WO2025023160A1

WO2025023160A1 - 認知症の治療又は予防に用いるための組成物

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Publication number: WO2025023160A1
Application number: PCT/JP2024/025883
Authority: WO
Inventors: 正祐川西; 恵一平本; 展司吉川; 利明牧野; 優奈田下
Original assignee: 宏輝システムズ株式会社; 公立大学法人名古屋市立大学; 学校法人鈴鹿医療科学大学
Priority date: 2023-07-21
Filing date: 2024-07-19
Publication date: 2025-01-30

Abstract

本発明は、アルツハイマー病等の認知症の治療又は予防に用いるための組成物、及び認知症の治療又は予防のための方法に関する。

Description

認知症の治療又は予防に用いるための組成物

　本発明は、アルツハイマー病等の認知症の治療又は予防に用いるための、グリチルリチン酸類縁体を含む組成物に関する。

　近年、日本をはじめとする先進諸国では、脳梗塞や頭部外傷、アルツハイマー病やパーキンソン病などの認知・記憶障害、様々なストレスに起因するうつ病や不安症など、脳機能が低下した患者が増加し、社会問題となっている。アルツハイマー病は、認知症の５０～６０％を占める神経変性疾患である。このアルツハイマー病の神経病理学的特徴は、大脳皮質や海馬における神経原線維変性、老人斑と大量の神経細胞脱落である。神経原線維変性は、微小管結合タンパク質の一つであるタウタンパク質が過剰にリン酸化され線維封入体となったもので、老人斑はアミロイドβタンパク質の細胞外蓄積である。アルツハイマー病の場合、このアミロイドβタンパク質の蓄積が神経原線維変性を加速し、繊維化したタウタンパク質は細胞内輸送を阻害する。さらには、アミロイドβタンパク質自体がシナプスの機能障害などの細胞毒性を有する。

　現在、アルツハイマー病の根本的な治療薬はないが、その症状の改善や抑制を目的とした医薬は既に報告されている(例えば、特許文献１及び２)。

　今後、超高齢者社会の到来とともに、認知症患者が激増し、社会的な問題となることが懸念される。そこで、現在、特に、食事など生活習慣への介入によって、アルツハイマー病等の認知症の発症予防や改善、進行抑制についての研究が求められている。

特開２０１４－００９２１４号公報特開２０１４－１０１３２４号公報特願２０２２－０２５６５５

　本発明の課題は、アルツハイマー病等の認知症の発症予防、改善及び進行抑制に有効な、新たな手段を提供することにある。

　このような状況下において、本発明者らは、アルツハイマー病等の認知症の予防及び治療に有効な組成物を開発すべく、鋭意研究を行った。その結果意外にも、モデル動物を用いる認知機能試験において、グリチルリチン酸類縁体が認知機能の低下を強く阻害することを初めて見出した。これらの知見に基づいて、本発明を完成した。即ち、本発明の組成物は、認知症の治療又は予防に用いられ、グリチルリチン酸類縁体を有効成分とする。本発明の組成物は、甘草エキスそのものでもよく、甘草から抽出・精製されたグリチルリチン酸類縁体、あるいは薬学的に許容しうるその塩又は溶媒和物であってもよい。

　また、グリチルリチン酸にはその分子における１８位の水素の配置に基づく異性体が存在している。通常、カンゾウ属植物が生産するグリチルリチン酸の９０％以上は、１８β体であるが、ごく一部は１８α体である。この１８α体の生理活性の多くは、基本的には１８β体と共通しているが、１８α体の抗炎症・抗アレルギー作用における比活性が１８β体のそれよりも高いことから、１８α体を主成分とする医薬品が創製されている。また、１８α体は、１８β体とは物性において異なるところがある、すなわち、１８α体は、酸性溶液において、１８β体のようにゲル化することがないので、比較的酸性の化粧品への配合も可能であるとの優位性もある。この１８α体も、１８β体同様に認知機能の低下を阻害することを確認できた。さらに、１８α体は、１８β体に比べ、その代謝物（グリチルレチン酸、あるいはその硫酸抱合体であるグリチルレチン酸－３－硫酸エステル）による、偽アルドステロン症の原因となる１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型（以降「１１β－ＨＳＤ２」と称する）の阻害作用が弱いことが確認されているので、より安全性の高い医薬組成物を提供できる。

　すなわち、本発明は、以下に限定されるものではないが、次の発明を包含する。

１．認知症の治療又は予防に用いるための医薬組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、医薬組成物。

２．前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、前項１に記載の医薬組成物。

３．前記グリチルリチン酸類縁体の、１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する阻害活性が、１８β－グリチルレチン酸のそれに比して低い、前項１に記載の医薬組成物。

４．前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、前項１に記載の医薬組成物。

５．ヒトに投与される、前項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。

６．認知症がアルツハイマー病である、前項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。

７．認知症の治療又は予防に用いるための食品組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、食品組成物。

８．前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、前項７に記載の食品組成物。

９．前記グリチルリチン酸類縁体の、１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する阻害活性が、１８β－グリチルレチン酸のそれに比して低い、前項７に記載の食品組成物。

１０．前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、前項７に記載の食品組成物。

１１．ヒトに摂取される、前項７～１０のいずれか１項に記載の食品組成物。

１２．認知症がアルツハイマー病である、前項７～１１のいずれか１項に記載の食品組成物。

１３．腸内細菌叢の改善に用いるための医薬組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、医薬組成物。

１４．腸内細菌叢の改善に用いるための食品組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、食品組成物。

　本発明においては、認知症の治療又は予防に用いるための組成物が提供される。本発明の組成物は、これまで長く使用されてきたグリチルリチン酸を有効成分として含有し、通常の服用量であれば長期にわたって服用しても安全性が高い、認知症の治療又は予防薬として使用することが出来る。さらに、有効成分が１８α－グリチルリチン酸であれば、より高い安全性を提供することができる。

Ｓｔｅｐ－ｔｈｒｏｕｇｈ式の受動的回避実験による、学習・記憶能力の比較である。脳海馬部位におけるリン酸化タウタンパク質の蓄積である。脳海馬部位におけるアミロイドβの蓄積である。老化促進マウス糞便中の短鎖脂肪酸濃度である。老化促進マウスの腸内細菌種の占有率である。

　以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
　本発明は、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、組成物に関する。一実施形態において、本発明の組成物は医薬組成物である。一実施形態において、本発明の組成物は、認知症の治療又は予防に用いるための医薬組成物である。一実施形態において、本発明の組成物は食品組成物である。一実施形態において、本発明の組成物は、認知症の治療又は予防に用いるための食品組成物である。
　ある化合物の「類縁体」及び「誘導体」はいずれも、通常はその化合物に類似した構造を有する他の化合物を意味する。しかし、本発明においては便宜上、ある化合物の「類縁体」は、その化合物自体も包含し、ある化合物の「誘導体」は、その化合物自体を包含しないものとする。グリチルリチン酸誘導体を与える誘導体化の例としては、置換基（炭化水素基、ハロゲン原子、酸素含有官能基（ヒドロキシル基、アルコキシ基、エポキシ基、オキソ基、カルボキシル基等）、窒素含有官能基（非置換又は置換アミノ基、シアノ基等）、硫黄含有官能基（チオール基、スルホ基等）等）の導入、酸化、還元、エステル化、アミド化、異性化（立体異性化を含む）、糖鎖の修飾（糖鎖の除去を含む）等を挙げることができるが、それらに限定されない。また、塩及び溶媒和物も誘導体及び類縁体に包含される。本発明において、これらのグリチルリチン酸類縁体は、単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。

　本発明において、上記グリチルリチン酸類縁体の「薬学的に許容し得る塩」とは、上記グリチルリチン酸類縁体の塩であって、上記グリチルリチン酸類縁体の生物学的特性（薬理活性を含む）が保持され、かつ生物学的にもその他の点でも望ましくないところがないものを指す。上記グリチルリチン酸類縁体が塩基性化合物である場合、その薬学的に許容し得る塩は、無機酸又は有機酸の付加によって調製されうる。無機酸から誘導される塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等との塩を含むが、これらに限定されない。有機酸から誘導される塩は、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステイン等との塩を含むが、これらに限定されない。上記グリチルリチン酸類縁体が酸性化合物である場合、その薬学的に許容し得る塩は、無機塩基又は有機塩基の付加によって調製されうる。無機塩基から誘導される塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム等との塩を含むが、これらに限定されない。有機塩基から誘導される塩は、第一級、第二級及び第三級アミン（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン及びトリプロピルアミン）、置換アミン（例えば、エタノールアミン、リジン及びアルギニン）、環状アミン（例えば、Ｎ－エチルピペリジン及びピペリジン）等との塩を含むが、これらに限定されない。

　本発明において、上記グリチルリチン酸類縁体は、その薬学的に許容し得る溶媒和物の形態であってよい。ある化合物の「溶媒和物」とは、その化合物の分子に、化学量論量又は非化学量論量の何らかの溶媒の分子が付加した構造を有する複合体を意味する。溶媒和物を形成する溶媒の例としては、水、アルコール（メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール等）、ＤＭＳＯ、酢酸エチル等が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒が水である溶媒和物は「水和物」と称される。ある化合物の「薬学的に許容し得る溶媒和物」とは、その化合物の溶媒和物であって、その化合物の生物学的特性（薬理活性を含む）が保持され、かつ生物学的にもその他の点でも望ましくないところがないものを指す。

　本発明においては、グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
　これらのグリチルリチン酸類縁体のうち、１８β－グリチルリチン酸は、古くから医薬品として利用されてきたマメ科カンゾウ属植物（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ，　Ｇ．　ｇｌａｂｒａあるいはＧ．　ｉｎｆｌａｔａなど）の地下部に含まれる主たるサポニンであり、下記式：

で表される構造を有する。従来単に「グリチルリチン酸」と称されてきた化合物は、通常はこの１８β－グリチルリチン酸である。現在、カンゾウ属植物地下部から抽出精製された（１８β－）グリチルリチン酸は、抗炎症・抗アレルギーあるいは抗慢性肝炎を適応症とする医薬品、あるいは、その抗炎症・抗アレルギー作用を生かした医薬部外品や化粧品にも配合されている。さらに、その甘味を利用する食品添加物としても使われている。

　１８α－グリチルリチン酸は、１８β－グリチルリチン酸の立体異性体の１つ（１８位炭素の立体配置が逆転している）であり、下記式：

で表される構造を有する。上記のようなカンゾウ属植物から得られるサポニンは、多量の１８β－グリチルリチン酸と共に、ごく少量ながら１８α－グリチルリチン酸を含む場合がある。後述の通り、１８α－グリチルリチン酸は、１８β－グリチルリチン酸から合成することができる。

　１８α－グリチルレチン酸は、下記式：

で表される、１８α－グリチルリチン酸のアグリコンに該当する構造を有する。１８α－グリチルレチン酸は、公知の方法、例えば１８α－グリチルリチン酸を強酸水溶液（例えば塩酸）中で加熱して加水分解することにより調製することができる。
　１８－α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドは、下記式：

で表される、１８α－グリチルリチン酸から２つのグルクロン酸残基のうち１つが除去された構造を有する。１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドは、公知の方法、例えば１８α－グリチルリチン酸の酵素的加水分解（例えば、１８α－グリチルリチン酸を真菌Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍａｇｎｕｓ　ＭＧ－２７株の培養液中で処理すること）により調製することができる（Ｔ．Ｋｕｒａｍｏｔｏ　ｅｔ．ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｃ　Ａｃｉｄ　３－Ｏ－Ｍｏｎｏ－β－Ｄ－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ　ｆｒｏｍ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ　ｂｙ　Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍａｇｎｕｓ　ＭＧ－２７，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９４），５８：３，４５５－４５８を参照）。

　受動的回避実験による学習・記憶試験において、グリチルリチン酸類縁体が学習・記憶能力の有意な改善をもたらすことが、本発明者らによって確認された。また、グリチルリチン酸類縁体が、リン酸化タウタンパク質及びアミロイドβの脳組織（特に海馬）への蓄積（これはアルツハイマー病の病理学において重要である）を抑制することが、本発明者らによって確認された。これらのことに基づき、グリチルリチン酸類縁体が認知症の治療及び予防に有効であることが示された。
　グリチルリチン酸類縁体（特に１８β－グリチルリチン酸）は、抗アレルギー作用、抗炎症作用など、種々の有用な薬理作用を示すことが知られている。脳損傷及び／又は神経炎症に起因する中枢神経系障害の改善における、この抗炎症作用の利用も知られている（非特許文献２０及び２１）。しかし、グリチルリチン酸類縁体が認知症の治療及び予防に有効であることは、本発明者らにより初めて見出されたことである。

　さらに、ある種の認知症において好ましくない状態となった患者の腸内細菌叢が、グリチルリチン酸類縁体により改善されることも、本発明者らによって確認された。すなわち、グリチルリチン酸類縁体を含む本発明の組成物は、腸内細菌叢の改善に有効である。一実施態様において、本発明の組成物は、腸内細菌叢の改善に用いるための医薬組成物である。一実施態様において、本発明の組成物は、腸内細菌叢の改善に用いるための食品組成物である。

　本発明の一態様は、認知症の治療又は予防に用いるための、上記グリチルリチン酸類縁体を提供する。本発明の一態様は、上記グリチルリチン酸類縁体と、薬学的に許容し得る担体及び／又は薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の一態様は、認知症の治療又は予防のための、上記グリチルリチン酸類縁体の使用を提供する。本発明の一態様は、認知症の治療又は予防のための医薬の製造のための、上記グリチルリチン酸類縁体の使用を提供する。本発明の一態様は、認知症の治療又は予防のための方法であって、ヒト又は動物に上記グリチルリチン酸類縁体を投与する工程を含む方法を提供する。
　医薬組成物を調製するための担体及び賦形剤は特に限定されず、従来から知られているものを用いることができる。医薬組成物は、所望であれば、結合剤、崩壊剤、コーティング剤、滑沢剤、保存剤、安定剤、緩衝剤、界面活性剤、酸化防止剤、等張化剤、着色剤等の、従来から知られている添加剤を含んでいてもよい。

　本発明の一実施形態において、認知症は、リン酸化タウタンパク質及び／又はアミロイドβの脳組織（特に海馬）への蓄積によって特徴付けられる。本発明の一実施形態において、認知症は、アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）である。

　本発明においては、安全性の観点から、グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種、特に１８α－グリチルリチン酸を含むことが好ましい。
　１８β－グリチルリチン酸は、そのアグリコンである１８β－グリチルレチン酸に代謝された後で、生体に吸収されることが知られている。１８α－グリチルリチン酸及び１８－α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドも、同様にそのアグリコンである１８α－グリチルレチン酸に代謝された後で、生体に吸収されると推察されている。
　上記１８α－グリチルレチン酸及び１８β－グリチルレチン酸はいずれも、１１β－ＨＳＤ２に対する阻害活性を示す。甘草成分を含有する医薬品の副作用として知られる偽アルドステロン症は、この阻害活性に起因するものである。１８α－グリチルレチン酸のこの阻害活性は、１８β－グリチルレチン酸のそれよりも低い。そのため、上記３種のグリチルリチン酸類縁体は、偽アルドステロン症を起こしにくいという点で、１８β－グリチルリチン酸に比して安全性に優れている。

　グリチルリチン酸類縁体の副作用としての偽アルドステロン症は従来より知られており、この副作用の発現頻度が、グリチルリチン酸含有製剤の服用量と相関していることも確認されている（非特許文献１）。この副作用は主に、カンゾウ属植物の主要なサポニンである１８β－グリチルリチン酸（正確にはその代謝物）によって引き起こされる。
　この１８β－グリチルリチン酸の立体異性体である１８α－グリチルリチン酸の存在は、従来より知られており、この化合物の生理活性及び薬物動態に関し種々報告されている（非特許文献２～１９）。それらの報告の中には、１１β－ＨＳＤ２に対する阻害活性（偽アルドステロン症の原因）に関するものもある（非特許文献２及び３）。しかし、この阻害活性に関する情報は一貫性に乏しかったため、グリチルリチン酸類縁体における１８位の立体配置と、１１β－ＨＳＤ２に対する阻害活性の関係は、最近まで明らかではなかった。
　しかし最近になって、１８β－グリチルレチン酸（１８β－グリチルリチン酸のアグリコン）は、ヒト１１β－ＨＳＤ２およびラット１１β－ＨＳＤ２のいずれに対しても同程度の阻害活性を示すのに対し、１８α－グリチルレチン酸（１８α－グリチルリチン酸のアグリコン）は、ラット１１β－ＨＳＤ２に対しては１８β－グリチルレチン酸と同等の阻害活性を示し、ヒト１１β－ＨＳＤ２に対しては１８β－グリチルレチン酸よりも高い阻害活性を示すことが確認された（特許文献３）。よって、安全性を重視する観点からは、１８α－グリチルリチン酸を用いる方が望ましいことが分かる。
　本発明の一実施形態において、グリチルリチン酸類縁体の、１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する阻害活性は、１８β－グリチルレチン酸のそれに比して低い。

　一方、入手可能性、さらにはコストの観点からは、本発明においては、グリチルリチン酸類縁体が、１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種、特に１８β－グリチルリチン酸を含むことが好ましい。

　他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８α－グリチルリチン酸及び１８α－グリチルレチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８α－グリチルリチン酸及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８α－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。他の一実施形態において、上記グリチルリチン酸類縁体は、１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である。

　グリチルリチン酸類縁体そのもの、あるいはそれを含有する甘草エキスも、本発明の組成物として用いることができる。本発明で使用されるグリチルリチン酸類縁体は、甘草エキスから一般的な方法にて抽出・単離精製したものを用いることができる。すなわち、甘草エキスから有機溶媒抽出により脂溶性の着色成分を除去した後、晶析などの手段を用いて精製することで、純度７０％以上の精製品を得ることができる。一方、本発明の組成物として甘草エキスを用いる場合は、植物体の根及び／又は茎から当該分野で公知の一般的な方法にて抽出されたものを使用することができる。本発明においては、市販の甘草エキスを使用することもできる。本発明で使用される甘草エキスのグリチルリチン酸類縁体の含量は、５％以上、好ましくは、１０％以上、より好ましくは１３％以上である。

　甘草エキスの製造に用いられる抽出溶媒は特に限定されず、たとえば、水、アルコール（たとえば、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、ｎ－ブタノールなど）、アセトン、酢酸エチルなどを用いることができる。また、甘草エキスの乾燥粉末を得る場合は、例えば減圧乾燥や噴霧乾燥等、当業者が通常用いる方法によりエキスの溶媒を除去することで得ることができる。

　上記１８α－グリチルリチン酸を１８β－グリチルリチン酸から製造するには、例えば特許公報（１６１０３００号：平成２年７月１５日登録）に記されているように、原料の１８β－グリチルリチン酸を、２～６Ｎ程度の水酸化ナトリウムあるいは水酸化カリウム水溶液中において、７０～２００℃に、常圧あるいは加圧下に加熱することによって行われる。異性化が６０～８０％に達したところで反応を打ち切り、その後、生した１８α－グリチルリチン酸と１８β－グリチルリチン酸とを分離する。それにより、所望の純度の１８α－グリチルリチン酸を得る。反応混合物から１８α－グリチルリチン酸を単離するには、１８α体を１８β体と共に、一先ず硫酸あるいは塩酸などの鉱酸によって、ｐＨを１～２にして沈殿させた後、沈殿物を濾取し、その後カラムクロマトグラフィーなどで分画することが出来る。あるいは、１８α体だけを単離する方法は、以下の通りである。

　グリチルリチン酸混合物を濃度０．５～２％程度の希薄水溶液とし、これに鉱酸を加えてｐＨを約２にした後、濾紙で濾過する。この場合、１８α体は結晶状に酸析されているから濾紙上に残り、一方、１８β体はゲル状に分離していて濾紙を通過するから濾液中に入る。濾紙上の沈殿物にはまだかなりの１８β体が混在するので、これを希アンモニア水に溶解した後、再び前記酸析・濾過による分離を行う。このような処理を繰り返すことにより、１８α体の純度は高まり、通常３～５回の繰り返し処理で、１８β体の除去は完了する。

本発明の組成物の生体に適用する用途
　本発明の組成物の用途としては、医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは食品等が挙げられる。この組成物の適用対象は、好ましくはヒトである。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒトに投与される。一実施形態において、本発明の食品組成物は、ヒトに摂取される。

　本発明の組成物の形態は、特に限定されず、この組成物は、その用途に応じて、通常使用される形態を取ることが出来る。
　医薬品として用いられる本発明の医薬組成物の形態は、経口投与に適した形態と、非経口投与に適した形態に大別される。前者の例には、錠剤、トローチ剤、丸剤、懸濁剤（水性又は油性）、散剤、顆粒剤、乳剤、硬又は軟カプセル剤（例えばゼラチンカプセル剤）、シロップ剤、エリキシル剤等が含まれる。後者の例には、注射剤、クリーム、軟膏、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、坐剤等が含まれる。
　医薬部外品（薬用化粧品を含む）として用いられる本発明の医薬組成物は、歯磨き剤等の他、従来用いられている種々の化粧品の形態であってよい。
　本発明の食品組成物は、従来用いられている種々の形態であってよい。

　本発明の組成物に含まれるグリチルリチン酸類縁体の投与量は、５～１２０ｍｇ／日／ヒト、好ましくは１０～６０ｍｇ／日／ヒトである。また、この場合、投与は一日に２回から３回までの間で、上記投与量を分割して実施することとなる。また、本発明の組成物として甘草エキスを用いる場合は、そのグリチルリチン酸類縁体含量を考慮し、それに含まれるグリチルリチン酸類縁体の投与量が上記と同様となるよう調整する。

　以下、本発明について、実施例により説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

　被験物質の認知症予防作用測定方法の概要は、以下の通りである。すなわち、４０週齢のＳＡＭＰ８マウスを試験動物として使用し１２週間飼育した。ＳＡＭＲ１マウスを対比群（コントロール群）として使用した。
　ＳＡＭＰ８マウス及びＳＡＭＲ１マウス（いずれも日本エスエルシー株式会社より入手可能）は、加齢に伴う学習・記憶能力の低下に関する動物実験においてしばしば用いられ、後者が対照となる。ＳＡＭＰ８マウスは、加齢に伴う学習・記憶障害、情動障害等を、正常マウスに比して早期に示す、確立された老化促進マウスモデルである。ＳＡＭＲ１マウスは、ＳＡＭＰ８マウスと同じマウスコロニーに由来するが、正常な老化プロファイルを示すマウスである。
　これらのマウスを各々実験群と対照群に分け、実験群のマウスに対し、１８α－グリチルリチン酸あるいは１８β－グリチルリチン酸を１５ｍｇ／ｋｇの用量で週３回経口投与した。給水・食事は通常通りに与えた。
　これらの試験動物に関し、下記の測定・試験を行った。
　また、４０週齢から５２週齢まで４週毎に、上記ＳＡＭＰ８マウス及びＳＡＭＲ１マウスの体重を測定したところ、ＳＡＭＰ８マウスの体重は、ＳＡＭＲ１マウスより明らかに軽かった。老化による体重減少傾向が、ＳＡＭＰ８マウスでは認められた。老化による体重減少傾向に対するグリチルリチン酸投与の影響は認められなかったが、体重減少は緩和する傾向にあった。

自発運動量
　自発運動測定装置を用いて、ケージ下部にとりつけられた赤外線センサーで行動量を数値化して測定した。試験マウスを１匹ずつ新規環境に入れて（訓化なし）、それぞれの自発運動量を２０分間計測した。

受動的回避実験による学習・記憶試験
　認知症テストの一つとして、Ｓｔｅｐ－ｔｈｒｏｕｇｈ式の受動的回避実験により、学習・記憶能力の比較を行った。
　マウスが暗室に進入した時に電流を流し、この行動が危険であることを学習させた。一日後、マウスを明室に入れて、明室滞在時間を測定した。学習・記憶が成立していれば、マウスは暗室への進入を避けるため、明室滞在時間が延長される。
　結果を図１に示す。ＳＡＭＰ８マウスのグリチルリチン酸非投与群では、学習・記憶能力が減退し、Ａｑｕｉｓｉｔｉｏｎ　ｔｒｉａｌ（学習時の試験）とＰｌａｙ　ｂａｃｋ　ｔｒｉａｌ（１日後の記憶に基づく試験）で差が見られなかった。一方、ＳＡＭＰ８マウスのグリチルリチン酸投与群においては、１８α体、１８β体の何れでも、Ｐｌａｙ　ｂａｃｋ　ｔｒｉａｌでＳｔｅｐ－ｔｈｒｏｕｇｈ　ｌａｔｅｎｃｙ　ｔｉｍｅ（明室滞在時間）が非投与群のそれに比して３倍以上に延長されており(Ｐ＜０．０５)、学習・記憶能力の有意な改善が認められた。

脳組織における蓄積タンパク質の量（免疫染色）
　ＳＡＭＰ８マウス及びＳＡＭＲ１マウスについて、脳組織における蓄積タンパク質の量を、免疫染色を用いる公知の方法により比較した。結果を図２及び３に示す。
　アルツハイマー病において病理学的に重要な、リン酸化タウタンパク質（図２）及びアミロイドβ（図３）の脳海馬部位への蓄積が、１８β－グリチルリチン酸投与群では抑制されていた。

糞便中の短鎖脂肪酸濃度
　ＳＡＭＰ８マウスについて、糞便中の短鎖脂肪酸濃度を公知の方法により測定した。結果を図４に示す。
　アルツハイマー病発症者では、ある種の短鎖脂肪酸の糞便中濃度が低下するとされている。そのような短鎖脂肪酸のうち、酢酸及びプロピオン酸の濃度が、１８β－グリチルリチン酸投与群では１８β－グリチルリチン酸非投与群に比して高くなっていた。

腸内細菌種の分布
　ＳＡＭＰ８マウスについて、腸内細菌種の分布を公知の方法により測定した。結果を図５に示す。
　１８β－グリチルリチン酸投与群では、１８β－グリチルリチン酸非投与群に比して、Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科、Ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ綱及びＰａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ科に属する腸内細菌の糞便中占有率が低下していた。これらの腸内細菌の糞便中占有率は、アルツハイマー病発症者においては増加する傾向にあることが知られている。
　一方、１８β－グリチルリチン酸投与群では、１８β－グリチルリチン酸非投与群に比して、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属及びＰａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属に属する腸内細菌の糞便中占有率が増加していた。これらの腸内細菌の糞便中占有率は、アルツハイマー病発症者においては低下する傾向にあることが知られている。
　Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科は、Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ目に属し、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ属、Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ属、Ｏｌｓｅｎｅｌｌａ属等が同科に含まれる。この科に属する腸内細菌の例としては、Ｃｏｌｌｉｎｓｅｌｌａ　ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ　ｌｅｎｔａ等を挙げることができる。
　Ａｌｐｈａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ綱には、Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉａｌｅｓ目、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目等が含まれる。
　Ｐａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ科は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目に属し、Ｐａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ属が同科に含まれる。この科に属する腸内細菌の例としては、Ｐａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ　ｃｌａｒａ、Ｐａｒａｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ　ｘｙｌａｎｉｐｈｉｌａ等を挙げることができる。
　Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ科に属する。この属に属する腸内細菌の例としては、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｖｕｌｇａｔｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｄｏｒｅｉ等を挙げることができる。
　Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ属は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ科に属する。この属に属する腸内細菌の例としては、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｄｉｓｔａｓｏｎｉｓ、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｍｅｒｄａｅ等を挙げることができる。

　被験物質のヒト１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型阻害測定方法の概要は、以下の通りである。
　すなわち、ラット腎ミクロソーム画分（最終濃度２ｍｇ／ｍＬ）、1,2,6,7-[3H]-cortisol（Perkin Elmer、Waltham、MA、USA）２０ｎＭ、ＮＡＤ＋（富士フィルム）ｌ．２ｍＭ、各種サンプルを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）２５０μＬを調製した。ラット腎ミクロソーム画分（最終濃度２ｍｇ／ｍＬ）又はヒト腎ミクロソーム画分（SekisuiXenoTech、Kansas City、KA、USA）（最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）、1,2,6,7-［３Ｈ］-cortisol 20 ｎＭ、ＮＡＤ＋1.2 mM、各種サンプルを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）２５μＬを調製した。それぞれの混合液を３７℃で３０分間インキュベートした後、１ｍｇ／ｍＬ cortisol及び１ｍｇ／ｍＬ cortisone（ナカライテスク、京都）を含むメタノール２５μＬを反応液に加え、反応を停止させた。

　この液体を薄層クロマトグラフィープレート（Silica Gel 60, Merck、Darmstadt、Germany）に２０μＬスポットして、chloroform:methanol（9:1)で約１８ｃｍ展開し、cortisolとcortisoneを分離した。ＵＶランプで、cortisoneのスポット（Ｒｆ値約０．４３）を検出し、cortisoneを保持する固定相をかきとって、Clear-sol I（ナカライ）３ｍＬを入れたバイアルに移し、液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定した。各サンプルはｎ＝４で、その平均士標準偏差をデータとした。ＩＣ５０値は、阻害率で５０％を挟む３ポイントを用いて、対数濃度対阻害率の近似直線で５０％を示す濃度を算出した。

　１８β－グリチルレチン酸の場合、ヒト由来及びラット由来酵素何れに対しても、０．２～０．４μＭレベルの濃度で５０％阻害率となった。それに対して、１８α－グリチルレチン酸の場合は、ラット由来酵素では１８β体の場合と同様の濃度で５０％阻害率となったが、ヒト由来酵素ではこの濃度が１５．１μＭと約７０倍に高くなり、この化合物に起因するヒトにおける偽アルドステロン症発症の恐れが低いことを確認することが出来た。

　グリチルリチン酸類縁体を配合した本発明の組成物は、動物、特にヒトにおける認知症、例えばアルツハイマー病の発症を防止し、あるいはその進行を予防するために有用である。

　日本国特許出願２０２３－１１８８３４（出願日：２０２３年７月２１日）の開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
　本明細書に記載された全ての文献、特許出願、及び技術規格は、個々の文献、特許出願、及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書中に参照により取り込まれる。

Claims

　認知症の治療又は予防に用いるための医薬組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、医薬組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の医薬組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体の、１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する阻害活性が、１８β－グリチルレチン酸のそれに比して低い、請求項１に記載の医薬組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の医薬組成物。
　ヒトに投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
　認知症がアルツハイマー病である、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
　認知症の治療又は予防に用いるための食品組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、食品組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド及び１８β－グリチルリチン酸、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項７に記載の食品組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体の、１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する阻害活性が、１８β－グリチルレチン酸のそれに比して低い、請求項７に記載の食品組成物。
　前記グリチルリチン酸類縁体が、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸及び１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニド、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項７に記載の食品組成物。
　ヒトに摂取される、請求項７～１０のいずれか１項に記載の食品組成物。
　認知症がアルツハイマー病である、請求項７～１１のいずれか１項に記載の食品組成物。
　腸内細菌叢の改善に用いるための医薬組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、医薬組成物。
　腸内細菌叢の改善に用いるための食品組成物であって、グリチルリチン酸及びその誘導体、並びに薬学的に許容しうるその塩及び溶媒和物からなる群より選択される少なくとも１種のグリチルリチン酸類縁体を含む、食品組成物。