Verfahren zur Herstellung von D-Ribose Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von D-Ribose.
Die bisher zur Herstellung von D-Ribose zur An wendung gelangten Verfahren (beispielsweise durch Hy drolyse von Hefe-Nuklein-Säure) hängen von der Zer setzung von Stoffen ab, die mit der Ribonukleinsäure verwandt sind; infolgedessen sind diese bekannten Ver fahren ziemlich kostspielig.
Die vorliegende Erfindung beruht auf der Erkenntnis, dass bei Gärungen, die mit einer Vielzahl von Mikro organismen in Medien durchgeführt werden, die eine verhältnismässig hohe Konzentration an Metallsalzen, insbesondere Kalium- und Magnesiumsalzen, enthalten, eine bemerkenswert grosse Menge von D-Ribose in dem Gärungsmedium angesammelt wird, wenn diesem ge trennt oder in Kombination ein Zusatz von bestimmten Metallsalzen in verhältnismässig hoher Konzentration bei gefügt wird.
Es hat sich dabei herausgestellt, dass die oben be schriebene Beobachtung vom Stamm der Mikroorganis men unabhängig ist, also auch für Stämme von Mikro organismen gültig ist, die beispielsweise zu den Gattun gen Micrococcus, Brevibacterium, Aerobacterium, Co rynebacterium, Bacillus usw., gehören. Die Erfindung kann auch bei Nährstoffe benötigenden Mutanten ange wendet werden, die man durch verschiedene mutations- fördernde Behandlungen erhält.
Das Kulturmedium kann genügende Mengen von Sacchariden und anderen Kohlenstoffquellen (beispiels weise Glukose, Stärke, Hydrolyse-Stärke und Melasse), Stickstoffquellen (beispielsweise Harnstoff, Ammonium chlorid und Ammoniumnitrat), anorganische Verbindun gen (beispielsweise Kaliumphosphat, Magnesiumsulfat, Mangansulfat, Zinksulfat, Eisensulfat, Eisenchlorid, Zink chlorid und Kalziumchlorid) sowie stickstoffhaltige na türliche Stoffe (beispielsweise Flüssigkeit der Maismai sche, Hefeextrakt,- Fleischextrakt,
Pepton, Hydrolyse- Protein und Fischmehl) enthalten. Im Falle von Nähr stoffe benötigenden Mutationsstämmen müssen natür lich die erforderlichen Nährstoffe dem Medium zugesetzt werden, um das Wachstum dieser Mutanten zu gewähr leisten.
Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung von D-Ribose kennzeichnet sich dadurch, dass man in einem ein Saccharid enthaltenden wässrigen Näheboden mit 0,01 bis 0,2 Gew.- /o Magnesiumionen, 0,1 bis 1,5 Gew.-7o Kaliumionen und 0,0001 bis 1 g Mangan-, Eisen- und/ oder Zinkionen in<B>100</B> Milliliter Lösung einen D-Ribose bildenden Mikroorganismus aerobisch züchtet und die erzeugte D-Ribose abtrennt.
Die Gärung wird aerobisch, z.B. mit einer Rühr- oder Belüftungs - Gärungs - Anlage, beispielsweise bei einer Züchtungstemperatur von 20 bis 40 C durchgeführt. Nach einer Züchtungsdauer von 2 bis 8 Tagen hat sich eine bemerkenswert grosse Menge von D-Ribose in dem Kulturmedium und in den Zellen gebildet.
Nach Beendigung der Gärung kann die D-Ribose durch Behandlung mit einem Ionenaustauscher-Harz, Ad sorption, Fällung und Extraktion gewonnen werden, wie in den nachstehend aufgeführten Beispielen beschrieben wird, die nur zur Erläuterung dienen und die Erfindung in keiner Weise einschränken sollen.
In den folgenden Beispielen sind, wenn nicht aus drücklich etwas anderes vermerkt ist, die Prozentsätze auf das Gewicht bezogen.
<I>Beispiel 1</I> Brevibaeterium ammoniagenes ATCC No. 6872 wird verwendet. Es wird unter Rühren in dem Impfkultur medium gezüchtet, das 2% Glukose, 1% Pepton, 1% Hefeextrakt und 0,25% NaCI enthält und dann in 30 Mil- liliter-Portionen in einen 250 Milliliter-Erlenmeyerkolben gegeben, in welchem es 24 Stunden lang bei 30 C bleibt.
Ein unten angeführtes Gärungsmedium, das in 20 Milli- liter-Portionen in den 250 Milliliter-Erlenmeyerkolben eingeführt wird, wird mit ungefähr 10 Vol.-% der oben angeführten Impfkultur geimpft. Das Gärungsmedium wird ebenfalls bei 30 C unter Rühren gezüchtet.
<I>Zusammensetzung des Gärungsmediums:</I> 100 Gramm Glukose, 6 Gramm Harnstoff, 10 Gramm KH.-P04, 10 Gramm K,HP04, 10 Gramm MgSO, -7H1!0, 30 y Biotin, 0,1 Gramm CaCl2 - 2H20 und 2 Gramm MnSO, - 4H20 werden mit Wasser zu einem Liter er gänzt, wonach der pH-Wert vor der Sterilisation auf 8,0 eingestellt wird.
Auf diese Art und Weise werden in dem 120 Stunden gezüchteten Gärungsmedium 11 Milligramm D-Ribose pro Milliliter erzeugt. Eine ähnliche Ansammlung von D-Ribose wird ebenfalls in den Zellen festgestellt. Die Glukose wird beinahe vollständig verbraucht.
Die Zellen werden aus diesem Gärungsmedium ent fernt und ein Liter des Filtrates wird mit Salzsäure auf einen pH-Wert von 5,0 eingestellt und dann durch eine Harz-Dia-Ionen-Kolonne SK No. 1 (H-Typ) geschickt.
Danach wird destilliertes Wasser durch die Kolonne geschickt und Ribose-Anreicherungen in den Ausflüssen werden gesammelt und wieder durch eine Dia-Ionen- Kolonne SA No. 21A (OH-Typ) geschickt, wobei der pH-Wert unverändert beibehalten wird. Die Ribose-An- reicherungen der Ausflüsse werden zusammen gesam melt, auf einen pH-Wert von 6,5 eingestellt und dann unter verringertem Druck bei 50 C konzentriert.
Die konzentrierte Lösung entfärbt man mit Aktivkohlepulver und lässt sie dann nach Zusatz von Alkohol in einem Kühlraum stehen. Man erhält Ribose in kristallinischer Form (Ausbeute 8,6 Gramm).
<I>Beispiel 2</I> Brevibacterium ammoniagenes ATCC No. <I>6872</I> wird für die Gärung verwendet. Für das Impfpräparat werden 30 Milliliter eines wässrigen Kulturmediums, das 2% Glukose, 1% Pepton, 1% Hefeextrakt und 0.25% Na triumchlorid enthält, in einen Erlenmeyerkolben einge führt und sterilisiert, wonach man den oben angeführten Stamm unter Rühren in diesem Medium bei 30 C wäh rend 24 Stunden wachsen lässt.
Das Gärungsmedium, das die folgende Zusammensetzung hat, wird in 250 Milli- liter-Erlenmeyerkolben in einzelnen, 20 Milliliter-Portio- nen hergestellt und sterilisiert, anschliessend mit der oben beschriebenen Impfkultur geimpft und nach der Impfung während des weiteren Wachstums bei 30 C gerührt.
EMI0002.0048
Glukose <SEP> 10 <SEP> % <SEP> MgSO, <SEP> - <SEP> 7H20 <SEP> 1,0 <SEP> %
<tb> Harnstoff <SEP> 1,0% <SEP> Biotin <SEP> 30/Liter
<tb> KH,P04 <SEP> 1,0% <SEP> CaCl2 <SEP> - <SEP> 211_O <SEP> <B>0,010/,</B>
<tb> K,HP04 <SEP> 1,0% Nach der Sterilisation wird der pn-Wert auf 8,0 ein gestellt.
Danach werden verschiedene Arten von Metallsalzen getrennt zugesetzt und Mangansalze und andere metal lische Salze werden ebenfalls in Mischungen dem wie oben beschrieben hergestellten Kulturmedium zugesetzt. Die Mengen von D-Ribose, die sich nach 96 Stunden Züchtung angesammelt haben, sind in Tabelle 1 ange geben:
EMI0002.0053
Tabelle <SEP> 1
<tb> Art <SEP> des <SEP> metal- <SEP> Konzentration <SEP> Erzeugte <SEP> D lischen <SEP> Ions <SEP> des <SEP> Zuschlages <SEP> Ribose-menge
<tb> O <SEP> 0 <SEP> 0,08 <SEP> mg/ml
<tb> Fe-- <SEP> 0,05% <SEP> 4,2 <SEP> > >
<tb> Mn-- <SEP> 0,05% <SEP> 7,9 <SEP> <SEP>
<tb> Co- <SEP> 0,05% <SEP> 0,0 <SEP> <SEP>
<tb> Ni-"-" <SEP> 0,05% <SEP> 0,0 <SEP> <SEP>
<tb> Zn++ <SEP> 0,05% <SEP> 3,0 <SEP> <SEP>
<tb> Mn- <SEP> -f- <SEP> Fe- <SEP> 0,05% <SEP> -I-- <SEP> 0,05% <SEP> 8,3 <SEP> <SEP>
<tb> Mn++ <SEP> -f- <SEP> Zn++ <SEP> 0,05% <SEP> -I- <SEP> 0,05% <SEP> 7,7 <SEP> > >
<tb> Mn- <SEP> -I- <SEP> Co- <SEP> 0,05% <SEP> -I- <SEP> 0,05% <SEP> 0,0 <SEP> <SEP>
<tb> <I>MW-'</I> <SEP> -I-- <SEP> Ni- <SEP> 0,05 .o <SEP> -f- <SEP> 0,05% <SEP> 0,
0 <SEP> <SEP> <I>Beispiel 3</I> Bei Verwendung des gleichen Stammes und der glei chen Züchtungsbedingungen wie im Beispiel 2 wird die Menge des dem Medium zugesetzten MnS04 - 4H20 ver ändert. Nach 96 Stunden haben sich folgende D-Ribose- Mengen angesammelt:
EMI0002.0058
Tabelle <SEP> 2
<tb> Menge <SEP> von
<tb> zugesetztem <SEP> Mn-H- <SEP> Erzeugte <SEP> D-Ribose-Menge
<tb> 0 <SEP> % <SEP> 0,1 <SEP> Milligramm/Milliliter
<tb> <B>0,0001%</B> <SEP> 2,0 <SEP> <SEP>
<tb> <B>0,0008%</B> <SEP> 3,8 <SEP> <SEP>
<tb> 0,008 <SEP> % <SEP> 7,4 <SEP> <SEP>
<tb> 0,004 <SEP> % <SEP> 10,7 <SEP> <SEP>
<tb> 0,08 <SEP> % <SEP> 6,5 <SEP> > >
<tb> 0,4 <SEP> % <SEP> 5,1 <SEP> <SEP>
<tb> <U>0,8 <SEP> %</U> <SEP> 1,2 <SEP> <SEP> <I>Beispiel 4</I> Der verwendete Stamm ist Micrococcus glutamicus KY <I>3803</I> (ATCC No. 15455).
Das Gärungsverfahren und die Zusammensetzung des Impfkulturmediums sind die gleichen wie in Beispiel 1.
Die Zusammensetzung des Gärungsmediums wird un ten angegeben.
Zusammensetzung <I>des</I> Gärungsmediums: 100 Gramm Glukose, 3 Gramm Harnstoff, 2 Gramm KH2P04, 1 Gramm Kf!HP04, 1 Gramm MgS04 - 7H20, 10 Gramm Biotin, 0,1 Gramm CaCl, - 2H20 und 2 Gramm MnS0, - 4H20 werden mit Wasser zu einem Liter ergänzt und der pH-Wert wird vor der Sterilisation auf 8,0 eingestellt.
Nach 120 Stunden Züchtung haben sich 8,2 Milli gramm D-Ribose in jedem Milliliter des Gärungsmediums angesammelt.
Das Gärungsmedium wird auf einen pH-Wert von 4,5 eingestellt, während 10 Minuten auf 70 C erhitzt und zentrifugiert um die Zellen abzuscheiden. Aus der sich ergebenden Flüssigkeit wird ein Liter der oben schwimmenden Flüssigkeitsschicht abgetrennt und mit wässrigem NaOH auf einen pH-Wert von 7,8 eingestellt und mit 50 Gramm zugesetzter gepresster Brothefe wäh rend 10 Minuten bei 37 C zur Reaktion gebracht, um die Restglukose zu verbrauchen. Die Flüssigkeit wird zentrifugiert und die obenschwimmende Flüssigkeits schicht wird gemäss dem gleichen Verfahren wie in Bei- spiel 1 beschrieben, behandelt.
Man erhält 5,7 Gramm kristalliner Ribose.
<I>Beispiel 8</I> Baciltus cereus (ATCC No. 9139) wird in einem im Beispiel 2 beschriebenen Medium gezüchtet und auf ein Medium mit der folgenden Zusammensetzung übertra gen und darin während 102 Stunden unter Zusatz von Mn- und Zn- (0,05% bzw. 0,02%) gezüchtet. Die Men ge von angesammelter D-Ribose beträgt 7,1 Milligramm pro Milliliter des Gärungsmediums.
EMI0003.0011
Glukose <SEP> 10 <SEP> a/o <SEP> NH,CI <SEP> <I>0,7 /o</I>
<tb> <B>K2HPO4</B> <SEP> 0,6% <SEP> <B>KH2PO1</B> <SEP> 0,6%
<tb> MgS04 <SEP> - <SEP> <B>7H20</B> <SEP> 0,6% <SEP> Hefeextrakt <SEP> <B>1,0%</B> Die gemäss dem obigen erhaltene D-Ribose ergibt nach der gleichen Behandlung wie im Beispiel 1 5,7 Gramm kristalliner Ribose.
<I>Beispiel 6</I> Brevibacterium ammoniagenes (ATCC No. 6872) wird in der gleichen Art und Weise wie in Beispiel 2 gezüch tet. Das Impfkulturmedium wird in Portionen von 150 Millilitern in 2-Liter-Erlenmeyerkolben gegeben, 18 Stun den lang unter Rühren gezüchtet und dann in 5-Liter- Gärungskolben (in Portionen von 3 Litern) eingeführt, worin es mit einem Belüftungsvolumen von 3 Liter/Mil- liliter und unter Rühren mit 400 U/min. weiter gezüchtet wird.
Die Zusammensetzung des wässrigen Gärungsmit tels ist folgende: 10% Glukose; 1,07, KH@P04; 1,0% K@HP04; 1,0% MgS04 - 7H20; 100 y/Liter Biotin; 0,010/, CaCl2 . 2H20; 0,2a/o Harnstoff und O,loo MnSO, -4H,0.
Das pH des Gärungsmediums wird mit Harnstoff auf einen geeigneten Wert eingestellt. Nach 66 Stunden Züch tung haben sich 12,7 Milligramm D-Ribose in jedem Milliliter des Gärungsmediums angesammelt. Die D-Ri- bose wird in der gleichen Art und Weise wie im Beispiel 2 behandelt. Man erhält 30 Gramm D-Ribose-Kristalle.
Process for the production of D-ribose The present invention relates to a process for the production of D-ribose.
The methods used so far for the production of D-ribose (for example by hydrolysis of yeast nucleic acid) depend on the decomposition of substances that are related to ribonucleic acid; as a result, these known methods are quite costly.
The present invention is based on the finding that fermentations that are carried out with a large number of microorganisms in media that contain a relatively high concentration of metal salts, in particular potassium and magnesium salts, contain a remarkably large amount of D-ribose Fermentation medium is accumulated when this ge separates or in combination an addition of certain metal salts in a relatively high concentration is added.
It has been found that the observation described above is independent of the strain of the microorganisms, so it is also valid for strains of microorganisms belonging to the genera Micrococcus, Brevibacterium, Aerobacterium, Co rynebacterium, Bacillus, etc. . The invention can also be applied to nutrient-requiring mutants obtained by various mutation-promoting treatments.
The culture medium can contain sufficient amounts of saccharides and other carbon sources (e.g. glucose, starch, hydrolysis starch and molasses), nitrogen sources (e.g. urea, ammonium chloride and ammonium nitrate), inorganic compounds (e.g. potassium phosphate, magnesium sulfate, manganese sulfate, zinc sulfate, iron sulfate, Iron chloride, zinc chloride and calcium chloride) as well as nitrogen-containing natural substances (e.g. liquid from maize mash, yeast extract, meat extract,
Peptone, hydrolysis protein and fish meal). In the case of mutation strains that require nutrients, the necessary nutrients must of course be added to the medium to ensure the growth of these mutants.
The process according to the invention for the production of D-ribose is characterized in that in an aqueous near soil containing a saccharide with 0.01 to 0.2 wt / o magnesium ions, 0.1 to 1.5 wt 0.0001 to 1 g of manganese, iron and / or zinc ions in <B> 100 </B> milliliter solution aerobically cultivates a D-ribose-forming microorganism and separates the D-ribose produced.
The fermentation is carried out aerobically, e.g. with a stirring or ventilation - fermentation - carried out, for example at a cultivation temperature of 20 to 40 C. After a culture period of 2 to 8 days, a remarkably large amount of D-ribose has formed in the culture medium and in the cells.
After fermentation has ended, the D-ribose can be obtained by treatment with an ion exchange resin, adsorption, precipitation and extraction, as is described in the examples given below, which are only intended to be illustrative and are not intended to limit the invention in any way.
In the following examples, unless expressly stated otherwise, the percentages are based on weight.
<I> Example 1 </I> Brevibaeterium ammoniagenes ATCC No. 6872 is used. It is grown with stirring in the seed culture medium, which contains 2% glucose, 1% peptone, 1% yeast extract and 0.25% NaCl and then placed in 30 milliliter portions in a 250 milliliter Erlenmeyer flask, in which there are 24 Stays at 30 C for hours.
A fermentation medium listed below, which is introduced in 20 milliliter portions into the 250 milliliter Erlenmeyer flask, is inoculated with approximately 10% by volume of the above-mentioned inoculum. The fermentation medium is also grown at 30 C with stirring.
<I> Composition of the fermentation medium: </I> 100 grams of glucose, 6 grams of urea, 10 grams of KH.-P04, 10 grams of K, HP04, 10 grams of MgSO, -7H1! 0, 30 y biotin, 0.1 grams of CaCl2 - 2H20 and 2 grams of MnSO, - 4H20 are added to one liter with water, after which the pH is adjusted to 8.0 before sterilization.
In this way, 11 milligrams of D-ribose per milliliter are produced in the fermentation medium grown for 120 hours. A similar accumulation of D-ribose is also found in the cells. Almost all of the glucose is used up.
The cells are removed from this fermentation medium and one liter of the filtrate is adjusted to a pH of 5.0 with hydrochloric acid and then passed through a resin slide ion column SK No. 1 (H type) sent.
Then distilled water is sent through the column and ribose accumulations in the outflows are collected and again passed through a Dia-ion column SA No. 21A (OH type), keeping the pH unchanged. The ribose accumulations of the outflows are collected together, adjusted to a pH of 6.5 and then concentrated at 50 ° C. under reduced pressure.
The concentrated solution is decolorized with activated charcoal powder and then left in a cold room after adding alcohol. Ribose is obtained in crystalline form (yield 8.6 grams).
<I> Example 2 </I> Brevibacterium ammoniagenes ATCC No. <I> 6872 </I> is used for fermentation. For the inoculation preparation, 30 milliliters of an aqueous culture medium containing 2% glucose, 1% peptone, 1% yeast extract and 0.25% sodium chloride are introduced into an Erlenmeyer flask and sterilized, after which the above strain is stirred in this medium at 30 C is allowed to grow for 24 hours.
The fermentation medium, which has the following composition, is prepared and sterilized in 250 milliliter Erlenmeyer flasks in individual 20 milliliter portions, then inoculated with the above-described inoculum and, after inoculation, stirred at 30 ° C. during further growth.
EMI0002.0048
Glucose <SEP> 10 <SEP>% <SEP> MgSO, <SEP> - <SEP> 7H20 <SEP> 1.0 <SEP>%
<tb> Urea <SEP> 1.0% <SEP> Biotin <SEP> 30 / liter
<tb> KH, P04 <SEP> 1.0% <SEP> CaCl2 <SEP> - <SEP> 211_O <SEP> <B> 0.010 /, </B>
<tb> K, HP04 <SEP> 1.0% After the sterilization, the pn value is set to 8.0.
Thereafter, different types of metal salts are added separately and manganese salts and other metallic salts are also added in mixtures to the culture medium prepared as described above. The amounts of D-ribose accumulated after 96 hours of cultivation are given in Table 1:
EMI0002.0053
Table <SEP> 1
<tb> Type <SEP> of the <SEP> metal- <SEP> concentration <SEP> <SEP> generated <SEP> ions <SEP> of the <SEP> addition <SEP> amount of ribose
<tb> O <SEP> 0 <SEP> 0.08 <SEP> mg / ml
<tb> Fe-- <SEP> 0.05% <SEP> 4.2 <SEP>>>
<tb> Mn-- <SEP> 0.05% <SEP> 7.9 <SEP> <SEP>
<tb> Co- <SEP> 0.05% <SEP> 0.0 <SEP> <SEP>
<tb> Ni - "-" <SEP> 0.05% <SEP> 0.0 <SEP> <SEP>
<tb> Zn ++ <SEP> 0.05% <SEP> 3.0 <SEP> <SEP>
<tb> Mn- <SEP> -f- <SEP> Fe- <SEP> 0.05% <SEP> -I-- <SEP> 0.05% <SEP> 8.3 <SEP> <SEP>
<tb> Mn ++ <SEP> -f- <SEP> Zn ++ <SEP> 0.05% <SEP> -I- <SEP> 0.05% <SEP> 7.7 <SEP>>>
<tb> Mn- <SEP> -I- <SEP> Co- <SEP> 0.05% <SEP> -I- <SEP> 0.05% <SEP> 0.0 <SEP> <SEP>
<tb> <I> MW- '</I> <SEP> -I-- <SEP> Ni- <SEP> 0.05 .o <SEP> -f- <SEP> 0.05% <SEP> 0 ,
0 <SEP> <SEP> <I> Example 3 </I> When using the same strain and the same cultivation conditions as in Example 2, the amount of MnS04-4H20 added to the medium is changed. After 96 hours, the following amounts of D-ribose have accumulated:
EMI0002.0058
Table <SEP> 2
<tb> amount <SEP> of
<tb> added <SEP> Mn-H- <SEP> <SEP> amount of D-ribose produced
<tb> 0 <SEP>% <SEP> 0.1 <SEP> milligrams / milliliter
<tb> <B> 0.0001% </B> <SEP> 2.0 <SEP> <SEP>
<tb> <B> 0.0008% </B> <SEP> 3.8 <SEP> <SEP>
<tb> 0.008 <SEP>% <SEP> 7.4 <SEP> <SEP>
<tb> 0.004 <SEP>% <SEP> 10.7 <SEP> <SEP>
<tb> 0.08 <SEP>% <SEP> 6.5 <SEP>>>
<tb> 0.4 <SEP>% <SEP> 5.1 <SEP> <SEP>
<tb> <U> 0.8 <SEP>% </U> <SEP> 1.2 <SEP> <SEP> <I> Example 4 </I> The strain used is Micrococcus glutamicus KY <I> 3803 < / I> (ATCC No. 15455).
The fermentation process and the composition of the inoculum culture medium are the same as in Example 1.
The composition of the fermentation medium is given below.
Composition <I> of </I> the fermentation medium: 100 grams of glucose, 3 grams of urea, 2 grams of KH2P04, 1 gram of Kf! HP04, 1 gram of MgS04 - 7H20, 10 grams of biotin, 0.1 grams of CaCl, -2H20 and 2 grams MnS0.4H20 are made up to one liter with water and the pH is adjusted to 8.0 before sterilization.
After 120 hours of cultivation, 8.2 milli grams of D-ribose have accumulated in each milliliter of the fermentation medium.
The fermentation medium is adjusted to a pH value of 4.5, heated to 70 ° C. for 10 minutes and centrifuged to separate the cells. One liter of the liquid layer floating above is separated from the resulting liquid and adjusted to a pH of 7.8 with aqueous NaOH and reacted with 50 grams of pressed bread yeast for 10 minutes at 37 ° C. in order to consume the residual glucose . The liquid is centrifuged and the floating liquid layer is treated according to the same method as described in example 1.
5.7 grams of crystalline ribose are obtained.
<I> Example 8 </I> Baciltus cereus (ATCC No. 9139) is grown in a medium described in Example 2 and transferred to a medium with the following composition and placed therein for 102 hours with the addition of Mn- and Zn- ( 0.05% and 0.02%) are bred. The amount of D-ribose accumulated is 7.1 milligrams per milliliter of fermentation medium.
EMI0003.0011
Glucose <SEP> 10 <SEP> a / o <SEP> NH, CI <SEP> <I> 0.7 / o </I>
<tb> <B> K2HPO4 </B> <SEP> 0.6% <SEP> <B> KH2PO1 </B> <SEP> 0.6%
<tb> MgS04 <SEP> - <SEP> <B> 7H20 </B> <SEP> 0.6% <SEP> yeast extract <SEP> <B> 1.0% </B> The D After the same treatment as in Example 1, ribose gives 5.7 grams of crystalline ribose.
<I> Example 6 </I> Brevibacterium ammoniagenes (ATCC No. 6872) is grown in the same manner as in Example 2. The inoculum culture medium is placed in 150 milliliter portions in 2 liter Erlenmeyer flasks, cultured for 18 hours with stirring and then introduced into 5 liter fermentation flasks (in 3 liter portions) in which it is filled with a ventilation volume of 3 liters / mil - liliter and with stirring at 400 rpm. is further bred.
The composition of the aqueous fermentation agent is as follows: 10% glucose; 1.07, KH @ PO4; 1.0% K @ HP04; 1.0% MgSO 4 - 7H 2 O; 100 y / liter biotin; 0.010 /, CaCl2. 2H20; 0.2 a / o urea and 0.100 MnSO, -4H, 0.
The pH of the fermentation medium is adjusted to a suitable value with urea. After 66 hours of cultivation, 12.7 milligrams of D-ribose have accumulated in each milliliter of the fermentation medium. The D-ribose is treated in the same way as in example 2. 30 grams of D-ribose crystals are obtained.