CH694904A5 - Utilisation d'un extrait de Rhodiola crenulata, par voie topique. - Google Patents

Description

  



   L'invention concerne l'utilisation d'un extrait de Rhodiola crenulata,  par voie topique pour augmenter le métabolisme énergétique des tissus  cutanés d'un sujet.  Etat de la technique  



   II est connu que cette famille de plantes, aussi appelée Rhodiole,  pousse en altitude, en environnement défavorable voire hostile, et  qu'elle possède des propriétés adaptogènes. Les extraits de Rhodiola  ont été utilisés par voie orale, sous forme de boissons alcooliques  pour de multiples applications: effets sur le système cardio-vasculaire,  effets sur la mémoire, effets anti-histaminiques, etc. ... sans que  les effets soient bien étudiés d'un point de vue de la biologie mécanistique.  Les effets ont par ailleurs principalement été décrits sur Rhodiola  rosea, Rhodiola kirilowii et Rhodiola sachalinensis, car Rhodiola  crenulata est une plante relativement difficile à trouver, ne pousse  que sur les hauts plateaux tibétains et de ce fait, n'a fait l'objet  que de très peu d'études à l'heure actuelle. 



   Par ailleurs, des applications cosmétiques sans activité biologique  directement démontrée, ont été décrites pour Rhodiola rosea (JP 2  001 048 768) ou pour Rhodiola sachalinensis (CN 1 306 816). 



   Pour finir, des extraits de Rhodiola crenulata ont été décrits pour  des utilisations par voie orale pour des applications pharmaceutiques  en particulier pour augmenter les taux de testostérone et d'oestradiol  dans le sang, ou pour favoriser le transport de l'oxygène dans le  sang (US 2002/0 127 285 = US 6 399 116). Il est également décrit  dans ce document que le transport efficace d'oxygène permet de réduire  la fatigue musculaire en augmentant le taux d'ATP présent dans les  fibres musculaires. Ceci permet de réduire la fatigue musculaire.  Cependant les études sont restreintes à ce domaine et l'homme de  l'art ne peut pas tirer    d'enseignement quant à une éventuelle  utilisation cosmétique ou dermopharmaceutique des extraits de Rhodiola  crenulata pour augmenter le métabolisme cellulaire des tissus cutanés.

                                                           



   A l'heure actuelle de nombreuses recherches sont effectuées, notamment  par les spécialistes des tissus cutanés afin de mettre en évidence  des solutions permettant de pallier notamment le relâchement du tissu  cutané et l'apparition de rides, en utilisant des méthodes généralement  assez agressives du type "pilling" du tissu cutané, afin de faire  disparaître les rides de surface et de lutter contre son relâchement.                                                          



   De nombreuses recherches ont également lieu dans le domaine concernant  la lutte contre l'acné. 



   A l'identique, de nombreuses recherches ont lieu afin de pallier  différents problèmes du tissu cutané, en particulier de la peau,  comme la présence de différentes zones de pigmentation. 



   Malgré l'importance de ces recherches, il existe à l'heure actuelle  une carence dans les solutions apportées à ces différents problèmes.                                                           



   D'autre part les utilisateurs de produits cosmétiques sont sensibles  à l'origine végétale des compositions qu'on leur propose et préfèrent  ainsi utiliser des compositions comportant des extraits végétaux.  Buts de l'invention  



   L'invention vise donc à pallier les carences de l'état de la technique  en résolvant les différents problèmes techniques énoncés ci-dessus  et ci-après. 



   L'invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème  technique consistant en la fourni- ture de nouvelles compositions  topiques permettant d'augmenter le métabolisme énergétique des tissus  cutanés d'un sujet, notamment de la peau, dans le but en particulier  de réduire,    ralentir ou prévenir l'apparition de rides ou exercer  un effet anti-ride, et/ou d'augmenter la plasticité du tissu cutané,  et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir le relâchement du tissu  cutané, et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition  de l'acné, et/ou d'exercer un effet dépigmentant du tissu cutané,  en particulier de la peau, et/ou de favoriser la desquamation du  tissu cutané (ou peeling).  Description de l'invention  



   L'ensemble de ces problèmes techniques est résolu pour la première  fois d'une manière satisfaisante par l'invention, notamment à l'échelle  industrielle et en particulier cosmétique. 



   L'invention concerne, selon un premier aspect, l'utilisation d'un  extrait de Rhodiola crenulata pour la fabrication d'une composition  topique, pour augmenter le métabolisme énergétique des tissus cutanés  d'un sujet. 



   Le métabolisme énergétique des tissus cutanés est avantageusement  représenté par le dosage de l'ATP cytosolique. 



   Avantageusement le métabolisme énergétique du tissu cutané peut également  être mesuré in situ, par exemple par spectroscopie RMN (Résonance  Magnétique Nucléaire), en particulier du phosphore 31. 



   En particulier les variations du métabolisme énergétique de la peau  peuvent être déterminées par spectroscopie RMN du phosphore 31 grâce  à la mesure des concentrations relatives des principaux métabolites  phosphorylés de la peau: phosphate inorganique (Pi), phosphocréatine  (PCr) et adénosine tri-phosphate (ATP). 



   Les molécules d'ATP fournissent l'énergie nécessaire aux cellules  et aux tissus. La phosphocréatine est une molécule qui constitue  une réserve d'énergie immédiatement disponible, chargée de reconstituer  les réserves d'ATP consommées lors d'une période d'ischémie cellulaire  en fournissant    un groupement phosphate aux molécules d'ADP selon  la réaction catalysée par la créatine phosphokinase: ADP + PCr  -> ATP + Cr 



   



   L'évolution des rapports PCr/Pi, ATP/Pi, PCr/ATP et PCr/Ptotal sont  un reflet du statut énergétique d'un tissu. 



   L'invention elle-même n'est pas limitée à l'analyse particulière  permettant de mettre en évidence l'évaluation du métabolisme énergétique,  mais les méthodes indiquées ci-dessus sont avantageusement utilisées  dans l'invention et fournissent en particulier une rapidité et une  précision d'analyse efficaces pour atteindre le but recherché. 



   Selon un mode de réalisation, ledit tissu cutané est la peau. De  préférence, ledit tissu cutané est l'épiderme et/ou le derme, en  particulier de l'être humain. 



   Avantageusement, cette utilisation permet d'augmenter le métabolisme  énergétique des kératinocytes et/ou des fibroblastes. 



   Selon un mode de réalisation, le sujet est un mammifère, en particulier  l'être humain. 



   Avantageusement, la composition topique comprend entre 0,01% et 10%  d'extrait (p/p). 



   Selon un autre mode de réalisation, l'extrait contient la crénulatine,  ou au moins un de ses sels ou au moins un de ses dérivés, tel que  ses dérivés sous forme acide ou ester. 



   Selon encore un autre mode de réalisation, l'extrait de Rhodiola  crenulata est préparé par extraction de préférence des racines, et/ou  de la tige basse de la plante, par un solvant, éventuellement suivi  d'une étape    de fractionnement permettant d'isoler la ou les fractions  actives. Le solvant peut être po- laire ou non. Ledit solvant est  choisi de préférence parmi le groupe consistant en le pentane, le  décane, le cyclohexane, l'hexane, l'éther de pétrole, le monochlorométhane,  le dichlorométhane, le chloroforme, l'isopropanol, le propanol, l'acétate  d'éthyle, l'éthanol, le méthanol, l'acétone, le butylène glycol,  le propylène glycol, le pentylène glycol, le glycérol, l'eau, et  un mélange quelconque d'au moins deux de ces solvants, en particulier  les mélanges hydroalcooliques ou hydroglycoliques. 



   Avantageusement, l'extrait est purifié. 



   Avantageusement, cette utilisation permet de lutter contre, ou de  ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, et/ou d'augmenter  la plasticité du tissu cutané, et/ou d'exercer un effet anti-ride,  et/ou de lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné,  et/ou d'exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier  de la peau, et/ou de favoriser la desquamation du tissu cutané (ou  peeling). 



   En particulier, la présente invention permet d'accroître la capacité  des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter  la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératino-  cytes et des fibroblastes. 



   Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire  dans l'épiderme permet un renouvellement plus rapide de l'épiderme.                                                            



   Avantageusement, ce renouvellement plus rapide de l'épiderme permet,  de modifier la quantité de mélanine présente dans l'épiderme ce qui  permet ainsi de modifier la pigmentation du tissu et d'exercer un  effet dépigmentant du tissu cutané. Cet effet est notamment utilisé  pour éclaircir la peau d'un être humain ou d'un animal. 



   Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire  permet, par exemple sur une peau âgée, qui est généralement très  fine,    d'épaissir l'épiderme de manière à restituer le rOle d'effet  barrière de l'épiderme. 



   Avantageusement, cette augmentation de la prolifération cellulaire  permet par exemple dans les cas de peau sèche qui par définition  ont du mal à desquamer de favoriser la desquamation. 



   Avantageusement, l'augmentation de la prolifération cellulaire, en  particulier des fibroblastes dans le derme permet de densifier ce  derme et de restaurer ainsi la plasticité de celui-ci et/ou sa fermeté  de manière notamment à exercer un effet anti-ride ou à lutter contre,  ralentir ou prévenir l'apparition des  rides. 



   Selon un second aspect, l'invention concerne une composition topique  comprenant un agent actif pour augmenter le métabolisme énergétique  du tissu cutané sur au moins la partie sur laquelle est appliquée  ladite composition, ledit agent actif étant un extrait de Rhodiola  crenulata, tel que défini précédemment. 



   Avantageusement l'extrait est en mélange avec un excipient acceptable  par voie topique, en particulier un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement  acceptable. 



   Pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins  un composé choisi parmi le groupe consistant en les conservateurs,  les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les hydratants,  les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiant, les  stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents  de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments,  les colorants, les parfums et les filtres solaires.

   Ces excipients  sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides  aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères  et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides,  les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base  de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles  et    synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les  insaponifiables, les phytosterols, les esters végétaux, les silicones  et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l'huile de Jojoba et  ses dérivés, les esters lipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides,  les extraits de plantes les esters de Saccharose, les dioxydes de  Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi  le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth-21,

    le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol,  le méthylparaben, l'éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben,  le butylène glycol, les tocophérols naturels, la glycérine, le sodium  dihydroxycétyle, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate,  le triisononaoine, l'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine,  le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol,  une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate,  les caprique/caprylique triglycérides, le cétéaryl octanoate, le  dibutyl adipate, l'huile de pépin de raisin, l'huile de jojoba, le  sulfate de magnésium, l'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane,  l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles  minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène  glycol,

   l'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8 Beewax, les glycérides  d'huile de coeur de palme hydrogénée, les glycérides d'huile de palme  hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate,  le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose,  le saccharose, le poly- éthylène basse densité, une solution isotonique  salée. 



   Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une  forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse  ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment  en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing; un lait;  une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile-dans-eau  ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée; une lotion,    notamment  en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol;  une ampoule; un savon liquide; un pain dermatologique; une pommade;  une mousse; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou  solide, par exemple sous forme de bâtonnet, notamment sous forme  de rouge à lèvre. 



   L'extrait de Rhodiola crenulata est obtenu par un procédé comprenant  la réduction sous forme de poudre d'au moins une partie de la plante  de Rhodiola crenulata. 



   L'ensemble des méthodes connues par l'homme de l'art peuvent être  employées pour effectuer l'extraction. 



   On soumet de façon particulièrement avantageuse la poudre à une extraction  en utilisant un solvant ou un mélange de solvants, puis on fait subir  éventuellement au produit ainsi obtenu des étapes de fractionnement  permettant d'isoler la ou les fractions actives. La ou les fractions  actives sont avantageusement filtrées sur un filtre adéquat pour  obtenir une matière solide contenant la substance active vis-à-vis  du but recherché. De préférence, la poudre est laissée à macérer  dans un solvant ou mélange de solvants, par exemple à température  ambiante ou à reflux du solvant. Avantageusement, ledit solvant est  choisi parmi ceux décrits précédemment. 



   Avantageusement, la substance active obtenue après filtration est  mélangée avec au moins un excipient, topiquement acceptable tel que  précédemment défini. 



   Avantageusement, l'homme de l'art réalisera la formulation adéquate  au but recherché de par ses connaissances techniques. 



   Selon un quatrième aspect, l'invention concerne une méthode de soin  cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique    sur au moins une partie du tissu cutané d'un sujet de ladite composition  comprenant un extrait de Rhodiola crenulata, pour augmenter le métabolisme  énergétique d'au moins la partie du tissu cutané du sujet. 



   Avantageusement, la méthode de soin cosmétique permet d'exercer un  soin choisi parmi le groupe constituant en lutter contre, ou de ralentir  ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter la plasticité  du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir  l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition  de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier  de la peau, et favoriser la desquamation du tissu cutané (ou peeling).                                                         



   Selon un mode de réalisation particulier, la méthode de soin cosmétique  permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se  multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire  de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes,  et donc en particulier d'obtenir les effets décrits précédemment.                                                              



   Avantageusement, le soin cosmétique est effectué sur un sujet en  ayant besoin, en particulier en effectuant une étape préalable de  sélection desdits sujets vis-à-vis d'une population. 



   Avantageusement, ladite partie du tissu cutané sur laquelle est appliquée  la composition, est sélectionnée en fonction du soin à effectuer.                                                              



   Selon un cinquième aspect, l'invention concerne une méthode de traitement  thérapeutique comprenant l'application topique sur au moins une partie  du tissu cutané d'un sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace  de ladite composition comprenant un extrait de Rhodiola crenulata,  permettant ainsi d'augmenter le métabolisme énergétique d'au moins  ladite partie du tissu cutané du sujet. 



   Avantageusement cette méthode de traitement permet d'effectuer un  traitement choisi parmi le groupe consistant en lutter contre, ou  de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter  la plasticité    du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir  ou prévenir l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir  l'apparition de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané,  en particulier de la peau, et favoriser la desquamation du tissu  cutané (ou peeling). 



   Selon un mode de réalisation particulier, la méthode de traitement  thérapeutique permet d'accroître la capacité des cellules du tissu  cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération  cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou  des fibroblastes, et donc en particulier d'obtenir les effets décrits  précédemment. 



   Avantageusement, cette méthode de traitement est effectué sur un  sujet ayant besoin de ce traitement, en particulier en effectuant  une étape préalable de sélection desdits sujets vis-à-vis d'une population.                                                    



   Avantageusement, ladite partie du tissu cutané sur laquelle est appliquée  la composition, est sélectionnée en fonction du traitement à effectuer.                                                        



   De manière générale, le tissu est de préférence la peau ou la muqueuse  du sujet. 



   La composition topique de la présente invention permet en particulier  d'obtenir un effet local d'augmentation du métabolisme du tissu cutané  au niveau de la zone d'application. 



   D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront  clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description  explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement  à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter  la portée de l'invention. 



   Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute  caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la  technique antérieure quelconque à partir de la description prise  dans son    ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante  de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. 



   Ainsi, chaque exemple a une portée générale. 



   D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés  en poids, sauf indication con- traire, et la température est exprimée  en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la  pression atmosphérique, sauf indication contraire.  Exemples    Exemple 1: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata  



   Un extrait de Rhodiola crenulata a été réalisé à partir des racines  coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée  avec de l'éthanol pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans de l'éthanol.  Cette solution a été portée à reflux. L'extraction a été réalisée  pendant 1 heure puis la solution a été mise à température ambiante  et a été filtrée, l'éthanol éliminé. Le résultat a été solubilisé  à 5% (p/p) dans un mélange eau/glycol 75/25 (p/p) puis ultrafiltré  sur filtre céramique à différents seuils de coupure, et enfin filtrée  à 0,45  mu m. Puis, 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur,  a été rajouté en final en présence ou non d'un gel de xanthane.   Exemple 2: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata  



   Un extrait de Rhodiola crenulata a été réalisé à partir des racines  coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée  avec du cyclohexane pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans le  cyclohexane. Cette solution a été portée à reflux. L'extraction a  été réalisée pendant 24 heures puis la solution a été mise à température  ambiante et a été filtrée, le cyclohexane éliminé. Le résultat a  été    solubilisé à 5% (p/p) dans un mélange eau/glycol 75/25 (p/p)  puis ultrafiltré sur filtre céramiques à différents seuils de coupure,  et enfin filtrée à 0,45 mm. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme  conservateur a été rajouté en final en présence ou non d'un gel de  carbomer.   Exemple 3: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata  



   Un extrait de Rhodiola crenulata est réalisé à partir des racines  coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée  dans un solvant constitué par 75% d'eau et 25% de butylène glycol  pour obtenir une solution à 10% (p/p) dans le solvant. La macération  a été réalisée pendant 1 nuit à 45 DEG C puis la solution a été ultrafiltrée  sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée  à 0,45  mu m. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur  a été rajouté en final en présence ou non d'un gel de cellulose.   Exemple 4: Préparation d'un extrait de Rhodiola crenulata   



   Un extrait de Rhodiola crenulata est réalisé à partir des racines  coupées, puis broyées en poudre. La poudre obtenue a été mélangée  dans un solvant constitué par 75% d'eau et 25% de butylène glycol  pour obtenir une solution à 1% (p/p) dans le solvant. La macération  est réalisée pendant 1 nuit à 4 DEG C puis la solution est ultrafiltrée  sur filtre céramiques a différents seuils de coupure, et enfin filtrée  à 0,45  mu m. 0,1% de methyl paraben, utilisé comme conservateur  est rajouté en final en présence ou non d'un gel de xanthane.   Exemple 5: Etude de cytotoxicité  



   Etude de la Cytotoxicité de l'Extrait de Rhodiola crenulata préparé  selon l'exemple 4 sur kératinocytes (dosage au para-nitrophényl phosphate,  PNPP). 



   Des kératinocytes humains normaux ont été extraits d'une biopsie  abdominale. Ils ont été ensemencés dans des plaques de culture 96  puits. Une fois la confluence atteinte, les cellules étaient incubées  dans un milieu de culture seul (témoin) ou contenant 0.01%, 0.1%,  1%, 3%, 5% et 10% de l'Extrait de Rhodiola Crenulata (p/p) préparé  selon l'exemple 4, pendant 24 heures à 37 DEG C dans une atmosphère  contenant 5% de CO 2 . 



   A la fin de la période d'incubation, la viabilité cellulaire était  évaluée par un test au PNPP. Ce test permet d'évaluer l'activité  des phosphatases acides intracellulaires qui est directement proportionnelle  au nombre de cellules viables. 



   200  mu l de solution de PNPP (Sigma) à 5 mM dans de l'eau déminéralisée  contenant 0,1% de triton X100 (Sigma) et 0,1 M de sodium acétate  (Sigma) à pH 5 sont placés dans chaque puits de culture. Une incubation  à 37 DEG C pendant 2 heures est réalisée puis la réaction est stoppée  par ajout de NaOH 1N (Merck). Une lecture de l'absorbance est réalisée  à 405 nm et les résultats sont exprimés en pourcentage de cellules  viables par rapport au témoin (sans actif).  Tableau I  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb>Head Col 1: Concentration en Extrait  de Rhodiola crenulata <tb>Head Col 2: Pourcentage de viabilité   sur kératinocytes <tb>Head Col 3: Ecart type <tb><SEP> 0,01%<SEP>  95,9<SEP> 3,3 <tb><SEP> 0,1%<SEP> 92,4<SEP> 5,5 <tb><SEP> 1%<SEP>  92,2<SEP> 4,8 <tb><SEP> 3%<SEP> 84,5<SEP> 8 <tb><SEP> 5%<SEP> 79,4<SEP>  5,9 <tb><SEP> 10%<SEP> 55,7<SEP> 5,3  <tb></TABLE>   Exemple  6: Evaluation du métabolisme énergétique sur kératinocytes humains  en culture de l'extrait obtenu dans l'exemple 4     Mesure  des taux d'ATP Cellulaire  



   Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés à raison de 15.10<3>  cellules par puits dans des microplaques de 96 puits. Après 72 heures  d'incubation à 37 DEG C, le milieu de culture est éliminé et remplacé  par du milieu contenant l'actif à différentes concentrations. Les  cellules sont incubées 3 jours consécutifs puis les cellules sont  rincées avec du tampon PBS. Le dosage de l'ATP cytosolique est déterminé  par une technique de bioluminescence selon la réaction: 



   
EMI13.1
 



   Après rinçage au PBS, les kératinocytes sont mis à incuber pendant  5 minutes dans un tampon de perméabilisation contenant de la digitonine.  Une solution diluée d'AMR (ATP monitoring reagent Roche Diagnostic)  est injectée directement dans les microplaques et l'intensité de  lumière émise (RLU total) est mesurée par un luminomètre (Luminoscan,  Labsystem). Après une première lecture, les puits de microplaques  reçoivent une solution d'hexokinase (Sigma) (système utilisateur  d'ATP). Après 10 minutes d'incubation, une seconde mesure de la lumière  est effectuée    (RLU0) permettant de soustraire la part de luminescence  liée à des molécules autres que l'ATP: RLU A  TP  = RLU T  otal  - RLU 0 



   



   Le taux d'ATP cytosolique est déterminé à partir d'une gamme étalon  réalisée avec des concentrations standards d'ATP. Parallèlement à  la mesure de l'ATP cytosolique, un dosage des protéines cellulaires  est réalisé sur une seconde microplaque par un test au bleu de Coomassie  (BioRad Protein Assay).  Résultats:  



   Les résultats (taux d'ATP) sont exprimés en pmoles d'ATP/ mu g de  protéines. Le tableau ci-dessous regroupe les valeurs moyennes (N=4).  Tableau II  



    <tb><TABLE> Columns = 5  <tb>Head Col 1: Moyenne <tb>Head Col  2: Ecart type <tb>Head Col 3: Stat* <tb>Head Col 4: ATP (%) <tb><SEP>  Témoin<SEP> 47,86<SEP> 4,77<SEP> n.s.<SEP> 100% <tb><SEP> Extrait  de Rhodiola crenulata à 0,1%<SEP> 52,68<SEP> 1,72<SEP> n.s.<SEP>  110% <tb><SEP> Extrait de Rhodiola crenulata à 0,5%<SEP> 54,04<SEP>  3,44<SEP> n.s.<SEP> 113% <tb><SEP> Extrait de Rhodiola crenulata  1%<SEP> 62,18<SEP> 2,68<SEP> p < 0,01<SEP> 130% <tb><SEP> Extrait  de Rhodiola crenulata 2%<SEP> 76,16<SEP> 2,19<SEP> p < 0,01<SEP>  159%  <tb></TABLE> 



   Stat*: test T de Student 



   Aucune modification de la croissance cellulaire n'est observée au  niveau des lots traités avec l'actif Extrait Rhodiola crenulata.  En effet, les taux de protéines cellulaires sont identiques à celui  enregistré au niveau du lot témoin (sans actif). 



   Par contre, une légère diminution (11%) du taux de protéines est  enregistrée au niveau des cellules traitées avec l'extrait de Rhodiola  crenulata à 2% (p/p). 



     Une augmentation dose-dépendante des taux d'ATP est enregistrée  au niveau des culture traitées; les différences enregistrées au niveau  des essais avec l'Extrait de Rhodiola crenulata à 1% et 2% sont statistiquement  significatives (test t de Student). 



   La fig.1 représente le taux d'ATP dans des kératinocytes humains  en fonction de différentes concentrations de l'extrait de Rhodiola  crenulata.  Conclusion:  



   Dans les conditions expérimentales décrites ci-dessus, l'extrait  de Rhodiola crenulata est capable de stimuler le métabolisme énergétique  des kératinocytes humains. 



   En effet, une augmentation dose-dépendante du taux d'ATP cytosolique  a été enregistrée dans la gamme des concentrations testées. A la  concentration de 2% (p/p), l'extrait de Rhodiola crenulata est capable  d'induire une augmentation de 59% du taux d'ATP des kératinocytes.   Exemple 7: Amélioration du métabolisme énergétique du tissu  cutané.  



   La mesure in situ du métabolisme énergétique du tissu cutané a été  réalisée en utilisant la spectroscopie RMN (Résonance Magnétique  Nucléaire). Le but de cette étude était d'évaluer l'effet d'une formulation  contenant 3% (p/p) de l'extrait de Rhodiola crenulata sur le métabolisme  énergétique de la peau, dans un test in vivo faisant intervenir des  volontaires sains. 16 volontaires sains âgés de plus de 18 ans ont  été inclus dans cette étude. Les 16 volontaires sains ont appliqué  une formulation contenant 3% (p/p) de l'extrait de Rhodiola crenulata  deux fois par jour pendant 28 jours sur l'un de leurs avant-bras.  Pendant la même période, 8 de ces volontaires appliquaient une formulation  placebo    sur leur autre avant-bras, alors que l'autre moitié du  panel n'appliquait aucun traitement sur ce deuxième avant bras (avant-bras  "témoins"). 



   Avant et après 28 jours d'applications bi-quotidiennes de la formulation  à tester, le métabolisme énergétique de la peau de chacun des avant-bras  des volontaires a été analysé par spectroscopie RMN. 



   Les variations du métabolisme énergétique de la peau peuvent être  déterminées par spectroscopie RMN du phosphore 31 grâce à la mesure  des concentrations relatives des principaux métabolites phosphorylés  de la peau: phosphate inorganique (Pi), phosphocréatine (PCr) et  adénosine tri-phosphate (ATP). 



   Les molécules d'ATP fournissent l'énergie nécessaire aux cellules  et aux tissus. La phosphocréatine est une molécule qui constitue  une réserve d'énergie immédiatement disponible, chargée de reconstituer  les réserves d'ATP consommées lors d'une période d'ischémie cellulaire  en fournissant un groupement phosphate aux molécules d'ADP selon  la réaction catalysée par la créatine phosphokinase: 



   ADP + PCr -> ATP + Cr 



   L'évolution des rapports PCr/Pi, ATP/Pi, PCr/ATP et PCr/Ptotal sont  un reflet du statut énergétique d'un tissu. 



   Les résultats présentés dans la figure ci-dessous montrent que la  formulation contenant l'extrait de Rhodiola crenulata était capable,  après 28 jours de traitement, d'augmenter significativement le rapport  PCr/Ptotal. 



   Dans le même temps, alors que le rapport PCr/ATP mesuré sur les avant-bras  "témoins" diminuait, celui des avant-bras traités par la formulation  contenant l'extrait de Rhodiola crenulata, augmentait.  Cette différence  était significative. 



     Aucune amélioration des paramètres mesurés n'a pu être observée  sur les avant-bras ayant reçu la formulation placebo, et ce, quel  que soit le temps de mesure. 



   La fig. 2 représente l'évolution des rapports PCr/Ptotal et PCr/ATP  (en %) par rapport à J0 (jour 0 = jour d'application de la composition)  après 28 jours d'application d'une formulation contenant 3% de Rhodiola  crenulata. 



   Dans la figure, les symboles utilisés sont:  : significativement  différent de J0 (p<0,05) ns: non significativement différent  de J0 * : significativement différent du groupe "témoin" (p<0,05)  Valeurs de la fig. 2:  



   Evolution du rapport PCr/Ptotal (en pourcentage) dans les conditions  "témoin" et "traité" après 28 jours:  Tableau III  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb>Head Col 1: Rhodiola crenulata <tb>Head  Col 2: Témoin <tb><SEP> Moyenne<SEP> 3,72<SEP> 0,05 <tb><SEP> Ecart  type<SEP> 4,72<SEP> 3,14  <tb></TABLE> 



   Evolution du rapport PCr/ATP (en pourcentage) dans les conditions  "témoin" et "traité" après 28 jours:  Tableau IV  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb>Head Col 1: Rhodiola crenulata <tb>Head  Col 2: Témoin <tb><SEP> Moyenne<SEP> 5,83<SEP> -4,17 <tb><SEP>  Ecart type<SEP> 10,56<SEP> 4,92  <tb></TABLE> 



   La présente étude a permis de montrer qu'une formulation contenant  3% (p/p) d'un extrait de Rhodiola crenulata est capable in vivo d'améliorer  le métabolisme énergétique du tissu cutané. En effet après 28 jours  d'applications bi-quotidiennes, les résultats obtenus montrent un  effet significatif du produit testé sur le métabolisme de la phosphocréatine.  Exemple 8: Tests d'innocuité  



   Evaluation de l'acceptation cosmétique d'une préparation contenant  le produit de l'invention 



   Les essais de toxicologie ont été réalisés sur l'extrait de Rhodiola  crenulata obtenu selon l'exemple 4, utilisé pur, par une évaluation  oculaire chez le lapin, par l'étude de l'absence de toxicité anormale  par administration orale unique chez le rat et par l'étude du pouvoir  sensibilisant sur le cobaye.   A) Evaluation de l'irritation  primaire cutanée chez le lapin:  



   Les préparations décrites ci-dessus sont appliquées sans dilution  à la dose de 0,5 ml sur la peau de 3 lapins selon la méthode préconisée  par la directive OCDE concernant l'étude de "l'effet irritant/corrosif  aigu sur la peau". 



   Les produits sont classés selon les critères définis par l'arrêté  du 1/2/1982 publié au JORF du 21/02/82. 



   Les résultats de ces essais, ont permis de conclure que la préparation  retenue était classée non irritante pour la peau.   B) Evaluation  de l'irritation oculaire chez le lapin:  



   Les préparations décrites ci-dessus ont été instillées pure en une  seule fois, à raison de 0,1 ml, dans l'oeil de 3 lapins selon la  méthode préconisée par la directive de l'OCDE n DEG  405 du 24 février  1987 concernant l'étude de "l'effet irritant/corrosif aigu sur les  yeux". 



   Les résultats de ce test permettent de conclure que la préparation  peut être considérée comme non irritante pour les yeux, au sens de  la directive 91/326 CEE utilisées pures.   C) Essai sur l'absence  de toxicité anormale par administration orale unique chez le rat:  



   Les préparations décrites ont été administrées en une fois par voie  orale à la dose de 5 g/kg de poids corporel, à 5 rats mâles et 5  rats femelles selon un protocole inspiré de la directive de l'OCDE  n DEG  401 du 24 février 1987 et adapté aux produits cosmétiques.                                                              



   Les DL0 et DL50 sont trouvées supérieures à 5000 mg/kg. La préparation  testée n'est donc pas classée parmi les préparations dangereuses  par ingestion.   D) Evaluation du potentiel de sensibilisation  cutanée chez le cobaye:  



   Les préparations décrites sont soumises au test de maximisation décrit  par Magnusson et Kligmann, protocole en accord avec la ligne directrice  n DEG 406 de l'OCDE. 



   La préparation est classée comme non sensibilisante par contact avec  la peau. 



     Dans les exemples suivant, "Produits de l'invention" représente  les extraits de Rhodiola crenulata selon l'invention et en particulier  selon les exemples 1 à 4.   Exemple 9: Rouge à lèvre "no transfert"  



   Utilisation des produits de l'invention dans des formulations cosmétiques  ou pharmaceutiques de type émulsion huile dans eau.   Formulation  9a:  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> Eau Butylène Glycol  Glycérine Sodium Dihydroxycetyl Phosphate, Isopropyl Hydroxycetyl  Ether<SEP> qsp 100 2 3 2 <tb><SEP> B<SEP> Glycol Stéarate  SE Triisononaoin Octyl Cocoate<SEP> 14 5 6 <tb><SEP> C<SEP>  Butylène Glycol, Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben,  pH ajusté à 5,5<SEP> 2 <tb><SEP> D<SEP> Produits de l'invention<SEP>  0,01-10%  <tb></TABLE>  Formulation 9b:  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP>    A<SEP> Eau Butylène Glycol  Glycérine Polyacrylamide, Isoparafin, Laureth-7<SEP> qsp 100  2 3 2,8 <tb><SEP> B<SEP> Butylène Glycol, Methylparaben,  Ethylparaben, Propylparaben; Phenoxyethanol, Methylparaben,  Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Butylène Glycol<SEP>  2 2 0,5 <tb><SEP> D<SEP> Produits de l'invention<SEP>  0,01-10%  <tb></TABLE>  Formulation 9c  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> Carbomer Propylene  Glycol Glycerol Eau<SEP> 0,50 3 5 qsp 100 <tb><SEP> B<SEP>  Octyl Cocoate   Bisabolol Dimethicone<SEP> 5 0,30 0,30 <tb><SEP>  C<SEP> Sodium Hydroxide<SEP> 1,60 <tb><SEP> D<SEP> Phenoxyethanol,  Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben<SEP>  0,50 <tb><SEP> E<SEP> Parfum<SEP> 0,30 <tb><SEP> F<SEP> Produits  de l'invention<SEP> 0,01-10%  <tb></TABLE>   Exemple 10: Utilisation  des produits de l'invention dans une formulation de type eau dans  huile  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> PEG 30 dipolyhydroxystearate  Capric Triglycérides Cetearyl Octanoate Dibutyl Adipate Grape  Seed Oil Jojoba Oil Phenoxyethanol, Methylparaben, Propylparaben,  Butylparaben, Ethylparaben<SEP> -3 3 4 3 1,5 1,5  0,5 <tb><SEP>    B<SEP> Glycérine Butylène Glycol Magnésium  Sulfate EDTA Eau<SEP> 3 3 0,5 0,05 qsp 100 <tb><SEP>  C<SEP> Cyclomethicone Dimethicone<SEP> 1 1 <tb><SEP> D<SEP>  Parfum<SEP> 0,3 <tb><SEP> E<SEP> Produits de l'invention<SEP> 0,01-10%  <tb></TABLE>   Exemple 11: Utilisation des produits de l'invention  dans une formulation de type shampoing ou gel douche  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> Xantham Gum Eau<SEP>  0,8 qsp 100 <tb><SEP> B<SEP> Butylène Glycol, Methylparaben,  Ethylparaben, Propylparaben Phenoxyethanol, Methylparaben,  Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben<SEP> 0,5 0,5 <tb><SEP>    C<SEP> Citric acid<SEP> 0,8 <tb><SEP> D<SEP> Sodium Laureth Sulfate<SEP>  40,0 <tb><SEP> E<SEP> Produit de l'invention<SEP> 0,01-10%  <tb></TABLE>   Exemple 12: Utilisation des produits de l'invention dans une  formulation de type rouge à lèvres et autres produits anhydres                                                             



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> Minerai Wax Isostearyl  Isostearate Propylene Glycol Dipelargonate Propylene Glycol Isostearate  PEG 8 Beewax Hydrogenated Palm Kernel Oil Glycerides, Hydrogenated  Palm Glycerides Lanoline Oil Sesame Oil Cetyl Lactate Mineral  Oil, Lanolin Alcohol<SEP> 17,0 31,5 2,6 1,7 3,0 3,4  3,4 1,7 1,7 3,0 <tb><SEP> B<SEP> Castor Oil Titanium Dioxide  CI 15850:1 CI 45410:1 CI 19140:1   CI 77491<SEP> qsp 100  3,9 0,616 0,256 0,048 2,048 <tb><SEP> C<SEP> Produits de  l'invention<SEP> 0,01-5%  <tb></TABLE>   Exemple 13: Utilisation  des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours  de l'oeil, amincissants, etc.)  



    <tb><TABLE> Columns = 3  <tb><SEP> A<SEP> Eau Carbomer Butylène  Glycol Phenoxyethanol, Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben,  Ethylparaben<SEP> qsp 100 0,5 15 0,5 <tb><SEP> B<SEP> Produits  de l'invention<SEP> 0,01-10%  <tb></TABLE>

Claims (10)

1. Procédé de fabrication d'une composition topique, pour augmenter le métabolisme énergétique du tissu cutané d'un sujet, comprenant le mélange d'un extrait de Rhodiola crenulata avec un excipient acceptable par voie topique.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit tissu cutané est la peau, de préférence, ledit tissu cutané est l'épiderme et/ou le derme, en particulier de l'être humain.

3. Procédé selon la revendication 2, pour augmenter le métabolisme énergétique des kératinocytes et/des fibroblastes.

4.

Procédé selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de Rhodiola crenulata est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi le groupe consistant en le pentane, le décane, le cyclohexane, l'hexane, l'éther de pétrole, le monochlorométhane, le dichlorométhane, le chloroforme, l'isopropanol, le propanol, l'acétate d'éthyle, l'éthanol, le méthanol, l'acétone, le butylène glycol, le propylène glycol, le pentylène glycol, le glycérol, l'eau, et un mélange quelconque d'au moins deux de ces solvants.

5. Procédé selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait contient la crénulatine, ou au moins un de ses sels ou au moins un de ses dérivés.

6.

Procédé selon revendication 1, caractérisée en ce que la composition est une composition pour lutter contre, ou ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, et/ou pour augmenter la plasticité du tissu cutané, et/ou pour exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, et/ou pour lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, et/ou pour exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et/ou pour favoriser la desquamation du tissu cutané ou pour le peeling.

7. Composition topique caractérisée en ce qu'elle comprend un agent actif pour augmenter le métabolisme énergétique du tissu cutané sur au moins la partie sur laquelle est appliquée ladite composition, ledit agent actif étant un extrait de Rhodiola crenulata.

8.

Utilisation dans le soin cosmétique de la composition selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application topique sur au moins une partie du tissu cutané d'un sujet de la composition, pour augmenter le métabolisme énergétique d'au moins ladite partie du tissu cutané du sujet.

9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que le soin cosmétique est choisi parmi le groupe consistant en lutter contre, ou de ralentir ou prévenir le relâchement du tissu cutané, augmenter la plasticité du tissu cutané, exercer un effet anti-ride ou ralentir ou prévenir l'apparition de rides, lutter contre, ralentir ou prévenir l'apparition de l'acné, exercer un effet dépigmentant du tissu cutané, en particulier de la peau, et favoriser la desquamation du tissu cutané ou pour le peeling.

10.

Utilisation selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce qu'elle permet d'accroître la capacité des cellules du tissu cutané de se multiplier, c'est-à-dire d'augmenter la prolifération cellulaire de ces cellules, en particulier des kératinocytes et/ou des fibroblastes.