BRPI0708779A2

BRPI0708779A2 - derivados de pirrolopirimidina utilizados como inibidores de hsp90

Info

Publication number: BRPI0708779A2
Application number: BRPI0708779-9A
Authority: BR
Inventors: Andrew Brough Paul; James Drysdale Martin; Gareth Morse Davies Nicholas; Noel Foloppe Nicolas; Stokes Stephan
Original assignee: Vernalis R & D
Priority date: 2006-03-11
Filing date: 2007-03-09
Publication date: 2011-06-14
Also published as: EP2007767A1; AU2007226344A1; KR20090007319A; EP2007767B1; WO2007104944A1; EA200801968A1; JP2009533323A; US20090163490A1; ATE531718T1; MX2008011559A; CA2645343A1

Abstract

DERIVADOS DE PIRROLOPIRIMIDINA UTILIZADOS COMO INIBIDORES DE HSP9O. A presente invenção refere-se a compostos de fórmula (I) que possuem atividade inibidora HSP9O e são, portanto, úteis no tratamento de, inter alia, câncer: em que R~ 1~ é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, ou um radical de fórmula -X-Alq^ 1^-(Z)~ m~-(Alq^ 2^)~ n~-Q em que X é -O-, -S- -S(O)-, -SO~ 2~-, ou -NH-, Z é -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S(O)-, -S0~ 2-~-, -NR^ A-^~, ou, em cada orientação - C(=O)O-, -C(=O)NR^ A-^, ~C(=S)NR^A-^, -SO~ 2~NR^ A-^, -NR^ A^C(=O)-, ou ~NR^ A^SO~ 2~- em que R^ A^ é hidrogênio ou C~ 1~-C~ 6~ alquila AIq^ 1^ e Alq^ 2^ são radicais de C~ 1~-C~ 3~ alquileno ou C~ 2~-C~ 3~ alquenileno divalentes opcionalmente substituidos, m, n e p são independentemente 0 ou 1, e Q é hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído; R~ 2~ é um radical de fórmula -(Ar^ 1^)p-(Alq^ 1^)q-(Z)r-(Alq^ 2^)~ s~-Q em que Ar^ 1^ é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituído, Alq^ 1^, Alq^ 2^, Z, e Q são como definidos acima, e p, q, r e s são independentemente 0 ou 1; e R~ 3~ é ciano (-CN), flúor, cloro, bromo, metila em que um ou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituidos por átomos de flúor, etila em que um ou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituidos por átomos de flúor, ciclopropila, -OH, -CH~ 2~OH, -C(O)NH~ 2~, -C(O)CH~ 3~ ou -NH~ 2~.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOSDE PlRROLOPIRiMIDINA UTILIZADOS COMO INIBIDORES DE HSP90".

A presente invenção refere-se aos compostos de pirrolopirimidi-na bicíclicos substituídos tendo atividade inibidora de HSP90, ao uso de taiscompostos na medicina, em relação às doenças que são responsivas a inibi-ção da atividade de HSP90 tais como cânceres, e às composições farma-cêuticas contendo tais compostos.

Antecedentes da Invenção

Os acompanhantes moleculares mantêm a dobradura e a con-formação apropriadas de proteínas e são cruciais na regulação do equilíbrioentre a síntese e degradação da proteína. Eles foram apresentados de se-rem importantes na regulação de funções celulares muito importantes, taiscomo a proliferação e apoptose celular (Jolly and Morimoto, 2000; Smith etal., 1998; Smith, 2001).

Proteínas de Choque Térmico (Hsps)

A exposição das células e vários estresses ambientais, incluindoo choque térmico, álcoois, metais pesados e estresse oxidativo, resulta noacúmulo celular de vários acompanhantes, comumente conhecidos comoproteínas de choque térmico (Hsps). A indução de Hsps protege a célulacontra o insulto de estresse inicial, intensifica a recuperação e leva a manu-tenção de um estado tolerante de tensão. Também se tornou claro, no en-tanto, que certas Hsps também podem desempenhar um papel acompanha-te molecular principal sob as condições livres de estresse normais mediantea regulação da dobradura, degradação, localização e função corretas deuma lista crescente de proteínas celulares importantes.

Existem várias famílias de múltiplos genes de Hsps, com produ-tos genéticos individuais variáveis na expressão, função e localização celu-lar. Eles são classificados de acordo com o peso molecular, por exemplo,Hsp70, Hsp90 e Hsp27. Várias doenças em seres humanos podem ser ad-quiridas como um resultado de dobradura errônea da proteína (revisto emTytell et al., 2001; Smith et al., 1998). Em conseqüência, o desenvolvimentode terapias que rompem o mecanismo de acompanhante molecular podecomprovar ser benéfico. Em algumas condições (por exemplo, doença deAlzheimer, doenças de priônio e doença de Huntington), as proteínas de do-bradura errônea podem causar a agregação de proteína resultando em dis-túrbios neurodegenerativos. Da mesma forma, as proteínas de dobraduraerrônea podem resultar na perda da função de proteína tipo silvestre, levan-do às funções moleculares e fisiológicas desreguladas na célula.

As Hsps também foram implicadas no câncer. Por exemplo, e-xiste evidência de expressão diferencial de Hsps que pode se relacionar como estágio de progressão tumoral (Martin et al., 2000; Conroy et al., 1996;Kawanishi et al., 1999; Jameel et al., 1992; Hoang et al., 2000; Lebeau et al.,1991). Como um resultado do envolvimento de Hsp90 em vários caminhosoncogênicos crítivos e da descoberta que certos produtos naturais com ativi-dade anticâncer são direcionados a este acompanhante molecular, se suge-re que a inibição da função de Hsp90 pode ser útil no tratamento de câncer.

Para este fim, o primeiro na classe de protuto natural 17AAG está corrente-mente nos testes clínicos de Fase II.

Hsp90

A Hsp90 constitui cerca de 1 a 2 % da proteína celular total. Nascélulas, ela forma complexos de múltiplas proteínas dinâmicos com umaampla variedade de proteínas acessórias (referidas como co-acompanhates)que parecem responsáveis para a regulação da função de acompanhate(Young et al., 2001). Quando as células sofrem vários estresses celularesambientais, a Hsp90 forma um componente de núcleo da resposta de es-tresse celular mediante a interação com muitas proteínas após a sua con-formação nativa ter sido alterada. Os estresses ambientais, tais como cho-que térmico, metais pesados ou álcool, geram dobradura errônea da proteí-na localizada. A Hsp90 (de comum acordo com outros acompanhantes) ligaestas proteínas de dobradura errônea permitindo a redobradura adequada eprevenindo a agregação não-específica (Smith et al., 1998). Além disso, osrecentes resultados sugerem que a Hsp90 também pode desempenhar umpapel no tamponamento contra os efeitos de mutação, presumivelmentemediante a correção da dobradura inapropriada de proteínas mutantes (Ru-therford and Lindquist, 1998). No entanto, a Hsp90 também possui um papelregulador importante. Sob condições fisiológicas normais, juntamente com seuhomólogo de retículo endoplásmico GRP94, a Hsp90 desempenha um papel deorganização na célula, mantendo a estabilidade conformacional e maturação demuitas proteínas clientes. Estas podem ser subdivididas em três grupos: (a) re-ceptores do hormônio esteróide (por exemplo, receptor de estrogênio, receptorde progesterona) (b) Ser/Thr ou tirosina cinases (por exemplo, Her2, Raf-1,CDK4 e Lck), e (c) uma coleção de proteínas aparentemente não relacionadas,por exemplo, mutante p53 e a subunidade catalítica de telomerase hTERT.

Também foi mostrado recentemente que a Hsp90 é responsável pela estabi-lização e ativação das cinases mutantes onde a cinase tipo silvestre não éum cliente Hsp90 (para um exemplo vide a B-Raf story published in da Ro-cha Dias et al., 2005). Todas estas proteínas desempenham papéis regula-dores chaves em muitos processos fisiológicos e bioquímicos na célula. No-vas proteínas clientes de Hsp90 estão sendo constantemente identificadas;vide http://www.Dicard.ch/downloads/Hsp90interactors.pdf para a lista maisrecente.

A família de Hsp90 altamente conservada em seres humanosconsiste de quatro genes, a saber, as isoformas Hsp90oc e Ηερ90β citosóli-cas (Hickey et al., 1989), GRP94 no retículo endoplásmico (Argon et al.,1999) e Hsp75/TRAP1 na matriz mitrocôndria (Felts et al., 2000). À parte dasdiferenças na localização subcelular, muito pouco é conhecido a cerca dasdiferenças na função entre Hsp90a/p, GRP94 e TRAP1. Os relatos iniciaisque sugerem que certas proteínas clientes fossem acompanhadas por umaHsp90 específica (por exemplo, Her2 em Grp94 isoladamente) parecem tersido errôneos.

A Hsp90 participa em uma série de interações complexas comuma faixa de proteínas clientes e reguladoras (Smith, 2001). Embora os de-talhes moleculares precisos permanecem para serem elucidados, estudosbioquímicos e cristalográficos de raio X (Prodromou et al., 1997; Stebbins etal., 1997) realizados durante os últimos anos têm fornecido critérios cadavez mais detalhados na função de acompanhante de Hsp90.Seguinte a controvérsia mais no princípio sobre este assunto,fica agora claro que a Hsp90 é um acompanhante molecular dependente deATP (Prodromou et al, 1997), com dimerização dos domínios de ligação aonucleotídeo sendo essencial para a hidrólise de ATP, que é por sua vez es-sencial para a função de acompanhante (Prodromou et al, 2000a). A ligaçãode ATP resulta na formação de uma estrutura de dímero toroidal em que osdomínios N terminais são levados em contato mais próximo um com o outroresultando em uma mudança conformacional conhecida como o 'mecanismoclampe' (Prodromou and Pearl, 2000b). Esta mudança conformacional é, emparte, regulada pelos vários co-acompanhantes associados com a Hsp90(Siligardi et al., 2004).

Inibidores de Hsp90 Conhecidos

A primeira classe de inibidores de Hsp90 a ser descoberta foi aclasse de ansamicina de benzoquinona, que inclui os compostos de herbimi-cina A e geldanamicina. Eles foram mostrados de inverter o fenótipo malignode fibroblastos transformados pelo oncogene (Uehara et al., 1985), e subse-qüentemente apresentam atividade antitumoral potente em modelos animaistanto in Vitro (Schulte et al., 1998) quanto in vivo (Supko et al., 1995).

Estudos de imunoprecipitação e matriz de afinidade têm mostra-do que o mecanismo principal de ação da geldanamicina envolve a ligação aHsp90 (Whitesell et al., 1994; Schulte and Neckers, 1998). Além do mais,estudos cristalográficos de raio X têm mostrado que a geldanamicina compe-te no sítio de ligação ATP e inibe a atividade ATPase intrínseca de Hsp90(Prodromou et al., 1997; Panaretou et al., 1998). Esta interrupção do ciclo deacompanhante (através do bloqueio do movimento de ATP) causa a perdado co-acompanhante p23 do complexo e o direcionamento das proteínasclientes para a degradação através do caminho proteasoma ubiquitina. 17-Alilamino, 17-demetoxigeldanamicina (17AAG) retém a propriedade de inibi-ção de Hsp90 resultando na depleção da proteína cliente e atividade antitu-moral na cultura celular e modelos de enxerto xenoblástico (Schulte et al,1998; Kelland et al, 1999), mas possui significativamente menos hepatotoxi-cidade do que a geldanamicina (Page et al, 1997). De interesse, a 17AAG foimostrada de ser muito mais ativa sobre as células tumorais do que sua afini-dade com a Hsp90 purificada sugere. Isto tem levado à sugestão de que ascélulas tumorais (mas não células não-tumorigênicas) contêm uma confor-mação de alta afinidade de Hsp90 na qual a 17AAG se liga mais firmemente,e confere seletividade tumooral nos inibidores de Hsp90 (Kamal et al., 2003).A 17AAG está correntemente sendo avaliada nos testes clínicos de Fase II.

Radicicol é um antibiótico macrocíclico mostrado para inverter ofenótipo maligno de fibroblastos transformados vSrc e vHa-Ras (Kwon et al,1992; Zhao et al, 1995). Foi mostrado de degradar várias proteínas de sinali-zação como uma conseqüência da inibição de Hsp90 (Schulte et al., 1998).Os dados cristalográficos de raio X confirmaram que o radicicol também seliga ao domínio N terminal de Hsp90 e inibe a atividade ATPase intrínseca(Roe et al., 1998). O radicicol carece de atividade antitumoral in vivo devido^ à natureza química instável do composto.Os antibióticos de cumarina são conhecidos de se ligarem ao

DNA girase bacteriano em um sítio de ligação ATP homólogo a aquele doHsp90. A cumarina, novobiocina, foi mostrada dde se ligar ao terminal decarbóxi da Hsp90, isto é, em um sítio diferente aquele ocupado pelas ansa-micinas de benzoquinona e radical que se liga no terminal N (Marcu et al.,2000b). No entanto, isto ainda resultou na inibição da função e degradaçãode Hsp90 de várias proteínas de sinalização acompanhate de Hsp90 (Marcuet al. 2000a). A geldanamicina não pode se ligar a Hsp90 subsequente ànovobiocina; isto sugere que alguma interação entre os domínios terminais Ne C deve existir e é consistente com a visão de que ambos os sítios são im-portantes com relação as propriedades de acompanhante da Hsp90.

Um inibidor de Hsp90 com base em purina, PU3, foi mostrado deresultar na degradação de moléculas de sinalização, incluindo Her2, e cau-sar a interrupção e diferenciação do ciclo celular nas células de câncer damama (Chiosis et al., 2001). Estudos recentes têm identificado outros com-postos com base em purina com atividade contra Her2 e atividade nos en-saios de inibição do crescimento celular (Dymock et al 2004; Kasibhatla et al2003; Llauger et al 2005).As publicações de patente WO 2004/050087, WO 2004/056782,WO 2004/072051, WO 2004/096212, WO 2005/000300, WO 2005/021552,WO 2005/034950 se relacionam com os inibidores de Hsp90.Hsp90 como um Alvo Terapêutico

Devido ao seu envolvimento na regulação de vários caminhos desinalização que são crucialmente importantes na condução do fenótipo deum tumor, e a descoberta de que certos produtos naturais bioativos exercemseus efeitos através da atividade de Hsp90, o Hsp90 acompanhante molecu-lar está correntemente sendo avaliado com um novo alvo para o desenvol-vimento de fármaco anticâncer (Neckers et al., 1999).

O mecanismo predominante de ação da geldanamicina, 17AAG,e radicicol envolve a ligação à Hsp90 no sítio de ligação ATP localizado nodomínio N-terminal da proteína, levando à inibição da atividade ATPase in-trínseca de Hsp90 (Prodromou et al., 1997; Stebbins et al., 1997; Panaretouet al., 1998).

A inibição da atividade ATPase de Hsp90 por 17AAG induz aperda de p23 do complexo de proteína acompanhante-cliente que interrom-pe o ciclo de acompanhante. Isto leva à formação de um complexos de pro-teína Hsp90-cliente que direciona estas proteínas clientes para a degrada-ção através do caminho de proteasoma ubiquitina (Neckers et al., 1999; Whi-tesell & Lindquist, 2005). O tratamento com inibidores de Hsp90 leva à de-gradação seletiva de proteínas importantes (por exemplo, Her2, Akt, receptorde estrogênio e CDK4) envolvidas na proliferação celular, reculação do ciclocelular e apoptose, processos que são fundamentalmente importantes nocâncer.

O desenvolvimento pré-clínico de 17AAG como um agente anti-câncer tem sido bem documentado (Sausville et al., 2003) e está corrente-mente passando por testes clínicos de Fase II. Os resultados dos testes clí-nicos de Fase I foram recentemente publicados (Banerji et al., 2005; Goetzet al., 2005; Ramanathan et al., 2005 and Grem et al., 2005). De todos estestestes, aquele conduzido por Banerji et al. mostrou ser o mais positivo comuma dose máxima de 450 mg/m2/semana alcançada com respostas de mar-cador PD na maioria dos pacientes e possível atividade antitumoral em doispacientes.

A inibição da função de Hsp90 foi mostrada causar degradaçãoseletiva de proteínas de sinalização importantes envolvidas na proliferaçãocelular, regulação do ciclo celular e apoptose, processos que são fundamen-talmente importantes e que são comumente desregulados no câncer (Hoste-in et al., 2001). Uma análise racional atrativa para o desenvolvimento demedicamentos contra este alvo para uso na clínica é que mediante a deple-ção simultânea de proteínas associada com o fenótipo transformado, pode-se obter um efeito antitumoral forte e alcançar uma vantagem terapêuticacontra as células de câncer versus normais. Estes eventos a jusante da ini-bição de Hsp90 são supostos de ser responsáveis para a atividade antitumo-ral dos inibidores de Hsp90 na cultura celular e modelos animais (Schulte etal., 1998; Kellandetal., 1999).

Recente trabalho tem mostrado que o estado de acetilação deHsp90 também desempenha um papel no controle do ciclo de acompanhan-te. A inibição de HDAC6 por inibidores de molécula pequena ou através dodirecionamento do gene siRNA interrompe o ciclo de acompanhante. Taistratamentos causam a degradação da proteína cliente em uma maneira aná-loga aos inibidores do sítio de ATP de molécula pequena (Kovacs et al,2005; Aoyagi & Archer, 2005).

Relatos recentes (vide Cowen et. al. Science 309, 2185 (2005) eHeitman, Science 309, 2175, 2005) também indicam que a Hsp90 é requeri-da tanto para a emergência de isolados fúngicos resistentes aos agentesantifúngicos, quanto para a resistência contínua ao fármaco visto que istotem ocorrido. Os inibidores de Hsp90, portanto, ressensibilizam as cepasque se tornaram resitentes, por exemplo, aos agentes antifúngicos de azol(por exemplo, fluconazol) assim como aos agentes mais novos tais comoequinocandinas.

Descrição detalhada da invenção

Em um amplo aspecto da presente invenção fornece um com-posto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste:<formula>formula see original document page 9</formula>

em que

R1 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, ou um radical de fórmula-X-AIq1-(Z)m-(AIq2)n-Q (IA)

em que

X é -O-, -S- -S(O)-, -SO2-, ou -NH-,

Z é -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S(O)-, -SO2-, -NRa-, ou, em cada

orientação -C(=0)0-, -C(=0)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRa-,-NRaC(=0)-, ou -NRaSO2- em que Ra é hidrogênio ou Ci-C6 al-quila

Alq1 e Alq2 são radicais de CrC3 alquileno ou C2-C3 alquenilenodivalentes opcionalmente substituídos,

m, η e ρ são independentemente O ou 1, eQ é hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocíclico opcio-nalmente substituído;

R2 é um radical de fórmula (IB):-(Ar1)P-(Alq1)q-(Z)r-(AIq2)S-O (IB)

em que

Ar1 é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituí-do,

Alq1, Alq2, Z, e Q são como definidos em relação à fórmula (IA), ep, q, r e s são independentemente O ou 1; eR3 é ciano (-CN), flúor, cloro, bromo, metila em que um ou maisátomos de hidrogênio são opcionalmente substituídos por átomos de flúor,etila em que um ou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituí-dos por átomos de flúor, ciclopropila, -OH, -CH2OH1 -C(=0)NH2, -C(=0)CH3,ou -NH2.

Em um outro aspecto, a invenção fornece o uso de um compostode fórmula (I), ou um sal, N-óxido, hidrato ou solvato deste na preparação deuma composição para a inibição da atividade de HSP90 in vitro ou in vivo.

A invenção também fornece um método de tratamento de doen-ças que são responsivas à inibição da atividade de HSP90 em mamíferos,cujo método compreende a administração ao mamífero de uma quantidadede um composto com definido de acordo com a reivindicação 1 eficaz parainibir dita atividade de HSP90.

O uso in vivo, e método, da invenção é aplicável para o trata-mento de doenças em que a atividade de HSP90 é implicada, incluindo ouso para a imunossupressão ou o tratamento de doença viral, infecção fún-gica resistente ao fármaco (visto que os inibidores de HSP90 são capazesde ressensibilizar as cepas que se tornaram resistentes, por exemplo, aosagentes antifúngicos de azol (por exemplo, fluconazol) assim como agentesmais novos tais como equinocandinas), doenças inflamatórias tais como ar-trite reumatóide, asma, esclerose múltipla, diabetes Tipo I, lúpus, psoríase edoença intestinal inflamatória; doença relacionada com a angiogênese dafibrose cística tal como retinopatia diabética, hemangiomas e endometriose;ou para a proteção de células normais contra a toxicidade induzida pelaquimioterapia; ou doenças onde a insuficiência para sofrer apoptose é umfator subjacente; ou proteção da lesão hipoxia-isquêmica devido a elevaçãode Hsp70 no coração e cérebro; encefalopatia espongiforme/CJD, doençade Huntingdon ou Alzheimer. Uso para o tratamento de câncer é especial-mente indicado.

Como aqui usado, o termo "(Ca-Cb)alquila" em que a e b sãonúmeros inteiros refere-se a um radical de alquila de cadeia reta ou ramifi-cada tendo de a a b átomos de carbono. Assim, quando a for 1 eb for 6, porexemplo, o termo inclui metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila,sec-butila, t-butila, n-pentila e n-hexila.

Como aqui usado o termo "radical de (Ca-Cb)alquileno divalente"em que a e b são número inteiros refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetosaturada tendo de a a b átomos de carbono e duas valências não satisfeitas.

Como aqui usado o termo "(Ca-Cb) alquenila" em que a e b sãonúmero inteiros refere-se a um componente de alquenila de cadeia reta ouramificada tendo de a a b átomos de carbono tendo pelo menos uma ligaçãodupla e estereoquímica E ou Z onde aplicável. O termo inclui, por exemplo,vinila, alila, 1- e 2-butenila e 2-metil-2-propenila.

Como aqui usado o termo "radical de (Ca-Cb) alquenileno diva-lente" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto tendo de a a b átomos decarbono, pelo menos uma ligação dupla, e duas valências não satisfeitas.

Como aqui usado o termo "cicloalquila" refere-se a um radicalcarbocíclico saturado tendo de 3 a 8 átomos de carbono e inclui, por exem-pio, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila.

Como aqui usado o termo "cicloalquenila" refere-se a um radicalcarbocíclico tendo de 3 a 8 átomos de carbono contendo pelo menos umaligação dupla, e inclui, por exemplo, ciclopentenila, cicloexenila, cicloeptenilae ciclooctenila.

Como aqui usado o termo "arila" refere-se a um radical aromáti-co carbocíclico mono-, bi- ou tricíclico, e inclui radicais carbocíclicos monocí-clicos ou bicíclicos aromáticos fundidos em um anel carbocíclico ou hetero-cíclico não-aromático. Ilustrativo de tais radicais são fenila, bifenila e naptila,e os radicais da fórmula:

<formula>formula see original document page 11</formula>

em que o anel A (i) é opcionalmente substituído, (ii) possui 5 ou 6 membrosde anel incluindo os carbonos do anel de fenila em que é fundido, e (iii) pos-sui pelo menos um heteroátomo O, S ou N como um membro do anel.

Como aqui usado o termo "carbocíclico" refere-se a um radicalcíclico cujos átomos do anel são todos carbono, e inclui radicais de arila,cicloalquila e cicloalquenila.

Como aqui usado o termo "heteroarila" refere-se a um radicalaromático mono-, bi- ou tricíclico contendo um ou mais heteroátomos sele-cionados de S, N e O. Ilustrativos de tais radicais são tienila, benztienila, furi-la, benzfurila, pirrolila, imidazolila, benzimidazolila, tiazolila, benztiazolila,isotiazolila, benzisotiazolila, pirazolila, oxazolila, benzoxazolila, isoxazolila,benzisoxazolila, isotiazolila, triazolila, benztriazolila, tiadiazolila, oxadiazolila,piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, indolila e indazolila.

Como aqui usado o termo não qualificado "heterociclila" ou "he-terocíclico" inclui "heteroarila" como definido acima, e em particular refere-sea um radical não-aromático mono-, bi- ou tricíclico contendo um ou mais he-teroátomos selecionados de S, N e O, e aos grupos consistindo de üm radi-cal não-aromático monocíclico contendo um ou mais de tais heteroátomosque são covalentemente ligados a outro tal radical ou a um radical carbocí-clico monocíclico. Ilustrativo de tais radicais são grupos de pirrolila, furanila,tienila, piperidinila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, tiadiazolila, pi-razolila, piridinila, pirrolidinila, pirimidinila, morfolinila, piperazinila, indolila,morfolinila, benzfuranila, piranila, isoxazolila, benzimidazolila, metilenodioxi-fenila, etilenodioxifenila, maleimido e succinimido.

A não ser que de outra maneira especificada no contexto emque ocorre, o termo "substituído" como aqui aplicado a qualquer componentesignifica substituído com pelo menos um substituinte, por exemplo, selecio-nado de (CrC6) alquila, (C1-C6) alcóoxi (incluindo a substituição de metile-nodióxi e etilenodióxi nos átomos de carbono adjacentes de um anel carbo-cíclico ou heterocíclico), hidróxi, hidróxi(C1-C6)alquila, mercapto, mercap-to(C1-C6)alquila, (C1-C6)alquiltio, monocíclico carbocíclico de 3 a 6 átomosde carbono do anel, monocíclico heterocíclico de 5 ou 6 átomos do anel, ha-lo (incluindo flúor e cloro), trifluorometila, trifluorometóxi, nitro, nitrila (-CN),oxo, -COOH, -COORa, -CORa, -SO2Ra1 -CONH2, -SO2NH2, -CONHRa, -SO2NHRa, -CONRaRb, -SO2NRaRb, -NH2, -NHRa, -NRaRb, -OCONH2, -OCONHRa, -OCONRaRb, -NHCORa, -NHCOORa, -NRbCOORa, -NHSO2ORa, -NRbSO2ORa, -NHCONH2, -NRaCONH2, -NHCONHRb -NRaCONHRb, -NHCONRaRb, ou -NRaCONRaRb em que Ra e Rb são inde-pendentemente um grupo de (C1-C6)alquila. No caso onde o substituinte op-cional contém um radical de alquila, em que o radical de alquila pode sersubstituído por um grupo carbocíclico monocíclico de 3 a 6 átomos de car-bono do anel, ou um grupo heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 átomos doanel. No caso onde o substituinte opcional for ou compreende um grupo car-bocíclico monocíclico de 3 a 6 átomos de carbono do anel, ou um grupo mo-nocíclico heterocíclico de 5 ou 6 átomos de anel, em que o próprio anel podeser substituído por qualquer um dos substituintes opcionais não cíclicos Iis-tados acima. Um "substituinte opcional" pode ser um dos grupos de substitu-inte incluídos na descrição acima.

Como aqui usado o termo "sal" inclui sais de adição de base,adição de ácido e quaternários. Os compostos da invenção que são acídicospodem formar sais, incluindo sais farmacêutica ou veterinariamente aceitá-veis, com bases tais como hidróxidos de metal alcalino, por exemplo, hidró-xidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal terroso alcalino, por exemplo,hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas, por exemplo,N-etil piperidina, dibenzilamina e similares. Aqueles compostos (I) que sãobásicos podem formar sais, incluindo sais farmacêutica ou veterinariamenteaceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo, com ácidos hidroálicos taiscomo ácidos clorídricos ou bromídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou áci-do fosfórico e similares, ácidos cítricos, metanossulfônicos e p-tolueno sulfô-nicos e similares. Qualquer referência aqui não qualificada a um compostoque caia dentro da fórmula (I), deve ser interpretada como uma referência aeste composto, independente de quer esteja quer não esteja na forma desal.

Para uma recapitulação sobre sais, vide Handbook of Pharma-ceutical Salts: Properties. Selection. and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

Em comum com muitos compostos orgânicos úteis na medicina,pelo menos alguns dos compostos da invenção são esperados de seremrecuperáveis como hidratos cristalinos e solvatos. Tais hidratos e solvatossão formas físico-químicas evidentes meramente específicas dos compostosativos da invenção e, portanto, formam parte da invenção. Qualquer referên-cia aqui não qualificada a um composto que caia dentro da fórmula (I) deveser interpretada como uma referência e este composto, independente dequer esteja quer não esteja na forma de um hidrato ou solvato. O termo 'sol-vato' é aqui usado para descrever um complexo molecular compreendendo ocomposto da invenção e uma quantidade estequiométrica de uma ou maismoléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. Otermo 'hidrato' é empregado quando dito solvente for água.

Os nitrogênios no anel de pirimidina fundido presentes nos com-postos da invenção podem ser oxidados para formar N-óxidos. Tais N-óxidossubstancialmente retêm a atividade inibidora de HSP90 dos compostos deorigem, e assim formam parte da invenção. Qualquer referência aqui nãoqualificada a um composto que caia dentro da fórmula (I) deve ser interpre-tada como uma referência e este composto, independente de quer estejaquer não esteja na forma de um N-óxido.

Os compostos com os quais a invenção está envolvida que po-dem existir em uma ou mais formas estereoisoméricas, por causa da pre-sença de átomos assimétricos ou restrições rotacionais, podem existir comovários estereoisômeros com estereoquímica R ou S em cada centro de quiralou como atropisômeros com estereoquímica R ou S em cada eixo de quiral.A invenção inclui todos tais enantiômeros e diastereoisômeros e misturasdestes.

Os assim chamados 'pró-fármacos' dos compostos de fórmula (I)também estão dentro do escopo da invenção. Assim certos derivados decompostos de fórmula (I) que podem ter pouca ou nenhuma atividade farma-cológica a si mesmos podem, quando administrados no ou sobre o corpo,ser convertidos nos compostos de fórmula (I) tendo a atividade desejada, porexemplo, pela clivagem hidrolítica. Tais derivados são referidos como 'pró-fármacos'. Outra informação sobre o uso de pró-fármacos pode ser observa-da em Pro-druas as Novel Deliverv Svstems. Vol. 14, ACS Symposium Seri-es (T. Higuchi e W. Stella) e Bioreversible Carriers in Drua Desiqn, Perga-mon Press, 1987 (ed. Ε. B. Roche, American Pharmaceutical Association).

Os pró-fármacos de acordo com a invenção podem, por exem-pio, ser produzidos mediante a substituição das funcionalidades apropriadaspresentes nos compostos de fórmula (I) com certos componentes conheci-dos por aqueles versados na técnica como 'pró-componentes' como descri-to, por exemplo, em Desian of Prodruqs by H. Bundgaard (Elsevier, 1985).

Também incluídos dentro do escopo da invenção são os meta-bólitos de compostos de fórmula (I), isto é, compostos formados in vivo apósa administração do fármaco. Alguns exemplos de metabólitos incluem

(i) onde o composto de fórmula (I) contém um grupo de metila,um derivado de hidroximetila deste (-CH3 -> -CH2OH):

(ii) onde o composto de fórmula (I) contém um grupo de alcóxi,um derivado de hidróxi deste (-OR -> -OH);

(iii) onde o composto de fórmula (I) contém um grupo de aminoterciário, um derivado de amino secundário deste (-NR1R2 -> -NHR1 ou -NHR2);

(iv) onde o composto de fórmula (I) contém um grupo de aminosecundário, um derivado primário deste (-NHR1 -> -NH2);

(v) onde o composto de fórmula (I) contém um componente defenila, um derivado de fenol deste (-Ph -> -PhOH); e

(vi) onde o composto de fórmula (I) contém um grupo de amida,um derivado de ácido carboxílico deste (-CONH2 -> COOH).

O grupo Ri

Quando Ri for um radical de fórmula (IA):

-X-AIq1-(Z)m-(AIq2)n-O (IA)

X pode ser -O-, -S- -S(O)-, -SO2-, ou -NH-. Presentemente -O- e-S- são preferidos;

quando presente, Z pode ser -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S(O)-, -SO2-, -NRa-, ou, em cada orientação -C(=0)0-, -C(=0)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRa-, -NRaC(=0)-, ou -NRaSO2- em que Ra é hidrogênio ou C1-C6 alqui-la. Presentemente -NRa- é preferido;

Alq1 (e Alq2 quando presente) pode ser, por exemplo -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2--CH(CH3)CH2- ou -CH2CH=CH-;

m, η e ρ são independentemente O ou 1. Desta maneira, em umaclasse de radicais (IA), m e η são ambos 0. Em uma outra classe de radicais(IA), m é 1 e η é 0. Em uma outra classe de radicais (IA), m é O e η é 1;

Q pode ser hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocícli-co opcionalmente substituído. Exemplos de radicais carbocíclicos Q incluemfenila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e cicloexila. Exemplos de radicaisheterocíclicos Q incluem radicais de heteroarila tais como piridila, tienila efuranila, e radicais heterocíclicos não-aromáticos tais como piperidinila, pipe-razinila, tetraidropirrolila e morfolinila.

dos. Q (quando carbocíclico ou heterocíclico) pode ser não substituído, masquando substituído, os substituintes opcionais podem ser selecionados de,por exemplo, metila, etila, n- ou isopropila, vinila, alila, metóxi, etóxi, n-propilóxi, isopropilóxi, benzilóxi, alilóxi, cianometóxi, flúor, cloro, bromo, cia-no, oxo, formila, metil-, etil-, ou n-propil-carbonilóxi, metil- ou etilaminocarbo-nila, e substituintes de fórmula -O(CH2)aZ1 em que a é 1, 2 ou 3 e Z1 é um,ou um grupo de Ci-C6alcóxi; ou de fórmula -(AIq3)bZ1 em que Alq3 é um (CrC3) alquileno de cadeia reta ou ramificada divalente, b é O ou 1, e Z1 é umgrupo de amino primário, secundário, terciário ou cíclico, ou um grupo de CrC6alcóxi.

S(CH2)nZ1 em que η é 1, 2 ou 3 e Z1 é um grupo de amino primário, secun-dário, terciário ou cíclico, o último mencionado sendo opcionalmente substi-tuído, ou um grupo de CrC6alcóxi. Exemplos específicos de Ri incluem hi-drogênio, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio, hidroxietiltio, metilamino, dietilamino-metiltio, metilaminocarbonilmetiltio, e grupos de fórmula (A) a (H):

Correntemente é preferível que Alq1 e Alq2 sejam não substituí-

Um tipo de substituinte Ri possui a fórmula -O(CH2)nZ1 ou -

<formula>formula see original document page 16</formula>em que W é -O- ou -S-.O grupo R?

R2 é um radical de fórmula (IB): -(Ar1 )p-(AlqV(Z)r-(AIq2)s-Q. Em(IB):

Ar1 é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituí-do, por exemplo fenila, tienila, benztienila, furila, benzfurila, pirrolila, imidazo-lila, benzimidazolila, tiazolila, benztiazolila, isotiazolila, benzisotiazolila, pira-zolila, oxazolila, benzoxazolila, isoxazolila, benzisoxazolila, isotiazolila, tria-zolila, benztriazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimidini-la, pirazinila, triazinila, indolila e indazolila. Correntemente é preferível queAr1 seja fenila opcionalmente substituída.

Alq1 e Alq2 quando presentes podem ser, por exemplo -CH2-, -CH2CH2-, -Ch2CH2CH2--CH(CH3)CH2- ou -CH2CH=CH-; no momento épreferível que Alq1 e Alq2 quando presentes sejam -CH2-;Z, quando presente, pode ser -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S(O)-,-SO2-, -NRa-, ou, em cada orientação -C(=0)0-, -C(=0)NRA-, -C(=S)NRA-, -SO2NRa-, -NRaC(=0)-, ou -NRaSO2- em que Ra é hidrogênio ou C1-C6 alqui-la. No momento é preferível que Z, quando presente, seja -O-, ou -ΝΗ-;Q pode ser, por exemplo, um anel de fenila, cicloexila, piridila,morfolino, piperidinila ou piperazinila, tal como fenila opcionalmente substitu-ída, 2- ou 3-tienila, 2- ou 3- furanila, 2-, 3- ou 4-piridinila, morfolinila ou pipe-ridinila.

Em uma classe de compostos da invenção, no grupo R2, ρ é 1,cada um de q, r e s é O, e Q é hidrogênio. Em outra classe, ρ é 1, e q, r e ssão O, e Q é um anel carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituí-do. Em mais uma outra classe, p, q, r e s são cada um 1, e Q é hidrogênio.

Em uma classe de compostos (I) da invenção, R2 é fenila, opcio-nalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados de metila,trifuorometila, etila, n- ou isopropila, vinila, alila, metóxi, trifuorometóxi, etóxi,metilenodióxi, etilenodióxi, n-propilóxi, benzilóxi, alilóxi, cianometóxi, flúor,cloro, bromo, ciano, formila, metil-, etil-, ou n-propil-carbonilóxi, metil- ou eti-laminocarbonila, e substituintes de fórmula -O(CH2)nZ1 em que η é 1, 2 ou 3e Z1 é um grupo de amino primário, secundário, terciário ou cíclico, ou umgrupo de CrC6 alcóxi; ou de fórmula -(AIq3)mZ1 em que Alq3 é um (CrC3)alquileno de cadeia reta ou ramificada divalente, m é 0 ou 1, e Z1 é um grupode amino primário, secundário, terciário ou cíclico, o último mencionado sen-do opcionalmente substituído, ou um grupo de C1-C6 alcóxi. Os substituintesopcionais quando R2 for fenila estão preferivelmente na posição 2 e/ou 4e/ou 5 do anel de fenila.

O grupo R3

Presentemente, é preferível que R3 seja ciano (-CN).Particularmente preferível presentemente são os compostos dafórmula (II):

<formula>formula see original document page 18</formula>

R1 é (a) CrC6 alquiltio ou CrC6 alcóxi em cada um dos quais umou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituídos por átomosde flúor, ou (b) um substituinte de fórmula -O(CH2)nZ1 ou -S(CH2)nZ1 em queη é 1, 2 ou 3 e Z1 é um grupo de amino primário, secundário, terciário ou cí-clico o último mencionado sendo opcionalmente substituído.R10 é H, Cl, Brou -CH3;

R11 é hidrogênio, Cl, Br, CN, metila, etila, n- ou iso-propila, metó-xi, etóxi, vinila ou alila; e

R12 é (i) um radical de fórmula -O(CH2)nZ1 ou -S(CH2)nZ1 em queη é 1, 2 ou 3 e Z1 é (i) um grupo de amino primário, secundário, terciário oucíclico, ou um grupo de CrC6 alcóxi; ou (ii) um radical de fórmula -(AIq3)mZ1em que Alq3 é um (Ci-C3) alquileno de cadeia reta ou ramificada divalente, mé O ou 1, e Z1 é um grupo de amino primário, secundário, terciário ou cíclico,ou um grupo de C1-C6 alcóxi.Exemplos específicos de compostos da invenção incluem aque-les dos Exemplos anexos.

Existem múltiplas estratégicas sintéticas para a síntese doscompostos (I) com as quais a presente invenção está envolvida, mas todascontam com a química conhecida, entendida pelo químico de orgânica sinté-tica. Assim, os compostos de acordo com a fórmula (I) podem ser sintetiza-dos de acordo com os procedimentos descritos na literatura padrão e sãobem-conhecidos de uma pessoa versada na técnica. Fontes de literaturatípica são "Advanced organic chemistry", 4th Edition (Wiley), J March, "Com-prehensive Organic Transformation", 2nd Edition (Wiley), R.C. Larock ,"Handbook of Heterocyclic Chemistry", 2nd Edition (Pergamon), A.R. Ka-tritzky), artigos de revisão tais como observados na "Synthesis", "Acc. Chem.Res.", "Chem. Rev", ou fontes de literatura primária identificadas por pesqui-sas de literatura padrão on-line ou de fontes secundárias tais como "Chemi-cal Abstracts" ou "Beilstein". Tais métodos em literatura incluem aqueles dosexemplos preparativos aqui descritos, e métodos analógos aos mesmos.

Os compostos da invenção são inibidores de HSP90 e são úteisno tratamento de doenças que são responsivas à inibição da atividade deHSP90 tais como cânceres; doenças virais tais como Hepatite C (HCV)(Waxman, 2002); Imunossupressão tal como em transplante (Bijlmakers,2000 e Yorgin, 2000); doenças Antiinflamatórias (Bucci, 2000) tais como Ar-trite reumatóide, Asma, MS, Diabetes Tipi I, Lupus, Psoríase e Doença Intes-tinal Inflamatória; Fibrose cística (Fuller, 2000); doenças relacionadas com aangiogênese (Hur, 2002 e Kurebayashi, 2001): retinopatia diabética, heman-giomas, psoríase, endometriose e angiogênese tumoral. Também um inibi-dor de Hsp90 da invenção pode proteger as células normais contra a toxici-dade induzida por quimioterapia e ser útil em doenças onde a insuficiênciade sofrer de apoptose é um fator subjacente. Um tal inibidor de Hsp90 tam-bém pode ser útil em doenças onde a indução de um estresse celular ouresposta de proteína por choque térmico pode ser benéfica, por exemplo,proteção da lesão de hipoxia-isquêmica devido a elevação de Hsp70 no co-ração (Hutter, 1996 e Trost, 1998) e cérebro (Plumier, 1997 e Rajder, 2000).Um inibidor de Hsp90 - aumento induzido nos níveis de Hsp70 também po-de ser útil nas doenças onde a dobradura errônea ou agregação da proteínaé um fator causativo principal, por exemplo, distúrbios neurogenerativos taiscomo encefalopatia espongiforme/CJD, doença de Huntingdon e Alzheimer(Sittler, 2001; Trazelt, 1995 e Winklhofer, 2001)".

Conseqüentemente, a invenção também inclui:

(i) Uma composição farmacêutica ou veterinária que compreen-de um composto de fórmula (I) acima, juntamente com um portador farma-cêutica ou veterinariamente aceitável.

(ii) O use de um composto de fórmula (I) acima na preparaçãode uma composição para a inibição da atividade de HSP90 in vitro ou in vivo.

(iii) Um método de tratamento de doenças ou condições que sãoresponsivas à inibição da atividade de HSP90 em mamíferos, cujo métodocompreende a administração a um mamífero de uma quantidade de umcomposto de fórmula (I) acima eficaz para inibir dita atividade de HSP90.

Ficará entendido que o nível de dose específico para qualquerpaciente particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a ativi-dade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde ge-ral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, taxa de ex-creção, combinação medicamentosa e o mecanismo causativo e gravidadeda doença particular que passa por terapia. Em geral, uma dose adequadapara as formulações oralmente administráveis geralmente estará na faixa de0,1 a 3000 mg, uma vez, duas vezes, três vezes per dia, ou a quantidadediária equivalente administrada por infusão ou outras vias. No entanto, osníveis ideais de dose e a freqüência de dosagem serão determinados portestes clínicos como é convencional na técnica.

Os compostos com os quais a invenção está envolvida podemser preparados para a administração por qualquer via consistente com suaspropriedades farmacocinéticas. As composições oralmente administráveispodem estar na forma de tabletes, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, prepa-rações líquidas ou de gel, tais como soluções ou suspensões orais, tópicasou estéreis. Tabletes e cápsulas para a administração oral podem estar naforma de apresentação de dose unitária, e podem conter excipientes con-vencionais tais como agentes de ligação, por exemplo, xarope, acácia, gela-tina, sorbitol, tragacanto ou polivinil-pirrolidona; cargas, por exemplo, lactose,açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante deformação de tabletes, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietilenoglicol ou sílica; desintegrantes, por exemplo, amido de batata, ou agentesumectantes aceitáveis tais como Iauril sulfato de sódio. Os tabletes podemser revestidos de acordo com os métodos bem-conhecidos na prática farma-cêutica normal. As preparações líquidas orais podem estar na forma de, porexemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ouelixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstitui-ção com água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais preparaçõeslíquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspen-são, por exemplo, sorbitol, xarope, metil celulose, xarope de glicose, gelati-na, gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsificantes, por exem-plo, lecitina, monooleato de sorbitano, ou acácia; veículos não-aquosos (quepodem incluir óleos comestíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, óleo decoco fracionado, ésteres oleosos tais como glicerina, propileno glicol, ou ál-cool etílico; conservantes, por exemplo, p-hidroxibenzoato de metila ou pro-pila ou ácido sórbico, e se desejável, agentes flavorizantes ou colorantesconvencionais.

Para aplicação tópica na pele, o fármaco pode ser preparado emum creme, loção ou ungüento. As formulações de creme ou ungüento quepodem ser usadas para o fármaco são formulações convencionais bem-conhecidas na técnica, por exemplo, como descrito nos manuais padrão deprodutos farmacêuticos tais como British Pharmacopoeia.

O ingrediente ativo também pode ser administrado parenteral-mente em um meio estéril. Dependendo do veículo e concentração usados,o fármaco pode ser colocado em suspensão ou dissolvidos no veículo. Van-tajosamente, adjuvantes tais como um anestésico local, conservante e agen-tes tamponantes podem ser dissolvidos no veículo.

Os compostos da invenção podem ser administrados juntamentecom outras classes de medicamentos farmaceuticamente ativos. Por exem-plo, para o tratamento de cânceres, a terapia de combinação com duas oumais classes diferentes de agente anticâncer é uma prática reconhecida emuito difundida. Os presentes compostos podem ser usados em tal terapiade combinação, particularmente onde o(s) outro(s) fármaco(s) possui(em)um modo de ação diferente da inibição de HSP90.

Os seguintes exemplos ilustram a preparação e atividades doscompostos específicos da invenção e não são destinados a serem Iimitativosdo escopo total da invenção.Procedimentos Gerais

Todos os reagentes obtidos de fontes comerciais foram usadossem mais purificação. Os solventes anídricos foram obtidos de fontes co-merciais e usados sem outra secagem. A cromatografia instantânea foi exe-cutada com cartuchos de sílica-gel pré-acondicionados (Strata SI-1; 61Á,Phenomenex, Cheshire UK ou IST Flash II, 54Á, Argonaut, Hengoed, UK). Acromatografia de camada fina foi conduzida com placas de 5 χ 10 cm reves-tidas com sílica-gel Merck Type 60 F254-

Os compostos da presente invenção foram caracterizados porLC/MS usando um Hewlett Packard 1100 series LC/MSD ligado a detectorquadripolar (modo de ionização: pulverização de elétron positivo ou negati-vo; coluna: Phenomenex Luna 3u C18(2) 30 χ 4,6 mm; Tampão A preparadopela dissolução de 1,93 g de acetato de amônio em 2,5 L HPLC grau H2O eadição de 2 ml ácido fórmico. Tamponante B preparado pela adição de 132ml de tamponante A para 2,5 L de HPLC grau acetonitrila e adição de 2 mlácido fórmico; gradiente de eluição 95:5 a 5:95 tamponante A: tamponante Bsobre 3,75 minutos ou 7,5 minutos. Taxa de fluxo = 2,0 ml/min) Tempos deRetenção (TR) são relatados em minutos. A ionização é positiva a não serque de outra maneira mencionada.

A análise de ressonância magnética nuclear (RMN) foi executa-da com um espectrômetro de RMN Brucker DPX-400 MHz. A referência es-pectral era a mudança química conhecida do solvente. Os dados de RMNem próton são relatados como se segue: mudança química (δ) em ppm, mui-tiplicidade (s = singleto, d = dobleto, t = tripleto, q = quarteto, ρ = penteto, m= multipleto, dd = dobleto de dobleto, br = amplo), integração, constante de acoplamento.

Alguns compostos da invenção foram purificados pela HPLCpreparativa. As purificações por HPLC preparativa foram executadas em umsistema Waters FractionLinx MS Autopurification com um Gemini® 5 μΜC18(2), coluna 100 mm χ 20 mm i.d. da Phenomenex, operando em umataxa de fluxo de 20 ml min"1 com detecção de disposição de diodo UV (210 -400 nm) e compilação direcionada de massa. Os gradientes usados paracada composto são mostrados na Tabela 1.

Em pH 4: Solvente A: HPLC grau Água + 10mM acetato de a-mônio + 0,08 % v/v ácido fórmico.

Solvente B: 95 % v/v HPLC grau acetonitrila + 5 % v/v Solven-te A + 0.08 % v/v ácido fórmico.

Em pH 9: Solvente A: HPLC grau Água + 10 mM acetato de a-mônio + 0.08 % v/v solução de amônia.

Solvente B: 95 % v/v HPLC grau acetonitrila + 5 % v/v Solven-te A + 0,08 % v/v solução de amônia.

O espectrômetro de massa foi um espectrômetro Waters Micro-mass ZQ2000 operando em modos de ionização por eletropulverização deíon positivo ou negativo, com um peso molecular na faixa de 150 a 1000.

Tabela 1 Gradientes de HPLC preparativos

<table>table see original document page 23</column></row><table>

Os nomes químicos IUPAC foram gerados usando AutoNomStandard.Alguns compostos da invenção podem ser produzidos (por meiode exemplo) por um caminho representado no esquema 1 (PG = grupo deproteção).

Esquema 1

<formula>formula see original document page 24</formula>

Alguns compostos da invenção podem ser produzidos pelo ca-minho representado pelo esquema 2 (PG = grupo de proteção).

Esquema 2

<formula>formula see original document page 24</formula>

Alguns compostos da invenção podem ser produzidos pelo ca-minho representado pelo esquema 3 (PG = grupo de proteção).Esquema 3

<formula>formula see original document page 25</formula>

Um caminho sintético alternativo para os compostos da síntesetais como 17 é mostrado no Esquema 4. Este envolve o deslocamento desulfonas (18) por nucleófilos apropriados usando métodos e reagentes co-nhecidos por aqueles versados na técnica.

Esquema 4

<formula>formula see original document page 19</formula>

O grupo Arila ("Ar" nos esquemas de 1 a 4) pode ser manipuladoainda para criar mais exemplos da invenção, como delineado no esquema 5(PG = grupo de proteção).

Esquema 5

<formula>formula see original document page 25</formula>Exemplo 1

4-(2.4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 26</formula>

Etapa 1

4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 26</formula>

A uma mistura de hidreto de sódio (276 mg; 6,89 mmols) emDMF (10 ml) a O0C foi adicionado por gotejamento uma solução de 4-cloro-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina [preparado como detalhado em Da-voll. J. J. Chem. Soe. 1960, pp131-138] (1,145 g; 5,74 mmols) em DMF aní-drico (20 ml). Quando a adição estava completa, cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetila (1,32 ml; 7,46 mmols) foi adicionado por gotejamento e a misturade reação foi agitada em 0°C durante 1,5 horas, depois deixada aquecerpara a temperatura ambiente. A mistura de reação foi dividida entre água(100 ml) e acetato de etila (100 ml). A fase orgânica foi secada por Na2SO4depois filtrada e os solventes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bru-to foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (70g) eluindocom um gradiente de solvente de 0 a 5 % acetato de etila em hexano paraproporcionar o produto como óleo incolor (2,04 g).

LC/MS: TR = 2,88 min; m/z = 332, 330 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 2

4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina<formula>formula see original document page 27</formula>

Uma mistura de 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetHsilanil-etoxi-metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,04 g; 6,19 mmols), 1N carbonato de só-dio hidrogênio (aq) 18,6 ml; 18,6 mmols), DMF (41 ml) e ácido 2,4-dimetilfenilborônico foi submetido a retirada de gás por borbulhamento denitrogênio através da mistura de reação durante 5 minutos. Dicloro-bis(trifenilfosfina) paládio(ll) (217 mg; 0,309 mmol) foi adicionado e a misturade reação foi aquecida para 80°C durante 2,25 horas sob atmosfera de ni-trogênio. A mistura de reação foi deixada esfriar para a temperatura ambien-te e depois filtrada através da um tampão de celita. O bolo do filtro foi lavadocom metanol e acetato de etila e os solventes combinados do filtrado foramremovidos in vácuo e o resíduo dividido entre acetato de etila (100 ml) e so-lução de cloreto de sódio sat. (aq) (100 ml). A fase orgânica foi secada porNa2SO4 depois filtrada e os solventes do filtrado evaporados in vácuo. Oproduto bruto foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (50 g)eluindo com um gradiente de solvente de 0 a 10 % acetato de etila em hexa-no para proporcionar o produto como um óleo amarelo, (2,01 g).LC/MS: TR = 3,06 min; m/z = 400 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 3

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 27</formula>À uma solução de 4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (etapa 2) (100 mg, 0,25mmol) em CH2CI2 (3 ml) a 0 0C foi adicionado por gotejamento uma soluçãode N-Bromossuccinimida em CH2CI2 (45 mg, 0,25 mmol). Após 5 minutos areação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente. A solução foi eva-porada in vácuo e o resíduo foi dividido entre EtOAc (2 χ 20 ml) e solução detiossulfato de sódio aquoso sat. (20 ml). Os orgânicos combinados forampassados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O crudefoi aplicado a uma coluna de SiO2 (20 g) e eluído com Hexano - 5 % EtO-Ac/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como um óleoincolor, 100 mg, 84 %.

LC/MS: TR = 5,92 min; m/z = 480, 478 [M + H]+. Tempo de operação total7,5 min.Etapa 4

4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (90 mg, 0,188 mmol), CuCN (67 mg,0,753 mmol), dppf (17 mg, 0,03 mmol), Pd2(dba)3 (7 mg, 0,04 mmol) e 1,4-dioxano (1,5 ml) foram combinados e depois aquecidos a 100 0C durante anoite. A reação não tinha se esgotado até a conclusão de modo que outrosequivalentes de CuCN, dppf e Pd2(dba)3 foram adicionados e a reação a-quecida durante mais 2 h. A mistura de reação foi deixada esfriar para atemperatura ambiente, e dividida entre EtOAc (2 χ 20 ml) e solução saturadade NaHCO3 (20 ml). Os orgânicos combinados foram passados através dauma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo para fornecer um crude sólido(100 mg). O produto crude foi purificado por cromatografia instantânea emSiO2 (20 g) eluindo com Hexano em 10 % EtOAc/Hexano (gradiente) para ocomposto do título, 10 mg, 13 %.

LC/MS: TR = 2,94 min; = m/z = 425 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 5

4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

À uma solução de 4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetil-silanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (10 mg, 0,024mmol) em THF (0,4 ml), foram adicionados seqüencialmente, etilenodiamina(0,005 ml, 0,071 mmol) e TBAF (1M em THF, 0,15 ml, 0,142 mmol). A mistu-ra de reação foi aquecida em 50 0C durante a noite. A reação foi deixadaesfriar para a temperatura ambiente e foi depois dividida entre EtOAc (2x10ml) e água (10 ml). Os orgânicos combinados foram passados através dauma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O produto bruto resultante foipurificado por cromatografia instantânea em SiO2 (5g) eluindo com Hexano-40 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o produto desejado comoum sólido, 5 mg, 72 %.

LC/MS: TR = 2,44 Min; m/z = 295 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (CD3OD): δ 2,26 (s, 3H); 2,43 (s, 3H); 2,65 (s, 3H); 7,19 (d, 1H, J =7,7 Hz); 7,23 (s, 1H); 7,30 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 8,11 (s, 1H) NH não observa-do.

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 2(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7H^irrolo[2I3-d]pinmidina-5-carbonitri

<formula>formula see original document page 30</formula>

Etapa 1

5-Bromo-4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 30</formula>

À uma solução de 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoxi-metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,5 g, 1,516 mmol) (exemplo 1 etapa 2) emDMF (14 ml) a 0 0C foi adicionado por gotejamento uma solução de N-bromossuccinimida (270 mg, 1,516 mmol) em DMF (6 ml). Após 5 minutos areação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente. A solução foi divi-dida entre EtOAc (2 χ 40 ml) e água (40 ml). Os orgânicos combinados fo-ram passados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. Oproduto bruto foi purificado por cromatografia instantânea em S1O2 (50 g)eluindo com Hexano - 5 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar oproduto desejado como um sólido branco, 433 mg, 70 %.

LC/MS: TR = 3,112 min; m/z = 410, 408 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.Etapa 2

Ácido 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 30</formula>À uma solução de n-butil lítio (2,5M em hexanos, 0,24 ml, 0,59mmol) em THF (0,5 ml) a 0 0C foi adicionado lentamente por gotejamentouma solução de 5-Bromo-4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (200 mg, 0,489 mmol) em THF (2 ml). Após 2 mi-nutos, CO2 sólido moído foi adicionado e a mistura foi deixada aquecer paraa temperatura ambiente. Ácido acético foi adicionado depois água (20 ml) ea mistura extraída com EtOAc (2 χ 20 ml). Os orgânicos combinados forampassados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo para pro-porcionar o produto desejado bruto como um sólido branco, 167 mg, 91%.

LC/MS: TR = 2,664 min; m/z = 374 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 3

Amida de ácido 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 31</formula>

À uma solução de ácido 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-

etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (100 mg, 0,268 mmol) emCH2CI2 (1,5 ml) foi adicionado cloreto de oxalila (2M em CH2CI2, 0,17 ml,0,349 mmol) seguido por algumas gotas de DMF. Após 10 min a mistura dereação foi evaporada in vácuo depois redissolvida em CH2CI2 (3 ml). Solu-ção aquosa de amônia (2 ml) foi adicionada e a mistura foi agitada vigoro-samente durante 15 minutos. Água (10 ml), e CH2CI2 (10 ml) foram adicio-nados e as fases resultantes separadas. A fase aquosa foi extraída commais CH2CI2 (15 ml). Os orgânicos combinados foram passados através dauma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O produto bruto foi aplicado auma coluna de SiO2 (20 g) eluindo com CH2CI2 - 5 % MeOH/CH2CI2 (gradi-ente) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo, 77mg, 77 %.

LC/MS: TR = 2,47 min; m/z = 373, 375 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 4

4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

À uma solução de amida de ácido 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (73 mg,0,196 mmol) em CH2CI2 a 0 0C foi adicionado Et3N seguido por TFAA (0,03ml, 0,21 mmol) lentamente por gotejamento. A mistura agitada de reação foideixada aquecer para a temperatura ambiente. Mais CH2CI2 (5 ml) foi depoisadicionada e a fase orgânica foi lavada com solução saturada De NaHCO3(15 ml). A camada orgânica foi passada através da uma "frit" hidrofóbica eevaporada in vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia instan-tânea em SiO2 (20 g) eluindo com Hexano - 20 % EtOAc/Hexano (gradiente)para proporcionar o composto do título como um sólido branco, 60 mg, 86 %.LC/MS: TR = 2,84 min; m/z = 357, 355 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 5

2-metilsulfanil-4-fenil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 32</formula>

Uma mistura de 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoxime-til)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (54 mg, 0,152 mmol), ácido fenil-borônico (24 mg, 0,198 mmol), Pd2CI2(PF3)2 (5 mg, 0,0076 mmol), soluçãoaquosa de NaHCO3 (1M, 0,46 ml, 0,456 mmol) e DMF foi submetida a retira-da de gás por borbulhamento de N2 através da mistura durante 5 min. A rea-ção foi depois aquecida sob uma atmosfera de nitrogênio em 80 0C durante3 h. A mistura foi deixada esfriar e foi depois dividida entre EtOAc (2x15 ml)e salmoura (15 ml). Os orgânicos combinados foram passados através dauma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O produto bruto foi purificadopor cromatografia instantânea em SiO2 (20 g) eluindo com Hexano - 20 %EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o produto desejado como umsólido branco, 50 mg, 83 %.

LC/MS: TR = 2,912 min; m/z = 397 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 6

2-metilsulfanil-4-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 33</formula>

À uma solução de 2-metilsulfanil-4-fenil-7-(2-trimetilsilanil-etoxi-min.metil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (50 mg, 0,126 mmol) em THF(1 ml) foi adicionado etilenodiamina (0,025 ml, 0,378 mmol) seguido por fluo-reto de tetrabutilamônio (1 M solução em THF, 0,76 ml, 0,756 mmol). A mis-tura de reação foi aquecida em 50 0C durante a noite. A reação foi deixadaesfriar para a temperatura ambiente e foi depois dividida entre EtOAc (2x15ml) e água (15 ml). Os orgânicos combinados foram passados através dauma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O produto bruto resultante foipurificado por cromatografia instantânea em SiO2 (20 g) eluindo com 10 %EtOAc/Hexano - 40 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o com-posto do título como um sólido branco, 17 mg, 51 %.LC/MS: TR = 2,313 min; m/z = 267 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,60 (s, 3H); 7,5-7,6 (m, 3H); 7,8-7,9 <m, 2H); 8,50 (s,1H); 13,21, (s,1H).Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.

Exemplo 3

4-(4-ciano-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 34</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 2 e por meio dos métodos do exemplo 2, usando ácido 4-cianofenilborônico na etapa apropriada.

LC/MS: TR = 3,56 min; m/z = 290 [M-H]" (ionização negativa). Tempo de o-peração total 7,5 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,61 (s, 3H); 8,05 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 8,07 (d,1H, J =8,2Hz); 8,56 (s, 1 H);13,32 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.

Exemplo 4

4-(2-metil-4-flúor-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 34</formula>

Etapa 1

4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 35</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 2 e por meio dos métodos do exemplo 2, usando ácido 2-metil-4-fluorofenil borônico e 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila na etapa apropriada (acoplamento cru-zado)

LC/MS: TR = 2,89 min; m/z = 429 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 2

4-(2-metil-4-flúor-fenil)-2-metilsulfanil-7H^irrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 35</formula>

O composto do título foi produzido por meio do método do e-xemplo 1 etapa 5 (desproteção SEM mediada por TBAF). O produto bruto foipurificado por cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo com misturade acetato de etila e hexano para proporcionar um sólido esbranquiçado.LC/MS: TR = 2,40 min; m/z = 299 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ, 2,22 (s, 3H); 2,57 (s, 3H); 7,1 - 7,2 (m, 1H); 7,26 (dd,1H, J = 10,1, 2,2 Hz), 7,46 (dd, 1H, J = 8,6, 6,1 Hz); 8,44 (s, 1H); 13,19(brs,1H).

Exemplo 5

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina<formula>formula see original document page 36</formula>

O composto do título foi preparado mediante o tratamento de 5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (exemplo 1, etapa 3) com fluoreto de tetra butilamôniofluoride usando o método delineado no exemplo 1 etapa 5. A purificação foipor cromatografia instantânea em sílica-gel eluindo com mistura de acetatode etila / hexano.

LC/MS: TR = 4,44 Min; m/z = 350, 348 [M + H]+. Tempo de operação total7,5 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,06 (s, 3H); 2,35 (s, 3H); 2,57 (s, 3H); 7,08 - 7,20 (m,3H), 7,62 (s, 1H); 12,48 (s,1H).

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 6

4-(2,4-dimetil-fenil)-5-metil-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 36</formula>

Etapa 1

4-(2,4-dimetil-fenil)-5-metil-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina<formula>formula see original document page 37</formula>

À uma solução de n-Butil lítio (2,5M; 0,1 Oml; 0,253 mmol) emTHF anídrico (2 ml) esfriada em banho de C02-acetona sob uma atmosferade nitrogênio foi adicionada uma solução de 5-bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (110 mg;0,23 mmol) em THF anídrico (1,4 ml) por gotejamento. Quando a adição es-tava completa, iodeti de metila (72 μΙ_; 1,15 mmol) foi adicionado e a misturade reação agitada durante 5 minutos, o banho de esfriamento foi removido ea mistura de reação deixada aquecer para a temperatura ambiente. A mistu-ra de reação foi dividida entre solução saturada de NH4CI (aq) e acetato deetila. A fase orgânica foi passada através da uma "frit" hidrofóbica e os sol-vents removidos in vácuo para fornecer um óleo que foi purificado por cro-matografia instantânea eluindo de 0 a 10 % gradiente de acetato de etila emhexano proporcionando o produto como um óleo incolor (80 mg; 84 %).LC/MS: TR = 3,08 min; m/z = 414 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 2

4-(2,4-dimetil-fenil)-5-metil-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 37</formula>

O composto do título foi preparado mediante o tratamento de 4-(2,4-dimetil-fenil)-5-metil-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina com fluoreto de tetrabutilamônio usando o métododelineado no exemplo 1 etapa 5. A purificação foi por cromatografia instan-tânea em sílica-gel eluindo com mistura de acetato de etila / hexano; seguidopor trituração com éter dietílico para proporcionar o composto do título comoum sólido incolor.

LC/MS: TR = 2,63 min; m/z = 284 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,68 (s, 3H); 2,05 (s, 3H); 2,35 (s, 3H); 2,52 (s, 3H);7,08 - 7,12 (m, 4H); 11,75 (s, 1H).

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.

Exemplo 7

4-[(3-(2-Dietilamino-etóxi)-fenil]-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 38</formula>

Etapa 1

4-[(3-Hidróxi-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 38</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 2 e por meio dos métodos do exemplo 2, usando ácido 3-hidroxifenil borônico e 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila na etapa apropriada (acoplamento cruzado).

LC/MS TR = 2,746 min; m/z = 413 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.Etapa 2

4-[(3-(2-Dietilamino-etóxi)-fenil]-2-metilsute7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 39</formula>

Carbonato de césio (73 mg; 0,225 mmol) foi adicionado à umasolução de 4-[(3-Hidróxi-fenil]-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (37 mg; 0,09 mmol) em DMF (1,5 ml), hidrobrometo de 2-bromo-N,N-dietiletilamina (26 mg; 0,1 mmol) foi adicionado seguido por uma quanti-dade catalítica de Kl e a suspensão aquecida, em 110 0C1 durante 18 h. Asuspensão resultante foi deixada esfriar e dividida entre acetato de etila eamônia aquosa. As fases foram separadas, despejadas através de uma "frit"hidrofóbica e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica-geleluindo com misturas de diclorometano e metanol (0 a 15 % gradiente deMetanol em diclorometane), para proporcionar o produto como um sólidoamarelo 28 mg; 61 %.

LC/MS: TR = 2,243 min; m/z = 512 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 3

<formula>formula see original document page 39</formula>

O composto do título foi preparado mediante a reação de 4-[(3-(2-Dietilamino-etóxi)-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila com fluoreto de tetrabutilamônio e etile-no diamina em THF1 usando o método delineado no exemplo 1 etapa 5. Apurificação foi por cromatografia instantânea em sílica-gel eluindo com gra-diente 1 % trietilamina em diclorometane a 1 % trietilamina; 15 % metanol;84 % diclorometano para proporcionar o composto do título como um sólidoamarelo claro.

LC/MS: TR = 1,69 Min; m/z = 382 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,99 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,56 - 2,65 (m, 4H), 2,60 (s,3H); 2,86 (t, 2H, J = 5,8 Hz); 4,18 (t, 2H, J = 5,9 Hz); 7,14 (d, 1H, J = 7,9 Hz);10 7,38 - 7,50 (m, 3H); 8,49 (s, 1H); 12,91 (brs; 1H).

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 8

2-Cloro-4-(2,4-dimetil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 40</formula>

Etapa 1

6-Amino-5-(2,2-dietoxietil)-pirimidina-2,4-diol

<formula>formula see original document page 40</formula>

À uma solução de uréia (5,24 g; 87,2 mmols) em etanol anídrico(200 ml), sob uma atmosfera de nitrogênio, foi adicionado éster etílico deácido 2-ciano-4,4-dietóxi butírico [preparado como detalhado em Davoll. J. J.

Chem. Soc., 1960, pp 131-138] (20 g; 87,2 mmols) seguido por etóxido desódio (11,88 g; 172,6 mmols). A mistura de reação foi aquecida em refluxodurante a noite. A reação foi deixada esfriar para a temperatura ambiente edepois água (500 ml) e ácido acético (5 ml) foram adicionados. A solução foiesfriada para aproximadamente 5 °C e um sólido marrom claro se formouque foi coletado por filtração (8,4 g; 40 %).

LC/MS: TR = 1,37 min; m/z = 198 [M -EtOH]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,07 (t, 3H); 2,40 (d, 2H); 3,39 (m, 2H); 3,60 (m, 2H);4,45 (t, 1H); 10,08 (s, 1H); 10,8 (br s, 1H).Etapa 2

7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina-2,4-diol

<formula>formula see original document page 41</formula>

6-Amino-5-(2,2-dietoxietil)-pirimidina-2,4-diol (2,57 g; 10,6 mmols)foi agitado em HCI (0,2 M; 80 ml) em temperatura ambiente durante 1,5 h. Asuspensão foi depois filtrada fornecendo o produto desejado como um sólidomarrom claro (1,28 g; 80 %).

LC/MS: TR = 0,54 min; m/z = 152 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 3

2,4-Dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 41</formula>

Uma solução de 7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina-2,4-diol (1,28 g; 8,5mmols) em dicloreto fenilfosfônico (7 ml) foi aquecida em 165 0C durante 2 h.A mistura de reação quente foi depois despejada lentamente em água gela-da (150 ml) e extraída com acetato de etila (2 χ 100 ml). O extrato orgânicofoi lavado com água (100 ml) seguido por solução de cloreto de sódio sat.(aq) (100 ml). A fase orgânica foi secada por Na2SO4 depois filtrada e ossolventes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bruto foi purificado porcromatografia instantânea em sílica-gel (20 g) eluindo com 75 % acetato deetila em hexano para proporcionar o produto desejado como um sólido ama-relo, (0,45 g; 28 %).LC/MS: TR = 1,98 min; m/z = 188 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 4

2,4-Dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 42</formula>

A uma mistura de hidreto de sódio (115 mg; 2,88 mmols) emDMF (4 ml) a 0°C foi adicionada por gotejamento uma solução de 2,4-Dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,45 g; 2,4 mmols) em DMF anídrico (2ml). Quando a adição estava completa, cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetila(0,55 ml; 3,12 mmols) foi adicionado por gotejamento e a mistura de reaçãofoi agitada em 0°C durante 1,5 hora depois deixada aquecer para a tempe-ratura ambiente. A mistura de reação foi dividida entre água (50 ml) e aceta-to de etila (50 ml). A fase orgânica foi secada por Na2SO4 depois filtrada e ossolventes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bruto foi purificado porcromatografia instantânea em sílica-gel (10g) eluindo com um solvente deacetato de etila a 15 % em hexano para proporcionar o produto como óleoamarelo (0,65 g; 85 %).

LC/MS: TR = 2,84 min; m/z = 320, 318 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 5

5-Bromo-2,4-dicloro-7-(2-trimetlisilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 42</formula>

À uma solução de 2,4-Dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,81 g; 5,7 mmols) em DMF (8 ml) a 0°C foi adicio-nada por gotejamento uma solução de N-Bromossuccinimida em DMF (1,02g; 5,7 mmols). Após 1 h a solução foi dividida entre EtOAc (100 ml) e água(100 ml). O extrato orgânico foi lavado com água (100 ml) seguido por solu-ção de cloreto de sódio sat. (aq) (100 ml). A fase orgânica foi secada porNa2SO4 depois filtrada e os solventes do filtrado evaporados in vácuo forne-cendo um óleo laranja. Trituração em hexano forneceu o produto desejadocomo um sólido amarelo (1,39 g; 61 %).

LC/MS: TR = 2,94 min; m/z = 400,398,396 [M + H]+. Tempo de operação to-tal 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,00 (s, 9H); 0,92 (t, 2H); 3,61 (t, 2H); 5,64 (s, 2H);8,26 (s, 1H).

Etapa 6

Ácido 2,4-dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 43</formula>

À uma solução de n-butil lítio (2,5M em hexanos; 1,18 ml; 2,95mmols) em THF (10 ml) a -78 0C foi adicionada lentamente por gotejamentouma solução de 5-Bromo-2,4-dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (980 mg; 2,46 mmols) em THF (2 ml). Após 5 minutosCO2 foi borbulhado através da mistura e a mistura foi deixada aquecer paraa temperatura ambiente. Ácido acético foi adicionado depois água (50 ml) ea mistura extraída com EtOAc (2 χ 50 ml). Os orgânicos combinados foramsecados por Na2SO4 depois filtrados e os solventes do filtrado evaporados invácuo deixando ficar um sólido verde. Trituração em hexano proporcionou oproduto desejado como um sólido verde claro (431 mg, 48%).LC/MS: TR = 2,60 min; m/z = 364/362 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 mins

Etapa 7

Amida de ácido 2,4-dicloro-7-(2-trimetlisilanil-etoximetil_7H-pirrolo[2,3-d] pi-rimidina-5-carboxílicoÀ uma solução de ácido 2,4-dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (320 mg; 0,89 mmol) em CH2CI2 (10ml) foi adicionado cloreto de oxalila (2M em CH2CI2, 0,58 ml; 1,16 mmol) se-guido por algumas gotas de DMF. Após 20 min a mistura de reação foi eva-porada in vácuo depois redissolvida em CH2CI2 (10 ml). Solução aquosa deamônia (6 ml) foi adicionada e a mistura foi agitada vigorosamente durante 3horas. Água (50 ml), e CH2CI2 (50 ml) foram adicionados e as fases resultan-tes separadas. A fase aquosa foi extraída com mais CH2CI2 (50 ml). Os or-gânicos combinados foram secados por Na2SO4 depois filtrados e os solven-tes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bruto foi aplicado a uma colu-na de SiO2 (20 g) eluindo com 2 % MeOH/CH2CI2 para proporcionar o com-posto do título como um sólido branco (0,146 g; 46 %).LC/MS: TR = 2,42 min; m/z = 363, 361 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,00 (s, 9H); 0,92 (t, 2H); 3,62 (t, 2H); 5,67 (s, 2H);7,49 (br s, 1H); 7,88 (br s, 1H); 8,29 (s, 1H).

Etapa 8

2,4-Dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 44</formula>

À uma solução de amida de ácido 2,4-dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (146 mg; 0,405 mmol) emCH2CI2 (10 ml) a 0 0C foi adicionado Et3N (0,12 ml; 0,87 mmol) seguido porTFAA (0,06 ml; 0,43 mmol) lentamente por gotejamento. A mistura de reaçãoagitada foi deixada aquecer para a temperatura ambiente. Mais CH2CI2 (10ml) foi depois adicionado e a fase orgânica foi lavada com solução saturadade NaHCO3 (20 ml). A camada orgânica foi secada por Na2SO4 depois filtra-da e os solventes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bruto foi purifi-cado por cromatografia instantânea em SiO2 (10 g) eluindo com 10% EtO-Ac/Hexano para proporcionar o composto do título como um sólido branco(92 mg; 66 %).

LC/MS: TR = 2,78 min; m/z = 345, 343 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,00 (s, 9H); 0,99 (t, 2H); 3,62 (t, 2H); 5,69 (s, 2H);8,96 (s, 1H).

Etapa 9

2-Cloro-4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 45</formula>

pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (75 mg; 0,22 mmol), ácido 2,4-dimetilfenilborônico (49 mg; 0,33 mmol), Pd(dppf)CI2 (10 mg; 0,012 mmol),K2CO3 (90 mg; 0,65 mmol) e THF/ H2O (10:1; 2 ml) foi submetida a retiradade gás por borbulhamento de N2 através da mistura durante 5 min. A reaçãofoi depois submetida a microondas em 120 0C durante 20 minutos. A misturafoi deixada esfriar e foi depois dividida entre EtOAc (2 χ 20 ml) e salmoura(20 ml). Os orgânicos combinados foram secados por Na2SO4 depois filtra-dos e os solventes do filtrado evaporados in vácuo. O produto bruto foi puri-ficado por cromatografia instantânea em SiO2 (10 g) eluindo com 10 % EtO-Ac/Hexano para proporcionar o produto desejado como um sólido branco (40mg; 44 %).

LC/MS: TR = 2,91 min; m/z = 415, 413 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,00 (s, 9H); 0,94 (t, 2H); 2,27 (s, 3H); 2,45 (s, 3H);

Uma mistura de 2,4-dicloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-3,68 (t, 2H); 5,73 (s, 2H); 7,25 (d, 1H); 7,30 (s, 1H), 7,40 (d, 1H); 8,89 (s,1H).

2-cloro-4-(2,4-dimetil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 46</formula>

À uma solução de 2-Cloro-4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (40 mg; 0,097 mmol) emTHF (2 ml) foi adicionada etilenodiamina (0,019 ml; 0,29 mmol) seguido porfluoreto de tetrabutilamônio (1 M solução em THF; 0,58 ml; 0,58 mmol). Amistura de reação foi aquecida em 50 0C durante a noite. A reação foi deixa-da esfriar para a temperatura ambiente e foi depois dividida entre EtOAc (2 χ15 ml) e água (15 ml). Os orgânicos combinados foram secados por Na2SO4depois filtrados e os solventes do filtrado evaporados in vácuo. O produtobruto resultante foi purificado por HPLC prep, (pH = 4), para proporcionar oproduto desejado como um sólido branco (2,3 mg; 8,4 %).

LC/MS: TR = 2,36 min; m/z = 283 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 Acetona): δ 2,32 (s, 3H); 2,42 (s, 3H); 7,21 (d, 1H); 7,24 (s, 1H),7,39 (d, 1H); 8,46 (s, 1H), NH não observado.

Exemplo 9

4-(2,4-dimetil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrilaEtapa 1

6-Amino-5-(2,2-dietóxi-etil)-pirimidin-4-ol

<formula>formula see original document page 47</formula>

6-amino-5-(2,2-dietóxi-etil)-2-mercapto-pirimidin-4-ol pirimidina3,0 g (11,6 mmols) [preparada como detalhado em Davoll. J., J. Chem. Soe.1960, pp131-138] foi dissolvida em uma mistura de água (150 ml e soluçãoaquosa de amônia (9 ml) e aquecida para 90°C. Alíquotas (2-3 ml) de umasuspensão de níquel Raney foram adicionadas à mistura de reação até quea análise de TLC e LC/MS mostrou que a reação estava completa. A misturade reação foi deixada esfriar para a temperatura ambiente e filtrada atravésde um tampão de celita. O bolo do filtro foi lavado com água (2 χ 25 ml) e ofiltrado aquoso combinado foi secado por congelamento para proporcionar ocomposto do título como um pó esbranquiçado 2,23 g (85 %).

LC/MS: TR = 1,37 min; m/z = 182 [M-EtOH+H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,07 (brt, 6H); 3,40 (m, 2H); 3,59 (m, 2H); 4,56 (brt,1H); 6,07 (brs, 2H); 7,70 (s, 1H); 11,43 (brs, 1H).

Etapa 2

7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-ol

<formula>formula see original document page 47</formula>

12,8 M ácido clorídrico (1,2 ml) foi adicionado a uma suspensãode 6-Amino-5-(2,2-dietóxi-etil)-pirimidin-4-ol (2,23g 9,8 mmols) em água (60ml), foi agitada em temperatura ambiente durante 2,5 h. A mistura foi depoisesfriada com um banho de água gelada e depois filtrada. Os sólidos filtradosforam secados in vácuo para proporcionar o composto do título como umsólido amarelo 1,2 g (90 %).LC/MS: TR = 0,572 min; m/z = 158 [M+Na]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 6,40 (dd, 1H); 7,03 (dd, 1H); 7,82 (s, 1H); 11,74 (brs,1H); 11,83 (brs, 1H).

Etapa 3

4-Cloro-7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 48</formula>

Oxicloreto de fósforo foi adicionado a 7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-ol (1,15 g, 8,5 mmols) e a reação foi aquecida sob atmosfera de N2 em 100°C durante 2,5 horas. A suspensão inicial transforma-se em suspensão es-cura homogênea que foi depois deixada esfriar para a temperatura ambien-te. Excesso de oxicloreto de fósforo foi removido in vácuo e o resíduo foi es-friado em banho de gelo e gelo moído foi adicionado com agitação. A mistu-ra foi diluída com água (20 ml) e extraída com acetato de etila (2 χ 30 ml).

Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução sat de NaCI(aq), depois secados por Na2SO4 anídrico. A mistura foi filtrada e os solven-tes do filtrado removidos in vácuo para proporcionar um sólido branco (0,811g; (62 %).

LC/MS: TR = 1,619 min; m/z = 154 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 6,60 (dd, 1H, J = 3,5, 1,8Hz); 7,69 (dd, 1H, J = 3,6,2,3 Hz); 8,59 (s,1H), 12,57 (brs 1H).

Etapa 4

4-Cloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 48</formula>

O composto do título foi preparado a partir de 4-Cloro-7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,805 g; 5,24 mmols) usando o método do exemplo1 etapa 1. O produto foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (25 g) eluindo com 2 a 25 % gradiente de acetato de etila em hexano.Isto proporcionou o composto do título como óleo incolor, 1,31 g (87 %).LC/MS: TR = 0,572 min; m/z = 384 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ -0,66 (s, 9H); 0,90 (t, 2H); 3,51 (t, 2H); 5,64 (s, 2H);6,66 (d, 1H); 7,38 (d, 1H); 8,66 (s, 1H).

Etapa 5

4-(2,4-Dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin

<formula>formula see original document page 49</formula>

Este composto foi preparado por meio do método do exemplo 1etapa 2. Assim, 4-Cloro-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,29g, 4,54 mmols) foi reagida com ácido 2,4-dimetilfenilborônico (0,818 g; 1,2 equiv), diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) ebicarbonato de sódio em mistura de DMF/H20, e o produto bruto purificadopor cromatografia instantânea em sílica-gel (25 g) eluindo com gradiente de3-30 % acetato de etila em hexano para proporcionar o composto do títulocomo um óleo incolor, (1,29g; 80%).

LC/MS: TR = 2,87 min; m/z = 354 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 6

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinaUma solução de N-bromossuccinimida (0,639 g, 3,59 mmols) emDMF (10 ml) foi adicionada a uma solução agitada esfriada com banho degelo de 4-(2,4-Dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,27g, 3,59 mmols) em DMF (20 ml). A mistura de reação foidepois agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. DMF foi removi-do in vácuo e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (150 ml) e água(150 ml). As fases foram separadas e a fase aquosa foi re-extraída com ace-tato de etila (50 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com so-lução sat de NaCI (aq) e secadas por Na2SO4. A mistura foi filtrada e o sol-vente do filtrado removido para proporcionar um óleo marrom que foi purifi-cado por cromatografia instantânea em sílica-gel (50 g) eluindo com gradien-te de 0 a 30 % acetato de etila em hexano para proporcionar o composto dotítulo como um óleo incolor. (0,772 g; 49 %).

LC/MS: TR = 2,940 min; m/z = 434,432 [M + H]+ (padrão de divisão de isóto-po de bromo observado). Tempo de operação total 3,75 min.Etapa 7

Ácido 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-

d]pirimidina-5-carboxílico.

Este composto foi produzido por meio do método do exemplo 2etapa 2. Assim, 0,77 g, 1,78 mmol de 5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina foi reagido com n-butil lítioe dióxido de carbono para proporcionar um produto bruto que foi purificadopor cromatografia instantânea em sílica-gel (50 g) eluindo com gradiente de25-100 % acetato de etila em hexano para proporcionar o composto do títulocomo um sólido incolor, (0,307 g; 43 %).

LC/MS: TR = 2,584 min; m/z = 398 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 8

Amida de ácido 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 51</formula>

Este composto foi produzido por meio do método do exemplo 2etapa 3. Desta maneira, 0,304 g, 0,76 mmol de ácido 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico foi reagi-do com cloreto de oxalila e amônia para proporcionar um produto bruto (óleomarrom) que foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (25g)eluindo com gradiente de 50-100% acetato de etila em hexano para propor-cionar o composto do título como um sólido incolor, (0,135 g; 45%).LC/MS: TR = 2,446 min; m/z = 397 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 9

4-(2,4-Dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 51</formula>

Este composto foi produzido por meio do método do exemplo 2etapa 4. Desta maneira, 0,133 g, 0,34 mmol de amida de ácido 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimicarboxílico foi reagida com anidrido trifluoroacético para proporcionar umproduto bruto (óleo marrom) que foi purificado por cromatografia instantâneaem sílica-gel (25g) eluindo com gradiente de 20-70% acetato de etila em he-xano para proporcionar o composto do título como um sólido incolor, (0,075g; 59 %).

LC/MS: TR = 2,789 min; m/z = 379 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 10

4-(2,4-Dimetil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 52</formula>

Este composto foi produzido por meio do método do exemplo 2etapa 6. Desta maneira, 0,075 g, 0,20 mmol de 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagidocom TBAF para proporcionar um produto bruto (óleo marrom) que foi purifi-cado por cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g) eluindo com 3:2 ace-tato de etila : hexano para proporcionar o composto do título como um sólidoincolor, (0,075 g; 59 %).

LC/MS: TR = 2,034 min; m/z = 249 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,18 (s, 3H); 2,37 (s, 3H); 7,14 (d, 1H, J = 7,5 Hz);7,20 (s, 1H); 7,30 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 8,52 (s, 1H); 8,97 (s, 1H); 13,34 (s, 1H).

Exemplo 10

4-(2,4-Dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-5-trifluorometil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina<formula>formula see original document page 53</formula>

Etapa l

4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-5-trifluorometil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (exemplo 1, etapa 3) (100 mg, 0,209mmol), Cul (80 mg, 0,418 mmol), trifluoroacetato de sódio (57 mg, 0,418mmol), tolueno (0,5 ml) e DMF (1 ml) foram combinados sob N2 e aquecidospara 170 0C durante a noite. A mistura de reação foi deixada esfriar para aTR e foi depois dividida entre EtOAc (2 χ 15 ml) e água (15 ml). Os orgâni-cos foram passados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo.O crude resultante foi purificado por cromatografia instantânea em SiO2 (20g) eluindo com Hexano-6 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar oproduto protegido desejado juntamente com o produto não halogenado.

Etapa 2

15 4-(2,4-Dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-5-trifluorometil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinaO produto da etapa 1 foi desprotegido usando o método do e-xemplo 1 etapa 5. O produto final foi purificado por HPLC (executada em pH4) para proporcionar o composto do título como um sólido esbranquiçado, 7mg, 10 %.

LC/MS: TR = 2,68 Min; m/z = 349 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,92 (s, 3H); 2,34 (s, 3H); 2,55 (s, 3H); 7,04-7,15 (m,3H); 8,08 (s, 1H); NH não observado.

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 11

5-Ciclopropil-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina

<formula>formula see original document page 54</formula>

5-Bromo-4-(2,4-dimetil-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (exemplo 1, etapa 3) (100 mg, 0,209mmol), Pd(OAc)2 (3 mg, 0,01 mmol), P(Cy)3 (57 mg, 0,418 mmol), K3PO4(170 mg, 0,80 mmol), ácido ciclopropilborônico (25 mg, 0,30 mmol) tolueno(1,0 ml) e água (0,05 ml) foram combinados sob N2 e a mistura submetida aretirada de gás por borbulhamento de N2 através dela durante 5 min. A rea-ção foi depois aquecida em 100 0C durante 2 h. A mistura de reação foi dei-xada esfriar para a TR e foi depois dividida entre EtOAc (2 χ 15 ml) e água(15 ml). Os orgânicos foram secados (Na2SO4) e passados através da uma"frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo. O produto bruto resultante foi purifi-cado por cromatografia instantânea em SiO2 (10 g) eluindo com Hexano-5 %EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o produto protegido desejado eum pouco não halogenado (17 mg). Esta mistura de composto foi desprote-gida usando o método delineado no exemplo 1 etapa 5). O produto bruto foipurificado por HPLC (executado em pH 4) para proporcionar o composto dotítulo como um sólido esbranquiçado, 4 mg, 6 %.

LC/MS: TR = 2,70 min; m/z = 310 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,36 - 0,40 (m, 4H); 1,06 m, 1H); 2,10 (s, 3H); 2,34 (s,3H); 2,52 (s, 3H); 7,00 (m, 1H); 7,09 (d, 1H,J = 7,5 Hz); 7,14 (s, 1H); 7,20 (d,1H, J = 7,5 Hz); 11,7 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade 'C' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 12

<formula>formula see original document page 55</formula>

O composto do título produzido por meio do caminho delineadono esquema 2 e esquema 4.Etapa 1

4-(4-Flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 55</formula>

À uma solução de 4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (189 mg,0,44 mmol) (exemplo 4 etapa 1) em CH2CI2 (8,5 ml) a 0 0C foi adicionada porgotejamento uma solução de mCPBA (396 mg, 1,76 mmol) em CH2CI2 (8,5ml). Após a adição estar completa a reação foi deixada aquecer para a TR.Após 1 h a mistura de reação foi lavada com 5 % solução de Na2S2O3 (20ml). A camada aquosa foi extraída com mais. CH2CI2 (20 ml). Os orgânicoscombinados foram depois lavados com solução saturada de NaHCO3 (40ml). Os orgânicos foram depois passados através de um "frit" hidrofóbica eevaporados in vácuo. O produto bruto resultante foi purificado por cromato-grafia instantânea em SiO2 (25 g) eluindo com 20 % EtOAc/Hexano-45 %EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como umóleo incolor, 187 mg, 92 %.

LC/MS: TR = 2,65 Min; m/z = 461 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 2

A uma mistura de KOtBu (20 mg, 0,17 mmol) em THF (1 ml) a 0°C sob N2, MeOH (0,007 ml, 0,17 mmol) foi adicionado seguido por uma so-lução de 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (40 mg, 0,087 mmol) emTHF (0,5 ml) por gotejamento. Após 30 min. a mistura de reação foi divididaentre EtOAc (2 χ 10 ml) e solução saturada De NaHCO3 (15 ml). Os orgâni-cos foram depois passados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporados invácuo para fornecer o produto protegido crude. Este foi desprotegido comfluoreto de tetrabutilamônio usando o método delineado no exemplo 1 etapa5. A purificação foi por cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g) eluindocom 10 % EtOAc/Hexano-50 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionaro composto do título como um sólido branco, 12 mg, 48 %.

LC/MS: TR = 2,16 Min; m/z = 283 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.1H RMN (d6 DMSO): δ 2,23 (s, 3H); 3,96 (s, 3H); 7,17 (m, 1H); 7,26 (dd, 1H,J = 10,4 e 2,3 Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,4, 6,0 Hz); 8,37 (s, 1H); 13,06 (brs,1H).

Exemplo 13

4-(4-Flúor-2-metil-fenil)-2-(2-pirrolidin-1 -il-etóxi)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 57</formula>

O composto do título foi preparado usando o caminho delineadono esquema 2 e esquema 4 usando os métodos delineados no exemplo 12.Desta maneira, 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com 2-pirrolidina-1 -il-etanol e o produto resultante desprotegido com TBAF.LC/MS: TR = 1,63 Min; m/z = 366 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,68 - 1,74 (brm, 4H); 2,23 (s, 3H); 2,60 - 2,67 (brm,4H); 2,93 (brt, 2H); 4,46 (t, 2H, J = 5,8 Hz); 7,17 (m, 1H); 7,23 (dd, "IH1 J =10,2 e 2,5 Hz); 7,44 (dd, IH1J = 8,6, 6,0 Hz); 8,37 (s, 1H); 12,7 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade 'C' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.

Exemplo 14

4-(4-Flúor-2-metil-fenil)-2-(2-morfolin-4-il-etóxi)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 58</formula>

O composto do título foi preparado usando o caminho delineadono esquema 2 e esquema 4 usando os métodos delineados no exemplo 12.Desta maneira, 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com 2-morfolin-4-il-etanol e o produto resultante desprotegido com TBAF.

LC/MS: TR = 1,62 Min; m/z = 382 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,23 (s, 3H); 2,41 - 2,49 (m, 4H); 2,72 (t, 2H, J = 5,8Hz); 3,55 (t, 4H, J = 4,5 Hz); 3,60 (t, 2H, J = 5,5 Hz); 4,52 (t, 2H, J = 5,8 Hz);7,17 (m, 1H); 7,23 (dd, IH1J = 10,1 e 2,6 Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,3, 6,1 Hz);8,36 (s, 1H); 13,0 (brs, 1H).

Exemplo 15

4-(4-Flúor-2-metil-fenil)-2-[2-(2-oxo-pirrolidin-1 -il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 58</formula>

O composto do título foi preparado usando o caminho delineadono esquema 2 e esquema 4 usando os métodos delineados no exemplo 12.Desta maneira, 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com 1-(2-hidróxi-etil-pirrolidin-2-ona e o produto resultante desprotegido com TBAF.LC/MS: TR = 2,023 Min; m/z = 380 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,89 (m, 2H); 2,19 (t, 2H, J = 8,4 Hz); 2,23 (s, 3H);3,45 (t, 2H, J = 6,8 Hz); 3,60 (t, 2H, J = 5,5 Hz); 4,45 (t, 2H, J = 5,5 Hz); 7,17(m, 1H); 7,26 (dd, 1H, J = 10,2 e 2,6 Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,6, 6,1 Hz); 8,385 (s, 1H); 13,0 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 16

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(4-metil-piperazin-1-il)-7H^irrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 59</formula>

Etapa 1

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(4-metil-piperazin-1-il)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-

4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 12 etapa 1) (50mg, 0,11 mmol), 1-metilpiperazina (0,024 ml, 0,22 mmol), e DMF anídrico(0,5 ml) foram combinados sob N2 e aquecidos em 100 0C durante 3 h. Areação foi deixada esfriar para a TR e foi dividida entre EtOAc (2 χ 10 ml) esolução saturada De NaHCO3 (10 ml). Os orgânicos foram depois passadosatravés da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo para fornecer o pro-duto protegido bruto. Este foi purificado por cromatografia instantânea emsílica-gel (10 g) eluindo com 10 % EtC>Ac/Hexano-50 % EtOAc/Hexano (gra-diente) para proporcionar o composto do título como óleo incolor, 29 mg, 55 %.

LC/MS: TR = 2,14 Min; m/z = 481 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 2

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(4-metil-piperazin-1-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 60</formula>

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetiO^H-pirrolo^.S-dlpirimidina-S-carbonitrila foi despro-tegido com fluoreto de tetrabutilamônio usando o método delineado no e-xemplo 1 etapa 5. A purificação foi por cromatografia instantânea em sílica-gel (10g) eluindo com CH2CI2-6 % MeOH/CH2CI2 (gradiente) para proporcio-nar o composto do título como um sólido amarelo, 4 mg, 18 %.

LC/MS: TR = 1,67 Min; m/z = 351 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,93 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,53 (q, 4H, J = 7,1 Hz); 2,75(brt, 2H, J = 8,0 Hz); 3,28 (m, 2H); 7,17 (m, 1H); 7,25 (dd, 1H, J = 10,2 e 2,6Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8). 13,0 brs 1H.

Exemplo 17

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metilamino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 61</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 16, e o caminho delineado no esquema 2 e esquema 4.Desta maneira, 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com metilami-na e o produto resultante desprotegido com TBAF.

LC/MS: TR = 2,08 Min; m/z = 282 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): 6 2,21 (s, 3H); 2,83 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 7,11 (m, 1H);7,20 (dd, 1H, J = 10,1 e 2,5 Hz); 7,12-7,21 (brs, 1H); 7,36 (dd, 1H, J = 8,3 e6,0 Hz); 8,02 (s, 1H); 12,44 (brs, 1H).

Exemplo 18

EtMgBr (0,04 ml, 0,11 mmol, 3M solução em Et2O) foi adiciona-

<formula>formula see original document page 61</formula>

EtMgBr (0,04 ml,0,11 mmol, 3M solucao em Et2O) foi adiciona-do à uma solução de 4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 12etapa 1) (50 mg, 0,11 mmol) em 0 0C. Após 20 min. a reação foi dividida en-tre EtOAc (2 χ 15 ml) e água (15 ml). Os orgânicos foram depois passadosatravés da uma "frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo para fornecer o pro-duto protegido bruto. Este produto foi desprotegido com fluoreto de tetrabuti-lamônio usando o método delineado no exemplo 1 etapa 5. A purificação foipor cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g) eluindo com CH2CI2-6 %MeOH/CH2CI2 (gradiente) para proporcionar o composto do título como umsólido bege, 24 mg, 79 %.

LC/MS: TR = 2,20 Min; m/z = 281 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,33 (t, 3H, J = 7,6 Hz); 2,21 (s, 3H); 2,99 (q, 2H, J =7,6 Hz); 7,17 (m, 1H); 7,25 (dd, 1H, J = 10,1 e 2,5 Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,5e 6,0 Hz); 8,50 (s, 1H); 13,18 (brs, 1H).

Exemplo 19

2-(2-Dietilamino-etilsulfanil)-4-(4-flúor-2-metil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 62</formula>

Etapa 1

2-(2-Dietilamino-etilsulfanil)-4-(4-flúor-2-metil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 62</formula>

4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 12 etapa 1) (50mg, 0,11 mmol), cloridreto de 2-dietilaminoetanotiol (37 mg, 0,22 mmol),Et3N (0,03 ml, 0,22 mmol) e DMF anídrico (2,0 ml) foram combinados sob N2e aquecidos em 100 0C durante 40 min. A reação foi deixada esfriar para aTR e foi dividida entre EtOAc (2 χ 15 ml) e NH3 (aq) solução (15 ml). Os or-gânicos foram depois passados através da uma "frit" hidrofóbica e evapora-dos in vácuo para fornecer o produto protegido bruto. Este foi purificado porcromatografia instantânea em sílica-gel (10g) eluindo com CH2CI2-6% Me-OH/CH2CI2 (gradiente) para proporcionar o composto do título como um óleoamarelo, 40 mg, 71 %.

LC/MS: TR = 2,17 Min; m/z = 514 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 2

<formula>formula see original document page 63</formula>

2-(2-Dietilamino-etilsulfanil)-4-(4-flúor-2-metil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi despro-tegida com fluoreto de tetrabutilamônio usando o método delineado no e-xemplo 1 etapa 5. A purificação foi por cromatografia instantânea em sílica-gel (10g) eluindo com CH2CI2-13% MeOH/CH2CI2 (gradiente) para propor-cionar o composto do título como um sólido branco, 20 mg, 67%.LC/MS: TR = 1,73 Min; m/z = 384 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,93 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,53 (q, 4H, J = 7,1 Hz); 2,75(brt, 2H, J = 8,0 Hz); 3,28 (m, 2H); 7,17 (m, 1H); 7,25 (dd, 1H, J = 10,2 e 2,6Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,3 e 6,1 Hz); 8,43 (s, 1H); 12,91 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 204-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-hidróxi-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 18, e o caminho delineado no esquema 2 e esquema 4.

Desta maneira, 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com 2-mercatoetanol e o produto resultante desprotegido com TBAF.

LC/MS: TR = 2,073 Min; m/z = 329 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,22 (s, 3H); 3,27 (t, 2H, J = 6,6 Hz); 3,68 (m, 2H);4,99 (t, 1H, J = 5,3 Hz);7,18 (m, 1H); 7,26 (dd, 1H, J = 10,1 e 2,1 Hz); 7,44(dd, 1H, J = 8,3 e 6,1 Hz); 8,43 (s, 1H); 13,17 (brs, 1H).

Exemplo 21

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-morfolin-4-il-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 64</formula>

Etapa 1

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-morfolin-4-il-etilsulfanil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 65</formula>

À uma solução de 4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-hidróxi-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (precursor para o exem-plo 20) (100 mg, 0,22 mmol) em CH2Cl2 (10 ml) Dess-Martin periodinano(111 mg, 0,26 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 5 h em TR.

A mistura foi depois evaporada in vácuo para fornecer o aldeído protegidobruto. Este foi parcialmente purificado por cromatografia instantânea em síli-ca-gel (20 g) eluindo com Hexano-40% EtOAc/Hexano (gradiente) para pro-porcionar o aldeído como óleo incolor, 73 mg. Este foi combinado com mor-folino (0,03 ml, 0,308 mmol), AcOH (0,04 ml, 0,77 mmol), peneiras molecula-res em pó 3A, MeOH (3 ml) e Na(OAc)3BH3 (65 mg, 0,31 mmol) e agitadoem TR sob N2 durante 2 h. A mistura foi depois filtrada e o filtrado evaporadoin vácuo. Este foi depois dividido entre CH2CI2 (2 χ 10 ml) e solução saturadaDe NaHCO3 (10 ml). Os orgânicos foram depois passados através da uma"frit" hidrofóbica e evaporados in vácuo para fornecer o produto protegidobruto. Este foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g)eluindo com 20 % EtOAc/Hexano-70 % EtOAc/Hexano (gradiente) para pro-porcionar o composto do título como óleo incolor, 47 mg, 41%.

LC/MS: TR = 2,25 Min; m/z = 528 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 2

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-morfolin-4-il-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 66</formula>

4-(4-flúor-2-metil-fenil)-2-(2-morfolin-4-il-etilsulfanil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H^irrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi despro-tegida com fluoreto de tetrabutilamônio usando o método delineado no e-xemplo 1 etapa 5. A purificação foi por cromatografia instantânea em sílica-gel (10 g) eluindo com CH2Cl2-5% MeOH/CH2CI2 (gradiente) para proporcio-nar o composto do título como um sólido branco, 19 mg, 54%.LC/MS: TR = 1,68 Min; m/z = 398 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,22 (s, 3H); 2,43 (brm, 4H); 2,65 (t, 2H, J = 7,5 Hz);3,30 (t, 2H, J = 7,5 Hz);3,55 (m, 4H); 7,18 (m, 1H); 7,26 (dd, 1H, J = 10,1 e2,5 Hz); 7,44 (dd, 1H, J = 8,7 e 6,0 Hz); 8,44 (s, 1H); 13,17 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 22

<formula>formula see original document page 66</formula>

4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

Etapa 1

1-Benzilóxi-2,4-dicloro-5-nitro-benzeno

<formula>formula see original document page 66</formula>Carbonato de potássio (12g, 87 mmols) foi adicionado à umasolução de 2,4-dicloro- 5-nitrofenol (Lancaster Synthesis, Morecambe, Lan-cashire, UK) (15,6 g, 75 mmols) em acetona. Brometo de benzila (9 ml, 76mmols) foi adicionado e a suspensão aquecida em 75°C (temperatura dobanho de óleo) durante ~3 h. A suspensão resultante foi deixada esfriar eágua (500 ml) foi adicionada, a mistura foi extraída com diclorometano (2 χ200 ml). Os extratos combinados foram lavados com hidróxido de sódio a-quoso (150 ml, 2M), água (2 χ 200 ml) e solução aquosa saturada de cloretode sódio (150 ml). A solução foi secada por sulfato de sódio anídrico e con-centrada em um sólido amarelo claro (21,5 g, 96 %)Rf 0,73 CH2CI2 (SiO2)

Tempo de retenção LC 2,915 min [M + H]+ nenhuma ionização (tempo deoperação 3,75 min)

Etapa 2

5-Benzilóxi-2,4-dicloro-fenilamina

<formula>formula see original document page 67</formula>

Pó de ferro (21 g, 376 mmols) foi adicionado a uma suspensãode 1-Benzilóxi-2,4-dicloro-5-nitro-benzeno (21,5 g, 72 mmols) em ácido acé-tico (300 ml) / água (150 ml) e a mistura foi aquecida em 85°C (temperaturado banho de óleo) durante -90 min. A suspensão resultante foi filtrada. Ofiltrado foi deixado esfriar, água (750 ml) foi adicionada e a mistura extraídacom diclorometano (3 χ 150 ml). Os extratos combinados foram lavados comhidróxido de sódio aquoso (300 ml, 2M), água (2 χ 500 ml) e solução aquosasaturada de cloreto de sódio (200 ml). A solução foi secada por sulfato desódio anídrico filtrada e os solventes do filtrado removidos in vácuo paraproporcionar o produto como um sólido marrom claro (18,6 g, 96 %) Rf 0,57CH2CI2 (SiO2).

tempo de retenção LC 2,792min [M + H]+ 270 /268 (tempo de operação3,75 min)Etapa 3

1-Benzilóxi-2,4-dicloro-5-iodo-benzeno

Ácido clorídrico (60 ml, 6M) foi adicionado a uma solução de 5-Benzilóxi-2,4-dicloro-fenilamina (16,2g, 60 mmols) em ácido acético (240 ml)5 e a suspensão resultante esfriada (gelo/água/sal). Nitrito de sódio aquoso(4,8 g, 69,5 mmols em 40 ml) foi adicionado lentamente (mantendo a tempe-ratura < 5 0C). Na adição completa a solução resultante foi agitada durante-30 min. A solução resultante foi despejada em uma solução de iodeto depotássio (20 g, 120 mmols) e iodo (4 g, 16 mmols) em água (200 ml), e a10 mistura agitada durante -90 min. Água (800 ml) foi adicionada e a misturaextraída com diclorometano (3 χ 250 ml). Os extratos combinados foram la-vados com solução aquosa de tiossulfato de sódio (2 χ 150 ml, 10 %), hidró-xido de sódio aquoso (250 ml, 2M), água (2 χ 250 ml) e solução aquosa sa-turada de cloreto de sódio (200 ml). A solução foi secada por sulfato de só-15 dio anídrico e concentrada em um óleo marrom claro, solidificado em repou-so. (20,6 g, 90 %). Rf 0,82 CH2CI2 (SiO2)

tempo de retenção LC 3,084 min [M + H]+ Nenhuma ionização (tempo deoperação 3,75 min)Etapa 420 2,4-Dicloro-5-iodo-fenol

Cl Cl

À uma solução de 1 -Benzilóxi-2,4-dicloro-5-iodo-benzeno (3,0 g,7,92 mmols) em CH2CI2 (50 ml) a 0 0C BCI3 (23,8 ml, 23,8 mmols, 1M solu-ção em CH2CI2) foi adicionado por gotejamento. Após a adição estar comple-ta a reação foi deixada aquecer para a TR. A mistura foi depois dividida en-25 tre solução saturada De NH4CI (50 ml) e CH2CI2 (2 χ 50 ml). Os orgânicoscombinados foram passados através da uma "frit" hidrofóbica e evaporadosin vácuo para fornecer um óleo bruto. Este foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica-gel (70 g) eluindo com Hexano-10 % EtOAc/Hexano(gradiente) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo,1,83 g, 80 %.

LC/MS: TR = 2,48 Min; m/z = 289, 287 [M-H]". Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 5

2,5-Dicloro-2-iodo-metóxi-benzeno

<formula>formula see original document page 69</formula>

À uma solução de 2,4-Dicloro-5-iodo-fenol (0,5 g, 1,73 mmols)em DMF (10 ml), K2CO3 (480 mg, 3,46 mmols) e Mel (0,12 ml, 1,90 mmol)foram adicionados seqüencialmente e a mistura resultante agitada sob N2em TR durante a noite. Adicionados outros equivalentes de K2CO3 (480 mg,3,46 mmols), Mel (0,12 ml, 1,90 mmol) e DMF (4 ml) e agitados em TR du-rante a noite. Dividida a mistura de reação entre sol. de NH3 (aq) (30 ml) eEtOAc (2 χ 30 ml). Secada (Na2SO4), os orgânicos combinados e evapora-dos in vácuo para fornecer o produto bruto. Este foi purificado por cromato-grafia instantânea em sílica-gel (50 g) eluindo com Hexano para proporcio-nar o composto do título como um sólido amarelo, 1,83 g, 80 %.

LC/MS: TR = 2,76 min; m/z = no mass. Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 6

4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 69</formula>À uma solução de 2,5-Dicloro-2-iodo-metóxi-benzeno em THF a-78 0C sob N2, triisopropil borato (0,64 ml, 2,75 mmols) foi adicionado segui-do por nBuLi (0,72 ml, 1,79 mmol, 2,5 M em Hexanos) por gotejamento. Areação foi deixada aquecer para a TR e foi depois evaporada in vácuo e di-vidida entre EtOAc (2 χ 50 ml) e sol. dil. de HCI (50 ml). Os orgânicos combi-nados foram secados (Na2SO4) e evaporados in vácuo para fornecer o ácidoborônico bruto como um sólido branco (320 mg). Este foi combinado com 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (390 mg, 1,1 mmol), 1M sol. De NaHCO3 (4,1 ml, 4,1 mmols),PdCI2(PF3)2 (48 mg, 0,07 mmol) e DMF (12 ml). A mistura foi submetida aretirada de gás por borbulhamento de N2 através dela durante 5 min. e foisubseqüentemente aquecida a 80 0C durante 3 h sob N2. A reação foi deixa-da esfriar antes de ser dividida entre EtOAc (3 χ 50 ml) e solução saturadade NaHCO3 (50 ml). Os orgânicos combinados foram secados (Na2SO4) eevaporados in vácuo para fornecer um óleo bruto. Este foi purificado porcromatografia instantânea em sílica-gel (70 g) eluindo com Hexano-20 %EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como umóleo amarelo, 260 mg, 48 %.

LC/MS: TR = 2,96 Min; m/z = 495, 497 [M-H]". Tempo de operação total 3,75min.Etapa 7

O composto do título foi preparado usando o método delineadono exemplo 1 etapa 5.

LC/MS: TR = 2,52 min; m/z = 365, 367 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.1H RMN (d6 DMSO): δ 2,59 (s, 3H); 3,90 (s, 3H); 7,39 (s, 1H); 7,81 (s, 1H);8,48 (s, 1H); 13,23.

Exemplo 23

4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 71</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos nos exemplos 12, 19 e 22, e o caminho delineado no esquema 2 e es-quema 4. Desta maneira, 4-(2,4-dicloro-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 22etapa 6) foi oxidada com mcpba e a sulfona resultante removida com 2-dietilaminoetanotiol. A remoção do grupo de proteção SEM com TBAF pro-porciona o composto do título como um sólido.LC/MS: TR = 1,84 Min; m/z = 450, 452 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,98 (t, 6H, J = 7,0 Hz); 2,61 - 2,76 (m, 4H); 2,86 -2,95 (m, 2H); 3,26 - 3,35 (m, 2H), 3,90 (s, 3H); 7,41 (s, 1H); 7,85 (s, 1H);8,49 (s, 1H); 12,2-12,9 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade 1A' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.

Exemplo 24

4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etóxi)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 72</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 12 e 22, e o caminho delineado no esquema 2 e esquema 4.Desta maneira, 4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 22etapa 6) foi oxidada com mcpba e a sulfona resultante removida com 2-dietilaminoetanol. A remoção do grupo de proteção SEM com TBAF propor-ciona o composto do título como um sólido.

LC/MS: TR = 1,75 Min; m/z = 434, 436 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,97 (t, 6H, J = 7,0 Hz); 2,57 (q, 4H, J = 7,0 Hz); 2,82(t, 2H, J = 6,4 Hz); 3,90 (s, 3H); 4,41 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 7,37 (s, 1H); 7,80 (s,1H); 8,38 (s, 1H).

Exemplo 25

4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-[2-(2-oxo-pirrolidin-1-il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 72</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 22, exemplo 12, e o caminho delineado no esquema 2 eesquema 4. Desta maneira, 4-(2,4-Dicloro-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 22etapa 6) foi oxidada com mcpba e a sulfona resultante removida com 1-(2-hidróxi-etil-pirrolidin-2-ona. A remoção do grupo de proteção SEM com TBAFproporciona o composto do título como um sólido.

LC/MS: TR = 2,14 Min; m/z = 446, 448 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,89 (m, 2H); 2,20 (t, 2H, J = 8,0 Hz); 3,46 (t, 2H, J =7,0 Hz)); 3,61 (t, 2H, J = 5,5 Hz); 3,90 (s, 3H); 4,47 (t, 2H, J = 5,5 Hz); 7,39(s, 1H); 7,81 (s, 1H); 8,42 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 13,13 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 26

4-[2,4-Dicloro-5-(2-pirrolidin-1-il-etóxi)-fenil]-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 73</formula>

Etapa 1

1 -[2-(2,4-Dicloro-5-iodo-fenóxi)-etil]-pirrolidina

<formula>formula see original document page 73</formula>

2,4-Dicloro-5-iodo-fenol (exemplo 22, etapa 4) (1 g, 3,46 mmols),bromidreto de 1-(2-bromoetil) pirrolodina (3,81 mmols), CsCO3 (2,8 g, 8,65mmols) e DMF (15 ml) foram combinados sob N2 e aquecidos em 110 0Cdurante 3 h. A mistura de reação foi depois dividida entre EtOAc (2 χ 40 ml)e sol. De NH3 (40 ml). Os orgânicos combinados foram secados (Na2SO4) eevaporados in vácuo para fornecer um óleo bruto. Este foi purificado porcromatografia instantânea em sílica-gel (25 g) eluindo com Hexano-45 %EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como umsólido amarelo, 1,08 g, 80 %.LC/MS: TR = 1,81 Min; m/z = 386, 388 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 2

<formula>formula see original document page 74</formula>

À uma solução de 1-[2-(2,4-Dicloro-5-iodo-fenóxi)-etil]-pirrolidina(200 mg, 0,518 mmol) em THF a -78°C sob N2 triisopropil borato (0,24 ml,1,04 mmol) foi adicionado seguido por nBuLi (0,27 ml, 0,67 mmol, 2,5 M emHexanos) por gotejamento. A reação foi deixada aquecer para a TR e foidepois evaporada in vácuo para fornecer o ácido borônico bruto. Este foicombinado com 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (92 mg, 0,26 mmol), 1M solução deNaHCO3 (0,8 ml, 0,78 mmol), PdC12(PF3)2 (9 mg, 0,01 mmol) e DMF (6 ml).A mistura foi submetida a retirada de gás por borbulhamento de N2 atravésdela durante 5 min. e foi subseqüentemente aquecida em 80°C durante 2 hsob N2. A reação foi deixada esfriar antes de ser dividida entre EtOAc (2 χ 60ml) e solução aquosa de NH3 (60 ml). Os orgânicos combinados foram se-cados (Na2SO4) e evaporados in vácuo para fornecer um óleo bruto. Este foipurificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (50 g) eluindo comCH2CI2-5 % MeOH/CH2CI2 (gradiente) para proporcionar o produto protegidocomo um óleo amarelo, 160 mg. Este produto foi desprotegido usando o mé-todo delineado no exemplo 1 etapa 5 para proporcionar o composto do títulocomo um sólido amarelo, 49 mg, 42 %.

LC/MS: TR = 1,83 min; m/z = 448, 450 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,68 (m, 4H); 2,58 (s, 3H); 2,61 (m, 4H); 2,89 (t, 2H, J= 5,8 Hz); 4,22 (t, 2Η, J = 5,7 Hz); 7,42 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,46 (s, 1H);13,00 (brs, 1 Η).

Exemplo 27

4-[2,4-Dicloro-5-(2-dietilamino-etóxi)-fenil]-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 75</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 26, e o caminho delineado no esquema 2 e esquema 4.Desta maneira, [2-(2,4-dicloro-5-iodo-fenóxi)-etil]-dietilamina (preparada co-mo por exemplo 26 etapa 1) foi convertida no ácido borônico 5-substituído ereagida com 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila. A remoção do grupo de proteção SEMproporcionou o composto do título como um sólido. LC/MS: TR = 1,86 min; m/z = 450, 452 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,99 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,59 (s, 3H); 2,62 (q, 4H, J =7,0 Hz); 2,90 (t, 2H, J = 5,1 Hz); 4,18 (t, 2H, J = 5,1 Hz); 7,42 (s, 1H); 7,80 (s,1H); 8,47 (s, 1H); 12,8 (brs, 1H).

Exemplo 28

2-{5-Ciano-4-[2,4-dicloro-5-(2-dietilamino-etóxi)-fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil}-N-metil-acetamida<formula>formula see original document page 76</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-

dos nos exemplos 12, 26, e 19, e o caminho delineado no esquema 2 e es-quema 4.

LC/MS: TR = 1,70 Min; m/z = 507, 509 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,50 (t, 6H, J = 7,2 Hz); 1,92 (s, 3H); 2,38 (q, 4H, J =7,2 Hz); 2,68 (t, 2H, J = 5,1 Hz); 3,14 (s, 2H); 3,62 (t, 2H, J = 5,1 Hz); 6,51(S1IH); 6,88 (s, 1H), 7,37 (s, 1H); 7,72 (s, 1H).

fluorescência descrito abaixo.Exemplo 29

<formula>formula see original document page 76</formula>

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização em

Etapa 1

Ácido 2-cloro-4,5-dimetoxifenil borônico

<formula>formula see original document page 76</formula>

À uma suspensão de ácido 3,4-dimetoxiborônico (364 mg) emacetonitrila (4 ml) foram adicionados TFA (50 uL) e NCS (294 mg). A misturade reação foi agitada durante 6 h em TR1 diluída com AcOEt e lavada comsalmoura. A fase orgânica foi secada por sulfato de sódio e o solvente foiremovido sob pressão reduzida. O material cristalino bruto foi triturado comAcOEt/Hexano para proporcionar ácido 2-cloro-4,5-dimetóxi-borônico (183mg, 42 %).

Etapa 2

<formula>formula see original document page 77</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 2 e o caminho delineado no esquema 2. Desta maneira, 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagido com ácido 2-cloro-4,5-dimetoxifenil borônico sob ascondições de condições de reação de acoplamento cruzado Suzuki. O grupode proteção SEM do produto resultante foi removido com TBAF para propor-cionar um sólido.

LC/MS: TR = 2,24 Min; m/z = 361 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,58 (s, 3H); 3,80 (s, 3H); 3,86 (s, 3H), 7,14 (s, 1H),7,19 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 13,20 (brs, 1H).

Exemplo 30

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 78</formula>

Etapa 1

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximeti7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 78</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 12. Desta maneira, 4-(2-cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 29) foi oxidada com mcpba para proporcionar o com-posto do título como um sólido marrom claro.

LC/MS: TR = 2,588 min; m/z = 523, 525 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.Etapa 2

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-

<formula>formula see original document page 78</formula>

O composto do título foi preparado por meio dos métodos doexemplo 19 etapa 1. Desta maneira, 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidicarbonitrila foi reagida com 2-dietilaminoetanotiol. O produto bruto desta rea-ção foi desprotegido por meio do método do exemplo 1 etapa 5, para pro-porcionar o produto como um sólido incolor seguinte a purificação por cro-matografia instantânea (Sílica-gel; eluindo com mistura de acetato de etila /hexano).

LC/MS: TR = 1,68 Min; m/z = 446 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,97 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,57-2,68 (m, 4H); 2,82-2,90(brm, 2H,); 3,25-3,35 (brm, 4H), 3,80 (s, 3H); 3,86 (s, 3H) 7,16 (s, 1H), 7,19(s, 1H); 8,44 (s, 1H);

Exemplo 31

15 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-[2-(4,4-diflúor-piperidin-1 -il)-etóxi]- 7H-

pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

Etapa 1

Éster de ácido acético-2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-2-oxo-etílico

<formula>formula see original document page 79</formula>

Cloridreto de 4,4-difluoropiperidina (600 mg, 3,8 mmol) foi agita-do em DCM (10 ml) com Et3N (11,4 mmols, 1,151 g, 1,59 ml) e esta misturafoi esfriado para 0°C. Cloreto de acetóxi acetila (5,7 mmols, 778 mg, 0,612ml) em DCM (5 ml) foi adicionado por gotejamento e a mistura de reação foiagitada durante a noite em TR. A mistura de reação foi lavada seqüencial-mente com solução saturada de NaHCO3 (x2) e salmoura (x2). A camadaorgânica foi secada (MgSCM)1 filtrada, e o solvente do filtrado foi removido invácuo. O resíduo foi esfriado e triturado com hexano para produzir o com-posto do título como um óleo incolor, (773 mg (92 %).

Etapa 2

2-(4,4-diflúor-piperidinil-1-il)etanol

<formula>formula see original document page 80</formula>

LiAIH4 (15 mmols, 15ml de um 1M solução em THF) foi agitadoem THF (20 ml) na TR. Éster de ácido acético-2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-2-oxo-etílico (5 mmols, 1,1 g) em THF (15 ml) foi adicionado por gotejamento.Após a adição estar completa, a reação foi aquecida para 40 gC e mantidaassim durante 4 h. A reação foi agitada durante a noite em TR, e depois es-friada para 0 -C. A mistura de reação foi extinta mediante a adição cuidado-sa de H2O (2 ml), 1M sol. aquosa de NaOH (1 ml) e H2O (1 ml). A mistura foiagitada durante 30 min. e depois filtrada através de celita, o bolo do filtrosendo lavado através de EtOAc várias vezes. O filtrado foi concentrado invácuo para produzir o composto do título, 800 mg (95 %).

Etapa 3

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-[2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-etóxi]-7-(2-trimetilsililanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 80</formula>

O composto do título foi sintetizado por meio dos métodos usa-dos no exemplo 12 etapa 2 usando 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 30, etapa 1) e 2-(4,4-diflúor-piperidinil-1-il)etanol. Esteproporciona um produto bruto que foi purificado por cromatografia instantâ-nea em sílica-gel eluindo com 1:1 acetato de etila : hexano para proporcionaro produto como um sólido esbranquiçado (90 % de rendimento).LC/MS: TR = 2,33 min; m/z = 608,610 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 4

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-[2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 81</formula>

O composto do título foi produzido por meio do método do e- xemplo 1 etapa 5. Desta maneira, 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-[2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-etóxi]-7-(2-trimetilsililanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagida com TBAF e etileno diamina em THFpara proporcionar um produto bruto que foi purificado por cromatografia ins-tantânea em sílica-gel, eluindo com gradiente de 1 a 5 % de metanol em di-clorometano para proporcionar o produto como sólido esbranquiçado. (39 %de rendimento).

LC/MS: TR = 1,646 min; m/z = 478, 480 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,87 - 2,00 (m, 4H); 2,59 - 2,68 (m, 4H); 2,83 (brt, 2H,J = 5,3 Hz); 3,74 (s, 3H); 3,86 (s, 3H), 4,46 (brt, 2H, J = 5,3 Hz); 7,13 (s, 1H),7,19 (s, 1H); 8,37 (s, 1H); 13,02 (brs, 1H).

Exemplo 32

4-(4,5-Dimetóxi-fenil)-2-[2-(4,4-diflúor-piperidin-1-il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila<formula>formula see original document page 82</formula>

Este composto foi produzido por meio dos caminhos delineadosno esquema 2 e esquema 4, utilizando os métodos dos exemplos 2, 12 e 31,usando ácidos borônicos apropriados durante o acoplamento e álcoois du-rante a remoção de sulfona. O produto final foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica-gel eluindo com gradiente de 0 a 5 % Metanol em di-clorometano para proporcionar o produto como sólido esbranquiçado.LC/MS: TR = 1,583 min; m/z = 444 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,88 - 2,00 (m, 4H); 2,59 - 2,65 (m, 4H); 2,82 (t, 2H, J=5,6 Hz); 3,85 (s, 3H); 3,89 (s, 3H), 4,48 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 7,14 (d, 1H, J =8,7 Hz), 7,46-7,51 (m, 2H); 8,42 (s, 1H); 12,99 (brs, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 33

2-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1 -il)-etóxi]-4-(3,4-dimetóxi-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 82</formula>

Este composto foi produzido por meio dos caminhos delineadosno esquema 2 e esquema 4, utilizando os métodos dos exemplos 2, 12 e 31,usando ácidos borônicos apropriados durante o acoplamento e álcoois du-rante a remoção de sulfona. O produto final foi purificado por HPLC Prep (pH4) para proporcionar um sólido incolor.LC/MS: TR = 1,736 min; m/z = 430 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,17 - 2,28 (m, 2H); 2,80 (t, 2H, J = 6,8 Hz); 2,88 (t,3H, J = 5,6 Hz); 3,00 (t, 2H, J = 13,5 Hz); 3,85 (s, 3H); 3,90 (s, 3H); 4,47 (t,2H, J = 5,6 Hz); 7,14 (s, 1H); 7,46-7,51 (m, 2H), 8,42 (s, 1H), 13,00 (brs 1H).

Exemplo 34

4-(3,4-Dimetóxi-fenil)-2-[2-(3(S)-flúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 83</formula>

Este composto foi produzido por meio dos caminhos delineadosno esquema 2 e esquema 4, utilizando os métodos dos exemplos 2,12 e 31,usando ácidos borônicos apropriados durante o acoplamento e álcoois du-rante a remoção de sulfona. O produto final foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica-gel eluindo com gradiente de 0 a 5 % Metanol em di-clorometano para proporcionar o produto como sólido branco.

LC/MS: TR = 1,474 min; m/z = 412 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,78 - 1,94 (m, 1H), 2,02 - 2,21 (m, 1H), 2,35 - 2,47(m, 1H); 2,63 - 2,75 (m, 1H), 2,80 - 2,95 (m, 4H), 3,85 (s, 3H), 3,90 (s, 3H),4,47 (t, 2H, J = 5,8 Hz); 5,49 (dm, 1H); 7,14 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,49 (m, 2H),8,42 (s, 1H); 13,01 (brs, 1H).

Exemplo 35

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-[2-(3(S)-flúor-piperidin-1-il)-etóxi]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrilano esquema 2 e esquema 4, utilizando os métodos dos exemplos 2, 12 e 31,usando ácidos borônicos apropriados durante o acoplamento e álcoois du-rante a remoção de sulfona. O produto final foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica-gel eluindo com gradiente de 3 a 5 % Metanol em di-clorometano para proporcionar o produto como sólido branco.LC/MS: TR = 1,502 min; m/z = 446 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,76 - 1,93 (m, 1H), 2,04 - 2,19 (m, 1H), 2,40 (m, 1H),2,62 - 2,77 (m, 1H), 2,80 - 2,88 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 4,46 (t,2H, J = 5,8 Hz); 5,20 (dm, 1H); 7,13 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 8,35 (s, 1H); 13,00(brs, 1H).

Exemplo 36

2-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-(2-Cloro-3,4-dimetóxi-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

Este composto foi produzido por meio dos caminhos delineadosno esquema 2 e esquema 4, utilizando os métodos dos exemplos 2, 12 e 31,20 usando ácidos borônicos apropriados durante o acoplamento e álcoois du-rante a remoção de sulfona O produto final foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica-gel eluindo com gradiente de 0 a 3 % metanol em di-clorometano para proporcionar o produto como sólido branco.

LC/MS: TR = 1,816 min; m/z = 464 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,17 - 2,28 (m, 2H); 2,80 (t, 2H, J = 6,7 Hz); 2,88 (t,3H, J = 5,6 Hz); 2,99 (t, 2H, J = 13,4 Hz); 3,74 (s, 3H); 3,86 (s, 3H); 4,40 (t,2H, J = 5,6 Hz); 7,14 (s, 1H); 7,18 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 13,00 (brs 1H).

Exemplo 37

4-(2-Cloro-4-ciano-5-metóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 85</formula>

Etapa 1

4-Amino-5-cloro-2-metoxibenzamida

<formula>formula see original document page 85</formula>

Ácido 4-amino-5-cloro-2-metoxibenzóico (comercialmente dispo-nível) (600 mg, 2,98 mmols) foi adicionado a sulfamida (715 mg; 7,44 mmols,2,5 equiv) e a mistura foi depois dissolvida em piridina (2,9 ml) e aquecidasob atmosfera de nitrogênio durante 2,5 horas. A mistura de reação foi dei-xada esfriar para a temperatura ambiente e a piridina foi removida in vácuo.Os sólidos resultante foram lavados com 10 % MeOH em diclorometano.Filtrados e secados para proporcionar um sólido cremoso 550 mg; 92 %.

Etapa 2

4-Amino-5-cloro-2-metoxibenzonitrila<formula>formula see original document page 86</formula>

4-Amino-5-cloro-2-metoxibenzamida foi adicionada em acetoni-trila) e POCI3 (excesso) foi adicionado na suspensão resultante e esta mistu-ra aquecida para 80 0C durante 3 horas (a mistura de reação ficou homogê-nea após 1,5 hora). A mistura de reação foi deixada esfriar para a tempera-tura ambiente, depois despejada em água gelada. Após agitação durante 2horas um sólido amarelo foi extraído por filtração, este foi secado durante anoite em 50 °C.Etapa 3

4-lodo-5-cloro-2-metoxibenzonitrila

<formula>formula see original document page 86</formula>

O composto do título foi produzido por meio do método do e-

xemplo 22 etapa 3 (diazotização e extinção com solução aquosa de iodo /iodeto de sódio).Etapa 4

4-(2-Cloro-4-ciano-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 86</formula>

O composto do título foi preparado por meio do método do e-xemplo 26 etapa 1 (formação de ácido borônico e subseqüente acoplamentocruzado).

LC/MS: TR = 2,884 min; m/z = 486, 488 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 5

4-(2-Cloro-4-ciano-5-metóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 87</formula>

O composto do título foi preparado por meio do método do e-xemplo 22 etapa 1 (oxidação com mcpba).

Etapa 6

<formula>formula see original document page 87</formula>

O composto do título foi preparado usando o caminho delineadono esquema 4, e os métodos do exemplo 19 (remoção de sulfona) e exem-pio 1 etapa 5 (desproteção).

LC/MS: TR = 1,75 min; m/z = 457 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 1,02 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 2,72-2,81 (brm, 4H); 2,94-3,03 (brm, 4H), 3,26-3,37 (brm, 4H); 3,96 (s, 3H); 7,56 (s, 1H); 8,19 (s, 1H),8,51 (s,1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 38

2-[5-Ciano-4-(4-flúor-2-metil-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil]-^metil-acetamida

O composto do título foi preparado usando os métodos delinea-dos no exemplo 12, exemplo 19, e o caminho delineado no esquema 2 eesquema 4.

LC/MS: TR = 2,01 min; m/z = 356 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 39

Etapa 1

Amida de ácido 4-(2,4-Dimeti-fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

Amida de ácido 4-(2,4-dimetil-fenil)-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-

7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (exemplo 9 etapa 8) foi desprotegidousando o método do exemplo 1 etapa 5. Desta maneira, a reação com TBAFe etilenodiamina em THF proporcionou o produto bruto que foi purificado porHPLC preparativa (pH 4) para fornecer o composto do título como sólido in-color.

LC/MS: TR = 1,987 min; m/z = 267 [M + H]+. Tempo de operação total 7,5min.

1H RMN (de DMSO): δ 1,91 (s, 3H); 2,33 (s, 3H); 6,81 (brs, 1H); 7,05 (d, 1H,J = 7,7 Hz); 7,07 (s, 1H); 7,12 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 7,97 (s, 1H); 8,83 (s, 1H).

fluorescência descrito abaixo.Exemplo 40

Amida de ácido 4-(4-flúor-2-meti-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílicono esquema 2, utilizando os métodos do exemplo 2 e exemplo 39.

Etapa 1

Amida de ácido 4-[(2-metil-4-flúor-fenil]-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

Este composto tinha atividade 'C' no ensaio de polarização em

O composto do título foi sintetizado pelos caminhos delineados

Amida de ácido 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico (exemplo 2, etapa 3) foiacoplada por cruzamento com ácido 4-flúor-2-metilfenil borônico, por meiodo método do exemplo 2 etapa 5. Isto proporcionou o produto bruto que foipurificado por cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo com 20 a 65% acetato de etila em hexano (gradiente); proporcionando composto do títulocomo óleo incolor (90 % de rendimento).

LC/MS: TR = 2,676 min; m/z = 447 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

Etapa 2

Amida de ácido 4-(4-flúor-2-meti-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 90</formula>

O composto do título foi preparado usando os métodos do e-xemplo 1 etapa 5. Desta maneira, a reação com TBAF e etilenodiamina emTHF proporcionou o produto bruto que foi purificado por cromatografia ins-tantânea em sílica-gel, eluindo com 0 a 4 % de metanol em diclorometano(gradiente) proporcionou o composto do título como um sólido incolor.LC/MS: TR = 1,920 min; m/z = 317 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,56 (s, 3H); 6,68 (brs, 1H); 6,98 - 7,11 (m, 3H); 7,19-7,24 (m, 1H); 7,84 (d, 1H, J = 2,3 Hz).

Exemplo 41

4-(Dicloro-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 90</formula>O composto do título foi produzido por meio do caminho delinea-do no esquema 2 e os métodos do exemplo 2. Desta maneira, 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagida com ácido 2,4 diclorofenil borônico e o produto resul-tante desprotegido com TBAF e etileno diamina em THF. O produto final foipurificado por HPLC Preparativa (pH 4) para proporcionar o composto dotítulo como um sólido esbranquiçado.

LC/MS: TR = 2,511 min; m/z = 335, 337 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (de DMSO): δ 2,58 (s, 3H); 7,62 (m, 2H); 8,86 (m, 1H); 8,49 (s, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 42

4-(2-Cloro-4-ciano-5-metóxi)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 91</formula>

4-(2-Cloro-4-ciano-5-metóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 37etapa 4) foi desprotegida por meio do método do exemplo 1 etapa 5. A puri-ficação por cromatografia instantânea em sílica-gel eluindo 20-50 % acetatode etila em hexano para proporcionar o produto como um sólido.

LC/MS: TR = 2,33 min; m/z = 356 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,59 (s, 3H); 3,96 (s, 3H); 7,54 (s, 1H); 8,19 (s, 1H);8,51 (s, 1H).

Este composto tinha atividade Ά' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Exemplo 43

4-(2,3-Dihidro-benzo[1,4]dioxin-6-il)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 92</formula>

O composto do título foi produzido por meio do caminho delinea-do no esquema 2 e os métodos do exemplo 2. Desta maneira, 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagida com ácido 1,4-benzodioxano-6-borônico e o produtoresultante desprotegido com TBAF e etilenodiamina em THF. O produto finalfoi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo 1:1 acetatode etila em hexano para proporcionar o composto do título como um sólido.LC/MS: TR = 2,26 min; m/z = 325 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,58 (s, 3H); 4,30 - 4,37 (m, 4H); 7,03 (dd, 1H, J = 7,1,1,3 Hz);7,39 (s, 1H); 7,40 (dd, 1H, J = 7,1, 2,4 Hz).

Exemplo 44

4-(Dimetoix-fenil_-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 92</formula> O composto do título foi produzido por meio do caminho delinea-do no esquema 2 e os métodos do exemplo 2. Desta maneira, 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila foi reagida com ácido 3,4- dimetoxifenil borônico e o produto re-sultante desprotegido com TBAF e etilenodiamina em THF. O produto finalfoi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel, eluindo 1:1 acetatode etila em hexano para proporcionar o composto do título como um sólido.LC/MS: TR = 2,17 min; m/z = 327 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,60 (s, 3H); 3,86 (s, 3H); 3,89 (s, 3H); 7,15 (d, 1H, J= 8,4 Hz); 7,46-7,51 (m, 2H); 8,50 (s, 1H).

Exemplo 45

4-[2-Cloro-5-(2-dietilamino-etóxi)-4-metóxi-fenil]-2-isopropilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 93</formula>

Etapa 1

5-Bromo-2-metóxi-fenol

<formula>formula see original document page 93</formula>

À uma solução de 5-Bromo-2-metóxi-benzaldeído (15 g, 69,8mmols) em CH2CI2 (200 ml), mCPBA (19,0 g, 82,4 mmols) foi adicionado e amistura resultante agitada em TR durante 48 h. Esta foi depois dividida entreCH2CI2 (150 ml) e solução saturada NaHCO3 (400 ml). A fase orgânica foisecada (Na2SO4) e evaporada in vácuo. O resíduo foi depois dissolvido emum mínimo de EtOAc e passado através da um tampão de SiO2 e lavagematravés de mais EtOAc. O filtrado foi evaporado in vácuo e re-dissolvido emMeOH (50 ml). 1M solução de LiOH aq. (50 ml) foi adicionada e a misturaagitada durante 10 min. 2M HCI (aq) foi depois adicionado cautelosamentepara acidificar a mistura de reação para pH 6-7. Esta foi extraída com EtOAc(3 χ 100 ml) e os orgânicos combinados secados (Na2SO4) e evaporados invácuo. O produto bruto resultante foi purificado por cromatografia instantâ-nea em SiO2 eluindo com Hexano depois 10 % EtOAc/Hexano para propor-cionar o composto do título como um sólido branco, 10,21 g, 72 %.LC/MS: TR = 2,11 Min; m/z = 201, 203 [M-H]. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 2

5-Bromo-4-cloro-2-metóxi-fenol

<formula>formula see original document page 94</formula>

À uma solução de 5-Bromo-2-metóxi-fenol (10,08 g, 49,66mmols) em MeCN (110 ml), TFA (1,15 ml, 14,9 mmols) e NCS (7,29 g, 54,63mmols) foram adicionados seqüencialmente e a mistura resultante agitadaem TR durante 16 h. Esta foi depois dividida entre EtOAc (200 ml) e salmou-16 ra (400 ml). A fase orgânica foi secada (Na2SO4) e evaporada in vácuo. Oproduto bruto resultante foi purificado por cromatografia instantânea em SiO2eluindo com Hexano depois 10 % EtOAc/Hexano para proporcionar o com-posto do título como um sólido branco, 10,5 g, 89 %.LC/MS: TR = 2,28 Min; m/z = 235, 237 [M-H]. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 3

1-Bromo-2-cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-benzeno

<formula>formula see original document page 94</formula>

À uma solução de 5-Bromo-4-cloro-2-metóxi-fenol (1,0 g, 4,21mmols) em dimetoximetano (28 ml) e CHCI3 (28 ml) a 0 0C sob N2 P2O5 (5,68g, 40 mmols) foi adicionado de uma vez. Após 5 min. a reação foi deixadaaquecer para a TR. A mistura de reação foi depois despejada em gelo e ex-traída com CH2CI2 (2 χ 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram seca-das (Na2SO4) e evaporadas in vácuo. O produto bruto resultante foi purifica-do por cromatografia instantânea em SiO2 eluindo com Hexano-10 % EtO-Ac/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como um sóli-do branco, 1,03 g, 87 %.

LC/MS: TR = 2,57 Min; no mass detected. Tempo de operação total 3,75min.Etapa 4

4-(2-Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 95</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado no

esquema 2 e por meio dos métodos dos exemplos 2 e 22, usando 1-Bromo-2-cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-benzeno e 4-cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila na etapaapropriada (acoplamento cruzado).LC/MS: TR = 2,84 Min; m/z = 521, 523 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.Etapa 5

4-(2-Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrilaO composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 4 e por meio dos métodos do exemplo 12 (etapa 1), usando 4-(2-

Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila.

LC/MS: TR = 2,62 Min; m/z = 553, 555 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 6

4-(2-Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-isopropilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

esquema 4 e por meio dos métodos do exemplo 12 etapa 2, usando 4-(2-Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila na etapa apropriada (re-moção nucleofílica).

LC/MS: TR = 2,96 Min; m/z = 549, 551 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.Etapa 7

4-(2-Cloro-5-hidróxi-4-metóxi-fenil)-2-isopropilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado no<formula>formula see original document page 97</formula>

4-(2-Cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-isopropilsulfanil-7-(2-

trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (94 mg, 0,17mmol), p-toluenossulfonato de piridínio (9 mg, 0,034 mmol) e lPrOH foramcombinados sob N2 e aquecidos em 85 0C durante 5 h. A reação foi deixadaesfriar e dividida entre EtOAc (20 ml) e salmoura (20 ml). A fase orgânica foisecada (Na2SO4) e evaporada in vácuo. O produto bruto resultante foi purifi-cado por cromatografia instantânea em SiO2 eluindo com Hexano-30 % E-tOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o composto do título como umsólido branco, 85 mg, 99 %.

LC/MS: TR = 2,86 Min; m/z = 505, 507 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.Etapa 8

4-[2-Cloro-5-(2-dietilamino-etóxi)-4-metóxi-fenil]-2-isopropilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 97</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 5 e por meio dos métodos do exemplo 26 etapa 1, usando 4-(2-Cloro-5-hidróxi-4-metóxi-fenil)-2-isopropilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila e (2-bromo-etil)-dietil-amina na etapa apropriada (alquilação).

LC/MS: TR = 2,37 Min; m/z = 604, 606 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Etapa 9

<formula>formula see original document page 98</formula>

O composto do título foi preparado pelos métodos do exemplo 1etapa 5 usando 4-[2-Cloro-5-(2-dietilamino-etóxi)-4-metóxi-fenil]-2-isopropilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina-5-carbonitrila e TBAF/ etilenodiamina em THF.

LC/MS: TR = 1,90 Min; m/z = 474, 476 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 0,96 (t, 6H, J = 7,1 Hz); 1,41 (d, 6H, J = 6,8 Hz); 2,58(q, 4H, J = 7,1 Hz), 2,84 (t, 2H, J = 6,0 Hz); 3,86 (s, 3H), 3,94 (sept, 1H, J =6,8 Hz); 4,06 (t, 2H, J = 6,0 Hz); 7,18 (s, 1H), 7,19 (s, 1H); 8,43 (s, 1H); NHnão observado.

Exemplo 46

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etanossulfinil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 98</formula>

À uma solução de 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-(2-dietilamino-etilsulfanil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 30) (30 mg,0,067 mmol) em MeCN a 0 0C, complexo MeCN:BF3 (0,85 ml, 16 % BF3 emMeCN)) foi adicionado por gotejamento. Uma solução de mCPBA (15 mg,-0,067 mmol) em MeCN (0,5 ml) foi depois adicionada lentamente e a rea-ção deixada aquecer para a TR. Após 1 h a mistura de reação foi divididaentre EtOAc (15 ml) e solução de tiossulfato de sódio (15 ml). A fase orgâni-ca foi lavada com solução saturada NaHCO3 (15 ml) secada (Na2SO4) e e-vaporada in vácuo. O produto bruto resultante foi purificado por HPLC prepa-rativa para proporcionar o composto do título como um sólido branco, 2 mg,6%.

LC/MS: TR = 1,54 Min; m/z = 462, 464 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

Exemplo 47

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metanossulfinil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 99</formula>

À uma solução de 4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 29) (50 mg, 0,139 mmol)em CH2CI2 a 0 0C uma solução de mCPBA (31 mg, -0,139 mmol) em CH2CI2(2,5 ml) foi adicionada e a reação deixada aquecer para a TR. A mistura dereação foi depois dividida entre CH2CI2 (2 χ 15 ml) e solução de tiossulfatode sódio (15 ml). A fase orgânica foi lavada com solução saturada NaHCO3(15 ml), secada (Na2SO4) e evaporada in vácuo. O produto bruto resultantefoi purificado por cromatografia instantânea em SiO2 eluindo com CH2CI2 - 5% MeOH/ CH2CI2 (gradiente) para proporcionar o composto do título comoum sólido branco, 27 mg, 52 %.

LC/MS: TR = 1,81 Min; m/z = 377, 379 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (d6 DMSO): δ 2,94 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 3,88 (s, 3H); 7,24 (s, 1H);7,25 (s, 2H); 8,77 (s, 1H); 13,8 (brs, 1H).

Exemplo 48

4-(2-Cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 100</formula>

O composto do título foi preparado pelo caminho delineado noesquema 4 e por meio dos métodos do exemplo 12 (etapa 1), usando 4-(2-cloro-4,5-dimetóxi-fenil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 29) na etapa apropriada (oxidação).LC/MS: TR = 1,97 Min; m/z = 393, 395 [M + H]+. Tempo de operação total3,75 min.

1H RMN (de DMSO): δ 3,49 (s, 3H); 3,87 (s, 3H); 3,89 (s, 3H); 7,26 (s, 1H);7,27 (s, 2H); 8,90 (s, 1H); 14,0 (brs, 1H).

Exemplo 49

Éster etílico de ácido (4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metó-xi-fenil}-5-ciano-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil)-acético.<formula>formula see original document page 101</formula>

Etapa 1

Éster ettílico de ácido [4-(2-cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-5-ciano-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H^irrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil]-acético.

<formula>formula see original document page 101</formula>

O composto do título foi preparado pelos caminhos delineadosno esquema 2 e 4 e por meio dos métodos do exemplo 12 (etapa 2), usandotioglicolato de etila, hidreto de sódio e 4-(2-cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-2-metanossulfonil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (exemplo 45, etapa 6). O produto bruto resultantefoi purificado por cromatografia instantânea em S1O2 eluindo com Hexanodepois 30 % EtOAc/Hexano para proporcionar o composto do título como umóleo, 240 mg, 81 %.

LC/MS: TR = 2,82 Min (270nm); m/z = 593, 595 [M + H]+. Tempo de opera-ção total 3,75 min (pos curto).Etapa 2

Éster etílico de ácido [4-(2-cloro-5-hidróxi-4-metóxi-fenil)-5-ciano-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil]-acético.O composto do título foi preparado por meio dos métodos doexemplo 45 etapa 7, usando éster ettílico de ácido [4-(2-cloro-4-metóxi-5-metoximetóxi-fenil)-5-ciano-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil]-acético e p-toluenossulfonato de piridina na etapa a-propriada (desproteção MOM). Após uma preparação aquosa completa ocomposto do título foi isolado como uma espuma colorida cremosa e usadosem mais purificação, 172 mg, 81 %.

LC/MS: TR = 2,73 Min (270nm); m/z = 549, 551 [M + H]+. Tempo de opera-ção total 3,75 min (pos curta).Etapa 3

l Éster etílico de ácido [4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metóxi-fenil}-5-ciano-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-

2-ilsulfanil]-acético.

À uma solução de composto 2 (164 mg, 0,298 mmol) em THF (5ml) foi adicionada trifenilfosfina (118 mg, 0,448 mmol) e 2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1 -il)-etanol (preparado tal como para 2-(4,4-diflúor-piperidinil)-etanolexemplo 32 etapa 1 e 2) (68 mg, 0,448 mmol). A reação foi agitada em TRdurante 15 min e depois esfriada para 0 QC. Diisopropil azodicarboxilato (91mg, 0,448 mmol) em THF (3 ml) foi adicionado por gotejamento e após adi-ção a reação foi deixada para alcançar a TR durante 15 min. A mistura dereação foi agitada 18 h em TR e depois dividida entre EtOAc e água. A ca-mada orgânica foi separada e a aquosa extraída com uma outra porção deEtOAc e estas camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessiva-mente com solução de bicarbonato de sódio saturada e solução de salmourasaturada. Os orgânicos foram secados (Na2SO4) e evaporados in vácuo. Oproduto bruto resultante foi purificado por cromatografia instantânea em SiO2eluindo com 30 % EtOAc/Hexano - 50 % EtOAc/Hexano (gradiente) paraproporcionar o composto do título como um óleo, 120 mg, 60 %.LC/MS: TR = 2,79 Min (270 nm); m/z = 682, 684 [M + H]+. Tempo de opera-ção total 3,75 min (pos curta).

Etapa 4

Éster etílico de ácido (4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metóxi-fenil}-5-ciano-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil)-acético.

<formula>formula see original document page 103</formula>

O composto do título foi preparado por meio do método do e-xemplo 1 etapa 5, usando éster etílico de ácido [4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metóxi-fenil}-5-ciano-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil]-acético, solução de fluoreto de tetrabutilamônio a 1M e 1,2-diaminoetano em THF. O produto bruto resultante foi pu-rificado por cromatografia instantânea em SiO2 eluindo primeiro com 50 %EtOAc/Hexano e depois 50 % EtOAc/DCM para proporcionar o composto dotítulo como um sólido amarelo claro, 30 mg, 31%.

LC/MS: TR = 2,12 Min (270 nm); m/z = 552, 554 [M + H]+. Tempo de opera-ção total 3,75 min (pos curta).

1H RMN (d4 MeOH): δ 1,15 (t, 3H); 2,15 - 2,27 (septeto, 2H); 2,82 - 2,91 (m,4H); 3,04 (t, 2H); 3,88 (s, 3H); 4,01 (s, 2H); 4,08 - 4,16 (m, 4H); 7,09 (s, 1H);7,11 (s, 1H); 8,07 (s, 1H) NH não observado.

Exemplo 50

Ácido (4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metóxi-fenil}-5-ciano-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-ilsulfanil)-acético.

<formula>formula see original document page 104</formula>

À uma solução de éster etílico de ácido (4-{2-cloro-5-[2-(3,3-diflúor-pirrolidin-1-il)-etóxi]-4-metóxi-fenil}-5-ciano-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin2-ilsulfanil)-acético, (20 mg, 0,0362 mmol) em MeOH (1 ml) foi adicionadoKOH (8 mg, 0,145 mmol) em água (1 ml) e a reação foi submetida a refluxodurante 1,5 h. A reação foi esfriada para a TR e concentrada in vácuo. Oresíduo foi dissolvido na quantidade mínima de água e cuidadosamente aci-dificado para pH 4 usando HCI a 2M. A solução aquosa resultante foi extraí-da com EtOAc (3 χ 10 ml) e os extratos combinados foram lavados com so-lução de salmoura saturada, secada (Na2SO4) e concentrada in vácuo paraproporcionar o composto do título como um sólido branco, 15,5 mg, 82 %.LC/MS: TR = 1,77 Min (270 nm); m/z = 524, 526 [M + H]+. Tempo de opera-ção total 3,75 min (pos curta).

1H RMN (d4 MeOH): δ 2,29 - 2,41 (septeto, 2H); 3,01 - 3,09 (m, 4H); 3,23 (t,2H); 3,98 (s, 3H); 4,09 (s, 2H); 4,25 (t, 2H); 7,19 (s, 1H); 7,21 (s, 1H); 8,15 (s,1H); NH e OH não observado.

Outros compostos da invenção são listados na tabela 1. Estescompostos são produzidos por meio dos caminhos delineados nos esque-mas de 1 a 5 e utilizando os métodos delineados no exemplos de 1 a 50.

Tabela 1<table>table see original document page 105</column></row><table><table>table see original document page 106</column></row><table><table>table see original document page 107</column></row><table><table>table see original document page 108</column></row><table><table>table see original document page 109</column></row><table><table>table see original document page 110</column></row><table><table>table see original document page 111</column></row><table><table>table see original document page 112</column></row><table><table>table see original document page 113</column></row><table><table>table see original document page 114</column></row><table>

*Atividade no ensaio de ligação FP descrito abaixo

Exemplo 93

4-(1,3-Diidro-isoindol-2-carbonil)-2-metilsulfanil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 114</formula>

Etapa 1

Ácido 5-ciano-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carboxílico

<formula>formula see original document page 114</formula>

4-Cloro-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila (100 mg, 0,282 mmol), trietilamina(0,083 ml, 0,592 mmol), MeOH (0,16 ml, 3,93 mmols), 1,3-bis(difenilfosfino)propano (96 mg, 0,23 mmol), Pd(OAc)2 (48 mg, 0,214 mmol) e DMF anídrico(2 ml) foram combinados. CO foi depois borbulhado através da mistura du-rante 2 min. A reação foi depois aquecida em 70°C sob uma atmosfera deCO durante 4 h. A mistura de reação foi dividida entre EtOAc (2 χ 15 ml) esolução saturada De NH4CI (20 ml). As fases orgânicas combinadas foramsecadas (Na2SO4) e evaporadas in vácuo para fornecer um óleo bruto. Estefoi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (20 g) eluindo comHexano-30 % EtOAc/Hexano (gradiente) para proporcionar o éster metílicoimpuro como um óleo amarelo. Este foi dissolvido em DMA (1 ml) e 2N Na-OH (0,1 ml, 0,212 mmol) adicionado. Após agitação durante 2 h em TR1 á-gua (15 ml) foi adicionada e a solução acidificada para pH 4-5 mediante aadição cautelosa de 1N solução de HCI (aq). Esta foi extraída com EtOAc (3χ 20 ml), os orgânicos secados (Na2SO4) e evaporados in vácuo para forne-cer o composto do título como um óleo amarelo, 50 mg. LC/MS: TR = 2,50Min; m/z = 365 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75 min.Etapa 2

4-(1,3-Diidro-isoindol-2-carbonil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila

<formula>formula see original document page 115</formula>

Ácido 5-ciano-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carboxílico (25 mg, -0,05 mmol), isoindolina (0,106mmol), HBTU (40 mg, 0,106 mmol), DIPEA (0,018 ml, 0,106 mmol) e DMA (1ml) foram combinados sob N2 e agitados em TR durante 1 h. A reação foidepois dividida entre EtOAc (2 χ 15 ml) e solução saturada NH4CI (20 ml). Asfases orgânicas combinadas foram secadas (Na2SO4) e evaporadas in vá-cuo. O produto bruto resultante foi purificado por cromatografia instantâneaem SiO2 eluindo com misturas de hexano - acetato de etila (gradiente) paraproporcionar o composto do título como um óleo amarelo.LC/MS: TR = 2,84 Min; m/z = 466 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Etapa 3

4-(1,3-Diidro-isoindole-2-carbonil)-2-metilsu^5-carbonitrila

O composto do título foi preparado por meio dos métodos doexemplo 1 etapa 5, usando solução de fluoreto de 4-(1,3-diidro-isoindol-2-carbonil)-2-metilsulfanil-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-5-carbonitrila tetrabutil amônio 1M e 1,2-diaminoetano em THF.LC/MS: TR = 2,19 Min; m/z = 336 [M + H]+. Tempo de operação total 3,75min.

Este composto tinha atividade 'B' no ensaio de polarização emfluorescência descrito abaixo.Ensaio de polarização em fluorescência

A polarização em fluorescência {também conhecida como aniso-tropia de fluorescência} mede a rotação de uma espécie fluorescente emsolução, onde quanto maior a molécula tanto mais polarizada a emissão defluorescência. Quando o fluoróforo for excitado com a luz polarizada, a luzemitida também é polarizada. O tamanho molecular é proporcional à polari-zação da emissão de fluorescência.

A sonda rotulada de fluorosceína -HO.se liga a HSP90 {HSP90 humano de comprimento total, de levedura decomprimento total ou de domínio N-terminal} e a anisotropia {rotação dasonda:complexo de proteína} é medida.

O composto de teste é adicionado na placa de ensaio, deixadose equilibrar e a anisotropia medida outra vez. Qualquer mudança na aniso-tropia é devido à ligação competitiva de composto para HSP90, desse modoliberando a sonda.Materiais

Os produtos químicos são de pureza mais elevada comercial-

mente disponíveis e todas as soluções aquosas são preparadas em águaAR.

1) Placa de ensaio preta de 96 reservatórios Costar #3915

2) Tamponante de ensaio de (a) 100 mM Tris pH 7,4; (b) 20mM KCI; (c) 6 mM MgCI2. Armazenados em temperatura ambiente.

3) BSA (albumina de soro bovino) 10 mg/ml (New England

Biolabs # B9001S)

4) 20 mM sonda em concentração de carga 100 % DMSO.Armazenado no escuro em TR. A concentração operacional é de 200 nMdiluído em água AR e armazenado em 4 0C. Concentração final no ensaio 80nM.

5) Proteína HSP90 de comprimento total humana expressa E.coli, purificada >95 % (vide, por exemplo, Panaretou et al., 1998) e armaze-nada em alíquotas de 50 μΙ a -80 °C.Protocolo

1) Adicionar 100 μΙ de 1 χ tampão nos reservatórios 11A e 12A(=FP BLNK)

2) Preparar a mistura de ensaio - todos os reagentes sãomantidos em gelo com uma tampa sobre a tina quano a sonte for sensível aluz.

i. Concn Final

• 1x Hsp90 FP Tampão IOmMx

• BSA 10 mg/ml (NEB) 5,0 μΙ 5 pg/ml• Sonda 200 μΜ 4,0 μΙ 80 ηΜ

• Hsp90 de comprimento total humano 6,25 μl 200 nM

3) Alíquota 100 μl de mistura de ensaio para todos os outrosreservatórios

4) Lacrar a placa e deixar no escuro em temperatura ambien-te durante 20 minutos para equilibrar

Placa de Diluição do Composto - 1 χ 3 séries de diluição

1) Em uma placa de fundo ν com 96 reservatórios transparen-te - {# VWR 007/008/257} adicionar 10 μl 100 % DMSO nos reservatórios deB1 a H11

2) Aos reservatórios de A1 a A11 adicionar 17,5 μΙ 100 %DMSO

3) Adicionar 2,5 μΙ cpd em A1. Isto fornece carga de 2,5 mM{50x} cpd - adotando cpds 20 mM.

4) Repetir para os reservatórios de A2 a A10. Controle nascolunas 11 e 12.

5) Transferir 5 μΙ da série A para a série B- sem a coluna 12.Misturar satisfatoriamente.

6) Transferir 5 μΙ da série B para a série C. Misturar satisfatoriamente.

7) Repetir para a série G.

8) Não adicionar qualquer composto na série H - isto é, a série 0.

9) Isto produz uma série de diluição de 1 χ 3 de 50 μΜ a 0,07 μΜ.

10) No reservatório B12 preparar 20 μΙ de composto padrão 100 μΜ.

11) Após a primeira incubação a placa de ensaio é lida emuma leitora de placa Fusion™ α-FP (Packard BioScience, Pangboume,Berkshire, UK).

12) Após a primeira leitura, 2 μΙ de composto diluído são adi-cionados em cada reservatório para as colunas de 1 a 10. Na coluna 11 {for-nece a curva padrão} somente adicionar o composto B11 - H11. Adicionar 2μΙ de 100 mM cpd padrão nos reservatórios B12 - H12 {é o controle positivo}

13) O fator Z' é calculado a partir dos controles zero e reserva-tórios positivos. Tipicamente fornece um valor de 0,7 - 0,9.

Os compostos testados no ensaio acima foram designados parauma de três faixas de atividade, a saber, A = <0,5DM; B = 0,5DM a 100M; C= >10DM, e estas designações são relatadas acima.

Um ensaio de inibição do crescimento também foi empregadopara a avaliação dos compostos de teste:

Avaliação da citotoxicidade pelo ensaio de Sulforhodamine B (SRB): cálculode 50 % da concentração inibidora (ICsn).Dia 1

1) Determinar o número de células por hemocitômetro.

2) Usar um porta-pipeta múltiplo de 8 canais, adicionar 160 μΙ

da suspensão celular (3600 células/reservatório ou 2 χ 104 células/ml) emcada reservatório de uma placa de microtítulo de 96 reservatórios.

3) Incubar durante a noite a 37 0C em uma incubadora deCO2.

Dia 2

4) Soluções de carga de medicamentos são preparadas, e di-luições seriais de cada fármaco são executadas em meio para fornecer con-centrações finais nos reservatórios.

5) Utilizar um porta-pipeta múltiplo, 40 μΙ de fármaco (emconcentração final 5x) são adicionados para quadruplicar os reservatórios.

6) Os reservatórios de controle estão em cada lado das pla-cas de 96 reservatórios, onde 40 μΙ de meio são adicionados.

7) Incubar as placas na incubadora de CO2 durante 4 dias (48horas).

Dia 6

8) Despejar o meio na pia e imergir a placa lentamente em 10% ácido tricloroacético gelado (TCA). Deixar durante cerca de 30 min emgelo.

9) Lavar as placas três vezes com água da bica mediante aimersão das placas em banhos de água da bica e incliná-las fora.

10) Secar na incubadora.

11) Adicionar 100 μΙ de 0,4 % SRB em 1 % ácido acético a ca-

da reservatório (exceto a última série (lado direito) da placa de 96 reservató-rios, isto é, o controle 0 %, isto é, sem fármaco, sem mancha. A primeira sé-rie será o controle 100 % sem fármaco, mas com mancha). Deixar durantemin.

12) Tirar com lavagem a mancha SRB não ligada com quatro

lavagens de ácido acético a 1 %.

13) Secar as placas na incubadora.

14) Solubilizar SRB usando 100 μΙ de 10 mM Tris base e colo-car as placas sobre o agitador de placa durante 5 min.

15) Determinar absorvência em 540 nm usando uma leitora de

placa. Calcular a absorvência média com relação aos reservatórios quadru-plicados e expressar como uma porcentagem de valor para o controle, re-servatórios não tratados.

16) Traçar em gráfico de valores de absorvência % versusconcentração Iog de fármaco e determinar o GI5O., isto é, a concentração docomposto de teste requerido para inibir o crescimento das células em 50 %.

Os compostos testados no ensaio acima foram designados parauma das três faixas de atividade, a saber, A = <0,5DM; B = 0,5DM a 10DM;C = >10μΜ, e os resultados para seis dos compostos da invenção são rela-tados na Tabela 2.Tabela 2

<table>table see original document page 121</column></row><table><table>table see original document page 122</column></row><table>

GI5O^ Inibição de crescimento nas células BT474 como descrito.REFERÊNCIAS

Um número de publicações é citado acima de modo a maiscompletamente descrever e divulgar a invenção e o estado da técnica a quala invenção pertence. Todas as citações para estas referências são forneci-das abaixo. Cada uma destas referências é aqui incorporada por menção emsua totalidade na presente divulgação.

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Claims

1. Composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável deste:<formula>formula see original document page 129</formula>R1 é hidrogênio, flúor, cloro, bromo, ou um radical de fórmula(1A):-X-Alq1-(Z)m-(Alq2)n-Q (IA)em queX é -O-, -S- -S(O)-, -SO2-, ou -NH-,Z é -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=S)-, -S(O)-, -SO2-, -NRa-, ou, em cadaorientação -C(=0)0-, -C(=0)NRA-, -C(=S)NRa-, -SO2NRa-,-NRaC(=0)-, ou -NRaSO2- em que Ra é hidrogênio ou C1-C6 alquilaAlq1 e Alq2 são radicais de C1-C3 alquileno ou C2-C3 alquenilenodivalentes opcionalmente substituídos,m, η e ρ são independentemente O ou 1, eQ é hidrogênio ou um radical carbocíclico ou heterocíclico opcio-nalmente substituído;R2 é um radical de fórmula (IB):-(Ar1)P-(Alq1)q-(Z)r-(Alq2)S-O (IB)em queAr1 é um radical de arila ou heteroarila opcionalmente substituído,Alq1, Alq2, Z e Q são como definidos em relação à fórmula (IA), ep, q, r e s são independentemente O ou 1; eR3 é ciano (-CN), flúor, cloro, bromo, metila em que um ou maisátomos de hidrogênio são opcionalmente substituídos por átomos de flúor,etila em que um ou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituídospor átomos de flúor, ciclopropila, -OH1-CH2OH1 -C(=0)NH2> -C(=0)CH3, ou -NH2.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que R3 é ciano(-CN).

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2em que Ri é hidrogênio, metóxi, etóxi, metiltio, etiltio, hidroxietiltio, metilami-no, dietilaminometiltio, metilaminocarbonilmetiltio, ou um grupo de fórmula(A) -(H):<formula>formula see original document page 130</formula>em que W é -O- ou -S-.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de-1 a 3 em que, no grupo R2, Alq1 e Alq21 quando presentes, são -CH2-.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesprecedentes em que, no grupo R2, Ar1, quando presente, é um anel de fenila,opcionalmente substituído.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de-1 a 3 em que, no grupo R2, ρ é 1, cada um de q, r e s é O, e Q é hidrogênio.

7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de-1 a 3 em que, no grupo R2, ρ é 1, e q, r e s são O, e Q é um anel carbocíclicoou heterocíclico opcionalmente substituído.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7 em que, no grupoR2, Q é um anel de fenila, cicloexila, piridila, morfolino, piperidinila ou pipera-zinila, opcionalmente substituído.

9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de-1 a 3 em que R2 é fenila, 2- ou 3-tienila, 2- ou 3- furanila, 2-, 3- ou 4-piridinila, morfolinila ou piperidinila opcionalmente substituída.

10. Composto de acordo com a reivindicação 9 em que R2 é fe-nila, opcionalmente substituída por um um ou mais substituintes seleciona-dos de metila, trifuorometila, etila, n- ou isopropila, vinila, alila, metóxi, trifuo-rometóxi, etóxi, metilenodióxi, etilenodióxi, n-propilóxi, benzilóxi, alilóxi, cia-nometóxi, flúor, cloro, bromo, ciano, formila, metil-, etil-, ou n-propil-carbo-nilóxi, metil- ou etilaminocarbonila, e substituintes de fórmula -O(CH2)nZ1 ou-S(CH2)nZ1 em que η é 1, 2 ou 3 e Z1 é um grupo de amino primário, secun-dário, terciário ou cíclico o último mencionado sendo opcionalmente substitu-ído, ou um grupo de Ci-C6 alcóxi; ou de fórmula -(AIq3)mZ1 em que Alq3 é um(Ci-C3) alquileno de cadeia reta ou ramificada divalente, m é 0 ou 1, e Z1 éum grupo de amino primário, secundário, terciário ou cíclico, o último men-cionado sendo opcionalmente substituído, ou um grupo de CrC6 alcóxi.

11. Composto de acordo com a reivindicação 10 em que ossubstituintes opcionais estão na posição 2 e/ou 4 e/ou 5 do anel de fenila.

12. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo a fórmula(II):<formula>formula see original document page 131</formula>Ri é (a) Ci-C6 alquiltio ou Ci-C6 alcóxi em cada um dos quais umou mais átomos de hidrogênio são opcionalmente substituídos por átomosde flúor, ou (b) um substituinte de fórmula -O(CH2)nZ1 ou-S(CH2)nZ1 em que η é 1, 2 ou 3 e Z1 é um grupo de amino pri-mário, secundário, terciário ou cíclico o último mencionado sendo opcional-mente substituído.R10 é H, Cl, Br1 ou -CH3;R11 é hidrogênio, Cl, Br, CN, metila, etila, n- ou iso-propila, metó- xi, etóxi, vinila ou alila; eR12 é (i) um radical de fórmula -O(CH2)nZ1 ou -S(CH2)nZ1 em queη é 1, 2 ou 3 e Z1 é (i) um grupo de amino primário, secundário, terciário oucíclico, ou um grupo de C1-C6 alcóxi; ou (ii) um radical de fórmula -(AIq3)mZ1em que Alq3 é um (C1-C3) alquileno de cadeia reta ou ramificada divalente, mé O ou 1, e Z1 é um grupo de amino primário, secundário, terciário ou cíclico,ou um grupo de C1-Cealcoxi.

13. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é o objeto dequalquer um dos Exemplos anexos.

14. Composição farmacêutica ou veterinária que compreendeum composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 13,juntamente com um ou mais portadores e/ou excipientes farmacêutica ouveterinariamente aceitáveis.

15. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicações de 1 a 13 na preparação de uma composição para a inibiçãoda atividade HSP90 in vitro ou in vivo.

16. Método de tratamento de doenças que são responsivas àinibição da atividade HSP90 em mamíferos, cujo método compreende a ad-ministração ao mamífero de uma quantidade de um composto como definidoem qualquer uma das reivindicações de 1 a 13 eficaz para inibir dita ativida-de HSP90.

17. Uso de acordo com a reivindicação 15 ou um método de a-cordo com a reivindicação 16 para a imunossupressão ou o tratamento dedoença viral, infecção fúngica resistente a fármaco, doenças inflamatóriastais como artrite reumatóide, asma, esclerose múltipla, diabetes Tipo I, lú-pus, psoríase e doença intestinal inflamatória; doença relacionada com aangiogênese da fibrose cística tal como retinopatia diabética, hemangioma eendometriose; ou para a proteção de células normais contra a toxicidadeinduzida pela quimioterapia; ou doenças onde a insuficiência para sofrer a-poptose é um fator subjacente; ou proteção da lesão hipoxia-isquêmica de-vido a elevação de Hsp70 no coração e cérebro; encefalopatia espongifor-me/CJD, doença de Huntingdon ou Alzheimer.

18. Uso de acordo com a reivindicação 15 ou um método de a-cordo com a reivindicação 16, para o tratamento de câncer.