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"Procédé pour la préparation de 4 pxarène diul-3-uu ou d u.3opreçnane-2U-oi3,6-diaue".
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Dans la demande de brevet allemand a* Son 2997 IVb/12 o est décrit un procédé pour la préparation dt L'..gr, . na-6,2Q-dial-3-one (III) et de 1 al,spretane-20.ol3e6-dioa.a (7') isomère, ainsi que des dérivée fonctionnels ]aydroj<y]Lé<tt en particulier des esters de cas composée, qui est caractérisé' par le fait que l'on soumet le groupe nydroxyle en position 3
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du A -pregnèn -3p,6,2ûp-triolt selon des modes opératoires
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connu en eux-meaea, à une oxydation sélective, que l'on eép*- re les produits d'oxydation engendrées d'une manière connue en elle-même, en leurs composants et que, si on le désire,
l'on
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transforme ensuite les dernière d'une manière connue en elle- même, en leurs dérivés hydroxyléa fonctionnels. Les produite du procédé du brevet précité sont, à cause de leur action 00*- trogène et cytostatique, des produits pharmaceutiques de grande valeur.
Il a maintenant été trouvé, que l'on peut préparer les mêmes composés également en partant de la A -pregnène-
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2OP-ol-3-one (I) connue et plus facilement préparable, en in- troduisant en position 6 de ce composé, d'une manière connue en elle-même, un hydroxyle et en traitant ensuite, selon le
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procédé du brevet précité, le produit d'bydroX11ation pr18iti- vement formé. Pour l'introduction de 1'hydroxyle en position 6, se sont révélée employables dans le cas présent, parmi les processus connus en eux-même, aussi bien des processus biochi- miques que purement chimiques.
Ainsi, l'on peut, à l'aide de l'enzyme des champi-
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gnons chaetomium funicolum ou Rhizopus nigricans, introduire le groupe hydroxyle en position 6, directement dans la mql'oule du la A -pregnène-2op-ol-3-one ou de son 20-ester, ce lors de quoi, daus le dernier cas, se produit simultanément une saponi- fication du groupe ester.
Pour l'introduction du groupe hydrosyle en position
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6 par voie purement chimique, on utilise l'action de peraeides, en particulier l'acide monoperphtalique, de préférence sur un 20-ester de la l4 pregnène-2?S-o3-3ane transformé auparavant, , de manière connue, en son $nolae7Late, et on obtient ainsi le 20-ester correspondant de la A 4-preenène-60-200-diol-3-ones qui ensuite, si on le désire, est transposée par traitement avec un alcali, en l,'allopregnane-20p-ol-3,6-dione.
Au lieu de cela, on peut cependant également trans- former le même énolacylate,par traitement avec des halogènes,
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en particulier avec le brome ou d'autres agents de b1'08ura- tison, comme la U-bro.acétamide. tout d'abord en le 20-ester correspondant de la 6-br08o- qui
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ensuite est transposé, par traitement avec des acides en solu-
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tion alcoolique aqueuse. en particulier l'acide ahlorbldrique. sans isolement de la 14-pregnne-lCt-diol--aae engendrée comme sous-produit, directement en 1*allopregnant-ZOP-01-316-
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dione.
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Par l'utilisation de la N-broraosucainïm.de, on peut 8;'.e s'épargner le stade de l'énolacylate et trto.r le 20-enter de la d'-pre;rënr-2C-aC-,-one directement en le
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20-ester de la 6-bromo- qui ensuit.,
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coma@ il vient d'être indiqué, est transposé et l'allopregnone- 20-oi-3,S-àione.
Le tableau de formules suivatt explique le procédé
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conforme à l'inventions
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EXEMPLE¯1
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40,46 gr de A 4¯pregnên.-20p-ol--oa. ont aban- donnés dans 1 210 cm3 d'anhydride acétique avec 40,46 gr d1 aci- de p-toluènesultuD1que. sous azote, pendant 16 heures, avec
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agitation au début, à la température ambiante. Maintenant, l'en-
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titrete du mélange de réaction est délayée prudemment dans l'eau glacée, le précipité solide est essoré et séché. Recrista1li., dans le méthaJlo1. on obtient â3,gr de 1 .prentdièn-3,2- diol-diacétate de point de fusion lO&ll6.. Une nouvelle re-
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cristallisation dans le méthanol avec du charbon fournit un
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point de fusion de 120-124*.
A 1,.7, gr de l'inolaoitutt oot.- nu, dans 1 725 cas d'acétone, ont ajoutée goutte A goutte, en refroidissant avec de la glace, une solution, refroidi* par la glace, de 16,5 gr de )t-broIlacét6f.81de.. 15,0 gr d'acétate 40 sodium, 16., cm3 d'acide acétique et 500 gaz d'eau, on 610leO alors le bain de glaces abandonne 3 heures à la température ambiante et concentre dans le vide jusqu'à siccité. Le 6-bromc-
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A -pretsnène-20p-ol-3-one-20-acébate bl"\1t ainsi obtenu est chauffé dans 1 9M cm3 d'éthanol et 198 cm3 d'acide chlorh7- drique concentré, pendant 4 heures à reflux, sous anots, est ensuite concentré dans le vide, à environ 1/3 du volume; le mé- lange da réaction est délayé dans l'eau glacée, le précipité ainsi formé est essoré,lavé avec de l'eau et séché.
Après re-
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cristallisation dans l'acétate d' éthyle (avec du charbon), oa obtient la 5crcprsrnane=t?-o3.-3,fi-dine avec point de fusion 225-2290. Une nouvelle cristallisation dans la mét3rlioobutyl- cétone fournit un point de fusion de 22g2,1 [aJ' - 25* (OHC1,;>. Rendement global après chromatographie des eaux-aères sur silicagel, qui contient 101/a d'eau, avec chlorure de méthyle- ne-tétrachlorure de carbone r 1 lui 4.1 sr. La substance se présente de manière @ identique au matériau préparé par une autre voie.
EXEMPLE 2
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A 5,0 gr de A4 pregnne-2±-al-3 one-2C1-astats dans 250 cm3 de tétrachlorure de carbone sec, sont ajoutés 6.0 gr de ll-bromosucciniaide et le mélange est chauffé 1 heure à reflux. Après filtration, concentration à siccité, le 6-brono- #4 -pregnène-20p-ol-3-one-20-acétate brut ainsi obtenu est
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traité ultérieurement comme dans l'exemple 1. La 5a-pregnane'" 20p-ol 3,6-dione ainsi préparée fond, après ohromatographie sur silicagel et recristallisation dans la .ét11liaobutyle¯tone. à 229-231 .
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BXEl4PL1:: Une solution de 4,0 gr A4-prsgnne-2ti-ol-3..oae dans 200 c 2 de benzol sec et 40 cntf d'acétate d'ieopropényle, qui contient 1,2 gr d'acide p-toluène-sultoniquq manohyàraté, est chauffée avec distillation lente pendant 4 heures, ce lors de quoi, après les deux premières hauxâs;nm3oni ri u- 'Veau ajoutée. Ensuite, après addition d'eau glacée, on extrait avec du chlorure de méthylènelave cette solution avec du bi- carbonate de sodiua et de l'eau, sèche et évapore à siccité.
Une priae d'essai recristallisée dans le méthanol, fond à 120-
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124'. Le A;-preçnadiène3,2t-diol-diacétata brut ainsi obtenu est maintenant abandonné avec 1,3 équivalent d'acide roaaperphtalique dane 400 cm3 d'éther, pendant environ 72 heu- ree. Après traitement usuel et chromatographie ex l*oxyde d'alu- minium neutre, on obtient le C.-pragnëne-6,Odial3-rn!- 20-acqtate. LJ'Y e236 a 13 000.
EXEr.#LE 4 Une solution de 100 ng de A4,.prsgune-6,2Q.diol- 3-one-20-aoétate dans 20 Cs3 de méthanol est additionnée de 1,0 gr d'hydroxyde de potasutuel dissous dans 2 ca3 d'eau, et chauffée pendant une heure à reflux. Après refroidissement, la solution est neutralisée avec l'acide acétique, diluée avec de l'eau et extraite avec du chlorure de méthylène et traitée comme à l'ordinaire. Le résidu restant après évaporation du
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solvant .et recriatalliaé dans la .étli8obutl1c'ton.. La 9e'- prognane-200-ol-31,6-diont ainsi obtenue fond à 8.-2r'". Rien- dement 73 mg.
EXEMPLE 5
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300 g de 5ac-pxe,nan-2(3-01., 6-dian sont chauffa alto 1,2 cm3 de pyridine et 0,6 cm3 d'anhydride acétique, pen- dant 1 1/2 heure au bain-marie. Après refroidissement, délayage prudent dune l'eau glacée, essorage et lavage à l'eau du préci-
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pit6 formé, on obtient, par recristallisation dans le méttanol, le 5,oc-pre,nane-2f3-o1-36-dions-2-aratat de point de fusion 200-201, 5" . Rendement 200 .
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EXEMPLE 6
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6p-bydroxylatÏon de la ..prgnne-:7-0l-3-dions. a) avec Cbaetomium tunicolum Un fermenteur en acier inoxyda&le, de 50 1 de ca-
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paoitéiu garni de 30 1 d'une solution nutritive de . 0,5% extrait de levure
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0,51* liqueur de Cornateep
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2tuw 8ue d'amidon ajustée au pH 7,0, .tér11i..e
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par c4au.tta..se, poîtndant 40 minutera 120" et, après refroidisse- ment, ensemencée avec une suspension de spores de Chaetoa1wa tW11colUli, qui avais été obtenue par prélèvement l1e culture de Mais de 5 jours (15 gr mats) avec environ 100 ml de solu- tion physiologique de chlorure de sodium.
Après croissance de 48 heures à 28 avec agitation,
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(220 toure/min.) et aération (1,65 m'/h), tl.1tJ>rélev.. dans de conditions stériles,, 1,8 litre de la culture engendrée, et transe- géré dans un foraouteur de 50 litres avec 28,2 litron d'une solution nutritive de la mt3me composition, stérilisée Ourra ci-dessus.
Après une durée de croissance de 16 heures turent
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ajoutée , dans des conditions stériles, 7,5 gr de 4- renène- 20p-ol-3-ons dans 150 ml d'éthanol. La durée de reraentation fut déterminée par analyse chro81atograph.'lque sur papier, de et prises d'essai8/s'él. à environ 48 à 64 heuros.
Le bouillon de fermentation fut filtré sur un en- tonnoir-filtre et le filtrat fut extrait 3 fois avec de.9 frac-
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tions de 10 litres de a éthy.isoàutlaétone. L'extrait fut con- centré dans un évapore-teur a marche continue sous vide. Le réai- du huileux fut chromatoraphié au silicael.
Avec chlorure de mét tjlè ne -chloroforme (1 1 fuit élue environ 1 gr de matière première huileuse.
Les produits élues avec le chloroforme et avec chloroforme-acétate d'éthyle contenaient environ 5 gr de com.. posé 6p-hydroxylé brut qui furent recristallisés dans acétone-
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éther de pétrole. .8 6r de produit pur(50 de la théorie).
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P.7. 186,5-189- f2,6 . 13 600 b) avec Rhizopus nigricans
Dans un fermenteur de 50 litres, furent ensemencé* 30 litres de solution nutritive composée de
3,5% extrait de malt
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3,0% sucre d' amidon 0, 65'p NaC1 0,15% peptone
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O,016 Kahn)4 et 0,009 Ug;;) 4 à l'aide d'une suspension de spores de Bh1sopus n16r1cana . développés dans les mêmes conditions techniques que sous a).
Après 24 heures tuent ajoutés dans cotte culture 15 gr de 4..
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pre6nène-20-ol-3-ons dans 200 ail d'éthanol et fermentes pen- dant 24 autres heures.
Après le traitement décrit sous a), le produit brut
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huileux fut chromatographie au ailicagol,,
Avec du chloroforme, tut élue environ 1 gr de na- tière première inaltérée. Produit pur : 0,69 gr.
Les produits élues avec chloroforme-acétate d'éthy- le (4 : 1) fournirent, après recristallitation dans chlorure
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de mathylène-éther isopropylique , 1,6 gr de composé 6µ-hydro- X11é (10). P.F. la3-r.
Les produits élues avec chloroforme-acétate d'éthy- ent
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le (2 1) à (1 1 1) contenai/ le composé 11a-bydroxy1é. ce
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après quoi furent élues, avec l'acétate d'éthyle,de faibles por-
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tions de composé ,11a-âixaydroxyl.
RBVENùICATION6 1. Modification du procédé pour la préparation de .4-pre,nne-,U-d,ol-3-one et de 3.lallopregaana-2U3-o1- t6-dione isomère, ainsi, que de leurs dérivée hdroxylés tono- tionnels, aelon le brevet précité, caractérisée par le fait que l'on introduit un b1Jroxyle en position 6 de la A4¯prenèn.- eop-ol-3-onot d'une manière connue on elle-môme et que, ensuite,
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on traite ultérieurement selon le procédé du brevet précité.
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Se produit dfhydroi7lation primitivement formé.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on effectue l'introduction du groupe hydroxy-
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16 en position 6 par voie biochieiquct en particulier à l'aide des enzymes des champignons Chaetomium funicolum ou Rhisoptts nigricans.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
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par le fait que l'on traite le 20-ester de lit a 4-pregnètit- -ol- 20p? 5"Boa seut t&xmt 1 na.actia avec 48 y.rac1ù88, en particulier l'acide xnonoperphtalique.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé @
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par le fait que l'on .et à réagir le 20-ester de la A -pregab- -ol- 20p'-3-oae, de préférence sous foroe de son éaolacylate, arec le brome ou d'autres agents de bromuration, en particulier
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avec la li-bromacétamide et que l'on transpose le 6-broao- A - pregnène-20p-ol-.3-one-2Q-acylate obtenu, avec des acides en 80- lution alcoolique aqueuse, en particulier 1* acide chlorb1drl- que, directement en allopregnane-20p-ol-p,6-dione.
5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé par le fait que l'on met à réagir la 20-ester de la #4-pre-
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gnéne-2Q-al.-3-one directement avec la N-bromosucciniNide et que l'on procède pour le reste selon la revendication 4.
6. Les 20-esters de la 6-bromo- t-pregnene-20- ol-3-one.