Prueba Rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo - (Suero / Plasma / Sangre Total) Página 1 de 2

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SE SUMINISTRAN

1. Reloj o cronometro
2. Contenedor para mantener las muestras de prueba
3. Pipeta con puntas para volúmenes de 20 uL con una precisión mayor a 1.5%.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Para uso de Diagnóstico in Vitro
Catálogo Número R0121C 1. Este inserto debe ser leído en su totalidad antes de llevar a cabo la prueba. De no ser
así, se pueden presentar resultados imprecisos.
2. La bolsa de aluminio no se debe abrir, a menos que se vaya a realizar el ensayo
inmediatamente.
Diagnóstico In vitro 3. No utilice dispositivos caducados.
4. Lleve todos los reactivos a una temperatura ambiente de 15°C - 30°C antes de ser usados.
USO 5. No utilice los componentes de otro tipo de kit de prueba para reemplazar los componentes del
La prueba rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo es un inmunoensayo de flujo lateral que kit.
permite la detección simultánea y la diferenciación de IgG e IgM para las subespecies de 6. No utilice muestras de sangre hemolizadas para ensayo.
Leishmania donovani (L.donovani), los protozoarios causales de leishmaniasis Visceral, a 7. Utilice ropa protectora y guantes desechables durante la manipulación de los reactivos del kit y
través de suero, plasma o muestras de sangre humanos. Se utiliza como prueba de tamizaje y muestras clínicas. Lávese bien las manos luego de realizar la prueba..
como apoyo en el diagnóstico de enfermedades de leishmaniasis Visceral. Cualquier muestra 8. Los usuarios de esta prueba deben seguir las precauciones universales del CDC de Estados
reactiva con la prueba rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo debe ser certificada a través Unidos para la prevención de la transmisión de VIH, VHB y otros patógenos transmitidos a
de la aplicación de métodos alternativos de ensayo. través de la sangre.
9. No se debe fumar, beber o comer en áreas donde se manipulen las muestras o reactivos del
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA kit.
La leishmaniasis visceral o Kala-azar, es una infección diseminada por varias subespecies de 10. Deseche todas las muestras y materiales utilizados en la prueba como residuos biológicos
L. donovani. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que la enfermedad afecta peligrosos.
1
aproximadamente 12 millones de personas en 88 países . Esta se transmite a los humanos 11. Manipule los controles Positivo y Negativo de la misma forma que con las muestras.
por medio de la picadura de los mosquitos flebótomos, los cuales adquieren la infección al 12. Los resultados de las pruebas deben leerse antes de 15 minutos después de aplicada la
alimentarse de animales infectados. Aunque es una enfermedad que se encuentra en los muestra en la cavidad del dispositivo o en la almohadilla de muestras del dispositivo. Si se
países pobres, en el sur de Europa, se ha convertido en una infección oportunista en realiza la lectura del resultado después de los 15 minutos puede dar resultados erróneos.
2-3
pacientes con SIDA . 13. No lleve a cabo la prueba en un cuarto con flujo de aire fuerte, por ejemplo con un
ventilador eléctrico o aire acondicionado.
La identificación del organismo L. donovani proveniente de la sangre, médula ósea, hígado,
ganglios linfáticos o el bazo proporciona un medio definido de diagnóstico. La detección PREPARACION DE REACTIVOS E INSTRCCIONES DE ALMACENAMIENTO
serológica de anti-L. donovani IgM es un excelente marcador para la detección de
Todos los reactivos suministrados están listos para su uso. Almacene el dispositivo de prueba
Leishmaniasis visceral aguda. Entre las pruebas utilizadas en clínica se incluyen ELISA,
sellado a una temperatura de 2°C a 30°C. Los controles positivo y negativo deben mantenerse
inmunofluorescencia directa o pruebas de aglutinación4-5. Recientemente, la utilización de la
a una temperatura de 2°C a 8°C. Si se almacenan bajo esta temperatura, asegúrese de que el
proteína especifica L. donovani en la prueba ha mejorado la sensibilidad y la especificidad de
dispositivo de prueba se encuentre a temperatura ambiente antes de abrirlo. El dispositivo de
manera significativa6-7.
prueba es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa sellada. No se debe
La prueba rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo es una prueba serológica recombinante congelar el kit ni exponer a una temperatura de más de 30°C.
con base en rK39, que detecta anticuerpos IgG e IgM para L. donovani simultáneamente. La
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA Y MANIPULACIÓN
prueba proporciona un resultado fiable en 15 minutos sin la utilización de ningún instrumento
adicional. Considere todos los materiales de origen humano como infecciosos y manipúlelos siguiendo
los procedimientos de bioseguridad.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA Plasma
La prueba rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo es un inmunoensayo cromatográfico de Paso 1: Extraiga la muestra de sangre en un tubo de recolección con punta de color
flujo lateral. El casete de prueba consiste en: 1) una almohadilla de conjugado de color lavanda, azul o verde, (con contenido de EDTA, citrato o heparina, respectivamente)
borgoña recombinante con contenido de antígeno rK39 conjugado con oro coloidal mediante punción intravenosa.
(conjugados de Leishmania) y conjugados de IgG-oro para conejo, 2) una tira de membrana Paso 2: Separe el plasma mediante centrifugación.
de nitrocelulosa que contiene dos bandas de prueba (M y G) y un grupo control (grupo C). La Paso 3: Retire con cuidado el plasma en un tubo nuevo previamente etiquetado.
banda M se encuentra pre-revestida con anticuerpo monoclonal anti-IgM humano para la Suero
detección de anticuerpos anti-L. donovani IgM, la banda G se encuentra pre-revestida con Paso 1: Extraiga la muestra de sangre en un tubo de recolección con tapa roja (el cual no
reactivos para la detección de anticuerpos anti-L. donovani IgG, y la banda C se encuentra contiene anticoagulantes) mediante punción intravenosa.
pre-revestida con anticuerpo de cabra anti-IgG de conejo. Paso 2: Permita que la sangre coagule.
Paso 3: Separe el suero mediante centrifugación.
Identificación Banda de Líneas de Pozo de Paso 4: Retire con cuidado el suero en un nuevo tubo previamente etiquetado.
de la muestra Control prueba muestra
Después de la recolección, realice el análisis de las muestras tan pronto como sea posible. Almacene
las muestras a una temperatura de 2ºC a 8ºC en caso de no ser usada inmediatamente.
Almacene las muestras a una temperatura 2ºC a 8ºC hasta por 5 días y congeladas a una
temperatura de -20°C en caso de necesitar un almacenamiento más prolongado.
Evite ciclos múltiples de congelación y descongelación. Antes del ensayo, permita que las
Cuando un volumen adecuado de muestra de prueba se dispensa en la cavidad para muestras congeladas lleguen a una temperatura ambiente lentamente y luego mézclelas
muestras del casete, la muestra migra por acción capilar a través de éste. Si hay presencia de suavemente. Las muestras que contengan partículas visibles, deben ser aclaradas mediante
IgM contra la L. donovani en la muestra, este se une a los conjugados de Leishmania. Luego centrifugación antes de la prueba. No utilice muestras que presenten lipemia gruesa,
el inmunocomplejo es capturado sobre la membrana por el anticuerpo IgM pre-recubierto anti- hemolisis grave o turbidez con el fin de evitar interferencias en la interpretación de resultados.
humano, formando una banda M de color borgoña, indicando un resultado de L. donovani IgM
positivo para la prueba. Sangre
Se pueden obtener gotas de sangre entera mediante un pinchazo en el dedo o por medio de
Si hay presencia de L. donovani IgG en la muestra, éste se unen a los conjugados de punción venosa. No utilice sangre hemolizada en las pruebas.
Leishmania. El inmunocomplejo es capturado después por los reactivos pre-recubiertos en la
membrana, formando una banda G de color borgoña, lo que indica un resultado positivo para Las muestras de sangre entera deben ser refrigeradas a una temperatura de 2°C a 8°C en
L. donovani IgG de la prueba. caso de no usarlas en la prueba. Las muestras deben analizadas en un plazo de 24 horas
luego de la recolección
La ausencia de las bandas de prueba (M y G) representa un resultado negativo. La prueba
contiene un control interno (banda C) la cual muestra una banda de color borgoña del PROCEDIMIENTO
inmunocomplejo de cabra anti IgG de conejo / conjugado conejo IgG- oro independientemente Paso 1: Lleve los componentes de muestras y ensayos a temperatura ambiente en caso de
del color presentado en cualquiera de las bandas de prueba. De lo contrario, el resultado de la estar refrigerados o congelados Una vez descongelada, mezcle bien la muestra
prueba no es válido y la muestra debe ser analizada de nuevo con otro dispositivo. antes de realizar el ensayo.
Paso 2: Una vez se esté listo para llevar a cabo el ensayo, abra la bolsa por la muesca y
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS
retire el dispositivo. Coloque el dispositivo de prueba en una superficie limpia y
1. Bolsas de aluminio selladas que contiene: plana.
a. Un dispositivo casete Paso 3: Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de identificación de la muestra.
b. Un desecante Paso 4: Para prueba de sangre
2. Goteros de plástico Aplique 1 gota de sangre (de 40 a 50 µL) en la cavidad para muestras.
3. Un diluyente de muestras (1 vial, 5ml) Luego adicione inmediatamente una gota (de 35 a 50µL) de diluyente de muestra.
4. Un inserto (Instrucciones de uso)

MATERIALES QUE SON REQUERIDOS Y NO SON SUMINISTRADOS

1. Control Positivo
o Resultado
2. Control Negativo 15 minutos

1 gota de muestra 1 gota de diluyente de muestra

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Para pruebas de suero o plasma CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO

Vierta 20 µL de la muestra en la cavidad para muestras del dispositivo. 1. Rendimiento clínico para la prueba IgM
Luego adicione inmediatamente dos gotas (de 70-100 µL) de Diluyente de Un total de 234 muestras de sujetos susceptibles fueron analizadas con la prueba
Muestras. rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo y mediante una prueba comercial EIA de L.
donovani IgM . La siguiente tabla presenta la comparación de todos los sujetos.

Prueba Rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo

Resultado
EIA IgM Positivo Negativo Total
15 minutos
Positivo 31 3 34
Negativo 1 199 200
20 µL de suero/plasma 2 gotas de diluyente de muestra Total 32 202 234
Paso 5: Programe el cronómetro. Sensibilidad Relativa: 91.2%, Especificidad Relativa: 99.5%, Concordancia: 98.3%

Paso 6: Los resultados pueden leerse en el transcurso de 15 minutos. Los resultados 2. Rendimiento clínico para la prueba IgG
positivos son visibles en un tiempo de 1 minuto. Un total de 214 muestras de sujetos susceptibles fueron analizadas con la prueba
rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo y mediante una prueba comercial EIA de L.
No realice la lectura del resultado después de 15 minutos. Para evitar
donovani IgG . La siguiente tabla presenta la comparación de todos los sujetos.
confusiones, deseche el dispositivo de prueba después de interpretar su
resultado. Prueba Rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo
CONTROL DE CALIDAD EIA IgG Positivo Negativo Total
1. Control interno: Esta prueba contiene una característica de control interno, la banda Positivo 13 1 14
C. La línea C se genera luego de adicionar la muestra y el diluyente. De otro modo, Negativo 2 198 200
revise en su totalidad el procedimiento y repita la prueba con un nuevo dispositivo.
Total 15 199 214
2. Control externo: Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan el uso de controles Sensibilidad Relativa: 92.9%, Especificidad Relativa: 99.0%, Concordancia: 98.6%
externos, positivos y negativos, con el fin de asegurar un adecuado rendimiento de la
prueba, particularmente bajo las siguientes circunstancias: LIMITACIONES DE LA PRUEBA
a. Un nuevo operador utiliza el kit, antes de realizar el análisis de las muestras. 1. El procedimiento de análisis y la interpretación de resultados del ensayo deben ser
b. Se usa un nuevo kit de ensayo. seguidos muy de cerca cuando se evalué la presencia de anticuerpos para L- donovani
c. Se usa un nuevo envío de kits. en el suero, plasma o sangre de sujetos individuales. Si no se sigue el procedimiento
d. La temperatura usada durante el almacenamiento del kit se encuentra fuera de pueden generarse resultados inexactos.
2°C a 30°C. 2. La prueba rápida OnSite Leishmania IgG/IgM Combo se limita a la detección cualitativa
e. La temperatura de la zona de ensayo se encuentra fuera de 15°C a 30°C. de anticuerpos para L donovani en suero, plasma o sangre humanos. La intensidad de
la banda de prueba no tiene correlación lineal con el título de anticuerpo en la muestra.
f. Al verificar una frecuencia superior a la prevista de resultados positivos o
3. Un resultado no reactivo para un individuo indica ausencia de anticuerpos detectables
negativos.
de L. donovani. Sin embargo, un resultado de prueba no reactivo no excluye la
g. Al investigar la causa de resultados inválidos repetitivos. posibilidad de exposición a las especies causativas de Visceral leishmaniasis de L.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS donovani.
4 Puede presentarse un resultado no reactivo si la cantidad de anticuerpos L. donovani
1. RESULTADO NEGATIVO: Si sólo aparece la banda C, y hay ausencia de color presentes en la muestra se encuentra por debajo de los límites de detección del
borgoña en las demás bandas de prueba (M y G) indica que en la muestra no se logró ensayo, o los anticuerpos detectados no están presentes durante la etapa de la
detectar el anticuerpo anti-L.donovani. En este caso el resultado es no reactivo. enfermedad en la cual se recoge una muestra.
5. Algunas muestras que contienen títulos inusualmente altos de anticuerpos heterófilos o
de factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados.
6. Si el síntoma persiste, cuando el resultado de la prueba rápida OnSite Leishmania
IgG/IgM Combo es un resultado no reactivo, se recomienda analizar la muestra
nuevamente días después o analizar con métodos alternativos de prueba tales como
ELISA.
7. Los resultados obtenidos con esta prueba sólo deben interpretarse junto con otros
2. RESULTADO POSITIVO: procedimientos diagnósticos, así como con hallazgos clínicos.
2.1 Si además de presentarse una línea en la banda C, solo se genera la banda M,
la prueba indica la presencia de anticuerpos anti-L. donovani IgM. En este caso REFERENCIAS
el resultado es positivo. 1. WHO. Control of the Leishmaniasis. World Health Organization. Technical Report
Series 1990. No. 793.
2. Rosenthal E, Marty P. Visceral leishmaniases. Rev Prat. 2004;54(20):2211-6.
3. Molina R, Gradoni L, Alvar J. HIV and the transmission of Leishmania. Ann Trop Med
Parasitol. 2003 ;97 Suppl 1:29-45.
4. Allain DS, Kagan IG. A direct agglutination test for leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg.
2.2 Si además de presentarse una línea en la banda C, solo se genera la banda G, 1975 ;24(2):232-6.
la prueba indica la presencia de anticuerpos anti-L. donovani IgG. En este caso 5. Badaro R, Reed SG, Carvalho EM. Immunofluorescent antibody test in American
el resultado es reactivo. visceral leishmaniasis: sensitivity and specificity of different morphological Am J Trop
Med Hyg. 1983;32(3):480-4.
6. Maalej IA, Chenik M, Louzir H, Ben Salah A, et, al. Comparative evaluation of ELISAs
based on ten recombinant or purified Leishmania antigens for the serodiagnosis of
Mediterranean visceral leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg. 2003 68(3):312-20.
7. Burns JM Jr, Shreffler WG, Benson DR, Ghalib HW, Badaro R, Reed SG. Molecular
characterization of a kinesin-related antigen of Leishmania chagasi that detects specific
2.3 Adicional a presentarse una línea en la banda C, se generan tanto la banda M
antibody in African and American visceral leishmaniasis. Proc Natl Acad Sci U S A.
como la banda G, la prueba indica la presencia de ambos anticuerpos anti-L.
1993 Jan 15;90(2):775-9.
donovani IgG e IgM. En este caso el resultado también es reactivo.
Índice de Símbolos
Consulte las Para uso diagnóstico
Utilice por
instrucciones de uso in vitro únicamente
Pruebas por
REF Catálogo número Número de Lote N kit
Las muestras con resultados positives deben ser confirmadas con métodos de análisis
alternativos y hallazgos clínicos antes de tomar una determinación en el diagnóstico. Almacenar de 2 a Representante
No reutilizar
30°C Autorizado
3. RESULTADO INVALIDADO: Si no se genera una banda C, el ensayo no es válido sin
importar que se haya creado una línea de color en cualquiera de las bandas de prueba Fabricante Fecha de fabricación
como se muestra a continuación. El análisis se debe repetir con un nuevo dispositivo.

CTK Biotech, Inc. MDSS GmbH

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San Diego, CA 92121, USA
Tel: 858-457-8698
Fax: 858-535-1739
E-mail: info@ctkbiotech.com
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Effective date: 2013-06-11
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