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CH638813A5 - Verfahren zur isolierung von mutterkornalkaloiden aus kultursuspensionen. - Google Patents

Verfahren zur isolierung von mutterkornalkaloiden aus kultursuspensionen. Download PDF

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CH638813A5
CH638813A5 CH1295778A CH1295778A CH638813A5 CH 638813 A5 CH638813 A5 CH 638813A5 CH 1295778 A CH1295778 A CH 1295778A CH 1295778 A CH1295778 A CH 1295778A CH 638813 A5 CH638813 A5 CH 638813A5
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CH
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mycelium
aqueous
extracted
adsorbent
earth
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CH1295778A
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Werner Grawert
Brigitte Neumann
Ludwig Schiedt
Karlheinz Dr Rer N Heidenbluth
Christoph Dr Rer Nat Dauth
Rudolf Schirutschke
Monika Mueller
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Dresden Arzneimittel
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    • C12P17/183—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing an indolo[4,3-F,G]quinoleine nucleus, e.g. compound containing the lysergic acid nucleus as well as the dimeric ergot nucleus
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Description

Die Erfindung betrifft die industrielle Gewinnung von Mutterkornalkaloiden, insbesondere für therapeutische Zwecke, aus Submers- und Emerskulturen.
Es ist ein wesentliches Charakteristikum saprophytischer Mutterkornkulturen, dass sich die gebildeten Alkaloide (wasserlösliche Alkaloide vom Ergometrintyp, Clavine, z.T. auch Peptidalkaloide) mehr oder minder ausgeprägt auf Zellmasse und Flüssiganteile der Kultursuspension verteilen. Die bekannten technischen Lösungen zur Isolierung von Mutterkornalkaloiden tragen diesem Sachverhalt dadurch Rechnung, dass sie nach Trennung von Biomasse und Kulturfil-trat gesonderte Aufarbeitungsverfahren für beide oder eines der beiden Medien vorsehen (HU-PS150632, HU-PS 161654, Zusatzp.z.HU-PS 150631, DL-PS 41967, OE-PS 259 770), die den speziellen Löslichkeitseigenschaften der jeweils gebildeten Alkaloide angepasst sind. So wird zur Isolierung des wasserlöslichen Ergometrins der Zusatz z.T. erheblicher Salzmengen empfohlen (Ung.Anm. R1-440); die in der HU-PS 142 407 vorgeschlagene Adsorption an Bentonit mit nachfolgender Extraktion des Adsorbats mittels wässrigen Alkohols erwies sich wegen der hohen Verluste durch Isomerisierung als ungünstig (siehe dazu HU-PS 142406).
Es hat deshalb nicht an Versuchen gefehlt, den Isolierungs-prozess durch eine Einstrang-Aufarbeitung der Kultursuspension technisch und ökonomisch günstiger zu getalten; so wird im DDR-Patent C 12d/165 516 die direkte Extraktion der Suspension beschrieben, doch mindern Emulsionsbildung und Isomerisierungsneigung in Abhängigkeit vom Verarbeitungsrhythmus den praktischen Wert dieses Verfahrens.
Ziel der Erfindung war die Entwicklung eines ökonomisch günstigen Aufarbeitungsverfahrens, das die Nachteile der bekannten Verfahren unter konsequenter Durchsetzung des Einstrangprinzips überwindet und universell auf alle Typen von Mutterkornalkaloiden in saprophytischer Kultur anwendbar ist.
Es wurde nun überraschend gefunden, dass speziell die quellfähigen Tonerden wie Bentonit, Bleicherde, Fullererde oder Walkerde beim natürlichen pH-Wert der Kultursuspension ein ausserordentlich hohes Adsorptionsvermögen nicht nur für Ergometrin, sondern für alle untersuchten Mutter-kornalkaloide der unterschiedlichsten Struktur aufweisen.
Es wurde weiter gefunden, dass so hergestellte Mycel-Adsorbens-Gemische durch Filtration oder andere Trennver-fahren mechanisch gut abtrennbar sind.
Weiterhin wurde überraschend gefunden, dass sich die nach mechanischer Abtrennung erhaltenen alkaloidhaltigen Mycel-Adsorbensgemische ohne Isomerisierung oder Zersetzung der Alkaloide bei an sich unüblich hohen Temperaturen von 80-90°C durch Wirbelschichttrocknung unter Einhaltung bestimmter physikalischer Bedingungen in hervorragender Weise konservieren lassen. Die erhaltene, beliebig lagerfähige Trockenmycel-Adsorbens-Masse lässt sich nach Anquellen mit wenig schwachalkalischer wässriger Lösung mittels organischer, aprotischer Lösungsmittel schonend und vollständig extrahieren.
In weiteren Versuchen wurde festgestellt, dass sich das genannte Trocknungsverfahren auch auf solche Kulturen übertragen lässt, die alle gebildeten Alkaloide in der Biomasse enthalten, den Zusatz von Adsorbentien also nicht erforderlich machen. Auch hier wird nach mechanischer Abtrennung und Trocknung in der Wirbelschicht ein lagerfähiges Trockenmycel erhalten, dessen Aufarbeitung unabhängig vom Erntetermin vorgenommen werden kann.
Das erfindungsgemässe Verfahren ist im Anspruch 1 definiert.
Eine besonders vorteilhafte Ausführungsform des Verfahrens besteht darin, dass man die geerntete, ein beliebiges Spektrum an Mutterkornalkaloiden wie Ergokryptin/Ergo-tamin/Ergocristin/Ergocornin/Ergometrin/Lysergsäure/ Agroclavin/Ergosin oder andere enthaltende Kultursuspensionen bei Anwesenheit wasserlöslicher Anteile im Spektrum zunächst mit 4 bis 5 Gew.-% (bezogen auf Erntevolumen) einer quellfähigen Tonerde ca 30 min verrührt, die festen und flüssigen Anteile mechanisch, z.B. durch Filtration trennt, das erhaltene Feuchtmycel bzw. Feuchtmycel-Adsorbens-Gemisch in der Wirbelschicht bei 80-90°C während 20 bis 40 min bis zu einer Ablufttemperatur von 50 bis 70°C und einer Restfeuchte von maximal 15% trockent, das Trockenmycel bzw. Trockenmycel-Adsorbens-Gemisch nach Ansteigen mit einer wässrigen, schwach alkalischen Lösung, z.B. 15%igem Ammoniakwasser, der Extraktion mit einem aprotischen organischen Lösungsmittel, z.B. einem niedern Alkylcarbonsäureester, Aceton oder einem halogenierten Kohlenwasserstoff unterzieht, den erhaltenen Extrakt zur Entfernung nichtbasischer Ballaststoffe der flüssig-flüssig-Extraktion mit einer wässrig-sauren Phase mit Volumen Verhältnis 2:1 bis 1:1 extrahiert und die wässrige, die Gesamtalkaloide enthaltende Lösung nach Alkalisierung bis zu einem pH-Wert im Bereich 8 bis 9,5.mit einem organischen, mit Wasser nicht mischbaren
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Lösungsmittel, vorzugsweise Äthylacetat, im Verhältnis 1:1 bis 3:1 reextrahiert.
Die weitere Verarbeitung des vorgereinigten Extraktes erfolgt in an sich bekannter Weise unter Berücksichtigung der chemischen und physikalischen Eigenschaften der betreffenden Alkaloide.
Beispiel la
2001 Kultursuspension des Stammes Claviceps purpurea (Fr.) Tul. IMET PA 130 (hinterlegt am 29. Juni 1972 beim Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie Jena) wird mit 8 kg Bentonit 30 min verrührt und anschliessend über ein Vakuumdrehzellenfilter mit 10 mm Schicht aus Calziumsulfat-Dihydrat filtriert. Das praktisch alkaloidfreie Filtrat wird verworfen; das abgenommene Feuchtmycel-Bentonit-Gemisch trocknet man in der Wirbelschicht bei einer Zulufttemperatur von 90°, bis eine Ablufttemperatur von 60° erreicht wird (Dauer ca 30 min). Man erhält 20 bis 24 kg Trockenmycel-Bentonit-Gemisch mit einer Restfeuchte von 3-5%, das 95-100% des in der Kultursuspension bestimmten Ergotoxins und 92-96% des Ergometrins enthält.
Die morphologischen und mikroskopischen Eigenschaften des oben erwähnten Stammes gehen aus der folgenden Übersicht hervor.
Tabelle 1
Morphologische Eigenschaften von Claviceps purpurea, Stamm IMET PA 130, auf verschiedenen Agarmedien nach 14-tägiger Bebrütung in Petrischalen bei 24°C
Medium I
(3 % Sacharose, 0,001%FeSC>4- IWiO,
0,3%NaNO 1% Maisquellwasser,
0,1%K2HPC>4, 3% Agar;
0,05%MgS04-7H20, pH 6,8-6,9)
0,05 % KCl
Kolonieform:
Erhabene, kompakte, unregelmässig und stark gefaltete Kolonie; Unterseite glatt, nicht vom Boden der Platte abgehoben.
Koloniedurchmesser:
1,0-1,5 cm
Koloniefarbe:
Oberseite hellbraun bis violett, Rand weiss; Unterseite braun, Rand hellbraun.
Durchschnittliche Versporung:
46,3 x 106 Konidien/Kolonie
Medium 2
(15% Bierwürze, 0,1 % Ammoniumzitrat,
0,5 % Hefeextrakt, 3% Agar;
0,5%(NH4):P04, pH 5,0)
Kolonieform:
Mitte erhaben, mit kraterförmiger Einsenkung; Rand radial gefaltet; Agar durchwachsen, Kolonie vom Boden der Platte abgehoben.
Koloniedurchmesser:
2-3 cm
Koloniefarbe:
Ober- und Unterseite hellgrau.
Durchschnittliche Versporung:
34,1 x 106 Konidien/Kolonie
Medium 3
(2 % Glukose,
50 % wässriger Kartoffelextrakt,
3 % Agar;
Kolonieform:
Mitte erhaben, mit kraterförmiger Einsenkung: Agar durchwachsen, Kolonie vom Boden der Platte abgehoben.
Koloniedurchmesser:
1,5-2,0 cm
Koloniefarbe:
Oberseite grauviolett; Unterseite graubraun. Durchschnittliche Versporung:
3,3 x 106 Konidien/Kolonie
Mikroskopische Charakteristik der Konidien und Hyphen
Die Konidien weisen in allen Fällen eine ellipsoide Form mit Abmessungen von 6-10 [im (grosse Achse) bzw. 4-8 (im (kleine Achse) auf. Die Substrathyphen haben eine Länge bis zu 200 |xm und einen Durchmesser von 4-8 (im. Bei blasigen Auftreibungen beträgt der Durchmesser 8-16 [im. Es treten Lufthyphen auf, deren Länge über 200 (im und deren Durchmesser nur 2-4 (im betragen.
Beispiel 2a
1001 Kultursuspension des unter Beispiel la bezeichneten Claviceps-purpurea-Stammes wird mit 5 kg Bleicherde 1 Stunde verrührt, filtriert und das Feuchtmycel-Bleicherde-Gemisch in der Wirbelschicht während 15 min bei 80-90° bis zu einer Ablufttemperatur von 50° getrocknet. Man erhält 12 kg Trockenmycel-BIeicherde-Gemisch mit eienr Restfeuchte von 10-12% und einem Alkaloidgehalt von 92-100% bezogen auf Kultursuspension.
Beispiel lb
10 kg eines gemäss Beispiel la oder 2a hergestellten Trok-kenmycel-Adsorbens-Gemisches werden mit 1,511:2 verdünntem Ammoniakwasser angeteigt, nach einer Quellzeit von 5-10 min mit 401 Äthylacetat in 2 Portionen jeweils 15 min mit dem Ultra-Turrax verrührt und abgesaugt; den Gesamtextrakt gibt man mit 2013%iger wässriger Phosphorsäure durch den Separator. Die schwere Phase wird mit 81 Äthylacetat überschichtet, unter Rühren durch Zugabe von konzentriertem Ammoniakwasser auf pH 8,5 bis 9,0 eingestellt und 10 min gerührt. Nach Phasentrennung wird die Extraktion mit 6 bis 81 Äthylacetat noch zweimal wiederholt. Der Gesamtextrakt wird im Vakuum-Umlauf-Verdampfer, Fallstromverdampfer oder einem anderen schonenden Eindampfverfahren auf 0,3 bis 0,61 konzentriert, mit dem doppelten Volumen Chloroform versetzt und das Ergometrin in Form des schwerlöslichen Chloroform-Adduktes abgetrennt. Aus dem Filtrat gewinnt man nach adsorptionschromatogra-phischer Reinigung im Säulen- oder Batchverfahren das Ergotoxin als Benzol- oder Toluoladdukt.
Beide Addukte sind dünnschichtchromatographisch rein und haben einen Alkaloidgehalt von 96 bis 103% ber. als Bimaleinat. Die Ausbeute beträgt 58,6 g Ergotoxin-Toluol-addukt = 72% bezogen auf Kultursuspension und 40,5 g Ergometrin-Chloroformaddukt = 82% bezogen auf Kultursuspension.
Beispiel 2b
60 kg eines gemäss Beispiel la oder 2a gewonnenen Trok-kenmycel-Adsorbens-Gemisches werden mit 7,511:1 verdünntem Ammoniakwasser verknetet, im Rührextraktor mit
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1501 Chloroform oder Methylenchlorid über 45 min extrahiert, der Extrakt unter Druck filtriert und die Extraktion mit dem gleichen Volumen des Lösungsmittels über 30 min wiederholt.
Den Gesamtextrakt gibt man mit 5%iger wässriger Weinsäure im Verhältnis 1:1 durch den Separator, stellt die Wasserphase kontinuierlich auf pH 9 ein und separiert ein zweites Mal mit dem gleichen Lösungsmittel oder mit Äthylacetat im Verhältnis 2:1. Nach Eindampfung, Ergometrin-Abtrennung und Ergotoxin-Fällung erhält man die Addukte in der im Beispiel lb genannten Ausbeute und Qualität.
wurden nicht beobachtet, auf üblichen Sporulationsmedien (z.B. M10) zerfiel dagegen das Mycel in z.T. sehr kleine Bruchstücke (auch in flüssiger M10-Kultur). Fett-Tröpfchen in relativ geringer Anzahl konnten nur auf Medium 846 und s 829 beobachtet werden.
Das Mycel der submersen Kulturen (ca. 14 Tage alt, Produktionsmedium) besteht aus langen, verzweigten Hyphen mit einer Dicke von ca. 5 ji. Die Hyphen haben z.T. kugelförmig abgerundete Anschwellungen und enthalten viele io Fett-Tröpfchen, Konidien wurden nicht beobachtet.
Beispiel 3
301 Kulturlösung des ergosinbildenden Stammes Clavi-ceps purpurea IMET PA 134 werden beim natürlichen pH-Wert (5-6) 30 min mit 1,2 kg Bentonit verrührt, über eine Schicht aus Calziumsulfat-Dihydrat abgesaugt und das Filtrat verworfen. Die Trocknung des Feuchtmycel-Bentonit-Gemisches gemäss Beispiel la liefert 2,8 kg lagerfähiges Trockenmycel-Bentonit-Gemisch, das die in der Kultursuspension analytisch bestimmten Alkaloide (Ergosin/Ergo-sinin/Spuren Chanoclavin) zu praktisch 100% enthält.
Der Extraktionseffekt bei der Rührextraktion mit der 10-bis 12fachen Menge Äthylacetat beträgt i.D. 90% bezogen auf den Gehalt des Trockenmycel-Bentonit-Gemisches.
Der Stamm Clariceps purpurea IMET PA 134 ist am 28.Januar 1977 beim Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie Jena hinterlegt worden. Er besitzt die folgenden makroskopischen und mikroskopischen Eigenschaften:
Mikroskopisches Aussehen
Auf den in der Tabelle 2 genannten Agarmedien bestehen die Kolonien aus mehr oder weniger stark verzweigtem Mycel, das eine Dicke von durchschnittlich 4-5 ji besitzt. An den Verzweigungen wurden 7-8 (i gemessen. Konidien
Makroskopisches Aussehen
15 Das makroskopische Aussehen wurde bei Kulturen festgestellt, die bei 24 ± 1 °C auf Agarschalen (0 10 cm) während 14-16 Tagen gewachsen waren. Die Zusammensetzung der Medien ist Tab. 1 zu entnehmen.
20 Medium MIO
sehr gutes Wachstum mit gefalteter, sich teilweise abhebender Oberfläche, braune Pigmentierung Rückseite teilweise mit dunklen Flecken, keine Konidien
2S Medium 846
gutes Wachstum, Kolonien mit gefalteter, gekröseartiger Oberfläche, braun, Rückseite hellbraun, keine Konidien
Medium 829
30 gutes Wachstum. Die hellbraunen bis braunen Kolonien besitzen eine gefaltete, krause Oberfläche und einen unregelmässigen Rand. Die Rückseite ist hellbraun
Medium 784
35 gutes Wachstum. Die Kolonien haben eine braune Oberseite und eine farblose Unterseite. Sie sind gefaltet, kraus und besitzen einen unregelmässigen Rand. Keine Konidien.
Tabelle 2
Zur Kultivation auf Agar verwendete Medien
Komponenten
Medien
MIO
NL846
NL 829
NL784
Bierwürze (ungehopfte 330 ml Vorderwürze, 15%)
Hefeextrakt 3 g 0,5 g 3,0 g
Saccharose 100,0 g 100,0 g
Glucose 50,0 g
Ammoniumeitrat 15,0 g
L-Asparagin 10,0g
Neo-Pepton 3,0 g
Ca(NOs)2 1,0 g 1,0 g
KH2PO4 0,25 g . 0,25 g 0,5 g
FeS04.7H20 10,0 mg 20 mg 20 mg
ZnS04.7Hi0 4,4 mg 20 mg 17,6 mg
MgS04.7H20 0,3 g 0,25 g 0,3 g
KCl 0,2 g
Agar-Agar 25-30 g 30 g 25-30 g 25-30 g
Wasser ad 1000.0 ad 1000.0 ad 1000.0 ad 1000.0
pH 5.5 5.6-5.8 5.4-5.6 5.5
Sterilisation 30 Min., 110°C 30 Min., 110°C 30 Min., 110°C 30 Min., 110°C
Beispiel 4
201 Kultursuspension des im Beispiel 3 genannten Stammes werden ohne Zusatz eines Adsorptionsmittels über eine 20 mm Schicht aus Calziumsulfat-Dihydrat filtriert; das Filtrat, das nur Spuren Ergosin und einen Teil der Begleital-kaloide enthält, wird verworfen. Das isolierte Feuchtmycel
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wird sofort in der Wirbelschicht bei 90° bis zur Ablufttemperatur von 60° getrocknet (Dauer ca. 40 min). Man erhält 0,8 bis 1,0 kg eines lagerfähigen Trockenmycels, das 96-100% des in der Kultursuspension bestimmten Ergosins sowie Spuren der Begleitalkaloide enthält. s
Zur Gewinnung des Alkaloids wird das Trockenmycel nach Anteigen mit 150 ml 10%igem Ammoniakwasser unter Rühren mit 81 Chloroform in 2 Portionen extrahiert und nach Überführung in die wässrig-saure Phase, Reextraktion und Eindampfung aus dem erhaltenen Konzentrat mit Wein- io säure als Rohtartrat gefällt.
Beispiel 6
201 Kultursuspension des im Beispiel 5 genannten Stammes werden ohne Zusatz eines Adsorptionsmittels über is eine 20 mm Schicht von Calziumsulfat-Dihydrat filtriert; das Filtrat das nur Spuren Ergotamin und einen Teil der Begleitalkaloide enthält, wird verworfen. Das isolierte Feuchtmycel wird sofort in der Wirbelschicht bei 90°C bis zur Ablufttemperatur von 60°C getrocknet (Dauer ca. 40 Minuten). Man 20 erhält 0,8 bis 1,0 kg eines lagerfähigen Trockenmycels das 96-100% des in der Kultursuspension bestimmten Ergotamins sowie Spuren der Begleitalkaloide enthält.
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Zur Gewinnung des Ergotamins wird das Trockenmycel nach Anteigen mit 150 ml 10%igem Ammoniakwasser unter Rühren mit 81 Chloroform in 2 Portionen extrahiert und nach Überführung in die wässrig-saure Phase, Reextraktion und Eindampfung aus dem erhaltenen Konzentrat mit Weinsäure als Rohtartrat gefällt.
Beispiel 5
201 Kultursuspension des beim Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie in Jena/DDR unter der Nr. IMET PA 135 hinterlegten ergotaminbildenden Stammes Claviceps purpurea (Fr.) Tul. werden mit 1 kg Bentonit versetzt, 30 Minuten gerührt und abgesaugt. Das Filtrat (181) ist praktisch alkaloidfrei und wird verworfen. Die Trocknung des Filterkuchens in der Wirbelschicht liefert 1,8 kg Trockenmycel-Bentonit-Gemisch, das sowohl das Hauptalkaloid Ergotamin als auch die Nebenalkaloide Ergo-kryptin, Ergometrin und Ergosin in 100%iger Ausbeute in der ursprünglichen Relation von 28:4:3:1 enthält.
Die Extraktion mit Äthylacetat, Überführung in die saure wässrige Phase und Reextraktion erfolgen in Analogie zu Beispiel lb oder 2b. Nach säulenchromatographischer Reinigung erhält man chemische Ausbeuten zwischen 60 und 70% bezogen auf die Kultursuspension.
B

Claims (6)

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1. Verfahren zur Isolierung von Mutterkornalkaloiden aus Kultursuspensionen, dadurch gekennzeichnet, dass man die geerntete Kultursuspension im natürlichen Zustand oder -bei Anwesenheit wasserlöslicher Alkaloidanteile - nach Verrühren mit einer quellfähigen Tonerde mechanisch trennt, das abgenommene Feuchtmycel bzw. Feuchtmycel-Adsor-bens-Gemisch in der Wirbelschicht trocknet, mit organischen, aprotischen Lösungsmitteln extrahiert, den erhaltenen Extrakt mit verdünnten wässrigen Säuren extrahiert und den wässrigen Extrakt nach Alkalisierung mit organischen, mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmitteln reextrahiert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als quellfähige Tonerde 4 bis 5 Gewichtsprozent Bleicherde, Fullererde, Walkerde oder Bentonit verwendet werden und die Kultursuspension vor der mechanischen Trennung 30 min mit dem Adsorbens gerührt wird.
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PATENTANSPRÜCHE
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Wirbelschichttrocknung des Feuchtmycels bzw. Feuchtmycels-Adsorbensgemisches bei 80 bis 90°C während 20 bis 40 min bis zu einer Ablufttemperatur von 50 bis 70°C und einer Restfeuchte von maximal 15% durchgeführt wird.
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die fest-flüssige Extraktion mit niederen Alkylcar-bonsäureestern, vorzugsweise Äthylacetat, Aceton oder halo-genierten Kohlenwasserstoffen, vorzugsweise Chloroform oder Methylenchlorid vornimmt und das Trockenmycel bzw. Trockenmycel-Adsorbensgemisch vor der Extraktion mit 10 bis 20 Gew.% eines wässrigen Alkalis, vorzugsweise Ammoniakwasser, anquillt.
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man den erhaltenen Rohextrakt zur Entfernung nicht basischer Ballaststoffe im Verhältnis 2:1 bis 1:1 mit wässrigen Säuren, vorzugsweise 3 bis 5%iger Phosphorsäure oder Weinsäure, extrahiert.
6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die erhaltene wässrig-saure Phase nach Einstellen eines pH-Wertes von 8,0 bis 9,5 im Verhältnis 1:1 bis 3:1 mit einem niederen Alkylcarbonsäureester, vorzugsweise Äthylacetat oder einem halogenierten Kohlenwasserstoff, vorzugsweise Chloroform oder Methylenchlorid, reextrahiert.
CH1295778A 1977-12-20 1978-12-20 Verfahren zur isolierung von mutterkornalkaloiden aus kultursuspensionen. CH638813A5 (de)

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SE (1) SE7813066L (de)
SU (1) SU985020A1 (de)
YU (1) YU261878A (de)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989003037A1 (en) * 1987-09-28 1989-04-06 The Texas A&M University System Selective immobilization and detection of mycotoxins in solution
US5178832A (en) * 1987-09-28 1993-01-12 The Texas A&M University System Selective immobilization and detection of mycotoxins in solution

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2835675A (en) * 1951-11-02 1958-05-20 Abe Matazo Elymoclavine and manufacture of ergot alkaloids by culture
US2809920A (en) * 1953-04-10 1957-10-15 Saul & Co Process for the preparation of ergotamine, ergotaminine and ergometrine by saprophytic culture of ergot (claviceps purpurea [fr] tul.) in vitro and isolation of the alkaloids thus produced

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