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BRPI0720982A2 - Composições farmacêuticas de galatos de alquila - Google Patents

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BRPI0720982A2
BRPI0720982A2 BRPI0720982-7A BRPI0720982A BRPI0720982A2 BR PI0720982 A2 BRPI0720982 A2 BR PI0720982A2 BR PI0720982 A BRPI0720982 A BR PI0720982A BR PI0720982 A2 BRPI0720982 A2 BR PI0720982A2
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BR
Brazil
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gallate
alkyl
alkyl gallate
octyl
mrsa
Prior art date
Application number
BRPI0720982-7A
Other languages
English (en)
Inventor
Tomihiko Higuchi
Hirofumi Shibata
Masanori Higuchi
Original Assignee
Microbiotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbiotech Inc filed Critical Microbiotech Inc
Publication of BRPI0720982A2 publication Critical patent/BRPI0720982A2/pt

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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÕES FARMACÊUTICAS DE GALATOS DE ALQUILA".
Campo Técnico
A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica tendo um efeito antifúngico, antibacteriano, ou antiviral, que é útil como um produto farmacêutico, um agroquímico, um cosmético e um produto funcio- nal alimentar. Mais particularmente, a invenção refere-se a um método para reforçar as atividades antifúngicas, antibacterianas e antivirais por gaiatos de alquila, e refere-se a uma nova composição farmacêutica útil como um agen- te terapêutico para infecção ou um fármaco descrito para prevenção nos campos de esterilização e desinfecção externas gerais, dermatologia, odon- tologia oral (cáries dentárias, periodontite, halitose, estomatite), oftalmologia, e ginecologia (saúde da mulher e proteção sanitária) ou como um produto farmacêutico, um agroquímico (animais domésticos, animais de estimação, vida marinha, plantas), um cosmético, um produto funcional alimentar e simi- lares.
Técnica antecedente
Alguns dos gaiatos de alquila foram aprovados como aditivos alimentares pelo WHO e FDA (gaiatos de propila, gaiatos de octila, gaiatos de dodecila) ou como aditivos farmacêuticos (gaiatos de propila) ou como quase fármacos (gaiato de octila) pelo Japanese Ministry of Health, Labour and Welfare; isto significa que eles são superiores em segurança.
Os presentes inventores investigaram estes gaiatos de alquila de um novo ponto de vista em detalhes e descobriram que estes têm atividades antifúngicas, antibacterianas e antivirais e propuseram usá-los como produ- tos farmacêuticos (Documento de patente 1).
As atividades antifúngicas, antibacterianas e antivirais destes gaiatos de alquila, entretanto, não são sempre suficientemente fortes, e o reforço de suas atividades foi desejado. Além disso, visto que os gaiatos de alquila foram altamente hidrofóbicos e moderadamente solúveis em água, sua formulação não foi sempre fácil.
Documento de patente 1: JP-A-2006-306836 Descrição da Invenção
Problema a ser solucionado pela invenção
Na situação acima mencionada, o propósito da invenção é refor- çar as atividades antifúngicas, antivirais e antibacterianas dos gaiatos de alquila também desenvolvendo e aprofundando o estudo dos inventores, e fornecer uma nova tecnologia e métodos que permitam a solubilização dos gaiatos de alquila em água.
Meios para Solucionar os Problemas
A fim de solucionar o problema mencionado acima, a invenção é caracterizada pelos seguintes:
Primeiro: A composição farmacêutica de gaiatos de alquila que contém gaiatos de alquila como ingredientes ativos tendo um efeito antifúgi- co, antiviral ou antibacteriano, em que o grupo alquila do gaiato de alquila é ligado a um grupo galoíla para formar uma ligação de éster, caracterizada por compreender os seguintes dois membros de gaiatos de alquila:
(A) um gaiato de alquila em que o número de carbono do grupo alquila é na faixa de 5 a 16; e
(B) outro gaiato de alquila em que o número de carbono do gru- po alquila é menor do que aquele de (A).
Segundo: A primeira composição farmacêutica de gaiatos de al-
quila, caracterizada pelo fato de que o número de carbono do grupo alquila do gaiato de alquila (B) é na faixa de 2 a 7.
Terceiro: A primeira ou segunda composição farmacêutica de gaiatos de alquila, caracterizada por também conter (C) pelo menos um membro selecionado de um sal de metal de álcali, ácido bórico, borato de sódio e um sal orgânico.
Quarto: Qualquer uma da primeira à terceira composição farma- cêutica de gaiatos de alquila, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados misturando-se os ga- 30 latos de alquila com pelo menos um membro selecionado de um tensoativo não-iônico, polietileno glicol e arginina ou um cloridrato de um derivado des- tas em uma solução aquosa ou em um tampão de pH. Quinto: A quarta composição farmacêutica de gaiatos de alquila, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados misturando-se 1 a 10 partes em peso de um ten- soativo não-iônico e 100 a 5000 partes em peso de água com base em 1 parte em peso de gaiatos de alquila.
Sexto: A quinta composição farmacêutica de gaiatos de alquila, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados misturando-se e aquecendo-se os gaiatos de alquila em uma temperatura de 30 a 95°C seguido por resfriamento em temperatura ambiente.
Efeito da Invenção
De acordo com a invenção, as atividades antifúgicas, antivirais e antibacterianas no produto farmacêutico contendo gaiatos de alquila podem ser aumentadas, e os gaiatos de alquila podem ser solubilizados em água.
Breve Descrição dos Desenhos
[Figura 1] A Figura 1 é um gráfico mostrando uma redução do tempo requerido para matar bactériass pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila contra cepas de MRSA COL.
[Figura 2] A Figura 2 é um gráfico mostrando uma redução do tempo requerido para matar mofo pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila contra Candida albicans ATCC 10231.
[Figura 3] A Figura 3 é um gráfico mostrando reforço da atividade virótica da influenza de gaiatos de n-dodecila por gaiato de n-hexila e gaiato de n-butila. O eixo abscissa indica as concentrações de gaiatos de n- dodecila.
[Figura 4] A Figura 4 é um gráfico mostrando reforço da atividade viral anti-influenza de gaiatos de octila em células MDCK por gaiatos de pro- pila.
[Figura 5] A Figura 5 é um gráfico mostrando o efeito de reforço de gaiatos de propila sobre a atividade antiviral de gaiatos de octila contra HSV-1.
[Figura 6] A Figura 6 é um gráfico mostrando uma redução do tempo requerido para matar viroses pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila contra influenza B/T/1/05.
[Figura 7] A Figura 7 é um gráfico mostrando o curso de tempo da atividade virótica de gaiatos de octila sozinho contra o vírus influenza B/T/1/05.
[Figura 8] A Figura 8 é um gráfico mostrando o curso de tempo da atividade virótica de gaiatos de propila sozinho contra o vírus influenza B/T/1/05.
[Figura 9] A Figura 9 é um gráfico mostrando o efeito da concen- tração de gaiatos de propila sobre o curso de tempo da atividade virótica de gaiatos de octila (5 mg/L) contra vírus influenza B/T/1/05.
[Figura 10] A Figura 10 é um gráfico mostrando o efeito da con- centração de gaiatos de propila sobre o curso de tempo da atividade virótica de gaiatos de octila (10 mg/L) contra o vírus influenza B/T/1/05.
[Figura 11] A Figura 11 é um gráfico mostrando o efeito da con-
centração de gaiatos de propila sobre o curso de tempo da atividade virótica de gaiatos de octila (20 mg/L) contra o vírus influenza B/T/1/05.
[Figura 12] A Figura 12 é um gráfico mostrando o curso de tempo de reforço da atividade virótica pelo uso concomitante de gaiatos de octila (30 mg/L) e gaiatos de propila (300 mg/L) contra o vírus influenza B/T/1/05. Melhor Modo de Realizar a Invenção
A seguir, uma modalidade da invenção será descrita.
Os gaiatos de alquila usados na invenção podem ter um outro substituinte ou substituintes apropriados, por exemplo, um grupo alquila, um grupo cicloalquila, um grupo arila, um grupo alcóxi, um grupo éster, um gru- po amida, um grupo amino, ou similares em adição ao grupo de ligação de éster entre um grupo alquila e um grupo galoíla.
Exemplos específicos do grupo alquila dos gaiatos de alquila usados na invenção incluem um grupo n-propila, um grupo isopropila, um grupo n-butila, um grupo isobutila, um grupo n-amila, um grupo isoamila, um grupo n-hexila, um grupo n-heptila, um grupo n-octila, um grupo n-nonila, um grupo n-decila, um grupo n-undecila, um grupo n-dodecila e similares. Os termos "antifúngico", "antiviral" e "antibacteriano" na invenção também incluem os significados de "fungicida", "viricida" e "bactericida", res- pectivamente.
Como descrito acima, a composição farmacêutica de gaiatos de alquila, em que o efeito do ingrediente ativo da invenção é reforçado, é es- sencialmente caracterizada por compreender a pluralidade de:
(A) um gaiato de alquila em que o número de carbono do grupo alquila é na faixa de 5 a 16; e
(B) outro gaiato de alquila em que o número de carbono do gru- 10 po alquila é menor do que aquele de (A). Aqui, o número de carbono do gru- po alquila do gaiato de alquila (B) é preferivelmente na faixa de 2 a 7, e uma combinação de, por exemplo, o gaiato de alquila (A) em que o número de carbono do grupo alquila é na faixa de 8 a 12 e o gaiato de alquila (B) em que o número de carbono do grupo alquila é na faixa de 3 a 7 é preferivel-
mente exemplificada.
O significado da característica acima será descrito em detalhes
abaixo.
Nas seguintes descrições, ND nas tabelas denota "Não Detecta- do", significa que o crescimento de bactéria está completamente inibido e nenhuma bactéria foi detectada.
1. Reforço das atividades antimicrobianas
A Tabela 1 mostra que os valores MIC (concentração de inibição de crescimento mínima) de gaiatos de octila contra bactérias gram-positivas e gram-negativas foram diminuídos pela adição de gaiatos de isoamila em 25 uma concentração igual a, ou menor do que, a MIC na qual nenhuma ativi- dade antimicrobiana foi observada, e que este decréscimo foi também refor- çado pela adição de NaCI.
Verificou-se que fenômenos similares foram observados quando gaiato de n-heptila, gaiato de n-hexila, gaiato de n-pentila, gaiato de n-butila, gaiato de isobutila ou gaiato de n-propila (e seus tipos estruturalmente simi- lares) foi adicionado em lugar de gaiatos de isoamila em uma concentração igual a, ou menor do que a MIC, na qual nenhuma atividade antimicrobiana foi observada. Verificou-se também que similarmente, o volume MIC de gala- to de n-dodecila, gaiato de n-undecila, gaiato de n-decila, ou gaiato de n- nonila foi diminuído pela adição de gaiato de n-heptila, gaiato de n-hexila, gaiato de n-pentila, gaiato de n-butila, gaiato de isobutila ou gaiato de n- 5 propila (e seus tipos estruturalmente similares) em uma concentração igual
a, ou menor do que a MIC, na qual nenhuma atividade antimicrobiana foi observada.
A Tabela 2 mostra que a adição de gaiatos de isoamila em uma concentração igual a, ou menor do que a MIC, na qual nenhuma atividade 10 antimicrobiana foi observada e NaCI diminuiu enormemente o volume MIC de gaiatos de octila contra bactérias, que foi descoberto ser muito menor do que aquele de um desinfetante existente gluconato de clorhexidina (um má- ximo de 640 vezes). Isto indica que gaiatos de octila podem ser um potente bactericida ou desinfetante.
A razão pela qual os fenômenos mencionados acima foram cau-
sados é especulada como segue. Considerando todos os dados disponíveis até agora, o ponto de ação de gaiatos de octila contra bactérias inclui 2 sí- tios, isto é, o sítio envolvido na inibição de crescimento de bactérias e o sítio que não se refere ao crescimento de bactérias. Quando os gaiatos de isoa- 20 mila uma vez ligam-se ao último sítio, gaiatos de octila especificamente li- gam-se apenas ao primeiro sítio envolvido no crescimento de bactérias; des- te modo, é especulado que gaiatos de octila inibem o crescimento de bacté- rias em uma concentração muito baixa e diminiu o volume MIC.
Com base nos resultados acima, a invenção será sumariada como segue.
As atividades antifúngicas, antibacterianas e antivirais de um gaiato de alquila (A) (em que o número de carbono da cadeia alquila é de 5 a 16) são reforçadas por outro gaiato de alquila (B) em que o número de carbono da cadeia alquila é menor do que aquele de gaiato de alquila (A) e 30 um sal de metal de álcali tal como um sal monovalente (C) (NaCI, KCI, LiCI, NaHCCh), ácido bórico, borato de sódio ou um sal orgânico, e desse modo o volume MIC de gaiato de alquila (A) pode ser diminuído. LO I HfrZ 7.81 I 15.63 I ND I 15.63 σ> 31.25 L ND I CO ND I I ND i LO UO 24h I 62.50 ! 62.50 I 31.25 I ; 62.50 I 31.25 I 62.50 I 62.50 I 15.63 I CO >250 I CO CSI CO CD csi cn CD O LO ■8 LO _C 0.49 I I 3.91 I ND I I 15.63 ND I ND I ND I CO OO I ND í 0.24 .2 CS) ί os 24h ! 31.25 I 31.25 I 31.25 | 62.50 | 31.25 62.50 I 31.25 | 15.63 I ND I >250 I 3.91 I t! co CsJ CD Ü cá O O £> « O J3 O È· 40 I Sl 0.24 L 3.91 I ND ' ! 15.63 ND ND ND ND I CT) I ND ! •'Φ £ UO 24h I 31.25 I I 31.25 I 31.25 J UO 31.25 I 62.50 I ND | CO ND I >250 I UO d» *3- CO CSI "Π I--- CSI r~-’ σ> 'C CSJ O > CO > « ® bfi LO -C I ND I ND J I ND. I co L ND I ND I ί ND J I ND I LO I ND I Lnd I M I 100 I 24h I 31.25 I j 31.25 I I 15.63 J I 31.25 I I 15.63 I I 62.50 I ND I LO I ND I ND I I 0.49 I CO ^r r~~ σ> 3 CS5 3 CSj I â SxO & 8 3 (D O SZ I ND I 3.91 I I_ND I I 15.63 I ND_ I ND I L ND J LO 7.81 I I ND ! I <0.061 O 3 1> Γ SE I -C I 15.63 I I 31.25 I I 15.63_I I 31.25 I I 15.63 I 31.25 CD I 15.63 I 15.63 I I ND j I 3.91 I *4-, E IO CsJ σ> O ε CS| O O \ S 'ω O O bü t+-< -J ri O è O NaCi JS LO 24h ND IO ND ' CO ND ND I ND I ND 0.49 I i_ND ND & O NaCl IU 40 _c 15.63 I í 31.25 I CO 31.25 o> I 31.25 I ND CO I 15.63 I ND I 3.91 I S S 15 r-· cr> r~^ Λ 2 Ίδ *3- CO -S o> ε ε φ ε CSl C -M to ο +J «0 C JS 0) JS >, CO 100 ] 24h I ND I ND_I I ND ] OO ND_i ND I ND I ND I ND_I L ND_I ND >> ΙΛ I _ 45 Ί 24h I I E9 Sl I 31.25 I I 3.91 I I 31.25_I 5Í I_31.25_I I QN 1 CO 7.81 I Ind I I 3.91 I ■*-> σι +-> CO r---· o O ο O O Sj a> -C 31.25 I 62.50 J 7.81 I 31.25 I S CO ND I 31.25 I 31.25 I ND I 15.63 CO O -C 15.63 I 31.25 I co I 31.25 I o> i 31.25 ND I 7.81 CO ND I σ> B C ^r r-^ σ> LO CSJ CO r-^ CO te O CSJ O I C a S OD LO 24h I [ ON ND_I ND I ND_i ND I \ QN ND I I ND I ND I I ON I I ND_I g UO -C CO csi CSJ I 15.63 I ί 86Ό I I 31.25 I I ND. I I 860 i σ> ND_I 0.12 I i 1 r-- CsJ CO O CO B a 8 § y CD I HfrZ ND I ND I ND I ND I ND I ND I ND I ND I ND I I ND I I ND I 8 O JZ OO LO I ND CO CT> I 15.63 I L . ND I I ND I I 0.49 I I ND I I ND I <4-4 O ο ^r r- CSJ CO O O ϋ CSj CO uo ã m ω 0> I none | I 24h I LO I 62.5 I I 62.5 I I 62.5 I LO IO I 62.5 I I 31.25 I LO I >250 I I 31.25 Oi I 4frZ I I 15.63 I I 31.25 I I 31.25 I 62.50 I 31.25 I 62.50 I 31.25 I 31.25 I 31.25_I CSJ i 31.25 ! C csi csi csi CSi C O O CO CO CD CO O C C I MIC sample] I concomitanti S I concomitanti I conc^g/mL)| 6) 0 CO I £ faecalis 0497P ] |£ Faecium 0677P I CSJ |£ coli ATCC25922 | I S. Typhimurium IF013245 I I S. epidermidis IF037625 | I SI epidermidis IID866 I I S. marcescens IAMt 184 | Ia SubtHis IF03134 I I MIC sample| I concomitanti I conc.(%)| I concomitanti -J I timel 0 CO Q. |£ faecium 0677P I CSJ csi 15. Typhimurium IFOI3245 I LO I S. epidermidis IID866 I *^· ■^r ò .§ C O cs) E C O r-- OJ CSJ CSJ co CO C <0 CSj CSJ "Sb ro CsJ <y> CSJ Cft CD 5 CO O 1 0 O Ò > 0 O O UO r- < 0 O Uj C O C 1 C .to O CSJ CO S U- <0 I- O So CQ ~nj I- O 0 ü .ço > < ο Uj > o < O U. EU 1 1 O 1 Uj .Ço h- Γ0 Ç to C/J Qi I Uj < 1 QD ca UJ ~<s "o I CJ Co O (o Uj </) Uj UJ Legenda: TABELA 1
Concentração concomitante de amostra MIC (%)
Tempo de concentração concomitante (pg / mL)
Efeito de uso concomitante de gaiato de isoamila e NaCI em decréscimo de MIC de gaiato de octila contra uma variedade de bactéria MIC de gaiato de octila (pg/mL)
Gaiato de isoamila
Efeito de uso concomitante de gaiato de isoamila e NaCI em decréscimo de MIC de gaiato de octila contra uma variedade de bactéria Ol O O
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[Table 2]
Comparison of MIC-values of octyl gallate and chlorhexidine gluconate
In this experiment, NaCl and isoamyl gallate werc added at ihc time of determination of MIC of octyl gallate.
chlorhexidine gluconate octyl gallate NaCI Isoamyl gallate A/B ratio MIC (uK/ml) (A) MIC (Ug/ml) (B) % Hg/ml Gram (+) bactéria foi d MRSA #5 0.61 0.06 4 25 10.2 MRSA #9 1.22 0.06 4 25 20.3 MRSA #17 1.22 0.06 4 50 20.3 MRSA #22 1.22 0.06 4 50 20.3 MRSA COL 1.22 0.098 4 50 12.4 MRSA Mu3 4.88 0.06 4 25 81.3 MSSA 1023 0.61 0.06 4 25 10.2 MSSA RN 0.61 0.20 4 25 3.1 £ faecium (VanA) 1.20 0.10 2 100 12.0 £ faeca/is (VanB) 4.90 0.49 4 40 10.0 £ gallinarum (VanCD 4.90 0.24 4 40 20.4 £ Casseliflavus(SanClfCS) 4.90 1.95 4 75 2.5 £ faeca/is 0497P 2.40 0.122 3 75 19.7 £ faecium 0677P 1.20 0.98 4 100 1.2 £ faecalis ATCC21212 4.90 0.49 3 75 10.0 S. epidermidis IFO 3762 0.60 0.98 3 75 0.6 S. epidermidis I1D866 0.60 0.49 4 75 1.2 B. subtilis 1F03134 1.20 0.122 4 75 9.8 Gram (-) bactéria S. Typhimurium IF013245 4.90 0.06 3 35 81.7 P. aeruginosa ATCC9027 19.50 1.95 3 20 10.0 P. aeruginosa PA 01 78.10 0.122 3 25 640.2 £ coli ATCC25922 2.40 0.98 4 0 2.4 S. marcescens IAM1184 9.80 0.122 3 0 80.3 NaCI (%)
Gaiato de isoamila - pg/mL Bactérias Gram (+)
Relação A/B - dobra
5 Neste contexto, os procedimentos experimentais nos casos das
tabelas 1 e 2, bem como na tabela 8 mostrada abaixo, são como segue.
A determinação da concentração de inibição de crescimento mínima (MIC) foi conduzida de acordo com o método padrão da Japanese Society of Chemotherapy (Susumu Mitsuhashi e outro, 1981; Revisão do 10 método para determinação da concentração de inibição de crescimento mí- nima (MIC), Chemotherapy, 29:76-79) em um Mueller Hinton Il Agar (BBL) por um método de diluição serial de 2 vezes usando uma placa de ágar. Os reagentes empregados são gaiatos de octila (Tokyo Kasei), gaiatos de isoa- mila (Tokyo Kasei), e NaCI (Kanto Chemical Co.). Uma solução de Hibitano a 15 5% (Sumitomo Seiyaku) foi usada como um fármaco de referência. O orga- nismo de teste foi inoculado em um caldo Mueller Hinton (DIFCO), cultivado a 37°C durante 18 horas para multiplicação, e diluída com solução salina fisiológica para 1 x 106 CFU/mL para fornecer uma solução celular para ino- culação. Esta solução celular foi inoculada com um microplanter (Sakuma 20 Seisakusho) em uma placa de ágar suplementada com um fármaco. Após incubação a 37°C durante 24 horas, a concentração na qual o crescimento foi completamente inibido foi considerada como MIC (concentração de inibi- ção mínima).
A Tabela 3A mostra o efeito de reforço de adição de 0,9 % (p/v) de citrato de trissódio e gaiatos de propila sobre a atividade antimicrobial de gaiatos de octila contra bactérias comum (bactérias gram-positivas e gram- negativas).
É claramente mostrado que a atividade antimicrobial de gaiatos de octila contra bactérias comuns (bactérias gram-positivas e gram- negativas) é reforçada pela adição de 0,9 % (p/v) citrato de trissódio e gaia- tos de propila. Neste contexto, quando a quantidade de citrato de trissódio adicionada aumentou, o volume MIC de gaiatos de octila diminuiu para gala- cn [Table 3Α]
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Date 9.6,07 MIC sample Octyl gallate MIC^g/mL) Octyl gallate MIC ^g/mL) médium MHA MHA (+0.9% trisodium citrate) concomitant DDW Propyl gallate DDW Propyl gallate conc.^g/mL) 400 350 300 250 200 400 350 300 250 200 time 24h 24b 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h £ faecium (VanA) 50 ND ND ND ND ND 50 ND ND ND ND r ND £ faecalis (VanB) 50 ND ND ND 20 20 50 2.5 10 20 20 20 E. galfinarum (VanCI) 50 2.5 10 20 20 20 50 ND 5 10 10 20 E- casse/ifíavus(VanC2/C3) 50 10 20 20 50 50 50 0.3125 5 20 20 20 £ faecalis 0497P 50 ND ND ND ND 1.25 50 ND 5 10 20 20 E. faecium 0677P 50 ND ND ND 20 20 50 ND ND 5 10 20 £ faecalis ATCC21212 50 ND ND ND 20 20 50 ND 10 10 10 20 £ coii ATCC25922 50 ND ND ND 20 20 50 ND 10 10 20 20 £ coii KUE0507Q1 >50 ND ND ND >50 >50 >50 ND ND NO ND ND S. Typhimurium IF013245 50 ND ND ND ND ND 50 ND ND ND ND ND S. Enterietidis IF063313 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND S. Enterietidis DT104-3 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND 5. Enterietidis DT104-26 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND 5. Oranienburg 1151 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND S. Infantis TUS050902 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND Paeruginosa ATCC9027 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 ND ND ND ND >50 P. aeruginosa PA01 >50 ND ND ND ND >50 >50 ND ND ND ND ND P. aeruginosa MHP0509-01 >50 ND ND ND >50 >50 >50 ND ND ND ND 20 K. pneumoniae ATCC10031 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 ND ND >50 >50 >50 Kpneumoniae KUK050801 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 >50 S. epidermidis IF03762 20 ND ND ND ND 5 20 ND ND ND ND ND S. epidermidis IID866 20 ND ND ND ND ND 20 ND ND ND ND ND S. marcescens IAM1184 >50 ND ND ND ND >50 >50 ND ND ND ND ND B. subtilis [F03134 50 ND 1.25 5 10 10 20 ND ND 2.5 5 10 P. mirabilis IF03849 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND £ cloacae IF013535 >50 ND ND ND ND ND >50 ND ND ND ND ND MRSA COL 25 ND ND ND ND ND 20 ND ND ND ND ND tos de propila em uma menor concentração. Também no caso onde citrato de hidrogênio de dissódio foi usado em lugar de citrato de trissódio, uma tendência similar foi observada. Na tabela, MHA denota Mueller Hinton Il A- gar, e DDW denotas água estéril. Gaiatos de octila foram solubilizados com J1816 (em uma quantidade três vezes maior do que aquela de gaiatos de Legenda: TABELA 3A Dados
Amostra de MIC Meio Concomitante Cone. (pg/mL)
Tempo
MIC de gaiato de octila (pg/mL) Gaiato de propila MHA (+0,9% de citrato de trissódio) Gaiato de propila A Tabela 3B mostra os volumes MICs de gaiatos de octila (solu- bilizados com J1216 pelo método do exemplo 2 mencionado abaixo) obtidos por recristalização a fim de ter uma alta pureza contra isolatos clínicos MR- SA (21 cepas) e MSSA (8 cepas). Isto revela que citrato de hidrogênio de 5 dissódio reforça a atividade antimicrobiana de gaiatos de octila mais do que citrato de trissódio, e que pelo uso concomitante com 50 mg/L de gaiatos de propila (solubilizados pelo método do exemplo 3 mencionado abaixo), a ati- vidade antimicrobiana de gaiatos de octila é significantemente reforçada e todas as cepas foram mortas com 1,25 mg/L de gaiatos de octila. Dos resul- 10 tados destes experimentos, foi demostrado que as impurezas de gaiatos de octila não mostram uma atividade antimicrobiana, porém gaiatos de octila por si só mostram uma atividade antimicrobiana.
A Tabela 3C mostra os volumes MICs de gaiatos de octila (solu- bilizados com J1216 pelo método do exemplo 2 mencionado abaixo) obtidos por recristalização a fim de ter uma alta pureza contra bactérias gram- positivas e gram-negativas. Isto revela que citrato de hidrogênio de dissódio reforça a atividade antimicrobiana de gaiatos de octila mais do que citrato de trissódio (a coluna à direita na tabela), e que pelo uso concomitante com 300 mg/L de gaiatos de propila, as bactérias, exceto para três cepas de bacté- rias, foram completamente mortas. Além disso, Verificou-se que pelo uso concomitante com 100 mg/L de gaiatos de propila, os volumes MIC de gaia- tos de octila podem ser diminuídos (a atividade antimicrobiana de gaiatos de octila pode ser reforçada). Dos resultados destes experimentos, foi demos- trado que as impurezas de gaiatos de octila não mostram uma atividade an- timicrobiana, porém gaiatos de octila por si só mostram uma atividade anti- microbiana contra bactérias comum. 10 Gaiato de propila (dissolvido em 5 mg/mL em água contendo 3 mg/mL de J- cn
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Oate 12.24.07 12.7.07 MIC sample #Recrystalized octyl gallate MIC(mg/L) #Recrystalized octyl gallate MKXmg/L) médium MHA(+0.9% dísodfum h/drogen citrate)* MHA(-f-0.9ft trisodium cítrste)* concomitant DDW Propyl gallate(dissolved at 5mg/mL in U---1216 Propyl gal!ate(dissolved at 5mg/mL in water water) containing 3mg/mL ü---1216) conc.(mg/LJ 100 50 600 200 100 I 75 time 24h 24h 24h 24h 24h 24h I 24h MRSA #1 0.625 ND ND 25 2.5 ND 10 MRSA #2 2.5 ND ND 50 2.5 2.5 10 MRSA #3 ND ND ND 20 2.5 ND 10 MRSA #4 ND ND ND ND ND ND ND MRSA #5 ND ND ND 20 ND ND 5 MRSA #6 ND ND ND 20 ND ND 0 MRSA #7 ND ND ND ZO ND ND 2.5 MRSA #8 ND ND ND 20 ND ND 5 MRSA #9 ND ND ND 20 ND ND * 5 MRSA #10 ND ND 1.25 25 0.625 ND 10 MRSA #12 ND ND ND 50 5 ND 10 MRSA #13 ND ND ND 20 ND ND 5 MRSA #16 1.25 ND ND 50 ND ND 10 MRSA #17 ND ND ND 50 ND ND 10 MRSA #18 ND ND ND ND ND ND ND MRSA #19 ND ND ND 20 ND ND 5 MRSA #20 ND ND ND 20 5 ND 10 MRSA #21 ND ND ND 25 2.5 5 10 MRSA #22 2.5 ND 0.625 50 2.5 5 10 MRSA COL 2.5 ND T.25 20 1.25 1.25 5 MRSA Mu3 ND ND ND 25 ND ND 10 MSSA 1003 ND ND 0.625 ND 1.25 ND 5 MSSA 1010 ND ND ND ND 5 ND 10 MSSA 1020 ND ND ND 5 ND ND 5 MSSA 1023 2.5 WD ND 20 2.5 5 10 MSSA 1029 2.5 ND ND 25 2.5 5 10 MSSA 1032 ND ND ND 25 ND ND 10 MSSA ATCC6538 ND ND ND ND ND ND 5 MSSA RN4220 ND ND ND ND ND ND 2.5 24h MIC 24h MIC 24h MIC 24h MIC 24h MIC 24h MIC 24h MIC MRSA MRSA MRSA MRSA MRSA MRSA MRSA MIC Range 0.625-2.5 ND 0.625-1.25 20-50 0.0625-5 1.25-5 2.5-10 MIC 50 ND ND ND 20 2.5 2.5 10 MIC 100 2.5 ND 1.25 50 5 5 10 cn [Table 3C]
OOx
Oate I 12.24.07 MIC sample #Recrystalized octyl gallate MIC (mg/L) medium MHA(-F0.9% disodiurn hydrogen citrate)* concomitant DDW Propyl gallateCdissolved at 5mg/mL in miiliQ water) C on c.(mg/L) 300 100 time 24h 24h 24h £ faecium (VanA) ND ND ND E. faecalis (VanB) 10 ND 10 £. saUmarum (VanCl) 10 ND 5 £ casseIifíavus(V a n C 2 / C 3) 10 ND 5 £ faecalis 0497P 10 ND 5 £ faecium 0677P 10 ND 5 £ faeca/is ATCC21212 10 ND 5 £ coii ATCC25922 50 ND ND £ coii KUE050701 50 ND ND S- Tvphimurium 1F013245 50 ND ND S. Enterietidis IF063313 50 ND ND S. Enterietidis DT104-3 100 ND ND S, Enterietidis DTl 04-26 100 ND ND 5. Oranienburg 1151 100 ND ND 5. Infantis TUS050902 25 ND ND P. aeruginosa ATCC9027 100 ND ND P. aeruginosa PAOl >100 ND ND P. aeruginosa MHPÜ509-01 >100 ND ND K. pneumoniae ATCC1003 í >100 >100 >100 K. pneumoniae KUK050801 >100 >100 >100 S. epidermidis IF03762 ND ND ND S. epidermidis IID366 ND ND ND S. marcescens IAM 1184 >100 >100 >100 S. subtiiis ÍF03134 5 ND 5 P, mirabiiis ÍF03849 >100 ND ND £ doacae IF013535 >100 ND ND MRSA COL 5 ND ND 7.25.07 9.6.07 11.21.07 Octyl gallate(was solubüized with Octyl gallateídissolved in ImM Octyl gallateídissolved at 1 mg/mL m MiIIiQ ImM phosphate buffer at pH6.5 phosphate buffer involvrng water containing 3mg/mL of J-1216) containing 0.356mg/mL of J-1816) 3mg/mL J-1816) MIC(mg/L) MIC(mg/L) MIC(mg/L) ΜΗΑ( + 0.9% trisodium citrate) MHA(4-0.9% trisodium citrate) MHA(-i"0.9?4 trisodium citrate)* ImM Propyl gal!ate(dissolved DDW Propyl DDW Propyl galiate(dissolved at phosphate in !mM phosphate gallateídissolved in 3mg/mL in miiliQ water) buffer at bufFer at pH6.5 milliO water containing pH6.5 containing 0.356mg/mL 1.5mg/mL of J---1816) involving J-I SI 6) 0.356mg/rr>L J-1816 0.1 mM 200 100 300 200 3001 200 1 100 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 24h 50 10 50 50 ND ND 20 ND 10 20 50 50 50 50 20 20 20 20 20 20 50 50 50 50 10 20 20 20 20 20 50 50 50 50 20 20 20 20 20 20 50 50 ■ 50 50 10 20 20 20 20 20 50 50 50 50 5 20 ■ 20 20 20 20 50 50 50 50 10 20 ’ 20 20 20 20 50 50 50 50 10 20 20 ND ND 50 >100 25 >100 >100 ND ND 50 ND 10 L_>100 50 ND 2.5 50 ND ND 20 ND ND 10 50 ND 10 >100 ND ND 50 ND ND 5 >100 ND 50 >100 ND ND 100 ND ND 50 100 ND 50 >100 NO ND 100 ND ND 20 >100 ND 50 >100 ND ND >100 ND ND ND >100 ND ND >100 ND ND 20 ND ND ND >100 20 >100 >100 ND 100 100 ND 25 >100 >100 ND 100 >100 ND ND 100 ND 25 >100 >100 100 >100 >100 ND 20 100 25 >100 >100 >100 >100 >100 >100 100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 5 10 20 ND ND 10 0.625 5 10 ND ND 20 ND ND ND 5 5 10 >100 50 >100 >100 ND ND 100 >100 >100 >100 10 20 20 2.5 10 10 2.5 5 5 >100 ND 25 100 ND ND >100 >100 >100 >100 >100 ND 50 >100 ND ND >100 ND ND 50 50 ND ND 20 ND ND 10 ND 1.25 5 ο
ο
CJi
O
Tl
ω
χ'
03
CL
CD
Ni
ZJ
O
—ί
03
(J)
to
Ο)
O
MHA1 Muller Hinton Agar
DOW, ;$87Κ * Sodium ascorbate was added at 0.5mg/ml In the medium (Table 3B-3C).
#Recrystalized octyl gallate was dispersed at 1 mg/mL in hot water at 70 C by vigorous shaking and solufailized by adding 3mg/mL of J-1216. Legenda: TABELA 3C Dados
Amostra de MIC Meio Concomitante
# MIC de Gaiato de octila recristalizado (mg/L)
MHA (+0,9% de citrato de hidrogêniode dissódio)
Concentração (mg/L)
Tempo
Gaiato de propila (dissolvido em 5 mg/mL em água Milli-Q)
Gaiato de octila (foi solubilizado com 1 mM de tampão de fosfato em pH 6,5 contendo 0,356 mg/mL de J-1816)
MIC (mg/L)
Gaiato de octila (dissolvido em 1 mM de tampão de fosfato envolvendo........
Gaiato de octila (dissolvido em 1 mg/mL em água Milli-Q, contendo.....)
MIC (mg/L)
Gaiato de propila (dissolvido em 5 mg/mL em água contendo 3 mg/mL de J- 1216)
24 horas Faixa de MIC MIC 50
Gaiato de propila (dissolvido em água Milli-Q contendo 1,5 mg/mL.....
Gaiato de propila (dissolvido em 3 mg/mL em água Milli-Q)
MHA, Muller Hinton Ágar # Gaiato de octila recristalizado foi disperso a 1 mg/mL em água quente a 70°C por agitação vigorosa e solubilizado adicionando 3 mg/mL de J-1216
* Ascorbato de sódio foi adicionado a 0,5 mg/ml no meio (Tabela 3B-3C) A Figura 1 mostra uma redução do tempo requerido para matar bactérias pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila contra cepas de MRSA COL. Verificou-se que a atividade bactericida de ga- iatos de propila sozinho é baixa, entretanto, pelo uso concomitante com ga- iatos de octila, o tempo requerido para matar bactérias é encurtado em uma larga extensão.
A Tabela 4 mostra o efeito de adição de NaCI sobre a atividade antimicrobial de gaiatos de octila contra bactérias comuns (bactérias gram- positivas e gram-negativas).
Verificou-se que quando a quantidade de NaCI adicionada (2 a 4 %) aumenta, o volume MIC de gaiatos de octila é acentuadamente diminuído por gaiatos de isoamila.
Iii I CC £ LT ir > IT u- K C - C C u- C ir W C CZ C I LT CO C 115 675l C C Q § C CC cv CS ? ir IT CS IT LT ir cs /N c- tn tn Z C CC A ?: »- CS CN CS Xs O CC Cs Cs tr LT Cs CC cs <r cs. C C IC C u* CS C C S I U tn O α O ο Q to ■d· (£ CC Cs Cs Λ CC Cs Cs IT *- CC CSs IT Cs to Cs tn IO Ul Z (C (£ /s cs /S Xs CN CSl CM /•s /S /S X «a IT IT ir O tr IT ίο C CS C C IT to CE IO IO C £ S in in O CO O O Q CO cc cs Cs Cs CC in CO /S CS CS. Cs CS Csl /s CS CsJ Cs IO O Ln Cs Z CC CC CC CN --- CC CO /S «- CO Csi σι CM /S CO /N O JC S m IT ir tn u~ IT to O U- CC O CSI cs CC Q C' in O S Lf Q O O O O CO CC cs Cs CSl Cs CS CSJ O CO CO CC CO CN IO A ro Z in Ul Z <r CO CO co CO /\ CSI A. /S LO JZ D Cs O CO Ϊ CO * IO O Q O to O IP S to O IO S CO Cs O O O Q CO 03 Z CO cs LO LO IO CsJ IO CM O Z CM co Csl to LO Z TT <o csi CM CSJ CSJ CO CO A. CSJ CM /\ /s /\ /S O X Ci CO CO S S í IO O LO O CO O C çs IO LO O O IO CS IO O ί O O Q CO Z CO CSJ IO CSI IO CSl CM CM co Cs cs IO Cs Z *í CO CSJ IO Csl CM /N 'ί¬ JZ Q CO ir IT § cs I LO O = O S LT O LO IO Ul D IO O cs Cs O CD σ Ο CO Z CO CO CSI IO LO LT CM es CO Z CM CS co CO CS IO Ul Z Tf CO CSI CM <o CO CM CM /N /s ^s y"s CO ο JZ O cs to CO I CS S IO O (O O If IO IO IO S to O U-) C S Cs O 2 O CS O ιο CO Z co CS CO CsJ LO 0 cs CSI Csj CS CM Z csj Λ CO CO tr tO Z CO CO CSl 01 S\ CO CSJ /\ CO /\ LO JZ O in CO CO CO S òq Csi O O to IO IO CO to Q Q O £ C 5 CO o I C Cs O CO Z co 0 CO IO to Z CSI CM CM CM Z Z Z cs IO Λ CO Z rf 01 Csi CO CO CD /N CM CO' /S ε O JZ Q C-J CN LD «5 <N 03 IO O O csj CSI to Q LD Q O O to O O O Q Q O IO Q O CO Z co CO CSJ O co S /N CO CO S Z CM Z Z Z CD IO Z Cl Z <31 Z CM Z CO CD CM CO CO CO O O P a> 03 Iri csi io IO IO m UO S O IO O O O OJ S to Q O O Csj IO O to O O CM ? bo C Ti¬ (O CSl CO CSI Csj CO IO csj to CM CM CSJ Z CM to CO csj LO CO LO IO CO C ID <o <o CSJ CO CM CO CM CM CM /\ /S f\ co IU 21 >, JO co O S CSl S Q IO S S O Q O O O O ίο Q O Q CO O ? CSJ O S O O Q P JO E Z Z CSI LO LO CSJ LO CSJ csj Z Z to CO Z U-J Ul Z ro CO CSI CSI /N /N CD /N CM CM O /S /\ /N Irt JZ α S £ S α 5 Si 1 O O O CD 1O csj CO O Q Q IO Csj S LO Q O S O CO CO Z Z o' IO Z to csi CO Z Z Z CM to CV Z IO Z /S /\ CO CO CO /\ O _C O I m IO Q § O CSJ O D O LO CD CM to Q O α S UO <M § Q § O S Q 03 Z Z O CSJ Z IO Csi CO CM Z Z Z csi Z IO Z ys /S CO CO CO CM \D JZ Q S CD t£> Q I S & O D O IO to § to O Q O <N IO I I Q LO O Ul Q 'J- CO Z O O Z O tn Z LO Csj S OJ Z Z Z csi Z LO S Z CO /*s /\ CO CO CO /\ O jC O I I I O S Q Ci IO O VO O D Q O D Q Q Q Ul CO O D CO D Q O IO CO Z Z Z Z csi Z csj Z Z Z Z Z Z Z Z csj u> CJl Z O Z Z Z ■'J- CO co CO CO σι co lO JZ Q O r~‘ α I Q α OJ α d O Q O Q Q O CD α Q Q O ο η O O I---· CO Z 07 ζ Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z σ ζ Z Z O JZ § m CO IO S IO S IO O S O O IO O csi O to Q to IO OJ u> LO IO ο ο S O CO OJ CNj csi c\i LO to IO CM to CO Z CSl Z CM CM CO CSJ csj CSj U-) CM CO CO CO CO /N /\ CM CM CO CO CO CO cõ CM /N /S D _c Q S «Ϊ S I S <0 ui O o O to IO IO LT> Q O Q csi O to u> Ct α5 O Ul D C Z O Csl LO Z IO CM CD CSJ CO Z Z Z CD UO CSi O Z γ- CM CM Z O CO CO OJ CM CO σ> C CO CO JZ Q Q Q Q Q Q O CI Q O Q O α Q Q Q Cl Q Q Q CO Q O ο Cl O Q Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z O Z Z Z Z Z Z CO CO JZ Q Q Q Q Q Q Q Q Q O Q CJ Q Q Q Q Q Q O Q Q Q O O O Q O CO Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z 0) C JZ n IO q LO IO o IO LO LO O to IO LO IO 3 O o O IO U^ O O O ο LO C O CO CM CSJ CM csi CSJ csi IO CsJ OJ CM CM IO LO Csj csj IO CO Ul IO O C CO CO CM CO CM CM CO CO CM /\ C /N /N O Qj C as C _J 6> t. faecium (VartAj £> O > CL α cs; £ coii ATCC25922 D 0 O o à io O O O ? O V 0 S S ^r \Ρ m/rabiiís IF03849 CO O +-> Q (0 ò È JE E C e -· Pk- O 3 1 t^i O O i O ü < o O 3 ís =O < CO δ < (0 E F C o ώ Ç/> δ σ> r>· O IO Co J 1 O < Cl α < ü 1 9 C O U- •ν a (0 o O o Zt ~c5 CO St- CO < O Òj I CO n: rç Sc I I -S § U. lSi U O O C C o Ç O 0 2 UJ <s> Cl H .ξ. Vl * 1 Co ί OJ C O O U UJ 52 1 ■Ij r> VS Q.' 0 I -Ci CJ O O O -Li ~íi o "o C CQ' <0 O ο -U U 1 Uj 03 Uj Q. JJ Legenda: TABELA 4 Dados
Amostra de MIC Concomitante Concentração (%)
Concentração (pg/mL)
MIC de Gaiato de octila (pg/mL)
Tempo
No = Nenhum
A Tabela 5 mostra o efeito de reforço de adição de 0,9% (p/v) de
citrato de trissódio e gaiatos de propila sobre a atividade antimicrobial de gaiatos de octila contra fungos (mofo).
É claramente mostrado que a atividade antimicrobial de gaiatos de octila contra fungos (mofo) é reforçada pela adição de 0,9 % (p/v) de ci- trato de trissódio e gaiatos de propila. Concomitante #1 MIC de Gaiato de octila (Mg/mL)
cn
CD
o'
>
3
o
CO —* 0)
D
0)
Cl
O
ω
CD
Ω
CD
CL
0)
[Table 5]
O
>
DO
m
i—
>
cn
Date
MIC sample
Medium
Concomitant
Cone. (fi g/mL) Time
2007.7.25
#1 Octyf gallate MIC (U g/mL)
# I Octyl gallate MIC (jUg/mL)
SDA
SDA (+0.9% trisodium citrate)
phosphate buffer (1 mM)
0
24hr 48hr
#2 Propyl gallate
150 24hr 48hr
300 24hr 48hr
500 24hr 48hr
1000 24hr 48hr
phosphate buffer (1
mM)
24hr 48hr
#2 PropyI gallate
150 24hr 48hr
300 24hr 48hr
1000 24hr 48hr
C. albicans 20 20 20 20 20 20 20 20 10 10 20 20 20 20 10 20 10 10 20 20 20 20 20 10 10 10 10 20 20 20 20 10 10 10 10 20 20 20 20 20 20 20 10 10 20 20 20 20 10 20 10 10 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 20 50 20 25 10 20 10 20 Candida spp. 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 20 50 20 25 10 20 10 20 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 20 50 20 25 10 20 10 20 5. cerevisiue 20 20 20 20 20 20 20 20 10 10 10 20 10 20 10 20 5 10 20 20 20 20 20 20 20 10 10 10 20 10 20 10 20 5 10 20 20 20 20 20 20 20 10 10 10 20 10 20 10 20 5 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 5 5 Yeast 4-1 white 10 10 5 5 5 5 10 10 5 5 10 10 5 5 5 5 5 5 10 10 5 5 10 10 5 5 5 5 10 10 10 10 5 5 5 5 #1 Octyl gallate at 1 mg per ml was solubilized in 1 mM of phosphate baffer CpH 6.59) containing J1816 at 0.356 mg per mi. #2 Propyl gallate at 10 mg per ml was solubilized in 1 mM of phosphate baffer (pH 6.59) containing J1816 at 0.356 mg per ml. Tampão de fosfato
SDA (+0,9% de citrato de trissódio)
#2 Gaiato de Propila
#1 Gaiato de octila a 1 mg por mL foi solubilizado em 1 mM de tampão de fosfato (pH 6,59) contendo J-1816 a 0,356 mg por mL.
#1 Gaiato de propila a 10 mg por mL foi solubilizado em 1 mM de tampão de fosfato (pH 6,59) contendo J-1816 a 0,356 mg por mL.
A Figura 2 mostra uma redução do tempo requerido para matar mofo pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila contra 10 Candida albicans ATCC 10231. Descobriu-se que a atividade fungicida de gaiatos de propila sozinho é baixa, entretanto, pelo uso concomitante com gaiatos de octila, o tempo requerido para matar mofo é encurtado em uma larga extensão.
A Tabela 6 mostra o efeito de reforço de gaiatos de isoamila ou gaiatos de propila na presença de 3% de NaCI sobre a ação antimicrobiana de gaiato de Iaurila contra Pseudomonas aeruginosa POA1.
Verificou-se que a ação antimicrobiana de gaiato de Iaurila con- tra Pseudomonas aeruginosa POA1 é reforçada por gaiatos de isoamila ou gaiatos de propila na presença de 3% de NaCI. LO _c CO co CO CO *er G» CD r~--- -£Z O 05 ·*&■ tkO C-J ”>> CD _c O CL OO 2: O V_ CL Cj -C NO ε ■'Sj* CNi 2.2.07 tfcO o gallate CD CO CO O CO LO “"St" CO CD CO -^r O -+-> <c Csí cr> ca rc co’ “íD O bjO 2 Isoamyl LO _cr CO CO CO r---· cr> cr> I--- Osl ND ! CD <u CO 31.25 CZ C *>!■ O O CVJ 15.625 ! CZ CZ CD MIC sample medium concomitant Cj time! O 05 E <c Q _t. Q- d 0 C .C o 1 O ttj o: Leaenda: TABELA 6 Dados
Amostra de MIC Meio Concomitante
Concentração (pg/mL)
Tempo
MIC de gaiato de Iaurila (pg/mL) MHA (3% de NaCI)
Galatodelsoamila Gaiato de propila Tempo
24 horas 48 horas
A Tabela 7 mostra o efeito de reforço de gaiatos de isoamila so- bre a ação antimicrobiana de gaiatos de octila contra isolatos clínicos MRSA e MSSA.
ATabeIa 7 mostra que a ação antimicrobiana de gaiatos de octila contra isolatos clínicos MRSA e MSSA é reforçada por gaiatos de isoamila. Gaiatos de octila e gaiatos de isoamila foram solubilizados com J1816 em uma quantidade de 3,5 vezes (relação de peso) maior do que aquela para gaiato de alquila.
LO X in 12.5 CSl 12.5 I 3.125 I 12.5 I 6.25 I 6.25 I 12.5 I I SZl I SZL I 5'Zl to LO LO I 6.25 I I s-zi I IO IO IO I 12.5 I I 3.125 I IO to I SZL I IO I 12.5 I IO I 12.5 I CO CSl O CNJ csj csi CN CN csj CN CN csj CNj ò (Ó vi mL) +J CM 24h I 12.5 I 0.3906 I <0.0244 I 6.25 I 3.125 I to * CD 1.5625 I 3.125 I IO 6.25 I 3.125 I [ S'ZL I I 3.125 I to LO SZI I I 6.25 I_ 3.125_ CO I 0.3906 IO I 3.125 I 1.5625 I 12.5 I 12.5 I 12.5 I 0.195 JS CN csi O CN CN Ν CO CNJ lõ CO O 03 CD O CO bO O CO IO O Vl O í" bfl < > n x 12.5 I ND I I QN ND I I QN ND I ND I ND I Q ND I I <0.0244 1 ND I ND I L ND___I I NP ! I ND I ND I I ND I 0.1953 O I ND I ND I ND I ND I ND I_ ND I ND I 1.56 I ND O zL I E CO Z Z 0 ϋ 1 0 {/> CO O < ID X I QN Q D O D G G G I GH ND I i <0.0244 I ND I G I ND ' G G G G I ND ON I G QN I I ND ! ND G I ND I ND I ND I ND CO +j O CN Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z CD I 262.5 I X O ü G IO IO 1.5625 I I QN to LO IO ND I IO IO IO IO G G G CO I ND IO G G D to I 12.5 G O I ND CO CO LO Z Z CN CSJ Csl csj CN CN CNJ CN csj Z Z Z CO CNl Z Z Z CN Z IO 'í CD CD ί¬ ο T I MfrZ ..I m í ND I Γ ND I IO r ND η G I ND Π G to CD D IO LO IO CO G G G G G IO Il ND Il ND a !I ND G Il ND G G "3 CN CsJ Z Z CvJ O Z CNJ CN CN CN Z Z Z Z Z CVi Z Z Z Z O CO O I Datell MIC sample mediumj concomitant /jfcV O) I MRSA #1 Il I MRSA #2 Ii I MRSA #3 l· I MRSA #4 I I MRSA #5 I I MRSA #6 I I MRSA #7 I I MRSA #8 I I MRSA #9 I I MRSA #10 I I MRSA #12 I I MRSA #16 I I MRSA #17 I I MRSA #18 I I MRSA #19 I I MRSA #20 I MRSA #21 I MRSA #22 I MRSA COL I MRSA #13 I MRSA Mu3 I MSSA 1003 I MSSA 1010 I MSSA 1020 I MSSA 1023 I MSSA 1029 I MSSA 1032 I MSSA ATCC I MSSA RN J E E V V ω O C 0 ü Legenda: TABELA 7 Dados
Amostra de MIC Meio
Concomitante Concentração (pg/mL)
Tempo
MIC de gaiato de octila (pg/mL)
Gaiato de Isoamila
2. Reforço adicional do efeito de realce da sensibilidade de β-lactam ao MR- SA por gaiatos de alquila
Verificou-se que os gaiatos de alquila realçam a sensibilidade de 10 β-lactamas ao MRSA (PCT/JP2004/000751); além disso, descobriu-se que este efeito de realce pode também ser reforçado na coexistência de um ga- iato de alquila em que o número de carbono da cadeia alquila é menor do que aquele de gaiatos de octila. A Tabela 8 e a Tabela 9 mostram exemplos de gaiatos de propila e gaiatos de isoamila em uma concentração na qual 15 nenhuma atividade antimicrobiana é observada, porém na coexistência des- tes gaiatos, um decréscimo do volume MIC de oxacilina para MRSA ocorre por gaiatos de octila em uma concentração tão baixa quanto 1,56 μg/ml. OO
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3
Legenda: TABELA 8 MIC de oxacilina (pg/mL)
Gaiato de isoamila (pg/mL)
Gaiato de isoamila ou Gaiato de propila Nenhum
Gaiato de Octila Nenhum
24 horas
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[Table 9]
48h 9.10.06 9.10.06 Oxacillin Ml"C(íiR/mU Octyl galiatc MÍC( U g/mL.) Isoamyl G or Propyi G Isoamyl G Propyl G 4Bh Isoamyl G none 25 12.5 6.25 25 Octyl G Octyl G Octyl G Octyl G Octyl G none 12.5 6.25 13.125 1.5B2ÍI 3.125 1.5B2S none 3.12505625 none 12.5tQ.25 3.125 >.5625 none i.SG25lncr\e 25 I? S fi?5 TlDDG 48h 48h 4Bh' I 48h I 48h 48h 4Gh 48 h 48h I 48h 48b 48hí 48b 4Bh 48h 48h 48b I 48h 4Hh Rang c of 48h 48h 48 h MRSA #1 512 64 128 128 256 8 0 16 128 128 255 255 64 256 256 256 32 32 MRSA #1 3.906 tton 31.25 31 75 31.25 MRSA #2 256 16 32 32 64 1 2 4 64 32 128 64 64 12B 128 128 8 2 MRSA #2 0.4883 31.25 31.25 31 25 MRSA #3 128 2 a 16 32 0.5 0.5 0.25 32 1G 32 64 64 64 64 64 1 1 MRSA #3 a.976G 31.25 31.75 62.5 MRSA #4 253 32 £4 64 120 16 B 8 64 64 256 256 128 128 128 128 8 8 MRSA #4 15.525 31.25 31.25 31 ?5 MRSA #5 256 32 64 64 128 0.5 I 1 32 32 64 64 G4 256 128 128 4 4 MRSA #5 0.4B83 31.25 31.25 31.25 MRSA #6 123 16 32 32 64 Q.5 1 l 32 32 32 64 37. 64 UQ 64 1 ? MRSA #G 1 953 31.25 31.75 31.25 MRSA #7 255 32 128 128 25G 0.5 1 128 32 128 !20 128 128 256 256 4 16 MRSA #7 31.25 3.906 31.25 31.75 31.25 MRSA #8 123 3 32 64 64 0.125 0.125 0.25 64 8 64 64 64 32 128 128 4 MRSA #8 0.2441 31.7.5 31 75 31.75 NflRSA #9_ 256 128 120 128 256 4 2 ! B 128 12G 250 256 256 256 256 256 4 4 MRSA #9 I).DYSC 31.25 31.25 31.25 MRSA #10 128 8 16 16 32 0.5 2 16 16 32 16 16 32 64 64 4 4 MRSA #10 ND'' 7.612Ξ 31 75 31 75 MRSA #12 25G 16 32 64 64 2 2 2 32 32 64 32 32 64 128 128 4 4 MRSA #12 31,25 Í906 7.B125 31 25 31.75 31.25 MRSA #16 256 32 64 64 64 0.5 0.5 1 32 IQ 64 32 32 32 126 128 7 4 MRSA #16 0.4303 31 75 31 75 31.25 MRSA #17 128 16 32 32 64 2 2 32 16 32 54 32 32 64 64 4 4 MRSA #17 7.0125 31.25 31.25 31 75 MRSA #18 256 32 64 128 128 16 0 32 64 G1 128 256 128 12 B 256 128 8 R MRSA #18 11625 31 75 31 75 31.25 MRSA #19 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND MRSA #19 ND ND ND ND MRSA #20 64 4 C 4 16 0.125 0.25 0.5 8 2 2 8 8 15 32 32 0,5 MRSA #20 0.2*1 «Π 3.906 31 75 21.25 MRSA #21 64 0.5 16 32 0.5 0.5 1G 8 16 IG 15 32 64 32 0.5 MRSA #21 31.25 31.25 31.75 3! 75 MRSA #22 64 2 8 8 15 0.25 0.25 1 16 8 10 15 13 32 32 0.5 0.5 MRSA #22 CU-Ml 31.25 31.25 31.25 MRSA COL 256 4 32 64 64 0.25 0.25 1 32 4 32 16 32 32 128 128 1 MRSA COL 0.48G3 31 25 31.75 31.25 MSSA 1Q03 0.5 0.25 0.5 0.5 0.5 0.125 0.125 0.25 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0,5 0.5 0.25 0.125 MSSA 1003 0.1221 3.906 31.25 31.25 MSSA 10IQ 0.5 0.125 C.25 0.5 0.5 0.125 0.125 0.25 0.25 0.5 0.5 0.25 0.25 0.5 0,5 0.5 0.5 0.5 MSSA 1010 «.0.0610 U.97QÜ 7,0125 31.25 MSSA 1020 2 0.5 2 2 0.25 0.25 0.6 1 l 2 0.5 1 2 2 2 0.5 0.5 MSSA 1020 31.25 3.505 7.0125 31.25 31.25 31.25 MSSA 1023 B 4 4 4 8 0.5 0.5 í B 2 4 4 4 4 8 8 i t MSSA 1023 CU441 3Í.25 31.25 31.25 MSSA 1029 2 0.5 1 2 2 0.25 0.25 0.5 I 1 1 0.5 1 1 2 1 0.5 1 MSSA 1029 ND 3 !.25 31.25 31.25 MSSA 1032 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25 0.122 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25 0.175 0.25 MSSA 1032 0.4883 31.25 31.25 31.25 MSSA ATCC jo.125 SD.DD3 0.125 0.125 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 MSSA ATCC 31.25 31.25 31,25 31.25 MSSA rn 0.5 0.25 0.5 0.5 0.5 0.125 0.125 0.25 0.5 D.5 0.5 0.12S) 0.25 0.5 0.5 0.5 0.25 0.5 MSSA RN SU OU SO 31.25 31.25 3' .25 MRSA #13 256 16 120 120 250 1 : i 2 128 64 128 128 128 I28 128 128 8 8 MRSA #13 31.25 3.90G 7.B1Z5 31.25 31.25 31.7.5 MRSA Mu3 512 64 250 256 5!2 I I 0.25 8 128 64 256 256 I 256 1 128 128 256 16 128 MRSA Mu3 3.S05 31,25 31.2b 31.25 to
This time, in severai cases, the growth of bacterium was once inhibited. then began again at a higher concentration, and then inhibited again.
MIC was determined at a concentration at which the bacterium did not grow again.
When the inhibition of growth was observed at a lower concentration than MlC1 the growth inhibition concentration at the Iowest concentration was indicated in the >eft coiumn of “Range of inhibition concentration", and the inhibition concentration immediately before the growth of bacterium began again was indicated in the right column. Nenhum 48 horas
MIC de Gaiato de Octila
Este tempo, em diversos casos, o crescimento de bactéria foi uma vez inibi- do, em seguida começou novamente em uma concentração maior, e em se- guida inibido novamente.
A MIC foi determinada em uma concentração na qual a bactéria não se de- senvolveu novamente.
Quando a inibição de crescimento foi observada em uma concentração me- nor do que a MIC, a concentração de inibição de crescimento na menor con- centração foi indicada na coluna à esquerda de "Faixa de Concentração de Inibição", e a concentração de inibição imediatamente antes do crescimento de bactéria começar novamente, foi inicado na coluna à direita.
A Tabela 10 mostra o volume MIC de oxacilina quando ela foi usada sozinha e o volume MIC de oxacilina quando ela foi usada concomi- tantemente com gaiatos de octila para o MRSAde isolato clínico.
Para ser mais específico, o volume MIC de oxacilina quando ela foi usada sozinha e o volume MIC de oxacilina quando ela foi usada conco- mitantemente com gaiatos de octila determinado pelo método de diluição de 20 placa de ágar de 2 vezes seriais são mostrados para as respectivas cepas de bactérias testadas. Um efeito de ILSMR pode ser confirmado em diversas cepas de bactérias quando o uso concomitante de gaiatos de octila a 12,5 μg/mL, e um efeito inibitório de crescimento foi observado em todas as ce- pas bacterianas com apenas gaiatos de octila com o uso concomitante de 25 gaiatos de octila a 25 μg/mL. [Table 10]
Oxacillin MIC against clinicai isolate MRSA when oxacillin was used alone and when oxacillin was used concomitantly with octyl gallate
OxacHiin MIC (pg/mL)
Octyl gallate (ug/mL)
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MIC de oxacilina contra MRSA de isolato clínico quando a oxacilina foi usada sozinha e quando a oxacilina foi usada concomitantemente com gaiato de octila.
Cepa
MIC de Oxacilina (Mg/mL)
Gaiato de Octila (Mg/mL)
Nenhum 10
ATabeIa 11 mostra as concentrações de gaiatos de octila neces- sárias para obter um valor MIC de oxacilina não maior do que 2 μg/mL quan- do oxacilina foi usada concomitantemente com gaiatos de octila para as res- pectivas cepas bacterianas. Para ser mais específico, a tabela mostra o caso onde oxacilina foi usada concomitantemente apenas com gaiatos de octila sem a coexistência de um gaiato de cadeia curta e o caso onde oxacilina foi usada concomitantemente com gaiatos de isoamila ou gaiatos de propila em adição a gaiatos de octila. Verificou-se que quando 25 μg/mL de gaiatos de isoamila são permitidos coexistir, o uso concomitante de gaiatos de octila a 1,56 μg/mL é suficiente a fim de obter MIC de oxacilina de 2 μg/mL.
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Legenda: TABELA 11
Efeito de reforço de uso concomitante de gaiato de octila na presença de gaiato de alquila de cadeia curta sobre a sensibilidade de oxacilina a MRSA de isolato clínico.
Cepa Nenhum Gaiato de isoamila (pg/mL)
Gaiato de propila (pg/mL)
Nenhum
Concentração de gaiato de octila por uso concomitante necessário para ob- ter a MIC de oxacilina não maior do que 2 μg/ml (mg/ml)
ATabeIa 12 mostra um efeito de uso concomitante de um gaiato
de alquila de cadeia curta sobre efeito de reforço de gaiatos de octila sobre a sensibilidade da oxacilina ao MRSA isolato clínico, e as concentrações de gaiatos de octila necessárias para obter um valor MIC de oxacilina não maior do que 2 μg/mL mostrado na tabela 7 são sumariadas na tabela 12 em ter- mos de faixa, C50 e C100· C50 e C1Oo denotam as concentrações de gaiatos de octila para uso concomitante, que obtêm 50% e 100% de inibição de cresci- mento de cepas bacterianas por oxacilina a 2 μg/mL ou menor, respectiva- mente. Quando gaiatos de propila foram permitidos coexistir a 25 μg/mL, 100% de inibição de crescimento de cepa de MRSAforam obtidos por oxaci- Iina a 2 μg/mL ou menor com o uso concomitante de gaiatos de octila a 6,25 μg/mL. Quando gaiatos de isoamila foram permitidos coexistir a 25 μg/mL, 100% de inibição de crescimento de cepa de MRSAforam obtidos por oxaci- lina a 2 μg/mL ou menor com o uso concomitante de gaiatos de octila a 1,56 μg/mL Neste contexto, um valor MIC de oxacilina de 2 μg/mL é usado como um índice para a cepa sensível (MSSA). fS
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Legenda: TABELA 12
Efeito de uso concomitante de gaiato de alquila de cadeia curta sobre a ati- vidade de reforço da sensibilidade de oxacilina a MRSAde isolato clínico por gaiato de octila.
Concentração de gaiato de octila por uso concomitante necessário para ob- ter a MIC de oxacilina não maior do que 2 pg/mL (Mg/mL). 3. Reforço de atividade viricida e atividade antiviral
1) Reforço de atividade viricida (Figura 3)
O círculo aberto na Figura 3 indica o efeito viricida da influenza de gaiatos de dodecila sozinho. O efeito na coexistência de 100 μg/ml de 5 gaiato de hexila é indicado pelo quadrado aberto na Figura 3; deste modo, o efeito viricida de gaiatos de dodecila foi acentuadamente reforçado e ne- nhum sobrevivente foi observado mesmo a 20 μg/ml. Este efeito viricida de gaiatos de dodecila foi também reforçado acentuadamente pela adição de gaiato de butila (triângulo aberto) em uma concentração na qual nenhum
efeito viricida foi observado. Como um resultado de elucidação de diversas maneiras, foi revelado que a atividade viricida de gaiato de alquila A (em que o número de carbono da cadeia alquila foi 5 a 16) foi reforçada por gaiato de alquila B em que o número de carbono da cadeia alquila foi menor do que aquele de gaiato de alquila A.
2) Reforço de atividade antiviral (Figura 4)
Gaiato de octila inibe o crescimento de vírus influenza em célu- las MDCK; esta inibição de crescimento foi acentuadamente reforçada por gaiatos de propila em uma concentração na qual nenhuma atividade antiviral foi observada.
Como um resultado de elucidação de diversas maneiras, foi re-
velado que a atividade antiviral de gaiato de alquila A (em que o número de carbono da cadeia alquila foi de 5 a 16) foi reforçada por gaiato de alquila B em que o número de carbono da cadeia alquila foi menor do que aquele de gaiato de alquila A.
A Tabela 13 indica as bactérias-alvo, fungos e viroses da inven-
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Legenda: TABELA 13 Viroses
Encefalopatia Espongiforme Bovina (BSE) Doença Creutzfeldt-Jakob Citomegalovírus Corona Vírus Vírus da Dengue Vírus Ebola
Enteroviroses (poliovírus)
Vírus Epstein-Barr Hentavírus
Vírus da Hepatite A (HAV)
Vírus da Hepatite B (HBV)
Vírus da Hepatite C (HCV)
Vírus do Herpes Simples (HSV) 1 & 2 Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV)
Papilomavírus Humano (HPV)
Vírus da Influenza Vírus do Sarampo Vírus da Cachumba 15 Vírus Nipah Vírus Noro Vírus da raiva
Vírus Sincicial Respiratório (RSV)
Rinovírus 20 Vírus da Rubéola Corona Vírus SARS Vírus Varicela-Zóster Vírus West Nile Vírus da Febre Amarela 25 Fungos
Dermatófitos
As Tabelas 14 a 16 mostram que a atividade viricida de gaiatos de octila contra o herpes vírus (HSV-1) e vírus influenza foi acentuadamente reforçada pela adição de J1816 e gaiatos de propila.
Na coexistência de 6 mg/L de J1816, o HSV-1 perdeu comple-
tamente a infectividade às células devido aos gaiatos de octila a 2 mg/L (20 mg/L na ausência de J1816). Similarmente, também no caso do vírus influ- enza, na presença de 30 mg/L de J1816, o vírus influenza perdeu completa- mente a infectividade às células devido aos gaiatos de octila a 10 mg/L (60 mg/L na ausência de J1816). Consequentemente, verificou-se que a ativida- de viricida de gaiatos de octila contra o herpes vírus (HSV-1) e vírus influen- za foi acentuadamente reforçada pela adição de J1816.
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CO T---- OO CO T--- ---- CO U--- Y---■ Ò “3 E O \ hO ε E bfl LO E CO hO C tiO C C 'c ‘(0 4-» CO C O C O O O U ü> U a= CD 5 ti= Xt ZS Xl <D 4-» 0 CQ X a. -C W Q. o (/) JZ O CL JZ 0.2 S E lf> C C Ί3 <D Ό N 0) Iq Z( JD O O u) u> W W co (0 £ 1 Έ bO fcd) E E LO r--- <D +J _ca (0 <0 bü hfi , >> CX -T“* O O \_ O a. T- csj '4* 3* Leaenda: TABELA 14
Atividade Viricida contra HSV-1 pela coexistência de gaiato de octila, J1816
e gaiato de propila.
#1 Gaiato de Octila (mg/L) #2 Gaiato de Propila (mg/L)
J1816 (mg/L)
Citrato de Na3 N0 de placas
#1 Gaiato de octila (1 mg/ml) foi solubilizado em 1 mM de tampão de fosfato contendo 3 mg/ml de J1816.
#2 Gaiato de propila (5 mg/ml) foi solubilizado em 5 mM de tampão de fosfa- to contendo 1,5 mg/ml de J1816.
[Table 15]
Virucidaf activity against HSV-1 by the coexistence of octyl gallate and propyl gallate
#3octyl gallate (mg/L) propyl gallate (mg/L J1816 (mg/L) NaCitrate No of plaques 0 0 0.90% 158 10 0 0.90% 48 20 0 0.90% 0 30 0 0.90% 0 60 0 0.90% 0 100 0 0.90% 0 0 300 0 0.90% 137 10 300 0 0.90% 11 20 300 0 0.90% 0 30 300 0 0.90% 0 60 300 0 0.90% 0 100 300 0 0.90% 0 0 0 0.90% 150 100 0 0.90% 192 200 0 0.90% 139 300 0 0.90% 162 400 0 0.90% 102 500 0 0.90% 130 #3: Octyl gallate was solubilized with 1M Arginine
#4: Propyl gallate (3mg/ml) was solubilized in 5mM phosphate buffer at pH 6.71
Legenda: TABELA 15 Atividade viricida contra HSV-1 pela coexistência de gaiato de octila e gaiato de propila
#3 Gaiato de octila (mg/L)
Gaiato de Propila (mg/L)
J1816 (mg/L) Citrato de Na N0 de Placas
#3 Gaiato de octila foi solubilizado com 1M de arginina #4 Gaiato de propila (3 mg/ml) foi solubilizado em 5 mM de tampão de fosfa- to a pH 6,71
[Table 16]
Virucidal activity against influenza virus A/Aichi (H3N2) by the coexistence of octyl gallate, J18I6 and propyl gallate
#1 octyl rí #2propyl gallte (mg/1 J1816 (mg/L) NaCitrate No of plaques 1 0 0 0.90% 256 244 248 2 20 60 0.90% 0 3 40 120 0.90% 0 4 60 180 0.90« 0 80 240 0.90% 0 6 100 300 0.90% 0 7 0 300 90 0.90% 52 8 20 300 150 0.90% 0 9 40 300 210 0.90% 0 60 300 270 0.90% 0 11 80 300 330 0.90% 0 12 100 300 390 0.90% 0 13 0 0 0.90% 2(4 14 100 30 0.90% 84 200 60 0.90% 87 16 300 90 0.90% 53 17 400 120 0.90% 47 18 500 150 0.90% 42 19 60 180 0 50 118 21 100 100 22 150 84 23 200 78 24 300 88 400 --- 26 500 76 #1: Octyl gallate (1mg/ml)was solbilized in 1mM phosphate buffer containing 3 mg/ml of J1816.
#2: Propyl gallate (5mg/ml) was solubilized in 5mM phosphate buffer containing 1.5 mg/ml of J1816
Legenda: TABELA 16
Atividade viricida contra o vírus da Influenza A/Aichi (H3N2) pela coexistên- cia de gaiato de octila, J1816 e gaiato de propila.
#1 gaiato de octila #2 gaiato de propila (mg/L)
J1816 (mg/L)
Citrato de Na N0 de placas #1 Gaiato de octila (1 mg/ml) foi solubilizado em 1 mM de tampão de fosfato contendo 3 mg/ml de J1816.
#2 Gaiato de propila (5 mg/ml) foi solubilizado em 5 mM de tampão de fosfa- to contendo 1,5 mg/ml de J1816.
A Figura 5 mostra que um reforço acentuado de atividade viricida
de gaiatos de octila contra HSV-1 foi observado por 60 mg/L de gaiatos de propila.
A Figura 6 mostra uma redução do tempo requerido para matar viroses pelo uso concomitante de gaiatos de octila e gaiatos de propila con- 10 tra influenza B/T/1/05. Descobriu-se que a atividade viricida de gaiatos de propila sozinho é baixa, entretanto, pelo uso concomitante de gaiatos de oc- tila, o tempo requerido para matar viroses é encurtado em uma larga exten- são.
Os experimentos nas Figuras 7 a 12 foram realizados a 37°C. A infectividade de viroses foi determinada usando células de MDCK pelo mé- todo de ensaio de placa .
Verificou-se que a partir da Figura 7, os gaiatos de octila têm uma atividade viricida contra o vírus influenza B/T/1/05, e a partir da Figura
8, gaiatos de propila têm uma baixa atividade viricida. Entretanto, as Figuras 20 9 a 12 mostram que a atividade viricida de gaiatos de octila é acentuada- mente reforçada pelo uso concomitante com gaiatos de propila. Além disso, na Figura 12, verificou-se que pelo uso concomitante de ambos os compos- tos, perdeu a infectividade às células dentro de 1 minuto, portanto, pode-se esperar que um agente viricida extremamente potente seja formado. Esta 25 atividade viricida de gaiatos de octila foi reforçada por gaiatos de propila também contra vírus influenza A/Aichi (H3N2) da mesma maneira como aci- ma.
4. Escopo de aplicação
Tendo potentes efeitos antifúngicos, antibacterianos, antivirais com baixa toxicidade, uma ampla variedade das seguintes aplicações com relação a produtos farmacêuticos, agroquímicos (animais domésticos, peixes de chocadeira, animais de estimação, plantas), produtos funcionais alimenta- res e cosméticos são possíveis.
1) Esterilização e desinfecção externas gerais (desinfecção de instrumentos cirúrgicos e instrumentos médicos, desinfecção de facilidades de cuidados médicos, desinfecção das mãos), prevenção de infecção em
ambientes hospitalares
2) Campo otolaringológico (erradicação de MRSA intranasal, e
similares)
3) Campo dermatológio (prevenção e terapia de escara, quei- madura térmica e acne, eliminação de odor corporal), cosméticos para cura
da acne, xampu e xampu corporal, e similares
4) Campo dentário oral (prevenção e terapia de resfriado co- mum, prevenção e terapia de faringite, terapia e prevenção de cáries dentá- rias, terapia e prevenção de periodontite, eliminação e prevenção de halito- se, terapia e prevenção de estomatite); gargarejo, pó dentifrício médico, an-
tisséptico bucal
5) Campo oftálmico (terapia e prevenção de infecção bacteriana, fúngica ou viral, esterilização e desinfecção de lentes de contato); colírios, desinfetantes
6) Campo ginecológico (agentes antibacterianos, antifúngicos,
antivirais, artigos sanitários, viricidas para HIV e similares)
7) Campo de envenenamento alimentar (terapia e prevenção de envenenamento alimentar causado por Vibrio parahaemolyticus, Campilo- bacter jejuni/coli, Salmonella, Echerichia coii, Clostridium perfringens, Bacil- Ius cereusu, Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, Vibrio mimicus, Vibrio
fluvialis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas Sobria, Plesimonas shigelloides, Staphilococcus aureus, Clostridium botulinum, Norovirus, e similares); agen- tes terapêuticos e preventivos de envenenamento alimentar
8) Agentes terapêuticos para pneumonia (terapia e prevenção de pneumonia causada por Mycoplasma pneumoniae, Streptococcus pneumo-
niae, Hemophilus influennzae, Klebsiella pneumoniae, Legionella pneumo- phila, Moraxella catarrhalis, Staphilococcus aureus, Mycobacteria tuberculo- s/s, uma variedade de viroses), terapia e prevenção por inalação. 9) Produtos alimentares funcionais (eliminação de halitose ou prevenção e terapia de resfriado comum e estomatite por adição à goma ou similares)
Exemplos da via de administração da composição farmacêutica 5 tendo um efeito antifúngico, antiviral ou antibacteriano da invenção incluem administração parenteral, administração oral, administração local, e similares da mesma maneira que em antibióticos usuais. Em geral, a administração por injeção é preferida. Em tal caso, a injeção pode ser preparada de uma maneira convencional, e um caso onde os ingredientes são dissolvidos em 10 um veículo apropriado, por exemplo, água destilada esterilizada, solução salina fisiológica, ou similares, como uma forma de injeção é também incluí- do.
A administração oral é também tolerável em várias formas de dosagem. Por exemplo, comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos com açúcar ou similares, e soluções ou suspensões líquidas são incluídos em tais formas.
A dose do ingrediente ativo mencionado acima usada para pre- venção ou terapia pode ser mudada dependendo da idade, peso corporal, condição do paciente, e via de administração; por exemplo, o ingrediente 20 ativo pode ser administrado oralmente em uma dose de 1 mg a 3 g (por 1 kg de peso corporal) 1 a 3 vezes ao dia para adultos. A fim de obter o melhor efeito terapêutico, a dose e a via de administração são mudadas.
As composições farmacêuticas da invenção são habitualmente preparadas de acordo com um método convencional e formuladas em uma 25 forma farmaceuticamente adequada. Por exemplo, uma formulação sólida pode conter juntamente com um composto ativo um diluente tal como Iacto- se, dextrose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; um lubrificante tal como sílica, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio ou estearato de cálcio e/ou polietileno glicol; um agente de ligação tal como a- 30 mido, goma arábica, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou polivinil- pirrolidina; um desintegrador tal como amido, ácido algínico, um alginato ou sódio de amido de ácido glicólico; um agente espumante; um pigmento; um adoçante; um agente umectante tal como lecitina, polissorbato, ou sulfato de laurila; e uma substância farmaceuticamente inativa, farmaceuticamente prescrita e geralmente não-tóxica. Estas composições farmacêuticas podem ser produzidas de acordo com um processo conhecido, por exemplo, pro- 5 cesso de mistura, granulação, formação de comprimido, revestimento de açúcar, revestimento ou similares.
Em administração parenteral, a formulação mais amplamente usada é de injeção, através de supositórios direcionados para o reto pode também ser empregada. As preparações para injeção incluem aquelas dife- 10 rentes em aparência externa, tais como preparações líquidas, preparações que se dissolvem imediatamente antes do uso, e preparações tipo suspen- são, porém basicamente elas são consideradas ser as mesmas, porque um ingrediente ativo é esterilizado de uma maneira apropriada, em seguida co- locado diretamente em um vaso, e hermeticamente fechado nele.
Como um dos métodos mais simples para preparar uma formu-
lação, existe um método em que um ingrediente ativo é esterilizado de uma maneira apropriada, em seguida misturado separadamente ou fisicamente, e uma certa quantidade da mistura resultante é dividida para produzir uma formulação. Quando uma forma líquida for escolhida, um método em que um 20 ingrediente ativo é dissolvido em um veículo apropriado, esterilizado por fil- tração, colocado em ampolas ou frasconetes apropriados, e firmemente fe- chado neles, pode ser empregado.
Neste caso, o veículo mais frequentemente usado é água desti- lada para injeção, porém a invenção não está restrita a ela. Se requerido, é 25 possível adicionar um agente calmante tendo uma ação anestésica local tal como cloridrato de procaína, cloridrato de xilocaína, álcool benzílico ou fenol; um antisséptico tal como álcool benzílico, fenol, metil- ou propil-parabeno, ou clorobutanol; um tampão tal como um sal de sódio de ácido cítrico, ácido acético ou ácido fosfórico; um agente de solubilização tal como etanol, propi- 30 Ieno glicol ou cloridrato de arginina; um estabilizante tal como L-cisteína, L- metionina ou L-histidina; ou um aditivo tal como um agente de tonicidade.
5. Processo para preparar uma solução de gaiato de alquila aquosa Gaiatos de alquila são difíceis de preparar em preparações far- macêuticas porque eles são altamente hidrofóbicos e moderadamente solú- veis em água. A presente invenção refere-se ao processo para preparar uma solução aquosa transparente de gaiatos de alquila. Um gaiato de alquila (1 5 parte em peso), um tensoativo não-iônico (1 a 10 partes em peso) e água (100 a 5000 partes em peso) são misturados com um misturador ou por ul- trassonicação e aquecidos a 30 a 95° C para dissolução, para fornecer uma mistura branca cremosa, que é resfriada em temperatura ambiente (aproxi- madamente 0 a 30° C), pelo que uma solução transparente aquosa pode ser 10 preparada. Exemplos do tensoativo não-iônico incluem ésteres de ácido gra- xo de sacarose, óleo de rícino de polioxietileno / óleo de rícino endurecido, ésteres de ácido graxo de glicerina, macrogol polietileno e similares.
Exemplo 1:
Gaiato de octila (100 mg), éster de ácido esteárico de sacarose 15 (Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd. J1816) (300 mg) e água (100 ml) são misturados com um misturador de alta velocidade e aquecidos a aproxima- damente 60 a 70°C para fornecer uma mistura branca cremosa. Esta mistura é deixada descansar em temperatura ambiente, pela qual uma solução transparente aquosa é obtida.
Exemplo 2:
À água Milli-Q (aproximadamente 60 ml) aquecida a 50 a 70° C, gaiato de octila (100 mg) é adicionado, e a mistura é vigorosamente agitada. Após gaiato de octila estar completamente disperso em água, éster de ácido graxo de sacarose (geralmente 10 mg/ml, Mitsubishi Chemical Foods Co., 25 Ltd. J1216 (D1216), J1416 (D1416), J1616 (D1616), J1816 (D1816), ou simi- lares) (10 a 35 ml) que foi solubilizado com água Milli-Q antecipadamente é também adicionado, e em seguida agitado, pelo que uma solução aquosa transparente e incolor é obtida. Em seguida, água Milli-Q é também adicio- nada para formar o volume final de 100 ml.
Exemplo 3:
À água Milli-Q (100 ml) aquecida para aproximadamente 60 a 70° C, gaiato de propila (300 a 500 mg) é adicionado, e a mistura é vigoro- samente agitada, pelo que uma solução aquosa transparente e incolor é ob- tida.
Exemplo 4:
Gaiato de octila (100 mg), óleo de rícino de polioxietileno endu- 5 recido (Nikko Chemicals Co., Ltd.; HCO-60) (500mg), e água (100 ml) são misturados com um misturador de alta velocidade e aquecidos para aproxi- madamente 60 a 70° C para fornecer uma mistura branca ligeiramente cre- mosa. Esta mistura é deixada descansar em temperatura ambiente, pelo que uma solução transparente aquosa é obtida.
Exemplo 5:
Gaiato de propila (500 mg), 5 mM de tampão de fosfato (KH2PO4-Na2HPO4) de pH 6,5 e água Milli-Q (100 ml) a 50 a 60°C são mistu- rados e homogeneizados com um homogeneizador de alta velocidade tal como homogeneizador de vidro Potter-Elvehjem Teflon (marca registrada), 15 pelo que uma solução aquosa transparente e incolor é obtida. A solução a- quosa resultante é armazenada em um frasco de vidro marrom. Prefere-se que a Iuz seja sombreada durante a preparação da solução aquosa. A arma- zenagem é realizada em temperatura ambiente ou em um refrigerador. Quando o ar, contido na solução de gaiato de alquila aquosa obtida, é substi- 20 tuído com gás de argônio, gás He, gás N2 ou similares, ou um antioxidante é também adicionado, a solução resultante pode ser armazenada permanen- temente.
Exemplo 6:
Ao gaiato de octila (100 mg) e éster de ácido esteárico de saca- 25 rose (Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd. J1816) (100 a 300 mg), água Milli- Q (aproximadamente 50 ml) aquecida para 60 a 70°C é adicionada, e a mis- tura é homogeneizada com homogeneizador de vidro Potter-Elvehjem Teflon (marca registrada) em uma alta velocidade, pelo que uma solução aquosa que é incolor, porém ligeiramente turva é obtida. À solução aquosa obtida, 30 água Milli-Q é adicionada para formar o volume final de 100 ml. A armazena- gem é realizada em temperatura ambiente ou em um refrigerador.
Exemplo 7: Ao gaiato de octila (100 mg), polietileno glicol (Daiichi Kogyo Pharmaceutical. Co. Ltd., macrogol #6000) (100 a 500 mg) e água Milli-Q (aproximadamente 50 ml) são adicionados, e a mistura é aquecida para 40 a 70° C e agitada para dissolver os ingredientes. Em seguida, éster de ácido 5 esteárico de sacarose (Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd. J1816) (100 a 300 mg) é também adicionado, e a mistura é homogeneizada com homoge- neizador de vidro Potter-Elvehjem Teflon (marca registrada) em uma alta ve- locidade, pelo que uma solução aquosa completamente transparente é obti- da. Água Milli-Q é também adicionada para formar o volume final de 100 ml. 10 A armazenagem é realizada em temperatura ambiente ou em um refrigera- dor.
Exemplo 8:
À água Milli-Q (100 ml) aquecida para aproximadamente 70° C, gaiato de octila (10 mg) é adicionado, e a mistura é vigorosamente agitada. 15 Após o gaiato de octila estar completamente disperso em água, cloridrato de arginina a 1M é também adicionado, pelo que uma solução aquosa transpa- rente e incolor é obtida. Cloridrato de arginina pode ser um cloridrato de ar- ginina de alquila tal como cloridrato de arginina de butiloíla.
Exemplo 9: Preparação de coquetel fungicida, viricida e bactericida Como um coquetel fungicida, viricida e bactericida, o seguinte
coquetel foi preparado.
Formulação otimizada (1)
Gaiato de octila < 200 mg/L (este limite superior é a concentra- ção permitida em quasifármaco pelo Japanese Ministry of Health, Labour and Welfare)
Gaiato de propila < 2,000 mg/L (este limite superior é a concen- tração permitida em aditivos farmacêuticos pelo Japanese Ministry of Health, Labour and Welfare)
J1816 < 2,000 mg/L
Citrato de trissódio ou citrato de hidrogênio de dissódio < 4%
(p/v)
KH2PO4-Na2HPO4 < 10 mM Polietileno glicol Macrogol #6000 < 100 mg/L
Antioxidante tal como ácido ascórbico, ascorbato de sódio ou vitamina E < 1.000 mg/L Final pH: 4 a 8
Verificou-se que quando o coquetel acima contendo macrogol #6000 foi colocado em uma escova de dentes e os dentes foram escovados com a escova de dentes, placa e tártaro puderam ser removidos.
Quando ar contido em uma solução aquosa do coquetel obtido no Exemplo 9 é substituído com gás de argônio, gás de He2 ou N2 ou simila- res, podem ser armazenados permanentemente.
Exemplo 10: Preparação de coquetel fungicida, viricida e bactericida
Como um coquetel fungicida, viricida e bactericida, o seguinte coquetel foi preparado:
Formulação otimizada (2)
Gaiato de octila < 200 mg/L Gaiatos de propila < 2.000 mg/L J1216 <600 mg/L
Citrato de hidrogênio de dissódio < 4% (p/v)
Tampão tal como tampão de fosfato
Antioxidante (tal como ascorbato de sódio ou vitamina E)

Claims (18)

1. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila que contém gaiatos de alquila como ingredientes ativos tendo um efeito antifúgico, antivi- ral ou antibacteriano, em que o grupo alquila do gaiato de alquila é ligado a um grupo galoíla para formar uma ligação de éster, caracterizada por com- preender os seguintes dois membros de gaiatos de alquila: (A) um gaiato de alquila em que o número de carbono do grupo alquila é na faixa de 5 a 16; e (B) outro gaiato de alquila em que o número de carbono do gru- po alquila é menor do que aquele de (A).
2. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o número de carbono do grupo alquila do gaiato de alquila (B) é na faixa de 2 a 7.
3. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por também conter (C) pelo menos um membro selecionado de um sal de metal de álcali, ácido bórico, borato de sódio e um sal orgânico.
4. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados mistu- rando-se os gaiatos de alquila com pelo menos um membro selecionado de um tensoativo não-iônico, polietileno glicol e arginina ou um cloridrato de um derivado destes em uma solução aquosa ou em um tampão de pH.
5. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados misturando-se 1 a 10 partes em peso de um tensoativo não-iônico e 100 a 5000 partes em peso de água com base em 1 parte em peso de gaiatos de alquila.
6. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que é uma solução aquosa em que os gaiatos de alquila são solubilizados misturando-se e aquecendo- se os gaiatos de alquila em uma temperatura de 30 a 95° C seguidos por resfriamento em temperatura ambiente.
7. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito fungicida.
8. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito viricida.
9. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito anti-influenza viral.
10. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito anti-herpes viral.
11. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito antibacteriano.
12. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito anti-MRSA.
13. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que contém os gaiatos de alquila (A) e (B) como ingredientes ativos tendo um efeito anti-MSSA.
14. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a composição é um agente de realce da atividade de β-lactama.
15. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o β-lactama é oxacili- na.
16. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, caracterizada pelo fato de que o gaiato de alquila (A) é gaiato de octila, e o gaiato de alquila (B) é gaiato de propila.
17. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, caracterizada pelo fato de que o gaiato de alquila (A) é gaiato de octila, e o gaiato de alquila (B) é gaiato de isoamila.
18. Composição farmacêutica de gaiatos de alquila de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 15, caracterizada pelo fato de que o gaiato de alquila (A) é gaiato de octila, o gaiato de alquila (B) é gaiato de propila, e (C) é citrato de hidrogênio de dissódio ou citrato de trissódio.
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