BR112015023262B1

BR112015023262B1 - Anticorpo isolado, imunoconjugado, formulação famacêutica e usos do anticorpo

Info

Publication number: BR112015023262B1
Application number: BR112015023262-0A
Authority: BR
Inventors: Gai Ayalon; Danielle Marie Di Cara; Isidro Hotzel; Andrea Pfeifer; Oskar Adolfsson; Andreas Muhs; Maria Pihlgren
Original assignee: Genentech, Inc.; Ac Immune S.A
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-12
Publication date: 2023-12-19
Also published as: MX374811B; RU2661111C2; JP2016514140A; BR112015023262A2; WO2014150877A2; US20160024193A1; KR102233349B1; RU2015143886A; BR112015023262B8; EP2970452A2; JP6568514B2; KR20150131163A; US9598485B2; CN105143258B; CA2902910A1; HK1218125A1; MX2015012872A; CN105143258A; WO2014150877A3

Abstract

anticorpo, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, métodos de produção de um anticorpo, de tratamento de um indivíduo com uma doença, de redução dos níveis de proteína tau total e de modulação dos níveis de proteína tau total, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso de um anticorpo. a presente invenção refere-se aos anticorpos anti-tau, tais como os anticorpos que se ligam a um epítopo fosforilado na proteína tau humana com alta especificidade e/ou alta afinidade, e aos métodos de uso dos mesmos.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se aos anticorpos anti-Tau, tais como anticorpos que se ligam a um epítopo fosforilado na proteína Tau com alta especificidade e/ou alta afinidade, e aos métodos de uso dos mesmos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Os novelos neurofibrilares e/ou filamentos de neuropil (NTs) são as principais características neuropatológicas da doença de Alzheimer (AD). Os NTs são compostos de proteína Tau associada a microtúbulo que sofreu modificações após a tradução, incluindo fosforilação, e desenvolvidas pela agregação de confôrmeros Tau hiperfosforilados. O AD compartilha essa patologia com muitas tauopatias neurodegenerativas, em particular com certos tipos de demência frontotemporal (FTD). A proteína tau parece ser um importante fator determinante no desaparecimento cognitivo na AD e tauopatias neurodegenerativas relacionadas.

[003] Abordagens terapêuticas que a proteína Tau alvo são escassas e compreendem principalmente inibidores das quinases que são considerados intensificadores da fosforilação da Tau até níveis patológicos, e compostos que bloqueiam a agregação citoplasmática da proteína Tau hiperfosforilada. Essas abordagens apresentam várias desvantagens em termos de especificidade e eficácia. Os anticorpos de camundongo que se ligam aos confôrmeros Tau patológicos fosforilados foram descritos anteriormente, por exemplo, em WO 2012/045882. No entanto, ainda há uma necessidade de imunoterapias passivas e/ou ativas adicionais que funcionem para contrabalançar os confôrmeros da proteína patológica, conhecidos ou presumidos para causar distúrbios neurodegenerativos, tais como a patologia amiloide na AD causada, por exemplo, por agregados intraneuronais da proteína Tau hiperfosforilada que são tão típicos para a AD como a amiloide.

SUMÁRIO

[004] A presente invenção refere-se aos anticorpos anti-Tau, tais como anticorpos que se ligam a um epítopo fosforilado na proteína Tau com alta especificidade e/ou alta afinidade, e aos métodos de uso dos mesmos.

[005] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a um anticorpo isolado que se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, no qual o anticorpo compreende pelo menos uma sequência selecionada do grupo consistindo em HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que: (a) HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos X1SSQX2LX3X4X5X6GX7TYX8H (SEQ ID NO: 89), em que X1 = R ou T; X2 = S, R ou V; X3 = V, I ou R; X4 = H ou R; X5 = S, R, G ou K; X6 = H, N, R, K ou G; X7 = K ou R; e X8 = L ou V; (b) HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos KVX9X10RFX11 (SEQ ID NO: 90), em que X9 = S, K ou R; X10 = N, K ou H; e X11 = S, F, G, K, R, Y ou L; e (c) HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos SQTX12X13FPX14T (SEQ ID NO: 91), em que X12 = A ou R; X13 = H, R, Q ou Y; X14 = Y ou R; e em que o anticorpo não compreende uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que a sequência de aminoácidos HVR-L1 é RSSQSLVHSHGKTYLH (SEQ ID NO:15) ou RSSQRLVHSHGKTYLH (SEQ ID NO:92); a sequência de aminoácidos HVR-L2 é KVSNRFS (SEQ ID NO: 16); e a sequência de aminoácidos HVR-L3 é SQTAHFPYT (SEQ ID NO: 30).

[006] Em certas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, que inclui um resíduo de aminoácido fosforilado selecionado do grupo consistindo em: serina na posição 409 da tau humana (SEQ ID NO: 59); serina na posição 404 da tau humana (SEQ ID NO: 59); e serina nas posições 404 e 409 da tau humana (SEQ ID NO: 59).

[007] Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende pelo menos uma sequência selecionada do grupo consistindo em HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que HVR-H1 compreende a sequência de aminoácidos GYTFTDYYMN (SEQ ID No: 33); HVR-H2 compreende a sequência de aminoácidos DINPNRGGTTYNQKFKG (SEQ ID No: 34); e HVR-H3 compreende a sequência de aminoácidos YYAVGY (SEQ ID NO: 35).

[008] Em modalidades específicas, os anticorpos de acordo com a presente invenção compreendem pelo menos uma sequência selecionada do grupo consistindo em HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que (a) HVR-L1 compreende a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14; (b) HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, e (c) HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 e SEQ ID NO:32.

[009] Em modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que (a) HVR- L1 compreende a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14; (b) HVR-L2 compreende a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26 e (c) HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 e SEQ ID NO:32.

[010] Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16; e (c) HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27.

[011] Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27.

[012] Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8; (b) HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29.

[013] Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31.

[014] Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31.

[015] Em modalidades particulares, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende uma sequência de domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:54 e SEQ ID NO:55, ou uma VL que tem pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 98% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:54 e SEQ ID NO:55.

[016] Em certa modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção compreende uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (VH) da SEQ ID NO: 58, ou uma sequência VH com pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 98% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58.

[017] Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo humano, humanizado ou quimérico. Em modalidades particulares, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo humano ou humanizado.

[018] Em modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo IgG completo. Em outras modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo IgG4 completo. Em outras modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um anticorpo IgG1 N297G completo. Em ainda outras modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção é um fragmento de anticorpo que se liga a um epítopo fosforilado em uma proteína Tau humana.

[019] Em certas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga à proteína Tau, que é uma proteína Tau humana (por exemplo, a proteína Tau da SEQ ID NO: 59).

[020] Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, mas não se liga ao mesmo epítopo da proteína Tau que não é fosforilado. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, mas se liga ao mesmo epítopo da proteína Tau que não é fosforilado com afinidade substancialmente reduzida. Em modalidades particulares, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, em que a proteína Tau compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 59. Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau humana que compreende os resíduos de aminoácidos 404 a 411 (SEQ ID NO: 59).

[021] Em modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, com uma Kd entre cerca de 1 nm e 45 nM. Em uma modalidade, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, com uma Kd < 1 nM. Em modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau, com uma constante da taxa de dissociação < 5 x 10-3s-1. Em modalidades específicas, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau com uma constante da taxa de associação > 3 x 105 M-1s-1 ou > 7 x 105 M-1s-1.

[022] Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção se liga à proteína Tau, que é uma proteína Tau hiperfosforilada e/ou associada à microtúbulo agregada, tal como aquela presente nos filamentos helicoidais emparelhados (PHF).

[023] Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a um ácido nucleico isolado que codifica qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção.

[024] Em ainda outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma célula hospedeira que compreende o ácido nucleico isolado que codifica qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção. Em certas modalidades, a presente invenção refere-se aos métodos de produção de um anticorpo que compreende tal célula hospedeira, de modo que o anticorpo seja produzido.

[025] Em ainda outro aspecto, a presente invenção refere-se a um imunoconjugado que compreende qualquer um dos anticorpos aqui descritos e um agente citotóxico.

[026] Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma formulação farmacêutica que compreende qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[027] Em alguns aspectos, a presente invenção refere-se a um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção) para uso como um medicamento. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau em um indivíduo. Em modalidades particulares, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para o tratamento de uma taupatia em um indivíduo. Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso no tratamento da doença de Alzheimer (AD) em um indivíduo. Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso no tratamento da demência frontotemporal (FTD) em um indivíduo. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso no tratamento de uma deficiência em ou perda das funções cognitivas em um indivíduo. Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso na redução ou modulação dos níveis totais de proteína Tau no cérebro de um indivíduo. Em uma modalidade específica, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso na redução ou modulação dos níveis totais de uma proteína Tau fosforilada ou hiperfosforilada no cérebro de um indivíduo.

[028] Em certas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou distúrbio em um indivíduo selecionado de: uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau, taupatia, AD, FTD e uma deficiência na ou perda das funções cognitivas em um indivíduo. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso na fabricação de um medicamento para reduzir ou modular os níveis totais de proteína Tau no cérebro de um indivíduo. Em algumas modalidades, o anticorpo de acordo com a presente invenção é para uso na fabricação de um medicamento para reduzir ou modular os níveis de proteína Tau fosforilada ou hiperfosforilada no cérebro de um indivíduo.

[029] Em certas modalidades, a presente invenção refere-se aos métodos de tratamento de um indivíduo com uma doença ou distúrbio selecionado de: uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau, taupatia, AD, FTD e uma deficiência na ou perda das funções cognitivas, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção). Em uma modalidade, a doença ou o distúrbio tratado de acordo com os métodos da invenção é a AD.

[030] Em certas modalidades, a presente invenção refere-se aos métodos de redução dos níveis de proteína Tau total, proteína Tau fosforilada ou proteína Tau hiperfosforilada no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção) para reduzir os níveis da proteína Tau total, da proteína Tau fosforilada ou da proteína Tau hiperfosforilada no cérebro do indivíduo. Em algumas modalidades, a presente invenção refere-se aos métodos de modulação dos níveis de proteína Tau total, proteína Tau fosforilada ou proteína Tau hiperfosforilada no cérebro de um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção) para modular os níveis da proteína Tau total, da proteína Tau fosforilada ou da proteína Tau hiperfosforilada no cérebro do indivíduo.

[031] Em modalidades específicas, um indivíduo tratado de acordo com os métodos descritos na presente invenção é um ser humano. Em modalidades específicas, os anticorpos são para administração a um ser humano. Em modalidades específicas, os usos descritos na presente invenção são para o tratamento de um ser humano.

[032] Em outro aspecto, a presente invenção refere-se aos anticorpos para uso na detecção de emaranhados neurofibrilares, filamentos de neuropil e/ou neurite distrófica. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção) é para uso na detecção de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau, taupatia, AD ou FTD. Em uma modalidade específica, um anticorpo descrito na presente invenção (qualquer um dos anticorpos descritos na presente invenção) é para uso na detecção da AD.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[033] Figuras 1(A-C). Mostram um alinhamento das sequências de aminoácidos das regiões variáveis de cadeia leve, incluindo as CDRs, do anticorpo 5202.4 e as variantes maturadas com afinidade anti-pTau da 5202.4, ou seja, TAM1 a TAM23. O anticorpo 5202.4 tem a mesma região variável da cadeia pesada e da cadeia leve que o anticorpo hACI-36-2B6-Ab1, descrito no PCT/US13/32341, depositado em 15 de março de 2013. A numeração do resíduo ocorre de acordo com o sistema Kabat. As sequências de aminoácidos das CDRs são indicadas como "Kabat-CDR L1", "Kabat-CDR L2" e "Kabat-CDR L3." Os resíduos das variantes amadurecidas de afinidade anti-pTau, que variam da sequência da 5202.4, estão destacados (ver os resíduos nas caixas pretas).

[034] Figuras 2 (A-F). Ligação dos anticorpos da IgG para a Tau, Tau fosforilada e alfa-sinucleína pS129, conforme é medido por ELISA. A figura 2 mostra a ligação da IgG1 5202.4, TAM1, TAM2, TAM9, TAM19, TAM20 e dos anticorpos controle (anti-gD 5B6) à Tau integral não fosforilada, TAU integral PKA- fosforilada, Tau integral hiperfosforilada, alfa-sinucleína monofosforilada (pS129) ou controle não revestida/BSA.

[035] Figura 3. Ligação dos anticorpos IgG imobilizados aos peptídeos biotinilados derivados da Tau contendo pS404 e/ou pS409, conforme medido por ELISA. A figura 3 mostra a ligação dos anticorpos IgG1 5202.4, TAM1, TAM2, TAM9, TAM19, TAM20 e controle (anti-gD 5B6 e sem IgG) imobilizados aos peptídeos biotinilados derivados da Tau, incluindo os peptídeos fosforilados na serina 404 e na serina 409 (pS404, pS409), peptídeos fosforilados na serina 404 (pS404), peptídeos fosforilados na serina 409 (pS409), peptídeos não fosforilados ou sem peptídeo controle. 10 nM dos peptídeos biotinilados mostrados na figura 3, e 5 μg/mL de IgG, foram usados.

[036] Figura 4 (A-E). Ligação dos anticorpos IgG aos peptídeos biotinilados derivados da Tau imobilizados contendo pS404 e/ou pS409, conforme medido por ELISA. A figura 4 mostra a ligação dos anticorpos IgG1 5202.4, TAM1, TAM2, TAM9, TAM19, TAM20 e controle (anti-gD 5B6 e sem IgG) imobilizados aos peptídeos biotinilados derivados da Tau, incluindo os peptídeos fosforilados na serina 404 e na serina 409 (pS404, pS409), peptídeos fosforilados na serina 404 (pS404), peptídeos fosforilados na serina 409 (pS409), peptídeos não fosforilados ou sem peptídeo controle, ou controle basal. 20 nM de peptídeos biotinilados e 5 diferentes concentrações de IgG (ou seja, 0,01 nM, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM e 100 de nM IgG) foram utilizados para cada experimento de ligação.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES DA INVENÇÃO I. DEFINIÇÕES

[037] Uma "estrutura humana aceitadora", para os fins da presente invenção, é uma estrutura que compreende a sequência de aminoácidos de uma estrutura de domínio variável da cadeia leve (VL) ou de uma estrutura de domínio variável da cadeia pesada (VH) derivada de uma estrutura de imunoglobulina humana ou de uma estrutura de consenso humana, conforme é definido abaixo. Uma estrutura humana aceitadora “derivada de” uma estrutura de imunoglobulina humana ou de uma estrutura de consenso humana pode compreender a mesma sequência de aminoácidos da mesma, ou ela pode conter alterações da sequência de aminoácidos. Em algumas modalidades, o número de alterações de aminoácidos é 10 ou menos, 9 ou menos, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos ou 2 ou menos. Em algumas modalidades, a estrutura humana aceitadora VL é idêntica, em sequência, à sequência da estrutura de imunoglobulina humana ou à estrutura de consenso humana.

[038] "Afinidade" refere-se à força da soma total das interações não covalentes entre um sítio de ligação simples de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e o seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que seja indicado de outra forma, como usado na presente invenção, "afinidade de ligação" refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre os membros de um par de ligações (por exemplo, o anticorpo e o antígeno). A afinidade de uma molécula X pelo seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles divulgados na presente invenção. Modalidades ilustrativas e exemplares específicas para medir a afinidade de ligação estão descritas a seguir.

[039] Um anticorpo com "afinidade maturada" refere-se a um anticorpo com uma ou mais alterações em uma ou mais regiões hipervariáveis (HVRs), em comparação com um anticorpo original que não possui tais alterações, com essas alterações resultando em uma melhoria da afinidade do anticorpo pelo antígeno.

[040] Os termos "anticorpo anti-Tau" e "um anticorpo que se liga à Tau" referem-se a um anticorpo que é capaz de se ligar ao Tau com afinidade suficiente, de modo que o anticorpo é útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento da Tau. Em uma modalidade, a extensão da ligação de um anticorpo anti-Tau a uma proteína não Tau não relacionada é menor que cerca de 10% da ligação do anticorpo à Tau, conforme medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga à Tau tem uma constante de dissociação (Kd) < 1μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (por exemplo, igual a 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M). Em certas modalidades, um anticorpo anti-Tau se liga a um epítopo da Tau que é conservado entre as Taus de diferentes espécies. O termo "anticorpo(s) anti-Tau" engloba o(s) anticorpo(s) anti-pTau.

[041] Os termos "anticorpo anti-pTau" e "um anticorpo que se liga à pTau" referem-se a um anticorpo que é capaz de se ligar aos epítopos fosforilados da Tau com afinidade suficiente, de modo que o anticorpo é útil como um agente de diagnóstico e/ou terapêutico no direcionamento da pTau. Em uma modalidade, a extensão da ligação de um anticorpo anti-pTau a uma proteína não pTau é menor que cerca de 10% da ligação do anticorpo à pTau, conforme medido, por exemplo, por um radioimunoensaio (RIA). Em certas modalidades, um anticorpo que se liga à pTau tem uma constante de dissociação (Kd) < 1μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (por exemplo, igual a 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M). Em certas modalidades, um anticorpo anti-pTau se liga a um epítopo fosforilado da Tau que é conservado entre as Taus de diferentes espécies. Em certas modalidades, o anticorpo anti-pTau se liga seletivamente a uma fosfoforma da Tau ou a um epítopo da Tau que contém resíduos de aminoácidos que são fosforilados. Em outras modalidades, o anticorpo anti-pTau não se liga, ou se liga com afinidade substancialmente reduzida a uma Tau não fosforilada ou epítopo da Tau que não é fosforilado em relação a uma Tau fosforilada, a uma fosfoforma da Tau ou a um epítopo da Tau que contém resíduos de aminoácidos que são fosforilados. Em algumas modalidades, a Tau fosforilada ou o epítopo da Tau contém serinas fosforiladas na posição do aminoácido 404, 409 ou 404 e 409 da sequência de aminoácidos da Tau humana.

[042] O termo "anticorpo", na presente invenção, é usado no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpo, incluindo, mas sem se limitar, aos anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) e fragmentos de anticorpo, contanto que eles exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada.

[043] Um "fragmento de anticorpo" refere-se a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não se limitam, ao Fv, Fab, Fab', Fab’-SH e F(ab')2; diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpo de cadeia única (por exemplo, scFc); e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.

[044] Um "anticorpo que se liga ao mesmo epítopo" que um anticorpo de referência refere-se a um anticorpo que bloqueia a ligação do anticorpo de referência ao seu antígeno em um ensaio de competição em 50% ou mais e, inversamente, o anticorpo de referência bloqueia a ligação do anticorpo ao seu antígeno em um ensaio de competição em 50% ou mais. Um ensaio de competição exemplar é fornecido na presente invenção.

[045] O termo "anticorpo modulador" refere-se a um anticorpo ou a um fragmento funcional do mesmo, conforme descrito na presente invenção nas várias modalidades, que pode suprarregular (por exemplo, ativar ou estimular), infrarregular (por exemplo, inibir ou suprimir) ou, de outro modo, alterar uma propriedade funcional, atividade biológica ou nível de proteína Tau solúvel ou insolúvel, particularmente de proteína Tau fosforilada solúvel no cérebro, particularmente no córtex cerebral e/ou no hipocampo de um animal, particularmente de um mamífero ou ser humano contendo níveis aumentados de proteína Tau solúvel e/ou de proteína Tau fosforilada solúvel. Um anticorpo modulador, ou um fragmento funcional do mesmo, pode agir para modular uma proteína Tau ou um polipeptídeo que codifica a dita proteína Tau, direta ou indiretamente. Em certas modalidades, um anticorpo modulador ou fragmento funcional do mesmo reduz os níveis de proteína Tau solúvel e insolúvel, particularmente da proteína Tau fosforilada solúvel, no cérebro, particularmente no córtex cerebral e/ou no hipocampo de um animal, particularmente de um mamífero ou ser humano contendo níveis aumentados de proteína Tau solúvel e/ou de proteína Tau fosforilada solúvel."

[046] As frases "substancialmente reduzido" ou "substancialmente diferente", conforme utilizado na presente invenção, refere-se a um grau de diferença suficientemente alto entre dois valores numéricos (geralmente um associado a uma molécula e o outro associado a uma molécula de referência/de comparação), de modo que uma pessoa versada na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como sendo estatisticamente significativa dentro do contexto da característica biológica medida pelos ditos valores (por exemplo, valores da Kd). A diferença entre os ditos dois valores é, por exemplo, maior que cerca de 10%, maior que cerca de 20%, maior que cerca de 30%, maior que cerca de 40% e/ou maior do que cerca de 50% em função do valor para a molécula de referência/comparação.

[047] "Afinidade de ligação" refere-se, em geral, à força da soma total das interações não covalentes entre um sítio de ligação simples de uma molécula (por exemplo, de um anticorpo) e o seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que seja indicado de outra forma, como usado na presente invenção, "afinidade de ligação" refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre os membros de um par de ligação (por exemplo, o anticorpo e o antígeno). A afinidade de uma molécula X pelo seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (Kd). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, incluindo aqueles divulgados na presente invenção. Anticorpos de baixa afinidade geralmente se ligam ao antígeno lentamente e tendem a se dissociar facilmente, enquanto que os anticorpos de alta afinidade geralmente se ligam ao antígeno mais rápido e tendem a permanecer ligados por mais tempo. Uma variedade de métodos de medição da afinidade de ligação são conhecidos na técnica, qualquer um dos quais podendo ser usado para efeitos da presente invenção. As modalidades ilustrativas específicas são descritas a seguir. Em uma modalidade, a "Kd" ou "valor de Kd", de acordo com essa invenção, é medido por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA) realizado com a versão Fab de um anticorpo de interesse e o seu antígeno, como descrito pelo ensaio a seguir. Solution binding affinity of Fabs for antigen can be measured, in one example, by equilibrating Fab with a minimal concentration of (125I)-labeled antigen in the presence of a titration series of unlabeled antigen, then capturing bound antigen with an anti-Fab antibody- coated plate (Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881). Para estabelecer condições para o ensaio, as placas de microtitulação (Dynex) são revestidas de um dia para o outro com 5 μg/mL de um anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em carbonato de sódio 50 mM (pH 9,6) e, posteriormente, bloqueadas com albumina de soro bovino 2% (p/v) em PBS durante duas a cinco horas em temperatura ambiente (cerca de 23 °C). Em uma placa não adsorvente (Nunc No. 269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno [125I] são misturados com diluições em série de um Fab de interesse (por exemplo, consistente com a avaliação de um anticorpo anti-VEGF, Fab-12, em Presta et al., (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599). O Fab de interesse é, em seguida, incubado de um dia para o outro; no entanto, a incubação pode continuar por um período mais longo (por exemplo, durante 65 horas) para garantir que o equilíbrio é atingido. Depois disso, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação em temperatura ambiente (por exemplo, durante uma hora). A solução é, em seguida, removida e a placa é lavada oito vezes com Tween-20 0,1% em PBS. Quando as placas secaram, 150 μL/poço de scintillant (MicroScint-20; Packard) é adicionado, e as placas são contadas em um contador de radiação gama Topcount (Packard) durante dez minutos. As concentrações de cada Fab que produzem menos de ou 20% de ligação máxima são escolhidas para uso nos ensaios de ligação competitiva. De acordo com outra modalidade, o valor de Kd ou Kd pode ser medido por meio de ensaios de ressonância de plasmônio de superfície usando um BIAcore™-2000 ou um BIAcore™-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) de acordo com as instruções do fabricante ou a 25 °C com chips CM5 com antígeno imobilizado a -10 unidades de resposta (RU). Em resumo, os chips biossensores de dextrana carboximetilada (CM5, BIAcore Inc.) são ativados com cloridrato de N- etil-N'-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N-hidroxisuccinimida (NHS), de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com acetato de sódio 10 mM, pH 4,8, até 5 μg/mL (-0,2 μM) antes da injeção com uma vazão de 5 μL/minuto para atingir cerca de 10 unidades de resposta (RU) da proteína acoplada. Após a injeção do antígeno, etanolamina 1 M é injetada para bloquear os grupos que não reagiram. Para as medições de cinética, diluições em série de Fab de duas vezes (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com Tween 20 0,05% (PBST) a 25 °C com uma vazão de cerca de 25 μL/min. As taxas de associação (kon) e de dissociação (koff) podem ser calculadas usando um modelo de ligação de Langmuir simples de um para um (versão 3.2 do software de avaliação BIAcore) pelo ajuste simultâneo dos sensorgramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (Kd) pode ser calculada como a razão koff/kon; consulte, por exemplo, Chen, Y., et al. (1999) J. Mol Biol 293: 865-881. Se a taxa de associação exceder 106 M-1 s-1 pelo ensaio de ressonância de plasmônio de superfície acima, então a taxa de associação pode ser determinada usando uma técnica de supressão fluorescente que mede o aumento ou a diminuição da intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, 16 nm de gama de comprimentos) a 25 °C de um anticorpo antiantígeno 20 nM (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno, conforme medido em um espectrômetro, como em um espectrofotômetro equipado com interruptor de fluxo (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro de SLM-Aminco série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.

[048] Uma "taxa de associação” ou "kon", de acordo com essa invenção, também pode ser determinada com a mesma técnica de ressonância de plasmônio de superfície descrita acima usando um BIAcore (TM)-2000 ou um BIAcore (TM)-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) a 25 °C, com chips CM5 com antígeno imobilizado a -10 unidades de resposta (RU). Em resumo, os chips biossensores de dextrana carboximetilada (CM5, BIAcore Inc.) são ativados com cloridrato de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N- hidroxisuccinimida (NHS), de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com acetato de sódio 10 mM, pH 4,8, até 5 μg/mL (-0,2 μM) antes da injeção com uma vazão de 5 μL/minuto para atingir cerca de 10 unidades de resposta (RU) da proteína acoplada. Após a injeção do antígeno, a etanolamina 1 M é injetada para bloquear os grupos que não reagiram. Para as medições de cinética, diluições em série de Fab de duas vezes (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com Tween 20 0,05% (PBST) a 25 °C com uma vazão de cerca de 25 μL/min. As taxas de associação (kon) e de dissociação (koff) podem ser calculadas usando um modelo de ligação de Langmuir simples de um para um (versão 3.2 do software de avaliação BIAcore) pelo ajuste simultâneo dos sensorgramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (Kd) foi calculada como a razão koff/kon; consulte, por exemplo, Chen, Y., et al. (1999) J. Mol Biol 293: 865-881. No entanto, se a taxa de associação exceder 106 M-1 s-1 pelo ensaio de ressonância de plasmônio de superfície acima, então a taxa de associação pode ser determinada usando uma técnica de supressão fluorescente que mede o aumento ou a diminuição da intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, 16 nm de gama de comprimentos) a 25 °C de um anticorpo antiantígeno 20 nM (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno, conforme medido em um espectrômetro, como em um espectrofotômetro equipado com interruptor de fluxo (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro de SLM-Aminco série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.

[049] O termo anticorpo "quimérico" refere-se a um anticorpo no qual uma porção da cadeia pesada e/ou leve é derivada de uma determinada fonte ou espécie, enquanto o restante da cadeia pesada e/ou da cadeia leve é derivada de uma fonte ou espécie diferente.

[050] A "classe" de um anticorpo refere-se ao tipo de domínio constante ou região constante possuído pela sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM e vários deles podem ser divididos em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são chamados α, δ, ε, y e μ, respectivamente.

[051] O termo "agente citotóxico", como utilizado na presente invenção, refere-se a uma substância que inibe ou previne uma função celular e/ou causa a morte ou destruição celular. Os agentes citotóxicos incluem, mas não se imitam, aos isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos do Lu); fármacos ou agentes quimioterapêuticos (por exemplo, metotrexato, adriamicina, alcaloides da vinca (vincristina, vimblastina, etoposídeo), doxorrubicina, melfalano, mitomicina C, clorambucil, daunorrubicina ou outros agentes intercalantes); agentes inibidores do crescimento; enzimas e fragmentos dos mesmos, como enzimas nucleolíticas; antibióticos; toxinas, tais como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, incluindo fragmentos e/ou variantes das mesmas; e os vários agentes antitumorais ou anticancerígenos divulgados abaixo.

[052] "Funções efetoras" referem-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, que variam de acordo com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras do anticorpo incluem: C1q ligante e citotoxicidade dependente do complemento (CDC); ligação ao receptor de Fc; citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose; infrarregulação dos receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de célula B); e ativação das células B.

[053] Uma “quantidade eficaz” de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, refere-se a uma quantidade eficaz, nas dosagens e por períodos de tempo necessários para atingir o resultado terapêutico ou profilático desejado.

[054] O termo "região Fc", na presente invenção, é usado para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada da imunoglobulina que contém pelo menos uma parte da região constante. O termo inclui regiões de Fc da sequência nativa e regiões de Fc variantes. Em uma modalidade, uma região Fc de cadeia pesada da IgG humana se estende a partir da Cys226, ou da Pro230, até a carboxila terminal da cadeia pesada. No entanto, a lisina C-terminal (Lys447), da região Fc, pode ou não estar presente. A menos que seja especificado de outra forma, a numeração dos resíduos de aminoácidos na região de Fc ou na região constante é de acordo com o sistema de numeração EU, também chamado de índice EU, conforme descrito em Kabatet al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

[055] "Estrutura" ou "FR" refere-se aos resíduos de domínio variável que não são os resíduos da região hipervariável (HVR). A FR de um domínio variável geralmente consiste em quatro domínios FR: FR1, FR2, FR3 e FR4. Nesse sentido, as sequências HVR e FR geralmente aparecem na seguinte sequência na VH (ou VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

[056] Os termos "anticorpo integral", "anticorpo intacto" e "anticorpo inteiro" são usados na presente invenção de forma intercambiável para se referir a um anticorpo com uma estrutura substancialmente similar a uma estrutura de anticorpo nativo, ou possuindo cadeias pesadas que contêm uma região Fc, conforme definido na presente invenção.

[057] Os termos "célula hospedeira", "linhagem de célula hospedeira" e "cultura de célula hospedeira" são usados de forma intercambiável e referem-se às células nas quais o ácido nucleico exógeno foi introduzido, incluindo a descendência de tais células. Células hospedeiras incluem "células transformantes" e "células transformadas", que incluem as células transformadas primárias e a descendência derivada das mesmas, sem levar em conta o número de passagens. A descendência não pode ser completamente idêntica em termos de conteúdo de ácido nucleico em relação a uma célula de origem, mas pode conter mutações. A descendência mutante que tem a mesma função ou atividade biológica, conforme foi testado ou selecionado para a célula originalmente transformada, está incluída na presente invenção.

[058] Um "anticorpo humano" é aquele que possui uma sequência de aminoácidos que corresponde a de um anticorpo produzido por um ser humano ou uma célula humana, ou derivado de uma fonte não humana que utiliza repertórios de anticorpo humano ou outras sequências codificantes de anticorpo humano. Esta definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado que compreende resíduos de ligação ao antígeno não humanos.

[059] Uma "estrutura de consenso humana" é uma estrutura que representa os resíduos de aminoácidos de ocorrência mais comum em uma seleção de sequências de estrutura VL ou VH de imunoglobulina humana. Geralmente, a seleção das sequências VL ou VH de imunoglobulina humana é de um subgrupo de sequências de domínio variável. Geralmente, o subgrupo de sequências é um subgrupo, tal como em Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, Publicação NIH 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Em uma modalidade, para a VL, o subgrupo kappa I é como em Kabat et al., supra. Em uma modalidade, para a VH, o subgrupo é o subgrupo III como em Kabat et al., supra.

[060] Um anticorpo "humanizado" refere-se a um anticorpo quimérico que compreende os resíduos de aminoácidos das HVRs não humanas e resíduos de aminoácido das FRs humanas. In certain embodiments, a humanized antibody will comprise substantially all of at least one, and typically two, variable domains, in which all or substantially all of the HVRs (e.g., CDRs) correspond to those of a non-human antibody, and all or substantially all of the FRs correspond to those of a human antibody. Um anticorpo humanizado pode compreender, opcionalmente, pelo menos uma porção de uma região constante do anticorpo derivada de um anticorpo humano. Uma “forma humanizada” de um anticorpo, por exemplo, de um anticorpo não humano, refere-se a um anticorpo que sofreu humanização.

[061] O termo "região hipervariável" ou "HVR", como usado na presente invenção, refere-se a cada uma das regiões de domínio variável do anticorpo que são hipervariáveis em sequência ("regiões determinantes de complementaridade" ou "CDRs") e/ou que formam alças estruturalmente definidas ("alças hipervariáveis") e/ou que contêm resíduos de contato com o antígeno ("contatos de antígeno"). Geralmente, os anticorpos compreendem seis HVRs: três na VH (H1, H2, H3) e três na VL (L1, L2, L3). HVRs exemplares na presente invenção incluem: (a) alças hipervariáveis que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) e 96-101 (H3) (Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)); (b) CDRs que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 24-34 (L1), 5056 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) e 95-102 (H3) (Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)); (c) contatos de antígeno que ocorrem nos resíduos de aminoácido 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) e 93-101 (H3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); e (d) combinações de (a), (b), e/ou (c), incluindo os resíduos de aminoácidos HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) e 94-102 (H3).

[062] Em uma modalidade, os resíduos HVR compreendem aqueles identificados na tabela 2B (ou seja, compreendem a SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 e/ou SEQ ID NO: 35) ou em outras partes do relatório descritivo.

[063] A menos que seja indicado de outra forma, os resíduos HVR e outros resíduos no domínio variável (por exemplo, resíduos FR) estão numerados na presente invenção de acordo com Kabat et al., supra.

[064] Um "imunoconjugado" é um anticorpo conjugado com uma ou mais molécula(s) heteróloga(s), incluindo, mas sem se limitar, a um agente citotóxico.

[065] Um "indivíduo" ou "sujeito" é um mamífero. Os mamíferos incluem, mas não se limitam, aos animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cães e cavalos), primatas (por exemplo, os seres humanos e primatas não humanos, como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em certas modalidades, o indivíduo ou o sujeito é um ser humano.

[066] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi separado de um componente do seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado até mais de 95% ou 99% de pureza, conforme determinado, por exemplo, por eletroforese (por exemplo, eletroforese SDS-PAGE, de focalização isoelétrica (IEF) ou capilar) ou cromatografia (por exemplo, HPLC de troca iônica ou fase reversa). Para uma revisão dos métodos para avaliação da pureza do anticorpo, consulte, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).

[067] Um ácido nucleico "isolado" refere-se a uma molécula de ácido nucleico que foi separada de um componente do seu ambiente natural. Um ácido nucleico isolado inclui uma molécula de ácido nucleico contida nas células que normalmente contêm a molécula de ácido nucleico, mas a molécula de ácido nucleico está presente extracromossomicamente ou em um local cromossômico que é diferente do seu local cromossômico natural.

[068] "Ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-Tau" refere-se a uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam as cadeias pesada e leve do anticorpo (ou fragmentos das mesmas), incluindo tal/tais molécula(s) de ácidos nucleicos em um único vetor ou em vetores separados, e tal/tais molécula(s) de ácidos nucleicos estão presentes em um ou mais locais em uma célula hospedeira.

[069] O termo "anticorpo monoclonal", como usado na presente invenção, refere-se a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos e/ou se ligam ao mesmo epítopo, exceto para anticorpos variantes possíveis, por exemplo, contendo mutações naturais ou que ocorrem durante a produção de uma preparação de anticorpo monoclonal, com tais variantes geralmente estando presentes em pequenas quantidades. Ao contrário das preparações de anticorpo policlonal, que tipicamente incluem anticorpos diferentes direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante em um antígeno. Dessa forma, o modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais para serem usados de acordo com a presente invenção podem ser feitos por uma variedade de técnicas, incluindo, mas sem se limitar, ao método do hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição de fago e métodos utilizando animais transgênicos contendo todos ou parte dos loci de imunoglobulina humana, tais métodos e outros métodos exemplares para produzir anticorpos monoclonais sendo descritos na presente invenção.

[070] Um “anticorpo nu” refere-se a um anticorpo que não é conjugado a uma porção heteróloga (por exemplo, uma porção citotóxica) ou radiomarcador. O anticorpo nu pode estar presente em uma formulação farmacêutica.

[071] "Anticorpos nativos" refere-se às moléculas de imunoglobulina de ocorrência natural com estruturas diferentes. Por exemplo, os anticorpos de IgG nativos são glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 Daltons, que compreendem duas cadeias leves idênticas e duas cadeias pesadas idênticas que são unidas por ligação dissulfeto. Do N para o C-terminal, cada cadeia pesada tem uma região variável (VH), também chamada de um domínio variável pesado ou de um domínio variável da cadeia pesada, seguido por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3). Da mesma forma, do N para o C-terminal, cada cadeia leve tem uma região variável (VL), também chamada de domínio leve variável ou domínio variável da cadeia leve, seguido por um domínio leve constante (CL). A cadeia leve de um anticorpo pode ser atribuída a um dos dois tipos, denominados kappa (K) e lambda (A), com base na sequência de aminoácidos do seu domínio constante.

[072] O termo "folheto da embalagem" é usado para se referir às instruções habitualmente incluídas em pacotes comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração, terapia de combinação, contraindicações e/ou advertências sobre o uso de tais produtos terapêuticos.

[073] "Identidade de sequência de aminoácidos porcentual (%)" em relação a uma sequência polipeptídica de referência, é definida como a porcentagem dos resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que é idêntica aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência depois de alinhar as sequências e introduzir lacunas, se necessário, para atingir a máxima identidade de sequência porcentual, e sem considerar quaisquer substituições conservadoras como parte da identidade de sequência. O alinhamento, com a finalidade de determinar a identidade de sequência de aminoácidos porcentual, pode ser obtido de várias formas que estão dentro da habilidade da pessoa versada na técnica, por exemplo, usando os softwares de computador publicamente disponíveis como os softwares BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 ou Megalign (DNASTAR). As pessoas versadas na técnica podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinhamento máximo em relação a todo o comprimento das sequências sendo comparadas. Para fins da presente invenção, no entanto, os valores de identidade de sequência de aminoácidos % são gerados usando o programa de computador de comparação de sequências ALIGN- 2. O programa de computador de comparação de sequências ALIGN-2 foi de autoria da Genentech, Inc., e o código-fonte foi depositado com a documentação do usuário no Escritório de Copyright dos EUA, em Washington D.C., 20559, onde está registrado sob o No. de registro de Copyright dos EUA TXU510087. O programa ALIGN-2 é publicamente disponível a partir da Genentech, Inc., South San Francisco, Califórnia, ou pode ser compilado do código fonte. O programa ALIGN- 2 deve ser compilado para uso em um sistema operacional UNIX, incluindo o digital UNIX V4.0D. Todos os parâmetros de comparação de sequência são definidos pelo programa ALIGN-2 e não variam.

[074] Em situações onde o ALIGN-2 é utilizado para comparações da sequência de aminoácidos, a % de identidade de sequência de aminoácidos de uma dada sequência de aminoácidos A para, com ou contra uma determinada sequência de aminoácidos B (que pode ser alternativamente formulada como uma determinada sequência de aminoácidos A que tem ou compreende uma certa % de identidade de sequência de aminoácidos para, com ou contra uma dada sequência de aminoácidos B) é calculada como a seguir: 100 vezes a fração X/Y; onde X é o número de resíduos de aminoácidos marcados como correspondências idênticas pelo programa de alinhamento de sequência ALIGN-2 no alinhamento de A e B do programa, e onde Y é o número total de resíduos de aminoácidos em B. Será notado que onde o comprimento da sequência de aminoácidos A não é igual ao comprimento da sequência de aminoácidos B, a porcentagem da identidade de sequência de aminoácidos de A em relação a B não será igual à porcentagem da identidade de sequência de aminoácidos de B em relação a A. A menos que seja especificamente indicado de outra forma, todos os valores da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos usados na presente invenção são obtidos conforme descrito no parágrafo imediatamente anterior usando o programa de computador ALIGN-2.

[075] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação que está em formas de modo a permitir que a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contida seja eficaz, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação deveria ser administrada.

[076] Um "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, além de um ingrediente ativo, que é atóxico para um indivíduo. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui, mas não se limita, a um tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.

[077] O termo "pTau", como usado na presente invenção, refere-se à Tau na qual um resíduo de serina, treonina ou tirosina é fosforilado por uma proteína quinase pela adição de um grupo fosfato covalentemente ligado. Em algumas modalidades, a pTau é fosforilada em um resíduo de serina ou de treonina. Em algumas modalidades, a pTau é fosforilada na serina na posição 409 e/ou na serina na posição 404. Em uma modalidade, a pTau é fosforilada na serina na posição 409.

[078] O termo "Tau", como usado na presente invenção, refere-se a qualquer proteína Tau nativa de qualquer fonte de vertebrados, incluindo de mamíferos como primatas (por exemplo, seres humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que seja indicado de outra forma. O termo engloba Tau processada “integral”, bem como qualquer forma de Tau que resulte do processamento na célula. O termo também abrange variantes de ocorrência natural da Tau, por exemplo, variantes das variantes alélicas. A sequência de aminoácidos de uma Tau humana exemplar é mostrada na SEQ ID NO: 59.

[079] Como usado na presente invenção, "tratamento" (e variações gramaticais do mesmo, como “tratar” ou "tratando") refere-se à intervenção clínica na tentativa de alterar o curso natural do indivíduo a ser tratado, e pode ser realizado para profilaxia ou durante o curso da patologia clínica. Efeitos desejáveis do tratamento incluem, mas não se limitam, à prevenção da ocorrência ou recorrência da doença, alívio dos sintomas, uma diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, diminuição da taxa de progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e a remissão ou prognóstico melhorado. Em algumas modalidades, os anticorpos da invenção são utilizados para retardar o desenvolvimento de uma doença ou para retardar a progressão de uma doença.

[080] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvido na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas semelhantes, com cada domínio compreendendo quatro regiões de estrutura conservadas (FRs) e três regiões hipervariáveis (HVRs). (Consulte, por exemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6a ed., W.H. Freeman e Co., página 91 (2007).) Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade antígeno- ligante. Além disso, os anticorpos que se ligam a um antígeno particular podem ser isolados usando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para selecionar uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Consulte, por exemplo, Portolano et al, J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352: 624-628 (1991).

[081] O termo "vetor", como usado na presente invenção, refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual ele está ligado. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácido nucleico autorreplicante, bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual ele foi introduzido. Certos vetores são capazes de direcionar a expressão dos ácidos nucleicos, aos quais eles são operativamente ligados. Tais vetores são referidos, na presente invenção, como “vetores de expressão”.

[082] Os termos "Tau solúvel" ou "proteína Tau solúvel," como usados na presente invenção, referem-se às proteínas consistindo em dois tanto nos monômeros de proteína/peptídeo Tau completamente solubilizados ou dos peptídeos/proteínas tipo Tau, ou de peptídeos/proteínas Tau ou modificados ou truncados ou de outros derivados dos monômeros de peptídeos/proteínas Tau, e de oligômeros da proteína Tau. "Tau solúvel" exclui particularmente os emaranhados neurofibrilares (NFT).

[083] O termo "Tau insolúvel", como usado na presente invenção, refere-se a múltiplos monômeros agregados dos peptídeos ou proteínas Tau, ou de peptídeos/proteínas tipo Tau, ou de peptídeos/proteínas Tau truncadas ou de outros derivados dos peptídeos/proteínas Tau formando estruturas oligoméricas ou polímeros que são insolúveis in vitro, em meio aquoso médio e in vivo, no corpo do ser humano ou mamífero, mais particularmente no cérebro, porém particularmente em vários monômeros agregados da Tau ou dos peptídeos/proteínas Tau modificados ou truncados, ou de derivados dos mesmos, que são insolúveis no corpo humano ou mamífero, mais particularmente no cérebro, respectivamente. "Tau insolúvel" inclui particularmente os emaranhados neurofibrilares (NFT).

[084] Os termos "Tau monomérico" ou "monômero Tau", como usados na presente invenção, referem-se a proteínas Tau completamente solubilizadas sem complexos agregados em meio aquoso.

[085] Os termos "Tau agregado", "Tau oligomérico" e "oligômero Tau," como usados na presente invenção, referem-se a múltiplos monômeros agregados dos peptídeos ou proteínas Tau, ou de peptídeos/proteínas tipo Tau, ou e peptídeos/proteínas Tau modificados ou truncados ou de outros derivados dos peptídeos/proteínas Tau formando estruturas oligoméricas ou poliméricas que são insolúveis ou solúveis tanto in vitro, em meio aquoso e in vivo, no corpo humano ou de mamífero, mais particularmente no cérebro, porém particularmente em vários monômeros agregados da Tau ou dos peptídeos/proteínas Tau modificados ou truncados ou seus derivados, que são insolúveis ou solúveis no corpo do mamífero ou ser humano, mais particularmente no cérebro, respectivamente.

[086] Os termos "pTau PHF", "PHF" e "filamentos helicoidais emparelhados" são utilizados na presente invenção como sinônimos, referem-se aos pares de filamentos enrolados em hélices com uma periodicidade de 160 nm visível na microscopia eletrônica. A largura varia entre 10 e 22 nm. PHF são as estruturas predominantes nos emaranhados neurofibrilares da doença de Alzheimer (AD) e nos filamentos de neuropil. A PHF também pode ser vista em algumas, porém, não em todas as neurites distróficas associadas com as placas neuríticas. O principal componente do PHF é uma forma hiperfosforilada da proteína Tau associada à microtúbulo. O PHF pode ser parcialmente composto de proteínas Tau hiperfosforiladas antiparalelas unidas por ligações dissulfeto. A Tau PHF pode ser truncada dos seus 20 resíduos de aminoácidos C-terminais. Os mecanismos subjacentes à formação do PHF são incertos, porém a hiperfosforilação da Tau pode separá-la dos microtúbulos, e aumentando o pool solúvel de Tau, do qual o PHF pode ser formado dentro dos neurônios.

I. COMPOSIÇÕES E MÉTODOS

[087] Em um aspecto, a invenção baseia-se, em parte, na geração dos anticorpos anti-Tau. Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam à pTau são fornecidos. Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam à pTau com alta especificidade e/ou alta afinidade são fornecidos. Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam à Tau fosforilada na serina na posição 409, tais como os anticorpos que se ligam à Tau fosforilada na serina na posição 409 com alta afinidade e/ou alta especificidade são fornecidos. Os anticorpos da invenção são úteis, por exemplo, para o diagnóstico ou o tratamento de taupatias, tal como a doença de Alzheimer (AD).

A. ANTICORPOS ANTI-TAU EXEMPLARES

[088] Em um aspecto, a invenção fornece anticorpos isolados que se ligam à Tau ou a um fragmento da mesma. Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (pTau). Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga à serina fosforilada na posição 409 ("pS409") e/ou serina fosforilada na posição 404 ("pS404"). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga ao pS409. Em modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti- pTau que se liga a um epítopo que compreende os resíduos de aminoácidos 404411 da proteína Tau humana, como mostrado na SEQ ID NO: 59 (opcionalmente, com a necessidade da serina fosforilada na posição 409, ou seja, pS409). Em outras modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo que compreende os resíduos de aminoácidos 405-411 da proteína Tau humana, como mostrado na SEQ ID NO: 59 (opcionalmente, com a necessidade da pS409). Em outras modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo que compreende os resíduos de aminoácidos 401-418 da proteína Tau humana, como mostrado na SEQ ID NO: 59 (opcionalmente, com a necessidade da pS409). Em modalidades particulares, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a um epítopo fosforilado patológico na Tau (por exemplo, um epítopo fosforilado associado com uma taupatia, como a AD). Em modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a um confôrmero Tau patológico (por exemplo, um confôrmero Tau associado com uma taupatia, como a AD). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau hiperfosforilada (por exemplo, um Tau hiperfosforilada associada com uma taupatia, como a AD). Em modalidades particulares, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau agregada (por exemplo, uma Tau agregada associada com uma taupatia, como a AD). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau fosforilada agregada (por exemplo, uma proteína Tau agregada fosforilada em um epítopo associado com uma taupatia, como AD). Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga ao Tau solúvel (por exemplo, pTau solúvel). Em outras modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga à Tau insolúvel (por exemplo, pTau insolúvel). Em modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau associada a microtúbulo (por exemplo, uma Tau associada a microtúbulo associada com uma taupatia, como a AD). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau associada a microtúbulo agregada (por exemplo, uma Tau associada a microtúbulo agregada associada com uma taupatia, como a AD). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga a uma Tau associada a microtúbulo agregada e hiperfosforilada (por exemplo, uma Tau associada a microtúbulo agregada e hiperfosforilada associada com uma taupatia, como a AD). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga à Tau presente nos filamentos helicoidais emparelhados (por exemplo, nos filamentos helicoidais emparelhados associados com uma taupatia, como AD). ). Em modalidades particulares, incorporações, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga à Tau presente em emaranhados neurofibrilares pareados, filamentos de neuropil e/ou neurite distrófica (por exemplo, pTau ou Tau hiperfosforilada).

[089] Em alguns aspectos, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que reconhece especificamente e se liga à Tau (por exemplo, pTau) ou a um fragmento da mesma. Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que reconhece a pTau com alta especificidade.

[090] Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti- pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (por exemplo, fosfosserina 409, fosfosserina 404 ou fosfosserina 409 e fosfosserina 404), mas não se liga ao epítopo não fosforilado correspondente na Tau e/ou aos epítopos não relacionados. Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (por exemplo, fosfosserina 409, fosfosserina 404 ou fosfosserina 409 e fosfosserina 404), mas se liga ao epítopo da Tau que não é fosforilado com uma afinidade substancialmente reduzida. Em modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (por exemplo, fosfosserina 409, fosfosserina 404 ou fosfosserina 409 e fosfosserina 404) com uma afinidade que é pelo menos 3 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 15 vezes, pelo menos, 20, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes maior que a sua afinidade para o epítopo não fosforilado correspondente na Tau e/ou a um epítopo não relacionado. Em modalidades específicas, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (por exemplo, fosfosserina 409, fosfosserina 404 ou fosfosserina 409 e fosfosserina 404) com uma afinidade que é pelo menos 10 vezes maior que a sua afinidade com o epítopo não fosforilado correspondente na Tau e/ou a um epítopo não relacionado.

[091] Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti- Tau (por exemplo, anti-pTau) que tem alta afinidade pela Tau (por exemplo, pTau).

[092] Em modalidades particulares, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga a um epítopo fosforilado na Tau (por exemplo, fosfosserina 409 e/ou fosfosserina 404) com uma constante de dissociação (Kd) menor que 70 nM, menor que 60 nM, menor que 50 nM, menor que 45 nM, menor que 40 nM, menor que 35 nM, menor que 30 nM, menor que 25 nM, menor que 20 nM, menor que 15 nM, menor que 10 nM, menor que 9 nM, menor que 8 nM, menor que 7 nM, menor que 6 nM, menor que 5 nM, menor que 4 nM, menor que 3 nM, menor que 2 nM, menor que 1 nM, menor que 0,9 nM, menor que 0,8 nM, menor que 0,7 nM, menor que 0,6 nM, menor que 0,5 nM, menor que 0,4 nM, menor que 0,3 nM, menor que 0,2 nM ou menor que 0,1 nM (ou igual a qualquer um dos valores listados acima).

[093] Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga à pTau com uma constante da taxa de associação que é maior que 1,5 x 105 M-1 s-1, maior que 2 x 105 M-1 s-1, maior que 2,5 x 105 M-1 s-1, maior que 3 x 105 M-1 s-1, maior que 3,5 x 105 M-1 s-1, maior que 4 x 105 M-1 s-1, maior que 4,5 x 105 M-1 s-1, maior que 5 x 105 M-1 s-1, maior que 5 x 105 M-1 s-1, maior que 5,5 x 105 M-1 s-1, maior que 6 x 105 M-1 s-1, maior que 6,5 x 105 M-1 s-1, maior que 7 x 105 M-1 s-1, maior que 7,5 x 105 M-1 s-1, maior que 8 x 105 M-1 s-1, maior que 8,5 x 105 M-1 s-1, maior que 9 x 105 M-1 s-1, maior que 10 x 105 M-1 s-1, maior que 12,5 x 105 M-1 s-1 ,maior que 15 x 105 M-1 s-1, maior que 20 x 105 M-1 s-1, maior que 25 x 105 M-1 s-1, maior que 30 x 105 M-1 s-1, maior que 35 x 105 M-1 s- 1, maior que 40 x 105 M-1 s-1, maior que 45 x 105 M-1 s-1, maior que 50 x 105 M-1 s-1, ou maior que 75 x 105 M-1 s-1 ou maior que 100 x 105 M-1 s-1 (ou igual a qualquer um dos valores listados acima).

[094] Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga à pTau com uma constante da taxa de dissociação que é menor que 10 x 10-3 s-1, menor que 9 x 10-3 s-1, menor que 8 x 10-3 s-1, menor que 7 x 10-3 s-1, menor que 6 x 10-3 s-1, menor que 5 x 10-3 s-1, menor que 4 x 10-3 s-1, menor que 3 x 10-3 s-1, menor que 2 x 10-3 s-1, menor que 1 x 10-3 s-1, ou menor que 0,5 x 10-3 s-1 (ou igual a qualquer um dos valores listados acima). Em ainda outras modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga à pTau com uma constante da taxa de dissociação que é maior que 1 x 10-4 s-1, maior que 2 x 10-4 s-1, maior que 3 x 10-4 s-1, maior que 4 x 10-4 s-1, maior que 5 x 10-4 s-1, maior que 6 x 10-4 s-1, maior que 7 x 10-4 s-1, maior que 8 x 10-4 s-1, maior que 9 x 10-4 s-1, menor que 10 x 10-4 s-1 ou maior que 12 x 10-4 s-1 (ou igual a qualquer um dos valores listados acima).

[095] Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que tem alta especificidade e/ou alta afinidade por (um) epítopo(s) fosforilado(s) patológico(s) na Tau, um confôrmero Tau patológico (por exemplo, uma pTau patológica), uma Tau hiperfosforilada, uma Tau agregada (por exemplo, uma pTau agregada), uma Tau solúvel (por exemplo, uma pTau solúvel), uma Tau insolúvel (por exemplo, uma pTau insolúvel), uma Tau associada a microtúbulo (por exemplo, uma pTau associada a microtúbulo), uma Tau associada a microtúbulo agregada e hiperfosforilada, Tau presente nos filamentos helicoidais emparelhados ou Tau presente nos emaranhados neurofibrilares pareados, filamentos de neuropil e/ou neurite distrófica. Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que se liga com uma Kd, uma constante da taxa de associação ou uma constante da taxa de dissociação igual a qualquer um dos valores fornecidos acima a (um) epítopo(s) fosforilado(s) patológico(s) na Tau, um confôrmero Tau patológico (por exemplo, uma pTau patológica), uma Tau hiperfosforilada, uma Tau agregada (por exemplo, uma pTau agregada), uma Tau solúvel (por exemplo, uma pTau solúvel), uma Tau insolúvel (por exemplo, uma pTau insolúvel), uma Tau associada a microtúbulo (por exemplo, uma pTau associada a microtúbulo), uma Tau associada a microtúbulo agregada e hiperfosforilada, Tau presente nos filamentos helicoidais emparelhados ou Tau presente nos emaranhados neurofibrilares pareados, filamentos de neuropil e/ou neurite distrófica. Em algumas dessas modalidades, o anticorpo anti-Tau se liga a um epítopo fosforilado na Tau, mas não se liga (ou se liga com uma afinidade que é 5, 10, 50 ou 100 vezes menor) ao epítopo não fosforilado correspondente na Tau e/ou aos epítopos não relacionados.

[096] Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que tem alta especificidade e/ou alta afinidade por um epítopo que compreende os resíduos de aminoácidos 404-411, 405-411 ou 401-418, e inclui pS409 e/ou pS404 da proteína Tau humana. Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-pTau que se liga com uma Kd, uma constante da taxa de associação ou uma constante da taxa de dissociação igual a qualquer um dos valores fornecidos acima para um epítopo que compreende os resíduos de aminoácidos 404-411, 405-411 ou 401-418, e inclui pS409 da proteína Tau humana. Em algumas dessas modalidades, o anticorpo anti-pTau se liga ao epítopo, o qual compreende os resíduos de aminoácido 404-411, 405-411 ou 401-418, e inclui pS409, na Tau, mas não se liga (ou se liga com uma afinidade que é 5, 10, 50 ou 100 vezes menor) ao epítopo não fosforilado correspondente na Tau e/ou aos epítopos não relacionados.

[097] Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti- Tau que se liga a uma Tau de mamífero (por exemplo, pTau de mamífero) , tal como a Tau humana (por exemplo, pTau humana).

[098] Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti- Tau (por exemplo, anti-pTau) que é um anticorpo monoclonal ou um fragmento do mesmo. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) que é um anticorpo quimérico ou um fragmento do mesmo. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti- pTau) que é um anticorpo humanizado ou um fragmento do mesmo. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) que é um anticorpo humano ou um fragmento do mesmo.

[099] Em um aspecto, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau que compreende pelo menos uma, duas, três, quatro, cinco, ou seis HVRs selecionadas a partir de (a) uma HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) uma HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) uma HVR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) uma HVR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 ou da SEQ ID NO:14; (e) uma HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ou da SEQ ID NO:26; e (f) uma HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 ou SEQ ID NO:32.

[0100] Em um aspecto, a invenção fornece um anticorpo que compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências VH HVR selecionadas a partir de (a) HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; e (c) HVR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35. Em uma modalidade, o anticorpo compreende a HVR-H3, compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35. Em outra modalidade, o anticorpo compreende a HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 e da HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 ou da SEQ ID NO: 32. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende a HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35, HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 ou da SEQ ID NO: 32, e a HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34. Em uma outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; e (c) HVR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35.

[0101] Em outro aspecto, a invenção fornece um anticorpo que compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as todas as três sequências VL HVR selecionadas a partir de (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 ou SEQ ID NO:14; (b) HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ou SEQ ID NO:26; e (c) HVR- L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 ou da SEQ ID NO:32. Em outra modalidade, o anticorpo compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 ou SEQ ID NO:14; (b) HVR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ou SEQ ID NO:26; e (c) HVR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 ou SEQ ID NO:32.

[0102] Em outro aspecto, um anticorpo da invenção compreende (a) um domínio VH, que compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências VH HVR selecionadas a partir da (i) HVR-R1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33, (ii) HVR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34 e (iii) HVR-H3 que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada da de SEQ ID NO: 35; e (b) um domínio VL que compreende pelo menos uma, pelo menos duas ou todas as três sequências VL HVR selecionadas a partir de (i) HVR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 ou SEQ ID NO:14, (ii) HVR-L2, compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ou SEQ ID NO:26; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 ou SEQ ID NO:32.

[0103] Em um aspecto, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) uma HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13 ou da SEQ ID NO:14; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 ou da SEQ ID NO:26; e (f) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 ou SEQ ID NO:32.

[0104] Em certas modalidades, qualquer um ou mais aminoácidos de um anticorpo anti-Tau compreendendo a HVR-L1 da SEQ ID NO: 15, a HVR-L2 da SEQ ID NO: 16 e a HVR-L3 da SEQ ID NO: 30 é substituído nas seguintes posições da HVR (conforme definido por Kabat): na HVR-L1 (SEQ ID NO: 15): posições Kabat 24, 27A, 27C, 27D, 27E, 28, 30 e 33 na HVR-L2 (SEQ ID NO: 16): posições Kabat, 52, 53 e 56 na HVR-L3 (SEQ ID NO: 30): posições Kabat, 92, 93 e 96

[0105] Em certas modalidades, as substituições são substituições conservadoras, tal como é previsto na presente invenção. Em certas modalidades, qualquer uma ou mais das seguintes substituições podem ser realizadas em qualquer combinação nas posições de Kabat indicadas: na HVR-L1 (SEQ ID NO: 15): R24T; S27aR ou V; V27cR ou I; H27dR; S27eR, G ou K; H28R, K, N ou G; K30R; ou L33V na HVR-L2 (SEQ ID NO: 16): S52K ou R; N53K ou H; ou S56F, G, K, R, Y ou L na HVR-L3 (SEQ ID NO: 30): A92R, H93R, Q ou Y; ou Y96R.

[0106] Todas as combinações possíveis das substituições acima estão englobadas pelas seguintes sequências de consenso: HVR-L1, compreendendo a sequência de aminoácidos X1SSQX2LX3X4X5X6GX7TYX8H (SEQ ID NO:89), em que X1=R ou T; X2=S, R ou V; X3=V, I ou R; X4=H ou R; X5=S, R, G ou K; X6=H, N, R, K ou G; X7=K ou R; e X8=L ou V; HVR-L2, compreendendo a sequência de aminoácidos KVX9X10RFX11 (SEQ ID NO:90), em que X9=S, K ou R; X10=N, K ou H; e X11=S, F, G, K, R, Y ou L, HVR-L3 compreende a sequência de aminoácidos SQTX12X13FPX14T (SEQ ID NO: 91), em que X12=A ou R; X13=H, R, Q ou Y; X14=Y ou R.

[0107] Em modalidades específicas, o anticorpo tendo a sequência consenso apresentada acima não compreende as três das seguintes sequências HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3: HVR-L1, consistindo em RSSQSLVHSHGKTYLH (SEQ ID NO:15) ou RSSQRLVHSHGKTYLH (SEQ ID NO:92); HVR-L2, consistindo em KVSNRFS (SEQ ID NO:16); e HVR-L3, consistindo em SQTAHFPYT (SEQ ID NO:30).

[0108] Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR- L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31.

[0109] Em uma modalidade específica, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16; e (f) HVR-L3, que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. Em outra modalidade específica, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (f) HVR-L3, que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. Em outra modalidade específica, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21; e (f) HVR-L3, que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29. Em ainda outra modalidade específica, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; e (f) HVR-L3, que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31. Em ainda outra modalidade específica, a invenção fornece um anticorpo que compreende (a) HVR-H1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35; (d) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9; (e) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17; e (f) HVR-L3, que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31.

[0110] Em qualquer uma das modalidades acima, um anticorpo anti- Tau pode ser humanizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-Tau compreende HVRs, como em qualquer uma das modalidades acima, e compreende ainda uma estrutura humana aceitadora, por exemplo, uma estrutura de imunoglobulina humana ou uma estrutura de consenso humana. Em outra modalidade, um anticorpo anti-Tau compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades acima, e compreende ainda uma VH, que compreende a sequência da SEQ ID NO: 58. Em outra modalidade, um anticorpo anti-Tau compreende HVRs como em qualquer uma das modalidades a acima e, adicionalmente, compreende uma sequência compreendendo a VL da SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56 ou da SEQ ID NO:57.

[0111] Em outro aspecto, um anticorpo anti-Tau compreende uma sequência do domínio variável da cadeia pesada (VH) com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 58. Em certas modalidades, uma sequência VH com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-Tau compreendendo essa sequência preserva a capacidade de se ligar à Tau. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram sido substituídos, inseridos e/ou eliminados na SEQ ID NO: 58. Em certas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VH na SEQ ID NO: 58, incluindo as modificações pós-tradução daquela sequência. Em uma modalidade particular, a VH compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas da: (a) HVR-H1 compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33; (b) HVR-H2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34; e (c) HVR-H3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35.

[0112] Em outro aspecto, um anticorpo anti-Tau é fornecido, em que o anticorpo compreende um domínio variável da cadeia leve (VL) com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56 ou da SEQ ID NO:57. Em certas modalidades, uma sequência VL com pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade contém substituições (por exemplo, substituições conservadoras), inserções ou deleções em relação à sequência de referência, mas um anticorpo anti-Tau compreendendo essa sequência preserva a capacidade de se ligar à Tau. Em certas modalidades, um total de 1 a 10 aminoácidos foram substituídos, inseridos e/ou deletados na SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:56 ou na SEQ ID NO:57. Em certas modalidades, as substituições, inserções ou deleções ocorrem em regiões fora das HVRs (ou seja, nas FRs). Opcionalmente, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VL na SEQ ID NO: 36, incluindo as modificações pós-tradução daquela sequência. Em uma modalidade, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VL na SEQ ID NO: 37, incluindo as modificações pós-tradução daquela sequência. Em uma modalidade, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VL na SEQ ID NO: 44, incluindo as modificações pós- tradução daquela sequência. Em ainda outra modalidade, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VL da SEQ ID NO: 54, incluindo as modificações pós- tradução daquela sequência. Em ainda outra modalidade, o anticorpo anti-Tau compreende a sequência VL da SEQ ID NO: 55, incluindo as modificações pós- tradução daquela sequência. Em uma modalidade particular, a VL compreende uma, duas ou três HVRs selecionadas a partir da (a) HVR-L1, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 ou da SEQ ID NO:14; (b) HVR-L2, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:21 ou da SEQ ID NO:25; e a (c) HVR-L3, que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29 ou da SEQ ID NO:31.

[0113] Em outro aspecto, um anticorpo anti-Tau é fornecido, em que o anticorpo compreende uma VH, como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima, e uma VL, como em qualquer uma das modalidades fornecidas acima. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências VH e VL na SEQ ID NO: 58 e na SEQ ID NO: 36, respectivamente, incluindo as modificações pós-tradução daquelas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências VH e VL na SEQ ID NO: 58 e na SEQ ID NO: 37, respectivamente, incluindo as modificações pós-tradução daquelas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências VH e VL na SEQ ID NO: 58 e na SEQ ID NO: 44, respectivamente, incluindo as modificações pós-tradução daquelas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências VH e VL na SEQ ID NO: 58 e na SEQ ID NO: 54, respectivamente, incluindo as modificações pós-tradução daquelas sequências. Em uma modalidade, o anticorpo compreende as sequências VH e VL na SEQ ID NO: 58 e na SEQ ID NO: 55, respectivamente, incluindo as modificações pós-tradução dessas sequências.

[0114] Em um outro aspecto, a invenção fornece um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo que um anticorpo anti-Tau fornecido na presente invenção. Por exemplo, em certas modalidades, um anticorpo é fornecido que se liga ao mesmo epítopo que um anticorpo compreendendo uma sequência VH da SEQ ID NO: 58 e uma sequência VL selecionada do grupo consistindo na SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 54 e SEQ ID NO: 55. Em certas modalidades, um anticorpo é fornecido que e liga a um epítopo fosforilado dentro de um fragmento da Tau, consistindo nos aminoácidos 401 a 418, ou consistindo nos aminoácidos 404 a 411, ou consistindo nos aminoácidos 405 a 411 da SEQ ID NO: 59.

[0115] Em um outro aspecto da invenção, um anticorpo anti-Tau, de acordo com qualquer uma das modalidades acima, é um anticorpo monoclonal, incluindo um anticorpo quimérico, humanizado ou humano. Em uma modalidade, um anticorpo anti-Tau é um fragmento de anticorpo, por exemplo, um fragmento Fv, Fab, Fab', scFv, diacorpo ou F(ab')2. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo integral, por exemplo, um anticorpo de IgG1 N297G, IgG2, IgG3 ou IgG4 intacto ou outra classe de anticorpo ou isotipo, conforme é definido na presente invenção.

[0116] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-Tau, de acordo com qualquer uma das modalidades acima, pode incorporar qualquer uma das características, isoladamente ou em combinação, conforme descrito nas seções 1 a 7 abaixo:

1. AFINIDADE DO ANTICORPO

[0117] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção tem uma constante de dissociação (Kd) < 1μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0,1 nM, < 0,01 nM ou < 0,001 nM (por exemplo, igual a 10-8 M ou menos, por exemplo, de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M).

[0118] Em uma modalidade, a Kd é medida por um ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA). Em uma modalidade, uma RIA é realizada com a versão Fab de um anticorpo de interesse e o seu antígeno. Por exemplo, a afinidade de ligação da solução dos Fabs ao antígeno pode ser medida pelo equilíbrio do Fab com uma concentração mínima de antígeno marcado com (125I) na presença de uma série de titulações do antígeno não marcado, em seguida, pela captura do antígeno ligado com uma placa revestida com anticorpo anti-Fab (Chen, et al. (1999) J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)). Para estabelecer condições para o ensaio, as placas de múltiplos poços MICROTITER® (Thermo Scientific) são revestidas de um dia para o outro com 5 μg/mL de um anticorpo anti-Fab de captura (Cappel Labs) em carbonato de sódio 50 mM (pH 9,6) e, posteriormente, bloqueadas com albumina de soro bovino 2% (p/v) em PBS durante duas a cinco horas em temperatura ambiente (cerca de 23 °C). Em uma placa não adsorvente (Nunc No. 269620), 100 pM ou 26 pM de antígeno [125I] são misturados com diluições em série de um Fab de interesse (por exemplo, consistente com a avaliação de um anticorpo anti-VEGF, Fab-12 em Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). O Fab de interesse é, em seguida, incubado de um dia para o outro; no entanto, a incubação pode continuar por um período mais longo (por exemplo, durante 65 horas) para garantir que o equilíbrio é atingido. Depois disso, as misturas são transferidas para a placa de captura para incubação em temperatura ambiente (por exemplo, durante uma hora). A solução é, em seguida, removida e a placa é lavada oito vezes com polissorbato 20 (TWEEN-20®) 0,1% em PBS. Quando as placas secaram, 150 μL/poço de scintillant (MicroScint-20; Packard) é adicionado, e as placas são contadas em um contador de radiação gama TOPCOUNT™ (Packard) durante dez minutos. As concentrações de cada Fab que produzem menos de ou 20% de ligação máxima são escolhidas para uso nos ensaios de ligação competitiva.

[0119] De acordo com outra modalidade, a Kd é medida usando um ensaio de ressonância de plasmônio de superfície BIACORE®. Por exemplo, um ensaio usando uma BIACORE®-2000 ou uma BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) é realizado a 25 °C, com chips CM5 com antígeno imobilizado em ~10 unidades de resposta (RU). Em uma modalidade, os chips biossensores de dextrana carboximetilada (CM5, BIACORE, Inc.) são ativados com cloridrato de N- etil-N'-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida (EDC) e N-hidroxisuccinimida (NHS), de acordo com as instruções do fornecedor. O antígeno é diluído com acetato de sódio 10 mM, pH 4,8, até 5 μg/mL (-0,2 μM) antes da injeção com uma vazão de 5 μL/minuto para atingir cerca de 10 unidades de resposta (RU) da proteína acoplada. Após a injeção do antígeno, etanolamina 1 M é injetada para bloquear os grupos que não reagiram. Para as medições de cinética, diluições em série de Fab de duas vezes (0,78 nM a 500 nM) são injetadas em PBS com polissorbato 20 0,05% (TWEEN-20™) a 25 °C com uma vazão de cerca de 25 μL/min. As taxas de associação (k ) e de dissociação (k ) podem ser calculadas usando um modelo de ligação de Langmuir simples de um para um simples (versão 3.2 do software de avaliação BIAcore) pelo ajuste simultâneo dos sensorgramas de associação e dissociação. A constante de dissociação de equilíbrio (Kd) é calculada como a razão koff/kon. Consulte, por exemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999). Se a taxa de associação exceder 106 M-1 s-1 pelo ensaio de ressonância de plasmônio de superfície acima, então a taxa de associação pode ser determinada usando uma técnica de supressão fluorescente que mede o aumento ou a diminuição da intensidade de emissão de fluorescência (excitação = 295 nm; emissão = 340 nm, 16 nm de gama de comprimentos) a 25oC de um anticorpo antiantígeno 20 nM (forma Fab) em PBS, pH 7,2, na presença de concentrações crescentes de antígeno, conforme medido em um espectrômetro, como em um espectrofotômetro equipado com interruptor de fluxo (Aviv Instruments) ou um espectrofotômetro SLM-AMINCO™ série 8000 (ThermoSpectronic) com uma cubeta agitada.

2. FRAGMENTOS DE ANTICORPO

[0120] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção é um fragmento de anticorpo. Fragmentos de anticorpo incluem, mas não se limitam, aos fragmentos Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv, e scFv, e outros fragmentos descritos abaixo. Para uma revisão de certos fragmentos de anticorpos, consulte Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003). Para uma revisão de fragmentos scFv, consulte, por exemplo, Pluckthün, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., (Springer-Verlag, Nova Iorque), pp. 269-315 (1994); consulte também o documento WO 93/16185; e as Patentes Norte-Americanas Nos. 5.571.894 e 5.587.458. Para a discussão dos fragmentos Fab e F(ab')2 compreendendo resíduos de epítopo de ligação ao receptor de recuperação e com maior meia-vida in vivo, consulte a Patente Norte- Americana No. 5.869.046.

[0121] Diacorpos são fragmentos de anticorpos com dois sítios de ligação ao antígeno que podem ser bivalentes ou biespecíficos. Consulte, por exemplo, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); e Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Triacorpos e tetracorpos também são descritos em Hudson et al, Nat. Med. 9: 129-134 (2003).

[0122] Anticorpos de domínio único são fragmentos de anticorpos compreendendo toda ou uma porção do domínio variável da cadeia pesada, ou toda ou uma porção do domínio variável da cadeia leve de um anticorpo. Em certas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; consulte, por exemplo, a Patente Norte- Americana No. 6.248.516 B1).

[0123] Os fragmentos de anticorpo podem ser feitos por várias técnicas, incluindo, mas sem se limitar, à digestão proteolítica de um anticorpo intacto, bem como à produção por células hospedeiras recombinantes (por exemplo, E. coli ou fago), conforme descrito na presente invenção.

3. ANTICORPOS QUIMÉRICOS E HUMANIZADOS

[0124] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção é um anticorpo quimérico. Certos anticorpos quiméricos são descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana No. 4.816.567; e em Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)). Em um exemplo, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de um camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano, tal como um macaco) e uma região constante humana. Em um outro exemplo, um anticorpo quimérico é um anticorpo que "mudou de classe", em que a classe ou subclasse mudou da do anticorpo original. Anticorpos quiméricos incluem os seus fragmento de ligação ao antígeno.

[0125] Em certas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Tipicamente, um anticorpo não humano é humanizado para reduzir a imunogenicidade aos seres humanos, mantendo ao mesmo tempo a especificidade e a afinidade do anticorpo não humano original. Em geral, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis, em que as HVRs, por exemplo, as CDRs, (ou porções das mesmas) são derivadas de um anticorpo não humano, e FRs (ou partes delas) são derivadas de sequências de anticorpo humano. Um anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá, pelo menos, uma porção de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos da FR em um anticorpo humanizado são substituídos com resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos HVR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou a afinidade do anticorpo.

[0126] Anticorpos humanizados e métodos para fazê-los são revistos, por exemplo, em Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), e são adicionalmente descritos, por exemplo, em Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); nas Patentes Norte-Americanas Nos. 5.821.337, 7.527.791, 6.982.321 e 7.087.409; Kashmiri et al., Methods 36: 25-34 (2005) (descrevendo o enxerto da região determinante de especificidade (SDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (descrevendo o “novo revestimento”); Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (descrevendo o “embaralhamento de FR”); e Osbourn et al., Methods 36: 61-68 (2005) e Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (descrevendo a abordagem de “seleção guiada” para o embaralhamento de FR).

[0127] As regiões de estrutura humana que podem ser usadas para humanização incluem, mas não se limitam, às: regiões de estrutura selecionadas usando o método de "melhor ajuste" (consulte, por exemplo, Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)); as regiões de estrutura derivadas da sequência consenso de anticorpos humanos de um subgrupo particular das regiões variáveis de cadeia leve ou pesada (consulte, por exemplo, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); e Presta et al. J. Immunol., 151: 2623 (1993)); regiões de estrutura maduras humanas (somaticamente modificada) ou regiões de estrutura da linhagem germinativa humana (consulte, por exemplo, Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); e as regiões de estrutura derivadas da varredura das bibliotecas FR (consulte, por exemplo, Baca et al, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) e Rosok et al., J. Biol. Chem. 271: 22611-22618 (1996)).

4. ANTICORPOS HUMANOS

[0128] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção é um anticorpo humano. Anticorpos humanos podem ser produzidos utilizando várias técnicas conhecidas na arte. Os anticorpos humanos são descritos geralmente em van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) e Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).

[0129] Os anticorpos humanos podem ser preparados através da administração de um imunógeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao desafio antigênico. Tais animais normalmente contêm todas ou uma porção dos loci da imunoglobulina humana, que substituem os loci de imunoglobulina endógena, ou que estão presentes extracromossomicamente ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais camundongos transgênicos, os loci da imunoglobulina endógena geralmente foram inativados. Para uma revisão dos métodos para a obtenção de anticorpos humanos de animais transgênicos, consulte Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005). Consulte também, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas Nos. 6.075.181 e 6.150.584, descrevendo a tecnologia XENOMOUSE™; a Patente Norte-Americana No. 5.770.429, que descreve a tecnologia HuMab®; a Patente Norte-Americana No. 7.041.870, descrevendo a tecnologia K-M MOUSE® e a Publicação do Pedido de Patente Norte-Americano No. US 2007/0061900, descrevendo a tecnologia VelociMouse®). As regiões variáveis humanas dos anticorpos intactos gerados por tais animais podem ser adicionalmente modificadas, por exemplo, combinando com uma região constante humana diferente.

[0130] Os anticorpos humanos também podem ser feitos por métodos baseados no hibridoma. O mieloma humano e as linhagens celulares de heteromielona de camundongo-humano para a produção de anticorpos monoclonais humanos foram descritos. (Consulte, por exemplo, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nova Iorque, 1987); e Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991).) Os anticorpos humanos gerados por meio da tecnologia do hibridoma de célula B humana também são descritos em Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 3557-3562 (2006). Métodos adicionais incluem aqueles descritos, por exemplo, na Patente Norte-Americana No. 7.189.826 (descrevendo a produção de anticorpos de IgM monoclonais humanos a partir das linhagens celulares do hibridoma) e Ni, Xiandai Mianyixue, 4: 265-268 (2006) (descrevendo os hibridomas humano-humano). A tecnologia do hibridoma humano (tecnologia Trioma) também é descrita em Vollmer e Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e em Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005).

[0131] Os anticorpos humanos também podem ser gerados pelo isolamento das sequências do domínio variável do clone Fv selecionadas dentre as bibliotecas de exibição de fago derivadas de seres humanos. As sequências podem, então, ser combinadas com um domínio constante humano desejado. As técnicas para selecionar os anticorpos humanos das bibliotecas de anticorpo são descritas abaixo.

5. ANTICORPOS DERIVADOS DE BIBLIOTECA

[0132] Os anticorpos da invenção podem ser isolados por bibliotecas de triagem combinatória para os anticorpos com a atividade ou atividades desejadas. Por exemplo, uma variedade de métodos são conhecidos na técnica para gerar bibliotecas de exibição de fago e testar essas bibliotecas para os anticorpos que possuem as características de ligação desejadas. Tais métodos são revistos, por exemplo, em Hoogenboom et al. em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) e são adicionalmente descritos, por exemplo, em McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks e Bradbury, em Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); e Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).

[0133] Em certos métodos de exibição de fago, os repertórios dos genes VH e VL são, separadamente, clonados por reação em cadeia da polimerase (PCR) e recombinados aleatoriamente nas bibliotecas de fago, que podem ser, então, testadas para o fago de ligação ao antígeno, conforme descrito em Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). O fago tipicamente exibe fragmentos de anticorpos, como fragmentos de cadeia única Fv (scFv) ou como fragmentos de Fab. As bibliotecas das fontes imunizadas fornecem anticorpos de alta afinidade para o imunógeno sem a necessidade de construir hibridomas. Alternativamente, o repertório virgem pode ser clonado (por exemplo, de ser humano) para fornecer uma única fonte de anticorpos para uma ampla gama de autoantígenos e de não autoantígenos sem qualquer imunização, conforme descrito por Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). Por fim, bibliotecas virgens também podem ser feitas sinteticamente por clonagem de segmentos do gene V não rearranjados de células tronco, e usando iniciadores de PCR contendo a sequência aleatória para codificar as regiões de CDR3 altamente variáveis e realizar o rearranjo in vitro, tal como descrito por Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). As publicações de patentes descrevendo as bibliotecas do fago de anticorpo humano incluem, por exemplo: a Patente Norte-Americana No. 5.750.373 e as Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 e 2009/0002360.

[0134] Anticorpos ou fragmentos de anticorpos isolados de bibliotecas de anticorpo humano são considerados anticorpos humanos ou fragmentos de anticorpos humanos, na presente invenção.

6. ANTICORPOS MULTIESPECÍFICOS

[0135] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção é um anticorpo multiespecífico, por exemplo, um anticorpo biespecífico. Anticorpos multiespecíficos são anticorpos monoclonais que têm especificidades de ligação para pelo menos dois sítios diferentes. Em certas modalidades, uma das especificidades de ligação é para a Tau (por exemplo, pTau) e a outra é para qualquer outro antígeno. Em certas modalidades, os anticorpos biespecíficos podem se ligar a dois epítopos diferentes da Tau (por exemplo, pTau). Anticorpos biespecíficos também podem ser usados para localizar agentes citotóxicos para as células que expressam a Tau. Os anticorpos biespecíficos podem ser preparados como anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpos.

[0136] Técnicas para fazer anticorpos multiespecíficos incluem, mas não se limitam, à coexpressão recombinante de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina com diferentes especificidades (consulte Milstein e Cuello, Nature 305: 537 (1983); WO 93/08829 e Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)); e a engenharia “knob-in-hole” (consulte, por exemplo, a Patente Norte- Americana No. 5.731.168). Anticorpos multiespecíficos também podem ser feitos pela projeção de efeitos de condução eletrostáticos para fazer moléculas de anticorpo Fc-heterodiméricas (WO 2009/089004A1); a reticulação de dois ou mais anticorpos ou fragmentos (consulte, por exemplo, a Patente Norte-Americana No. 4.676.980 e Brennan et al, Science, 229: 81 (1985)); usando zíperes de leucina para produzir anticorpos biespecíficos (consulte, por exemplo, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5(: 1547-1553 (1992)); usando a tecnologia de "diacorpo" para fazer fragmentos de anticorpos biespecíficos (consulte, por exemplo, Hollinger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)); e usando dímeros Fv (sFv) de cadeia única (consulte, por exemplo, Gruber et al., J. Immunol., 152: 5368 (1994)); e preparar os anticorpos triespecíficos como descrito, por exemplo, em Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).

[0137] Os anticorpos manipulados com três ou mais sítios de ligação ao antígeno funcionais, incluindo "anticorpos octopus" também estão incluídos na presente invenção (consulte, por exemplo, US 2006/0025576A1).

[0138] O anticorpo ou o fragmento na presente invenção inclui um "Fab de ação dupla" ou "DAF", compreendendo um sítio de ligação ao antígeno que se liga à Tau (por exemplo, pTau), bem como outro antígeno diferente (consulte, por exemplo, a US 2008/0069820, por exemplo).

[0139] Além disso, os anticorpos da presente invenção podem ser manipulados para ter vantagem do transporte mediado por receptor (RMT) pela barreira hematoencefálica (BBB) por vários receptores que exploram a BBB (ou seja, o receptor de transferrina, o receptor de insulina, a proteína 8 relacionada com a lipoproteína de baixa densidade, o transportador de glicose 1 (Glut1) e similares) (consulte, por exemplo, a WO9502421). Por exemplo, os anticorpos da presente invenção podem se tornar multiespecíficos para a Tau alvo e o receptor da BBB. Um exemplo não limitante de um anticorpo multiespecífico inclui um anticorpo biespecífico, no qual um braço do anticorpo é que um fragmento de anticorpo da presente invenção e o outro braço do anticorpo alveja um receptor da BBB que medeia o transporte através da BBB. O receptor da BBB, por exemplo, pode incluir o receptor da transferrina (TfR), o receptor da insulina, o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina (receptor do IGF), a proteína 8 relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade (LRP8), a proteína 1 relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade (LRP1), o transportador de glicose 1 (Glut1) e o fator de crescimento tipo fator de crescimento epidérmico de ligação à heparina (HB-EGF).

7. VARIANTES DE ANTICORPO

[0140] Em certas modalidades, as variantes da sequência de aminoácidos dos anticorpos fornecidos na presente invenção são contempladas. Por exemplo, pode ser desejável melhorar a afinidade obrigatória e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. As variantes da sequência de aminoácidos de um anticorpo podem ser preparadas através da introdução de modificações apropriadas na sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo, ou pela síntese de peptídeo. Tais modificações incluem, por exemplo, deleções de, e/ou inserções em e/ou substituições de resíduos dentro de sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição pode ser feita para obter o constructo final, contanto que o constructo final possua as características desejadas, por exemplo, de ligação ao antígeno.

a) VARIANTES DE SUBSTITUIÇÃO, INSERÇÃO E DELEÇÃO

[0141] Em certas modalidades, as variantes do anticorpo tendo uma ou mais substituições de aminoácidos são fornecidas. Os sítios de interesse para a mutagênese substitucional incluem as HVRs e as FRS. As substituições conservadoras são mostradas na tabela A, sob o título "substituições preferenciais". Alterações mais substanciais são fornecidas na tabela A, sob o título "substituições exemplares", e como é adicionalmente descrito abaixo em referência às classes de cadeia lateral de aminoácido. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em um anticorpo de interesse e os produtos podem ser selecionados para uma atividade desejada, por exemplo, ligação ao antígeno preservada/melhorada, imunogenicidade reduzida ou ADCC ou CDC melhorada. TABELA A

[0142] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as propriedades da cadeia lateral comuns: (1) hidrofóbicos: norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácidos: Asp, Glu; (4) básicos: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; (6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.

[0143] As substituições não conservadoras irão implicar na troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.

[0144] Um tipo de variante de substituição envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo original (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Em geral, a(s) variante(s) selecionada(s) para um estudo mais aprofundado terão modificações (por exemplo, melhorias) em certas propriedades biológicas (por exemplo, aumento de afinidade, imunogenicidade reduzida) em relação ao anticorpo original e/ou terão certas propriedades biológicas substancialmente retidas do anticorpo original. Uma variante de substituição exemplar é um anticorpo de afinidade maturada, o qual pode ser convenientemente gerado, por exemplo, usando técnicas de maturação de afinidade baseadas em exibição de fago, tais como aquelas descritas na presente invenção. Em resumo, um ou mais resíduos HVR são modificados e os anticorpos variantes exibidos no fago e testados para uma atividade biológica particular (por exemplo, afinidade de ligação).

[0145] Alterações (por exemplo, substituições) podem ser feitas nas HVRs, por exemplo, para melhorar a afinidade do anticorpo. Tais alterações podem ser feitas em “hotspots” da HVR, ou seja, em resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (consulte, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), e/ou resíduos que entram em contato com o antígeno, com a variante VH ou VL resultante sendo testada quanto à afinidade de ligação. A maturação de afinidade pela construção e nova seleção de bibliotecas secundárias foi descrita, por exemplo, em Hoogenboom et al. em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001).) Em algumas modalidades da maturação de afinidade, a diversidade é introduzida nos genes variáveis genes escolhidos para a maturação por qualquer um de vários métodos (por exemplo, PCR propenso a erro, emparelhamento de cadeia ou mutagênese direcionada a oligonucleotídeo). Uma secundária biblioteca é, então, criada. A biblioteca é, em seguida, testada para identificar quaisquer variantes de anticorpo com a afinidade desejada. Outro método para introduzir a diversidade envolve a abordagem direcionada pela HVR, em que vários resíduos HVR (por exemplo, 4 a 6 resíduos de cada vez) são randomizados. Os resíduos HVR envolvidos na ligação ao antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, usando a mutagênese de varredura de alanina ou modelagem. A H3 da CDR e a L3 da CDR -L3 são, em particular, frequentemente orientadas.

[0146] Em certas modalidades, as substituições, inserções ou deleções podem ocorrer dentro de uma ou mais HVRs, contanto que tais alterações não reduzam substancialmente a capacidade do anticorpo de se ligar ao antígeno. Por exemplo, alterações conservadoras (por exemplo, substituições conservadoras, tal como é fornecido na presente invenção) que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação, podem ser feitas nas HVRs. Tais alterações podem, por exemplo, estar fora dos resíduos de contato com o antígeno nas HVRs. Em certas modalidades das sequências VH e VL variantes fornecidas acima, cada HVR é inalterado ou contém no máximo uma, duas ou três substituições de aminoácidos.

[0147] Um método útil para a identificação dos resíduos ou das regiões de um anticorpo que podem ser orientadas para a mutagênese é denominado “mutagênese de varredura de alanina”, tal como é descrito por Cunningham e Wells (1989) Science, 244: 1081-1085. Nesse método, um resíduo ou um grupo de resíduos alvos (por exemplo, resíduos carregados, como arg, asp, his, lys e glu) são identificados e substituídos por um aminoácido neutro ou negativamente carregado (por exemplo, alanina ou polialanina) para determinar se a interação do anticorpo com o antígeno é afetada. Outras substituições podem ser introduzidas nos locais dos aminoácidos, demonstrando sensibilidade funcional com as substituições iniciais. Alternativamente, ou adicionalmente, uma estrutura cristalina de um complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o antígeno. Such contact residues and neighboring residues may be targeted or eliminated as candidates for substitution. As variantes podem ser testadas para determinar se elas contêm as propriedades desejadas.

[0148] As inserções da sequência de aminoácidos incluem fusões amino e/ou carboxiterminais que variam em comprimento de um resíduo a polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, bem como inserções intrassequenciais de resíduos de aminoácidos simples ou múltiplos. São exemplos de inserções terminais um anticorpo com um resíduo de metionila N-terminal. Outras variantes de inserção da molécula do anticorpo incluem a fusão ao N ou C- terminal do anticorpo para uma enzima (por exemplo, para ADEPT) ou um polipeptídeo o qual aumenta a meia-vida no soro do anticorpo.

b) VARIANTES DE GLICOSILAÇÃO

[0149] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção é alterado para aumentar ou diminuir a extensão na qual o anticorpo é glicosilado. A adição ou a deleção dos sítios de glicosilação a um anticorpo pode ser convenientemente realizada alterando a sequência de aminoácidos, de modo que um ou mais sítios de glicosilação seja(m) criado(s) ou removido(s).

[0150] Onde o anticorpo compreende uma região Fc, o carboidrato ligado a ele pode ser alterado. Os anticorpos nativos produzidos pelas células de mamífero compreendem tipicamente um oligossacarídeo biantenário ramificado, o qual é geralmente ligado por uma ligação N ao Asn297 do domínio CH2 da região Fc. Consulte, por exemplo, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997). O oligossacarídeo pode incluir vários carboidratos, por exemplo, a manose, N- acetilglucosamina (GlcNAc), galactose e ácido siálico, bem como uma fucose ligada a um GlcNAc na "haste" da estrutura de oligossacarídeo biantenária. Em algumas modalidades, as modificações do oligossacarídeo em um anticorpo da invenção podem ser feitas para criar variantes do anticorpo com certas propriedades melhoradas.

[0151] Em uma modalidade, as variantes do anticorpo são fornecidas com uma estrutura de carboidratos que não tem fucose ligada (diretamente ou indiretamente) a uma região Fc. Por exemplo, a quantidade de fucose em tal anticorpo pode ser de 1% a 80%, de 1% a 65%, de 5% a 65% ou de 20% a 40%. A quantidade de fucose é determinada pelo cálculo da quantidade média de fucose na cadeia de açúcar no Asn297, em relação à soma de todas as glicoestruturas ligadas a um Asn 297 (por exemplo, estruturas complexas, híbridas e de alto teor de manose), como medido por espectrometria de massa MALDI-TOF, conforme descrito em WO 2008/077546, por exemplo. O Asn297 refere-se ao resíduo de asparagina localizado aproximadamente na posição 297 na região Fc (numeração Eu dos resíduos da região Fc); no entanto, o Asn297 também pode estar localizado a cerca de ± 3 aminoácidos a montante ou a jusante da posição 297, ou seja, entre as posições 294 e 300, devido às variações de sequência secundárias nos anticorpos. Tais variantes de fucosilação podem ter função melhorada da ADCC. Consulte, por exemplo, as Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos. US 2003/0157108 (Presta, L.)US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Exemplos de publicações relacionadas com as variantes de anticorpo “desfucosiladas” ou “deficientes em termos de fucose” incluem: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Exemplos de linhagens celulares capazes de produzir anticorpos desfucosilados incluem as células Lec13 CHO deficientes em termos de fucosilação de proteína (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); Pedido de Patente Norte-Americana No. US 2003/0157108 A1, Presta, L; e WO 2004/056312 A1, Adams et al, especialmente no exemplo 11) e linhagens de células nocaute, como o gene da alfa-1,6-fucosiltransferase, FUT8, de células CHO nocaute (consulte, por exemplo, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); e WO2003/085107).

[0152] Variantes de anticorpos são adicionalmente fornecidas com oligossacarídeos bisseccionados, por exemplo, em que um oligossacarídeo biantenário ligado à região Fc do anticorpo é dividido pela GlcNAc. Tais variantes de anticorpo podem apresentar fucosilação reduzida e/ou função melhorada da ADCC. Exemplos de tais variantes de anticorpo são descritos, por exemplo, em WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.);na Patente Norte-Americana No. 6.602.684 (Umana et al.);e na US 2005/0123546 (Umana et al.). As variantes do anticorpo com pelo menos um resíduo de galactose no oligossacarídeo ligado à região Fc também são fornecidas. Tais variantes de anticorpo podem ter função melhorada da CDC. Tais variantes de anticorpo são descritas, por exemplo, em WO 1997/30087 (Patel et al.);WO 1998/58964 (Raju, S.);e WO 1999/22764 (Raju, S.).

c) VARIANTES DA REGIÃO FC

[0153] Em certas modalidades, uma ou mais modificações de aminoácidos podem ser introduzidas na região Fc de um anticorpo fornecido na presente invenção, gerando através disso uma variante da região Fc. A variante da região Fc pode compreender uma sequência da região Fc humana (por exemplo, uma região Fc da IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 humana) compreendendo uma modificação de aminoácido (por exemplo, uma substituição) em uma ou mais posições de aminoácidos.

[0154] Em certas modalidades, a invenção contempla uma variante de anticorpo que possui algumas, porém não todas as funções efetoras, o que a torna um candidato desejável para aplicações em que a meia-vida do anticorpo in vivo é importante, ainda que certas funções efetoras (como complemento e ADCC) sejam desnecessárias ou deletérias. Os ensaios de citotoxicidade in vitro e/ou in vivo podem ser realizados para confirmar a redução/esgotamento das atividades CDC e/ou ADCC. Por exemplo, os ensaios de ligação ao receptor de Fc (FcR) podem ser realizados para garantir que o anticorpo não possui ligação à FcyR (portanto, provavelmente sem atividade ADCC), porém, retém a capacidade de ligação à FcRn. As células primárias para mediar a ADCC, as células NK, expressam apenas a Fc(RIII, enquanto que os monócitos expressam a Fc(RI, a Fc(RII e a Fc(RIII. A expressão da FcR nas células hematopoiéticas está resumida na tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991). Exemplos não limitantes dos ensaios in vitro para avaliar a atividade da ADCC de uma molécula de interesse são descritos na Patente Norte-Americana No. 5.500.362 (consulte, por exemplo, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) e Hellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985); 5.821.337 (consulte Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987)). Alternativamente, os métodos de ensaio não radioativos podem ser utilizados (consulte, por exemplo, o ensaio de citotoxicidade não radioativo ACTI ™ para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; e o ensaio de citotoxicidade não radioativo CytoTox 96® (Promega, Madison, WI). Células efetoras úteis para tais ensaios incluem as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e as células Natural Killer (NK). Alternativamente, ou além disso, a atividade ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal, tal como aquele divulgado em Clynes et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95: 652-656 (1998). Os ensaios de ligação C1q também podem ser realizados para confirmar que o anticorpo é incapaz de se ligar ao C1q e, portanto, não possui atividade CDC. Consulte, por exemplo, o ELISA de ligação ao C1q e C3c em WO 2006/029879 e WO 2005/100402. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio de CDC pode ser realizado (consulte, por exemplo, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); e Cragg, M.S. e M.J. Glennie, Blood 103: 2738-2743 (2004)). A ligação da FcRn e as determinações de depuração/meia vida in vivo também podem ser realizadas usando os métodos conhecidos na técnica (consulte, por exemplo, Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006)).

[0155] Os anticorpos com função efetora reduzida incluem aqueles com a substituição de um ou mais dos resíduos da região Fc 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329 (Patente Norte-Americana No. 6.737.056). Tais mutantes Fc incluem mutantes Fc com substituições em duas ou mais posições de aminoácidos 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo os chamados mutantes Fc "DANA", com a substituição dos resíduos 265 e 297 para alanina (Patente Norte-Americana No. 7.332.581).

[0156] Certas variantes do anticorpo com ligação melhorada ou diminuída às FcRs são descritas. Consulte, por exemplo, a Patente Norte- Americana No. 6.737.056; WO 2004/056312, e Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001).)

[0157] Em determinadas modalidades, uma variante do anticorpo compreende uma região Fc com uma ou mais substituições de aminoácidos que melhoram a ADCC, por exemplo, substituições nas posições 298, 333 e/ou 334 da região Fc (numeração EU dos resíduos).

[0158] Em algumas modalidades, as alterações são feitas na região Fc, que resultam na ligação do c1q alterada (ou seja, melhorada ou diminuída) e/ou na citotoxicidade dependente do complemento (CDC), por exemplo, conforme descrito na Patente Norte-Americana No. 6.194.551, WO 99/51642, e Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

[0159] Os anticorpos com meias vidas aumentadas e ligação aprimorada ao receptor de Fc neonatal (FcRn), que é responsável pela transferência das IgGs maternas para o feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) e Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)), são descritos em US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Aqueles anticorpos compreendem uma região Fc com uma ou mais substituições nos mesmos, que melhoram a ligação da região Fc à FcRn. Tais variantes de Fc incluem aquelas com substituições em um ou mais dos resíduos da região Fc: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 ou 434, por exemplo, a substituição do resíduo da região Fc 434 (Patente Norte-Americana No. 7.371.826).

[0160] Consulte também Duncan & Winter, Nature 322: 738-40 (1988); Patente Norte-Americana No. 5.648.260; Patente Norte-Americana No. 5.624.821; e WO 94/29351, em relação aos outros exemplos das variantes da região Fc.

d) VARIANTES DO ANTICORPO MANIPULADO DE $239CISTEÍNA

[0161] Em certas modalidades, pode ser desejável criar anticorpos cisteína manipulados, por exemplo, "thioMAbs," em que um ou mais resíduos de um anticorpo são substituídos com resíduos de cisteína. Em modalidades particulares, os resíduos substituídos ocorrem em locais acessíveis do anticorpo. Substituindo aqueles resíduos com cisteína, os grupos tiol reativos são, através disso, posicionados em locais acessíveis do anticorpo e podem ser usados para conjugar o anticorpo a outras porções, como porções de fármaco ou porções de ligação a fármaco, para criar um imunoconjugado, tal como é descrito adicionalmente na presente invenção. Em certas modalidades, qualquer um ou mais dos seguintes resíduos pode ser substituído com cisteína: V205 (numeração de Kabat) da cadeia leve; A118 (numeração EU) da cadeia pesada; e S400 (numeração EU) da região Fc de cadeia pesada. Os anticorpos cisteína manipulados podem ser gerados como descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana No. 7.521.541.

e) DERIVADOS DE ANTICORPO

[0162] Em certas modalidades, um anticorpo fornecido na presente invenção pode ser adicionalmente modificado para conter porções não proteináceas adicionais que são conhecidas na técnica e que são prontamente disponíveis. As porções adequadas para a derivatização do anticorpo incluem, mas não se limitam, aos polímeros hidrossolúveis. Exemplos não limitantes de polímeros hidrossolúveis incluem, mas não se limitam, ao polietilenoglicol (PEG), copolímeros de etilenoglicol/propilenoglicol, carboximetilcelulose, dextrana, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1, 3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios) e dextrana ou poli(n-vinilpirrolidona)polietilenoglicol, homopolímeros de propropilenoglicol, copolímeros de óxido de prolipropileno/óxido de etileno, polióis polietoxilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico e misturas dos mesmos. O polietilenoglicol propionaldeído pode ter vantagens na fabricação devido à sua estabilidade em água. O polímero pode ser de qualquer peso molecular, e pode ser ramificado ou não ramificado. O número de polímeros ligados ao anticorpo pode variar, e se mais de um polímero estiver ligado, eles podem ser moléculas iguais ou diferentes. Em geral, o número e/ou o tipo de polímeros utilizados para a derivatização pode ser determinado com base em considerações incluindo, mas sem se limitar, às propriedades particulares ou funções do anticorpo a ser melhorado, se o derivado de anticorpo será usado em uma terapia sob condições definidas, etc.

[0163] Em outra modalidade, os conjugados de um anticorpo e de uma porção não proteinácea que podem ser seletivamente aquecidos por exposição à radiação são fornecidos. Em uma modalidade, a porção não proteinácea é um nanotubo de carbono (Kam et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). A radiação pode ser de qualquer comprimento de onda e inclui, mas não se limita, aos comprimentos de onda que não prejudicam as células normais, mas que aquecem a porção não proteinácea até uma temperatura na qual as células proximais à porção anticorpo-não proteinácea são mortas.

B. MÉTODOS E COMPOSIÇÕES RECOMBINANTES

[0164] Os anticorpos podem ser produzidos usando métodos e composições recombinantes, por exemplo, conforme descrito na Patente Norte- Americana No. 4.816.567. Em uma modalidade, o ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) descrito na presente invenção é fornecido. Tal ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos que compreende a VL e/ou uma sequência de aminoácidos que compreende a VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leve e/ou pesada do anticorpo). Em uma outra modalidade, um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendendo tais ácidos nucleicos são fornecidos. Em uma outra modalidade, uma célula hospedeira que compreende tal ácido nucleico é fornecida. Em uma tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com): (1) um vetor compreendendo um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos que compreende a VH do anticorpo, ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VL do anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a VH do anticorpo. Em uma modalidade, a célula hospedeira é eucariótica, por exemplo, uma célula de ovário de hamster chinês (CHO) ou células linfoides (por exemplo, as células Y0, NS0 e Sp20). Em uma modalidade, é fornecido um método de fazer um anticorpo anti-Tau, em que o método compreende o cultivo de uma célula hospedeira compreendendo um ácido nucleico que codifica o anticorpo, como fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, a recuperação do anticorpo da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).

[0165] Para a produção recombinante de um anticorpo anti-Tau, o ácido nucleico que codifica um anticorpo, por exemplo, como descrito acima, é isolado e inserido em um ou mais vetores para clonagem e/ou expressão posterior em uma célula hospedeira. Tal ácido nucleico pode ser facilmente isolado e sequenciado usando os procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeo que são capazes de se ligar especificamente aos genes que codificam as cadeias pesada e leve do anticorpo).

[0166] Células hospedeiras adequadas para a clonagem ou expressão de vetores que codificam o anticorpo incluem as células procarióticas ou eucarióticas descritas na presente invenção. Por exemplo, os anticorpos podem ser produzidos nas bactérias, em especial quando a glicosilação e a função Fc efetora não são necessárias. Para a expressão dos fragmentos de anticorpo e dos polipeptídeos nas bactérias, consulte, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas Nos. 5.648.237, 5.789.199, e 5.840.523. (Consulte também Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), páginas 245 a 254, descrevendo a expressão dos fragmentos de anticorpo em E. Coli). Após a expressão, o anticorpo pode ser isolado da pasta celular bacteriana em uma fração solúvel e pode ser adicionalmente purificado.

[0167] Além dos procariotos, os micróbios eucariotos, como os fungos filamentosos ou leveduras, são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para os vetores que codificam o anticorpo, incluindo as cepas de fungos e levedura cujas vias de glicosilação foram "humanizadas", resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcialmente ou totalmente humano. Consulte Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) e Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006).

[0168] Células hospedeiras adequadas para a expressão do anticorpo glicosilado também são derivadas de organismos pluricelulares (invertebrados e vertebrados). São exemplos de células de invertebrados células de plantas e de insetos. Várias cepas de baculovírus foram identificadas que podem ser utilizadas juntamente com as células de insetos, particularmente para a transfecção de células de Spodoptera frugiperda.

[0169] As culturas de células vegetais plantas também podem ser utilizadas como hospedeiros. Consulte, por exemplo, as Patentes Norte- Americanas Nos. 5.959.177, 6.040.498, 6.420.548, 7.125.978 e 6.417.429 (descrevendo a tecnologia PLANTIBODIES™ para a produção de anticorpos em plantas transgênicas).

[0170] As células de vertebrados também podem ser usadas como hospedeiros. Por exemplo, as linhagens de células de mamíferos que são adaptadas para crescer em suspensão podem ser úteis. Outros exemplos de linhagens de células hospedeiras de mamíferos úteis são a linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7); a linhagem de rim embrionário humano (293 ou células 293, conforme descrito, por exemplo, em Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977)); células de rim de hamster bebê (BHK); células de sertoli de camundongo (células TM4, como descrito, por exemplo, em Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980) );células de rim de macaco (CV1); células de rim de macaco verde africano (VERO-76); células de carcinoma cervical humano (HELA); células de rim canino (MDCK; células de fígado de rato norvégico (BRL 3A); células de pulmão humano (W138); as células do fígado humano (Hep G2); tumor mamário em camundongo (MMT 060562); células TRI, conforme descrito, por exemplo, em Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982); células MRC 5; e células FS4. Outras linhagens de célula hospedeira de mamíferos incluem as células de ovário de hamster chinês (CHO), incluindo as células DHFR-CHO (Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); e linhagens celulares de mieloma, como Y0, NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de certas linhagens de células hospedeiras de mamíferos adequadas para a produção de anticorpos, consulte, por exemplo, Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).

C. ENSAIOS

[0171] Os anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) aqui apresentados podem ser identificados, testados ou caracterizados por suas propriedades físico-químicas e/ou atividades biológicas por vários ensaios conhecidos na técnica.

1. ENSAIOS DE LIGAÇÃO E OUTROS ENSAIOS

[0172] Em um aspecto, um anticorpo da invenção é testado quanto à sua atividade de ligação ao antígeno, por exemplo, por métodos conhecidos como ELISA, Western blot, Biacore, etc.

[0173] Em outro aspecto, ensaios de competição podem ser usados para identificar um anticorpo que compete com um ou mais anticorpos descritos na presente invenção (por exemplo, o anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 61 e com a cadeia pesada da SEQ ID NO: 63, o anticorpo com a cadeia leve da de SEQ ID NO: 64 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, o anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 65 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, o anticorpo da cadeia leve da SEQ ID NO: 72 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, o anticorpo da cadeia leve da SEQ ID NO: 82 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87 ou o anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 83 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, para ligação à pTau. Em certas modalidades, tal anticorpo competidor se liga ao mesmo epítopo (por exemplo, um epítopo linear ou conformacional) que está ligado por tais anticorpos. Métodos exemplares detalhados para mapear um epítopo ao qual um anticorpo se liga são fornecidos em Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” em Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).

[0174] Em um ensaio de competição exemplar, a pTau imobilizado é incubada em uma solução composta por um primeiro anticorpo marcado que se liga à pTau (por exemplo, um anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 61 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 63, um anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 64 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, um anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 65 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, um anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 72 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87, um anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 82 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87 ou anticorpo com a cadeia leve da SEQ ID NO: 83 e a cadeia pesada da SEQ ID NO: 87) e um segundo anticorpo não marcado que está sendo testado quanto à sua capacidade de competir com o primeiro anticorpo pela ligação à pTau. O segundo anticorpo pode estar presente em um hibridoma sobrenadante. Como controle, a pTau imobilizada é incubada em uma solução que compreende o primeiro anticorpo marcado, mas não o segundo anticorpo não marcado. Após a incubação sob condições permissivas par a ligação do primeiro anticorpo à pTau, o anticorpo não ligado em excesso é removido, e a quantidade de marcador associado com a pTau imobilizada é medida. Se a quantidade de marcador associado com a pTau imobilizada for substancialmente reduzida na amostra de teste em relação à amostra controle, então isso indica que o segundo anticorpo está competindo com o primeiro anticorpo pela ligação à pTau. Consulte, Harlow e Lane (1988) "Antibodies: A Laboratory Manual" Cáp. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).

2. ENSAIOS DE ATIVIDADE

[0175] Em um aspecto, os ensaios são fornecidos para a identificação dos seus anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau), com atividade biológica. A atividade biológica pode incluir, por exemplo, a ligação de tais anticorpos à Tau (por exemplo, emaranhados neurofibrilares no cérebro contendo Tau) e a redução do nível de proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada, no cérebro, por exemplo, no córtex cerebral e/ou no hipocampo). Os anticorpos com tal atividade biológica in vivo e/ou in vitro também são fornecidos.

[0176] Em certas modalidades, um anticorpo da invenção é testado para tal atividade biológica. Por exemplo, um modelo animal de taupatia, tal como o camundongo transgênico Tau (por exemplo, P301L), pode ser usado para detectar a ligação dos anticorpos anti-Tau às seções do cérebro e, em particular, aos emaranhados neurofibrilares nos cérebros dos camundongos transgênicos. Além disso, um modelo animal da taupatia, como os camundongos Tau transgênicos (por exemplo, P301L), pode ser tratado com anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti- pTau) e técnicas experimentais conhecidas na arte podem ser usadas para avaliar se tal tratamento reduz o nível de proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo a Tau hiperfosforilada) no cérebro de camundongo (por exemplo, no córtex cerebral e/ou no hipocampo).

D. IMUNOCONJUGADOS

[0177] A invenção também fornece imunoconjugados compreendendo um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau), conjugado na presente invenção com um ou mais agentes citotóxicos, tais como agentes ou fármacos quimioterapêuticos, agentes inibidores do crescimento, toxinas (por exemplo, toxinas proteicas, toxinas enzimaticamente ativas de bactérias, fungos, plantas ou de origem animal, ou os fragmentos das mesmas) ou isótopos radioativos.

[0178] Em uma modalidade, um imunoconjugado é um conjugado anticorpo-fármaco (ADC) no qual um anticorpo é conjugado a um ou mais fármacos, incluindo, mas sem se limitar, a um maitansinoide (consulte as Patentes Norte- Americanas Nos. 5.208.020, 5.416.064 e a Patente Europeia EP 0 425 235 B1); uma auristatina, como porções do fármaco monometilauristatina DE e DF (MMAE e MMAF) (consulte as Patentes Norte-Americanas Nos. 5.635.483 e 5.780.588, e 7.498.298); uma dolastatina; uma caliqueamicina ou um derivado da mesma (consulte as Patentes Norte-Americanas Nos. 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.770.701, 5.770.710, 5.773.001 e 5.877.296; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); e Lode et al., Cancer Res. 58: 2925-2928 (1998)); uma antraciclina, como daunomicina ou doxorrubicina (consulte Kratz et al., Current Med. Chem. 13: 477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16: 358362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); e a Patente Norte-Americana No. 6.630.579); metotrexato; vindesina; um taxano, como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel e ortataxel; um tricoteceno; e CC1065.

[0179] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo, conforme descrito na presente invenção, conjugado com uma toxina enzimaticamente ativa ou com um fragmento da mesma, incluindo, mas sem se limitar, à cadeia de difteria A, fragmentos ativos não ligantes da toxina diftérica, cadeia de exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia de ricina A, cadeia de abrina A, cadeia de modecina A, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor da Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor da Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e tricotecenos.

[0180] Em outra modalidade, um imunoconjugado compreende um anticorpo, conforme descrito na presente invenção, conjugado com um átomo radioativo para formar um radioconjugado. Uma variedade de isótopos radioativos está disponível para a produção de radioconjugados. Exemplos incluem os At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos do Lu. Quando o radioconjugado é usado para detecção, ele pode compreender um átomo radioativo para estudos cintilográficos, por exemplo, tc99m ou I123, ou um marcador de spin para a captura de imagem por ressonância magnética nuclear (RMN) (também conhecida como imagem por ressonância magnética, mri), tal como iodo- 123 novamente, iodo-131, índio-111, flúor-19, carbono-13, nitrogênio-15, oxigênio- 17, gadolínio, manganês ou ferro.

[0181] Os conjugados de um anticorpo e do agente citotóxico podem ser feitos usando uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncionais, como o propionato de N-succinimidil-3-(2-piridiltio) (SPDP), ciclo- hexano-1-carboxilato de succinimidil-4-(N-maleimidometila) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (como adipimidato de dimetila HCl), ésteres ativos (por exemplo, suberato de dissuccinimidila), aldeídos (tais como o glutaraldeído), compostos de bis-azido (como bis(p-azidobenzoil)hexanodiamina), derivados do bisdiazônio (como bis-(p-diazoniobenzoil)-etilenodiamina), di- isocianatos (por exemplo, 2,6-di-isocianato de tolueno) e compostos de flúor bisativos (como 1,5-diflúor-2,4-dinitrobenzeno). Por exemplo, uma imunotoxina de ricina pode ser preparada como descrito em Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987). O ácido 1-isotiocianatobenzil-3-metildietilenotriaminopentacético marcado com carbono 14 (MX-DTPA) é um agente quelante exemplar para a conjugação do radionuclídeo ao anticorpo. Consulte o documento WO94/11026. O ligante pode ser um "ligante clivável" que facilita a liberação de um fármaco citotóxico na célula. Por exemplo, um ligante ácido-lábil, um ligante sensível à peptidase, um ligante fotolábil, um ligante de dimetila ou um ligante contendo dissulfeto (Chari et al, Cancer Res. 52:127-131 (1992); Patente Norte-Americana No. 5.208.020) pode ser usado.

[0182] Os imunoconjugados ou ADCs na presente invenção contemplam expressamente, mas não se limitam, a tais conjugados preparados com reagentes de reticulação incluindo, mas sem se limitar, ao BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC e sulfo- SMPB, e SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona)benzoato), que são comercialmente disponíveis (por exemplo, junto à Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL. EUA).

E. MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA DIAGNÓSTICOS E DETECÇÃO

[0183] Em certas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti-Tau aqui fornecidos é útil para detectar a presença da Tau em uma amostra biológica. O termo "detectando", como usado na presente invenção, engloba a detecção quantitativa ou qualitativa. Em certas modalidades, uma amostra biológica compreende uma célula ou tecido, tal como o líquido cefalorraquidiano, uma célula ou tecido do cérebro (por exemplo, do córtex cerebral ou hipocampo) ou sangue. Em uma modalidade, uma amostra biológica é líquido cefalorraquidiano.

[0184] Em uma modalidade, um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti- pTau) para uso em um método de diagnóstico ou detecção é fornecido. Em outro aspecto, é fornecido um método de detecção da presença da Tau (por exemplo, pTau) em uma amostra biológica. Em certas modalidades, o método compreende colocar em contato a amostra biológica com um anticorpo anti-Tau, conforme descrito na presente invenção, sob condições permissivas para a ligação do anticorpo anti-Tau à Tau, e a detecção de se um complexo é formado entre o anticorpo anti-Tau e a Tau. Em certas modalidades, o método compreende colocar em contato a amostra biológica com um anticorpo anti-pTau, conforme descrito na presente invenção, sob condições permissivas para a ligação do anticorpo anti- pTau à pTau, e a detecção de se um complexo é formado entre o anticorpo anti- pTau e a pTau. Tal método pode ser um método in vitro ou in vivo. Além disso, o complexo formado entre o anticorpo anti-Tau e a Tau em uma amostra de teste biológico pode ser comparado ao complexo formado em uma amostra de controle biológico (por exemplo, uma amostra biológica de um indivíduo ou de indivíduos saudáveis). A quantidade de complexo formado entre o anticorpo anti-Tau e a Tau em uma amostra de teste biológico pode também ser quantificada e comparada com a quantidade do complexo formado em uma amostra de controle biológico (por exemplo, uma amostra biológica de um indivíduo ou de indivíduos sadios) ou com a quantidade média do complexo conhecido por ser formado em indivíduos saudáveis.

[0185] Em uma modalidade, um anticorpo anti-Tau é usado para selecionar indivíduos elegíveis para a terapia com um anticorpo anti-Tau, por exemplo, onde a Tau é um biomarcador para a seleção dos pacientes. Em uma modalidade, um anticorpo anti-pTau é usado para selecionar indivíduos elegíveis para a terapia com um anticorpo anti-Tau, por exemplo, onde a pTau é um biomarcador para a seleção dos pacientes. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) é usado para detectar se o indivíduo tem uma doença ou distúrbio relacionado com a proteína Tau, ou se o indivíduo apresenta alto risco (ou predisposição para contrair) uma doença ou distúrbio relacionado com a proteína Tau.

[0186] Doenças ou distúrbios exemplares que podem ser diagnosticados usando um anticorpo da invenção incluem as doenças ou distúrbios associados com a proteína Tau e doenças ou distúrbios causados por, ou associados com a formação dos emaranhados neurofibrilares ou filamentos de neuropil. Em algumas modalidades, as doenças ou os distúrbios que podem ser diagnosticados usando um anticorpo da invenção incluem as doenças ou distúrbios associados com a proteína Tau que se manifestam em uma deficiência ou perda das funções cognitivas, incluindo raciocínio, juízo situacional, capacidade de memória, aprendizagem e/ou navegação especial. Em particular, as doenças ou distúrbios que podem ser diagnosticados usando um anticorpo da invenção incluem tauopatias, como as tauopatias neurodegenerativas. Doenças ou distúrbios exemplares que podem ser diagnosticados usando um anticorpo da invenção incluem, mas não se limitam, a doença de Alzheimer, doença de Creutzfeldt-Jacob, demência pugilística, síndrome de Down, doença de Gerstmann-Straussler- Scheinker, miosite por corpos de inclusão, angiopatia amiloide da proteína príon cerebral, injúria cerebral traumática, esclerose lateral amiotrófica/complexo de Guam da demência por parkinsonismo, doença neuronal motora não guamaniana com emaranhados neurofibrilares, demência por grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, emaranhados neurofibrilares difusos com calcificação, demência frontotetemporal, demência frontotemporal com parkinsonismo ligado ao cromossomo 17, doença de Hallevorden-Spatz, atrofia múltipla sistêmica, doença de Niemann-Pick tipo C, degeneração palido-ponto nigral, doença de Pick, gliose subcortical progressiva, paralisia supranuclear progressiva, panencefalite esclerosante subaguda, demência por emaranhado, Parkinsonismo pós- encefalítico e distrofia miotônica. Em uma modalidade, um distúrbio que pode ser diagnosticado usando um anticorpo da invenção é a doença de Alzheimer (AD).

[0187] Em certas modalidades, os anticorpos anti-Tau marcados são fornecidos. Os marcadores incluem, mas não se limitam, aos marcadores ou porções que são detectados diretamente (como os marcadores fluorescentes, cromóforos, de densidade eletrônica, quimiluminescentes e radioativos), bem como porções, como enzimas ou ligantes, que são detectados indiretamente, por exemplo, através de uma reação enzimática ou interação molecular. Marcadores exemplares incluem, mas não se limitam, aos radioisótopos 32P, 14C, 125I, 3H e 131I, aos fluoróforos, como quelatos de terra rara ou fluoresceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, dansila, umbeliferona, luceriferases, por exemplo luciferase de vaga-lume e luciferase bacteriana (Patente Norte-Americana No. 4.737.456), luciferina, 2,3-di-hidroftalazinodionas, peroxidase de rábano silvestre (HRP), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glicoamilase, lisozima, sacarídeo oxidases, por exemplo, glicose oxidase, galactose oxidase e glicose-6-fosfato desidrogenase, oxidases heterocíclicas, tais como uricase e xantina oxidase, acoplado com uma enzima que utiliza o peróxido de hidrogênio para oxidar um precursor de corante, como HRP, lactoperoxidase ou microperoxidase, biotina/avidina, marcadores de spin, marcadores bacteriófagos, radicais livres estáveis e similares.

F. FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

[0188] As formulações farmacêuticas de um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau), conforme descrito na presente invenção, são preparadas pela mistura de tal anticorpo, com o grau desejado de pureza, com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980)), sob a forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações utilizadas, e incluem, mas não se limitam, aos: tampões, como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo o ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos, como metil ou propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, como a albumina do soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos como polivinilpirrolidona; aminoácidos como a glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo a glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, como o EDTA; açúcares, como a sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos como polietilenoglicol (PEG). Os veículos farmaceutiamente exemplares da presente invenção incluem agentes de dispersão de fármaco intersticiais, como glicoproteínas da hialuronidase ativa-neutra solúveis (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas da hialuronidase PH-20 solúvel humana, como rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Certas sHASEGPs e métodos de uso exemplares, incluindo rHuPH20, são descritos nas Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos. 2005/0260186 e 2006/0104968. Em um aspecto, uma sHASEGP é combinada com uma ou mais glicosaminoglicamases adicionais, como as condroitinases.

[0189] As formulações de anticorpo liofilizado exemplares são descritas na patente Norte-Americana No. 6.267.958. As formulações de anticorpo aquosas incluem aquelas descritas na patente Norte-Americana No. 6.171.586 e no documento WO2006/044908, as últimas formulações incluindo um tampão histidina- acetato.

[0190] A formulação fornecida na presente invenção também pode conter mais de um ingrediente ativo, como necessário, para a indicação específica a ser tratada, de preferência para aquelas com atividades complementares que não prejudicam adversamente uns aos outros. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes em combinação em quantidades que são eficazes para a finalidade tencionada.

[0191] A composição de acordo com a invenção pode ser administrada em combinação com outras composições compreendendo uma substância biologicamente ativa ou compostos como, por exemplo, um composto conhecido usado na medicação de taupatias e/ou de amiloidoses, um grupo de doenças e distúrbios associados com a proteína amiloide ou tipo amiloide, um como a proteína β-amiloide envolvida na doença de Alzheimer.

[0192] Em geral, outro composto biologicamente ativo pode incluir intensificadores de transmissão de nêutrons, fármacos psicoterapêuticos, inibidores de acetilcolina esterase, bloqueadores dos canais de cálcio, aminas biogênicas, tranquilizantes benzodiazepínicos, síntese da acetilcolina, intensificadores de armazenamento ou liberação, agonistas do receptor pós-sináptico da acetilcolina, inibidores da monoamina oxidase A ou B, antagonistas do receptor da N-metil-D- aspartato glutamato, fármacos anti-inflamatórios não esteroidais, antioxidantes e antagonistas dos receptores serotonérgicos. Em particular, o agente ou o composto biologicamente ativo pode compreender pelo menos um composto selecionado do grupo consistindo em compostos contra o estresse oxidativo, compostos antiapoptóticos, quelantes de metais, inibidores de reparação de DNA, tais como pirenzepina e metabólitos, ácido 3-amino-1-propanossulfônico (3APS), 1,3- propanodissulfonato (1,3PDS), ativadores da secretase, inibidores da [beta]- e 7- secretase, proteínas tau, neurotransmissor, quebradores de folhas β, moléculas anti-inflamatórias, "antipsicóticos atípicos", tais como , por exemplo clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol ou olanzapina, ou inibidores da colinesterase (ChEIs) como tacrina, rivastigmina, donepezila e/ou galantamina, e outros fármacos e suplementos nutritivos tais como, por exemplo, vitamina B12, cisteína, um precursor da acetilcolina, lecitina, colina, Ginkgo biloba, acietil-L-carnitina, idebenona, propentofilina ou um derivado da xantina, juntamente com um peptídeo de ligação de acordo com a invenção, incluindo anticorpos, particularmente anticorpos monoclonais e fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente e instruções para o tratamento de doenças.

[0193] Em uma outra modalidade, a composição de acordo com a invenção pode compreender niacina ou memantina, juntamente com um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado de acordo com a invenção, incluindo anticorpos, particularmente os anticorpos monoclonais e fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente.

[0194] Em ainda outra modalidade da invenção, são fornecidas composições que compreendem "antipsicóticos atípicos", tais como, por exemplo, clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol ou olanzapina para tratamento de sintomas psicóticos positivos e negativos, incluindo alucinações, delírios, transtornos do pensamento (manifestados por incoerência acentuada, descarrilamento, tangencialidade), e comportamento bizarro ou desorganizado, bem como anedonia, embotamento afetivo, apatia e isolamento social, juntamente com o anticorpo quimérico ou o anticorpo humanizado de acordo com a invenção ou fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente.

[0195] Outros compostos que podem ser usados adequadamente nas composições, além do anticorpo quimérico ou do anticorpo humanizado, de acordo com a invenção, são aqueles divulgados, por exemplo, em WO 2004/058258 (consulte especialmente as páginas 16 e 17) incluindo alvos de fármacos terapêuticos (páginas 36 a 39), ácidos alcanossulfônicos e ácido alcanossulfúrico (páginas 39 a 51), inibidores da colinesterase (páginas. 51 a 56), antagonistas dos receptores NMDA (páginas 56 a 58), estrogênios (páginas 58 e 59), fármacos anti- inflamatórios não esteroidais (páginas 60 e 61), antioxidantes (páginas 61 e 62), agonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma (PPAR) (páginas 63 a 67), agentes de redução do colesterol (páginas 68 a 75); inibidores amiloides (páginas 75 a 77), inibidores de formação de amiloide (páginas 77 e 78), quelantes de metais (páginas 78 e 79), antipsicóticos e antidepressivos (páginas 80 a 82), suplementos nutricionais (páginas 83 a 89) e compostos que aumentam a disponibilidade das substâncias biologicamente ativas no cérebro (consulte as páginas 89 a 93) e promedicamentos (páginas 93 e 94), cujo documento está incorporado na presente invenção por referência, mas especialmente os compostos mencionados nas páginas indicadas acima.

[0196] Os ingredientes ativos podem ser aprisionados em microcápsulas preparadas, por exemplo, através de técnicas de coacervação ou pela polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de administração de medicamentos coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980). Preparações de liberação sustentada podem ser preparadas. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o anticorpo, cujas matrizes estão sob a forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas.

[0197] As formulações a serem usadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilidade pode ser facilmente realizada, por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis.

G. COMPOSIÇÕES E MÉTODOS TERAPÊUTICOS

[0198] Qualquer um dos anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) aqui apresentados pode ser usado nos métodos terapêuticos.

[0199] Em um aspecto, um anticorpo anti-Tau para uso como medicamento é fornecido. Em outros aspectos, um anticorpo anti-Tau para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é fornecido. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-Tau para uso no tratamento de doenças ou distúrbios causados por, ou associados com a formação de emaranhados neurofibrilares ou filamentos de neuropil é fornecido. Em modalidades particulares, um anticorpo anti-Tau para uso no tratamento de uma taupatia como uma taupatia neurodegenerativa é fornecido. Doenças ou distúrbios associados com a proteína Tau exemplares que podem ser tratados usando os anticorpos anti-Tau incluem, sem limitação, a doença de Alzheimer, esclerase lateral amiotrófica, doença de Parkinson, doença de Creutzfeldt-Jacob, demência pugilística, síndrome de Down, doença de Gerstmann-Straussler-Scheinker, miosite por corpos de inclusão, angiopatia amiloide da proteína príon cerebral, injúria cerebral traumática, esclerose lateral amiotrófica/complexo de Guam da demência por parkinsonismo, doença neuronal motora não guamaniana com emaranhados neurofibrilares, demência por grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, emaranhados neurofibrilares difusos com calcificação, demência frontotemporal, demência frontotemporal com parkinsonismo ligado ao cromossomo 17, doença de Hallevorden-Spatz, atrofia múltipla sistêmica, doença de Niemann-Pick tipo C, degeneração palido-ponto nigral, doença de Pick, gliose subcortical progressiva, paralisia supranuclear progressiva, panencefalite esclerosante subaguda, demência por emaranhado, Parkinsonismo pós-encefalítico e distrofia miotônica. Em uma modalidade, um anticorpo anti-Tau para uso no tratamento da doença de Alzheimer (AD) é fornecido na presente invenção. Além disso, a proteína Tau associada às doenças ou distúrbios que podem ser tratados com um anticorpo anti- Tau incluem doenças ou distúrbios que se manifestam em uma deficiência ou perda de função cognitiva, como raciocínio, juízo situacional, capacidade de memória, aprendizagem e/ou navegação especial. Em certas modalidades, o anticorpo anti- Tau para uso em um método de tratamento é fornecido. Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso em um método de tratamento de um indivíduo, tendo qualquer uma das doenças ou distúrbios associados com a Tau descritos acima, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau). Em uma tal modalidade, o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo.

[0200] Em outras modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti- Tau para uso na redução dos níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada) em um indivíduo. Por exemplo, tal redução pode ocorrer no cérebro (por exemplo, no córtex cerebral e/ou no hipocampo). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso na redução dos níveis da Tau fosforilada. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso na redução dos níveis da Tau insolúvel (por exemplo, da Tau fosforilada insolúvel). Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso na redução dos níveis da Tau hiperfosforilada. Em uma modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso na redução dos níveis dos filamentos helicoidais emparelhados (por exemplo, dos filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada) em um tecido cerebral (por exemplo, no córtex cerebral e/ou no hipocampo). Em certas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) para uso em um método de redução dos níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada) no cérebro (por exemplo, no córtex cerebral e/ou hipocampo) em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo anti-Tau para reduzir os níveis da proteína Tau. Um "indivíduo", de acordo com qualquer uma das modalidades acima, é um mamífero, preferencialmente um ser humano.

[0201] Em algumas modalidades, a invenção fornece um anticorpo anti-Tau para uso na modulação dos níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada), por exemplo, no cérebro (por exemplo, no córtex cerebral e/ou no hipocampo) de um indivíduo.

[0202] Em outro aspecto, a invenção prevê o uso de um anticorpo anti- Tau na fabricação ou na preparação de um medicamento. Em uma modalidade, o medicamento é para tratamento de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau. Adoença ou distúrbio associado com a proteína Tau pode ser uma doença ou distúrbios causados ou associados com a formação dos emaranhados neurofibrilares ou filamentos de neuropil. Em modalidades particulares, o medicamento é para o tratamento de uma taupatia, como uma taupatia neurodegenerativa. Em modalidades específicas, o medicamento é para o tratamento de doenças ou distúrbios selecionados do grupo consistindo em: doença de Alzheimer (AD), doença de Creutzfeldt-Jacob, demência pugilística, síndrome de Down, doença de Gerstmann-Straussler-Scheinker, miosite por corpos de inclusão, angiopatia amiloide da proteína príon cerebral, injúria cerebral traumática, esclerose lateral amiotrófica/complexo de Guam da demência por parkinsonismo, doença neuronal motora não guamaniana com emaranhados neurofibrilares, demência por grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, emaranhados neurofibrilares difusos com calcificação, demência frontotetemporal, demência frontotemporal com parkinsonismo ligado ao cromossomo 17, doença de Hallevorden-Spatz, atrofia múltipla sistêmica, doença de Niemann-Pick tipo C, degeneração palido-ponto nigral, doença de Pick, gliose subcortical progressiva, paralisia supranuclear progressiva, panencefalite esclerosante subaguda, demência por emaranhado, Parkinsonismo pós-encefalítico e distrofia miotônica. Em uma modalidade, o medicamento é para o tratamento da AD. Em modalidades particulares, o medicamento é para o tratamento de uma doença ou distúrbio associado com a Tau que se manifesta em uma deficiência ou perda de uma função cognitiva, como o raciocínio, juízo situacional, capacidade de memória, aprendizagem ou navegação especial. Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso em um método de tratamento de uma das doenças listadas acima (por exemplo, uma taupatia, como AD) compreendendo a administração a um indivíduo com tal doença de uma quantidade eficaz do medicamento. Em uma tal modalidade, o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo.

[0203] Em uma outra modalidade, o medicamento é para reduzir os níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada). Por exemplo, tal redução da proteína Tau pode ser observada no cérebro (por exemplo, no córtex cerebral e/ou hipocampo) ou no líquido cefalorraquidiano de um indivíduo. Em uma modalidade, o medicamento é para reduzir os níveis da Tau fosforilada. Em uma modalidade, o medicamento é para reduzir os níveis da Tau insolúvel (por exemplo, da Tau fosforilada insolúvel). Em uma modalidade, o medicamento é para reduzir os níveis da Tau hiperfosforilada. Em uma modalidade, o medicamento é para reduzir os níveis dos filamentos helicoidais emparelhados (por exemplo, dos filamentos helicoidais emparelhados contendo a Tau hiperfosforilada). Em uma outra modalidade, o medicamento é para uso em um método de redução dos níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada) em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do medicamento para reduzir os níveis da proteína Tau. Um "indivíduo", de acordo com qualquer uma das modalidades acima, é um mamífero, preferencialmente um ser humano.

[0204] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para o tratamento de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau. A doença ou distúrbio associado com a proteína Tau que pode ser tratado de acordo com os métodos fornecidas na presente invenção inclui doenças ou distúrbios causados por ou associados com a formação dos emaranhados neurofibrilares ou filamentos de neuropil. Em modalidades particulares, a invenção fornece um método para o tratamento de uma taupatia, como uma taupatia neurodegenerativa. Em modalidades específicas, a invenção fornece um método para tratar uma doença ou distúrbio selecionado do grupo consistindo em: doença de Alzheimer, doença de Creutzfeldt-Jacob, demência pugilística, síndrome de Down, doença de Gerstmann- Straussler-Scheinker, miosite por corpos de inclusão, angiopatia amiloide da proteína príon cerebral, injúria cerebral traumática, esclerose lateral amiotrófica/complexo de Guam da demência por parkinsonismo, doença neuronal motora não guamaniana com emaranhados neurofibrilares, demência por grãos argirofílicos, degeneração corticobasal, emaranhados neurofibrilares difusos com calcificação, demência frontotetemporal, demência frontotemporal com parkinsonismo ligado ao cromossomo 17, doença de Hallevorden-Spatz, atrofia múltipla sistêmica, doença de Niemann-Pick tipo C, degeneração palido-ponto nigral, doença de Pick, gliose subcortical progressiva, paralisia supranuclear progressiva, panencefalite esclerosante subaguda, demência por emaranhado, Parkinsonismo pós-encefalítico e distrofia miotônica. Em uma modalidade, a invenção fornece um método para tratar a doença de Alzheimer (AD). Em modalidades particulares, a invenção fornece um método para tratar uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau que se manifesta em uma deficiência ou perda de uma função cognitiva, como o raciocínio, juízo situacional, capacidade de memória, aprendizagem ou navegação especial. Em uma modalidade, o método compreende administrar a um indivíduo, tendo qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos acima, uma quantidade efetiva de um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau). Em uma tal modalidade, o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo. Em uma modalidade, o método compreende administrar a um indivíduo com uma das doenças descritas na presente invenção uma quantidade efetiva de um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau). Em uma tal modalidade, o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade efetiva de pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo. Um "indivíduo", de acordo com qualquer uma das modalidades acima, pode ser um ser humano.

[0205] Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para reduzir os níveis da proteína Tau (por exemplo, Tau total, Tau total solúvel, Tau fosforilada solúvel, Tau total insolúvel, Tau fosforilada insolúvel, Tau hiperfosforilada ou filamentos helicoidais emparelhados contendo Tau hiperfosforilada) em um indivíduo. Por exemplo, tal redução dos níveis da proteína Tau pode ser observada no cérebro (por exemplo, no córtex cerebral e/ou hipocampo) ou no líquido cefalorraquidiano de um indivíduo. Em uma modalidade, a invenção fornece um método para reduzir os níveis da Tau fosforilada. Em uma modalidade, a invenção fornece um método para reduzir os níveis da Tau insolúvel (por exemplo, da Tau fosforilada insolúvel). Em uma modalidade, a invenção fornece um método para reduzir os níveis da Tau hiperfosforilada. Em uma modalidade, a invenção fornece um método para reduzir os níveis dos filamentos helicoidais emparelhados (por exemplo, dos filamentos helicoidais emparelhados contendo a Tau hiperfosforilada). Em uma modalidade, o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) para reduzir os níveis da proteína Tau. Em uma modalidade, um "indivíduo" é um ser humano.

[0206] Em alguns aspectos, a invenção fornece um método para aliviar um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou um anticorpo anti-Tau ou um medicamento compreendendo o anticorpo anti-Tau para aliviar um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Em alguns aspectos, a invenção fornece um método para reduzir o número de sintomas ou a gravidade de um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou um anticorpo anti- Tau ou um medicamento compreendendo o anticorpo anti-Tau para reduzir o número de sintomas ou a gravidade de um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Em uma modalidade particular, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é um comprometimento na cognição. Em uma modalidade específica, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é um comprometimento no aprendizado e/ou memória. Em uma modalidade específica, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é uma perda de memória de longo prazo. Em uma modalidade específica, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é a demência. Em algumas modalidade, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é confusão, irritabilidade, agressividade, mudanças de humor ou uma deficiência de linguagem. Em algumas modalidades, o sintoma de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau é uma deficiência ou perda de uma ou mais funções cognitivas, como raciocínio, juízo situacional, capacidade de memória e/ou de aprendizagem. Os métodos fornecidos na presente invenção compreendem a administração de uma quantidade (por exemplo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um anticorpo anti- Tau a um indivíduo (por exemplo, que exibe um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau ).

[0207] Em aspectos específicos, a invenção fornece um método para manter ou aumentar a capacidade de memória cognitiva, ou para retardar a perda de memória associada com uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou um anticorpo anti-Tau ou um medicamento que compreende um anticorpo anti- Tau para manter ou aumentar a capacidade de memória cognitiva ou para retardar a perda de memória associada com uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Os métodos fornecidos na presente invenção compreendem a administração de uma quantidade (por exemplo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um anticorpo anti-Tau a um indivíduo (por exemplo, que exibe um ou mais sintomas de pwerda de memória ou de diminuição da capacidade de memória).

[0208] Em alguns aspectos, a invenção fornece um método para diminuir a taxa de progressão de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou de um anticorpo anti-Tau ou um medicamento compreendendo um anticorpo anti-Tau para diminuir a taxa de progressão de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Os métodos fornecidos na presente invenção compreendem a administração de uma quantidade (por exemplo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um anticorpo anti-Tau a um indivíduo (por exemplo, que exibe um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau ).

[0209] Em alguns aspectos, a invenção fornece um método para prevenir a evolução de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou de um anticorpo anti-Tau ou um medicamento compreendendo um anticorpo anti- Tau para diminuir a evolução de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Os métodos fornecidos na presente invenção compreendem a administração de uma quantidade (por exemplo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um anticorpo anti-Tau a um indivíduo (por exemplo, que está em risco de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau).

[0210] Em alguns aspectos, a invenção fornece um método para retardar a evolução de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau; ou de um anticorpo anti-Tau ou um medicamento compreendendo um anticorpo anti- Tau para retardar a evolução de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau (como qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos na presente invenção, por exemplo, AD). Os métodos fornecidos na presente invenção compreendem a administração de uma quantidade (por exemplo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um anticorpo anti-Tau a um indivíduo (por exemplo, que exibe um ou mais sintomas de uma doença ou distúrbio associado com a proteína Tau ).

[0211] Em um outro aspecto, a invenção fornece formulações farmacêuticas compreendendo qualquer um dos anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) aqui fornecidos, por exemplo, para uso em qualquer um dos métodos terapêuticos acima. Em uma modalidade, uma formulação farmacêutica compreende qualquer os anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) fornecidos na presente invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, uma formulação farmacêutica compreende qualquer um dos anticorpos anti-Tau (por exemplo, anti-pTau) fornecidos na presente invenção, e pelo menos um agente terapêutico adicional, por exemplo, conforme descrito abaixo.

[0212] Os anticorpos da invenção podem ser usados sozinhos ou em combinação com outros agentes em uma terapia. Por exemplo, um anticorpo da invenção pode ser administrado conjuntamente pelo menos um agente terapêutico adicional.

[0213] Por exemplo, a composição de acordo com a invenção pode ser administrada em combinação com outras composições compreendendo uma substância biologicamente ativa ou composto como, por exemplo, um composto conhecido usado na medicação de taupatias e/ou de amiloidoses, um grupo de doenças e distúrbios associados com a proteína amiloide ou tipo amiloide, como a proteína β-amiloide envolvida na doença de Alzheimer.

[0214] Em geral, outro composto biologicamente ativo pode incluir intensificadores de transmissão de nêutrons, fármacos psicoterapêuticos, inibidores de acetilcolina esterase, bloqueadores dos canais de cálcio, aminas biogênicas, tranquilizantes benzodiazepínicos, síntese da acetilcolina, intensificadores de armazenamento ou liberação, agonistas do receptor pós-sináptico da acetilcolina, inibidores da monoamina oxidase A ou B, antagonistas do receptor da N-metil-D- aspartato glutamato, fármacos anti-inflamatórios não esteroidais, antioxidantes e antagonistas dos receptores serotonérgicos. Em particular, o agente ou o composto biologicamente ativo pode compreender pelo menos um composto selecionado do grupo consistindo em compostos contra o estresse oxidativo, compostos antiapoptóticos, quelantes de metais, inibidores de reparação de DNA, tais como pirenzepina e metabólitos, ácido 3-amino-1-propanossulfônico (3APS), 1,3- propanodissulfonato (1,3PDS), ativadores da secretase, inibidores da [beta]- e 7- secretase, proteínas tau, neurotransmissor, quebradores de folhas β, moléculas anti-inflamatórias, "antipsicóticos atípicos", tais como , por exemplo clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol ou olanzapina, ou inibidores da colinesterase (ChEIs) como tacrina, rivastigmina, donepezila e/ou galantamina, e outros fármacos e suplementos nutritivos tais como, por exemplo, vitamina B12, cisteína, um precursor da acetilcolina, lecitina, colina, Ginkgo biloba, acietil-L-carnitina, idebenona, propentofilina ou um derivado da xantina, juntamente com um peptídeo de ligação de acordo com a invenção, incluindo anticorpos, particularmente anticorpos monoclonais e fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente e instruções para o tratamento de doenças.

[0215] Em uma outra modalidade, a composição de acordo com a invenção pode compreender niacina ou memantina, juntamente com um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado de acordo com a invenção, incluindo anticorpos, particularmente os anticorpos monoclonais e fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente.

[0216] Em ainda outra modalidade da invenção, são fornecidas composições que compreendem "antipsicóticos atípicos", tais como, por exemplo, clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol ou olanzapina para tratamento de sintomas psicóticos positivos e negativos, incluindo alucinações, delírios, transtornos do pensamento (manifestados por incoerência acentuada, descarrilamento, tangencialidade), e comportamento bizarro ou desorganizado, bem como anedonia, embotamento afetivo, apatia e isolamento social, juntamente com o anticorpo quimérico ou o anticorpo humanizado de acordo com a invenção ou fragmentos ativos dos mesmos e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente.

[0217] Outros Compostos Que Podem Ser Usados Adequadamente Nas Composições, Além Do Anticorpo Quimérico Ou Do Anticorpo Humanizado, De Acordo Com A Invenção, São Aqueles Divulgados, Por Exemplo, Em Wo 2004/058258 (Consulte Especialmente As Páginas 16 E 17) Incluindo Alvos De Fármacos Terapêuticos (Páginas 36 A 39), Ácidos Alcanossulfônicos E Ácido Alcanossulfúrico (Páginas 39 A 51), Inibidores Da Colinesterase (Páginas. 51 A 56), Antagonistas Dos Receptores Nmda (Páginas 56 A 58), Estrogênios (Páginas 58 E 59), Fármacos Anti- Inflamatórios Não Esteroidais (Páginas 60 E 61), Antioxidantes (Páginas 61 E 62), Agonistas Dos Receptores Ativados Por Proliferadores De Peroxissoma (Ppar) (Páginas 63 A 67), Agentes De Redução Do Colesterol (Páginas 68 A 75); Inibidores Amiloides (Páginas 75 A 77), Inibidores De Formação De Amiloide (Páginas 77 E 78), Quelantes De Metais (Páginas 78 E 79), Antipsicóticos E Antidepressivos (Páginas 80 A 82), Suplementos Nutricionais (Páginas 83 A 89) E Compostos Que Aumentam A Disponibilidade Das Substâncias Biologicamente Ativas No Cérebro (Consulte As Páginas 89 A 93) E Promedicamentos (Páginas 93 E 94), Cujo Documento Está Incorporado Na Presente Invenção Por Referência, Mas Especialmente Os Compostos Mencionados Nas Páginas Indicadas Acima.

[0218] Tais terapias de combinação observadas acima englobam a administração combinada (onde dois ou mais agentes terapêuticos estão incluídos na mesma formulação ou em formulações separadas), e separar a administração, neste caso, a administração do anticorpo da invenção pode ocorrer antes de, simultaneamente e/ou após a administração do agente ou agentes terapêutico(s) adicional/adicionais. Em uma modalidade, a administração do anticorpo anti-Tau e a administração de um agente terapêutico adicional ocorrem no período de cerca de um mês, ou dentro de cerca de uma, duas ou três semanas, ou dentro de cerca de um, dois, três, quatro, cinco ou seis dias, entre si.

[0219] Um anticorpo da invenção (e qualquer agente terapêutico adicional) pode ser administrado por qualquer meio apropriado, incluindo por administração parenteral, intrapulmonar e intranasal e, se desejado, para tratamento local, a administração intralesional. Infusões parenterais incluem a administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. A dosagem pode ser por qualquer via apropriada, por exemplo, por injeções, como injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo em parte de se a administração é breve ou crônica. Vários cronogramas de dosagem, incluindo, mas sem se limitar, a administrações únicas ou múltiplas em vários pontos de tempo, administração em bolus e infusão por pulso são contempladas na presente invenção.

[0220] Os anticorpos da invenção poderiam ser formulados, dosados e administrados de forma consistente com as boas práticas médicas. Fatores para consideração, nesse contexto, incluem o distúrbio particular sendo tratado, o mamífero particular sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de administração do agente, o método de administração, a programação da administração e outros fatores conhecidos pelos profissionais médicos. O anticorpo não precisa ser, mas é opcionalmente formulado com um ou mais agentes atualmente usados para prevenir ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade efetiva de tais outros agentes depende da quantidade de anticorpo presente na formulação, do tipo do distúrbio ou tratamento e de outros fatores discutidos acima. Estes são geralmente usados nas mesmas dosagens e com as vias de administração conforme descritas na presente invenção, ou cerca de 1 a 99% das dosagens descritas na presente invenção, ou em qualquer dosagem e por qualquer via que seja empiricamente/clinicamente determinada como sendo apropriada.

[0221] Para a prevenção ou o tratamento da doença, a dosagem apropriada de um anticorpo da invenção (quando utilizado sozinho ou em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos) dependerá do tipo de doença a ser tratada, do tipo de anticorpo, da gravidade e do curso da doença, se o anticorpo é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, de terapia anterior, do histórico clínico do paciente e da resposta ao anticorpo, e do critério do médico responsável. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente em um momento ou ao longo de uma série de tratamentos. Dependendo do tipo e da gravidade da doença, cerca de 1 μg/Kg a 15 mg/Kg (por exemplo, de 0,1 mg/Kg a 10 mg/Kg) do anticorpo pode ser uma dosagem inicial candidata para a administração ao paciente, seja ela, por exemplo, administrada por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Uma dosagem diária típica pode variar de cerca de 1 μg/Kg a 100 mg/Kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima, Para administrações repetidas ao longo de vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento geralmente seria prolongado até ocorrer uma supressão dos sintomas da doença desejada. Um dosagem exemplar do anticorpo estaria no intervalo de cerca de 0,05 mg/Kg a cerca de 10 mg/Kg. Assim, uma ou mais doses de cerca de 0,5 mg/Kg, 2,0 mg/Kg, 4,0 mg/Kg ou 10 mg/Kg (ou qualquer combinação das mesmas) podem ser administradas ao paciente. Tais doses podem ser administradas intermitentemente, por exemplo, a cada semana ou a cada três semanas (por exemplo, de modo que o paciente recebe de duas a cerca de vinte, ou por exemplo, cerca de seis doses do anticorpo). Uma dose de carga maior inicial, seguido por uma ou mais doses mais baixas, pode ser administrada. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis. O progresso dessa terapia é facilmente monitorado por ensaios e técnicas convencionais.

[0222] Deve-se compreender que qualquer uma das formulações ou métodos terapêuticos acima pode ser realizada utilizando um imunoconjugado da invenção no lugar de ou além de um anticorpo anti-Tau.

H. ARTIGOS DE FABRICAÇÃO

[0223] Em outro aspecto da invenção, é fornecido um artigo de fabricação contendo materiais úteis para o tratamento, prevenção e/ou diagnóstico dos distúrbios descritos acima. O artigo de fabricação compreende um recipiente e um marcador ou folheto da embalagem, em ou associado com o recipiente. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, bolsas de solução IV, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, como vidro ou plástico. O recipiente retém uma composição que é eficaz, em si mesma, ou combinada com outra composição eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar a condição, e pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasco com uma tampa perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é um anticorpo da invenção. O rótulo ou folheto da embalagem indica que a composição é usada para tratar a condição de escolha. Além disso, o artigo de fabricação pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição compreende um anticorpo da invenção; e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo, em que a composição compreende um outro agente citotóxico ou, de outra forma, terapêutico. O artigo de fabricação nessa modalidade da invenção pode compreender ainda um folheto da embalagem indicando que as composições podem ser usadas para tratar uma determinada condição. Alternativamente, ou adicionalmente, o artigo de fabricação pode compreender ainda um segundo (ou terceiro) recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, como água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Ele pode incluir ainda outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.

[0224] Entende-se que qualquer um dos artigos de fabricação acima pode incluir um imunoconjugado da invenção no lugar de ou além de um anticorpo anti-Tau (por exemplo, anti-pTau).

II. EXEMPLOS

[0225] Encontram-se a seguir exemplos dos métodos e composições da invenção. Entende-se que várias outras modalidades podem ser praticadas, dada a descrição geral fornecida acima.

[0226] Os anticorpos humanizados contra anti-pTau foram amadurecidos em termos de afinidade e foram analisados conforme descrito abaixo:

5202.4 DESCRIÇÃO DA MATURAÇÃO DE AFINIDADE

[0227] O 5202.4 humanizado foi exibido na superfície do bacteriófago M13 filamentoso no formato Fab usando vetores de fagemídeo (a Tabela 1 mostra a sequência de aminoácidos da 5202.4; a região variável da 5202.4 é idêntica ao anticorpo hACI-36-2B6-Ab1 descrito no documento PCT/US13/32341, depositado em 15 de março de 2013. Quatro bibliotecas foram construídas com base em um modelo de paragem (um vetor no qual as CDRs para a mutagênese foram deletadas e os códons de parada foram inseridos em um esforço para reduzir a expressão das sequências não mutantes). A mutagênese de Kunkel com oligonucleotídeos degenerados foi usada para modificar as CDRs em cada uma das quatro bibliotecas. As cadeias leve e pesada sofreram mutagênese separadamente; dessa forma, cada biblioteca continha uma cadeia pesada original e uma cadeia leve que sofreu mutagênese, ou vice-versa. Em duas das bibliotecas, a cadeia pesada ou a cadeia leve sofreu mutagênese, usando o esquema conhecido como “NNK walk”, em que um resíduo da CDR de cada vez (por CDR) sofreu mutagênese usando o códon degenerado NNK. NNK é capaz de codificar todos os vinte aminoácidos naturais e um códon de parada. Todas as três CDRs sofreram mutagênese simultaneamente. Nas outras duas bibliotecas, as três CDRs de cadeia pesada ou leve sofreram mutagênese simultaneamente usando a mutagênese "suave". Nesse caso, durante a síntese do oligonucleotídeo, cada nucleotídeo na região selecionada para mutagênese foi substituído com uma mistura contendo 90% de nucleotídeo original e 3,3% de cada um dos nucleotídeos não originais. As posições 2 e 3 do códon foram mantidas como parentais para os resíduos CDR-L1 L27a, CDR-L1 L33 e CDR-H1 M34 (numeração de Kabat). O DNA que sofreu mutagênese foi transformado na E. coli XL1 e a biblioteca foi resgatada com o fago auxiliar baseado em M13. O número de transformantes foi estimado como sendo entre 2 x 108-1 x 109 para cada biblioteca.

[0228] Cada biblioteca foi submetida a três ou quatro ciclos de seleção com peptídeo biotinilado em solução, usando o peptídeo biotinil-18-amino- 4,7,10,13,16-pentaoxaoctadecanoil-Gly-Asp-Thr-Ser[PO3H2]-Pro-Trp-His-Leu- Ser[PO3H2]-Asn-Val-Ser-Ser-Thr-Gly-Ser-Ile-Asp-NH2 (SEQ ID NO: 93). Os complexos fago/peptídeo foram capturados em microplacas revestidas com neutravidina, lavados repetidamente e eluídos com ácido clorídrico 100 mM. Os fagos eluídos foram amplificados em E. coli XL1 Blue, recuperados com o fago auxiliar e purificados por precipitação com PEG/NaCl. As concentrações de peptídeo biotinilado usadas foram 250 nM (ciclo 1), 100 nM (ciclo 2), 40 nM (ciclo 3) e 4 nM ou 10 nM (ciclo 4). Em algumas das seleções do ciclo 4, a IgG parental (1 μM) foi adicionada à mistura fago/peptídeo trinta minutos antes da captura.

[0229] Os clones individuais foram isolados por diluição limitante e sequenciados a partir do DNA de plasmídeo. Após o Ciclo 3 e, em um segundo experimento, após o ciclo 4, foi observado que as sequências de consenso surgiram nos pools com cadeias leves que sofreram mutagênese. As mutações mais frequentemente observadas incluíram: H27dR, S27eR, S27eK, H28R, H28N, H28K, K30R, S52R, S52K, S56F, S56L, Q90S, A92R, H93R, H93Q, Y96R (numeração de acordo com o sistema Kabat). 23 sequências de aminoácidos foram obtidas, ou seja, TAM1, TAM2, TAM3, TAM4, TAM5, TAM6, TAM7, TAM8, TAM9, TAM10, TAM11, TAM12, TAM13, TAM14, TAM15, TAM16, TAM17, TAM18, TAM19, TAM20, TAM21, TAM22, TAM23 (coletivamente, as "proteínas TAM"). Um total de 22 sequências de aminoácidos únicas foram selecionadas para uma análise adicional e foram expressas como fragmentos Fab recombinantes e IgG por transfecção transiente de células 293S (Nota: TAM20 e TAM22 representam a mesma sequência de aminoácidos).

[0230] A figura 1 mostra as mudanças de aminoácidos nas CDRs das proteínas TAM em relação à figura 5202.4; A tabela 2A fornece as sequências de aminoácidos das CDRs de cadeia leve das proteínas TAM e 5202.4; a tabela 2B fornece as sequências de aminoácidos para as CDRs de cadeia pesada das proteínas TAM e 5202.4; a tabela 3 mostra as posições Kabat nas quais as mutações de aminoácidos ocorrem e o tipo de mutações nas proteínas TAM; A tabela 4 mostra as sequências de aminoácidos de cadeia leve variável e as sequências de aminoácidos de cadeia pesada variável das proteínas TAM; A tabela 5 mostra as sequências de aminoácidos de cadeia leve integrais das proteínas TAM, a tabela 7 mostra as sequências de aminoácidos de cadeia pesada integrais (IgG1) das proteínas TAM. A tabela 6 mostra as sequências de aminoácidos da cadeia pesada integrais dos isotipos IgG4 dos anticorpos TAM. A tabela 8 mostra as sequências de aminoácidos da cadeia pesada integrais dos isotipos IgG1 N297G dos anticorpos TAM.

SELEÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DO ANTICORPO

[0231] Os instrumentos Biacore foram usados para caracterizar a Fab e a IgG usando a análise de ressonância de plasmônio de superfície. Para esses experimentos, a proteína Tau fosforilada com a proteína quinase A (PKA) foi imobilizada diretamente em um chip sensor CM5 ou da série S CM5 usando o kit de acoplamento amina da Biacore e um tampão de imobilização de acetato de sódio pH 5. A célula do fluxo 1 foi tratada para uso como uma célula de referência e os dados dessa célula foram subtraídos de todos os sensorgramas antes da análise. O tampão de regeneração de glicina 10 mM, pH 1,7 foi injetado durante 0,5 a 1 minuto após cada ciclo de associação/dissociação. A ligação do anticorpo foi avaliada em uma vazão de 30 μL/min. As constantes cinéticas foram determinadas por regressão não linear usando o software BIAevaluation e um modelo de ligação 1:1.

[0232] A triagem dos 22 clones TAM foi realizada em um instrumento de Biacore T100 usando um chip da série S CM5 e quatro concentrações diferentes de zero de cada Fab (2,4, 12, 60 e 300 nM). Os resultados foram classificados por KD e são mostrados na tabela 9. A partir das classificações de KD, TAM1, TAM2, TAM9, TAM19 e TAM20 foram selecionados para serem adicionalmente caracterizadas. Dois experimentos foram realizados (tabela 10), ambos usando sete concentrações Fab diferentes de zero, incluindo uma concentração em replicata. O experimento um utilizou um instrumento Biacore T100, um chip sensor série S CM5 e período de regeneração de 30 segundos. O experimento 2 utilizou um instrumento Biacore 3000, um chip sensor CM5 e um período de regeneração de 1 minuto. A tabela 10 mostra a cinética de ligação das variantes de afinidade amadurecida selecionadas de 5202.4 (formato Fab) à proteína Tau fosforilada-PKA. Densidade do ligante: cerca de 403 RU de proteína Tau fosforilada -PKA foi imobilizado no experimento 1 e cerca de 356 RU foi imobilizado no experimento 2.

[0233] Os clones também foram analisados no formato de IgG (IgG1), usando um chip sensor CM5 e um instrumento Biacore 2000. O tempo de regeneração foi igual a 1 minuto. Seis concentrações diferentes de zero, incluindo uma concentração em replicata, foram testadas; desses dados, pelo menos cinco das seis injeções foram incluídas na análise final. Devido à bivalência da IgG, o ajuste subótimo de 1:1 pode ser esperado nesse formato, e os resultados podem depender da densidade do antígeno imobilizado. Duas densidades foram avaliadas simultaneamente usando células de fluxo adjacentes e os resultados estão mostrados na tabela 11 (o quadro 11 mostra a cinética de ligação das variantes de afinidade maturada selecionadas de 5202.4 (formato de IgG) com a proteína Tau fosforilada-PKA). Densidade do ligante: cerca de 153 RU de proteína Tau fosforilada-PKA foram imobilizados na célula de fluxo 4 (densidade de ligante 1) e cerca de 824 RU do mesmo na célula de fluxo 3 (densidade de ligante 2). Esses dados demonstram que há um componente de avidez pela ligação dos anticorpos com o ligante, e indicam que ambos os segmentos do anticorpo podem contribuir para a ligação do anticorpo ao ligante.

[0234] A especificidade dos cinco clones principais foi avaliada por ELISA. Microplacas revestidas com 0,1 ou 1 μg/mL de Tau integral não fosforilada, TAU integral PKA-fosforilada, Tau integral hiperfosforilada ou alfa-sinucleína monofosforilada foram bloqueadas com PBS/BSA 0,5%/Tween 20 0,1% (BBT) durante várias horas em temperatura ambiente e foram expostas à IgG anti-Tau com as concentrações declaradas, em BBT, durante duas horas. A sequência de aminoácidos da Tau integral (441 aa) usada nesse experimento é fornecida na tabela 12 (SEQ ID NO: 59). A Tau integral PKA-fosforilada foi obtida através da incubação da Tau integral in vitro com a proteína quinase A, que fosforila a serina 409. A Tau hiperfosforilada foi obtida através da incubação da Tau integral in vitro com um coquetel de quinases, incluindo a PKA, GSK3β, CDK5 e a caseína 1 delta quinase. A IgG ligada foi detectada com a Fc anti-humana conjugada com a peroxidase e visualizada com um sistema de detecção à base de 3,3',5,5'- tetrametilbenzidina (TMB). Após a adição de um volume igual de ácido fosfórico 1 M, a absorvância a 450 nm foi quantificada utilizando um leitor de placas SpectraMax M2 (Molecular Devices). A IgG TAM1, TAM2, TAM9, TAM19 e TAM20 se ligou às placas revestidas com Tau integral PKA-fosforilada, porém se ligou pouco, se possível às placas revestidas com a proteína Tau não fosforilada ou à alfa-sinucleína monofosforilada (Figura 2).

[0235] As especificidades dos cinco clones principais para a fosfosserina 404 e para a fosfosserina 409 também foram avaliadas por ELISA. Em um experimento (Figura 3), as placas Nunc maxisorp foram revestidas com 5 μg/mL de IgG em tampão de revestimento (solução de carbonato de sódio pH 9,6) durante 70 minutos em temperatura ambiente. Nenhum sítio de ligação não específico foi bloqueado com BBT por um período mínimo de 2 horas, em seguida, as placas foram lavadas e peptídeo biotinilado 10 nM em BBT foi adicionado. Depois de 1,5 hora, o peptídeo ligado foi detectado por uma incubação de 65 minutos com estreptavidina conjugada com peroxidase e detecção com TMB, como descrito acima. A figura 3 mostra a média e o intervalo de poços em duplicata; o eixo y representa a absorvância a 450 nm. Os peptídeos sintetizados e utilizados nesse experimento (que correspondem aos aminoácidos 401 a 418 da Tau completa) têm as seguintes sequências de aminoácidos (tabela B): TABELA B

[0236] Em outro experimento (Figura 4), as mocroplacas de Nunc maxisorp foram revestidas com 5 μg/mL de neutravidina em tampão de revestimento de um dia para o outro a 4 °C, e os sítios de ligação não específicos foram bloqueados por incubação com BBT durante um período mínimo de 2 horas. Os peptídeos biotinilados (20 nM) foram, em seguida, deixados ligar durante 1,5 hora antes das placas serem lavadas e expostas à IgG nas concentrações definidas durante 1 hora. Os mesmos peptídeos foram utilizados neste experimento como no experimento mostrado na figura 3 e descrito anteriormente (consulte a tabela B). A IgG ligada foi detectada com anticorpo anti-humano conjugado com peroxidase e pela detecção com TMB, como descrito acima. Várias concentrações de IgG foram usadas (0,01 nM, 0,1 nM, 1 nM, 10 nM e 100 nM). A figura 4 mostra a média e o intervalo de poços em duplicata; o eixo y representa a absorvância a 450 nm. "Fundo" indica o sinal de poços não revestidos com Neutravidina; "Nenhum peptídeo" indica o sinal dos poços revestidos com Neutravidina, mas não expostos ao peptídeo.

CONCLUSÃO

[0237] Os dados mostram que os anticorpos de afinidade maturada que reconhecem e se ligam especificamente a um epítopo fosforilado na Tau foram gerados. Alguns dos anticorpos gerados exibem alta especificidade e/ou alta afinidade pela pTau.

[0238] TAM1, TAM2 e TAM9 identificam seletivamente a fosfosserina 409 na Tau, como mostrado por ELISA e Biacore. Em geral, todos os dados também mostram a seletividade desses anticorpos (ou seja, TAM1, TAM2 e TAM9) para a fosfosserina 409 no contexto da Tau integral fosforilada em comparação com a Tau integral não fosforilada. TABELA 1. SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DA 5202.4 (HIGGI) Tabela 2A. Sequência De Aminoácidos Das Cdrs Das Regiões Variáveis De Cadeia Leve Das Proteínas TAM E 5202.4 TABELA 2B. SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DAS CDRS DAS REGIÕES VARIÁVEIS DE CADEIA PESADA DAS PROTEÍNAS TAM E 5202.4 (É IGUAL EM TODAS AS PROTEÍNAS TAM E 5202.4) TABELA 3. MUTAÇÕES DE AMINOÁCIDOS NA SEQUÊNCIA DAS CDRS DE CADEIA LEVE NAS PROTEÍNAS TAM EM RELAÇÃO AO 5202.4 TABELA 4. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DAS REGIÕES DA CADEIA LEVE VARIÁVEL E DA CADEIA PESADA VARIÁVEL DAS PROTEÍNAS TAM TABELA 5. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS INTEGRAIS DAS CADEIAS LEVES DAS PROTEÍNAS TAM TABELA 6. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE COMPRIMENTO TOTAL DA CADEIA PESADA (IGG4) DA TAM TABELA 7. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS INTEGRAIS DA CADEIA PESADA (IGG1) DAS PROTEÍNAS TAM TABELA 8. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS INTEGRAIS DA CADEIA PESADA (IGG1 N297G) DA TAM TABELA 9. TRIAGEM BIACORE: FABS CLASSIFICADOS POR KD

[0239] Ligante: Proteína Tau integral PKA-fosforilada, imobilizada diretamente usando o acoplamento de amina.

[0240] Analito: Fab recombinante TABELA 10. CINÉTICA DE LIGAÇÃO DAS VARIANTES DE AFINIDADE AMADURECIDA SELECIONADAS DE 5202.4 (FORMATO FAB) À PROTEÍNA TAU FOSFORILADA-PKA NO BIACORE: INTERAÇÃO MONOVALENTE TABELA 11. CINÉTICA DE LIGAÇÃO DAS VARIANTES DE AFINIDADE AMADURECIDA SELECIONADAS DE 5202.4 (FORMATO IGG) À PROTEÍNA TAU FOSFORILADA-PKA

[0241] Concentrações testadas: 25 nM, 6,25 nM, 1,56 nM, 1,56 nM, 0,4 nM, 0,1 nM. Controle de qualidade: os dados de 25 nM foram excluídos onde a fase de associação negativo e/ou a ligação não específica maior que cerca de 10% da Rmax foi observada (TAM1 & 2, em ambas as densidades; TAM19, densidade 1). Uma curva (TAM20, 1,25 nM) foi excluída devido a uma inclinação positiva na fase de dissociação. O asterisco (*) indica Chi2 aproximadamente igual a 21% da Rmax. Observe que o ajuste subideal de 1:1 pode ser esperado para a ligação da IgG bivalente com um antígeno imobilizado. TABELA 12. ISOFORMA MAIS LONGA DA TAU HUMANA (441 AA), TAMBÉM CHAMADA DE TAU40

[0242] Embora a invenção acima tenha sido descrita com certo grau de detalhes a título de ilustração e exemplo, para fins de clareza de compreensão, as descrições e exemplos não deve ser interpretados como limitantes do escopo da invenção. As divulgações de toda a literatura científica e de patente citada nesse documento são expressamente incorporadas em suas totalidades por referência.

Claims

1. ANTICORPO ISOLADO, que se liga a um epítopo fosforilado da proteína Tau humana, caracterizado pelo anticorpo compreender as seguintes HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3: i. (a) sequência de aminoácidos da HVR-L1 de SEQ ID NO:1; (b) sequência de aminoácidos da HVR-L2 de SEQ ID NO:16; e (c) sequência de aminoácidos da HVR-L3 de SEQ ID NO:27; ou ii. (a) sequência de aminoácidos da HVR-L1 de SEQ ID NO:2; (b) sequência de aminoácidos da HVR-L2 de SEQ ID NO:17; e (c) sequência de aminoácidos da HVR-L3 de SEQ ID NO:27; ou iii. (a) sequência de aminoácidos da HVR-L1 de SEQ ID NO:8; (b) sequência de aminoácidos da HVR-L2 de SEQ ID NO:21; e (c) sequência de aminoácidos da HVR-L3 de SEQ ID NO:29; ou iv. (a) sequência de aminoácidos da HVR-L1 de SEQ ID NO:14; (b) sequência de aminoácidos da HVR-L2 de SEQ ID NO:25; e (c) sequência de aminoácidos da HVR-L3 de SEQ ID NO:31; ou v. (a) sequência de aminoácidos da HVR-L1 de SEQ ID NO:9; (b) sequência de aminoácidos da HVR-L2 de SEQ ID NO:17; e (c) sequência de aminoácidos da HVR-L3 de SEQ ID NO:31; e em que o anticorpo compreende as seguintes HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3: a sequência de aminoácidos da HVR-H1 GYTFTDYYMN (SEQ ID NO: 33); a sequência de aminoácidos da HVR-H2 DINPNRGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 34); e a sequência de aminoácidos da HVR-H3 YYAVGY (SEQ ID NO: 35).

2. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender uma sequência do domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada da SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:54 e SEQ ID NO:55.

3. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado por compreender uma sequência do domínio variável da cadeia pesada (VH) da SEQ ID NO: 58.

4. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por compreender uma sequência do domínio variável da cadeia leve (VL) selecionada da SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 54 e SEQ ID NO: 55 e uma sequência do domínio variável da cadeia pesada (VH) da SEQ ID NO: 58.

5. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser um anticorpo monoclonal.

6. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado por ser um anticorpo humanizado ou quimérico.

7. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado poor ser um anticorpo humanizado.

8. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser um anticorpo IgG1 integral.

9. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser um anticorpo IgG4 integral.

10. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser um anticorpo IgG1 N297G integral.

11. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado por ser um fragmento Fv, Fab, Fab’, scFv, diacorpo ou F(ab’)2.

12. IMUNOCONJUGADO, caracterizado por compreender o anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e um agente citotóxico.

13. FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender o anticorpo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

14. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar uma taupatia em um indivíduo.

15. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar doença de Alzheimer (AD) em um indivíduo.

16. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar demência frontotemporal (FTD) em um indivíduo.

17. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar uma deficiência em ou perda das funções cognitivas em um indivíduo.

18. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para reduzir os níveis totais de proteína Tau no cérebro de um indivíduo.

19. USO DO ANTICORPO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para reduzir os níveis totais de uma proteína Tau fosforilada ou hiperfosforilada no cérebro de um indivíduo.

20. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, caracterizado pelo indivíduo ser humano.

21. ANTICORPO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por ser para a detecção de emaranhados neurofibrilares, filamentos de neuropil, neurite distrófica, taupatia, AD ou FTD.

22. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por ser para a detecção de taupatia.

23. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por ser para a detecção de AD.

24. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por ser para a detecção de FTD.