WO2024143314A1 - 放射性標識医薬 - Google Patents
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- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
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Definitions
- Z1 and Z2 each independently represent a hydrogen atom or an amino-protecting group
- Z3 is a hydrogen atom, a protecting group for a carboxy group, or a bond to a solid phase.
- FIG. 1 shows the experimental results of incubation of BBMVs with 67 Ga-labeled NOTA-Phe-Gly-Lys (Bzo) or 67 Ga-labeled NOTA-Met-Val-Lys (Bzo).
- the R 1 's each independently represent a hydrogen atom or a hydrocarbon group having 1 to 8 carbon atoms.
- the hydrocarbon group for R 1 is not particularly limited, but is preferably a hydrocarbon group used as a protecting group for a carboxy group, such as a methyl group, an ethyl group, a t-butyl group, or a benzyl group.
- a hydrogen atom is preferred.
- Y is a monovalent group P derived from a protein or peptide, a hydrogen atom, or a target molecular recognition element.
- Y is a hydrogen atom or a monovalent group P derived from a protein or peptide.
- the protein or peptide in the monovalent group P derived from a protein or peptide is not particularly limited, and a protein or peptide having binding ability to a target molecule such as a protein present in a living body is preferably used.
- Specific examples include proteins or peptides that function as ligands that bind to proteins that are highly expressed in tissues associated with inflammation, tumor cell infiltration, etc., and proteins or peptides that are specifically expressed in tumor cells.
- proteins or peptides include cyclic pentapeptides such as cyclo-Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys (SEQ ID NO: 1) having affinity for integrins highly expressed in neovascular cancer; F-Met-Leu-Phe (fMLP), a peptide having affinity for a receptor for a chemotactic factor present on the surface of macrophages; ⁇ -melanocyte-stimulating hormone derivatives, which are peptides having affinity for melanocortin receptors highly expressed in malignant melanoma; and somatostatin derivatives having affinity for somatostatin receptors highly expressed in endocrine tumors.
- cyclic pentapeptides such as cyclo-Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys (SEQ ID NO: 1) having affinity for integrins highly expressed in neovascular cancer
- F-Met-Leu-Phe (fMLP) a peptide having affinity for
- target molecule recognition element refers to a monovalent group derived from a molecule capable of recognizing a target molecule in vivo, such as by binding (preferably specifically binding) to the target molecule, or an organic or inorganic monovalent group. However, this does not include the above-mentioned proteins or peptides. For example, it includes a monovalent group derived from an imidathiazole sulfonamide for carbonic anhydrase IX, which is highly expressed in hypoxic regions of solid tumors, and a monovalent group derived from an asymmetric urea compound for prostate-specific membrane antigen.
- target molecule refers to a molecule present in a target site that is the subject of diagnosis with a radiopharmaceutical, such as a tissue or cell, and preferably a molecule that is specifically expressed.
- a radiopharmaceutical such as a tissue or cell
- target molecule recognition element can be appropriately selected based on, for example, Binding DB (www.bindingdb.org/rwd/bind/index.jsp) etc.
- L1 is a single bond or a linker group.
- Specific examples of the —NR 2 -L 1 -Y structure in the above formula (1) include the following embodiments (w1) to (w6).
- w3 a -NR 2 -(target molecular recognition element) structure in which L 1 is a single bond and Y is a target molecular recognition element;
- a monovalent group P derived from a protein or peptide is directly bonded to the --NR 2 group, preferably via an amide bond.
- the target molecular recognition element is directly bonded to the --NR 2 group, preferably via an amide bond.
- L1 is a linker group
- the -NR 2 -L 1 -H structure and the -NR 2 -L 1 -P structure are preferably formed by various protein crosslinking agents, i.e., the linker group in L1 is a linker group derived from various protein crosslinking agents or a linker group having various protein crosslinking agents as a part thereof.
- Specific crosslinkers include protein crosslinkers having a carboxyl-amine reactive group, such as a carbodiimide group; protein crosslinkers having an amine reactive group, such as an N-hydroxysuccinimide (NHS) ester group or an imide group; and protein crosslinkers having a carbonyl reactive group, such as a hydrazide group or an alkoxyamine group.
- the --NR 2 -L 1 -P structure may be a structure containing a thioether group formed by a sulfhydryl reactive group such as a maleimide group and a sulfhydryl group derived from a sulfhydryl group-introducing reagent such as 2-iminothiolane.
- the -NR2 - L1- (target molecule recognition element) structure is preferably formed by various crosslinking agents, such as, in addition to the above-mentioned protein crosslinking agents, structures derived from crosslinking agents such as mercaptocarboxylic acids such as 3-mercaptopropionic acid and poly(ethylene glycol) 2-mercaptoethyl ether acetic acid.
- crosslinking agents such as, in addition to the above-mentioned protein crosslinking agents, structures derived from crosslinking agents such as mercaptocarboxylic acids such as 3-mercaptopropionic acid and poly(ethylene glycol) 2-mercaptoethyl ether acetic acid.
- the reaction temperature and reaction time can be appropriately set by those skilled in the art.
- the reaction temperature can be, for example, 0 to 40° C.
- the reaction time can be, for example, 30 minutes to 10 days.
- the reaction is preferably carried out in a solvent.
- the solvent include organic solvents such as ethyl acetate, N,N-dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO), 1,4-dioxane, tetrahydrofuran (THF), acetonitrile, and dichloromethane, but are not limited thereto.
- the solvent may be either a single solvent or a mixed solvent of two or more solvents.
- the dose of the diagnostic drug is 1.5 MBq/kg to 4 MBq/kg in terms of the radioactivity of 64 Cu, and 0.93 GBq/m 2 to 2.22 GBq/m 2 in terms of the radioactivity of radiation therapy.
- the dose of the diagnostic medicine is 0.93 GBq/m 2 to 2.22 GBq/m 2 in terms of the radioactivity of 67 Cu.
- SE-HPLC Analysis by molecular sieve HPLC
- Synthesis Example 5 Synthesis of 67 Ga-labeled NOTA-Phe-Gly-Lys(Bzo) 67 GaCl 3 (1.0 ⁇ L) was mixed with 0.1 M ammonium acetate buffer (pH 5.5, 10 ⁇ L) and left to stand at room temperature for 5 minutes. After mixing with NOTA-Phe-Gly-Lys(Bzo) solution (2.0 ⁇ 10 ⁇ 4 M, 10 ⁇ L), the mixture was reacted at 37° C. for 1 hour to synthesize 67 Ga-NOTA-Phe-Gly-Lys(Bzo). The formation was confirmed by the fact that the retention time of the non-radioactive Ga complex and that of the RP-HPLC were the same.
- BBMVs Renal brush border membrane vesicles
- the cortex was mixed with 12 mM Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 4-5 times the mass of 300 mM mannitol and 5 mM EGTA, homogenized for 2 minutes with a Polytron homogenizer PT-3100 (Kinematica GmbH), and diluted with the same buffer to obtain a 10% homogenate. Then, after diluting twice with distilled water, a 1.0M MgCl2 aqueous solution was added so that the final concentration was 10 mM, and the suspension was left for 15 minutes. The homogenate was then centrifuged at 1,900 g, and the supernatant was centrifuged for another 30 minutes at 24,000 g.
- the precipitate was resuspended in 6 mM Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 150 mM mannitol equivalent to 20 times the cortex mass, and 2.5 mM EGTA, and homogenized with a Teflon (trademark) homogenizer (1,000 rpm, 10 strokes).
- a 1.0M MgCl2 aqueous solution was then added so that the final concentration was 10 mM, and the suspension was left for 15 minutes, after which the homogenate was centrifuged at 1,900 g, and the supernatant was centrifuged for another 30 minutes at 24,000 g.
- the obtained precipitate was suspended in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0) equivalent to 10 times the cortex mass, and homogenized again with a Teflon (trademark) homogenizer (1,000 rpm, 10 strokes). The homogenate was then centrifuged at 24,000 g for 30 minutes to obtain BBMVs as a precipitate. The BBMVs precipitate was then resuspended in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0) and passed through a 0.4 mm x 19 mm needle 10 times to make the vesicle size constant. For the incubation test, the protein was diluted to a concentration of 10 mg/mL.
- BBMVs (Incubation test) The incubation test of BBMVs and 67 Ga-labeled small molecule model substrate was carried out by the following method.
- BBMVs (10 ⁇ L) prepared to have a protein concentration of 10 mg/mL was pre-incubated at 37 ° C for 10 minutes.
- Figure 1 shows the experimental results of incubation of BBMVs with 67Ga -labeled NOTA-Met-Val-Lys (Bzo) (MVK in the figure) or 67Ga -labeled NOTA-Phe-Gly-Lys (Bzo) (FGK in the figure).
- the values in the figure indicate the percentage (%) of radioactivity of the generated metabolites relative to 100% radioactivity in the incubated BBMVs.
- the peak of 67 Ga-labeled NOTA-Phe-Gly was observed, not that of 67 Ga-labeled NOTA-Phe.
- the amount of 67 Ga-NOTA-Phe-Gly released was lower than that of 67 Ga -labeled NOTA-Met-Val-Lys(Bzo).
- Measurement Example 3 Measurement of pharmacokinetics in mice (cell culture) Brain tumor cells U87MG were cultured under the following conditions: a 150 mm Cell Culture Dish-Treated (Trueline) was used as the culture vessel, and DMEM medium (Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) supplemented with 10% (v/v) FBS (Japan Biomaterials Center Co., Ltd.) and 1% (v/v) penicillin/streptomycin (5000 units-5000 ⁇ g/mL, Invitrogen, Life Technologies Japan) was used as the medium, and the cells were incubated at 37°C, 5% (v/v) CO 2 , and saturated water vapor pressure.
- DMEM medium Flujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
- FBS Japanese Biomaterials Center Co., Ltd.
- penicillin/streptomycin 5000 units-5000 ⁇ g/mL, Invitrogen, Life Technologies Japan
- the values in the table show the change in internal radioactivity distribution over time, and the units are the radioactivity accumulation rate (%) [%ID/g] relative to 100% of the injected dose per 1g of organ or tissue, except for the stomach and intestines, and the radioactivity accumulation rate (%) [%ID] relative to 100% of the injected dose per organ or tissue, for the stomach and intestines.
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Abstract
本発明は、腎臓への集積をより低減できる放射性標識医薬の調製に使用するための新規化合物等の提供を課題とする。 解決手段として以下を提供する：下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ｙ及びＸ１は明細書中に記載の通り。］
Description
本発明は、新規化合物、放射性標識医薬を調製するための組成物、放射性標識医薬組成物、新規化合物の製造方法等に関する。
放射性標識医薬を用いて、単一光子放射断層撮影（Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｈｏｔｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｄ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＳＰＥＣＴ」ともいう）、陽電子放射断層撮影（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＰＥＴ」ともいう）等の放射線画像診断が行われている。これらの放射線画像診断には、様々な放射性核種が使用されるが、そのなかでも放射性ガリウムは、ＳＰＥＣＴには、ガリウム－６７（６７Ｇａ）が使用でき、ＰＥＴには、ガリウム－６８（６８Ｇａ）が使用でき、いずれの装置にも対応可能である。特に、６８Ｇａは、ゲルマニウム－６８を用いたジェネレータから溶出できることから、近年注目されている。
６８Ｇａの半減期は６８分と短いために、血液クリアランスの早い低分子化抗体等の分子量の小さいペプチドを標識母体として使用する。しかしながら放射性標識低分子ペプチドを生体に投与すると、標的組織への特異的な集積の他に腎臓への非特異的な集積が観察される。この場合、腎臓に近い標的組織に対する画像化を困難にする。腎臓への放射活性の集積（以下「腎集積」ともいう）は、ＲＩ標識低分子ペプチドが腎臓に取り込まれた後、リソソームに運ばれ、代謝された後に生成する放射性代謝物が腎臓に残存することに起因する。
特許文献１には、腎臓への集積を投与早期から低減できる放射性標識薬剤が得られる化合物として、ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）が開示されている。
６８Ｇａの半減期は６８分と短いために、血液クリアランスの早い低分子化抗体等の分子量の小さいペプチドを標識母体として使用する。しかしながら放射性標識低分子ペプチドを生体に投与すると、標的組織への特異的な集積の他に腎臓への非特異的な集積が観察される。この場合、腎臓に近い標的組織に対する画像化を困難にする。腎臓への放射活性の集積（以下「腎集積」ともいう）は、ＲＩ標識低分子ペプチドが腎臓に取り込まれた後、リソソームに運ばれ、代謝された後に生成する放射性代謝物が腎臓に残存することに起因する。
特許文献１には、腎臓への集積を投与早期から低減できる放射性標識薬剤が得られる化合物として、ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）が開示されている。
６８Ｇａの半減期は６８分と短いことから、投与後早期から腎臓への集積を低減することが望ましい。
特許文献１に記載のＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を使用すると、腎臓への集積を低減させることを達成できる。しかし、投与１０分後から１時間後にかけて、腎臓への集積が僅かではあるが、観察されることを本発明者らは見出した。
本発明は、このような腎臓への集積をより低減できる放射性標識医薬の調製に使用するための新規化合物等に関する。
特許文献１に記載のＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を使用すると、腎臓への集積を低減させることを達成できる。しかし、投与１０分後から１時間後にかけて、腎臓への集積が僅かではあるが、観察されることを本発明者らは見出した。
本発明は、このような腎臓への集積をより低減できる放射性標識医薬の調製に使用するための新規化合物等に関する。
本発明は、以下の発明に関する。
［１］ 下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［１］ 下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［式中、
Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基であり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
［２］ Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、上記［１］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［３］ 上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬を調製するための組成物。
［４］ 下記式（２）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基であり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
［２］ Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、上記［１］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［３］ 上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬を調製するための組成物。
［４］ 下記式（２）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［式中、
＊Ｍは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕであり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
［５］ Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、上記［４］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［６］ 上記［４］又は［５］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬組成物。
［７］ 下記工程（ａ１）～（ａ２）を含む方法（Ｉ）又は下記工程（ｂ１）～（ｂ２）を含む方法（II）のいずれかである、上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
｛方法（Ｉ）｝
（ａ１）下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、下記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる工程、
（ａ２）工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる工程；
｛方法（II）｝
（ｂ１）下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させる工程、又は、下記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる工程、
（ｂ２）工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる工程
＊Ｍは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕであり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
［５］ Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、上記［４］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
［６］ 上記［４］又は［５］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬組成物。
［７］ 下記工程（ａ１）～（ａ２）を含む方法（Ｉ）又は下記工程（ｂ１）～（ｂ２）を含む方法（II）のいずれかである、上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
｛方法（Ｉ）｝
（ａ１）下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、下記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる工程、
（ａ２）工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる工程；
｛方法（II）｝
（ｂ１）下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させる工程、又は、下記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる工程、
（ｂ２）工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる工程
［式中、Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基である。］
［式中、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基であり、
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。］
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基であり、
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。］
ｍは０又は１であり、
ｍが０の場合は、Ｐは、タンパク質又はペプチドであり、
ｍが１の場合は、Ｌ１ｂは、リンカー基であり、Ｐはタンパク質又はペプチドに由来する１価の基である。］
［８］ 上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩とを反応させる工程を含む、上記［４］又は［５］に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
本発明によれば、腎臓への集積をより低減できる放射性標識医薬の調製に使用するための新規化合物等が提供できる。
［化合物等］
＜化合物（１）等＞
以下、本発明の下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩（以下、単に「化合物（１）等」ともいう）について詳述する。
＜化合物（１）等＞
以下、本発明の下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩（以下、単に「化合物（１）等」ともいう）について詳述する。
［式中、
Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基であり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオン基であり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基であり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオン基であり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
上記Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子、又は炭素数１～８の炭化水素基である。
Ｒ１の炭化水素基は、特に限定されないが、カルボキシ基の保護基として用いられる炭化水素基が好ましく、例えば、メチル基、エチル基、ｔ－ブチル基、ベンジル基等が挙げられる。
これらのＲ１の中でも、水素原子が好ましい。
Ｒ１の炭化水素基は、特に限定されないが、カルボキシ基の保護基として用いられる炭化水素基が好ましく、例えば、メチル基、エチル基、ｔ－ブチル基、ベンジル基等が挙げられる。
これらのＲ１の中でも、水素原子が好ましい。
上記Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基である。
また、上記Ｌ１は、単結合又はリンカー基である。
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。すなわち、窒素含有複素環を形成しても、しなくてもよい。Ｒ２及びＬ１が互いに結合して隣接する窒素原子とともに形成する炭素数３～１０の窒素含有複素環としては、マレイミド基が挙げられる。
また、上記Ｌ１は、単結合又はリンカー基である。
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。すなわち、窒素含有複素環を形成しても、しなくてもよい。Ｒ２及びＬ１が互いに結合して隣接する窒素原子とともに形成する炭素数３～１０の窒素含有複素環としては、マレイミド基が挙げられる。
上記Ｒ２における炭素数１～８の有機基は、好ましくは炭素数１～５、より好ましくは炭素数１～３の有機基である。有機基としては、例えばアルキル基、アルコキシ基、アシル基等が挙げられる。
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子である。１つの態様においては、Ｙは、水素原子又はタンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである。
タンパク質又はペプチドに由来する１価の基Ｐにおけるタンパク質又はペプチドは特に限定されず、生体内に存在するタンパク質等の標的分子に対し、結合性を有するタンパク質又はペプチドが好ましく用いられる。具体的には、炎症や腫瘍細胞浸潤等に伴う組織において高い発現が認められるタンパク質、腫瘍細胞に特異的に発現するタンパク質等に結合するリガンドとして機能するタンパク質又はペプチドが挙げられる。
このようなタンパク質又はペプチドとしては、抗体及びその抗原結合領域断片が挙げられる。
抗体の抗原結合領域断片としては、例えば、Ｆａｂ断片（以下単に「Ｆａｂ」ともいう）、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）２断片、可変領域断片（以下、「Ｆｖ断片」ともいう）が挙げられる。Ｆａｂ断片とは、抗体のパパイン分解により生ずるＮ末端側の産物及びこれと同様のドメイン構造を有する断片を意味する。Ｆ（ａｂ’）２断片とは、抗体のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を還元することにより得られる断片及びこれと同様のドメイン構造を有する断片を意味する。Ｆ（ａｂ）２断片とは、２分子のＦａｂ断片が互いにジスルフィド結合で結合した二量体を意味する。Ｆｖ断片とは、抗体の断片であって抗原との結合活性を有する最小の断片を意味する。
抗体の抗原結合領域断片としては、より具体的には、特定のがん細胞に特異的に発現するタンパク質に対する抗体、及び、そのＦａｂ断片若しくはＦｖ断片が挙げられる。
特定のがん細胞に特異的に発現するタンパク質に対する抗体としては、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ２０抗体等のモノクローナル抗体が挙げられる。
タンパク質又はペプチドに由来する１価の基Ｐにおけるタンパク質又はペプチドは特に限定されず、生体内に存在するタンパク質等の標的分子に対し、結合性を有するタンパク質又はペプチドが好ましく用いられる。具体的には、炎症や腫瘍細胞浸潤等に伴う組織において高い発現が認められるタンパク質、腫瘍細胞に特異的に発現するタンパク質等に結合するリガンドとして機能するタンパク質又はペプチドが挙げられる。
このようなタンパク質又はペプチドとしては、抗体及びその抗原結合領域断片が挙げられる。
抗体の抗原結合領域断片としては、例えば、Ｆａｂ断片（以下単に「Ｆａｂ」ともいう）、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）２断片、可変領域断片（以下、「Ｆｖ断片」ともいう）が挙げられる。Ｆａｂ断片とは、抗体のパパイン分解により生ずるＮ末端側の産物及びこれと同様のドメイン構造を有する断片を意味する。Ｆ（ａｂ’）２断片とは、抗体のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を還元することにより得られる断片及びこれと同様のドメイン構造を有する断片を意味する。Ｆ（ａｂ）２断片とは、２分子のＦａｂ断片が互いにジスルフィド結合で結合した二量体を意味する。Ｆｖ断片とは、抗体の断片であって抗原との結合活性を有する最小の断片を意味する。
抗体の抗原結合領域断片としては、より具体的には、特定のがん細胞に特異的に発現するタンパク質に対する抗体、及び、そのＦａｂ断片若しくはＦｖ断片が挙げられる。
特定のがん細胞に特異的に発現するタンパク質に対する抗体としては、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ２０抗体等のモノクローナル抗体が挙げられる。
タンパク質又はペプチドの別の態様として、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有するシクロ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－ＤＰｈｅ－Ｌｙｓ（配列番号１）等の環状ペンタペプチド；マクロファージの表面に存在する走化性因子の受容体と親和性があるペプチドであるＦ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ（ｆＭＬＰ）、悪性黒色腫に高発現するメラノコルチン受容体に親和性があるペプチドであるα－メラノサイト刺激ホルモン誘導体、内分泌腫瘍に高発現するソマトスタチン受容体に親和性があるソマトスタチン誘導体等が挙げられる。
α－メラノサイト刺激ホルモン誘導体の例としては、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｎｌｅ－シクロ（Ａｓｐ－Ｈｉｓ－ＤＰｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ）（配列番号２）の配列を有するペプチドが例示される。ソマトスタチン誘導体としては、ＤＰｈｅ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＴｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ（Ｃｙｓ２－Ｃｙｓ７の間はジスルフィド結合）（配列番号３）の配列を有するペプチドが例示される。
なお、Ｆはホルミル基、Ｎｌｅはノルロイシン、ＤＰｈｅはＤ体フェニルアラニン、ＤＴｒｐはＤ体トリプトファンをそれぞれ示す。
α－メラノサイト刺激ホルモン誘導体の例としては、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｎｌｅ－シクロ（Ａｓｐ－Ｈｉｓ－ＤＰｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ）（配列番号２）の配列を有するペプチドが例示される。ソマトスタチン誘導体としては、ＤＰｈｅ－Ｃｙｓ－Ｔｙｒ－ＤＴｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ（Ｃｙｓ２－Ｃｙｓ７の間はジスルフィド結合）（配列番号３）の配列を有するペプチドが例示される。
なお、Ｆはホルミル基、Ｎｌｅはノルロイシン、ＤＰｈｅはＤ体フェニルアラニン、ＤＴｒｐはＤ体トリプトファンをそれぞれ示す。
「標的分子認識素子」とは、生体内において、標的分子に結合する（好ましくは特異的に結合する）等の標的分子を認識可能な分子に由来する１価の基、有機若しくは無機の１価の基等である。ただし、前記のタンパク質又はペプチドは含まない。例えば、固形腫瘍の低酸素領域に高発現する炭酸脱水素酵素ＩＸに対するイミダチアゾールスルホンアミドに由来する１価の基、前立腺特異的膜抗原に対する非対称ウレア化合物に由来する１価の基などを含む。
本明細書において、「標的分子」とは、放射性薬剤による診断の対象となる標的部位、例えば、組織や細胞に存在する分子、好ましくは特異的に発現する分子をいう。「標的分子」と「標的分子認識素子」の組み合わせは、例えばＢｉｎｄｉｎｇ ＤＢ（ｗｗｗ．ｂｉｎｄｉｎｇｄｂ．ｏｒｇ／ｒｗｄ／ｂｉｎｄ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）等に基づき適宜選択することができる。
Ｌ１は、単結合又はリンカー基である。
上記式（１）の－ＮＲ２－Ｌ１－Ｙ構造の具体的態様として、下記の態様（ｗ１）～（ｗ６）が挙げられる。
（ｗ１）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙがタンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである－ＮＲ２－Ｐ構造；
（ｗ２）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙが水素原子である－ＮＨＲ２構造;
（ｗ３）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙが標的分子認識素子である－ＮＲ２－（標的分子認識素子）構造;
（ｗ４）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙがタンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造；
（ｗ５）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙが水素原子である－ＮＲ２－Ｌ１－Ｈ構造；
（ｗ６）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙが標的分子認識素子である－ＮＲ２－Ｌ１－（標的分子認識素子）構造
上記式（１）の－ＮＲ２－Ｌ１－Ｙ構造の具体的態様として、下記の態様（ｗ１）～（ｗ６）が挙げられる。
（ｗ１）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙがタンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである－ＮＲ２－Ｐ構造；
（ｗ２）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙが水素原子である－ＮＨＲ２構造;
（ｗ３）Ｌ１が単結合であり、かつ、Ｙが標的分子認識素子である－ＮＲ２－（標的分子認識素子）構造;
（ｗ４）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙがタンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造；
（ｗ５）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙが水素原子である－ＮＲ２－Ｌ１－Ｈ構造；
（ｗ６）Ｌ１がリンカー基であり、Ｙが標的分子認識素子である－ＮＲ２－Ｌ１－（標的分子認識素子）構造
－ＮＲ２－Ｐ構造は、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐが、－ＮＲ２基に、好ましくはアミド結合を介して直接結合している。
－ＮＲ２－（標的分子認識素子）構造は、標的分子認識素子が、－ＮＲ２基に、好ましくはアミド結合を介して直接結合している。
Ｌ１がリンカー基である場合の－ＮＲ２－Ｌ１－Ｈ構造及び－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造は、好ましくは各種のタンパク質架橋剤によって形成される。すなわち、上記Ｌ１におけるリンカー基は、各種のタンパク質架橋剤に由来するリンカー基、又は各種のタンパク質架橋剤をその一部に有するリンカー基である。
具体的な架橋剤としては、カルボジイミド基等のカルボキシル－アミン反応性基を有するタンパク質架橋剤；Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル基、イミド基等のアミン反応性基を有するタンパク質架橋剤；ヒドラジド基、アルコキシアミン基等のカルボニル反応性基を有するタンパク質架橋剤が挙げられる。
また、－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造は、マレイミド基等のスルフヒドリル反応性基と２－イミノチオラン等のスルフヒドリル基導入試薬に由来するスルフヒドリル基が形成したチオエーテル基を含む構造であってよい。
Ｌ１がリンカー基である場合の－ＮＲ２－Ｌ１－（標的分子認識素子）構造は、好ましくは各種の架橋剤によって形成される。上記のタンパク質架橋剤に加えて、例えば、３－メルカプトプロピオン酸等のメルカプトカルボン酸；ポリ（エチレングリコール）２－メルカプトエチルエーテル酢酸等の架橋剤に由来する構造が挙げられる。
－ＮＲ２－（標的分子認識素子）構造は、標的分子認識素子が、－ＮＲ２基に、好ましくはアミド結合を介して直接結合している。
Ｌ１がリンカー基である場合の－ＮＲ２－Ｌ１－Ｈ構造及び－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造は、好ましくは各種のタンパク質架橋剤によって形成される。すなわち、上記Ｌ１におけるリンカー基は、各種のタンパク質架橋剤に由来するリンカー基、又は各種のタンパク質架橋剤をその一部に有するリンカー基である。
具体的な架橋剤としては、カルボジイミド基等のカルボキシル－アミン反応性基を有するタンパク質架橋剤；Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル基、イミド基等のアミン反応性基を有するタンパク質架橋剤；ヒドラジド基、アルコキシアミン基等のカルボニル反応性基を有するタンパク質架橋剤が挙げられる。
また、－ＮＲ２－Ｌ１－Ｐ構造は、マレイミド基等のスルフヒドリル反応性基と２－イミノチオラン等のスルフヒドリル基導入試薬に由来するスルフヒドリル基が形成したチオエーテル基を含む構造であってよい。
Ｌ１がリンカー基である場合の－ＮＲ２－Ｌ１－（標的分子認識素子）構造は、好ましくは各種の架橋剤によって形成される。上記のタンパク質架橋剤に加えて、例えば、３－メルカプトプロピオン酸等のメルカプトカルボン酸；ポリ（エチレングリコール）２－メルカプトエチルエーテル酢酸等の架橋剤に由来する構造が挙げられる。
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンである。
Ｘ１が薬学的に許容可能な陽イオンである場合、化合物（１）は塩を形成する。
薬学的に許容可能な陽イオンとして、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アンモニウムイオン等の無機の陽イオン；トリエチルアンモニウムイオン、トリエタノールアンモニウムイオン、ピリジニウムイオン、ジイソプロピルアンモニウムイオン等の有機の陽イオンが挙げられる。
その他、上記式（１）で表される化合物の薬学的に許容可能な塩としては、酸付加塩、塩基付加塩が挙げられる。
酸付加塩としては、無機酸塩、有機酸塩のいずれであってもよい。無機酸塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩が挙げられる。有機酸塩としては、例えば、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩が挙げられる。
塩基付加塩としては、無機塩基塩、有機塩基塩のいずれであってもよい。無機塩基塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩が挙げられる。有機塩基塩としては、例えば、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩が挙げられる。
本発明の化合物は、水和物等の溶媒和物であってもよい。溶媒は、薬学的に許容される溶媒であれば特に限定されない。
Ｘ１が薬学的に許容可能な陽イオンである場合、化合物（１）は塩を形成する。
薬学的に許容可能な陽イオンとして、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、アンモニウムイオン等の無機の陽イオン；トリエチルアンモニウムイオン、トリエタノールアンモニウムイオン、ピリジニウムイオン、ジイソプロピルアンモニウムイオン等の有機の陽イオンが挙げられる。
その他、上記式（１）で表される化合物の薬学的に許容可能な塩としては、酸付加塩、塩基付加塩が挙げられる。
酸付加塩としては、無機酸塩、有機酸塩のいずれであってもよい。無機酸塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩が挙げられる。有機酸塩としては、例えば、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩が挙げられる。
塩基付加塩としては、無機塩基塩、有機塩基塩のいずれであってもよい。無機塩基塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩が挙げられる。有機塩基塩としては、例えば、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩が挙げられる。
本発明の化合物は、水和物等の溶媒和物であってもよい。溶媒は、薬学的に許容される溶媒であれば特に限定されない。
化合物（１）等は、下記の化合物（２）等を有効成分とする放射性標識医薬を調製するための原料として好適に使用することができる。
＜化合物（２）等＞
以下、本発明の下記式（２）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩（以下、単に「化合物（２）等」ともいう）について詳述する。
以下、本発明の下記式（２）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩（以下、単に「化合物（２）等」ともいう）について詳述する。
［式中、
＊Ｍは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕであり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
＊Ｍは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕであり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］
Ｒ２、Ｌ１、Ｙ、Ｘ１は、上記化合物（１）等と同じである。
化合物（２）等は、化合物（１）の１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリ酢酸（以下、「ＮＯＴＡ」ともいう。）部分に、放射性金属＊Ｍが配位している。すなわち、化合物（２）等は、化合物（１）を配位子として、放射性金属＊Ｍが配位した配位化合物（錯体ともいう）である。
上記式（２）中、破線は配位結合を示す。
上記式（２）中、破線は配位結合を示す。
本明細書において、放射性金属＊Ｍは、放射性同位体である金属元素のみならず、金属元素が放射性化合物により標識されたものを包含し、具体的には、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕである。
１８Ｆ－Ａｌは、１８Ｆで標識されたＡｌであり、例えば、［Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１４，２５，２０３８－２０４５］に記載された方法で、化合物（２）等に導入することができる。
＊Ｍは、好ましくは６７Ｇａ、６８Ｇａ又は１８Ｆ－Ａｌであり、より好ましくは６７Ｇａ又６８Ｇａである。
１８Ｆ－Ａｌは、１８Ｆで標識されたＡｌであり、例えば、［Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１４，２５，２０３８－２０４５］に記載された方法で、化合物（２）等に導入することができる。
＊Ｍは、好ましくは６７Ｇａ、６８Ｇａ又は１８Ｆ－Ａｌであり、より好ましくは６７Ｇａ又６８Ｇａである。
化合物（２）等は、放射性標識医薬の有効成分として好適に使用することができる。
［製造方法］
＜化合物（１）等＞
本発明の上記式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば、下記工程（ａ１）～（ａ２）を含む方法（Ｉ）又は下記工程（ｂ１）～（ｂ２）を含む方法（II）のいずれかで製造することができる。
｛方法（Ｉ）｝
（ａ１）下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、下記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる工程、
（ａ２）工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる工程；
＜化合物（１）等＞
本発明の上記式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば、下記工程（ａ１）～（ａ２）を含む方法（Ｉ）又は下記工程（ｂ１）～（ｂ２）を含む方法（II）のいずれかで製造することができる。
｛方法（Ｉ）｝
（ａ１）下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、下記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる工程、
（ａ２）工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる工程；
｛方法（II）｝
（ｂ１）下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させる工程、又は、下記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる工程、
（ｂ２）工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる工程
（ｂ１）下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させる工程、又は、下記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる工程、
（ｂ２）工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる工程
［式中、Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基である。］
［式中、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基であり、
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。］
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基であり、
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。］
［式中、
ｍは０又は１であり、
Ｐは、タンパク質若しくはペプチド又はそれに由来する１価の基であり、
ｍは０又は１であり、
ｍが０の場合は、Ｐは、タンパク質又はペプチドであり、
ｍが１の場合は、Ｌ１ｂは、リンカー基であり、Ｐはタンパク質又はペプチドに由来する１価の基である。］
ｍは０又は１であり、
Ｐは、タンパク質若しくはペプチド又はそれに由来する１価の基であり、
ｍは０又は１であり、
ｍが０の場合は、Ｐは、タンパク質又はペプチドであり、
ｍが１の場合は、Ｌ１ｂは、リンカー基であり、Ｐはタンパク質又はペプチドに由来する１価の基である。］
｛方法（Ｉ）｝
＜工程（ａ１）＞
工程（ａ１）では、上記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、上記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる。
上記式（ｉ）で表される化合物は、公知の合成方法により製造することができる。また、市販品も使用することができる。市販品は、例えば、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ社（米国テキサス州）より購入することができる。
上記式（ii）で表される化合物は、公知のペプチド合成方法により製造することができる。
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基である。アミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）等が例示される。
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。カルボキシ基の保護基としては、メチル基、エチル基、ベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等が例示される。固相は、好ましくは公知のペプチド合成方法に使用される固相であり、例えば、ポリスチレン、フッ化ポリビニリデン、ナイロン等のポリマー；ガラス表面；セルロース、ニトロセルロース等のセルロース誘導体が挙げられる。固相への結合は、必要に応じてリンカーを介していてもよい。
反応は、１モルの上記式（ｉ）で表される化合物に対して、例えば０．１～１０モル、好ましくは０．５～２モル、更に好ましくは約等モル量の上記式（ii）で表される化合物を反応させる。
反応は、必要に応じて１モルの上記式（ｉ）で表される化合物に対して、例えば０．１～過剰量モル、好ましくは０．５～１０モルの塩基の存在下で行うことができる。塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、２，６－ルチジン等の有機塩基等；炭酸ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩、水素化ナトリウム等の水素化アルカリ金属等の無機塩基が挙げられる。中でも、反応性の観点から、好ましくは有機塩基である。また、溶媒を兼ねることができるとの観点から、より好ましくは、室温で液体の有機塩基である。
反応温度、反応時間は、当業者が適宜設定することができる。反応温度は、例えば０～４０℃とすることができる。反応時間は、例えば３０分間～１０日間とすることができる。
反応は、反応進行性の観点から、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル、ジクロロメタン等の有機溶媒が例示されるが、これに限定されるものではない。溶媒は、単一溶媒または２以上の溶媒の混合溶媒のいずれであってもよい。
＜工程（ａ１）＞
工程（ａ１）では、上記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、上記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる。
上記式（ｉ）で表される化合物は、公知の合成方法により製造することができる。また、市販品も使用することができる。市販品は、例えば、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ社（米国テキサス州）より購入することができる。
上記式（ii）で表される化合物は、公知のペプチド合成方法により製造することができる。
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基である。アミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）等が例示される。
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。カルボキシ基の保護基としては、メチル基、エチル基、ベンジル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等が例示される。固相は、好ましくは公知のペプチド合成方法に使用される固相であり、例えば、ポリスチレン、フッ化ポリビニリデン、ナイロン等のポリマー；ガラス表面；セルロース、ニトロセルロース等のセルロース誘導体が挙げられる。固相への結合は、必要に応じてリンカーを介していてもよい。
反応は、１モルの上記式（ｉ）で表される化合物に対して、例えば０．１～１０モル、好ましくは０．５～２モル、更に好ましくは約等モル量の上記式（ii）で表される化合物を反応させる。
反応は、必要に応じて１モルの上記式（ｉ）で表される化合物に対して、例えば０．１～過剰量モル、好ましくは０．５～１０モルの塩基の存在下で行うことができる。塩基としては、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、２，６－ルチジン等の有機塩基等；炭酸ナトリウム等のアルカリ金属炭酸塩、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ金属炭酸水素塩、水素化ナトリウム等の水素化アルカリ金属等の無機塩基が挙げられる。中でも、反応性の観点から、好ましくは有機塩基である。また、溶媒を兼ねることができるとの観点から、より好ましくは、室温で液体の有機塩基である。
反応温度、反応時間は、当業者が適宜設定することができる。反応温度は、例えば０～４０℃とすることができる。反応時間は、例えば３０分間～１０日間とすることができる。
反応は、反応進行性の観点から、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，４－ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル、ジクロロメタン等の有機溶媒が例示されるが、これに限定されるものではない。溶媒は、単一溶媒または２以上の溶媒の混合溶媒のいずれであってもよい。
＜工程（ａ２）＞
工程（ａ２）では、上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる。
上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基にリンカー基Ｌ１ａを導入した化合物は、下記式（iv）で表される構造を有する。
工程（ａ２）では、上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる。
上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基にリンカー基Ｌ１ａを導入した化合物は、下記式（iv）で表される構造を有する。
［式中、Ｒ１、Ｚ２及びＺ３は、前記に同じである。］
工程（ａ２）において、ｍ＝１の場合に、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂが、上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。ｍ＝０の場合には、上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端が、上記工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。
工程（ａ２）は、公知のタンパク質架橋剤を使用して２つのタンパク質又はペプチドを架橋する手段に準じて行うことができる。使用するタンパク質架橋剤としては、２－イミノチオラン等が挙げられる。
工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基と上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端とを反応させる場合、分子末端は好ましくはカルボキシ基であり、反応によりペプチド基が形成される。
工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基と上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端とを反応させる場合、分子末端は好ましくはカルボキシ基であり、反応によりペプチド基が形成される。
Ｚ１及びＺ２がアミノ基の保護基である場合、保護基の脱保護を任意の段階で、常法により行うことができる。
例えば、トリフルオロ酢酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の有機酸、塩酸、硫酸等の無機酸等の酸触媒を使用した方法が挙げられる。中でも、酸性触媒は、好ましくはトリフルオロ酢酸である。
反応温度、反応時間は、当業者が適宜設定することができる。反応温度は、例えば１０～４０℃程度とすることができる。反応時間は、例えば３０分間～２４時間程度とすることができる。
反応は、反応進行性の観点から、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、水等の水性溶媒が挙げられる。
例えば、トリフルオロ酢酸、ｐ－トルエンスルホン酸等の有機酸、塩酸、硫酸等の無機酸等の酸触媒を使用した方法が挙げられる。中でも、酸性触媒は、好ましくはトリフルオロ酢酸である。
反応温度、反応時間は、当業者が適宜設定することができる。反応温度は、例えば１０～４０℃程度とすることができる。反応時間は、例えば３０分間～２４時間程度とすることができる。
反応は、反応進行性の観点から、溶媒中で行うことが好ましい。溶媒としては、水等の水性溶媒が挙げられる。
｛方法（II）｝
＜工程（ｂ１）＞
工程（ｂ１）では、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させるか、又は、上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる。
上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基にリンカー基Ｌ１ａを導入した化合物は、下記式（v）で表される構造を有する。
＜工程（ｂ１）＞
工程（ｂ１）では、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させるか、又は、上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる。
上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基にリンカー基Ｌ１ａを導入した化合物は、下記式（v）で表される構造を有する。
［式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は、前記に同じである。］
工程（ｂ１）は、前記工程（ａ２）と同様にして行うことができる。
工程（ｂ１）において、ｍ＝１の場合に、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂが、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。ｍ＝０の場合には、上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端が、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。
工程（ｂ１）において、ｍ＝１の場合に、上記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂが、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。ｍ＝０の場合には、上記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端が、上記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と反応する。
＜工程（ｂ２）＞
工程（ｂ２）では、上記工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、上記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる。
工程（ｂ２）は、前記工程（ａ１）と同様にして行うことができる。
工程（ｂ２）では、上記工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、上記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる。
工程（ｂ２）は、前記工程（ａ１）と同様にして行うことができる。
かくして、方法（Ｉ）又は方法（II）により、化合物（１）等が製造される。本発明の化合物（１）等が合成されたことは、例えば１Ｈ－ＮＭＲ測定、１３Ｃ－ＮＭＲ測定、質量分析等の公知の手段により確認することができる。
Ｚ３が固相への結合の場合、任意の段階において、公知の手法により固相からの切断を行うことができる。
Ｚ３が固相への結合の場合、任意の段階において、公知の手法により固相からの切断を行うことができる。
＜化合物（２）等＞
本発明において、上記式（２）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば、上記式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩と、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩とを反応させる工程を含む。
６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩としては、塩化物等のハロゲン化物が挙げられる。
具体的な手法としては、従来知られている錯体形成反応を利用する簡便な操作が挙げられる。
本発明において、上記式（２）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩は、例えば、上記式（１）で示される化合物又はその薬学的に許容される塩と、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩とを反応させる工程を含む。
６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩としては、塩化物等のハロゲン化物が挙げられる。
具体的な手法としては、従来知られている錯体形成反応を利用する簡便な操作が挙げられる。
［組成物等］
＜放射性標識医薬を調製するための組成物＞
本発明の放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（１）を必須成分として含む。
放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（１）の他に、水性緩衝液などのｐＨ調節剤、アスコルビン酸、ｐ－アミノ安息香酸等の安定化剤等を含んでいてもよい。
Ｙが水素原子である場合、上記タンパク質又はペプチド、上記二官能性タンパク質架橋剤を含むことができる。
更に、上記６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩を含むことができる。
＜放射性標識医薬を調製するための組成物＞
本発明の放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（１）を必須成分として含む。
放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（１）の他に、水性緩衝液などのｐＨ調節剤、アスコルビン酸、ｐ－アミノ安息香酸等の安定化剤等を含んでいてもよい。
Ｙが水素原子である場合、上記タンパク質又はペプチド、上記二官能性タンパク質架橋剤を含むことができる。
更に、上記６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩を含むことができる。
放射性標識医薬を調製するための組成物は、各成分を別々の包装単位として含むキットとして提供することができる。
本発明の放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（２）の製造に使用することができ、好適には医療、検査等の現場で放射性標識医薬を調製するために使用される。
本発明の放射性標識医薬を調製するための組成物は、上記化合物（２）の製造に使用することができ、好適には医療、検査等の現場で放射性標識医薬を調製するために使用される。
上記態様に関連して、本発明は以下の態様も包含する。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（１）。
・上記化合物（１）の放射性標識医薬を調製するための使用。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（１）。
・上記化合物（１）の放射性標識医薬を調製するための使用。
＜放射性標識医薬＞
本発明の放射性標識医薬は、上記化合物（２）を必須成分として含む。
放射性標識医薬は、必要に応じて、１種類又は２種類以上の医薬的に許容される担体（医薬用担体）を含む医薬組成物として調製できる。医薬用担体として、水性緩衝液、酸、及び塩基などのｐＨ調節剤、アスコルビン酸やｐ－アミノ安息香酸などの安定化剤、Ｄ－マンニトールなどの賦形剤、等張化剤、並びに保存剤などを例示できる。また、放射化学的純度を改良するのに役立つクエン酸、酒石酸、マロン酸、グルコン酸ナトリウム、グルコヘプトン酸ナトリウムなどの化合物を添加してもよい。本発明の放射性標識医薬は、水溶液の形態、凍結溶液の形態、及び凍結乾燥品のいずれでも提供が可能である。
本発明の放射性標識医薬は、上記化合物（２）を必須成分として含む。
放射性標識医薬は、必要に応じて、１種類又は２種類以上の医薬的に許容される担体（医薬用担体）を含む医薬組成物として調製できる。医薬用担体として、水性緩衝液、酸、及び塩基などのｐＨ調節剤、アスコルビン酸やｐ－アミノ安息香酸などの安定化剤、Ｄ－マンニトールなどの賦形剤、等張化剤、並びに保存剤などを例示できる。また、放射化学的純度を改良するのに役立つクエン酸、酒石酸、マロン酸、グルコン酸ナトリウム、グルコヘプトン酸ナトリウムなどの化合物を添加してもよい。本発明の放射性標識医薬は、水溶液の形態、凍結溶液の形態、及び凍結乾燥品のいずれでも提供が可能である。
本発明の放射性標識医薬は、例えば、放射線画像診断に用いられる放射性標識医薬して使用される。
放射線画像診断としては、例えば、単一光子放射断層撮影（Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｈｏｔｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｄ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＳＰＥＣＴ」ともいう）、陽電子放射断層撮影（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＰＥＴ」ともいう）等が挙げられる。
診断としては、特に限定されず、腫瘍、炎症、感染症、心循環器疾患、脳・中枢系疾患等の各種疾患及び臓器・組織の放射線画像診断等に用いられ、好ましくは、腫瘍の放射線画像診断に使用される。
診断の対象となる標的の特性に従って、タンパク質若しくはペプチド、標的分子認識素子等を選択することにより、多種多様な標的の診断や治療が可能であり、本発明の放射性標識医薬は診断の分野で広く使用できる。
放射線画像診断としては、例えば、単一光子放射断層撮影（Ｓｉｎｇｌｅ Ｐｈｏｔｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｄ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＳＰＥＣＴ」ともいう）、陽電子放射断層撮影（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，以下単に「ＰＥＴ」ともいう）等が挙げられる。
診断としては、特に限定されず、腫瘍、炎症、感染症、心循環器疾患、脳・中枢系疾患等の各種疾患及び臓器・組織の放射線画像診断等に用いられ、好ましくは、腫瘍の放射線画像診断に使用される。
診断の対象となる標的の特性に従って、タンパク質若しくはペプチド、標的分子認識素子等を選択することにより、多種多様な標的の診断や治療が可能であり、本発明の放射性標識医薬は診断の分野で広く使用できる。
本発明の放射性標識医薬の投与経路としては、例えば、静脈内投与若しくは動脈内投与などの非経口投与、経口投与が挙げられ、静脈内投与が好ましい。
投与経路はこれら経路に限定されず、放射性標識医薬の投与後に、その作用が有効に発現し得る経路であればいずれも利用できる。
本発明の放射性標識医薬の放射活性強度は、本医薬を投与することにより目的を達成し得る強度であり、且つ、被験者の放射線被爆が可能な限り低い臨床投与量である限りにおいて任意である。
放射活性強度は、放射性標識医薬を使用する一般的な診断方法や治療方法で使用されている放射活性強度を参考にして決定できる。その投与量は患者の年齢、体重、適当な放射線イメージング装置、及び対象疾患の状態等の諸条件を考慮し、イメージングが可能と考えられる放射能量及び投与量が決定される。
投与経路はこれら経路に限定されず、放射性標識医薬の投与後に、その作用が有効に発現し得る経路であればいずれも利用できる。
本発明の放射性標識医薬の放射活性強度は、本医薬を投与することにより目的を達成し得る強度であり、且つ、被験者の放射線被爆が可能な限り低い臨床投与量である限りにおいて任意である。
放射活性強度は、放射性標識医薬を使用する一般的な診断方法や治療方法で使用されている放射活性強度を参考にして決定できる。その投与量は患者の年齢、体重、適当な放射線イメージング装置、及び対象疾患の状態等の諸条件を考慮し、イメージングが可能と考えられる放射能量及び投与量が決定される。
ヒトを対象とする場合、各種金属における放射能量は、以下のとおりである。
６７Ｇａを用いた場合、通常、ＳＰＥＣＴに使用されることが想定され、その診断医薬の投与量は、特に限定されないが、例えば、６７Ｇａの放射能量として１．１ＭＢｑ／ｋｇ～１．５ＭＢｑ／ｋｇである。
６８Ｇａを用いた場合、通常、ＰＥＴに使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６８Ｇａの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～３ＭＢｑ／ｋｇである。
１８Ｆ－Ａｌを用いた場合、通常、ＰＥＴに使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、１８Ｆの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～４ＭＢｑ／ｋｇである。
６４Ｃｕを用いた場合、通常、ＰＥＴ及び放射線治療に使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６４Ｃｕの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～４ＭＢｑ／ｋｇであり、放射線治療の放射能量として０．９３ＧＢｑ／ｍ２～２．２２ＧＢｑ／ｍ２である。
６７Ｃｕを用いた場合、通常、放射線治療に使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６７Ｃｕの放射能量として０．９３ＧＢｑ／ｍ２～２．２２ＧＢｑ／ｍ２である。
６７Ｇａを用いた場合、通常、ＳＰＥＣＴに使用されることが想定され、その診断医薬の投与量は、特に限定されないが、例えば、６７Ｇａの放射能量として１．１ＭＢｑ／ｋｇ～１．５ＭＢｑ／ｋｇである。
６８Ｇａを用いた場合、通常、ＰＥＴに使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６８Ｇａの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～３ＭＢｑ／ｋｇである。
１８Ｆ－Ａｌを用いた場合、通常、ＰＥＴに使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、１８Ｆの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～４ＭＢｑ／ｋｇである。
６４Ｃｕを用いた場合、通常、ＰＥＴ及び放射線治療に使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６４Ｃｕの放射能量として１．５ＭＢｑ／ｋｇ～４ＭＢｑ／ｋｇであり、放射線治療の放射能量として０．９３ＧＢｑ／ｍ２～２．２２ＧＢｑ／ｍ２である。
６７Ｃｕを用いた場合、通常、放射線治療に使用されることが想定され、診断医薬の投与量は、６７Ｃｕの放射能量として０．９３ＧＢｑ／ｍ２～２．２２ＧＢｑ／ｍ２である。
以上、本発明によれば、腎臓への集積を投与早期から低減でき、その後に増加に転じない放射性標識医薬が得られる化合物が提供できる。このように本発明の放射性標識医薬は、従来に比べて、鮮明な画像を与え、精度の高い放射線画像診断を可能とする。また、腎臓への集積が低減できるため、他の臓器への損傷も小さく止めることが可能である。
上記態様に関連して、本発明は以下の態様も包含する。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（２）。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（２）の使用。
・上記化合物（２）を必要とする対象に投与する工程、及び対象において前記化合物（１）に基づく放射線を測定する工程を含む、対象の診断方法又は治療方法。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（２）。
・放射性標識医薬を調製するための上記化合物（２）の使用。
・上記化合物（２）を必要とする対象に投与する工程、及び対象において前記化合物（１）に基づく放射線を測定する工程を含む、対象の診断方法又は治療方法。
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。
下記実施例及び比較例で、置換基、化合物、及び有機溶媒について、下記の略号を使用した。
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル基
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基
Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）：２－クロロトリチル基
ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＮＯＴＡ：２－Ｓ－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリ酢酸
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ：２－クロロトリチルクロライドレジン（２－Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｒｅｓｉｎ）
Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ：Ｎ－α－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｎ－ε－［１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］－Ｌ－リシン
Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ・ＨＣｌ：Ｎ－α－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－リシン塩酸塩
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＮＭＣＭ：Ｎ－メトキシカルボニルマレイミド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＤＰＳ：２，２’－ジピリジルジスルフィド
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
Ｄ－ＰＢＳ：ダルベッコリン酸緩衝生理食塩液
ＥＧＴＡ：グリコールエーテルジアミン四酢酸
ＭＧＴＡ：ＤＬ－２－メルカプトメチル－３－グアニジノエチルチオプロパン酸
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル基
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基
Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）：２－クロロトリチル基
ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＮＯＴＡ：２－Ｓ－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリ酢酸
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ：２－クロロトリチルクロライドレジン（２－Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｒｅｓｉｎ）
Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ：Ｎ－α－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｎ－ε－［１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］－Ｌ－リシン
Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ・ＨＣｌ：Ｎ－α－（９－フルオレニルメトキシカルボニル）－Ｌ－リシン塩酸塩
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＮＭＣＭ：Ｎ－メトキシカルボニルマレイミド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＤＰＳ：２，２’－ジピリジルジスルフィド
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
Ｄ－ＰＢＳ：ダルベッコリン酸緩衝生理食塩液
ＥＧＴＡ：グリコールエーテルジアミン四酢酸
ＭＧＴＡ：ＤＬ－２－メルカプトメチル－３－グアニジノエチルチオプロパン酸
［測定方法、実験動物］
下記実施例及び比較例において、各種物性等の測定方法は下記の方法で行った。
＜ＮＭＲ（核磁気共鳴）＞
１Ｈ－ＮＭＲによる分析はＪＥＯＬ ＥＣＳ－４００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（日本電子株式会社）を使用した。
下記実施例及び比較例において、各種物性等の測定方法は下記の方法で行った。
＜ＮＭＲ（核磁気共鳴）＞
１Ｈ－ＮＭＲによる分析はＪＥＯＬ ＥＣＳ－４００ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（日本電子株式会社）を使用した。
＜薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）＞
薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）による分析にはｓｉｌｉｃａ ｐｌａｔｅｓ（ＴＬＣ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｓｈｅｅｔｓ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ ＲＰ－１８ Ｆ２５４ｓ，ＭＥＲＣＫ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を使用し、０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液：メタノール＝１：１の展開溶媒で１０ｃｍ展開したものを５ｍｍずつ切断し、オートウェルガンマシステム（ＷＩＺＡＲＤ３，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）によりそれぞれの画分の放射活性を測定した。
薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）による分析にはｓｉｌｉｃａ ｐｌａｔｅｓ（ＴＬＣ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｓｈｅｅｔｓ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ ＲＰ－１８ Ｆ２５４ｓ，ＭＥＲＣＫ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を使用し、０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液：メタノール＝１：１の展開溶媒で１０ｃｍ展開したものを５ｍｍずつ切断し、オートウェルガンマシステム（ＷＩＺＡＲＤ３，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）によりそれぞれの画分の放射活性を測定した。
＜逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）及び分子ふるいＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）＞
逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）による分析は、ＵＶ検出器としてＬ－７４０５（ＨＩＴＡＣＨＩ Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）、送液ポンプとしてＬ－７１００（ＨＩＴＡＣＨＩ Ｌｔｄ．）、分析用カラムとしてＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８－ＡＲ－３００ ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を使用した。ＲＰ－ＨＰＬＣによる分取にはガードカラムＣａｄｅｎｚａ ５ＣＤ－Ｃ１８ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍｎ（１０ｍｍ×８ｍｍ，Ｉｍｔａｋｔ）を連結したＣａｄｅｎｚａ ５ＣＤ－Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２０ｍｍ×１５０ｍｍ，Ｉｍｔａｋｔ）を使用した。
移動相には０．１％（ｖ／ｖ） ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（Ａ相）と０．１％（ｖ／ｖ） ＴＦＡ／ＭｅＣＮ（Ｂ相）を用い、０－３０分までＡ相９０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相１０％（ｖ／ｖ）からＡ相２０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相８０％（ｖ／ｖ）まで変化させ、３０－４０分でＡ相２０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相８０％（ｖ／ｖ）からＡ相０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相１００％（ｖ／ｖ）まで変化させる直線グラジエント法により流速５．０ｍＬ／分で溶出した。
逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）による分析は、ＵＶ検出器としてＬ－７４０５（ＨＩＴＡＣＨＩ Ｌｔｄ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）、送液ポンプとしてＬ－７１００（ＨＩＴＡＣＨＩ Ｌｔｄ．）、分析用カラムとしてＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８－ＡＲ－３００ ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を使用した。ＲＰ－ＨＰＬＣによる分取にはガードカラムＣａｄｅｎｚａ ５ＣＤ－Ｃ１８ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍｎ（１０ｍｍ×８ｍｍ，Ｉｍｔａｋｔ）を連結したＣａｄｅｎｚａ ５ＣＤ－Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２０ｍｍ×１５０ｍｍ，Ｉｍｔａｋｔ）を使用した。
移動相には０．１％（ｖ／ｖ） ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（Ａ相）と０．１％（ｖ／ｖ） ＴＦＡ／ＭｅＣＮ（Ｂ相）を用い、０－３０分までＡ相９０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相１０％（ｖ／ｖ）からＡ相２０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相８０％（ｖ／ｖ）まで変化させ、３０－４０分でＡ相２０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相８０％（ｖ／ｖ）からＡ相０％（ｖ／ｖ）、Ｂ相１００％（ｖ／ｖ）まで変化させる直線グラジエント法により流速５．０ｍＬ／分で溶出した。
分子ふるいＨＰＬＣ（以下「ＳＥ－ＨＰＬＣ」ともいう）による分析はＣｏｓｍｏｓｉｌ ５ Ｄｉｏｌ－３００ＩＩ（７．５ｍｍ×６００ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）にＣｏｓｍｏｓｉｌ ５ Ｄｉｏｌ－３００ＩＩ ガードカラム（７．５ｍｍ×５０ｍｍ，Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を接続し、移動相に０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を使用して流速１．０ｍＬ／分で溶出した。
＜γ線検出器＞
６７Ｇａ標識化合物の分析には、γ線検出器Ｇａｂｉ ｓｔａｒ（Ｒａｙｔｅｓｔ社製）をオンラインで接続、又は溶出液をフラクションコレクターＦｒａｃ－９２０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ社製）により０．５分間隔で分取後、オートウェルガンマシステムＷＩＺＡＲＤ３（パーキンエルマー社製）により放射活性を測定することで分析した。
６７Ｇａ標識化合物の分析には、γ線検出器Ｇａｂｉ ｓｔａｒ（Ｒａｙｔｅｓｔ社製）をオンラインで接続、又は溶出液をフラクションコレクターＦｒａｃ－９２０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ社製）により０．５分間隔で分取後、オートウェルガンマシステムＷＩＺＡＲＤ３（パーキンエルマー社製）により放射活性を測定することで分析した。
＜動物実験＞
動物実験は、雄性のｄｄＹ系ＳＰＦマウス６週齢及び雄性のＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウス８～１０週齢（日本ＳＬＣ社より購入）、並びに雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラットを使用した。また、動物実験は、千葉大学の動物倫理委員会による承認を受けて実施した。
動物実験は、雄性のｄｄＹ系ＳＰＦマウス６週齢及び雄性のＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウス８～１０週齢（日本ＳＬＣ社より購入）、並びに雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラットを使用した。また、動物実験は、千葉大学の動物倫理委員会による承認を受けて実施した。
合成例１：ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）の合成
下記の合成経路に従い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成したトリペプチド配列Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓのεアミノ基をマレオイル化した後、ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡと塩基性条件下で反応させることによりＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を合成した。
下記の合成経路に従い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成したトリペプチド配列Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓのεアミノ基をマレオイル化した後、ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡと塩基性条件下で反応させることによりＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を合成した。
（１－１）Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＯＨの合成；工程（ａ）～（ｅ）
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ（１９５ｍｇ，０．３１３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２５０ｍｇ，０．４６９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３２７μＬ，１．８７６ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（２ｍＬ）中１．５時間反応させた後、Ｍｅｔｈａｎｏｌ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３２７μＬ，１．８７６ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止した。次いでｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌することで、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎを作製した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行い、Ｎα－Ｆｍｏｃ基の脱保護を確認した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄し、乾燥させた後、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ処理の際に生成するＮ－（９－ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅのＡ３０１における吸光度を測定することによりＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨの樹脂への導入量を定量した（０．２８０ｍｍｏｌ，８９．５％）。Ｈ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎ（０．２８０ｍｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ固相合成法により２．５等量のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．７８３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（ＤＩＣ，０．７８３ｍｍｏｌ）、１－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ（ＨＯＢｔ，０．７８３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中、室温で２時間撹拌した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行うことで、縮合反応の終了を確認した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌した。Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（０．７８３ｍｍｏｌ）を用いて同様の操作を行い、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎを作製した後、２％ ｈｙｄｒａｚｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）中室温で１時間撹拌することで、Ｄｄｅ基を除去した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：２，２，２－ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｌ：ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ＝３：１：６（２ ｍＬ）の混液中室温で２時間撹拌した。樹脂をろ去した後、ろ液を減圧留去して得られた残渣にｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（３ｍＬ）を加えることで結晶化させた。結晶をろ取し、ｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒで洗浄した後、減圧乾燥することでＢｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５１，Ｆｏｕｎｄ ４５１．
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ（１９５ｍｇ，０．３１３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ（２５０ｍｇ，０．４６９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３２７μＬ，１．８７６ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（２ｍＬ）中１．５時間反応させた後、Ｍｅｔｈａｎｏｌ（１ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３２７μＬ，１．８７６ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止した。次いでｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌することで、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎを作製した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行い、Ｎα－Ｆｍｏｃ基の脱保護を確認した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄し、乾燥させた後、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ処理の際に生成するＮ－（９－ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅのＡ３０１における吸光度を測定することによりＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨの樹脂への導入量を定量した（０．２８０ｍｍｏｌ，８９．５％）。Ｈ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎ（０．２８０ｍｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ固相合成法により２．５等量のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．７８３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（ＤＩＣ，０．７８３ｍｍｏｌ）、１－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ（ＨＯＢｔ，０．７８３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中、室温で２時間撹拌した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行うことで、縮合反応の終了を確認した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌した。Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（０．７８３ｍｍｏｌ）を用いて同様の操作を行い、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－Ｒｅｓｉｎを作製した後、２％ ｈｙｄｒａｚｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）中室温で１時間撹拌することで、Ｄｄｅ基を除去した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：２，２，２－ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｌ：ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ＝３：１：６（２ ｍＬ）の混液中室温で２時間撹拌した。樹脂をろ去した後、ろ液を減圧留去して得られた残渣にｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（３ｍＬ）を加えることで結晶化させた。結晶をろ取し、ｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒで洗浄した後、減圧乾燥することでＢｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５１，Ｆｏｕｎｄ ４５１．
（１－２）Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの合成；工程（ｆ）
Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＯＨ（６５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を氷冷下で飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ－（ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（ＮＭＣＭ）（３３ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下３０分撹拌した後、更に３０分室温で撹拌した。１Ｍ硫酸で中和した。Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ（５ｍＬ×３）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ液を減圧蒸留した。残渣を分取用ＴＬＣで精製し、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５３１，Ｆｏｕｎｄ ５３１．
Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＯＨ（６５ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を氷冷下で飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｍＬ）に溶解し、Ｎ－（ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｍａｌｅｉｍｉｄｅ（ＮＭＣＭ）（３３ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下３０分撹拌した後、更に３０分室温で撹拌した。１Ｍ硫酸で中和した。Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ（５ｍＬ×３）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ液を減圧蒸留した。残渣を分取用ＴＬＣで精製し、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ５３１，Ｆｏｕｎｄ ５３１．
（１－３）Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの合成；工程（ｇ）
Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨ（４１ｍｇ，７１．９μｍｏｌ）を４Ｎ ＨＣｌ／ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ ３ｍＬに溶解し、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、ｈｅｘａｎｅで共沸することで、Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの塩酸塩を白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３１，Ｆｏｕｎｄ ４３１．
Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨ（４１ｍｇ，７１．９μｍｏｌ）を４Ｎ ＨＣｌ／ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ ３ｍＬに溶解し、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、ｈｅｘａｎｅで共沸することで、Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの塩酸塩を白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４３１，Ｆｏｕｎｄ ４３１．
（１－４）ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨ（ＮＯＴＡ－ＦＧＫ－Ｍａｌ）の合成；工程（ｈ）
Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの塩酸塩（９．６ｍｇ，１３μｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解し、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（１２μＬ）を加えた。ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（９．７ｍｇ，２１μｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した後、ｍｉｌｌｉＱで１０倍に希釈し、分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８８１，Ｆｏｕｎｄ ８８１．
Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨの塩酸塩（９．６ｍｇ，１３μｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解し、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（１２μＬ）を加えた。ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（９．７ｍｇ，２１μｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した後、ｍｉｌｌｉＱで１０倍に希釈し、分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）－ＯＨを白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８８１，Ｆｏｕｎｄ ８８１．
合成例２：ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂの合成
（２－１）抗Ｆａｂフラグメントの作製
ＩｇＧ（９ｍｇ）を１０ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ ｃｙｓｔｅｉｎｅを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） １．５ｍＬに溶解し、ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐａｐａｉｎ ５０％ ｓｌｕｒｒｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製） ５００μＬを加え、３７℃で４２時間インキュベートした。反応終了後、１０ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を２ｍＬ加え、０．４５μｍのフィルターでろ過し、ろ液を回収した。ろ液を１０ｋＤａの限外ろ過膜を用いて２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に置換し、１ｍＬに濃縮した。その後、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラムを用いて精製を行い、Ｆａｂを得た。得られたＦａｂは、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を溶出溶媒とした流速１．０ｍＬ／ｍｉｎで溶出するＳＥ－ＨＰＬＣにより生成を確認し、Ａ２８０を測定することで濃度を算出した。
（２－１）抗Ｆａｂフラグメントの作製
ＩｇＧ（９ｍｇ）を１０ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ及び２０ｍＭ ｃｙｓｔｅｉｎｅを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） １．５ｍＬに溶解し、ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｐａｐａｉｎ ５０％ ｓｌｕｒｒｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製） ５００μＬを加え、３７℃で４２時間インキュベートした。反応終了後、１０ｍＭ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を２ｍＬ加え、０．４５μｍのフィルターでろ過し、ろ液を回収した。ろ液を１０ｋＤａの限外ろ過膜を用いて２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に置換し、１ｍＬに濃縮した。その後、ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラムを用いて精製を行い、Ｆａｂを得た。得られたＦａｂは、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を溶出溶媒とした流速１．０ｍＬ／ｍｉｎで溶出するＳＥ－ＨＰＬＣにより生成を確認し、Ａ２８０を測定することで濃度を算出した。
（２－２）ＩＴ－Ｆａｂの作製
十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１６Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．０）を用いてＦａｂ溶液（２００μＬ，２．０ｍｇ／ｍＬ）を調製し、同じ緩衝液に溶解した２－ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ（２－ＩＴ）（７．５μＬ，２．０ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で３０分間反応した。反応後、十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法により反応溶液中の過剰の２－ＩＴを除去した。Ｆａｂ１分子あたりに導入されたチオール基の数は、２，２’－ｄｉｐｙｒｉｄｙｌ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ（ＤＰＳ）を用いて測定した。
十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１６Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．０）を用いてＦａｂ溶液（２００μＬ，２．０ｍｇ／ｍＬ）を調製し、同じ緩衝液に溶解した２－ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ（２－ＩＴ）（７．５μＬ，２．０ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で３０分間反応した。反応後、十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法により反応溶液中の過剰の２－ＩＴを除去した。Ｆａｂ１分子あたりに導入されたチオール基の数は、２，２’－ｄｉｐｙｒｉｄｙｌ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ（ＤＰＳ）を用いて測定した。
（２－３）ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂの作製
２－ＩＴによりチオール化したＦａｂ溶液（１．６ｍｇ／ｍＬ，９５μＬ）にＤＭＦに溶解したＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）（１．２５μＬ，５０ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で１時間反応した。反応後、十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法により反応溶液中の過剰のＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を除去した。次いで、２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を用いてｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製し、これを１２．５μＬ 加えた後、３７℃で１時間反応を行い、未反応のチオール基をアルキル化した。その後、０．２５Ｍ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法で精製した。Ｆａｂ１分子あたりに導入されたキレートの数は、反応前後に行ったＤＰＳを用いたチオール基の定量により算出した。
２－ＩＴによりチオール化したＦａｂ溶液（１．６ｍｇ／ｍＬ，９５μＬ）にＤＭＦに溶解したＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）（１．２５μＬ，５０ｍｇ／ｍＬ）を加え、３７℃で１時間反応した。反応後、十分脱気した２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法により反応溶液中の過剰のＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を除去した。次いで、２ｍＭ ＥＤＴＡ含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を用いてｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製し、これを１２．５μＬ 加えた後、３７℃で１時間反応を行い、未反応のチオール基をアルキル化した。その後、０．２５Ｍ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法で精製した。Ｆａｂ１分子あたりに導入されたキレートの数は、反応前後に行ったＤＰＳを用いたチオール基の定量により算出した。
合成例３：６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂの合成
６７ＧａＣｌ３（５μＬ、ＰＤＲファーマ株式会社製）を０．２５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５，５μＬ）に混和し、室温で５分間静置した。ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂ溶液（１０μＬ）を混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。２０ｍＭ ＥＤＴＡ溶液（２０μＬ）を加えた後、Ｄ－ＰＢＳ（－）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法で精製することで、６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを作製した。ＴＬＣ、ＳＥ－ＨＰＬＣにおいて放射化学的収率９５％以上を確認した。
６７ＧａＣｌ３（５μＬ、ＰＤＲファーマ株式会社製）を０．２５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５，５μＬ）に混和し、室温で５分間静置した。ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂ溶液（１０μＬ）を混合した後、３７℃で１時間インキュベートした。２０ｍＭ ＥＤＴＡ溶液（２０μＬ）を加えた後、Ｄ－ＰＢＳ（－）で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０ Ｆｉｎｅを用いるスピンカラム法で精製することで、６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを作製した。ＴＬＣ、ＳＥ－ＨＰＬＣにおいて放射化学的収率９５％以上を確認した。
比較合成例Ｃ１：ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）の合成
ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
比較合成例Ｃ２：６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂの合成
合成例２においてＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）に替えてＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を用いる以外は同様にして、ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを作製した。次いで、合成例３においてＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂに替えてＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを用いる以外は同様にして、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを合成した。
ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
比較合成例Ｃ２：６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂの合成
合成例２においてＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）に替えてＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｍａｌ）を用いる以外は同様にして、ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを作製した。次いで、合成例３においてＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂに替えてＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを用いる以外は同様にして、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂを合成した。
合成例４：ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
（４－１）ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙの合成
ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（５ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を最終濃度が１０～１００ｍｇ／ｍＬとなるように０．１Ｍ ホウ酸緩衝液ｐＨ９．０に溶解し、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に調整後、ＰｈｅあるいはＰｈｅ－Ｇｌｙ（０．０１１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応した。分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ６１６，Ｆｏｕｎｄ ６１６，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ： ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６７３，Ｆｏｕｎｄ ６７３．
（４－１）ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙの合成
ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（５ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を最終濃度が１０～１００ｍｇ／ｍＬとなるように０．１Ｍ ホウ酸緩衝液ｐＨ９．０に溶解し、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に調整後、ＰｈｅあるいはＰｈｅ－Ｇｌｙ（０．０１１ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応した。分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ６１６，Ｆｏｕｎｄ ６１６，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ： ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６７３，Ｆｏｕｎｄ ６７３．
（４－２）Ｎ－（Ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ）ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅの合成
Ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ（１．０ｇ，８．２０ｍｍｏｌ）及びＮ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ（１．０４ｇ，９．０２ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解し、アルゴン雰囲気下０℃で１０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解したｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（１．８６ｇ，９．０２ｍｍｏｌ）を滴下した。室温に戻し、１２時間撹拌後、沈殿を濾去し、溶媒を減圧留去することでＮ－（Ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ）ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅの粗精製物２．０６ｇを白色固体として得た。この化合物は少量のウレアを含むが、そのまま次の反応に用いた。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ２．９１（４Ｈ，ｔ，ＣＨ２），８．００－８．２４（５Ｈ，ｍ，Ａｒ－Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２２０，Ｆｏｕｎｄ ２２０．
Ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ（１．０ｇ，８．２０ｍｍｏｌ）及びＮ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ（１．０４ｇ，９．０２ｍｍｏｌ）を３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解し、アルゴン雰囲気下０℃で１０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解したｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（１．８６ｇ，９．０２ｍｍｏｌ）を滴下した。室温に戻し、１２時間撹拌後、沈殿を濾去し、溶媒を減圧留去することでＮ－（Ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ）ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅの粗精製物２．０６ｇを白色固体として得た。この化合物は少量のウレアを含むが、そのまま次の反応に用いた。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ２．９１（４Ｈ，ｔ，ＣＨ２），８．００－８．２４（５Ｈ，ｍ，Ａｒ－Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２２０，Ｆｏｕｎｄ ２２０．
（４－３）Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨの合成
Ｎ－（Ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ）ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ（２７ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ １ｍＬに溶解し、ｍｉｌｌｉＱ水（１ｍＬ）に溶解したＦｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ・ＨＣｌ（５０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（２０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）に滴下後、室温で激しく撹拌した。２４時間撹拌後、１Ｎ 塩酸で酸性とした後、ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（５ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、ｈｅｘａｎｅ：ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ：ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ＝１：２：０．１を溶出溶媒とするオープンカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨ ５７ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ，４９％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．４８－１．９４（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２），３．４６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２），３．７３－４．４０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ，ＣＨ２），７．２３－８．０６（１３Ｈ，ｍ，Ａｒ－Ｈ）； ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７３，Ｆｏｕｎｄ ４７３．１４．
Ｎ－（Ｂｅｎｚｏｙｌｏｘｙ）ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ（２７ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ １ｍＬに溶解し、ｍｉｌｌｉＱ水（１ｍＬ）に溶解したＦｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ・ＨＣｌ（５０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（２０ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）に滴下後、室温で激しく撹拌した。２４時間撹拌後、１Ｎ 塩酸で酸性とした後、ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（５ｍＬ×３）で抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、ｈｅｘａｎｅ：ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ：ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ＝１：２：０．１を溶出溶媒とするオープンカラムクロマトグラフィーにより精製し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨ ５７ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ，４９％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．４８－１．９４（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２），３．４６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２），３．７３－４．４０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ，ＣＨ２），７．２３－８．０６（１３Ｈ，ｍ，Ａｒ－Ｈ）； ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４７３，Ｆｏｕｎｄ ４７３．１４．
（４－４）Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ（３２ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨ（３７ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３６μＬ，０．２０９ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（０．５ｍＬ）中１．５時間反応させた後、Ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．２ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３６μＬ，０．２０９ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止した。樹脂をＤＭＦ次いでｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌し、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎを作製した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行い、Ｎα－Ｆｍｏｃ基の脱保護を確認した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄し、乾燥させた後、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ処理の際に生成するＮ－（９－ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅのＡ３０１における吸光度を測定することによりＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨの樹脂への導入量を定量した（０．０４０ｍｍｏｌ，７６％）。Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎ（０．０２６ｍｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ固相合成法により２．５等量のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．０６５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（ＤＩＣ，１０μＬ，０．０６５ｍｍｏｌ）、１－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ（ＨＯＢｔ，０．０６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中、室温で２時間撹拌した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行うことで、縮合反応の終了を確認した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌した。同様の操作をＦｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（０．０６５ｍｍｏｌ）を用いて行うことで、Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎを作製後、ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：２，２，２－ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｌ：ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ＝３：１：６（２ｍＬ）の混液中室温で２時間撹拌した。樹脂をろ去した後、ろ液を減圧留去して得られた残渣にｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（３ｍＬ）を加えることで結晶化させた。結晶をろ取し、ｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒで洗浄した後、減圧乾燥することＨ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の酢酸塩（９．７ｍｇ，６９．０％）を白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５５，Ｆｏｕｎｄ ４５５．
Ｃｌ－Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）Ｒｅｓｉｎ（３２ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨ（３７ｍｇ，０．０７８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３６μＬ，０．２０９ｍｍｏｌ）をｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ（０．５ｍＬ）中１．５時間反応させた後、Ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．２ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（３６μＬ，０．２０９ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止した。樹脂をＤＭＦ次いでｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄後、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌し、Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎを作製した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行い、Ｎα－Ｆｍｏｃ基の脱保護を確認した。樹脂をＤＭＦ及びｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅで洗浄し、乾燥させた後、ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ処理の際に生成するＮ－（９－ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅのＡ３０１における吸光度を測定することによりＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－ＯＨの樹脂への導入量を定量した（０．０４０ｍｍｏｌ，７６％）。Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎ（０．０２６ｍｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ固相合成法により２．５等量のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．０６５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ（ＤＩＣ，１０μＬ，０．０６５ｍｍｏｌ）、１－ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ（ＨＯＢｔ，０．０６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中、室温で２時間撹拌した。樹脂の一部を採取してＫａｉｓｅｒ ｔｅｓｔを行うことで、縮合反応の終了を確認した後、ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２０％ ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ／ＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、２０分間室温で撹拌した。同様の操作をＦｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ（０．０６５ｍｍｏｌ）を用いて行うことで、Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）－Ｒｅｓｉｎを作製後、ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ：２，２，２－ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｅｔｈａｎｏｌ：ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ＝３：１：６（２ｍＬ）の混液中室温で２時間撹拌した。樹脂をろ去した後、ろ液を減圧留去して得られた残渣にｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ（３ｍＬ）を加えることで結晶化させた。結晶をろ取し、ｄｉｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒで洗浄した後、減圧乾燥することＨ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の酢酸塩（９．７ｍｇ，６９．０％）を白色結晶として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ４５５，Ｆｏｕｎｄ ４５５．
（４－５）ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（５ｍｇ，１１μｍｏｌ）を最終濃度が１０～１００ｍｇ／ｍＬとなるように０．１Ｍ ホウ酸緩衝液ｐＨ９．０に溶解し、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に調整後、Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（５．０ｍｇ，１１μｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応した。分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ） ７．７ｍｇ（７７％）を白色固体として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９０５，Ｆｏｕｎｄ ９０５．
ｐ－ＳＣＮ－ＮＯＴＡ（５ｍｇ，１１μｍｏｌ）を最終濃度が１０～１００ｍｇ／ｍＬとなるように０．１Ｍ ホウ酸緩衝液ｐＨ９．０に溶解し、０．１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８～９に調整後、Ｈ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（５．０ｍｇ，１１μｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応した。分取用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ） ７．７ｍｇ（７７％）を白色固体として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９０５，Ｆｏｕｎｄ ９０５．
合成例５：６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
６７ＧａＣｌ３（１．０μＬ）を０．１Ｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．５，１０μＬ）に混和し、室温で５分間静置した。ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）溶液（２．０×１０－４Ｍ，１０μＬ）を混合した後、３７℃で１時間反応することで、６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を合成した。非放射性Ｇａ錯体とＲＰ－ＨＰＬＣの保持時間が一致したことにより生成を確認した。
非放射性Ｇａ錯体は、ＧａＣｌ３（１．１ｍｇ，６．５μｍｏｌ）を０．２５Ｍ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５，５０μＬ）に溶解しＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ（３μｍｏｌ）を加えた。室温で１時間反応後、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、非放射性Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙを白色固体として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ： ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６８３，Ｆｏｕｎｄ ６８３，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ７３９，Ｆｏｕｎｄ ７３９，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｂｚｏ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ９７１，Ｆｏｕｎｄ ９７１．
６７ＧａＣｌ３（１．０μＬ）を０．１Ｍ 酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５．５，１０μＬ）に混和し、室温で５分間静置した。ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）溶液（２．０×１０－４Ｍ，１０μＬ）を混合した後、３７℃で１時間反応することで、６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を合成した。非放射性Ｇａ錯体とＲＰ－ＨＰＬＣの保持時間が一致したことにより生成を確認した。
非放射性Ｇａ錯体は、ＧａＣｌ３（１．１ｍｇ，６．５μｍｏｌ）を０．２５Ｍ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５，５０μＬ）に溶解しＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ（３μｍｏｌ）を加えた。室温で１時間反応後、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製し、非放射性Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙを白色固体として得た。
ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ： ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６８３，Ｆｏｕｎｄ ６８３，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ７３９，Ｆｏｕｎｄ ７３９，Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｂｚｏ：［Ｍ＋Ｈ］＋ ９７１，Ｆｏｕｎｄ ９７１．
比較合成例Ｃ３：ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
比較合成例Ｃ４：６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）の合成
６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）を、特許文献１の記載に準じて合成した。
測定例１：ＢＢＭＶｓ（腎刷子縁膜小胞）とのインキュベート試験
（ＢＢＭＶｓ（腎刷子縁膜小胞）の調製）
腎刷子縁膜小胞（Ｂｒｕｓｈ Ｂｏｒｄｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｖｅｓｉｃｌｅｓ；ＢＢＭＶｓ）はＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（２００－２５０ｇ）の腎臓からＨｏｒｉらの方法に従って作製した［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４５：１７６３－１７６８，１９９３］。全ての操作は氷上で行った。皮質に質量で４～５倍の３００ｍＭ ｍａｎｎｉｔｏｌ、及び５ｍＭ ＥＧＴＡを含む１２ｍＭ トリス－塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）を加え、ポリトロンホモジナイザーＰＴ－３１００（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ ＧｍｇＨ製）で２分間ホモジナイズし、同じ緩衝液で希釈することで１０％ホモジネートとした。次いで、蒸留水で２倍に希釈した後、最終濃度が１０ｍＭとなるよう、１．０Ｍに調整したＭｇＣｌ２水溶液を加え、１５分間放置した。その後、ホモジネートを１，９００ｇで遠心し、上清を更に３０分間２４，０００ｇで遠心した。沈殿を皮質質量の２０倍に相当する１５０ｍＭ ｍａｎｎｉｔｏｌ、及び２．５ｍＭ ＥＧＴＡを含む６ｍＭ トリス－塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）に再懸濁し、テフロン（商標）ホモジナイザー（１，０００ｒｐｍ，１０ｓｔｒｏｋｅｓ）によりホモジナイズした。次いで、最終濃度が１０ｍＭとなるように１．０Ｍ ＭｇＣｌ２水溶液を加え、懸濁液を１５分間放置し、その後、ホモジネートを１，９００ｇで遠心し、上清を更に３０分間２４，０００ｇで遠心した。得られた沈殿を皮質質量の１０倍に相当する０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、再度テフロン（商標）ホモジナイザー（１，０００ｒｐｍ，１０ｓｔｒｏｋｅｓ）によりホモジナイズした。次いで。ホモジネートを３０分間２４，０００ｇで遠心し、ＢＢＭＶｓを沈殿として得た。次いで、ＢＢＭＶｓの沈殿を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に再懸濁し、０．４ｍｍ×１９ｍｍの針に１０回通すことで小胞の大きさを一定にした。インキュベート試験にはタンパク質濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように希釈して用いた。調製したＢＢＭＶｓについて、リソソームマーカー酵素であるβ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ活性をｐ－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏ－ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅを用いて測定することにより、リソソーム酵素の混入を評価した［Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ５５：９４－９８，１９７５］。また、γ－ｇｌｕｔａｍｙｌ ｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの活性を、Ｇｌｏｓｓｍａｎｎら［ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９：３４０－３４４，１９７２］、Ｋｒａｍｅｒｓら［Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９９：３４５－３５１，１９７９］の方法に従い、Ｌ－γ－ｇｌｕｔａｍｙｌ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ、Ｌ－ｌｅｕｃｉｎｅ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅを用いて測定した。
（ＢＢＭＶｓ（腎刷子縁膜小胞）の調製）
腎刷子縁膜小胞（Ｂｒｕｓｈ Ｂｏｒｄｅｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｖｅｓｉｃｌｅｓ；ＢＢＭＶｓ）はＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（２００－２５０ｇ）の腎臓からＨｏｒｉらの方法に従って作製した［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４５：１７６３－１７６８，１９９３］。全ての操作は氷上で行った。皮質に質量で４～５倍の３００ｍＭ ｍａｎｎｉｔｏｌ、及び５ｍＭ ＥＧＴＡを含む１２ｍＭ トリス－塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）を加え、ポリトロンホモジナイザーＰＴ－３１００（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ ＧｍｇＨ製）で２分間ホモジナイズし、同じ緩衝液で希釈することで１０％ホモジネートとした。次いで、蒸留水で２倍に希釈した後、最終濃度が１０ｍＭとなるよう、１．０Ｍに調整したＭｇＣｌ２水溶液を加え、１５分間放置した。その後、ホモジネートを１，９００ｇで遠心し、上清を更に３０分間２４，０００ｇで遠心した。沈殿を皮質質量の２０倍に相当する１５０ｍＭ ｍａｎｎｉｔｏｌ、及び２．５ｍＭ ＥＧＴＡを含む６ｍＭ トリス－塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）に再懸濁し、テフロン（商標）ホモジナイザー（１，０００ｒｐｍ，１０ｓｔｒｏｋｅｓ）によりホモジナイズした。次いで、最終濃度が１０ｍＭとなるように１．０Ｍ ＭｇＣｌ２水溶液を加え、懸濁液を１５分間放置し、その後、ホモジネートを１，９００ｇで遠心し、上清を更に３０分間２４，０００ｇで遠心した。得られた沈殿を皮質質量の１０倍に相当する０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、再度テフロン（商標）ホモジナイザー（１，０００ｒｐｍ，１０ｓｔｒｏｋｅｓ）によりホモジナイズした。次いで。ホモジネートを３０分間２４，０００ｇで遠心し、ＢＢＭＶｓを沈殿として得た。次いで、ＢＢＭＶｓの沈殿を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に再懸濁し、０．４ｍｍ×１９ｍｍの針に１０回通すことで小胞の大きさを一定にした。インキュベート試験にはタンパク質濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように希釈して用いた。調製したＢＢＭＶｓについて、リソソームマーカー酵素であるβ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ活性をｐ－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ－β－Ｄ－ｇａｌａｃｔｏ－ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅを用いて測定することにより、リソソーム酵素の混入を評価した［Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ５５：９４－９８，１９７５］。また、γ－ｇｌｕｔａｍｙｌ ｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅの活性を、Ｇｌｏｓｓｍａｎｎら［ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９：３４０－３４４，１９７２］、Ｋｒａｍｅｒｓら［Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ９９：３４５－３５１，１９７９］の方法に従い、Ｌ－γ－ｇｌｕｔａｍｙｌ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅ、Ｌ－ｌｅｕｃｉｎｅ－ｐ－ｎｉｔｒｏａｎｉｌｉｄｅを用いて測定した。
（インキュベート試験）
ＢＢＭＶｓと６７Ｇａ標識低分子モデル基質のインキュベート試験は以下の方法で行った。タンパク質濃度を１０ｍｇ／ｍＬとなるように調製したＢＢＭＶｓ（１０μＬ）を、３７ ℃で１０分間プレインキュベートした。その後、逆相ＨＰＬＣによって過剰の配位子を除去してＰＢＳに溶解した６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）又は６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）溶液（１０μＬ）を加え、３７℃で２時間インキュベートした。ＢＢＭＶｓ溶液に対してエタノール濃度が６０％となるようにエタノールを加え、５０００ｒｐｍで１０分間遠心した。上清を回収後、沈殿に６０％エタノールを加え再度同様の方法で遠心した後に、上清を回収した。得られた上清を、ＨＰＬＣにてＩｍｔａｋｔ Ｕｎｉｓｏｎ ＵＳ－Ｃ１８ １５０ｍｍ×４．６ｍｍを用い移動相にはＡ相に０．１％ＴＦＡ／ＭｉｌｌｉＱ、Ｂ相に０．１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮを使用し、０－３０分でＡ相１００％、Ｂ相０％からＡ相５５％、Ｂ相４５％まで変化させる直線ｇｒａｄｉｅｎｔ法により流速１ｍＬ／ｍｉｎで分析を行った。
図１は、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（図中「ＭＶＫ」）又は６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（図中「ＦＧＫ」）とＢＢＭＶｓのインキュベートの実験結果を示す。図中の数値はインキュベートしたＢＢＭＶｓ中の放射活性（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ）１００％に対する、生成した代謝物の放射活性の百分率（％）である。
６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅのピークではなく、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙのピークが観察された。６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙの遊離量は、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）から遊離される６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔの量に比べて低値であった。
ＢＢＭＶｓと６７Ｇａ標識低分子モデル基質のインキュベート試験は以下の方法で行った。タンパク質濃度を１０ｍｇ／ｍＬとなるように調製したＢＢＭＶｓ（１０μＬ）を、３７ ℃で１０分間プレインキュベートした。その後、逆相ＨＰＬＣによって過剰の配位子を除去してＰＢＳに溶解した６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）又は６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）溶液（１０μＬ）を加え、３７℃で２時間インキュベートした。ＢＢＭＶｓ溶液に対してエタノール濃度が６０％となるようにエタノールを加え、５０００ｒｐｍで１０分間遠心した。上清を回収後、沈殿に６０％エタノールを加え再度同様の方法で遠心した後に、上清を回収した。得られた上清を、ＨＰＬＣにてＩｍｔａｋｔ Ｕｎｉｓｏｎ ＵＳ－Ｃ１８ １５０ｍｍ×４．６ｍｍを用い移動相にはＡ相に０．１％ＴＦＡ／ＭｉｌｌｉＱ、Ｂ相に０．１％ ＴＦＡ／ＭｅＣＮを使用し、０－３０分でＡ相１００％、Ｂ相０％からＡ相５５％、Ｂ相４５％まで変化させる直線ｇｒａｄｉｅｎｔ法により流速１ｍＬ／ｍｉｎで分析を行った。
図１は、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（図中「ＭＶＫ」）又は６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）（図中「ＦＧＫ」）とＢＢＭＶｓのインキュベートの実験結果を示す。図中の数値はインキュベートしたＢＢＭＶｓ中の放射活性（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ）１００％に対する、生成した代謝物の放射活性の百分率（％）である。
６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｐｈｅのピークではなく、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙのピークが観察された。６７Ｇａ－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙの遊離量は、６７Ｇａ標識ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ（Ｂｚｏ）から遊離される６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔの量に比べて低値であった。
測定例２：マウス体内動態の測定
上述の方法により調製した６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＦａｂをＤ－ＰＢＳ（－）で希釈した。マウス尾静脈より、Ｆａｂ濃度を５μｇ／１００μＬに調整した６７Ｇａ標識Ｆａｂ溶液（０．３μＣｉ／１００μＬ／匹）を投与した。投与後１０分、１時間、３時間、６時間に各群５～３匹のマウスを屠殺し、血液（Ｂｌｏｏｄ）及び関心臓器（肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、腎臓（Ｋｉｄｎｅｙ）、脾臓（Ｓｐｌｅｅｎ）、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）及び腸（Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ））を採取し、質量を測定後、オートウェルガンマシステムにより放射活性を測定した。また、投与６時間後までの糞尿を採取し、糞尿中に含まれる放射活性をオートウェルガンマシステムにより測定した。
対照として、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂについても、同様にしてマウス体内動態を測定した。
結果を表１に示す。
上述の方法により調製した６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－ＦａｂをＤ－ＰＢＳ（－）で希釈した。マウス尾静脈より、Ｆａｂ濃度を５μｇ／１００μＬに調整した６７Ｇａ標識Ｆａｂ溶液（０．３μＣｉ／１００μＬ／匹）を投与した。投与後１０分、１時間、３時間、６時間に各群５～３匹のマウスを屠殺し、血液（Ｂｌｏｏｄ）及び関心臓器（肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、腎臓（Ｋｉｄｎｅｙ）、脾臓（Ｓｐｌｅｅｎ）、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）及び腸（Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ））を採取し、質量を測定後、オートウェルガンマシステムにより放射活性を測定した。また、投与６時間後までの糞尿を採取し、糞尿中に含まれる放射活性をオートウェルガンマシステムにより測定した。
対照として、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂについても、同様にしてマウス体内動態を測定した。
結果を表１に示す。
表中の数値は体内放射活性分布の経時変化を示し、その単位は、胃及び腸以外は、臓器又は組織１ｇあたりの放射能投与量（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｄｏｓｅ）１００％に対する放射能集積率（％）［％ＩＤ／ｇ］であり、胃及び腸については、臓器又は組織あたりの放射能投与量（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｄｏｓｅ）１００％に対する放射能集積率（％）［％ＩＤ］である。
６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂと６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂとの間で、腎放射活性に有意な差が認められた。６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－ＦＧＫ－Ｆａｂは投与後経時的に腎臓からの放射活性が低減し、投与１時間後において、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－ＭＶＫ－Ｆａｂと比較し有意に低値を示した。
一方で、血液クリアランスは同様の結果であった。
一方で、血液クリアランスは同様の結果であった。
測定例３：マウス体内動態の測定
（細胞培養）
脳腫瘍細胞Ｕ８７ＭＧの培養は、以下の条件により行った。培養容器として１５０ｍｍ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｄｉｓｈ－Ｔｒｅａｔｅｄ（トゥルーライン社製）を使用し、培地として１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（株式会社日本生物材料センター製）及び１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシン（５０００ｕｎｉｔ－５０００μｇ／ｍＬ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ライフ・テクノロジーズ・ジャパン社製）を添加したＤＭＥＭ培地（富士フイルム和光純薬株式会社製）を使用し３７℃，５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２，飽和水蒸気圧下でインキュベートした。
（腫瘍モデルマウスの作製）
ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウス（雄性，８～１０週齢）の左足大腿部皮下に３×１０６個のＵ８７ＭＧ細胞を移植した。腫瘍モデルマウスとして、４～５週間後に腫瘍サイズが０．４ｇ～１．０ｇに成長した担癌マウスを得た。
（細胞培養）
脳腫瘍細胞Ｕ８７ＭＧの培養は、以下の条件により行った。培養容器として１５０ｍｍ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｄｉｓｈ－Ｔｒｅａｔｅｄ（トゥルーライン社製）を使用し、培地として１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（株式会社日本生物材料センター製）及び１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシン（５０００ｕｎｉｔ－５０００μｇ／ｍＬ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ライフ・テクノロジーズ・ジャパン社製）を添加したＤＭＥＭ培地（富士フイルム和光純薬株式会社製）を使用し３７℃，５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２，飽和水蒸気圧下でインキュベートした。
（腫瘍モデルマウスの作製）
ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウス（雄性，８～１０週齢）の左足大腿部皮下に３×１０６個のＵ８７ＭＧ細胞を移植した。腫瘍モデルマウスとして、４～５週間後に腫瘍サイズが０．４ｇ～１．０ｇに成長した担癌マウスを得た。
（体内動態の測定）
上述の方法により調製した６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂと６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂをリン酸緩衝生理食塩水（１ｍＭ，ｐＨ７．４）で希釈した。上記腫瘍モデルマウスの尾静脈より、Ｆａｂ濃度を５μｇ／１００μＬに調整した各放射性金属標識Ｆａｂ溶液（０．３μＣｉ／１００μＬ／匹）を投与した。投与後１時間及び３時間に各群５匹のマウスを屠殺し、血液及び関心臓器を採取し、質量を測定後、オートウェルガンマシステムにより放射活性を測定した。
結果を表２に示す。
上述の方法により調製した６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂと６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂをリン酸緩衝生理食塩水（１ｍＭ，ｐＨ７．４）で希釈した。上記腫瘍モデルマウスの尾静脈より、Ｆａｂ濃度を５μｇ／１００μＬに調整した各放射性金属標識Ｆａｂ溶液（０．３μＣｉ／１００μＬ／匹）を投与した。投与後１時間及び３時間に各群５匹のマウスを屠殺し、血液及び関心臓器を採取し、質量を測定後、オートウェルガンマシステムにより放射活性を測定した。
結果を表２に示す。
表中の数値は体内放射活性分布の経時変化を示し、その単位は、胃及び腸以外は、臓器又は組織１ｇあたりの放射能投与量（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｄｏｓｅ）１００％に対する放射能集積率（％）［％ＩＤ／ｇ］であり、胃及び腸については、臓器又は組織あたりの放射能投与量（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｄｏｓｅ）１００％に対する放射能集積率（％）［％ＩＤ］である。
６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂと６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｍｅｔ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｆａｂとの間で、腎放射活性に有意な差が認められた。６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－ＦＧＫ－Ｆａｂは投与後経時的に腎臓からの放射活性が低減し、投与１時間後及び３時間後において、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－ＭＶＫ－Ｆａｂと比較し有意に低値を示した。
一方で、腫瘍への集積は同様の結果であった。
一方で、腫瘍への集積は同様の結果であった。
本発明の効果が達成される理由は必ずしも明らかでないが、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｆａｂは腎刷子縁膜上の酵素作用により６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙが速やかに生じ、６７Ｇａ標識－ＮＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙは高い尿排泄性を有していることが寄与すると考えられる。
Claims (8)
- 下記式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
Ｒ１は、それぞれ独立に、水素原子又は炭素数１～８の炭化水素基であり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］ - Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
- 請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬を調製するための組成物。
- 下記式（２）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
＊Ｍは、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕであり、
Ｒ２は、水素原子又は炭素数１～８の有機基であり、
Ｌ１は、単結合又はリンカー基であり、
Ｙは、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐ、水素原子又は標的分子認識素子であり、
Ｘ１は、水素原子又は薬学的に許容可能な陽イオンであり、
Ｒ２及びＬ１は互いに結合して隣接する窒素原子とともに炭素数３～１０の窒素含有複素環を形成することができる。］ - Ｙが、タンパク質若しくはペプチドに由来する１価の基Ｐである、請求項４に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
- 請求項４又は５に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む、放射性標識医薬組成物。
- 下記工程（ａ１）～（ａ２）を含む方法（Ｉ）又は下記工程（ｂ１）～（ｂ２）を含む方法（II）のいずれかである、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
｛方法（Ｉ）｝
（ａ１）下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基と、下記式（ii）で表される化合物のフェニルアラニン残基のＮ末端とを反応させる工程、
（ａ２）工程（ａ１）で得られた化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａ又は該アミノ基と、下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ又はＰの分子末端とを反応させる工程；
｛方法（II）｝
（ｂ１）下記式（iii）で表される化合物のリンカー基Ｌ１ｂ若しくはＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基に導入したリンカー基Ｌ１ａとを反応させる工程、又は、下記式（iii）で表される化合物のＰの分子末端と、下記式（ii）で表される化合物のリジン残基の側鎖のアミノ基とを反応させる工程、
（ｂ２）工程（ｂ１）で得られた化合物のＮ末端のフェニルアラニン残基のアミノ基と、下記式（ｉ）で表される化合物のイソチオシアネート基とを反応させる工程
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立に、水素原子又はアミノ基の保護基であり、
Ｚ３は、水素原子、カルボキシ基の保護基又は固相への結合である。］
ｍは０又は１であり、
ｍが０の場合は、Ｐは、タンパク質又はペプチドであり、
ｍが１の場合は、Ｌ１ｂは、リンカー基であり、Ｐはタンパク質又はペプチドに由来する１価の基である。］ - 請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１８Ｆ－Ａｌ、６４Ｃｕ又は６７Ｃｕの塩とを反応させる工程を含む、請求項４又は５に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
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|---|---|---|---|
| JP2022210738 | 2022-12-27 | ||
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|---|---|
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|---|---|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010108125A2 (en) * | 2009-03-19 | 2010-09-23 | The Johns Hopkins University | Psma-targeting compounds and uses thereof |
| WO2017150549A1 (ja) | 2016-03-01 | 2017-09-08 | 国立大学法人 千葉大学 | 放射性標識薬剤 |
| JP2019525910A (ja) * | 2016-07-01 | 2019-09-12 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | グランザイムｂを指向するイメージングおよび治療 |
-
2023
- 2023-12-26 WO PCT/JP2023/046536 patent/WO2024143314A1/ja active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2010108125A2 (en) * | 2009-03-19 | 2010-09-23 | The Johns Hopkins University | Psma-targeting compounds and uses thereof |
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