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WO2020251346A1 - Compuestos activadores de senescencia celular - Google Patents

Compuestos activadores de senescencia celular Download PDF

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Publication number
WO2020251346A1
WO2020251346A1 PCT/MX2020/050010 MX2020050010W WO2020251346A1 WO 2020251346 A1 WO2020251346 A1 WO 2020251346A1 MX 2020050010 W MX2020050010 W MX 2020050010W WO 2020251346 A1 WO2020251346 A1 WO 2020251346A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
group
guayulin
synthesis
subsequently
Prior art date
Application number
PCT/MX2020/050010
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Zaira TAVARES SANTAMARIA
Mariano MARTINEZ VAZQUEZ
Nadia Judith JACOBO HERRERA
Leticia ROCHA ZABALETA
Alejandro ZENTELLA DEHESA
Beatriz del Carmen COUDER GARCIA
Original Assignee
Universidad Nacional Autonoma De Mexico
Guayulera San Salvador Y Plantas Del Desierto Spr De Rl De Cv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Priority to EP20822864.3A priority patent/EP3988521A4/en
Priority to JP2021573470A priority patent/JP2022536698A/ja
Publication of WO2020251346A1 publication Critical patent/WO2020251346A1/es

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/76—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C07C59/80—Unsaturated compounds containing keto groups containing rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C59/82—Unsaturated compounds containing keto groups containing rings other than six-membered aromatic rings the keto group being part of a ring
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    • A61K31/585—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin containing lactone rings, e.g. oxandrolone, bufalin
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    • C07C2603/02—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems
    • C07C2603/52—Ortho- or ortho- and peri-condensed systems containing five condensed rings

Definitions

  • the present invention relates to the field of medicinal chemistry with an emphasis on the therapeutic effects of compounds of natural origin.
  • Cancer is currently one of the diseases of greatest concern worldwide and a challenge for public health systems, especially for developing countries, due to the economic and social aspects that the disease entails.
  • cytotoxic drugs are considered the most toxic drugs that can be prescribed to a human being and among them are the drugs most used in Mexico (for example, cisplatin, 5-fluorouracil, epirubicin , gemcitabine, capecitabine, paclitaxel, etoposide, among others). Many of these have a therapeutic index of 1, which means that the therapeutic dose is practically the same as the toxic dose. Mainly, cytotoxic drugs can affect the bone marrow, gastrointestinal mucosa and hair follicles due to the fact that these tissues have a high growth factor and it is precisely where these types of drugs exert their mechanism of action.
  • cytotoxic drug Depending on the type of cytotoxic drug, cardiotoxicity, ototoxicity, hepatotoxicity and nephrotoxicity can also occur (Waller and Sampson, 2018). Importantly, the compounds described in the present invention have demonstrated greater safety in toxicological studies performed compared to a reference cytotoxic drug.
  • cytotoxic compounds The high toxicity of cytotoxic compounds is associated with their mechanism of action, since they intervene in the synthesis of cancer cell DNA, but their selectivity is limited since this process is also carried out in non-malignant cells and some of them may have growth rates similar to the malignant ones.
  • the alteration in DNA synthesis generated by cytotoxic drugs can be at different levels, for example: in the biosynthesis of purine or pyrimidic nitrogenous bases, in the formation of ribonucleotides, in DNA biosynthesis, directly on DNA, in the mRNA and / or protein formation, or on the synthesized proteins (Waller and Sampson, 2018).
  • the effect of the compounds described in the present invention exert an antitumor effect by promoting a specific cellular senescence process for tumor cells.
  • Targeted cancer therapies are other pharmacological alternatives for this condition consisting of monoclonal antibodies (bevacizuma, cetuximab, trastuzumab, rituximab) or small inhibitory molecules (erlotinib, gefitinib, imatinib, sorafenib) that differ greatly from that of mechanism of action used by cytotoxic drugs.
  • targeted therapy drugs have better tolerance than cytotoxic drugs and can be used for different common cancers such as breast, lung, colon, pancreas, lymphoma, leukemia, and multiple myeloma. This type of therapy is aimed at particular molecules that are expressed in cancer cells, thus representing the beginnings of a personalized therapy.
  • the Parthenium argentatum is a shrub that grows in the arid zones of the north of the country and the south of the United States, which was first referred to by JM Bigelow in 1852, and its botanical characteristics were described by Asa Gray of Harvard University in 1859 (Hammond and Polhamus, 1965). In this tree the rubber is stored as a colloidal latex suspension confined in individual cells and is located in practically all the organs of the plant, stems, roots and leaves (Rollins, 1950).
  • guayule Among the compounds isolated from guayule are partheniol, essential oils (a-pinene, felandral limonene, among others), methoxylated flavonoids, sesquiterpenes called guayulins A, B, C and D from ethanolic extract, cycloartan-type triterpenes named argentatin A and C, isoargentine B and argentatin D, among others.
  • Argentatins are triterpenes which have been considered in the scientific literature as good candidates for the search for active compounds that interfere with the inflammatory process and have antitumor activity in human cancer cell lines (Akihisa et al, 2000; Dzubak et al, 2006 ; Flores-Rosete and Martinez-Vazquez, 2008; Oviedo-Chávez et al, 2004; Oviedo-Chávez et al, 2005; Recio et al, 1995a; Recio et al, 1995b; Ukiya et al, 2009)
  • Senescence was proposed by Leonard Hayflick (1961) as the irreversible loss of the proliferative capacity of cells that remain in a metabolically active state necessary for their survival.
  • Cellular senescence can be triggered by different mechanisms that include: cell damage, activation of oncogenes, telomere shortening, with drugs that damage DNA and radiation (Saretzki, 2010).
  • in vitro cell senescence process can be studied by different methods that determine the loss of DNA replication, the determination of telomere shortening, the increase in the concentration of the b-galactosidase enzyme and the expression profile of specific genes .
  • Cellular senescence involves the irreversible arrest of proliferation, resistance to apoptosis and, frequently, the generation of a secretory phenotype of senescent cells characterized by being pro-inflammatory and destroying tissue.
  • Senescent cells accumulate in various tissues during the aging process and are part of the pathogenesis of various chronic diseases, geriatric syndromes, and loss of resilience. That is why it is considered that preventing the accumulation of senescent cells or reducing their load can contribute to the delay, prevention or improvement of multiple conditions associated with senescence (Kirkland and Tchkonia, 2017).
  • this could be modified for two different therapeutic purposes. One of them would be the already mentioned inhibitory effect of senescent cells to improve the consequences of aging and chronic degenerative diseases; and the other mechanism would be the induction of a senescence process in tumor cells in order to exert an antitumor effect.
  • telomeres Since the loss of telomeric repeats in somatic cells, which leads to senescence, is increased by low telomerase activity, the induction of telomerase activity, which has the effect of adding matrices of telomeric repeats to the cells. telomeres, imparts to deadly somatic cells an increased replicative capacity, and imparts to senescent cells the ability to proliferate and adequately exit the cell cycle after damaged tissue repair.
  • Telomerase is a ribonucleoprotein that catalyzes the addition of telomeric repeats to the ends of telomeres. Telomeres are long stretches of repeating sequences that cover the ends of chromosomes and are believed to stabilize the chromosome. Telomerase is not expressed in most adult cells, and telomere length decreases with successive rounds of replication. After a certain number of replication rounds, the progressive shortening of telomeres causes the cells to enter a stage of telomeric crisis, which in turn leads to cellular senescence.
  • telomere activity in cells can be increased.
  • Such methods and compositions can be used on cells in cell culture, ie, In vitro or ex vivo, or In vivo, such as cells growing in tissues of a subject, including human subjects and non-human mammals.
  • the increased activity of telomerase promotes the capacity for cell replication and proliferation, generating an anti-aging effect.
  • the compounds described in the present invention seek to generate a senescence process on tumor cells to avoid their proliferative capacity and thus exert an anti-tumor effect.
  • the method described in the state of the art comprises identifying a cell or tissue in which an increase in telomerase activity is desired and contacting the cell or tissue with a compound as described in the documents US 7,846,904; US 8,481,721; US 8,759,304; US 9,403,866; US 9,913,851.
  • the method described in the state of the art includes the identification, determination or diagnosis of a certain condition in a subject in such a way that it is desired to increase telomerase activity in the cells or tissue of the subject, and to administer the compound to the subject.
  • the subject can be a mammalian subject, such as for example a domestic animal, a dog or a cat, or also a mouse, a rat, a monkey or a human subject or patient.
  • Such conditions or diseases for prevention or treatment may include, for example, viral and opportunistic infections, including HIV, various degenerative diseases, such as neurodegenerative diseases, degenerative diseases of the bones or joints and connective tissues, macular degeneration, diabetic retinopathy, cardiovascular diseases including central and peripheral vascular disease, Crohn's disease and other immune conditions, liver diseases including fibrosis and cirrhosis, lung diseases including pulmonary fibrosis, asthma, emphysema and COPD, hematopoietic disorders (including anemia, thrombocytopenia, neutropenia and other cytopenias ), chronic inflammatory disease, gastrointestinal diseases such as Barretts esophagus, as well as any disorder related to the loss of proliferative capacity in stem cell or progenitor cell populations.
  • various degenerative diseases such as neurodegenerative diseases, degenerative diseases of the bones or joints and connective tissues, macular degeneration, diabetic retinopathy, cardiovascular diseases including central and peripheral vascular disease, Crohn's disease and
  • Such conditions can include bone marrow failure syndrome, aplastic anemia, myelodysplastic anemia, or myelodysplastic syndrome. These conditions also include wounds or other acute or chronic conditions of the skin and its appendages, such as a burn, an abrasion, an incision, a graft, an injury caused by an infectious agent, a chronic venous ulcer, a diabetic ulcer. , compression or decubitus ulcer, mucous ulcer, keloid formation, loss of pigment or hair and other structural aberrations of the skin and its appendages.
  • Such conditions also include cancer and precancerous conditions in which low telomerase or shortened telomeres are associated with genomic instability, or higher mutation rates, or loss of tumor suppressor functions, and consequently subjects are at increased risk of tumor initiation. , tumor progression or tumor recurrence.
  • no experiments or procedures are described in documents D1-D5 that demonstrate the safety of the protected compounds on cancer cells and their safety on healthy cells.
  • the benefits that can be obtained by increasing telomerase activity in a cell or tissue include, for example, the improvement of the replicative capacity and / or the lifespan of said cell or cells within said tissue.
  • the effect that is declared for derivatives of astragalosides is to inhibit cellular senescence in healthy somatic cells to promote their proliferation and, therefore, the regeneration of certain cells and tissues that may contribute to the treatment of diseases such as HIV, Alzheimer's disease, heart disease, in transplanted tissues, etc.
  • the researchers indicate that the invention can also be applied to cancer and precancerous conditions in which there is a decreased activity of telomerase or short telomeres, which causes instability of the genome, or an increase in the mutation rate. , or loss of the function of tumor suppressor genes and that, consequently, individuals have a higher risk of initiation of tumor formation, progression of an existing tumor, or a recurrent tumor.
  • the present invention refers to a method that favors the induction of a tumor cell senescence process in order to inhibit the proliferation of this type of cells and induce their death, through the arrest of the cell cycle.
  • Figure 3 Evaluation of the effect of compound In in mice xenotransplanted with HCT-1 16 cells.
  • the arrows indicate the days of administration of the compound, in a regimen of 1 administration per week for 3 weeks, each point represents the average and SD of 6 mice.
  • a significant difference was found between the groups treated with In (250 and 500 mg / kg) and the group of mice treated with cisplatin (4 mg / kg) versus the group treated with vehicle (**** p ⁇ 0.0001, t-test Student).
  • Figure 4 Images of the size of mouse tumors treated for three weeks with A) vehicle, B) cisplatin 4 mg / kg once a week, C) In 250 mg / kg once a week, D) In 500 mg / kg once a week.
  • the tumor was induced with the colon cancer cell line HCT-1 16.
  • FIG. 5 Evaluation of the effect of compound In in xenograft mice with HCT-1 16 cells.
  • the arrows indicate the days of administration, with 3 administrations per week for 3 weeks, each point represents the mean ⁇ SD of 6 mice. Significant differences were observed between the In and cisplatin-treated groups versus the vehicle-treated group (**** p ⁇ 0.0001, Student's t-test).
  • Figure 6 Images of the size of the tumors treated for three weeks with A) vehicle, B) In 250 mg / kg three times a week, and C) cisplatin 2 mg / kg three times a week.
  • Figure 7 A) Weight variation of nu / nu mice treated with In at doses of 500 mg / kg, 250 mg / kg or cisplatin 4 mg / kg, administered intraperitoneally once a week for 3 weeks.
  • Each point in the graphs represents the mean ⁇ SD of the weight of 3 mice per experimental group. A statistical difference was observed between the weight of the cisplatin-treated mice versus the vehicle group mice (**** p ⁇ 0.0001, Student's t-test).
  • Figure 8 Representative photomicrographs of HCT-1 16 cell xenotransplantation stained with hematoxylin-eosin.
  • Figure 9 Representative photomicrographs of the HCT-1 16 cell xenotransplantation stained with DAPI.
  • the images were taken with an Olympus 1X71 inverted microscope using Qcapturepro 5 software from Qlmaging with a U-mwu2 filter, 330-420 nm excitation band, 400 dichroic mirror, with a Fluorite plan 20x NAO.45 objective.
  • FIG. 10 Representative photomicrographs of PCNA immunostaining.
  • FIG. 11 Antiproliferative effect of compound In observed with the cell proliferation marker PCNA in xenograft cells HCT-1 16. The results are shown in percentage of PCNA ⁇ SD.
  • the fiji.sc software was used to calculate the average number of antigen-positive cells in 10 randomly selected microscopic fields from 3 xenotransplantation tissues per experimental group, leaving a total of 30 measurements. Significant differences were found between the different treatments with In and the control group (**** p ⁇ 0.0001, Student's t test).
  • FIG. 12 A) Activity of b-galactosidase in HCT-1 16 cells, B) Activity of b-galactosidase in HCT-15 cells, C) Cell control of the HCT-1 16 cell line, D) HCT cells -1 16 treated with In 30 mM for 72 hours. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
  • the present invention deals with a relevant and novel antitumor activity of a compound of formula (I) and (I ') with zero toxicity due to the fact that it acts on mechanisms of regulation of the cell cycle that indirectly has been shown not to cause a anti-proliferative effect on healthy cells.
  • Compound (I) has the formula:
  • A is a group that is selected from one of:
  • C is a group that is selected from one of:
  • R 1 represents a group that is selected from:
  • R 2 represents a group that is selected from:
  • R 3 represents a group that is selected from:
  • R 4 represents a group that is selected from:
  • R 1 and R 3 can be at the same time
  • R 3 and R 4 can be at the same time
  • R 1 and R 2 are not at the same time respectively;
  • R 5 is a group that is selected from one of: H, CH 3 or an alkyl chain.
  • R 1 is not and R 2 is not -Br, and R 3 and R 4 are at the same time a group selected from
  • R 1 and R 3 can be at the same time
  • R1 and R2 can together form a group
  • a compound of formula (I) is preferred:
  • A, B, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 5 have the meanings as defined above, with the proviso that:
  • R 3 and R 4 cannot be -OH at the same time
  • R 1 and R 2 are not at the same time respectively;
  • the compound of formula (I) is a compound wherein:
  • A is a group
  • R 1 represents a group:
  • R 2 represents a group: -H
  • R 3 represents a group selected from: -OH;
  • R 4 represents a group selected from: -OH; and / or the enantiomers, diastereoisomers, mixtures of enantiomers, mixtures of diastereoisomers, anomers, hydrates, solvates, polymorphs, of the aforementioned compound and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • a compound of formula (I ') is preferred:
  • a and B have the meanings as defined above,
  • R 1 represents a group that is selected from:
  • R 2 represents a group that is selected from:
  • R 3 represents a group that is selected from:
  • R 1 and R 3 can be at the same time
  • R 1 and R 2 are not at the same time respectively;
  • R 5 is a group that is selected from one of: H, CH 3 or an alkyl chain.
  • R 1 and R 2 can together form a group
  • the compound of formula (I) and (I ') have an antitumor activity due to the fact that they present zero toxicity when acting on mechanisms of regulation of the cell cycle that indirectly has been shown not to cause an anti-proliferative effect on healthy cells.
  • the compounds of the present invention refer to a method that favors the induction of a senescence process of tumor cells in order to inhibit the proliferation of this type of cells and induce the death of the same, through the arrest of the cell cycle.
  • the triterpene-type compound has a very different toxicological profile than the drug cisplatin.
  • the administration of In at doses of 500, 250 or 125 mg / kg, once a week, for 3 weeks does not show toxicity in nu / nu mice, and the mean lethal dose (LD 50 ) calculated was much greater than 500 mg / kg.
  • mice 500 mg / kg once a week and 250 mg / kg three times a week for three weeks
  • mice treated with cisplatin 4 mg / kg once a week and 2 mg / kg three times a week for 3 weeks
  • mice treated with cisplatin 4 mg / kg once a week and 2 mg / kg three times a week for 3 weeks
  • hepatotoxicity increased alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase levels
  • decreased levels of leukocytes Table 2.
  • PCNA proliferating cell nuclear antigen
  • the compound In has an antitumor effect similar to that exerted by cytotoxic drugs currently on the market but with a marked safety advantage by not producing the same side effects as the available drugs, since this it does so through the induction of a process of cellular senescence, in where the tumor cell remains in a cell cycle arrest state that consequently leads to cell death, without causing direct damage to healthy cells.
  • the induction of the cellular senescence process in tumor cells can also be associated with derivatives of compound In (Ia-Ii) which are described below.
  • a 0.40 x 0.32 x 0.26 mm crystal was used to carry out an X-ray diffraction analysis. Said analysis was performed in a Siemens P4 diffractometer at a temperature of 293 K. The crystallographic data of the compound are shown in Table 5 The experimental conditions and the results of the X-ray diffraction analysis were deposited in the CCDC under the code CCDC 254670.

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Abstract

La presente invención describe un compuesto químico de origen natural, específicamente de guayulinas A, B, C y D empleado en medicina que presentan nula citotoxicidad ni genotoxicidad sobre células linfocíticas sanas, dichos compuestos activos interfieren con el proceso inflamatorio y tienen actividad antitumoral en líneas celulares de cáncer humano ya que inhiben su crecimiento a través de un proceso de senescencia.

Description

COMPUESTOS ACTIVADORES DE SENESCENCIA CELULAR
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se relaciona al campo de la química medicinal con énfasis en los efectos terapéuticos de compuestos de origen natural.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Actualmente el cáncer es una de las enfermedades de mayor preocupación a nivel mundial y un reto para los sistemas de salud pública en especial para países en desarrollo debido a los aspectos económicos y sociales que conlleva la enfermedad.
En México, esta enfermedad es una causa importante de morbilidad y mortalidad debido a las deficiencias nutricionales y enfermedades infecto-contagiosas propias de la región. El padecimiento se mantiene entre la segunda y tercera causa de muerte desde el año 2000 a la fecha. En el 2013 el cáncer causó el 12.84% de las muertes registradas en México, posicionándose como la tercera causa de muerte tan solo después de las enfermedades cardiacas (24.3%) y diabetes (14.3%). Entre los principales tipos de cáncer que han causado el 45% de las muertes por esta enfermedad, entre el año 2000 y 2013, se encuentran: el cáncer de pulmón, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de mama y cáncer cervicouterino. Se ha observado que la tasa de mortalidad de la enfermedad (por cada 100,000 habitantes) va en aumento. En el 2000 se estimó en 58.7, mientras que en el 2013 la tasa de mortalidad reportada fue de 65.1 y se ha calculado que para el año 2020 esta tasa será de 79 por cada 100,000 habitantes (IC 95% 76.51 a 81.48) y que habrá 1 ,262,861 mexicanos (IC 95% 1 ,079,419 a 1 ,446,303) diagnosticados con algún tipo de cáncer (Mohar-Betancourt et al, 2017).
Existen distintas opciones de tratamiento para el cáncery su utilización dependerá del tipo de cáncer y del estadio de la enfermedad. Lo más común es utilizar combinación de la cirugía con quimioterapia y/o radioterapia, o también utilizar tratamientos inumnoterapéuticos, terapia hormonal o terapia blanco específica. En México, las instituciones de salud incluyen en sus guías de práctica clínica distintas opciones de quimioterapia para el tratamiento de los principales tipos de cáncer, entre ellos se incluyen: cisplatino, 5-fluorouracilo, oxaliplatino, epirrubicina, mitomycin-C, vinorelbine, gemcitabine, capecitabine, paclitaxel, docetaxel, carboplatino, etopósido, tamoxifeno, cetuximab, trastuzumab, gefitnib, erlotinib. Estos fármacos presentan distintos mecanismos de acción para inhibir el crecimiento de las células tumorales, no obstante, algunos pueden presentar costos muy elevados y otros presentan asociadas reacciones adversas de distintos grados de severidad. Por tanto, en la experiencia clínica del tratamiento quimioterapéutico del cáncer se presentan con frecuencia dos relevantes áreas de oportunidad en la mejora de los tratamientos disponibles: 1) aspectos relacionados con la seguridad y eficacia del medicamento; y 2) el costo de los tratamientos disponibles. En general el costo de los fármacos quimioterapéuticos disponibles en México como los también distribuidos en el mundo es elevado. Se ha estimado que el tratamiento contra el cáncer puede rebasar los US$100,000 por paciente en los estadios más avanzados, dentro del cual se incluyen la quimioterapia así como gastos por cirugías, hospitalizaciones, entre otros (Blumen et al, 2016). Además, se ha observado una importante variabilidad interindividual en la respuesta y seguridad a este tipo de fármacos, lo que puede llegar a disminuir la probabilidad de éxito del tratamiento en ciertos casos (Chen et al, 2015; Visa et al, 2018; Zhuang et al, 2017).
Respecto a la seguridad de los fármacos antineoplásicos, los del tipo citotóxicos son los considerados los fármacos más tóxicos que se pueden prescribir a un ser humano y entre ellos se encuentran los fármacos más utilizados en México (por ejemplo, cisplatino, 5-fluorouracilo, epirrubicina, gemcitabine, capecitabine, paclitaxel, etopósido, entre otros). Muchos de estos tienen un índice terapéutico de 1 , lo que significa que la dosis terapéutica es prácticamente la misma que la dosis tóxica. Principalmente, los fármacos citotóxicos pueden afectar la médula ósea, la mucosa gastrointestinal y los folículos pilosos debido a que estos tejidos tienen un factor de crecimiento elevado y es precisamente en donde este tipo de fármacos ejercen su mecanismo de acción. Dependiendo del tipo de fármaco citotóxico también puede presentarse cardiotoxicidad, ototoxicidad, hepatotoxicidad y nefrotoxicidad (Waller y Sampson, 2018). De manera relevante, los compuestos descritos en la presente invención han demostrado una mayor seguridad en los estudios toxicológicos realizados en comparación con un fármaco citotóxico de referencia.
La alta toxicidad de los compuestos citotóxicos está asociada a su mecanismo de acción, ya que éstos intervienen en la síntesis del DNA de la célula cancerosa, pero su selectividad queda limitada ya que este proceso también se lleva a cabo en las células no malignas y algunas de ellas pueden tener tasas de crecimiento similares a las malignas. La alteración en la síntesis de DNA generada por los fármacos citotóxicos puede ser a distintos niveles, por ejemplo: en la biosíntesis de bases nitrogenadas púricas o pirimídicas, en la formación de ribonucleótidos, en la biosíntesis de DNA, directamente sobre el DNA, en la formación de mRNA y/o proteínas, o sobre las proteínas sintetizadas (Waller y Sampson, 2018). Por el contrario, el efecto de los compuestos descritos en la presente invención ejercen un efecto antitumoral al promover un proceso de senescencia celular específico para las células tumorales.
Las terapias dirigidas contra el cáncer son otras alternativas farmacológicas para este padecimiento que consisten en anticuerpos monoclonales (bevacizuma, cetuximab, trastuzumab, rituximab) o moléculas pequeñas inhibidoras (erlotinib, gefitinib, imatinib, sorafenib) que difieren mucho del mecanismo de acción utilizado por los fármacos citotóxicos. En general, los fármacos de terapia dirigida presentan mejor tolerancia que los citotóxicos y pueden ser utilizados para distintos tipos de cáncer comunes como de mama, pulmón, colon, páncreas, linfoma, leucemia y mieloma múltiple. Este tipo de terapia está dirigido a moléculas particulares que se expresan en las células cancerosas por lo que representan los inicios de una terapia personalizada. No obstante, no parece ser la mejor opción para todos los pacientes, ya que en primer lugar las células cancerosas deben contener la molécula y/o receptor específico para los cuales esté dirigido el fármaco de lo contrario este no podría ejercer un efecto sobre la tumoración. Asimismo, el costo parece elevarse por mucho en este tipo de fármacos; por ejemplo, se ha reportado que el tratamiento multifármacos para cáncer de colon que incluya bevacizumab o cetuximab puede llegar a tener un costo de US$30,790 por un tratamiento de 8 semanas, mientras que el tratamiento con la misma duración, pero utilizando fluorouracilo con leucovorina tiene un costo aproximado de US$63. Asimismo, a pesar de la selectividad de este tipo de tratamientos ya se han reportado algunas reacciones adversas a estos fármacos como erupciones cutáneas, insuficiencia cardiaca, trombosis, hipertensión y proteinuria; además de que en el caso del tratamiento con moléculas pequeñas inhibidoras se pueden presentar distintos tipos de interacciones a través del citocromo P450 (Gerber, 2008). Los compuestos descritos en la presente invención no están dirigidos contra un receptor o proteína en específico expresado por la célula tumoral, en cambio, los compuestos actúan sobre la maquinaria enzimática para activar el arresto del ciclo celular de las células que componen los distintos tipos de tumores.
Es por ello que los trabajos de investigación en cáncer se han enfocado en el desarrollo de nuevos tratamientos eficaces que presenten un mejor perfil de seguridad y un menor costo que los actualmente disponibles. En este sentido el uso de productos naturales se ha convertido en un área de oportunidad para el descubrimiento de fitofármacos con actividad anti-carcinogénica ya que se ha observado que pueden interferir en el inicio, desarrollo y progresión del cáncer a través de la modulación de diversos mecanismos celulares (proliferación, diferenciación, apoptosis, angiogénesis y metástasis). Y se ha sugerido que el uso de productos naturales puede ofrecer una alternativa costo-efectiva en el tratamiento de las neoplasias (Rajesh et al, 2015).
A lo largo del tiempo se han identificado y aislado distintos metabolitos secundarios del guayule, que significa "árbol de hule". El Parthenium argentatum es un arbusto que crece en las zonas áridas del norte del país y sur de los Estados Unidos el cual fue referido por primera vez por J. M. Bigelow en 1852, y sus características botánicas fueron descritas por Asa Gray de la Universidad de Harvard en 1859 (Hammond y Polhamus, 1965). En este árbol el hule está almacenado como una suspensión coloidal de látex confinado en células individuales y se ubica prácticamente en todos los órganos de la planta, tallos, raíces y hojas (Rollins, 1950). Entre los compuestos aislados del guayule se encuentran el parteniol, aceites esenciales (a-pineno, limoneno felandral, entre otros), flavonoides metoxilados, sesquiterpenos llamados guayulinas A, B, C y D a partir del extracto etanólico, triterpenos del tipo cicloartano nombrados argentatinas A y C, la isoargentina B y la argentatina D, entre otros.
Durante el proceso químico para la obtención del hule a partir del guayule se obtiene una resina con un notable rendimiento ya que por cada kilogramo de hule se obtiene un kilogramo de resina de la cual las argentatinas representan el 27% (Komoroski et al., 1986).
Las argentatinas son triterpenos los cuales han sido considerados en la literatura científica como buenos candidatos para la búsqueda de compuestos activos que interfieren con el proceso inflamatorio y tienen actividad antitumoral en líneas celulares de cáncer humano (Akihisa et al, 2000; Dzubak et al, 2006; Flores-Rosete y Martinez-Vazquez, 2008; Oviedo-Chávez et al, 2004; Oviedo- Chávez et al, 2005; Recio et al, 1995a; Recio et al, 1995b; Ukiya et al, 2009)
De manera particular el estudio de las argentatinas procedentes del guayule ha demostrado que estos compuestos presentan una actividad antimicrobiana contra Candida albicans, Torulopsis glabrata, Hansenulla sp., Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa (Martinez-Vazquez et al, 1994). Asimismo, otro estudio evaluó la actividad citotóxica de las argentantinas A y B en líneas celulares de cáncer humano (próstata, leucemia, sistema nervioso central, mama y colon) y se encontró que las argentatinas presentaban diferencias en su actividad citoestática de las células cancerosas, pero sin mostrar citotoxicidad ni genotoxicidad sobre células linfocíticas sanas (Parra- Delgado et al, 2005a).
Además, se ha evaluado la capacidad de inhibición de crecimiento de nueve compuestos derivados de las argentatinas en líneas celulares de cáncer de próstata, sistema nervioso central, colon y leucemia, en los que se observó que entre estos derivados existen compuestos con mayor actividad en la inhibición de crecimiento celular (Parra-Delgado et al, 2005b); y también se ha reportado la actividad antiinflamatoria de estos y otros derivados de las argentatinas en modelos murinos (Romero et al, 2014). En otro estudio se ha demostrado la capacidad de inhibición de células cancerosas por parte del compuesto argentatina B y derivados del mismo (Parra-Delgado et al, 2006) y se ha descrito que este efecto en las células cancerosas se realiza a través de un proceso de senescencia celular (Alcántara-Flores et al, 2015) específicamente al actuar sobre las proteínas supresoras de tumores p53 y p73 de las células tumorales (Romero-Benavides et al, 2017). En este último estudio se demostró que la argentatina B y sus derivados generan un arresto del ciclo celular en la fase G1 e inducen la fosforilación de las proteínas antes mencionadas.
La senescencia fue propuesta por Leonard Hayflick (1961) como la pérdida irreversible de la capacidad proliferativa de células que se mantienen en un estado metabólicamente activo necesario para su supervivencia. La senescencia celular puede ser desencadenada por diferentes mecanismos que incluye: daño celular, activación de oncogenes, acortamiento de telómeros, con fármacos que dañan el DNA y radiación (Saretzki, 2010).
Se considera que el proceso de senescencia celular in vitro puede estudiarse por distintos métodos que determinen la pérdida de replicación del ADN, la determinación del acortamiento de telómeros, el incremento de la concentración de la enzima b-galactosidasa y el perfil de expresión de genes específicos. Las metodologías moleculares específicas para las detecciones de estos procesos celulares incluyen: la incorporación de 5-bromodeoxiuridina o Timidina-3H, inmunohistoquímica para proteínas como PCNA y Ki-67, análisis de fragmentos de restricción terminal (TRF) con una sonda marcada radioactivamente que reconoce repeticiones teloméricas, cuantificación de hibridación In situ con fluorescencia (Q-FISH) para medición de fragmentos teloméricos, la técnica Flow-FISH que combina las propiedades de la Q-FISH con citometría de flujo para cuantificar células senescentes, medición de niveles de la enzima b-galactosidasa, detección de elementos de las vías de transducción de señales que mantienen fenotipos senescentes, marcadores de estrés genotóxico, secreción de citoquinas inflamatorias, entre otras (Martínez Salazar et al, 2009). Todas estas técnicas presentan ventajas y desventajas y su aplicación depende de las necesidades del estudio; por ejemplo, en el estado de la técnica se ha observado que en fibroblastos humanos senescentes hay un aumento significativo en los niveles de la enzima b-galactosidasa, indicativo de un acortamiento de telómeros, por lo que se ha considerado esta condición como un biomarcador confiable para células senescentes (Dimri et al., 1995; Kurz et al., 2000; Yang y Hua, 2004).
La senescencia celular implica el arresto irreversible de la proliferación, resistencia a la apoptosis y, frecuentemente, la generación de un fenotipo secretor de las células senescentes caracterizado por ser pro-inflamatorio y destructor de tejido. Las células senescentes se acumulan en diversos tejidos durante el proceso de envejecimiento y son parte de la patogénesis de distintas enfermedades crónicas, síndromes geriátricos y pérdida de resiliencia. Es por ello que se considera que el impedir la acumulación de las células senescentes o reducir su carga puede contribuir al retraso, la prevención o mejora de múltiples condiciones asociadas con la senescencia (Kirkland y Tchkonia, 2017). Sin embargo, de acuerdo al mecanismo del proceso de senescencia, este podría ser modificado para obtener dos fines terapéuticos distintos. Uno de ellos, sería el ya mencionado efecto inhibitorio de las células senescentes para mejorar consecuencias del envejecimiento y enfermedades crónico-degenerativas; y el otro mecanismo sería la inducción de un proceso de senescencia en células tumorales con la finalidad de ejercer un efecto antitumoral.
En los documentos US 8759304, US 9913851 , US 9403866, US 8481721 , US 7846904 (D1 -D5 respectivamente) se explica que ciertas enfermedades están asociadas con una pérdida telomérica rápida, lo que resulta en una senescencia celular prematura. Por ejemplo, a diferencia de las células tumorales y ciertas células madre, las células somáticas tienen poca o ninguna actividad de la telomerasa y dejan de dividirse cuando los extremos teloméricos de al menos algunos cromosomas se han acortado a una longitud crítica, lo que lleva a una senescencia celular programada (muerte celular). Dado que la pérdida de repeticiones teloméricas en las células somáticas, que conduce a la senescencia, se ve aumentada por la baja actividad de la telomerasa, la inducción de la actividad de la telomerasa, que tiene el efecto de agregar matrices de repeticiones teloméricas a los telómeros, imparte a las células somáticas mortales un aumento de la capacidad replicativa, e imparte a las células senescentes la capacidad de proliferar y salir adecuadamente del ciclo celular tras la reparación del tejido dañado.
La telomerasa es una ribonucleoproteína que cataliza la adición de repeticiones teloméricas a los extremos de los telómeros. Los telómeros son largos tramos de secuencias repetidas que cubren los extremos de los cromosomas y se cree que estabilizan el cromosoma. La telomerasa no se expresa en la mayoría de las células adultas, y la longitud del telómero disminuye con rondas sucesivas de replicación. Después de un cierto número de rondas de replicación, el acortamiento progresivo de los telómeros hace que las células entren en una etapa de crisis telomérica, lo que a su vez conduce a la senescencia celular.
En este sentido, las patentes mencionadas describen y protegen compuestos, sus composiciones, y métodos para aumentar la actividad de la telomerasa en células. Dichos métodos y composiciones pueden usarse en células en cultivo celular, es decir, In vitro o ex vivo, o In vivo, tales como células que crecen en tejidos de un sujeto, incluidos sujetos humanos y mamíferos no humanos. El aumento de la actividad de la telomerasa promueve la capacidad de replicación y proliferación celular generando un efecto anti-envejecimiento. Por el contrario, los compuestos de descritos en la presente invención buscan generar un proceso de senescencia sobre las células tumorales para evitar su capacidad proliferativa y de esta manera ejercer un efecto anti-tumoral. En un aspecto, el método descrito en el estado de la técnica comprende identificar una célula o tejido en el que se desea un aumento de la actividad de la telomerasa y poner en contacto la célula o el tejido con un compuesto como el descrito en los documentos US 7,846,904; US 8,481 ,721 ; US 8,759,304; US 9,403,866; US 9,913,851.
El método descrito en el estado de la técnica incluye la identificación, determinación o diagnóstico de una determinada afección en un sujeto de tal manera que se desee aumentar la actividad de la telomerasa en las células o el tejido del sujeto, y administrar el compuesto al sujeto. El sujeto puede ser un sujeto mamífero, como por ejemplo un animal doméstico, un perro o un gato, o también un ratón, una rata, un mono o un sujeto o paciente humano.
Dichas afecciones o enfermedades para la prevención o el tratamiento pueden incluir, por ejemplo, infecciones virales y oportunistas, incluido el VIH, diversas enfermedades degenerativas, como enfermedades neurodegenerativas, enfermedades degenerativas de los huesos o articulaciones y tejidos conectivos, degeneración macular, retinopatía diabética, enfermedades cardiovasculares incluyendo enfermedad vascular central y periférica, enfermedad de Crohn y otras afecciones inmunológicas, enfermedades hepáticas que incluyen fibrosis y cirrosis, enfermedades pulmonares que incluyen fibrosis pulmonar, asma, enfisema y EPOC, trastornos hematopoyéticos (incluyendo anemia, trombocitopenia, neutropenia y otras citopenias), enfermedad inflamatoria crónica, enfermedades gastrointestinales como el esófago de Barretts, así como cualquier trastorno relacionado con la pérdida de la capacidad proliferativa en las poblaciones de células madre o de células progenitoras. Tales afecciones pueden incluir el síndrome de insuficiencia de la médula ósea, anemia aplásica, anemia mielodisplásica o síndrome mielodisplásico. Estas afecciones también incluyen heridas u otras afecciones agudas o crónicas de la piel y sus apéndices, como por ejemplo, una quemadura, una abrasión, una incisión, un injerto, una lesión causada por un agente infeccioso, una úlcera venosa crónica, una úlcera diabética, úlcera por compresión o decúbito, úlcera mucosa, formación de queloides, pérdida de pigmento o cabello y otras aberraciones estructurales de la piel y sus apéndices. Dichas condiciones también incluyen cáncer y condiciones precancerosas en las que la telomerasa baja o los telómeros acortados se asocian con inestabilidad genómica, o mayores tasas de mutación, o pérdida de funciones supresoras de tumores, y en consecuencia los sujetos tienen un mayor riesgo de iniciación tumoral, progresión tumoral o recurrencia tumoral. Sin embargo, en los documentos D1 -D5 no se describen experimentos o procedimientos que demuestren la seguridad de los compuestos protegidos sobre células cancerosas y su seguridad sobre células sanas. Los beneficios que se pueden obtener al aumentar la actividad de la telomerasa en una célula o tejido incluyen, por ejemplo, la mejora de la capacidad replicativa y / o la vida útil de dicha célula o células dentro de dicho tejido.
En este sentido, por ejemplo, en la patente No. US 8,759,304 B2 se protegen métodos y compuestos para aumentar la actividad de la telomerasa. Estos compuestos son derivados de astragalósidos con múltiples sustituyetes (Figura 1 ). Los astragalósidos son triterpenoides tetracíclicos de tipo alcohólico con una alta polaridad (Ren et al, 2013). Por el contrario, el compuesto de fórmula In y sus derivados son triterpenos del tipo de los cicloartanos, y aunque el esqueleto hidrocarbonado de ambas estructuras presenta una alta similitud, la diferencia entre estos compuestos radica de manera importante en los sustituyetes que se encuentran en los carbonos 3, 6 y 16 los cuales confieren características químicas distintas entre los astragalósidos y los cicloartanos como en el compuesto In.
El efecto que se declara para los derivados de los astragalósidos es inhibir la senescencia celular en células somáticas sanas para promover su proliferación y, por ende, la regeneración de ciertas células y tejidos que puedan contribuir al tratamiento de enfermedades como VIH, enfermedad de Alzheimer, cardiopatías, en tejidos trasplantados, etc. En una patente posterior (US 9,913,851 B2) los investigadores indican que la invención también puede aplicar para cáncer y condiciones precancerígenas en las que exista una actividad disminuida de la telomerasa o telómeros cortos lo que ocasione inestabilidad del genoma, o aumento de la tasa de mutación, o pérdida de la función de genes supresores de tumores y que, por consecuencia, los individuos tengan un riesgo mayor de inicio de formación de tumor, progresión de un tumor ya existente, o un tumor recurrente.
Sin embargo, estos estudios no han demostrado científicamente la actividad antitumoral específica de los compuestos protegidos ni su mecanismo en modelos animales para estudio del cáncer o en células tumorales en donde el aumento de la actividad de la telomerasa no llevaría a la disminución de la proliferación de las células tumorales, por lo que, por el contrario, se requerirían procesos que llevaran a la inducción de un proceso de senescencia de las células tumorales La presente invención se refiere a un método que favorece la inducción de un proceso de senescencia de las células tumorales con el fin de inhibir la proliferación de este tipo de células e inducir la muerte de las mismas, a través del arresto del ciclo celular. Asimismo, como se ha mencionado anteriormente en los tratamientos contra el cáncer la seguridad de los mismos depende de la toxicidad de los compuestos sobre células sanas lo cual no se detalla en las patentes encontradas; otra diferencia con respecto al estado de la técnica es que los compuestos descritos en la presente invención no presentan toxicidad sobre las células sanas, ya que el compuesto In y sus derivados actúan sobre mecanismos de regulación del ciclo celular que de manera indirecta se ha visto que no causa un efecto anti-proliferativo sobre las mismas.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1. Compuestos astraglósidos utilizados para aumentar la actividad de la telomerasa (Patente US 8,759,304 B2).
Figura 2. Resultados de la inducción de apoptosis utilizando un doble mareaje con anexina V e IP, debido al efecto del compuesto In.
Figura 3. Evaluación del efecto del compuesto In en ratones xenotransplantados con células HCT- 1 16. Las flechas indican los días de administración del compuesto, en un régimen de 1 administración por semana durante 3 semanas, cada punto representa el promedio y DE de 6 ratones. Se encontró una diferencia significativa entre los grupos tratados con In (250 y 500 mg/kg) y el grupo de ratones tratados con cisplatino (4 mg/kg) contra el grupo tratado con vehículo (****p<0.0001 , prueba t de Student).
Figura 4. Imágenes del tamaño de los tumores de ratón tratados por tres semanas con A) vehículo, B) cisplatino 4 mg/kg una vez por semana, C) In 250 mg/kg una vez por semana, D) In 500 mg/kg una vez por semana. El tumor fue inducido con la línea celular de cáncer de colon HCT-1 16.
Figura 5. Evaluación del efecto del compuesto In en ratones xenotransplantados con células HCT- 1 16. Las flechas indican los días de administración, con 3 administraciones por semana durante 3 semanas, cada punto representa el promedio ± DE de 6 ratones. Se observaron diferencias signficativas entre los grupos tratados con In y cisplatino contra el grupo tratado con vehículo (****p<0.0001 , prueba t de Student).
Figura 6. Imágenes del tamaño de los tumores tratados por tres semanas con A) vehículo, B) In 250 mg/kg tres veces por semana, y C) cisplatino 2 mg/kg tres veces por semana.
Figura 7. A) Variación de peso de ratones nu/nu tratados con In a dosis de 500 mg/kg, 250 mg/kg o cisplatino 4 mg/kg, administrados vía intraperitoneal 1 vez por semana durante 3 semanas. B) Variación de peso de ratones nu/nu tratados con In a dosis de 250 mg/kg o cisplatino 2 mg/kg, administrados vía intraperitoneal 3 veces por semana durante 3 semanas. Cada punto en las gráficas representa el promedio ± DE del peso de 3 ratones por grupo experimental. Se observó una diferencia estadística entre el peso de los ratones tratados con cisplatino contra los ratones del grupo de vehículo (****p<0.0001 , prueba t de Student).
Figura 8. Fotomicrografías representativas del xenotrasplante de células HCT-1 16 teñidas con hematoxilina-eosina. A) Vehículo, B) In 500 mg 1 vez por semana, C) In 250 mg/kg 1 vez por semana, D) In 250 mg/kg 3 veces por semana. Las imágenes fueron tomadas con un microscopio invertido Olympus 1X71 utilizando el software Qcapturepro 5 de la compañía Qlmaging con una escala microscópica 20x.
Figura 9. Fotomicrografías representativas del xenotrasplante de células HCT-1 16 teñido con DAPI. A) Vehículo, B) In 500 mg/kg 1 vez por semana, C) In 250 mg/kg 1 vez por semana, D) In 250 mg/kg 3 veces por semana. Las imágenes fueron tomadas con un microscopio invertido Olympus 1X71 utilizando el software Qcapturepro 5 de la compañía Qlmaging con un filtro U-mwu2, banda de exitación de 330-420 nm, espejo dicroico 400, con un objetivo Fluorite plan 20x NAO.45.
Figura 10. Fotomicrografías representativas del inmunomarcaje de PCNA. A) Vehículo, B) In 500 mg 1 vez por semana, C) In 250 mg/kg 1 vez por semana, D) In 250 mg/kg 3 veces por semana. Las imágenes fueron tomadas con un microscopio invertido Olympus 1X71 utilizando el software Qcapturepro 5 de la compañía Qlmaging con una escala microscópica 20x. El color café indica las células positivas para PCNA.
Figura 11. Efecto antiproliferativo del compuesto In observado con el marcador de proliferación celular PCNA en células xenotrasplantadas HCT-1 16. Los resultados se muestran en porcentaje de PCNA ± DE. Se utilizó el software fiji.sc para calcular el promedio de células positivas para el antígeno en 10 campos microscópicos seleccionados aleatoriamente de 3 tejidos de xenotrasplantes por grupo experimental, dejando un total de 30 mediciones. Se encontraron diferencias significativas entre los distintos tratamientos con In y el grupo control (**** p<0.0001 , prueba t de Student).
Figura 12. A) Actividad de la b-galactosidasa en células HCT-1 16, B) Actividad de la b-galactosidasa en células HCT-15, C) Control celular de la línea de células HCT-1 16, D) Células HCT-1 16 tratadas con In 30 mM durante 72 horas. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente invención trata sobre una relevante y novedosa actividad antitumoral de un compuesto de fórmula (I) y (I') con una nula toxicidad debido a que actúa sobre mecanismos de regulación del ciclo celular que de manera indirecta se ha visto que no causa un efecto anti-proliferativo sobre las células sanas.
El compuesto (I) tiene la fórmula:
(A)-(B)-(C)
en donde:
A es un grupo que se selecciona de uno de:
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B es
Figure imgf000013_0002
C es un grupo que se selecciona de uno de:
Figure imgf000013_0003
y en donde:
R1 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000013_0004
R2 representa un grupo que se selecciona de:
R3 representa un grupo que se selecciona de:
R4 representa un grupo que se selecciona de:
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y en donde:
R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
R3 y R4 pueden ser al mismo tiempo
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R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
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R5 es un grupo que se selecciona de uno de: H, CH3 o una cadena alquílica. y en donde
cuando A es
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, entonces R1 no es y R2 no es -Br, y R3 y R4 son al mismo tiempo un grupo que se selecciona de
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o
cuando C es entonces R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
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Figure imgf000014_0009
o
cuando A es , entonces R1 y R2 pueden formar juntos un grupo
Figure imgf000014_0004
Figure imgf000014_0005
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En una modalidad se prefiere un compuesto de fórmula (I):
(A)-(B)-(C)
en donde:
A, B, R1 , R2, R3, R4 y R5 tienen los significados como se define anteriormente, con la condición de que:
R3 y R4 no pueden ser al mismo tiempo -OH; y
R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
Figure imgf000015_0005
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una modalidad, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto en donde:
A es un grupo
Figure imgf000015_0001
B es un grupo
Figure imgf000015_0002
C es un grupo
Figure imgf000015_0003
y en donde:
R1 representa un grupo:
Figure imgf000015_0004
R2 representa un grupo: -H;
R3 representa un grupo que se selecciona de: -OH;
R4 representa un grupo que se selecciona de: -OH; y/o los enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, del compuesto mencionado anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
En una modalidad se prefiere un compuesto de fórmula ( I'):
(A)-(B)-T
en donde:
A y B tienen los significados como se define anteriormente,
R1 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000016_0001
R2 representa un grupo que se selecciona de:
R3 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000016_0005
y en donde:
R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
Figure imgf000016_0002
R5 es un grupo que se selecciona de uno de: H, CH3 o una cadena alquílica. y en donde
cuando A es , entonces R1 no es y R2 no es -Br;
Figure imgf000016_0003
o
Figure imgf000016_0004
cuando A es , entonces R1 y R2 pueden formar juntos un grupo
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0002
y en donde T representa un grupo
Figure imgf000017_0003
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Figure imgf000017_0004
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
El compuesto de formula (I) y ( I') tienen una actividad antitumoral debido a que presentan nula toxicidad al actuar sobre mecanismos de regulación del ciclo celular que de manera indirecta se ha visto que no causa un efecto anti-proliferativo sobre las células sanas en un modelo animal in vivo.Asimismo, los compuestos de la presente invención se refiere a un método que favorece la inducción de un proceso de senescencia de las células tumorales con el fin de inhibir la proliferación de este tipo de células e inducir la muerte de las mismas, a través del arresto del ciclo celular.
En primer lugar, se evaluó la actividad citotóxica de los compuestos de fórmula (I) y ( I') de manera especial del compuesto In contra distintas líneas celulares de cáncer de colon (Tabla 1) en donde se observó que el compuesto presenta un efecto citotóxico moderado y que la línea celular de cáncer de colon HCT-1 16 fue más sensible a la administración del triterpeno. Asimismo, llamó la atención de que a pesar de la actividad citotóxica del compuesto In (Argentantina A) sobre las líneas celulares, esta sólo indujo apoptosis en la línea HCT-1 16 (30mM) a las 72 horas de tratamiento (Figura 2). Esto indica que el compuesto In puede llegar a inducir apoptosis en intervalos prolongados de incubación, sin embargo, esto es una arista que demuestra que el compuesto induce un proceso de senescencia celular que eventualmente lleva a la muerte celular como se explicará más adelante. Tabla 1. Citotoxicidad del compuesto In contra distintas líneas células de cáncer de colon bajo tratamiento durante 24, 48 y 72 horas. Se utilizó Cisplatino como control positivo. Los valores presentados corresponden al promedio de 3 experimentos independientes realizados por triplicado ± desviación estándar.
Figure imgf000020_0001
El Instituto Nacional de Cáncer y algunas revistas científicas indican que los compuestos aislados de plantas medicinales deben ser considerados agentes citotóxicos sólo cuando muestran valores de ED5O £ 4 hg/ml (dosis efectiva media). Por tanto, el compuesto In sería considerada como un compuesto inactivo de acuerdo a esta referencia, sin embargo, lo que se observa en el estado de la técnica es que los compuestos del tipo de los triterpenos muestran una baja citotoxicidad pero una importante actividad antiinflamatoria que puede ejercer una importante actividad antitumoral.
En este sentido, se demostró la actividad antitumoral del compuesto In en un estudio de xenotransplante utilizando ratones inoculados con células cancerosas HCT-1 16. Se realizó un primer estudio en el que In se administró a dosis de 250 a 500 mg/kg de peso una vez por semana durante 21 días y se observó una reducción del tamaño del tumor en 49.1 % y 48.8%, respectivamente, en comparación con el tumor que desarrolló el ratón que no recibió el tratamiento (Figuras 3 y 4). Posteriormente se realizó un estudio en el que se demostró que con la administración de In a dosis de 250 mg/kg de peso, tres veces por semana, durante 21 días se consigue una reducción del 78.1 % del tumor en comparación con el tumor de los ratones no tratados. Esta reducción del tumor fue equivalente al efecto ejercido con la administración de 2 mg/kg de cisplatino en el mismo régimen de administración del compuesto In (Figuras 5 y 6).
Además de que In demuestra poseer un efecto antitumoral equiparable al del cisplatino, el compuesto de tipo triterpeno posee un perfil toxicológico muy diferente al del fármaco cisplatino. En primer lugar se demuestra que la administración de In a dosis de 500, 250 0 125 mg/kg, una vez por semana, durante 3 semanas no muestra toxicidad en ratones nu/nu, y la dosis letal media (DL50) calculada fue mucho mayor que 500 mg/kg. Además, la administración de In a dosis de 250 y 500 mg/kg no ocasiona disminución de peso en el ratón, al contrario de lo que sucedió con los ratones tratados con cisplatino a dosis de 4 mg/kg una vez por semana o a dosis de 2 mg/kg tres veces por semana durante 21 días (Figura 7).
Asimismo, los ratones tratados con In (500 mg/kg una vez por semana y 250 mg/kg tres veces por semana durante tres semanas) no muestran cambios físicos ni de comportamiento comparados con el grupo control. Sin embargo, los ratones tratados con cisplatino (4 mg/kg una vez por semana y 2 mg/kg tres veces por semana durante 3 semanas) muestran evidencia de hepatotoxicidad (aumento de los valores de alanina aminotransferasa y aspartato aminotransferasa) y disminución de los leucocitos (Tabla 2).
Tabla 2. Parámetros sanguíneos de los ratones tratados.
A Administración una vez por semana,
B Administración 3 veces por semana.
Se muestran los promedios obtenidos de los 3 ratones que integraron cada grupo. Se encontraron diferencias significativas en ambos grupos de cisplatino (2 mg/kg y 4 mg/kg) cuando cada uno de ellos fue comparado contra el grupo control (*p<0.05, **p<0.001 , ****p<0.0001 , prueba t de Student).
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Adicionalmente se realizaron estudios para evaluar el efecto de la administración de In en la morfología celular en tejidos tumorales teñidos con hematoxilina-eosina. Con ello se evidencia que los tejidos tratados con el compuesto muestran núcleos un poco alargados y mayor espacio entre ellos lo que sugiere una expansión del área citoplásmica. Este hallazgo permite mostrar que las células están sufriendo algún tipo de daño en comparación de los tejidos del grupo control (Figura 8).
Para evaluar si estos núcleos se encuentran fragmentados como señal de muerte celular se realizó un mareaje de los tejidos con el marcador fluorescente (CAPI (4',6-diamino-2-fenilindol) el cual se une fuertemente a regiones ricas con adenina y timina en secuencias de DNA, el cual es excitado con luz ultravioleta y detectado con un filtro azul a través de microscopía de fluorescencia (máximo de absorción a 358 nm en el rango ultravioleta, y su máximo de emisión se encuentra a los 461 nm en el espectro del color azul). En este caso se observó que los grupos tratados y el grupo control presentan patrones similares, que no se encuentran núcleos fragmentados que indiquen muerte celular, sin embargo, sí se notan más alargados en los tejidos provenientes de los grupos tratados con In (Figura 9).
Por su parte, la inhibición de la proliferación celular causada por el compuesto In se demostró por una disminución de células positivas para la expresión del antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) tanto en los tejidos de los ratones tratados con In a dosis de 500 mg/kg 1 vez por semana como en los tejidos de los ratones tratados con el compuesto a dosis de 250 mg/kg 3 veces por semana (Figura 10).
La cuantificación de PCNA confirmó que en los grupos tratados con el compuesto In, a distintas dosis, existe una disminución de la proliferación celular en comparación con el grupo control 10-20% vs 54.81 % ± 15.63) (Figura 1 1).
Ahora bien, como ya se ha mencionado anteriormente, el mecanismo por el cual In ejerce un efecto antitumoral sin generar citotoxicidad sobre células sanas es a través de la inducción de senescencia celular. Este proceso se demuestra por la evaluación de la actividad de la enzima b-galactosidasa en las células de líneas celulares de cáncer de colon. La actividad de esta enzima se observa de manera predominante en las células de la línea HCT-1 16 tratadas con In durante 72 horas a una concentración de 30 mM (Figura 12).
Por tanto, con los resultados obtenidos se puede establecer que el compuesto In tiene un efecto antitumoral similar al ejercido por fármacos citotóxicos actualmente en el mercado pero con una marcada ventaja de seguridad al no producir los mismos efectos secundarios que los fármacos disponibles, ya que esto lo hace a través de la inducción de un proceso de senescencia celular, en donde la célula tumoral queda en un estado de arresto del ciclo celular que consecuentemente lleva a la muerte celular, sin ocasionar un daño directo a las células sanas. La inducción del proceso de senescencia celular en células tumorales también puede estar asociado a derivados del compuesto In (Ia-Ii) los cuales se describen a continuación.
Por otro lado, un estudio del efecto de los compuestos Ia-Ii sobre distintas líneas celulares se refleja en la siguiente tabla.
Figure imgf000023_0001
Mientras que para el caso del compuesto Im, el % de inhibición del crecimiento en distintas líneas celulares como colon (HCT-15), mama (MCF-7), SNC células glia (U-251), próstata (PC-3) pulmón (SKUL) y leucemia promielocitica (K-562), arroja los siguientes resultados:
Tabla 4.
Figure imgf000024_0002
Aproximación sintética:
Síntesis del compuesto (la)
Figure imgf000024_0001
100 mg de In se disolvieron en 5 mi de ácido acético glacial y se hicieron reaccionar con 0.4 mi de una disolución 1 M de bromo en ácido acético. La reacción se llevó a cabo en agitación a 3 °C. Después de 1.25 h la mezcla de reacción se vertió en un matraz Erlenmeyer que contenía 50 g de hielo. Se observó la presencia de un precipitado abundante, el cual se lavó con una disolución 5% NaHC03 y posteriormente se recristalizó para obtener el producto la, (94%). P. f. 1 16-118°C. IR (película) vmax cm-1: 3380.48 (O-H), 2972.39-2872.9 (C-H), 1721.94 (C=0), 1463.42, 1382.14. EM- IE m/z (%): 550 (M+, 0.77), 498 (15), 496 (15), 351 (5), 349 (5), 143 (100), 125 (30), 107 (31), 81 (20), 71 (32), 43 (30). RMN1 H (200 MHz, CDCI3) d ppm: 0.60 (d, J=4.3, 1 H, H-19), 0.73 (d, J=4.3, 1 H, H-19'), 0.89 (s, 3H, CH3), 1.14 (s, 3H, CH3), 1.16 (s, 6H, 2CH3), 1.25 (s, 3H, CH3), 1.29 (s, 3H, CH3), 2.70 (sa, 2H, 2 O-H), 3.86 (t, J= 7.7, 1 H, H-24), 4.63 (m, 1 H, H-16), 5.1 1 (dd, J= 6.5, J= 12.8, 1 H, H-2b). RMN13C (75 MHz, CDCI3) d ppm: 32.9 (C-1 ), 37.6 (C-2), 201.4 (C-3), 50.9 (C-4), 47.7 (C- 5), 21.01 (C-6), 25.6 (C-7), 43.5 (C-8), 20.8 (C-9), 25.9 (C-10), 26.6 (C-1 1), 31.8 (C-12), 46.2 (C-13), 46.5 (C-14), 48.3 (C-15), 73.2 (C-16), 55.4 (C-17), 21.6 (C-18), 30.2 (C-19), 87.0 (C-20), 21 .1 (C- 21), 37.3 (C-22), 27.3 (C-23), 84.5 (C-24), 70.9 (C-25), 27.3 (C-26), 26.1 (C-27), 20.4 (C-28), 20.7
(C-29), 21.0 (C-30).
Síntesis del compuesto (Ib)
Figure imgf000025_0001
Una disolución de In (200 g) y cloruro de fenilselenio (120 g) en EtOAc (4.6 l) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después, se agregó 1 mi de agua a la mezcla de reacción en agitación. La fase acuosa se separó y se agregaron 2 mi de THF y 0.2 mi de H202 al 30%. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Transcurrido ese tiempo, la reacción se procesó por métodos convencionales y se obtuvo un sólido impuro. Al sólido se purificó por medio de cromatografía en columna para obtener 140 mg (70%) del producto deseado como un sólido cristalino de punto de fusión de 196-198 °C. IR (Película)vmax cm-1: 3380.47 (O-H), 2967.73, 2873.35, 1667.21 (C=0), 1463.32, 1379.72. EM-IE m/z (%): 470 (M+, 1), 452 (12), 434 (7), 41 1 (2), 143
(100), 125 (25), 107 (10), 59 (10). RMN 1 H (200 MHz, CDCI3) d ppm: 0.81 (d, J=4.6, 1 H, H-19), 0.90
(s, 3H, CH3), 0.97 (s, 3H, CH3), 1.1 1 (s, 3H, CH3), 1.15 (s, 3H, CH3), 1.26 (s, 3H, CH3), 1.30 (s, 3H, CH3), 1.42 (s, 3H, CH3), 3.86 (t, J= 7.6, 1 H, H-24), 4.61 (m,1 H, H-16), 5.94 (d, J= 10.0, 1 H, H-2), 6.77 (d, J=10.0, 1 H, H-1). RMN 13C (75.4 MHz, CDCI3) d ppm: 153.7 (C-1), 126.7 (C-2), 205.1 (C-3), 47.0 (C-4), 44.9 (C-5), 19.7 (C-6), 27.6 (C-7), 44.5 (C-8), 24.1 (C-9), 29.9 (C-10), 24.0 (C-1 1), 32.8 (C-
12), 46.1 (C-13), 46.3 (C-14), 47.6 (C-15), 73.2 (C-16), 55.5 (C-17), 21.5 (C-18), 30.8 (C-19), 87.2 (C-20), 25.5 (C-21), 37.5 (C-22), 23.8 (C-23), 84.5 (C-24), 70.9 (C-25), 27.3 (C-26), 26.1 (C-27), 19.8 (C-28), 20.1 (C-29), 19.1 (C-30). Síntesis del compuesto (Ic)
Figure imgf000025_0002
Una mezcla de 25.5 mg del derivado Ib, 21 mg de acetato de sodio y 2 l de anhídrido acético se calentó a temperatura de reflujo por una hora. Posteriormente, la mezcla se vertió en un matraz erlenmeyer que contenía 5 g de hielo y se agitó por 3 minutos. El contenido del matraz se extrajo con AcOEt (3x). La fase orgánica se secó y se concentró a presión reducida para obtener un semisólido. Dicho producto se recristalizó (hexano/ AcOEt) para obtener 27.4 mg del acetato le (99%) de punto de fusión de 158-160 °C. IR (Película) em1: 2971.64, 2937.91 , 2873.33, 1734.33 (0=0), 1668.83 (0=0), 1460.83, 1367.44, 1241.0, 755.46. RMN1H (300 MHz, CDCI3)d ppm: 0.95 (s,
3H, CH3), 1.10 (s, 3H, CH3), 1.22 (s, 3H, CH3), 1.25 (s, 6H, 2CH3), 1 .47 (s, 3H, CH3), 1.55 (s, 3H, CH3), 1.99 (s, 3H, CH3), 2.03 (s, 3H, CH3), 2.54 (d, J= 8.49, 1 H), 3.74 (t, J= 7.9, 1 H, H-24), 5.40 (m, 1 H, H-16), 5.95 (d, J= 10, 1 H, H-2), 6.77 (d, J=10, 1 H, H-1 ). RMN 13C (75.4 MHz, CDCI3) d ppm :
153.5 (C-1), 126.9 (C-2), 205.1 (C-3), 47.0 (C-4), 44.6 (C-5), 19.6 (C-6), 27.8 (C-7), 44.2 (C-8), 24.1 (C-9), 30.1 (C-10), 23.9 (C-1 1), 31.8 (C-12), 46.0 (C-13), 46.9 (C-14), 44.6 (C-15), 74.8 (C-16), 56.8 (C-17), 19.4 (C-18), 29.7 (C-19), 85.1 (C-20), 22.7 (C-21), 35.1 (C-22), 25.7 (C-23), 81.7 (C-24), 82.3 (C-25), 28.6 (C-26), 22.9 (C-27), 19.1 (C-28), 19.1 (C-29), 19.1 (C-30), 21.6 y 22.5 (metilo de los grupos acetato), 170.4 y 170.3 (carbonilo de los grupos acetato).
Síntesis del compuesto (Id)
Figure imgf000026_0001
301 mg del compuesto In en 4.5 ml de piridina se hicieron reaccionar con 99 mg of NH2OH HCI en agitación a temperatura de reflujo durante una hora. Posteriormente, la mezcla de reacción se vertió en un matraz que contenía 100 g de hielo y se extrajo con AcOEt (3x). La fase orgánica se lavó repetidas ocasiones con una disolución de HCI al 10% seguido de agua y posteriormente se secó y concentró a presión reducida. El residuo obtenido después de la evaporación se purificó por medio de cromatografía en columna, para obtener 277 mg de la oxima Id (90%). P. f. 200-205°C. IR (KBr)vmax cm-1: 3379.8, 2968.9, 2870.9, 1638.5, 1460, 1380.1 , 1 103.9. EM-IE m/z (%): 487 (M+, 13), 470 (9), 452 (9), 286 (8), 143 (100), 125 (21), 59 (10). RMN 1M (300 MHz, CDCI3) d ppm: 0.54 (d, J=4.2, 1 H, H-19), 0.74 (d, J=4.2, 1 H, H-19'), 0.88 (s, 3H, CH3), 1.1 (s, 6H, 2CH3), 1.3 (s, 3H, CH3), 1.3 (s, 3H, CH3), 1.4 (s, 3H, CH3), 3.38 (dq, 1 H), 3.9 (t, J= 1.8, J= 7.8, 1 H, H-24), 4.6 (m, 1 H, H-16). RMN 13C (75.4 MHz) d ppm: 32.7 (C-1), 20.0 (C-2), 167.1 (C-3), 43.4 (C-4), 48.8 (C-5), 21.7 (C-6), 26.1 (C-7), 47.6 (C-8), 20.9 (C-9), 27.3 (C-10), 26.1 (C-1 1), 33.1 (C-12), 46.3 (C-13), 46.6 (C-14), 48.7 (C-15), 73.4 (C-16), 55.6 (C-17), 21.2 (C-18), 30 (C-19), 87.2 (C-20), 25.7 (C-21), 37.3 (C-22),
23.7 (C-23), 84.5 (C-24), 70.8 (C-25), 27.3 (C-26), 26.3 (C-27), 20.3 (C-28), 20.9 (C-29), 20.9 (C- 30). Un cristal de 0.40 x 0.32 x 0.26 mm se empleó para llevar a cabo un análisis de difracción de rayos X. Dicho análisis se realizó en un difractómetro Siemens P4 a la temperatura de 293 K. Los datos cristalográficos del compuesto se muestran en la Tabla 5. Las condiciones experimentales y los resultados del análisis de difracción de rayos X se depositaron en el CCDC bajo la clave CCDC 254670.
Figure imgf000027_0001
Síntesis del compuesto (le)
Figure imgf000028_0001
Una disolución de 100 mg de In en 4 l de ácido acético se trató a 0-5 °C con trióxido de cromo (100 mg) en 0.3 mi de agua. Después de 1 hora, la mezcla se dejó a temperatura ambiente y posteriormente se extrajo con AcOEt (3x). La fase orgánica se procesó de manera convencional para obtener el producto deseado le (40 %). P. f. 138-140 °C. IR (Película)vmax cm-1: 2972.73 2876.01 , 1768.64 (C=0), 1737.46 (C=0), 1703.84 (C=0), 1462.38, 1385.8. EM-IE m/z (%): 426 (M+,
100), 41 1 (23), 313 (35), 288 (34), 270 (15), 99 (42), 43 (27). RMN1H (200 MHz, CDCI3) d ppm: 0.68 (d, J= 4.5, 1 H, H-19), 0.88 (d, J= 4.5, 1 H, H-19'), 1.07 (s, 3H, CH3), 1.12 (s, 3H, CH3), 1 .13 (s, 3H, CH3), 1.34 (s, 3H, CH3), 1.49 (s, 3H, CH3). RMN 13C (75.5 MHz) d ppm: 33.1 (C-1), 37.3 (C-2), 215.1 (C-3), 50.1 (C-4), 48.5 (C-5), 21.2 (C-6), 26.2 (C-7), 47.0 (C-8), 20.2 (C-9), 26.5 (C-10), 26.1 (C-11), 33.4 (C-12), 45.7 (C-13), 46.2 (C-14), 50.6 (C-15), 215.8 (C-16), 65.1 (C-17), 28.3 (C-18), 30.1 (C-
19), 85.5 (C-20), 22.1 (C-21), 42.4 (C-22), 27.8 (C-23), 177.2 (C-24), 19.7 (C-28), 20.7 (C-29), 19.9 (C-30).
Síntesis del compuesto (If)
Figure imgf000028_0002
Una mezcla de 200 mg de In, 60.2 mg de acetato de sodio y 5 mi de anhídrido acético se calentó a temperatura de reflujo por 18 horas. Posteriormente, la mezcla se vertió en un matraz erlenmeyer que contenía 50 g de hielo y se agitó por 15 minutos. El contenido del matraz se extrajo con AcOEt (3x). La fase orgánica se secó y se concentró a presión reducida para obtener un semisólido. Dicho producto se recristalizó (hexano/ AcOEt) para obtener el acetato correspondiente If (99%) de punto de fusión de 200-206 °C. IR (Película) cm-1: 2971.49, 2943.41 , 2872.45, 1734.68 (0=0), 1706.33 (0=0), 1459.92, 1368.46, 1241.62. EM-IE m/z,(%): 556 (M+), 496 (24), 436 (27), 395 (28), 185 (52), 143 (42), 125 (100), 43 (57). RMN1 H (300 MHz) CDCI3 d ppm: 0.53 (d, J= 4.2, 1 H, H-19), 0.83 (d, J= 4.2, 1 H, H-19'), 0.96 (s, 3H, CH3-21), 1.05 (s, 3H, CH3-29), 1.09 (s, 3H, CH3-18), 1.23 (s, 3H, CH3- 26), 1.40 (s, 3H, CH3-28), 1.47 (s, 3H, CH3-27), 1.55 (s, 3H, CH3-21 ), 2.00 (s, 3H, CH3), 2.02 (s, 3H, CH3), 3.74 (t, J= 7.7, 1 H, H-24), 5.39 (m, 1 H, H-16). RMN13C (300 MHz, CDCI3): 33.2 (C-1 ), 37.3 (C- 2), 214.9 (C-3), 50.1 (C-4), 47.7 (C-5), 21.2 (C-6), 25.9 (C-7), 48.4 (C-8), 20.7 (C-9), 26.5 (C-10), 26.8 (C-1 1), 32.1 (C-12), 46.6 (C-13), 46.9 (C-14), 45.5 (C-15), 75.04 (C-16), 57.16 (C-17) 20.7 (C- 18), 30.3 (C-19), 85.0 (C-20), 22.6 (C-21), 35.2 (C-22), 25.7 (C-23), 81.6 (C-24), 82.3 (C-25), 28.5 (C-26), 22.9 (C-27), 19.9 (C-28), 22.2 (C-29), 20.07 (C-30), 21.5, 22.4, 170.13, 170.29.
Síntesis del compuesto (Ig)
Figure imgf000029_0001
200 mg del diacetato In en 6.5 ml de piridina se hicieron reaccionar con 95 mg of NH2OH HCI en agitación a temperatura de reflujo durante 1.5 horas. Posteriormente, la mezcla de reacción se vertió en un matraz que contenía 50 g de hielo y se extrajo con AcOEt (3x). La fase orgánica se lavó 3 veces con una disolución de HCI al 10% y después con agua. La recristalización de la fase orgánica permitió la purificación de la oxima Ig (90%) de p. f. 140-143 °C. IR (película) vmax cm-1: 3318.57, 2972.66, 2942.16, 2872.86, 1734.27, 1456.29, 1368.98, 1242.09. EM-IE m/z (%): 571 (M+), 51 1 (12), 434 (15), 185 (67), 143 (49), 125 (100), 43 (60). RMN 1 H (300 MHz, CDCI3) d ppm: 0.44 (d, J=4.2, 1 H, H-19), 0.72 (d, J=4.2, 1 H, H-19'), 0.94 (s, 3H, CH3), 1 .08 (s, 3H, CH3), 1.14 (s, 3H, CH3), 1.22 (s, 3H, CH3), 1.38 (s, 3H, CH3), 1.47 (s, 3H, CH3), 1.54 (s, 3H, CH3), 2.00 (s, 3H, CH3), 2.02 (s, 3H, CH3), 2.52 (d, J= 8.4, 1 H, H-17), 3.36 (de, 1 H), 3.73 (t, J= 7.5, 1 H, H-24), 5.38 (m, 1 H, H-16), 6.62 (sa, 1 H, O-H). RMN 13C (75.5 MHz) d ppm: 32.6 (C-1), 20.0 (C-2), 166.9 (C-3), 42.7 (C-4), 48.7 (C- 5), 21.0 (C-6), 25.8 (C-7), 47.5 (C-8), 20.4 (C-9), 26.8 (C-10), 26.5 (C-11 ), 32.0 (C-12), 46.6 (C-13), 46.9 (C-14), 45.4 (C-15), 75.1 (C-16), 57.0 (C-17), 21.6 (C-18), 30.2 (C-19), 85.1 (C-20), 22.6 (C- 21), 35.0 (C-22), 25.6 (C-23), 81.7 (C-24), 82.3 (C-25), 28.6 (C-26), 22.9 (C-27), 19.8 (C-28), 23.6 (C-29), 20.0 (C-30), 21.5 y 22.5 (carbonos de los metilos de los grupos acetato), 170.4 y 170.3 (carbonos correspondientes a los carbonilos en los grupos acetato).
Síntesis del compuesto (Ih)
Figure imgf000030_0001
A una disolución de 200 mg de In en 6 ml de piridina seca, contenida en atmósfera inerte, se adicionaron 1 mi de formiato de etilo (recién destilado), así como 0.8 mi de una disolución de sodio en MeOH absoluto (0.44 g / 6 ml). La reacción se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante toda la noche. La aparición de un color ocre y/o la formación de un precipitado insoluble se consideraron como evidencia de la reacción. Transcurrido el tiempo pertinente, la mezcla de reacción se colocó en una disolución fría de 3 mi de ácido acético en 27 mi de agua. Como resultado de la acción anterior, se observó la aparición de un precipitado, el cual fue extraído con cloruro de metileno. La fase acuosa se descartó. La fase orgánica se lavó con agua y se extrajo con una disolución de hidróxido de potasio al 2%. El extracto básico se lavó con éter, se acidificó con ácido acético glacial y finalmente se extrajo con cloruro de metileno. La fase de cloruro de metileno final se secó y se concentró a presión reducida para obtener un producto semisólido impuro. Dicho producto se purificó por cromatografía en capa preparativa para obtener el derivado formilado Ih (89%). IR (KBr) vmax cm-1: 3403.7, 2974.0, 2941 .9, 2874.8, 1635.1 , 1586.9, 1464.6, 1355.9. EM-IE m/z (%): 500 (M+, 2), 482 (6), 441 (M+-59, 6), 143 (100), 125 (22), 107 (13), 85 (12), 71 (12), 59 (8),
43 (13). RMN 1H (200 MHz, CDCI3) d ppm: 0.49 (d, J= 4.4, 1 H, H-19), 0.70 (d, J= 4.4, 1 H, H-19'),
0.92 (s, 3H, CH3), 1.1 (S, 3H, CH3), 1 .15 (s, 3H, CH3), 1.22 (s, 3H, CH3), 1.26 (s, 3H, CH3), 1.3 (s, 3H, CH3), 1.46 (s, 3H, CH3), 2.60 (d, J= 15, 1 H), 3.46 (sa, 2H, 2 O-H), 3.86 (t, J= 7.4, 1 H, H-24), 4.63 (m, 1 H, H-16), 8.7 (s, 1 H, H-31), 14.8 (sa, 1 H, O-H). RMN 13C (50 MHz) d ppm: 33.1 (C-1), 106.6 (C-
2), 190.5 (C-3), 42.7 (C-4), 48.5 (C-5), 21.4 (C-6), 26.1 (C-7), 44.7 (C-8), 19.3 (C-9), 29.7 (C-10), 25.5 (C-1 1 ), 31.8 (C-12), 46.3 (C-13), 46.6 (C-14), 48.6 (C-15), 73.5 (C-16), 55.6 (C-17), 21.2 (C- 18), 30.2 (C-19), 87.2 (C-20), 25.2 (C-21), 37.3 (C-22), 23.7 (C-23), 84.5 (C-24), 70.9 (C-25), 27.3 (C-26), 26.1 (C-27), 20.6 (C-28), 24.4 (C-29), 21.6 (C-30), 188.9 (C-31). Síntesis del compuesto (Ii)
Figure imgf000031_0001
Una disolución de 60 mg del derivado formilado Ih en 5 ml de ácido acético glacial, en agitación, se hizo reaccionar durante dos horas con 30 mg de clorhidrato de hidroxilamina a temperatura de reflujo. Después, la mezcla de reacción se vertió en un matraz erlenmeyer que contenía 50 g de hielo y se extrajo con AcOEt. La fase orgánica se lavó con una disolución de bicarbonato de sodio al 5% (3x) y con agua. Las fases acuosas fueron descartadas. La fase orgánica se secó y concentró a presión reducida para obtener un semisólido impuro. Dicho semisólido fue purificado por medio de cromatografía en columna para obtener el isoxazol Ii (80%). P. f. 125-129 °C. IR (Película) vmax cm- 1: 3377.57, 2970.67, 2940.45, 2875.63, 1640, 1564.63, 1463, 1379.57. EM-IE m/z (%): 497 (M+, 4), 479 (8), 439 (10), 420 (10), 337 (10), 296 (9), 143 (100), 125 (22), 107 (15), 43 (15). RMN 1 H (300 MHz, CDCI3) d ppm: 0.47 (d, J= 4.5, 1 H, H-19), 0.74 (d, J= 4.5, 1 H, H-19'), 0.94(s, 3H, CH3), 1 .15 (s, 3H, CH3), 1.21 (s, 3H, CH3), 1.26 (s, 3H, CH3), 1.30 (s, 3H, CH3), 1 .36 (s, 3H, CH3), 1 .46 (s, 3H, CH3), 2.66 (d, J= 15.6, 1 H), 3.87 (t, J= 7.2, 1 H, H-24), 4.63 (m, 1 H, H-16), 7.98 (s, 1 H). RMN 13C (75.4 MHz) d ppm: 28.3 (C-1), 109.9 (C-2), 174.8 (C-3), 37.4 (C-4), 48.5 (C-5), 20.8 (C-6), 26.4 (C-7), 46.3 (C-8), 19.7 (C-9), 24.8 (C-10), 25.3 (C-1 1), 33.2 (C-12), 46.6 (C-13), 46.8 (C-14), 48.8 (C-15), 73.4 (C-16), 55.7 (C-17), 21.2 (C-18), 30.4 (C-19), 87.2 (C-20), 25.7 (C-21), 37.3 (C-22), 23.8 (C-23), 84.5 (C-24), 70.9 (C-25), 27.3 (C-26), 26.1 (C-27), 20.6 (C-28), 25.5 (C-29), 22.2 (C-30), 149.4 (C-31).
Síntesis del compuesto (Ij)
Figure imgf000032_0001
A 100 g de oxi a de In disueltos en CHCI3 se le adicionaron 0.5 mL de anhídrido trifluoroacético lentamente a 0°C. Concluida la adición se mantuvo la mezcla de reacción con agitación constante a 25°C durante 18 min. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida. De esta reacción se obtuvo un producto identificado como 16-trifluoroaxetoxi-lactama de In. A dicho producto se le adicionó una solución de carbonato de potasio en metanol y se mantuvo con agitación durante 15 min. a temperatura ambiente, posteriormente la solución se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El producto de reacción se purificó por cromatografía en columna con polaridad de 2:1 Hex:AcOEt, obteniendo 38 mg de Ij. IR (CHCI3): vmaxcm-1: 3612, 3395, 2963, 2871 , 1644 cm-1. EIMS m/z (%): 487 (M+, 29.27), 429 (M+ -58, 5.4), 428 (1 1.5), 413 (64.86), 58 (100). HRMS: encontrado m/z 488.3726, [M+H]+; C30H50N04 requerido 488.3739. 1H NMR (CDCI3, 300 MHz): d 0.61 (1 H, d, J = 6 Hz, H-190), 0.68 (1 H, d, J = 6 Hz, H-19), 0.86 (3H, s, H-29/30)*, 1.1 1 (3H, s, H-18), 1.21 (3H, s, H-21), 1.26 (3H, s, H-27), 1.30 (3H, s, H-26), 1.33 (3H, s, H-29/30)*, 3.1 (1 H, m, H-2), 3.83 (1 H, t, J = 7 Hz, H-24), 4.60 (1 H, m, H-16), 7.5 (1 H, s, NH). 13C NMR (75 MHz, CDCI3): d 20.2 (C-18), 20.3 (C-28), 21.0 (C-6), 21.0 (C-9), 22.1 (C-29), 23.9 (C-23), 24.4 (C-30), 25.3 (C-21), 26.5 (C-7), 26.5 (C-10), 26.7 (C-1 1), 27.0 (C-26), 27.5 (C- 27), 29.5 (C-1), 29.9 (C-2), 30.8 (C-19), 33.0 (C-12), 36.2 (C-22), 45.5 (C-14), 45.9 (C-13), 48.2 (C-5), 48.5 (C-8), 50.08 (C-15), 55.5 (C-4), 56.3 (C-17), 69.4 (C-25), 71.5 (C-16), 83.4 (C-24), 85.6 (C- 20), 175.6 (C-3).
Síntesis del compuesto (Ik)
Figure imgf000032_0002
200 mg de In fueron tratados con 170 mg ácido m-cloroperoxibenzoico durante 3 horas, para obtener 180 mg de un sólido blanco identificado como Ik.
Síntesis del compuesto (II)
Figure imgf000033_0001
A 100 mg de In se los trató con 80 mg borohidruro de sodio (NaBH4) obteniéndose un sólido blanco identificado como II, con punto de fusión de 125-128 °C y peso molecular de 474 g/mol.
Síntesis del compuesto (Im)
Figure imgf000033_0002
A 0.15 mmol de cloruro de hexadecanoilo, previamente obtenido y en atmósfera inerte se le adiciono 0.22 mmol de In, disueltos en 4 ml_ de diclorometano seco. La reacción se dejó en agitación por 30 minutos. Transcurrido este tiempo, a la mezcla de reacción, se le agrego 15 mL de acetato de etilo y se colocó en un embudo de separación. La fase orgánica se lavó tres veces con agua destilada y tres veces con una solución saturada de NaHC03, se secó con Na2S04 anhidro y se concentró a presión reducida. La mezcla de reacción fue cromatografiada en columna abierta y empacada con sílice. Como mezcla de elución se utilizó la mezcla hexano-acetato de etilo (7:3). De las fracciones 3-8 se obtuvieron 50 mg de de un sólido blanco amorfo con p.f. de 246 °C con un rendimiento de 70 %. IR (solución CHCI3) cm-1: 2920.70, 2851.35 (CH), 1732.60 (C=0), 1707.92 (C=0), 1463.77, 1379.20, 1270.56, 1 153.83. EM-FAB + m/z, (%): 948 (1), 933 (5), 437 (77), 381 (34), 125 (100), 43
(93). EM-IE (70 eV), m/z, (%): 692 [M +- ác. palmítico] (6), 436 (24), 381 (22), 256 (22), 125 (100), 43 (54). RMN 1 H (300 MHz, CDCI3) d ppm: 5.44 (1 H, ddd J=5.4, J= 2.7 y J=12.3 Hz, H-16), 3.66 (1 H, dd, J=6.9 Hz y J=8.51 Hz, H-24), 1.38 (3H, s), 1.25 (m, para dos grupos CH3 y varios CH2 del residuo de palmitato), 1.14 (3H, s), 1.09 (3H, s), 1 .04 (3H, s), 0.87 (3H, s), 0.81 (1 H, d, J= 4.3 Hz, H-19a), 0.59 (1 H, d, J=4.3 Hz, H-19b). RMN 13C (75 MHz, CDCI3) d ppm: 215.68 (C3), 175.46 y 172.91
(carbonilos de los ásteres de palmitato), 81 .91 (C24), 81.89 (C25), 74.45 (C16), 56.35 (C17), 49.58 (C4), 47.84 (C8), 47.15 (C5), 46.15 (C13), 46.02 (C14), 44.91 (C15), 35.97 (C2), 36.80 (C22), 33.64 (C1), 32.64 (C12), 29.56 (C19), 29.54 (metilenos del residuo de palmitato), 29.01 (C20), 26.30 (C1 1 ), 25.88 (C7), 27.90 (C26), 27.36 (C27), 24.40 (C23), 21 .61 (C21), 21.61 (C18), 20.19 (C29), 19.63 (C30), 14.07 (Metilos del palmitato).
Síntesis del compuesto (I'a)
Figure imgf000034_0001
Una solución de 100 mg de le en EtOH se mantuvo a reflujo con 289 mg of hidróxido de potasio por 40 min. Después la reacción fue neutralizada y se obtuvo 70 mg de 3,16-dioxo-25-nor-cicloartan-17- en-24-oic acido [I'a] P.f. 182-184 °C. IR (KBr): vmax cm-1: 3327, 1741 , 1703, 1615 cm-1. EIMS m/z (%): 426 (M+, 39.69), 41 1 (100), 143 (4.5), 125 (3). HRMS: encontrado m/z 427.2864, [M+H]+; C27H3904 requerido 427.2848.1 H NMR (300 MHz, CDCI3): d ppm : 0.64 (d, J = 4.2 Hz, 1 H, H-19), 0.86 (d, J = 4.8 Hz, 1 H, H-190), 0.99 (s, 3H, CH3), 1.06 (s, 3H, CH3), 1.1 1 (s, 3H, CH3), 1.35 (s, 3H, CH3), 1.92 (s, 3H, CH3). 13C NMR (75 MHz, CDCI3): d ppm : 20.2 (C-18), 20.7 (C-28), 20.8 (C-30), 20.9 (C- 9), 21.2 (C-29), 22.1 (C-21), 22.6 (C-6), 26.0 (C-7), 26.3 (C-11), 26.3 (C-10), 29.2 (C-23), 30.6 (C-19), 30.8 (C-22), 32.6 (C-12), 33.1 (C-1), 37.2 (C-2), 42.3 (C-13), 45.7 (C-14), 47.9 (C-8), 48.2 (C-5), 50.20 (C-4), 51.0 (C-15), 141.7 (C-17), 149.5 (C-20), 177.8 (C-24), 207.3 (C-16), 216.0 (C-3).

Claims

REIVINDICACIONES
1 Un compuesto de guayulinas A, B, C y D denominadas:
Argentatinas A y C,
Isoargentina B y
Argentatina D, de fórmula (I) y (I') que presentan nula citotoxicidad ni genotoxicidad sobre células linfocíticas sanas en un modelo animal In vivo, caracterizado porque presenta actividad antiinflamatoria, inhibe el crecimiento de células cancerosas a través de un proceso de senescencia; En donde el compuesto de fórmula (I):
(A)-(B)-(C)
en donde:
A es un grupo que se selecciona de uno de:
Figure imgf000036_0001
C es un grupo que se selecciona de uno de:
Figure imgf000036_0002
y en donde: R1 representa un grupo que se selecciona de:
R2 representa un grupo que se selecciona de:
R3 representa un grupo que se selecciona de:
R4 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000037_0001
y en donde:
R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
R3 y R4 pueden ser al mismo tiempo R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
Figure imgf000037_0002
R5 es un grupo que se selecciona de uno de: H, CH3 o una cadena alquílica. y en donde
cuando A es
Figure imgf000037_0003
, entonces R1 no es y R2 no es _Br, y R3 y R4 son al mismo tiempo un grupo que se selecciona de -
Figure imgf000037_0004
o
cuando C es , entonces R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo — ° y R2 no es -Br;
Figure imgf000037_0005
o
cuando A es _ entonces R1 y R2 pueden formar juntos un grupo
Figure imgf000037_0006
Figure imgf000037_0007
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Y el compuesto de fórmula (I '):
(A)-(B)-T
en donde:
A y B tienen los significados como se define anteriormente, R1 representa un grupo que se selecciona de:
R2 representa un grupo que se selecciona de:
R3 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000038_0001
y en donde:
R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
Figure imgf000038_0002
R5 es un grupo que se selecciona de uno de: H, CH3 o una cadena alquílica.
y en donde
cuando A es , entonces R1 no es y R2 no es -Br;
Figure imgf000038_0003
o
Figure imgf000038_0004
cuando A es , entonces R1 y R2 pueden formar juntos un grupo
Figure imgf000038_0005
Figure imgf000038_0006
y en donde T representa un grupo
Figure imgf000039_0001
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
2.- Un compuesto de guayulinas de fórmula (I):
(A)-(B)-(C)
en donde:
A, B, R1 , R2, R3, R4 y R5 se define de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque:
R3 y R4 no pueden ser al mismo tiempo -OH; y
R1 y R2 no son al mismo tiempo respectivamente;
Figure imgf000039_0002
y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
3- Un compuesto de guayulinas de fórmula (I):
(A)-(B)-(C)
de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque:
A es un grupo
Figure imgf000039_0003
B es un grupo
Figure imgf000039_0004
C es un grupo
Figure imgf000040_0001
y en donde:
R1 representa un grupo:
Figure imgf000040_0002
R2 representa un grupo: -H;
R3 representa un grupo que se selecciona de: -OH;
R4 representa un grupo que se selecciona de: -OH;
y/o los enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, del compuesto mencionado anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
4 - Un compuesto de guayulinas de fórmula (I ') de conformidad con la reivindicación 1 :
(A)-(B)-T
en donde:
A y B tienen los significados como se define anteriormente, caracterizado porque:
Figure imgf000040_0003
R2 representa un grupo que se selecciona de:
R3 representa un grupo que se selecciona de:
Figure imgf000040_0004
y en donde:
R1 y R3 pueden ser al mismo tiempo
Figure imgf000040_0005
R1 y R2 no son al mismo tiempo
Figure imgf000040_0006
R5 es un grupo que se selecciona de uno de: H, CH3 o una cadena alquílica.
y en donde cuando A es
Figure imgf000041_0001
, entonces R1 no es y R2 no es -Br; o
Figure imgf000041_0002
cuando A es , entonces R1 y R2 pueden formar juntos un grupo
Figure imgf000041_0004
Figure imgf000041_0003
Figure imgf000041_0005
y en donde T representa un grupo y enantiómeros, diasteroisómeros, mezclas de enantiómeros, mezclas de diasteroisómeros, anómeros, hidratos, solvatos, polimorfos, de los compuestos mencionados anteriormente y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
5.- Un compuesto de guayulinas de fórmula (I) y (I ') de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque los compuestos de fórmula (I) y (I ') que se seleccionan de entre:
Figure imgf000041_0006
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0001
6.- Un compuesto de guayulinas de fórmula (I) y (I ') de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el compuesto In es el compuesto
Figure imgf000043_0002
7.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (la) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: 100 mg de In se disolvieron en 5 ml de ácido acético glacial reaccionando con 0.4 l de una disolución 1 M de bromo en ácido acético. La reacción se lleva a cabo en agitación a 3 °C durante 1.25 h la mezcla de reacción se verte en un matraz Erlenmeyer que contenía 50 g de hielo, se lava con una disolución 5% NaHC03 y posteriormente se recristaliza:
Figure imgf000044_0001
8.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ib) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una disolución de In (200 mg) y cloruro de fenilselenio (120 mg) en EtOAc (4.6 ml) se agita a temperatura ambiente durante 2 h; posteriormente se agrega 1 mi de agua a la mezcla de reacción en agitación. La fase acuosa se separa y se agregaron 2 mi de THF y 0.2 mi de H202 al 30%. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 1 h.
Figure imgf000044_0002
9.- .- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ic) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una mezcla de 25.5 mg del derivado Ib, 21 mg de acetato de sodio y 2 mi de anhídrido acético se calenta a temperatura de reflujo por una hora; posteriormente, la mezcla se verte en un matraz erlenmeyer que contenía 5 g de hielo y se agita por 3 minutos. El contenido del matraz se extrae con AcOEt (3x). La fase orgánica se seca y se concentra a presión reducida para obtener un semisólido; se recristaliza se obtiene el acetato le
Figure imgf000045_0002
10.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Id) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: 301 mg del compuesto In en 4.5 ml de piridina se hacen reaccionar con 99 mg of NH2OH HCI en agitación a temperatura de reflujo durante una hora; posteriormente, la mezcla de reacción se vertie en un matraz que contenía 100 g de hielo y se extrae con AcOEt (3x). La fase orgánica se lava repetidas ocasiones con una disolución de HCI al 10% seguido de agua y posteriormente se seca y concentra a presión reducida. El residuo obtenido después de la evaporación se purifica por medio de cromatografía en columna, para obtener la oxima Id.
Figure imgf000045_0001
1 1.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (le) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una disolución de 100 mg de In en 4 mi de ácido acético se trata a 0-5 °C con trióxido de cromo (100 mg) en 0.3 mi de agua. Después de 1 hora, la mezcla se deja a temperatura ambiente y posteriormente se extrae con AcOEt (3x). La fase orgánica se procesa de manera convencional para obtener el producto le
Figure imgf000046_0001
12.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (If) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una mezcla de 200 mg de In, 60.2 mg de acetato de sodio y 5 mi de anhídrido acético se calientan a temperatura de reflujo por 18 horas; posteriormente, la mezcla se verte en un matraz erlenmeyer que contenía 50 g de hielo y se agita por 15 minutos; se extrae con AcOEt (3x). La fase orgánica se seca y se concentra a presión reducida para obtener un semisólido. El producto se recristaliza (hexano/ AcOEt) para obtener acetato If
Figure imgf000046_0002
13.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 12 caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ig) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: 200 mg del diacetato In en 6.5 mi de piridina se hacen reaccionar con 95 mg de NH2OH HCI en agitación a temperatura de reflujo durante 1.5 horas; posteriormente, la mezcla de reacción se verte en un matraz que contenga 50 g de hielo y se extrae con AcOEt (3x). La fase orgánica se lava 3 veces con una disolución de HCI al 10% y después con agua. La recristalización de la fase orgánica purifica la oxima Ig
Figure imgf000047_0001
14.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ih) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una disolución de 200 mg de In en 6 mi de piridina seca, contenida en atmósfera inerte, se adiciona 1 mi de formiato de etilo (recién destilado), 0.8 mi de una disolución de sodio en MeOH absoluto (0.44 g / 6 mi). La reacción se mantiene en agitación a temperatura ambiente durante 8 a 12 horas hasta la aparición de un color ocre y/o la formación de un precipitado insoluble; posteriormente la mezcla de reacción se coloca en una disolución fría de 3 mi de ácido acético en 27 mi de agua; el precipitado, se extrae con cloruro de metileno. La fase orgánica se lava con agua y se extrae con una disolución de hidróxido de potasio al 2%. El extracto básico se lava con éter, se acidifica con ácido acético glacial y finalmente se extrae con cloruro de metileno. La fase de cloruro de metileno final se seca y se concentra a presión reducida para obtener un producto semisólido impuro, purificándose por cromatografía en capa preparativa para obtener el derivado formilado Ih.
Figure imgf000047_0002
15.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ii) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una disolución de 60 mg del derivado formilado Ih en 5 mi de ácido acético glacial, en agitación, se hace reaccionar durante 2 horas con 30 mg de clorhidrato de hidroxilamina a temperatura de reflujo; posteriormente la mezcla de reacción se vierte en un matraz erlenmeyer que contenía 50 g de hielo y se extrae con AcOEt. La fase orgánica se lava con una disolución de bicarbonato de sodio al 5% (3x) y con agua. La fase orgánica se seca y concentra a presión reducida para obtener un semisólido impuro, posteriormente el semisólido se purifica por medio de cromatografía en columna para obtener el isoxazol Ii
Figure imgf000048_0001
16.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ij) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: a 100 mg de oxima de In disueltos en CHCI3 se le adiciona 0.5 mi de anhídrido trifluoroacético lentamente a 0°C la mezcla de reacción se agita constante a 25°C durante 18 min; posteriormente la mezcla de reacción se evapora a presión reducida. De esta reacción se obtiene 16-trifluoroaxetoxi-lactama de In, se le adicionó una solución de carbonato de potasio en metanol y se agita durante 15 min. a temperatura ambiente, posteriormente la solución se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. El producto de reacción se purifica por cromatografía en columna con polaridad de 2: 1 Hex:AcOEt, obteniendo Ij.
Figure imgf000048_0002
17.- Un compuesto de guayulinas/argentatinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Ik) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: 200 mg de In se tratan con 170 mg ácido m-cloroperoxibenzoico durante 3 horas, para obtener 180 mg de un sólido blanco Ik
Figure imgf000049_0001
18.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (II) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: a100 mg de In se tratan con 80 mg borohidruro de sodio (NaBH4) obteniéndose un sólido blanco II.
Figure imgf000049_0002
19.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la síntesis del compuesto (Im) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: a 0.15 mmol de cloruro de hexadecanoilo, previamente obtenido y en atmósfera inerte se le adiciona 0.22 mmol de In, disueltos en 4 mi de diclorometano seco. La reacción se agita por 30 minutos; posteriormente se le agrego 15 mL de acetato de etilo y se coloca en un embudo de separación. La fase orgánica se lava tres veces con agua destilada y tres veces con una solución saturada de NaHCO3, se seca con Na2SO4 anhidro y se concentra a presión reducida. La mezcla de reacción es cromatografiada en columna abierta y empacada con sílice. Como mezcla de elución se utiliza la mezcla hexano- acetato de etilo (7:3). De las fracciones 3-8 se obtiene un sólido blanco amorfo (Im).
Figure imgf000049_0003
Figure imgf000050_0001
20.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado porque la síntesis del compuesto (I'a) se lleva a cabo de conformidad con los siguientes pasos: una solución de 100 mg de le en EtOH se mantiene a reflujo con 289 mg de hidróxido de potasio por 40 min; posteriormente la reacción es neutralizada y se obtiene 3,16-dioxo-25-nor-cicloartan-17-en-24-oic acido [I'a]
Figure imgf000050_0002
21.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque son compuestos activos que interfieren con el proceso inflamatorio y tienen actividad antitumoral en líneas celulares de cáncer humano.
22.- Un compuesto de guayulinas de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el mecanismo por el cual ejercen un efecto antitumoral sin generar citotoxicidad sobre células sanas es a través de la inducción de senescencia celular.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022133477A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Bridgestone Corporation Modified guayule resin product and related processes
WO2022170364A1 (en) * 2021-02-08 2022-08-11 Bridgestone Corporation Modified guayule resin product and related processes

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7846904B2 (en) 2003-06-23 2010-12-07 Geron Corporation Compositions and methods for increasing telomerase activity
US8481721B2 (en) 2009-05-18 2013-07-09 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for increasing telomerase activity

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7846904B2 (en) 2003-06-23 2010-12-07 Geron Corporation Compositions and methods for increasing telomerase activity
US20110071095A1 (en) * 2003-06-23 2011-03-24 Geron Corporation Compositions and Methods for Increasing Telomerase Activity
US8759304B2 (en) 2003-06-23 2014-06-24 Telomerase Activation Science, Inc. Compositions and methods for increasing telomerase activity
US8481721B2 (en) 2009-05-18 2013-07-09 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for increasing telomerase activity
US9403866B2 (en) 2009-05-18 2016-08-02 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for increasing telomerase activity
US9913851B2 (en) 2009-05-18 2018-03-13 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for increasing telomerase activity

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELA ALCÁNTARA-FLORES, BRECHÚ-FRANCO ALICIA, GARCÍA-LÓPEZ PATRICIA, ROCHA-ZAVALETA LETICIA, LÓPEZ-MARURE REBECA, MARTÍNEZ-VÁZQUEZ M: "Argentatin B Inhibits Proliferation of Prostate and Colon Cancer Cells by Inducing Cell Senescence", MOLECULES, vol. 20, no. 12, 27 November 2015 (2015-11-27), pages 21125 - 21137, XP055769356, ISSN: 1420-3049, DOI: 10.3390/molecules201219757 pubmed:26633316 *
PARRA-DELGADO H ET AL.: "Synthesis of argentatin A derivatives as growth inhibitors of human cancer cell lines in vitro", BIOORGANIC AND MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 15, no. 4, 15 February 2005 (2005-02-15), pages 1005 - 1008, XP025314453, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/j.bmcl.2004.12.038 *
ROMERO JUAN CARLOS ET AL.: "Synthesis, anti-inflammatory activity and modeling studies of cycloartane-type terpenes derivatives isolated fromParthenium argentatum", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 22, no. 24, 25 October 2014 (2014-10-25), Nl. Neidle Stephen, pages 6893 - 6898, XP029102536, ISSN: 0968-0896, DOI: 10.1016/j.bmc. 2014.10.02 8 *
TAVAREZ-SANTAMARÍA ZAIRA, JACOBO-HERRERA NADIA J., ROCHA-ZAVALETA LETICIA, ZENTELLA-DEHESA ALEJANDRO, COUDER-GARCÍA BEATRIZ DEL CA: "A Higher Frequency Administration of the Nontoxic Cycloartane-Type Triterpene Argentatin ''. A Improved Its Anti-Tumor Activity", MOLECULES, vol. 25, no. 8, 14 April 2020 (2020-04-14), pages 1780, XP055769372, DOI: 10.3390/molecules25081780 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022133477A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Bridgestone Corporation Modified guayule resin product and related processes
JP7633407B2 (ja) 2020-12-18 2025-02-19 株式会社ブリヂストン 変性グアユール樹脂生成物及び関連するプロセス
WO2022170364A1 (en) * 2021-02-08 2022-08-11 Bridgestone Corporation Modified guayule resin product and related processes

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