BR0112101B1

BR0112101B1 - Interleucin 2 stabilized

Info

Publication number: BR0112101B1
Application number: BRPI0112101A
Authority: BR
Inventors: A Shearer Michael; Nayar Rajiv; Wang Wei
Original assignee: Aicuris Gmbh & Co Kg; Bayer Corp
Priority date: 2000-06-28
Filing date: 2001-06-27
Publication date: 2017-11-14
Also published as: CN1523997A; DE60142412D1; CA2413334C; WO2002000243A3; AU2001273063A1; CO5290308A1; KR100799402B1; US6689353B1; CA2413334A1; JP5989728B2; IL153587A0; MXPA03000046A; IL153587A; WO2002000243A2; EP1370280A2; JP5522878B2; DOP2001000197A; AR029139A1; MY128629A; KR20030016312A

Abstract

"interleucina 2 estabilizada". a preparação farmacêutica estável compreendendo interleucina2 humana ou uma variante desta e uma quantidade estabilizante de histidina. a formulação preferida inclui glicina e sacarose e uma variante de il-2 tendo uma mutação única, n88r. a formulação preferida é na forma liofilizada, que sob reconstituição com um diluente aquoso, resulta em uma solução tendo um ph variando de cerca de 5,0 a 6,5.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS ESTÁVEIS COMPREENDENDO INTERLEUCI-NA 2 ESTABILIZADA".

FUNDAMENTO DA INVENÇÃO CAMPO

A invenção está geralmente relacionada com o campo das formulações farmacêuticas. Mais especificadamente, a invenção está direcionada a uma formulação de lnterleucina-2 terapeuticamente ativa estabilizada capaz de seletivamente ativar células T (PHA-blasts) e, muito preferivelmente, incluindo uma muteína de IL-2 demonstrando ativação reduzida de células exterminadoras naturais ("NK"). As composições estabilizadas tendo as propriedades preferidas incluem variantes de IL-2 descritos abaixo. FUNDAMENTO

Como discutido em um pedido relacionado PCT/US 99/10643 publicado em 25 de novembro de 1999, a lnterleucina-2 (IL-2) é uma potente es-timuladora imune, ativando diversas células do sistema imune, incluindo células T, células B e monócitos. A IL-2 é também um potente e crítico fator de desenvolvimento de células T. Foi em virtude dessas atividades que IL-2 foi testada pela sua capacidade de tratar o câncer. A IL-2 humana é uma droga aprovada FDA para o tratamento do carcinoma renal metastático e melanoma metastáti-co. O uso de IL-2 em pacientes elegíveis é restrito devido a grave toxicidade associada com a terapia com IL-2; é estimado que na melhor das hipóteses somente 20% dos pacientes elegíveis atualmente recebam a terapia. As toxici-dades associadas com a terapia com IL-2 incluem graves febres, náuseas, vômitos, vazamento vascular e sérias hipotensões. A despeito dessas toxicida-des, entretanto, IL-2 é eficaz para suas indicações aprovadas. Os variantes de IL-2 tendo toxicidade reduzida é o assunto principal do pedido WO 99/60128. A informação significante sobre a estabilização da IL-2 e outras formulações de proteína terapêutica está disponível. A preparação de IL-2 Humana atualmente aprovada (IL-2 Proleukin®, Chiron Corporation) é uma preparação secada por congelamento que inclui manitol, sulfato de dodecila de sódio (SDS) e um tampão de fosfato. Outras proteínas terapêuticas for- muladas, incluindo IL-2, estão descritas nas seguintes referências.

Fernandes e outros, 1986, Composições farmacêuticas de in-terleucina-2 microbialmente produzidas (Patente U.S. n° 4.604.377) descreve uma formulação secada por congelamento contendo um estabilizador (manitol) e um agente de solubilização tal como sulfato de dodecila de sódio ou sulfato de deoxicolato de sódio em cerca de 100 a cerca de 250 ug por mg de IL-2. A formulação para o produto de IL-2 Proleukin® atualmente disponível acredita-se estar descrita nesta referência.

Patel, 1994 Estabilização de formulações de proteína (Patente U.S. n° 5.358.708) descreve formulações aquosas de um interferon, um fator de estimulação de colônia de granulócito-macrófago ou uma interleucina tendo uma duração de armazenagem prolongada incorporando-se metioni-na, histidina ou misturas destes. Embora referência seja feita às várias in-terleucinas, incluindo IL-2, no trabalho feito com uma formulação de IL-4 as patentes constataram que a histidina é menos eficaz como um estabilizador do que a metionina, sob condições do estabilizador teste empregado.

Shaked, e outros, 1991, Composições farmacêuticas de inter-leucina-2 recombinante e processos de formulação (Patente U.S. n° 5.037.644) descreve formulações que são ou secadas por congelamento ou na forma líquida. Os excipientes da formulação incluem um detergente poli-mérico não-iônico tal como um Triton X405, Triton X305, monoestearato PEG (4000), Tween 80 e Tween 20 em concentrações de cerca de 0,001% a cerca de 5%, um agente de estabilização/encorpante tal como sacarose, frutose, dextrose, maltose, glicose, dextran, manitol, sorbitol, inositol, galac-titol, xilitol, lactose, trealose, albumina de soro humano e albumina de soro bovino, e um agente de tamponamento tal como glicona, citrato, ou fosfato em uma concentração variando de cerca de 10 mM a cerca de 50 mM com um pH variando de cerca de 3 a cerca de 7. A concentração (peso/volume) do agente encorpante de açúcar de poliol varia de cerca de 0,025% a cerca de 10%.

Roskan, e outros, 1995, Drogas contendo uma interleucina-2 glicosilada (Patente U.S. n° 5.417.970) descreve uma formulação secada por congelamento contendo gelatina hidrolizada (ou albumina de soro humano) e alanina com um pH 6,5.

Hora, e outros, 1992, Composições farmacêuticas para interleu-cina-2 contendo estabilizadores fisiologicamente compatíveis (Patente U.S. n° 5.078.997) descreve formulações que são ou líquidas ou secadas por congelamento. As formulações podem conter um ou uma combinação de estabilizadores tal como arginina, carnitina, betaína, piridoxina, polivinilpir-rolidona, sais de ácido cáprico, açúcares, álcoois de açúcares, albumina de soro, e citrato em tampão com pH 5,0-8,5. A concentração dos estabilizadores é entre 0,2 e 3,0% (peso/volume) para carnitina, entre 2 e 6% (peso/volume) para sacarose, e 0,01 e 0,3 M para citrato.

Yasushi, e outros, 1987 Composição estável de interleucina-2 e albumina (Patente U.S. n° 4.645.830) descreve uma formulação aquosa estável que contém albumina de soro humano (0,1-50 mg/ml) com ou sem um excipiente de redução tal como glutationa, ácido tióctico, N-acetilcisteína, ou ácido ascórbico (concentração de 0,05-20 mg/ml) em pH entre 3 a 5,5. A formulação de albumina pode conter um aminoácido alifático de monoami-no, um aminoácido cíclico, um monossacarídeo, um aminoácido alifático de monoamino ou álcool de açúcar (concentração de 5 a 50 mg/ml).

Lee, e outros, 1989 Formulações de proteína de plasma farmacêuticas em veículos de resistência iônica inferior; cloreto de sódio e/ou cloreto de potássio, hidrocloreto de lisina, e histidina (Patente U.S. n° 4.877.608) descreve fator VIII estável e outras formulações de proteína de plasma em veículos de resistência iônica inferior que compreende: cloreto de sódio, cloreto de potássio ou misturas destes; cloridrato de lisina; e histidina como o agente de tamponamento.

Nayar, 1998 Preparação do fator VIII recombinante sem albumina estabilizada tendo um baixo conteúdo de açúcar (Patente U.S. n° 5.763.401 e 5.874.408) descreve uma formulação FVIII estabilizada sem albumina incluindo glicina, histidina, sacarose e NaCI.

Na tentativa de encontrar uma formulação de IL-2 (especialmente para a muteína de IL-2 preferida (N88R) de WO 99/60128), atual- mente tem-se encontrado uma formulação farmaceuticamente aceitável e muito estável para IL-2 humano biologicamente ativo. A descoberta está com base no direcionamento o que acredita-se ser o mecanismo básico responsável pela estabilidade, como descrito abaixo.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 é um gráfico ilustrando a faixa de pH ótimo para uma solução de IL-2 aquoso.

Figura 2 compara o efeito estabilizante da histidina para acetato e citrato sobre a agregação de IL-2 induzida pelo aquecimento da solução de proteína em 1 C°/minutos de 25°C a 95°C.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção é uma composição farmacêutica ou formulação de IL-2 ou variantes (muteínas) destes estabilizada com histidina. Preferivelmente, a composição compreende uma mistura resultando em uma solução de resistência iônica baixa (por exemplo, <0,1) e inclui outros estabilizadores tal como açúcares e aminoácidos, preferivelmente sacarose e glicina. A formulação pode incluir de 0 a 0,9% em peso de NaCI. A composição é sem albumina e a formulação na forma lipofilizada pode ser rapidamente reconstituída (<1 minuto) com água. A composição solubiliza sob condições de pH fisiologicamente aceitáveis, preferivelmente em um pH variando de cerca de 5,0 a cerca de 6,5, sem o uso de tensoativos tal como sulfato de dodecila de sódio. A solução reconstituída está próxima da isoto-nicidade e pode ser administrada tanto subcutaneamente quanto intraveno-samente. Em uma modalidade muito preferida, a IL-2 da composição é uma muteína tendo uma única substituição de aminoácido, preferivelmente o variante N88R descrito em WO 99/60128. A composição muito preferida tem uma concentração de proteína de 1-5 mg/ml e compreende os seguintes na forma aquosa (sob uma base peso/peso). IL-2 0,1-0,5% em peso Histidina 0,08-1,6% em peso NaCI 0-0,9% em peso Sacarose 1 -10% em peso Glicina 0-3% em peso, em um pH de 5 a 6,5 Os detalhes da nossa formulação e como foi descoberta são descritos abaixo.

MODALIDADES ESPECÍFICAS

Como empregado aqui, o termo IL-2 inclui igualmente IL-2 tipo silvestre ativo e seus variantes biologicamente ativos ou muteínas tal como aquelas descritas em WO 99/60128. Nos exemplo abaixo foram empregados uma IL-2 conhecida como IL-2(N88R) que é uma muteína recombinante de IL-2 humana, com aspargina (N) na posição de aminoácido 88 modificada para arginina (R). Esta muteína foi expressa de células de ovário de hamster Chinês (CHO) e compreendeu uma mistura de ambas formas não-glicosiladas e glicosiladas. Isto está descrito na WO 99/60128 citado acima como um pedido relacionado. O objetivo que conduz a esta invenção foi a necessidade de identificar uma forma de dosagem liofilizada para a muteína IL-2 preferida que foi sem albumina com estabilidade aceitável. Desse modo, o bioensaio para IL-2 foi uma medição insensível de estabilidade, onde foram empregadas quantitações de IL-2 solúvel por HPLC de fase reversa como o ensaio de indicação de estabilidade. Como empregados aqui, o termo "estável" ou "estabilizado" significa redução da quantidade de IL-2 solúvel pelo HPLC de fase reversa para não menos do que 90% da quantidade solúvel original após armazenamento durante quatro meses a 40°C (observe as tabelas 3 e 4 abaixo). Os ensaios de indicação de estabilidade adicionais empregados incluem índice de Agregação, uma medição de agregação por espectrofo-tometria UV/VIS e determinação de agregados solúveis por HPLC de exclusão de tamanho. Além de um produto estável, a reconstituição rápida (menos do que 1 minuto) da liofilizado é altamente preferida.

Finalmente, a formulação em uma forma de dosagem liofilizada com estabilidade aceitável que poderia ser facilmente liofilizada nos secadores por congelamento da produção foi desejada.

Os estudos de estabilidade aquosa, realizados durante as pesquisas da pré-formulação indicaram que IL-2 (N88R) facilmente agrega no estado líquido e a agregação foi dependente do pH. Dois estudos de estabilidade de pré-formulação foram conduzidos: um perfil de pH de IL-2 (N88R) e estabilidade na presença de excipientes de tampões diferentes. Os objetivos desses estudos foram para identificar uma taxa de pH adequada para IL-2 (N88R) e um excipiente de tamponamento adequado para estabilidade aquosa (potencial de agregação reduzido). Na geração do perfil do pH, as soluções IL-2 foram preparadas com condições de pH diferentes e armazenadas sob condições de temperatura acelerada (40°C). As amostras foram analisadas em intervalos de tempo diferente e taxas de agregação calculadas. Como mostrado na figura 1, a faixa de pH ótimo para taxas de agregação inferior foi identificada entre pH de 5,0 e 6,5. A histidina, o acetato e o citrato foram identificados como agentes de tamponamento farmacêutico para IL-2 (N88R) nesta faixa de pH e foram avaliados em uma concentração de 20 mM em soluções de IL-2 (N88R) contendo 1 mg/ml de IL-2 (N88R) e 150 mM (0,9% em peso) de NaCI. Essas amostras foram aquecidas de 25°C a 95°C em 1°C por minuto e a precipitação foi monitorado por espectrofoto-metria UV em 350 nm. Como mostrado na figura 2, para nossa surpresa, a histidina significantemente estabilizou IL-2(N88R) sobre os outros excipientes de tamponamento em pH 5,5 como indicado por um aumento na temperatura inicial da precipitação. As temperaturas iniciais na presença de citrato, acetato, e histidina foram 62°C, 64°C, e 70°C, respectivamente. Estudos tal como estes demonstraram que histidina pode ser empregada não somente como um agente de tamponamento porém também como um estabilizador para IL-2 sob condições aquosas.

Para desenvolvimento de uma forma de dosagem liofilizada, outros excipientes que são empregados por aqueles familiarizados com a técnica foram investigados. Estes incluíram agentes de tamponamento e crioprotetores tal como glicina, sacarose, e manitol. Dois tensoativos foram também avaliados como estabilizadores para IL-2 (N88R), desde que a agregação tenha um dos mecanismos de instabilidade para a molécula du- rante os estudos de estabilidade aquosa. Os resultados desses estudos são sumarizados nos exemplos abaixo. Eles mostraram que para nossa surpresa a histidina tem efeitos de estabilização seletiva na IL-2 sobre outros ex-cipientes, tal como citrato por exemplo.

Exemplo 1 A estabilidade da IL-2 (N88R) líquida em pHs diferentes foi examinada em 40°C. Os resultados mostraram que a taxa de precipitação de IL-2 (N88R) foi menor entre pH 5,0 a 6,5 (Figura 1). Então, o pH 5,5 foi escolhido como o pH ótimo da formulação no estado líquido e para preparação de formulações liofilizadas.

Exemplo 2 Examinou-se o efeito potencial de agentes de tamponamento diferentes sobre a estabilidade de IL-2 (N88R). Os agentes de tamponamento que foram examinados incluíram citrato, acetato, e histidina. Estes agentes de tamponamento foram empregados em 20 mM em soluções de IL-2 (N88R) contendo 1 mg/mç de IL-2(N88R) e 150 mM (0,9% em peso) de NaCI. Estas amostras de estabilidade foram aquecidas a partir de 25°C a 95°C em 1°C por minuto ao mesmo tempo em que sendo monitoradas por espectrofotometria UV/VIS. A histidina significantemente estabilizou IL-2 (N88R) aumentando-se a temperatura de precipitação e diminuindo-se a taxa de precipitação em comparação com acetato e citrato (Figura 2). A tabela 2 mostra a temperatura de precipitação inicial de IL-2 (N88R) na presença desses três agentes de tamponamento. A temperatura de precipitação inicial foi arbitrariamente definida como a temperatura na qual a densidade óptica em 350 nm (OD350) alcança um certo nível (0,2 e 1,0 no caso de OD350). A temperatura de precipitação de IL-2 (N88R) na presença de histidina foi vários graus mais elevados do que àqueles na presença dos outros dois agentes de tamponamento. Este exemplo demonstrou que a histidina pode ser um estabilizador específico além de ser empregado como um agente de tamponamento para IL-2 (N88R) no estado líquido.

Tabela 1: Temperatura de Precipitação (OD^n = 0.2 e OD^n = 1,Q) de IL-2 (N88R) em Tampões Diferentes Exemplo 3 Em uma tentativa para avaliar também o efeito estabilizante da histidina, IL-2 (N88R) lifolizada foi preparada a partir de diferentes formulações aquosas (observe a Tabela 2). A maioria das formulações conteve 2% em peso de glicina como um agente encorpante e 1% em peso de sacarose como um estabilizador. O manitol em 5% em peso foi empregado em uma formulação como um comparador para Proleukin®, um produto comercializado de IL-2. Dois tensoativos, Tween 80 e Pluronic F68 ambos em 0,1% em peso, foram avaliados para prevenção de agregação e absorção da superfície da proteína e agregação. Todas as formulações contiveram ou histidina ou citrato como um agente de tamponamento com um pH ajustado para 5,5. O citrato foi incluído para distinguir o efeito estabilizante da histidina daquele do citrato em pH 5,5. Essas formulações lifolizadas foram armazenadas a 40°C e foram analisadas por diversos métodos analíticos que incluíram espectrofotometria UV/VIS, SEC-HPLC, e RP-HPLC. A tabela 3 mostra a estabilidade da IL-2 (N88R) em diversas formulações como avaliado por espectrofotometria UV/VIS para agregação, quantidade de agregados solúveis por HPLC de exclusão por tamanho (SEC-HPLC), e percentual de recuperação da proteína por HPLC de fase reversa (RP-HPLC). As amostras foram analisadas após lipofilização e armazenadas em uma temperatura de armazenamento acelerada de 40°C durante quatro meses. O processo de lifolização não mudaria o índice de agregação na rede de IL-2 (N88R) do estado de pré-lifolização, sugerindo que IL-2 (N88R) tolere o processo de liofilização com respeito à precipita- ção/agregação de proteína. Após armazenamento a 40°C durante quatro meses, um aumento significante no índice de agregação na rede foi observado para a formulação contendo citrato (B), PluronicF-68 (D), ou manitol (E). Estes resultados indicaram que a inclusão ou de citrato, manitol ou Tween-80 ou Pluronic F-68 não ofereceu qualquer proteção de agregação de IL-2 (N88R) no estado sólido durante o armazenamento. As formulações de A e F não mostrariam uma mudança significante no índice de agregação, sugerindo que a inclusão de histidina, glicina, e sacarose com 1 ou 5 mg/ml de IL-2 (N88R) resultasse em um produto estável.

Entretanto, as quantidades significantes de agregados solúveis foram constatadas na formulação contendo Tween-80 mesmo antes da liofi-lização (Tabela 3), indicando que Tween-80 promove formação de agregados IL-2 (N88R) solúveis, embora a formação de agregados insolúveis possa ser inibida. Uma vez que Pluronic F-68 (formulação D) também cause a formação significante de agregados solúveis, os tensoativos não podem ser compatíveis com IL-2 (N88R). Somente as formulações que contiveram 2% de glicina, 1% de sacarose, e 20 mM de histidina (0,31% em peso) (A, F) não mostraram qualquer formação detectável de agregados solúveis após o armazenamento da formulação lifolizada em 40°C durante quatro meses, sugerindo novamente que IL-2(N88R) fosse estabilizada pela histidina. A recuperação total da IL-2 (N88R) solúvel após liofilização e armazenamento foi determinada por RP-HPLC (Tabela 3). A recuperação da IL-2 (N88R) após liofilização foi maior do que cerca de 96% para todas formulações exceto para a formulação contendo manitol. Após armazenamento dessas formulações em 40°C durante 4 meses, aproximadamente 92% de IL-2 (N88R) foi recuperado nas formulações A e F contendo 2% de glicina, 1% de sacarose, e 20 mM (0,31% em peso) de histidina contendo 1 e 5 mg/ml de IL-2 (N88R). Esses dados (maior do que 90% de recuperação de IL-2 (N88R) para formulações A e F) sugeriram novamente que a histidina estabilize IL-2(N88R) ao mesmo tempo em que desestabilize a proteína.

Tabela 2: Composição de Formulação 1L-2(N88R) Lifolizada Tabela 3: Estabilidade de IL-2 (N88F0 durante Liofilizacão e Armazenamento da Formulação Liofilizada em 40°C durante 4 meses aND = não detectável bNA = não disponível Exemplo 4 IL-2 tipo silvestre foi também liofilizada a partir de uma formulação aquosa da mesma composição como a formulação A. Os dados da estabilidade para IL-2 tipo silvestre em 40°C foi comparável àqueles para IL-2 (N88R) (Tabela 4).

Tabela 4: Estabilidade da Formulação de IL-2ÍN88R1 tipo silvestre durante Liofilização e Armazenamento da Formulação Liofilizada.

aND = não detectável DISCUSSÃO IL-2 humano tem 133 aminoácidos que forma seis estruturas helicoidais (A-F). Quatro dessas formas de hélice que é chamada de um motif de lote de tetrahélice. A ligação de disulfeto intramolecular entre cys58 e cys105 está localizada na alça estendida entre as hélices. O cys125 livre está localizado na hélice F que incorpora os aminoácidos 117-133. O descobrimento inesperado que a histidina é um estabilizador específico de IL-2 sugere que a histidina pode interagir com IL-2 de uma maneira específica que resulte na estabilização da molécula em ambos os estados liofilizado e aquoso. Um dos maiores mecanismos de instabilidade do IL-2 é a agregação que resulta da formação de oligômeros devido às reações de alteração do tiol/dissulfeto. Por conseguinte, alguém pode supor que a histidina possa de fato inibir ou reduzir as reações de alteração do tiol-dissulfeto em IL-2. Desde que IL-2 tipo silvestre, IL-2 (N88R) e possivelmente outras moléculas variantes de IL-2 que tenham uma ligação de disulfeto e uma cisteína livre (Cys125), o grupo SH livre no Cys125 pode facilmente reagir com a ligação dissulfeto através da passagem de alteração do tiol/dissulfeto através da qual resultando em eventuais agregações /precipitações. O mecanismo de alteração do tiol/dissulfeto tem sido descrito recentemente por Bulaj e outros. (Relação de reatividade por ionização para tióis de cisteína em polipeptídeos. Bioquímico 23 de junho de 1998; 37(25):8965-72). Em estudos de proteínas e peptídeos modelo, a taxa de reação tem sido mostrada ser sensível a forças eletrostática bem como a estrutura secundária das proteínas. A distribuição do elétron em volta de um átomo de súlfur em um tiol pode ser influenciada pela presença de efeitos indutivos através de ligações e alterações próximas que podem alterar o pK, do tiol. Por exemplo, reatividade aumentada dos tióis na alteração de tiol/dissulfeto pode ser atribuída à redução do seu pK, devido à presença ou de alterações positivas próximas ou contribuições de dipolo de peptídeo de uma estrutura alfa hélicoidal. Em contraste, as alterações negativas próximas do grupo de tiol podem aumentar o pK do tiol e conduzir para taxas de reações de tiol/dissulfeto. Este mecanismo proposto é também suportado por outros estudos, onde a estabilização de íons de tiolato altamente reativos por resíduos positivamente alterados próximos foi demonstrada para fosfatase de tiosina de proteína (Zhang e Dixon, 1993 Rotulação de Sítio Ativo da fosfatase de tirosina da proteína Yersinia: a determinação do pKa da cisteína do sítio ativo e a função da histidina conservada 402. Bioche-mistry 14 de setembro de 1993;32(36): 9340-5) e isomerase de dissulfeto de proteína (Kortemme e outros, Intereações eletrostática no sítio ativo do domínio tipo tioredoxina de terminação N de isomerase de dissulfeto de proteína. Biochemistry 19 de novembro de 1996; 35(46): 14503-11).

Com base nessas propriedades da reação de alteração tiol/dissulfeto, alguém pode prever um mecanismo de estabilização onde a histidina desempenha ou um papel termodinâmico ou cinético na estabilização de IL-2 (N88R). Existem cinco resíduos de ácido glutâmico (57, 60, 61, 62, e 106) perto da ponte de dissulfeto Cys58- Cys105. A ligação específica de histidina a esses resíduos negativamente carregados podem conduzir a uma barreira cinética para a reação de alteração de tiol/dissulfeto ou a ligação da histidina próxima a ponte de dissulfeto pode estabilizar termodinamicamente a molécula IL-2 em uma conformação que é menos provável a reações de agregação. Além disso, as intereações iônicas His-Glu podem também aumentar o obstáculo estéricos que ainda reduziría a etapa de determinação de taxa na alteração de tiol/dissulfeto que é a formação de um estado de transição intermediário entre os três átomos de enxofre participantes. A acessibilidade da histidina aos resíduos de ácido glutâmico é muito provável por causa da ligação do dissulfeto estar localizada em uma alça estendida da superfície de proteína.

Dados os exemplos abaixo é esperado que variações das invenções divulgadas aqui ocorram àqueles versados na técnica. Consequentemente, é entendido que os exemplos acima devam ser construídos como somente ilustrativos e que as invenções divulgadas aqui devam ser limitadas somente pelas seguintes reivindicações.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Composição farmacêutica liofilizada, estável, caracterizada pelo fato de que compreende uma muteína de interleucina-2 humana (IL-2) estabilizada com histidina, sendo que a dita muteína de IL-2 apresenta uma única substituição de aminoácido N88R.

2. Composição farmacêutica na forma aquosa, estável, caracterizada pelo fato de que compreende uma muteína de interleucina-2 humana estabilizada com histidina, sendo que a dita muteína de IL-2 apresenta uma única substituição de aminoácido N88R, apresentando um pH variando de 5,0 a 6,5.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que inclui glicina.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que inclui sacarose.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que inclui glicina e sacarose.

6. Composição liofilizada, estável, caracterizada pelo fato de que, sob reconstituição aquosa, compreende os seguintes: IL-2 0,1 a 5 mg/mL, Histidina 0,08 a 1,6% em peso, NaCI 0 a 0,9% em peso, Sacarose 1 a 10% em peso, e Glicina 0 a 3% em peso, em um pH de 5 a 6,5, sendo que a dita IL-2 é uma muteína apresentando uma única substituição de aminoácido N88R.