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WO2024175069A1 - 喜树碱衍生物及其偶联物以及其制备方法和医药用途 - Google Patents

喜树碱衍生物及其偶联物以及其制备方法和医药用途 Download PDF

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WO2024175069A1
WO2024175069A1 PCT/CN2024/078189 CN2024078189W WO2024175069A1 WO 2024175069 A1 WO2024175069 A1 WO 2024175069A1 CN 2024078189 W CN2024078189 W CN 2024078189W WO 2024175069 A1 WO2024175069 A1 WO 2024175069A1
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WO
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integer
gly
alkyl
val
nrf
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Application number
PCT/CN2024/078189
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English (en)
French (fr)
Inventor
陈兆远
毛彦利
Original Assignee
一线医药（杭州）有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 一线医药（杭州）有限公司 filed Critical 一线医药（杭州）有限公司
Priority to CN202480003481.3A priority Critical patent/CN119630672A/zh
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    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/14—Ortho-condensed systems
    • C07D491/147—Ortho-condensed systems the condensed system containing one ring with oxygen as ring hetero atom and two rings with nitrogen as ring hetero atom
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic

Definitions

  • the present invention relates to novel camptothecin derivatives and conjugates thereof, as well as preparation methods thereof, pharmaceutical compositions containing the same, and uses thereof for preparing antitumor drugs.
  • Antibody-drug conjugates are a relatively new class of anticancer drugs that are designed to combine the selectivity of monoclonal antibodies with the cell-killing properties of cytotoxic agents.
  • ADCs have attracted great interest as a new therapeutic approach and continue to develop.
  • the design of ADCs connects monoclonal antibodies or antibody fragments to biologically active cytotoxic agents through linkers, making full use of the antibody's specificity for binding to tumor cell surface antigens and the high efficiency of cytotoxic substances, while avoiding the defects of low efficacy of antibodies themselves and excessive toxic side effects of cytotoxic agents. This means that compared with traditional chemotherapy drugs, antibody-drug conjugates can kill tumor cells more accurately and reduce toxic side effects on normal cells.
  • the linker in ADC drugs is not only a molecular part that forms a covalent connection between antibodies and small molecule drugs, but also a key element with design properties in targeted drug therapy. This involves many considerations: the addition of linkers should not induce aggregation; ensure acceptable PK properties; improve blood circulation stability; and effectively release active molecules at the target site.
  • Camptothecin is a pentacyclic quinoline alkaloid originally isolated from the wood and bark of the Chinese native tree, Camptotheca acuminata. Camptothecin exhibits significant antitumor activity by inhibiting topoisomerase I.
  • Topoisomerase I is an enzyme that is overexpressed in a variety of tumor cell lines and is essential for DNA synthesis. Camptothecin can bind to the Topo I-DNA complex and stabilize it, thereby preventing the broken DNA strands from rejoining, preventing DNA replication and RNA synthesis. Due to its broad-spectrum antitumor activity and unique mechanism of action, efforts have been made to develop clinical analogs of camptothecin.
  • camptothecin homologs are on the market, namely irinotecan (approved by the FDA in 1994 by Pfizer Pharmaceuticals in the United States), topotecan (approved by the FDA in 2007 by Novartis Pharmaceuticals), and belotecan (approved by ChongKunDang Pharmaceuticals in South Korea in 2003).
  • camptothecin and most of its derivatives have poor solubility and low activity under physiological conditions, which limits the clinical development of camptothecin analogs. Therefore, making camptothecin into ADC can overcome these limitations.
  • Irinotecan is a prodrug, and its active metabolite SN-38 has poor water solubility and a short half-life.
  • Immunomedics uses SN-38 as a toxic agent connected to certolizumab, which targets cancer cells expressing Trop-2 for the treatment of adult patients with metastatic triple-negative breast cancer (TNBC).
  • TNBC metastatic triple-negative breast cancer
  • Humanized certolizumab lyophilized powder injection (Sacituzumab Govitecan-Hziy) has been approved by the FDA for treatment in April 2022 (US7999083B2).
  • the amino group of exatecan contributes to its water solubility, while the rigidity conferred by the cyclohexane ring is thought to favor the balance between the active lactone form and the inactive hydrolyzed hydroxy acid, thereby improving its activity, but clinical trials did not reach the expected endpoints.
  • Daiichi Sankyo used aminohydroxy acetylation to generate DXd, which is 2-4 times less active than exatecan (US 20210169852 A).
  • the ADC Enhertu
  • produced by coupling DXd with an anti-HER2 antibody using an enzyme-cleavable Gly-Gly-Phe-Gly tetrapeptide linker has shown great potential against HER2-expressing cancers in the clinical setting.
  • the resulting ADC When coupled with an antibody against human epidermal growth factor receptor (HuEGFR), the resulting ADC is effective against the EGFR-positive HSC-2 tumor xenograft model (US20210077482A1).
  • researchers at MediBoston derived a functional group for connecting to an antibody at position 9, introduced a hydrophilic peptide linker, and the resulting ADC achieved good preclinical results (WO 2021173773).
  • camptothecin analogs have good anti-tumor activity, especially after coupling with humanized antibodies, they have good targeting and tumor killing activity and a lower effective dose, thereby reducing toxicity and increasing the therapeutic window.
  • different types of camptothecin derivatives not only have significantly different half-lives, membrane permeability and in vitro activities, but also have huge differences in toxicity to different cancer cells. Therefore, we hope to improve the activity and membrane permeability of camptothecin derivatives on tumor cells (i.e., increase the bystander effect of camptothecin derivatives) by designing new structures, thereby improving the killing of tumor cells with low or no antigen expression, in order to achieve a certain clinical effect.
  • the present invention provides a compound represented by general formula (A) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, LL 2 -L 1 -Dr (A)
  • Dr is selected from the following structures:
  • R 2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen;
  • R6 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • R 7 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen and alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein the alkyl is optionally further substituted with cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, alkyl;
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen, alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein the alkyl is optionally further substituted with cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, alkyl ;
  • L2 is selected from a bond, Where * is the connection site with L 1 ;
  • L3 is an amino acid residue formed by two or more amino acids, and L3 optionally comprises one selected from the following or multiple structures, L 6 is selected from one or more of the following structures:
  • R, Raa , and Rbb are each independently selected from hydrogen and alkyl
  • Z 1 is selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) p -, -(C 2 H 4 O) q -, -(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH- ;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • s is an integer from 1 to 6;
  • t is an integer from 0 to 10;
  • s 1 , s 2 , s 3 , and s 4 are each independently an integer of 0 to 10; preferably an integer of 0 to 8, or an integer of 0 to 6; further preferably an integer of 0 to 4, and further preferably an integer of 0 to 2, or an integer of 1 to 2;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6;
  • t1 is an integer from 1 to 6;
  • t2 is an integer from 0 to 6;
  • t3 is an integer from 1 to 6;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10;
  • p is an integer from 1 to 10;
  • q is an integer from 1 to 10;
  • Q is a linker unit.
  • Z1 is connected to Q.
  • Dr is selected from the following structures:
  • R a is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • R b is selected from hydrogen, alkyl, -C(O)R c , -S(O)R c , -S(O) 2 R c , wherein R c is selected from hydrogen, hydroxy, C 1 -C 6 alkyl;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4; more preferably an integer from 1 to 2;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4; more preferably an integer from 1 to 2;
  • R1 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1-C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 -C6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably C1 - C6 alkyl , C1 - C6 alkoxy;
  • R2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, and the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl are optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably halogen.
  • Dr is selected from the following structures:
  • R a is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • R b is selected from hydrogen, alkyl, -C(O)R c , -S(O)R c , -S(O) 2 R c , wherein the alkyl is optionally further substituted by cycloalkyl; wherein R c is selected from hydrogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4; more preferably an integer from 1 to 2;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4; more preferably an integer from 1 to 2;
  • R2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen; preferably halogen;
  • R d , Re , R f , m and n are as defined in the general formula (A).
  • Dr is selected from the following structures:
  • R a is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • R b is selected from hydrogen, alkyl, -C(O)R c , -S(O)R c , -S(O) 2 R c , wherein the alkyl is optionally further substituted by cycloalkyl; wherein R c is selected from hydrogen, hydroxyl, C 1 -C 6 alkyl;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4;
  • R2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, and the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl are optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably halogen.
  • Dr is selected from the following structures:
  • L 1 is selected from -O-*, wherein * is the attachment site to L 2 ;
  • R2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen; preferably halogen;
  • R d , Re , R f , m and n are as defined in the general formula (A).
  • Dr is selected from the following structures:
  • L 1 is selected from -O-*, wherein * is the attachment site to L 2 ;
  • R2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, and the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl are optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably halogen.
  • R4 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl are optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably hydroxyl, C1 - C6 alkyl, C1 - C6 alkoxy.
  • Dr is selected from the following structures:
  • L 1 is selected from -(CH 2 ) m -O-*, -(CH 2 ) m -NR a -*, wherein * is the connection site with L 2 ;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4;
  • R a is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • R5 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably halogen;
  • R7 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1 - C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, the C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably hydroxyl and amino.
  • Dr is selected from the following structures:
  • L 1 is selected from -O-*, wherein * is the attachment site to L 2 ;
  • R5 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably halogen;
  • R6 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably hydroxyl and amino;
  • R7 is selected from hydrogen, halogen, hydroxyl , amino, cyano, C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl, C2 - C6 alkynyl, wherein the C1 - C6 alkyl, C1- C6 alkoxy, C2 - C6 alkenyl , C2 - C6 alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen; preferably hydroxyl and amino.
  • L2 is selected from a bond or Where * is the connection site with L 1 ;
  • Ra , Rb , m and n are as defined in the general formula (A).
  • L2 is selected from a bond, Where * is the connection site with L 1 ;
  • Ra , Rb , m and n are as defined in the general formula (A).
  • L3 is an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine, and L3 optionally comprises one or more structures selected from the following:
  • R, Raa , and Rbb are each independently selected from hydrogen and C1 - C6 alkyl
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t 3 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, more preferably 1 or 2;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10.
  • L3 is an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine, and L3 optionally comprises one or more structures selected from the following:
  • R, Raa , Rbb , s, t, t1 - t5 , s5 - s6 are as described above.
  • L 1b and L' 1b are each independently selected from one or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, amino acid residues formed by amino acids in threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine;
  • L 1a is a bond or one or more structures selected from the following:
  • R is selected from hydrogen and C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen
  • R aa and R bb are each independently selected from C 1 -C 6 alkyl
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t3 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, more preferably 1 or 2;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10.
  • L3 is * is the position connected to L2
  • ⁇ is the position connected to the carbonyl group or methylene group
  • L 1b and L' 1b are each independently an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine;
  • L 1a is a bond or one or more structures selected from the following:
  • R, Raa , Rbb , s, t, t1 - t5 , s5 - s6 are as described above.
  • L 1b and L' 1b are each independently an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine;
  • R is selected from hydrogen and C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen
  • R aa and R bb are each independently selected from C 1 -C 6 alkyl
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t3 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, more preferably 1 or 2;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10;
  • L 1b and L' 1b are each independently an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from phenylalanine, alanine, glycine, valine, leucine, isoleucine, tryptophan, tyrosine, histidine, lysine, citrulline, serine, threonine, cysteine, glutamic acid, glutamine, aspartic acid, asparagine, methionine, and arginine;
  • R is selected from hydrogen and C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen
  • R aa and R bb are each independently selected from C 1 -C 6 alkyl
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t3 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, more preferably 1 or 2;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10;
  • L 1b and L' 1b are each independently an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine, preferably an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, valine, lysine, glutamine, glutamic acid, leucine, and alanine.
  • L 1b and L ' 1b are each independently selected from the group consisting of: -Gly-*, -Val-*, -Gly-Phe-Gly-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Gly-Val-Arg-*, -Val-Arg-*, -Gly-Val-Ala-*, -Val-Ala-*, -Gly-Phe-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Gly-Gly -*, Gly-Gly-*, -Gly-Val-Gly-*, -Gly-Ala-Gly-*, -Gly-Phe-Cit-*, -Gly-Phe-Val-*, -Gly-Phe-Ala-*, -Gly-Phe-Cit-*, -Gly-Phe-Val-*, -Gly-Phe
  • Z1 is selected from a bond, -( CH2 ) p- , -( CH2 ) p -C(O)NH-, -( CH2 ) p -O-( CH2 ) p -C(O)NH-, -( CH2 ) p -C(O)-L6 - NH-, -( CH2 ) p -O-( CH2 )p- C (O) -L6 -NH-, -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)- and -OC(O)NH-;
  • p is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 6; more preferably an integer from 2 to 4; most preferably an integer from 2 to 3;
  • s 1 , s 2 , s 3 , and s 4 are each independently an integer of 0 to 10; preferably an integer of 0 to 8, or an integer of 0 to 6; further preferably an integer of 0 to 4, and further preferably an integer of 0 to 2, or an integer of 1 to 2;
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • L 6 is preferably
  • Z 1 is selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) p -, -(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)NH-, -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)- and -OC(O)NH-;
  • s 1 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 2 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 3 is 0;
  • s 4 is 0;
  • p is an integer of 1 to 10, preferably an integer of 1 to 6; more preferably an integer of 2-4; most preferably an integer of 2-3.
  • Z 1 is selected from -(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)NH-, -C(O)NH-;
  • s 1 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 2 to 6;
  • s 2 is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 2 to 10;
  • s 3 is 0;
  • s 4 is 0;
  • p is an integer of 1 to 10, preferably an integer of 1 to 6; more preferably an integer of 2-4; most preferably an integer of 2-3.
  • Z 1 is selected from -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)- and -OC(O)NH-, preferably -C(O)NH-;
  • p is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 6; more preferably an integer from 2 to 4; most preferably an integer from 2 to 3;
  • s 1 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 2 is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 8;
  • s 3 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 4 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 2;
  • s 7 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 1 to 2;
  • s 8 is an integer from 1 to 4, preferably an integer from 1 to 2;
  • s 9 is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 8;
  • s10 is an integer of 1-4, preferably an integer of 1-2.
  • L 1b is an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine; preferably, an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, alanine, valine, glutamine, glutamic acid, and lysine; more preferably, -Gly-*, -Val-*, -Gly-Phe-Gly-*, -Phe- Gly-*, -Gly-Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Gly-Val-Arg-*, -Val-Arg-*, -Gly-Val-Ala-*, -Val-Ala-*, -Gly-Phe-*, -Phe-Gly-*,
  • Z 1 is selected from -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)- and -OC(O)NH-, preferably -C(O)NH-;
  • p is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 6;
  • s 1 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 2 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 2;
  • s 3 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 2;
  • s 4 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 2;
  • t is an integer from 0 to 10;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t3 is an integer of 1 to 6; preferably an integer of 1 to 4, more preferably 1 or 2.
  • L 1b is an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine; preferably, an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, alanine, valine, glutamine, glutamic acid, and lysine; more preferably, -Gly-*, -Val-*, -Gly-Phe-Gly-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Gly-Val-Arg-*, -Val- Arg-*, -Val- Arg-*, -Gly-Val-Ala
  • L' 1b is an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine; preferably, an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, aspartic acid, alanine, valine, glutamine, glutamic acid, and lysine; more preferably, -Gly-*, -Val-*, -Gly- Phe-Gly-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Gly-Val-Arg-*, -Val-Arg-*, -Val-Arg-*, -Gly-Gly-Gly-
  • L 1b and L' 1b are -Gly-* or -Val-*.
  • the compound represented by general formula (A) or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention wherein the compound is selected from:
  • Another aspect of the present invention provides a compound represented by general formula (I) or its stereoisomer, tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • R 8 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • G is selected from cycloalkylene, heterocyclylene, heteroarylene, and arylene;
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein the C1 - C6 alkyl is optionally further substituted by C3 - C6 cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl , C1 - C6 alkyl;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • n is an integer of 1 to 6.
  • G is selected from cycloalkylene, heterocyclylene, heteroarylene, and arylene;
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen;
  • Rf is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen
  • n is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 4;
  • n is an integer of 1 to 6, preferably 1 or 2.
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen;
  • Rf is selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, C1 - C6 alkyl ;
  • n is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • n is an integer of 1 to 6, preferably 1 or 2.
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • n is an integer from 1 to 6;
  • n is an integer of 1 to 4, preferably 1 or 2.
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein the C1 - C6 alkyl is optionally further substituted by C3 - C6 cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl , C1 - C6 alkyl;
  • n is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4 or from 4 to 6;
  • n is an integer of 1 to 4, preferably 1 or 2.
  • the compound represented by the general formula (I) according to the present invention or its stereoisomer, tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from:
  • Another aspect of the present invention provides a compound represented by general formula (II) or its stereoisomer, tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • R 11 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, C1 - C6 alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, C1 - C6 alkyl ;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • n is an integer of 1 to 6.
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen, C 1 -C 6 alkyl
  • n is an integer of 1-6, preferably an integer of 1-4.
  • R 13 is selected from hydroxyl and C 1-6 alkoxy.
  • the compound represented by the general formula (II) according to the present invention or its stereoisomer, tautomer, mesomer, racemate, enantiomer, diastereomer, or mixture thereof, or pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from:
  • Another aspect of the present invention provides a ligand-drug conjugate represented by general formula (B) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • Dr is selected from the following structures:
  • R 2 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted with one or more groups selected from halogen;
  • R6 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • R 7 is selected from hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, wherein the alkyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl is optionally further substituted by one or more groups selected from halogen;
  • R d and Re are each independently selected from hydrogen and alkyl
  • Rf is selected from hydrogen, alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O ) 2Rc , the C1 - C6 alkyl is optionally further substituted by C3 - C6 cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, alkyl;
  • Ra and Rb are each independently selected from hydrogen, alkyl, -C(O) Rc , -S(O) Rc , -S(O) 2Rc , wherein the alkyl is optionally further substituted with cycloalkyl; wherein Rc is selected from hydrogen, hydroxyl, alkyl ;
  • L2 is selected from a bond, Where * is the connection site with L 1 ;
  • Q' is selected from:
  • L3 is an amino acid residue formed by two or more amino acids, and L3 optionally comprises one or more structures selected from the following, and L6 is selected from one or more structures selected from the following:
  • R, Raa , and Rbb are each independently selected from hydrogen and alkyl
  • Z 1 is selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) p -, -(C 2 H 4 O) q -, -(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH- ;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • n is an integer from 1 to 6;
  • s is an integer from 1 to 6;
  • t is an integer from 0 to 10;
  • s 1 , s 2 , s 3 , and s 4 are each independently an integer of 0 to 10; preferably an integer of 0 to 8, or an integer of 0 to 6; further preferably an integer of 0 to 4, and further preferably an integer of 0 to 2, or an integer of 1 to 2;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6;
  • t1 is an integer from 1 to 6;
  • t2 is an integer from 0 to 6;
  • t3 is an integer from 1 to 6;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10;
  • p is an integer from 1 to 10;
  • q is an integer from 1 to 10;
  • v is 1 to 10, v is a decimal or an integer;
  • Pc is an antibody or an antigen-binding fragment thereof, or a modified antibody
  • the modified antibody has a Pc'-((L 5 ) w -F) x structure, wherein:
  • Pc’ is antibody
  • L 5 is a linker
  • w is 0 or 1;
  • F is a click probe or a thiol group or a precursor thereof that can be linked to Q' after a reaction such as a metal-free click reaction, preferably F is an azide group;
  • x is an integer from 1 to 8.
  • Z1 is connected to Q'.
  • the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention wherein:
  • L 3 is selected from:
  • R is selected from hydrogen and C 1 -C 6 alkyl, preferably hydrogen
  • R aa and R bb are each independently selected from C 1 -C 6 alkyl
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • s 5 and s 6 are each independently an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • t1 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, further preferably an integer from 2 to 4, further preferably 1 or 2;
  • t2 is an integer from 0 to 6; preferably an integer from 1 to 4, and more preferably 1 or 2;
  • t 3 is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 1 to 4, more preferably 1 or 2;
  • t 4 is an integer from 0 to 10;
  • t5 is an integer from 0 to 10;
  • L 1b and L ' 1b are each independently an amino acid residue formed by one or more amino acids selected from the group consisting of glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine, preferably an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from the group consisting of glycine, phenylalanine, citrulline, valine, lysine, glutamine, glutamic acid, leucine, and alanine;
  • L 1b and L ' 1b is each independently selected from: -Gly-*, -Val-*, -Gly-Phe-Gly-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Val-Cit-*, -Gly-Val-Arg-*, -Val-Arg-*, -Gly-Val-Ala-*, -Val-Ala-*, -Gly-Phe-*, -Phe-Gly-*, -Gly-Gly -Gly-*, Gly-Gly-*, -Gly-Val-Gly-*, -Gly-Ala-Gly-*, -Gly-Phe-Cit-*, -Gly-Phe-Val-*, -Gly-Phe-Ala-*, -Gly-Phe-Ala-*, -Gly-Phe-Cit-*, -
  • the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention wherein:
  • Q' is selected from:
  • L3 is an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, leucine, isoleucine, alanine, valine, asparagine, glutamine, arginine, glutamic acid, and lysine, preferably an amino acid residue formed by two or more amino acids selected from glycine, phenylalanine, citrulline, valine, lysine, glutamine, glutamic acid, leucine, and alanine;
  • Z 1 is selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) p -, -(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)NH-, -(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -(CH 2 ) p -O-(CH 2 ) p -C(O)-L 6 -NH-, -C(O)NH -, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH-;
  • s 1 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 2 to 6;
  • s 2 is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 2 to 10;
  • s 3 is 0;
  • s 4 is 0;
  • p is an integer from 1 to 10, preferably an integer from 1 to 6; more preferably an integer from 2 to 4; most preferably an integer from 2 to 3;
  • s is an integer from 1 to 6; preferably an integer from 2 to 6; more preferably an integer from 2 to 4;
  • t is an integer from 0 to 10; preferably an integer from 2 to 8; more preferably an integer from 3 to 7;
  • L 6 is preferably
  • Z2 and Z3 are each independently selected from -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH-; preferably -C(O)NH-;
  • r 1 is an integer from 1 to 8, preferably an integer from 1 to 6, more preferably an integer from 1 to 3;
  • r2 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 4, more preferably an integer from 1 to 2;
  • r 3 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r 4 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r5 is an integer of 1-6, preferably an integer of 1-4, and more preferably an integer of 1-2.
  • F is a thiol group; when w is 1, F is a click probe that can be connected to Q' after a reaction such as a metal-free click reaction, and preferably F is an azido group.
  • Pc is a modified antibody having the structure
  • Pc’ is antibody
  • Z2 and Z3 are each independently selected from -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH-; preferably -C(O)NH-;
  • r 1 is an integer from 1 to 8, preferably an integer from 1 to 6, more preferably an integer from 1 to 3;
  • r2 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 4, more preferably an integer from 1 to 2;
  • r 3 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r 4 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r5 is an integer of 1-6, preferably an integer of 1-4, and more preferably an integer of 1-2.
  • Pc is a modified antibody
  • Pc-Q' is selected from the structure:
  • Pc’ is antibody
  • Z2 and Z3 are each independently selected from -C(O)NH-, -C(O)O-, -C(O)-, -OC(O)-, -NH-, -O- and -OC(O)NH-; preferably -C(O)NH-;
  • r 1 is an integer from 1 to 8, preferably an integer from 1 to 6, more preferably an integer from 1 to 3;
  • r2 is an integer from 1 to 6, preferably an integer from 1 to 4, more preferably an integer from 1 to 2;
  • r 3 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r 4 is an integer from 0 to 6, preferably an integer from 0 to 4, more preferably an integer from 0 to 2;
  • r5 is an integer of 1-6, preferably an integer of 1-4, and more preferably an integer of 1-2.
  • the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from:
  • v is 1 to 10, v is a decimal or an integer;
  • Pc is an antibody or an antigen-binding fragment thereof
  • Pc is an antibody.
  • the antibody is selected from a murine antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody and a fully human antibody.
  • the antibody or its antigen-binding fragment is selected from anti-HER2 (ErbB2) antibody, anti-EGFR antibody, anti-B7-H3 antibody, anti-c-Met antibody, anti-HER3 (ErbB3) antibody, anti-HER4 (ErbB4) antibody, anti-ROR1 antibody, anti-CLDN6 antibody, anti-CLDN9 antibody, anti-CLDN18.2 antibody, anti-NaPi-2b antibody, anti-TNF- ⁇ antibody, anti-ENPP3 antibody, anti-DLL3 antibody, anti-CD20 antibody, anti-CD22 antibody, anti-CD28 antibody, anti-CD30 antibody, anti-CD33 antibody, anti-CD37 antibody, anti-CD38 antibody, anti-CD39 antibody, anti-CD40 antibody, anti-CD41 antibody, anti-CD42 antibody, anti-CD43 antibody, anti-CD44 antibody, anti-CD45 antibody, anti-CD47 antibody, anti
  • the antibody or its antigen-binding fragment is selected from trastuzumab, cetuximab, pertuzumab, nimotuzumab, enoblituzumab, emibetuzumab, inotuzumab, pinatuzumab, brentuximab, gemtuzumab, bivatuzumab, lorvotuzumab, or an antigen-binding fragment thereof.
  • the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention is selected from:
  • v is an integer or decimal from 1 to 10, preferably an integer from 2 to 8.
  • the present invention further relates to a pharmaceutical composition, which comprises the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • a pharmaceutical composition which comprises the ligand-drug conjugate represented by general formula (B) according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • the present invention also relates to the use of the compound represented by the general formula (A) or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the preparation of a ligand-drug conjugate.
  • the present invention also relates to the use of the compound represented by the general formula (I) according to the present invention or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the compound represented by the general formula (II) according to the present invention or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof in the preparation of ligand-drug conjugates.
  • the present invention further relates to a ligand-drug conjugate or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention.
  • a pharmaceutical composition containing it in the preparation of a drug for treating tumors or cancers wherein the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the present invention also relates to the ligand-drug conjugate according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a pharmaceutical composition containing the same, and its use in a drug for treating tumors or cancers, wherein the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the present invention also relates to a method for treating tumors or cancers, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of the ligand-drug conjugate according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition containing the same, wherein the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the present invention further relates to the use of the compound represented by the general formula (I) according to the present invention or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the compound represented by the general formula (II) or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions containing the same in the preparation of drugs for treating tumors or cancers, wherein the cancers are preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the cancers are preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer,
  • the present invention also relates to the compound represented by the general formula (I) according to the present invention or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the compound represented by the general formula (II) or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions containing them, and their use in drugs for treating tumors or cancers, wherein the cancers are preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the cancers are preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, mela
  • the present invention also relates to a method for treating tumors or cancers, comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of general formula (I) according to the present invention or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or a compound of general formula (II) or its stereoisomers, tautomers, mesomers, racemates, enantiomers, diastereomers, or mixtures thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof, or a pharmaceutical composition containing the same, wherein the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small cell lung cancer, gastric cancer, melanoma, head and neck cancer, cervical cancer, and prostate cancer.
  • the cancer is preferably breast cancer, ovarian cancer, soft tissue sarcoma, liposarcoma, lung cancer, non-small
  • linker unit refers to a chemical structure fragment or bond that is connected to a ligand at one end and to a drug at the other end, and can also be connected to other linkers before being connected to the drug.
  • ligand drug conjugate refers to a ligand connected to a biologically active drug via a stable linker.
  • the "ligand drug conjugate” is preferably an antibody drug conjugate (ADC), which refers to a monoclonal antibody or antibody fragment connected to a biologically active toxic drug, i.e., a camptothecin derivative, via a stable linker.
  • ADC antibody drug conjugate
  • antibody refers to immunoglobulin, which is a tetrapeptide chain structure composed of two identical heavy chains and two identical light chains connected by interchain disulfide bonds.
  • the amino acid composition and arrangement order of the constant region of the immunoglobulin heavy chain are different, so their antigenicity is also different.
  • immunoglobulins can be divided into five categories, or called immunoglobulin isotypes, namely IgM, IgD, IgG, IgA and IgE, and their corresponding heavy chains are ⁇ chain, ⁇ chain, ⁇ chain, ⁇ chain, and ⁇ chain, respectively.
  • IgG can be divided into IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4.
  • Light chain Different constant regions can be classified into ⁇ chains or ⁇ chains.
  • Each of the five classes of Ig can have either ⁇ chains or ⁇ chains.
  • the three CDR regions of the light chain refer to LCDR1, LCDR2, and LCDR3; the three CDR regions of the heavy chain refer to HCDR1, HCDR2, and HCDR3.
  • the number and position of the CDR amino acid residues in the LCVR and HCVR regions of the antibodies or antigen-binding fragments described in the present disclosure conform to the known Kabat numbering convention (LCDR1-3, HCDR2-3), or conform to the numbering convention of Kabat and Chothia (HCDR1).
  • antigen-binding fragment refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen. It has been shown that fragments of full-length antibodies can be used to perform the antigen-binding function of an antibody.
  • binding fragments included in "antigen-binding fragments" include (i) Fab fragments, monovalent fragments consisting of VL, VH, CL and CH1 domains; (ii) F(ab') 2 fragments, bivalent fragments comprising two Fab fragments connected by a disulfide bridge on the hinge region; (iii) Fd fragments consisting of VH and CH1 domains; (iv) Fv fragments consisting of the VH and VL domains of a single arm of an antibody; (v) single domain or dAb fragments, which consist of a VH domain; and (vi) isolated complementarity determining regions (CDRs) or (vii) combinations of two or more isolated CDRs that may be optionally connected by synthetic linkers.
  • the two domains VL and VH of the Fv fragment are encoded by separate genes, they can be connected by synthetic linkers using recombinant methods, so that they can be produced as a single protein chain (called single-chain Fv (scFv)) in which the VL and VH regions are paired to form a monovalent molecule.
  • single-chain Fv Single-chain Fv
  • Such single-chain antibodies are also intended to be included in the "antigen-binding fragment" of the term antibody.
  • Such antibody fragments are obtained using conventional techniques known to those skilled in the art, and the fragments are screened for functionality in the same manner as for intact antibodies.
  • Antigen-binding portions can be produced by recombinant DNA technology or by enzymatic or chemical cleavage of intact immunoglobulins.
  • the antibody can be an antibody of different types, for example, IgG (e.g., IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 subtypes), IgA1, IgA2, IgD, IgE or IgM antibodies.
  • IgG e.g., IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 subtypes
  • IgA1, IgA2, IgD, IgE or IgM antibodies e.g., IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4 subtypes.
  • alkyl refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, which is a straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably an alkyl group containing 1 to 12 carbon atoms, more preferably an alkyl group containing 1 to 10 carbon atoms, and most preferably an alkyl group containing 1 to 6 carbon atoms (including 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms).
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhexyl, 5-methylhexyl, 2,
  • lower alkyl groups containing 1 to 6 carbon atoms are preferred, non-limiting examples of which include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, and the like.
  • the alkyl group may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent may be substituted at any available point of attachment.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyloxy, heterocycloalkyloxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio, and oxo.
  • alkoxy refers to-O-(alkyl) and-O-(non-substituted cycloalkyl), wherein the definition of alkyl or cycloalkyl is as described above.
  • alkoxy include: methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy.
  • Alkoxy can be optionally substituted or non-substituted, and when substituted, substituents are preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, sulfhydryl, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyloxy, heterocycloalkyloxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent, wherein the cycloalkyl ring contains 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 12 carbon atoms, more preferably 3 to 10 carbon atoms, and most preferably 3 to 8 carbon atoms (containing 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms).
  • Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyls include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatrienyl, cyclooctyl, etc.; polycyclic cycloalkyls include spirocyclic, fused and bridged cycloalkyls.
  • heterocyclyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic hydrocarbon substituent containing 3 to 20 ring atoms, one or more of which are heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (wherein m is an integer of 0, 1 or 2), but excluding the ring part of -OO-, -OS- or -SS-, and the remaining ring atoms are carbon.
  • it contains 3 to 12 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms (1, 2, 3 or 4 heteroatoms); more preferably, the cycloalkyl ring contains 3 to 10 ring atoms (including 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 ring atoms).
  • Non-limiting examples of monocyclic heterocyclic groups include pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazinyl, etc.
  • Polycyclic heterocyclic groups include spirocyclic, fused ring and bridged heterocyclic groups.
  • spiro heterocyclic group refers to a polycyclic heterocyclic group in which the monocyclic rings of 5 to 20 members share one atom (called a spiro atom), wherein one or more of the ring atoms is a heterocyclic group selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (wherein m is an integer from 0 to 2). Atoms, the remaining ring atoms are carbon. It may contain one or more double bonds, but no ring has a completely conjugated ⁇ electron system. Preferably 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members.
  • the spiral heterocyclic group is divided into a single spiral heterocyclic group, a double spiral heterocyclic group or a multi-spiro heterocyclic group, preferably a single spiral heterocyclic group and a double spiral heterocyclic group. More preferably, it is a 4-membered/4-membered, 4-membered/5-membered, 4-membered/6-membered, 5-membered/5-membered or 5-membered/6-membered single spiral heterocyclic group.
  • spiral heterocyclic groups include:
  • fused heterocyclic group refers to a polycyclic heterocyclic group of 5 to 20 yuan, each ring in the system shares a pair of atoms adjacent to other rings in the system, one or more rings may contain one or more double bonds, but no ring has a completely conjugated ⁇ electron system, wherein one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or S (O) m (wherein m is an integer 0, 1 or 2) heteroatoms, and the remaining ring atoms are carbon.
  • O oxygen
  • m is an integer 0, 1 or 2
  • 6 to 14 yuan more preferably 7 to 10 yuan (7 yuan, 8 yuan, 9 yuan or 10 yuan ring).
  • the number of constituent rings it can be divided into a bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused heterocyclic group, preferably a bicyclic or tricyclic, more preferably a 5 yuan/5 yuan or 5 yuan/6 yuan bicyclic fused heterocyclic group.
  • fused heterocyclic groups include:
  • bridged heterocyclic group refers to a polycyclic heterocyclic group of 5 to 14 members, wherein any two rings share two atoms that are not directly connected, which may contain one or more double bonds, but none of the rings has a completely conjugated ⁇ electron system, wherein one or more ring atoms are heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or S(O) m (wherein m is an integer of 0, 1 or 2), and the remaining ring atoms are carbon.
  • it is 6 to 14 members, more preferably 7 to 10 members (7-, 8-, 9- or 10-membered rings).
  • bridged heterocyclic groups include:
  • the heterocyclyl ring may be fused to an aryl, heteroaryl or cycloalkyl ring, wherein the ring attached to the parent structure is a heterocyclyl, non-limiting examples of which include:
  • the heterocyclic group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyloxy, heterocycloalkyloxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio, and oxo.
  • aryl refers to a 6- to 14-membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (i.e., rings that share adjacent pairs of carbon atoms) group having a conjugated ⁇ electron system, preferably 6- to 10-membered (6-, 7-, 8-, 9-, or 10-membered), such as phenyl and naphthyl, preferably phenyl.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl, or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring, non-limiting examples of which include:
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxy, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyloxy, heterocycloalkyloxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio.
  • heteroaryl refers to a heteroaromatic system containing 1 to 4 heteroatoms (1, 2, 3 or 4 heteroatoms), 5 to 14 ring atoms, wherein the heteroatoms are selected from oxygen, sulfur and nitrogen.
  • Heteroaryl is preferably 5 to 10 yuan (5 yuan, 6 yuan, 7 yuan, 8 yuan, 9 yuan or 10 yuan heteroaryl), more preferably 5 yuan or 6 yuan, such as furanyl, thienyl, pyridyl, pyrrolyl, N-alkylpyrrolyl, pyrimidyl, pyrazinyl, imidazolyl, tetrazolyl, etc.
  • the heteroaryl ring can be fused to an aryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a heteroaryl ring, and its non-limiting examples include:
  • the heteroaryl group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyloxy, heterocycloalkyloxy, cycloalkylthio, and heterocycloalkylthio.
  • amino protecting group is to protect the amino group with a group that is easily removed in order to keep the amino group unchanged when other parts of the molecule react.
  • Non-limiting examples include 9-fluorenylmethoxycarbonyl, tert-butyloxycarbonyl, acetyl, benzyl, allyl and p-methoxybenzyl. These groups can be optionally substituted with 1-3 substituents (1, 2 or 3 substituents) selected from halogen, alkoxy or nitro.
  • the amino protecting group is preferably 9-fluorenylmethoxycarbonyl.
  • haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more halogens, wherein alkyl is as defined above.
  • deuterated alkyl refers to an alkyl group substituted with one or more deuterium atoms, wherein alkyl is as defined above.
  • hydroxyalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more hydroxy groups, wherein alkyl is as defined above.
  • hydroxy refers to an -OH group.
  • halogen refers to fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • amino refers to -NH2 .
  • nitro refers to -NO2 .
  • cyano refers to -CN.
  • amido refers to -C(O)N(alkyl) or (cycloalkyl), wherein alkyl and cycloalkyl are as defined above.
  • carboxylate refers to -C(O)O(alkyl) or (cycloalkyl), wherein alkyl and cycloalkyl are as defined above.
  • the present disclosure also includes various deuterated forms of compounds of formula (I). Each available hydrogen atom connected to a carbon atom can be independently replaced by a deuterium atom. Those skilled in the art can synthesize deuterated forms of compounds of formula (I) with reference to relevant literature. Commercially available deuterated starting materials can be used when preparing deuterated forms of compounds of formula (I), or they can be synthesized using deuterated reagents using conventional techniques, and deuterated reagents include but are not limited to deuterated borane, trideuterated borane tetrahydrofuran solution, deuterated lithium aluminum hydride, deuterated ethyl iodide and deuterated methyl iodide, etc.
  • Optional or “optionally” means that the subsequently described event or circumstance may but need not occur, and the description includes instances where the event or circumstance occurs or does not occur.
  • a heterocyclic group optionally substituted with an alkyl group means that the alkyl group may but need not be present, and the description includes instances where the heterocyclic group is substituted with an alkyl group and instances where the heterocyclic group is not substituted with an alkyl group.
  • Substituted means that one or more hydrogen atoms, preferably up to 5, more preferably 1, 2 or 3 hydrogen atoms in a group are replaced independently of each other by a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without undue effort. For example, amino or hydroxy groups with free hydrogens may be unstable when combined with carbon atoms with unsaturated (e.g. olefinic) bonds.
  • composition refers to a mixture containing one or more compounds described herein or their physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, as well as other components such as physiologically/pharmaceutically acceptable carriers and excipients.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration to an organism, facilitate the absorption of the active ingredient, and thus exert biological activity.
  • pharmaceutically acceptable salt or “pharmaceutically usable salt” refers to a salt of the ligand-drug conjugates of the present disclosure. Or salts of the compounds described in the present disclosure, such salts are safe and effective when used in mammals, and have the desired biological activity.
  • the ligand-drug conjugates of the present disclosure contain at least one amino group, and thus can form salts with acids.
  • Non-limiting examples of pharmaceutically acceptable salts include: hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, hydrogen sulfate, citrate, acetate, succinate, ascorbate, oxalate, nitrate, sorbate, hydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, salicylate, hydrogen citrate, tartrate, maleate, fumarate, formate, benzoate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate.
  • carrier is used for the drugs disclosed herein and refers to a system that can change the way the drug enters the human body and its distribution in the body, control the release rate of the drug, and deliver the drug to the targeted organ.
  • the drug carrier release and targeting system can reduce drug degradation and loss, reduce side effects, and improve bioavailability.
  • polymer surfactants that can be used as carriers can self-assemble to form various forms of aggregates due to their unique amphiphilic structure, and preferred examples are micelles, microemulsions, gels, liquid crystals, vesicles, etc. These aggregates have the ability to encapsulate drug molecules and have good permeability to membranes, and can be used as excellent drug carriers.
  • excipient refers to the additives in pharmaceutical preparations other than the main drug, which can also be called auxiliary materials.
  • auxiliary materials for example, the binders, fillers, disintegrants, and lubricants in tablets; the matrix part in semi-solid preparations such as ointments and creams; the preservatives, antioxidants, flavoring agents, aromatics, cosolvents, emulsifiers, solubilizers, osmotic pressure regulators, colorants, etc. in liquid preparations can all be called excipients.
  • the pharmaceutical composition containing the active ingredient may be in a form suitable for oral administration, such as tablets, troches, lozenges, aqueous or oil suspensions, dispersible powders or granules, emulsions, hard or soft capsules, or syrups or elixirs.
  • Oral compositions may be prepared according to any method known in the art for preparing pharmaceutical compositions, and such compositions may contain one or more ingredients selected from the following: sweeteners, flavoring agents, colorants and preservatives to provide pleasing and palatable pharmaceutical preparations. Tablets contain the active ingredient and non-toxic pharmaceutically acceptable excipients suitable for preparing tablets for mixing.
  • excipients may be inert excipients such as calcium carbonate, sodium carbonate, lactose, calcium phosphate or sodium phosphate; granulating agents and disintegrants such as microcrystalline cellulose, crosslinked sodium carboxymethyl cellulose, corn starch or alginic acid; binders such as starch, gelatin, polyvinyl pyrrolidone or gum arabic; and lubricants such as magnesium stearate, stearic acid or talc.
  • These tablets may be uncoated or may be coated by known techniques which mask the taste of the drug or delay disintegration and absorption in the gastrointestinal tract, thereby providing a sustained release action over a longer period of time.
  • water soluble taste masking materials such as hydroxypropylmethylcellulose or hydroxypropylcellulose, or time extending materials such as ethylcellulose, cellulose acetate butyrate may be used.
  • Oral preparations may also be provided in hard gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with an inert solid diluent such as calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin, or in soft gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with a water-soluble carrier such as polyethylene glycol or an oily vehicle such as peanut oil, liquid paraffin or olive oil.
  • an inert solid diluent such as calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin
  • a water-soluble carrier such as polyethylene glycol or an oily vehicle such as peanut oil, liquid paraffin or olive oil.
  • Aqueous suspensions contain the active substance and excipients suitable for preparing aqueous suspensions for mixing.
  • excipients are suspending agents, such as sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium alginate, polyvinylpyrrolidone and gum arabic; dispersing agents or wetting agents, which may be naturally occurring phosphatides such as lecithin, or condensation products of alkylene oxides with fatty acids, such as polyoxyethylene stearate, or condensation products of ethylene oxide with long chain fatty alcohols, such as heptadecaethyleneoxy cetanol, Or the condensation product of ethylene oxide with partial ester derived from fatty acid and hexitol, for example polyethylene oxide sorbitol monooleate, or the condensation product of ethylene oxide with partial ester derived from fatty acid and hexitol anhydride, for example polyethylene oxide dehydrated sorbitan monooleate.
  • suspending agents such as sodium carboxymethylcellulose,
  • the aqueous suspension may also contain one or more preservatives such as ethylparaben or n-propylparaben, one or more coloring agents, one or more flavoring agents and one or more sweeteners, for example sucrose, saccharin or aspartame.
  • Oil suspensions can be prepared by suspending the active ingredient in a vegetable oil such as peanut oil, olive oil, sesame oil or coconut oil, or a mineral oil such as liquid paraffin.
  • the oil suspension may contain a thickener such as beeswax, hard paraffin or cetyl alcohol.
  • the above-mentioned sweeteners and flavoring agents may be added to provide a palatable preparation.
  • These compositions may be preserved by adding an antioxidant such as butylated hydroxyanisole or alpha-tocopherol.
  • Dispersible powders and granules suitable for preparing aqueous suspensions can provide the active ingredient and a dispersant or wetting agent, a suspending agent or one or more preservatives for mixing by adding water. Suitable dispersants or wetting agents and suspending agents are as described above. Other excipients such as sweeteners, flavoring agents and coloring agents can also be added. These compositions can be preserved by adding antioxidants such as ascorbic acid.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be in the form of an oil-in-water emulsion.
  • the oil phase can be a vegetable oil such as olive oil or peanut oil, or a mineral oil such as liquid paraffin or a mixture thereof.
  • Suitable emulsifiers can be naturally occurring phospholipids, such as soybean lecithin, and esters or partial esters derived from fatty acids and hexitol anhydrides, such as sorbitan monooleate, and condensation products of the partial esters and ethylene oxide, such as polyethylene oxide sorbitol monooleate.
  • Emulsions can also contain sweeteners, flavoring agents, preservatives and antioxidants.
  • Syrups and elixirs prepared with sweeteners such as glycerol, propylene glycol, sorbitol or sucrose can be used.
  • Such preparations can also contain a demulcent, a preservative, a coloring agent and an antioxidant.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of a sterile injectable aqueous solution.
  • Acceptable vehicles and solvents that may be used are water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution.
  • the sterile injectable preparation may be a sterile injectable oil-in-water microemulsion in which the active ingredient is dissolved in an oil phase.
  • the active ingredient is dissolved in a mixture of soybean oil and lecithin.
  • the oil solution is then added to a mixture of water and glycerol and processed to form a microemulsion.
  • the injection or microemulsion may be injected into the patient's bloodstream by local mass injection.
  • the solution and microemulsion may be preferably administered in a manner that maintains a constant circulating concentration of the compound of the present invention. To maintain such a constant concentration, a continuous intravenous drug delivery device may be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be in the form of a sterile injection water or oil suspension for intramuscular and subcutaneous administration.
  • the suspension can be prepared according to known techniques with the above-mentioned suitable dispersants or wetting agents and suspending agents.
  • the sterile injection preparation can also be a sterile injection solution or suspension prepared in a non-toxic parenterally acceptable diluent or solvent, such as a solution prepared in 1,3-butanediol.
  • sterile fixed oils can be conveniently used as solvents or suspension media. For this purpose, any blended fixed oils including synthetic mono- or diglycerides can be used.
  • fatty acids such as oleic acid can also be used to prepare injections.
  • the dosage of a drug depends on many factors, including but not limited to the following factors: the activity of the specific compound used, the patient's age, the patient's weight, the patient's health condition, the patient's behavior, the patient's diet, the administration time, the administration method, the excretion rate, the combination of drugs, etc.
  • the optimal treatment method such as the treatment mode, the daily dosage of the general compound or the type of pharmaceutically acceptable salt This can be verified according to traditional treatment options.
  • FIG. 1 is a tumor growth curve of the NCI-N87 gastric cancer tumor-bearing mouse model in Test Example 3.
  • FIG. 2 is a tumor growth curve of the human breast cancer JIMT-1 tumor mouse model in Test Example 4.
  • FIG. 3A is a growth inhibition curve of Her2-negative 468-luc cells in Test Example 6.
  • FIG. 3B is a growth inhibition curve of Her2-positive N87 cells in Test Example 6.
  • FIG. 3C is a growth inhibition curve of co-incubation of N87 cells and 468-luc cells in Test Example 6.
  • Figures 4 and 5 are the body weight change curves of rats in Test Example 7 after a single administration of 200 mg/kg.
  • 6A-6B are tumor growth curves of the NCI-N87 gastric cancer tumor-bearing mouse model in Test Example 5.
  • the compounds of the present invention are prepared using convenient starting materials and common preparation steps.
  • the present invention provides typical or preferred reaction conditions, such as reaction temperature, time, solvent, pressure, and molar ratio of reactants. However, unless otherwise specified, other reaction conditions can also be adopted.
  • the optimized conditions may change with the use of specific reactants or solvents, but in general, the reaction optimized steps and conditions can be determined.
  • protecting groups may be used in the present invention to protect certain functional groups from unwanted reactions.
  • protecting groups suitable for various functional groups and their protection or deprotection conditions are widely known to those skilled in the art. For example, T.W.Greene and G.M.Wuts' Protecting Groups in Organic Preparations (3rd edition, Wiley, New York, 1999 and references therein) describes in detail the protection or deprotection of a large number of protecting groups.
  • the separation and purification of compounds and intermediates can be carried out by appropriate methods and steps according to specific needs, such as filtration, extraction, distillation, crystallization, column chromatography, preparative thin layer chromatography, preparative high performance liquid chromatography or a combination of the above methods.
  • the specific use method can refer to the examples described in the present invention. Of course, other similar separation and purification means can also be adopted. Conventional methods (including physical constants and spectral data) can be used to characterize them.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • ADC analysis HIC was tested using an Agilent 1200 HPLC with a Thermo MAbPac HIC-Bulty (5 ⁇ m, 4.6 ⁇ 100 mm) column, and a mobile phase A of 1.5 M ammonium sulfate and 25 mM phosphate mixed solution (pH 7.0)-isopropanol (95:5), and a mobile phase B of 25 mM phosphate solution (pH 7.0)-isopropanol (80:20) for gradient elution at a flow rate of 1.0 ml/min.
  • ADC analysis SEC was performed using an Agilent 1200 HPLC with a Waters BioResolve SEC mAb (2.5 ⁇ m, 7.8 ⁇ 300 mm) column and PBS as the mobile phase for isocratic elution at a flow rate of 0.5 ml/min.
  • the ADC analysis RP was tested by HIC using an Agilent 1200 HPLC with a Thermo MAbPac RP (4 ⁇ m, 3 ⁇ 100 mm) column.
  • the mobile phase A was 0.1% trifluoroacetic acid solution and the mobile phase B was acetonitrile-isopropanol-trifluoroacetic acid (80:20:0.1) for gradient elution at a flow rate of 1.0 ml/min.
  • the preparative HPLC method used an LC6000 HPLC (manufacturer: Chuangxin Tongheng).
  • the chromatographic column was Daisogel C18 10 ⁇ m 100A (30 mm ⁇ 250 mm), and the mobile phase was acetonitrile/water; Oriendo, model BRIX-2860.
  • the chromatographic column was Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50 mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • the mobile phase was water (0.225% trifluoroacetic acid)-acetonitrile.
  • the thin layer chromatography silica gel plate used was Qingdao Ocean Chemical GF254 silica gel plate.
  • the silica gel plate used in thin layer chromatography (TLC) had a specification of 0.20 mm to 0.25 mm, and the specification used in preparing the thin layer chromatography separation and purification product was 0.5 mm.
  • the known starting materials of the present invention can be synthesized by methods known in the art, or can be purchased from online shopping malls, Beijing Coupling, Sigma, Bailingwei, Yishiming, Shanghai Shuya, Shanghai Inokai, Anaiji Chemical, Shanghai Bid, Haoyuan Pharmaceutical, Yilai Biotechnology, Duchuang Pharmaceutical and other companies.
  • Argon atmosphere or nitrogen atmosphere means that the reaction bottle is connected to an argon or nitrogen balloon with a capacity of about 1L.
  • Reaction solvent organic solvent or inert solvent are each expressed as the solvent used that does not participate in the reaction under the described reaction conditions, including benzene, toluene, acetonitrile, tetrahydrofuran (THF), dimethylformamide (DMF), chloroform, dichloromethane, ether, methanol, nitrogen-methylpyrrolidone (NMP), pyridine, etc.
  • the solution refers to an aqueous solution.
  • the chemical reactions described in the present invention are generally carried out under normal pressure.
  • the reaction temperature is between -78°C and 200°C.
  • the reaction time and conditions are, for example, between -78°C and 200°C at one atmosphere, and are completed within about 1 to 24 hours. If the reaction is left overnight, the reaction time is generally 16 hours.
  • the reaction temperature is room temperature, which is 20°C to 30°C.
  • reaction progress in the examples was monitored by thin layer chromatography (TLC), and the developing solvent systems used in the reaction were: A: dichloromethane and methanol system, B: petroleum ether and ethyl acetate system, C: acetone, and the volume ratio of the solvents was adjusted according to the polarity of the compounds.
  • TLC thin layer chromatography
  • the eluent system of column chromatography and the developing solvent system of thin layer chromatography used for purifying compounds include: A: dichloromethane and methanol system, B: petroleum ether and ethyl acetate system.
  • A dichloromethane and methanol system
  • B petroleum ether and ethyl acetate system.
  • the volume ratio of the solvent is adjusted according to the polarity of the compound, and a small amount of alkaline or acidic reagents such as triethylamine and trifluoroacetic acid can also be added for adjustment.
  • NaNO 2 (270 mg, 3.91 mmol) was placed in a 25 mL three-necked flask, 6 mL of water was added to dissolve, and then 1 mL of glacial acetic acid was added, and then an acetic acid aqueous solution (3 mL of glacial acetic acid, 3 mL of water) of isotecan mesylate (Haoyuan Pharmaceutical, 100 mg, 0.188 mmol) was slowly added to the above NaNO 2 solution, and the reaction was carried out at room temperature for 1.5 h.
  • reaction solution was filtered to collect the solid, and the solid was dried to obtain a reddish brown solid, which was separated and purified by high performance liquid chromatography (Oriendo, BRIX-2860; chromatographic column: Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: water (0.5% formic acid)-acetonitrile, eluted from 40% to 80%), and freeze-dried to obtain 12 mg of slightly red powder, with a yield of 14%.
  • Step 1 Preparation of (9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl(4-nitrophenyl)carbonate (PY-1D)
  • Step 2 Preparation of (9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxy-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl(2-hydroxyethyl)carbamate (PY-1AB)
  • Step 1 Preparation of (E)-N-(3-fluoro-7-(hydroxymethylene)-4-methyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-22)
  • N-(3-fluoro-4-methyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (1.0 g, 4.25 mmol, 1.0 eq) was dissolved in THF (20 mL), cooled to 0°C in ice water, t-BuOK (12.75 mmol, 1 M, 12.75 mL, 3 eq) was slowly added, and the system temperature was maintained at 0°C. After stirring for 30 minutes, ethyl formate (787 mg, 10.63 mmol, 2.5 eq) was added to the reaction system and stirred for 2 hours.
  • Step 2 Preparation of N-(3-fluoro-7-(hydroxymethyl)-4-methyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-23)
  • Step 3 Preparation of 8-amino-6-fluoro-2-(hydroxymethyl)-5-methyl-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-24)
  • Step 4 Preparation of (9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-4-methyl-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-2) and (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-1-methylene-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-2b)
  • Step 1 Preparation of (1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1-isocyanate-4-methyl-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (4Car2)
  • Step 2 Preparation of 2-hydroxyethyl ((1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)carbamate (PY-4Car)
  • Step 1 Preparation of 4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)butyl(4-nitrophenyl)carbonate (PY-4car2-b)
  • Step 2 Preparation of 4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)butyl((1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)carbamate (PY-4car2-d)
  • Triethylamine (20.92 ⁇ L, 150.48 ⁇ mol, 4 eq), compound PY-4car2-b (18.1 mg, 48.92 ⁇ mol, 1.3 eq) and 1-hydroxybenzotriazole (2.4 mg, 18.81 ⁇ mol, 0.5 eq) were added to a solution of isotecan (20 mg, 37.62 ⁇ mol, 1 eq, mesylate, Haoyuan Pharmaceutical) and N,N-diisopropylethylamine (6.22 ⁇ L, 37.62 ⁇ mol, 1 eq) in dichloromethane (6 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 48 hours, concentrated, and the residue was purified by high performance liquid chromatography (preparative chromatography manufacturer Orange Oriendo, model BRIX-2860.
  • Step 3 Preparation of 4-hydroxybutyl ((1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)carbamate (PY-4Car2)
  • Step 1 Preparation of compound 3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl(4-nitrophenyl)carbonate
  • the reaction solution was prepared by high performance liquid chromatography (preparative chromatography manufacturer Orange Oriendo, model BRIX-2860.
  • the chromatographic column was Welch Xtimate C18 150 ⁇ 21.2mm ⁇ 5 ⁇ m.
  • Mobile phase water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, water elution ratio from 50% to 80%) was used for purification. Freeze-drying gave a light yellow solid compound PY-4Car 3C-a (45 mg, Yield: 91.75%).
  • Triethylamine trihydrofluoride (499.70 mg, 98%, 505.26 ⁇ L, 3.04 mmol, 50 eq) was added to a THF (2 mL) solution of compound PY-4Car3C-a (45 mg, 60.75 ⁇ mol, 1 eq) at room temperature. After addition, the reaction solution was stirred at 40°C for 10 hours. LCMS showed that the reaction was complete, and the reaction solution was purified by high performance liquid chromatography (preparative chromatography manufacturer Shimadzu, model LC-20AP. The chromatographic column was Welch Xtimate C18 250 ⁇ 30 mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • the mobile phase was water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, and the elution ratio of water was from 30% to 60%), and the yellow solid compound PY-4Car3C (27.40 mg, Yield: 83.90%, Purity: 98.19%) was obtained by freeze drying.
  • Acetic anhydride (63.87 mg, 625.65 ⁇ mol) was added dropwise to a solution of acetic acid (31.31 mg, 521.38 ⁇ mol) in anhydrous tetrahydrofuran (1 mL), and the reaction system was reacted at 50°C for 1 hour.
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by HPLC (Oriendo, BRIX-2860; chromatographic column: Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: water (0.225% trifluoroacetic acid)-acetonitrile, eluted from 40% to 80%) to obtain (3.25 mg, 15%) of white solid compound PY-6A2.
  • Step 4 Preparation of (Z)-4-(5-acetamido-3-fluoro-2-methoxyphenyl)but-3-enoic acid ethyl ester (PY-85)
  • Step 5 Preparation of ethyl 4-(5-acetylamino-3-fluoro-2-methoxyphenyl)butyrate (PY-86)
  • Lithium hydroxide (3 equiv., 1.93 g) was added to a mixed solvent of methanol ⁇ tetrahydrofuran ⁇ water (120 ml) (mixed in a ratio of 1:1:1) of compound 4-(5-acetylamino-3-fluoro-2-methoxyphenyl)butyric acid ethyl ester (PY-86) (8 g, 26.91 mmol) and reacted at room temperature overnight. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and impurities were extracted with ethyl acetate (2 ⁇ 80 ml), and the organic phase was removed.
  • Step 7 Preparation of N-(3-fluoro-4-methoxy-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-88)
  • reaction mixture was poured into ice water, washed with water, extracted with ethyl acetate (3 ⁇ 30 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by high performance liquid chromatography (Oriendo, BRIX-2860; chromatographic column: Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: water (0.225% trifluoroacetic acid)-acetonitrile, eluted from 45% to 85%), and lyophilized to obtain compound PY-88 (110 mg, yield 11%).
  • Step 8 Preparation of N-(3-fluoro-4-hydroxy-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-89)
  • Step 9 Preparation of 4-acetylamino-2-fluoro-5-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl trifluoromethanesulfonate (PY-810)
  • Step 10 Preparation of N-(4-(3-(benzyloxy)prop-1-yn-1-yl)-3-fluoro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-811)
  • Step 11 Preparation of N-(3-fluoro-4-(3-hydroxypropyl)-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-812)
  • Step 12 Preparation of 8-amino-6-fluoro-5-(3-hydroxypropyl)-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-813)
  • Step 13 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-(3-hydroxypropyl)-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-8)
  • N-(3-bromo-5-fluorophenyl)acetamide (PY-8a) 54 g, 0.2327 mol was dissolved in N,N-dimethylformamide (700 mL), and di(tri-tert-butylphosphine)palladium (5.97 g, 11.64 mmol), tri(o-methylphenyl)phosphine (7.07 g, 23.27 mmol), N-methyldicyclohexylamine (100 g, 0.5119 mol) and tert-butyl 1-butene-4-ate (66.1 g, 0.4654 mol) were added in sequence. After nitrogen replacement three times, the reaction was carried out at 100°C for 16 hours.
  • Step 4 Preparation of tert-butyl 4-(5-acetylamino-2-bromo-3-fluorophenyl)butyrate (PY-8d)
  • tert-Butyl 4-(3-acetylamino-5-fluorophenyl)butyrate (PY-8c) (55 g, 0.1864 mol) was dissolved in N,N-dimethylformamide (600 mL).
  • NBS (36.5 g, 0.2051 mol) was added in batches under an ice-water bath. After the addition was completed, the mixture was stirred at room temperature for 1 h, and then ethyl acetate (300 mL) and water (400 mL) were added for extraction. The aqueous phase was extracted once with ethyl acetate (100 mL).
  • Step 7 Preparation of N-(4-(3-(benzyloxy)prop-1-yn-1-yl)-3-fluoro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-8h)
  • N-(4-bromo-3-fluoro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-8g) (1.8 g, 6.0 mmol) was dissolved in anhydrous DMF (50 mL), and (prop-2-en-1-oxy)methyl)benzene (4.34 mL, 29.99 mmol), cuprous iodide (228.4 mg, 1.2 mmol), bistriphenylphosphine palladium dichloride (841.9 mg, 1.2 mmol) and triethylamine (3.33 mL, 23.99 mmol) were added in sequence. The resulting mixture was replaced with nitrogen for three times.
  • Step 8 Preparation of N-(3-fluoro-8-oxo-4-propyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-8i)
  • Step 9 Preparation of 8-amino-6-fluoro-5-propyl-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-8j)
  • Step 10 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-propyl-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-8B)
  • the mobile phase is water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, and the elution ratio of water is from 12% to 42%), and lyophilized to obtain a crude white solid compound PY-9.
  • the white solid compound was further separated and purified by thin layer chromatography to obtain 3.03 mg of compound PY-9.
  • Step 1 Preparation of 8-amino-5-bromo-6-fluoro-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-10b)
  • Step 2 (S)-4-Bromo-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyran Preparation of 1,2-b-quinoline-10,13-dione (PY-10d)
  • Step 3 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-(hydroxymethyl)-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-10)
  • Step 1 Preparation of N-(3-fluoro-4-formyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-10-1)
  • H 2 SO 4 (4.34 g, 44.21 mmol, 5.2 eq) was added to a solution of N-(3-fluoro- 4 -methyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (2 g, 8.5 mmol, 1.0 eq) and MnO 2 (11.09 g, 127.52 mmol, 15 eq) in chloroform (100 mL), and the reaction was gradually restored to room temperature and continued for 16 hours.
  • Step 2 Preparation of 4-acetylamino-2-fluoro-5-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalene-1-carboxylic acid (PY-10-2)
  • Step 3 Preparation of 4-amino-2-fluoro-5-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalene-1-carboxylic acid (PY-10-3)
  • Step 4 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-4-carboxylic acid (PY-10A) and (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-10B)
  • Step 1 Preparation of (S)-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl(4-nitrophenyl)carbonate (PY-10Cara)
  • Step 2 Preparation of (S)-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[d]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl(2-hydroxyethyl)carbamate (PY-10Car)
  • Step 1 Preparation of 8-amino-6-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-111)
  • Step 2 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methoxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-11)
  • Step 1 Preparation of (E)-N-(3-fluoro-7-(hydroxyimino)-4-methoxy-8-oxy-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-121)
  • Step 2 Preparation of N,N'-(3-fluoro-4-methoxy-8-oxy-5,6,7,8-tetrahydronaphthalene-1,7-diacyl) diethylamide (PY-122)
  • Step 3 Preparation of N-(8-amino-6-fluoro-5-methoxy-1-oxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl)acetamide (PY-123)
  • Step 4 Preparation of N-(9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methoxy-10,13-dioxy-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)acetamide (PY-124)
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by high performance liquid chromatography (Oriendo, BRIX-2860; chromatographic column: Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: water (0.225% trifluoroacetic acid)-acetonitrile, eluted from 45% to 85%) to obtain 55 mg of a yellow solid mixture PY-124.
  • Step 5 Preparation of (1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methoxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione and (1R,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methoxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-12A and PY-12B)
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by high performance liquid chromatography (Oriendo, BRIX-2860; column: Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, eluted from 45% to 85%) and lyophilized to obtain compound PY-12A (4.55 mg) and compound PY-12B (6.24 mg), respectively.
  • Step 1 Preparation of N-(3-fluoro-4-hydroxy-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-131)
  • Step 3 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-4,9-dihydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-13)
  • Step 1 Preparation of 1-(2,4-difluoro-3-methoxyphenyl)propan-1-one (PY-14-c)
  • Step 4 Preparation of 1-(6-amino-2,4-difluoro-3-hydroxyphenyl)propan-1-one (PY-14-f)
  • Step 5 Preparation of (S)-4,11-diethyl-8,10-difluoro-4,9-dihydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-14)
  • the reactants were purified by HPLC (preparative chromatography manufacturer SHIMADZU, model LC-20AP.
  • HPLC preparative chromatography manufacturer SHIMADZU, model LC-20AP.
  • the chromatographic column was YMC-Triart Prep C18 250 ⁇ 30mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • Mobile phase water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, the elution ratio of water was from 12% to 42%) and lyophilized to obtain a yellow solid (35.55 mg, 55.65%).
  • Step 1 Preparation of N-(4-((Benzylamino)methyl)-3-fluoro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-16d)
  • Step 2 Preparation of 8-amino-5-((benzylamino)methyl)-6-fluoro-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-16e)
  • Step 3 Preparation of (S)-4-((Benzylamino)methyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-16g)
  • Step 4 Preparation of (S)-4-(aminomethyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-16)
  • Step 1 Preparation of 2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl(4-nitrophenyl)carboxylate (PY-16Carb)
  • tert-butyldimethylhydroxyethoxysilane (2.0 g, 11.34 mmol, 1.0 eq) was added to bis(4-nitrobenzene) carbonate (NPC) (5.18 g, 17.01 mmol, 1.5 eq) and N,N-diisopropylethylamine (DIPEA,
  • NPC bis(4-nitrobenzene) carbonate
  • DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • the reaction mixture was concentrated under reduced pressure and purified by silica gel column chromatography with an eluent system of ethyl acetate/petroleum ether (0-10%) to obtain a yellow oily compound PY-16Carb (2.70 g, 7.91 mmol, yield: 70%).
  • Step 2 Preparation of 2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl (S)-((9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl)carbamate (PY-16Carc)
  • compound 2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethyl(4-nitrophenyl)carboxylate 35.75 mg, 0.105 mmol, 1.2 eq
  • compound (S)-4-(aminomethyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (38.0 mg, 0.087 mmol, 1.0 eq) and N,N-diisopropylethylamine (33.84 mg, 0.262 mmol, 3.0 eq) were added to N,N-dimethylformamide (2 mL) solution and stirred at 25° C. for 1 hour. The reaction solution was directly used in the next step.
  • Step 3 Preparation of 2-hydroxyethyl (S)-((9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl)carbamate (PY-16Car)
  • Step 1 Preparation of (S)-tert-butyl (2-((9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[d]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)oxy)ethyl)carbamate (PY-17-a)
  • Step 2 Preparation of (S)-4-(2-aminoethoxy)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[d]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-17): To a solution of compound PY-17-a (7 mg, 12.38 ⁇ mol, 1.0 eq) in 5 mL DCM solvent was slowly added 0.5 mL TFA under ice-water bath conditions. The mixture was naturally heated to 25 °C and stirred for 16 hours under ice-water bath conditions.
  • the reactants were purified by HPLC (preparative chromatography manufacturer SHIMADZU, model LC-20AP.
  • HPLC preparative chromatography manufacturer SHIMADZU, model LC-20AP.
  • the chromatographic column was YMC-Triart Prep C18 250 ⁇ 30mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • Mobile phase water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, the elution ratio of water was from 12% to 42%) and lyophilized to obtain a white solid compound PY-17 (1.97 mg, yield: 34%).
  • Step 1 Preparation of N-(4-(2-(benzyloxy)ethyl)-3-fluoro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-18c)
  • Step 2 Preparation of N-(3-fluoro-4-(2-hydroxyethyl)-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-18d)
  • Step 3 Preparation of 8-amino-6-fluoro-5-(2-hydroxyethyl)-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-one (PY-18e)
  • Step 4 Preparation of (S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-(2-hydroxyethyl)-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-18)
  • the chromatographic column was Synergi Max-RP 280 ⁇ 30mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • the mobile phase was water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, and the elution ratio of water was from 12% to 42%).
  • Step 1 tert-Butyl (S,E)-(3-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)allyl)carbamate
  • Step 2 Preparation of (S)-tert-butyl (3-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)propyl)carbamate (PY-19d)
  • Step 3 Preparation of (S)-4-(3-aminopropyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-19)
  • reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (eluent: dichloromethane/methanol 20:1 to 8:1) to obtain a crude product, and then by high performance liquid preparative chromatography (preparative chromatography manufacturer SHIMADZU, model LC-20AP. Chromatographic column Welch Xtimate C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • the mobile phase was water (0.225% FA)-ACN, the elution ratio of water was from 12% to 42%), and lyophilized to obtain 2.53 mg of compound (S)-4-(3-aminopropyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-19) (yield: 21%).
  • Step 1 Preparation of (S)-(2-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)ethyl)carbamic acid benzyl ester (PY-20a)
  • the residual liquid was purified by HPLC (preparative chromatography manufacturer: Oriendo, model: BRIX-2860 (R1, 4, 5, 6).
  • the chromatographic column was Phenomenex Luna C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • Mobile phase water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, the elution ratio of water was from 30% to 60%) to obtain a white solid product PY-20a (10 mg, yield: 13.86%).
  • Step 2 Preparation of (S)-4-(2-aminoethyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-20)
  • Step 1 Preparation of 1-(2-amino-4-fluoro-5-methoxyphenyl)butan-1-one (PY-21-Ab)
  • Step 2 Preparation of (S)-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-9-methoxy-11-propyl-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-21-Ad)
  • Step 3 Preparation of (S)-4-ethyl-8-fluoro-4,9-dihydroxy-11-propyl-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-21-A)
  • Step 1 Preparation of (S)-tert-butyl (4-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)but-3-en-1-yl)carbamate (PY-24c)
  • Step 2 Preparation of (S)-tert-butyl (4-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)butyl)carbamate (PY-24d)
  • Step 3 Preparation of (S)-4-(4-aminobutyl)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-24)
  • the chromatographic column was Welch Xtimate C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 10 ⁇ m.
  • the mobile phase was water (0.225% FA)-ACN, and the elution ratio of water was from 12% to 42%) and lyophilized to obtain 0.35 mg of compound PY-24 (yield: 5.4%).
  • Step 1 Preparation of methyl 2-(8-acetamido-6-fluoro-5-methyl-1-oxo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl)acetate (PY-251)
  • N-(3-fluoro-4-methyl-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (2g, 8.5mmol) in a 100mL three-necked flask, add 30mL THF to dissolve under nitrogen atmosphere. Cool to -78°C, slowly add LDA (10.6mL, 2M in THF) to the above reaction solution, and react at -78°C for 1h. Then add methyl bromoacetate (1.3g, 8.5mmol) to the reaction solution, warm to room temperature and react for 16h.
  • reaction solution was added to 150 mL of water, extracted with ethyl acetate (100 mL ⁇ 3), the organic phase was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • the residue was purified by silica gel column chromatography (80% PE/20% EA) to obtain 800 mg of slightly yellow solid compound 2-(8-acetamido-6-fluoro-5-methyl-1-oxo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl)acetate (PY-251), yield: 30.6%.
  • Step 2 Preparation of 2-(8-amino-6-fluoro-5-methyl-1-oxo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl)acetic acid (PY-252)
  • Step 3 Preparation of 2-((9S)-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxy-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4:6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl)acetic acid (PY-25)
  • N,N-diisopropylethylamine 26.71 mg, 206.68 ⁇ mol, 3 eq
  • HATU 31.43 mg, 82.67 ⁇ mol, 1.2 eq
  • 2-hydroxyacetic acid 6.29 mg, 82.67 ⁇ mol, 1.2 eq
  • the reaction solution was purified by high performance liquid preparative chromatography (preparative chromatography manufacturer ISCO, model ISCO-R1.
  • Chromatographic column was YMC-Triart Prep C18 250 ⁇ 50 mm ⁇ 7 ⁇ m.
  • Step 1 Preparation of (S)-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl(4-nitrophenyl)carbonate (PY-27a)
  • Step 2 Preparation of (S)-(9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl(2-hydroxyethyl)carbamate (PY-27)
  • the mobile phase was water (0.225% formic acid)-acetonitrile, and the elution ratio of water was from 12% to 42%) and lyophilized to obtain a white solid product PY-27 (4.14 mg, 7.56umol, two-step yield: 42%).
  • Step 4 Preparation of (S)-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-9-methoxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-29d)
  • Step 5 Preparation of (S)-11-(4-(benzyloxy)butyl)-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-9-methoxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione) (PY-29f)
  • reaction solution was poured into ice water, and the organic phase was extracted with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3), washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product.
  • the crude product was purified by silica gel column chromatography (eluent: dichloromethane/methanol 20:1 to 4:1) to obtain 230 mg of compound PY-29f (64% purity).
  • Step 6 Preparation of (S)-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-11-(4-hydroxybutyl)-9-methoxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-29B)
  • Step 7 Preparation of (S)-4-ethyl-8,10-difluoro-4,9-dihydroxy-11-(4-hydroxybutyl)-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-29)
  • Step 1 Preparation of (S)-4-ethyl-8,10-difluoro-4,9-dihydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (PY-29A)
  • N-(3-bromo-5-chlorophenyl)acetamide (5.00 g, 20.1 mmol, 1.0 eq) was dissolved in N,N-dimethylformamide (30 mL), and 1-butene-4-acid tert-butyl ester (4.29 g, 30.2 mmol, 4.89 mL, 1.5 eq), tri(o-methylphenyl)phosphine (306.2 mg, 1.01 mmol, 0.05 eq), triethylamine (4.07 g, 40.2 mmol, 5.60 mL, 2.0 eq), bis(tri-tert-butylphosphine)palladium (103 mg, 201.2 ⁇ mol, 0.01 eq) and N-methyldicyclohexylamine (7.86 g, 40.2 mmol, 8.54 mL, 2.0 eq) were added.
  • the mixture was reacted at 100 ° C for 4 hours under a nitrogen atmosphere.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, water (50.0 mL) was added, and then extracted twice with ethyl acetate (25.0 mL).
  • the organic phase was washed three times with saturated brine (30 mL), then dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and the filtrate was concentrated to obtain a crude product.
  • Step 4 Preparation of tert-butyl 4-(5-acetylamino-2-bromo-3-chlorophenyl)butyrate (PY-36e)
  • Step 6 Preparation of N-(4-bromo-3-chloro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (PY-36g)
  • Step 7 Preparation of 8-amino-5-bromo-6-chloro-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-1-one (PY-36h)
  • N-(4-bromo-3-chloro-8-oxo-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)acetamide (900 mg, 2.84 mmol, 1.0 eq) was dissolved in ethanol (15 mL), hydrochloric acid solution (5 mL, 6 mol/mL) was added at room temperature, and stirred at 80°C for 3 hours.
  • reaction solution was cooled to room temperature and concentrated, and the concentrate was adjusted to pH 8-9 with saturated sodium bicarbonate solution, then extracted twice with ethyl acetate (10 mL), and the organic phase was washed once with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a crude product 8-amino-5-bromo-6-chloro-3,4-dihydronaphthalen-1(2H)-1-one (700 mg, 2.55 mmol, yield 89.8%) as a yellow solid.
  • Step 8 Preparation of (S)-4-bromo-5-chloro-9-ethyl-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10h,13h-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-36i)
  • Step 9 Preparation of tert-butyl (S)-(5-chloro-9-ethyl-9-hydroxy-10,13-dioxo-2,3,9,10,13,15-hexahydro-1h,12h-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-4-yl)methyl)carbamate (PY-36j)
  • Step 10 Preparation of (S)-4-(aminomethyl)-5-chloro-9-ethyl-9-hydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10h,13h-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-36)
  • the reaction solution was cooled to room temperature, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure, diluted with water, and then extracted with ethyl acetate (10 mL) twice.
  • the organic phase was washed with saturated brine (10 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a crude product.
  • the crude product was purified by reverse phase chromatography (column: Welch Xtimate C18 150 ⁇ 30mm ⁇ 5 ⁇ m; mobile phase [water (FA)-ACN]; gradient: 6%-46% B, 25min) to obtain compound PY-37 (2.08mg, 0.005mmol, yield 1.25%) as a white solid.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, filtered, the filtrate was concentrated under reduced pressure, diluted with water, and then extracted with ethyl acetate (10mL) twice.
  • the organic phase was washed with saturated brine (10mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a crude product.
  • the crude product was purified by reverse phase chromatography (column: Welch Xtimate C18 150 ⁇ 30mm ⁇ 5 ⁇ m; mobile phase: [water (FA)-ACN]; gradient: 6%-46% B, 25min) to obtain compound PY-37A (2.23mg, 0.005mmol, yield 1.25%) as a white solid.
  • Step 1 Preparation of (S)-5-chloro-9-ethyl-9-hydroxy-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10h,13h-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-38a)
  • Step 2 Preparation of (S)-5-chloro-9-ethyl-4,9-dihydroxy-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10h,13h-benzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13-dione (PY-38)
  • reaction solution was quenched with saturated ammonium chloride solution (0.2 mL), and then purified by reverse phase chromatography (column: Xtimate C18 150 ⁇ 40 mm ⁇ 10 ⁇ m; mobile phase: [water (FA)-ACN]; gradient: 10%-50% B, 36 min) to obtain compound PY-38 (0.82 mg, 0.002 mmol, yield 1.53%) as a white solid.
  • Step 1 Preparation of compounds PY-41A-a and PY-41A-b
  • the reaction solution was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by high performance liquid chromatography (preparative chromatography manufacturer Shimadzu, model LC-20AP.
  • the chromatographic column was YMC-Triart Prep C18 250 ⁇ 50mm ⁇ 7 ⁇ m.
  • Mobile phase water (0.225% HCOOH)-acetonitrile, the elution ratio of water was from 21% to 51%) to obtain two brown isomer solids, namely PY-41-a (54 mg, yield: 22.41%) and PY-41-b (54 mg, Yield: 22.41%).

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Abstract

喜树碱衍生物及其偶联物以及其制备方法和医药用途。喜树碱类化合物的衍生物及包含其的配体药物偶联物，含有该偶联物的药物组合物，以及该偶联物在治疗癌症中的用途。

Description

喜树碱衍生物及其偶联物以及其制备方法和医药用途 技术领域
本发明涉及新型的喜树碱衍生物及其偶联物，以及其制备方法，含有其的药物组合物，以及其用于制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术
抗体-药物偶联物(ADC)是一类相对较新的抗癌药物，旨在将单克隆抗体的选择性与细胞毒性剂的细胞杀伤特性相结合。ADC作为一种新的治疗疗法引起了极大的兴趣，并且继续在不断发展。ADC的设计通过连接子将单克隆抗体或者抗体片段与具有生物活性的细胞毒性剂相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和细胞毒性物质的高效性，同时又避免了抗体本身疗效偏低和细胞毒性剂的毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体－药物偶联物能更精准地杀伤肿瘤细胞并降低对正常细胞的毒副作用。因此，ADC药物中的连接子不仅是抗体与小分子药物之间形成共价连接的分子部分，也是靶向药物治疗中具有设计性质的关键元件。这涉及到多方面的考虑：连接子的加入不应诱导聚集；确保可接受的PK特性；提高血液循环的稳定性；活性分子在靶向位点有效释放。
喜树碱(CPT)是一种五环喹啉生物碱，最初是从中国本土树种-喜树的木材和树皮中分离出来的。喜树碱通过抑制拓扑异构酶I表现出显著的抗肿瘤活性。拓扑异构酶I是一种在多种肿瘤细胞系中过表达且对DNA合成至关重要的酶。喜树碱能结合Topo I-DNA复合物，稳定此复合物，从而使断裂的DNA链不能重新接合，阻止DNA复制及RNA合成。由于其广谱抗肿瘤活性和独特的作用机制，人们一直在努力开发喜树碱的临床类似物。目前只有三个喜树碱同系药物上市，即伊立替康(Irinotecan，美国辉瑞制药公司1994年获得FDA批准)、拓扑替康(Topotecan，诺华制药2007年获得FDA批准)、倍罗替康(Belotecan，韩国公司ChongKunDang Pharmaceuticals于2003年被批准在韩国上市)。
然而，喜树碱及其大部分衍生物在生理条件下溶解性差活性低，限制了喜树碱类似物的临床开发。因此，将喜树碱制成ADC可以克服这些限制。伊立替康(Irinotecan)是一个前药，其活性代谢产物SN-38水溶性差，半衰期短。Immunomedics公司利用SN-38作为毒性剂连接到赛妥珠单抗，其靶向识别表达Trop-2的癌细胞，用于治疗转移性三阴性乳腺癌(TNBC)的成年患者。人源化的赛妥珠单抗冻干粉注射剂(Sacituzumab Govitecan-Hziy)于2022年4月已经被FDA批准用于治疗(US7999083B2)。
依沙替康(DX-8951f)的氨基有助于其水溶性，而环己烷环赋予的刚性被认为有利于活性内酯形式与非活性水解羟基酸的平衡从而提高其活性，但是临床试验并没有达到预期终点。第一三共利用氨基羟基乙酰化生成DXd，其活性比依沙替康低2-4倍(US 20210169852 A)。使用酶可切割的Gly-Gly-Phe-Gly四肽连接子连接DXd，与抗HER2抗体偶联产生的ADC(Enhertu)在临床环境中显示出对抗HER2表达癌症的巨大潜力。因此，Enhertu于2019年12月20日获得FDA加速批准，用于在转移性疾病中已接受过2种或2种以上抗HER2药物治疗的HER2阳性、不可切除性或转移性乳腺癌成人患者。DXd的环己胺环虽然被认为稳定了生物活性内酯形式，但它携带了一个手性中心，使合成工作和SAR研究复杂化。为了克服这一困难，ImmunoGen公司的研究人员设计了一组新的喜树碱类似物，这个环被打开，额外的手性中心被消除，在7位上引出一个可以与抗体连接的基团。与抗人表皮生长因子受体(HuEGFR)的抗体偶联时，产生的ADC对EGFR阳性的HSC-2肿瘤异种移植模型有效(US20210077482A1)。MediBoston公司的研究人员利用类似方法在9位衍生出连接抗体的官能团，引入了亲水性的多肽连接子，产生的ADC取得了较好的临床前效果(WO 2021173773)。
虽然喜树碱类似物具有良好的抗肿瘤活性，特别是与人源化抗体偶联后具有很好的靶向性和肿瘤杀伤活性以及较低的起效剂量，从而降低了毒性增大了治疗窗。但是不同类型的喜树碱衍生物不仅半衰期和透膜性和体外活性显著不同，而且对不同癌细胞毒性也存在巨大差异。因此，我们期望通过设计新的结构，提高喜树碱衍生物对肿瘤细胞的活性和透膜性(即增加喜树碱衍生物的旁观者效应)，从而提高对抗原低表达或者不表达的肿瘤细胞的杀伤，以期达到一定的临床效果。
发明内容
本发明一方面提供一种通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
L-L2-L1-Dr
(A)
其中：
Dr选自以下结构：
R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；
R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、 -NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
Rd和Re各自独立地选自氢和烷基；
Rf选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
L为
L3为由两个或多个氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个 或多个结构，L6选自以下的一个或多个结构：
其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和烷基；
L4为
Z1选自键、-(CH2)p-、-(C2H4O)q-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
m为1至6的整数；
n为1至6的整数；
s为1至6的整数；
t为0至10的整数；
s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；优选0至8的整数、0至6的整数；还优选0至4的整数，进一步优选0至2的整数、1至2的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；
t1为1至6的整数；
t2为0至6的整数；
t3为1至6的整数；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数；
p为1至10的整数；
q为1至10的整数；
Q为接头单元。
其中，Z1与Q连接。
在一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
Ra选自氢、C1-C6烷基；
Rb选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，其中Rc选自氢、羟基、C1-C6 烷基；
m为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
n为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
Ra选自氢、C1-C6烷基；
Rb选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
n为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、 -(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
Rd、Re、Rf、m、n如通式(A)所定义。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-(CH2)m-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
Ra选自氢、C1-C6烷基；
Rb选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；优选1至4的整数；
n为1至6的整数；优选1至4的整数；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-O-*，其中*为与L2的连接位点；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选氢或羟基；
R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷 氧基；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
Rd、Re、Rf、m、n如通式(A)所定义。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-O-*，其中*为与L2的连接位点；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素。
R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CH2＝，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选氢或羟基；
R4选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*，其中*为与L2的连接位点；
m为1至6的整数；优选1至4的整数；
Ra选自氢、C1-C6烷基；
R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、 C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Dr选自以下结构：
L1选自-O-*，其中*为与L2的连接位点；
R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基；
R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Dr选自：
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
当L1选自-NRa-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、 -(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*或-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*，其中*为与L2的连接位点时；
L2选自键或其中*为与L1的连接位点；
Ra、Rb、m、n如通式(A)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
L1选自键、-O-*、-(CH2)m-O-*、-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*或-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点时；
L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
Ra、Rb、m、n如通式(A)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
L3为由两个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构：

优选
其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和C1-C6烷基；
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数。
在另一个实施方案中，L3为由两个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构：
R、Raa、Rbb、s、t、t1-t5、s5-s6如前所述。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3为 *为与L2连接的位置，·为与羰基或亚甲基连接的位置；
其中，L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨 酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
L1a为键或者选自以下的一个或多个结构：
优选
其中R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数。
在另一个实施方案中，L3为 *为与L2连接的位置，·为与羰基或亚甲基连接的位置；
其中，L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
L1a为键或者选自以下的一个或多个结构：
R、Raa、Rbb、s、t、t1-t5、s5-s6如前所述。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3选自：

其中：
L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数；
*为与L2连接的位置，
为与羰基或亚甲基连接的位置。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3选自：

其中：
L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数；
*为与L2连接的位置，
为与羰基或亚甲基连接的位置。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b和L’1b各自独立地选自：-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、 Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys*，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*；其中*为与L2连接的位置。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3选自：




*为与L2连接的位置，
为与羰基或亚甲基连接的位置。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Q选自：
优选
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-；p为1至10的整数，优选1至6的整数；更优选2-4的整数；最优选2-3的整数；
s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；优选0至8的整数、0至6的整数；还优选0至4的整数，进一步优选0至2的整数、1至2的整数；
L6选自
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
L6优选为
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-；
s1为0至6的整数，优选0至2的整数；
s2为0至6的整数，优选0至2的整数；
s3为0；
s4为0；
p为1至10的整数，优选1至6的整数；更优选2-4的整数；最优选2-3的整数。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
Z1选自-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-C(O)NH-；
s1为1至6的整数，优选2至6的整数；
s2为1至10的整数，优选2至10的整数；
s3为0；
s4为0；
p为1至10的整数，优选1至6的整数；更优选2-4的整数；最优选2-3的整数。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Q-L4-选自：

其中：
Z1选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-，优选-C(O)NH-；
p为1至10的整数，优选1至6的整数；更优选2-4的整数；最优选2-3的整数；
s1为0至6的整数，优选0至2的整数；
s2为1至10的整数，优选1至8的整数；
s3为0至6的整数，优选0至2的整数；
s4为1至6的整数，优选1至2的整数；
s7为0至6的整数，优选1至2的整数；
s8为1至4的整数，优选1至2的整数；
s9为1至10的整数，优选1至8的整数；
s10为1至4的整数，优选1至2的整数。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L选自：


其中，
L1b为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、赖氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；更优选，-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、 -Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*；
*为与L2连接的位置；
Z1选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-，优选-C(O)NH-；
p为1至10的整数，优选1至6的整数；
s1为0至6的整数，优选0至2的整数；
s2为1至6的整数，优选1至2的整数；
s3为0至6的整数，优选0至2的整数；
s4为1至6的整数，优选1至2的整数；
t为0至10的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、赖氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；更优选，-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*；优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、 -Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L’1b为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、赖氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；更优选，-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b和L’1b为-Gly-*或-Val-*。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：


















本发明另一方面提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，
R8选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R9选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自氘、卤素、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；
G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
R10选自氢、卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、 -O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述C1-C6烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；
n为1至6的整数。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R8为卤素，优选氟或氯。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R9选自羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；
G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基，优选氢；
Rf选自氢、C1-C6烷基，优选氢；
m为1至6的整数，优选1至4的整数；
n为1至6的整数，优选1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R10选自氢、羟基、氨基、-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-NRf-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基，优选氢；
Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数，优选1至4的整数，还优选1或2；
n为1至6的整数，优选1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R9选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、羧基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
Rf选自氢、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；
n为1至4的整数，优选1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R10选自氢、羟基、氨基、CH2＝、-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述C1-C6烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；优选1至4或4至6的整数；
n为1至4的整数，优选1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其选自：
本发明另一方面提供一种通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，
R11选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R12选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、 -(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R13选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
m为1至6的整数；
n为1至6的整数。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R11选自卤素优选氟或氰基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R12选自羟基、氨基、C1-C6烷基、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe；
Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
m为1至6的整数，优选1至4的整数。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R13选自羟基、氨基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R13选自羟基、C1-6烷氧基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其选自：
本发明另一方面提供一种通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，
其中：
Dr选自以下结构：
R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；
R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、 -(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
Rd和Re各自独立地选自氢和烷基；
Rf选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述C1-C6烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
L’为
Q’选自：
其中，*为与L4连接的位置，为与Pc连接的位置；
L3为由两个或多个氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构，L6选自以下的一个或多个结构：
其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和烷基；
L4为
Z1选自键、-(CH2)p-、-(C2H4O)q-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
m为1至6的整数；
n为1至6的整数；
s为1至6的整数；
t为0至10的整数；
s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；优选0至8的整数、0至6的整数；还优选0至4的整数，进一步优选0至2的整数、1至2的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；
t1为1至6的整数；
t2为0至6的整数；
t3为1至6的整数；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数；
p为1至10的整数；
q为1至10的整数；
v为1至10，v为小数或整数；
Pc为抗体或其抗原结合片段，或者为修饰抗体；
所述修饰抗体具有Pc’-((L5)w-F)x结构，其中：
Pc’为抗体；
L5为连接子；
w为0或1；
F为经反应例如无金属点击反应后能够与Q’连接的点击探针或巯基或其前体，优选地F为叠氮基；
x为1至8的整数。
其中，Z1与Q’连接。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：
L3选自：
R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
t4为0至10的整数；
t5为0至10的整数；
*为与L2连接的位置；
为与羰基或亚甲基连接的位置；
L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；
优选地，L1b和L’1b各自独立地选自：-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-；其中*为与L2连接的位置。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：
L’为
Q’选自：
其中，*为与L4连接的位置，为与Pc连接的位置；
L3为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；
L4为
Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
s1为1至6的整数，优选2至6的整数；
s2为1至10的整数，优选2至10的整数；
s3为0；
s4为0；
p为1至10的整数，优选1至6的整数；更优选2-4的整数；最优选2-3的整数；
L6选自
s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
t为0至10的整数；优选2至8的整数；更优选3至7的整数；
L6优选为
在一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中，L5为
Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中当w为0时，F为巯基；当w为1时，F为经反应例如无金属点击反应后能够与Q’连接的点击探针，优选地F为叠氮基。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：
Pc为修饰抗体，所述修饰抗体具有结构，
其中：
Pc’为抗体；
Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：Pc为修饰抗体，Pc-Q’选自结构：
Pc’为抗体；
Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O- 和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：













其中：
v为1至10，v为小数或整数；
Pc为抗体或其抗原结合片段；
Pc’为抗体。
在一些实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
在另一些实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗ROR1抗体、抗CLDN6抗体、抗CLDN9抗体、抗CLDN18.2抗体、抗NaPi-2b抗体、抗TNF-α抗体、抗ENPP3抗体、抗DLL3抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD28抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD37抗体、抗CD38抗体、抗CD44抗体、抗CD45抗体、抗CD47抗体、抗CD48抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD98抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗EphA2抗体、抗MUCI抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体、抗CD79抗体、抗TROP-2抗体、抗CD79B抗体、抗Mesothelin抗体、抗Nectin-4抗体、抗TPBG抗体，或其抗原结合片段。
在另一些实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体或其抗原结合片段选自曲妥珠单抗(Trastuzumab)、西妥昔单抗(Cetuximab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、恩波妥珠单抗(Enoblituzumab)、依玛妥珠单抗(Emibetuzumab)、奥英妥珠单抗(Inotuzumab)、维汀-匹那妥珠单抗(Pinatuzumab)维布妥昔单抗(Brentuximab)、吉妥单抗(Gemtuzumab)、比伐珠单抗(Bivatuzumab)、莫洛伐妥单抗(Lorvotuzumab)，或其抗原结合片段。
在另一些实施方案中，根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：












其中v为1至10的整数或小数，优选2至8的整数。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其包含根据本发明所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明还涉及根据本发明所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备配体-药物偶联物中的用途。
本发明还涉及根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐在制备配体-药物偶联物中的用途。
本发明进一步涉及根据本发明所述的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐 或者含有其的药物组合物在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
本发明还涉及根据本发明所述的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐或者含有其的药物组合物，其用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
本发明还涉及一种治疗肿瘤或癌症的方法，其包含向有需要的受试者施用有效量的根据本发明所述的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐或者含有其的药物组合物，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者含有其的药物组合物在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
本发明还涉及根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者含有其的药物组合物，其用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
本发明还涉及一种治疗肿瘤或癌症的方法，其包含向有需要的受试者施用有效量的根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者含有其的药物组合物，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
发明详述
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本公开所属领域普通技术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本公开，但本文描述了优选的方法和材料。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“接头单元(或连接片段)”是指一端与配体连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。
术语“配体药物偶联物”指配体通过稳定的连接单元与具有生物活性的药物相连。在本公开中“配体药物偶联物”优选为抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，指将单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的连接单元与具有生物活性的毒性药物即喜树碱衍生物相连。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码及其结构的示例如下表：

术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链 通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。
抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公开所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置上符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR2-3)，或者符合kabat和chothia的编号规则(HCDR1)。
术语“抗原结合片段”是指抗体的保持特异性结合抗原的能力的一个或多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)单结构域或dAb片段，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可任选地通过合成的接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv))。此类单链抗体也意欲包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子(包含1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子)的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、 2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个碳原子(包含3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子)。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0、1或2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子(1个、2个、3个或4个杂原子)；更优选环烷基环包含3至10个环原子(包含3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个环原子)。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂 原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(7元、8元、9元或10元环)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(7元、8元、9元或10元环)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
等。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元(6元、7元、8元、9元或10元)，例如苯基和萘基，优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子(1个、2个、3个或4个杂原子)、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(5元、6元、7元、8元、9元或10元杂芳基)，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤 素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含9-芴甲氧羰基、叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基(1个、2个或3个取代基)所取代。所述氨基保护基优选为9-芴甲氧羰基。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氰基”指-CN。
术语“酰氨基”指-C(O)N(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
本公开还包括各种氘化形式的式(I)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(I)化合物。在制备氘代形式的式(I)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1个、2个或3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本公开配体-药物偶联物的盐， 或本公开中所述的化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本公开配体药物偶联物至少含有一个氨基，因此可以与酸形成盐，可药用盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
术语“载体”用于本公开的药物，是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。如可作为载体的高分子表面活性剂由于其独特的两亲性结构，可以进行自组装，形成各种形式的聚集体，优选的实例如胶束、微乳液、凝胶、液晶、囊泡等。这些聚集体具有包载药物分子的能力，同时又对膜有良好的渗透性，可以作为优良的药物载体。
术语“赋形剂”是在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。如片剂中的粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水混悬液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)， 或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油混悬液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。
通过加入水，适用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒可以提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂如上所述。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制的糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒和溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。
本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
本领域技术人员熟知，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等。另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物的日用量或可药用的盐的种类 可以根据传统的治疗方案来验证。
附图说明
图1为测试例3中NCI-N87胃癌荷瘤小鼠模型的肿瘤生长曲线。
图2为测试例4中人乳腺癌JIMT-1瘤小鼠模型的肿瘤生长曲线。
图3A为测试例6中Her2阴性468-luc细胞增长抑制曲线。
图3B为测试例6中Her2阳性N87细胞增长抑制曲线。
图3C为测试例6中N87细胞和468-luc细胞共孵育的增长抑制曲线。
图4-图5为测试例7中大鼠单次给药剂量为200mg/kg后体重变化曲线。
图6A-6B为测试例5中NCI-N87胃癌荷瘤小鼠模型的肿瘤生长曲线。
具体实施方式
进一步通过实施例来理解本发明的化合物及其制备，这些实施例说明了一些制备或使用所述化合物的方法。然而，要理解的是，这些实施例并不限制本发明的范围。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和要求保护的本发明范围之内。
本发明化合物是利用便利的起始原料和通用的制备步骤来完成制备的。本发明给出了典型的或倾向性的反应条件，诸如反应温度、时间、溶剂、压力、反应物的摩尔比。但是除非特殊说明，其他反应条件也能采纳。优化条件可能随着具体的反应物或溶剂的使用而改变，但在通常情况下，反应优化步骤和条件都能得到确定。
另外，本发明中可能用到了一些保护基团来保护某些官能团避免不必要的反应。适宜于各种官能团的保护基以及它们的保护或脱保护条件已经为本领域技术人员广泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有机制备中的保护基团》(第3版，Wiley，New York，1999和书中的引用文献)详细描述了大量的保护基团的保护或脱保护。
化合物和中间体的分离和纯化依据具体的需求采取适当的方法和步骤，例如过滤、萃取、蒸馏、结晶、柱层析、制备薄层色谱、制备高效液相色谱或上述方法的混合使用。其具体使用方法可参阅本发明描述的实例。当然，其他类似的分离和纯化手段也是可以采用的。可以使用常规方法(包括物理常数和波谱数据)对其进行表征。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Brukerdps 400型核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，氘代水(D2O)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
小分子MS的测定用LC(Waters 2695)/MS(Quattro Premier xE)质谱仪(生产商： 沃特世)(Photodiode Array Detector)。
ADC的MS测定用UPLC-MS，Thermo Fisher Scientific，DionexUltiMate 3000 UPLC-Q Exactive MS；High resolution mass spectrometer，Thermo Q EXACTIVE HF-X。
ADC分析HIC使用Agilent 1200高效液相色谱仪进行HIC测试，色谱柱为Thermo MAbPac HIC-Bulty(5μm，4.6×100mm)，以1.5M硫酸铵和25mM磷酸盐混合溶液(pH 7.0)-异丙醇(95：5)为流动相A，25mM磷酸盐溶液(pH 7.0)-异丙醇(80：20)为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min。
ADC分析SEC使用Agilent 1200高效液相色谱仪进行SEC测试，色谱柱为Waters BioResolve SEC mAb(2.5μm，7.8×300mm)，以PBS为流动相进行等度洗脱，流速为0.5ml/min。
ADC分析RP使用Agilent 1200高效液相色谱仪进行HIC测试，色谱柱为Thermo MAbPac RP(4μm，3×100mm)，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相A，乙腈-异丙醇-三氟乙酸(80：20：0.1)为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min。
制备高效液相色谱法使用lc6000高效液相色谱仪(生产商：创新通恒)。色谱柱为Daisogel C18 10μm 100A(30mm×250mm)，流动相：乙腈/水；橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％三氟乙酸)-乙腈。
薄层层析硅胶板使用青岛海洋化工GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.20mm～0.25mm，制备薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.5mm。
柱层析一般使用青岛海洋化工硅胶100～200目、200～300目和300～400目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自网化商城、北京偶合、Sigma、百灵威、易世明、上海书亚、上海伊诺凯、安耐吉化学、上海毕得、皓元医药、已铼生物、都创医药等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
反应溶剂、有机溶剂或惰性溶剂各自表述为使用的该溶剂在所描述的反应条件下不参与反应，包括如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
本发明中所描述的化学反应一般在常压下进行。反应温度在-78℃至200℃之间。反应时间和条件为，例如，一个大气压下，-78℃至200℃之间，大约1至24小时内完成。如果反应过夜，则反应时间一般为16小时。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，C：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和三氟乙酸等碱性或酸性试剂进行调节。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。
根据本文提供的示例性程序及其本领域技术人员已知的改变来制备本发明的化合物。
制备例
制备例1：(9R)-9-乙基-5-氟-1,9-二羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-1)的制备
将NaNO2(270mg，3.91mmol)置于25mL三口瓶中，加入6mL水溶解，再加入1mL冰醋酸，随后将伊喜替康甲磺酸盐(皓元医药，100mg，0.188mmol)的醋酸水溶液(3mL冰醋酸，3mL水)缓慢加入到上述NaNO2溶液中，室温反应1.5h。将反应液过滤收集固体，将固体干燥得到红棕色固体，高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.5％甲酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)分离纯化，冻干，得到12mg微红色粉末，收率：14％。
LCMS(ESI)：m/z，437.1[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,J＝11.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.50(s,1H),6.04-5.83(m,1H),5.48-5.29(m,4H),5.16(d,J＝5.6Hz,1H),3.23(dd,J＝13.4,8.6Hz,2H),3.09-2.98(m,1H),2.37(s,3H),2.02(dd,J＝16.4,6.8Hz,1H),1.86(dq,J＝14.0,7.2Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例2：(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-1AB)的制备
步骤1：(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基(4-硝基苯基)碳酸酯(PY-1D)的制备
将化合物PY-1(40.0mg，0.09mmol，1.0eq)和三乙胺(27.3mg，0.27mmol，3.0eq)溶于二氯甲烷中(5mL)，0℃加入对氯甲酸硝基苯酯(36.2mg，0.18mmol，2.0eq)，然后升温至35℃，并搅拌3小时。将反应液冷却至室温，然后浓缩得到粗品黄色固体(60mg粗品，49.3％纯度，0.05mmol，收率55.6％)。
LCMS：RT＝0.909min，MS(ESI)m/z＝602.1[M+H]+。
步骤2：(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-1AB)的制备
将化合物PY-1D(0.05mmol，1.0eq)和三乙胺(10.1mg，0.1mmol，2.0eq)溶于二氯甲烷中(5mL)，0℃加入乙醇胺(31.4mg，0.04mmol，1.1eq)，并在25℃搅拌3小时。将反应液冷浓缩得到粗品，粗品用反相色谱法纯化(柱:Welch Xtimate C18 150×30mm×5μm；流动相：[water(FA)-ACN]；梯度：6％-46％B over 25min)，得到标题化合物PY-1AB(2.23mg，0.004mmol，收率8.00％)，白色固体。
LCMS：RT＝1.197min，MS(ESI)m/z＝524.2[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.81(d,J＝10.8Hz,1H),7.45(t,J＝5.6Hz,1H),7.33(s,1H),6.52(s,1H),6.27(s,1H),5.44-5.24(m,4H),4.70(t,J＝5.6Hz,1H),3.48-3.44(m,2H),3.22-3.12(m,4H),2.40(s,3H),2.20-2.17(m,1H),1.91-1.86(m,2H),1.27-1.22(m,1H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例3：(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-(羟甲基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-2)和(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1-亚甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-2b)的制备
步骤1：(E)-N-(3-氟-7-(羟基亚甲基)-4-甲基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-22)的制备
在100ml三口烧瓶中，将N-(3-氟-4-甲基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-21)(1.0g，4.25mmol，1.0eq)溶于THF(20mL)，在冰水中降温至0℃，缓慢加入t-BuOK(12.75mmol，1M，12.75mL，3eq)，维持体系温度在0℃，搅拌30分钟后，将甲酸乙酯(787mg，10.63mmol，2.5eq)加入反应体系中，搅拌2小时。加入氯化铵(20ml)淬灭，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到黄色固体化合物(E)-N-(3-氟-7-(羟基亚甲基)-4-甲基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.22g，收率95％)。
LCMS(ESI)：m/z，264.1[M+1]+。
步骤2：N-(3-氟-7-(羟甲基)-4-甲基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-23)的制备
在氮气氛下，向化合物(E)-N-(3-氟-7-(羟基亚甲基)-4-甲基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺PY-22(400mg，1.52mmol，1.0eq的甲醇(50ml)溶液中加入 PtO2(69.00mg，303.90μmol，0.2eq)，置换3次氢气，氢气氛下反应24小时(40℃)，检测有原料剩余，再补加PtO2(69.00mg，303.90μmol，0.2eq)，在氢气氛下，继续反应24小时。过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)纯化，得到黄色固体状的化合物N-(3-氟-7-(羟甲基)-4-甲基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(324mg，收率63％)。
LCMS(ESI)：m/z，266.1[M+1]+。
步骤3：8-氨基-6-氟-2-(羟甲基)-5-甲基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-24)的制备
冰浴下，向化合物N-(3-氟-7-(羟甲基)-4-甲基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺PY-23(180mg，0.68μmol，1.0eq)的无水MeOH(15mL)溶液中加入SOCl2(2.71mmol，1M/L，2.71mL，4.0eq)，加完后，置换3次氮气，50℃搅拌60min。减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)纯化，得到淡黄色固体化合物8-氨基-6-氟-2-(羟甲基)-5-甲基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(28.5mg，25％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，264.1[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.43(brs,2H),6.35(d,J＝12.0Hz,1H),3.74(dd,J＝10.8,4.4Hz,1H),3.60(dd,J＝10.8,7.2Hz,1H),2.90(dt,J＝17.2,4.8Hz,1H),2.75-2.54(m,2H),2.18-2.08(m,1H),1.98(s,3H),1.84-1.79(m,1H)。
步骤4：(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-(羟甲基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-2)和(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1-亚甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-2b)的制备
向化合物8-氨基-6-氟-2-(羟甲基)-5-甲基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(22mg，98.5μmol，1.0eq)的二甲苯(5mL)溶液中加入(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(26mg，98.50μmol，1.0eq)、PPTS(5mg，19.70μmol，0.2eq)。加完后，置换3次氮气，140℃搅拌3h。减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从48％到80％)纯化，得到黄色固体PY-2(3.42mg，收率7％)和深棕色有些粘的固体PY-2b(5.31mg，收率10％)。
PY-2：
LCMS(ESI)：m/z，451.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),8.14(s,1H),7.17(d,J＝12.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.46(s,1H),6.11(d,J＝2.0Hz,1H),5.61(d,J＝2.0Hz,1H),5.36(s,1H),4.73(d,J＝2.4Hz,1H),2.95(t,J＝6.8Hz,2H),2.79(t,J＝6.8Hz,2H),2.25–2.03(m,5H),2.00(d,J＝2.0Hz,1H),1.86-1.76(m,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)。
PY-2b：
LCMS(ESI):m/z，433.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝10.8Hz,1H),7.62(s,1H),5.77-5.70(m,3H),5.38-5.30(m,3H),3.77(s,1H),3.22-3.19(m,2H),2.85-2.82(m,2H),2.41(s,3H),1.96-1.82(m,2H),1.04(t,J＝8.0Hz,3H)。
制备例4：(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-((2-羟甲基)氨基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-4)的制备
将伊喜替康甲磺酸盐(皓元医药)(50mg，114.82μmol)溶于DMF(2mL)，向该溶液加入环氧乙烷(1M，1.15mL)和冰醋酸(3.45mg，57.41μmol)，该反应体系在90℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向体系加入20mL水，乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)纯化，向得到的溶液中加入1滴盐酸冻干，得到黄色固体化合物PY-4(5.82mg，收率21％)。
LCMS：[M+H]+＝480.9。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ(ppm)0.72–0.83(t,J＝14.7Hz,3H),1.72–1.85(m,2H),2.13-2.22(s,3H),2.43-2.56(m,1H),2.80-3.06(m,2H),3.18–3.31(s,2H),3.31-3.40(m,1H),3.74-3.82(m,2H),5.08-5.13(s,1H),5.18–5.41(m,4H),7.10-7.14(s,1H),7.15-7.21(s,1H)。
制备例5：2-羟乙基((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃[3',4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4Car)的制备
步骤1：(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-异氰酸酯-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(4Car2)的制备
于0℃，向伊喜替康甲磺酸盐(20mg，0.046mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三当量的三乙胺(14mg，0.14mmol)和1当量的三光气(14mg，0.046mmol)，0℃搅拌三小时。减压浓缩，得到20mg粗品，直接进行下一步反应。
步骤2：2-羟乙基((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4Car)的制备
将化合物(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-异氰酸酯-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4]：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(4Car2)(20mg，0.043mmol)加入1mL二氯甲烷溶解，滴加10个当量的乙二醇(27mg，0.43mmol)，室温搅拌3小时。减压浓缩，残余物通过反相制备色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)纯化，得到6.5mg黄色固体的化合物PY-4Car。
LCMS：m/z＝524.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(s,1H),8.00(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝10.8Hz,1H),7.31(s,1H),6.55(s,1H),5.43(s,2H),5.24(d,J＝7.20Hz,2H),4.81(t,J＝5.2Hz,1H),3.97-4.17(m,2H),3.61(d,J＝3.6Hz,2H),3.02-3.18(m,2H),2.30-2.41(m,3H),2.05-2.28(m,2H),1.75-1.94(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例6：4-羟丁基((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4Car2)的制备
步骤1：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基(4-硝基苯基)碳酸酯(PY-4car2-b)的制备
向4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇(1g，4.89mmol，1eq)和二(对硝基苯)碳酸酯(2.98g，9.79mmol，2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(2.43mL，14.68mmol，3eq)，并于室温搅拌过夜，将反应液浓缩，加入二氯甲烷(10mL)稀释，用水(10mL)洗涤有机相3次，用饱和食盐水(10mL)洗涤1次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1；10，二氯甲烷/石油醚＝40％)纯化，得产物4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基(4-硝基苯基)碳酸酯(PY-4car2-b)(1.63g，收率＝90.2％)。
LCMS(ESI):m/z，370[M+H]+。
步骤2：4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4car2-d)的制备
向伊喜替康(20mg，37.62μmol，1eq，甲磺酸盐，皓元医药)和N,N-二异丙基乙胺(6.22μL，37.62μmol，1eq)的二氯甲烷(6mL)溶液中加入三乙胺(20.92μL，150.48μmol，4eq)、化合物PY-4car2-b(18.1mg，48.92μmol，1.3eq)和1-羟基苯并三唑(2.4mg，18.81μmol，0.5eq)，并于室温搅拌48小时，浓缩，残余物经高效液相色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱 为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从50％到60％洗脱)纯化，得标题化合物PY-4car2-d(15mg，收率＝59.8％)。
LCMS(ESI):m/z，666[M+H]+。
步骤3：4-羟丁基((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4Car2)的制备
冰浴下，向化合物PY-4car2-d(15mg，22.53μmol，1eq)的四氢呋喃(3mL)溶液中加入三乙胺三氢氟酸盐(14.69μL，90.12μmol，4eq)，搅拌5分钟后，于25℃搅拌过夜，残余物经反相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到55％洗脱)纯化，得标题化合物PY-4Car2(3.77mg，收率＝30.34％)。
LCMS(ESI):m/z，552[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝10.8Hz,1H),7.31(s,1H),6.51(s,1H),5.42(s,2H),5.24(d,J＝4.2Hz,2H),4.41(t,J＝5.2Hz,1H),4.15-4.03(m,2H),3.43(q,J＝6.2Hz,2H),3.29–3.06(m,3H),2.38(d,J＝1.8Hz,3H),2.25-2.08(m,2H),1.93-1.81(m,2H),1.65(p,J＝6.8Hz,2H),1.50(p,J＝6.6Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-111.37。
制备例7：3-羟丙基((1S，9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H，12H-苯并[d]吡喃并[3'，4'：6,7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸酯(PY-4Car3C)的制备

步骤1：化合物3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基(4-硝基苯基)碳酸酯的制备
0℃下向化合物3-(叔丁基二甲基硅氧)丙醇(400mg，2.10mmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入二(对硝基苯)碳酸酯(1.28g，852.31μL，4.20mmol，2eq)和DIPEA(543.14mg，694.55μL，4.20mmol，2eq)，室温(25℃)搅拌16小时，反应液倒入60mL水中，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL，合并有机相，有机相用食盐水(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得到粗品，粗品通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚1：30到1：20)纯化得到浅黄色油状化合物3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基(4-硝基苯基)碳酸酯(740mg，Yield:99.07％)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.30-8.26(m,2H),7.40-7.35(m,2H),4.41(t,J＝6.4Hz,2H),3.76(t,J＝5.9Hz,2H),1.99-1.93(m,2H),0.90(s,9H),0.07(s,6H)。
步骤2：化合物PY-4Car 3C-a的制备
向化合物3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基(4-硝基苯基)碳酸酯(32.10mg，90.29μmol，1.2eq)，依喜替康甲磺酸盐(40mg，75.24μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入HOBt(10.17mg，99.96％，6.78μL，75.24μmol，1eq)和DIPEA(29.17mg，99％，37.31μL，225.73μmol，3eq)，加毕，室温(25℃)搅拌1小时，LCMS显示反应完成，反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×21.2mm×5μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从50％到80％洗脱)纯化，经 冻干得到浅黄色固体化合物PY-4Car 3C-a(45mg，Yield:91.75％)。
LCMS：m/z＝652.3[M+1]+；Rt＝3.098min。
步骤3：化合物PY-4Car 3C的制备
室温下向化合物PY-4Car3C-a(45mg，60.75μmol，1eq)的THF(2mL)溶液中加入三乙胺三氢氟酸盐(499.70mg，98％，505.26μL，3.04mmol，50eq)，加毕，反应液在40℃下搅拌10小时。LCMS显示反应完成，反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经冻干得到黄色固体化合物PY-4Car3C(27.40mg，Yield:83.90％，Purity:98.19％)。
LCMS：m/z＝538.2[M+1]+；Rt＝1.508min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(d,J＝10.9Hz,1H),7.30(s,1H),6.52(s,1H),5.42(s,2H),5.23(d,J＝6.4Hz,3H),4.51(s,1H),4.20-4.15(m,1H),4.13-4.05(m,1H),3.50(t,J＝6.4Hz,2H),3.23(s,1H),3.14-3.07(m,1H),2.37(d,J＝1.8Hz,3H),2.24-2.09(m,2H),1.92-1.82(m,2H),1.76(p,J＝6.5Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例8：(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-(2-羟乙基)(甲基)氨基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-5)的制备
将化合物(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-((2-羟甲基)氨基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-4)(25mg，52.14μmol)溶于甲醇(2mL)，向该溶液加入多聚甲醛(7.83mg，260.69μmol)和冰醋酸(626.19μg，10.43μmol)，将反应体系在60℃搅拌两小时。将氰基硼氢化钠(16.38mg，260.69μmol)加入，该反应体系在30℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向体系中加入20mL饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。将残余物通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex  Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)纯化，得到干净的产品溶液，向该溶液中加入1滴盐酸冻干，得到黄色固体PY-5(7.63mg，收率29.65％)。
LCMS：[M+H]+＝494.8。
1H NMR(氘代二甲基亚砜，400MHz):δ(ppm)0.65-0.81(t,J＝7.4Hz,3H),1.73-1.84(m,2H),2.05-2.22(s,3H),2.48-2.57(m,1H),2.57-2.69(s,3H),2.93-3.15(m,2H),3.19-3.31(m,1H),3.34-3.42(m,1H),3.78-3.92(m,2H),5.08-5.44(m,4H),7.12-7.14(s,1H),7.14-7.18(d,J＝10.4Hz,1H)。
制备例9：N-(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-N-(2-羟乙基)甲酰胺(PY-6A1)的制备
向醋酸(31.31mg，521.38μmol)的无水四氢呋喃(1mL)溶液中滴加入醋酸酐(63.87mg，625.65μmol)，该反应体系在50℃反应1小时。将化合物(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-((2-羟甲基)氨基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-4)(100mg，208.55μmol)的无水四氢呋喃(5mL)溶液加入上述反应体系，并在20℃反应4小时。向反应体系加入20mL水，乙酸乙酯萃取(20mL×3)。合并有机相后用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱法纯化(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)，然后冻干得到白色固体化合物PY-6A1(4.02mg，7.92μmol，收率3.80％)。
LCMS：[M+H]+＝508.2。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ(ppm)0.77-0.95(t,J＝0.9Hz,3H),1.75-1.91(m,2H),2.15-2.33(m,1H),2.322.39(s,3H),2.94-3.14(m,2H),3.40-3.66(m,2H),4.67-5.30(m,3H),5.31-5.57(m,3H),6.46-6.51(s,1H),7.26-7.30(s,1H),7.71-7.82(m,1H),8.11-8.29(d,J＝44.6Hz,1H)。
制备例10：N-(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-N-(2-羟乙基)乙酰胺(PY-6A2)的制备
于0℃，向化合物(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-((2-羟甲基)氨基)-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-4)(20mg，0.04mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入三当量的三乙胺(12mg，0.12mmol)和一当量的乙酰氯(3.27mg，41.70μmol)，0℃搅拌两小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从40％到80％洗脱)纯化，得到(3.25mg，15％)白色固体化合物PY-6A2。
LCMS(ESI)：m/z，522.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,1H)7.75(br d,J＝9.6Hz,1H)7.25-7.38(m,1H)6.52(s,1H)5.30-5.53(m,4H)4.04-4.33(m,2H)2.85-3.19(m,5H)2.29-2.41(m,4H)2.03-2.23(m,5H)1.83-1.95(m,2H)0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例11：N-(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-N-(2-羟乙基)甲磺酰胺(PY-6B1)的制备
于0℃，向化合物(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1-((2-羟甲基)氨基)-4-甲基 -1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-4)(20mg，0.04mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入三当量的三乙胺(12mg，0.12mmol)和一当量的甲烷磺酰氯(5mg，0.04mmol)，0℃搅拌两小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从48％到80％洗脱)纯化，得到白色固体化合物PY-6B1(1.3mg，收率：6％)。
LCMS(ESI)：m/z，558.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝13.6Hz,1H),7.70-7.81(m,1H),7.28-7.35(m,1H),6.55(d,J＝1.6Hz,1H),5.43(s,3H),4.15-4.37(m,1H),2.80-3.11(m,4H),2.63-2.70(m,1H),2.27-2.40(m,6H),2.01-2.24(m,2H),1.53-1.95(m,4H),0.80-0.94(m,3H)。
制备例12：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(3-羟丙基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-8)的制备
步骤1：1-溴-3-氟-2-甲氧基-5-硝基苯(PY-82)的制备
向2-氟-1-甲氧基-4-硝基苯(PY-81)(50g，292mmol)和NBS(57.2g，321mmol)的醋酸(500mL)溶液中加入浓硫酸(30mL)，并于120℃搅拌过夜。将反应液浓缩，静置析出乳白色固体物，过滤，将滤饼用水和乙醇洗涤，干燥得到化合物PY-82(58g，79％产率)。
LCMS(ESI)：m/z，249.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34-8.23(m,2H),4.07(d,J＝3.2Hz,3H)。
步骤2：3-溴-5-氟-4-甲氧基苯胺(PY-83)的制备
向化合物1-溴-3-氟-2-甲氧基-5-硝基苯(PY-82)(50g，200mmol)和铁粉(55.85g，1mol)的乙醇(500mL)溶液中依次加入浓盐酸(3.34mL，0.55equiv.)和83mL水)，并于80℃搅拌过夜。反应液经硅藻土过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(PE:EA＝3:1)分离纯化，得到化合物PY-83(40g，产率90％)。
LCMS(ESI)：m/z，219.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.59(t,J＝2.0Hz,1H),6.41(dd,J＝13.2,2.6Hz,1H),5.40(s,2H),3.67(s,3H)。
步骤3：N-(3-溴-5-氟-4-甲氧基苯基)乙酰胺(PY-84)的制备
向化合物3-溴-5-氟-4-甲氧基苯胺(PY-83)(10.0g，45.4mmol)和三乙胺(13.9mL，2.2equiv.)的二氯甲烷(500mL)溶液中加入乙酰氯(4mL，1.2equiv.)，并于25℃搅拌过夜。使用150ml饱和氯化铵淬灭反应，然后加入3×80ml二氯甲烷萃取，有机相用80ml饱和氯化钠溶液洗涤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(PE:EA＝3:1)分离纯化，得到化合物PY-84(10克，产率84％)。
LCMS(ESI)：m/z，264.0[M+H]+。
步骤4：(Z)-4-(5-乙酰胺基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁-3-烯酸乙酯(PY-85)的制备
向化合物N-(3-溴-5-氟-4-甲氧基苯基)乙酰胺(PY-84)(15g，57.23mmol)和Pd(t-Bu3P)2(1.46g，0.05equiv)的甲苯(200.0mL)溶液中依次加入DIPEA(60mL，6.0equiv.)和丁烯酸乙酯(1.5equiv.，10.89mL)，于13℃搅拌过夜。将反应混合液直接减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(PE:EA＝1:2)分离纯化，得到化合物PY-85(7.9g，产率46％)。
LCMS(ESI)：m/z，296.1[M+H]+。
步骤5：4-(5-乙酰氨基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁酸乙酯(PY-86)的制备
向化合物(Z)-4-(5-乙酰胺基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁-3-烯酸乙酯(PY-85)(8.0g，27.08mmol)的甲醇(100.0mL)溶液中加入钯碳(0.1equiv.，2.88g)，于50℃反应过夜。将反应混合液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，干燥，得到粗产物化合物PY-86，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)：m/z，298.1[M+H]+。
步骤6：4-(5-乙酰氨基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁酸(PY-87)的制备
向化合物4-(5-乙酰氨基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁酸乙酯(PY-86)(8g，26.91mmol)的甲醇\四氢呋喃\水(120ml)的混合溶剂中(按1:1:1的比例混合)加入氢氧化锂(3equiv.，1.93g)，并于室温反应过夜。将反应混合液减压浓缩，再使用乙酸乙酯(2×80ml)萃取杂质，去除有机相。水相随后加入浓盐酸调pH值到1，再使用乙酸乙酯(3×80ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物PY-87(3.8g，产率：70％)。
LCMS(ESI)：m/z，270.1[M+H]+；292.1[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.07(s,1H),9.99(s,1H),7.50(dd,J＝13.6,2.4Hz,1H),7.09-7.03(m,1H),3.77(d,J＝1.2Hz,3H),2.63-2.53(m,2H),2.25(t,J＝7.2Hz,2H),2.02(s,3H),1.75(dq,J＝9.2,7.2Hz,2H)。
步骤7：N-(3-氟-4-甲氧基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-88)的制备
于95℃，将化合物4-(5-乙酰氨基-3-氟-2-甲氧基苯基)丁酸(PY-87)(1g，3.71mmol)在PPA(多聚磷酸)的溶液搅拌3小时。将反应混合液倒入冰水中，用水洗涤，然后用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，无水硫酸钠干燥，然后过滤减压浓缩，残余物经高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干后得到化合物PY-88(110mg，产率11％)。
LCMS(ESI)：m/z，252.1[M+H]+；274.0[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.37(d,J＝14.8Hz,1H),3.81(d,J＝1.2Hz,3H),2.95(t,J＝6.0Hz,2H),2.66(dd,J＝7.2,5.6Hz,2H),2.16(s,3H),1.99(q,J＝6.4Hz,2H)。
步骤8：N-(3-氟-4-羟基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-89)的制备
将化合物N-(3-氟-4-甲氧基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-88)(1.3g)溶于DCE(20ml)中，加入5当量AlCl3，60℃搅拌5小时。加入100ml水稀释，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到910mg黄色固体状化合物PY-89。
LCMS(ESI)：m/z，238.0[M+1]+。
步骤9：4-乙酰氨基-2-氟-5-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基三氟甲烷磺酸盐(PY-810)的制备
将化合物N-(3-氟-4-羟基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-89)(0.9g)溶于DCM(20mL)中，加入3当量的三乙胺和3当量的三氟甲磺酸酐，室温搅拌3小时，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(乙酸乙酯/正己烷1:5)分离纯化，得到0.9g黄色固体化合物PY-810。
LCMS(ESI)：m/z，370.1[M+1]+。
步骤10：N-(4-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-811)的制备
将化合物4-乙酰氨基-2-氟-5-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基三氟甲烷磺酸盐(PY-810)(420mg)溶于DMF(10mL)中，加入2当量三乙胺，3当量的丙炔基苄基醚，0.2当量的Pd(PPh3)2Cl2和0.1当量的CuI。氮气氛下，80℃搅拌12小时。加100mL水稀释，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到250mg黄色固体化合物PY-811。
LCMS(ESI)：m/z，366.1[M+1]+。
步骤11：N-(3-氟-4-(3-羟丙基)-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-812)的制备
将化合物N-(4-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-811)(250mg)溶于MeOH(10mL)中，加入0.1当量的钯炭，氢气氛下，室温搅拌12小时。过滤，滤液减压浓缩，得到150mg黄色固体化合物PY-812。
LCMS(ESI)：m/z，280.2[M+1]+。
步骤12：8-氨基-6-氟-5-(3-羟丙基)-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-813)的制备
将化合物N-(3-氟-4-(3-羟丙基)-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-812)(150mg)溶于6N HCl(2mL)和EtOH(2mL)中，60℃搅拌3小时，过滤，减压浓缩，得到125mg黄色固体化合物PY-813。
LCMS(ESI)：m/z，238.1[M+1]+。
步骤13：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(3-羟丙基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-8)的制备
将化合物8-氨基-6-氟-5-(3-羟丙基)-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-813)(125mg，0.53mmol)和1.1当量的(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]吲哚嗪并嗪-3,6,10(4H)-三酮(皓元医药，152mg，0.58mmol)溶于10mL二甲苯中，加入0.3当量PPTS(吡啶对甲苯磺酸盐)(40mg，0.16mmol)。氮气氛下，120℃搅拌12小时。减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离纯化，冻干得到黄色固体化合物PY-8(42mg，收率17％)。
LCMS(ESI)：m/z，456.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝11.2Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.43(s,2H),5.24(s,2H),4.60(t,J＝5.2Hz,1H),3.49(q,J＝6.0Hz,2H),3.16(t,J＝6.0Hz,4H),2.87(t,J＝8.0Hz,2H),2.08(t,J＝6.0Hz,2H),1.88-1.87(m,2H),1.69(p,J＝6.4Hz,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例13：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-丙基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-8B)的制备
步骤1：N-(3-溴-5-氟苯基)乙酰胺(PY-8a)的制备
将3-溴-5-氟苯胺(50g，0.263mol)溶于二氯甲烷(700mL)，室温加入三乙胺(53.2g，0.526mol)，冰水浴下，缓慢滴加乙酸酐(40.3g，0.395mol)，加毕，室温反应2小时。加入水(400mL)，水相再用二氯甲烷萃取(200mL)，合并有机相，依次用饱和氯化钠溶液洗涤(300mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物再用正庚烷打浆，过滤得N-(3-溴-5-氟苯基)乙酰胺(54g，产率：88.4％)。
步骤2：(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(PY-8b)的制备
将N-(3-溴-5-氟苯基)乙酰胺(PY-8a)(54g，0.2327mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(700mL)，依次加入二(三叔丁基膦)钯(5.97g，11.64mmol)、三(邻甲基苯基)磷(7.07g，23.27mmol)、N-甲基二环己基胺(100g，0.5119mol)和1-丁烯-4-酸叔丁酯(66.1g，0.4654mol)，氮气置换三次后，100℃反应16小时。加乙酸乙酯(600mL)和水(1L)萃取，水相再用乙酸乙酯萃取(300mL)，合并有机相，依次用饱和氯化钠溶液洗涤(500mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系乙酸乙酯/正庚烷(0-30％)纯 化，得到(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(65g，产率：95.3％)。
步骤3：4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁酸叔丁酯(PY-8c)的制备
将(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(PY-8b)(65g，0.2218mol)溶于甲醇(1.3L)，氮气置换一次后，加入Pd/C(33g，0.3101mol)，加毕，氮气再置换一次后，用氢气置换两次，室温反应16小时。过滤，滤液减压浓缩，残余物用反相色谱法以洗脱剂体系乙腈/纯化水(0-90％)纯化，得到4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁酸叔丁酯(PY-8c)(55g，产率：84％)。
步骤4：4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸叔丁酯(PY-8d)的制备
将4-(3-乙酰氨基-5-氟苯基)丁酸叔丁酯(PY-8c)(55g，0.1864mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(600mL)，冰水浴下，分批加入NBS(36.5g，0.2051mol)，加毕，室温搅拌1h后，加入乙酸乙酯(300mL)和水(400mL)萃取，水相再用乙酸乙酯(100mL)萃取一次，合并有机相，依次用饱和氯化钠溶液洗涤(300mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系乙酸乙酯/正庚烷(0-30％)纯化，得4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸叔丁酯(59g，产率：84.6％)。
步骤5：4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸(PY-8e)的制备
将4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸叔丁酯(PY-8d)(59g，0.1577mol)溶于二氯甲烷(300mL)，冰水浴下，滴加HCl/二氧六环(400mL，1.6mol)，加毕，室温反应16小时，过滤，滤液减压浓缩，得4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸(42g，产率：83.7％)。
步骤6：N-(4-溴-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-8g)的制备
1L三口瓶中，加入4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氟苯基)丁酸(PY-8e)(42g，0.1321mol)和伊顿试剂(210g)，氮气置换3次后，85℃反应1小时。冰水浴下，缓慢将反应液滴加到水中(2L)，过滤，滤饼用水淋洗干净，滤液再减压浓缩干后，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系乙酸乙酯/二氯甲烷(0-30％)纯化，得粗品(30g)，再将粗品用乙酸乙酯(10mL)/石油醚(100mL)体系打浆，过滤后，得N-(4-溴-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(20g，收率50.4％)。
LCMS(ESI)：m/z，300.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.35(s,1H),8.61(d,J＝11.6Hz,1H),3.07(t,J＝6.0Hz,2H),2.69(dd,J＝7.2Hz,2H),2.24(s,3H),2.11(p,J＝6.4Hz,2H)。
步骤7：N-(4-(3-(苄氧基)丙-1-炔-1-基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-8h)的制备
氮气氛下，将N-(4-溴-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-8g)(1.8g，6.0mmol)溶解于无水DMF(50mL)中，依次加入(丙-2-烯-1-氧基)甲基)苯(4.34mL，29.99mmol)、碘化亚铜(228.4mg,1.2mmol)、双三苯基膦二氯化钯(841.9mg，1.2mmol)以及三乙胺(3.33mL，23.99mmol)，所得混合物用氮气置换三 次后，加热至100℃搅拌反应16小时。将反应液浓缩至干，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂:乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)纯化，得到化合物PY-8h(1.0g，收率45.6％)，黄色固体。
LCMS：m/z＝366.1[M+1]+；Rt＝1.108。
步骤8：N-(3-氟-8-氧代-4-丙基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-8i)的制备
将化合物PY-8h(2.5g，6.84mmol)溶解于甲醇(20mL)和四氢呋喃(20mL)中，加入钯炭(4.0g)，氢气置换三次，并加热至45℃搅拌4小时。将反应液过滤后，直接浓缩，粗品直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝264.1[M+1]+；Rt＝1.056。
步骤9：8-氨基-6-氟-5-丙基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-8j)的制备
将化合物PY-8i(1.91g，6.84mmol)溶解于6M盐酸(20mL)和乙醇(20mL)中，加热至60℃搅拌反应1小时。将反应液浓缩至干，粗品直接用于下一步反应。
步骤10：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-丙基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-8B)的制备
氮气氛下，将化合物PY-8j(960mg,1.0eq)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(PY-8f)(皓元医药)(1.17g，1.1eq)分散于甲苯(25mL)中，加入对甲苯磺酸吡啶(508mg，0.5eq)，加热至120℃搅拌反应16小时。将反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂:二氯甲烷/甲醇＝10:1)纯化，得到化合物PY-8B(340mg，收率18％)，棕色固体。
LCMS：m/z＝449.2[M+H]+；Rt＝3.313min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,J＝11.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.23(s,2H),3.15(q,J＝5.6Hz,4H),2.81(t,J＝7.7Hz,2H),2.08(t,J＝5.9Hz,2H),1.94-1.78(m,J＝7.1Hz,2H),1.58(h,J＝7.4Hz,2H),0.97(t,J＝7.3Hz,3H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例14：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(2-羟基乙氧基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-9)的制备
在化合物PY-13(20mg)的2ml水溶液中，分别加入1倍当量的四丁基溴化铵(TBAB)(15.3mg)、0.2倍当量的氯化钯催化剂(1.7mg)、250ml的环氧乙烷以及2.5倍当量的碳酸钾(16.4mg)。将反应置于25℃反应16小时，将反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)，冻干，得到粗品白色固体化合物PY-9，该白色固体化合物，进一步通过薄层色谱法分离纯化，得到3.03mg化合物PY-9。
LCMS(ESI)：m/z，467.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(d,J＝12.5Hz,1H),7.29(s,1H),6.51(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,2H),4.93(t,J＝5.4Hz,1H),4.14(t,J＝4.9Hz,2H),3.73(q,J＝5.1Hz,2H),3.16(dt,J＝11.1,6.1Hz,4H),2.02(dt,J＝12.6,6.6Hz,2H),1.86(h,J＝7.0Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-123.40。
制备例15：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟基甲基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-10)的制备
步骤1：8-氨基-5-溴-6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-10b)的制备
向化合物PY-8g(2g，6.66mmol，1eq)的乙醇(6mL)溶液中，加入6N HCl(6mL)，将反应置于80℃搅拌3小时，将反应液冷却至室温，减压浓缩，加入20mL水稀释，用碳酸氢钠溶液调节pH至中性，随后用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，使用饱和食盐水(30mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到黄色固体粗品化合物8-氨基-5-溴-6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-10b)(1.52g，产率：88％；纯度：91％)。
LCMS(ESI)：m/z，258[M+1]+，260[M+1]+。
步骤2：(S)-4-溴-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃 并[3’,4’:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-10d)的制备
向化合物PY-10b(1.52g，5.89mmol，1eq)的甲苯(20mL)溶液中，加入化合物PY-8f(1.55g，5.89mmol，1eq)和PPTS(1.48g，5.89mmol，1eq)，在氮气氛围下，将该反应置于120℃搅拌16小时，残余物通过硅胶柱层析色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体化合物PY-10d(1.3g，产率：45％；纯度：88％)。
LCMS(ESI)：m/z，485[M+H]+，487[M+H]+。
步骤3：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟基甲基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-10)的制备
向化合物PY-10d(1.30g，2.68mmol，1eq)的二氧六环(5mL)溶液中，分别加入(三丁基锡基)甲醇(2.84g，8.84mmol，3.3eq)、Xphos Pd G2(210.77mg，267.87μmol，0.1eq)，在氮气氛围下，将该反应置于90℃搅拌16小时，减压浓缩，加水和二氯甲烷(50mL/50mL)稀释，有固体析出，过滤，滤饼单独收集，滤液用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，再使用饱和食盐水(50mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物和滤饼通过硅胶柱层析色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体化合物PY-10(649mg，产率：55.5％，纯度：100％)。
LCMS(ESI):m/z，437[M+H]+。
制备例16：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-羧酸(PY-10A)和(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-10B)的制备
步骤1：N-(3-氟-4-甲酰基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-10-1)的制备
在0℃，向N-(3-氟-4-甲基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(2g，8.5mmol，1.0eq)与MnO2(11.09g，127.52mmol，15eq)的氯仿(100mL)溶液中加入H2SO4(4.34g，44.21mmol，5.2eq)，反应逐渐恢复室温并继续反应16小时。过滤后用碳酸氢钠饱和溶液调节pH至中性，二氯甲烷(30mL×3)萃取，浓缩得棕黄色固体粗品(2.1g)，不经纯化直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，250.1[M+1]+。
步骤2：4-乙酰氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-羧酸(PY-10-2)的制备
在25℃，向化合物N-(3-氟-4-甲酰基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.1g，2.21mmol，1eq)和亚氯酸钠(1.20g，13.24mmol，6eq)、磷酸二氢钠(534mg，4.41mmol，2eq)的甲醇/水＝1/1(30ml)的溶液中加入二甲基二丁烯(1.55g，22.07mmol，10eq)。反应在50℃搅拌2小时。饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8，二氯甲烷(30mL×3)萃取回收原料，后水相用2N HCl调节pH至2，水相用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，浓缩得化合物PY-10-2(324mg，收率：55.36％)。
LCMS(ESI)：m/z，266.0[M+1]+。
步骤3：4-氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-羧酸(PY-10-3)的制备
将化合物4-乙酰氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-羧酸(415mg，1.67mmol，1eq)加入到NaOH(5M，15mL)溶液中，反应在80℃搅拌2小时，用2N稀盐酸调节pH至2后，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相浓缩得化合物PY-10-3(320mg，收率：85.6％)。
LCMS(ESI)：m/z:224.0[M+1]+。
步骤4：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-羧酸(PY-10A)和(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-10B)的制备
将化合物4-氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-羧酸(364.64mg，1.43mmol，1eq)与化合物(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]中氮茚-3,6,10(4H)-三酮(377.42mg，1.43mmol，1eq)和PPTS(360.29mg，1.43mmol，1eq)溶于甲苯(15mL)溶液中并在120℃搅拌16小时，减压除去溶剂后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇10:1到5:1)纯化，得棕色油状化合物粗品，然后经过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)分离，冻干，得化合物PY-10A(18.19g，收率：2.82％)，LCMS(ESI)：m/z:451.1[M+1]+；和化合物PY-10B(46mg，收率：7.9％)，LCMS(ESI)：m/z:407.1[M+1]+。
制备例17：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-10Car)的制备
步骤1：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(4-硝基苯基)碳酸酯(PY-10Cara)的制备
在室温下将化合物PY-10(8.0mg，0.018mmol，1.0eq)、双(4-硝基苯)碳酸酯(44.6mg，0.147mmol，8.0eq)和N,N-二异丙基乙胺(28.4mg，0.220mmol，12.0eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中50℃搅拌16h。LCMS显示反应完全。反应液减压浓缩，用薄层色谱板展开剂体系二氯甲烷/甲醇(15/1)纯化，得到黄色油状化合物PY-10Car-a(18mg，超重不计算收率)。
LCMS(ESI)：m/z，602.3[M+H]+。
步骤2：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-10Car)的制备
在室温下将化合物PY-10Car-a(18.0mg，不纯)、氨基乙醇(1.83mg，0.030mmol)和N,N-二异丙基乙胺(11.6mg，0.090mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，25℃搅拌0.5h。LCMS显示反应完全。反应液经过高效液相色谱制备(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)，洗脱液冻干后得到白色固体产物PY-10Car(4.14mg，7.56μmol，二步收率：42％)。
LCMS(ESI):m/z,524.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.19(t,J＝5.6Hz,1H),6.54(s,1H),5.44(s,2H),5.27(d,J＝4.4Hz,3H),4.63(t,J＝5.6Hz,1H),3.30–3.23(m,5H),3.18(s,2H),3.04(q,J＝6.0Hz,2H),2.08(s,2H),1.86(dt,J＝15.2,7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例18：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并 [de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-11)的制备
步骤1：8-氨基-6-氟-5-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-111)的制备
于100℃，将化合物N-(3-氟-4-甲氧基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-88)(100mg)的HCl(7N，10毫升)溶剂搅拌2小时。缓慢加入饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭反应并调节pH值至中性(pH 7)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体化合物PY-111(66mg，79％)。
LCMS(ESI)：m/z，210.1[M+H]+。
步骤2：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-11)的制备
向化合物8-氨基-6-氟-5-甲氧基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-111)(20mg)的甲苯(10mL)溶剂中加入PPTS(0.67eq，16mg)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(1eq，25mg)，于140℃反应16小时。减压浓缩去除甲苯，加入5毫升DMF，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到白色固体化合物PY-11(8.4mg，产率20％)。
LCMS(ESI)：m/z，437.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.85(d,J＝12.5Hz,1H),7.30(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,2H),3.94(s,3H),3.14(dt,J＝11.2,6.0Hz,4H),2.05(q,J＝6.4,5.8Hz,2H),1.88(dq,J＝14.4,7.2Hz,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例19：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮和(1R,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-12A和PY-12B)的制备
步骤1：(E)-N-(3-氟-7-(羟基亚氨基)-4-甲氧基-8-氧基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-121)的制备
于0℃，向化合物N-(3-氟-4-甲氧基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-88)(200mg)的10mL四氢呋喃溶液中分别加入3当量的叔丁醇钾四氢呋喃溶液和亚硝酸叔丁酯，于0℃搅拌1小时，加30mL水稀释，每次用10mL乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到180mg黄色固体化合物PY-121。
LCMS(ESI)：m/z，281.1[M+1]+。
步骤2：N,N’-(3-氟-4-甲氧基-8-氧基-5,6,7,8-四氢萘-1,7-二酰基)二乙酰胺(PY-122)的制备
室温，向化合物(E)-N-(3-氟-7-(羟基亚氨基)-4-甲氧基-8-氧基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-121)(180mg)加入1mL乙酸酐和2mL乙酸，加入锌粉(35mg)，室温搅拌4小时。将反应液减压浓缩，加入100mL水稀释，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到150mg白色固体化合物PY-122。
LCMS(ESI)：m/z，309.1[M+1]+。
步骤3：N-(8-氨基-6-氟-5-甲氧基-1-氧基-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酰胺(PY-123)的制备
将化合物N,N’-(3-氟-4-甲氧基-8-氧基-5,6,7,8-四氢萘-1,7-二酰基)二乙酰胺(PY-122)(150mg)溶于6N的HCl(2mL)和EtOH(2mL)中，60℃搅拌3小时。将反应液减压浓缩，得到115mg粗品，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)：m/z，267.1[M+1]+。
步骤4：N-(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H苯并[de]吡喃并[3'，4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酰胺(PY-124)的制备
向N-(8-氨基-6-氟-5-甲氧基-1-氧基-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酰胺(PY-123)(80mg)的甲苯溶液中加入1当量的(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(皓元医药)(92mg)和0.5当量的PPTS(24mg)，120℃搅拌12小时。将反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到55mg的黄色固体混合物PY-124。
LCMS(ESI)：m/z，494.2[M+1]+。
步骤5：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮和(1R,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-12A和PY-12B)的制备
将N-(9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲氧基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H，12H苯并[de]吡喃[3'，4:6,7]吲哚嗪[1,2-b]喹啉-1-基)乙酰胺(PY-124)(55mg)溶于3毫升6N的盐酸中，85℃搅拌5小时。将反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干分别得到化合物PY-12A(4.55mg)和化合物PY-12B(6.24mg)。
PY-12A(LCMS保留时间0.651min)：
LCMS(ESI)：m/z，452.2[M+1]+，Rt＝0.651。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.87(d,J＝12.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.53(s,1H),5.62(d,J＝19.2Hz,1H),5.46–5.29(m,3H),4.38(s,1H),3.95(s,3H),3.28–3.03(m,4H),2.08(s,2H),1.87(dd,J＝9.2,7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
PY-12B(LCMS保留时间0.677min)：
LCMS(ESI)：m/z，452.2[M+1]+，Rt＝0.677。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,2H),8.01(d,J＝12.4Hz,1H),7.34(s,1H),6.57(s,1H),5.90(d,J＝19.2Hz,1H),5.60-5.30(m,3H),5.08(s,1H),4.00(d,J＝1.2Hz,3H),3.15(t,J＝12.8Hz,3H),2.12(t,J＝13.6Hz,1H),1.97-1.76(m,J＝7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例20：(S)-9-乙基-5-氟-4,9-二羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-13)的制备
步骤1：N-(3-氟-4-羟基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-131)的制备
向化合物N-(3-氟-4-甲氧基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-88)(200mg)的DCM溶液中加入3当量的AlCl3，于60℃反应2小时。缓慢加入饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭反应并继续调节pH值至3～4，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体化合物PY-131(130mg，68％)。
LCMS(ESI)：m/z，238.0[M+H]+，260.1[M+Na]。
步骤2：8-氨基-6-氟-5-羟基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-132)的制备
于100℃，将化合物N-(3-氟-4-羟基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-131)(70mg)的HCl(12N，3.5mL)溶液搅拌16小时。缓慢加入饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭反应，调节pH值至3～4，用乙酸乙酯(30×3mL)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，加入5mL MeCN，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到黄色固体化合物PY-132(12mg，20％)。
LCMS(ESI)：m/z，196.1[M+H]+。
步骤3：(S)-9-乙基-5-氟-4,9-二羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-13)的制备
向8-氨基-6-氟-5-羟基-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-132)(15mg)的甲苯(10mL)溶液中，加入PPTS(0.67eq，12.9mg)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(1eq，20.2mg)，于140℃反应16小时。减压除去甲苯，加入5mL的DMF，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到白色固体化合物PY-13(3.2mg)。
LCMS(ESI)：m/z，423.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77(d,J＝11.9Hz,1H),7.26(s,1H),6.50(s,1H),5.42(s,2H),5.22(s,2H),3.11(t,J＝6.1Hz,2H),3.03(t,J＝6.2Hz,2H),2.01(q,J＝6.2Hz,2H),1.87(dq,J＝14.5,7.1Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例21：(S)-4,11-二乙基-8,10-二氟-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-14)的制备
步骤1：1-(2,4-二氟-3-甲氧基苯基)丙-1-酮(PY-14-c)的制备
在-70℃，向化合物1,3-二氟-2-甲氧基苯(PY-14-a)(2g，13.88mmol，1eq)的20mL无水THF溶剂中，缓慢滴加n-BuLi(1.07g，10.41mL，16.65mmol，1.2eq，1.60M)，在该同一温度条件下搅拌半小时，随后，加入化合物N-甲氧基-N-甲基丙酰胺(PY-14-b)(4.55g，34.69mmol，2.5eq)，在-70℃继续搅拌半小时，去掉低温浴升温至25℃搅拌16小时。LCMS表明有产物生成，在室温条件下，使用5mL饱和氯化铵溶液猝灭反应，再使用3×10mL乙酸乙酯提取有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化，得淡黄色油状标题化合物(1.6g，产率：54％)。
LCMS(ESI)：m/z，214.9[M+H]+。
步骤2：1-(2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)丙-1-酮(PY-14-d)的制备
在-40℃，向1-(2,4-二氟-3-甲氧基苯基)丙-1-酮(2.20g，10.99mmol，1eq)的22mL H2SO4溶剂中，缓慢滴加发烟硝酸(699.74mg，95％，474.82μL，10.55mmol，0.96eq)，在该温度下搅拌1小时。反应液倒入冰水中，使用10mL无水乙醇洗涤反应瓶，加入100mL DCM提取该有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)纯化，干燥得淡黄色油状化合物1-(2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)丙-1-酮(1.2g，产率：34％)。
LCMS(ESI):m/z，246.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24–8.13(m,1H),4.16(t,J＝2.1Hz,3H),2.89–2.81(m,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤3：1-(6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯基)丙-1-酮(PY-14-e)的制备
向1-(2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯基)丙-1-酮(PY-14-d)(200mg，815.73μmol，1eq)的10mL无水乙醇溶剂中，分别加入铁粉(250.57mg，31.88μL，4.49mmol，5.5eq)、水(339.85mg，339.85μL，18.86mmol，23.12eq)以及浓盐酸(16.36mg，37.39μL，448.65μmol，0.55eq，12M)，在氮气氛围下，将该反应置于80℃搅拌16小时。反应液经减压浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化，得白色固体化合物1-(6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯基)丙-1-酮(141mg，产率：80％)。
LCMS(ESI)：m/z，216.1[M+H]+。
步骤4：1-(6-氨基-2,4-二氟-3-羟基苯基)丙-1-酮(PY-14-f)的制备
向1-(6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯基)丙-1-酮(PY-14-e)(300mg，1.39mmol，1eq)的10mL DCM溶剂中，加入3倍当量的AlCl3(557.61mg，4.18mmol，3eq)，在氮气氛围下，将该反应置于70℃搅拌4小时。使用100mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，再使用2×100mL DCM提取有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得黄色固体粗品化合物1-(6-氨基-2,4-二氟-3-羟基苯基)丙-1-酮(165mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，202.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(s,1H),6.42(dd,J＝13.0,2.1Hz,1H),3.45(s,2H),2.87-2.82(m,2H),1.05(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤5：(S)-4,11-二乙基-8,10-二氟-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-14)的制备
向1-(6-氨基-2,4-二氟-3-羟基苯基)丙-1-酮(PY-14-f)(30mg，149.13μmol，1eq)的10mL甲苯溶剂中，分别加入PPTS(25.11mg，99.92μmol，0.67eq)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(皓元医药)(30mg，149.13μmol，1eq)，在氮气氛围下，将该反应置于130℃搅拌16小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得黄色固体(35.55mg，55.65％)。
LCMS(ESI)：m/z，429.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(d,J＝11.4Hz,1H),7.26(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.31(s,2H),3.22–3.15(m,2H),1.86(hept,J＝7.1Hz,2H),1.32(t,J＝7.4Hz,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例22：(S)-4-(氨基甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-16)的制备
步骤1：N-(4-((苄氨基)甲基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-16d)的制备
向化合物N-(3-氟-4-甲酰基-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.22g，8.5mmol，1eq)和苯甲胺(642.29μL)的DCM(110mL)溶液中，加入NaBH(OAc)3(2.06g，9.79mmol，2eq)。将反应置于室温搅拌12小时。加水(100mL)淬灭，用DCM(50mL)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚：1/5-1/2)纯化，得到棕色油状物N-(4-((苄氨基)甲基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-16d)(499.5mg，收率：30％)。
LCMS(ESI)：m/z，341[M+H]+。
步骤2：8-氨基-5-((苄氨基)甲基)-6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-16e)的制备
向化合物N-(4-((苄氨基)甲基)-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(499.5mg，1.47mmol，1eq)中加入6N HCl(3mL)和EtOH(3mL)，将反应置于60℃搅拌3小时，减压浓缩得到棕色油状物粗品8-氨基-5-((苄氨基)甲基)-6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-16e)(517.9mg)。
LCMS(ESI)：m/z，341[M+H]+。
步骤3：(S)-4-((苄氨基)甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-16g)的制备
向化合物8-氨基-5-((苄氨基)甲基)-6-氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(517.9mg，1.22mmol，1eq)和化合物(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]中氮茚-3,6,10(4H)-三酮(皓元医药)(319.87mg，1.22mmol，1eq)的甲苯(15mL)溶液中，加入PPTS(305.35mg，1.22mmol，1eq)，将反应置于120℃搅拌12小时。加水(100mL)淬灭，后用DCM(50mL)萃取三次，合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法 (洗脱剂：二氯甲烷/甲醇：12/1–11/1)纯化，得到棕色油状物(S)-4-((苄氨基)甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-16g)(466mg，收率：73％)。
LCMS(ESI)：m/z，526[M+H]+。
步骤4：(S)-4-(氨基甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-16)的制备
氢气氛围下，向化合物(S)-4-((苄氨基)甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(218mg，414.78μmol，1eq)的MeOH(10mL)溶液中，加入Pd/C(100mg，939.67μmol，2.27eq)和Pd(OH)2(100mg，712.1μmol，1.72eq)，将反应置于室温搅拌5小时，用硅藻土过滤钯碳后浓缩，得到棕色固体产物(S)-4-(氨基甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-16)(296.6mg，收率：82％)。
LCMS(ESI)：m/z，436[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,1H),7.75(d,J＝11.2Hz,1H),7.31(s,1H),6.54(s,1H),5.44(s,2H),5.24(s,2H),4.00(s,2H),3.25(t,J＝5.8Hz,2H),3.16(t,J＝6.2Hz,2H),2.09(t,J＝6.2Hz,2H),1.87(hept,J＝7.0Hz,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-113.60。
制备例23：2-羟基乙基(S)-((9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基)氨基甲酸酯(PY-16Car)的制备
步骤1：2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基(4-硝基苯基)羧酸酯(PY-16Carb)的制备
在0℃，将叔丁基二甲基羟乙氧基硅烷(2.0g，11.34mmol，1.0eq)加入双(4-硝基苯)碳酸酯(NPC)(5.18g，17.01mmol，1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA， 4.40g，34.03mmol，3.0eq)的四氢呋喃(120mL)溶液中，25℃搅拌16h。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系乙酸乙酯/石油醚(0-10％)纯化，得到黄色油状化合物PY-16Carb(2.70g，7.91mmol，收率：70％)。
1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δ8.28(d,J＝9.2Hz,2H),7.38(d,J＝9.2Hz,2H),4.36(dd,J＝5.6,4.1Hz,2H),3.91(dd,J＝5.6,4.1Hz,2H),0.91(s,9H),0.10(s,6H)。
步骤2：2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基(S)-((9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基)氨基甲酸酯(PY-16Carc)的制备
在室温，将化合物2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基(4-硝基苯基)羧酸酯(35.75mg，0.105mmol，1.2eq)和化合物(S)-4-(氨基甲基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H，13H-苯并[de]吡喃并[3'，4'：6,7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10,13-二酮(38.0mg，0.087mmol，1.0eq)和N,N-二异丙基乙胺(33.84mg，0.262mmol，3.0eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中，25℃搅拌1小时。反应液直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，638.3[M+H]+。
步骤3：2-羟基乙基(S)-((9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基)氨基甲酸酯(PY-16Car)的制备
将MeOH(2mL)和4N盐酸加入到上一步的反应液中，25℃搅拌1小时。反应液经过高效液相色谱制备(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)，洗脱液冻干后得到白色固体产物PY-16Car(20.4mg，0.039mmol，二步收率：45％)。
LCMS(ESI)：m/z，524.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(d,J＝11.2Hz,1H),7.65(t,J＝5.6Hz,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.24(s,2H),4.71(t,J＝5.2Hz,1H),4.43(d,J＝5.2Hz,2H),3.96(t,J＝5.2Hz,2H),3.52(q,J＝5.2Hz,2H),3.24(t,J＝6.0Hz,2H),3.15(t,J＝6.4Hz,2H),2.12–2.02(m,2H),1.87(hept,J＝7.2Hz,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例24：(S)-4-(2-氨基乙氧基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-17)的制备

步骤1：(S)-(2-((9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧-2,3,9,10,13,15-六氢-1H，12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(PY-17-a)的制备
向化合物PY-13(41mg，38.63μmol，1.0eq)的DMF溶剂中，加入碳酸钾(10.7mg，77.26μmol，2.0eq)，于25℃搅拌半小时，随后，在同一温度下，加入(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(21.6mg，91.6μmol，2.5eq)，于25℃搅拌16小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得灰色固体化合物PY-17-a(5mg，产率：23％)。
LCMS(ESI):m/z，566.2[M+H]+。
步骤2：(S)-4-(2-氨基乙氧基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-17)的制备在冰水浴条件下，向化合物PY-17-a(7mg，12.38μmol，1.0eq)的5mL DCM溶剂中，缓慢滴加0.5mL TFA，在该冰浴条件下，自然升温至25℃搅拌16小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物PY-17(1.97mg，产率：34％)。
LCMS(ESI)：m/z，466.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(s,3H),7.90(d,J＝12.3Hz,1H),7.30(s,1H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.27(s,2H),4.27(t,J＝5.1Hz,2H),3.17(t,J＝6.1Hz,5H),2.06(t,J＝6.2Hz,2H),1.87(p,J＝6.8Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例25：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(2-羟基乙基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-18)的制备

步骤1：N-(4-(2-(苄氧基)乙基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-18c)的制备
氮气氛下，向化合物N-(4-溴-3-氟-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(200mg)的12.5mL的甲苯与水(体积比为4比1)的混合溶剂中，依次分别加入3.3倍当量化合物(2-(苄氧基)乙基)三氟硼酸钾(532mg)，3倍当量碳酸钾，30mg醋酸钯以及88mg的S-Phos配体，在氮气氛下，将该反应置于100℃搅拌16小时，减压浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:8)纯化，得到140mg白色固体化合物N-(4-(2-(苄氧基)乙基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-18c)(产率：59％)。
LCMS(ESI)：m/z，356[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),8.29(d,J＝13.3Hz,1H),5.10(t,J＝5.3Hz,1H),4.50(dd,J＝5.4,J＝2.2Hz,2H),3.10(t,J＝6.2Hz,2H),2.67(dd,J＝7.3,J＝5.8Hz,2H),2.16(s,3H),1.99(p,J＝6.3Hz,2H)。
步骤2：N-(3-氟-4-(2-羟基乙基)-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-18d)的制备
向化合物N-(4-(2-(苄氧基)乙基)-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(140mg)的10mL的甲醇溶剂中，分别加入0.25倍当量的钯碳催化剂和0.25倍当量的Pd(OH)2催化剂，在氢气氛下，25℃反应16小时。该反应滤出催化剂后，经减压浓缩干燥，得到苍白色固体粗产物化合物N-(3-氟-4-(2-羟基乙基)-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-18d)(100mg，粗品收率不计)。
LCMS(ESI)：m/z，266[M+H]+，288[M+Na]+。
步骤3：8-氨基-6-氟-5-(2-羟基乙基)-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-18e)的制备
向化合物N-(3-氟-4-(2-羟乙基)-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(80mg)加入4mL的6N HCl中，在40℃反应3小时，该反应液冷却至室温，加水稀释，用2N的稀盐酸调节pH值至3～5，再使用乙酸乙酯提取有机相，该有机相再使用饱和食盐水洗涤，随后加入无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到30mg黄色固体化合物 8-氨基-6-氟-5-(2-羟基乙基)-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-18e)(产率：37％)。
LCMS(ESI)：m/z，224[M+H]+。
步骤4：(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(2-羟基乙基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-18)的制备
氮气氛下，向化合物8-氨基-6-氟-5-(2-羟乙基)-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(30mg)的5ml的甲苯溶剂中，分别加入0.67倍当量PPTS(18.8mg)和1倍当量化合物(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]中氮茚-3,6,10(4H)-三酮(29.4mg)(皓元医药)，将该反应置于130℃搅拌16小时，经过高效液相色谱制备(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)分离，冻干后，得到6.0mg黄色固体化合物(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(2-羟基乙基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-18)(产率：12％)。
LCMS(ESI)：m/z，451[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.71(dd,J＝11.3,6.3Hz,1H),7.33–7.28(m,1H),6.54(s,1H),5.43(s,2H),5.23(d,J＝11.2Hz,2H),4.88(t,J＝5.3Hz,1H),3.61(d,J＝6.5Hz,2H),3.20–3.12(m,4H),3.01(d,J＝6.6Hz,2H),2.07(s,2H),1.87(hept,J＝7.0Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.5。
制备例26：(S)-4-(3-氨基丙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-19)的制备
步骤1：(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)烯丙基)氨基甲酸叔丁酯 (PY-19c)和(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙-1-en-1-基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19c’)混合中间体的制备
向化合物(S)-4-溴-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H，13H-苯并[de]吡喃并[3'，4'：6,7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10,13-二酮(20mg)的5mL甲苯溶剂中，分别加入0.1倍当量的双(叔丁基膦)钯(2.1mg)、0.2倍当量的三(邻甲苯基)膦(2.5mg)、6倍当量的DIPEA(41μL)、2.5倍当量化合物烯丙基氨基甲酸叔丁酯(17.8mg)，将该反应置于120℃搅拌16小时，反应液浓缩后通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1到10:1)纯化，减压浓缩，得10mg化合物(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19c)和(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙-1-en-1-基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19c’)的混合物(产率：43％；纯度：77％)。
步骤2：(S)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19d)的制备
向混合物(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19c)和(S,E)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙-1-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19c’)(30mg)的5mL甲醇溶剂中，分别加入0.25倍当量的Pd/C(14.2mg)和0.25倍当量的Pd(OH)2(9.4mg)，在氢气氛下，将该反应置于25℃搅拌16小时，反应液过滤后，减压浓缩，得19.6mg粗品化合物(S)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(PY-19d)(产率：65％)，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)：m/z，564.3[M+1]+。
步骤3：(S)-4-(3-氨基丙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-19)的制备
在冰水浴条件下，向化合物(S)-(3-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(16.3mg，纯度：82％)的2.4mL二氯甲烷溶剂中，缓慢加入0.8mL的TFA，该反应自然升温至25℃搅拌16小时。在减压条件下浓缩反应液，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1到8:1)纯化得粗品，然后经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱 为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相水Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干，得2.53mg化合物(S)-4-(3-氨基丙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-19)(产率：21％)。
LCMS(ESI)：m/z，473.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),7.75(d,J＝11.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.53(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,2H),3.16(d,J＝6.5Hz,6H),2.88(s,2H),2.82(s,2H),2.08(t,J＝6.2Hz,2H),1.87(p,J＝7.0Hz,2H),1.76(s,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-113.12。
制备例27：(S)-4-(2-氨基乙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-20)的制备
步骤1：(S)-(2-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)乙基)氨基甲酸苄酯(PY-20a)的制备
将化合物PY-10d(90.91mg，66％，123.63μmol，1eq)溶于二氧六环(4mL)/水(1mL)，然后加入苄氧羰基氨基乙基三氟硼酸钾(148.91mg，494.53μmol，4eq)、三邻甲苯磷(18.81mg，61.82μmol，0.5eq)和磷酸钾(78.73mg，30.71μL，370.90μmol，3eq)，氮气氛下，该反应液在90℃下搅拌12小时。反应液减压浓缩，过滤，残留液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得白色固体产物PY-20a(10mg，收率：13.86％)。
LCMS(ESI)：m/z，584.2[M+H]+。
步骤2：(S)-4-(2-氨基乙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-20)的制备
将化合物PY-20a(10mg，17.13μmol，1eq)溶于MeCN(0.5mL)，向该溶液中加入TMSI(56mg，40μL，279.87μmol，16.334eq)，该溶液在25℃下搅拌12小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从3％到33％洗脱)纯化，得白色固体产物(5.16mg，收率：67％，纯度：97.64％)。
LCMS(ESI)：m/z，450.2[M+H]+。
制备例28：(S)-4-乙基-8-氟-4,9-二羟基-11-丙基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-21-A)的制备
步骤1：1-(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)丁-1-酮(PY-21-Ab)的制备
在冰水浴条件下，向10mL无水苯溶剂中加入BCl3(1eq，830.04mg，7.08mmol)，然后加入3-氟-4-甲氧基苯胺(1eq，1g，7.08mmol)溶在20mL无水苯溶剂中的溶液，在氮气氛下，依次加入丁腈(2eq，979.24mg，14.17mmol，1.23mL)和AlCl3(1.1053eq，1.04g，1.04mol)，在100℃反应16个小时。于冰水浴冷却之后，缓慢加入2M的50mL盐酸，该混合液在80℃条件下再搅拌1小时。在冰水浴下，使用100mL水猝灭反应，再使用2×100mL乙酸乙酯提取有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到淡黄色固体化合物PY-21-Ab(440mg，产率：29％)。
LCMS(ESI)：m/z，212.1[M+H]+。
步骤2：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-11-丙基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-21-Ad)的制备
向1-(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)丁-1-酮(PY-21-Ab)(1eq，62.31mg，236.70μmol)的10mL的甲苯溶液中，分别加入(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]中氮茚-3,6,10(4H)-三酮(1eq，62.31mg，236.70μmol)和PPTS(1eq，59.48mg，236.70μmol，10mL)，在氮气氛围下，将该反应置于130℃搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到黄色固体化合物PY-21-Ad(80mg，产率：77％)。
LCMS(ESI):m/z，439.1[M+H]+。
步骤3：(S)-4-乙基-8-氟-4,9-二羟基-11-丙基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-21-A)的制备
向化合物PY-21-Ad(10mg，22.81μmol，1eq)的4mL的DCM溶液中，加入AlCl3(18.25mg，136.84μmol，6eq)。在70℃反应条件下，搅拌16小时。使用100mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，再使用2×100mL乙酸乙酯提取有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得到白色固体化合物PY-21-A(4.3mg，产率：44％)。
LCMS(ESI):m/z，425.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),7.91(dd,J＝11.9,2.8Hz,1H),7.64–7.57(m,1H),7.26(s,1H),6.49(s,1H),5.43(s,2H),5.27(d,J＝3.1Hz,2H),3.06(t,J＝7.9Hz,2H),1.86(dq,J＝14.1,7.0Hz,2H),1.73(p,J＝7.5Hz,2H),1.05(t,J＝7.3Hz,3H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例29：(S)-4-(4-氨基丁基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-24)的制备
步骤1：(S)-(4-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丁-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(PY-24c)的制备
向化合物(S)-4-溴-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H，13H-苯并[de] 吡喃并[3'，4'：6,7]中氮茚并[1，2-b]喹啉-10,13-二酮(200mg)的15mL甲苯溶剂中，分别加入0.1倍当量的二(三叔丁基膦)钯(21mg)、0.2倍当量的三(邻甲基苯基)磷(25mg)、6倍当量的DIPEA(410μL)、2.5倍当量的丁-3-烯-1-基氨基甲酸叔丁酯(176mg)，将该反应置于120℃搅拌16小时。反应液浓缩后，通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1到10:1)纯化，减压浓缩，得129mg粗品(产率：54％)，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)：m/z，576.3[M+1]+。
步骤2：(S)-(4-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(PY-24d)的制备
向6.8mg的粗品(S)-(4-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丁-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的3mL甲醇溶剂中，分别加入0.25倍当量的Pd/C(1.3mg)和0.25倍当量的Pd(OH)2(1.7mg)，在氢气氛下，将该反应置于25℃搅拌16小时，反应液过滤后，减压浓缩的6.8mg粗品化合物(S)-(4-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(PY-24d)(产率：55％，纯度：63％)，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI)：m/z，578.2[M+1]+。
步骤3：(S)-4-(4-氨基丁基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-24)的制备
在冰水浴条件下，向化合物(S)-(4-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(6.8mg，纯度：63％)的2.1mL二氯甲烷溶剂中，缓慢加入0.7mL的TFA，该反应自然升温至25℃搅拌16小时，经高效液相色谱制备(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相水Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得0.35mg化合物PY-24(产率：5.4％)。
LCMS(ESI)：m/z，473.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),7.78-7.71(m,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,2H),3.16(d,J＝6.0Hz,6H),2.86(s,2H),2.76(s,2H),2.08(s,2H),1.88(q,J＝7.0Hz,2H),1.59(s,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.93。
制备例30：2-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酸(PY-25)的制备
步骤1：2-(8-乙酰胺基-6-氟-5-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酸甲酯(PY-251)的制备
将N-(3-氟-4-甲基-8-氧-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(2g，8.5mmol)置于100mL三口瓶中，氮气氛下，加入30mL THF溶解。降温至-78℃，将LDA(10.6mL，2M在THF中)-缓慢加入到上述反应液中，加毕-78℃反应1h。再将溴乙酸甲酯(1.3g，8.5mmol)加入到反应液中，升至室温反应16h。将反应液加入150mL水中，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(80％PE/20％EA)纯化，得到800mg微黄色固体化合物2-(8-乙酰胺基-6-氟-5-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酸甲酯(PY-251)，收率：30.6％。
步骤2：2-(8-氨基-6-氟-5-甲基-1-氧-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酸(PY-252)的制备
将2mL NaOH(2mol/mL)水溶液加入到化合物2-(8-乙酰胺基-6-氟-5-甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酸甲酯(PY-251)(400mg,1.3mol)的EtOH(8mL)溶液中，75℃反应16h。将反应液用2N盐酸调节pH至pH＝7-8，减压浓缩，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到200mg粗产品，直接用于下一步。
步骤3：2-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酸(PY-25)的制备
将2-(8-氨基-6-氟-5-甲基-1-氧-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酸(PY-252)(200mg,0.796mmol)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(251mg，0.954mmol)置于50mL三口瓶中，加入甲苯(10mL，50v)，再加入对甲苯磺酸(27.3mg，0.159mmol)和邻甲苯酚(0.6mL，3v)，120-125℃反应16h。将反应液减压浓缩，残余物通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860； 色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到70mg黄色粉末化合物PY-25，收率18.38％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),7.76(d,J＝11.1Hz,1H),7.31(s,1H),6.51(s,1H),5.44(s,2H),5.36(s,2H),3.83–3.74(m,1H),3.19-3.05(m,2H),2.70-2.64(m,1H),2.58-2.53(m,1H),2.38(s,3H),2.23(d,J＝13.6Hz,1H),2.06-1.95(m,1H),1.87(tt,J＝14.1,7.0Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例31：2-((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-N-(2-羟乙基)乙酰胺和2-((1R,9S)-9-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-N-(2-羟乙基)乙酰胺(PY-25A和PY-25B)的制备
冰浴下，向化合物2-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧基-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并并[3’,4]：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酸(PY-25)(18mg，37.62μmol，1.0eq)的DMF(3mL)的溶液中加入HATU(17mg，45.14μmol，1.2eq)、DIEPA(20mg，150.5μmol，4eq)、乙醇胺(2.3mg，37.62μmol，1.0eq)，加毕升至室温，搅拌2小时。将反应液减压浓缩，残余物经过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离纯化，得到白色固体化合物PY-25A(4.01mg，收率18％)和PY-25B(6.62mg，收率30％)。
PY-25A(LCMS保留时间1.73min)：
LCMS(ESI)：m/z，522.3[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07(t,J＝4.0Hz,1H),7.76(d,J＝12.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.44(s,2H),5.34(s,2H),4.67(t,J＝4.0Hz,1H),3.78-3.77(m,1H),3.44-3.36(m,3H),3.18-3.14(m,4H),2.45-2.44(m,1H),2.39(s,3H),2.13-2.11(m,1H),1.97-1.80(m,3H),0.87(t,J＝8.0Hz,3H)。
PY-25B(LCMS保留时间1.83min)：
LCMS(ESI)：m/z，522.2[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(brs,0.36H,HCOOH),8.08-8.06(m,1H),7.75(d,J＝12.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.44(s,2H),5.34(s,2H),4.66(s,1H),3.78-3.76(m,1H),3.38-3.36(m,2H),3.15-3.12(m,,4H),2.48–2.30(m,5H),2.14(s,1H),1.88-1.85(m,3H),0.87(t,J＝8.0Hz,3H)。
制备例32：(S)-N-((9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(PY-26)的制备
0℃，向化合物PY-16(30mg，68.89μmol，1eq)和2-羟基乙酸(6.29mg，82.67μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(26.71mg，206.68μmol，3eq)和HATU(31.43mg，82.67μmol，1.2eq)。加毕，25℃反应2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％FA)-乙腈，乙腈的洗脱比例从28％到37％洗脱)纯化，得到白色固体化合物PY-26(4.37mg，收率＝12.8％)。
LCMS(ESI)：m/z，494.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06-8.05(m,1H),7.74(d,J＝12Hz,1H),7.31(s,1H),6.54(s,1H),5.43-5.42(m,3H),5.25(s,2H),4.56(d,J＝8.0Hz,2H),3.82(d,J＝8.0Hz,2H),3.26-3.23(m,2H),3.15-3.15(m,2H),2.08-2.05(m,2H),1.90-1.83(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.11。
制备例33：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-27)的制备

步骤1：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(4-硝基苯基)碳酸酯(PY-27a)的制备
在室温，将化合物PY-10(8.0mg，0.018mmol，1.0eq)、双(4-硝基苯)碳酸酯(44.6mg，0.147mmol，8.0eq)和N,N-二异丙基乙胺(28.4mg，0.220mmol，12.0eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，50℃搅拌16h。反应液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系二氯甲烷/甲醇(15/1)纯化，得到黄色油状化合物PY-27a(18mg)。
LCMS(ESI)：m/z，602.3[M+H]+。
步骤2：(S)-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基(2-羟乙基)氨基甲酸酯(PY-27)的制备
在室温，将化合物PY-27a(18.0mg，不纯)、氨基乙醇(1.83mg，0.030mmol)和N,N-二异丙基乙胺(11.6mg，0.090mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，25℃搅拌0.5h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干，得到白色固体产物PY-27(4.14mg，7.56umol，二步收率：42％)。
LCMS(ESI)：m/z，524.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.19(t,J＝5.6Hz,1H),6.54(s,1H),5.44(s,2H),5.27(d,J＝4.4Hz,3H),4.63(t,J＝5.6Hz,1H),3.30-3.23(m,5H),3.18(s,2H),3.04(q,J＝6.0Hz,2H),2.08(s,2H),1.86(dt,J＝15.2,7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例34：(S)-4-乙基-8,10-二氟-4,9-二羟基-11-(4-羟基丁基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29)的制备和(S)-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-11-(4-羟基丁基)-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29B)的制备

步骤1：2,4-二氟-3-甲氧基苯甲醛(PY-29a)的制备
在-78℃，向1,3-二氟-2-甲氧基苯(2.8g)的20mLTHF溶剂中，加入1.2倍当量n-BuLi(9.3mL，2.5M)，在该温度下搅拌半小时，然后，加入6倍当量的DMF(9.15mL)继续搅拌半小时，撤掉低温反应浴，将反应置于15℃反应1小时。用4M HCl(6mL)猝灭反应，乙酸乙酯(3×50mL)萃取，有机层减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯20:1到10:1)纯化，得1.8g黄色油状物化合物PY-29a(产率：53％)。
LCMS(ESI)：m/z，173[M+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.96-9.56(m,1H),7.83-7.43(m,1H),7.30(b,1H),4.22-3.90(m,3H)。
步骤2：2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯甲醛(PY-29b-1)的制备
向化合物2,4-二氟-3-甲氧基苯甲醛(1.78g)的20.3mL硫酸溶剂中，加入0.96倍当量发烟硝酸(446μL)，将反应置于25℃反应1小时。将反应液倒入冰水中，加压抽滤，用水洗涤反应液，干燥得925mg黄色固体状物化合物2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯甲醛(PY-29b-1)(产率：40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),8.21(dd,J＝11.1,2.0Hz,1H),4.13(t,J＝1.9Hz,3H)。
步骤3：6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯甲醛(PY-29c)的制备
向化合物2,4-二氟-3-甲氧基-6-硝基苯甲醛(925mg)的30mL乙醇溶剂中，分别加入铁粉(5.5eq，1.31g)，水(23.12eq，1.77mL)和盐酸(0.55eq，71μL)，将反应置于80℃搅拌16小时，LCMS表明有产物生成，该反应液冷却到室温，随后，加压过滤，浓缩得到粗产物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯10:1到5:1)纯化，干燥得488毫克绿色固体6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯甲醛(PY-29d)(61％产率)。
LCMS(ESI):m/z，187.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),7.48(s,2H),6.44(dd,J＝13.4,2.0Hz,1H),3.77(s,3H)。
步骤4:(S)-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29d)的制备
向化合物6-氨基-2,4-二氟-3-甲氧基苯甲醛(PY-29c)(150mg)的10mL的甲苯溶剂中，分别加入0.67倍当量PPTS(134.9mg)和1.2倍当量化合物PY-8f(253.2mg)，在氮气氛下，将该反应置于130℃搅拌16小时，反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5:1到0:1)纯化，得到233mg黄色固体化合物PY-29d(产率：67％；纯度：78％)。
LCMS(ESI)：m/z，415[M+H]+。
步骤5：(S)-11-(4-(苄氧基)丁基)-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮)(PY-29f)的制备
将化合物PY-29d(193mg，78％纯度)溶于14.6mL冰醋酸溶剂中，在冰浴条件下，缓慢加入3.6mL的浓硫酸。在另一个反应瓶中加入1.2倍当量的硫酸亚铁(66.2mg)和2.6mL去离子水，在同一温度下，将该硫酸亚铁溶液加入至上述化合物PY-29d的溶液中，随后，再依次加入5倍当量的5-(苄氧基)戊醛(PY-29e)(349mg)和54.4μL的过氧化氢，该反应在冰浴条件下，搅拌45分钟。将反应液倒入冰水中，用乙酸乙酯(50mL×3)提取有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗品，粗品通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1到4:1)纯化，得到230mg化合物PY-29f(64％纯度)。
LCMS(ESI)：m/z，577.3[M+H]+。
步骤6：(S)-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-11-(4-羟基丁基)-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29B)的制备
向化合物PY-29f(497mg)的10ml甲醇溶液中，分别加入0.25倍当量钯碳(78mg)和0.25倍当量的Pd(OH)2(51.4mg)，该反应在30℃搅拌16小时。过滤后进行减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20：1到10:1)纯化，得到55mg化合物PY-29B(产率：38％；纯度：78％)。
LCMS(ESI)：m/z，487.1[M+H]+。
步骤7：(S)-4-乙基-8,10-二氟-4,9-di羟基-11-(4-羟基丁基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29)的制备
在90℃，向化合物PY-29B(48mg，78％的纯度)的4mL的DCM溶剂中，间隔2小时分批加入6倍当量AlCl3化合物(79mg)，反应液经高效液相色谱制备(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干，得到6.77mg白色固体化合物PY-29(产率：14.5％)。
LCMS(ESI)：m/z，473.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝6.8Hz,1H),7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.76(d,J＝9.0Hz,1H),7.71(d,J＝7.5Hz,2H),7.55(t,J＝6.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.33(t,J＝7.5Hz,2H),4.33–4.20(m,4H),4.11(p,J＝7.0Hz,1H),3.67(d,J＝6.2Hz,2H),1.95(dt,J＝12.6,6.3Hz,1H),1.38(d,J＝1.9Hz,9H),1.24(d,J＝7.2Hz,3H),0.86(dd,J＝19.2,6.7Hz,6H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-125.50(d,J＝13.5Hz)。
制备例35：(S)-4-乙基-8,10-二氟-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29A)的制备
步骤1：(S)-4-乙基-8,10-二氟-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(PY-29A)的制备
向化合物PY-29d(29.5mg，55.51μmol，1.0eq，78％的纯度)的3mL的DCM溶液中，加入AlCl3(22.2mg，166.52μmol，3.0eq)，在70℃反应2个小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物PY-29A(1.46mg，产率：4.9％)。
LCMS(ESI):m/z，401.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.77(d,J＝11.9Hz,1H),7.25(s,1H),6.52(s,1H),5.42(s,2H),5.23(s,2H),1.86(p,J＝7.0Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
制备例36：(S)-4-(氨基甲基)-5-氯-9-乙基-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-36)的制备

步骤1：N-(3-溴-5-氯苯基)乙酰胺(PY-36b)的制备
将3-溴-5-氯-苯胺(PY-36a)(5.00g，24.2mmol，1.0eq)、三乙胺(4.90g，48.4mmol，6.74mL，2.0eq)加入二氯甲烷(50.0mL)中，置换三次氮气，在0℃滴加乙酰氯(2.85g，36.3mmol，2.58mL，1.5eq)，然后在氮气氛下25℃搅拌2小时。在0℃，向反应液中滴加30.0mL水，析出沉淀，过滤，将滤液减压浓缩，得到化合物N-(3-溴-5-氯苯)乙酰胺(5.90g，收率97％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),7.77(d,J＝1.2Hz,1H),7.68(d,J＝1.2Hz,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),2.05(s,3H)。
步骤2：(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(PY-36c)的制备
将N-(3-溴-5-氯苯基)乙酰胺(5.00g，20.1mmol，1.0eq)溶于N,N二甲基甲酰胺(30mL)中，加入1-丁烯-4-酸叔丁酯(4.29g，30.2mmol，4.89mL，1.5eq)、三(邻甲基苯基)磷(306.2mg，1.01mmol，0.05eq)、三乙胺(4.07g，40.2mmol，5.60mL，2.0eq)、双(三特丁基膦)钯(103mg，201.2μmol，0.01eq)和N-甲基二环己基胺(7.86g，40.2mmol，8.54mL，2.0eq)。氮气氛下，在100℃反应4小时。将反应液冷却至室温，加入水(50.0mL)，然后用乙酸乙酯(25.0mL)萃取两次。有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱层析色谱法纯化，石油醚/乙酸乙酯＝15/1-3/2洗脱，得到(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(5.10g，16.5mmol，收率82.09％)，白色固体。
LCMS：RT＝0.634min，MS(ESI)m/z＝254.0[M+H]+。
步骤3：4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁酸叔丁酯(PY-36d)的制备
将(E)-4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁-3-烯酸叔丁酯(5.00g，16.1mmol，1.0eq)加入甲醇(50.0ml)中，在氩气氛下加入三(三苯基膦)氯化铑(I)(1.49g，1.61mmol，0.1eq)，然后在25℃，氢气(30Psi)条件下反应两个小时。反应液过滤，滤液浓缩，得到粗品4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁酸叔丁酯(3.60g，11.5mmol，收率71.42％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.41(s,1H),7.13-7.08(m,2H),6.85(s,1H), 2.52(t,J＝7.2Hz,2H),2.15(t,J＝7.6Hz,1H),2.10(s,1H),1.83-1.81(m,2H),1.38(s,9H)。
步骤4：4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸叔丁酯(PY-36e)的制备
将4-(3-乙酰氨基-5-氯苯基)丁酸叔丁酯(100mg，320.7μmol，1.0eq)溶于N,N二甲基甲酰胺(5.00mL)，缓慢加入NBS(68.5mg，385μmol，1.2eq)，在25℃反应1个小时。向反应液中滴加水(10.0mL)，然后用乙酸乙酯(10.0mL)萃取两次，有机相用饱和食盐水(10.0mL)洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗品4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸叔丁酯(120mg，96.0％)，白色固体。
LCMS：RT＝2.885min，MS(ESI)m/z＝336.1[M+H]+。
步骤5：4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸(PY-36f)的制备
将4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸叔丁酯(100mg，256μmol，1.0eq)溶于二氯甲烷(2.00mL)，0℃缓慢滴加三氟乙酸(2.00mL)，反应液在25℃反应2个小时。反应液直接减压浓缩，得到固体，然后加入二氯甲烷(8.00mL)搅拌过滤，得到粗品4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸(60.0mg，70.0％)，白色固体。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 12.09(br,1H),10.19(s,1H),7.87(d,J＝2.4Hz,1H),7.37(d,J＝2.4Hz,1H),2.72(t,J＝7.6Hz,2H),2.28(t,J＝7.2Hz,2H),2.04(s,3H),1.78(t,J＝7.6Hz,2H)。
步骤6：N-(4-溴-3-氯-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-36g)的制备
将4-(5-乙酰氨基-2-溴-3-氯苯基)丁酸(1.80g，5.38mmol，1.0eq)溶于伊顿试剂(113.6g，477.3mmol，75.00mL，88.73eq)，氮气氛下，在100℃反应1个小时。将反应液冷却至室温，并缓慢加入冷水中充分淬灭，过滤得固体。将固体溶解在二氯甲烷(10.0mL)中，然后浓缩，用混合溶剂(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)打浆，过滤，得到N-(4-溴-3-氯-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.20g，3.79mmol，收率70.45％)，黄色固体。
LCMS：RT＝0.961min，MS(ESI)m/z＝317.9[M+H]+。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 12.11(s,1H),8.86(s,1H),3.03(t,J＝6.0Hz,2H),2.61(t,J＝6.4Hz,2H),2.16(s,3H),2.04(t,J＝6.4Hz,2H)。
步骤7：8-氨基-5-溴-6-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-1-酮(PY-36h)的制备
将N-(4-溴-3-氯-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(900mg，2.84mmol，1.0eq)溶于乙醇(15mL)中，室温加入盐酸溶液(5mL，6mol/mL)，80℃搅拌3小时。将反应液冷却至室温，浓缩，浓缩物用饱和碳酸氢钠溶液调pH至8-9，然后用乙酸乙酯萃取(10mL)两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗产物8-氨基-5-溴-6-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-1-酮(700mg，2.55mmol，收率89.8％)，黄色固体。
LCMS：RT＝0.942min，MS(ESI)m/z＝275.8[M+H]+。
步骤8：(S)-4-溴-5-氯-9-乙基-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-36i)的制备
将8-氨基-5-溴-6-氯-3,4-二氢萘-1(2H)-1-酮(574mg，2.09mmol，1.1eq)和化合物PY-8f(500mg，1.90mmol，1.0eq)溶于甲苯(10mL)中，加入对甲基苯磺酸(36.1mg，0.19mmol，0.1eq)，氮气氛下，110℃反应16小时。反应液冷却至室温，有固体析出，过滤，然后干燥，得到粗品PY-36i，黄色固体(850mg，1.69mmol，收率89.4％)。
LCMS：RT＝2.233min，MS(ESI)m/z＝503.3[M+H]+。
步骤9：(S)-(5-氯-9-乙基-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1h,12h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(PY-36j)的制备
将化合物PY-36i(400mg，0.80mmol，1.0eq)、N-Boc-胺甲基三氟硼酸钾盐(948mg，4.00mmol，5.0eq)、正丁基-二(1-金刚烷基)膦(375mg，0.40mmol，0.5eq)、碳酸钾(221mg，1.60mmol，2.0eq)和醋酸钯(53.88mg，0.24mmol，0.3eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)中，氮气氛下，80℃搅拌2小时。将反应液冷却至室温，浓缩，向浓缩物中加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯萃取(10mL)两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，粗品用反相色谱法纯化(柱：Xtimate C18 150×40mm×10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；梯度：26％-66％B，36min)，得到化合物PY-36j(54.2mg，0.095mmol，收率11.87％)，白色固体。
LCMS：RT＝2.127min，MS(ESI)m/z＝552.5[M+H]+。
步骤10：(S)-4-(氨基甲基)-5-氯-9-乙基-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-36)的制备
将化合物PY-36j(52.4mg，0.095mmol，1.0eq)溶于二氯甲烷中(5mL)，在0℃加入三氟乙酸(2mL)，25℃反应2小时。将反应液减压浓缩，粗品用反相色谱法纯化(柱：Xtimate C18 150×40mm×10μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；梯度：0％-38％B，30min)，得到化合物PY-36(4.55mg，0.01mmol，收率10.53％)，白色固体。
LCMS：RT＝1.566min，MS(ESI)m/z＝452.2[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.23(s,1H),8.19(s,2H),7.34(s,1H),6.55(s,1H),5.45(s,2H),5.30(s,2H),4.41(s,2H),3.20-3.18(m,4H),2.12(t,J＝4.8Hz,2H),1.90-1.86(m,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例37：(S)-5-氯-9-乙基-9-羟基-4-(羟甲基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-37)的制备
将化合物PY-36i(200mg，0.40mmol，1.0eq)和(三丁基锡烷基)甲醇(192mg，0.60mmol，1.5eq)溶于1,4-二氧六环中(5mL)，加入催化剂氯(2-二环己基膦基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯)]钯(II)(XPhos Pd G2)(31.4mg，0.04mmol，0.1eq)，氮气氛下，90℃反应4小时。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，加水稀释，然后用乙酸乙酯萃取(10mL)两次，有机相用饱和食盐水洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用反相色谱法纯化(柱：Welch Xtimate C18 150×30mm×5μm；流动相[水(FA)-ACN]；梯度：6％-46％B，25min)，得到化合物PY-37(2.08mg，0.005mmol，收率1.25％)，白色固体。
LCMS：RT＝1.475min，MS(ESI)m/z＝453.3[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.10(s,1H),7.32(s,1H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.28(s,2H),5.19(t,J＝5.2Hz,1H),4.83(d,J＝5.2Hz,2H),3.17(t,J＝7.6Hz,2H),2.09(t,J＝7.6Hz,2H),1.89-1.84(m,2H),1.15-1.14(m,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例38：(S)-9-乙基-9-羟基-4-(羟甲基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-37A)的制备
将化合物PY-36i(200mg，0.40mmol，1.0eq)和(三丁基锡烷基)甲醇(192mg，0.60mmol，1.5eq)溶于1,4-二氧六环中(5mL)，加入催化剂氯(2-二环己基膦基-2,4,6-三异丙基-1,1-联苯基)[2-(2-氨基-1,1-联苯)]钯(II)(XPhos Pd G2)(31.4mg， 0.04mmol，0.1eq)，氮气氛下，90℃反应4小时。将反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，加水稀释，然后用乙酸乙酯萃取(10mL)两次，有机相用饱和食盐水洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用反相色谱法纯化(柱：Welch Xtimate C18 150×30mm×5μm；流动相：[水(FA)-ACN]；梯度：6％-46％B，25min)，得到化合物PY-37A(2.23mg，0.005mmol，收率1.25％)，白色固体。
LCMS：RT＝1.233min，MS(ESI)m/z＝419.4[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.99(d,J＝8.8Hz 1H),7.90(d,J＝8.8Hz1H),7.32(s,1H),6.51(s,1H),5.44(s,2H),5.33(t,J＝4.4Hz,1H),5.27(s,2H),4.73(d,J＝5.2Hz,2H),3.19-3.16(m,1H),3.10-3.07(m,1H),2.08(t,J＝3.2Hz,2H),1.90-1.86(m,2H),1.15-1.13(m,2H),0.89(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例39：(S)-5-氯-9-乙基-4,9-二羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-38)的制备
步骤1：(S)-5-氯-9-乙基-9-羟基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-38a)的制备
将化合物PY-36i(400mg，0.80mmol，1.0eq)、双联频哪醇硼酸酯(305mg，1.20mmol，1.5eq)、醋酸钾(235mg，2.40mmol，3.0eq)和1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(176mg，0.24mmol，0.3eq)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氮气氛下，90℃搅拌5小时。将反应液冷却至室温，浓缩，向浓缩物中加入水(10mL)，然后用乙酸乙酯萃取(10mL)两次，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物，粗品用制备薄层色谱法纯化(PE/EA＝1/4)，得到化合物PY-38a(70.2mg，0.13mmol，收率16.25％)，黄色固体。
LCMS：RT＝2.391min，MS(ESI)m/z＝549.3[M+H]+。
步骤2：(S)-5-氯-9-乙基-4,9-二羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10h,13h-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-38)的制备
将化合物PY-38a(70.2mg，0.13mmol，1.0eq)溶于四氢呋喃(0.2mL)和水(0.2mL)中，在0℃加入过硼酸钠四水合物(44.15mg，0.39mmol，3.0eq)，25℃反应1小时。将反应液用饱和氯化铵溶液(0.2mL)淬灭，然后用反相色谱法纯化(柱：Xtimate C18 150×40mm×10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；梯度：10％-50％B，36min)，得到化合物PY-38(0.82mg，0.002mmol，收率1.53％)，白色固体。
LCMS：RT＝1.491min，MS(ESI)m/z＝439.3[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.36(s,0.16H),8.03(s,1H),7.23(s,1H),6.49(s,1H),5.42(s,2H),5.21(s,2H),3.10-3.07(m,2H),3.02(t,J＝5.6Hz,2H),2.01(t,J＝6.4Hz,2H),1.88-1.85(m,2H),1.24(s,1H),0.88(t,J＝7.6Hz,3H)。
制备例40：PY-41A和PY-41B的制备
步骤1：化合物PY-41A-a和PY-41A-b的制备
将化合物N-(8-氨基-5-溴-6-氟-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酰胺(PY-U-c)(制备方法见制备例44)(140mg，444.25μmol，1eq)溶于甲苯(10mL)，加入(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(PY-8f)(116.95mg，444.25μmol，1eq)和PPTS(111.64mg，444.25μmol，1eq)，反应液在125℃下搅拌12小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到两个棕色异构体固体，分别为PY-41-a(54mg，收率：22.41％)和PY-41-b(54mg，Yield：22.41％)。
LCMS(ESI)：m/z，542.2[M+H]+。
步骤2：化合物PY-41A的制备
将化合物PY-41A-a(15mg，27.66μmol，1eq)溶于二氧六环(2mL)，加入羟甲基三丁基锡烷(26.64mg，82.97μmol，3eq)和XPhos Pd G2(4.35mg，5.53μmol，0.2eq)，反应液置换氮气三次，氮气氛围下，在90℃搅拌12小时。反应液过滤，减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从14％到24％洗脱)纯化，得到白色固体PY-41A(1.10mg，收率：8.06％)。
LCMS(ESI):m/z，494.2[M+H]+。
步骤3:化合物PY-41B的制备
将化合物PY-41A-b(15mg，27.66μmol，1eq)溶于二氧六环(2mL)，加入羟甲基三丁基锡烷(26.64mg，82.97μmol，3eq)和XPhos Pd G2(4.35mg，5.53μmol，0.2eq)，反应液置换氮气三次，氮气氛围下，在90℃搅拌12小时。反应液过滤，减压浓缩，残余物通过高效液相色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到白色固体产物PY-41B(1.02mg，收率：7.47％)。
LCMS(ESI):m/z，494.1[M+H]+。
制备例41：((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟甲基)-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-1-基)氨基甲酸乙酯(PY-42)的制备
将化合物PY-U-A(制备方法见制备例44)(10.53mg，95％，22.15μmol，1eq)溶于DCM(5mL)中，加入TEA(4.48mg，6.16μL，44.30μmol，2eq)，0℃下加入氯甲酸乙酯(4.81mg，4.24μL，44.30μmol，2eq)。反应液0℃搅拌8小时。反应液用DCM(10mL)稀释，用水(10mL)洗涤，有机相干燥后过滤，用高效液相色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得白色固体产物PY-42(1.12mg，收率：9.66％，Purity:90％)。
LCMS(ESI)：m/z，524.2[M+H]+。
制备例42：N-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟甲基)-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4'：6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-2-羟基乙酰胺(PY-43)的制备
步骤1：2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟甲基)-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酰胺(PY-43-b)的制备
将化合物PY-U-A(5mg，100％，11.08μmol，1eq)溶于DMF(1mL)中，加入DIPEA(2.86mg，3.66μL，22.15μmol，2eq)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙酸酯(PY-43-a)(3.82mg，13.29μmol，1.2eq)。反应液20℃搅拌12小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得白色固体产物(2mg，收率：28.95％)。
LCMS(ESI)：m/z，624.2[M+H]+。
步骤2：N-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟甲基)-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)-2-羟基乙酰胺(PY-43)的制备
将化合物PY-43-b(2mg，3.21μmol，1eq)溶于THF(1mL)中，加入HCl(116.91μg，500μL，3.21μmol，1eq)。反应液15℃搅拌2小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得黄色固体产物PY-43(1.10mg，收率：67.33％，纯度：100％)。
LCMS(ESI)：m/z，510.2[M+H]+。
制备例43：(S)-4-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-A)的制备

步骤1：6,8-二氟-5-硝基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(PY-Ab)的制备
向6,8-二氟-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(PY-Aa)(1.0g)的6mL硫酸溶液中，加入0.96倍当量的硝酸钾(546mg)，反应于冰浴下搅拌2小时。将反应液倒入冰水中，加入50mL水猝灭，使用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到800mg粗产物化合物PY-Ab(41％的纯度)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.20–7.07(m,1H),2.96(q,J＝6.0Hz,2H),2.61(ddd,J＝27.9,7.3,5.8Hz,2H),2.12–2.00(m,2H)。
步骤2：6,8-二氟-5-氨基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(PY-Ac)的制备
向6,8-二氟-5-硝基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(800mg)的9mL乙醇与水混合溶剂(体积比为：8比1)中，分别加入8倍当量的铁粉(894mg)和3倍当量氯化铵(321mg)，反应在80℃搅拌2小时。反应液滤去铁粉后，直接浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚为1:1)纯化，得到176mg 6,8-二氟-5-氨基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(PY-Ac)(产率：45％)。
LCMS(ESI):m/z，198.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.03(t,J＝11.4Hz,1H),5.02(s,2H),2.70(t,J＝6.2Hz,2H),2.08(s,1H),2.00(p,J＝6.4Hz,2H)。
步骤3：N-(2,4-二氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-Ad)的制备
向6,8-二氟-5-氨基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(600mg)的25mL二氯甲烷溶液中，分别加入1.2倍当量的乙酸酐(343μL)和1.2倍当量三乙胺(508μL)，反应在60℃搅拌36小时。浓缩反应液，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇为20:1)纯化，得到483mg N-(2,4-二氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-Ad)(产率：66％，纯度：95％)。
LCMS(ESI):m/z，240.1[M+H]+。
步骤4：N-(4-氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-Ae)的制备
在封管中，向N-(2,4-二氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-Ad)(1.43g)的30mL DMSO溶液中，加入35mL氨水，于100℃搅拌16小时。加入50mL水猝灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇为20:1)纯化，得到1.01g N-(4-氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-Ae)(产率：72％，纯度：94％)。
LCMS(ESI):m/z，237.2[M+H]+。
步骤5：(S)-N-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)乙酰胺(PY-Ag)的制备
N-(4-氨基-2-氟-5-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(1.01g)的50mL甲苯溶液中，分别加入1.2倍当量的化合物PY-8f(1.3g)和0.67倍当量的PPTS(691mg)，反应在130℃搅拌16小时。浓缩该反应液，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇为10:1)纯化，得到584mg化合物PY-Ag(产率：30％，纯度：>99％)。
LCMS(ESI):m/z，464.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),7.80(d,J＝11.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.25(s,2H),3.16(t,J＝6.1Hz,2H),2.98(t,J＝6.0Hz,2H),2.14(s,3H),2.06–1.99(m,2H),1.87(p,J＝7.1Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
步骤6：(S)-4-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(PY-A)的制备
向化合物PY-Ag(78mg)的6mL乙醇溶液中，加入12N的盐酸(6mL)，反应在60℃搅拌16小时。经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干，得到43.9mg化合物PY-A(产率：61％，纯度：98％)。
LCMS(ESI)：m/z，422.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝12.5Hz,1H),7.20(s,1H),6.47(s,1H),5.76(s,2H),5.41(s,2H),5.18(s,2H),3.06(t,J＝6.1Hz,2H),2.84(t,J＝6.1Hz,2H),2.02(t,J＝6.2Hz,2H),1.86(dq,J＝14.4,7.0Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-125.24。
制备例44：PY-U-A和PY-U-B的制备
步骤1：(E)-N-(4-溴-3-氟-7-(羟基亚氨基)-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-U-a)的制备
于0℃，氮气氛下，向N-(4-溴-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1-基)乙酰胺(PY-8g)(3g，10mmol，1eq)的无水THF(150mL)溶液中，滴加叔丁醇钾(3.36g，29.99mL，29.99mmol，3eq，1M在THF中)和亚硝酸叔丁酯(3.09g，3.60mL，29.99mmol，3eq)，加毕，0-10℃反应1.5小时。0℃下向反应液中加入200mL水，随后用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相再使用饱和食盐水(100mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到黄色固体粗品化合物PY-U-a(3.20g，粗品，收率：48.63％，纯度：50％)。
LCMS(ESI)：m/z，329.0[M+1]+。
步骤2：化合物N,N'-(4-溴-3-氟-8-氧代-5,6,7,8-四氢萘-1,7-二基)二乙酰基酰胺(PY-U-b)的制备
向化合物PY-U-a(3.20g，50％，4.86mmol，1eq)的醋酸(40mL)和醋酸酐(20mL)溶液中，加入锌粉(4.77g，668.47μL，72.92mmol，15eq)，加毕，15-20℃反应16小时。反应液浓缩除去醋酸，残余物倒入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)的混合溶液中，混合溶液搅拌10分钟，用硅藻土过滤，滤液倒入分液漏 斗中分液，水相用乙酸乙酯萃取2次(50mL×2)，合并有机相，用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化，得到黄色固体化合物PY-U-b(1.15g，收率：55.63％，纯度：84％)。
LCMS(ESI)：m/z，357[M+H]+，359[M+H]+。
步骤3：N-(8-氨基-5-溴-6-氟-1-氧代-1,2,3,4-四氢萘-2-基)乙酰胺(PY-U-c)的制备
将化合物PY-U-b(1.15g，84％，2.70mmol，1eq)溶于乙醇(15mL)，然后加入HCl(3.28g，15mL，90mmol，33.2776eq，6M)，该反应液在60℃搅拌2小时。反应液浓缩掉大部分溶剂，用碳酸氢钠(30mL)中和，然后用DCM(20mL×2)萃取，有机相干燥，过滤，减压浓缩后直接用于下一步。所得产物为棕色固体(700mg，收率：68.99％)。
LCMS(ESI)：m/z，315.0[M+H]+。
步骤4：N-((9S)-4-溴-9-乙基-5-氟-9-羟基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酰胺(PY-U-d)的制备
将化合物PY-U-c(700mg，2.22mmol，1eq)溶于甲苯(50mL)，向该溶液中加入(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲哚嗪-3,6,10(4H)-三酮(PY-8f)(877.11mg，3.33mmol，1.5eq)和PPTS(558.20mg，2.22mmol，1eq)，该溶液在125℃下搅拌12小时。反应液减压浓缩，残余物用高相液相制备色谱法纯化，得棕色固体产物(1g，收率：83.01％，纯度：75％)。
LCMS(ESI)：m/z，542.1[M+H]+。
步骤5：N-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-(羟甲基)-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[d]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)乙酰胺(PY-U-e)的制备
将化合物PY-U-d(300mg，75％，414.85μmol，1eq)溶于二氧六环(10mL)的溶液中，加入(三丁基锡基)甲醇(399.62mg，1.24mmol，3eq)和XPhos Pd G2(65.28mg，82.97μmol，0.2eq)。反应液用氮气置换后，在氮气氛围下，90℃搅拌12小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相色谱法纯化，得到白色固体产物(120mg，收率：收率：58.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，494.1[M+H]+。
步骤6：化合物PY-U-A和PY-U-B的制备
将化合物PY-U-e(50mg，101.32μmol，1eq)溶于HCl(6N，6mL)，加入DIPEA，反应液在85℃下搅拌6小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号R-120g。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到 20％洗脱)纯化，得到两个白色异构体固体，分别是PY-U-A(62mg，收率：粗品收率不计)和PY-U-B(16mg，收率：34.98％，)。
LCMS(ESI)：m/z，452.2[M+H]+。
制备例45：(S)-7-乙基-7-羟基-14-(3-羟丙基)-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(PY-Y)的制备
步骤1：6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊-5-甲醛(PY-Y2)的制备
将铁粉(3.94g，70.47mmol，5.5eq)和氯化铵(3.77g，70.47mmol，5.5eq)加入乙醇(30.0mL)和水(3.00mL)中，然后加入6-硝基苯[d][1,3]氧杂环戊-5-甲醛(2.50g，12.81mmol，1eq)，反应液在80℃反应4小时。过滤，滤液减压浓缩，残余物溶于水和二氯甲烷(100mL)中，有机相用饱和碳酸氢钠(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱色谱法纯化(SiO2，DCM:MeOH＝1:0，Rf(P)＝0.39)，得到6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊-5-甲醛(1.27g，产率：59.83％)。
LCMS：RT＝0.996min，MS(ESI)m/z＝166.1[M+H]+。
步骤2：(S)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11h-[1,3]二氧杂环戊并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(PY-Y3)的制备
将化合物PY-8f(2.00g，7.60mmol，1eq)和6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊-5-甲醛(1.25g，7.60mmol，1eq)溶于甲苯(160ml)，然后加入对甲苯磺酸一水 合物(144.52mg，759.75μmol，0.1eq)，反应液在125℃搅拌16小时后，冷却至25℃过滤，滤饼用10mL四氢呋喃洗涤，减压干燥，得到化合物PY-Y3(1.51g，产率：50.65％)。
LCMS：RT＝1.271min，MS(ESI)m/z＝393.2[M+H]+。
步骤3：(S)-7-乙基-7-羟基-14-(3-羟丙基)-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(PY-Y)的制备
将化合物PY-Y3(400mg，795.19μmol，1eq)、七水硫酸亚铁(353.72mg，1.27mmol，1.6eq)溶于10mL水中，搅拌下加入98％硫酸(4.59g，46.83mmol，2.50mL，58.89eq)，充分搅拌10分钟后，0℃滴加4-羟基丁醛(343.3mg，3.90mmol，5eq)，再滴加双氧水(1.26g，11.10mmol，1.07mL，30％纯度，13.96eq)在20mL水中的溶液，反应液在0-5℃搅拌1小时。反应液倒入冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝8.0，用乙酸乙酯萃取(50mL×5)，减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法纯化(Xtimate C18 150×40mm×10μm；流动相：[水(0.1％FA)-乙腈]；梯度：10％-44％乙腈，36min)，得到化合物PY-Y(99.5mg，99.6％纯度)。
LCMS:RT＝1.890min，MS(ESI)m/z＝451.3[M+H]+。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.63(s,1H),7.50(s,1H),7.24(s,1H),6.50(s,1H),6.29(s,2H),5.42(s,2H),5.25(s,2H),4.68(t,J＝5.2Hz,1H),3.49(t,J＝5.6Hz,2H),3.15(t,J＝6.8Hz,2H),2.53(t,J＝1.6Hz,1H),2.33(t,J＝1.6Hz,1H),1.81-1.88(m,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
制备例46：N2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(A)的制备
路线一：
步骤1：N2-(苄氧基)羰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ac)的制备
于室温，将(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮(Aa)(1.27g，7.13mmoL)和((苄氧基)羰基)-L-赖氨酸(Ab)(2g，7.13mmol)溶解于甲醇(30mL)，再加入三乙胺(1.44g，14.27mmoL)。反应液于70℃搅拌16小时。将反应液减压浓缩，所得的残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到白色固体化合物Ac(2.5g，收率76.43％)。
LCMS：[M+H]+＝459.1。
步骤2：N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ad)的制备
室温，将化合物N2-(苄氧基)羰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ac)(2.5g，5.45mmoL)溶解于甲醇(40mL)，再将10％湿钯碳(250mg)加入反应液中。氢气氛下，反应液于室温搅拌6小时。将反应液用硅藻土过滤，滤饼用水洗涤，滤液冻干，得到白色固体化合物Ad(1.6g，收率：88.96％)。
LCMS：[M+H]+＝325.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.16-4.19(d,J＝9.4Hz,1H),3.93-3.97(t,J＝9.4Hz,1H),3.72–3.50(m,5H),3.10-3.20(m,2H),1.68-1.79(m,2H),1.40-1.55(m,2H),1.20-1.35(m,2H)。
步骤3：N2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(A)的制备
室温，将化合物N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ad)(1.6g，4.93mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，再分别向其中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(Ae)(1.52g，4.93mmoL)、DIEA(1.27g，9.87mmoL)。氮气氛下，反应液于70℃搅拌16小时。反应液过滤，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex  Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到白色固体连接子A(400mg，收率:15.67％)。
LCMS：[M+H]+＝517.9。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,2H),5.32(m,1H),4.59–4.30(m,2H),4.17–3.99(m,1H),3.96-3.91(m,1H),3.89-3.81(m,1H),3.57-3.5(m,1H),3.48-3.39(m,2H),3.34(s,4H),3.12–2.89(m,2H),2.05(t,J＝6.4Hz,2H),1.82–0.95(m,13H)。
路线二：
步骤1：N2-(叔丁氧羰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ag)的制备
(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸(Af)(5g，0.02mol)、(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮(Aa)(3.6g，0.02mol)溶解于MeOH(80mL)中，加入TEA(4.1g，0.04mol)，在70℃反应16小时。将反应液浓缩，加入MTBE(50ml×3)减压浓缩，然后用石油醚打浆，得粗品8g，呈白色泡沫状(产品为酸性化合物与TEA成盐)粗品，收率不计。
LCMS(ESI)：m/z，425.2[M+H]+，447.2[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.50(brs,1H),5.61(d,J＝4.0Hz,1H),4.27(s,1H),4.13(s,1H),4.10-3.85(m,1H),3.85-3.66(m,4H),3.28-3.15(m,2H),1.80-1.55(m,2H),1.55-1.48(m,2H),1.50-1.21(m,11H。
步骤2：N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ad)的制备
N2-(叔丁氧羰基)-N6-(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(Ag)(7g)溶于DCM(35mL)中，加入TFA(35mL)，10-15℃反应16小时。将反应液浓缩，加入DCM(50mL×3)减压浓缩，然后后加水溶清冻干，得黄色粘状物粗品8g，100％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),8.26(d,J＝25.1Hz,3H),7.69(dd,J＝37.2,31.4Hz,1H),3.99(d,J＝3.7Hz,1H),3.94–3.84(m,2H),3.58(dd,J＝13.3,3.7Hz,1H),3.51–3.45(m,2H),3.40-3.34(m,1H),3.09(qt,J＝15.7,7.9Hz,2H),1.84–1.67(m,2H),1.60–1.27(m,4H),1.18(t,J＝7.3Hz,5H)。
其余步骤与路线一相同，得到连接子A。
制备例47：抗体标签(antibody-tag)2-(2-氨基乙氧基)-N-(3-叠氮丙基)乙酰胺盐酸盐(TS-1)的制备
步骤1：(2-(2-(3-叠氮丙基)氨基)-2-氧代乙氧基)氨基甲酸叔丁基酯(TS-13)的制备
向2-(2-(叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙酸(TS-12)(皓元医药，450.0mg，2.0mmol，1.0eq)的二氯甲烷(4.5mL)溶液中依次加入3-叠氮基丙胺(205.4mg，2.0mmol，1.0eq)、DIEA(662.6mg，5.1mmol，2.5eq)和T3P(2.3g，3.7mmol，1.8eq)。反应室温搅拌16小时后，加30mL二氯甲烷稀释，并用20mL水洗涤有机相。水相用30mL二氯甲烷萃取一次，合并有机相，并用20mL饱和食盐水洗涤。有机相干燥，过滤，浓缩。残余物通过硅胶柱层析快速色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:1)纯化，得到无色油状的化合物TS-13，492mg(收率79％)。
LCMS(ESI)：m/z，302[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.84(s,1H),4.88(s,1H),3.95(s,2H),3.56(t,J＝5.2Hz,2H),3.41–3.31(m,6H),1.81(q,J＝6.7Hz,2H),1.44(s,9H)。
步骤2：2-(2-氨基乙氧基)-N-(3-叠氮丙基)乙酰胺盐酸盐(TS-1)的制备
于三口瓶中加入于化合物叔丁基(2-(2-((3-叠氮基丙基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(TS-13)(482.0mg，1.6mmol，1.0eq)和5mL甲醇，0℃缓慢滴加6M HCl的1,4-二氧六环溶液(1.6mL)，温度不超过5℃。升至室温搅拌16小时后，浓缩反应体系。残余物通过高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.1％HCl)-乙腈，水的洗脱比例从55％到85％洗脱)纯化，冻干，得到无色油状化合物TS-1，94.8mg(收率24.7％)。
LCMS(ESI)：m/z，202[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.67-1.72(m,J＝6.85Hz,2H),2.97–3.04(m,J＝5.30Hz,2H),3.15–3.20(q,J＝6.71Hz,2H),3.34-3.37(t,J＝6.82Hz,2H),3.62-3.64(t,J＝5.00Hz,2H),3.91(s,2H),8.21-8.30(m,3H)。
实施例1：化合物LY-1的制备

步骤1：甲基-L-苯丙氨酰基甘氨酸叔丁酯(LY-1c)的制备
将((苄氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(LY-1a)(3.0g，10.0mmol)溶于50mLDMF，依次加入甘氨酸叔丁酯盐酸(1.9g，10.1mmol)、HOBt(0.68g，5.0mmol)、EDCI(2.3g，12.0mmol)和DIPEA(3.87g，30.0mmol)。氮气氛下，室温搅拌18h。加水(80mL)稀释，DCM(100mL)萃取两次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)纯化，得化合物LY-1c(3.5g，收率85％)，无色油状物。
步骤2：L-苯丙氨酰基甘氨酸叔丁酯(LY-1d)的制备
将甲基-L-苯丙胺酰基甘氨酸叔丁酯(LY-1c)(3.0g，7.3mmol)溶于30mL二氯甲烷，在0℃加入10mL的三氟乙酸。氮气氛下，室温搅拌2h。减压浓缩。产品未经纯化直接用于下一步，淡黄色固体。
步骤3：((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(LY-1f)的制备
将L-苯丙氨酰基甘氨酸叔丁酯(LY-1d)(1.39g，5mmol)，LY-1e(1.49g，5mmol)溶于50mL DMF，依次加入HOBt(0.68g，5.0mmol)、EDCI(1.9g，10.0mmol)和DIPEA(3.87g，30.0mmol)。氮气氛下，室温搅拌18h。加稀盐酸(30mL)调节pH至1-2，DCM(100mL)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)分离纯化，得化合物LY-1f(3.1g，收率84％，两步)，白色固体。
LCMS(ESI)：m/z，502.4[M+H]+。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基-(2-(1-(2-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-1g)的制备
将化合物((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(2.5g，5mmol)溶于20mL DMF，依次加入HATU(2.3g，6.0mmol)和DIPEA(1.9g，15.0mmol)以及4-氨基苯甲醇(0.74g，6mmol)。氮气氛下，室温搅拌10h。加水(50mL)稀释，DCM(100mL)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)分离纯化，得化合物LY-1g(2.8g，收率92％)，白色固体。
LCMS(ESI)：m/z，607.2[M+H]+。
步骤5：(9H-芴-9-基)甲基-(2-(1-(2-(4-(4-(硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-1h)的制备
将(9H-芴-9-基)甲基-(2-(1-(2-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-1g)(2.0g，3.3mmol)和碳酸双(4-硝基苯基))酯(2g，6.6mmol)溶于DMF(20mL)，加入DIPEA(0.43g，3.3mmol)。氮气氛下，室温搅拌2h。加水(30mL)稀释，DCM萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:5)分离纯化，得化合物LY-1h(0.92g，收率36％)，白色固体。
步骤6：化合物(LY-1i)和(LY-1j)的制备
将(9H-芴-9-基)甲基-(2-(1-(2-(4-(4-(硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-氧代-3-苯丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-1h)(397mg，0.54mmol)和伊喜替康甲磺酸盐(300mg，0.56mmol)溶于DMF(2mL)，加入HOBt(73mg，0.54mmol)、吡啶(425mg，5.38mmol)和DIPEA(208mg，1.61mmol)，室温搅拌过夜，得到LY-1i。加入NMM(109mg，1.08mmol)，室温搅拌8h。反应液通过制备HPLC(色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得化合物LY-1j(123mg，收率21％)，白色固体。
LCMS(ESI)：m/z，1068.5[M+H]+。
步骤7：化合物(LY-1)的制备
于连接子A(11.2mg，0.022mmol，1.2eq)的无水四氢呋喃(7mL)溶液中依次加入HATU(10.3mg，0.027mmol，1.5eq)、DIPEA(7.0mg，0.054mmol，3.0eq)和LY-1j(15mg，0.018mmol，1eq)。将反应液在60℃搅拌2小时。反应液通过高效液相色谱制备(色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10um；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离纯化，冻干，得到黄色固体目标化合物LY-1(9.4mg，收率38％)。
LCMS(ESI)：m/z，1345.6[M+H]+，673.5[1/2M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.40(s,1H),8.10(dd,J＝20.8,8.0Hz,3H),7.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.78(d,J＝10.8Hz,1H),7.66–7.53(m,3H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),7.31(s,1H),7.27–7.22(m,3H),7.18(t,J＝4.4Hz,1H),6.98(d,J＝2.2Hz,2H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.35(s,1H),5.29(s,3H),5.08(s,2H),4.50(dd,J＝13.6,8.4Hz,5H),4.18–4.07(m,1H),3.96(s,1H),3.93–3.83(m,3H),3.72(s,1H),3.64–3.51(m,2H),3.46(s,2H),3.23(s,4H),3.05(dt,J＝15.2,7.2Hz,5H),2.90–2.77(m,2H),2.38(d,J＝1.9Hz,3H),2.25–2.01(m,5H),1.92–1.82(m,2H),1.58(s,2H),1.49–1.33(m,6H),1.26–1.10(m,4H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例2：化合物LY-2的制备
步骤1：((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰-L-戊酰基-L-丙氨酸叔丁酯(LY-2b)的制备
将(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基-L-缬氨酸(LY-2a)(8g，20.2mmol)、氨基乙酸叔丁酯(3.66g，20.2mmol)加入250mL三口瓶中，加入DMF(80ml)，氮气氛下，滴加DIEA(7.8g，60.6mmol)，加毕搅拌5分钟，滴加HATU(9.2g，24.2mmol)的DMF(30mL)溶液，加毕室温搅拌1小时。将反应液缓慢倒入水(800mL)中，搅拌30分钟，过滤，固体加DCM(200mL)溶解，水洗一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得9.5g黄色油状物，收率：90％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.32(d,J＝6.7Hz,1H),7.88(d,J＝7.5Hz,2H),7.70(d,J＝7.3Hz,3H),7.51(t,J＝6.0Hz,1H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),4.19(m,5H),3.66(d,J＝5.1Hz,2H),1.95(m,1H),1.37(s,9H),1.23(d,J＝7.2Hz,3H),0.85(dd,J＝18.7,6.8Hz,6H)。
步骤2：((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(LY-2c)的制备
将((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰-L-戊酰基-L-丙氨酸叔丁酯(LY-2b)(6g，11.47mmol)溶于DCM(30mL)中，氮气氛下，滴加TFA(20mL)，加毕室温反应2小时。将反应液浓缩至小体积，加入饱和碳酸氢钠溶液调节至pH＝7-8，加入DCM(100mL)萃取杂质，用1N HCl调pH至1-2，EA(200mL×2)萃取，用水(100mL×3)洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得4.8g白色固体，收率：89％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.88(d,J＝7.5Hz,2H),7.70(d,J＝7.4Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.32(t,J＝7.3Hz,2H),4.21(m,5H),3.65(s,2H),1.92(m,1H),1.26(d,J＝7.3Hz,3H),0.84(dd,J＝20.8,6.7Hz,6H)。
步骤3：(9H-芴-9-基)甲基(2-((S)-1-((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-2d)的制备
将((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(LY-2c)(2.5g，5.35mmol)、氨基苯甲醇(645mg，5.24mmol)加入反应瓶，加入DMF(25mL)溶解，氮气氛下，加入2,6-二甲基吡啶(1.72g，16mmol)，加毕搅拌5分钟，滴加HATU(2.44g，6.4mmol)的DMF(8mL)溶液，加毕室温反应1小时。将反应液加入水(200mL)中，EA(200mL×2)萃取，稀盐酸洗涤有机相，碳酸氢钠洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得2.4g近白色固体，收率：80％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(d,J＝7.5Hz,2H),7.70(d,J＝7.5Hz,2H),7.55(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),4.48–4.35(m,3H),4.25(dd,J＝21.4,6.6Hz,4H),3.70(d,J＝2.4Hz,2H),2.00–1.95(m,1H),1.33(d,J＝7.1Hz,3H),0.87(dd,J＝19.4,6.8Hz,6H)。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基(2-((S)-3-甲基-1-((S)-1-((4-(硝基苯氧基)羰基)氧基) 甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-2e)的制备
将(9H-芴-9-基)甲基(2-((S)-1-((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-2d)(1g，1.74mmol)、二(4-硝基苯基))碳酸酯(0.8g，2.62mmol)溶于DMF(10mL)中，氮气氛下，滴加DIEA(563mg,4.37mmol)，加毕室温反应2小时。将反应液加入水(50mL)中，EA(100mL×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(PE:EA＝10:1)纯化，得1g近白色固体，收率：78％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.96(s,1H),8.35–8.23(m,3H),7.87(m,3H),7.62(m,7H),7.41(t,J＝6.8Hz,4H),7.32(t,J＝7.0Hz,2H),5.23(s,2H),4.45–4.33(m,1H),4.22(m,4H),3.70(s,2H),1.99(m,1H),1.33(m,3H),0.86(dd,J＝19.9,6.8Hz,6H)。
步骤5：(9H-芴-9-基)甲基(2-((S)-1-((S)-1-((4-(((((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨甲酰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-2f)的制备
将(9H-芴-9-基)甲基(2-((S)-3-甲基-1-((S)-1-((4-(硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯(LY-2e)(415mg，0.54mmol)和伊喜替康甲磺酸盐(300mg，0.56mmol)溶于DMF(2mL)，加入HOBt(73mg，0.54mmol)、吡啶(425mg，5.38mmol)和DIPEA(208mg，1.61mmol)。室温搅拌过夜，得到LY-2f。反应液直接用于下一步。
步骤6：化合物(LY-2g)的制备
将步骤5的反应液加入哌啶(92mg，1.08mmol)，室温搅拌8h。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得化合物LY-2g(81.0mg，收率18.5％)，白色固体，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，834.4[M+Na]+，812.5[M+H]+。
步骤7：化合物(LY-2)的制备
向连接子A(3.9mg，0.0074mmol，1.2eq)的无水四氢呋喃(2mL)的溶液中依次加入HATU(2.83mg，0.0074mmol，1.2eq)、DIPEA(2.4mg，0.019mmol，3.0eq)和化合物LY-2g(5mg，0.0062mmol，1eq)。反应液在60℃搅拌2小时。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，冻干，得到黄色固体化合物LY-2(2.0mg，收率24.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，1333.5[M+Na]+，1311.6[M+H]+，656.4[1/2M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.91(s,1H),8.25–8.14(m,2H),8.06(d,J＝8.8Hz,1H),7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.75(dd,J＝21.2,9.6Hz,2H),7.65–7.55(m,3H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.31(s,1H),7.00(s,2H),6.52(s,1H),5.45(s,2H),5.29(s,3H),5.07(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),4.23–4.10(m,3H),3.97(d,J＝3.6Hz,1H),3.90(s,1H),3.73(d,J＝5.6Hz,2H),3.59–3.53(m,1H),3.46(s,2H),3.22(s,1H),3.04(t,J＝7.6Hz,3H),2.38(s,3H),2.25–2.04(m,5H),2.01–1.80(m,4H),1.60(s,2H),1.52–1.35(m,7H),1.30(d,J＝7.2Hz,3H),1.19(dt,J＝15.4,9.0Hz,4H),0.92–0.75(m,9H)。
实施例3：化合物LY-3的制备
步骤1：(2-(S)-1-(S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基)氨基)-3- 甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(LY-3b)的制备
室温，将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(皓元生物，LY-3a)(300mg，0.79mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺中(10mL)，再分别加入Boc保护的甘氨酸(138.5mg，0.79mmol)、EDCI(227.7mg，1.19mmoL)、HOBT(53.4mg，0.40mmoL)和三乙胺(240mg，2.37mmoL)。反应液于室温搅拌16小时。反应液过滤，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到白色固体化合物LY-3b(300mg，收率69.04％)。
LCMS：[M+H]+＝537.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),8.32–8.04(d,J＝7.6Hz,1H),7.58-7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.49-7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.17-7.22(d,J＝8.8Hz,2H),7.00-7.08(t,J＝7.6Hz,1H),5.90-6.00(t,J＝5.6Hz,1H),5.37(s,2H),5.06(t,J＝6.0Hz,1H),4.37-4.42(d,J＝5.6Hz,2H),4.30–4.36(m,1H),4.19-4.26(m,1H),3.52-3.58(m,2H),2.85-3.05(m,3H),2.05-2.07(m,1H),1.85-2.05(m,1H),1.74–1.44(m,2H),1.33(s,9H),0.75–0.90(dd,J＝17.6,6.8Hz,6H)。
步骤2：(2-(((S)-3-甲基-1-((S)-1-((4-((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(LY-3c)的制备
室温，将(2-(S)-1-(S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲叔丁酸(LY-3b)(250mg，0.466mmoL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入4-硝基碳酸酯(383.45mg，0.932mmoL)和DIEA(180.3mg，1.4mmoL)，反应液于室温搅拌16小时。反应液过滤，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到黄色固体化合物LY-3c(200mg，收率61.18％)。
LCMS：[M+H]+＝702.3。
步骤3：化合物(LY-3d)的制备
室温下，将化合物(LY-3c)(200mg，0.285mmoL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，再分别加入伊喜替康甲磺酸盐(148.9mg，0.342mmoL)、HOBT(19.26mg，0.143mmoL)和DIEA(110.3mg，0.855mmoL)，反应液于室温搅拌8小时。将反应液过滤，通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到白色固体化合物LY-3d(200mg，收率70.31％)。
LCMS：[M+H]+＝998.60。
步骤4：化合物(LY-3e)的制备
在0℃，将化合物LY-3d(200mg，0.2mmoL)加入10％三氟乙酸/二氯甲烷溶 液(15mL)中，反应液于0℃搅拌4小时。反应液减压浓缩，残余物通过制备HPLC(流动相：乙腈/水；酸性体系：0.1％HCl)分离纯化，得到黄色固体化合物LY-3e(120mg，收率：66.69％)。
LCMS：[M+H]+＝898.3。
步骤5：化合物(LY-3)的制备
室温，分别将化合物LY-3e(120mg，0.133mmoL)、连接子A(83mg，0.160mmoL)和HATU(61mg，0.160mmoL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再向其中加入DIEA(51.72mg，0.4mmoL)。将反应液于60℃搅拌1小时。将反应液过滤，再通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(1％甲酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到黄色固体化合物LY-3(74.4mg，收率39.84％)。
LCMS：[M/2+2H]+＝699.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),8.18-8.08(m,2H),8.02(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(d,J＝6.0Hz,1H),7.73(d,J＝10.9Hz,1H),7.68(d,J＝9.0Hz,1H),7.57(m,3H),7.32(d,J＝7.2Hz,2H),7.27(s,1H),6.96(s,2H),5.97(s,1H),5.41(s,2H),5.24(m,3H),5.04(s,2H),4.33(m,1H),4.19(m,1H),4.13–4.06(m,1H),3.94(d,J＝4Hz 1H),3.86(m,1H),3.70(m,3H),3.31-3.17(m,9H),3.13-2.83(m,7H),2.33(m,3H),2.22–1.02(m,25H),0.97–0.67(m,10H)。
实施例4：化合物LY-5的制备
步骤1：N6-(叔丁氧羰基)-N2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基)-L-赖氨酸(LY-5a)的制备
氮气氛围下，向反应瓶中加入N6-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸(300mg，1.0eq)、2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(Ae)(375mg，1.0eq)、DIPEA(315mg，2eq)，然后加入10mL无水DMF，置换氮气三次 后，室温反应16h。经过高效液相制备色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％三氟乙酸)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到400mg无色胶状化合物LY-5a。
LCMS(ESI)：m/z，340.2[M-100+1]+，462.3[M+Na]+。
步骤2：化合物(LY-5b)的制备
氮气氛围下，向反应瓶中加入化合物LY-5a(6.33mg，1.3eq)、HATU(5mg，1.2eq)、化合物LY-2g(9mg，1.0eq)、DIPEA(4.3mg，3eq)，然后加入3mL DMF。氮气氛下，室温反应2h。反应液经制备高效液相色谱法(色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到2mg的化合物LY-5b，黄色固体。
LCMS(ESI)：m/z，1255.5[M+Na]+，1233.8[M+H]+。
步骤3：化合物(LY-5)的制备
向反应瓶中加入化合物LY-5b(2mg，1.0eq)，然后加入3mL DCM和0.3mL TFA，15℃反应1小时。将反应液减压浓缩，加入5mL DCM，减压浓缩，残余物通过制备HPLC(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)分离，得到0.61mg化合物LY-5，白色固体。
LCMS(ESI)：m/z，1155.6[M+Na]+，1133.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),8.22(d,J＝6.8Hz,1H),8.16(s,1H),8.01(dd,J＝39.6,8.2Hz,3H),7.79(d,J＝10.4Hz,2H),7.59(d,J＝8.2Hz,4H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.31(s,1H),7.00(s,2H),6.53(s,1H),5.45(s,2H),5.29(s,2H),5.08(s,2H),4.38(t,J＝7.0Hz,2H),4.20(d,J＝7.7Hz,2H),3.74(d,J＝5.7Hz,2H),2.78-2.72(m,3H),2.68-2.65(m,2H),2.38(s,3H),2.34-2.32(m,3H),2.20(d,J＝10.4Hz,2H),2.10(t,J＝7.2Hz,2H),1.98(q,J＝6.8Hz,2H),1.88(dd,J＝15.6,7.2Hz,3H),1.52-1.48(m,4H),1.31(d,J＝7.2Hz,3H),1.18(t,J＝7.8Hz,2H),0.89-0.86(m,4H),0.82(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例5：化合物LY-6的制备

步骤1：((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(4-硝基苯基)羧酸酯(LY-61)的制备
将((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲醇(BCN)(500mg，3.33mmol)和DIEA(1.3g，9.99mmol)溶于DMF(8mL)中，于室温缓慢加入硝基苯基碳酸酯(2.03g，6.66mmol)，搅拌过夜。加入100mL水稀释，EA(30mL×3)萃取，减压浓缩，残余物通过柱层析色谱法(乙酸乙酯：正己烷＝1:10)纯化，得到850mg白色固体化合物LY-61。
LCMS：m/z＝338.1[M+Na]+。
步骤2：((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(LY-62)的制备
将((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(4-硝基苯基)羧酸酯(LY-61)(750mg，2.5mmol)、Et3N(0.78g，7.5mmol)溶于DMF(10mL)中，于室温逐滴加入乙二醇乙胺(0.54g，5mmol)，搅拌过夜。加入100mL水稀释，EA(30mL ×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干，得到265mg化合物LY-62，白色固体。
LCMS：m/z＝304.2[M+Na]+。
步骤3：((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2-(2-(4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)氨基甲酸酯(LY-63)的制备
将((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(LY-62)(500mg，1.78mmol)、DIEA(689mg，5.33mmol)溶于DMF(10mL)中，于室温加入硝基苯基碳酸酯(1.08g，3.55mmol)，搅拌过夜。残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到295mg白色固体化合物LY-63。
LCMS：m/z＝447.2[M+1]+。
步骤4：LY-64的制备
将((1R,8S,9s)双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2-(2-(4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙氧基)氨基甲酸酯(LY-63)(446mg，1.0mmol)、DIEA(689mg，5.33mmol)溶于DMF(10mL)中，于室温加入N6-((2R，3S，4R，5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(1.15g，3.55mmol)，搅拌过夜。残余物通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到380mg白色固体化合物LY-64。
LCMS：m/z＝632.2[M+1]+。
步骤5：(叔丁氧羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(LY-6a)的制备
向2,5-二氧代吡咯烷-1-基(叔丁氧羰基)甘氨酸酯(7.23g，27mmol)的THF(100mL)和水(50mL)溶液中加入碳酸氢钠(26g，79mmol)和L-缬氨酰基-L-丙氨酸(5g，27mmol)，室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩，用EA(60mL)萃取，水相用2mol/L稀HCl调节pH至3～5，再用EA(15mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤滤液减压浓缩，得9g化合物LY-6a，白色固体。
LCMS：m/z＝346.2[M+1]+。
步骤6：(2-((S)-1-((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(LY-6b)的制备
向(叔丁氧羰基)甘氨酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酸(LY-6a)(9g，26mmol)的DMF(100mL)溶液中加入T3P(14.9g，46.9mmol)和氨基苯甲醇(3.53g，29mmol)，室温搅拌12小时。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱： Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到2g化合物LY-6b，黄色固体。
步骤7：(2-((S)-3-甲基-1-((S)-1-((4-((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(LY-6c)的制备
向(2-((S)-1-((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(LY-6b)(500mg，1.11mmol)的DMF(15mL)溶液中加入DIEA(430.3，3.33mmol)和硝基苯基碳酸酯(675.3mg，2.22mmol)，室温搅拌12小时。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到412mg化合物LY-6c，黄色固体。
LCMS：m/z＝638.2[M+Na]+。
步骤8：化合物(LY-6d)的制备
向化合物LY-6c(100mg，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入HOBt(11mg，0.5eq)、DIEA(63mg，3eq)和伊喜替康甲磺酸盐(103.6mg，1.2eq)，室温搅拌12小时。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到150mg化合物LY-6d，黄色固体。
LCMS：m/z＝912.4[M+1]+。
步骤9：化合物(LY-6e)的制备
在冰浴下，向化合物LY-6d(10mg，1eq)的DCM(1mL)溶液中加入TFA(0.1mL)，并搅拌1小时，反应液减压浓缩，得到粗产物8.9mg直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝812.4[M+1]+。
步骤10：化合物(LY-6)的制备
向化合物LY-6e(8.9mg，0.01mmol)的DMF(2mL)溶液中加入化合物LY-64(7mg，0.01mmol)、HATU(6.3mg，0.015mmol)和DIEA(4.5mg，0.03mmol)，室温搅拌1小时。反应液通过高效液相色谱制备(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到4mg化合物LY-6，黄色固体。
LCMS：m/z＝713.5[M/2+1]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86-9.96(m,1H),7.99-8.27(m,3H),7.52-7.82(m,5H),7.27-7.45(m,4H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H),6.45-6.56(m,1H),5.42(d,J＝6.4Hz,2H),5.20-5.36(m,4H),5.01-5.14(s,2H),4.27-4.58(m,6H),3.81-4.09(m,6H),3.64-3.80(d,J＝7.2Hz,2H),3.38-3.62(m,5H),2.94-3.20(m,7H), 2.64-2.70(m,1H),2.30-2.42(m,4H),2.05-2.29(m,8H),1.76-2.04(m,4H),1.16-1.68(m,12H),0.70-0.94(m,11H)。
实施例6：化合物LY-7-P1和LY-7-P2的制备
氮气氛围下，向反应瓶加入化合物LY-5(25mg，20μmol，1.0eq，TFA盐)，然后加入MeOH(8mL)/HOAc(0.8mL)、(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(D-葡萄糖)(108mg，0.6mmol，30eq)和NaBH3CN(19mg，0.3mmol，15eq)。加毕，氮气氛下，65℃反应6小时，补加化合物D-葡萄糖(108mg，0.6mmol，30eq)和NaBH3CN(19mg，0.3mmol，15eq)，然后继续于65℃反应16小时。反应液减压浓缩，通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干，得白色固体化合物LY-7-P1(5.11mg，收率17.5％)和LY-7-P2(3.81mg，收率13％)(在碱性条件下，手型碳消旋)。
LY-7-P1(保留时间2.013min)。
LCMS(ESI)：m/z，731.5[M+2]+/2，1483.7[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,2H),8.33(d,J＝7.2Hz,1H),8.23(d,J＝6.8Hz,2H),8.14(s,1H),8.05(s,4H),7.80–7.72(m,3H),7.64–7.57(m,3H),7.39–7.34(m,3H),7.31(d,J＝1.3Hz,1H),6.98(d,J＝3.2Hz,2H),6.53(s,2H),5.44(s,3H),5.29(d,J＝3.5Hz,5H),5.07(s,3H),4.52(d,J＝5.6Hz,3H),4.43–4.30(m,6H),4.15(d,J＝12.5Hz,4H),3.74(d,J＝6.8Hz,5H),3.59(d,J＝4.4Hz,5H),2.37(d,J＝2.0Hz,4H),2.12–2.07(m,3H),1.87(dd,J＝10.0,7.2Hz,2H),1.47(d,J＝10.8Hz,6H),1.30(dd,J＝7.2,5.6Hz,4H),1.23–1.16(m,4H),0.90–0.81(m,12H)。
LY-7-P2(保留时间2.070min)。
LCMS(ESI)：m/z，731.4[M+2]+/2，1483.5[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,2H),8.33(d,J＝6.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.15(s,1H),8.06(s,1H),7.97(dd,J＝15.6,7.2Hz,2H),7.81–7.71(m,3H),7.65–7.56(m,3H),7.39–7.30(m,4H),6.99(d,J＝3.0Hz,2H),6.53(s,1H),5.45(s,3H),5.28(s,3H),5.08(s,2H),4.51(d,J＝5.6Hz,3H),4.46–4.31(m,7H),4.17(t,J＝8.8Hz,4H),3.73(s,5H),3.57(d,J＝11.0Hz,5H),2.38(d,J＝2.0Hz,4H),2.13–2.07(m,3H),1.88(dd,J＝15.6,7.6Hz,4H),1.46(s,9H),1.32–1.27(m,4H),1.22–1.13(m,4H),0.89-0.80(m,12H)。
实施例7：化合物(LY-8)的制备
步骤1：(18S,19R,20R,21R)-18,19,20,21,22-五羟基-16-(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂二十二酸(LY-82)的制备
向1-氨基-3,6,9,12-四氧杂二十烷-15-乙酸(LY-81)(200mg，0.75mmol，1.0eq)的无水MeOH(15mL)和HOAc(1.5mL)的溶液中加入(2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己醛(D-葡萄糖)(1.36g，7.54mmol，10eq)和NaBH3CN(237mg，3.77mmol，5eq)，加毕，在氮气氛下，在40-45℃反应24h。将反应液减压浓缩，残余物加入约8mL水和2mL甲醇，通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干，得到化合物LY-82(384mg，收率72％，TFA盐)(无色/类白色胶状物)。
LCMS(ESI)：m/z，594.5[M+1]+。
1H NMR(400MHz,D2O)δ4.22-4.20(m,2H),3.90-3.88(m,2H),3.87-3.59(m,25H),3.49-3.44(m,5H),2.63(t,J＝8.0Hz,2H)。
步骤2：化合物(LY-8)的制备
向化合物LY-82(5mg，8.50μmol，1.2eq，TFA盐)、化合物LY-5(8mg，8.50μmol，1.0eq，TFA盐)的无水DMF(2mL)溶液中加入HATU(3.2mg，1.2eq)和DIPEA(3.7mg，4eq)，室温继续搅拌2h。反应液通过制备高效液相色谱法(Oriendo，BRIX-2860；色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干，得白色固体化合物LY-8(3.06mg，收率25％)。
LCMS(ESI)：m/z，854.9[M+2]+/2，1730.8[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),8.34(s,2H),8.25–8.15(m,2H),8.07(d,J＝8.8Hz,1H),7.94(d,J＝7.2Hz,1H),7.82–7.71(m,3H),7.60(dd,J＝11.8,8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(s,1H),6.98(d,J＝3.4Hz,2H),6.54(s,1H),5.44(s,2H),5.29(s,3H),5.07(s,2H),4.50(d,J＝5.6Hz,2H),4.42–4.30(m,4H),4.16(dq,J＝13.8,7.2Hz,3H),3.76–3.47(m,28H),2.98(d,J＝6.7Hz,4H),2.67-2.66(m,2H),2.58(dd,J＝13.2,4.4Hz,3H),2.37(d,J＝1.8Hz,3H),2.34-2.32(m,2H),2.27(td,J＝6.8,2.8Hz,3H),2.21–2.04(m,5H),2.00–1.81(m,5H),1.60(d,J＝7.8Hz,2H),1.47(d,J＝11.8Hz,5H),1.36–1.14(m,10H),0.91–0.77(m,8H)。
实施例8：化合物LY-10的制备

步骤1：(30S,31R,32R,33R)-30,31,32,33,34-五羟基-28-(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧杂-28-氮杂三十四甲酸(LY-10b)的制备
向1-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂庚烷-27-油酸(LY-10a)(123mg，0.28mmol，1.0eq)的甲醇(10mL)/乙酸(1mL)溶液中加入D-葡萄糖(502mg，2.79mmol，10eq)和NaBH3CN(294mg，1.39mmol，5eq)，40℃反应40小时。将反应体系浓缩至约5mL，加入5mL甲醇和3mL水，通过高效液相色谱制备(色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，冻干，得到无色油状化合物LY-10b(124mg，收率50.4％，TFA盐)。
LCMS(ESI)：m/z，770.7[M+1]+。
1H NMR(400MHz,D2O)δ4 26(m,2H),3.99-3.94(m,2H),3.90-3.78(m,12H),3.78-3.71(m,26H),3.70-3.65(m,4H),3.60-3.56(m,5H),2.70(t,J＝8.0Hz,2H)。
步骤2：化合物LY-10的制备
冰水浴下，向化合物LY-10b(14.3mg，18.53μmol，2.0eq，TFA盐)的DMF(3mL)的溶液中加入HATU(7mg，18.5μmol，2.0eq)、DIEPA(7.2mg，55.6μmol，6eq)、化合物LY-5(10.5mg，9.27μmol，1.0eq，TFA盐)，加毕室温反应2小时。反应液通过高效液相色谱制备(色谱柱：Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm；流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，从45％到85％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-10(9.3mg，8.29mg，收率40％)。
LCMS(ESI)：m/z，943.1[M+2]+/2，1908.1[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.41–8.29(m,2H),8.23–8.12(m,2H),8.08–7.90(m,3H),7.81–7.67(m,4H),7.61(dd,J＝11.8,8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(s,1H),6.99(d,J＝3.2Hz,2H),6.50(s,1H),5.44(s,2H),5.29(d,J＝3.2Hz,3H),5.08(s,2H),4.60–4.25(m,12H),4.16-4.13(m,4H),3.73(d,J＝ 5.6Hz,2H),3.65(dt,J＝8.4,4.4Hz,3H),3.59-3.57(m,7H),3.50(d,J＝4.2Hz,28H),2.99(q,J＝6.8Hz,3H),2.73–2.63(m,3H),2.61–2.53(m,4H),2.38(d,J＝1.8Hz,3H),2.33–2.24(m,3H),2.10(td,J＝7.2,4.4Hz,3H),2.00–1.84(m,4H),1.53–1.42(m,5H),1.35–1.16(m,9H),0.86-0.82(m,9H)。
实施例9：化合物LY-21的制备
步骤1：化合物LY-21a的制备
将化合物PY-8(50mg，0.1mmol)、(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(LY-21B-a)(成都正善达)(79mg，0.2mmol)溶于3mL四氢呋喃中，加入PPTS(13mg，0.05mmol)，45℃搅拌12小时。反应液经过prep-HPLC(制备色谱厂家岛津，型号Lab311-DJ-R2，色谱柱为Saga 220×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，洗脱比例从21％到51％)得到黄色固体LY-21a(20mg，收率：25％)。
LCMS：m/z＝733.3[M+1]+；Rt＝2.133。
步骤2：化合物LY-21b的制备
将化合物LY-21a(12mg，0.015mmol)溶于1mL DMAc中，加入二乙胺(5mg，0.075mmol)，25℃搅拌两小时。油泵抽10分钟去除多余的乙二胺，得到黄色固体粗品(10mg，收率：85％)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝551.1[M+1]+；Rt＝0.657。
步骤3：化合物LY-21的制备
将化合物LY-21b(10mg，0.018mmol)、(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰)甘氨酰-L-苯丙氨酸(成都正善达)(8mg，0.018mmol)、PPTS(9mg，0.036mmol)、HOBt(10mg，0.074mmol)溶于DMAc(1mL)，加入EDCI(4mg，0.02mmol)，25℃下搅拌12小时。反应液经过高效液相色谱制备(制备色谱厂家岛津，型号R5，色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相(0.225％HCOOH)-乙腈，洗脱比例从21％到51％)纯化，得到黄色固体化合物LY-21(2.71mg，收率：15％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,2H),8.31(s,1H),8.16–8.02(m,3H),7.72(d,J＝11.2Hz,1H),7.30(s,1H),7.23(d,J＝6.0Hz,4H),7.17(dd,J＝6.0,2.5Hz,1H),6.98(s,2H),6.51(s,1H),5.43(s,2H),5.23(s,2H),4.57(d,J＝6.8Hz,2H),4.48(d,J＝4.8Hz,1H),3.79–3.69(m,3H),3.66(d,J＝5.6Hz,2H),3.58(dd,J＝16.8,5.4Hz,2H),3.44(d,J＝6.0Hz,2H),3.14(q,J＝5.6Hz,4H),3.04(d,J＝9.6Hz,1H),2.84(dt,J＝19.6,6.0Hz,4H),2.09(q,J＝9.2,8.3Hz,4H),1.89–1.82(m,2H),1.74(d,J＝8.0Hz,2H),1.46(q,J＝7.6Hz,4H),1.17(t,J＝7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例10：化合物LY-21B的制备
步骤1：(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(LY-21B-b)的制备
氮气氛下，将化合物LY-21B-a(5g，14.11mmol，1eq)、LTA(8.76g，19.75 mmol，1.4eq)的THF(100mL)和甲苯(33mL)溶液置于85℃搅拌2.5小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后用(PE:EA＝8:1)打浆，溶液呈油状，加石油醚继续搅拌，溶液变为白色悬浊液。过滤得滤饼，油泵抽干得白色固体产物LY-21B-b(5.56g，收率：99％)。
LCMS(ESI)：m/z，391[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δ7.77(d,J＝7.6Hz,2H),7.59(d,J＝7.6Hz,2H),7.44–7.38(m,2H),7.32(td,J＝7.4,1.2Hz,2H),7.11(d,J＝8.0Hz,1H),5.42(d,J＝7.6Hz,1H),5.25(d,J＝7.2Hz,2H),4.45(d,J＝6.8Hz,2H),4.23(t,J＝6.8Hz,1H),3.90(d,J＝5.6Hz,2H),2.06(s,3H)。
步骤2：化合物LY-21B-c的制备
氮气氛下，向化合物LY-21B-b(44.16mg，119.87μmol，1.5eq)和PY-18(36mg，79.92μmol，1eq)的DMF(3.5mL)溶液中加入HCl(59.94μL，239.75μmol，3eq，4M在二氧六环中)，并置于室温搅拌2小时，然后补加化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(50mg，135.8μmol)，继续搅拌过夜。反应液浓缩，经反相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从35％到70％洗脱)纯化，得产物LY-21B-c(20.4mg，收率33.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，759[M+H]+。
步骤3：化合物LY-21B-d的制备
将化合物LY-21B-c(20.4mg，26.88μmol，1eq)和二乙胺(16.6μL，161.3μmol，6eq)的DMF溶液置于室温搅拌2小时。油泵抽干，得化合物LY-21B-d的粗品(19mg)。
LCMS(ESI)：m/z，537[M+H]+。
步骤4：化合物LY-21B的制备
氮气氛下，将化合物LY-21B-d(19mg，35.41μmol，1eq)、(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰)甘氨酰-L-苯丙氨酸(LY-21B-e)(成都正善达)(16.73mg，35.41μmol，1eq)、PPTS(17.8mg，70.82μmol，2eq)、HOBt(19.14mg，141.64μmol，4eq)和EDCI(7.47mg，38.95μmol，1.1eq)的DMA(1.5mL)溶液置于室温搅拌过夜，反应液经高效液相色谱制备(制备色谱厂家岛津SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到55％洗脱)纯化，得白色固体LY-21B(3.23mg，9.2％)。
LCMS(ESI)：m/z，991[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(t,J＝6.6Hz,1H),8.25(t,J＝5.8Hz,1H),8.10–8.05(m,2H),8.00(t,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝11.2Hz,1H),7.30(s,1H),7.22–7.12(m,5H),6.98(s,2H),6.53(d,J＝7.6Hz,1H),5.43(s,2H),5.21(s,2H), 4.55(d,J＝6.6Hz,2H),4.45(q,J＝4.6Hz,1H),3.74–3.53(m,10H),3.15(dd,J＝15.6,6.2Hz,4H),3.11–3.06(m,2H),2.98(dd,J＝13.8,4.4Hz,1H),2.74–2.69(m,1H),2.08(q,J＝7.6Hz,4H),1.87(p,J＝6.8Hz,2H),1.46(h,J＝7.2Hz,4H),1.21–1.14(m,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)；19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.37。
实施例11：化合物LY-21C的制备
步骤1：化合物LY-21C-b的制备
向化合物LY-21B-b(243.68mg，100％，661.48μmol，1.5eq)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入化合物PY-10(195mg，98.7％，440.99μmol，1eq)，再加入对甲苯磺酸(TSOH)(75.94mg，70.97μL，440.99μmol，1eq)。反应液在26℃搅拌12小时。减压浓缩，残余物通过柱层析色谱法(二氯甲烷：甲醇＝1：0～10：1)纯化，然后通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-4。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)分离纯化，冻干，得到白色固体产物LY-21C-b(95mg，收率：28.92％)。
LCMS(ESI)：m/z,745.2[M+H]+。
步骤2：化合物LY-21C-d的制备
将化合物LY-21C-b(13mg，15.15μmol，1eq)溶于DMF(6mL)，向该溶液中加入二乙胺(33.93mg，47.79μL，463.88μmol，3.6367eq)，氮气氛下，在10℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到粗品LY-21C-d，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，523.2[M+H]+。
步骤3：化合物LY-21C的制备
将化合物LY-21C-d(65mg，124.39μmol，1eq)与化合物LY-21B-e(70.53mg，149.27μmol，1.2eq)溶于DMF(5mL)，依次加入1-羟基-苯并-三氮唑(25.21mg， 16.81μL，186.59μmol，1.5eq)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(35.77mg，40.79μL，186.59μmol，1.5eq)，搅拌2小时。反应液过滤后，用反相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)分离，得到白色固体产物LY-21C(84.85mg，收率：69.81％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(t,J＝6.7Hz,1H),8.38(t,J＝5.9Hz,1H),8.18(d,J＝8.1Hz,1H),8.07(dt,J＝19.9,5.8Hz,2H),7.76(d,J＝11.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.25(d,J＝4.4Hz,4H),7.19–7.15(m,1H),6.99(s,2H),6.55(s,1H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.69(d,J＝6.5Hz,4H),4.52–4.47(m,1H),4.37(t,J＝5.1Hz,1H),3.81–3.75(m,2H),3.73(dd,J＝5.9,2.0Hz,1H),3.66(d,J＝5.7Hz,2H),3.59(dd,J＝16.7,5.4Hz,1H),3.47–3.41(m,1H),3.20(dd,J＝17.1,5.8Hz,3H),3.10–3.03(m,1H),2.82(dd,J＝13.8,9.7Hz,1H),2.11–2.03(m,4H),1.87(dt,J＝15.0,7.1Hz,2H),1.45(h,J＝7.6Hz,4H),1.21–1.12(m,2H),1.05(t,J＝7.0Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
LCMS(ESI):m/z,977.2[M+H]+。
实施例12：化合物LY-22的制备
步骤1：化合物LY-22c的制备
氮气氛下，将(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)乙酸酯(成都正善 达)(3g，8.14mmol，1eq)溶于四氢呋喃(60mL)，室温加入化合物2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烷-1-醇(2.87g，16.29mmol，2eq)，再加入催化量的对甲苯磺酸(140.23mg，131.06μL，814.35μmol，0.1eq)。反应液在20-25℃搅拌2.5小时。将反应液慢慢倒入冰水(60mL)中，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析色谱法纯化，流动相为石油醚/乙酸乙酯，梯度为1：0～1：2，得到半固体状白色固体化合物LY-22c(2.10g，收率：53.21％，纯度：96％)。
LCMS(ESI)：m/z，507.3[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22d的制备
将化合物LY-22c(2.10g，96％，4.16mmol，1eq)溶于DMA(20mL)中，向该溶液中加入DBU(316.62mg，310.72μL，2.08mmol，0.5eq)，氮气氛下，溶液在15℃搅拌1.5小时。反应液不做任何处理，直接用于下一步。
步骤3：化合物LY-22f的制备
0℃，向化合物LY-22d(1.14g，4.34mmol，1eq)的DMA(20mL)的溶液中加入对甲苯磺酸(374.02mg，349.55μL，2.17mmol，0.5eq)，再依次加入化合物LY-21B-e(1.85g，3.91mmol，0.9eq)、HOBt(586.99mg，4.34mmol，1eq)，最后加入EDCI(832.75mg，4.34mmol，1eq)，加完后，氮气氛下，反应液在0-10℃搅拌2小时。反应液慢慢倒入冰水(60mL)中，用二甲基四氢呋喃(60mL×2)萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠(60mL)、饱和氯化钠(60mL)、水(60mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得粗品用硅胶柱色谱法纯化(Instrument Name：ISCO-4，流动相为DCM:MeOH，梯度为0：1～10：1)，得到白色固体化合物LY-22f(2.80g，收率89.91％，纯度96％)。
LCMS(ESI):m/z，512.3(片段峰的lcms值)。
步骤4：化合物LY-22g的制备
将化合物LY-22f(1.04g，96％，1.39mmol，1eq)溶于THF(10mL)，0℃加入试剂TEA.3HF(899.47mg，5.58mmol，4eq)。氮气氛下，将反应液在25℃搅拌6小时。反应液用反相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-4。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.05％NH3H2O)-乙腈，水的洗脱比例从5％到20％洗脱)分离纯化，冻干后得到白色固体产物LY-22g(600mg，收率：71.38％)。
LCMS(ESI)：m/z，512.3(片段峰的lcms值)。
步骤5：化合物LY-22h的制备
将化合物LY-22g(300mg，497.80μmol，1eq)溶于DMA(20mL)，向该反应液中加入NPC(181.72mg，597.36μmol，1.2eq)、DIPEA(77.21mg，98.73μL，597.36μmol，1.2eq)。氮气氛下，反应液在30℃搅拌4小时。反应液不做处理，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，790.3[M+Na]+。
步骤6：化合物LY-22的制备
将化合物伊喜替康甲磺酸盐(皓元医药购买)(263.10mg，494.95μmol，1eq)溶于DMA(2mL)，加入DIPEA(63.97mg，81.81μL，494.95μmol，1eq)，该反应液在25℃搅拌10分钟，然后将化合物LY-22h(380mg，494.95μmol，1eq)的反应液加入，再依次加入HOBt(33.44mg，22.29μL，247.48μmol，0.5eq)和吡啶(195.75mg，200.16μL，2.47mmol，5eq)，氮气氛下，反应液在25℃搅拌3小时。反应液直接用高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干后得白色固体产物(220mg，收率：41.77％)。
LCMS(ESI)：m/z，1064.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.52(t,J＝6.7Hz,1H),8.30(t,J＝5.8Hz,1H),8.15–7.97(m,4H),7.78(d,J＝10.9Hz,1H),7.31(s,1H),7.28–7.12(m,5H),6.99(s,2H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,3H),4.62–4.55(m,2H),4.48(s,1H),4.18(s,2H),3.78–3.53(m,8H),3.23(s,2H),3.15–2.99(m,3H),2.78(dd,J＝13.8,9.7Hz,1H),2.38(d,J＝1.8Hz,2H),2.18(s,2H),2.09(t,J＝7.4Hz,2H),1.86(dt,J＝15.4,7.0Hz,3H),1.46(h,J＝7.1Hz,4H),1.19(h,J＝7.7Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例13：化合物LY-22BM1的制备

步骤1:化合物LY-22BM1-c的制备
向化合物甘氨酰-L-苯丙氨酸(购买自皓元医药)(500mg，98％，1.75mmol，1eq)和化合物马来酰亚胺-一聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯(544.34mg，98％，1.75mmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入DIPEA(680.23mg，99％，869.87μL，5.26mmol，3eq)，室温反应1小时，LCMS显示反应完成，残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-220g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-25％H2O/CH3CN，80mL/min)纯化，得到白色固体化合物LY-22BM1-c(696.60mg，Yield:83.68％，Purity:97％)。LCMS(ESI):m/z，475[M+H]+。
步骤2:化合物LY-22BM1-a的制备
向化合物乙酸[[2-(Fmoc-氨基)乙酰氨基]甲基]酯(1g，2.71mmol，1eq)和2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙醇(957.3mg，5.43mmol，2eq)的THF(15mL)溶液中加入TsOH(472.2mg，2.71mmol，1eq)，置于30℃下搅拌2小时，LCMS显示原料消失，反应液通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-330g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-35％H2O/CH3CN，100mL/min)纯化(中压)，得白色固体的LY-22BM1-a(316mg，Yield＝31.43％)。
LCMS(ESI):m/z，393[M+Na]+，Rt＝1.537min。
步骤3:化合物LY-22BM1-b的制备
向化合物LY-22BM1-a(316mg，853.11μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中，加入DBU(63.73μL，426.55μmol，0.5eq)，将反应置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。向反应液中加入TsOH(74.19mg，426.55μmol，0.5eq)。直接投下一步。LY-22BM1-b的理论质量为126.40mg(粗品不计产率)。
步骤4:化合物LY-22BM1-d的制备
氮气保护下，冰浴下向化合物LY-22BM1-c(208.65mg，426.57μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入LY-22BM1-b(63.20mg，426.57μmol，1eq)，HOBT(57.66mg，426.57μmol，1eq)，EDCI(82.60mg，426.57μmol，1eq)，置于室温下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化得淡黄色固体的LY-22BM1-d(172.40mg，Yield＝66.8％)。
LCMS(ESI):m/z，627[M+Na]+，Rt＝0.764min。
步骤5:化合物LY-22BM1-e的制备
向LY-22BM1-d(172.40mg，285.14μmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(142.80μL，855.42μmol，3eq)和二(对硝基苯)碳酸酯(178.85mg，570.28μmol，2eq)，并置于35℃下搅拌3小时，油泵浓缩溶液，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝0-50％，甲醇/二氯甲烷＝0-8％)纯化得白色固体的LY-22BM1-e(99.60mg，Yield＝45.38％)。
LCMS(ESI):m/z，792[M+Na]+，Rt＝1.563min。
步骤6:化合物LY-22BM1的制备
向化合物LY-22BM1-e(99.60mg，129.40μmol，1eq)和依喜替康甲磺酸盐(69.11mg，130μmol，1eq)的DMF(6mL)溶液中加入DIEA(85.54μL，517.59μmol，4eq)和HOBT(8.75mg，64.70μmol，0.5eq)，室温下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过高效液相色谱(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)得淡黄色固体的LY-22BM1(66.50mg，Yield＝48.21％，Purity＝94.38％)。
LCMS(ESI):m/z，1066[M+H]+，Rt＝1.675。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.30(s,1H),8.12(d,J＝7.2Hz,2H),8.05(d,J＝8.8Hz,1H),8.00(s,1H),7.78(d,J＝10.8Hz,1H),7.31(s,1H),7.28–7.15(m,5H),7.00(s,2H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,3H),4.58(d,J＝7.4Hz,2H),4.48(s,1H),4.18(s,2H),3.78–3.64(m,5H),3.61(t,J＝4.8Hz,2H),3.54(dt,J＝11.4,5.8Hz,4H),3.45(t,J＝5.6Hz,2H),3.12(s,2H),3.03(dd,J＝13.8,4.6Hz,1H),2.87–2.70(m,2H),2.38(s,3H),2.33(d,J＝6.0Hz,2H),2.18(s,2H),1.86(dt,J＝15.4,7.2Hz,2H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例14：化合物LY-22BM2的制备
步骤1:化合物((9H-芴-9-基)甲基(2,2,3,3-四甲基-11-氧代-4,8-二氧代-10-氮杂-3-硅十二烷-12-基)氨基甲酸酯(LY-22BM2-a)的制备
将化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)乙酸甲酯(购买自成都正善达)(1g，2.71mmol，1eq)溶于THF(20mL)，加入3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-醇(1.03g，99％，5.43mmol，2eq)和TsOH(46.75mg，99％，43.69μL，271.46μmol，0.1eq)，在25℃下搅拌1小时。LCMS显示目标产物。反应液通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-330g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-30％H2O/CH3CN，100mL/min)纯化，得棕色固体产物(600mg，Yield:44.32％)。
LCMS(ESI):m/z，521.3[M+Na]+。
步骤2:化合物LY-22BM2-a2的制备
将化合物LY-22BM2-a(600.01mg，1.20mmol，1eq)溶于DMF(20mL)，加入DBU(91.58mg，89.88μL，601.57μmol，0.5eq)，在25℃下搅拌2小时。LCMS显示目标产物。反应液无需纯化，直接用于下一步。
LCMS(ESI):m/z，299.3[M+Na]+。
步骤3:化合物LY-22BM2-b的制备
将化合物LY-22BM2-a2(150mg，542.59μmol，1eq)溶于DMF(5mL)中，加入TsOH(47.19mg，99％，44.10μL，271.30μmol，0.5eq)，再依次加入化合物LY-22BM1-c(该化合物的合成请参考LY-22BM1的合成实施例)(265.41mg， 542.59μmol，1eq)和HOBT(88.01mg，99.96％，58.68μL，651.11μmol，1.2eq，最后在0℃下加入EDCI(126.08mg，99％，651.11μmol，1.2eq)，反应液在25℃下搅拌1小时。LCMS显示有产物生成。得到黄色溶液(300mg，Yield:75.44％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI):m/z，755.4[M+Na]+。
步骤4:化合物LY-2BM2-c的制备
向化合物LY-22BM2-b(300mg，409.33μmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中，加入Et3N.3HF(68.03mg，97％，66.72μL，409.33μmol，1eq)，25℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完全。反应液通过硅胶柱层析色谱法制备，得到白色固体产物(150mg，Yield:59.24％)。
硅胶柱层析色谱法制备条件如下：
残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-120g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 25-50％H2O(0.225％FA)-ACN，100mL/min)纯化。
LCMS(ESI):m/z，641.3[M+Na]+。
步骤5:化合物LY-22BM2-d的制备
室温下将化合物LY-22BM2-c(150mg，242.47μmol，1eq)溶于DMF(5mL)，加入二(对硝基苯)碳酸酯(152.08mg，97％，101.39μL，484.93μmol，2eq)和DIPEA(94.96mg，99％，121.43μL，727.40μmol，3eq)，反应液在33℃下搅拌3小时，LCMS显示原料反应完全。反应液浓缩至干，残留物硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:1，再二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化，得白色固体产物(150mg，Yield:78.93％)。
LCMS(ESI):m/z，806.3[M+Na]+。
步骤6:化合物LY-22BM2的制备
将化合物LY-22BM2-d(60mg，76.56μmol，1eq)溶于DMF(3mL)，加入依喜替康甲磺酸盐(41.11mg，99％，76.56μmol，1eq)、DIPEA(39.98mg，99％，51.12μL，306.22μmol，4eq)和HOBT(5.17mg，99.96％，3.45μL，38.28μmol，0.5eq)，反应液在25℃下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过高效液相色谱制备，得到黄色固体产物(31.19mg，Yield:37.72％，Purity:95％)。
高效液相色谱制备条件如下：
制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱。
LCMS(ESI):m/z,1078.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(t,J＝6.6Hz,1H),8.30(t,J＝5.9Hz,1H),8.15–8.08(m,2H),8.03–7.92(m,2H),7.78(d,J＝11.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.28– 7.13(m,5H),7.00(s,2H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.23(d,J＝7.4Hz,3H),4.51(dd,J＝23.3,5.8Hz,3H),4.21–4.04(m,2H),3.81–3.63(m,5H),3.56(ddd,J＝17.9,13.2,5.4Hz,5H),3.50–3.41(m,4H),3.23(s,2H),3.15–3.07(m,1H),3.03(dd,J＝14.0,4.5Hz,1H),2.77(dd,J＝13.8,9.6Hz,1H),2.38(d,J＝1.9Hz,3H),2.32(t,J＝6.6Hz,2H),2.17(d,J＝24.5Hz,2H),1.86(dp,J＝18.5,6.8,6.2Hz,4H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例15：化合物LY-22BM3的制备
步骤1:化合物LY-22BM3-b制备
将化合物LY-22BM2-a2(该化合物的合成请参考LY-22BM2的合成实施例)(80mg，289.38μmol，1eq)溶于DMF(3mL)中，加入TsOH(24.92mg，99％，23.29μL，144.69μmol，0.5eq)，再依次加入LY-21B-e(购买自成都正善达)(136.73mg，289.38μmol，1eq)和HOBT(46.92mg，99.96％，31.28μL，347.26μmol，1.2eq)，最后在0℃下加入EDCI(66.57mg，99％，347.26μmol，1.2eq)，反应液在0-10℃下搅拌2小时。LCMS显示有产物生成。得到黄色溶液(150mg，Yield:70.92％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI):m/z，753.5[M+Na]+。
步骤2:化合物LY-22BM3-c的制备
向化合物LY-22BM3-b(150mg，205.22μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液 中，加入Et3N.3HF(170.53mg，97％，172.43μL，1.03mmol，5eq)，25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完全。反应液通过高效液相色谱制备，得到白色固体产物LY-22BM3-c(80mg，Yield:63.22％)。
反向色谱谱制备条件如下：
残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-330g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 12-42％H2O(0.225％FA)-ACN，100mL/min)纯化
LCMS(ESI):m/z，639.3[M+Na]+。
步骤3:化合物LY-22BM3-d的制备
室温下将化合物LY-22BM3-c(80mg，129.73μmol，1eq)溶于DMF(2mL)，加入二(对硝基苯)碳酸酯(81.37mg，97％，54.25μL，259.46μmol，2eq)和DIPEA(50.81mg，99％，64.97μL，389.19μmol，3eq)，反应液在30℃下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。反应液浓缩至干，残留物硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1:1，再二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化，得白色固体产物(90mg，Yield:88.74％)。
LCMS(ESI):m/z，804.4[M+Na]+。
步骤4:化合物LY-22BM3的制备
将化合物LY-22BM3-d(40mg，51.17μmol，1eq)溶于DMF(3mL)，加入依喜替康甲磺酸盐(27.20mg，51.17μmol，1eq)和DIPEA(26.72mg，99％，34.17μL，204.66μmol，4eq)，HOBT(3.46mg，99.96％，2.31μL，25.58μmol，0.5eq)，反应液在25℃下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过高效液相色谱制备，得到黄色固体产物LY-22BM3(32.19mg，Yield:58.35％，Purity:98％)。
高效液相色谱制备条件如下：
制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱。
LCMS(ESI):m/z，1078.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(t,J＝6.6Hz,1H),8.30(t,J＝5.9Hz,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),8.07(t,J＝5.7Hz,1H),8.01(t,J＝5.7Hz,1H),7.95(d,J＝9.0Hz,1H),7.77(d,J＝10.9Hz,1H),7.31(s,1H),7.27-7.12(m,5H),6.99(s,2H),6.53(s,1H),5.42(s,2H),5.31-5.16(m,3H),4.61-4.43(m,3H),4.13(ddt,J＝19.6,12.9,6.4Hz,2H),3.80-3.53(m,6H),3.47(t,J＝6.2Hz,2H),3.31-3.18(m,3H),3.12(d,J＝7.5Hz,1H),3.03(dd,J＝13.8,4.4Hz,1H),2.78(dd,J＝13.8,9.7Hz,1H),2.41-2.33(m,3H),2.24-2.05(m,4H),1.86(dp,J＝18.8,6.8,6.3Hz,4H),1.46(h,J＝7.2Hz,4H),1.18(p,J＝7.8,7.4Hz,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例16：化合物LY-22C的制备
与实施例12的制备方法相同，除了用4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇代替2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烷-1-醇，制得化合物LY-22C。
实施例17：化合物LY-22CDX的制备

步骤1:化合物LY-22CDX-a的制备
冰浴下，向化合物LY-39A-b(500mg，1.23mmol，1eq，90％purity，该化合物的合成参考LY-39A和LY-44A的合成过程)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(318.36mg，407.11μL，2.46mmol，2eq)，而后逐滴加入(2S)-2-氨基-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸(303.36mg，1.23mmol，1eq)的DMF(2mL)，并置于室温下搅拌2小时，LCMS显示原料基本反应完全。残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-330g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-40％H2O/CH3CN，100mL/min)纯化(中压)得到白色固体LY-22CDX-a(484.60mg，Yield＝68.93％，Purity＝87％)。
LCMS(ESI):m/z，519[M+Na]+，Rt＝1.478min。
步骤2:化合物LY-22CDX-b的制备
冰浴下向LY-22CDX-a(484.6mg，849.01μmol，1eq)和N-羟基丁二酰亚胺(122.14mg，1.061mmol，1.25eq)的DMF(10mL)溶液中加入DIC(264.55mg，1.7mmol，2eq)，并置于室温下搅拌3小时，LCMS显示原料反应完全，向反应液中加入EA(10mL)和水(10mL)，分液后用水(10mL)洗有机相三次，饱和食盐水(10mL)两次，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩直接投下一步，得粗品LY-22CDX-b(579.50mg，Yield＝95.62％，Purity＝80％)。
LCMS(ESI):m/z，616[M+Na]+，Rt＝1.788min。
步骤3:化合物LY-22CDX-c的制备
冰浴下，向化合物LY-22CDX-b(579.5mg，780.93μmol，1eq)和LY-28b(344.78mg，780.93μmol，1eq，购买自毕得医药)的DMF(10mL)溶液中加入DIEA(258.12μL，1.56mmol，2eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。 通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20-50％洗脱)得黄色油状的LY-22CDX-c(408.90mg，Yield＝56.9％)。
LCMS(ESI):m/z，942[M+Na]+，Rt＝1.563min。
步骤4:化合物LY-22CDX-d制备
冰浴下，向化合物LY-22CDX-c(48.9mg，53.27μmol，1eq)和LY-22CD-b(40mg，53.27μmol，1eq，该化合物的合成参考LY-22CD的合成实施例)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(17.21mg，22.01μL，133.19μmol，2.5eq)和HATU(30.39mg，79.91μmol，1.5eq)，并置于室温下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30-60％洗脱)纯化得白色固体的LY-22CDX-d(54.6mg，Yield＝62％)。
LCMS(ESI):m/z，1675[M+Na]+，Rt＝2.151min。
步骤5:化合物LY-22CDX-e的制备
冰浴下向LY-22CDX-d(54.6mg，33μmol，1eq)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(0.5mL)，搅拌10分钟后立即浓缩，而后加入DMF(1mL)，送LCMS检测显示原料基本反应完全，直接投下一步，LY-22CDX-e的理论量为34.19mg(粗品不计产率)。
LCMS(ESI):m/z，1553[M+H]+，Rt＝1.653min。
步骤6:化合物LY-22CDX的制备
冰浴下，向化合物LY-22CDX-e(34.19mg，22μmol，1eq)和LY-10b(18.6mg，24.2μmol，1.1eq，该化合物的合成请参考LY-10的合成实施例)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(18.2mL，110μmol，5eq)和HATU(10mg，26.4μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 200×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20-50％洗脱)纯化得白色固体的LY-22CDX(27.8mg，Yield＝55％)。
LCMS(ESI):m/z,1153[1/2M+H]+,Rt＝1.583min.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,2H),8.55(t,J＝6.6Hz,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.99–7.89(m,3H),7.85(d,J＝8.8Hz,1H),7.82–7.75(m,2H),7.31(s,1H),6.53(s,1H),5.43(s,2H),5.30–5.19(m,3H),4.61–4.42(m,6H),4.32(t,J＝5.8Hz,3H),4.19(dt,J＝15.0,8.0Hz,4H),4.14–3.97(m,3H),3.65(dd,J＝8.0,4.2Hz,2H),3.57(td,J＝6.8,4.2Hz,7H),3.53–3.44(m,50H),3.40(d,J＝8.6Hz,11H),3.20(q,J＝7.0,5.8Hz,6H),3.16–3.07(m,2H),2.98(d,J＝6.8Hz,2H),2.77–2.60(m,4H),2.59–2.54(m,3H),2.44(t,J＝6.8Hz,2H),2.40–2.37(m,3H),2.36–2.23(m,6H),2.22–2.06(m,3H),1.98–1.75(m,6H),1.68–1.42(m,7H),1.34(s,3H),1.21(d,J＝7.2Hz,4H),0.94–0.74 (m,9H)。
实施例18：化合物LY-22CG的制备
步骤1:化合物LY-22CG-a的合成
冰浴下，向化合物Fmoc-L-谷氨酸5-叔丁酯(2g，4.70mmol，1eq)的二氯甲烷(40mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(649.20mg，5.64mmol，1.2eq)和N,N'-二环己基碳二亚胺(1.26g，6.11mmol，1.3eq)，并置于室温下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。滤去不溶物后，浓缩后残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯：石油醚＝0：1-1:1，甲醇：二氯甲烷＝0:100-3:97)纯化得白色固体LY-22CG-a(1.13g，Yield＝42.74％，Purity＝93％)。
LCMS(ESI):m/z，545[M+Na]+。
步骤2:化合物LY-22CG-b的制备
将甘氨酸(40.08mg，533.92μmol，1eq)和碳酸氢钠(44.85mg，533.92μmol，1eq)溶于水(5mL)中，置于室温下搅拌15分钟，后向该溶液中加入LY22CG-a(300mg，533.92μmol，1eq)的四氢呋喃(5mL)溶液，置于室温下搅拌24小时，LCMS显示原料反应完全，浓缩后，在0℃下用2N稀盐酸调节至pH＝3，加入水(5mL)，水相用乙酸乙酯(5mL)萃取3次，合并有机相用饱和食盐水(15mL)洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得粗品LY22CG-b(323.20mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI):m/z，505[M+Na]+。
步骤3:化合物LY-22CG-c的制备
向LY22CG-b(323.20mg，535.84μmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入Et2NH(276μL，2.68mmol，5eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全，油泵拉干直接投下一步。LY22CG-c的理论质量为(139.47mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI):m/z，261[M+H]+。
步骤4:化合物LY-22CG-d的制备
冰浴下，向化合物LY-39A-b(217.52mg，535.83μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(177.11μL，1.07mmol，2eq)和LY-22CG-c(139.47mg，535.83μmol，1eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全，反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-22CG-d(198.20mg，Yield＝43.47％，Purity＝60％)。
LCMS(ESI):m/z，533[M+Na]+。
步骤5:化合物LY-22CG-e的制备
0℃下向化合物LY-22CG-d(15.22mg，29.82μmol，1.1eq)和LY-22CI-int(该化合物的合成请参考LY-22CI合成过程)(20mg，27.11μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(8.96μL，54.22μmol，2eq)和HATU(12.37mg，32.53μmol， 1.2eq)。加毕，反应液在25℃下反应1小时。LCMS显示反应完成。反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-22CG-e(25mg，Yield＝74.96％，Purity＝95％)。
LCMS(ESI):m/z，1230[M+H]+。
步骤6:化合物LY-22CG-f的制备
0℃下向化合物LY-22CG-e(26.32mg，95％，20.32μmol，1eq)的DCM(4毫升)溶液中加入TFA(1.6毫升)。加毕，反应液在0-5℃下反应3小时。LCMS显示反应完成。反应液直接旋干得到白色固体化合物LY22CG-f(24mg，粗品)。
LCMS(ESI):m/z，1196.5[M+Na]+。
步骤7:化合物LY-22CG的制备
0℃下向化合物LY-22CG-f(24mg，20.44μmol，1eq)和LY-34C-c(该化合物的合成请参考LY-34C合成实施例)(15.14mg，20.44μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(13.21mg，16.89μL，102.19μmol，5eq)和HATU(7.77mg，20.44μmol，1eq)。加毕，反应液在25℃下反应2小时。LCMS显示反应完成。反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-22CG(11.51mg，Yield:29.69％，Purity:95％)。
LCMS(ESI):m/z，1897.1[M+H]+，949.1[1/2M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,2H),8.62(d,J＝6.7Hz,1H),8.22–8.10(m,3H),7.98–7.86(m,3H),7.77(d,J＝10.9Hz,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.92(t,J＝5.7Hz,1H),5.40(d,J＝23.6Hz,4H),5.24(d,J＝3.2Hz,3H),4.58–4.43(m,5H),4.31(s,3H),4.20(dt,J＝14.4,8.3Hz,3H),4.07(s,2H),3.77–3.63(m,4H),3.61–3.54(m,4H),3.49(q,J＝2.2Hz,30H),3.39(d,J＝6.0Hz,9H),3.16(p,J＝6.7,6.2Hz,5H),2.93(p,J＝6.8Hz,3H),2.77–2.67(m,2H),2.65–2.53(m,5H),2.38(d,J＝1.9Hz,3H),2.32(t,J＝6.6Hz,3H),2.24–2.06(m,5H),1.85(ddd,J＝30.7,14.4,7.3Hz,7H),1.68–1.42(m,7H),1.33(s,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例19：化合物LY-22CH的制备
步骤1:化合物N2-((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰 甘氨酸的制备
将化合物甘氨酸(66.36mg，41.61μL，883.99μmol，1eq)和NaHCO3(74.26mg，40.36μL，883.99μmol，1eq)溶于H2O(5mL)中，室温搅拌15分钟，向上述混合溶液中加入化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸(500mg，883.99μmol，1eq)溶于THF(5mL)的混合溶液，室温反应2小时，LCMS显示反应完成，旋干，用2N HCl调节pH＝2，用EA(20mL×3)萃取，合并有机相水洗(20mL×3)，饱和食盐水(20mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压旋干，得到黄色固体化合物N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰甘氨酸(427mg，Yield:91.90％)。LCMS(ESI):m/z，548[M+Na]+。
步骤2:化合物N6-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酰甘氨酸的制备
向化合物N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰甘氨酸(427mg，812.40μmol，1eq)的DMF(10mL)溶液中加入Et2NH(297.10mg，418.45μL，4.06mmol，5eq)，室温反应1小时，LCMS显示反应完成，旋干，得到白色固体化合物N6-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酰甘氨酸(246.45mg，粗品不计产率)，直接用于下一步，LCMS(ESI):m/z，304[M+H]+。
步骤3:化合物LY-22CH-e的制备
向化合物N6-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酰甘氨酸(246.45mg，812.40μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入DIPEA(209.99mg，268.53μL，1.62mmol，2eq)，0℃下滴加化合物LY-39B(329.80mg，90％，812.40μmol，1eq)(见LY-39B的合成实施例)和DMF(1mL)混合溶液，室温反应1小时，LCMS显示反应完成，残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-120g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-45％water/CH3CN，60mL/min)纯化纯化，得到白色固体化合物LY-22CH-e(386.30mg，Yield:85.89％)，LCMS(ESI):m/z，576[M+Na]+。
步骤4：化合物LY-22CH-f的制备
0℃下，向化合物LY-22CH-e(22.12mg，39.96μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入LY-22CD-b(30mg，39.96μmol，1eq)(合成过程参见LY-22CD的合成实施例)，DIPEA(10.33mg，13.21μL，79.91μmol，2eq)和HATU(30.39mg，79.91μmol，2eq)，室温反应1小时，LCMS显示反应完成，过滤送高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-22CH-f(26.60mg，Yield:51.75％)。LCMS(ESI):m/z，1308[M+Na]+。
步骤5：化合物LY-22CH-g的制备
0℃下，向化合物LY-22CH-f(26.60mg，20.68μmol，1eq)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(921mg，600μL)，0℃反应25分钟，LCMS显示反应完成， 旋干得到白色固体化合物LY-22CH-g(24.53mg，粗品不计产率)，直接用于下一步，LCMS(ESI):m/z，1208[M+Na]+。
步骤6：化合物LY-22CH的制备
0℃下，向化合物LY-22CH-g(20mg，81％，13.66μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入化合物LY-10b(52.56mg，68.28μmol，5eq)(该化合物的合成请参考LY-10的合成实施例)，DIPEA(17.65mg，22.57μL，136.56μmol，10eq)和HATU(25.96mg，68.28μmol，5eq)，室温反应16小时，LCMS显示反应完成，过滤送高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 200×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-22CH(3.07mg，Yield:9.67％)。LCMS(ESI):m/z，1939.1[M+Na]+。Rt＝1.524min。
实施例20：化合物LY-22CI的制备

步骤1:化合物LY-22CI-int-a的制备
向化合物Fmoc-L-瓜氨酸(10g，25.16mmol，1eq)和甘氨酸叔丁酯(4.95g，37.74mmol，1.5eq)的DCM(20mL)溶液中，加入化合物DIPEA(9.76g，75.49mmol，3eq)和HATU(11.48g，30.19mmol，1.2eq)，反应液在室温下搅拌过夜。LCMS显示反应完成。向反应液中加入二氯甲烷/甲醇(10:1，300mL)和水 (100mL)，混合物用稀盐酸(0.5M)洗2次，每次100mL，用饱和食盐水洗2次，每次100mL，用无水硫酸钠干燥过滤后减压旋干，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷0：1到1:9纯化)得到白色固体产物LY-22CI-int-a(11.90g，Yield:92.62％)。LCMS(ESI):m/z，511.3[M+H]+。
步骤2:化合物LY-22CI-int-b的制备
0℃下向化合物LY-22CI-int-a(3.20g，6.27mmol，1eq)的DCM(20mL)溶液中加入TFA(4mL)，反应在室温条件下搅拌过夜。LCMS显示反应完成。反应液减压旋干，残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-330g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 10-45％water(0.225％FA)/CH3CN，100mL/min)纯化得到白色固体产物LY-22CI-int-b(2.02g，Yield:70.92％)。LCMS(ESI):m/z，455.2[M+H]+。
步骤3:化合物LY-22CI-int-c的制备
向化合物LY-22CI-int-b(2.02g，4.44mmol，1eq)的DMF(20mL)溶液中加入醋酸(800.70mg，764.03μL，13.33mmol，3eq)，醋酸铜(242.18mg，226.76μL，1.33mmol，0.3eq)和醋酸铅(3.94g，1.78mL，8.89mmol，2eq)，反应在60℃条件下搅拌1小时。LCMS显示反应完成。反应液减压旋干，向残余物中加入饱和NaHCO3溶液调节pH＝7，加入DCM/MeOH(10:1，2000mL)，混合溶液用DCM/MeOH(10:1)萃取3次，每次1000mL，合并有机相，用饱和食盐水(1000mL)洗，通过无水Na2SO4干燥有机相，过滤后减压旋干。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷0:1到10:1纯化)得到白色固体产物LY-22CI-int-c(540mg，Yield:25.93％)。LCMS(ESI):m/z，491.3[M+Na]+。
步骤4:化合物LY-22CI-int-d的制备
向化合物LY-22CI-int-c(200mg，426.89μmol，1eq)和4-(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代-1-丁醇(174.49mg，853.77μmol，2eq)的THF(5mL)溶液中加入甲磺酸(73.51mg，426.89μmol，1eq)，反应在35℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压旋干。混合物通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)得到白色固体产物LY-22CI-int-d(48.80mg，Yield:22.93％)。LCMS(ESI):m/z，521.3[M+Na]+。
步骤5:化合物LY-22CI-int-e的制备
向化合物LY-22CI-int-d(209mg，419.19μmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入二(对硝基苯)碳酸酯(765.13mg，510.09μL，2.52mmol，6eq)和DIPEA(325.06mg，415.67μL，2.52mmol，6eq)，反应在35℃下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液减压旋干。残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：甲醇/二氯甲烷0:1到10:1纯化)得到白色固体产物LY-22CI-int-e(223mg，Yield:80.16％)。LCMS(ESI):m/z，686.4[M+Na]+。
步骤6:化合物LY-22CI-int-f的制备
向化合物LY-22CI-int-e(223mg，336.01μmol，1.3eq)和依喜替康甲磺酸盐(137.40mg，258.47μmol，1eq)的DMF(5mL)溶液中加入DIPEA(100.21mg，775.40μmol，3eq)和HOBt(34.92mg，258.47μmol，1eq)，反应在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-120g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 10-50％water/CH3CN，60mL/min)纯化得到白色固体产物LY-22CI-int-f(277mg，粗品不计收率)。LCMS(ESI):m/z，960.5[M+H]+。
步骤7:化合物LY-22CI-int的制备
向化合物LY-22CI-int-f(277mg，粗品)的DMF(3mL)溶液中加入二乙胺(211.03mg，2.89mmol，10eq)，置于室温下搅拌2小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-120g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 5-35％water/CH3CN，60mL/min)纯化得到白色固体LY-22CI-int(105mg，Yield:49.32％)。LCMS(ESI):m/z，738.5[M+H]+。
步骤8:化合物LY-22CI-a的制备
室温下向甘氨酰-L-缬氨酸(61.60mg，353.59μmol，1eq)的H2O(5mL)溶液中加入NaHCO3(29.71mg，353.59μmol，1eq)，反应液在25℃下搅拌30分钟后加入N6-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-赖氨酸2,5-二氧代-1-吡咯烷基酯(200mg，353.59μmol，1eq)的THF(5mL)溶液。加完后反应液在25℃下搅拌90分钟，LCMS显示反应完成。反应液减压下除去溶剂，用1N HCl调节pH为2，然后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水(60mL)洗涤，加入无水硫酸钠干燥，减压下旋干，得到白色油状化合物LY-22CI-a(240mg，粗品)。
LCMS(ESI):m/z，647.5[M+Na]+。
步骤9：化合物LY-22CI-b的制备
0℃下向LY-22CI-a(38.63mg，54.22μmol，1eq)和LY-22CI-int(40mg，54.22μmol，1eq)的DMF溶液(1mL)中分别加入DIEA(21.02mg，26.88μL，162.65μmol，3eq)和HATU(30.92mg，81.32μmol，1.5eq)。加完后反应液在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从50％到80％洗脱)经冻干得到白色固体化合物LY-22CI-b(23mg，Yield:31.55％)。
LCMS(ESI):m/z，1367.7[M+Na]+。
步骤10：化合物LY-22CI-c的制备
0℃下向化合物LY-22CI-b(23mg，17.11μmol，1eq)的DCM(2.5mL)溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)，加毕，反应液在0℃下搅拌30分钟。LCMS显示 反应完成，反应液直接旋干得到黄色油状化合物LY-22CI-c(21mg，粗品)。
LCMS(ESI):m/z，1245.7[M+H]+。
步骤11：化合物LY-22CI-d的制备
0℃下向LY-22CI-c(21mg，16.88μmol，1eq)和LY-10b(该化合物的合成请参考LY-10的合成实施例)(38.97mg，50.63μmol，3eq)的DMF溶液(1mL)中分别加入DIEA(13.09mg，16.73μL，101.25μmol，6eq)和HATU(19.25mg，50.63μmol，3eq)。加完后反应液在25℃下搅拌1小时，LCMS显示反应完成。反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-22CI-d(5mg，Yield:14.84％)。
LCMS(ESI):m/z，998.4[(M+2)/2]+。
步骤12:化合物LY-22CI-e的制备
0℃下向化合物LY-22CI-d(5mg，2.50μmol，1eq)的DMF(0.5毫升)溶液中加入二乙胺(915.99μg，1.29μL，12.52μmol，5eq)，加毕，反应液在25℃下搅拌30分钟。LCMS显示反应完成，反应液直接旋干得到浅黄色油状化合物LY-22CI-e(4.44mg，粗品)。
LCMS(ESI):m/z，887.7[(M+2)/2]+。
步骤13:化合物LY-22CI的制备
向LY-22CI-e(4.44mg，2.50μmol，1eq)的DMF(0.5毫升)溶液中依次加入LY-39b(该化合物的合成请参考LY-39的合成实施例)(2.03mg，90％，5.01μmol，2eq)和DIEA(970.41μg，1.24μL，7.51μmol，3eq)，加毕，反应液在25℃下搅拌1小时。LCMS显示反应完成，反应液通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×21.2mm×5μm。流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-22CI(1.92mg，Yield:37.90％)。
LCMS(ESI):m/z，1012.8[(M+2)/2]+。
实施例21：化合物LY-22CJ的制备
步骤1:化合物N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰-L-谷氨酰胺的制备
将L-谷氨酰胺乙酯(194.65mg，1.87mmol，3eq)溶于水(15mL)中，加入NaHCO3(96.54mg，52.47μL，1.15mmol，1.3eq)，0℃下，再加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸盐(500mg，883.98μmol，1eq)的THF(15mL)溶液，反应置于25℃下搅拌12小时。LCMS显示反应完成，反应液用1N盐酸水溶液调节pH＝5，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，浓缩，残留物通过硅胶柱层析色谱法(C18)(ISCO，R-220g SepaFlash Silica Flash Column，Eluent of 10-50％water/CH3CN，100mL/min)纯化，得到白色固体(500mg，Yield:94.80％)。
LCMS(ESI):m/z，619.4[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22CJ-d的制备
向化合物N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰-L-谷氨酰胺(30mg，50.28μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中加入LY-22CD-b(该化合物的合成请参考LY-22CD的合成实施例)(37.75mg，50.28μmol，1eq)和DIPEA(13mg，16.62μL，100.56μmol，2eq)，0℃下，加入HATU(28.68mg，75.42μmol，1.5eq)，反应在25℃下搅拌1小时，LCMS显示有目标产物生成。反应液通过高效液相色谱纯化，得白色固体产物LY-22CJ-d(30mg，Yield:44.88％)。
高效液相色谱条件如下：
制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 200×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱。
LCMS(ESI):m/z，1329.9[M+H]+。
步骤3：化合物LY-22CJ-e的制备
0℃下，向LY-22CJ-d(25mg，18.80μmol，1eq)的DCM(3mL)溶液中加入TFA(3.84g，2.50mL，33.66mmol，1789.834eq)，10℃下搅拌0.5小时，LCMS显示原料反应完全。反应液直接旋干，得到黄色油状产物(20mg，Yield:86.52％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI):m/z，1229.7[M+H]+。
步骤4：化合物LY-22CJ-f的制备
向化合物LY-22CJ-e(20mg，16.27μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中加入LY-10b(25.05mg，32.54μmol，2eq)和DIPEA(2.10mg，2.69μL，16.27μmol，1eq)，0℃下，加入HATU(9.28mg，24.40μmol，1.5eq)，并置于25℃下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全，反应液通过高效液相色谱纯化，得白色固体产物LY-22CJ-f(20mg，Yield:62.05％)。
高效液相色谱制备条件如下：
制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱。
LCMS(ESI):m/z，1982.0[M+H]+。
步骤5：化合物LY-22CJ-g的制备
向LY-22CJ-f(10mg，5.05μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中加入Et2NH(1.85mg，2.60μL，25.24μmol，5eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。反应液直接旋干，得黄色油状产物(8mg，Yield:90.11％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI):m/z，880.1[(M+2H)/2]+。
步骤6：化合物LY-22CJ的制备
向化合物LY-22CJ-g(8mg，4.55μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中加入2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(1.76mg，2.26μL，13.64μmol，3eq)，DIPEA(1.76mg，2.26μL，13.64μmol，3eq)，并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。反应液通过高效液相色谱制备，得到白色固体产物LY-22CJ(1.23mg，Yield:13.46％，Purity:96％)。
高效液相色谱条件如下：
制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,2H),8.59(t,J＝6.6Hz,1H),8.11(d,J＝7.6Hz,1H),8.04(dd,J＝7.5,4.4Hz,2H),7.92(d,J＝8.9Hz,1H),7.82-7.75(m,2H),7.69(d,J＝8.7Hz,1H),7.31(s,1H),7.25(s,1H),6.82-6.74(m,1H),6.53(s,1H),5.43(s,2H),5.24(s,3H),4.66-4.39(m,6H),4.33(q,J＝5.7Hz,2H),4.28–4.02(m,7H),3.75(t,J＝7.9Hz,1H),3.56(t,J＝6.5Hz,5H),3.54-3.43(m,23H),3.41(s,3H),3.23(s,8H),3.16-3.03(m,4H),2.98(d,J＝6.8Hz,3H),2.59-2.52(m,3H),2.38(d,J＝1.9Hz,3H),2.34-2.23(m,4H),2.22-2.05(m,5H),1.89-1.87(m,9H),1.67–1.42(m,7H),1.40-1.14(m,8H),0.92–0.73(m,8H)。
实施例22：化合物LY-22F的制备

步骤1：N-{2-[2-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)乙酰胺基]乙基}氨基甲酸叔丁酯的制备
氮气氛下，将((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酸(300mg，1.01mmol，1eq)溶于DMF(10mL)。室温下，加化合物N-叔丁氧羰基乙二胺(193.99mg，190.94μL，1.21mmol，1.2eq)和DIPEA(195.61mg，250.15μL，1.51mmol，1.5eq)，然后再加入HATU(575.52mg，1.51mmol，1.5eq)。该反应液在15℃搅拌2小时。反应液直接用于下一步反应，产物量按理论收率计算(440mg，收率：99.21％)。
LCMS(ESI)：m/z，462.2[M+Na]+。
步骤2：N-[2-[(2-氨基乙酰基)氨基]乙基]-氨基甲酸1,1-二甲基乙酯的制备
将N-{2-[2-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)乙酰胺基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(440mg，1mmol，1eq)溶于DMF(5mL)，向该溶液中加入DBU(76.20mg，74.78μL，500.56μmol，0.5eq)，该溶液在20℃搅拌2小时。反应液不做任何处理，产物按理论量200mg(收率：91.95％)计算，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，259.3[M+H+MeCN]+。
步骤3：化合物LY-22F-d的制备
0℃下，向化合物(2-(2-氨基乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，460.26μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中，加入LY-21B-e(217.47mg，460.26μmol，1eq)，再依次加入TsOH(39.63mg，37.04μL，230.13μmol，0.5eq)、HOBt(62.19mg，41.46μL，460.26μmol，1eq)，最后加入EDCI(88.23mg，100.61μL，460.26μmol，1eq)，反应液在20℃下搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体产物(120mg，收率：38.81％)。
LCMS(ESI)：m/z，694.3[M+Na]+。
步骤4：化合物LY-22F-e的制备
将化合物LY-22F-d(120mg，178.64μmol，1eq)溶于DCM(3mL)/TFA(1mL)，反应液在15℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到黄色油状产物(100mg，收率：97.93％)。
LCMS(ESI)：m/z，572.3[M+H]+。
步骤5：化合物LY-22F-f的制备
将化合物LY-22F-e(100mg，174.94μmol，1eq)溶于DMF(3mL)，向该反应液中加入DIPEA(67.83mg，86.73μL，524.81μmol，3eq)，然后加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(106.43mg，70.96μL，349.87μmol，2eq)。反应液在30℃搅拌12小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇1:0到1:10)纯化，得到无色油状产物(120mg，收率：93.11％)。
LCMS(ESI)：m/z，737.3[M+H]+。
步骤6：化合物LY-22F的制备
将化合物LY-22F-f(25.32mg，34.37μmol，1.5eq)溶于DMF(1mL)，加入PY-1(10mg，22.91μmol，1eq)和DIPEA(8.88mg，11.36μL，68.74μmol，3eq)。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到两个批次白色固体产物(保留时间不同，应该是2个异构体)，产物量分别为(1.67mg，收率：6.77％，纯度：96％)，(2.46mg，收率：9.97％，纯度：96％)。
LCMS(ESI):m/z，1056.4[M+Na]+。
实施例23：化合物LY-22AD的制备
步骤1：化合物LY-22AD-a的制备
0℃下，向化合物LY-27a(800mg，1.66mmol，1eq)的THF(10mL)溶液中加入2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烷-1-醇(585.87mg，3.32mmol，2eq)和TsOH(85.82mg，80.21μL，498.39μmol，0.3eq)，加毕，30℃(外温)反应3小时。反应液冷却到室温，减压浓缩，残余物通过常规反相Flash纯化，冻干得到白色固体化合物LY-22AD-a(342mg，收率：42.57％)。
LCMS(ESI)：m/z，506.3[M+H]+，Rt＝1.817min。
步骤2：化合物LY-22AD-b的制备
0℃下向化合物LY-22AD-a(43.01mg，93％，82.72μmol，1eq)的DMF(4mL)溶液中加入二(对硝基苯)碳酸酯(50.33mg，33.55μL，165.44μmol，2eq)和DIEA(32.07mg，41.01μL，248.15μmol，3eq)。加毕反应液在30℃(外温)搅拌2小时。反应液减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1到10:1)纯化，得到化合物LY-22AD-b(61mg，收率：80.72％，纯度：71％)。
LCMS(ESI)：m/z，671.3[M+H]+。Rt＝2.645min。
步骤3：化合物LY-22AD-c的制备
将伊喜替康甲磺酸盐(35.49mg，66.77μmol，1eq)溶于DMA(3mL)，加入DIPEA(8.63mg，11.03μL，66.77μmol，1eq)，该反应液在25℃下搅拌10分钟，然后加入LY-22AD-b(61mg，71％，66.77μmol，1eq)、HOBt(4.51mg，3.01μL，33.38μmol，0.5eq)和吡啶(26.41mg，27μL，333.84μmol，5eq)。氮气氛下，反应液在25℃搅拌3小时。LCMS显示有7％原料剩余，补加DIPEA(17mg，2.0eq)，反应液继续在25℃搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从50％到80％洗脱)纯化，冻干后得白色固体产物LY-22AD-c(43mg，粗品，收率：61.34％，纯度：90％)。
LCMS(ESI)：m/z，945.5[M+H]+。Rt＝2.606min。
步骤4：化合物LY-22AD-d的制备
0℃下向化合物LY-22AD-c(43mg，90％，40.95μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入二乙胺(14.98mg，21.09μL，204.76μmol，5eq)，加毕反应液在25℃下搅拌2小时。反应液减压浓缩，得黄色固体化合物LY-22AD-d(29mg，粗品收率不计)。
LCMS(ESI)：m/z，745.4[M+Na]+，Rt＝1.323min。
步骤5：化合物LY-22AD的制备
0℃下向化合物LY-29B-d(16.89mg，85％，20.75μmol，1eq)、化合物LY-22AD-d (15mg，20.75μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(8.05mg，10.29μL，62.26μmol，3eq)和HATU(9.47mg，24.90μmol，1.2eq)，加毕25℃反应2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物LY-22AD(6.18mg，收率：21.32％，纯度：97.98％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,2H),8.59(s,1H),8.04(d,J＝6.9Hz,2H),7.93(s,1H),7.85(d,J＝8.7Hz,1H),7.78(d,J＝10.9Hz,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,3H),4.57(dd,J＝16.9,6.6Hz,2H),4.26–4.10(m,4H),3.59(d,J＝6.3Hz,3H),3.53–3.44(m,22H),3.40(d,J＝2.8Hz,10H),3.20(q,J＝5.8Hz,4H),2.57–2.53(m,2H),2.43(t,J＝6.9Hz,2H),2.40–2.36(m,3H),2.26(t,J＝7.3Hz,2H),2.17(d,J＝9.7Hz,2H),1.94–1.76(m,5H),1.20(d,J＝7.1Hz,3H),0.91–0.75(m,8H)。
LCMS(ESI)：m/z,1418.8[M+Na]+,Rt＝1.803min。HPLC:Rt＝4.812min。
实施例24：化合物LY-22AF的制备

步骤1：化合物LY-22AF-a的制备
将2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙烷-1-醇(311.1mg，2.0eq)和化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)乙酸甲酯(成都正善达)(325mg，1.0eq)溶解于无水四氢呋喃(15mL)中，加入对甲苯磺酸(45.58mg，0.3eq)后，于25℃搅拌反应1小时。反应液直接用于下一步。
LCMS：m/z＝507.3[M+Na]+；Rt＝3.030min。
步骤2：化合物LY-22AF-b的制备
向化合物LY-22AF-a(427mg)的反应液中加入对甲苯磺酸(45.51mg，0.3eq)，然后于25℃搅拌1小时。将反应液减压浓缩，残余物用少量DMF溶解后过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得到化合物LY-22AF-b(190mg，收率58.2％)。
LCMS：m/z＝393.2[M+Na]+；Rt＝1.496min。
步骤3：化合物LY-22AF-c的制备
将化合物LY-22AF-b(370mg，1.0eq)溶解于无水DMF(5mL)中，0℃下加入DIPEA(471μL，3.0eq)和二(对硝基苯)碳酸酯(577.4mg，2.0eq)后，升温至25℃搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-22AF-c(235mg，收率32.4％，纯度70.4％)。
LCMS：m/z＝558.3[M+Na]+；Rt＝2.433min。
步骤4：化合物LY-22AF-d的制备
将伊喜替康甲磺酸盐(76.3mg，1.0eq)溶解于无水DMF(5mL)中，向其中加入DIPEA(23.7μL，1.0eq)后，于25℃搅拌十分钟。然后依次加入化合物LY-22AF-c(142.8mg，1.3eq)和吡啶(58.1μL，5.0eq)、HOBT(9.7mg，0.5eq)，补加DIPEA(71.2μL，3.0eq)，于25℃搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-22AF-d(130mg，收率80％，纯度85.8％)。
LCMS：m/z＝854.3[M+Na]+；Rt＝2.303min。
步骤5：化合物LY-22AF-e的制备
将化合物LY-22AF-d(110mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，加入二乙胺(117.1μL，10.eq)后，于25℃搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，粗品直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝610.3[M+H]+；Rt＝1.169min。
步骤6：化合物LY-22AF的制备
将化合物LY-22AF-e(40mg，1.0eq)和化合物LY-22CE-f(63.7mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，0℃下加入DIPEA(32.5μL，3.0eq)和HATU(37.4mg，1.5eq)，然后升温至25℃搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到产品LY-22AF(8.10mg，收率8.67％)。
LCMS：m/z＝1391.5[M+Na]+；Rt＝1.730min。
实施例25：化合物LY-22CA的制备

步骤1：化合物LY-22CA-c的制备
向化合物LY-21A-b(1g，2.36mmol，1eq)和4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇(965.3mg，4.72mmol，2eq)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入对甲苯磺酸(122mg，708.51μmol，0.3eq)，并置于30℃搅拌3小时。反应液加水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取水相3次，合并有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚1:2-1:1)纯化，得化合物LY-22CA-c(519mg，收率＝55.1％)。
LCMS(ESI)：m/z，421[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22CA-d的制备
向化合物LY-22CA-c(519mg，1.3mmol，1eq)和二(对硝基苯)碳酸酯(790.5mg，2.6mmol，2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.64mL，3.9mmol，3eq)，并置于室温下搅拌2小时。加水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取水相3次，合并有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚1:3-1:1)纯化，得化合物LY-22CA-d(425.1mg，收率＝58.0％)。
LCMS(ESI)：m/z，586[M+Na]+。
其余步骤与实施例16相同，除了用LY-22CA-d代替化合物LY-22AF-c，用LY-47B-d代替LY-22CE-f，制得化合物LY-22CA。
LCMS(ESI)：m/z，1293[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,2H),8.51(t,J＝6.6Hz,1H),8.17(t,J＝5.8Hz,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,1H),7.93(dd,J＝8.6,4.6Hz,2H),7.77(d,J＝10.8Hz,1H),7.63(t,J＝6.0Hz,1H),7.31(s,1H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.37(d,J＝5.0Hz,1H),5.23(d,J＝3.6Hz,2H),4.51(ddd,J＝17.6,9.8,5.6Hz,4H),4.40(d,J＝7.2Hz,1H),4.34(s,1H),4.21-4.13(m,2H),4.07(d,J＝6.0Hz,2H),3.97(d,J＝4.2 Hz,1H),3.90(s,1H),3.70(qd,J＝16.8,5.6Hz,2H),3.57(d,J＝11.2Hz,1H),3.47(s,2H),3.41(s,7H),3.06(ddt,J＝27.2,13.2,6.6Hz,4H),2.55(d,J＝7.2Hz,2H),2.38(d,J＝2.0Hz,4H),2.24-2.11(m,2H),2.02-1.88(m,2H),1.89-1.77(m,4H),1.62(q,J＝6.8,6.2Hz,3H),1.58-1.49(m,3H),1.39(d,J＝7.2Hz,2H),1.25(d,J＝12.8Hz,2H),0.91-0.78(m,9H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-111.35。
实施例26：化合物LY-22CB的制备

步骤1：LY-22CB-c的制备
冰浴下，向化合物LY-37d(10.68mg，18.82μmol，1.2eq)和化合物LY-22CA-f(10mg，15.68μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(5.18μL，31.36μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(7.75mg，20.39μmol，1.3eq)，而后恢复室温搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从48％到78％洗脱)，得产物LY-22CB-c(14.4mg，收率＝40.7％)。
LCMS(ESI)：m/z，1187[M+H]+。
步骤2：LY-22CB-d的制备
向化合物LY-22CB-c(14.4mg，12.13μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入二乙胺(6.25μL，60.64μmol，5eq)，并置于室温下搅拌2小时。减压浓缩，得粗品LY-22CB-d(14.7mg)。
LCMS(ESI)：m/z，965[M+H]+。
步骤3：LY-22CB-f的制备
向化合物LY-39A-b(8.85mg，24.22μmol，2eq)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(6μL，36.33μmol，3eq)和LY-22CB-d(14.7mg，12.11μmol，1eq，79.5％纯度)，并置于室温下搅拌过夜。反应物通过高效液相色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，得产物LY-22CB-f(10.1mg，Yield＝68.63％)。
LCMS(ESI)：m/z，1215[M+H]+。
步骤4：LY-22CB-g的制备
冰浴下，向化合物LY-22CB-f(10.1mg，8.31μmol，1eq)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(0.2mL)，并置于冰浴下搅拌2小时。减压浓缩，得粗品LY-22CB-g(16.4mg)。
LCMS(ESI)：m/z，1115[M+H]+。
步骤5：LY-22CB的制备
向化合物LY-22CB-g(16.4mg，8.31μmol，1eq，56.5％纯度)和化合物LY-10b(19.2mg，24.93μmol，3eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(8.24μL，49.85μmol，6eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(6.32mg，16.62μmol，2eq)，置于室温搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得产物LY-22CB(1.83mg，收率＝11.8％)。
LCMS(ESI)：m/z，1866[M+H]+。
实施例27：化合物LY-22CC的制备

步骤1：化合物LY-22CC-a的制备
将化合物LY-27a(500mg，1.04mmol，1eq)溶于THF(10mL)，然后加入加化合物4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇(424.42mg，2.08mmol，2eq)和TsOH(16.46mg，15.38μL，95.59μmol，1eq)，该反应液在30℃下搅拌4小时。反应液直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，648.4[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22CC-b的制备
将化合物LY-22CC-a(500mg，798.88μmol，1eq)溶于THF(10mL)，向该溶液中加入4M的盐酸1,4-二氧六环溶液(29.13mg，199.72μL，798.88μmol，1eq)，该溶液在15℃下搅拌3小时。反应液减压浓缩，残余物用高压液相色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为XT-15*30-10。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从40％到70％洗脱)纯化，得白色固体化合物LY-22CC-b(70mg，收率：17.13％)。
LCMS(ESI)：m/z，534.3[M+Na]+。
步骤3：化合物LY-22CC-c的制备
将化合物LY-22CC-b(70mg，136.82μmol，1eq)溶于DMF(5mL)的溶液中，加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(83.24mg，55.50μL，273.64μmol，2eq)和DIPEA(53.05mg，67.84μL，410.46μmol，3eq)。反应液在15℃下搅拌12小时。反应液浓缩大部分DMF，加入DCM(30mL)，用水(30mL)洗涤，有机相干燥过滤，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：DCM:MeOH＝0:1～5:1)纯化，得到黄色固体产物LY-22CC-c(70mg，收率：75.60％)。
LCMS(ESI)：m/z，699.3[M+Na]+。
其余步骤与实施例16相同，除了用LY-22CC-c代替LY-22AF-c，用LY-29C-c代替LY-22CE-f，制得化合物LY-22CC。
LCMS(ESI):m/z，1350.7[M+H]+。
实施例28：化合物LY-22CD的制备
步骤1：LY-22CD-a的制备
向PY-4Car2(25.25mg，45.66μmol，1eq)和化合物LY-27a(219.87mg，456.59μmol，10eq)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入对甲苯磺酸(7.86mg，45.66μmol，1eq)，并置于30℃下搅拌20小时。将反应液浓缩后，用N,N-二甲基甲酰胺溶解后过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为XT-15*30-10。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从60％到90％洗脱)纯化，得产物LY-22CD-a(12.8mg，Yield＝28.81％)。
LCMS(ESI)：m/z，995[M+Na]+。
步骤2：LY-22CD-b的制备
将化合物LY-22CD-a(12.8mg，12.15μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入二乙胺(6.78μL，65.77μmol，5eq)，并置于室温下搅拌2小时。减压浓缩得粗品LY-22CD-b(15mg)。
LCMS(ESI)：m/z，773[M+Na]+。
步骤3：LY-22CD的制备
将化合物LY-22CD-b(9.88mg,13.16μmol，1eq)和化合物LY-29B-d(11.78mg，14.47μmol，1.1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(4.35μL，26.32μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(6mg，15.79μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌2小时。反应液经过高 效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Global30mm×250mm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到产物LY-22CD(4.05mg，收率＝21.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，1446[M+Na]+。
实施例29：化合物LY-22CD-2的制备
步骤1：2-亚硫基-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯的制备
将化合物2-溴-4-甲氧基羰基苯胺(7g，30.43mmol，1eq)和(乙氧基甲硫酰基)磺酰胺钾(9.75g，60.85mmol，2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液置于130℃下搅拌16小时。恢复室温，将溶液缓慢滴入冰水(50mL)中，用浓盐酸调节至pH＝1，析出固体，过滤并用冰水(10mL)洗涤，收集滤饼用甲醇溶解，通过C18反相柱分离得到白色固体2-亚硫基-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯(454.4mg，收率＝6.63％)。
LCMS(ESI)：m/z，226[M+H]+。
步骤2：2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯的制备
室温下向化合物2-亚硫基-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯(454.4mg，2.017mmol，1eq)和碘甲烷(150.7μL，2.42mmol，1.2eq)的乙醇(8mL)溶液中滴 入三乙胺(336μL，2.42mmol，1.2eq)，而后置于90℃搅拌1小时。将反应液浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝10％-15％)纯化，得产物2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯(434.9mg，收率＝90％)。
LCMS(ESI)：m/z，240[M+H]+。
步骤3：2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸的制备
冰浴下向化合物2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸甲酯(234.9mg，0.981mmol，1eq)的四氢呋喃/水(4mL/0.6mL)溶液中加入一水合氢氧化锂(164.8mg，3.92mmol，4eq)，室温下搅拌10小时后，LCMS显示反应未完全，加热至80℃搅拌5小时后，LCMS显示原料反应完全。加二氯甲烷(5mL)和水(5mL)稀释，后用1N稀盐酸调节至pH＝3，用二氯甲烷(5mL)反萃水相三次，合并有机相用饱和食盐水(15mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得产物2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(209.1mg，收率＝94.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，226[M+H]+。
步骤4：2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸的制备
将化合物2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(209.1mg，0.928mmol，1eq)和间氯过氧苯甲酸(800.9mg，4.64mmol，5eq)的二氯甲烷(5mL)溶液置于室温下搅拌16小时。用饱和硫代硫酸钠溶液(3mL)淬灭反应，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至中性，二氯甲烷(10mL)萃取水相三次，合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R1。色谱柱为Welch Xtimate C18250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得产物2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(150.4mg，收率＝63％)。
LCMS(ESI)：m/z，258[M+H]+。
步骤5：3-(2-((2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-基)甲酰胺基)乙氧基)丙酸叔丁酯(LY-22CD-2-a)的制备
将化合物2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(150.4mg，0.585mmol，1eq)和化合物3-(2-氨基乙氧基)丙酸叔丁酯(132.7mg，0.702μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(193mL，1.17μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(266.9mg，0.702μmol，1.2eq)，置于室温下搅拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R1。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得产物LY-22CD-2-a(169.9mg，收率＝67.8％)。
LCMS(ESI)：m/z，451[M+Na]+。
步骤6：3-{2-((2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-基)甲酰胺基)乙氧基)丙酸(LY-22CD-2-b)的制备
冰浴下向化合物LY-22CD-2-a(169.9mg，0.396mmol，1eq)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，而后置于室温下搅拌2小时，减压浓缩后得粗品(200mg)。
LCMS(ESI)：m/z，373[M+H]+。
步骤7：2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-{2-((2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-基)甲酰胺基)乙氧基)丙酸酯(LY-22CD-2-c)的制备
冰浴下向化合物LY-22CD-2-b(147.7mg，0.396mmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(91.15mg，0.792mmol，2eq)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(123mL，0.792mmol，2eq)，于室温下搅拌18小时后，LCMS显示基本未反应，补加N-羟基丁二酰亚胺(182.3mg，1.584mmol，4eq)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(246mL，1.584mmol，4eq)，于50℃搅拌6小时后，LCMS显示原料反应完全。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R1。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)得产物2,5-二氧代吡咯烷-1-基3-{2-((2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-基)甲酰胺基)乙氧基)丙酸酯(124.3mg，收率＝67.0％)。
LCMS(ESI)：m/z，470[M+H]+。
步骤8：1-(3-(2-((2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-基)甲酰胺基)乙氧基)丙酰胺基)-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂环庚烷-27-酸(LY-22CD-2-d)的制备
向化合物LY-22CD-2-c(60mg，127.8μmol，1eq)和27-氨基-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧杂二十七烷酸(LY-10a)(67.71mg，153.36μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(42.24mL，255.6μmol，2eq)，置于室温下搅拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到40％洗脱)得化合物LY-22CD-2-d(81mg，收率＝79.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，796[M+H]+。
步骤9：化合物LY-22CD-2的制备
冰浴下向化合物LY-22CD-b(19.03mg，82.6％纯度，20.94μmol，1eq)和化合物LY-22CD-2-d(20mg，25.13μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(6.92mL，41.88μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(9.55mg，25.13μmol，1.2eq)，置于室温下搅拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R1。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)得产物LY-22CD-2(13.48mg，收率＝42.11％)。
LCMS(ESI)：m/z，1550[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(d,J＝1.6Hz,1H),8.73(t,J＝5.6Hz,1H),8.54(t,J＝6.8Hz,1H),8.32(d,J＝8.6Hz,1H),8.14(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),8.03(d,J＝7.2Hz,1H),7.91(d,J＝7.2Hz,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(d,J＝10.8Hz,1H),7.31(s,1H),6.51(s,1H),5.42(s,2H),5.23(s,3H),4.51(ddd,J＝29.6,10.0,6.4Hz,2H),4.19(dt,J＝15.6,7.4Hz,2H),4.06(d,J＝6.4Hz,2H),3.67-3.51(m,9H),3.51-3.43(m,26H),3.37(t,J＝5.8Hz,6H),3.23(s,2H),3.18(q,J＝5.8Hz,4H),2.48–2.33(m,7H),2.28-2.05(m,3H),1.97-1.81(m,3H),1.66-1.50(m,4H),1.21(d,J＝7.2Hz,3H),0.96-0.70(m,9H)。
实施例30：化合物LY-22CD-3的制备
步骤1：5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺的制备
0℃下向5-氨基-2-溴吡啶(10g，57.80mmol，1eq)和硫氰酸钾(22.47g，11.91mL，231.20mmol，4eq)的醋酸溶液(100mL)中加入液溴的醋酸溶液(20mL)，20℃下搅拌3小时。反应液用水(50mL)淬灭，经过滤后得到滤液，滤液减压浓缩后得到粗品。粗品用碳酸氢钠水溶液碱化至pH＝8，并用乙酸乙酯(50mL×4)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩后得到黄色固体的5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(9.80g)。
LCMS(ESI)：m/z，230.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(s,2H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,1H)。
步骤2：(5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
室温下将5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺(7.80g，33.90mmol，1eq)/三乙胺(4.46g，6.13mL，44.07mmol，1.3eq)/4-二甲氨基吡啶(414.15mg，414.15μL，3.39mmol，0.1eq)和碳酸酐二叔丁酯(9.62g，9.43mL，44.07mmol，1.3eq)依次加入到四氢呋喃(320mL)溶液中，25℃下搅拌16小时。将反应液浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝40％-50％)纯化，得产物(5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g，21.20mmol，二步收率：26％)。
LCMS(ESI)：m/z，330.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.12(s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),1.52(s,9H)。
步骤3：2-((叔丁氧羰基)氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯的制备
室温下将(5-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6g，18.17mmol，1eq)、碳酸钾(7.53g，3.10mL，54.51mmol，3eq)、醋酸钯(1.22g，5.45mmol，0.3eq)和1,3-双二苯膦基丙烷(1.80g，4.36mmol，0.24eq)依次加入到甲醇(120mL)和N,N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液中，在一氧化碳气氛下，60℃搅拌16小时。将反应液浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝40％-80％)纯化，得产物2-((叔丁氧羰基)氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(2.20g，7.11mmol，收率：39％)。
LCMS(ESI)：m/z，310.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.26(s,1H),8.25–8.04(m,2H),3.90(s,3H),1.53(s,9H)。
步骤4：2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯的制备
0℃下，向2-((叔丁氧羰基)氨基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(2.20g，7.11mmol，1eq)的二氯甲烷(80mL)溶液中加入三氟乙酸(40mL)，20℃下搅拌2小时。将反应液浓缩后，向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，然后过滤，滤饼经减压浓缩后，得到2-氨基噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1.38g，6.60mmol，收率：93％)。
LCMS(ESI)：m/z，210.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(s,2H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.85(s,3H)。
步骤5：2-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯的制备
0℃下向溴化铜(1.84g，386.06μL，8.24mmol，1.25eq)的乙腈(60mL)溶液中加入亚硝酸叔丁酯(1.22g，1.42mL，11.87mmol，1.8eq)、2-氨基噻唑 并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1.38g，6.60mmol，1eq)，25℃下搅拌16小时。将反应液浓缩后，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝20％-40％)纯化，得产物2-溴噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1.45g，5.31mmol，收率：81％)。
LCMS(ESI)：m/z，273.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.37–8.27(m,2H),4.07(s,3H)。
步骤6：2-(甲硫基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯的制备
将2-溴-[1，3]噻唑并[5，4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(375mg，1.37mmol，1eq)和甲硫醇钠(240.61mg，3.43mmol，2.5eq)在乙二醇二甲醚(10mL)中的溶液置于-15℃下搅拌2小时。向反应物中加入饱和氯化铵水溶液(5mL)，浓缩，加入四氢呋喃(30mL)，过滤，收集滤饼，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R1。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体2-(甲硫基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(180mg，收率＝25.89％)和2-(甲硫基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸(100mg，收率＝15.28％)。
LCMS(ESI)：m/z，241.1[M+H]+。
步骤7：2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸的制备
室温下，将化合物2-(甲硫基)噻唑并[5,4-b]吡啶-5-羧酸甲酯(180mg，749.06μmol，1eq)和一水合氢氧化锂(62.92mg，41.67μL，1.50mmol，2eq)的四氢呋喃(2mL)与水(2mL)混合溶液置于20℃下搅拌12小时，将反应液浓缩，向其中加入水(50mL)和盐酸(2M，aq)至pH＜5，过滤，用水(3mL×2)洗涤，并收集滤饼，得产物2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(169mg，粗品)。
LCMS(ESI)：m/z，227.1[M+H]+。
步骤8：2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸的制备
向2-(甲基硫烷基)-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(269mg，1.19mmol，1eq)在四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中的溶液中加入过氧单磺酸钾(3.29g，9.51mmol，8eq)，混合物在20℃下搅拌2小时。向混合物中加入乙酸乙酯(30mL)和H2O(20mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取水相。合并的有机层用饱和食盐水(10mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到40％洗脱)纯化，得产物2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(220mg，收率＝71.65％)。
LCMS(ESI)：m/z，259.1[M+H]+。
步骤9：化合物(LY-22CD-3-a)的制备
将化合物3-(2-氨基乙氧基)丙酸叔丁酯(70.34mg，371.70μmol，1.2eq)和 2-甲基磺酰基-1,3-苯并噻唑-6-羧酸(80mg，309.75μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(80.07mg，102.38μL，619.51μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(141.34mg，371.70μmol，1.2eq)，置于室温下搅拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R6。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得化合物LY-22CD-3-a(114.3mg，收率＝85.91％)。
LCMS(ESI)：m/z，452[M+Na]+。
步骤10：化合物(LY-22CD-3-b)的制备
冰浴下向化合物(LY-22CD-3-a)(114.30mg，266.12μmol，1eq)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，而后置于室温下搅拌2小时，减压浓缩后得粗品(150mg)。
LCMS(ESI)：m/z，396[M+Na]+。
步骤11：化合物(LY-22CD-3-c)的制备
冰浴下向化合物LY-22CD-3-b(99.37mg，266.12μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中加入N-羟基丁二酰亚胺(183.77mg，1.60mmol，6eq)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(201.51mg，248.77μL，1.60mmol，6eq)，于50℃搅拌2小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到40％洗脱)纯化，得化合物LY-22CD-3-c(100mg，收率：79.87％)。
LCMS(ESI)：m/z，493[M+Na]+。
步骤12：化合物LY-22CD-3-d的制备
向化合物LY-22CD-3-c(100mg，212.55μmol，1eq)和27-氨基-4,7,10,13,16,19,22,25-八氧杂二十七烷酸(112.61mg，102.37μL，255.06μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(54.94mg，70.26μL，425.11μmol，2eq)，置于室温下搅拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到40％洗脱)纯化，得化合物LY-22CD-3-d(48.4mg，收率＝28.57％)。
LCMS(ESI)：m/z，797[M+H]+。
步骤13：化合物LY-22CD-3的制备
冰浴下向化合物LY-22CD-b(22.07mg，29.39μmol)和化合物LY-22CD-3-d(28.11mg，35.27μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(7.60mg，9.72μL，58.79μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(13.41mg，35.27μmol，1.2eq)，置于室温下搅 拌1小时。反应液过滤后，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860-R7。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得产物LY-22CD-3(17.03mg，收率＝37.87％)。
LCMS(ESI)：m/z，1551[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.86(d,J＝8.6Hz,1H),8.54(t,J＝6.6Hz,1H),8.37(d,J＝8.6Hz,1H),8.03(d,J＝7.2Hz,1H),7.90(s,2H),7.84(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(d,J＝10.8Hz,1H),7.31(s,1H),6.51(s,1H),5.42(s,2H),5.23(s,3H),4.58-4.44(m,3H),4.19(dt,J＝15.8,7.4Hz,3H),4.06(d,J＝6.4Hz,2H),3.66-3.52(m,10H),3.48(d,J＝3.2Hz,28H),3.18(q,J＝5.8Hz,3H),2.43(t,J＝6.8Hz,2H),2.38(s,3H),2.33(d,J＝6.2Hz,3H),2.24-2.11(m,3H),1.97-1.81(m,4H),1.67-1.49(m,5H),1.21(d,J＝7.2Hz,3H),0.90-0.77(m,9H)。
实施例31：化合物LY-22CE的制备
步骤1：化合物LY-22CE-a的制备
向PY-4Car2(30mg，54.39μmol，1eq)和(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)乙酸甲酯(200.36mg，543.9μmol，10eq)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入对甲苯磺酸(9.37mg，54.39μmol，1eq)，并置于30℃搅拌21小时，将反应液浓缩后，用N,N-二甲基甲酰胺溶解后过滤，滤液通过高效液相色谱(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为XT-15*30-10。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从60％到90％洗脱)纯化，得产物 LY-22CE-a(7.7mg，80％纯度，收率＝13.17％)。
LCMS(ESI)：m/z，882[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22CE-b的制备
将化合物LY-22CE-a(7.7mg，7.16μmol，1eq，80％纯度)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入二乙胺(3.69μL，35.82μmol，5eq)，并置于室温下搅拌2小时。减压浓缩得粗品LY-22CE-b(10mg)。
LCMS(ESI)：m/z，638[M+H]+。
步骤3：化合物LY-22CE-c的制备
室温下，将化合物5,8,11,14-四氧杂-2-氮杂十七烷二酸(1g，2.05mmol，1eq)、N-羟基丁二酰亚胺(259.67mg，162.29μL，2.26mmol，1.1eq)和二环己基碳二亚胺(465.53mg，574.72μL，2.26mmol，1.1eq)依次加入到二氯甲烷(20mL)中。20℃下搅拌60小时。反应液过滤后，滤液减压浓缩后，得到粗品化合物LY-22CE-c(1.1g)。
LCMS(ESI)：m/z，585.2[M+H]+。
步骤4：化合物LY-22CE-d的制备
室温下将化合物LY-22CE-c(1.65g)、甘氨酰-甘氨酰-L-苯丙氨酸(788.28mg，2.82mmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.09g，1.40mL，8.47mmol，3eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(16mL)和水(4mL)中。20℃下搅拌1.5小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R5。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体化合物LY-22CE-d(1.84g，两步收率：82％)。
LCMS(ESI)：m/z，749.4[M+H]+。
步骤5：化合物LY-22CE-e的制备
将二乙胺(1.80g，2.53mL，24.57mmol，10eq)加入到化合物LY-22CE-d(1.84g，2.46mmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，并置于20℃下搅拌2小时。减压浓缩得黄色油状粗品化合物LY-22CE-e(2.43g)。
LCMS(ESI)：m/z，527.3[M+H]+。
步骤6：LY-22CE-f的制备
室温下，将化合物LY-39A-b(982.93mg，2.69mmol，1.1eq)、化合物LY-22CE-e(2.43g，粗品纯度53％，2.45mmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(948.26mg，1.21mL，7.34mmol，3eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中。20℃下搅拌16小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R5。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到30％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体产物LY-22CE-f。
LCMS(ESI)：m/z，777.3[M+H]+。
步骤7：LY-22CE的制备
向化合物LY-22CE-f(12.25mg，7.88μmol，1.1eq，50％纯度)和化合物LY-22CE-b(4.57mg，7.17μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.18μL，7.17μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(3.27mg，8.6μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为P Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从40％到60％洗脱)，得到产物LY-22CE(0.86mg，收率＝8.59％)。
LCMS(ESI)：m/z，1418[M+Na]+。
实施例32：化合物LY-22CF的制备
步骤1：化合物LY-22CF-e的制备
向化合物LY-22CE-b(17.50mg，27.44μmol，1eq)和化合物LY-37f(16.66mg，30.19μmol，1.1eq)的DMF(2mL)中，冰浴下加入DIPEA(7.09mg，9.07μL，54.89μmol，2eq)和HATU(12.52mg，32.93μmol，1.2eq)，恢复室温继续搅拌2小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860R5。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从40％到70％洗脱)纯化，冻干，得到白色固体)化合物LY-22CF-e(5.60mg，收率：17.42％,纯度：100％)。
LCMS(ESI)：m/z，1193[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-22CF-f的制备
向化合物LY-22CF-e(5.60mg，100％，4.78μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中，加入二乙胺(1.75mg，2.46μL，23.90μmol，5eq)，将反应置于室温下搅拌2小时。减压浓缩，得到黄色油状液体粗品(4.50mg)。
LCMS(ESI)：m/z，949[M+H]+。
步骤3：化合物LY-22CF的制备
向化合物LY-22CF-f(4.50mg，4.74μmol，1eq)和化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2-甲基磺酰基嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(LY-39A-b)(2.08mg，5.69μmol，1.2eq)的DMF(1mL)中，加入DIPEA(1.23mg，1.57μL，9.48μmol，2eq)搅拌4小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)，冻干，得到白色固体LY-22CF(0.61mg，收率：10.7％,纯度：95％)。
LCMS(ESI):m/z，1199[M+H]+。
实施例33：化合物LY-27的制备
步骤1：化合物LY-27a2的制备
冰浴下，向(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸-L-丙氨酸(晧元医药，LY-27a1)(8.5g，20.71mmol，1eq)和甘氨酸叔丁酯(3.26g，24.85mmol，1.2eq)的甲醇/二氯甲烷(50mL/100mL)溶液中加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(7.68g，31.06mmol，1.5eq)，搅拌10分钟后，置于40℃搅拌过夜。浓缩后加入石油醚/乙酸乙酯(100mL/50mL)打浆，搅拌20分钟后过滤，得到白色固体(10.6g，收率＝97.76％)。
LCMS(ESI)：m/z，546[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-27a3的制备
冰浴下，向化合物LY-27a2(10.6g，20.24mmol，1.0eq)的二氯甲烷(60mL)溶液中加入三氟乙酸(20mL)，自然恢复室温，搅拌过夜。浓缩并用二氯甲烷(10mL)浓缩3次，得淡黄色稠状的粗品(15.24g)。
LCMS(ESI):m/z，468[M+H]+。
步骤3：化合物LY-27a的制备
氮气氛下，向化合物LY-27a3(15.24g，20.2mmol，1.0eq，62.1％纯度)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液中加入四乙酸铅(23.3g，52.52mmol，2.6eq)、醋酸(4.6mL，80.8mmol，4eq)、醋酸铜(1.46g，8.08mmol，0.4eq)，将反应液置于60℃搅拌1小时，升至室温，减压浓缩，残余物加水产生大量不溶物，用水(100mL)和乙腈(100mL)溶解，用乙酸乙酯(100mL)萃取，盐水(50mL×2)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物LY-27a(8g，收率＝82.2％，纯度＝80％)。
LCMS(ESI)：m/z，504[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.81(d,J＝7.6Hz,2H),7.69(t,J＝7.0Hz,2H),7.40(t,J＝7.6Hz,2H),7.32(t,J＝7.4Hz,2H),5.20(d,J＝6.2Hz,2H),4.48-4.30(m,3H),4.24(t,J＝6.8Hz,1H),3.94(d,J＝6.8Hz,1H),2.01(s,3H),1.36(d,J＝7.2Hz,3H),0.97(dd,J＝9.6,6.6Hz,6H)。
步骤4:化合物LY-27b的制备
向化合物PY-8(50mg，107.64μmol，1eq，80％的纯度)和化合物LY-27a(51.84mg，107.64μmol，1eq)的10mL THF溶剂中，加入0.39倍当量PPTS(10.55mg，41.98μmol)，将反应置于45℃搅拌16小时。反应液过滤后，经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干，得黄色固体化合物LY-27b(17mg，产率：14％，纯度：78％)。
LCMS(ESI)：m/z，886.4[M+H]+。
步骤5:化合物LY-27c的制备
向化合物LY-27b(17mg，78％的纯度，12.33μmol，1eq)的4mL的四氢呋喃与二氯甲烷(体积比为1:1)的混合溶液中，加入10倍当量二乙胺(16μL，123.3 μmol，10eq)，将反应置于25℃搅拌16小时。反应液过滤，经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干，得14mg的黄色固体LY-27c。
LCMS(ESI)：m/z，664.1[M+H]+。
步骤6：化合物LY-27f的制备
将氨基-八聚乙二醇-羧酸(晧元医药，200mg，452.98μmol，1eq)和马来酸酐(44.42mg，30.01μL，452.98μmol，1eq)加入到醋酸(10mL)溶液中，160℃搅拌16h。反应液减压浓缩，经过prep-HPLC(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到白色固体LY-27f(90mg，173μmol，收率：38％)。
LCMS(ESI)：m/z，522.3[M+H]+。
步骤7：化合物LY-27的制备
将四甲基氯代脲六氟磷酸酯(2.5mg，9.0μmol，1.2eq)和N-甲基咪唑(1.9mg，23μmol，3.0eq)加入到化合物LY-27c(5.0mg，7.5μmol，1.0eq)和化合物LY-27f(3.9mg，7.5μmol，1.0eq)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液中，25℃搅拌2h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体LY-27(0.64mg，0.5FA salt，5％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，1189.6[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(t,J＝6.7Hz,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.85(d,J＝8.7Hz,1H),7.72(d,J＝11.3Hz,1H),7.30(s,1H),7.02(s,2H),6.52(s,1H),5.43(s,3H),5.24(s,2H),4.56(qd,J＝10.2,6.4Hz,3H),4.28–4.13(m,3H),3.56(dd,J＝8.8,5.6Hz,4H),3.51(s,2H),3.46(s,12H),3.45–3.43(m,5H),3.11-3.14(m,5H),2.85(t,J＝7.8Hz,2H),2.47–2.32(m,4H),2.10-2.08(m,3H),1.90-1.85(m,4H),1.74(t,J＝7.6Hz,3H),1.20(d,J＝7.2Hz,4H),0.93–0.76(m,12H)。
实施例34：化合物LY-28的制备

步骤1：化合物LY-28a的制备
氮气氛下，向3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸(500mg，2.96mmol，1eq)、N-羟基丁二酰亚胺(425.6mg，3.7mmol，1.25eq)的低温DMF(15mL)溶液中加入DIC(747.1mg，5.92mmol，2eq)，在冰浴下搅拌10分钟后恢复室温搅拌过夜。反应液减压浓缩，用水(15mL)洗涤3次，饱和食盐水(15mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗白色固体化合物(859.1mg)。
LCMS(ESI)：m/z，289[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-28c的制备
氮气氛下，向化合物LY-28a(507mg，1.15mmol，1eq)的DCM(5mL)溶液中加入三乙胺(348mg，3.44mmol，4eq)和化合物LY-28b(晧元医药)(459.1mg，1.72mmol，1.5eq)，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩，残余物经高效液相制备法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-3。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得淡黄色油状的化合物LY-28c(500mg)。
LCMS(ESI)：m/z，593[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δ6.96(s,1H),6.70(s,2H),3.84(t,J＝7.0Hz,2H),3.77(t,J＝6.0Hz,2H),3.68–3.62(m,28H),3.54(t,J＝4.8Hz,2H),3.42(q,J＝5.2Hz,2H),2.60(t,J＝6.0Hz,2H),2.53(t,J＝7.2Hz,2H)。
步骤3：化合物LY-28的制备
氮气氛下，向化合物LY-28c(6.9mg，11.6μmol，1.1eq)和化合物LY-27c(7mg，10.6μmol，1eq)的乙腈(1mL)和DMF(0.3mL)溶液中加入TCFH(3.55mg，12.7μmol，1.2eq)和NMI(2.6mg，31.8μmol，3eq)，室温搅拌1小时。将反应液浓缩，残余物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-3。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从31％到61％洗脱)纯化，得化合物LY-28(1.03mg，白色固体)。
LCMS(ESI)：m/z，1260[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,CHCl3-d)δ7.68-7.60(m,2H),7.41(s,1H),7.20(s,1H),6.92(d,J＝7.6Hz,1H),6.80(s,1H),6.70(s,2H),5.75(d,J＝16.2Hz,1H),5.30(s,6H),5.18(s,2H),4.79–4.69(m,2H),4.49(q,J＝6.8,6.4Hz,1H),4.16(t,J＝6.4Hz,1H),3.87–3.76(m,4H),3.64(dq,J＝8.4,3.2Hz,26H),3.58–3.51(m,4H),3.41(q,J＝5.2Hz,2H),3.14(dt,J＝18.8,6.2Hz,4H),2.93(t,J＝7.8Hz,2H),2.71–2.63(m, 1H),2.52(t,J＝7.2Hz,2H),2.20(q,J＝7.4,6.4Hz,3H),1.93-1.83(m,4H),1.37(d,J＝7.2Hz,2H),1.07-0.93(m,9H)。
实施例35：化合物LY-28B的制备
步骤1：化合物LY-28-2的制备
向化合物PY-18(14.20mg，93.2％，29.38μmol，1eq)的四氢呋喃(1mL)溶液中加入化合物LY-27a(21.22mg，44.07μmol，1.5eq)，再加入催化量的对甲苯磺酸(1.52mg，1.42μL，8.81μmol，0.3eq)。反应液在20℃搅拌12小时。反应液用反相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-4。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)分离纯化，冻干后得到白色固体化合物LY-28-2(12mg，收率：43.66％)。
LCMS(ESI)：m/z，872.4[M+H]+。
步骤2：化合物LY-28-3的制备
将化合物LY-28-2(12mg，13.76μmol，1eq)溶于DMF(1mL)，向该溶液中加入二乙胺(6.04mg，8.51μL，82.57μmol，6eq)，氮气氛下，该溶液在20℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到粗品产物LY-28-3(8.50mg，收率：95.06％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，650.4[M+H]+。
步骤3：化合物LY-28B的制备
向化合物LY-28-3(4mg，6.16μmol，1eq)的DMF(0.5mL)溶液中加入化合物LY-28c(4.38mg，7.39μmol，1.2eq)、DIPEA(1.59mg，2.04μL，12.31μmol，2eq)，再加入HATU(3.51mg，9.23μmol，1.5eq)，反应液在20℃搅拌1小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为 YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-28B(2.84mg，收率：37.68％，纯度：98.02％)。
LCMS(ESI)：m/z，1246.2[M+H]+。
实施例36：化合物LY-28C的制备
与实施例10的制备方法相同，用化合物PY-10代替化合物PY-18，制得化合物LY-28C。
LCMS(ESI)：m/z，1210[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(t,J＝6.6Hz,1H),8.11(d,J＝7.2Hz,1H),8.02(t,J＝5.6Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.75(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.00(s,2H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.74(dd,J＝10.4,7.0Hz,1H),4.68-4.61(m,3H),4.30(p,J＝7.2Hz,1H),4.21(dd,J＝8.8,6.6Hz,1H),3.59(ddd,J＝8.0,6.4,2.4Hz,4H),3.50-3.48(m,26H),3.16(dq,J＝17.2,6.2,5.8Hz,8H),2.47-2.34(m,4H),2.30(s,2H),2.10-2.02(m,2H),1.96(dt,J＝15.2,7.6Hz,1H),1.87(dt,J＝14.8,7.2Hz,2H),1.29(d,J＝7.2Hz,3H),0.90–0.86(m,6H),0.83(d,J＝6.8Hz,3H)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-114.09。
实施例37：化合物LY-29的制备
步骤1：化合物LY-29a的制备
向化合物LY-27a1(246.89mg，601.48μmol，1eq)和化合物PY-16(327.4mg，601.48μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(0.2mL，1.2mmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(274.45mg，721.77μmol，1.2eq)，并置于室温搅拌2小时。将反应液逐滴加入冰水(20mL)中，收集滤饼用甲醇溶解，经柱层析色谱法纯化，得到化合物LY-29a(223.3mg，收率＝44.84％)。
LCMS(ESI)：m/z，828[M+H]+。
步骤2：化合物LY-29b的制备
向化合物LY-29a(223.3mg，248.14μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中加入二乙胺(0.15mL，1.49mmol，6eq)，并置于室温搅拌1小时。减压浓缩，并加入少量乙腈和水，冻干得淡黄色固体化合物LY-29b(215.9mg，粗品)。
LCMS(ESI)：m/z，606[M+H]+。
步骤3：化合物LY-29的制备
向化合物LY-29b(158mg，182.61μmol，1eq，70％纯度)和化合物LY-28c(151.51mg，255.65μmol，1.4eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(60.36μL，365.22μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(76.38mg，200.87μmol，1.1eq)，并置于室温搅拌2小时。经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到55％洗脱)纯化，得化合物LY-29(96.83mg，收率＝44.93％)。
LCMS(ESI):m/z，1080[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(t,J＝5.2Hz,1H),8.02(d,J＝7.0Hz,2H),7.84(d,J＝8.6Hz,1H),7.74(d,J＝11.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.00(s,2H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.23(s,2H),4.51(s,2H),4.25(t,J＝7.2Hz,1H),4.13(dd,J＝8.6,6.6Hz,1H),3.59(t,J＝7.2Hz,2H),3.56-3.40(m,34H),3.15(p,J＝5.2Hz,6H),2.47-2.34(m,2H),2.10-2.01(m,2H),1.89(dq,J＝17.0,6.6Hz,3H),1.19(d,J＝6.8Hz,3H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H),0.79(q,J＝7.2,6.4Hz,6H)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.70。
实施例38：化合物LY-29B的制备
步骤1：化合物LY-29B-d的制备
将化合物LY-29B-a(毕得医药，60mg，135.89μmol，1eq)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(参见LY-44A的合成实施例，实施例56，59.11mg，84％，135.89μmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(35.13mg，44.92μL，271.79μmol，2eq)，反应在20℃搅拌1小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)，得黄色产物(23mg，粗品，收率：24.47％)。
LCMS(ESI)：m/z,692.3[M+H]+。
步骤2：化合物LY-29B的制备
将化合物LY-29B-d(18mg，26.02μmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，向该溶液中加入化合物LY-29b(15.76mg，26.02μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(6.73mg，8.60μL，52.04μmol，2eq)，然后加入HATU 14.84mg，39.03μmol， 1.5eq)，溶液在20℃搅拌12小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得产物LY-29B(9.71mg，收率：28.73％，纯度：98.51％)。
LCMS(ESI)：m/z，1279.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,2H),8.16(t,J＝5.2Hz,1H),8.02(d,J＝7.4Hz,1H),7.93(t,J＝5.7Hz,1H),7.83(d,J＝8.7Hz,1H),7.75(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(s,1H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.51(s,2H),4.25(t,J＝7.2Hz,1H),4.13(dd,J＝8.6,6.7Hz,1H),3.57-3.46(m,26H),3.45-3.41(m,4H),3.18(dq,J＝15.6,5.9Hz,7H),2.58-2.52(m,3H),2.42(dt,J＝13.8,6.7Hz,2H),2.33-2.24(m,3H),2.05(t,J＝6.4Hz,3H),1.95-1.75(m,6H),1.18(d,J＝7.1Hz,3H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.80-0.73(m,6H)。
实施例39：化合物LY-29C的制备
步骤1：((1R,8S,9s)-双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(4-硝基苯基)碳酸酯(LY-29C-b)的制备
氮气氛下，0℃向化合物(1R,8S,9S)-双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲醇(LY-29C-a)(80mg，532.55μmol，1eq)(山东行致生物)的无水DCM(5mL)中加入吡啶(105.31mg，107.68μL，1.33mmol，2.5eq)和4-硝基苯基氯甲酸酯(134.18mg，665.69μmol，1.25eq)，加完室温反应半小时。0℃将反应液用饱和氯化铵(10mL)淬灭，用DCM(40mL×3)萃取三次，合并有机相，用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/正己烷1:20到1:9)纯化，得到无水油状化合物LY-29C-b(75mg，收率：44.66％)。
步骤2：化合物LY-29C-c的制备
氮气氛下，0℃向化合物LY-29B-a(156.82mg，355.18μmol，1eq)的无水DMF(5mL)加入LY-29C-b(112mg，355.18μmol，1eq)和DIPEA(114.77mg，146.76μL，887.96μmol，2.5eq)，加完室温反应16小时，不超过40℃减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到无水油状化合物LY-29C-c(148mg，收率：67.45％)。
步骤3：化合物LY-29C的制备
氮气氛下，向化合物LY-29C-c(10mg，16.2μmol，1eq)和LY-29b(23.3mg，16.2μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入DIEA(5.35μL，32.4μmol，2eq)和HATU(7.4mg，19.4μmol，1.2eq)，并置于冰浴下自然恢复室温，反应两个小时。通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得产物LY-29C(7.77mg，收率＝39.8％)。
LCMS(ESI):m/z，1205[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16(t,J＝5.2Hz,1H),8.02(d,J＝7.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.6Hz,1H),7.74(t,J＝11.6Hz,1H),7.32(s,1H),7.08(t,J＝5.8Hz,1H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.51(s,2H),4.25(t,J＝7.2Hz,1H),4.13(dd,J＝8.6,6.6Hz,1H),4.02(d,J＝8.0Hz,1H),3.56-3.40(m,36H),3.13(dq,J＝21.6,6.0Hz,6H),2.41(q,J＝7.2,6.8Hz,2H),2.32-2.10(m,4H),2.09-2.00(m,2H),1.96-1.81(m,3H),1.51(d,J＝11.2Hz,1H),1.31-1.22(m,1H),1.20-1.14(m,4H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H),0.83(s,1H),0.78(t,J＝7.2Hz,6H)。19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-112.71。
实施例40：化合物LY-29D的制备

步骤1：化合物LY-29D的制备
向化合物LY-22CD-3-d(25mg，31.37μmol，1eq，LY-22CD-3-d的合成参考LY-22CD-3的合成实施例)和化合物LY-34d(40.98mg，51％，34.51μmol，1.1eq，LY-34d的合成参考LY-34B的合成实施例)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(12.16mg，15.55μL，94.11μmol，3eq)和HATU(11.93mg，31.37μmol，1eq)并置于室温下搅拌1小时，LCMS显示原料反应完全。通过高效液相色谱制备(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R5)。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)得产物LY-29D(15.29mg，Yield＝35.20％)。
LCMS(ESI):m/z,1384[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(t,J＝5.6Hz,1H),9.00(d,J＝8.6Hz,1H),8.51(d,J＝8.6Hz,1H),8.30(d,J＝5.4Hz,1H),8.16(d,J＝7.4Hz,1H),8.04(t,J＝5.8Hz,1H),7.98(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(d,J＝11.2Hz,1H),7.46(s,1H),6.67(s,1H),5.58(s,2H),5.40(s,2H),4.65(s,2H),4.39(t,J＝7.2Hz,1H),4.31-4.24(m,1H),3.78(d,J＝10.6Hz,5H),3.71-3.54(m,34H),3.32(q,J＝6.2,6.0Hz,6H),2.60-2.38(m,5H),2.20(d,J＝7.8Hz,2H),2.01(tt,J＝14.2,6.8Hz,3H),1.32(d,J＝7.0Hz,3H),1.02(t,J＝7.2Hz,3H),0.92(t,J＝7.2Hz,6H).
实施例41：化合物LY-33的制备
氮气氛下，向化合物LY-33a(成都正善达)(30mg，48.65μmol，1eq)和化合物PY-16(27.5mg，63.25μmol，1.3eq)的DMF(2mL)溶液中加入TCFH(16.4mg，58.38μmol，1.2eq)和NMI(12.0mg，145.95μmol，3eq)，并将反应液置于室温搅拌1小时，反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水Water(0.225％FA)-ACN，乙腈的洗脱比例从30％到50％洗脱)纯化，得淡黄色固体化合物LY-33(6.62mg，收率＝13.2％)。
LCMS(ESI)：m/z，1034[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(t,J＝6.6Hz,1H),8.29(t,J＝5.8Hz,1H),8.17-8.10(m,2H),8.06(t,J＝5.6Hz,1H),7.99(t,J＝5.6Hz,1H),7.73(d,J＝11.2Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.24-7.15(m,5H),6.98(s,2H),6.51(s,1H),5.43(s,1H),5.23(s,1H),4.57(d,J＝6.2Hz,4H),4.47-4.43(m,1H),3.88(s,2H),3.78–3.52(m,8H),3.23(d,J＝5.6Hz,2H),3.16–3.13(m,2H),3.01(dd,J＝13.6,4.6Hz,2H),2.81-2.74(m,2H),2.08(d,J＝8.0Hz,4H),1.90-1.84(m,2H),1.46(q,J＝7.4Hz,4H),1.17(t,J＝7.6Hz,2H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例42：化合物LY-33A的制备
将HOBt(11.5mg，85.0μmol，3.0eq)和EDCI(9.8mg，60μmol，1.8eq)加入到化合物PY-16(16mg，37μmol，1.3eq)和化合物LY-33b(15mg，28μmol，1.0eq)(成都正善达购买)的DMA(0.5mL)溶液中，25℃搅拌2h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，洗脱液冻干后得到白色固体化合物LY-33A(3.63mg，14％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，947.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.24(t,J＝5.6Hz,1H),8.18(t,J＝5.2Hz,1H),8.07(dd,J＝7.2,4.0Hz,2H),7.99(t,J＝5.6Hz,1H),7.76(d,J＝11.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.26-7.18(m,4H),7.15(td,J＝6.0,2.4Hz,1H),6.98(s,2H),6.53(s,1H),5.43(s,2H),5.25(s,2H),4.53(d,J＝5.2Hz,2H),4.48-4.43(m,1H),3.72-3.62(m,5H),3.55 (d,J＝5.6Hz,1H),3.52-3.50(m,1H),3.22(t,J＝6.0Hz,2H),3.17-3.12(m,2H),3.02-2.97(m,1H),2.78-2.72(m,1H),2.09(dd,J＝10.4,4.4Hz,4H),1.86(dq,J＝14.0,7.2Hz,2H),1.45(h,J＝7.2Hz,4H),1.27-1.09(m,3H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例43：化合物LY-34的制备
步骤1：化合物LY-34c的制备
将化合物N-苄氧羰基-L-谷氨酸1-苄酯(LY-34a)(1.50g，4.04mmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)，室温加入化合物4-(4,6-二甲氧基三嗪)-4-甲基吗啉盐酸盐(毕得医药，2.24g，8.08mmol，2eq)和三乙胺(613.04mg，842.09μL，6.06mmol，1.5eq)，反应在25℃搅拌0.5小时，再加入D-萄糖胺(731.80mg，4.04mmol，1eq)。反应液在25℃搅拌11.5小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从11％到31％洗脱)纯化，得白色固体产物(2g，收率：78.74％，纯度：85％)。
LCMS(ESI):m/z，535.3[M+H]+。
步骤2：化合物LY-34d的制备
将化合物LY-34c(300mg，561.21μmol，1eq)溶于甲醇(10mL)/水(10mL)，向该溶液中加入钯碳(59.72mg，4.97μL，561.21μmol，1eq)，置换氢气三次后，在氢气氛围下25℃搅拌12小时。反应液过滤，冻干后得白色固体产物(180mg，收率：103.36％)。
LCMS(ESI)：m/z，333.1[M+Na+]。
步骤3：化合物LY-34f的制备
向化合物LY-34d(130mg，418.95μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中，加入6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(142.07mg，460.84μmol，1.1eq) 和三乙胺(169.57mg，232.93μL，1.68mmol，4eq)，反应液在25℃搅拌12小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从1％到24％洗脱)纯化，得到白色固体产物(70mg，收率：33.18％)。
LCMS(ESI)：m/z，504.2[M+H+]。
步骤4：化合物LY-34的制备
向化合物LY-34f(5mg，9,93μmol，1eq)的N,N-二甲基乙酰胺溶液中加入化合物LY-27c(6.59mg，9.93μmol，1eq)和对甲苯磺酸(4.99mg，19.86μmol，2eq)、4-羟基苯并三唑(5.37mg，39.72μmol，4eq)，最后加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(2.28mg，2.60μL，11.92μmol，1.2eq)。反应在25℃搅拌12小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体产物LY-34(1.13mg，收率：9.90％)。
LCMS(ESI)：m/z，1149.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(t,J＝6.7Hz,2H),8.11(d,J＝7.0Hz,2H),8.00(s,1H),7.72(d,J＝11.0Hz,4H),7.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),6.99(s,2H),6.54(d,J＝10.6Hz,2H),5.43(s,2H),5.26(s,2H),4.75(d,J＝4.6Hz,1H),4.60-4.52(m,3H),4.48(s,1H),4.37(dd,J＝13.5,5.9Hz,3H),4.27–4.18(m,5H),3.62-3.56(m,4H),3.15(d,J＝6.8Hz,4H),3.03-2.99(m,2H),2.86(s,2H),2.09(s,5H),1.88(d,J＝7.3Hz,2H),1.46(dd,J＝12.7,5.7Hz,6H),1.19(t,J＝6.5Hz,6H),0.82(dt,J＝14.7,7.4Hz,9H)。
实施例44：化合物LY-34B的制备
向化合物LY-29b(7.50mg，12.38μmol，1eq)的DMF(0.5mL)溶液中，加入化合物LY-34f(6.23mg，12.38μmol，1eq)和HOBt(2.51mg，1.67μL，18.57μmol，1.5eq)，再加入EDCI(3.56mg，4.06μL，18.57μmol，1.5eq)，加完后，氮气氛下，反应液在25℃搅拌2小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-4。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动 相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-34B(450μg，收率：3.18％，纯度：99.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，1091.5。
实施例45：化合物LY-34C的制备
步骤1：(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六己烷-1,26-基)二甲酸叔丁酯的制备
0℃向(26-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六羰基)氨基甲酸酯(毕得医药)(569mg，1.11mmol，1eq)的四氢呋喃(20ml)溶液中加入(9H-芴-9-基)甲基(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(411.86mg，1.22mmol，1.1eq)和碳酸钠(235.29mg，92.63 μL，2.22mmol，2eq，溶于5ml水中)。加毕，25℃反应2小时，LCMS显示反应完成，反应液先浓缩除去大部分四氢呋喃，残留物用30ml水稀释，然后用乙酸乙酯萃取3次(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到黄色油状(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六己烷-1,26-基)二甲酸叔丁酯(890mg)。
LCMS(ESI)：m/z，757.4[M+H]+。
步骤2：(9H-芴-9-基)甲基(26-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六羰基)氨基甲酸酯的制备
0℃，于(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六己烷-1,26-基)二甲酸叔丁酯(890mg，1.21mmol，1eq)的二氯甲烷(15ml)加入三氟乙酸(1.5ml)，加毕20℃反应2小时。反应浓缩得到黄色油状化合物(70mg)。
LCMS(ESI)：m/z，635.4[M+H]+。
步骤3：(9H-芴-9-基)甲基((29S,30R,31R,32R)-29,30,31,32,33-五羟基-27-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂-27-氮杂三戊基)氨基甲酸酯的制备
于(9H-芴-9-基)甲基(26-氨基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧六羰基)氨基甲酸酯(770mg，1.21mmol，1eq)、D-葡萄糖(2.19g，12.13mmol，10eq)的甲醇(20ml)和醋酸(2ml)溶液中加入氰基硼氢化钠(381.14mg，6.07mmol，5eq)，加毕升温到55℃反应40小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经过冻干得到黄色油状化合物(676mg，收率：54.97％，纯度：95％)。
LCMS(ESI)：m/z，963.6[M+H]+。
步骤4：化合物LY-34C-c的制备
于(9H-芴-9-基)甲基((29S,30R,31R,32R)-29,30,31,32,33-五羟基-27-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己基)-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧杂-27-氮杂三戊基)氨基甲酸酯(676mg，95％，666.82μmol，1eq)的DMF(5ml)溶液中加入二乙胺(243.86mg，343.46μL，3.33mmol，5eq)，加完25℃反应16小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R5。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从1％到24％洗脱)纯化，经冻干得到无色油状化合物(490mg，收率：99.19％)。
LCMS(ESI)：m/z，741.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz，氘代水)δ3.90-3.53(m，47H),3.22(t,J＝5.0Hz,6H)。
步骤5：化合物LY-34C-a的制备
向化合物LY-29b(10mg，16.51μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液中，加入化合物LY-35c(7.85mg，19.81μmol，1.2eq)，再依次加入4-羟基苯并三唑(3.35mg，2.23μL，24.77μmol，1.5eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(4.75mg，24.77μmol，1.5eq)，加完后，反应液在25℃搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从32％到62％洗脱)纯化，得到白色固体产物(8mg，收率：49.24％)。
LCMS(ESI)：m/z，984.5。
步骤6：化合物LY-34C-b的制备
25℃，化合物LY-34C-a(6mg，6.10μmol，1eq)在二氯甲烷/三氟乙酸(体积比为5：1，总体积为1mL)中搅拌1小时。反应液直接浓缩，得到粗品黄色固体产物(5mg，收率：88.37％)。
LCMS(ESI)：m/z，928.4[M+H+]。
步骤7：化合物LY-34C的制备
向化合物LY-34C-b(4mg，4.31μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中加入化合物LY-34C-c(3.19mg，4.31μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(1.11mg，1.42μL，8.62μmol，2eq)，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.97mg，5.17μmol，1.2eq)，反应液在0℃搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得白色固体产物(3.31mg，收率：45.93％，纯度：98.73％)。
LCMS(ESI)：m/z，1651.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(d,J＝5.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.84(t,J＝5.7Hz,1H),7.75(d,J＝11.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.32(s,1H),6.98(s,2H),6.52(s,1H),5.43(s,2H),5.26(s,2H),4.56-4.45(m,6H),4.32(t,J＝5.6Hz,4H),4.26-4.07(m,6H),3.65(dt,J＝8.6,4.4Hz,3H),3.60-3.54(m,5H),3.52-3.47(m,30H),3.25-3.01(m,14H),2.74-2.68(m,2H),2.59(dd,J＝13.2,4.3Hz,3H),2.06(d,J＝7.5Hz,6H),1.87(tq,J＝14.8,7.5,7.1Hz,5H),1.65(dd,J＝13.5,6.7Hz,2H),1.44(d,J＝7.6Hz,4H),1.18(d,J＝7.1Hz,4H),0.89(d,J＝7.2Hz,3H),0.77(dd,J＝14.3,6.7Hz,5H)。
实施例46：化合物LY-35的制备
步骤1：化合物LY-35j的制备
氮气氛下，室温，向化合物LY-35h(西安积学)(300mg，0.58mmol，1eq)的甲醇(15mL)溶液中加入(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮(1.04g，5.85mmol，10eq)和三乙胺(296mg，2.93mmol，5eq)，70℃反应14小时，冷却到室温，反应液减压浓缩，得到粗品化合物LY-35j(410mg)。
LCMS(ESI)：m/z，691.4[M+1]+/713.3[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-35g的制备
冰浴下，向化合物LY-35j(410mg，0.593mmol，1.0eq)的DCM(15mL)溶液中加入TFA(4mL)，加完室温反应2小时，反应液减压浓缩得到粗品，粗品经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从1％到24％洗脱)纯化，得到黄色油状化合物LY-35g(181mg，51％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，591.4[M+1]+/613.3[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.29(d,J＝3.7Hz,1H),4.06(d,J＝3.1Hz,1H),3.87–3.54(m,36H),3.43(d,J＝5.9Hz,2H),3.21–3.15(m,2H)。
步骤3：化合物LY-35c的制备
向2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸酯(1g，3.24mmol，1.0eq)的DMF(15ml)溶液中加入(S)-2-氨基-5-(叔丁氧基)-5-氧代戊酸(660mg，3.24mmol，1.0eq)、DIEA(839mg，6.49mmol，2.0eq)，加完室温反应6小时，反应液浓缩二分之一的DMF，经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到40％洗脱)纯化，得到无水油状化合物LY-35c(1.18g，91％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，419.2[M+Na]+。
步骤4：化合物LY-35e的制备
氮气氛下，0℃，向化合物LY-35c(61mg，154μmol，2.5eq)的DMF(5mL)溶液中加入化合物LY-35d(成都正善达购买)(50mg，61.6μmol，1eq)、HATU(30.4mg，80μmol，1.3eq)、DIPEA(48mg，370μmol，6.0eq)，室温反应2h。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm，流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，冻干得到白色固体化合物LY-35e(38.4mg，37.4％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，1190.6[M+H]+/1212.5[M+Na]+。
步骤5：化合物LY-35f的制备
0℃，于化合物LY-35e(10mg，8.4μmol，1.0eq)的DCM(4mL)溶液中，滴加TFA(0.8mL)，加完0-10℃反应4h，反应液室温浓缩，得到化合物LY-35f(10mg，75.56％收率，72％纯度)。
LCMS(ESI)：m/z，1134.5[M+H]+/567.8[1/2M+H]。
步骤6：化合物LY-35的制备
氮气氛下，0℃，向化合物LY-35f(10mg，6.35μmol，72％纯度，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入化合物LY-35g(4.9mg，8.25μmol，1.3eq)、HATU(3.14mg，8.25μmol，1.3eq)、DIPEA(5mg，38.09μmol，6.0eq)，加完室温反应 2h。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm，流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干得到白色固体LY-35(4.34mg，29.45％收率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,2H),8.47(s,4H),8.36(d,J＝7.2Hz,1H),8.25(d,J＝6.8Hz,1H),8.20-8.11(m,2H),8.09-8.00(m,3H),7.85(t,J＝5.8Hz,2H),7.81-7.73(m,3H),7.64-7.57(m,4H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(s,1H),6.98(d,J＝3.3Hz,2H),6.53(s,1H),5.44(s,4H),5.29(s,4H),5.07(s,2H),4.54(d,J＝22.8Hz,4H),4.45-4.33(m,5H),4.18-4.16(m,4H),3.99(s,2H),3.90(s,2H),3.76-3.71(m,3H),3.57(d,J＝11.2Hz,11H),3.18(d,J＝7.2Hz,4H),2.38(d,J＝2.0Hz,3H),2.09(d,J＝7.2Hz,9H),1.97-1.77(m,9H),1.46(d,J＝7.8Hz,5H),1.35-1.27(m,5H),1.17(t,J＝8.1Hz,3H),0.91–0.80(m,13H)。
LCMS(ESI)：m/z,1728.8[M+Na]+/854[1/2M+H]+。
实施例47：化合物LY-37A的制备

步骤1：化合物LY-37b的制备
氮气氛下，将化合物(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸(5g，1.0eq)和NHS(2.03g，1.2eq)溶解于无水四氢呋喃(40mL)中，加入DCC(3.65g，4.50mL，1.2eq)，室温搅拌反应16小时。反应液用无水四氢呋喃(20mL)稀释，过滤，滤饼用四氢呋喃(20mL)洗涤，合并滤液后浓缩得到化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸(7.3g，收率113％)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝459.2[M+Na]+；Rt＝1.034。
步骤2：化合物LY-37d的制备
氮气氛下，将化合物LY-37b(3.0g，1.0eq)和化合物LY-37c(毕得)(2.03g，1.2eq)溶解于四氢呋喃(37.5mL)中，滴加碳酸氢钠水溶液(其中碳酸氢钠2.31g，4.0eq，水37.5mL)，滴加完毕后室温搅拌反应16小时。将反应液用石油醚(30mL)洗涤一次，洗涤液用稀盐酸中和至pH＝5左右，加入乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并有机相，干燥后浓缩，得到化合物LY-37d(3.6g，收率92％)，白色固体，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝468.3[M+H]+；Rt＝0.971min。
步骤3：化合物LY-37e的制备
将化合物LY-37d(245mg，1.0eq)溶解于无水二氯甲烷(15mL)中，冷却至0℃，滴加三氟乙酸(1.5ml，46.5eq)，升温至室温搅拌2小时。将反应液浓缩至干，得到粗品化合物LY-37e(201mg，收率99％)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝468.3[M+H]+；Rt＝0.771min。
步骤4：化合物LY-37f的制备
氮气氛下，将化合物LY-37e(202mg，1.0eq)和丙醛(312μL，10.0eq)溶解于四氢呋喃(10mL)和甲醇(2.5mL)中，冷却至0℃，加入氰基硼氰化钠(136mg， 5.0eq)，升温至室温搅拌反应16小时。将反应液浓缩至干，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇20:1)纯化，得到化合物LY-37f(190mg，收率80％)。
LCMS：m/z＝552.4[M+H]+；Rt＝0.830min。
步骤5：化合物LY-37i的制备
氮气氛下，将5-溴-2-(甲硫基)嘧啶(5g，1.0eq)和己-5-炔酸甲酯(3.26mL，1.0eq)溶解于无水DMF(80mL)中，加入碘化亚铜(465mg,0.1eq)、三乙胺(1.5mL，1.0eq)和催化剂双三苯基膦二氯化钯(1.8g，0.1eq)，加热至95℃搅拌反应12小时。将反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯5:1)纯化，得到化合物6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸甲酯(LY-37i)(3.3g，收率54％)，黄色油状物。
LCMS：m/z＝251.1[M+H]+；Rt＝2.072min。
步骤6：化合物LY-37j的制备
将化合物LY-37i(1.0g，1.0eq)溶解于四氢呋喃(20mL)和水(20mL)中，加入氢氧化锂一水合物(1.2g，7.0eq)，20℃搅拌反应12小时。反应液用纯水(40mL)稀释，并用1M盐酸中和至pH＝3左右，并用二氯甲烷(60mL)分三次萃取，合并有机相，干燥浓缩后得到淡黄色固体化合物6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(LY-37j)(930mg，收率98％)。
LCMS：m/z＝237.1[M+H]+；Rt＝1.455min。
步骤7：化合物LY-37k的制备
将化合物N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-戊酰基)-N6，N6-二丙基-L-赖氨酸(LY-37f)(19.01mg，1.0eq)和化合物PY-16(15mg,1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，0℃加入HATU(19.65mg，1.5eq)和DIPEA(17.1μL，3.0eq)，升至室温搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水，(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-37k(12mg，收率36％)，白色固体粉末。
LCMS：m/z＝969.5[M+H]+；Rt＝2.026min。
步骤8：化合物LY-37l的制备
将化合物LY-37k(12mg，1.0eq)溶解于DMF(1mL)中，加入二乙胺(12.7μL，10.0eq)，室温搅拌反应3小时。将反应液浓缩至干，得到粗品LY-37l(10mg，粗品不计收率)。
LCMS：m/z＝747.5[M+H]+；Rt＝0.633min。
步骤9：化合物LY-37m的制备
将化合物LY-37l(10mg，1.0eq)和化合物LY-37j(3.16mg，1.0eq)溶解于无水DMF(1mL)中，0℃加入HATU(6.11mg，1.2eq)和DIPEA(6.6μL，3.0eq)， 升温至室温搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体产品LY-37m(5mg，收率38％)。
LCMS：m/z＝965.6[M+H]+；Rt＝1.795min。
步骤10：化合物LY-37A的制备
将化合物LY-37m(4mg，1.0eq)溶解于四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中，加入Oxone(23mg，10eq)，于室温搅拌反应16小时。反应液用亚硫酸钠溶液淬灭，减压浓缩除去四氢呋喃，残余物加少量纯水稀释后过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水，(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-37A(0.24mg,收率5.8％)。
LCMS：m/z＝997.5[M+H]+；Rt＝1.544min。
实施例48：化合物LY-37B的制备
步骤1：化合物LY-37B-e的制备
0℃，向化合物LY-37f(170mg，308μmol，1.0eq)、甘氨酸叔丁酯(48.5mg， 370μmol，1.2eq)的DMF(5ml)溶液中加入HATU(141mg，370μmol，1.2eq)和DIEA(119mg，924μmol，3.0eq)，加完室温反应4小时。反应液用乙酸乙酯稀释，倒入冷水中搅拌3分钟，水相用乙酸乙酯萃取2次，有机相合并，有机相用水洗涤2次，再用食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体化合物LY-37B-e(206mg，粗品收率不计)。
LCMS：m/z＝665.5[M+H]+；Rt＝2.246min。
步骤2：化合物LY-37B-f的制备
向化合物LY-37B-e(206mg，310μmol，1.0eq)的DCM(10ml)溶液中加入TFA(1ml)，加完室温反应3小时，反应液减压浓缩得到粗品，粗品通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇1；20到1:5)纯化，得到化合物LY-37B-f(174mg，收率：85％，93％纯度)。
LCMS：m/z＝609.4[M+H]+；Rt＝1.803min。
步骤3：化合物LY-37B-g的制备
0℃，向化合物LY-37B-f(60mg，91.66μmol，1.0eq)、化合物PY-16(40mg，91.66μmol，1.0eq)的DMF(2ml)溶液中加入HATU(42mg，110μmol，1.2eq)和DIEA(36mg，275μmol，3.0eq)，加完室温反应3小时，反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取3次，有机相用水洗涤2次，再用食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体化合物LY-37B-g(62mg，粗品)。
LCMS：m/z＝1026.5[M+H]+/513.8[1/2M+1]+；Rt＝1.020min。
步骤4：化合物LY-37B-h的制备
向化合物LY-37B-g(62mg，48.33μmol，1.0eq，粗品)的DMF(2ml)溶液中加入二乙胺(18mg，242μmol，5.0eq)，加完室温反应2小时，反应液减压浓缩，得到黄色固体化合物LY-37B-h(38mg，粗品)。
LCMS：m/z＝804.5[M+H]+；Rt＝1.083min。
步骤5：化合物LY-37B-j的制备
0℃，向化合物LY-37j(10mg，42.3μmol，1.0eq)和化合物LY-37B-h(34mg，42.3μmol，1.0eq)的无水DMF(4mL)溶液中，加入HATU(20.9mg，55μmol，1.3eq)和DIPEA(27mg，211μmol，5.0eq)，加完后升温至室温搅拌反应12小时。反应液浓缩，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-37B-j(13mg，收率27％)。
LCMS：m/z＝1022.4[M+H]+/511.8[1/2+1]+；Rt＝1.71min。
步骤6：化合物LY-37B的制备
向化合物LY-37B-j(2mg，1.96μmol，1.0eq)的THF(1mL)/H2O(1mL)的溶液中加入Oxone(12mg，19.56μmol，10.0eq)，加完25℃反应16小时。将 反应液过滤后，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R4。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×21.2mm×5μm。流动相水(10mM NH4HCO3)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干得到白色固体化合物LY-37B(1mg，收率：48％)。
LCMS：m/z＝1054.4[M+H]+；Rt＝1.47min。
实施例49：化合物LY-39A的制备
步骤1：化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯的制备
氮气氛下，将化合物6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(300mg，1.0eq)和NHS(183mg，1.2eq)溶解于DMF(10mL)中，冷却至0℃，加入DIC(401μL， 2.0eq)后于室温搅拌反应16小时。反应液用二氯甲烷(25mL)和水(20mL)稀释，搅拌后静置分层，收集有机相，水相用二氯甲烷(20mL)再萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥后浓缩，得到粗品化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸盐(520mg)，淡黄色固体，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝334.0[M+H]+；Rt＝0.659min。
步骤2：化合物N2-(L-缬氨酸)-N6,N6-二丙基-L-赖氨酸(LY-39A-e)的制备
将化合物LY-37f(250mg，1.0eq)溶解于无水DMF(5mL)中，加入二乙胺(467μL，10.0eq)，室温搅拌反应3小时。将反应液浓缩，得到粗品化合物LY-39A-e(150mg)，不经纯化直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝330.2[M+H]+；Rt＝0.473min。
步骤3：化合物LY-39A-f的制备
将化合物LY-39A-e(135mg，1.0eq)和化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸盐(164mg，1.2eq)混合于无水DMF(2mL)中，室温加入DIPEA(237μL，3.5eq)，搅拌反应12小时。将反应液过滤后，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到化合物LY-39A-f(37mg，收率16.5％)白色固体。
LCMS：m/z＝548.4[M+H]+；Rt＝1.497min。
步骤4：化合物LY-39A-h的制备
氮气氛下，将化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(成都正善达)(92.85mg，5.5eq)和化合物PY-10(20mg，1.0eq)混合于无水四氢呋喃(3mL)中，加入对甲苯磺酸(2.37mg，0.3eq)，于室温搅拌反应16小时。补加化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(92.85mg，5.5eq)继续搅拌反应16小时。将反应液过滤后浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，得到化合物LY-39A-h(22mg，收率64.5％)。
LCMS：m/z＝745.3[M+H]+；Rt＝2.111min。
步骤5：化合物LY-39A-i的制备
将化合物LY-39A-h(22mg，1.0eq)溶解于无水DMF(1mL)中，加入二乙胺(30.43μL，10.0eq)，于室温搅拌反应3小时。将反应液浓缩，得到粗品化合物LY-39A-i(15mg)，不经纯化直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝523.2[M+H]+；Rt＝0.598min。
步骤6：化合物LY-39A-j的制备
将化合物LY-39A-i(10mg，1.0eq)和化合物LY-39A-f(10.48mg，1.0eq) 混合于无水DMF(2mL)中，加入HATU(9.5mg，1.3eq)和DIEA(8.7mg，3.5eq)，加完室温搅拌反应1小时。反应液直接用于下一步。
LCMS：m/z＝1052.5[M+H]+；Rt＝1.776min。
步骤7：化合物LY-39A的制备
向含有化合物LY-39A-j(20.14mg，1.0eq)的反应液中，加入四氢呋喃(1mL)和水(1mL)以及DMF(4mL)，室温加入Oxone(106mg，33eq)，于室温搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到化合物LY-39A(3.13mg，收率15.08％)。
LCMS：m/z＝1084.5[M+H]+；Rt＝4.199min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(s,1H),8.76(t,J＝6.6Hz,1H),8.33(s,1H),8.23(t,J＝5.8Hz,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,2H),7.95(d,J＝8.5Hz,2H),7.74(d,J＝11.1Hz,2H),7.32(s,2H),6.54(s,2H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.69(d,J＝5.6Hz,5H),4.19(dt,J＝27.8,7.5Hz,5H),3.85-3.68(m,6H),3.19(dd,J＝13.8,6.6Hz,12H),2.40-2.22(m,15H),2.07(t,J＝6.3Hz,4H),2.00-1.73(m,12H),1.68(s,2H),1.56(dd,J＝9.1,4.9Hz,3H),1.33(h,J＝7.3Hz,10H),1.24(s,2H),0.91-0.75(m,9H)。
实施例50：化合物LY-39B的制备

步骤1：6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸甲酯的制备
氮气氛围下，向5-溴-2-(甲硫基)嘧啶(5g，24.38mmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液中，加入5-炔酸己甲酯(3.91mL，29.26mmol，1.2eq)、三乙胺(3.39mL，24.38mmol，1eq)、碘化亚铜(664.35mg，2.44mmol，0.1eq)、双(三苯基膦)二氯化钯(2.6g，2.44mmol，0.1eq)，将反应置于95℃反应12小时，LCMS监控反应，原料反应完全，加等体积乙酸乙酯溶解过滤，加水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，将有机相合并用水(100mL×2)、饱和食盐水(100mL×1)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/二氯甲烷＝5:1)纯化，得到黄色油状6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸甲酯(3.43g，收率＝56.20％)。
LCMS(ESI)：m/z，251[M+H]+。
步骤2：6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸的制备
向6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸甲酯(3.4g，24.38mmol，1eq)的四氢呋喃(60mL)和水(60mL)溶液中，加入氢氧化锂一水合物(4.02g，95.64mmol，7eq)，将反应置于25℃反应12小时，加等体积水溶解过滤，用1N盐酸调节pH＝3，用二氯甲烷(200mL×3)萃取，将有机相合并用水(200mL×2)、饱和食盐水(100mL×1)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到黄色油状6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(2.76g，收率＝85.49％)。
LCMS(ESI)：m/z，237[M+H]+。
步骤3：2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯的制备
向6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸(1.69g，14.72mmol，2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(1.98g，7.36mmol，1eq)，0℃加入N,N-二异丙基碳二亚胺(2.32mL)，将反应置于25℃反应12小时，加等体积乙酸乙酯溶解过滤，再用100mL水稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，将有机相合并用水(100mL×2)、饱和食盐水(100mL×1)洗涤，再用无水硫 酸钠干燥，过滤，浓缩，得到黄色油状2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(4.4g，收率＝163.59％)。
LCMS(ESI)：m/z，366[M+H]+。
步骤4：2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯的制备
向2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(4.4g，13.2mmol，2eq)的四氢呋喃(70mL)，水(70mL)溶液中，加入过氧单磺酸钾(22.20g，131.99mmol，10eq)，将反应置于25℃反应12小时，加等体积冰水，搅拌2分钟，用二氯甲烷(200mL×3)萃取，将有机相合并用水(200mL×2)、饱和食盐水(200mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到黄色油状2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸酯(2.58g，收率＝51.78％)。
LCMS(ESI)：m/z，366[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,2H),3.41(s,3H),2.90(t,J＝7.2Hz,2H),2.83(s,4H),2.70(t,J＝7.2Hz,2H),1.96(p,J＝7.2Hz,2H)。
步骤5：化合物LY-39c的制备
向化合物PY-10(30mg，68.74μmol，1eq)的四氢呋喃(2mL)溶液中加入化合物(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(50.64mg，137.48μmol，2eq)，再加入催化量的对甲苯磺酸(3.55mg，3.32μL，20.62μmol，0.3eq)。反应液在20℃搅拌12小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-4。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)分离纯化，冻干后得到白色固体产物LY-39c(13mg，收率：25.39％)。
LCMS(ESI)：m/z，745.3[M+H]+。
步骤6：化合物LY-39d的制备
将化合物LY-39c(13mg，15.15μmol，1eq)溶于DMF(1mL)，向该溶液中加入二乙胺(7.66mg，10.79μL，104.73μmol，6eq)，氮气氛下，溶液在20℃搅拌3小时。反应液减压浓缩，得到产物LY-39d(8mg，收率：87.71％)，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，1045.3[2M+H]+。
步骤7：化合物LY-39g的制备
将化合物LY-37e(400mg，855.49μmol，1eq)溶于MeOH(10mL)，加入TEA(432.83mg，4.28mmol，5eq)和(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮(304.79mg，507.99μL，1.71mmol，2eq)，在70℃搅拌12h。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例 从21％到41％洗脱)纯化，冻干后，得到白色固体产物LY-39g(18mg，收率：3.26％)。
LCMS(ESI)：m/z，646.3。
步骤8：化合物LY-39h的制备
向化合物LY-39g(12mg，18.58μmol，1eq)的DMF(1mL)中加入HOBt(3.77mg，2.51μL，27.88μmol，1.5eq)和化合物LY-39d(9.71mg，18.58μmol，1eq)，然后再加入EDCI(5.34mg，27.88μmol，1.5eq)。反应液在20℃搅拌1小时。反应液直接经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干后得白色固体LY-39h(10mg，收率：46.78％)。
LCMS(ESI)：m/z，1150.6[M+H]+。
步骤9：化合物LY-39i的制备
向化合物LY-39h(10mg，8.69μmol，1eq)的DMF(2mL)中加入Et2NH(3.18mg，4.48μL，43.47μmol，5eq)，反应液在20℃搅拌1小时。反应液减压浓缩，得产物LY-39i(8mg，收率：99.16％)。
LCMS(ESI)：m/z，928.4[M+H]+。
步骤10：化合物LY-39B的制备
向化合物LY-39i(5mg，5.39μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中加入化合物LY-39A-b(5mg，5.39μmol，1eq)和DIPEA(696.41μg，5.39μmol，1eq)，反应在20℃搅拌2h。反应液过滤后经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干后得白色固体化合物LY-39B(840μg，收率：13.23％)。
LCMS(ESI)：m/z，1178.5[M+H]+。
实施例51：化合物LY-41的制备

步骤1：化合物LY-41i的制备
将化合物LY-34d(30mg，96.68μmol，1eq)溶于DMF(0.5mL)，向其中加入DIPEA(24.99mg，31.96μL，193.36μmol，2eq)和化合物2,5-二氧代吡咯烷-1-基6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)己-5-炔酸盐(32.23mg，96.68μmol，1eq)。反应液在20℃搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相Water(10mM NH4HCO3)-ACN，水的洗脱比例从1％到24％洗脱)纯化，冻干后得白色固体LY-41i(30mg，收率：58.70％)。
LCMS(ESI)：m/z，529.2[M+H]+。
步骤2：化合物LY-41h的制备
向化合物LY-41i(5mg，9.46μmol，1eq)的DMF(0.5mL)中加入化合物LY-28C-c(6.01mg，9.46μmol，1eq)，再依次加入HOBt(1.92mg，1.28μL，14.19μmol，1.5eq)、EDCI(2.72mg，14.19μmol，1.5eq)，氮气氛围下，反应液在25℃搅拌1小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干后得白色固体产物LY-41h(3mg，收率：27.67％)。
LCMS(ESI)：m/z，1146.3[M+H]+。
步骤3：化合物LY-41的制备
向化合物LY-41h(4mg，3.49μmol，1eq)的THF(0.5mL)/H2O(0.5mL)溶液中加入Oxone(5.87mg，34.90μmol，10eq)，反应在20℃搅拌12h。反应液过滤后，经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 280×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干后得白色固体化合物LY-41(230μg，收率：5.59％，纯度：100％)。
LCMS(ESI)：m/z，1200.4[M+Na]+。
实施例52：化合物LY-41B的制备
向化合物LY-28C-c(12mg，18.88μmol，1eq)的DMF(60mL)溶液中，加入LY-34f(14.26mg，28.32μmol，1.5eq)，然后加入HOBT(3.83mg，2.55μL，28.32μmol，1.5eq)和EDCI.HCl(5.43mg，6.19μL，28.32μmol，1.5eq)，该反应液在10℃搅拌12小时。反应液通过反相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×21.2mm×5μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从14％到42％洗脱)纯化，冻干后，得到白色固体产物LY-41B(1.20g，收率：55.58％)。
LCMS(ESI)：m/z，1121.2[M+H]+。
实施例53：化合物LY-43C的制备
步骤1：化合物LY-43C-a的制备
向((苄氧基)羰基)-L-赖氨酸(3g，10.70mmol，1eq)的甲醇(100mL)溶液中加入葡萄糖酸内酯(3.81g，6.35mL，21.40mmol，2eq)和三乙胺(5.41g，7.44mL，53.51mmol，5eq)，加完后70℃搅拌16小时。反应液通过反相C18柱色谱法(ISCO，80g SepaFlash Silica Flash Column，洗脱梯度：0-45％水/乙腈，50mL/min)纯化，得到白色固体化合物LY-43C-a(3.84g，收率：78％)。
LCMS：m/z＝459.1[M+H]+；Rt＝1.43min。
步骤2：化合物LY-43C-c的制备
氮气氛下，向化合物LY-43C-a(450mg，981.55μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入甘氨酸叔丁酯(154.51mg，1.18mmol，1.2eq)、1-羟基苯并三唑(198.94mg，1.47mmol，1.5eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(282.24mg，1.47mmol，1.5eq)，于室温搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从12％到45％洗脱)纯化，得化合物LY-43C-c(523mg，收率＝93.2％)。
LCMS(ESI)：m/z，572[M+H]+。
步骤3：化合物LY-43C-d的制备
氢气氛围下，向化合物LY-43C-c(260mg，454.85μmol)的甲醇(8mL)溶液加入钯碳(100mg)，并于室温搅拌2小时，反应液用硅藻土过滤，并用水和甲醇(5mL/5mL)洗涤，浓缩得化合物LY-43C-d(232mg)。
LCMS(ESI)：m/z，438[M+H]+。
步骤4：化合物LY-43C-f的制备
向化合物LY-43C-d(232mg，530.3μmol，1eq)和化合物LY-34e(196.18mg，636.36μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(262.92μL，1.59mmol，3eq)，并置于室温搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得化合物LY-43C-f(165mg，收率＝49.3％)。
LCMS(ESI)：m/z，631[M+H]+。
步骤5：化合物LY-43C-g的制备
冰浴下，向化合物LY-43C-f(165mg，261.62μmol，1eq)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，搅拌10分钟后恢复室温搅拌2小时，再加入三氟乙酸(1mL)，并于室温搅拌3小时。反应液减压浓缩，得化合物LY-43C-g(311.2mg)。
LCMS(ESI)：m/z，575[M+H]+。
步骤6：化合物LY-43C的制备
向化合物LY-43C-g(22mg，1.5eq)和化合物LY-28C-c(13mg，20.45μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(33.8mL，204.5μmol，10eq)，然后加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(9.33mg，24.54μmol，1.2eq)，并置于冰浴下搅拌5分钟后恢复室温，搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得化合物LY-43C(0.56mg，收率＝2.94％)。
LCMS(ESI)：m/z，1192[M+H]+。
实施例54：化合物LY-43D的制备
步骤1：化合物LY-43D-b的制备
室温下，将Pd/C(10％纯度，286mg)加入到化合物LY-43C-a(1.43g，3.12mmol，1eq)的甲醇(25mL)溶液中，在氢气氛下(15Psi)20℃搅拌16小时。反应液过滤，滤液减压浓缩得到产物320mg。将滤饼加入到水(20mL)中，室温搅拌0.5小时，然后过滤，滤液冻干后得到白色固体产物LY-43D-b(1.12g)。
步骤2：化合物LY-43D-c的制备
在室温下，将化合物LY-43D-b(1.44g，粗品)、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(1.65g，4.88mmol，1.1eq)加入到四氢呋喃(30mL)中。将碳酸氢钠(1.12g，518.05μL，13.32mmol，3eq)溶于水(10mL)中，将此溶液室温下加入到上 述溶液中，15℃搅拌16h。反应液减压浓缩，残余物经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干后得到化合物LY-43D-c(1.60g，2.93mmol，二步收率：94％)。
LCMS(ESI)：m/z，547.2[M+H]+。
步骤3：化合物LY-43D-d的制备
在室温下将化合物LY-43D-c(470mg，860μmol，1eq)、二异丙基碳酰亚胺(130.22mg，160.77μL，1.03mmol，1.2eq)和N-羟基丁二酰亚胺(118.76mg，74.23μL，1.03mmol，1.2eq)加入到四氢呋喃(4mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，25℃搅拌3小时。反应液直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，644.3[M+H]+。
步骤4：化合物LY-43D-f的制备
在室温下将双甘氨肽(113.61mg，860μmol，1eq)、三乙胺(174.03mg，239μL，1.72mmol，2eq)和水(3mL)加入到LY-43D-d的反应液中。20℃搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干后得到化合物LY-43D-f(232mg，351μmol，二步收率：41％)。
LCMS(ESI)：m/z，661.2[M+H]+。
步骤5：化合物LY-43D-g的制备
在室温下将化合物LY-43D-f(40mg，60.54μmol，1eq)和二乙胺(22.14mg，31.18μL，302.72μmol，5eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。20℃搅拌2小时。反应液减压浓缩得到化合物LY-43D-g(33mg)。
LCMS(ESI)：m/z，439.2[M+H]+。
步骤6：化合物LY-43D-i的制备
在室温下将化合物LY-43D-g(33mg)、6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(LY-34e)(23.20mg，75.27μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(29.18mg，37.32μL，225.80μmol，3eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。20℃搅拌16小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从3％到33％洗脱)纯化，冻干后得到化合物LY-43D-i(20mg，31.7μmol，二步收率：52.3％)。
LCMS(ESI)：m/z，632.2[M+H]+。
步骤7：化合物LY-43D的制备
在室温下，将化合物LY-43D-i(6.9mg，10.9μmol，1.3eq)、化合物LY-28C-c(8mg，66.8％纯度，8.41μmol，1eq)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基 脲六氟磷酸酯(4.48mg，11.77μmol，1.4eq)和N,N-二异丙基乙胺(3.26mg，4.17μL，25.22μmol，3eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，15℃搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干后得到化合物LY-43D(3.26mg，2.91μmol，收率：51％)。
LCMS(ESI)：m/z，1271.6[M+Na]+。
实施例55：化合物LY-43E的制备
步骤1：化合物LY-43E-b的制备
将化合物LY-43E-a(4.0g，1.0eq)和乙醛(6.09mL，10.0eq)溶解于四氢呋喃(30mL)和甲醇(7.5mL)中，冰浴冷却下加入氰基硼氢化钠(3.41g，5.0eq)，然后自然升温至室温搅拌反应16小时。将反应液浓缩，剩余物中加入水(30mL)并用二氯甲烷/甲醇(10:1，30mL)萃取二次，合并有机相后浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝5:1)纯化，得到化合物LY-43E-b(1.9g，41.2％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，425.3[M+H]+。
步骤2：化合物LY-43E-d的制备
将化合物LY-43E-b(1.0g，1.0eq)和甘氨酸叔丁酯(370.8mg，1.2eq)溶解于无水DMF(10mL)中，加入HATU(1.07g,1.2eq)和DIPEA(1.17mL，3.0eq) 后于室温搅拌反应1小时。将反应液浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝8:1)纯化，得到化合物LY-43E-d(900mg，71％收率)。
LCMS(ESI)：m/z，538.3[M+H]+。
步骤3：化合物LY-43E-e的制备
向化合物LY-43E-d(900mg，1.67mmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入二乙胺(1.72mL，16.74mmol，10eq)，并于室温搅拌2小时。减压浓缩，得粗品(840.8mg)。
LCMS(ESI)：m/z，316[M+H]+。
步骤4：化合物LY-43E-g的制备
向化合物LY-43E-e(840.8mg，62.8％纯度，1.67mmol，1eq)和化合物LY-34e(619.23mg，2.01mmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(829.89μL，5.02mmol，3eq)，并于室温搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从10％到45％洗脱)纯化，得化合物LY-43E-g(234mg，收率＝27.5％)。
LCMS(ESI)：m/z，509[M+H]+。
步骤5：化合物LY-43E-h的制备
冰浴下向化合物LY-43E-g(234mg，460.03μmol，1eq)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入三氟乙酸(3mL)，搅拌5分钟后恢复室温搅拌4小时，反应液浓缩，然后用二氯甲烷浓缩，得粗品LY-43E-h(308mg)。
LCMS(ESI)：m/z，453[M+H]+。
步骤6：化合物LY-43E的制备
向化合物LY-28C-c(21.2mg，70.2％纯度，23.41μmol，1eq)和化合物LY-43E-h(18.7mg，67.6％纯度，27.96μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入1-羟基苯并三唑(5.06mg，37.46μmol，1.6eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(6.73mg，35.12μmol，1.5eq)，将反应置于室温搅拌过夜，反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从10％到45％洗脱)纯化，得化合物LY-43E(7.01mg，收率＝28.11％)。
LCMS(ESI):m/z，1070[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(d,J＝7.2Hz,1H),8.20(s,1H),8.16(d,J＝7.2Hz,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,1H),7.78-7.72(m,2H),7.33(s,1H),7.01(s,2H),6.53(s,1H),5.44(s,2H),5.27(s,2H),4.70(ddt,J＝32.2,16.6,8.8Hz,4H),4.30(q,J＝7.2Hz,1H),4.27-4.18(m,2H),3.75(d,J＝5.6Hz,2H),3.24-2.89(m,7H),2.09(dq,J＝12.8,6.4,5.8Hz,4H),2.00(q,J＝6.6Hz,1H),1.93-1.82(m,2H),1.67(s,1H),1.62-1.40(m,8H),1.30(d,J＝7.2Hz,6H),1.18(d,J＝16.8Hz,9H),0.90-0.86(m,6H),0.82(d,J＝6.8Hz,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-114.09。
实施例56：化合物LY-44A的制备
步骤1：化合物LY-44A-b的制备
向化合物LY-44A-a(500mg，1.26mmol，1.0eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，分别加入1.2倍当量的L-丙氨酸叔丁酯盐酸盐(275mg)、1.2倍当量O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(576mg，1.2eq)以及3.0倍当量的N,N-二异丙基乙胺(489mg)，加完后室温搅拌16小时。反应液用20ml水猝灭，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚1；20到1:5)纯化，得到白色固体化合物LY-44A-b(567mg，产率：80％；纯度：93％)(无色油状物)。
LCMS：m/z＝546.3[M+Na]+；Rt＝2.584min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝6.8Hz,1H),7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.76(d,J＝9.0Hz,1H),7.71(d,J＝7.5Hz,2H),7.55(t,J＝6.2Hz,1H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.33(t,J＝7.5Hz,2H),4.33–4.20(m,4H),4.11(p,J＝7.0Hz,1H),3.67(d,J＝6.2Hz,2H),1.95(dt,J＝12.6,6.3Hz,1H),1.38(d,J＝2.0Hz,9H),1.24(d,J＝7.2Hz,3H),0.86(dd,J＝19.2,6.7Hz,6H)。
步骤2：化合物LY-44A-c的制备
向化合物LY-44A-b(567mg，1.01mmol，1.0eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，加入10倍当量的二乙胺(1.0ml)。反应液室温搅拌16小时。减压浓缩，得到黄色油状物(300mg，粗品)。
LCMS：m/z＝302.2[M+H]+；Rt＝0.852min。
步骤3：化合物LY-44A-e的制备
0℃向化合物LY-44A-c(170.37mg，371.61μmol，1eq)、化合物LY-43C-a(112mg，371.61μmol，1eq)的DMF(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(144mg，1.11mmol，3eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(141.30mg，371.61μmol，1eq)，加完室温搅拌2小时。反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R2。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-44A-e(198mg，收率：64.8％)。
LCMS：m/z＝741.1[M+H]+/764.4[M+Na]；Rt＝1.552min。
步骤4：化合物LY-44A-f的制备
向化合物LY-44A-e(20mg，26.96μmol，1eq)的MeOH(3ml)溶液中加入钯碳(12mg)，加完用氢气球置换3次，然后在氢气氛围下反应2个小时。反应液加入2mL水，然后通过硅藻土过滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液减压浓缩，得到化合物LY-44A-f(16mg)。
LCMS：m/z＝608.3[M+H]+；Rt＝0.883min。
步骤5：化合物LY-44A-g的制备
0℃向化合物LY-44A-f(55mg，90.51μmol，1eq)、N-(9-氟苯基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(30.53mg，90.51μmol，1eq)的四氢呋喃(6mL)溶液中加入碳酸氢钠(22.81mg，10.56μL，271.52μmol，3eq)(溶于2ml水中)。25℃反应16小时，反应液减压浓缩，粗品用水和甲醇溶解，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R2。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-44A-g(70mg，收率：72％)。
LCMS：m/z＝830.5[M+H]+/852.5[M+Na]+；Rt＝2.3min。
步骤6：化合物LY-44A-h的制备
0℃向化合物LY-44A-g(70mg，84.34μmol，1eq)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)，25℃反应2小时，反应液减压浓缩，得到无色油状化合物LY-44A-h(60mg，粗品)。
LCMS：m/z＝774.3[M+H]+；Rt＝1.793min。
步骤7：化合物LY-44A-i的制备
0℃向化合物LY-44A-h(60mg，77.54μmol，1eq)和化合物PY-16(33.76mg，77.54μmol，1eq)的无水DMF(3mL)溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(40mg， 310.14μmol，4eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(35.38mg，93.04μmol，1.2eq)，加完后升温至20℃搅拌反应2小时。将反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R5。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)，得到白色固体化合物LY-44A-i(17mg，收率18.4％)。
LCMS：m/z＝1191.3[M+H]+/596.3[1/2M+1]+；Rt＝1.64min。
步骤8：化合物LY-44A-j的制备
0℃向化合物LY-44A-i(8mg，6.72μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中加入二乙胺(2.46mg，33.58μmol，5eq)，加完20℃反应2小时。将反应液浓缩，得到白色固体化合物LY-44-j(6.5mg，粗品)。
LCMS：m/z＝969.4[M+H]+；Rt＝1.090min。
步骤9：化合物LY-44A的制备
0℃向化合物LY-44A-j(6.50mg，6.71μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的溶液中加入化合物LY-39A-b(6.09mg，60％，10μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(3.47mg，4.43μL，26.83μmol，4eq)，加完20℃反应2小时。将反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R2。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-44A(2.71mg，收率：33.13％)。
LCMS：m/z＝1219.2[M+H]+/610.2[1/2M+1]+；Rt＝1.318min。
实施例57：化合物LY-44C的制备
步骤1：化合物LY-44C-e的制备
0℃向化合物LY-43C-a(456.35mg，0.99mmol，1eq)、化合物LY-44A-c(300mg，0.99mmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(385.96mg，2.99mmol，3eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(454.18mg，1.19mmol，1.2eq)。加完室温反应16小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-44C-e(417mg，收率：56％，82％纯度)。
LCMS：m/z＝742.2[M+H]+；Rt＝1.551min。
步骤2：化合物LY-44C-f的制备
氮气氛围下，向化合物LY-44C-e(110mg，82％，121.32μmol，1eq)的甲醇(10ml)溶液中加入钯碳(36mg)。加完用氢气置换3次，在氢气氛下反应2小时。向反应液里加入3ml水，然后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，得到无水油状化合物LY-44C-f(75mg，粗品)。
LCMS：m/z＝608.3[M+H]+；Rt＝1.103min。
步骤3：化合物LY-44C-g的制备
向化合物LY-44C-f(75mg，123.42μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液中加入化合物LY-34e(46mg，148.10μmol，1.2eq)和N,N-二异丙基乙胺(47.85mg，61.19μL，370.25μmol，3eq)，加完20℃反应16小时，反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R3。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm流动相水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到化合物LY-44C-g(70mg，收率：70.8％)。
LCMS：m/z＝801.4[M+H]+；Rt＝1.345min。
步骤4：化合物LY-44C-h的制备
0℃向化合物LY-44C-g(70mg，87.40μmol，1eq)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三氟乙酸(0.8mL)，加完20℃反应2小时。反应液减压浓缩，得无水油状化合物LY-44C-h(65mg，粗品)。
LCMS：m/z＝745.4[M+H]+；Rt＝0.770min。
步骤5：化合物LY-44C的制备
0℃向化合物LY-44C-h(30mg，40.28μmol，1eq)、化合物PY-16(15.79mg，36.25μmol，0.9eq)的N,N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(20.82mg，26.63μL，161.12μmol，4eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-六氟磷酸四甲基脲(18.38mg，48.34μmol，1.2eq)，加完25℃反应2小时，反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm，流动相：水(0.01％TFA)-乙腈，水的洗脱 比例从12％到42％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-44C(1.49mg，收率：3.18％)。
LCMS：m/z＝1162.4[M+H]+；Rt＝1.332min。
实施例58：化合物LY-44D的制备
步骤1：2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2-((苄氧基)羰基)-N6-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸的制备
于化合物LY-43C-a(800mg，1.74mmol，1eq)的THF(8mL)和DMF(4mL)溶液中加入DIC(264.26mg，330.32μL，2.09mmol，1.2eq)和NHS(240.99mg，2.09mmol，1.2eq)中。加完25℃反应4小时，反应液不经处理直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，556.2[M+H]+。
步骤2：N2-((苄氧基)羰基)-N6-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酰甘氨酰甘氨酸(LY-44a)的制备
于2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2-((苄氧基)羰基)-N6-((2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己酰基)-L-赖氨酸(969mg，1.74mmol，1eq)的THF(8mL)和DMF(4mL) 溶液加入甘氨酰甘氨酸(230.45mg，1.74mmol，1eq)和三乙胺(353mg，484.89μL，3.49mmol，2eq)以及5ml水。加毕25℃反应16小时，反应液减压浓缩，残余物通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号R3。色谱柱为GS-120-10-C18AP，流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从3％到33％洗脱)纯化，冻干得到白色固体化合物LY-44a(680mg，收率：68.09％)。
LCMS(ESI)：m/z，595.3[M+Na]+。
步骤3：化合物LY-44c的制备
将化合物LY-44a(200mg，349.30μmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，然后加入化合物1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(LY-44b)(48.24mg，419.16μmol，1.2eq)，再加入1,3-二异丙基碳二亚胺(52.90mg，66.12μL，419.16μmol，1.2eq)。反应在15℃搅拌5小时。反应液不做处理，直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，670.3[M+H]+。
步骤4：化合物LY-44f的制备
将化合物LY-44c(200mg，298.67μmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，向该溶液中加入L-缬氨酰胺-L-丙氨酸(LY-44e)(7.66mg，10.79μL，104.73μmol，6eq)和N,N-二异丙基乙胺(77.21mg，98.73μL，597.34μmol，2eq)。氮气氛下，该溶液在15℃搅拌12小时。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得化合物LY-44f(55mg，收率：24.79％)。
LCMS(ESI)：m/z，743.3[M+H]+。
步骤5：化合物LY-44g的制备
将化合物LY-44f(35mg，47.12μmol，1eq)溶于甲醇(3mL)，加入钯碳(15mg，140.95μmol，2.9913eq)，氢气置换三次，反应在氢气氛围下搅拌2小时。反应液过滤后减压浓缩，得到白色固体产物LY-44g(25mg，收率：87.17％)。
LCMS(ESI)：m/z，609.3[M+H]+。
步骤6：化合物LY-44h的制备
将化合物LY-44g(20mg，32.86μmol，1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，然后加入N,N-二异丙基乙胺(12.74mg，16.29μL，98.58μmol，3eq)和化合物LY-34e(304.79mg，507.99μL，1.71mmol，2eq)，反应在15℃搅拌12h。反应液用高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从3％到33％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体产物LY-44h(12mg，收率：45.54％)。
LCMS(ESI)：m/z，802.3[M+H]+。
步骤7：化合物LY-44D的制备
向化合物LY-44h(12mg，14.97μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，加入化合物PY-16(7.82mg，17.96μmol，1.2eq)和N,N-二异丙基乙胺(2.90mg，3.71μL，22.45μmol，1.5eq)，然后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(8.54mg，22.45μmol，1.5eq)。反应液在15℃搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-6。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相Water(0.225％FA)-ACN，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干后得白色固体LY-44D(5.57mg，收率：30.53％，纯度:97.4％)。
LCMS(ESI)：m/z，1219.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20–8.13(m,2H),8.09(d,J＝7.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.93(d,J＝7.4Hz,1H),7.76(dd,J＝10.0,5.7Hz,2H),7.61(t,J＝5.8Hz,1H),7.32(s,1H),6.99(s,2H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.35(d,J＝5.0Hz,1H),5.26(s,2H),4.52(s,3H),4.47(d,J＝5.0Hz,1H),4.39(d,J＝7.2Hz,1H),4.32(t,J＝5.7Hz,1H),4.24(t,J＝7.1Hz,1H),4.16(t,J＝7.8Hz,2H),3.97(t,J＝4.4Hz,1H),3.90(s,1H),3.71(dd,J＝12.6,5.7Hz,4H),3.55(d,J＝7.3Hz,1H),3.47(s,2H),3.21-3.13(m,5H),3.07-3.02(m,2H),2.07(dd,J＝14.0,5.3Hz,4H),1.89(dt,J＝14.8,7.1Hz,4H),1.62(s,1H),1.52-1.35(m,8H),1.18(d,J＝7.1Hz,8H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.77(dd,J＝9.9,6.8Hz,6H)。
实施例59：化合物LY-46D的制备

步骤1：化合物LY-46D-c的制备
室温下，向N-羟基丁二酰亚胺(1.22g，760.27μL，10.57mmol，1.2eq)和化合物LY-37d(5g，8.81mmol，1eq)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入二环己基碳二亚胺(1.82g，2.24mL，8.81mmol，1eq)，20℃下搅拌16小时。将反应液过滤，滤液浓缩后得白色固体产物LY-46D-c(4.40g，收率：75.15％，纯度：90％)。
LCMS(ESI)：m/z，687.4[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-46D-d的制备
将碳酸氢钠(250.23mg，135.99μL，2.98mmol，1eq)和甘氨酸(223.60mg，140.19μL，2.98mmol，1eq)溶于水(22mL)中，20℃下搅拌15分钟。将LY-46D-c(2.20g，90％，2.98mmol，1eq)溶于四氢呋喃(22mL)，然后加入到上述溶液中，20℃下搅拌16小时。反应液通过加压蒸馏除去四氢呋喃，剩余的水相通过2M盐酸酸化至pH＝2，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得粗品LY-46D-d(3.3g，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，647.4[M+Na]+。
步骤3：化合物LY-46D-e的制备
室温下，将化合物LY-46D-d(3.30g，63％，3.33mmol，1eq)、对氨基苯甲醇(614.72mg，4.99mmol，1.5eq)和2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(2.47g，2.06mL，9.98mmol，3eq)依次加入到二氯甲烷(50mL)和甲醇(25mL)中。25℃下搅拌60小时。反应液过滤得到滤饼，滤饼减压干燥后，得到白色固体产物LY-46D-e(1g，1.37mmol，收率：41.17％)。滤液减压浓缩后得到粗品，粗品通过石油醚(10mL)和乙酸乙酯打浆(10mL)。过滤得到滤饼，滤饼减压干燥后得到乳白色固体产物LY-46D-e(290mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，752.5[M+Na]+。
步骤4：化合物LY-46D-f的制备
室温下，将化合物LY-46D-e(1g，100％，1.37mmol，1eq)、4-硝基苯基碳酸酯(833.59mg，555.73μL，2.74mmol，2eq)和N,N-二异丙基乙胺(531.21mg，679.30μL，4.11mmol，3eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中。20℃下搅拌16小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到70％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体产物LY-46D-f(290mg，收率：23.65％，纯度：80％)和不纯的白色固体产物LY-46D-f(94mg,纯度：60％)
LCMS(ESI)：m/z，917.5[M+Na]+。
步骤5：化合物LY-46D-g的制备
室温下将伊喜替康甲磺酸盐(137.80mg，259.22μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(33.50mg，42.84μL，259.22μmol，1eq)加入N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，20℃下搅拌20分钟。然后，室温下将化合物LY-46D-f(290mg，80％，259.22μmol，1eq)和1-羟基苯并三唑(17.51mg，11.68μL，129.61μmol，0.5eq)、吡啶(102.52mg，104.83μL，1.30mmol，5eq)依次加入上述反应液中，20℃下搅拌16小时。反应液直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，1191.4[M+H]+。
步骤6：化合物LY-46D-h的制备
室温下将二乙胺(189.60mg，267.04μL，2.59mmol，10eq)加入到上一步的反应液中，20℃下搅拌3小时。反应液减压浓缩后得到棕色油状粗品产物LY-46D-h(理论产量251mg)。
LCMS(ESI)：m/z，991.5[M+Na]+。
步骤7：化合物LY-46D-i的制备
室温下向化合物LY-39A-b(113.56mg，310.81μmol，1.2eq)和化合物LY-46D-h(251mg，259.01μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中加入N,N-二异丙基乙胺(100.42mg，128.42μL，777.03μmol，3eq)，20℃下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色 谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体产物LY-46D-i(255mg，209.13μmol，四步收率：15％)。
LCMS(ESI)：m/z，1241.6[M+Na]+。
步骤8：化合物LY-46D-j的制备
0℃下将化合物LY-46D-i(135mg，110.71μmol，1eq)加入到三氟乙酸(0.2mL)和二氯甲烷(2mL)中。0℃下搅拌2小时，然后升温至20℃，搅拌14小时。反应液减压浓缩后，得到黄色固体产物LY-46D-j(124mg，110.8μmol，理论产量)。
LCMS(ESI)：m/z，1119.6[M+H]+。
步骤9：化合物LY-46-D的制备
室温下向化合物LY-46D-j(124mg，110.79μmol，1eq)、化合物LY-10b(255.87mg，332.37μmol，3eq)和N,N-二异丙基乙胺(114.55mg，146.48μL，886.32μmol，8eq)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(105.32mg，276.97μmol，2.5eq)，20℃下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.1％TFA)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得到产物LY-46-D(72.67mg，38.84μmol，二步收率：35％，纯度：98.01％)。
LCMS(ESI)：m/z，936.4[1/2M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),9.10(s,2H),8.25(t,J＝5.6Hz,1H),8.18-8.03(m,3H),7.95(d,J＝8.4Hz,1H),7.82-7.75(m,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.31(s,1H),6.53(s,1H),5.44(d,J＝7.2Hz,4H),5.28(s,3H),5.07(s,2H),4.79(s,2H),4.54(s,5H),4.20(dd,J＝16.4,7.6Hz,2H),3.99(s,2H),3.90-3.84(m,2H),3.78(t,J＝5.2Hz,2H),3.68(s,2H),3.61(d,J＝3.2Hz,1H),3.59-3.54(m,6H),3.53-3.46(m,25H),3.43(s,2H),3.40(s,4H),3.25(d,J＝14.4Hz,3H),3.13(s,2H),3.01(q,J＝6.4Hz,2H),2.55(d,J＝7.2Hz,2H),2.39-2.33(m,4H),2.29(t,J＝6.8Hz,2H),2.18(d,J＝14.0Hz,2H),2.02-1.95(m,1H),1.92-1.76(m,4H),1.68(d,J＝7.2Hz,1H),1.60-1.53(m,1H),1.42-1.22(m,6H),1.16-1.08(m,1H),0.91-0.80(m,13H)。
实施例60：化合物LY-46E的制备

步骤1：化合物LY-46E-b的制备
室温下将化合物LY-10b(100mg，129.90μmol，1eq)、N-羟基丁二酰亚胺(14.95mg，9.34μL，129.90μmol，1eq)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(32.37mg，36.91μL，168.87μmol，1.3eq)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中，20℃下搅拌16小时。反应液直接用于下一步。
LCMS(ESI)：m/z，867.4[M+H]+。
步骤2：化合物LY-46F-i的制备
室温下向上一步反应液中依次加入L-鸟氨酸盐酸盐(12mg，71.17μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(45.99mg，58.81μL，355.83μmol，5eq)，20℃下搅拌16小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6,7)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从1％到25％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体产物LY-46F-i(54mg，33.01μmol，二步收率：24％)。
LCMS(ESI)：m/z，818.7[1/2M+H]+。
步骤3：化合物LY-46E的制备
室温下向化合物LY-46D-j(6.43mg，5.74μmol，1eq)、化合物LY-46F-i(28.19mg，17.23μmol，3eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(5.46mg，14.36μmol，2.5eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(5.94mg，7.60μL，45.96μmol，8eq)，20℃下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860(R1,4,5,6,7)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.1％TFA) -乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，冻干后得到产物LY-46-E(2.56mg,935.32nmol收率：16.28％，纯度：96.98％)。
LCMS(ESI)：m/z，913.5[1/3M+2]+。
实施例61：化合物LY-46F的制备

步骤1：(S)-10-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2,2-二甲基-4,11-二氧代-3,15,18,24-五氧杂-5,12-二氮杂庚烷-27-酸的制备
室温下向1-氨基-3,6,9,12-四氧十五烷-15-酸(234.52mg，883.99μmol，1eq)和N6-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基)-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基)-L-赖氨酸2,5-二氧代-1-吡咯烷基酯(500mg，883.99μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(342.74mg，438.29μL，2.65mmol，3eq)。该反应液在20℃搅拌16小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 150×25mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到55％洗脱)纯化，冻干得到白色固体产物(S)-10-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2,2-二甲基-4,11-二氧代-3,15,18,24-五氧杂-5,12-二氮杂庚烷-27-酸(300mg，收率：47.41％)。
LCMS(ESI)：m/z，738.5[M+Na]+。
步骤2：(S)-10-氨基-2,2-二甲基-4-11-二氧代-3,15,18,24-五氧杂-5,12-二氮杂庚烷-27-酸的制备
室温下，向(S)-10-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2,2-二甲基-4,11-二氧代-3,15,18,24-五氧杂-5,12-二氮杂庚烷-27-酸(50mg，69.85μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入乙二胺(51.09mg，71.95μL，698.48μmol，10eq)。该反应液在20℃下搅拌2小时。反应液通过减压浓缩得到黄色油状产物(34mg，粗品不计收率)。
LCMS(ESI)：m/z，494.3[M+Na]+。
步骤3：化合物LY-46F-f的制备
将(S)-10-氨基-2,2-二甲基-4-11-二氧代-3,15,18,24-五氧杂-5,12-二氮杂庚烷-27-酸(25.17mg，68.88μmol，1eq)、化合物LY-39A-b(25.17mg，68.88μmol，1eq)和N,N-二异丙基乙胺(26.71mg，34.15μL，206.65μmol，3eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入。该反应液在20℃下搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，冻干，得到白色固体产物LY-46F-f(15mg，三步收率：14％)。
LCMS(ESI)：m/z，766.4[M+Na]+。
步骤4：(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯的制备
将化合物(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸-L-丙氨酸(1g，2.44mmol，1eq)溶于DCM(20mL)/MeOH(10mL)，加入(4-氨基苯基)甲醇(360.04mg，2.92mmol，1.2eq)和EEDQ(903.71mg，753.09μL，3.65mmol，1.5eq)。该反应液在25℃下搅拌12小时。反应液减压浓缩，所得固体用石油醚/乙酸乙酯＝3:1，总量为30mL打浆，滤饼用石油醚/乙酸乙酯＝3:1，总量为50mL洗涤，得黄色固体产物(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯(1.10g，收率：87.57％)。
LCMS(ESI)：m/z，538.2[M+Na]+。
步骤5：化合物LY-46F-c的制备
将(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯(500mg，969.74μmol，1eq)溶于DMF(6mL)，向该溶液中加入双(4-硝基苯基)碳酸酯(590.01mg，393.34μL，1.94mmol，2eq)和DIPEA(375.99mg，480.80μL，2.91mmol，3eq)。在25℃下反应16小时。反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚1:30到1：1)纯化，得黄色固体化合物LY-46F-c(380mg，收率：57.57％)。
LCMS(ESI)：m/z，703.3[M+Na]+。
步骤6：化合物LY-46F-d的制备
将化合物伊喜替康甲磺酸盐(78.10mg，146.91μmol，1eq)溶于DMF(3mL)的溶液中，加入DIPEA(18.99mg，24.28μL，146.91μmol，1eq)，反应液搅拌10min，再加入化合物LY-46F-c(100mg，146.91μmol，1eq)、HOBT(9.93mg，6.62μL，73.45μmol，0.5eq)和吡啶(58.10mg，59.41μL，734.54μmol，5eq)，反应液在25℃下搅拌16小时。反应液减压浓缩，通过硅胶柱层析色谱法(洗脱剂：DCM:MeOH＝1:0～10:1)，得到黄色固体产物LY-46F-d(150mg，收率：104.50％)。
LCMS(ESI)：m/z，977.4[M+H]+。
步骤7：化合物LY-46F-e的制备
将化合物LY-46F-d(150mg，153.52μmol，1eq)溶于DMF(5mL)，加入Et2NH(56.14mg，79.07μL，767.61μmol，5eq)，在25℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到棕色油状产物LY-46F-e(100mg，收率：86.30％)。
LCMS(ESI)：m/z，755.4[M+H]+。
步骤8：化合物LY-46F-g的制备
将化合物LY-46F-f溶于DMF(2mL)，向该反应液中加入化合物LY-46F-e(10.15mg，13.44μmol，1eq)和DIPEA(3.47mg，4.44μL，26.89，0℃下再加入HATU(7.67mg，20.16μmol，1.5eq)，反应液在5℃条件下搅拌2小时。LCMS显示反应完成。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，BRIX-2860(R1,4,5,6)。色谱柱为Phenomenex Luna C18 150×25mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从40％到70％洗脱)纯化，经过冻干得到白色固体产物LY-46F-g(9mg，收率：45.21％)。
LCMS(ESI)：m/z，1502.7[(M+Na)]+。
步骤9：化合物LY-46F-h的制备
将化合物LY-46F-g(9mg，6.08μmol，1eq)溶于DCM(5mL)，向该反应液中加入TFA(693.05μg，465.1μL，6.08μmol，1eq)，反应液在5℃条件下搅拌2小时。反应液直接旋干，得黄色固体产物(8mg，收率：95.34％)。
LCMS(ESI)：m/z，1380.5[(M+H)]+。
步骤10：化合物LY-46F的制备
将化合物LY-46F-h(8mg，5.79μmol，1eq)溶于DMF(1mL)，向该反应液中加入化合物LY-46E-i(9.48mg，5.79μmol，1eq)和DIPEA(1.50mg，1.92μL，11.59μmol，2eq)，将反应液冷却至0℃，加入HATU(3.31mg，8.69μmol，1.5eq)，反应液在25℃条件下搅拌1小时。反应液通过高效液相制备色谱法，得白色固体产物(620μg，收率：3.57％，纯度：98％)。
LCMS(ESI)：m/z，1000.13[(M+2H)/2]+。
实施例62：化合物LY-46G的制备

步骤1：化合物LY-46G-a的制备
将化合物(9H-芴-9-基)甲基((S)-1-(((S)-1-(4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸酯(300mg，1.0eq，购买于毕得医药)溶解于无水DMF(6mL)中，冰浴冷却下加入DIEA(164.8μL，2.0eq)和二(对硝基苯)碳酸酯(303.35mg，2.0eq)后于25℃下搅拌反应1小时。将反应液冷却至0℃，向其中缓慢滴加乙醚(120mL)，析出固体后在0℃下继续搅拌1小时，过滤，干燥得到化合物LY-46G-a，黄色固体(400mg，粗收率104.6％)
LCMS：m/z＝767.4[M+H]+；Rt＝2.664min。
步骤2：化合物LY-46G-b的制备
将化合物伊喜替康甲磺酸盐(197.58mg，1.0eq，购买于MCE)溶解于无水DMF(5mL)中，25℃下加入DIPEA(61.43μL，1.0eq)后搅拌十分钟。然后将化合物LY-46G-a(300mg，1.0eq)加入其中，再加入HOBT(25.11mg,0.5eq)和吡啶(150.3μL，5.0eq)，后于25℃下搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液通过反相C18纯化(流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到65％洗脱)，得到化合物LY-46G-b(270mg，收率68.33％)。
LCMS：m/z＝1063.5[M+H]+；Rt＝2.525min。
步骤3：化合物LY-46G-c的制备
将化合物LY-46G-b(250mg,1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，加入二乙胺(238μL，10.0eq)后，于25℃搅拌反应2小时。将反应液浓缩至干，得到粗品化合物LY-46G-c(240mg，收率92.89％)，不经纯化直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝841.5[M+H]+；Rt＝1.423min。
步骤4：化合物LY-46G-d的制备
将化合物LY-46G-c(30mg，1.2eq)和化合物LY-46F-f(25.52mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，0℃下加入DIEA(11.06μL，3.0eq)和HATU(11.02mg，1.3eq)后于25℃下搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-46G-d(56mg，收率56.93％)。
LCMS：m/z＝1589.8[M+Na]+；Rt＝2.088min。
步骤5：化合物LY-46G-e的制备
将化合物LY-46G-d(51.07mg，1.0eq)分散于无水DCM(2mL)中，冷却至0℃滴加三氟乙酸(200μL，84.0eq)后，于0℃下搅拌反应1小时。将反应液浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸后，得到粗品化合物LY-46G-e(54mg，粗收率100％)，不经纯化直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝1489.7[M+Na]+；Rt＝1.598min。
步骤6：化合物LY-46G的制备
将化合物LY-46G-e(54mg，1.0eq)和化合物E0057-499-P1溶解于无水DMF(2mL)中，冷却至0℃，加入DIEA(21.78μL，4.0eq)和HATU(16.29mg,1.3eq)后于0℃下搅拌反应1小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)，得到白色固体化合物LY-46G(7.02mg，收率6.91％)。
LCMS：m/z＝1542.8[1/2M+H]+；Rt＝1.421min。
实施例63：化合物LY-47A的制备
步骤1：化合物LY-47A-a的制备
将化合物PY-9(150mg，1.0eq)和化合物LY-21B-a(213.2mg，1.8eq)溶 解于无水四氢呋喃(8mL)中，加入对甲苯磺酸(55mg，1.0eq)后于30℃下搅拌反应3小时。将反应液过滤后，滤液通过反相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-47A-a(57mg，收率23％)。
LCMS：m/z＝775.3[M+H]+；Rt＝2.118min。
步骤2：化合物LY-47A-b的制备
将化合物LY-47A-a(57mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，加入二乙胺(76μL，10.0eq)后于25℃下搅拌反应4小时。将反应液直接浓缩干后，得到化合物LY-47A-b(42mg，粗品)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝553.3[M+H]+；Rt＝1.025min。
步骤3：化合物LY-47A的制备
将化合物LY-47A-b(21mg，1.0eq)和(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰)甘氨酰-L-苯丙氨酸(购买于成都正善达)(18mg，1.0eq)溶解于无水DMF(3mL)中，加入EDCI(11mg，1.5eq)和HOBT(8.22mg，1.6eq)后于25℃下搅拌反应5小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-47A(7.97mg，收率20.8％)。
LCMS：m/z＝1007.5[M+H]+；Rt＝1.652min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(t,J＝6.7Hz,1H),8.31(t,J＝5.9Hz,1H),8.13(d,J＝8.0Hz,1H),8.07(t,J＝5.8Hz,1H),8.02(t,J＝5.7Hz,1H),7.83(d,J＝12.5Hz,1H),7.29(s,1H),7.22(s,3H),7.28-7.12(m,2H),6.99(s,2H),6.51(s,1H),5.43(s,2H),5.24(s,2H),4.62(d,J＝6.7Hz,2H),4.53-4.43(m,1H),4.26-4.20(m,2H),3.81-3.63(m,8H),3.58(dd,J＝16.7,5.5Hz,1H),3.14(t,J＝6.1Hz,4H),3.03(dd,J＝13.8,4.5Hz,1H),2.78(dd,J＝13.8,9.7Hz,1H),2.06(dt,J＝24.4,6.8Hz,4H),1.96-1.77(m,J＝7.1Hz,3H),1.46(h,J＝7.5Hz,4H),1.18(qd,J＝9.5,9.0,6.0Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例64：化合物LY-47B的制备

步骤1：化合物LY-47B-d1的制备
0℃向2,5-二氧代吡咯烷-1-基((苄氧基)羰基)-L-缬氨酸酯(10g，28.71mmol，1eq)和N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸(7.07g，28.71mmol，1eq)的无水DMF(100mL)的溶液中加入DIPEA(11.13g，14.24mL，86.13mmol，3eq)，加毕，升温到20℃反应16小时。反应液在不超过40℃浓缩掉大部分DMF，然后向残余物加入200mL水。0℃用2N的盐酸将残余物的水溶液pH调到4，然后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，分别用水(300mL，2次)洗涤，饱和食盐水(100mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物LY-47B-d1(15.9g，粗品)。
LCMS(ESI)：m/z，502.2[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-47B-d2的制备
0℃向化合物LY-47B-d1(8.30g，17.31mmol，1eq)的无水DCM(60mL)的溶液中加入HCl/二氧六环(4M/L，50mL)，加毕，升温到20℃反应2小时。反应液减压浓缩，得化合物LY-47B-d2(6g，粗品)。
LCMS(ESI):m/z，380.2[M+H]+。
步骤3：化合物LY-47B-d3的制备
室温下向化合物LY-47B-d2(3.95g，34％，3.54mmol，1eq)的无水MeOH(40mL)溶液中加入(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-酮(1.26g，2.10mL，7.08mmol，2eq)和三乙胺(1.79g，2.46mL，17.70mmol，5eq)，加毕，升温到70℃反应16小时。反应液浓缩掉大部分甲醇，加入5ml水，然后通过 高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物LY-47B-d3(866mg，收率：43.88％)。
LCMS(ESI)：m/z，558.3[M+H]+。
步骤4：化合物LY-47B-d4的制备
氢气气氛下，向化合物LY-47B-d3(866mg，1.55mmol，1eq)的甲醇(30mL)溶液中，加入钯碳(200mg，16.64μL，1.88mmol，1.2101eq)，将反应于室温搅拌16小时。向反应液中加入水(3mL)，过滤，减压浓缩，得到固体产物LY-47B-d4(566mg，收率＝86％)。
LCMS(ESI)：m/z，424[M+H]+。
步骤5：化合物LY-47B-d的制备
向化合物LY-47B-d4(566mg，1.34mmol，1eq)和化合物LY-39A-b(634.85mg，1.74mmol，1.3eq)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液中，加入N,N-二异丙基乙胺(883.60μL，5.35mmol，4eq)，将反应置于室温搅拌2小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从3％到33％洗脱))纯化，冻干，得到白色固体产物LY-47B-d(411mg，收率＝45.6％)。
LCMS(ESI)：m/z，674[M+H]+。
步骤6：化合物LY-47B-a的制备
将化合物PY-9(100mg，1.0eq)和(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺)乙酸甲酯(LY-21B-a)(157.9mg，2.0eq)溶解于无水四氢呋喃(3mL)中，加入对甲苯磺酸(36.9mg，1.0eq)后于30℃搅拌反应3小时。将反应液过滤后，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物LY-47B-a(20mg，收率12.1％)。
LCMS：m/z＝775.3[M+H]+；Rt＝2.118min。
步骤7：化合物LY-47B-c的制备
将化合物LY-47B-a(20mg，1.0eq)溶解于无水DMF(1mL)中，加入二乙胺(26.6μL，10.0eq)后于25℃搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，得到化合物LY-47B-c(14.26mg，粗品)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝553.3[M+H]+；Rt＝1.104min。
步骤8：化合物LY-47B的制备
将化合物LY-47B-c(14.26mg,1.0eq)和化合物LY-47B-d(20.87mg，1.2eq)溶解于无水DMF(5mL)中，加入EDCI(7.42mg,1.5eq)和HOBT(5.58mg， 1.6eq)后于25℃搅拌反应3小时。将反应液过滤后，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相水(0.1％TFA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-47B(6.08mg，收率19.5％)白色固体。
LCMS：m/z＝1208.6[M+H]+；Rt＝1.363min。
实施例65：化合物LY-47C的制备
步骤1：化合物LY-47C-b的制备
向化合物LY-37d(20mg，35.23μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中加入二乙胺(25.77mg，36.29μL，352.31μmol，10eq)。加毕该反应液在25℃下反应6小时，反应液减压浓缩，得到类白色化合物LY-47C-b(12mg，粗品收率不计)。
LCMS(ESI)：m/z，346.3[M+H]+。
步骤2：化合物LY-47C-c的制备
0℃下向化合物LY-47C-b(100mg，289.49μmol，1eq)、化合物LY-39A-b的DMF(2mL)溶液中，加入DIEA(112.24mg，143.53μL，868.46μmol，3eq)。加毕该反应液在25℃搅拌16小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。 流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-47C-c(100mg，收率：57.99％)。
LCMS(ESI)：m/z，618.2[M+H]+。
步骤3：化合物LY-47C-d的制备
0℃下向化合物LY-47C-c(21.56mg，36.20μmol，1eq)、化合物LY-47B-c(20mg，36.20μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中，加入HOBt(8.31mg，5.54μL，61.53μmol，1.7eq)和EDCI(10.41mg，11.87μL，54.29μmol，1.5eq)。加毕该反应液在25℃搅拌2小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-47C-d(22mg，收率：53.78％)。
LCMS(ESI)：m/z，1152.3[M+Na]+。
步骤4：化合物LY-47C-e的制备
0℃下向化合物LY-47C-d(22mg，19.46μmol，1eq)的DCM(9mL)溶液中，加入TFA(0.9mL)。加毕该反应液在0-10℃搅拌3小时。反应液减压浓缩，然后加水和乙腈冻干，得到白色固体化合物LY-47C-e(23mg，收率：82.62％，纯度：80％)。
LCMS(ESI)：m/z，1052.3[M+H]+。
步骤5：化合物LY-47C的制备
向化合物LY-10(35.87mg，46.60μmol，3eq)、化合物LY-47C-e(20mg，80％，15.53μmol，1eq)的DMF(10mL)溶液中，加入DIPEA(12.04mg，15.40μL，93.19μmol，6eq)和HATU(11.81mg，31.06μmol，2eq)。加毕该反应液在20℃下反应2小时，反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-47C(10.88mg，收率：34.18％)。
LCMS(ESI)：m/z，1803.6[M+Na]+，891.4[1/2M+1]+。HPLC:Rt＝3.924min。
实施例66：化合物LY-47D的制备

步骤1：化合物LY-47D-a的制备
将化合物PY-9(50mg，105.04μmol，1eq)和化合物LY-27a(505.84mg，1.05μmol，10eq)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入对甲苯磺酸(18.09mg，105.04μmol，1eq)，并置于室温下搅拌15小时。将反应液浓缩后，用N,N-二甲基甲酰胺溶解后过滤，滤液通过高效液相色谱(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为PWelch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从39％到69％洗脱)，得产物LY-47D-a(43.7mg，收率＝46.8％)。
LCMS(ESI)：m/z，888[M+H]+。
步骤2：化合物LY-47D-b的制备
将化合物LY-47D-a(43.7mg，49.21μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入二乙胺(25.35μL，246.07μmol，5eq)，并置于室温下搅拌2小时。减压浓缩得粗品(41mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，666[M+H]+。
步骤3：化合物LY-47D的制备
将化合物LY-47D-b(41mg，49.2μmol，1eq，79.9％纯度)和化合物LY-29B-d(40.8mg，59.04μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(19.08mg，147.6μmol，3eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(22.5mg，59.04μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为Global 30mm×250mm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到白色固体化合物LY-47D(11.17mg，收率＝19.3％)。
LCMS(ESI)：m/z，1361[M+Na]+。
实施例67：化合物LY-47E的制备

将化合物LY-47A-b(20mg，1.0eq)和化合物LY-22CE-f(53.43mg，50％纯度)溶解于无水DMF(2mL)中，冰浴冷却至0℃，加入DIPEA(17μL，3.0eq)和HATU(17mg，1.3eq)后，自然升温至室温搅拌反应4小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号LC-20AP。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯度，得到白色固体化合物LY-47E(4.73mg，收率10.5％)。
LCMS：m/z＝1333.5[M+Na]+；Rt＝1.583min。
实施例68：化合物LY-47F的制备
步骤1：化合物LY-47F-a的制备
将化合物LY-37f(35.57mg，1.5eq)和化合物LY-47A-c(25mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，降温至0℃，加入HATU(21.25mg，1.3eq)和DIPEA(21.3μL，3.0eq)后升温至25℃搅拌反应16小时。将反应液过滤后，滤液通过常规反相制备色谱法(流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从10％到50％洗脱)纯化，得到化合物LY-47F-a(30mg，收率64.3％)。
LCMS：m/z＝1086.6[M+H]+；Rt＝2.033min。
步骤2：化合物LY-47F-b的制备
将化合物LY-47F-a(30mg，1.0eq)溶解于无水DMF(2mL)中，室温25℃下加入二乙胺(28.45μL，10.0eq)后，搅拌反应2小时。将反应液直接浓缩干，得到粗品(20mg，收率83.8％)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝864.5[M+H]+；Rt＝1.144min。
步骤3：化合物LY-47F的制备
将化合物LY-47F-b(20mg，1.0eq)和化合物LY-39A-b(13.19mg，1.3eq)溶解于无水DMF(5mL)中，冷却至0℃，滴加DIPEA(13.77μL，3.0eq)后升温至25℃搅拌反应2小时。将反应液过滤，滤液通过高效液相制备色谱法((制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 150×25mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从20％到50％洗脱)，得到白色固体化合物LY-47F(2.66mg，收率8.6％)。
LCMS：m/z＝1114.5[M+Na]+；Rt＝1.559min。
实施例69：化合物LY-48A的制备
步骤1:化合物LY-48A-a的制备
向化合物PY-29B(23mg，95％纯度，47.28μmol，1eq)的3ml四氢呋喃中，分别加入化合物LY-21B-a(34.83mg，94.56μmol，2eq)和对甲苯磺酸(8.14mg，7.61μL，47.28μmol，1eq)，该反应在25℃搅拌16小时。浓缩得到37.5mg粗品化合物LY-48A-a(纯度：48％)，直接用于下一步反应。
LCMS(ESI):m/z，795.3[M+H]+。
步骤2：化合物LY-48A-b的制备
向粗品化合物LY-48A-a(37.50mg，纯度48％，22.65μmol，1eq)的3mL DMF溶剂中，加入二乙胺(16.56mg，23.33μL，226.47μmol，10eq)，加毕将反应在25℃搅拌16小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得淡黄色固体化合物LY-48A-b(1.8mg，产率：14％)。
LCMS(ESI):m/z，573.2[M+H]+。
步骤3：化合物LY-48A的制备
向化合物LY-48A-b(9.70mg，16.94μmol，1eq)的2ml DMF溶剂中，分别加入化合物LY-21B-e(成都正善达)(9.61mg，20.33μmol，1.2eq)、EDCI(5.55μL，25.41μmol，1.5eq)以及HOBt(3.66mg，2.44μL，27.11μmol，1.6eq)，反应在25℃搅拌16小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得1.21mg白色固体化合物LY-48A(产率：7％)。
LCMS：m/z＝1027.3[M+H]+；Rt＝1.929min。
实施例70：化合物LY-48B的制备
0℃向化合物LY-48A-b(1.80mg，3.14μmol，1eq)的1mL DMF溶剂中，分别加入LY-47B-d(2.54mg，3.77μmol，1.2eq)、EDCI(903.98μg，4.72μmol，1.5eq)以及HOBt(679.65μg，5.03μmol，1.6eq)。加毕将反应在25℃搅拌16小时。反应液经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物LY-48B(1.50mg，产率：39％)。
LCMS(ESI):m/z，1228.3[M+H]+；Rt＝1.625min。
实施例71：化合物LY-48C的制备
步骤1：化合物LY-48C-a的制备
向化合物LY-47C-c(6.24mg，10.48μmol，1.2eq)、化合物LY-48A-b(5mg，8.73μmol，1eq)的2mL DMF溶剂中，加入HOBt(1.89mg，1.26μL，13.97μmol，1.6eq)、EDCI(2.51mg，2.86μL，13.10μmol，1.5eq)。加毕该反应在25℃搅拌3小时，反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，冻干得白色固体化合物LY-48C-a(6mg，收率：59.73％)。
LCMS(ESI)：m/z，1172.4[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-48C-b的制备
0℃下向化合物LY-48C-a(6mg，5.22μmol，1eq)的DCM(4mL)溶液中，加入TFA(0.4mL)。加毕该反应液在0-10℃搅拌2小时。反应液不超过35℃浓缩，然后加水和乙腈冻干得到浅黄色固体化合物LY-48C-b(6mg，粗品收率：98.81％)。
LCMS(ESI)：m/z，1050.4[M+H]+。
步骤3：化合物LY-48C的制备
向化合物LY-10b(9.13mg，11.85μmol，3eq)、化合物LY-48C-b(4.60mg，3.95μmol，1eq)的DMF(2mL)溶液中，加入DIPEA(3.57mg，4.57μL，27.66μmol，7eq)和HATU(3.76mg，9.88μmol，2.5eq)。加毕该反应液在20℃下反应2小时，反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.1％TFA)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，经冻干得到白色固体化合物LY-48C(4.98mg，收率：53.80％)。
LCMS(ESI):m/z,1801.7[M+Na]+，902[1/2M+1]+。HPLC:Rt＝4.298min。
实施例72：化合物LY-48D的制备
步骤1：化合物LY-48D-a的制备
向化合物PY-29B(159mg，326.84μmol，1eq)和化合物LY-27a(524.64mg，90％，980.53μmol，3eq)的THF(30mL)中加入TsOH(159mg，326.84μmol，1eq)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。减压浓缩该混合物以除去溶剂，用DMF溶解并过滤，通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从50％到80％洗脱)纯化，冻干，得到白色固体化合物LY-48D-a(33.80mg，收率：38.12％)。
LCMS(ESI)：m/z，930[M+Na]+。
步骤2：化合物LY-48D-b的制备
向化合物LY-48D-a(33.80mg，37.23μmol，1eq)在DMF(2mL)中加入Et2NH(13.61mg，19.17μL，186.13μmol，5eq)，混合物在25℃下搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到白色固体产物(36.6mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，686[M+H]+。
步骤3：化合物LY-48D的制备
向化合物LY-48D-b(90mg，131.25μmol，1eq)和化合物LY-29B-d(213.64mg，85％，262.49μmol，2eq)的DMF(5mL)溶液中，冰浴下加入DIPEA(33.92mg，43.38μL，262.49μmol，2eq)和HATU(74.86mg，196.87μmol，1.5eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干得到白色固体产物LY-48D(3.42mg，收率：24.75％，纯度：98％)。
LCMS(ESI)：m/z，1381[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,2H),8.55(s,1H),8.04(d,J＝7.2Hz,1H),7.95(d,J＝12.2Hz,2H),7.82(d,J＝8.7Hz,1H),7.31(s,1H),6.55(s,1H),5.44(s,2H),5.33(s,2H),4.54(dd,J＝12.8,6.7Hz,2H),4.22(t,J＝7.1Hz,1H),4.18–4.13(m,1H),4.09(s,3H),3.56(t,J＝6.5Hz,2H),3.49(d,J＝5.9Hz,28H),3.40(d,J＝2.9Hz,10H),3.20(d,J＝6.3Hz,6H),2.42(s,2H),2.36(s,2H),2.26(t,J＝7.4Hz,2H),1.89-1.84(m,2H),1.80(t,J＝7.3Hz,2H),1.19(d,J＝7.1Hz,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.79(dd,J＝11.0,6.7Hz,6H)。
实施例73：化合物LY-48E的制备
步骤1：化合物LY-48E的制备
将化合物LY-48A-b(4mg，6.99μmol，1eq)溶于DMF(2mL)中，加入LY-22CE-f(9.71mg，80％，10μmol，1eq)和DIPEA(1.81mg，2.31μL，13.97μmol，2eq)，最后加入HATU(4.52mg，11.89μmol，1.5eq)，反应液在25℃下搅拌1小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家岛津，型号 LC-20AP。色谱柱为Welch Xtimate C18 150×21.2mm×5μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)，得到白色固体产物LY-48E(1.47mg，收率：15.80％，纯度：96％)。
LCMS(ESI)：m/z，1353.5[M+Na]+。
实施例74：化合物LY-48F的制备
向化合物LY-48D-b(163.58mg，238.55μmol，1当量)和化合物LY-28c(282.73mg，477.10μmol，2当量)加入HATU(136.06mg，357.82μmol，1.5当量)，混合物在25℃搅拌2小时。反应物经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干得到白色固体产物LY-48F(240.60mg，收率：80.03％，纯度：88％)。
LCMS(ESI)：m/z，1260[M+Na]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(t,J＝6.6Hz,1H),8.10-7.99(m,2H),7.95(d,J＝11.5Hz,1H),7.83(d,J＝8.7Hz,1H),7.31(s,1H),7.00(s,1H),6.55(s,1H),5.44(s,2H),5.32(s,2H),4.61-4.47(m,2H),4.22(t,J＝7.2Hz,1H),4.15(dd,J＝8.7,6.6Hz,1H),4.09(s,3H),3.62-3.53(m,4H),3.52-3.38(m,34H),3.16(dd,J＝14.3,8.5Hz,5H),2.42(s,2H),2.33(td,J＝8.3,6.6Hz,3H),1.87(d,J＝7.1Hz,4H),1.19(d,J＝7.1Hz,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.79(dd,J＝11.0,6.8Hz,6H)。
实施例75：化合物LY-49B的制备
步骤1：化合物LY-49B-a的制备
向化合物PY-36A(5mg，11.98μmol，1eq)和(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸-L-丙氨酸(4.92mg，11.98μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(3.96μL，23.95μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(5.46mg，14.37μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为XT-15*30-10。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到产物LY-49B-a(6.1mg，收率＝62.88％)。
LCMS(ESI)：m/z，810[M+H]+。
步骤2：化合物LY-49B-b的制备
将化合物LY-49B-a(6.1mg，7.53μmol，1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入二乙胺(3.88μL，37.66μmol，5eq)，并置于室温下搅拌2小时。减压浓缩得粗品化合物LY-49B-b(7mg)。
LCMS(ESI)：m/z，588[M+H]+。
步骤3：化合物LY-49B的制备
将化合物LY-49B-b(4.43mg，7.54μmol，1eq)和化合物LY-29B-d(11.78mg，14.47μmol，1.1eq)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(2.49μL，15.08μmol，2eq)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(3.44mg，9.05μmol，1.2eq)，并置于室温下搅拌2小时。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到50％洗脱)纯化，得到产物LY-49B(2.93mg，收率＝30.3％)。
LCMS(ESI)：m/z，1261[M+H]+。
实施例76：化合物LY-50A的制备
与实施例75的制备方法相同，除了用化合物PY-37代替化合物PY-36A，并且用化合物LY-27a代替化合物(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-缬氨酸-L-丙氨酸，制得化合物LY-50A。
LCMS(ESI)：m/z，1347.5[M+Na]+，Rt＝1.687min；HPLC：Rt＝5.52min。
实施例77：化合物LY-50B的制备
与实施例76的制备方法相同，除了用化合物LY-21B-a代替化合物LY-27a， 并且用化合物LY-22CE-f代替化合物LY-29B-d，制得化合物LY-50B。
LCMS(ESI)：m/z，1297.4[M+H]+。
实施例78：化合物LY-51A的制备
与实施例76的制备方法相同，除了用化合物PY-37A代替化合物PY-37，制得化合物LY-51A。
LCMS：m/z＝1291.6[M+H]+；Rt＝1.538min。
实施例79：化合物LY-51B的制备
与实施例77的制备方法相同，除了用化合物PY-37A代替化合物PY-37，制得化合物LY-51B。
LCMS(ESI)：m/z，1285.6[M+Na]+。
实施例80：化合物BY-1B的制备
步骤1：化合物DXD的合成
氮气保护下，向化合物伊喜替康甲磺酸盐(20mg，37.63μmol，1eq)和羟基乙酸(2.48μL，41.39μmol，1.1eq)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(18.66μL，0.113mmol，3eq)，室温下搅拌3分钟后，冰浴下加入HATU(17.17mg，45.15μmol，1.2eq)，恢复室温继续搅拌2小时，反应液经反相制备色谱法(制备色谱厂家SHIMADZU，型号LC-20AP。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从20％到55％洗脱)纯化，得DXD(7.22mg，38.9％)。
LCMS(ESI):m/z，494[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(dd,J＝10.8,3.2Hz,1H),7.30(s,1H),6.53(s,1H),5.62-5.55(m,1H),5.51(t,J＝5.8Hz,1H),5.42(s,2H),5.26-5.11(m,2H),3.96(d,J＝3.8Hz,2H),3.23-3.10(m,2H),2.39(d,J＝2.0Hz,3H),2.18(ddd,J＝13.2,10.4,6.0Hz,2H),1.93-1.80(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H).19F NMR(377MHz,DMSO-d6)δ-111.33。
步骤2：化合物BY-1B-b制备
向化合物DXD(30mg，97％，58.97μmol，1eq)和化合物LY-27a(85.19mg，176.90μmol，3eq)的THF(2mL)溶液中，冰浴下加入TsOH(10.15mg，9.49μL，58.97μmol，1eq)，恢复室温继续搅拌4小时。反应物经高效液相制备色谱法(制备色谱型号型号BRIX-2860R7。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 150×30mm×10μm。流动相：水-(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化， 冻干得到白色固体产物BY-1B-b(14.10mg，收率：26.13％)。
LCMS(ESI)：m/z，914[M+H]+，937[M+Na]+。
步骤2：化合物BY-1B-c的制备
向化合物BY-1B-b(14.10mg，15.41μmol，1eq)的DMF(1mL)溶液中，加入二乙胺(5.64mg，7.94μL，77.05μmol，5eq)，将反应置于室温下搅拌2小时。反应液减压浓缩，得到棕色固体粗品(14.30mg，粗品不计产率)。
LCMS(ESI)：m/z，639[M+H]+。
步骤3：化合物BY-1B的制备
向化合物BY-1B-c(14.30mg，20.64μmol，1eq)和化合物LY-29B-d(18.48mg，85％，22.71μmol，1.1eq)的DMF(2mL)中，冰浴下加入DIPEA(5.34mg，6.82μL，41.28μmol，2eq)和HATU(9.42mg，24.77μmol，1.2eq)，恢复室温继续搅拌4小时。反应液通过高效液相制备色谱法(制备色谱型号R6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，乙腈的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，冻干得到白色固体BY-1B(4.40mg，收率：15.60％，纯度：96％)。
LCMS(ESI)：m/z，1388[M+Na]+。
实施例81：化合物BY-1C的制备
与实施例80的制备方法相同，除了用化合物LY-21B-a代替化合物LY-27a，用化合物LY-22CF-f代替化合物LY-29B-d，得到化合物BY-1C。
LCMS(ESI)：m/z，1338.5[M+H]+/1360.5[M+Na]+；HPLC:Rt＝4.508min。
实施例82：化合物BY-2的制备
步骤1：化合物BY-2-c的制备
将化合物PY-Y(20mg，1.0eq)和化合物LY-21B-a(40.89mg，2.5eq)溶解于无水四氢呋喃(2mL)中，加入对甲苯磺酸(7.65mg，1.0eq)后室温下反应16小时。将反应液浓缩后，残余物用N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶解，过滤后，经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为Synergi Max-RP 250×40mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，得到化合物BY-2-c(16mg，收率47.5％)。
LCMS：m/z＝759.1[M+H]+；Rt＝2.010min。
步骤2：化合物BY-2-d的制备
将化合物BY-2-c(16mg，1.0eq)溶解于DMF(1mL)中，加入二乙胺(21.72μL，10.0eq)后，室温下搅拌反应2小时。将反应液浓缩至干，得到粗品(12mg)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝537.1[M+H]+；Rt＝1.383min。
步骤3：化合物BY-2-f的制备
将化合物LY-37f(66mg,1.0eq)溶解于无水DMF(1mL)中，加入二乙胺(123.2μL,10eq)后，于室温下搅拌反应2小时。将反应液浓缩至干，得到化合物BY-2-f粗品(12mg)，直接用于下一步反应。
LCMS：m/z＝330.2[M+H]+；Rt＝1.337min。
步骤4：化合物BY-2-h的制备
将化合物BY-2-f(29.86mg，1.0eq)和化合物LY-39A-b(61.13mg，1.2eq) 溶解于无水DMF中，加入DIPEA(44.93μL，3.0eq)后，于室温下搅拌反应2小时。将反应液过滤后，经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号Lab311-DJ-R3。色谱柱为GS-120-10-C18AP。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，得到化合物BY-2-h(15mg，收率28.6％)。
LCMS：m/z＝580.3[M+H]+；Rt＝1.118min。
步骤5：化合物BY-2的制备
将化合物BY-2-h(12.21mg，1.0eq)和化合物BY-2-d(11.3mg，1.0eq)溶解于无水DMF(1mL)中，室温下加入HATU(10.41mg,1.3eq)和DIPEA(10.44μL，3.0eq)后，室温下搅拌反应1小时。将反应液过滤后，经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号Lab311-DJ-R2。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，得到白色固体化合物BY-2(3.65mg，收率15.8％)。
LCMS：m/z＝1098.4[M+H]+；Rt＝1.703min。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,2H),8.62(s,1H),8.19(s,1H),8.06(d,J＝7.4Hz,1H),7.96(dd,J＝21.1,8.5Hz,1H),7.59(s,1H),7.51(s,1H),7.24(s,1H),6.49(d,J＝2.4Hz,1H),6.28(s,2H),5.42(s,2H),5.25(s,2H),4.65-4.52(m,2H),4.23(d,J＝7.1Hz,1H),4.15(t,J＝7.8Hz,1H),3.73(t,J＝4.6Hz,2H),3.50(t,J＝6.0Hz,3H),3.40(s,3H),3.15-3.03(m,4H),2.93(s,1H),2.33(dd,J＝23.2,7.7Hz,7H),2.03-1.73(m,12H),1.28(s,2H),1.23(s,2H),0.84(dt,J＝18.7,6.8Hz,15H)。
实施例83：化合物BY-3的制备

步骤1：化合物BY-A的制备
0℃下将化合物PY-Ae(该化合物的合成参见PY-A的制备例)(240mg,1.02mmol，1eq)加入到25mL的浓盐酸溶液中，加完，80℃搅拌16小时，LCMS显示反应完成，反应液直接旋干得到黄色固体化合物BY-A(206mg,收率:75.91％)。
步骤2：化合物BY-3-c-01和BY-3-c-02的制备
在室温下将N,N-二异丙基乙基胺(548.34mg，701.21μL，4.24mmol，4eq)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(604.99mg，1.59mmol，1.5eq)加入到5,8-二氨基-6-氟-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(206mg，1.06mmol，1eq)、Fmoc-L-缬氨酰-L-丙氨酸(522.47mg，1.27mmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，50℃搅拌16h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R6。色谱柱为Welch Xtimate C18 250×30mm×10μm。流动相：水(0.225％FA)-乙腈，水的洗脱比例从39％到69％洗脱)纯化，冻干后得到白色固体异构体产物BY-3-c-01(2.21min，121mg)，BY-3-c-02(2.25min，75mg)(收率32％)。
LCMS(ESI)：m/z，587.4[M+H]+。
步骤3：化合物BY-3-e-01和BY-3-e-01的制备
在室温下将化合物BY-3-c-01和BY-3-c-02(混合物，75mg，127.84μmol，1eq)、(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃[3,4-f]中氮茚-3,6,10(4H)-三酮(BY-3-d)(购买于皓元医药)(33.65mg，127.84μmol，1eq)和4-甲基苯磺酸吡啶(32.13mg，127.84μmol，1eq)加入到甲苯(7mL)溶液中，氮气置换3次。120℃搅拌 16h。反应液减压浓缩后得到粗品，粗品经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家luna，型号Lab311-ISCO-R4。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％甲酸)-乙腈，水的洗脱比例从30％到60％洗脱)纯化，洗脱液冻干后得到白色固体异构体产物BY-3-e-01(2.14min，49mg)和BY-3-e-02(2.31min，46mg)(收率53％)。
LCMS(ESI)：m/z，814.3[M+H]+。
步骤3：化合物BY-3-f-01的制备
在室温下将BY-3-e-01(49mg，60.21μmol，1eq)和二乙胺(22.02mg，31.01μL，301.03μmol，5eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，25℃搅拌16h。反应液减压浓缩后得到粗品产物BY-3-f-01(0.981min，49mg)(粗品不计收率)。
LCMS(ESI)：m/z，592.2[M+H]+。
步骤4：化合物BY-3-P1的制备
在室温下将DIPEA(23.59mg，30.17μL，182.54μmol，3eq)加入到化合物BY-3-f-01(36mg，60.85μmol，1eq)、化合物LY-28c(43.27mg，73.02μmol，1.2eq)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(27.76mg，73.02μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中，25℃搅拌16h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家ISCO，型号ISCO-R1。色谱柱为YMC-Triart Prep C18 250×50mm×7μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从21％到51％洗脱)纯化，洗脱液冻干后得到白色固体产物BY-3-P1(12.14mg，二步收率：19％)。
LCMS(ESI)：m/z，1166.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),8.46(d,J＝7.2Hz,1H),8.02(d,J＝7.6Hz,2H),7.81(d,J＝11.2Hz,1H),7.32(s,1H),7.00(s,2H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.27(s,2H),4.56(t,J＝7.2Hz,1H),4.19(t,J＝7.6Hz,1H),3.59(t,J＝7.2Hz,2H),3.54(d,J＝2.4Hz,1H),3.51-3.46(m,22H),3.45(s,5H),3.44-3.40(m,4H),3.15(dq,J＝11.6,6.0Hz,4H),2.96(t,J＝6.0Hz,2H),2.46(t,J＝7.2Hz,1H),2.34(dt,J＝14.4,6.8Hz,3H),2.01(dp,J＝27.6,7.2Hz,3H),1.87(q,J＝7.2Hz,2H),1.41(d,J＝7.2Hz,3H),0.93-0.84(m,10H)。
步骤5：化合物BY-3-f-02的制备
在室温下将化合物BY-3-e-02(46mg，56.52μmol，1eq)和二乙胺(20.67mg，29.11μL，282.60μmol，5eq)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，25℃搅拌16h。反应液减压浓缩后得到粗品产物BY-3-f-02(0.888min，46mg)(粗品不计收率)。
LCMS(ESI)：m/z，592.2[M+H]+。
步骤6：化合物BY-3-P2的制备
在室温下将DIPEA(22.28mg，28.49μL，172.40μmol，3eq)加入到化合物 BY-3-f-02(34mg，57.47μmol，1eq)、化合物LY-28c(40.87mg，68.96μmol，1.2eq)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(26.22mg，68.96μmol，1.2eq)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中，25℃搅拌16h。反应液经过高效液相制备色谱法(制备色谱厂家橙达Oriendo，型号BRIX-2860。色谱柱为Phenomenex Luna C18 250×50mm×10μm。流动相：水(0.225％HCOOH)-乙腈，水的洗脱比例从12％到42％洗脱)纯化，洗脱液冻干后得到白色固体产物BY-3-P2(5.78mg，二步收率:12％)。
LCMS(ESI)：m/z，1166.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),8.27(d,J＝6.8Hz,1H),8.01(t,J＝5.6Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.81(d,J＝10.8Hz,1H),7.32(s,1H),7.00(s,2H),6.52(s,1H),5.44(s,2H),5.26(s,2H),4.54(t,J＝7.2Hz,1H),4.26(dd,J＝8.8,6.4Hz,1H),3.59(td,J＝7.2,3.2Hz,4H),3.50(d,J＝3.6Hz,28H),3.36(d,J＝6.0Hz,2H),3.18-3.11(m,4H),2.96(d,J＝7.2Hz,2H),2.46-2.40(m,1H),2.40–2.29(m,3H),1.99(dq,J＝13.2,8.0,6.8Hz,3H),1.87(p,J＝7.2Hz,2H),1.41(d,J＝7.2Hz,3H),0.94-0.79(m,10H)。
ADC制备例1：Trastuzumab Deruxtecan(Enhertu)(T-BY-1)的制备(方法1A，DAR 8)
在37℃条件下，向曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Herceptin，Genentech，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物BY-1(皓元生物，1.38mg，1330nmol)溶解于83.3μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃反应20分钟，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到Trastuzumab Deruxtecan(Enhertu)的PBS缓冲液(4.353mg/mL，3.30mL)，于4℃储存，长期保存于-80℃。
LC-MS计算的载药量平均值：n＝8.0(LC-MS见制备例3)。
ADC制备例2：Trastuzumab Deruxtecan(Enhertu)(T-BY-1-4)的制备(方法1B， DAR 4)
在25℃条件下，向曲妥珠单抗(Trastuzumab)的硼酸钠缓冲水溶液(pH＝7.4的25mM的硼酸钠缓冲水溶液；5.0mg/mL，0.3mL，10nmol)加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(5mM，4.8μL，24nmol)，置于水浴锅中，于25℃下反应2小时，停止反应。
将化合物BY-1溶解于DMSO(10mM BY-1)，加入到上述反应液中(10μL，100nmol)，置于水浴锅中，于25℃反应2小时，将反应液用透析试剂盒(品牌Thermo Fisher，型号Slide-A-LyzerTM)透析纯化，得到Trastuzumab Deruxtecan(Enhertu)的PBS缓冲液(3.275mg/mL，0.3mL)，于4℃储存，长期保存于-80℃。
RP-HPLC计算的载药量平均值：n＝4.2(见制备例3)。
ADC制备例3：T-LY-1的制备(方法1A)
在37℃条件下，向曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Herceptin，基因泰克，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物LY-1(1.94mg，1330nmol)溶解于83.3μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃反应20分钟，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到T-LY-1的PBS缓冲液(4.364mg/mL，3.85mL)，于4℃ 储存，长期保存于-80℃。
LC-MS计算的载药量平均值：n＝8.0(LC-MS实验仪器为UPLC-MS，Thermo Fisher Scientific，DionexUltiMate 3000 UPLC-Q Exactive MS；High resolution mass spectrometer，Thermo Q EXACTIVE HF-X；色谱柱为Waters XBridge BEH C4，3.5μm，4.6×100mm；流动相水(0.1％三氟乙酸)-乙腈(0.1％三氟乙酸)从20％-80％洗脱；数据分析采用Protein Deconvolution software进行解析)。
ADC制备例4：T-LY-2的制备(方法1A)
在37℃条件下，向曲妥珠单抗(Trastuzumab)(Herceptin，Genentech，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物LY-2(1.90mg，1330nmol)溶解于83.3μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃反应20分钟，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到T-LY-2的PBS缓冲液(4.353mg/mL，3.70mL)，于4℃储存，长期保存于-80℃。
LC-MS计算的载药量平均值：n＝8.0(LC-MS方法同上)。
ADC制备例5：T-LY-6的制备(T-LY-6，Site-specific DAR4)(方法2)
按照文献(Angew.Chem.Int.Ed.2010，49，9995–9997)描述的方法制备叠氮修饰的曲妥珠单抗突变体(Trastuzumab N297Q-TS-1)(1.0mg/mL，1mL，6.9μM)。
将化合物LY-6溶解于DMSO(2mM)，加入到曲妥珠单抗突变体的PBS水溶液中(69μM)，置于水浴锅中，于25℃反应6小时，将反应液用透析试剂盒(品牌Thermo Fisher，型号Slide-A-LyzerTM)透析纯化，得到T-LY-6的PBS缓冲液，于4℃储存，长期保存于-80℃。
RP-HPLC计算的载药量平均值：n＝4.0(见制备例3)。
ADC制备例6：T-LY-10的制备(方法3)
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab(Herceptin，Genentech，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入配置好的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃下反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物LY-10(2.51mg，1330nmol)溶解于83.3μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃下反应2小时，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到示例性产物T-LY-10的PBS缓冲液(2.88mg/mL)，分装后于4℃储存，长期保存于-80℃。
LC-MS计算的载药量平均值：n＝8.0。
ADC制备例7：T-LY-22C的制备(方法4)
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab(Herceptin，Genentech，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入配制好的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物LY-22C(2.12mg，1995nmol)溶解于125μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃反应30分钟，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到T-LY-22C的PBS缓冲液，于4℃储存，长期保存于-80℃。
RP计算的载药量平均值：n＝7.13。
ADC制备例8：T-LY-39B的制备(方法5)
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab(Herceptin，Genentech，10.0mg/mL，2mL，133nmol)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的0.04M的PBS缓冲水溶液)加入配制好的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(40mM，23.3μL，931nmol)，置于水浴锅中，于37℃反应2小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物LY-39B(1.57mg，1330nmol)溶解于83.3μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴锅中，于25℃反应30分钟，再加入1％(质量比例)N-乙基马来酰亚胺(NEM)终止反应。将反应液用透析卡(Slide-A-LyzerTM透析试剂盒，10K MWCO)透析纯化，得到T-LY-39B的PBS缓冲液，于4℃储存，长期保 存于-80℃。
RP计算的载药量平均值：n＝7.25。
本发明制备的ADC如下表所示：












生物学测试
测试例1：本发明化合物对癌细胞的抑制活性
使用含10％FBS(Gibco，10099-141)的RPMI640培养基(Gibco，22400-105)培养N87胃癌细胞(中国科学院上海细胞库，SCSP-534)。实验当天，细胞使用0.25％胰酶(Gibco，25200-072)消化，使用孔径为40μm筛网过滤后，加入相应 培养基稀释至细胞密度为1×104个/ml，传代至96孔白色细胞培养板(碧云天，FCP968)，每孔加入100μL，置于37℃，5％CO2培养箱(Thermo 311)，继续培养24小时。第二天，将待测样品用DMSO(Sigma，D1650)配制成终浓度1M储液，然后用相应培养基稀释至终浓度200nM，再做4倍连续梯度稀释，共9个浓度。取100μL稀释后的样品加入96孔板，置于37℃，5％CO2培养箱，继续培养144小时。取出细胞培养板，每孔加入100μL细胞活力检测试剂(Luminescent Cell Viability Assay，Promega，G7571)，室温避光反应5分钟。酶标仪(TECAN SPARK)读取发光值，用Graphpad Prism 7软件处理数据。
本发明化合物对N87胃癌细胞和MDA-MB-468(中国科学院上海细胞库，TCHu136)乳腺癌细胞的抑制IC50值如下表1所示。将DXD(PY-X)的IC50值设为1，其他化合物的IC50值为DXD的倍数关系。其中，也展示了不同毒素PY-10、PY-13、PY-16在不同细胞系上的抑制IC50效果，如表2所示。“相比PY-X的抑制IC50值的倍数”是指PY-X的IC50值与其他毒素的IC50值的比值，数值越大表明毒素相比较PY-X细胞毒性越强。PY-E为伊喜替康甲磺酸盐，PY-X是伊喜替康DXD(均购自上海皓元医药股份有限公司)；PY-Y见文献(WO2022170971A1)；PY-A见文献(WO2021148501A1)。
表1本发明化合物对N87胃癌细胞和MDA-MB-468乳腺癌细胞的抑制IC50值

a：PY-X(DXD)的IC50值设为1，表格中毒素的IC50值是其实测值与DXD的比值；b：样品一起复测
根据上述相似的方法，使用不同的细胞得到本发明化合物的抑制IC50值如下表2-1、2-2所示。
表2-1本发明化合物在不同细胞的抑制IC50值

a：PY-X(DXD)的IC50值设为1，表格中毒素的IC50值是其实测值与DXD的比值。
表2-2本发明化合物在不同细胞的抑制IC50值

a：PY-X(DXD)的IC50值设为1，表格中毒素的IC50值是其实测值与DXD的比值。
测试例2：本发明ADC对于癌细胞的抑制活性
1)实验步骤
Day0：取生长状态好的细胞消化过筛网后计数，96孔板每孔2000个细胞/100μL培养基(N87细胞)，96孔板每孔1000个细胞/100μL培养基(468细胞，N87或者HCC1954)，外圈加入200μL无菌水或PBS，孵育24h。
Day1：培养基梯度稀释样品(9个梯度+1个阴性对照)，N87铺板Payload或ADC：板一(T-LY21、T-LY29、T-LY33)、板二(T-LY33A、T-LY22、T-LY22C)、板三(T-LY34、T-LY34B、T-LY35)，板四(T-LY21C、T-LY28B、T-LY28C)，板五(T-LY43C、T-LY43D、T-LY43E)，每个样品两个平行对照，起始浓度为100nM，后续8个孔逐一进行4倍稀释后，向Day0铺板相应的孔板中每孔加入100μL相应样品，第11列加培养基作为对照组；每个样品两个平行对照，起始浓度为1000nM，后续8个孔逐一进行4倍稀释后，向Day0铺板相应的孔板中每孔加入100μL相应样品，第11列加培养基作为对照组。
Day7：细胞处理144h后，提前30min溶解显色剂每孔加入100μL避光显色2-5min，读数2遍，取平均数计算。
表3 ADC对N87胃癌细胞和MDA-MB-468以及HCC1954等乳腺癌细胞的抑制IC50值


注：在细胞抑制实验的时候DAR值都校正为DAR8。
测试例3：抗体药物偶联物在人胃癌NCI-N87移植瘤模型中的药效实验
人胃癌NCI-N87细胞株(ATCC，CTL-5822)在RPMI-1640培养基(Gibco，货号：22400-089，添加10％FBS(Excell Bio，货号：FCS500))中，培养于含5％CO2的37℃培养箱。细胞连续培养十代之前，用0.25％胰蛋白酶-EDTA消化，PBS洗两次，细胞计数仪计数，PBS稀释使细胞浓度为1x108/mL。
CB17 SCID小鼠，雌性，4-6周龄，购自维通利华实验动物有限公司。CB17 SCID小鼠实验室环境适应2-5天，于右肋部皮下接种NCI-N87细胞，接种细胞量为5x106/只，接种体积为0.1mL(含50％Matrigel)，待肿瘤生长至200mm3左右时，按表4所示方案给药，DAR值全部调整为8。
表4
每周测量2次瘤体积及体重，计算肿瘤增值率和相对肿瘤抑制率。计算公式为：
相对肿瘤增殖率T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
(TRTV治疗组平均RTV；CRTV对照组平均RTV；RTV＝Vt/VO，VO为分组时该动物的瘤体积，Vt为治疗后该动物的瘤体积)；
相对肿瘤抑制率TGI％＝(1-T/C)×100％
(T和C分别为治疗组和对照组在某一特定时间点的相对肿瘤体积(RTV))；
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝l/2×L长×L短 2，
其中L长、L短分别表示肿瘤长径、短径。试验结束，处死小鼠，取肿瘤称重。
试验结果见表5和图1。
表5 NCI-N87胃癌荷瘤小鼠模型的肿瘤体积数据
结果：第27天，溶媒组(PBS)的肿瘤体积平均值达到705mm3，各个给药组 的肿瘤体积平均值都小于200mm3。而且，T-LY10，T-L46D，T-LY22，T-LY22CD，T-LY44D，T-LY43D，T-LY47D，T-LY48D的相对肿瘤抑制率优于T-BY1对照。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性。
结论：本发明化合物具有良好的肿瘤抑制活性。
测试例4：抗体药物偶联物在人乳腺癌JIMT-1移植瘤模型中的药效实验
人乳腺癌JIMT-1细胞株(南京科佰生物，CBP60378)在DMEM培养基(Gibco，货号：11995-065)+10％FBS(Excell Bio，货号：FCS500)中，培养于含5％CO2的37℃培养箱。细胞用0.25％胰蛋白酶-EDTA消化，PBS洗两次，细胞计数仪计数，PBS稀释使细胞浓度为1x108/mL。
CB17 SCID小鼠，雌性，4-6周龄，购自维通利华实验动物有限公司。CB17 SCID小鼠实验室环境适应2-5天，于右肋部皮下接种JIMT-1细胞，接种细胞量为5x106/只，接种体积为0.1mL(含50％Matrigel)，待肿瘤生长至150-200mm3时，按表6所示方案给药。每周测量2次瘤体积及体重，计算肿瘤增值率和相对肿瘤抑制率。
表6
试验结果见表7和图2。
表7 JIMT-1乳腺癌荷瘤小鼠模型的肿瘤体积数据
结果：第25天，溶媒组(PBS)的肿瘤体积平均值达到588mm3，各个给药组的肿瘤体积平均值都小于250mm3。而且，T-LY22和T-LY22BM1相对肿瘤抑制率和T-BY1对照相似。T-LY22BM2和T-LY22BM3相对肿瘤抑制率比T-BY1对照更高。T-LY22C，T-LY22CD，T-LY22CD-3，T-LY22CDC相对肿瘤抑制率最高。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性。
结论：本发明化合物具有良好的肿瘤抑制活性。
测试例5：抗体药物偶联物在人胃癌NCI-N87移植瘤模型中的药效实验
人胃癌NCI-N87细胞株(ATCC，CTL-5822)在RPMI-1640培养基(Gibco，货号：22400-089，添加10％FBS(Excell Bio，货号：FCS500))中，培养于含5％CO2的37℃培养箱。细胞连续培养十代之前，用0.25％胰蛋白酶-EDTA消化，PBS洗两次，细胞计数仪计数，PBS稀释使细胞浓度为1x108/mL。
CB17 SCID小鼠，雌性，4-6周龄，购自维通利华实验动物有限公司。CB17 SCID小鼠实验室环境适应2-5天，于右肋部皮下接种NCI-N87细胞，接种细胞量为5x106/只，接种体积为0.1mL(含50％Matrigel)，待肿瘤生长至100mm3左右时，按表8所示方案给药，DAR值全部调整为8。
表8
每周测量2次瘤体积及体重，计算肿瘤增值率和相对肿瘤抑制率。计算公式为：
相对肿瘤增殖率T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
(TRTV治疗组平均RTV；CRTV对照组平均RTV；RTV＝Vt/VO，VO为分组时该动物的瘤体积，Vt为治疗后该动物的瘤体积)；
相对肿瘤抑制率TGI％＝(1-T/C)×100％
(T和C分别为治疗组和对照组在某一特定时间点的相对肿瘤体积(RTV))；
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝l/2×L长×L短 2，
其中L长、L短分别表示肿瘤长径、短径。试验结束，处死小鼠，取肿瘤称重。
试验结果见表9和图6A-6B。
表9 NCI-N87胃癌荷瘤小鼠模型的肿瘤体积数据
结果：第28天，溶媒组(PBS)的肿瘤体积平均值达到804mm3，各个给药组的肿瘤体积平均值都小于210mm3。而且，T-LY22，T-LYBM1，T-LYBM2，T-LYBM3，T-LY22C，T-LY22CD，T-LY22CD-3，T-LY22CDC的相对肿瘤抑制率优于T-BY1对照。其中，在可裂解的相同氨基酸序列下T-LYBM2和T-LYBM3 肿瘤抑制率略优于T-LY22，T-LYBM1，但是略劣于T-LY22C；同样的毒素情况下，含有更稳定连接子的T-LY22CD和T-LY22CD-3的肿瘤抑制率优于T-LY22C。仅增加连接子的亲水性的情况下，没有看到LYT-LY22CDC的肿瘤抑制率优于T-LY22CD和T-LY22CD-3。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性。
结论：含有脂溶性更好的毒素和稳定性更好的连接子的ADC具有更好的肿瘤抑制活性。
测试例6：旁观者杀伤试验
试验方法：
NCI-N87细胞(中国科学院上海细胞库，SCSP-534)用RPMI1640培养基(Gibco，22400-089)+10％胎牛血清(BOVOGEN)培养。MDA-MB-468-luc细胞(中国科学院上海细胞库，TCHu136)带有稳定转染的萤火虫荧光素酶基因自行构建)，用DMEM培养基(Gibco，11995-065)+10％胎牛血清(BOVOGEN)培养。胰酶消化细胞，取3块黑色透明底细胞培养板(Corning，3063)，板一加入1000个N87细胞/孔，板二加入1000个468-luc细胞/孔，板三加入2000个N87和1000个468-luc混合细胞/孔，细胞都置于37℃，5％CO2温箱培养过夜。ADC样品用培养基稀释至终浓度10nM和1nM，每孔加入100μL，并设置空白培养基作为对照组，细胞继续培养144h。板一每孔加入100μL CELL Counting-Lite 2.0检测试剂(Vazyme，DD1101-03)，避光显色5min。板二和板三每孔加入100μL One-LumiTMII检测试剂(Beyotime，RG056M)，避光显色10min。多功能酶标仪(Tecan Spark)检测荧光值，读取时间200ms。旁观者杀伤活性计算公式：(对照组读数-ADC组读数)/(对照组读数)×100％。
试验结果：
旁观者杀伤试验结果如图3A、3B和3C所示。在1nM和10nM浓度条件下，T-BY1和T-LY22C都有效杀伤HER2高表达N87细胞，但是基本不能杀伤HER2低表达468-luc细胞。当N87和468-luc细胞混合培养时，T-BY1和T-LY22C都能有效杀伤468-luc细胞。在1nM和10nM浓度条件下，T-BY1对468-luc细胞杀伤比例为13.9％和34.0％，T-LY22C对468-luc细胞杀伤比例为39.3％和48.5％。以上结果说明T-LY22C的旁观者杀伤活性明显高于T-BY1。
结论：本发明化合物具有良好旁观者杀伤效应。
测试例7：大鼠急性毒性研究
1、试验方法：SD大鼠购自北京维通利华试验动物有限公司，置于SPF动物房饲养。选取210-250g体重的大鼠随机分为3组，每组5只，尾静脉注射200mg/kg剂量的ADC或者溶媒对照，注射当日作为第1天。每天称量大鼠体重和摄食量，观察动 物活动状态，观察被毛及其它外观异常情况，观察是否有腹泻或者软便。给药后第5天和第21天采集血液检测血生化和血常规指标。给药后第22天试验结束，大鼠安乐死，解剖并观察主要脏器(心、肝、脾、肺、肾等)是否有肉眼可见的异常变化。
2、试验结果
第一次大鼠急性毒性研究
给药后第1天-第10天，LY-22CD组大鼠体重与溶媒对照类似，但是T-BY1组大鼠体重明显低于溶媒对照，见图4。
第二次大鼠急性毒性研究
给药后第1天-第10天，LY-22CD和LY-22CD-3组大鼠体重与溶媒对照类似，但是T-BY1、T-LY22、T-LY22C以及T-LY22BM3组大鼠体重明显低于溶媒对照。给药后第5天，T-LY22组有3只大鼠死亡，T-LY22BM3组有1只大鼠死亡。其他组没有大鼠死亡，但是LY22C组体重相对于溶媒组降低大约5％。给药后第7天，T-LY22组剩余大鼠体重降低约18％，T-LY22BM3组剩余大鼠体重降低约9％，LY22C组体重相对于溶媒组基本恢复。给药后第2天-第21天，T-LY22CD组和T-LY22CD-3组大鼠体重增长情况和溶媒对照一直相似，见图5。
结论：在相同的连接子的情况下，本发明毒素耐受性顺序为T-LY22C>T-LY22BM3>T-LY22。相同毒素不同连接子的情况下耐受性顺序为T-LY22CD～T-LY22CD-3>T-LY22C。这说明毒素结构和连接子对整体ADC耐受性都有重要影响，ADC T-LY22CD和T-LY22CD-3相比T-BY1有更大的治疗窗口。
测试例8：小分子LogD性质研究
1、配置缓冲液：
1)配制100mM磷酸盐缓冲液(PB)，pH分别为2.5和7.4：
a.100mM H3PO4水溶液的制备：将14.7M H3PO4用水稀释至100mM H3PO4，测得pH约为1.8。
b.100mM NaH2PO4的制备：将5.999g NaH2PO4用500mL水溶解，测得pH约为4.5。
c.100mM Na2HPO4的制备：将7.098g Na2HPO4加水溶解到500mL中，测得pH约为9.4。
d.100mM PB(pH 2.5)的制备：将15mL 100mM H3PO4添加到50mL管中，然后用100mM NaH2PO4调节pH至2.5±0.05。
e.100mM PB(pH 7.4)的制备：将15mL 100mM Na2HPO4添加到50mL 管中，然后用100mM NaH2PO4调节pH至7.4±0.05。
2)PB(pH 2.5和7.4)用1-辛醇饱和：将10mL 1-辛醇加入到100mL 100mM PB(pH 2.5和7.4)中，剧烈摇动混合物，然后在室温下静置过夜，待用。
3)PB饱和的1-辛醇(pH 2.5和7.4)：将10mL 100mM PB(pH 2.5和7.4)加入到100mL 1-辛醇中，剧烈摇动混合物，然后在室温下静置过夜，待用。
2、操作过程
2.1)将测试化合物和对照化合物的2μL 10mM DMSO原液等分到试管中，一式两份。
2.2)分别向管中添加149μL PB饱和的1-辛醇(pH 2.5和7.4)。
2.3)分别将149μL用1-辛醇饱和的PB(pH 2.5和7.4)添加到相应的管中。
2.4)每管剧烈混合2分钟，然后在室温下以800rpm的速度振荡1小时。
2.5)室温下4000rpm离心5分钟。
2.6)等分适当体积的缓冲层样品和1-辛醇层样品。
2.7)将这些样品稀释并使用LC-MS/MS方法进行检测，无需运行校准曲线。
2.8)数据分析：用以下公式计算每种化合物的log D值：
3、LC-MS分析条件

4、分析结果：
实验结论：PY-4Car2在不同的pH值下，其在正辛醇的溶解度比相应的PY-4Car和PY-4Car3C都好，也比对照DXD要好。这意味着PY-4Car2有更好的脂溶性，预测在体内有更好的旁观者效应，这与体内药效结果一致。

Claims (46)

  1. 一种通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
    L-L2-L1-Dr
    (A)
    其中：
    Dr选自以下结构：
    R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、 -NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；
    R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    Rd和Re各自独立地选自氢和烷基；
    Rf选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
    L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、 -NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
    L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
    L为
    L3为由两个或多个氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构，L6选自以下的一个或多个结构：
    其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和烷基；
    L4为
    Z1选自键、-(CH2)p-、-(C2H4O)q-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
    m为1至6的整数；
    n为1至6的整数；
    s为1至6的整数；
    t为0至10的整数；
    s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；
    t1为1至6的整数；
    t2为0至6的整数；
    t3为1至6的整数；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数；
    p为1至10的整数；
    q为1至10的整数；
    Q为接头单元。
  2. 根据权利要求1所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Dr选自以下结构：
    L1选自-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、 -NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    Ra选自氢、C1-C6烷基；
    Rb选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
    n为1至6的整数；优选1至4的整数；进一步优选1至2的整数；
    R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
    Rd、Re、Rf、m、n如权利要求1所定义。
  3. 根据权利要求1所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Dr选自以下结构：
    L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-(CH2)m-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    Ra选自氢、C1-C6烷基；
    Rb选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；优选1至4的整数；
    n为1至6的整数；优选1至4的整数；
    R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素。
  4. 根据权利要求1所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Dr选自以下结构：
    L1选自-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
    R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、 -(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选氢或羟基；
    R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、C1-C6烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    Rd、Re、Rf、m、n如权利要求1所定义。
  5. 根据权利要求1所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Dr选自以下结构：
    L1选自-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*，其中*为与L2的连接位点；
    m为1至6的整数；优选1至4的整数；
    Ra选自氢、C1-C6烷基；
    R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
    R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、 C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基。
  6. 根据权利要求1所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Dr选自以下结构：
    L1选自-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
    R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基；
    R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基，所述C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选羟基、氨基。
  7. 根据权利要求1至6中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Dr选自：
  8. 根据权利要求1至7中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    当L1选自-NRa-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*或-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*，其中*为与L2的连接位点时；
    L2选自键或其中*为与L1的连接位点；
    Ra、Rb、m、n如权利要求1至7中任一项所定义。
  9. 根据权利要求1至7中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    当L1选自键、-O-*、-(CH2)m-O-*、-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*或-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点时；
    L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
    Ra、Rb、m、n如权利要求1至7中任一项所定义。
  10. 根据权利要求1至9中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    L3为由两个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构：
    优选
    其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和C1-C6烷基；
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
    t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
    t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数。
  11. 根据权利要求1至10中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3为 *为与L2连接的位置，·为与羰基或亚甲基连接的位置；
    其中，L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
    L1a为键或者选自以下的一个或多个结构：
    优选
    其中R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
    Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
    t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
    t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数。
  12. 根据权利要求1至11中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3选自：

    其中：
    L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甲硫氨酸、精氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；
    R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
    Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
    t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
    t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数；
    *为与L2连接的位置，
    为与羰基或亚甲基连接的位置。
  13. 根据权利要求11或12所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基。
  14. 根据权利要求11至13中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L1b和L’1b各自独立地选自：-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*；其中*为与L2连接的位置。
  15. 根据权利要求1至14中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，L3选自：




    Raa和Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
    *为与L2连接的位置，
    为与羰基或亚甲基连接的位置。
  16. 根据权利要求1至15中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Q选自：
    优选
  17. 根据权利要求1至16中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-；p为1至10的整数，优选1至6的整数；
    s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；优选0至6的整数；还优选0至4的整数，进一步优选0至2的整数；
    L6选自
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    L6优选为
  18. 根据权利要求1至17中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-；
    s1为0至6的整数，优选0至2的整数；
    s2为0至6的整数，优选0至2的整数；
    s3为0；
    s4为0；
    p为1至10的整数，优选1至6的整数。
  19. 根据权利要求1至17中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，
    Z1选自-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-C(O)NH-；
    s1为1至6的整数，优选2至6的整数；
    s2为1至10的整数，优选2至10的整数；
    s3为0；
    s4为0；
    p为1至10的整数，优选1至6的整数。
  20. 根据权利要求1至19中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，Q-L4-选自：
    其中：
    Z1选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-和-OC(O)NH-，优选-C(O)NH-；
    p为1至10的整数，优选1至6的整数；
    s1为0至6的整数，优选0至2的整数；
    s2为1至10的整数，优选1至8的整数；
    s3为0至6的整数，优选0至2的整数；
    s4为1至6的整数，优选1至2的整数；
    s7为0至6的整数，优选1至2的整数；
    s8为1至4的整数，优选1至2的整数；
    s9为1至10的整数，优选1至8的整数；
    s10为1至4的整数，优选1至2的整数。
  21. 根据权利要求1至20中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

















  22. 一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
    其中，
    R8选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素；
    R9选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、 -(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自氘、卤素、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；优选，羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；
    G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R10选自氢、卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选，氢、羟基、氨基、-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe；
    Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述C1-C6烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；
    n为1至6的整数。
  23. 根据权利要求22所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
    其中，R9选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、羧基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH；
    Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    Rf选自氢、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；
    n为1至4的整数，优选1或2。
  24. 根据权利要求22或23所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
    其中，R10选自氢、羟基、氨基、CH2＝、-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH；
    Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述C1-C6烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；优选1至4或4至6的整数；
    n为1至4的整数，优选1或2。
  25. 根据权利要求22至24中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
    其中，R8选自卤素。
  26. 根据权利要求22至25中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其选自：





  27. 一种通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，
    其中，
    R11选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选卤素、氰基；
    R12选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、 -(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选，羟基、氨基、C1-C6烷基、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe；
    R13选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；优选，羟基、氨基；
    Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    Rf选自氢、C1-C6烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，其中Rc选自氢、羟基、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数；
    n为1至6的整数。
  28. 根据权利要求27所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中R11选自卤素、氰基。
  29. 根据权利要求27所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中R12选自C1-C6烷基、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe；
    Rd和Re各自独立地选自氢、C1-C6烷基；
    m为1至6的整数。
  30. 根据权利要求27所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中R13选自羟基、C1-6烷氧基。
  31. 根据权利要求27至30中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其 混合物形式、或其可药用盐，其选自：
  32. 一种通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    Dr选自以下结构：

    R1选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R2选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R3选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、CH2＝、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-NRf-C(＝O)Rd、-NRf-C(＝O)-(CH2)m-Rd、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-Rd、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-OH、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-O-(CH2)n-NRdRe、-NRfC(＝O)NRd-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；
    R4选自氢、卤素、羟基、羧基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基、-NRdRe、-(CH2)m-OH、-(CH2)m-NRdRe、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-OH、-OC(＝O)NRf-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-C(＝O)OH、-(CH2)m-C(＝O)-NRdRe、 -(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-C(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-NRf-(CH2)m-OH、-NRf-(CH2)m-NRdRe、-O-(CH2)m-OH、-O-(CH2)m-NRdRe、-NRfC(＝O)O-(CH2)m-OH、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-OH-、-(CH2)m-NRfC(＝O)O-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-OC(＝O)NRf-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-NRdRe、-(CH2)m-NRfC(＝O)-(CH2)n-OH、-(CH2)m-NRfC(＝O)-G-(CH2)n-OH，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基、环烷基任选进一步被选自卤素、氘、氨基、烷基、羟基的一个或多个基团取代；上述-(CH2)m-任选被一个或多个氘或卤素取代；G选自亚环烷基、亚杂环基、亚杂芳基、亚芳基；
    R5选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R6选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    R7选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、烯基、炔基，所述烷基、烷氧基、烯基、炔基任选进一步被选自卤素的一个或多个基团取代；
    Rd和Re各自独立地选自氢和烷基；
    Rf选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被C3-C6环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
    L1选自键、-(CH2)m-*、-O-*、-NRa-*、-(CH2)m-O-*、-(CH2)m-NRa-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-O-*、-OC(＝O)NRb-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRa-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-C(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-NRb-(CH2)m-O-*、-NRb-(CH2)m-NRa-*、-O-(CH2)m-O-*、-O-(CH2)m-NRa-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-O-*、-NRbC(＝O)O-(CH2)m-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)O-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-OC(＝O)NRb-(CH2)n-O-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-NRa-*、-(CH2)m-NRbC(＝O)-(CH2)n-O-*，其中*为与L2的连接位点；
    Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、-C(O)Rc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc，所述烷基任选进一步被环烷基所取代；其中Rc选自氢、羟基、烷基；
    L2选自键、 其中*为与L1的连接位点；
    L’为
    Q’选自：
    其中，*为与L4连接的位置，为与Pc连接的位置；
    L3为由两个或多个氨基酸形成的氨基酸残基，且L3任选包含选自以下的一个或多个结构，L6选自以下的一个或多个结构：
    其中R、Raa、Rbb各自独立地选自氢和烷基；
    L4为
    Z1选自键、-(CH2)p-、-(C2H4O)q-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
    m为1至6的整数；
    n为1至6的整数；
    s为1至6的整数；
    t为0至10的整数；
    s1、s2、s3、s4各自独立地为0至10的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；
    t1为1至6的整数；
    t2为0至6的整数；
    t3为1至6的整数；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数；
    p为1至10的整数；
    q为1至10的整数；
    v为1至10，v为小数或整数；
    Pc为抗体或其抗原结合片段，或者为修饰抗体；
    所述修饰抗体具有Pc’-((L5)w-F)x结构，其中：
    Pc’为抗体；
    L5为连接子；
    w为0或1；
    F为经反应例如无金属点击反应后能够与Q’连接的点击探针或巯基或其前体，优选地F为叠氮基；
    x为1至8的整数。
  33. 根据权利要求32所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：
    L3选自：
    R选自氢和C1-C6烷基，优选氢；
    Raa、Rbb各自独立地选自C1-C6烷基；
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    s5、s6各自独立地为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    t1为1至6的整数；优选1至4的整数，还优选2至4的整数，还优选1或2；
    t2为0至6的整数；优选1至4的整数，还优选1或2；
    t3为1至6的整数；优选1至4的整数，更优选1或2；
    t4为0至10的整数；
    t5为0至10的整数；
    *为与L2连接的位置；
    为与羰基或亚甲基连接的位置；
    L1b和L’1b各自独立地为由一个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；
    优选地，L1b和L’1b各自独立地选自：-Gly-*、-Val-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Arg-*、-Val-Arg-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Gly-Gly-*、Gly-Gly-*、-Gly-Val-Gly-*、-Gly-Ala-Gly-*、-Gly-Phe-Cit-*、-Gly-Phe-Val-*、-Gly-Phe-Ala-*、-Gly-Phe-Lys-*、-Phe-Lys-*、-Gly-Val-*、-Gly-Cit-*、-Gly-Ala-*、-Gly-Gly-Lys-*、Gly-Lys’-*、-Ala-Ala-Ala-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*，优选-Gly-Phe-Gly-*、-Gly-Val-Cit-*、-Val-Cit-*、-Gly-Val-Ala-*、-Val-Ala-*、-Gly-Phe-Gly-*、-Phe-Gly-*、-Gly-Phe-Lys-、-Phe-Lys-*、-Gln-Val-Ala-*、-Gln-Val-Cit-*、-Asp-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Val-Cit-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Ala-*、-Lys-Gly-Gly-Val-Cit-*、Gly-Gly-Phe-Gly-*、-Lys-Gln-Val-Cit-*、-Lys-Gln-Val-Ala-*、-Lys-Glu-Val-Cit-*、-Lys-Glu-Val-ALa-*、-Lys-Asp-Val-Cit-*、-Lys-Asp-Val-Ala-*、Glu-Val-Cit-*、Glu-Val-Ala-*、-Lys-Val-Ala-*、-Lys-Val-Cit-*、-Val-Lys-Gly-*、-Val-Lys-*、-Asp-Val-Cit-*；其中*为与L2连接的位置。
  34. 根据权利要求32所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接 受的盐，其中：
    L’为
    Q’选自：
    其中，*为与L4连接的位置，为与Pc连接的位置；
    L3为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基，优选为由两个或多个选自甘氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、亮氨酸、丙氨酸的氨基酸形成的氨基酸残基；
    L4为
    Z1选自键、-(CH2)p-、-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)NH-、-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-(CH2)p-O-(CH2)p-C(O)-L6-NH-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；
    s1为1至6的整数，优选2至6的整数；
    s2为1至10的整数，优选2至10的整数；
    s3为0；
    s4为0；
    p为1至10的整数，优选1至6的整数；
    L6选自
    s为1至6的整数；优选2至6的整数；更优选2至4的整数；
    t为0至10的整数；
    L6优选为
  35. 根据权利要求32至34中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中，L5为
    Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
    r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
    r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
    r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
  36. 根据权利要求32至35中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：当w为0时，F为巯基；当w为1时，F为经反应例如无金属点击反应后能够与Q’连接的点击探针，优选地F为叠氮基。
  37. 根据权利要求32至36中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：
    Pc为修饰抗体，所述修饰抗体具有结构：
    其中：
    Pc’为抗体；
    Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
    r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
    r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
    r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
  38. 根据权利要求32至37中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中：Pc为修饰抗体，Pc-Q’选自结构：

    Pc’为抗体；
    Z2和Z3各自独立地选自-C(O)NH-、-C(O)O-、-C(O)-、-OC(O)-、-NH-、-O-和-OC(O)NH-；优选-C(O)NH-；
    r1为1至8的整数，优选1至6的整数，更优选1至3的整数；
    r2为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数；
    r3为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r4为0至6的整数，优选0至4的整数，更优选0至2的整数；
    r5为1至6的整数，优选1至4的整数，更优选1至2的整数。
  39. 根据权利要求32至38中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：













    其中：
    v为1至10，v为小数或整数；
    Pc为抗体或其抗原结合片段；
    Pc’为抗体。
  40. 根据权利要求32至39中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体；优选地，所述抗体或其抗原结合片段选自抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗ROR1抗体、抗CLDN6抗体、抗CLDN9抗体、抗CLDN18.2抗体、抗NaPi-2b抗体、抗TNF-α抗体、抗ENPP3抗体、抗DLL3抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD28抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD37抗体、抗CD38抗体、抗CD44抗体、抗CD45抗体、抗CD47抗体、抗CD48抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD98抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗EphA2抗体、抗MUCI抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体、抗CD79抗体、抗TROP-2抗体、抗CD79B抗体、抗Mesothelin抗体、抗Nectin-4抗体、抗TPBG抗体，或其抗原结合片段。
  41. 根据权利要求32至40中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述抗体或其抗原结合片段选自曲妥珠单抗 (Trastuzumab)、西妥昔单抗(Cetuximab)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、恩波妥珠单抗(Enoblituzumab)、依玛妥珠单抗(Emibetuzumab)、奥英妥珠单抗(Inotuzumab)、维汀-匹那妥珠单抗(Pinatuzumab)维布妥昔单抗(Brentuximab)、吉妥单抗(Gemtuzumab)、比伐珠单抗(Bivatuzumab)、莫洛伐妥单抗(Lorvotuzumab)，或其抗原结合片段。
  42. 根据权利要求32至41中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：












    其中v为1至10的整数或小数，优选2至8的整数或小数。
  43. 一种药物组合物，其包含根据权利要求32至42中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
  44. 根据权利要求1至21中任一项所述的通式(A)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求22至26中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者根据权利要求27至31中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐在制备配体-药物偶联 物中的用途。
  45. 根据权利要求32至42中任一项所述的通式(B)所示的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求43所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
  46. 根据权利要求22至26中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或者根据权利要求27至31中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，所述癌症优选乳腺癌、卵巢癌、软组织肉瘤、脂肪肉瘤、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、头颈癌、宫颈癌、前列腺癌。
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