[go: up one dir, main page]

WO2024185762A1 - ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法 - Google Patents

ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2024185762A1
WO2024185762A1 PCT/JP2024/008210 JP2024008210W WO2024185762A1 WO 2024185762 A1 WO2024185762 A1 WO 2024185762A1 JP 2024008210 W JP2024008210 W JP 2024008210W WO 2024185762 A1 WO2024185762 A1 WO 2024185762A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
polyalkylene oxide
acid
phospholipid
modified phospholipid
Prior art date
Application number
PCT/JP2024/008210
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
浩樹 矢野
雅己 太田
Original Assignee
日油株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日油株式会社 filed Critical 日油株式会社
Publication of WO2024185762A1 publication Critical patent/WO2024185762A1/ja

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/335—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing phosphorus

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing polyalkylene oxide-modified phospholipids.
  • liposome preparations encapsulating anticancer drugs and other drugs have been widely conducted, and liposome surfaces have been modified with water-soluble polymers to improve their retention in the blood.
  • One such modification is polyalkylene oxide-modified phospholipids. Since these polyalkylene oxide-modified phospholipids are used for medical purposes, it is preferable that they contain as few impurities as possible or no impurities at all.
  • Such polyalkylene oxide-modified phospholipids are synthesized, for example, by reacting polyalkylene oxide with phospholipids.
  • the synthesized polyalkylene oxide-modified phospholipids can be purified, for example, by silica gel column chromatography (see Non-Patent Document 1).
  • Non-Patent Document 1 when using the silica gel column chromatography described in Non-Patent Document 1, the amount that can be purified at one time is limited due to equipment restrictions, and a large amount of solvent is used, making it unsuitable for industrial production. Furthermore, when purification is performed using silica gel column chromatography, some of the sodium ions, which are counter ions contained in the polyalkylene oxide-modified phospholipid, may be replaced by calcium ions, which are metals derived from silica gel.
  • Patent Document 1 discloses a method for purifying polyalkylene oxide-modified phospholipids using an inorganic adsorbent made of a compound containing aluminum and/or magnesium elements instead of silica gel column chromatography. By purifying using the inorganic adsorbent, it is possible to efficiently obtain high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids.
  • polyalkylene oxide-modified phospholipids because the phospholipids have a high coordination ability with the above metal ions, it has been found that it is difficult to replace aluminum ions and/or magnesium ions with sodium ions using ion exchange resins.
  • polyalkylene oxide-modified phospholipids that contain aluminum ions and/or magnesium ions as counter ions have low water solubility and may cause turbidity when dissolved in water.
  • the objective of the present invention is to provide an industrial method for producing high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids.
  • the present invention relates to a method for producing a polyalkylene oxide-modified phospholipid, and the produced polyalkylene oxide-modified phospholipid is as follows.
  • a method for producing a polyalkylene oxide-modified phospholipid represented by the following formula (1) which comprises sequentially carrying out the following steps (A), (B), (C) and (D):
  • polycarboxylic acid is one or more selected from the group consisting of citric acid, isocitric acid, oxalic acid, succinic acid, malonic acid, nitrilotriacetic acid, ethylenediaminetetraacetic acid, diethylenetriaminepentaacetic acid, glycoletherdiaminetetraacetic acid, triethylenetetraminehexaacetic acid, hydroxyethyliminediacetic acid, and 1,3-diamino-2-hydroxypropanetetraacetic acid.
  • the method for producing polyalkylene oxide-modified phospholipids of the present invention does not require special equipment and can efficiently produce high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids, making it extremely useful as an industrial method for producing polyalkylene oxide-modified phospholipids.
  • the high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids produced by the production method of the present invention and purified with an aluminum compound and/or a magnesium compound further have significantly reduced aluminum ions and/or magnesium ions, making them extremely useful.
  • R 1 CO and R 2 CO are each independently an acyl group having 4 to 24 carbon atoms.
  • the number of carbon atoms in R 1 CO and R 2 CO is more preferably 12 or more, and more preferably 20 or less.
  • R 1 CO and R 2 CO may each independently be a saturated or unsaturated acyl group, or a linear or branched acyl group.
  • the acyl groups (R 1 CO and R 2 CO) are usually derived from fatty acids (R 1 COOH and R 2 COOH).
  • R 1 CO and R 2 CO include acyl groups derived from saturated and unsaturated straight-chain or branched fatty acids such as butyric acid, isobutyric acid, caproic acid, caprylic acid, capric acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, palmitoleic acid, stearic acid, isostearic acid, oleic acid, linoleic acid, and arachidic acid.
  • R 1 CO and R 2 CO may be the same or different from each other.
  • the oxyalkylene group represented by R 3 O is an oxyalkylene group having 2 to 4 carbon atoms (more preferably 2 or 3 carbon atoms).
  • R 3 O include an oxyethylene group, an oxypropylene group, an oxytrimethylene group, and an oxybutylene group. Among these, an oxyethylene group and an oxypropylene group are preferred, and an oxyethylene group is particularly preferred.
  • n represents the average number of moles of oxyalkylene groups added, and is a number between 10 and 800 (more preferably between 20 and 500).
  • n 10 or more
  • the delivery effect is enhanced when the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention is used in a drug delivery system.
  • n 800 or less
  • the viscosity of the polyalkylene oxide compound of the above formula (2), which is the raw material does not increase significantly during the production of the polyalkylene oxide-modified phospholipid, improving workability.
  • k is 1 to 6, preferably 1 to 4, more preferably 2 to 4, and even more preferably 2.
  • X is a divalent hydrocarbon group having 1 to 3 carbon atoms or —C( ⁇ O)(CH 2 ) q — (wherein q is 1 to 4).
  • p is 0 or 1.
  • hydrocarbon group constituting X examples include -CH2- , -CH2CH2- , -( CH2 ), -CH( CH3 ) CH2- and the like.
  • Y is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms.
  • alkyl group having 1 to 4 carbon atoms include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, and a butyl group. Of these, a methyl group is particularly preferred.
  • Y is a hydrogen atom, an amino group, a carboxyl group, an aldehyde group, a glycidyl group, a maleimide group, a thiol group, a tert-butoxyamide group, a 9-fluorenylmethyloxyamide group, a methyl ester group or a St-butyl disulfide group, and is preferably an amino group.
  • the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention has a low aluminum content and a low magnesium content derived from an inorganic adsorbent containing a compound containing at least one of an aluminum element and a magnesium element.
  • the total value of the aluminum content and the magnesium content present in the polyalkylene oxide-modified phospholipid is 0.1 mol% or more and 5.0 mol% or less.
  • the total value of the aluminum content and the magnesium content present in the polyalkylene oxide-modified phospholipid is preferably 3.0 mol% or less, and more preferably 2.0 mol% or less.
  • the aluminum content present in the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention is 0.1 mol% or more and 5.0 mol% or less, and no magnesium is contained.
  • the magnesium content present in the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention is 0.1 mol% or more and 5.0 mol% or less, and no aluminum is contained.
  • the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention has a phospholipid content represented by formula (3) of 0.5% by weight or less and is highly pure. From this viewpoint, the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention preferably has a phospholipid content represented by formula (3) of 0.3% by weight or less, and more preferably 0.1% by weight or less.
  • the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention has a content of a polyethylene glycol derivative not bound to a phospholipid, which is produced as a by-product from the polyalkylene oxide compound represented by formula (2) in step (A), of:
  • the content of the polyalkylene oxide compound represented by formula (2) may be 0% by weight.
  • the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention can be produced by sequentially carrying out the following steps (A) to (D).
  • step (A) In step (A), a polyalkylene oxide compound represented by formula (2) is reacted with an amino group of a phospholipid represented by formula (3) in an organic solvent in the presence of an alkali metal salt that gives an alkaline aqueous solution.
  • R 1 CO, R 2 CO, R 3 O, k, n, X, p and Y are the same as those described above in formula (1).
  • Z is an activation group that imparts reactive activity to the polyalkylene oxide compound with the amino group of the phospholipid represented by formula (3), and includes electron-withdrawing groups and other groups.
  • groups include imidazole groups, 4-nitrophenyloxy groups, benzotriazole groups, chlorine, methoxy groups, ethoxy groups, propyloxy groups, carbonyloxy-N-2-pyrrolidinone groups, carbonyl-2-oxypyrimidine groups, N-succinimidyloxy groups, and pentafluorobenzoyl groups.
  • the N-succinimidyloxy group and the 4-nitrophenyloxy group are particularly preferred.
  • the phospholipid represented by formula (3) may be a natural phospholipid or a synthetic phospholipid.
  • k is 1 to 6, preferably 2 to 4, and more preferably 2.
  • Phosphatidylethanolamine is particularly preferred. Specific examples include natural and synthetic phosphatidylethanolamines such as soybean and hydrogenated soybean phosphatidylethanolamine, egg yolk and hydrogenated egg yolk phosphatidylethanolamine, etc.
  • the alkali metal salt used in step (A) that gives an alkaline aqueous solution is a carbonate, phosphate or acetate of an alkali metal that can bind the polyalkylene oxide compound represented by the above formula (2) with the amino group of the phospholipid represented by formula (3) and that, when dissolved in water to give an aqueous solution, gives an alkaline pH of 7.1 to 13, preferably 7.1 to 11, and is preferably a solid salt containing sodium.
  • Specific examples include sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate, sodium acetate, disodium hydrogen phosphate, and trisodium phosphate. Of these, sodium carbonate is particularly preferred.
  • the amount of metal salt used is preferably 0.1 to 1000 mol times the amount of polyalkylene oxide compound represented by formula (2) in terms of molar ratio. If the amount of metal salt used is 0.1 mol or more, the reaction proceeds quickly, which is preferable. Also, if this amount is 1000 mol or less, stirring is easy, which is preferable. In particular, the amount of metal salt used is preferably 1 to 500 mol times.
  • the amounts of the polyalkylene oxide compound of formula (2) and the phospholipid of formula (3) charged are desirably set so that the molar ratio (polyalkylene oxide compound of formula (2) : phospholipid of formula (3)) is 1:1 or more (excess phospholipid).
  • the molar ratio of the polyalkylene oxide compound of formula (2) and the phospholipid of formula (3) is 1:1 to 1:5, preferably 1:1.1 to 1:2, and more preferably 1:1.
  • step (A) the polyalkylene oxide compound represented by formula (2) can be reacted with the phospholipid represented by formula (3) in the presence of the metal salt as described above.
  • the organic solvent used in the reaction of step (A) can be any organic solvent that does not react or barely reacts with the starting materials and reaction products.
  • examples include aprotic solvents such as ethyl acetate, dichloromethane, chloroform, benzene, and toluene. Of these, toluene and chloroform are preferred.
  • Organic solvents having hydroxyl groups such as ethanol are not preferred because they react with the terminal active groups of the polyalkylene oxide compound represented by formula (2) above. Dichloromethane and the like do not pose any problems in terms of reactivity, but are not preferred from an operational standpoint due to their low boiling point.
  • the reaction temperature in step (A) is 30 to 90°C, preferably 40 to 80°C.
  • the reaction time is 1 hour or more, preferably 2 to 15 hours. Reaction times longer than 15 hours are not preferred because the polyalkylene oxide-modified phospholipid may decompose due to increased thermal history, resulting in a decrease in purity.
  • the polyalkylene oxide compound represented by formula (2) is reacted with the phospholipid represented by formula (3) to obtain the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention represented by formula (1).
  • step (A) when the terminal Y of the polyalkylene oxide compound represented by the above formula (2) is an amino group, a carboxyl group, or a thiol group, particularly an amino group, it is preferable to protect these groups before subjecting them to the reaction.
  • a protecting group such as a tert-butoxycarbonyl group or a 9-fluorenylmethyloxycarbonyl group.
  • a carboxyl group it is preferable to protect it by esterification with a methyl group or the like.
  • a thiol group it is preferable to protect it by attaching a protecting group such as an S-t-butylsulfide group.
  • the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention represented by the above formula (1) can be purified by filtering the solid salt from the reaction solution obtained in step (A), concentrating the filtrate or pouring it into a poor solvent for crystallization.
  • the filter medium used for filtration as long as it can remove insoluble matter from the treated liquid, and filters made of various materials such as paper and glass that have a pore size of 1 to 10 ⁇ m and are solvent-resistant can usually be used.
  • steps (B) to (D) described below By subjecting the obtained polyalkylene oxide-modified phospholipid or the solution of step (A) containing the polyalkylene oxide-modified phospholipid to steps (B) to (D) described below, a polyalkylene oxide-modified phospholipid of even higher purity can be obtained. Note that steps (B) to (D) are preferably performed after removing solid salts from the reaction solution of step (A) by filtration as described above.
  • step (B) an inorganic adsorbent containing at least one of aluminum and magnesium elements is added to the solution of the reaction product obtained in step (A) and stirred to remove the compound derived from Z and the excess phospholipid represented by formula (3) (unreacted phospholipid: for example, phosphatidylethanolamine).
  • the reaction product obtained in step (A) may be dissolved in an organic solvent to obtain the solution.
  • the filtrate obtained by filtering the reaction solution obtained in step (A) may be used as the solution.
  • the organic solvent used in step (B) is preferably ethyl acetate, chloroform, toluene, acetone, etc., and particularly preferably ethyl acetate.
  • the temperature for treatment with the inorganic adsorbent is 10 to 85°C, preferably 40 to 70°C, and the time is 10 minutes to 5 hours, preferably 30 minutes to 3 hours.
  • the crystals obtained in step (A) may be heated and dissolved, and then treated with the inorganic adsorbent. However, since the crystals may not dissolve at the above temperatures or the viscosity of the solution may be high, it is preferable to dilute the polyalkylene oxide-modified phospholipid of the present invention in a solvent that dissolves the polyalkylene oxide-modified phospholipid, such as ethyl acetate, before treatment.
  • the treatment temperature with the inorganic adsorbent is less than 10°C, the polyalkylene oxide-modified phospholipid may precipitate, and when the adsorbent is removed, the polyalkylene oxide-modified phospholipid is also removed, resulting in a lower yield, which is not preferable. Also, if the temperature exceeds 85°C, and if there is a trace amount of moisture, hydrolysis of the polyalkylene oxide-modified phospholipid may occur during the adsorbent treatment.
  • the amount of inorganic adsorbent used is desirably 0.1 to 200 parts by weight, preferably 1 to 50 parts by weight, per 100 parts by weight of the reactant to be treated.
  • amount of adsorbent is 0.1 to 200 parts by weight, Z-derived compounds and excess unreacted phospholipids can be sufficiently and efficiently removed.
  • step (B) the inorganic adsorbent treatment is carried out, and the inorganic adsorbent is removed by a method such as filtration, after which cooling or crystallization can be carried out using a poor solvent.
  • a method such as filtration
  • cooling to 10°C or less will ensure sufficient crystallization and produce crystals in good yields.
  • the solvent may be distilled off to effect crystallization, but when the solvent is distilled off, it is preferable to do so at 80°C or less and under reduced pressure. If the distillation temperature of the organic solvent exceeds 80°C, undesirable side reactions such as decomposition of the acyl group of the polyalkylene oxide-modified phospholipid represented by formula (1) may occur.
  • the inorganic adsorbent used in step (B) is an inorganic adsorbent that contains elemental aluminum but not elemental magnesium, an inorganic adsorbent that contains elemental magnesium but not elemental aluminum, or an inorganic adsorbent that contains elemental aluminum and elemental magnesium.
  • inorganic adsorbents examples include inorganic adsorbents containing aluminum hydroxide, aluminum oxide, magnesium oxide, magnesium hydroxide, aluminum silicate, etc.
  • the inorganic adsorbent is made of a metal oxide containing at least one of aluminum silicate and magnesium aluminum oxide.
  • the inorganic adsorbents can be used alone or in combination of two or more.
  • the specific surface area of the inorganic adsorbent is preferably 50 m 2 /g or more and 200 m 2 /g or less.
  • inorganic adsorbents include Kyoward 200B ( Al2O3.H2O ), Kyoward 200 (Al(OH) 3.nH2O ) , Kyoward 300 ( 2.5MgO.Al2O3.0.7CO3.nH2O ) , Kyoward 500 ( Mg6Al2 (OH) 16CO3.4H2O ) , Kyoward 600 ( 2MgO.6SiO2.nH2O ) , Kyoward 700 ( Al2O3.9SiO2.H2O ), Kyoward 1000 (Mg4.5Al2 ( OH ) 13CO3.3.5H2O ) , Kyoward 2000 ( Mg0.7Al0.3O 1.15 ), (trademark, manufactured by Kyowa Chemical Industry Co., Ltd.), etc.
  • step (B) can be repeated several times in the same manner to obtain polyalkylene oxide-modified phospholipids with even higher purity.
  • Step (C) In step (C), an organic solvent is added to the polyalkylene oxide-modified phospholipid obtained in step (B), and then an aqueous solution of a polycarboxylic acid is added and stirred to remove aluminum and/or magnesium derived from the inorganic adsorbent.
  • the organic solvent used in step (C) is preferably one that dissolves the target polyalkylene oxide-modified phospholipid but is not miscible with water.
  • Preferred organic solvents include chloroform and dichloromethane, with chloroform being particularly preferred.
  • the temperature for treatment with the polycarboxylic acid aqueous solution is 10 to 50°C, preferably 20 to 35°C, and the time is 10 minutes to 4 hours, preferably 30 minutes to 2 hours.
  • Treatment temperatures below 10°C are not preferred because they reduce the efficiency of removing aluminum or magnesium derived from the inorganic adsorbent.
  • temperatures above 50°C may cause hydrolysis of the polyalkylene oxide-modified phospholipid during treatment with the polycarboxylic acid aqueous solution due to the moisture in the aqueous solution.
  • the polyvalent carboxylic acid used in step (C) is preferably one that, when dissolved in water to give an aqueous solution, exhibits an acidity of pH 1 to 6, preferably 2 to 5, and has a high coordination ability with metal ions.
  • polycarboxylic acids include citric acid, isocitric acid, oxalic acid, succinic acid, malonic acid, nitrilotriacetic acid, ethylenediaminetetraacetic acid, diethylenetriaminepentaacetic acid, glycol ether diaminetetraacetic acid, triethylenetetraminehexaacetic acid, hydroxyethyliminediacetic acid, and 1,3-diamino-2-hydroxypropanetetraacetic acid.
  • citric acid, oxalic acid, succinic acid, and malonic acid are preferred, with citric acid being particularly preferred.
  • the concentration of the polycarboxylic acid aqueous solution should be 0.1% to 10% by weight, preferably 1 to 5% by weight. If the concentration of the polycarboxylic acid aqueous solution is 0.1% to 10% by weight, aluminum and/or magnesium derived from the inorganic adsorbent can be sufficiently and efficiently removed.
  • step (C) can be repeated several times in the same manner to obtain a polyalkylene oxide-modified phospholipid solution with even higher purity.
  • step (D) the hydrogen ions, which are counter ions in the polyalkylene oxide-modified phospholipid, are replaced with sodium ions by a method such as adding an alkaline aqueous solution of a sodium metal salt exhibiting alkalinity to the polyalkylene oxide-modified phospholipid solution after the treatment in step (C) and stirring the mixture.
  • the organic solvent used in step (D) is preferably one that dissolves the target polyalkylene oxide-modified phospholipid but is not miscible with water.
  • Preferred organic solvents include chloroform and dichloromethane, with chloroform being particularly preferred.
  • the alkaline sodium metal salt used in step (D) is not particularly limited as long as it is water-soluble.
  • Examples include sodium carbonate, sodium bicarbonate, sodium formate, sodium acetate, sodium propionate, trisodium citrate, disodium hydrogen phosphate, trisodium phosphate, sodium nitrite, etc.
  • sodium carbonate and sodium bicarbonate are preferred.
  • the temperature for treatment with the aqueous sodium metal salt solution is 10 to 50°C, preferably 20 to 35°C, and the time is 10 minutes to 4 hours, preferably 30 minutes to 2 hours. Treatment temperatures below 10°C are undesirable because the efficiency of replacing hydrogen ions, which are counter ions in the polyalkylene oxide-modified phospholipid, with sodium ions deteriorates. Furthermore, if the temperature exceeds 50°C, hydrolysis of the polyalkylene oxide-modified phospholipid may occur during treatment with the aqueous sodium metal salt solution due to the moisture in the aqueous sodium salt solution.
  • the concentration of the aqueous sodium metal salt solution is desirably 1% by weight to 20% by weight, preferably 5% by weight to 15% by weight. When the concentration of the aqueous citric acid solution is 5% by weight to 15% by weight, hydrogen ions, which are counter ions in the polyalkylene oxide-modified phospholipid, can be efficiently substituted with sodium ions.
  • Step (A) Toluene (140 mL) was added to polyoxyethylene monomethyl ether (molecular weight 5000, 30 g, 6 mmol), refluxed at 115°C, and dehydrated for 1 hour. After cooling to 40°C, N,N'-disuccinimidyl carbonate (4.61 g, 18 mmol) and pyridine (2.14 g, 27 mmol) were added, and reacted at 80°C for 8 hours. Ethyl acetate (150 mL) and hexane (85 mL) were added to the reaction solution, and cooled to 10°C. The precipitated crystals were filtered to obtain an activated form.
  • polyoxyethylene monomethyl ether molethoxyethylene monomethyl ether
  • Step (B) Kyoward #700 (6.0 g) was added as an inorganic adsorbent to the filtrate, and the mixture was stirred for 0.5 hours at 40° C. After filtering off the inorganic adsorbent, the adsorbent treatment was carried out twice in the same manner.
  • Step (C) The filtrate after the adsorbent treatment was concentrated to dryness at 50° C. using an evaporator, and then chloroform (300 mL) was added to dissolve it. Next, 2 wt % citric acid aqueous solution (450 mL) was added and stirred at 25° C. for 1 hour. After standing to separate, the aqueous layer was removed, and the citric acid aqueous solution treatment was similarly performed once.
  • Step (D) To the organic layer after the citric acid aqueous solution treatment, a 10 wt % aqueous sodium carbonate solution (450 mL) was added, and the mixture was stirred for 1 hour at 25° C. After standing to separate, the aqueous layer was removed, and the organic layer was concentrated and dried to obtain 18.9 g of the target compound (yield: 55.3 mol %).
  • Step (A) Toluene (40 mL) was added to polyoxyethylene monomethyl ether (molecular weight 2000, 30 g, 15 mmol), refluxed at 115° C., and dehydrated for 1 hour. After cooling to 60° C., p-nitrophenyl chloroformate (3.33 g, 16.5 mmol) and triethylamine (1.82 g, 18 mmol) were added, and reacted at 60° C. for 6 hours. After filtering the reaction solution, ethyl acetate (40 mL) was added and cooled to 25° C.
  • Step (B) The obtained crystals were dissolved by adding ethyl acetate (240 mL), and then Kyoward #2000 (6.0 g) and Kyoward #700 (0.3 g) were added as inorganic adsorbents, and the mixture was stirred at 55° C. for 0.5 hours. After filtering the inorganic adsorbent, the filtrate was cooled to 3° C., and the precipitated crystals were filtered to obtain crystals. The adsorbent treatment was carried out twice in the same manner.
  • Step (C) Chloroform (300 mL) was added to the crystals after the inorganic adsorbent treatment to dissolve them. Next, 2 wt% citric acid aqueous solution (450 mL) was added and stirred at 25° C. for 1 hour. After standing to separate, the aqueous layer was removed and similarly treated with the aqueous citric acid solution once.
  • Step (D) To the organic layer after the citric acid aqueous solution treatment, a 10 wt % aqueous sodium carbonate solution (450 mL) was added, and the mixture was stirred for 1 hour at 25° C. After standing to separate, the aqueous layer was removed, and the organic layer was concentrated and dried to obtain 20.5 g of the target compound (yield: 51.8 mol %).
  • Step (A) Toluene (140 mL) was added to polyoxyethylene monomethyl ether (molecular weight 5000, 30 g, 6 mmol), refluxed at 115° C., and dehydrated for 1 hour. After cooling to 40° C., N,N'-disuccinimidyl carbonate (4.61 g, 18 mmol) and pyridine (2.14 g, 27 mmol) were added, and reacted at 80° C. for 8 hours. Ethyl acetate (150 mL) and hexane (85 mL) were added to the reaction solution, and cooled to 10° C. The precipitated crystals were filtered to obtain an activated form.
  • polyoxyethylene monomethyl ether molethoxyethylene monomethyl ether
  • Step (A) Toluene (80 mL) was added to polyoxyethylene monomethyl ether (molecular weight 2000, 20 g, 10 mmol), refluxed at 110°C, and dehydrated for 1 hour. After cooling to 50°C, 1,1'-carbonyldiimidazole (1.95 g, 12 mmol) was added and reacted for 2 hours to obtain an activated form. Next, sodium carbonate (42.4 g, 400 mmol) and distearoylphosphoethanolamine (11.22 g, 15 mmol) were added, and the mixture was heated to 65°C and reacted for 8 hours. After filtering the sodium carbonate, hexane (300 mL) was added to the filtrate to crystallize.
  • polyoxyethylene monomethyl ether molethoxyethylene monomethyl ether
  • Step (B) The crystals obtained in step (A) were dissolved in ethyl acetate (400 mL), and Kyoward #2000 (5 g) and Kyoward #700 (0.8 g) were added as inorganic adsorbents, and the mixture was stirred at 65 ° C for 1 hour. After filtering the inorganic adsorbent, the mixture was cooled to 5 ° C and crystallized. After filtering the crystals, the inorganic adsorbent treatment was performed once in the same manner. After washing the crystals with hexane (200 mL), the mixture was filtered and dried to obtain 14.6 g of the target compound (yield 53.1 mol%).
  • Step (A) Toluene (140 mL) was added to polyoxyethylene monomethyl ether (molecular weight 5000, 30 g, 6 mmol), refluxed at 115° C., and dehydrated for 1 hour. After cooling to 40° C., N,N'-disuccinimidyl carbonate (4.61 g, 18 mmol) and pyridine (2.14 g, 27 mmol) were added, and reacted at 80° C. for 8 hours. Ethyl acetate (150 mL) and hexane (85 mL) were added to the reaction solution, and cooled to 10° C. The precipitated crystals were filtered to obtain an activated form.
  • polyoxyethylene monomethyl ether molethoxyethylene monomethyl ether
  • Step (B) Kyoward #700 (6.0 g) was added as an inorganic adsorbent to the filtrate, and the mixture was stirred for 0.5 hours at 40° C. After filtering off the inorganic adsorbent, the adsorbent treatment was carried out twice in the same manner.
  • Step (D) To the organic layer after the hydrochloric acid aqueous solution treatment, a 10 wt % aqueous sodium carbonate solution (450 mL) was added, and the mixture was stirred for 1 hour at 25° C. After standing to separate, the aqueous layer was removed, and the organic layer was concentrated and dried to obtain 17.7 g of the target compound (yield: 51.8 mol %).
  • TLC thin layer chromatography
  • each metal element was quantified by ICP emission spectroscopy. That is, the amount of metal ions (sodium, aluminum, magnesium) that are counterions in each polyalkylene oxide-modified phospholipid obtained in each Example and Comparative Example was quantified. Specifically, in the ICP emission spectroscopy, each product of each Example and Comparative Example was accurately weighed into a conical beaker and decomposed using nitric acid and perchloric acid on a hot plate at approximately 180°C to 250°C.
  • Tables 1 and 2 show that, according to the examples, high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids with low phospholipid content and low aluminum and magnesium element contents were obtained.
  • Comparative Example 2 the adsorption treatment was performed using an inorganic adsorbent, so the phospholipid content was low. However, the aluminum and magnesium contents were high.
  • adsorption treatment was performed using an inorganic adsorbent, resulting in a low phospholipid content.
  • treatment was performed with an aqueous solution of hydrochloric acid, which is a monovalent acid, instead of an aqueous solution of a polyvalent carboxylic acid, resulting in insufficient removal of aluminum and magnesium, resulting in high aluminum and magnesium contents.
  • the method for producing polyalkylene oxide-modified phospholipids of the present invention does not require special equipment and can efficiently produce high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipids, and is therefore extremely useful as an industrial method for producing polyalkylene oxide-modified phospholipids. Furthermore, the high-purity polyalkylene oxide-modified phospholipid produced by the production method of the present invention and purified with an aluminum compound and/or a magnesium compound further has significantly reduced aluminum ions and/or magnesium ions, and is extremely useful.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Polyethers (AREA)

Abstract

高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法を提供する。　下記工程（Ａ）、工程（Ｂ）、工程（Ｃ）および工程（Ｄ）を順に実施することを特徴とする、特定のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法を提供する。 工程（Ａ）：　特定のポリアルキレンオキシド化合物と特定のリン脂質とを、アルカリ金属塩の存在下、有機溶媒中にて反応させることで反応物を得る工程 工程（Ｂ）：　前記工程（Ａ）の前記反応物の溶液に対して、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する無機吸着剤を添加して撹拌することによって、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を得る工程 工程（Ｃ）：　工程（Ｂ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に有機溶剤を添加した後、多価カルボン酸の水溶液を添加して撹拌することで、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液を得る工程 工程（Ｄ）：　工程（Ｃ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液にナトリウム金属塩のアルカリ性水溶液を添加して撹拌する工程

Description

ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法
　本発明は、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法に関する。
　近年、抗癌剤等を内封したリポソーム製剤の研究が広く行われてきており、その血中滞留性を向上する目的で水溶性高分子によるリポソーム表面の修飾が行われている。その一つとして、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が用いられている。このポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は医薬用途で使用するため、限りなく不純物が少ないか、または不純物が存在しないことが好ましい。
　このようなポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、例えばポリアルキレンオキシドとリン脂質を反応させることにより合成される。この合成したポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の精製法としては、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどが利用されている（非特許文献１参照）。
　しかし、これら非特許文献１に記載のシリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用すると、設備の関係上、一度に精製できる量が限られる、使用溶媒量が多量である点から工業的生産に好ましくない。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を実施した場合、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に含まれる対イオンであるナトリウムイオンの一部が、シリカゲル由来の金属であるカルシウムイオン等に置換される場合がある。
　一方、特許文献１では、シリカゲルカラムクロマトグラフィーの代わりに、アルミニウム元素および／またはマグネシウム元素を含有する化合物からなる無機吸着剤を用いて、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を精製する方法が開示されている。上記無機吸着剤を用いて精製することで、高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を効率的に得ることができる。
Ｍ．Ｃ．Ｗｏｏｄｌｅ　（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ，　１１０５，　１９３－２００　（１９９２）
日本国特開２００２－３６３２７８号公報
　しかし、アルミニウム元素および／またはマグネシウム元素を含有する化合物からなる無機吸着剤を用いて精製を行うと、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に含まれる対イオンであるナトリウムイオンの一部が、無機吸着剤由来の金属であるアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンに置換される場合がある。置換されたアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンをナトリウムイオンへ再置換するためには、一般的には例えばイオン交換樹脂が考えられる。
　しかし、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質においては、リン脂質の上記金属イオンへの配位能が高いため、イオン交換樹脂を用いてアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンをナトリウムイオンへ再置換することは困難であることがわかった。また、対イオンとしてアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンを含んだポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は水溶解性が低く、水に溶解させた場合に濁りを生じることがある。
　以上より、近年求められているさらに高純度なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の効率的な工業的製法は確立されていなかった。
　本発明の課題は、高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の工業的な製造方法を提供することである。
　本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する無機吸着剤を用いて精製した後のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に対して、多価カルボン酸水溶液を添加して撹拌すると、無機吸着剤由来のアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンを効率的に除去することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
　本発明は、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法であり、製造されたポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は以下のとおりである。
（１）　下記工程（Ａ）、工程（Ｂ）、工程（Ｃ）および工程（Ｄ）を順に実施することを特徴とする、下記式（１）で示されるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。

工程（Ａ）：
　下記式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と下記式（３）で示されるリン脂質とを、アルカリ金属塩の存在下、有機溶媒中にて反応させることで反応物を得る工程

工程（Ｂ）：
　前記工程（Ａ）の前記反応物の溶液に対して、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する無機吸着剤を添加して撹拌することによって、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を得る工程

工程（Ｃ）：
　工程（Ｂ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に有機溶剤を添加した後、多価カルボン酸の水溶液を添加して撹拌することで、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液を得る工程

工程（Ｄ）：
　工程（Ｃ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液にナトリウム金属塩のアルカリ性水溶液を添加して撹拌する工程
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 （式（１）中、
　Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して、炭素数４～２４のアシル基を示し、
　ｋは１～６であり、
　Ｒ３Ｏは炭素数２～４のオキシアルキレン基であり、
　ｎは炭素数２～４のオキシアルキレン基Ｒ３Ｏの平均付加モル数であって、１０～８００であり、
　Ｘは炭素数１～３の２価の炭化水素基または－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｑ－であり（ｑは１～４である）、
　ｐは０または１であり、ｐが０の場合、Ｙは水素原子または炭素数１～４のアルキル基であり、ｐが１の場合、Ｙは、水素原子、アミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、グリシジル基、マレイミド基、チオール基、ｔｅｒｔ－ブトキシアミド基、９－フルオレニルメチルオキシアミド基、メチルエステル基またはＳ－ｔ－ブチルジスルフィド基である。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 （式（２）中、
　Ｒ３Ｏは炭素数２～４のオキシアルキレン基であり、
　ｎは炭素数２～４のオキシアルキレン基Ｒ３Ｏの平均付加モル数であって、１０～８００であり、
　Ｘは炭素数１～３の２価の炭化水素基または－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｑ－であり（ｑは１～４である）、
　ｐは０または１であり、ｐが０の場合、Ｙは水素原子または炭素数１～４のアルキル基であり、
ｐが１の場合、Ｙは、水素原子、アミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、グリシジル基、マレイミド基、チオール基、ｔｅｒｔ－ブトキシアミド基、９－フルオレニルメチルオキシアミド基、メチルエステル基またはＳ－ｔ－ブチルジスルフィド基であり、
　Ｚは、式（３）で示されるリン脂質のアミノ基との反応性置換基である。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 （式（３）中、
　Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して、炭素数４～２４のアシル基を示し、
　ｋは１～６である。）
（２）　前記式（２）において、Ｒ３Ｏがオキシエチレン基であることを特徴とする、（１）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
（３）　式（３）で示される前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンであることを特徴とする、（１）または（２）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
（４）　前記無機吸着剤が、ケイ酸アルミニウムとマグネシウム・アルミニウム酸化物との少なくとも一方を含有する金属酸化物からなり、前記無機吸着剤の比表面積が５０ｍ２／ｇ以上、２００ｍ２／ｇ以下であることを特徴とする、（１）または（２）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
（５）　前記多価カルボン酸が、クエン酸、イソクエン酸、シュウ酸、コハク酸、マロン酸、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、トリエチレンテトラミン六酢酸、ヒドロキシエチルイミン二酢酸および１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン四酢酸からなる群より選ばれた一種以上であることを特徴とする、（１）または（２）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
（６）　前記多価カルボン酸がクエン酸であることを特徴とする、（５）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
（７）　前記多価カルボン酸の水溶液中の多価カルボン酸の濃度が、０．１重量％以上、１０重量％以下であることを特徴とする、（１）または（２）のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
　本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製法は、特殊な設備を必要とせず、高純度なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を効率的に得ることができるため、工業的なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法として極めて有用である。
　また、本発明の製造方法により製造された、アルミニウム化合物および／またはマグネシウム化合物によって精製処理された高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、更にアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンも顕著に低減されたものであり、極めて有用である。
　上記式（１）で示される本発明の製造方法により製造されたポリアルキレンオキシド修飾リン脂質（以下、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質という場合がある）において、Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して炭素数４～２４のアシル基である。Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯの炭素数は、１２以上であることが更に好ましく、また２０以下であることが更に好ましい。Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して、飽和または不飽和のアシル基であってよく、また直鎖または分岐鎖のアシル基であってよい。
　このアシル基（Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯ）は通常脂肪酸（Ｒ１ＣＯＯＨおよびＲ２ＣＯＯＨ）に由来する。Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯの具体例としては、例えば、酪酸、イソ酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキジン酸などの飽和および不飽和の直鎖または分岐の脂肪酸由来のアシル基を挙げることができる。Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは互いに同じであっても異なっていてもよい。
　上記式（１）においてＲ３Ｏで表されるオキシアルキレン基は、炭素数２～４（より好ましくは炭素数２または３）のオキシアルキレン基である。Ｒ３Ｏとしては、例えばオキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシトリメチレン基、オキシブチレン基などが挙げられる。これらの中ではオキシエチレン基、オキシプロピレン基が好ましく、特にオキシエチレン基が好ましい。また、１分子内には、ｎの数だけオキシアルキレン基が存在するが、このオキシアルキレン基は１種単独であってもよいし、２種以上が組み合わされていてもよく、その組み合わせ方に制限はない。またブロック状であってもランダム状であってもよい。
　上記式（１）においてｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数を表し、１０～８００（より好ましくは２０～５００）の数である。ｎが１０以上であると、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質をドラッグデリバリーシステムに使用した場合にデリバリー効果が高くなる。またｎが８００以下であると、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を製造する際、原料である上記式（２）のポリアルキレンオキシド化合物の粘度がさほど上昇しないので、作業性が向上する。
　上記式（１）において、ｋは、１～６であり、好ましくは１～４、より好ましくは２～４、さらに好ましくは２である。
　上記式（１）において、Ｘは、炭素数１～３の２価の炭化水素基または－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｑ－（ここでｑは１～４）である。ｐは０または１である。
　Ｘを構成する炭化水素基の具体的例としては－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２）、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－などが挙げられる。
　上記式（１）において、ｐが０の場合には、Ｙは、水素原子または炭素数１～４のアルキル基である。炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等が挙げられる。これの中ではメチル基が特に好ましい。
　また、ｐが１の場合には、Ｙは水素原子、アミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、グリシジル基、マレイミド基、チオール基、ｔｅｒｔ－ブトキシアミド基、９－フルオレニルメチルオキシアミド基、メチルエステル基またはＳ－ｔ－ブチルジスルフィド基であり、好ましくはアミノ基である。
　本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する化合物を含む無機吸着剤に由来するアルミニウム含量、マグネシウムの含量が少ない。具体的には、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中に存在するアルミニウム含量およびマグネシウム含量の合計値が、０．１ｍｏｌ％以上、５．０ｍｏｌ％以下である。ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中に存在するアルミニウム含量およびマグネシウム含量の合計値は、３．０ｍｏｌ％以下であることが好ましく、２．０ｍｏｌ％以下であることが更に好ましい。
　ただし、無機吸着剤がアルミニウム元素を含有し、マグネシウム元素を含有しない場合には、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中に存在するアルミニウム含量が、０．１ｍｏｌ％以上、５．０ｍｏｌ％以下であり、マグネシウムは含有されていない。
　ただし、無機吸着剤がマグネシウム元素を含有し、アルミニウム元素を含有しない場合には、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中に存在するマグネシウム含量が、０．１ｍｏｌ％以上、５．０ｍｏｌ％以下であり、アルミニウムは含有されていない。
　また、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、式（３）で示されるリン脂質含量が０．５重量％以下であり、高純度である。この観点からは、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、式（３）で示されるリン脂質含量が０．３重量％以下であることが好ましく、０．１重量％以下であることが更に好ましい。
　また、本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、工程（Ａ）によって式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物より副生する、リン脂質が結合していないポリエチレングリコール誘導体の含有量が、
５．０重量％以下であることが好ましく、３．０重量％以下であることが更に好ましい。式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物の含有量は０重量％であってもよい。
　本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、以下の工程（Ａ）～（Ｄ）を順次実施することで製造可能である。
（工程（Ａ））
　工程（Ａ）では、式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と式（３）で示されるリン脂質のアミノ基とを、水溶液がアルカリ性を示すアルカリ金属塩の存在下、有機溶媒中にて反応させる工程である。　
　式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物および式（３）で示されるリン脂質において、Ｒ１ＣＯ、Ｒ２ＣＯ、Ｒ３Ｏ、ｋ、ｎ、Ｘ、ｐおよびＹは、上記式（１）で説明したものと同じである。
　式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物において、Ｚは活性付与基であって、ポリアルキレンオキシド化合物に対して、式（３）で示されるリン脂質のアミノ基との反応活性を付与する基であり、電子吸引性基、その他の基が含まれる。このような基として、具体的には、イミダゾール基、４－ニトロフェニルオキシ基、ベンゾトリアゾール基、塩素、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、カルボニロキシ－Ｎ－２－ピロリジノン基、カルボニル－２－オキシピリミジン基、Ｎ－スクシンイミジルオキシ基、ペンタフルオロベンゾイル基などが挙げられる。この中でも特にＮ－スクシンイミジルオキシ基、４－ニトロフェニルオキシ基が好ましい。
　式（３）で示されるリン脂質は、天然リン脂質でも合成リン脂質でもよい。また、ｋは１～６であるが、２～４が好ましく、２であることが好ましい。特にホスファチジルエタノールアミンが好ましい。具体例として、例えば大豆および大豆水添ホスファチジルエタノールアミン、卵黄および卵黄水添ホスファチジルエタノールアミン等の天然および合成ホスファチジルエタノールアミンなどが挙げられる。
　工程（Ａ）で使用する、水溶液がアルカリ性を示すアルカリ金属塩としては、上記式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と、式（３）のリン脂質のアミノ基とを結合させることができ、水に溶解して水溶液にした場合のｐＨが７．１～１３、好ましくは７．１～１１のアルカリ性を示すアルカリ金属の炭酸塩、リン酸塩または酢酸塩であり、さらにナトリウムを含む固体塩であることが好ましい。具体的には、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸三ナトリウムなどである。この中でも特に炭酸ナトリウムが好ましい。
　金属塩の使用量は、ｍｏｌ比率でみて、式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物の０．１～１０００ｍｏｌ倍であることが好ましい。金属塩の使用料が０．１倍モル以上であると反応が速やかに進行するため好ましい。また、これが１０００ｍｏｌ倍以下であると攪拌が容易であるので好ましい。金属塩の使用量は特に、１～５００ｍｏｌ倍であるのが好ましい。
　式（２）のポリアルキレンオキシド化合物と式（３）のリン脂質の仕込み量は、モル比（式（２）のポリアルキレンオキシド化合物：式（３）のリン脂質）で、１：１あるいは１：１超（リン脂質が過剰）となるように設定することが望ましい。具体的には、式（２）のポリアルキレンオキシド化合物と式（３）のリン脂質のモル比（式（２）のポリアルキレンオキシド化合物：式（３）のリン脂質）が１：１～１：５、好ましくは１：１．１～１：２、さらに好ましくは１：１である。
　リン脂質が過剰となる場合、後に述べる工程において生成物から除去することが可能である。一方、ポリアルキレンオキシド化合物が過剰となる場合、反応終了後に未反応のポリアルキレンオキシド化合物が残存する。ポリアルキレンオキシド化合物の分子量が約５００以上の場合、残存するポリアルキレンオキシド化合物の除去は困難であることが多く、高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を得るのが難しくなるので、上記モル比が好ましい。
　工程（Ａ）では、式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と、式（３）で示されるリン脂質とを、上記のように上記金属塩の存在下に反応させることができる。
　工程（Ａ）の反応に使用する有機溶媒は、出発原料および反応生成物と反応しないか、ほとんど反応しないものであれば特に制限なく使用することができる。例えば酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルム、ベンゼンおよびトルエンなどの非プロトン性溶媒などが挙げられる。これらの中ではトルエン、クロロホルムが好ましい。エタノールなどの水酸基を有する有機溶媒は、上記式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物の末端活性基と反応するので好ましくない。ジクロロメタン等でも反応性には問題はないが、低沸点であるため作業上好ましくない。
　工程（Ａ）の反応の反応温度は３０～９０℃、好ましくは４０～８０℃である。反応時間は１時間以上、好ましくは２～１５時間とするのが望ましい。反応時間が１５時間を超えるとポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が熱履歴の増大によって分解し、純度が低下する可能性があるため好ましくない。
　このようにして式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と式（３）で示されるリン脂質とを反応させることにより、式（１）で示される本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が得られる。
　なお、工程（Ａ）において、上記式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物の末端Ｙがアミノ基、カルボキシル基またはチオール基、特にアミノ基の場合には、これらの基を保護して反応に供するのが好ましい。例えば、アミノ基の場合にはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基または９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基等の保護基を付けることが好ましい。また，カルボキシル基の場合にはメチル基等によりエステル化して保護することが好ましい。またチオール基の場合にはＳ－ｔ－ブチルスルフィド基等の保護基を付けて保護するのが好ましい。
　工程（Ａ）で得られた反応液から固体塩を濾過後、濾液を濃縮または貧溶媒に投入して結晶化するなどの方法により、上記式（１）で示される本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を精製できる。濾過に使用する濾材は、被処理液の不溶物を除去することができるものであれば特に制限はなく、通常は保集粒子細孔径が１～１０μｍで耐溶媒性を有する紙、ガラスなど各種の材質のフィルターを使用することができる。濾過方法には制限なく、例えば減圧濾過、加圧濾過、遠心濾過などの方法を用いることができる。
　得られたポリアルキレンオキシド修飾リン脂質またはポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を含む工程（Ａ）の溶液を、下記のような工程（Ｂ）～（Ｄ）を経ることにより、さらに高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を得ることができる。なお、工程（Ｂ）～（Ｄ）は、上記の濾過により工程（Ａ）の反応液から固体塩を除去した後に行うことが好ましい。
（工程（Ｂ））
　工程（Ｂ）では、工程（Ａ）で得られた反応物の溶液に対して、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する無機吸着剤を添加して攪拌することによって、Ｚ由来の化合物、および式（３）で示される過剰のリン脂質（未反応のリン脂質：例えばホスファチジルエタノールアミン）の除去を行う。ここで、工程（Ａ）で得られた反応物を有機溶剤に溶解して前記溶液としてよい。あるいは、工程（Ａ）で得られた反応液を濾過した濾液を前記溶液として用いることができる。工程（Ｂ）で用いる有機溶剤は、酢酸エチル、クロロホルム、トルエン、アセトンなどが好ましく、特に酢酸エチルが好ましい。
　無機吸着剤を用いて処理する温度は１０～８５℃、好ましくは４０～７０℃、時間は１０分～５時間、好ましくは３０分～３時間とするのが望ましい。工程（Ａ）で得られた結晶を加熱溶解し、無機吸着剤で処理してもよいが、上記温度で結晶が溶解しない場合や溶液の粘度が高い場合が多いため、酢酸エチルなどの本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を溶解する溶媒に希釈して処理することが好ましい。
　無機吸着剤での処理温度が１０℃未満では、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が析出する場合があり、吸着剤を除去する場合にポリアルキレンオキシド修飾リン脂質も一緒に除去されて収率が下がるので好ましくない。また、８５℃を超えると、微量の水分が存在する場合、吸着剤処理中にポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の加水分解等が起こる可能性がある。
　無機吸着剤の使用量は、処理する反応物１００重量部に対して０．１～２００重量部、好ましくは１～５０重量部とするのが望ましい。吸着剤量が０．１～２００重量部であると、Ｚ由来の化合物および未反応の過剰なリン脂質を充分に効率よく除去することができる。
　工程（Ｂ）で無機吸着剤処理を行い、濾過などの方法により無機吸着剤を除去した後、冷却を行うか、または貧溶媒を用いて結晶化させることができる。好ましくは、１０℃以下に冷却して行えば、結晶化が十分に行われ、良好な収率で結晶が得られる。無機吸着剤除去後、溶媒を留去して結晶化してもよいが、溶媒を留去する場合、８０℃以下、減圧下で行うことが望ましい。有機溶媒の留去温度が８０℃　を越えると、式（１）で示されるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質のアシル基が分解するなど、望ましくない副反応が起こるおそれがある。
　工程（Ｂ）で用いる無機吸着剤は、アルミニウム元素を含有し、マグネシウム元素を含有しない無機吸着剤、マグネシウム元素を含有し、アルミニウム元素を含有しない無機吸着剤、またはアルミニウム元素およびマグネシウム元素を含有する無機吸着剤である。
　こうした無機吸着剤としては、水酸化アルミニウム、酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、ケイ酸アルミニウム等を含有する無機吸着剤が挙げられる。好ましくは、無機吸着剤が、ケイ酸アルミニウムとマグネシウム・アルミニウム酸化物との少なくとも一方を含有する金属酸化物からなることが好ましい。無機吸着剤は１種単独で使用することもできるし、２種以上を組み合せて使用することもできる。また、無機吸着剤の、比表面積は、５０ｍ２／ｇ以上２００ｍ２／ｇ以下であるとよい。
　このような無機吸着剤の市販品としては、キョーワード２００Ｂ（Ａｌ２Ｏ３・Ｈ２Ｏ）、キョーワード２００（Ａｌ（ＯＨ）３・ｎＨ２Ｏ）、キョーワード３００（２．５ＭｇＯ・Ａｌ２Ｏ３・０．７ＣＯ３・ｎＨ２Ｏ）、キョーワード５００（Ｍｇ６Ａｌ２（ＯＨ）１６ＣＯ３・４Ｈ２Ｏ）、キョーワード６００（２ＭｇＯ・６ＳｉＯ２・ｎＨ２Ｏ）、キョーワード７００（Ａｌ２Ｏ３・９ＳｉＯ２・Ｈ２Ｏ）、キョーワード１０００（Ｍｇ４．５Ａｌ２（ＯＨ）１３ＣＯ３・３．５Ｈ２Ｏ）、キョーワード２０００（Ｍｇ０．７Ａｌ０．３Ｏ１．１５）、（協和化学工業（株）製、商標）などが挙げられる。
　工程（Ｂ）を行うにあたり、さらに純度を上げたい場合、同様に工程（Ｂ）を数回繰り返すことにより、さらに純度の優れたポリアルキレンオキサイド修飾リン脂質を得ることができる。
（工程（Ｃ））
　工程（Ｃ）では、工程（Ｂ）で得られたポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に有機溶剤を添加した後、多価カルボン酸の水溶液を添加して撹拌することで、無機吸着剤由来のアルミニウムおよび／またはマグネシウムの除去を行う。
　工程（Ｃ）で用いる有機溶剤は、目的物であるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を溶解するが、水とは混和しない溶媒が好ましい。有機溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメタンなどが好ましく、特にクロロホルムが好ましい。
　多価カルボン酸水溶液を用いて処理する温度は１０～５０℃、好ましくは２０～３５℃、時間は１０分～４時間、好ましくは３０分～２時間とするのが望ましい。処理する温度が１０℃未満では、無機吸着剤由来のアルミニウムまたはマグネシウムの除去効率が悪化するため好ましくない。また５０℃を超えると、多価カルボン酸水溶液中の水分によって多価カルボン酸水溶液処理中にポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の加水分解が起こる可能性がある。
　工程（Ｃ）で使用する多価カルボン酸としては、水に溶解して水溶液にした場合のｐＨが１～６、好ましくは２～５の酸性を示し、金属イオンとの配位能が高いものが好ましい。
　具体的には、多価カルボン酸は、例えばクエン酸、イソクエン酸、シュウ酸、コハク酸、マロン酸、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、トリエチレンテトラミン六酢酸、ヒドロキシエチルイミン二酢酸、１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン四酢酸などが挙げられる。その中でもクエン酸、シュウ酸、コハク酸、マロン酸が好ましく、特にクエン酸が好ましい。
　多価カルボン酸水溶液の濃度は０．１重量％～１０重量％、好ましくは１～５重量％とするのが望ましい。多価カルボン酸水溶液の濃度が０．１重量％～１０重量％であると、無機吸着剤由来のアルミニウムおよび／またはマグネシウムを十分に効率よく除去することができる。
　工程（Ｃ）を行うにあたり、さらに純度を上げたい場合、同様に工程（Ｃ）を数回繰り返すことにより、さらに純度の優れたポリアルキレンオキサイド修飾リン脂質溶液を得ることができる。
（工程（Ｄ））
　工程（Ｄ）では、工程（Ｃ）処理後のポリアルキレンオキサイド修飾リン脂質溶液に、アルカリ性を示すナトリウム金属塩のアルカリ性水溶液を添加して撹拌する等の方法により、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中の対イオンである水素イオンをナトリウムイオンへ置換する。
　工程（Ｄ）で用いる有機溶剤は、目的物であるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を溶解するが、水とは混和しない溶媒が好ましい。有機溶媒としてはクロロホルム、ジクロロメタンなどが好ましく、特にクロロホルムが好ましい。
　工程（Ｄ）で使用するアルカリ性を示すナトリウム金属塩は、水溶性であれば特に制限はない。例えば炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ギ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸三ナトリウム、亜硝酸ナトリウムなどを挙げることができる。これらの中で炭酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムが好ましい。
　ナトリウム金属塩水溶液を用いて処理する温度は１０～５０℃、好ましくは２０～３５℃、時間は１０分～４時間、好ましくは３０分～２時間とするのが望ましい。処理する温度が１０℃未満では、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中の対イオンである水素イオンをナトリウムイオンへ置換する効率が悪化するため、好ましくない。また５０℃を超えると、ナトリウム金属塩水溶液中の水分によってナトリウム金属塩水溶液処理中にポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の加水分解が起こる可能性がある。
　ナトリウム金属塩水溶液の濃度は１重量％～２０重量％、好ましくは５～１５重量％とするのが望ましい。クエン酸水溶液の濃度が５重量％～１５重量％であるとポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中の対イオンである水素イオンをナトリウムイオンへ効率的に置換することができる。
　ナトリウム金属塩水溶液処理後の溶液から目的物を単離する方法は特に制限はないが、脱溶剤によって溶剤を除去し、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を乾燥固化して単離する方法が好ましい。
（実施例１）
　（モノメチルポリオキシエチレンカルバミル　ジパルミトイルホスホエタノールアミンの合成）
（工程（Ａ））
　ポリオキシエチレンモノメチルエーテル（分子量５０００、３０ｇ、６ｍｍｏｌ）にトルエン（１４０ｍＬ）を加え、１１５℃で還流し、１時間脱水した。４０℃に冷却後、Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネート（４．６１ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ピリジン（２．１４ｇ、２７ｍｍｏｌ）　を加え、８０℃で８時間反応させた。反応液に酢酸エチル（１５０ｍＬ）、ヘキサン（８５ｍＬ）を加え、１０℃に冷却した。析出した結晶を濾過し、活性化体を得た。次に、トルエン（２００ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．７０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）、ジパルミトイルホスホエタノールアミン（４．５７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加え、６５　℃　に昇温後、６時間反応させたのち酢酸エチル（１７０ｍＬ）を加えて希釈し、炭酸ナトリウムを濾過した。
（工程（Ｂ））
　濾液に、無機吸着剤としてキョーワード＃７００（６．０ｇ）を加え、４０℃にて０．５時間撹拌した。無機吸着剤を濾過後、同様に、吸着剤処理を２回行った。
（工程（Ｃ））
　吸着剤処理後の濾液に対してエバポレーターを用いて５０℃で濃縮乾固させたのち、クロロホルム（３００ｍＬ）を加え、溶解させた。次に、２重量％クエン酸水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、同様に、クエン酸水溶液処理を１回行った。
（工程（Ｄ））
　クエン酸水溶液処理後の有機層に１０重量％炭酸ナトリウム水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、有機層を濃縮、乾燥することで目的化合物１８．９ｇ（収率５５．３ｍｏｌ％）を得た。
（実施例２）
　（モノメチルポリオキシエチレンカルバミル　ジミリストイルホスホエタノールアミンの合成）
（工程（Ａ））
　ポリオキシエチレンモノメチルエーテル（分子量２０００、３０ｇ、１５ｍｍｏｌ）にトルエン（４０ｍＬ）を加え、１１５℃で還流し、１時間脱水した。６０℃　に冷却後、ｐ―ニトロフェニルクロロホルメート（３．３３ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．８２ｇ、１８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で６時間反応させた。反応液をろ過したのち、酢酸エチル（４０ｍＬ）を加えて２５℃に冷却した。ヘキサン（１２０ｍＬ）を加えて０．５時間撹拌させたのち析出した結晶を濾過し、活性化体を得た。次に、トルエン（２００ｍＬ）、炭酸ナトリウム（２４．６ｇ、２３３ｍｍｏｌ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（１１．５ｇ、１８ｍｍｏｌ）、トルエン（５０ｍＬ）を加え、６８℃に昇温後、１２時間反応させたのち酢酸エチル（１７０ｍＬ）を加えて希釈し、炭酸ナトリウムを濾過した。濾液に酢酸エチル（３７０ｍＬ）加え、３℃　に冷却した。析出した結晶を濾過し、結晶を得た。
（工程（Ｂ））
　得られた結晶に酢酸エチル（２４０ｍＬ）を加え溶解させた後、無機吸着剤としてキョーワード＃２０００（６．０ｇ）およびキョーワード＃７００（０．３ｇ）を加え、５５℃　にて０．５時間撹拌した。無機吸着剤を濾過後、濾液を３℃に冷却し、析出した結晶を濾過し、結晶を得た。同様に、吸着剤処理を２回行った。
（工程（Ｃ））
　無機吸着剤処理後の結晶に対して、クロロホルム（３００ｍＬ）を加え、溶解させた。次に、２重量％クエン酸水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、同様に、クエン酸水溶液処理を１回行った。
（工程（Ｄ））
　クエン酸水溶液処理後の有機層に１０重量％炭酸ナトリウム水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、有機層を濃縮、乾燥することで目的化合物２０．５ｇ（収率５１．８ｍｏｌ％）を得た。
（比較例１）
（モノメチルポリオキシエチレンカルバミル　ジパルミトイルホスホエタノールアミンの合成）
（工程（Ａ））
　ポリオキシエチレンモノメチルエーテル（分子量５０００、３０ｇ、６ｍｍｏｌ）にトルエン（１４０ｍＬ）を加え、１１５℃で還流し、１時間脱水した。４０℃に冷却後、Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネート（４．６１ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ピリジン（２．１４ｇ、２７ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で８時間反応させた。反応液に酢酸エチル（１５０ｍＬ）、ヘキサン（８５ｍＬ）を加え、１０℃に冷却した。析出した結晶を濾過し、活性化体を得た。次に、トルエン（２００ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．７０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）、ジパルミトイルホスホエタノールアミン（４．５７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に昇温後、６時間反応させたのち酢酸エチル（１７０ｍＬ）を加えて希釈し、炭酸ナトリウムを濾過した。
（水による洗浄処理）
　反応後の濾液に対してエバポレーターを用いて５０℃で濃縮乾固させたのち、クロロホルム（３００ｍＬ）を加え、溶解させた。次に、蒸留水（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、同様に、水洗浄処理を１回行った。有機層を濃縮、乾燥することで目的化合物２２．９ｇ（収率６７．１ｍｏｌ％）を得た。
（比較例２）
　（モノメチルポリオキシエチレンカルバミル　ジステアロイルホスホエタノールアミンの合成）
（工程（Ａ））
　ポリオキシエチレンモノメチルエーテル（分子量２０００、２０ｇ、１０ｍｍｏｌ）にトルエン（８０ｍＬ）を加え、１１０℃　で還流し、１時間脱水した。５０℃　に冷却後、１，１’－カルボニルジイミダゾール（１．９５ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加え、２時間反応させることにより、活性化体を得た。次に、炭酸ナトリウム（４２．４ｇ、４００ｍｍｏｌ）、ジステアロイルホスホエタノールアミン（１１．２２ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、６５℃　に昇温後、８時間反応させた。炭酸ナトリウムを濾過後、濾液にヘキサン（３００ｍＬ）を入れ、結晶化させた。結晶を濾過後、結晶にアセトン（８０ｍＬ）を加え、５０℃　に加温した。グラスフィルターにて濾過し、不溶物を除去した。濾液にヘキサン（１６０ｍＬ）を加え、晶析させ、５℃まで冷却した。その後、結晶を濾過した。
　この結晶に酢酸エチル（４００ｍＬ）を加え、６５℃で溶解し０．５時間撹拌後、５℃に冷却した。析出した結晶を濾過した。同様に酢酸エチルでの再結晶工程をもう１回行った。
（工程（Ｂ））
　工程（Ａ）で得られた結晶を酢酸エチル（４００ｍＬ）にて溶解し、無機吸着剤としてキョーワード＃２０００（５ｇ）、キョーワード＃７００（０．８ｇ）を加え、６５℃にて１時間撹拌した。無機吸着剤を濾過後、５℃に冷却し、結晶化させた。結晶を濾過後、同様に、無機吸着剤処理を１回行った。ヘキサン（２００ｍＬ）にて結晶洗浄後、濾過、乾燥し、目的化合物１４．６ｇ（収率５３．１ｍｏｌ％）を得た。
（比較例３）
（モノメチルポリオキシエチレンカルバミル　ジパルミトイルホスホエタノールアミンの合成）
（工程（Ａ））
　ポリオキシエチレンモノメチルエーテル（分子量５０００、３０ｇ、６ｍｍｏｌ）にトルエン（１４０ｍＬ）を加え、１１５℃で還流し、１時間脱水した。４０℃に冷却後、Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネート（４．６１ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ピリジン（２．１４ｇ、２７ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で８時間反応させた。反応液に酢酸エチル（１５０ｍＬ）、ヘキサン（８５ｍＬ）を加え、１０℃に冷却した。析出した結晶を濾過し、活性化体を得た。次に、トルエン（２００ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．７０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）、ジパルミトイルホスホエタノールアミン（４．５７ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に昇温後、６時間反応させたのち酢酸エチル（１７０ｍＬ）を加えて希釈し、炭酸ナトリウムを濾過した。
（工程（Ｂ））
　濾液に、無機吸着剤としてキョーワード＃７００（６．０ｇ）を加え、４０℃にて０．５時間撹拌した。無機吸着剤を濾過後、同様に、吸着剤処理を２回行った。
（塩酸水溶液による洗浄処理）
　吸着剤処理後の濾液に対してエバポレーターを用いて５０℃で濃縮乾固させたのち、クロロホルム（３００ｍＬ）を加え、溶解させた。次に、２重量％塩酸水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、同様に、塩酸水溶液処理を１回行った。
（工程（Ｄ））
　塩酸水溶液処理後の有機層に１０重量％炭酸ナトリウム水溶液（４５０ｍＬ）を加え、２５℃で１時間撹拌した。静置分層させた後、水層を除去し、有機層を濃縮、乾燥することで目的化合物１７．７ｇ（収率５１．８ｍｏｌ％）を得た。
　各実施例、比較例について、製造工程の概要を表１にまとめる。
（不純物の分析）
　各実施例、比較例の各生成物について、シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって不純物含量を測定した。
　具体的には、ＴＬＣに際して、展開溶媒としてクロロホルム、メタノール、水の混合比が８５：１４：１容量比の混合溶媒を用い、ヨウ素蒸気にて発色させて既知量の標準物質との比較により、不純物の定量を行った。
　不純物として、式（１）で示されるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質のモノアシル体（Ｌｙｓｏ－ＰＥＧ）、工程（Ａ）によって式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物より副生する、リン脂質が結合していないポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ誘導体）、式（３）で示されるリン脂質（ＰＥ）を定量した。結果を表２、表３に示す。
（各金属元素の定量）
　（各金属元素の定量）
　各金属元素をＩＣＰ発光分光分析により定量した。すなわち、各実施例、比較例で得られた各ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質中の対イオンである金属イオン量（ナトリウム、アルミニウム、マグネシウム）を定量した。具体的にはＩＣＰ発光分光分析に際して各実施例、比較例の各生成物をコニカルビーカーに正確に秤取り、およそ１８０℃から２５０℃のホットプレート上で硝酸および過塩素酸を用いて分解した。その後水を加えて定容し、ＩＣＰ発光分光分析装置（ｉＣＡＰ　ＰＲＯ　ＸＰ　ＤｕＯ　ＩＣＰ－ＯＥＳ、サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製）を用いて金属イオン量（ナトリウム、アルミニウム、マグネシウム）を定量した。計量結果を表２、表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　表１、表２の結果から、実施例によれば、リン脂質含量が少なく、またアルミニウム元素およびマグネシウム元素の含有量が少ない高純度なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が得られた。
　比較例１では、無機吸着剤による吸着処理を行っていない。このため、生成物中のアルミニウム含量、マグネシウム含量は低いが、リン脂質含量が高い。
　比較例２では、無機吸着剤による吸着処理を行っているので、リン脂質含量は低くなっている。しかし、アルミニウム含量およびマグネシウム含量が高くなっている。
　比較例３では、無機吸着剤による吸着処理を行っているので、リン脂質含量は低くなっている。しかし、多価カルボン酸水溶液のかわりに１価の酸である塩酸水溶液で処理をおこなっているため、アルミニウムおよびマグネシウムの除去が不十分であり、アルミニウム含量およびマグネシウム含量が高くなっている。
　本発明のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製法は、特殊な設備を必要とせず、高純度なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を効率的に得ることができるため、工業的なポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法として極めて有用である。
　また、本発明の製造方法により製造された、アルミニウム化合物および／またはマグネシウム化合物によって精製処理された高純度のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質は、更にアルミニウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンも顕著に低減されたものであり、極めて有用である。
　本発明を詳細にまた特定の実施態様を参照して説明したが、本発明の精神と範囲を逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは当業者にとって明らかである。
　本出願は、２０２３年３月７日出願の日本特許出願（特願２０２３－０３４１９８）に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。

Claims (7)

  1. 　下記工程（Ａ）、工程（Ｂ）、工程（Ｃ）および工程（Ｄ）を順に実施することを特徴とする、下記式（１）で示されるポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。

    工程（Ａ）：
    　下記式（２）で示されるポリアルキレンオキシド化合物と下記式（３）で示されるリン脂質とを、アルカリ金属塩の存在下、有機溶媒中にて反応させることで反応物を得る工程

    工程（Ｂ）：
    　前記工程（Ａ）の前記反応物の溶液に対して、アルミニウム元素とマグネシウム元素との少なくとも一方を含有する無機吸着剤を添加して撹拌することによって、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を得る工程

    工程（Ｃ）：
    　工程（Ｂ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質に有機溶剤を添加した後、多価カルボン酸の水溶液を添加して撹拌することで、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液を得る工程

    工程（Ｄ）：
    　工程（Ｃ）で得られた前記ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質溶液にナトリウム金属塩のアルカリ性水溶液を添加して撹拌する工程
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式（１）中、
    　Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して、炭素数４～２４のアシル基を示し、
    　ｋは１～６であり、
    　Ｒ３Ｏは炭素数２～４のオキシアルキレン基であり、
    　ｎは炭素数２～４のオキシアルキレン基Ｒ３Ｏの平均付加モル数であって、１０～８００であり、
    　Ｘは炭素数１～３の２価の炭化水素基または－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｑ－であり（ｑは１～４である）、
    　ｐは０または１であり、ｐが０の場合、Ｙは水素原子または炭素数１～４のアルキル基であり、ｐが１の場合、Ｙは、水素原子、アミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、グリシジル基、マレイミド基、チオール基、ｔｅｒｔ－ブトキシアミド基、９－フルオレニルメチルオキシアミド基、メチルエステル基またはＳ－ｔ－ブチルジスルフィド基である。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式（２）中、
    　Ｒ３Ｏは炭素数２～４のオキシアルキレン基であり、
    　ｎは炭素数２～４のオキシアルキレン基Ｒ３Ｏの平均付加モル数であって、１０～８００であり、
    　Ｘは炭素数１～３の２価の炭化水素基または－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｑ－であり（ｑは１～４である）、
    　ｐは０または１であり、ｐが０の場合、Ｙは水素原子または炭素数１～４のアルキル基であり、
    　ｐが１の場合、Ｙは、水素原子、アミノ基、カルボキシル基、アルデヒド基、グリシジル基、マレイミド基、チオール基、ｔｅｒｔ－ブトキシアミド基、９－フルオレニルメチルオキシアミド基、メチルエステル基またはＳ－ｔ－ブチルジスルフィド基であり、
    　Ｚは、式（３）で示されるリン脂質のアミノ基との反応性置換基である。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式（３）中、
    　Ｒ１ＣＯおよびＲ２ＣＯは、それぞれ独立して、炭素数４～２４のアシル基を示し、
    　ｋは１～６である。）
  2. 　前記式（２）において、Ｒ３Ｏがオキシエチレン基であることを特徴とする、請求項１記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
  3. 　式（３）で示される前記リン脂質がホスファチジルエタノールアミンであることを特徴とする、請求項１または２記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
  4. 　前記無機吸着剤が、ケイ酸アルミニウムとマグネシウム・アルミニウム酸化物との少なくとも一方を含有する金属酸化物からなり、前記無機吸着剤の比表面積が５０ｍ２／ｇ以上、２００ｍ２／ｇ以下であることを特徴とする、請求項１または２記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
  5. 　前記多価カルボン酸が、クエン酸、イソクエン酸、シュウ酸、コハク酸、マロン酸、ニトリロ三酢酸、エチレンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸、グリコールエーテルジアミン四酢酸、トリエチレンテトラミン六酢酸、ヒドロキシエチルイミン二酢酸および１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン四酢酸からなる群より選ばれた一種以上であることを特徴とする、請求項１または２記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
  6. 　前記多価カルボン酸がクエン酸であることを特徴とする、請求項５記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
  7. 　前記多価カルボン酸の水溶液中の多価カルボン酸の濃度が、０．１重量％以上、１０重量％以下であることを特徴とする、請求項１または２記載のポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法。
PCT/JP2024/008210 2023-03-07 2024-03-05 ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法 WO2024185762A1 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2023034198 2023-03-07
JP2023-034198 2023-03-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024185762A1 true WO2024185762A1 (ja) 2024-09-12

Family

ID=92675194

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2024/008210 WO2024185762A1 (ja) 2023-03-07 2024-03-05 ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JP2024127824A (ja)
WO (1) WO2024185762A1 (ja)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002037883A (ja) * 2000-07-24 2002-02-06 Nof Corp ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質、その製造方法および用途
JP2002363278A (ja) * 2001-03-02 2002-12-18 Nof Corp ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質およびその製造方法
WO2004083219A1 (ja) * 2003-03-20 2004-09-30 Nof Corporation リン脂質誘導体

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002037883A (ja) * 2000-07-24 2002-02-06 Nof Corp ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質、その製造方法および用途
JP2002363278A (ja) * 2001-03-02 2002-12-18 Nof Corp ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質およびその製造方法
WO2004083219A1 (ja) * 2003-03-20 2004-09-30 Nof Corporation リン脂質誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024127824A (ja) 2024-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI359806B (en) Polyglycerin monoether and method for producing th
JP5044965B2 (ja) α−グリセロホスホリルコリン結晶の製造方法
EP3106465A1 (en) Method for preparing racemic or optically active glycerophosphoryl choline
JP2019500362A (ja) ヒドロキシベンゾフェノンポリグリコールエーテル（メタ）アクリレートの製造方法
RU2272022C2 (ru) Способ получения эфиров гидроксифенилкарбоновой кислоты
KR101882517B1 (ko) 알킬 포스페이트의 제조 방법
WO2024185762A1 (ja) ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質の製造方法
CN107406371B (zh) 3-苯基异丝氨酸衍生物的制造方法
EP3778703B1 (en) Method for purifying trityl group-containing monodispersed polyethylene glycol
KR100453590B1 (ko) 벤젠 디올의 모노카르보닐화 방법
EA010021B1 (ru) Способ получения металлических солей среднецепочечных жирных кислот
ES2394565T3 (es) Método de preparación de fesoterodina y/o fumarato de fesoterodina
JPH10139877A (ja) コハク酸イミジル基置換ポリオキシアルキレン誘導体の製造方法
CA1041542A (en) Process for the production of n, n-diallyldichloroacetamide
JPH0327556B2 (ja)
KR20210148151A (ko) 말단 카르복실기함유 폴리에틸렌글리콜의 제조 방법 및 활성화 폴리에틸렌글리콜의 제조 방법
JP4551514B2 (ja) 不飽和炭化水素残基置換アニリン類の製造方法
EP3687969B1 (en) Method of preparing esters of terephthalic acid
JPH09249657A (ja) （メタ）アクリル酸グリシジルの精製方法
US6667420B2 (en) Process for the preparation of sodium divalproate
JPH0692424B2 (ja) リン酸エステルの製造法
KR100294621B1 (ko) 이오파미돌의제조방법
JP3171279B2 (ja) 炭素原子数１４〜１８を有するアルキルホスホコリンの製法及びアルキルホスホコリンの精製法
JP2933412B2 (ja) ホスファチジルコリンの製造法
EP3094636B1 (en) Preparation of purified phosphorodiamidite

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 24767129

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1