[go: up one dir, main page]

WO2019107387A1 - マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬 - Google Patents

マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬 Download PDF

Info

Publication number
WO2019107387A1
WO2019107387A1 PCT/JP2018/043698 JP2018043698W WO2019107387A1 WO 2019107387 A1 WO2019107387 A1 WO 2019107387A1 JP 2018043698 W JP2018043698 W JP 2018043698W WO 2019107387 A1 WO2019107387 A1 WO 2019107387A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
rifin
protein
lilrb1
malaria
binding
Prior art date
Application number
PCT/JP2018/043698
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
尚 荒瀬
史路 平安
恒幸 平安
Original Assignee
国立大学法人大阪大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人大阪大学 filed Critical 国立大学法人大阪大学
Priority to JP2019557256A priority Critical patent/JPWO2019107387A1/ja
Priority to US16/767,929 priority patent/US20210187002A1/en
Publication of WO2019107387A1 publication Critical patent/WO2019107387A1/ja

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
    • C07K14/445—Plasmodium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a drug for treating malaria, a method for treating malaria, a method for screening a candidate substance for treating malaria, a marker for marking malaria severity, a method for testing the risk of severity of malaria, and a test reagent.
  • Vaccines have been developed to prevent malaria infection and to control the severity of symptoms at the time of infection. However, no clinically effective malaria vaccine has been developed at present.
  • the present invention aims to provide a novel malaria therapeutic drug.
  • the malaria therapeutic agent of the present invention (hereinafter also referred to as “therapeutic agent”) is a riffin (RIFIN) protein and a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein And a inducer of the binding inhibitor, or an inhibitor of expression of RIFIN or LILRB1.
  • RIFIN riffin
  • LILRB1 leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1
  • the method for treating malaria of the present invention (hereinafter, also referred to as "therapeutic method") is characterized by administering to the patient the agent for treating malaria of the present invention.
  • the screening method of the candidate substance for malaria treatment of the present invention comprises, from the test substance, a riffin (RIFIN) protein and a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein A binding inhibitor that inhibits the binding of the compound, an inducer of the binding inhibitor, or an expression inhibitor of RIFIN or LILRB1 is selected as a candidate for malaria treatment.
  • RIFIN riffin
  • LILRB1 leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1
  • the malaria aggravation marker of the present invention (hereinafter also referred to as “marker”) is characterized by being riffin (RIFIN).
  • test method The method for testing the risk of severe malaria in the present invention is characterized by including a measurement step of measuring the expression of riffin (RIFIN) in a biological sample of a subject.
  • RIFIN riffin
  • the test reagent of the present invention comprises a reagent for measuring expression of riffin (RIFIN), It is characterized by being used in the test method of the present invention.
  • a novel malaria therapeutic agent can be provided.
  • FIG. 1 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 1.
  • FIG. 2 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 2.
  • FIG. 3 is a dot plot showing the results of flow cytometry in Example 3.
  • FIG. 4 is a histogram showing the results of flow cytometry in Example 4.
  • FIG. 5 is a histogram showing the results of flow cytometry in Example 5.
  • FIG. 6 is a histogram showing the results of flow cytometry in Example 6.
  • FIG. 7 is a graph showing the results of flow cytometry in Example 7.
  • FIG. 8 is a graph showing the production of IgM in Example 8.
  • FIG. 9 is a graph showing the activity of NK cells in Example 9.
  • FIG. 9 is a graph showing the activity of NK cells in Example 9.
  • FIG. 10 is a graph showing the number of infected erythrocytes binding to LILRB1-Fc in Example 10
  • FIG. 11 is a graph showing the percentage of Africans having IgG binding to RIFIN protein in Example 11.
  • FIG. 12 is a histogram showing the results of flow cytometry in Example 12.
  • FIG. 13 is a graph showing the results of flow cytometry in Example 12.
  • treatment refers to prevention (prevention), inhibition (stop) or suppression of progression of symptoms, prevention (prevention) or inhibition (stop) or suppression of aggravation, improvement or amelioration of symptoms, or prognosis It may have any meaning, including the meaning of improvement.
  • severeation includes the meanings of cerebral malaria and severe anemia, and may be any meaning or both.
  • the cerebral malaria is defined as, for example, Blantyre coma score ⁇ 3.
  • the severe anemia is defined as, for example, blood haemoglobin ⁇ 5 g / dL.
  • Blantyre coma score is, for example, a total value of the following evaluation items (a), (b) and (c).
  • the method of measuring the blood hemoglobin concentration is, for example, a cyanmethemoglobin method.
  • the therapeutic agent for malaria of the present invention is, as described above, a binding inhibitor that inhibits binding of a riffin (RIFIN) protein to a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein, induction of the binding inhibitor It is characterized in that it comprises a substance or an expression suppressor of RIFIN or LILRB1.
  • the therapeutic agent of the present invention is characterized by including a binding inhibitor which inhibits the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein, an inducer of the binding inhibitor, or an inhibitor of RIFIN or LILRB1 expression, and other constitutions and The conditions are not particularly limited.
  • the therapeutic agent of the present invention can treat malaria.
  • the therapeutic agent of the present invention can prevent (prevent) the aggravation of malaria, for example. Therefore, the therapeutic agent of the present invention can also be referred to, for example, as an agent for preventing the aggravation of malaria (prophylactic agent).
  • RIFIN expressed in erythrocytes infected with Plasmodium falciparum binds to LILRB1 expressed in immune system cells such as B cells, NK cells, etc. We found that they inhibit cell function.
  • the present inventors have found that in erythrocytes of severe malaria patients, the binding of LILRB1 protein is higher than erythrocytes of mild malaria patients (non-severe malaria patients), that is, LILRB1-binding RIFIN It was found that protein expression was high.
  • the present inventors obtained the finding that the coexistence of a binding inhibitor that inhibits the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein can inhibit the generation of a signal mediated by LILRB1 protein by RIFIN protein. From these findings, the present inventors have found that P. falciparum escapes the immune system and causes malaria to become more severe through the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein, and the present invention Came to establish. According to the therapeutic agent of the present invention, for example, since the binding of RIFIN protein to LILRB1 protein can be directly or indirectly inhibited, generation of a signal through LILRB1 protein by RIFIN protein can be inhibited.
  • the therapeutic agent of the present invention it is possible to prevent or release the suppression of the function of the immune system cells by, for example, the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein. Therefore, according to the therapeutic agent of the present invention, malaria can be treated, for example, by preventing the aggravation of malaria.
  • the origin of RIFIN is, for example, P. falciparum.
  • the RIFIN derived from P. falciparum can refer to information registered in an existing database, for example.
  • RIFIN of Plasmodium falciparum for example, the following amino acid sequence can be mentioned as a protein.
  • the character string shown after "Genbank:" in parenthesis is the accession number in Genbank of each RIFIN protein (following, the same).
  • RIFIN of P. falciparum for example, a base sequence registered under NCBI accession number shown in Table 1 below is mentioned.
  • P. falciparum RIFIN protein 1 (SEQ ID NO: 1, PF3D7_0100200, GenBank: CAB 89210.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTPHTPNHTQTTRLLCECELYSPANNDNDAEMKRVMQQFEDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQSDSIPTCICEKSLEDKVEKGCLRCAGVLGGGIAPGWSLVSGLGYAVWTNYVTQTALQKGIEAGVKAGIEGLRDFSGLGKLIPISVIQNLINHTNYDIAKTYITFVKSVNSTKCAVKEHSFCFSTYISNENALSKRAAGIAEYAADMAKITERGVLDAATPGLTTYSNAITASVVAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 2 (SEQ ID NO: 2, PF3D7_0900200, GenBank: CAD 51688.1) MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHNSTTHHTLKIPITRLLCECELYELANYDNDPEMKEVMQQFEDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCICEKSLEDKMEKECLKCAQNLGGIVAPSTGVLGEIAALAVNAWKTEAIAAATKAAIAKGTAKGLAAGAAKGVAEVIAQVESQFRLSTIGVKELGSIFNASNYTNETFISGYIYAQYQGSQCGSLSMLLGKSKPFCTFVEGRIFATSVRVGRSFSPEDFIKTTVQTIVKNAKTTAEATKAQVASAEKAAVLETSKKAIEATTTPYYTPIIVSIVAIVVIILIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 3 (SEQ ID NO: 3, PF3D7_0223100, GenBank: CZT 98243.1) MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITRTPKATTRTLCECELYAPATYDDDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDQFDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQNDAIPTCICEKSLADKVEKTCLRCGSVFGGGITPGWGLISGLGYVGWTNYITEIAIQKGIEAGVKAGIQELKGFAGLSRLINFSEIKNLINHTNYFKEMTYVSFLQDANKTHCSARPTSKEIFCNFVSHNGESALSKRAAGIADYAADMAKITEEGVLEEGASATSSLTTAIIASIIAIVVIILIMIIIYLVLRYLRKKKMKKKLEYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 4 (SEQ ID NO: 4, PF3D7_1254800, GenBank: CZT 99701.1) MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITPRHIQTTRLLCECELYMSNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDDRMIEKRQKCKDRCNKEIEKIILKDKIEKELTETFATLNTNITNEDIPTCICKKSVADKIEKTCLKYGGALGGGVMPGLGLIGGNSVYILANYETINAFIAKTIEELEGIPGITKLFGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCAANKNELLCRGMNPNVPETLPKKIEVAVNEVLSSVNDTWATATTPTTFFTNPIILSAIAILVIVIIMVIIYLILRYRRKQKIKKKLQYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 5 (SEQ ID NO: 5, PF3D7_0700200, GenBank: CZT62652.1) MKIHYINILLFALPLNILVHNQRNHKKTILHTPKTKSTRTHRSLCECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDRCDKDIQKIILKDKIEKELAETFSSLHTDIQSDAIPTCICEKSLADKVEKGCLRCAQNLGGLVPGMGLIGGTAVYAAAVKAATKAGMKEALEGLKSIGGLKLLLQDKFTELVTTRNFQCPNALVGAVQNVINTQCVGPAAKNQLLCNGYEAQNDSRIIQKAVDAGRDGADVYIRTFSDSTTITTFLTDPIVISAIVVISIVVILLIIYLILRYRRKIKMNKKLQYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 6 (SEQ ID NO: 6, PF3D7_1100400, GenBank: CZT 98672.1) MKIHYINILLFALPLNILVNNQRNHNNSTYHTSNTKTIKSHRSLCECELYAQSNYENDQEMKDVIKEFNDRTAQRFEEYNERMQVKKDQCKEQCDKEIQQIILKDKIEKELTERFSALETKIDTNDILTCICEKSVTDKFEKTCLKCSGIFATAVPELGLIGGTVVYAAAVKAATKAGMEAALVGLESVNGLRGLLGEKIKDLVTTTNFQCPNALMGLVQNVKDTQCVGAAAQSQVFCKGLLPESTSRIIQKAAAAGREGAEAYNTTFSDSTTITAFLTDPIVISAIVVISIVVILLIIYLILRYRRKIKMNKKLQYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 7 (SEQ ID NO: 7, PF3D7_1480000, GenBank: CZU00495.1) MKVHYINILLFSLPLNILEHNPWNHYMKPHTYTNRSLCECELYELANYDNDPQMKEVMENFIKQTQQRFHEYDERLQSKRKQYKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMAQQLTTLDPNITTEDIPTCVCEKSLADKTEKFCLNCGKTMGGVAPGWGLVSGLGYAGWSHYAATTLVKIATDAGIAEGLKVGLTKVTEIVTQLSSSTEVAIPTIDVLTNLTTGISADNVTLLGIFKTINIGMKGEFDTDTYALFSTWVQNIATTPKSYMGRYLTEAEEVTKAFADAQTRVLTQAGNVTSNLTTGITVSIIAIVVIVLVMLIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 8 (SEQ ID NO: 8, PF3D7_0600300, GenBank: CAG25174.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHNSTTPHHPPNTRLLCECELYAPATYDDDPQMKEVMQQFEDRTSQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQNDAIPTCVCEKSLEDKMEKGCLRCGGVLGGGIAPTFGLIGSVAINMWKTTEIAAATKAAIAAGKAAGKIAGEAAGKKAVIEALKYFGVDDFFPEIFKSILKMSRYTDVTKFGAAIAEKHVLNCAMSARGGSVNDSTCNAFEIKLGLFEAETGKPNGPPAYQAIPQKINELAEEATQAAAEAAKKASESATAAFETAEKEAIEAASMQLYTTIAYSILAILIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 9 (SEQ ID NO: 9, PF3D7_0632700, GenBank: CAG 25139.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHYITRTPKATTRSLSECELYAPSNYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDHRMKTTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQNDAIPTCVCEKSVADKVEKNCMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALYVWRDAEIVAAIAAAKEAGAAKGAAVGIKEGIKVLLNRLNTDFGLSPVRIKELESVINGTNYTDVTFIYEAIYTTYKRSCVPVDVSVRFTVADTDLTFCESVWNQTLAVSQRNMGTSPLPIIQKTAQKIVSDANFTAAATAETATEEATTTLTAKNTGEVNATYMGYQTPIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 10 (SEQ ID NO: 10, PF3D7_0632200, GenBank: CAG25134.1) MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHQKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERVQNTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKIEKELNEKFSALHTDIQSDDIPTCICEMSMADKVEKGCLRCVGVFGGGIAPSVGLLGGLGIYVWKPGALKVAITAALNANSVKIAAAANAAGEAMGVKTVIEGLKALNVHGLCPDLFESIGTKIHYTNAEEIAKIIVAKYRATCNLSTGTSSTQAMCKQFDYTFGMRIRLGSPVEYGPPPASAIPDTVKKVVAGAEQAAEAKAANVRTTISSKIITEETDVINTIYMSNQTAIIASIAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 11 (SEQ ID NO: 11, PF3D7_0100400, GenBank: CAB89212.1) MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITSRHIQTTRLLCECELYTPNYDNDPEMKSVMQQFHDRTTQRFHEYDENLKEKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIEKELTEKFSSLQTDIHSDAIPTCICEKSLADKVEKNCLKCTQNLGKIVAPSSGVLAGISEAALSVWKTTEIAAAMELAKQAGAAAGLKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGDKLLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYTTSCTPSLVNDQLVGTFNTSDPFCNLVHSNLQGSFYRSSAQTIIYEKVEEAVAGAEQAATTKTAVMTPIYTTEFTAKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKMKLKKKL
  • P. falciparum RIFIN protein 12 (SEQ ID NO: 12, PF3D7-1254400, GenBank: CZT 99697.1) MMLNYTNILLFYLSLNILSSSSEVYNQRNHFITYTPKRSTRLLCECELYTSIFDNDPEMKSLIEHFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQSDAIPTCICEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGFLSGIVYTGWKAAALAAATKEAIAEGAAKGAAAGTKAGIKAVMDVLYSDFGLSIEGVQKMGLVLSATNYKDVPMITKALYSKFQVSSCLRGGPVPGVPPVRPTDGTFCSAMLEKILAQENVVKQNSLEGSIKSVVNQIVTEAKSAAVSETAKVTASETETLKATNIAAVNATYASSQTAIIASIIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLL
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 13 (SEQ ID NO: 13, PF3D7_0732900, GenBank: CAD51067.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHNSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIEKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDAIPTCVCEKSVADKTEKVCLNCGKTMGAVAPAWGLISGLWYATWSQYVSAKILEVGISEGIKEGLTQIMKFTISLYPKANLPNITVTQMLSSGKFTNNVTLFDMVQHINNTMYTTLEAEEYSKFCGVVSSMAKYKNITFNRTYGKYSTAVTEAVTQGKTNAINTLTPATNTLTTAIIASMVAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 14 (SEQ ID NO: 14, PF3D7_1040500, GenBank: CZT 98660.1) MKVHYINILLFVIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSVADKMEKGCLRCGSILGAAMPEMGSIGGSLLSALSAWKPVAIEAAEKAAIAKATDLATQAGMREVVLKIEQFLKNFTEKEGLVNFTSVVNKSNFKCPTALFQNANELLSDSCIPDEVTNRTSTFCSTIAYGEKTTFEPFAQAGATTFQETLTAKTPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 15 (SEQ ID NO: 15, PF3D7_0600500, GenBank: CAG25176.1) MKIHYTNILLFALPLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLDTDIQSDAIPSCVCEKSIAEKAEKGCLRCGYGLGSVAPMIGLTGSVAVNVWKTAELAAAMELAKQAGAAAGIKAGHLAGTKVVIDQLHTLGIYFVGGKPLESIIHVTNYMNVSVIYDKVYSHYTTLCTPRFVIDRPVGDFIFSGPVCNLVQPNHQGIWVKSSAQAIIKKKVEEAVAEGTQAADVVAKNTADEVTKAAIKTSTEAIDAATTTYYTPIIASIVAIVLIVLIMVIIYKILRYRRKRKMKK
  • P. falciparum RIFIN protein 16 (SEQ ID NO: 16, PF3D7-1254200, GenBank: CZT99695.1) MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKIDTNDIPTCVCEKSMTDKVEKGCLRCGRNLGVAVPGLGVLGAYGAHSIVKVAMATAEKVGIQLGIDAGNAAGIKAVIEALNSSLNIDNLGGITLDTVLKGNNFKNIDFLVYILTDKYNTTCTVSNTEVETLLCYIGKEKPTLPYTLIQSNVRKAVAEATEVATSTTEEMTTIYTTQELSKVTSTGAILSNPIIISFIVIVIVVIIFLIIYLILRYRRKKKTKKKLQYIKLLKE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 17 (SEQ ID NO: 17, PF3D7_0400700, GenBank: CAD 49098.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECELYSPANYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQNDAIPTCVCEKSIADKVEKGCLRCVGVFGGGVMPGFGTIGGTALYALNQLKPAVFKAAIKAALEEGAAEILAAGIEAGDAAGMNVVRYGLRYLHVHELFPVIFDSFVKTRPYNEITSIANSILLKYGPTCTGLDNNSPPAACTKFQLNLGIHKKIGAMIDTHGTPASTAIRQGLEGILEEATQTAEAAAKIAEKGVAAEITARETALIEAGFNSSITSINASIFAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 18 (SEQ ID NO: 18, PF3D7_1040700, GenBank: CZT 98662.1) MKFSYFNILLFSIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYSPDNYDNDAEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKDRCDKEIQKIILKDKIEKELSQHLSTLETNIDTNDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVNELKKAAMAIAIKDAIAEGLVAGETARIQASIKAVILGIKSKFRIDTLGGEVLESIITAQKYDDVSLISESIYMQYQSTCLPQYVGHGADLSKPICHTVYTLDFVQGKVHVPGSLQGSIKKALEKIVAEAKSNAVSETANVTTRQTAVFESRNIAAVDATYASYQTAIVASVVAILVIVLVMLIIYLILRYRRKKKMKKKLQYI
  • P. falciparum RIFIN protein 19 (SEQ ID NO: 19, PF3D7_0500400, GenBank: CAD51370.1) MKFSYFNILLFSIPLNILINDHSKYSSCKHTSNSKTTKPHRSLYECGLYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKEQCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLNTLETKIDTDDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVHVWKPMALEAAIEAAIAKSAAEISAAANAAGIQAGKIAVIESLKKLYVDYFWPEMSNYILNMSHYNGVANLTAFIHEPKFNVCKDAGEVILDKCNAFDMGFGILKKDGVTNGLLPKDAVPRVLKGIVGQAEGPAKVAADAARQTVTAEITEKETAAINTIFMSKQTAIIASVVAIVVIVLIMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
  • P. falciparum RIFIN protein 20 (SEQ ID NO: 20, PF3D7_1255100, GenBank: CZT99704.1) MKIHYINILLFPLKLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKITTDDIPTCLCEKSVADKMEKTCLRCAGVLGGGVMPGMGLIDGSLLGAISVLKPAAIIAAKDAALAEATALATQAGMREVVLKIEQFLKLFSEKEKIFDLKLIVNKSNFSCGSSLFQNAKELANKSCVAKPNGSYTSFCNSITYSRVEPFNGYAQAGITKYNETLPLQKALLEKAKVDAVNTTYAAYHTSIIASIVAVVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 21 (SEQ ID NO: 21, PF3D7_1300400, GenBank: CAD52146.1) MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMAQQFSTLHTDIQSDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCAQNLGGVAPGWGLLSGFGYVTWSQYISGIAAKAAADAGLKAGVKVGLVNAVKIVTKTLDGFGEVPTMDWAKLIAFGDFSDGVTLHAIFKNLNNMMNCYLDSGKYSQFSTVVQKFAENPRSYATPYSTEVTEVTKAVADAKTGVLTKAGNATSSLSTGITASIIAIVVIVLIMVIIYLVLRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 22 (SEQ ID NO: 22, PF3D7_0732200, GenBank: CAD51061.1) MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCHKEIEKIILKDKMEKQMAQQLTTLETKIGTDDIPTCVCEKSMADKMEKDCLRCTYGLGTLAPTVGLIGSVAVGAWKPTALKAAIVAAQKAGDAAGVAAGEAAGKKAVILALQHFKLDNLFPEIYNAIVKIRHYADVKNFSVAIVEEHSLKCQSLDLKVTTNPTCETFEFNIGMRIPDSSFVEPVDQVVPEVLDSLVGNIKEVAEAKAAEVAAAKTAEFKIANVGAVESTYGSCQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIK
  • P. falciparum RIFIN protein 23 (SEQ ID NO: 23, PF3D7_0115600, GenBank: CAD48968.1) MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECDIYTSIYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMQGKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDSIPTCVCEKSVADKVEKNYMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAELGLSAWKTTALKTAIAAAEQAGAAKGLAAGAAKGATRLIELIQSTFKIQNIAGKSLGTFIDATNYNNGPFIYQAIYTKFEMSLCLPVFPGVDPVPGAVRDPTFCNLFEKFVPTNGSSNRDSIINAIETYVQPFVSDAKFTAAATAETATEEATAVLITKKTGEVTTTYASYQTAIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQY
  • P. falciparum RIFIN protein 24 (SEQ ID NO: 24, PF3D7_1101100, GenBank: CZT 98679.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELNEKFLTLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGSILGAAMPEVGSIGGGLLYALNAWKPKALEAAIAAAKELAITEATNAGVKTVVSEINKLLAKFKQHEILFELKPIVNKSNFSCGSSLFQRAEELASKSCVAQPNGSYTSFCNTILNGEKTTFKPFAQAGANTYEKTLTTETPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 25 (SEQ ID NO: 25; PF3D7_0401400, GenBank: CAD 49104.1) MKVHYINILLFALPLNILVINQRNHNNSTYHTSNTKLTKTHRTLCECELYAPSNYENDPEMKELMENFNHQSSERFREYDERIQDKRKQFKEQCEKDIQKIILKDKIEKELTEKLSTLQTDISTNDIPTCVCEKSLADKMEKTCLKCGGVLGTAVPELGLIGGSVIYSAAQAAAAKLGVAKAIELMKKIYNLGNVSFIDWTNLINVGNYSHRMSLVGIVNKVNNMCQIKDPEGNVVFCFAKQNMRGGAGKFAQTISEQAGNAAIKAGETANVKFAEMTSVGTIFSDPIVISATVVVTIAVILIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 26 (SEQ ID NO: 26, PF3D7_1000200, GenBank: CZT 98249.1) MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDNDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKERCDKEIQKIILKHKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCHNCGYGLGSVAPNIGLLGGPGIYVWKIAALAAAKEFAEKAGAAMGKAAGDAAGAAELIRGLKALNIDKLFNESLGLVFDGTNYNNTEYIFKAIFSKFNESCMPRPPGSVPGPVIDRAFCDTVDTLVLPSGTGSQTSASTNAVIKEYVKPIVSNAKFTAEATAQTAAEEATNLALKTNTNAVNATYASSQTAIIVSIAAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • Plasmodium falciparum RIFIN protein 27 (SEQ ID NO: 27, PF3D7_0937500, GenBank: CAD52049. 1) MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITARHIQTTRLLCECELFSPQNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDKMEKQMAEKLSTLETKINTDDIPTCVCEKSMADKTEKFCLNCGKNMAAIAPWWGLVCGSGYAGWLHSAMAAAIDKAIAEGAAAGIKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGNKQLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYITLCTPRPVNGHLVSNFNFSDRFCKLFHQKDLVSLDIKSVKAIIKKNVEEAVAGAEQAAKAEVSNVTATKTTEFTTKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIK
  • P. falciparum RIFIN protein 28 (SEQ ID NO: 28, PF3D7_1000500, GenBank: CZT 98252.1) MKVHYFNILLFALPLNILVSSPKKNPSITQKRPTRRLLCECELYAPANYDSVPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMKQELTTLETKITTDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCGGVFGGGVAPGVGLLGGIGQLGLDVWKAAAIKAATEYALTEGAAKGLAAGNAHGMNIVIYHLKELLIDKLVPNICKTVSSTGDYTRVINFSKLIIQKRGAMCGADGGTLSKDMCTQININLGTVLRNGKANLPDKEAVPKVLNRLVSQADKAANEVAKDTSQSVAVKITEQQTAAINATYTSWQIAITASVIAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 29 (SEQ ID NO: 29, PF3D7_147700, GenBank: CZU00492.1) MKVHYINILLFALPLDILEHNKNEPHTTPNHTQTTRSLCECELYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMVEQFSTLQTDIQSDAIPTCVCEKSIEDKVEKGCLRCGSILGAAMPELGSVGGSLLYALNTWKPAAIIAAKEAALAEATDLATQAGIDTVVAQLKIEGLLASFTVKQRLVDLSSIVTSSTYNNGAILHKSAMELASSYCHFEGTQSTPPFCSTIKYGQTTNFVRYAKAGSAAFKTEFASKSATLTKAKVGAVEATYGGYHISIISSIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 30 (SEQ ID NO: 30, PF3D7_0632400, GenBank: CAG25136.1) MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECDLYIPNYDNDPQMKKIMENFDRQTSQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIDKELTEKFATLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGLISGIVYTGWKAAALAAAKKLAAEAGAAEGASQGAAAGATRLIELIQSTFQVQNIAGQSLESIFTAQTYTDVSNITKALFNEYAEICLPIFTDSVPVRGVRYNISSPICTFVEEGILATSRDKGGSPITFIEKKVETMVSKAEGVATARAADVAAAKTAEFEATKVGAVEATYAGYHTTIIASIIAILIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 31 (SEQ ID NO: 31, PF3D7_0101000, GenBank: CAX51180.1) MKVHCYNILLFSFTLIILLLSSSQVNNQMNHYNTAHMKNTEPIKSYRSLCECELYTSMYDDDPEMKEILHDFDRQTSQRFEEYNERLLENKQKCKEQCEKDIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSIADKMEKECLRCAQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALIVWKPAAIKAAKAAAAKAASDAATQAGMNAVRLEIKKLLEMFTGKPGYVDLLPIVKESTYKNGSALVDSAKKLFVESGKLEGLDRMPVFYNTVIDYPGPSNIKGFGKIGSDAYEAAFTSQKGTLEATKVGEVNTTYGGCQTAITASVIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
  • P. falciparum RIFIN protein 32 (SEQ ID NO: 32, PF3D7_1400600, GenBank: CZT99711.1) MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDESLQSKRKQCKDQCDKEIQKIILKDKIEKEFTEKLSTLQTDITTKDIPTCVCEKSLADKMEKVCLKCAQNLGGIVAPSTGVLGEIAALAVNAWKTTALKNAIAAAQKAGDAAGKIAGESKGVETIIGILEQYYSIYELKGTPLKSFFATTHYTDISNIATVIDTELNTSCGLNSLANQAICGLRTKLGLVAKPGQVMVTQKEAITKMITNVVHKSEITAEAAKTEVAATKTAAAIKMNTEAIEAATTPYYTPIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYI
  • P. falciparum RIFIN protein 33 (SEQ ID NO: 33, PF3D7_1040300, GenBank: CZT 98658.1) MKFNYTNIILFSLSLNILLLSSRVYNKRNHKSIILHTSNENPIKTHRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDRLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCLNCGVQLGGGVLQASGLLGGIGQLGLDAWKAAALVTAKELAEKAGAAAGLKAGDIHGMKIVIEGLKALKVDTLKSGIFNSFVNNSHYTEVTGLAIAIDTEMNEVCSATYIGIHPICVVREKLGVIPKAGGTMVKQKDAITNVLKQALEKATQSAEALSETTAEDVAAKLTAQKTGAINTIFMSNQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKL
  • RIFIN comprises, for example, LILRB1 binding RIFIN.
  • LILRB1-binding RIFIN include the following RIFIN.
  • RIFIN binds to LILRB1 more strongly, PF3D7_1254800 (SEQ ID NO: 4), PF3D7_0223100 (SEQ ID NO: 3), PF3D7_1100400 (SEQ ID NO: 6), PF3D7_0632700 (SEQ ID NO: 9), PF3D7_0700200 (SEQ ID NO: 5), PF3D7 — 0100200 (SEQ ID NO: 1) is preferred.
  • PF3D7_0100200 (SEQ ID NO: 1, GenBank: CAB89210.1)
  • PF3D7_0900200 (SEQ ID NO: 2, GenBank: CAD 51688.1)
  • PF3D7_0223100 (SEQ ID NO: 3, GenBank: CZT 98243.1)
  • PF3D7_1254800 (SEQ ID NO: 4, GenBank: CZT 99701.1)
  • PF3D7_0700200 SEQ ID NO: 5, GenBank: CZT62652.1
  • PF3D7_1100400 (SEQ ID NO: 6, GenBank: CZT 98672.1)
  • PF3D7_1480000 (SEQ ID NO: 7, GenBank: CZU00495.1)
  • PF3D7_0600300 (SEQ ID NO: 8, GenBank: CAG25174.1)
  • PF3D7_0632700 (SEQ ID NO: 9, GenBank
  • PF3D7_0632200 (SEQ ID NO: 10, GenBank: CAG 25134. 1)
  • PF3D7_0100400 (SEQ ID NO: 11, GenBank: CAB89212.1)
  • PF3D7_1254400 (SEQ ID NO: 12, GenBank: CZT 99697.1)
  • the source of LILRB1 (Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1) is, for example, human.
  • the human-derived LILRB1 can refer to, for example, information registered in an existing database.
  • human-derived LILRB1 has, for example, the following base sequence (SEQ ID NO: 34) registered as an mRNA, for example, NCBI accession number NM_001081637.2, and, for example, an NCBI accession number NP_001075106.2 as a protein:
  • SEQ ID NO: 35 is listed: In the following nucleotide sequence of LILRB1 mRNA and amino acid sequence of LILRB1 protein, the underlined region is a region corresponding to the extracellular region of LILRB1 used in preparation of LILRB1-Fc in the example described later.
  • Human LILRB1 protein (SEQ ID NO: 35) MTPILTVLICLGLSLG PRTHVQAGHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTAPWITRIPQELVKKGQFPIPSITWEHTGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVTLQCDSQVAFDGFILCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQS
  • the binding inhibitor may be capable of inhibiting the binding of the RIFIN protein to the LILRB1 protein.
  • the inhibition may be, for example, direct inhibition or indirect inhibition.
  • the said inhibition is, for example, the amount of complex formation between the RIFIN protein and the LILRB1 protein when the RIFIN protein and the LILRB1 protein form a complex in the presence of the aforementioned binding inhibitor, for example, It means that (for example, significantly) it is reduced as compared with the case where the complex is formed in the absence.
  • a labeled RIFIN protein or LILRB1 protein is contacted with a subject expressing LILRB1 protein or RIFIN protein, respectively, and said contact It can then be measured by detecting the label in the subject.
  • the measurement can be performed using, for example, a flow cytometer or the like.
  • the binding inhibitor examples include a binding substance that binds to the RIFIN protein, a binding substance that binds to the LILRB1 protein, and the like.
  • the binding inhibitor is preferably a binding member binding to the variable region of the RIFIN protein.
  • the binding substance that binds to the variable region of the RIFIN protein for example, binds to part or all of the variable region of the RIFIN protein.
  • the variable region and the conserved region of the RIFIN protein mean, for example, the following amino acid regions.
  • Variable region and conserved region of RIFIN protein PF3D7_0100200 (SEQ ID NO: 1, GenBank: CAB89210.1) Variable region: amino acid region 164 to 291 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 conserveed region: amino acid region 43 to 144 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 PF3D7_0900200 (SEQ ID NO: 2, GenBank: CAD 51688.1) Variable region: amino acid region 167 to 333 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 conserveed region: amino acid region 42 to 143 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 PF3D7_0223100 (SEQ ID NO: 3, GenBank: CZT 98243.1) Variable region: amino acid region 162 to 288 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 conserveed region: amino acid region 39 to 136 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 PF3D7_1254800 (SEQ ID NO: 4, GenBank:
  • Variable region amino acid region 165 to 334 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9
  • conserveed region amino acid region 39 to 144 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 PF3D7_0632200 (SEQ ID NO: 10, GenBank: CAG 25134.
  • Variable region amino acid region 168 to 334 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • conserveed region amino acid region 42 to 143 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • Variable region amino acid region 164 to 329 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
  • conserveed region amino acid region 39 to 146 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 PF3D7_1254400 (SEQ ID NO: 12, GenBank: CZT 99697.1)
  • Variable region amino acid region 169 to 336 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12
  • conserveed region amino acid region 44 to 148 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12
  • the type of the binding inhibitor is not particularly limited, and examples thereof include low molecular weight compounds, peptides, proteins, and nucleic acids.
  • the binding inhibitor when the binding inhibitor is a peptide or a protein, the binding inhibitor includes, for example, an antibody or an antigen binding fragment thereof.
  • the antibody may be, for example, a monoclonal antibody or a polyclonal antibody (the same applies hereinafter).
  • the binding inhibitor when the binding inhibitor is a peptide or a protein, the binding inhibitor includes, for example, a protein or peptide that binds to RIFIN protein, a protein or peptide that binds to LILRB1 protein, and the like.
  • Examples of the protein or peptide that binds to the RIFIN protein include an antibody or an antigen-binding fragment thereof that binds to the RIFIN protein, a solubilized product of LILRB1 protein, or a RIFIN protein-binding fragment thereof.
  • Examples of the solubilized LILRB1 protein include a fusion protein of an antibody Fc region (fragment crystallizable region) and LILRB1 protein or a RIFIN protein-binding fragment thereof.
  • Examples of the protein or peptide that binds to the LILRB1 protein include an antibody that binds to the LILRB1 protein or an antigen-binding fragment thereof, a decoy peptide of the RIFIN protein, and the like.
  • the decoy peptide of the RIFIN protein is, for example, a peptide that inhibits the binding of the RIFIN protein to the LILRB1 protein and does not activate the LILRB1 protein.
  • the activation of the LILRB1 protein means, for example, that the function of the LILRB1 protein is exerted.
  • the peptide may be, for example, a cyclic peptide or a special cyclic peptide (the same applies hereinafter).
  • the binding inhibitor is a nucleic acid
  • examples of the binding inhibitor include a binding nucleic acid molecule that binds to the RIFIN protein, a binding nucleic acid molecule that binds to the LILRB1 protein, and the like.
  • the binding nucleic acid molecule include DNA, RNA, or an aptamer comprising DNA and RNA.
  • the binding inhibitor for example, one type may be used alone, or two or more types may be used in combination.
  • the inducer of the binding inhibitor is, for example, a substance that induces the binding inhibitor in the administration subject when administered to a patient (hereinafter, also referred to as “administration subject”).
  • the binding inhibitor is preferably an antibody.
  • the type of the inducer include peptides, proteins, nucleic acids and the like.
  • the inducer is preferably used in combination with an adjuvant described below, for example, because it can efficiently induce the binding inhibitor.
  • Examples of the inducer include the RIFIN protein or a portion of the RIFIN protein, the LILRB1 protein or a portion of the LILRB1 protein, or a polynucleotide encoding any one or more of them.
  • the portion of the RIFIN protein preferably includes, for example, a variable region of the RIFIN protein because it can induce a binding inhibitor that effectively inhibits the binding between the RIFIN protein and the LILRB1 protein.
  • the inducer contains, for example, part or all of the variable region of the RIFIN protein.
  • the inducer is the polynucleotide
  • the polynucleotide is operably linked to a vector.
  • the vector include known vectors such as adenoviral vectors.
  • the polynucleotide may be, for example, DNA consisting of deoxyribonucleotide, RNA consisting of ribonucleotide, or polynucleotide consisting of DNA and RNA.
  • the inducer may, for example, induce the expression of the binding inhibitor in the administration subject.
  • the inducer is, for example, a synthetic enzyme of a low molecular weight compound, a polypeptide encoding a peptide or protein, a polynucleotide including a nucleic acid as a template for a nucleic acid which is the binding inhibitor, or a vector containing the same Can be mentioned.
  • one type of the inducer may be used alone, or two or more types may be used in combination.
  • the expression inhibitory substance is not particularly limited, and for example, a substance that suppresses the expression of mRNA of the RIFIN gene or the LILRB1 gene, a substance that cleaves the expressed mRNA, a substance that suppresses translation of a protein from the expressed mRNA, etc. Can be mentioned. Specific examples include, for example, RNA interference agents such as siRNA, antisense, ribozymes and the like.
  • the expression suppression substance may be, for example, a gene editing system capable of editing the base sequences of at least one of the RIFIN gene of P. falciparum and the LILRB1 gene of the patient.
  • the gene editing system may be, for example, a known genome editing system such as ZFN, TALEN, CRISPR-Cas9 or the like, or a known mRNA editing system such as CRISPR-Cas13.
  • a known genome editing system such as ZFN, TALEN, CRISPR-Cas9 or the like
  • a known mRNA editing system such as CRISPR-Cas13.
  • one type of the expression suppression substance may be used alone, or two or more types may be used in combination.
  • the therapeutic agent of the present invention may contain any one or more of the binding inhibitor, the inducer, and the expression inhibitor, and may contain two or all of them.
  • the type of the therapeutic agent of the present invention is a peptide, a protein, or a nucleic acid
  • the peptide, the protein, and the nucleic acid may be modified and / or modified with one or more amino acids or one or more nucleotides, for example .
  • the modification is not particularly limited and includes, for example, modification of the N-terminus, C-terminus or side chain of a peptide or protein, modification of a nucleic acid base, sugar, phosphate group or sugar phosphate backbone, and the like.
  • a variant of the peptide or protein is, for example, a deletion, substitution, insertion, and / or addition of one or several amino acids in the amino acid sequence of the peptide or protein And / or a peptide or protein consisting of an amino acid sequence having 80% or more identity to the amino acid sequence of said peptide or protein.
  • the peptide or protein is a RIFIN protein or a portion thereof
  • the variant binds, for example, to the LILRB1 protein.
  • the peptide or protein is LILRB1 protein or a portion thereof
  • the variant binds, for example, to the RIFIN protein.
  • the variant When the peptide or protein is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the RIFIN protein, the variant binds, for example, to the LILRB1 protein. When the peptide or protein is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to LILRB1 protein, the variant binds, for example, to the RIFIN protein.
  • the “one or several” is, for example, 1 to 76, 1 to 56, 1 to 37, 1 to 18, 1 to 15, 1 to 11, 1 to 7, 1 to 3 , 1 or 2 pieces.
  • the numerical value range of numbers includes, for example, all positive integers belonging to the range.
  • the description “1 to 5” means all disclosures of “1, 2, 3, 4, 5” (the same applies hereinafter).
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more.
  • the “identity” can be calculated by default parameters using, for example, analysis software such as BLAST and FASTA (the same applies hereinafter).
  • the therapeutic agent of the present invention is a nucleic acid
  • a variant of the nucleic acid consists of a nucleotide sequence in which one or several bases are deleted, substituted, inserted and / or added in the nucleotide sequence of the nucleic acid.
  • the polynucleotide may be, for example, a polynucleotide consisting of a nucleotide sequence having 80% or more identity to the nucleotide sequence of the polynucleotide and / or the nucleic acid.
  • the protein or peptide encoded by the variant binds, for example, to the LILRB1 protein.
  • the nucleic acid is a nucleic acid encoding LILRB1 protein or a portion thereof
  • the protein or peptide encoded by the variant binds, for example, to the RIFIN protein.
  • the nucleic acid is a nucleic acid that binds to the RIFIN protein
  • the variant binds, for example, to the LILRB1 protein.
  • the nucleic acid is a nucleic acid that binds to LILRB1 protein
  • the variant binds, for example, to the RIFIN protein.
  • the “one or several” is, for example, 1 to 228, 1 to 168, 1 to 111, 1 to 54, 1 to 45, 1 to 33, 1 to 21, 1 to 9 , 1 to 6, 1 to 3, 1 or 2;
  • the “identity” is, for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, 99% or more.
  • Therapeutic agents of the invention may also include other components, such as, for example, a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the therapeutic agent of the present invention can also be referred to, for example, as a "pharmaceutical composition".
  • the other components are not particularly limited, and examples thereof include preservatives, antioxidants, chelating agents, stabilizers, emulsifying agents, dispersing agents, suspending agents, thickeners and the like.
  • the preservative include thimerosal, 2-phenoxyethanol and the like.
  • the chelating agent include ethylenediamine tetraacetic acid and glycol ether diamine tetraacetic acid.
  • the therapeutic agent of the present invention contains the inducer, it is preferable that the therapeutic agent of the present invention contains an adjuvant as described above.
  • the therapeutic agent of the present invention can also be referred to, for example, as a "vaccine” or a "vaccine composition”.
  • the adjuvant is not particularly limited, and examples thereof include aluminum hydroxide, aluminum phosphate, aluminum chloride, lipopolypolysaccharide (LPS), Poly (I: C) (Polyinosinic-polycytidylic acid), complete Freund's adjuvant, incomplete Freund's adjuvant, Examples thereof include known adjuvants such as Toll-like receptor stimulators including CpG oligonucleotides and saponins.
  • the therapeutic agent of the present invention can inhibit the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein directly or indirectly, for example, when administered to a subject.
  • the binding inhibitor inhibits binding of LILRB1 protein to RIFIN protein or binding of RIFIN protein to LILRB1 protein, for example, by binding to RIFIN protein or LILRB1 protein.
  • the inducer induces, for example, the binding inhibitor in the administration subject, thereby inhibiting the binding of LILRB1 protein to RIFIN protein or the binding of RIFIN protein to LILRB1 protein.
  • the expression inhibitory substance inhibits binding of LILRB1 protein to RIFIN protein or binding of RIFIN protein to LILRB1 protein, for example, by suppressing expression of RIFIN protein or LILRB1 protein in the administration subject.
  • the therapeutic agent of the present invention can, for example, directly or indirectly inhibit the binding between RIFIN protein and LILRB1 protein, as described above, and so inhibits the generation of LILRB1 protein-mediated signal by RIFIN protein or suppresses the signal. it can. Therefore, according to the therapeutic agent of the present invention, it is possible to prevent or release the suppression of the function of the immune system cells by, for example, the binding of the RIFIN protein and the LILRB1 protein. For this reason, the therapeutic agent of the present invention may contain, for example, a signal inhibitor that suppresses a signal mediated by LILRB1 protein in addition to or instead of the binding inhibitor, the inducer and / or the expression inhibitor. .
  • the signal suppressor examples include an antagonist of LILRB1 protein, an inhibitor of activity of a signal transduction protein of LILRB1 protein, the binding inhibitor, the inducer, and the expression inhibitor.
  • the type of the signal suppressor is not particularly limited, and examples thereof include low molecular weight compounds, peptides, proteins, and nucleic acids.
  • the suppression of the signal may be, for example, the amount of signal through LILRB1 protein when LILRB1 protein and a ligand of LILRB1 protein (eg, RIFIN protein) are allowed to form a complex in the presence of the signal suppressor, for example. This means that the amount is decreased (eg, significantly) as compared to the amount of signal mediated by LILRB1 protein in the absence of the signal suppressor.
  • the amount of the signal can be measured, for example, using a reporter cell that expresses a reporter gene when a signal via LILRB1 protein is generated, referring to the examples described below.
  • the measurement can be performed using, for example, a flow cytometer or the like.
  • the administration subjects include, for example, humans and non-human animals except humans.
  • the non-human animals include mice, rats, dogs, monkeys, rabbits, sheep, horses, guinea pigs, cats and the like.
  • the dose of the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately set according to, for example, the type of the therapeutic agent, the type of the administration subject, symptoms, age, administration method and the like.
  • the dose of the peptide per administration is, for example, 0.8 to 30 mg and 10 to 30 mg.
  • the administration frequency of the peptide is not particularly limited, and is, for example, 1 to 3 times.
  • the dose of the protein per dose is, for example, 1 to 100 mg or 10 to 1000 mg.
  • the number of times of administration of the protein is not particularly limited, and is, for example, 1 to 5 times.
  • the administration form (dosage form) of the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include solutions, suspensions, emulsions, injections, sprays, powders and the like.
  • the administration method of the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited.
  • intravenous injection intramuscular injection, subcutaneous administration, intradermal administration, transdermal administration, rectal administration, intraperitoneal administration, topical administration, nasal administration, sublingual Administration etc. can be mentioned.
  • the method for producing the therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, and for example, known methods can be adopted depending on the type of the therapeutic agent.
  • the therapeutic agent of the present invention contains a low molecular weight compound
  • the low molecular weight compound can be produced by a known method, depending on, for example, its structure.
  • the therapeutic agent of the present invention contains a peptide
  • methods for producing the peptide include chemical synthesis, production by degradation of a protein containing the peptide, and synthetic methods using recombinant DNA technology.
  • the peptide is a known organic compound using a protecting group such as, for example, benzyloxycarbonyl group (Cbz), tert-butoxycarbonyl group (Boc), fluorenylmethoxycarbonyl group (Fmoc), etc. It can be produced by a synthetic method.
  • the peptide in the case of degradation of a protein containing the peptide, can be produced, for example, by degrading a protein containing the peptide with a known proteolytic enzyme such as protease or peptidase. Conditions for decomposing the protein containing the peptide can be appropriately set according to, for example, the type of protein containing the peptide, the substrate specificity of the proteolytic enzyme, and the like.
  • said peptide produces, for example, an expression vector comprising a polynucleotide encoding said peptide. And it can manufacture by producing the expression system of the said peptide, and isolating the said expressed peptide.
  • the expression system can be produced, for example, by introducing the expression vector into a host.
  • the host include known hosts such as animal cells, plant cells, insect cells, bacteria and the like.
  • the said peptide may use the polynucleotide which codes the said peptide, and a well-known cell-free translation system, for example. Then, it can be produced by isolating the peptide translated from the polynucleotide by the cell-free translation system.
  • the method for producing the protein examples include a chemical synthesis method, a synthetic method using recombinant DNA technology, and the like.
  • the method for producing the protein for example, in the description of the method for producing the peptide, “peptide” can be read as “protein” and the description can be incorporated.
  • the method of producing the antibody may be, for example, the same method as the method of producing the protein, or the animal may be immunized with the antigen of the antibody to recover serum. It may be a method of culturing cells such as hybridomas producing an antibody.
  • the method for producing the nucleic acid is not particularly limited, and examples thereof include chemical synthesis methods such as the phosphoroamidite method, and synthesis methods using recombinant DNA technology.
  • the nucleic acid contains an aptamer
  • the aptamer can be obtained by the SELEX method using, for example, the RIFIN protein or the LILRB1 protein.
  • the method for treating malaria according to the present invention is characterized by administering to the patient the agent for treating malaria according to the present invention as described above.
  • the treatment method of the present invention is characterized by administering to the patient the malaria therapeutic agent of the present invention, and the other steps and conditions are not particularly limited.
  • malaria can be treated such as preventing the aggravation of malaria.
  • the treatment method of the present invention can use, for example, the description of the therapeutic agent of the present invention.
  • the treatment method of the present invention may be carried out, for example, on a patient who is at risk for severe malaria in the test method of the present invention described later.
  • the treatment method of the present invention may be carried out, for example, in combination with the test method of the present invention, and the description of the specific steps for testing the risk of malaria progression is the test method of the present invention.
  • the explanation can be used.
  • the patient may be a patient uninfected with malaria, a patient infected with malaria, or a patient unknown whether or not malaria is infected.
  • the screening method for a malaria therapeutic candidate substance of the present invention inhibits the binding of a riffin (RIFIN) protein to a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein from a test substance It is characterized in that a binding inhibitor, an inducer of the binding inhibitor, or an expression inhibitor of RIFIN or LILRB1 is selected as a candidate for malaria treatment.
  • the candidate substance for treating malaria is a binding inhibitor that inhibits binding of RIFIN protein to LILRB1 protein, an inducer of the binding inhibitor, or an expression suppressor of RIFIN or LILRB1.
  • the screening method of the present invention can use, for example, the description of the therapeutic agent and the therapeutic method of the present invention.
  • the type of the binding substance include low molecular weight compounds, peptides, proteins, nucleic acids and the like.
  • the RIFIN is preferably, for example, a LILRB1 binding RIFIN because it can effectively treat malaria.
  • the screening method of the present invention comprises, for example, detecting the binding of the RIFIN protein to the LILRB1 protein in the coexistence of the RIFIN protein, the LILRB1 protein, and the test substance, and the RIFIN protein and the LILRB1 Including the step of selecting the test substance that has inhibited the binding to a protein as the therapeutic candidate substance.
  • a method for detecting the binding between the RIFIN protein and the LILRB1 protein is not particularly limited, and, for example, a known method for detecting binding between proteins can be adopted, and for example, the examples described later can be referred to.
  • a step of administering the test substance to a living body for example, a step of administering the test substance to a living body (administration target), a step of obtaining a biological sample from the living body, coexistence of the RIFIN protein, the LILRB1 protein, and the biological sample
  • the method further comprises the steps of detecting the binding of the RIFIN protein to the LILRB1 protein, and selecting the test substance in which the binding of the RIFIN protein to the LILRB1 protein is inhibited as the therapeutic candidate substance.
  • the description of the therapeutic agent of the present invention can be used, for example, as the administration condition of the test substance.
  • the administration step and the acquisition step are optional steps, and may not be provided.
  • a biological sample obtained from a living body to which the test substance is administered is used as the biological sample.
  • the biological sample is not particularly limited, and examples thereof include blood, plasma, serum and the like.
  • the screening method of the present invention includes, for example, contacting the RIFIN protein or the LILRB1 protein with the test substance, detecting the binding of the RIFIN protein or the LILRB1 protein to the test substance, and the RIFIN protein Or selecting the test substance bound to the LILRB1 protein as the therapeutic candidate substance.
  • the test substance is allowed to coexist in the expression system of RIFIN or LILRB1, and the expression of RIFIN or LILRB1 in the expression system is detected.
  • the expression to be detected may be, for example, expression of the RIFIN protein or the LILRB1 protein, or transcription of mRNA of the RIFIN gene or the LILRB1 gene.
  • the method for detecting the expression of the protein and the expression of the mRNA is not particularly limited, and for example, known methods can be adopted.
  • a signal inhibitor that suppresses a signal mediated by LILRB1 protein in addition to or in place of the binding inhibitor, the inducer and / or the expression inhibitor is used.
  • the signal suppressor include an antagonist of LILRB1 protein, an inhibitor of activity of a signal transduction molecule such as a signal transduction protein of LILRB1 protein, the binding inhibitor, the inducer, and the expression suppressor.
  • the screening method of the present invention selects a signal inhibitor as the malaria therapeutic candidate substance
  • the screening method of the present invention includes, for example, a ligand of LILRB1 protein such as the RIFIN protein, the LILRB1 protein, and the test substance And detecting the LILRB1 protein-mediated signal, and selecting the test substance that has suppressed the LILRB1 protein-mediated signal as the therapeutic candidate substance.
  • a method of detecting a signal through the LILRB1 protein is not particularly limited, and, for example, a known method of detecting a signal transduction molecule can be adopted, and for example, a reporter cell in Examples described later can be used.
  • the malaria aggravation marker of the present invention is characterized by being liffin (RIFIN) as described above.
  • the marker of the present invention is characterized by using RIFIN as a marker, and the other configurations and conditions are not particularly limited. According to the marker of the present invention, for example, by measuring the expression of RIFIN in a biological sample of a subject, it is possible to test the risk of severe malaria in the subject.
  • the marker of the present invention can use, for example, the description of the therapeutic agent, therapeutic method and screening method of the present invention.
  • the malaria is, for example, malaria caused by infection with the P. falciparum.
  • the RIFIN is preferably, for example, a LILRB1 binding RIFIN, because it shows a higher correlation with, for example, the aggravation of malaria.
  • the method for testing the risk of malaria progression of the present invention is characterized in that it comprises the measurement step of measuring the expression of riffin (RIFIN) in the biological sample of the subject as described above.
  • the test method of the present invention is characterized by measuring the expression of RIFIN as a marker for malaria severity, and the other steps and conditions are not particularly limited. According to the test method of the present invention, it is possible to test the subject's risk of malaria progression.
  • the test method of the present invention can use, for example, the description of the therapeutic agent, treatment method, screening method and marker of the present invention.
  • the test method of the present invention it is possible to evaluate, for example, the possibility of progression of symptoms of malaria, the possibility of aggravation, evaluation of prognosis and the like.
  • the malaria is, for example, malaria caused by infection with the P. falciparum.
  • the subject includes, for example, humans, non-human animals excluding humans and the like, and the non-human animals include, as described above, mammals such as mice, rats, dogs, monkeys, rabbits, sheep, horses and the like. Can be mentioned.
  • the type of the biological sample is not particularly limited, and examples thereof include body fluid, body fluid-derived cells, organs, tissues or cells separated from a living body.
  • Examples of the body fluid include blood, and specific examples include whole blood and the like.
  • Examples of the body fluid-derived cells include blood-derived cells, and specific examples include blood cells such as blood cells, white blood cells, red blood cells, and lymphocytes.
  • RIFIN is expressed, for example, in erythrocytes, a biological sample containing blood or a biological sample containing erythrocytes is preferable.
  • the expression of RIFIN to be measured includes, for example, expression of mRNA of RIFIN gene and expression of RIFIN protein.
  • the expression for example, only either the mRNA or the protein may be measured or both may be measured for the biological sample.
  • the method of measuring the mRNA expression may be, for example, a gene amplification method using reverse transcription reaction such as reverse transcription (RT) -PCR method. Specifically, for example, it is a method of synthesizing cDNA from mRNA by reverse transcription reaction and amplifying the gene using the cDNA as a template.
  • RT reverse transcription
  • methods for measuring the protein expression include, for example, immuno-antibody method, ELISA method, flow cytometry and Western blotting.
  • RIFIN protein expression may be measured, for example, using LILRB1 protein.
  • LILRB1-Fc described later can be used as the LILRB1 protein.
  • the RIFIN is preferably, for example, a LILRB1 binding RIFIN, because it shows a higher correlation with, for example, the aggravation of malaria.
  • the presence or absence of expression of the RIFIN may be measured, or the expression amount of the RIFIN may be measured.
  • the test method of the present invention is further, for example, based on the expression of RIFIN in the biological sample of the subject (hereinafter, also referred to as "subject biological sample"), the risk of malaria severity of the subject Includes test steps to be tested.
  • the measurement result in the measurement step is the expression level of RIFIN
  • the test step for example, the amount of expression of RIFIN in the biological sample of the subject is compared with a reference value to detect malaria in the subject Includes testing steps to test for risk of aggravation.
  • the reference value is not particularly limited, and includes, for example, the expression level of RIFIN of healthy persons, severe malaria patients, and malaria patients for each degree of progression of severeness. In the case of prognostic evaluation, the reference value may be, for example, the expression level of RIFIN after treatment of the same subject.
  • the reference value can be obtained, for example, using a biological sample (hereinafter also referred to as "reference biological sample") isolated from a healthy person and / or severe malaria patient as described above.
  • a biological sample hereinafter also referred to as "reference biological sample” isolated from a healthy person and / or severe malaria patient as described above.
  • a reference biological sample isolated after treatment from the same subject may be used.
  • the reference value may be measured, for example, simultaneously with the test biological sample of the subject or may be measured in advance. In the latter case, for example, it is preferable to obtain a reference value each time the test subject's biological sample is measured. It is preferable that, for example, the test biological sample of the subject and the reference biological sample be collected under the same conditions, and RIFIN be measured under the same conditions.
  • the evaluation method of the risk level of the malaria severity of the subject is not particularly limited, and can be appropriately determined, for example, based on the measurement result of the measurement step.
  • the said measurement result is the presence or absence of the expression of the said RIFIN, it can implement as follows, for example.
  • the RIFIN when the RIFIN is expressed in the test biological sample of the subject, the subject can be evaluated as having a risk of severe malaria or having a high risk.
  • the RIFIN when the RIFIN is not expressed in the test biological sample of the subject, the subject can be evaluated to have no risk or a low risk of severe malaria.
  • the said evaluation method can be suitably determined by the kind of said reference value, for example.
  • the RIFIN in the reference biological sample of the severe malaria patient Said subject is at risk for severe malaria if it is the same as the expression level of (if there is no significant difference) and / or if it is significantly higher than the expression level of RIFIN in the reference biological sample of said malaria patient Can be rated as high or dangerous.
  • the RIFIN in the test biological sample of the subject is the same as the expression level of RIFIN in the reference biological sample of the healthy subject (if there is no significant difference)
  • the RIFIN in the reference biological sample of the healthy subject Said subject is not at risk for severe malaria if it is significantly lower than the expression level of and / or is significantly lower than the expression level of RIFIN in the reference biological sample of the severe malaria patient Or it can be evaluated that the risk is low.
  • the amount of expression of RIFIN in the test biological sample of the subject is compared with the amount of expression of RIFIN in the reference biological sample of malaria patient for each degree of progression of the aggravation to obtain malaria The degree of progression of aggravation can be assessed.
  • test biological sample of the subject has, for example, an expression level similar to that of the reference biological sample in the degree of progression of any seriousness (when there is no significant difference)
  • the test A person can be evaluated as having the possibility of the progress of the said aggravation.
  • the prognostic state in the test step when evaluating the prognostic state in the test step, for example, it may be evaluated in the same manner as described above, or using the expression amount of RIFIN in a reference biological sample after treatment of the same subject as a reference value. It can also be evaluated. As a specific example, when the expression amount of RIFIN in the test biological sample of the subject is significantly higher than the reference value, the subject may be at risk of recurrence or deterioration (severe) after the treatment. It can be evaluated that there is.
  • the expression amount of RIFIN in the test biological sample of the subject is the same as the reference value (when there is no significant difference) and / or when the expression level is significantly lower than the reference value, the subject It can be evaluated that there is no or low risk of recurrence after the treatment.
  • biological samples of the same subject may be collected over time, and RIFIN expression levels in the biological samples may be compared.
  • RIFIN expression levels in the biological samples may be compared.
  • the test reagent of the present invention is characterized in that it contains a reagent for measuring expression of riffin (RIFIN) and is used in the test method of the present invention.
  • the test method of the present invention is characterized by using RIFIN expression measurement reagent in the test method of the present invention, and the other constitution and conditions are not particularly limited. According to the test reagent of the present invention, the test method of the present invention can be easily implemented.
  • the expression measurement reagent is only required to measure the expression of the RIFIN, and the type of the expression measurement reagent is not particularly limited.
  • the RIFIN expression measurement reagent may be, for example, a RIFIN protein expression measurement reagent, or a RIFIN gene mRNA expression measurement reagent.
  • the former includes, for example, a binding substance that binds to the RIFIN protein, and specific examples include an antibody or an antigen-binding fragment thereof.
  • the test reagent of the present invention preferably further includes, for example, a detection substance that detects the binding of the RIFIN protein to the antibody or the antigen-binding fragment thereof.
  • the detection substance include a combination of a detectably labeled antibody against the antibody or an antigen-binding fragment thereof, a substrate for the label, and the like.
  • Examples of the latter include reagents that amplify mRNA of the RIFIN gene by reverse transcription, and specific examples include poly dT, random primers, reverse transcriptase, dNTP, DNA polymerase, primers and the like.
  • the primer can be appropriately designed based on, for example, the base sequence of the RIFIN gene.
  • the diagnostic method of severe malaria according to the present invention is characterized by comprising the step of measuring the expression of riffin (RIFIN) in a biological sample of a subject.
  • the diagnostic reagent for the aggravation of malaria of the present invention is characterized in that it contains a reagent for measuring the expression of Lifin (RIFIN).
  • the diagnostic method and diagnostic reagent of the present invention can use, for example, the description of the test method and test reagent of the present invention.
  • the present invention provides a binding inhibitor that inhibits the binding of a riffin (RIFIN) protein to a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein for use in the treatment of malaria, an inducer of the binding inhibitor. Or RIFIN or LILRB1 expression suppressor.
  • the present invention provides a binding inhibitor that inhibits the binding of a riffin (RIFIN) protein to a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein for the production of a malaria therapeutic agent, an inducer of the binding inhibitor. Or the use of a RIFIN or LILRB1 expression suppressor.
  • the use of the malaria therapeutic agent of the present invention can use, for example, the description of the therapeutic agent, therapeutic method, screening method, marker, test method, and test reagent of the present invention.
  • Example 1 It was confirmed that LILRB1 binds to P. falciparum infected erythrocytes.
  • LILRB1-Fc expression vector A plasmid encoding a LILRB1-Fc fusion protein (LILRB1-Fc expression vector) was prepared in the same manner as the reference 1 described below.
  • LILRB1-Fc expression vector (Avi-LILRB1-Fc expression vector) with AviTag attached to the C-terminus to produce a biotinylated LILRB1-Fc protein expresses pCAGGS a polynucleotide encoding LILRB1-Fc It was produced by inserting into a vector.
  • the LILRB1-Fc and Avi-LILRB1-Fc expression vectors were introduced into 293T cells (obtained from RIKEN Cell Bank) using a transfection reagent (PEI Max, manufactured by Polysciences Inc.) according to the attached protocol. Then, the 293T cells were cultured to obtain a culture supernatant containing LILRB1-Fc and Avi-LILRB1-Fc. LILRB1-Fc and Avi-LILRB1-Fc were purified from the obtained culture supernatant using Protein A.
  • Reference 1 Hirayasu, K. et al., “Microbially cleaved immunoglobulins are sensed by the innate immunity receptor LILRA2.”, Nat. Microbiol., 2016, vol. 1, Article number: 16054
  • the clinical strain of Plasmodium falciparum (hereinafter referred to as "protozoa”) is a malaria living in Mae Saliang district (Mae Hong Son City) in Mae Hong Son City, Thailand. It was prepared by separating from patients (patients 1 to 7) and limiting dilution.
  • the clinical strain is RPMI-1640 medium (20% AlbuMAXITM, 25 mmol / L HEPES, 0.225% sodium bicarbonate, 0.38 mmol) to which human erythrocytes (obtained from Japan Red Cross, type O, hematocrit 2%) are added.
  • / L (containing hypoxatin and 10 g / mL gentamycin).
  • the culture conditions were 90% N 2 , 5% CO 2 , and 5% O 2 atmosphere, and the culture temperature was 37 ° C.
  • LILRB1-Fc Binding of LILRB1-Fc to infected erythrocytes
  • LILRB1-Fc was mixed with APC labeled anti-IgG Fc antibody to form a complex.
  • the infected red blood cells were stained with the complex by incubating the complex with infected red blood cells infected with the 3D7 strain or the clinical strain (derived from patient 1). After the staining, the obtained sample was analyzed by flow cytometry. Control 1 was analyzed in the same manner except that the protozoa were not infected, and Control 2 was analyzed in the same manner except using only the APC labeled anti-IgG Fc antibody.
  • FIG. 1 is a dot plot showing the results of flow cytometry.
  • (A) shows the results of erythrocytes not infected with protozoa
  • (B) shows the results of infected erythrocytes infected with 3D7 strain
  • (C) infects the clinical strain. Shows the results of infected red blood cells.
  • the horizontal axis shows forward scattered light (FSC)
  • the vertical axis shows LILRB1-Fc binding amount (Fc-binding-APC).
  • FSC forward scattered light
  • Fc-binding-APC LILRB1-Fc binding amount
  • LILRB1-Fc binding of LILRB1-Fc to infected red blood cells was observed against infected red blood cells infected with any protozoa of the 3D7 strain or the clinical strain. From these results, it was found that LILRB1-Fc binds to infected erythrocytes infected with P. falciparum.
  • Example 2 It was confirmed that LILRB1 protein binds to erythrocytes infected by a clinical strain of P. falciparum.
  • infected red blood cells were stained with a complex of LILRB1-Fc and an APC-labeled anti-IgG Fc antibody in the same manner as in Example 1.
  • the infected red blood cells were subjected to nuclear staining using a nuclear staining agent (Vybrant (registered trademark) DyeCycle (trademark) Green). After the staining, the obtained sample was analyzed by flow cytometry. Control 1 was similarly analyzed except that the clinical strain was not infected, and Control 2 was similarly analyzed except that LILRA2-Fc fusion protein was added instead of LILRB1-Fc.
  • LILRA2-Fc was prepared in the same manner as in Reference 1.
  • FIG. 2 is a dot plot showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis shows the fluorescence intensity of nuclear staining agent (Nuclear staining-VG), and the vertical axis shows the binding amount of LILRB1-Fc (LILRB1-Fc binding-APC).
  • the numerical values in the figure indicate the percentage of red blood cells that are positive for the nuclear stain in the examples and to which LILRB1-Fc binds.
  • Control 1 Uninfected erythrocytes
  • Control 2 black plot
  • Example 3 It was confirmed that LILRB1 protein binds to infected erythrocytes infected with different stages or different types of P. falciparum.
  • infected red blood cells infected with protozoa synchronized in the ring phase, infected red blood cells infected with protozoa in the trophozoite phase, and infected red blood cells infected with protozoa in the schizont phase were prepared.
  • the protozoa derived from patient 6 was used as the protozoa.
  • analysis was performed in the same manner as in Example 2 except that infected red blood cells infected with the ring, trophozoite or schizont phase protozoa were used instead.
  • analysis was conducted in the same manner except using strains CDC1, K1, FCR3 and Dd2 instead of protozoa having different stages.
  • the control was analyzed in the same manner except that LILRA2-Fc was added instead of LILRB1-Fc.
  • FIG. 3 is a dot plot showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis shows the fluorescence intensity of the nuclear staining agent (Nuclear staining-VG), and the vertical axis shows the binding amount of LILRB1-Fc (LILRB1-Fc binding-APC).
  • (A) shows the results of infected red blood cells infected with different stages of protozoa
  • (B) shows the results of infected red blood cells infected with different types of protozoa. Also, in FIG.
  • each dot plot is the result of infected red blood cells infected with the ring phase protozoa (Ring), the result of infected red blood cells infected with the trophozoite phase protozoa (mid trophozoite), and schizont
  • the results (schizont) of infected red blood cells infected with early stage protozoa are shown.
  • FIG. 3 (B) the name above each dot plot indicates the name of the protozoal strain.
  • the numerical values in the figure indicate the percentage of red blood cells to which the nuclear staining agent positive group in the example is bound and to which LILRB1-Fc binds. As shown in FIG.
  • LILRB1-Fc was bound to infected erythrocytes infected with any stage of protozoa.
  • LILRB1-Fc in particular, bound well to infected red blood cells infected with trophozoite or schizont phase protozoa.
  • FIG. 3 (B) in the control (black plot), binding of LILRB1-Fc to infected red blood cells was not observed in the nuclear stain positive group showing protozoal infection.
  • binding of LILRB1-Fc was observed in infected erythrocytes infected with any protozoa of strains CDC1, K1 and Dd2.
  • Example 4 The ligand of LILRB1 protein was confirmed to be RIFIN protein. In addition, it was confirmed that LILRB1 protein binds to various RIFIN proteins.
  • protozoa at a late stage of schizont were purified by 63 (v / v)% Percoll (manufactured by Amersham Pharmacia Biotech) density gradient centrifugation.
  • the purified protozoa were mixed with a culture solution (RPMI-1640 medium containing 10% type O human serum, parasitea: 1%, hematocrit: 2%) and cultured in a T-75 flask.
  • the culture was performed using a BNP-110 incubator (manufactured by Tabai Espec Corp.) under an atmosphere of 90% N 2 , 5% CO 2 , and 5% O 2 at 37 ° C. for 1 hour.
  • the cap of the flask was tightly closed, and the flask was shaken at 100 rpm using an orbital shaker so as to prevent infection of multiple protozoa with one cell erythrocyte.
  • the stage of protozoa in the flask was confirmed by Giemsa staining every 2 hours.
  • the culture solution containing the protozoa was diluted with a fresh culture solution (3% hematocrit).
  • the diluted protozoa (0.5 protozoa / 0.2 mL) were seeded on a 96 well flat bottom plate. Then, half of the culture solution was replaced every 48 hours and cultured for 2 weeks.
  • the protozoa were detected in about 20 wells per plate. For each well, it was screened by flow cytometry analysis whether it contains erythrocytes to which LILRB1 protein binds. Thus, an F2 clone to which the LILRB1 protein binds and a D11 clone to which the LILRB1 protein does not bind were obtained.
  • ghost cells of the infected erythrocytes were prepared using infected erythrocytes infected with the parasites of Schizont phase of F2 clone and D11 clone.
  • ghost cells obtained from infected erythrocytes infected with Z2 phase of protozoa of F2 clone and D11 clone were incubated with biotinylated LILRB1-Fc and then 0.25 mmol / L 3,3-dithiobis (sulfosuccinimidyl propionate) (DTSSP, Crosslinking was performed using Thermo Scientific.
  • the ghost cells were then washed with phosphate buffer (PBS) and boiled with sample buffer without 2-mercaptoethanol. After boiling, using Streptavidin Sepharose, a coprecipitate containing LILRB1-Fc was obtained from the sample after boiling. The coprecipitate was eluted with 50 mmol / L DTT (dithiothreitol), treated with trypsin, and subjected to mass spectrometry (LC-MS / MS). MS / MS spectra were analyzed using software (Mascot). Controls were analyzed in the same manner except that ghost cells not treated with biotinylated LILRB1-Fc were used. Also, the same analysis was independently performed once more.
  • PBS phosphate buffer
  • sample buffer without 2-mercaptoethanol 2-mercaptoethanol
  • the obtained amplified fragment was inserted into a PfCEN5 expression vector to obtain a PfCEN5 expression vector into which 19 types of RIFIN genes were inserted.
  • the base sequences of the constant region and variable region of the inserted RIFIN gene are decoded, and it is confirmed that the base sequence matches the 3D7 genome version 3 (release 32, PlasmoDB, http: // plasmodb. Org). did.
  • the base sequence of the cDNA of the obtained PfCEN5 expression vector is a primer specific to the PfCEN5 expression vector (5'-TTATCCTTATTTTTTTAATAACTGCC-3 '(SEQ ID NO: 37) and 5'-GTTCGTGGCATTCCAC-3' (SEQ ID NO: 38) It deciphered using.
  • the RIFIN gene introduced into the PfCEN5 expression vector is as follows.
  • PF3D7_1254800 PF3D7_0223100, PF3D7_1100400, PF3D7_0632700, PF3D7_0700200, PF3D7_0100200, PF3D7_0900200, PF3D7_0600300, PF3D7_1480000, PF3D7_0100400, PF3D7_0632200, PF3D7_1254400, PF3D7_1479700, PF3D7_0632400, PF3D7_0101000, PF3D7_1000200, PF3D7_0732200, PF3D7_0937500, PF3D7_1300400
  • transgenic protozoa In order to produce transgenic protozoa, fresh erythrocytes were transfected with RIFIN-PfCEN5 expression vector by electroporation, and then the erythrocytes were infected with 3D7 strain. Four days after the infection, the infected erythrocytes were cultured in RPMI-1640 medium containing pyrimethamine. The genetically modified protozoa were then cultured and maintained in RPMI-1640 medium containing 25 ng / mL pyrimethamine and 10% human serum supplemented with human erythrocytes. In addition, a control transgenic protozoa was prepared in the same manner except using the PfCEN5 expression vector into which the GFP gene was inserted.
  • FIG. 4 is a histogram showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis shows the binding amount of LILRB1-Fc (LILRB1-Fc binding-APC), and the vertical axis shows the count number.
  • a histogram indicated by a solid line in the figure indicates an example, and a histogram indicated by gray indicates a control.
  • the name above each histogram indicates the RIFIN gene name introduced into the genetically modified protozoa.
  • LILRB1 is encoded by PF3D7_1254800 (SEQ ID NO: 4), PF3D7_0223100 (SEQ ID NO: 3), PF3D7_1100400 (SEQ ID NO: 6), PF3D7_0632700 (SEQ ID NO: 9), PF3D7_0700200 (SEQ ID NO: 5), and PF3D7_0100200 (SEQ ID NO: 1). It bound particularly strongly to proteins. Similar results were obtained when a PfCEN5 expression vector in which a His tag was added to the C-terminus of the RIFIN gene was used instead of the PfCEN5 expression vector. From these results, it was found that LILRB1 protein binds to various RIFIN proteins.
  • a polynucleotide encoding the N-terminal conserved region or the C-terminal variable region of the RIFIN gene (PF3D7_1254800) (amino acid regions 39 to 139 and 166 to 275 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, respectively) and PILR ⁇
  • the polynucleotide encoding the transmembrane region and the intracellular region was ligated and inserted into the pME18s expression vector.
  • an expression vector expressing a fusion protein containing a conserved region of the RIFIN gene and an expression vector expressing a fusion protein containing a variable region were produced.
  • the amino acid sequences of the fusion protein (SEQ ID NO: 40) containing the conserved region expressed by the expression vector of the fusion protein and the fusion protein (SEQ ID NO: 41) containing the variable region are as follows.
  • PILR ⁇ protein Amino acid sequence of PILR ⁇ protein (SEQ ID NO: 39) MALLISLPGGTPAMAQILLLLSSACLHAGNSERSNRKNGFGVNQPESCSGVQGGSIDIPFSFYFPWKLAKDPQMSIAWRWKDFHGEFIYNSSLPFIHEHFKGRLILNWTQGQTSGVLRILNLKESDQTRYFGRVFLQTTEGIQFWQSIPGTQLNVTNATCTPTTLPSTTAATSAHTQNDITEVKSANIGGLDLQTTVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDPKENPKDNNIVYASISLSSPTSPGTAPNLPVHGNPQEETVYSIVKAK
  • Amino acid sequence of fusion protein containing variable region (SEQ ID NO: 41) MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLEYETINAFIAKTIEELEGIPGITKIPGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCANANKELLECGMANNPETPETKKIEVAVNEVLSSVNDTWTATPTTT NPTAGTLAGAGLFL GGLIVFLWWKRR RQ GQ KTE EQEGQ
  • an expression vector that expresses a fusion protein containing the storage region or an expression vector that expresses a fusion protein containing the variable region was introduced into 293T cells according to the attached protocol using the above-mentioned transfection reagent.
  • an expression vector containing a GFP gene was simultaneously introduced into the 293T cells.
  • analysis was performed in the same manner as in Example 2 except that 293T cells after introduction of the vector were used.
  • Control 1 was analyzed in the same manner except that APC labeled anti-FLAG antibody was added in place of LILRB1-Fc.
  • Control 2 was analyzed in the same manner except that 293T cells into which the vector had not been introduced were used.
  • FIG. 5 is a histogram showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis shows the binding amount of LILRB1-Fc (LILRB1-Fc binding-APC) or the binding amount of the APC labeled anti-FLAG antibody (FLAG-APC), and the vertical axis shows the count number.
  • each histogram shows, from the left, the result (Variable region) of 293T cells into which the expression vector expressing the fusion protein containing the variable region was introduced (Variable region) and the result of the expression vector expressing the fusion protein containing the conserved region (Conserved) region).
  • LILRB1-Fc binding-APC LILRB1-Fc binding-APC
  • FLAG-APC APC labeled anti-FLAG antibody
  • FIG. 5 shows the GFP-positive cells gated.
  • the fusion protein containing the conserved region and the fusion protein containing the variable region were expressed to the same extent.
  • LILRB1-Fc bound to the fusion protein containing the variable region, whereas it hardly bound to the fusion protein containing the conserved region. From these results, it was found that LILRB1 protein is bound by the variable region of RIFIN protein. That is, LILRB1 protein was found to bind more specifically to the variable region of RIFIN protein as compared to the conserved region of RIFIN protein.
  • RIFIN Protein A recombinant RIFIN protein to which a His tag was attached at the C-terminus was prepared as follows. First, codon optimization was performed on a polynucleotide encoding the amino acid sequence of the variable region at the C-terminal side of RIFIN (PF3D7_1254800) (the amino acid region of 166 to 275 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4). Next, the codon-optimized polynucleotide was inserted into a pET-15b expression vector capable of adding a His tag at the N-terminus. The resulting pET-15b expression vector was used to transform E. coli (E.
  • Coli BL21 (DE3)) by a conventional method.
  • the resulting transformant was cultured in the presence of IPTG (isopropyl- ⁇ -thiogalactopyranoside) to express a recombinant RIFIN protein.
  • IPTG isopropyl- ⁇ -thiogalactopyranoside
  • the transformant was recovered and disrupted, and the recombinant RIFIN protein was purified from the disrupted solution using TALON metal affinity chromatography. The purified recombinant RIFIN protein was then refolded.
  • LILRB1 Protein Expressing 293T Cells A polynucleotide encoding LILRB1 was inserted into a pMXs expression vector. Next, an expression vector that expresses LILRB1 protein was introduced into 293T cells according to the attached protocol using the above-mentioned transfection reagent. Thus, LILRB1 protein-expressing 293T cells were obtained.
  • FIG. 6 is a histogram showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis indicates the binding amount of RIFIN (RIFIN-binding-APC), and the vertical axis indicates the count number.
  • RIFIN RIFIN-binding-APC
  • the vertical axis indicates the count number.
  • LILRB1 reporter cell was prepared in the same manner as in Reference 2 below. Specifically, the LILRB1 reporter cell is a gene transfer gene of a mouse T cell hybridoma fused with NFAT-GFP, FLAG-tagged DAP12, and the extracellular domain of LILRB1 and PILR ⁇ by retrovirus gene transfer. I got it.
  • Reference 2 Shiroishi, M. et al., “Efficient leukemia Ig-like receptor signaling and crystal structure of disulfide-linked HLA-G dimer.”, J. Biol. Chem., 2006, vol. 281, pages 10439- 10447,
  • FIG. 7 is a graph showing the results of flow cytometry.
  • (A) shows the results using recombinant RIFIN protein
  • (B) shows the results using transgenic protozoa.
  • the horizontal axis shows the expression level of GFP (LILRB1-GFP reporter)
  • the vertical axis shows the count number
  • the histogram shown by the solid line shows an example
  • the histogram shown by gray shows Control 1 is shown.
  • FIG. 7 (B) shows the expression level of GFP (LILRB1-GFP reporter), and the vertical axis shows side scatter (SSC).
  • SSC side scatter
  • PBMC Peripheral blood mononuclear cells
  • CD8 positive RIFIN positive cells were mixed at a ratio of 1: 2 (ratio of the number of cells) and cultured for 24 hours.
  • the culture temperature was 37 ° C., and was performed under a 5% CO 2 atmosphere.
  • PBMCs were stimulated with K3CpG (2 ⁇ g / mL) for 3 days. After the stimulation, the culture supernatant was collected, and the IgM concentration in the culture supernatant was measured by ELISA.
  • Control 1 was measured in the same manner except using a fusion protein in which human MDA5 (human melanoma differentiation-associated protein 5) was fused instead of the transmembrane domain of PILR ⁇ .
  • human MDA5 human melanoma differentiation-associated protein 5
  • PBMCs and infected erythrocytes infected with the above-mentioned recombinant malaria were mixed at a ratio of 1: 100 (ratio of the number of cells), and measurement was carried out in the same manner except for culturing for 16 hours.
  • Control 2 uses PBMC alone and does not stimulate with K3CpG in the same manner, except that Control 3 substitutes for said genetic recombinant malaria and uses recombinant malaria in which GFP has been introduced. ,It was measured.
  • FIG. 8 is a graph showing the amount of production of IgM.
  • the horizontal axis indicates the type of sample, and the vertical axis indicates the amount of production of IgM.
  • FIG. 8 (A) when cocultured with CHO cells expressing LIFIN protein on the membrane (LILRB1 + RIFIN-CHO), comparison with control 1 (Mock-CHO) in which RIFIN protein is not expressed on cell membrane Production of IgM decreased.
  • control 1 Mock-CHO
  • K562 cells expressing RIFIN protein were established by the retroviral gene expression system with reference to Reference 3 below. Specifically, the polynucleotide encoding the fusion protein was excised from the expression vector that expresses the fusion protein containing the variable region of Example 5, and inserted into the pMX expression vector. The resulting pMX expression vector and PLAT-E retrovirus packaging cells were used to prepare a retrovirus containing the expression vector. Then, the K562 cells (RIFIN-K562) expressing RIFIN protein were produced by infecting the K562 cells (obtained from the Institute of Aging Medicine, Tohoku University) with the retrovirus. Reference 3: Morita, S. et. Al., “Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses.”, Gene therapy, 2000, vol. 7, pages 1063-1066.
  • NK cell activity In the presence of complete medium (composition: phenol red-free RPMI-1640 medium containing 10% heat-inactivated FCS) containing 15 ⁇ mol / L Calcein AM (manufactured by Thermo Fisher Scientific) RIFIN-K562 was labeled by incubating at 37 ° C. for 30 minutes. After the labeling, the washed twice with complete medium and suspended in the complete media so that RIFIN-K562 becomes 5 ⁇ 10 3 / 100 ⁇ L.
  • the NK cell line NKL cells obtained from Dr. Lanier (University of California) were washed twice with complete medium.
  • the NKL cells and RIFIN-K562 are adjusted to an E: T ratio (number of NK cell line cells: number of RIFIN-K562 cells) of 50: 1, 25: 1 or 12.5: 1.
  • the cells were seeded in 96 well plates. After the seeding, the plate was centrifuged at 100 ⁇ g for 5 minutes, and further cultured at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere for 4 hours. Next, the plate was centrifuged at 1500 rpm for 2 minutes, and the fluorescence of the culture supernatant was measured with TriStar LB941 (manufactured by Berthold Technologies) (experimental release).
  • RIMIN-K562 was treated with 2% Triton X-100-containing complete medium to determine the maximum release (maximamu release). Controls were measured in the same manner except that NKL cells were not seeded (spontaneous release). The activity (lysis rate) of NK cells was calculated by the following formula (1). The control was calculated in the same manner except using K562 cells instead of RIFIN-K562. These results are shown in FIG. In addition, it has been confirmed by flow cytometry that the NKL cell line expresses LILRB1.
  • Dissolution rate (experimental release-spontaneous release) / (maximum release-spontaneous release) ... (1)
  • FIG. 9 is a graph showing the activity of NK cells.
  • the horizontal axis shows the E: T ratio
  • the vertical axis shows the dissolution rate (Lysis (%)).
  • RIFIN protein suppressed the activation of NK cells. From these results, it was found that RIFIN protein suppresses NK cell activation via LILRB1 protein.
  • Example 10 It was confirmed that LILRB1 protein binding is high in severe malaria patients as compared with mild malaria patients (non-severe malaria patients).
  • the number of infected erythrocytes infected with the protozoa bound to the petri dish on which LILRA2-Fc is immobilized To calculate the number of infected erythrocytes that bind to LILRB1-Fc.
  • the severe malaria patients were patients with cerebral malaria and patients with severe anemia.
  • patients with cerebral malaria were defined as Blantyre coma score ⁇ 3 and patients with severe anemia were defined as blood haemoglobin ⁇ 5 g / dL.
  • Blantyre coma score and blood haemoglobin were calculated by the method described above.
  • mild malaria patients were non-severe malaria patients.
  • FIG. 10 is a graph showing the number of infected red blood cells binding to LILRB1-Fc.
  • the horizontal axis indicates the type of patient, and the vertical axis indicates the number of infected erythrocytes that bind to LILRB1-Fc (IEs binding to LILRB1 (Relative number of IESs)).
  • severe malaria patients severe Malaria
  • severe malaria patients had a significantly higher number of infected red blood cells binding to LILRB1-Fc as compared to mild malaria patients (non-severe Malaria). From these results, it was found that LILRB1 protein binding is higher in severe malaria patients as compared to mild malaria patients.
  • the recombinant RIFIN protein was immobilized on beads. Next, the immobilized beads were reacted with plasma from 222 Africans, respectively. After the reaction, the binding of the IgG bound to the immobilized beads was analyzed by Luminex (manufactured by Thermo Fisher Scientific), and the proportion of Kenyans having RIFIN protein-binding IgG was calculated (RIFIN-1). The cutoff value was 2 SD of the mean value of 43 European donors who had never had malaria. Moreover, it calculated similarly except replacing with the said recombinant RIFIN protein and using the recombinant RIFIN protein of the variable region of PF3D7_1254200 (RIFIN-2). The ratio was calculated for each age. The results are shown in FIG.
  • FIG. 11 is a graph showing the percentage of Africans having IgG binding to RIFIN protein.
  • the horizontal axis shows the type and age of the recombinant RIFIN protein
  • the vertical axis shows the percentage of Africans having IgG binding to the RIFIN protein.
  • each recombinant RIFIN protein is, from the left, 1 year old (0-1), 1 year old to 3 years old (1-3), 3 years old to 6 years old (3-6), 6 years old Of over 10 years old (6-10), over 10 years old to 15 years old (10-15), over 15 years old to 30 years old (15-30), and over 30 years old to 60 years old (30-60) The results are shown for Africans. As shown in FIG.
  • Example 12 It was confirmed that the anti-RIFIN antibody can inhibit the interaction between LILRB1 protein and RIFIN protein. In addition, it was confirmed that the anti-RIFIN antibody can suppress the signal mediated by LILRB1 protein by the RIFIN protein.
  • RIFIN beads were prepared by coupling the recombinant RIFIN protein to Aldehyde / Sulfate Latex beads (3.8 ⁇ m, manufactured by invirtogen, A37304). Then, RIFIN beads and each serum diluted 100-fold with PBS were incubated for 15 minutes. Next, after washing with PBS, it was stained for 15 minutes with an anti-mouse IgG antibody (manufactured by Jackson, 5 ⁇ g / mL). After the staining, RIFIN beads were analyzed by flow cytometry. As a result, it was confirmed that all the sera contained an antibody that binds to the RIFIN protein, that is, an anti-RIFIN antibody.
  • Control 3 was complexed with The analysis was carried out in the same manner except that unformed APC labeled anti-IgG Fc antibody was used alone. The results are shown in FIG.
  • FIG. 12 is a histogram showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis shows the binding amount of LILRB1-Fc
  • the vertical axis shows the count number.
  • Controls 1 and 2 which did not contain the anti-RIFIN antibody
  • binding of RIFIN protein to LILRB1 protein was observed.
  • serum containing anti-RIFIN antibody was added, the binding between RIFIN protein and LILRB1 protein was inhibited and became comparable to the background (control 3). From these results, it was found that the anti-RIFIN antibody can inhibit the binding between the RIFIN protein and the LILRB1 protein.
  • FIG. 13 is a graph showing the results of flow cytometry.
  • the horizontal axis indicates the type of sample, and the vertical axis indicates the expression level of GFP (LILRB1-GFP reporter).
  • GFP LILRB1-GFP reporter
  • the RIFIN protein is presumed to induce the severeness of malaria by binding to the LILRB1 protein.
  • the aggravation of malaria is caused by the fact that the RIFIN protein suppresses the activation of immune cells such as B cells and NK cells by a signal mediated by LILRB1 protein.
  • a binding inhibitor that inhibits the binding of RIFIN protein such as anti-RIFIN antibody to LILRB1 protein can suppress the signal mediated by LIFR1 protein by RIFIN protein as described above. Therefore, it can be said that the severeness of malaria can be suppressed in vivo by inhibiting the binding of RIFIN protein and LILRB1 protein directly or indirectly by the binding inhibitor, inducer and expression inhibitor of the present invention.
  • the malaria therapeutic agent according to appendix 2 wherein the binding substance that binds to the RIFIN protein binds to the variable region of the RIFIN protein.
  • the malaria therapeutic agent according to appendix 5 wherein the portion of the RIFIN protein comprises a variable region of the RIFIN protein.
  • the expression suppression substance is at least selected from the group consisting of a substance that suppresses the expression of mRNA of the RIFIN gene or the LILRB1 gene, a substance that cleaves the expressed mRNA, and a substance that suppresses translation of a protein from the expressed mRNA.
  • (Supplementary Note 10) A method for treating malaria, comprising administering to the patient the malaria therapeutic agent according to any of Appendices 1 to 9.
  • a binding inhibitor that inhibits binding of a riffin (RIFIN) protein to a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) protein, an inducer of the binding inhibitor, or expression of RIFIN or LILRB1 A method of screening a candidate substance for treating malaria, which comprises selecting a suppressing substance as a candidate substance for treating malaria.
  • Detecting the expression of the RIFIN or the LILRB1 in the expression system, and the test substance whose expression amount of the RIFIN or the LILRB1 is lower than that of a control expression system in which the test substance is not caused to coexist The screening method according to appendix 11, comprising the step of selecting as a therapeutic candidate substance.
  • RIFIN leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) binding RIFIN.
  • LILRB1 leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1
  • RIFIN is a leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 (LILRB1) binding RIFIN.
  • Appendix 26 24.
  • Appendix 27 Contains reagents for measuring expression of riffin (RIFIN), 24.
  • a test reagent which is used in the test method according to any of appendices 19 to 26. (Appendix 28) 24.
  • the expression measurement reagent is a reagent that amplifies RIFIN gene mRNA by reverse transcription.
  • malaria therapeutic agents of the present invention can treat malaria. Therefore, the present invention is extremely useful, for example, in the clinical field and the like.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

新たなマラリア治療薬を提供する。　本発明のマラリア治療薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。

Description

マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬
　本発明は、マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬に関する。
　マラリアの感染予防および感染時の症状の重症化を抑制するために、ワクチンの開発が行なわれている。しかしながら、現在、臨床上有効なマラリアワクチンは開発されていない。
　そこで、本発明は、新たなマラリア治療薬を提供することを目的とする。
　前記本発明の課題を解決するために、本発明のマラリア治療薬（以下、「治療薬」ともいう）は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。
　本発明のマラリアの治療方法（以下、「治療方法」ともいう）は、患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することを特徴とする。
　本発明のマラリア治療用候補物質のスクリーニング方法（以下、「スクリーニング方法」ともいう）は、被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする。
　本発明のマラリア重症化マーカー（以下、「マーカー」ともいう）は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする。
　本発明のマラリアの重症化の危険度を試験する方法（以下、「試験方法」ともいう）は、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする。
　本発明の試験試薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
前記本発明の試験方法に用いることを特徴とする。
　本発明によれば、新たなマラリア治療薬を提供できる。
図１は、実施例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図２は、実施例２におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図３は、実施例３におけるフローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。 図４は、実施例４におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。 図５は、実施例５におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。 図６は、実施例６におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。 図７は、実施例７におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。 図８は、実施例８におけるＩｇＭの産生量を示すグラフである。 図９は、実施例９におけるＮＫ細胞の活性を示すグラフである。 図１０は、実施例１０におけるＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合する感染赤血球の数を示すグラフである 図１１は、実施例１１におけるＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示すグラフである。 図１２は、実施例１２におけるフローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。 図１３は、実施例１２におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
　本発明において、「治療」は、症状の進行の防止（予防）、阻害（停止）、もしくは抑制、重症化の防止（予防）、阻害（停止）、もしくは抑制、症状の改善もしくは寛解、または予後の改善の意味を含み、いずれの意味でもよい。
　本発明において、「重症化」は、脳性マラリアおよび重症貧血の意味を含み、いずれの意味でもよいし、両者を意味してもよい。前記脳性マラリアは、例えば、Blantyre coma score＜３と定義される。また、前記重症貧血は、例えば、blood haemoglobin＜５ｇ／ｄＬと定義される。Blantyre coma scoreは、例えば、下記評価項目（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）の合計値である。前記血液ヘモグロビン濃度（blood haemoglobin）の測定方法は、例えば、シアンメトヘモグロビン法である。
（評価項目）
（ａ）最良運動反応
痛み部位の認識(指関節を肋骨に擦る)：Score 2
痛み刺激に対し四肢を引っ込める(ペンで親指の爪床を押し付ける)：Score 1
無反応：Score 0
（ｂ）言語反応
適切な泣き：Score 2
うめき声もしくは不適切な泣き：Score 1
無反応：Score 0
（ｃ）眼球運動
視線を動かす（母親の顔を追う）：Score 1
視線を動かさない：Score 0
　以下、本発明について、例を挙げて説明する。ただし、本発明は、以下の説明に制限されない。また、各発明の説明は、特に言及がない限り、他の発明の説明として援用できる。
＜マラリア治療薬＞
　本発明のマラリア治療薬は、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする。本発明の治療薬は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の治療薬によれば、マラリアを治療できる。また、後述するように、本発明の治療薬は、例えば、マラリアの重症化を防止（予防）できる。このため、本発明の治療薬は、例えば、マラリアの重症化防止薬（予防薬）ということもできる。
　本発明者らは、鋭意研究の結果、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）が感染した赤血球で発現するＲＩＦＩＮが、Ｂ細胞、ＮＫ細胞等の免疫系細胞に発現するＬＩＬＲＢ１と結合し、前記免疫系細胞の機能を抑制するとの知見を得た。また、本発明者らは、重症のマラリア患者の赤血球では、軽症のマラリア患者（非重症のマラリア患者）の赤血球と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いこと、すなわち、ＬＩＬＲＢ１結合性のＲＩＦＩＮタンパク質の発現が高いとの知見を得た。さらに、本発明者らは、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質を共存させることにより、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害できるとの知見を得た。これらの知見から、本発明者らは、熱帯熱マラリア原虫が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を介して、免疫系を回避し、マラリアの重症化を惹起していることを見出し、本発明を確立するに至った。本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接的または間接的に阻害できるため、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害できる。このため、本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合による前記免疫系細胞の機能抑制を防止または解除できる。したがって、本発明の治療薬によれば、例えば、マラリアの重症化を防止する等のマラリアの治療ができる。
　本発明において、ＲＩＦＩＮの由来は、例えば、熱帯熱マラリア原虫である。前記熱帯熱マラリア原虫由来のＲＩＦＩＮは、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮは、タンパク質として、例えば、下記アミノ酸配列があげられる。なお、括弧内の「Genbank：」の後に示す文字列は、各ＲＩＦＩＮタンパク質のＧｅｎｂａｎｋにおけるアクセッション番号である（以下、同様）。熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮは、ｍＲＮＡとして、例えば、下記表１に示すＮＣＢＩアクセッション番号で登録されている塩基配列があげられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１（配列番号１、PF3D7_0100200、GenBank:CAB89210.1）
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTPHTPNHTQTTRLLCECELYSPANNDNDAEMKRVMQQFEDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQSDSIPTCICEKSLEDKVEKGCLRCAGVLGGGIAPGWSLVSGLGYAVWTNYVTQTALQKGIEAGVKAGIEGLRDFSGLGKLIPISVIQNLINHTNYDIAKTYITFVKSVNSTKCAVKEHSFCFSTYISNENALSKRAAGIAEYAADMAKITERGVLDAATPGLTTYSNAITASVVAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２（配列番号２、PF3D7_0900200、GenBank:CAD51688.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHNSTTHHTLKIPITRLLCECELYELANYDNDPEMKEVMQQFEDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCICEKSLEDKMEKECLKCAQNLGGIVAPSTGVLGEIAALAVNAWKTEAIAAATKAAIAKGTAKGLAAGAAKGVAEVIAQVESQFRLSTIGVKELGSIFNASNYTNETFISGYIYAQYQGSQCGSLSMLLGKSKPFCTFVEGRIFATSVRVGRSFSPEDFIKTTVQTIVKNAKTTAEATKAQVASAEKAAVLETSKKAIEATTTPYYTPIIVSIVAIVVIILIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質３（配列番号３、PF3D7_0223100、GenBank:CZT98243.1)
MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITRTPKATTRTLCECELYAPATYDDDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDQFDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQNDAIPTCICEKSLADKVEKTCLRCGSVFGGGITPGWGLISGLGYVGWTNYITEIAIQKGIEAGVKAGIQELKGFAGLSRLINFSEIKNLINHTNYFKEMTYVSFLQDANKTHCSARPTSKEIFCNFVSHNGESALSKRAAGIADYAADMAKITEEGVLEEGASATSSLTTAIIASIIAIVVIILIMIIIYLVLRYLRKKKMKKKLEYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質４（配列番号４、PF3D7_1254800、GenBank:CZT99701.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITPRHIQTTRLLCECELYMSNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDDRMIEKRQKCKDRCNKEIEKIILKDKIEKELTETFATLNTNITNEDIPTCICKKSVADKIEKTCLKYGGALGGGVMPGLGLIGGNSVYILANYETINAFIAKTIEELEGIPGITKLFGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCAANKNELLCRGMNPNVPETLPKKIEVAVNEVLSSVNDTWATATTPTTFFTNPIILSAIAILVIVIIMVIIYLILRYRRKQKIKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質５（配列番号５、PF3D7_0700200、GenBank:CZT62652.1)
MKIHYINILLFALPLNILVHNQRNHKKTILHTPKTKSTRTHRSLCECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDRCDKDIQKIILKDKIEKELAETFSSLHTDIQSDAIPTCICEKSLADKVEKGCLRCAQNLGGLVPGMGLIGGTAVYAAAVKAATKAGMKEALEGLKSIGGLKLLLQDKFTELVTTRNFQCPNALVGAVQNVINTQCVGPAAKNQLLCNGYEAQNDSRIIQKAVDAGRDGADVYIRTFSDSTTITTFLTDPIVISAIVVISIVVILLIIYLILRYRRKIKMNKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質６（配列番号６、PF3D7_1100400、GenBank:CZT98672.1)
MKIHYINILLFALPLNILVNNQRNHNNSTYHTSNTKTIKSHRSLCECELYAQSNYENDQEMKDVIKEFNDRTAQRFEEYNERMQVKKDQCKEQCDKEIQQIILKDKIEKELTERFSALETKIDTNDILTCICEKSVTDKFEKTCLKCSGIFATAVPELGLIGGTVVYAAAVKAATKAGMEAALVGLESVNGLRGLLGEKIKDLVTTTNFQCPNALMGLVQNVKDTQCVGAAAQSQVFCKGLLPESTSRIIQKAAAAGREGAEAYNTTFSDSTTITAFLTDPIVISAIVVISIVVILLIIYLILRYRRKIKMNKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質７（配列番号７、PF3D7_1480000、GenBank:CZU00495.1)
MKVHYINILLFSLPLNILEHNPWNHYMKPHTYTNRSLCECELYELANYDNDPQMKEVMENFIKQTQQRFHEYDERLQSKRKQYKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMAQQLTTLDPNITTEDIPTCVCEKSLADKTEKFCLNCGKTMGGVAPGWGLVSGLGYAGWSHYAATTLVKIATDAGIAEGLKVGLTKVTEIVTQLSSSTEVAIPTIDVLTNLTTGISADNVTLLGIFKTINIGMKGEFDTDTYALFSTWVQNIATTPKSYMGRYLTEAEEVTKAFADAQTRVLTQAGNVTSNLTTGITVSIIAIVVIVLVMLIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質８（配列番号８、PF3D7_0600300、GenBank:CAG25174.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHNSTTPHHPPNTRLLCECELYAPATYDDDPQMKEVMQQFEDRTSQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLQTDIQNDAIPTCVCEKSLEDKMEKGCLRCGGVLGGGIAPTFGLIGSVAINMWKTTEIAAATKAAIAAGKAAGKIAGEAAGKKAVIEALKYFGVDDFFPEIFKSILKMSRYTDVTKFGAAIAEKHVLNCAMSARGGSVNDSTCNAFEIKLGLFEAETGKPNGPPAYQAIPQKINELAEEATQAAAEAAKKASESATAAFETAEKEAIEAASMQLYTTIAYSILAILIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質９（配列番号９、PF3D7_0632700、GenBank:CAG25139.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHYITRTPKATTRSLSECELYAPSNYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDHRMKTTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQNDAIPTCVCEKSVADKVEKNCMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALYVWRDAEIVAAIAAAKEAGAAKGAAVGIKEGIKVLLNRLNTDFGLSPVRIKELESVINGTNYTDVTFIYEAIYTTYKRSCVPVDVSVRFTVADTDLTFCESVWNQTLAVSQRNMGTSPLPIIQKTAQKIVSDANFTAAATAETATEEATTTLTAKNTGEVNATYMGYQTPIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１０（配列番号１０、PF3D7_0632200、GenBank:CAG25134.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHQKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERVQNTRQKCKEQCDKEIQKIILKDKIEKELNEKFSALHTDIQSDDIPTCICEMSMADKVEKGCLRCVGVFGGGIAPSVGLLGGLGIYVWKPGALKVAITAALNANSVKIAAAANAAGEAMGVKTVIEGLKALNVHGLCPDLFESIGTKIHYTNAEEIAKIIVAKYRATCNLSTGTSSTQAMCKQFDYTFGMRIRLGSPVEYGPPPASAIPDTVKKVVAGAEQAAEAKAANVRTTISSKIITEETDVINTIYMSNQTAIIASIIAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１１（配列番号１１、PF3D7_0100400、GenBank:CAB89212.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITSRHIQTTRLLCECELYTPNYDNDPEMKSVMQQFHDRTTQRFHEYDENLKEKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIEKELTEKFSSLQTDIHSDAIPTCICEKSLADKVEKNCLKCTQNLGKIVAPSSGVLAGISEAALSVWKTTEIAAAMELAKQAGAAAGLKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGDKLLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYTTSCTPSLVNDQLVGTFNTSDPFCNLVHSNLQGSFYRSSAQTIIYEKVEEAVAGAEQAATTKTAVMTPIYTTEFTAKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYLILRYRRKMKLKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１２（配列番号１２、PF3D7_1254400、GenBank:CZT99697.1)
MMLNYTNILLFYLSLNILSSSSEVYNQRNHFITYTPKRSTRLLCECELYTSIFDNDPEMKSLIEHFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQSDAIPTCICEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGFLSGIVYTGWKAAALAAATKEAIAEGAAKGAAAGTKAGIKAVMDVLYSDFGLSIEGVQKMGLVLSATNYKDVPMITKALYSKFQVSSCLRGGPVPGVPPVRPTDGTFCSAMLEKILAQENVVKQNSLEGSIKSVVNQIVTEAKSAAVSETAKVTASETETLKATNIAAVNATYASSQTAIIASIIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１３（配列番号１３、PF3D7_0732900、GenBank:CAD51067.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHNSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCREQCDKEIEKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDAIPTCVCEKSVADKTEKVCLNCGKTMGAVAPAWGLISGLWYATWSQYVSAKILEVGISEGIKEGLTQIMKFTISLYPKANLPNITVTQMLSSGKFTNNVTLFDMVQHINNTMYTTLEAEEYSKFCGVVSSMAKYKNITFNRTYGKYSTAVTEAVTQGKTNAINTLTPATNTLTTAIIASMVAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１４（配列番号１４、PF3D7_1040500、GenBank:CZT98660.1)
MKVHYINILLFVIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSVADKMEKGCLRCGSILGAAMPEMGSIGGSLLSALSAWKPVAIEAAEKAAIAKATDLATQAGMREVVLKIEQFLKNFTEKEGLVNFTSVVNKSNFKCPTALFQNANELLSDSCIPDEVTNRTSTFCSTIAYGEKTTFEPFAQAGATTFQETLTAKTPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１５（配列番号１５、PF3D7_0600500、GenBank:CAG25176.1)
MKIHYTNILLFALPLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLDTDIQSDAIPSCVCEKSIAEKAEKGCLRCGYGLGSVAPMIGLTGSVAVNVWKTAELAAAMELAKQAGAAAGIKAGHLAGTKVVIDQLHTLGIYFVGGKPLESIIHVTNYMNVSVIYDKVYSHYTTLCTPRFVIDRPVGDFIFSGPVCNLVQPNHQGIWVKSSAQAIIKKKVEEAVAEGTQAADVVAKNTADEVTKAAIKTSTEAIDAATTTYYTPIIASIVAIVLIVLIMVIIYKILRYRRKRKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１６（配列番号１６、PF3D7_1254200、GenBank:CZT99695.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKIDTNDIPTCVCEKSMTDKVEKGCLRCGRNLGVAVPGLGVLGAYGAHSIVKVAMATAEKVGIQLGIDAGNAAGIKAVIEALNSSLNIDNLGGITLDTVLKGNNFKNIDFLVYILTDKYNTTCTVSNTEVETLLCYIGKEKPTLPYTLIQSNVRKAVAEATEVATSTTEEMTTIYTTQELSKVTSTGAILSNPIIISFIVIVIVVIIFLIIYLILRYRRKKKTKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１７（配列番号１７、PF3D7_0400700、GenBank:CAD49098.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECELYSPANYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELAEKFVTLQTDIQNDAIPTCVCEKSIADKVEKGCLRCVGVFGGGVMPGFGTIGGTALYALNQLKPAVFKAAIKAALEEGAAEILAAGIEAGDAAGMNVVRYGLRYLHVHELFPVIFDSFVKTRPYNEITSIANSILLKYGPTCTGLDNNSPPAACTKFQLNLGIHKKIGAMIDTHGTPASTAIRQGLEGILEEATQTAEAAAKIAEKGVAAEITARETALIEAGFNSSITSINASIFAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１８（配列番号１８、PF3D7_1040700、GenBank:CZT98662.1)
MKFSYFNILLFSIPLNILINDQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYSPDNYDNDAEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKDRCDKEIQKIILKDKIEKELSQHLSTLETNIDTNDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVNELKKAAMAIAIKDAIAEGLVAGETARIQASIKAVILGIKSKFRIDTLGGEVLESIITAQKYDDVSLISESIYMQYQSTCLPQYVGHGADLSKPICHTVYTLDFVQGKVHVPGSLQGSIKKALEKIVAEAKSNAVSETANVTTRQTAVFESRNIAAVDATYASYQTAIVASVVAILVIVLVMLIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質１９（配列番号１９、PF3D7_0500400、GenBank:CAD51370.1)
MKFSYFNILLFSIPLNILINDHSKYSSCKHTSNSKTTKPHRSLYECGLYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMQSKRMQCKEQCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLNTLETKIDTDDIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGYGLGTVAPTVGLIGAVAVHVWKPMALEAAIEAAIAKSAAEISAAANAAGIQAGKIAVIESLKKLYVDYFWPEMSNYILNMSHYNGVANLTAFIHEPKFNVCKDAGEVILDKCNAFDMGFGILKKDGVTNGLLPKDAVPRVLKGIVGQAEGPAKVAADAARQTVTAEITEKETAAINTIFMSKQTAIIASVVAIVVIVLIMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２０（配列番号２０、PF3D7_1255100、GenBank:CZT99704.1)
MKIHYINILLFPLKLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYTPANYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMEQQLTTLETKITTDDIPTCLCEKSVADKMEKTCLRCAGVLGGGVMPGMGLIDGSLLGAISVLKPAAIIAAKDAALAEATALATQAGMREVVLKIEQFLKLFSEKEKIFDLKLIVNKSNFSCGSSLFQNAKELANKSCVAKPNGSYTSFCNSITYSRVEPFNGYAQAGITKYNETLPLQKALLEKAKVDAVNTTYAAYHTSIIASIVAVVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２１（配列番号２１、PF3D7_1300400、GenBank:CAD52146.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPHTTARHTQKIPTTRSLSECELYAPVNYYSDPQMKEVMDNFNKQTQQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMAQQFSTLHTDIQSDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCAQNLGGVAPGWGLLSGFGYVTWSQYISGIAAKAAADAGLKAGVKVGLVNAVKIVTKTLDGFGEVPTMDWAKLIAFGDFSDGVTLHAIFKNLNNMMNCYLDSGKYSQFSTVVQKFAENPRSYATPYSTEVTEVTKAVADAKTGVLTKAGNATSSLSTGITASIIAIVVIVLIMVIIYLVLRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２２（配列番号２２、PF3D7_0732200、GenBank:CAD51061.1)
MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCHKEIEKIILKDKMEKQMAQQLTTLETKIGTDDIPTCVCEKSMADKMEKDCLRCTYGLGTLAPTVGLIGSVAVGAWKPTALKAAIVAAQKAGDAAGVAAGEAAGKKAVILALQHFKLDNLFPEIYNAIVKIRHYADVKNFSVAIVEEHSLKCQSLDLKVTTNPTCETFEFNIGMRIPDSSFVEPVDQVVPEVLDSLVGNIKEVAEAKAAEVAAAKTAEFKIANVGAVESTYGSCQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLKE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２３（配列番号２３、PF3D7_0115600、GenBank:CAD48968.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECDIYTSIYDNDPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMQGKRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDMQSDSIPTCVCEKSVADKVEKNYMKCTQNLGGIVAPSSGVLAGIAELGLSAWKTTALKTAIAAAEQAGAAKGLAAGAAKGATRLIELIQSTFKIQNIAGKSLGTFIDATNYNNGPFIYQAIYTKFEMSLCLPVFPGVDPVPGAVRDPTFCNLFEKFVPTNGSSNRDSIINAIETYVQPFVSDAKFTAAATAETATEEATAVLITKKTGEVTTTYASYQTAIIASIVAILVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２４（配列番号２４、PF3D7_1101100、GenBank:CZT98679.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPITRLLCECELYAPSNYDNDPEMKEVMEIFDRQTSERFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKLEKELNEKFLTLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKGCLRCGSILGAAMPEVGSIGGGLLYALNAWKPKALEAAIAAAKELAITEATNAGVKTVVSEINKLLAKFKQHEILFELKPIVNKSNFSCGSSLFQRAEELASKSCVAQPNGSYTSFCNTILNGEKTTFKPFAQAGANTYEKTLTTETPVLQARYTAAVKTAYGGYQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２５（配列番号２５、PF3D7_0401400、GenBank:CAD49104.1)
MKVHYINILLFALPLNILVINQRNHNNSTYHTSNTKLTKTHRTLCECELYAPSNYENDPEMKELMENFNHQSSERFREYDERIQDKRKQFKEQCEKDIQKIILKDKIEKELTEKLSTLQTDISTNDIPTCVCEKSLADKMEKTCLKCGGVLGTAVPELGLIGGSVIYSAAQAAAAKLGVAKAIELMKKIYNLGNVSFIDWTNLINVGNYSHRMSLVGIVNKVNNMCQIKDPEGNVVFCFAKQNMRGGAGKFAQTISEQAGNAAIKAGETANVKFAEMTSVGTIFSDPIVISATVVVTIAVILIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２６（配列番号２６、PF3D7_1000200、GenBank:CZT98249.1)
MKIHYINILLFELPLNILIYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDNDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDERMKTTRQKCKERCDKEIQKIILKHKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCHNCGYGLGSVAPNIGLLGGPGIYVWKIAALAAAKEFAEKAGAAMGKAAGDAAGAAELIRGLKALNIDKLFNESLGLVFDGTNYNNTEYIFKAIFSKFNESCMPRPPGSVPGPVIDRAFCDTVDTLVLPSGTGSQTSASTNAVIKEYVKPIVSNAKFTAEATAQTAAEEATNLALKTNTNAVNATYASSQTAIIVSIAAIVVIVLVMIIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２７（配列番号２７、PF3D7_0937500、GenBank:CAD52049.1)
MKIHYTNILLFPLKLNILVNTHKKPSITARHIQTTRLLCECELFSPQNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDKMEKQMAEKLSTLETKINTDDIPTCVCEKSMADKTEKFCLNCGKNMAAIAPWWGLVCGSGYAGWLHSAMAAAIDKAIAEGAAAGIKAGHLAGTNAVIEQLRTLGIYFVGNKQLETIIDVTNYMNVSFIYDKVYSHYITLCTPRPVNGHLVSNFNFSDRFCKLFHQKDLVSLDIKSVKAIIKKNVEEAVAGAEQAAKAEVSNVTATKTTEFTTKNIAEVEAATTSYYTPIIASIVAIVIIVLIMVIIYKILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２８（配列番号２８、PF3D7_1000500、GenBank:CZT98252.1)
MKVHYFNILLFALPLNILVSSPKKNPSITQKRPTRRLLCECELYAPANYDSVPQMKEVMDNFNRQTQQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMKQELTTLETKITTDDIPTCICEKSLADKVEKGCLRCGGVFGGGVAPGVGLLGGIGQLGLDVWKAAAIKAATEYALTEGAAKGLAAGNAHGMNIVIYHLKELLIDKLVPNICKTVSSTGDYTRVINFSKLIIQKRGAMCGADGGTLSKDMCTQININLGTVLRNGKANLPDKEAVPKVLNRLVSQADKAANEVAKDTSQSVAVKITEQQTAAINATYTSWQIAITASVIAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質２９（配列番号２９、PF3D7_1479700、GenBank:CZU00492.1)
MKVHYINILLFALPLDILEHNKNEPHTTPNHTQTTRSLCECELYSPANNDNDPEMKRVMQQFEDRTSQRFHEYDERMVEKRMQCKDKCDKEIQKIILKDKLEKQMVEQFSTLQTDIQSDAIPTCVCEKSIEDKVEKGCLRCGSILGAAMPELGSVGGSLLYALNTWKPAAIIAAKEAALAEATDLATQAGIDTVVAQLKIEGLLASFTVKQRLVDLSSIVTSSTYNNGAILHKSAMELASSYCHFEGTQSTPPFCSTIKYGQTTNFVRYAKAGSAAFKTEFASKSATLTKAKVGAVEATYGGYHISIISSIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質３０（配列番号３０、PF3D7_0632400、GenBank:CAG25136.1)
MKVHYINILLFALPLNILIYNQRNHKSTTHHTLKIPTTRLLCECDLYIPNYDNDPQMKKIMENFDRQTSQRFHEYDERMKTTRQKCKDKCDKEIQKIILKDKIDKELTEKFATLQTDIQNDAIPTCVCEKSLADKVEKTCLKCGGVLGGGVTPAWGLISGIVYTGWKAAALAAAKKLAAEAGAAEGASQGAAAGATRLIELIQSTFQVQNIAGQSLESIFTAQTYTDVSNITKALFNEYAEICLPIFTDSVPVRGVRYNISSPICTFVEEGILATSRDKGGSPITFIEKKVETMVSKAEGVATARAADVAAAKTAEFEATKVGAVEATYAGYHTTIIASIIAILIIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質３１（配列番号３１、PF3D7_0101000、GenBank:CAX51180.1)
MKVHCYNILLFSFTLIILLLSSSQVNNQMNHYNTAHMKNTEPIKSYRSLCECELYTSMYDDDPEMKEILHDFDRQTSQRFEEYNERLLENKQKCKEQCEKDIQKIILKDKLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSIADKMEKECLRCAQNLGGIVAPSSGVLAGIAEGALIVWKPAAIKAAKAAAAKAASDAATQAGMNAVRLEIKKLLEMFTGKPGYVDLLPIVKESTYKNGSALVDSAKKLFVESGKLEGLDRMPVFYNTVIDYPGPSNIKGFGKIGSDAYEAAFTSQKGTLEATKVGEVNTTYGGCQTAITASVIAIVVIILIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質３２（配列番号３２、PF3D7_1400600、GenBank:CZT99711.1)
MKDHYINILLFALPLNILVYNQRNYYITPRHTETNRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFVDRTTQRFHEYDESLQSKRKQCKDQCDKEIQKIILKDKIEKEFTEKLSTLQTDITTKDIPTCVCEKSLADKMEKVCLKCAQNLGGIVAPSTGVLGEIAALAVNAWKTTALKNAIAAAQKAGDAAGKIAGESKGVETIIGILEQYYSIYELKGTPLKSFFATTHYTDISNIATVIDTELNTSCGLNSLANQAICGLRTKLGLVAKPGQVMVTQKEAITKMITNVVHKSEITAEAAKTEVAATKTAAAIKMNTEAIEAATTPYYTPIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLN
熱帯熱マラリア原虫　ＲＩＦＩＮタンパク質３３（配列番号３３、PF3D7_1040300、GenBank:CZT98658.1)
MKFNYTNIILFSLSLNILLLSSRVYNKRNHKSIILHTSNENPIKTHRSLCECELYSPTNYDSDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDERMKTTRQECKEQCDKEIQKIILKDRLEKELMDKFATLHTDIQSDAIPTCVCEKSLADKTEKFCLNCGVQLGGGVLQASGLLGGIGQLGLDAWKAAALVTAKELAEKAGAAAGLKAGDIHGMKIVIEGLKALKVDTLKSGIFNSFVNNSHYTEVTGLAIAIDTEMNEVCSATYIGIHPICVVREKLGVIPKAGGTMVKQKDAITNVLKQALEKATQSAEALSETTAEDVAAKLTAQKTGAINTIFMSNQTAIIASIVAIVVIVLIMVIIYLILRYRRKKKMKKKLQYIKLLEE
　ＲＩＦＩＮは、例えば、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮを含むことが好ましい。前記ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮは、例えば、下記ＲＩＦＩＮがあげられる。ＲＩＦＩＮは、例えば、ＬＩＬＲＢ１へより強く結合することから、PF3D7_1254800（配列番号４）、PF3D7_0223100（配列番号３）、PF3D7_1100400（配列番号６）、PF3D7_0632700（配列番号９）、PF3D7_0700200（配列番号５）、およびPF3D7_0100200（配列番号１）が好ましい。なお、括弧内の「Genbank：」の後に示す文字列は、各ＲＩＦＩＮのＧｅｎｂａｎｋにおけるアクセッション番号である。
PF3D7_0100200(配列番号１、GenBank: CAB89210.1)
PF3D7_0900200(配列番号２、GenBank: CAD51688.1)
PF3D7_0223100(配列番号３、GenBank: CZT98243.1)
PF3D7_1254800(配列番号４、GenBank: CZT99701.1)
PF3D7_0700200(配列番号５、GenBank: CZT62652.1)
PF3D7_1100400(配列番号６、GenBank: CZT98672.1)
PF3D7_1480000(配列番号７、GenBank: CZU00495.1)
PF3D7_0600300(配列番号８、GenBank: CAG25174.1)
PF3D7_0632700(配列番号９、GenBank: CAG25139.1)
PF3D7_0632200(配列番号１０、GenBank: CAG25134.1)
PF3D7_0100400(配列番号１１、GenBank: CAB89212.1)
PF3D7_1254400(配列番号１２、GenBank: CZT99697.1)
　本発明において、ＬＩＬＲＢ１（Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1）の由来は、例えば、ヒトである。前記ヒト由来のＬＩＬＲＢ１は、例えば、既存のデータベースに登録されている情報を参照できる。具体例として、ヒト由来のＬＩＬＲＢ１は、ｍＲＮＡとして、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NM_001081637.2で登録されている下記の塩基配列（配列番号３４）、タンパク質として、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号NP_001075106.2で登録されている下記のアミノ酸配列（配列番号３５）があげられる。なお、下記ＬＩＬＲＢ１　ｍＲＮＡの塩基配列およびＬＩＬＲＢ１　タンパク質のアミノ酸配列において、下線で示す領域が、後述する実施例のＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの作成で使用したＬＩＬＲＢ１の細胞外領域に対応する領域である。
ヒトＬＩＬＲＢ１　ｍＲＮＡ（配列番号３４）
CTCAGCCTGGGCGGCACAGCCAGATGCGAGATGCGTCTCTGCTGATCTGAGTCTGCCTGCAGCATGGACCTGGGTCTTCCCTGAAGCATCTCCAGGGCTGGAGGGACGACTGCCATGCACCGAGGGCTCATCCATCCACAGAGCAGGGCAGTGGGAGGAGACGCCATGACCCCCATCCTCACGGTCCTGATCTGTCTCGGGCTGAGTCTGGGCCCCCGGACCCACGTGCAGGCAGGGCACCTCCCCAAGCCCACCCTCTGGGCTGAACCAGGCTCTGTGATCACCCAGGGGAGTCCTGTGACCCTCAGGTGTCAGGGGGGCCAGGAGACCCAGGAGTACCGTCTATATAGAGAAAAGAAAACAGCACCCTGGATTACACGGATCCCACAGGAGCTTGTGAAGAAGGGCCAGTTCCCCATCCCATCCATCACCTGGGAACACACAGGGCGGTATCGCTGTTACTATGGTAGCGACACTGCAGGCCGCTCAGAGAGCAGTGACCCCCTGGAGCTGGTGGTGACAGGAGCCTACATCAAACCCACCCTCTCAGCCCAGCCCAGCCCCGTGGTGAACTCAGGAGGGAATGTAACCCTCCAGTGTGACTCACAGGTGGCATTTGATGGCTTCATTCTGTGTAAGGAAGGAGAAGATGAACACCCACAATGCCTGAACTCCCAGCCCCATGCCCGTGGGTCGTCCCGCGCCATCTTCTCCGTGGGCCCCGTGAGCCCGAGTCGCAGGTGGTGGTACAGGTGCTATGCTTATGACTCGAACTCTCCCTATGAGTGGTCTCTACCCAGTGATCTCCTGGAGCTCCTGGTCCTAGGTGTTTCTAAGAAGCCATCACTCTCAGTGCAGCCAGGTCCTATCGTGGCCCCTGAGGAGACCCTGACTCTGCAGTGTGGCTCTGATGCTGGCTACAACAGATTTGTTCTGTATAAGGACGGGGAACGTGACTTCCTTCAGCTCGCTGGCGCACAGCCCCAGGCTGGGCTCTCCCAGGCCAACTTCACCCTGGGCCCTGTGAGCCGCTCCTACGGGGGCCAGTACAGATGCTACGGTGCACACAACCTCTCCTCCGAGTGGTCGGCCCCCAGCGACCCCCTGGACATCCTGATCGCAGGACAGTTCTATGACAGAGTCTCCCTCTCGGTGCAGCCGGGCCCCACGGTGGCCTCAGGAGAGAACGTGACCCTGCTGTGTCAGTCACAGGGATGGATGCAAACTTTCCTTCTGACCAAGGAGGGGGCAGCTGATGACCCATGGCGTCTAAGATCAACGTACCAATCTCAAAAATACCAGGCTGAATTCCCCATGGGTCCTGTGACCTCAGCCCATGCGGGGACCTACAGGTGCTACGGCTCACAGAGCTCCAAACCCTACCTGCTGACTCACCCCAGTGACCCCCTGGAGCTCGTGGTCTCAGGACCGTCTGGGGGCCCCAGCTCCCCGACAACAGGCCCCACCTCCACATCTGCAGGCCCTGAGGACCAGCCCCTCACCCCCACCGGGTCGGATCCCCAGAGTGGTCTGGGAAGGCACCTGGGGGTTGTGATCGGCATCTTGGTGGCCGTCATCCTACTGCTCCTCCTCCTCCTCCTCCTCTTCCTCATCCTCCGACATCGACGTCAGGGCAAACACTGGACATCGACCCAGAGAAAGGCTGATTTCCAACATCCTGCAGGGGCTGTGGGGCCAGAGCCCACAGACAGAGGCCTGCAGTGGAGGTCCAGCCCAGCTGCCGATGCCCAGGAAGAAAACCTCTATGCTGCCGTGAAGCACACACAGCCTGAGGATGGGGTGGAGATGGACACTCGGCAGAGCCCACACGATGAAGACCCCCAGGCAGTGACGTATGCCGAGGTGAAACACTCCAGACCTAGGAGAGAAATGGCCTCTCCTCCTTCCCCACTGTCTGGGGAATTCCTGGACACAAAGGACAGACAGGCGGAAGAGGACAGGCAGATGGACACTGAGGCTGCTGCATCTGAAGCCCCCCAGGATGTGACCTACGCCCAGCTGCACAGCTTGACCCTCAGACGGGAGGCAACTGAGCCTCCTCCATCCCAGGAAGGGCCCTCTCCAGCTGTGCCCAGCATCTACGCCACTCTGGCCATCCACTAGCCCAGGGGGGGACGCAGACCCCACACTCCATGGAGTCTGGAATGCATGGGAGCTGCCCCCCCAGTGGACACCATTGGACCCCACCCAGCCTGGATCTACCCCAGGAGACTCTGGGAACTTTTAGGGGTCACTCAATTCTGCAGTATAAATAACTAATGTCTCTACAATTTTGAAATAAAGCAACAGACTTCTCAATAATCAATGAAGTAGCTGAGAAAACTAAGTCAGAAAGTGCATTAAACTGAATCACAATGTAAATATTACACATCAAGCGATGAAACTGGAAAACTACAAGCCACGAATGAATGAATTAGGAAAGAAAAAAAGTAGGAAATGAATGATCTTGGCTTTCCTATAAGAAATTTAGGGCAGGGCACGGTGGCTCACGCCTGTAATTCCAGCACTTTGGGAGGCCGAGGCGGGCAGATCACGAGTTCAGGAGATCGAGACCATCTTGGCCAACATGGTGAAACCCTGTCTCTCCTAAAAATACAAAAATTAGCTGGATGTGGTGGCAGTGCCTGTAATCCCAGCTATTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCAGGGAGTCAGAGGTTTCAGTGAGCCAAGATCGCACCACTGCTCTCCAGCCTGGCGACAGAGGGAGACTCCATCTCAAATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAA
ヒトＬＩＬＲＢ１　タンパク質（配列番号３５）
MTPILTVLICLGLSLGPRTHVQAGHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTAPWITRIPQELVKKGQFPIPSITWEHTGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVTLQCDSQVAFDGFILCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTSAGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVILLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKHTQPEDGVEMDTRQSPHDEDPQAVTYAEVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRREATEPPPSQEGPSPAVPSIYATLAIH
　本発明において、前記結合阻害物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害できればよい。前記阻害は、例えば、直接的な阻害でもよいし、間接的な阻害でもよい。前記阻害は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質およびＬＩＬＲＢ１タンパク質を、前記結合阻害物質の存在下で複合体を形成させた場合のＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との複合体の形成量が、例えば、前記結合阻害物質の非存在下で複合体を形成させた場合と比較して、（例えば、有意に）低下していることを意味する。ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との複合体形成は、例えば、後述の実施例を参照し、標識化されたＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質を、それぞれ、ＬＩＬＲＢ１タンパク質またはＲＩＦＩＮタンパク質を発現する対象と接触させ、前記接触後、前記対象における前記標識を検出することにより、測定できる。前記測定は、例えば、フローサイトメータ等を用いて実施できる。
　前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質等があげられる。前記結合阻害物質が前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質の場合、前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する結合物質であることが好ましい。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する結合物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域の一部または全部に結合する。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域および保存領域は、例えば、下記アミノ酸領域を意味する。
（ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域および保存領域）
PF3D7_0100200(配列番号１、GenBank: CAB89210.1)
　可変領域：配列番号１のアミノ酸配列における１６４～２９１番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号１のアミノ酸配列における４３～１４４番目のアミノ酸領域
PF3D7_0900200(配列番号２、GenBank: CAD51688.1)
　可変領域：配列番号２のアミノ酸配列における１６７～３３３番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号２のアミノ酸配列における４２～１４３番目のアミノ酸領域
PF3D7_0223100(配列番号３、GenBank: CZT98243.1)
　可変領域：配列番号３のアミノ酸配列における１６２～２８８番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号３のアミノ酸配列における３９～１３６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1254800(配列番号４、GenBank: CZT99701.1)
　可変領域：配列番号４のアミノ酸配列における１６６～２７５番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号４のアミノ酸配列における３９～１３９番目のアミノ酸領域
PF3D7_0700200(配列番号５、GenBank: CZT62652.1)
　可変領域：配列番号５のアミノ酸配列における１６７～２８１番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号５のアミノ酸配列における４５～１４６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1100400(配列番号６、GenBank: CZT98672.1)
　可変領域：配列番号６のアミノ酸配列における１７５～２８１番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号６のアミノ酸配列における４５～１４７番目のアミノ酸領域
PF3D7_1480000(配列番号７、GenBank: CZU00495.1)
　可変領域：配列番号７のアミノ酸配列における１６７～３００番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号７のアミノ酸配列における３８～１４２番目のアミノ酸領域
PF3D7_0600300(配列番号８、GenBank: CAG25174.1)
　可変領域：配列番号８のアミノ酸配列における１６６～３２９番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号８のアミノ酸配列における４０～１４５番目のアミノ酸領域
PF3D7_0632700(配列番号９、GenBank: CAG25139.1)
　可変領域：配列番号９のアミノ酸配列における１６５～３３４番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号９のアミノ酸配列における３９～１４４番目のアミノ酸領域
PF3D7_0632200(配列番号１０、GenBank: CAG25134.1)
　可変領域：配列番号１０のアミノ酸配列における１６８～３３４番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号１０のアミノ酸配列における４２～１４３番目のアミノ酸領域
PF3D7_0100400(配列番号１１、GenBank: CAB89212.1)
　可変領域：配列番号１１のアミノ酸配列における１６４～３２９番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号１１のアミノ酸配列における３９～１４６番目のアミノ酸領域
PF3D7_1254400(配列番号１２、GenBank: CZT99697.1)
　可変領域：配列番号１２のアミノ酸配列における１６９～３３６番目のアミノ酸領域
　保存領域：配列番号１２のアミノ酸配列における４４～１４８番目のアミノ酸領域
　前記結合阻害物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。具体例として、前記結合阻害物質がペプチドまたはタンパク質の場合、前記結合阻害物質は、例えば、抗体またはその抗原結合断片があげられる。前記抗体は、例えば、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい（以下、同様）。前記結合阻害物質がペプチドまたはタンパク質の場合、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合するタンパク質またはペプチド、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合するタンパク質またはペプチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合するタンパク質またはペプチドは、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の可溶化物またはそのＲＩＦＩＮタンパク質結合断片等があげられる。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の可溶化物は、例えば、抗体のＦｃ領域（fragment crystallizable region）と、ＬＩＬＲＢ１タンパク質またはそのＲＩＦＩＮタンパク質結合断片との融合タンパク質があげられる。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合するタンパク質またはペプチドは、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片、ＲＩＦＩＮタンパク質のデコイペプチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質のデコイペプチドは、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質のＬＩＬＲＢ１タンパク質への結合を阻害し、かつＬＩＬＲＢ１タンパク質を活性化しないペプチドである。前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の活性化は、例えば、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の機能が発揮されることを意味する。前記ペプチドは、例えば、環状ペプチドまたは特殊環状ペプチドであってもよい（以下、同様）。前記結合阻害物質が核酸の場合、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合核酸分子、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合核酸分子等があげられる。前記結合核酸分子は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡおよびＲＮＡからなるアプタマー等があげられる。前記結合阻害物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
　前記結合阻害物質の誘導物質は、例えば、患者（以下、「投与対象」ともいう）に投与した際に、前記投与対象において、前記結合阻害物質を誘導する物質である。前記結合阻害物質は、抗体が好ましい。前記誘導物質の種類は、例えば、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。前記誘導物質は、例えば、効率よく前記結合阻害物質を誘導できることから、後述のアジュバントと併用することが好ましい。前記誘導物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質もしくは前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質もしくは前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の部分、またはいずれか１つ以上をコードするポリヌクレオチド等があげられる。前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を効果的に阻害する結合阻害物質を誘導できることから、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含むことが好ましい。この場合、前記誘導物質は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域の一部または全部を含む。前記誘導物質が前記ポリヌクレオチドである場合、前記ポリヌクレオチドは、例えば、ベクターに機能的に連結されている。前記ベクターは、例えば、アデノウイルスベクター等の公知のベクターがあげられる。前記ポリヌクレオチドは、例えば、デオキシリボヌクレオチドからなるＤＮＡでもよいし、リボヌクレオチドからなるＲＮＡでもよいし、ＤＮＡおよびＲＮＡからなるポリヌクレオチドでもよい。前記誘導物質は、例えば、前記投与対象において、前記結合阻害物質の発現を誘導してもよい。この場合、前記誘導物質は、例えば、低分子化合物の合成酵素、ペプチド、もしくはタンパク質をコードするポリヌクレオチドおよび前記結合阻害物質である核酸の鋳型となる核酸を含むポリヌクレオチド、またはこれを含むベクター等があげられる。前記誘導物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
　前記発現抑制物質は、特に制限されず、例えば、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの発現を抑制する物質、発現したｍＲＮＡを切断する物質および発現したｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を抑制する物質等があげられる。具体例としては、例えば、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡ干渉剤、アンチセンス、リボザイム等があげられる。前記発現抑制物質は、例えば、熱帯熱マラリア原虫のＲＩＦＩＮ遺伝子および前記患者のＬＩＬＲＢ１遺伝子の少なくとも一方の塩基配列を編集可能な遺伝子編集システムでもよい。前記遺伝子編集システムは、例えば、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９等の公知のゲノム編集システムでもよいし、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ１３等の公知のｍＲＮＡの編集システムでもよい。前記発現抑制物質は、例えば、１種類を単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
　本発明の治療薬は、前記結合阻害物質、前記誘導物質、および前記発現抑制物質のうちいずれか１つ以上を含めばよく、２つを含んでもよいし、全てを含んでもよい。
　本発明の治療薬の種類がペプチド、タンパク質、または核酸である場合、前記ペプチド、前記タンパク質、および前記核酸は、例えば、１以上のアミノ酸または１以上のヌクレオチドが修飾および／または改変されてもよい。
　前記修飾は、特に制限されず、例えば、ペプチドまたはタンパク質のＮ末端、Ｃ末端、もしくは側鎖の修飾、核酸の塩基、糖、リン酸基、または糖リン酸骨格の修飾等があげられる。
　本発明の治療薬がペプチドまたはタンパク質である場合、前記ペプチドまたはタンパク質の改変体は、例えば、前記ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列において、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入および／または付加されたアミノ酸配列からなるペプチドまたはタンパク質、および／または前記ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に対して、８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるペプチドまたはタンパク質があげられる。前記ペプチドまたはタンパク質がＲＩＦＩＮタンパク質またはその部分である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。また、前記ペプチドまたはタンパク質がＬＩＬＲＢ１タンパク質またはその部分である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記ペプチドまたはタンパク質がＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。前記ペプチドまたはタンパク質がＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する抗体またはその抗原結合断片である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記「１もしくは数個」は、例えば、１～７６個、１～５６個、１～３７個、１～１８個、１～１５個、１～１１個、１～７個、１～３個、１または２個である。本発明において、個数の数値範囲は、例えば、その範囲に属する正の整数を全て開示するものである。つまり、例えば、「１～５個」との記載は、「１、２、３、４、５個」の全ての開示を意味する（以下、同様）。前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。前記「同一性」は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の解析ソフトウェアを用いて、デフォルトのパラメータにより算出できる（以下、同様）。
　本発明の治療薬が核酸である場合、前記核酸の改変体は、例えば、前記核酸の塩基配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および／または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド、および／または前記核酸の塩基配列に対して、８０％以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチドがあげられる。前記核酸がＲＩＦＩＮタンパク質またはその部分をコードする核酸である場合、前記改変体によりコードされるタンパク質またはペプチドは、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。また、前記核酸がＬＩＬＲＢ１タンパク質またはその部分をコードする核酸である場合、前記改変体によりコードされるタンパク質またはペプチドは、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記核酸がＲＩＦＩＮタンパク質に結合する核酸である場合、前記改変体は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する。前記核酸がＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する核酸である場合、前記改変体は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する。前記「１もしくは数個」は、例えば、１～２２８個、１～１６８個、１～１１１個、１～５４個、１～４５個、１～３３個、１～２１個、１～９個、１～６個、１～３個、１または２個である。前記「同一性」は、例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上である。
　本発明の治療薬は、例えば、薬学的に許容される担体等のその他の成分を含んでもよい。この場合、本発明の治療薬は、例えば、「医薬組成物」ということもできる。前記その他の成分は、特に制限されず、例えば、保存剤、抗酸化剤、キレート剤、安定化剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤等があげられる。前記保存剤は、例えば、チメロサール、２－フェノキシエタノール等があげられる。前記キレート剤は、例えば、エチレンジアミン４酢酸、グリコールエーテルジアミン４酢酸等があげられる。
　本発明の治療薬が前記誘導物質を含む場合、本発明の治療薬は、前述のように、アジュバントを含むことが好ましい。この場合、本発明の治療薬は、例えば、「ワクチン」または「ワクチン組成物」ということもできる。前記アジュバントは、特に制限されず、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、塩化アルミニウム、リポポリ多糖（ＬＰＳ）、Poly(I:C)（Polyinosinic-polycytidylic acid）、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、ＣｐＧオリゴヌクレオチド等を含むＴｏｌｌ様受容体刺激剤、サポニン等の公知のアジュバントがあげられる。
　本発明の治療薬は、例えば、投与対象に投与することで、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接または間接的に阻害可能である。具体例として、前記結合阻害物質は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。また、前記誘導物質は、例えば、前記投与対象において、前記結合阻害物質を誘導し、これにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。さらに、前記発現抑制物質は、例えば、前記投与対象におけるＲＩＦＩＮタンパク質またはＬＩＬＲＢ１タンパク質の発現を抑制することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合、またはＬＩＬＲＢ１タンパク質に対するＲＩＦＩＮタンパク質の結合を阻害する。
　本発明の治療薬は、例えば、前述のように、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を直接的または間接的に阻害できるため、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの発生を阻害またはシグナルを抑制できる。このため、本発明の治療薬によれば、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合による前記免疫系細胞の機能抑制を防止または解除できる。このため、本発明の治療薬は、例えば、前記結合阻害物質、前記誘導物質および／または前記発現抑制物質に加えて、または代えてＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制するシグナル抑制物質を含んでもよい。前記シグナル抑制物質は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のアンタゴニスト、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のシグナル伝達タンパク質の活性抑制物質、前記結合阻害物質、前記誘導物質、前記発現抑制物質等があげられる。前記シグナル抑制物質の種類は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸等があげられる。前記シグナルの抑制は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパクおよびＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンド（例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質）を、前記シグナル抑制物質の存在下で複合体を形成させた場合のＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの量が、例えば、前記シグナル抑制物質の非存在下でのＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの量と比較して、（例えば、有意に）低下していることを意味する。前記シグナルの量は、例えば、後述の実施例を参照し、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルが発生した場合に、レポーター遺伝子を発現するレポーター細胞を用いて、測定できる。前記測定は、例えば、フローサイトメータ等を用いて実施できる。
　本発明において、前記投与対象（患者）は、例えば、ヒトおよびヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ、モルモット、ネコ等があげられる。
　本発明の治療薬の投与量は、特に制限されず、例えば、前記治療薬の種類、前記投与対象の種類、症状、年齢、投与方法等により適宜設定できる。具体例として、本発明の治療薬がペプチドであり、前記治療薬をヒトに投与する場合、１回あたりの前記ペプチドの投与量は、例えば、０．８～３０ｍｇ、１０～３０ｍｇである。前記ペプチドの投与回数は、特に制限されず、例えば、１～３回である。
　また、本発明の治療薬がタンパク質であり、前記治療薬をヒトに投与する場合、１回あたりの前記タンパク質の投与量は、例えば、１～１００ｍｇ、１０～１０００ｍｇである。前記タンパク質の投与回数は、特に制限されず、例えば、１～５回である。
　本発明の治療薬の投与形態（剤形）は、特に制限されず、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、注射剤、噴霧剤、粉末剤等があげられる。
　本発明の治療薬の投与方法は、特に制限されず、例えば、静脈注射、筋肉注射、皮下投与、皮内投与、経皮投与、直腸投与、腹腔内投与、局所投与、経鼻投与、舌下投与等があげられる。
　本発明の治療薬の製造方法は、特に制限されず、例えば、前記治療薬の種類に応じて、公知の方法を採用できる。本発明の治療薬が低分子化合物を含む場合、前記低分子化合物は、例えば、その構造に応じて、公知の方法により製造できる。
　本発明の治療薬がペプチドを含む場合、前記ペプチドの製造方法は、例えば、化学的合成方法、前記ペプチドを含むタンパク質の分解により生産する方法、組換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記化学的合成方法の場合、前記ペプチドは、例えば、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、tert-ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）等の保護基を用いた公知の有機合成方法により製造できる。前記ペプチドを含むタンパク質の分解による場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドを含むタンパク質を、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等の公知のタンパク質分解酵素で分解することにより製造できる。前記ペプチドを含むタンパク質の分解条件は、例えば、前記ペプチドを含むタンパク質の種類、前記タンパク質分解酵素の基質特異性等に応じて適宜設定できる。前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを作成する。そして、前記ペプチドの発現系を作製し、発現した前記ペプチドを単離することにより製造できる。前記発現系は、例えば、前記発現ベクターを宿主に導入することで作製できる。前記宿主は、例えば、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、細菌等の公知の宿主があげられる。また、前記組換えＤＮＡ技術を使用する場合、前記ペプチドは、例えば、前記ペプチドをコードするポリヌクレオチドと、公知の無細胞翻訳系とを使用してもよい。そして、前記無細胞翻訳系により、前記ポリヌクレオチドから翻訳された前記ペプチドを単離することにより製造できる。
　本発明の治療薬がタンパク質を含む場合、前記タンパク質の製造方法は、例えば、化学的合成方法、組み換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記タンパク質の製造方法の説明は、例えば、前記ペプチドの製造方法の説明において、「ペプチド」を「タンパク質」に読み替えて、その説明を援用できる。前記タンパク質が抗体を含む場合、前記抗体の製造方法は、例えば、前記タンパク質の製造方法と同様でもよいし、前記動物に、前記抗体の抗原で免疫し、血清を回収する方法でもよいし、前記抗体を生産するハイブリドーマ等の細胞を培養する方法でもよい。
　本発明の治療薬が核酸を含む場合、前記核酸の製造方法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法等の化学的合成方法、組み換えＤＮＡ技術を使用した合成方法等があげられる。前記核酸がアプタマーを含む場合、前記アプタマーは、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質等を用いて、ＳＥＬＥＸ法により取得できる。
＜マラリアの治療方法＞
　本発明のマラリアの治療方法は、前述のように、患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することを特徴とする。本発明の治療方法は、前記患者に、前記本発明のマラリア治療薬を投与することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の治療方法によれば、マラリアの重症化を防止する等のマラリアの治療ができる。本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の治療薬の説明を援用できる。
　本発明の治療方法は、例えば、後述の本発明の試験方法において、マラリアが重症化する危険があるとする患者に対して、実施してもよい。この場合、本発明の治療方法は、例えば、本発明の試験方法と組合せて実施してもよく、マラリアの重症化の危険度を試験する具体的な工程の説明は、本発明の試験方法の説明を援用できる。前記患者は、マラリアに未感染の患者でもよいし、マラリアに感染している患者でもよいし、マラリアに感染しているか不明の患者でもよい。
＜マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法＞
　本発明のマラリア治療用候補物質のスクリーニング方法は、前述のように、被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする。本発明のスクリーニング方法は、マラリア治療用候補物質が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質とのとの結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質であることが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記本発明の治療薬および治療方法の説明を援用できる。
　前記結合物質の種類は、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアを効果的に治療できることから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
　本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合の検出方法は、特に制限されず、例えば、公知のタンパク質間の結合の検出方法が採用でき、例えば、後述の実施例を参照できる。
　本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記被検物質を生体（投与対象）に投与する工程、前記生体から生体試料を取得する工程、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記生体試料との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記投与工程において、前記被検物質の投与条件は、例えば、前記本発明の治療薬の説明を援用できる。前記投与工程および取得工程は、任意の工程であり、なくてもよい。この場合、前記検出工程では、前記生体試料として、例えば、前記被検物質を投与された生体から取得された生体試料を使用する。前記生体試料は、特に制限されず、例えば、血液、血漿、血清等があげられる。
　本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に前記被検物質を接触させる工程、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と前記被検物質との結合を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。
　本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１を発現させる工程、前記発現系における前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現を検出する工程、および前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現量が、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりも低い前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、検出対象の前記発現は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質の発現でもよいし、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの転写でもよい。前記タンパク質の発現およびｍＲＮＡの発現の検出方法は、特に制限されず、例えば、公知の方法を採用できる。
　本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記結合阻害物質、前記誘導物質および／または前記発現抑制物質に加えて、または代えてＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制するシグナル抑制物質をマラリア治療用候補物質として選択してもよい。前記シグナル抑制物質は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のアンタゴニスト、ＬＩＬＲＢ１タンパク質のシグナル伝達タンパク質等のシグナル伝達分子の活性抑制物質、前記結合阻害物質、前記誘導物質、前記発現抑制物質等があげられる。本発明のスクリーニング方法が前記マラリア治療用候補物質としてシグナル抑制物質を選択する場合、本発明のスクリーニング方法は、例えば、前記ＲＩＦＩＮタンパク質等のＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンドと、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを検出する工程、および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む。前記検出工程において、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの検出方法は、特に制限されず、例えば、公知のシグナル伝達分子の検出方法が採用でき、例えば、後述の実施例におけるレポーター細胞を使用できる。
＜マラリア重症化マーカー＞
　本発明のマラリア重症化マーカーは、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする。本発明のマーカーは、ＲＩＦＩＮをマーカーとすることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明のマーカーによれば、例えば、被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現を測定することで、被検者のマラリアの重症化の危険度を試験できる。本発明のマーカーは、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、およびスクリーニング方法の説明を援用できる。前記マラリアは、例えば、前記熱帯熱マラリア原虫の感染によるマラリアである。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアの重症化とより高い相関を示すことから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
＜試験方法＞
　本発明のマラリアの重症化の危険度を試験する方法は、前述のように、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする。本発明の試験方法は、マラリア重症化マーカーとして、ＲＩＦＩＮの発現を測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の試験方法によれば、被検者のマラリアの重症化の危険度を試験できる。本発明の試験方法は、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、スクリーニング方法、およびマーカーの説明を援用できる。
　本発明の試験方法によれば、例えば、マラリアの症状の進行の可能性、重症化の可能性、予後の評価等を評価できる。前記マラリアは、例えば、前記熱帯熱マラリア原虫の感染によるマラリアである。
　前記被検者は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物等があげられ、前記非ヒト動物は、前述のように、例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類があげられる。
　前記生体試料の種類は、特に制限はされず、例えば、生体から分離した、体液、体液由来細胞、器官、組織または細胞等があげられる。前記体液は、例えば、血液があげられ、具体例として、例えば、全血等があげられる。前記体液由来細胞は、例えば、血液由来細胞があげられ、具体的には、血球、白血球、赤血球、リンパ球等の血球細胞があげられる。前記熱帯熱マラリア原虫が感染した患者において、ＲＩＦＩＮは、例えば、赤血球に発現していることから、血液を含む生体試料、または赤血球を含む生体試料が好ましい。
　測定対象であるＲＩＦＩＮの発現は、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡおよびＲＩＦＩＮタンパク質の発現があげられる。前記発現は、例えば、前記生体試料について、前記ｍＲＮＡまたは前記タンパク質のいずれか一方のみを測定してもよいし、両方を測定してもよい。これらの測定方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。具体例として、前記ｍＲＮＡ発現の測定方法は、例えば、逆転写（Reverse transcription：ＲＴ）－ＰＣＲ法等の逆転写反応を利用した遺伝子増幅法等があげられる。具体的には、例えば、ｍＲＮＡから逆転写反応でｃＤＮＡを合成し、前記ｃＤＮＡを鋳型として遺伝子増幅する方法である。また、前記タンパク質発現の測定方法は、例えば、免疫抗体法、ＥＬＩＳＡ法、フローサイトメトリーおよびウエスタンブロット法等があげられる。また、ＲＩＦＩＮタンパク質発現は、例えば、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を用いて測定してもよい。この場合、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質としては、例えば、後述のＬＩＬＲＢ１－Ｆｃを使用できる。前記ＲＩＦＩＮは、例えば、マラリアの重症化とより高い相関を示すことから、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮであることが好ましい。
　前記測定工程では、例えば、前記ＲＩＦＩＮの発現の有無を測定してもよいし、前記ＲＩＦＩＮの発現量を測定してもよい。
　本発明の試験方法は、例えば、さらに、前記被検者の生体試料（以下、「被検生体試料」ともいう）におけるＲＩＦＩＮの発現に基づき、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含む。前記測定工程における測定結果がＲＩＦＩＮの発現量の場合、前記試験工程では、例えば、前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、基準値と比較することにより、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含む。前記基準値は、特に制限されず、例えば、健常者、重症のマラリア患者、および重症化の進行度ごとのマラリア患者のＲＩＦＩＮの発現量があげられる。予後の評価の場合、前記基準値は、例えば、同じ被検者の治療後のＲＩＦＩＮの発現量であってもよい。
　前記基準値は、例えば、前述のような、健常者および／または重症のマラリア患者から単離した生体試料（以下、「基準生体試料」ともいう）を用いて、得ることができる。また、予後の評価の場合、例えば、同じ被検者から治療後に単離した基準生体試料を用いてもよい。前記基準値は、例えば、前記被検者の被検生体試料と同時に測定してもよいし、予め測定してもよい。後者の場合、例えば、前記被検者の被検生体試料を測定する度に、基準値を得ることが不要となるため、好ましい。前記被検者の被検生体試料と前記基準生体試料は、例えば、同じ条件で採取し、同じ条件でＲＩＦＩＮの測定を行うことが好ましい。
　前記試験工程において、被検者のマラリアの重症化の危険度の評価方法は、特に制限されず、例えば、前記測定工程の測定結果により適宜決定できる。前記測定結果が、前記ＲＩＦＩＮの発現の有無の場合、例えば、以下のように実施できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料において、前記ＲＩＦＩＮが発現していると、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるまたは危険性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料において、前記ＲＩＦＩＮが発現していないと、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性がないまたは危険性が低いと評価できる。また、前記測定結果が、前記ＲＩＦＩＮの発現量の場合、前記評価方法は、例えば、前記基準値の種類によって適宜決定できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に高い場合、前記重症のマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記マラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に高い場合、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるまたは危険性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合（有意差がない場合）、前記健常者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に低い場合、および／または、前記重症のマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも有意に低い場合、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性がないまたは危険性が低いと評価できる。また、前記試験工程において、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、前記重症化の進行度ごとのマラリア患者の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と比較することで、マラリアの重症化の進行度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料が、例えば、いずれかの重症化の進行度の前記基準生体試料と同程度の発現量の場合（有意差がない場合）、前記被検者は、前記重症化の進行度の可能性があると評価できる。
　前記試験工程において、予後の状態を評価する場合、例えば、前述と同様に評価してもよいし、基準値として、同じ被検者の治療後の基準生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を使用して評価することもできる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記基準値よりも有意に高い場合、前記被検者は、前記治療後、再発または悪化（重症化）の危険性があると評価できる。また、前記被検者の被検生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記基準値と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記基準値よりも有意に低い場合、前記被検者は、前記治療後、再発の危険性がないもしくは危険性が低いと評価できる。
　本発明においては、例えば、同じ被検者の生体試料を経時的に採取し、前記生体試料におけるＲＩＦＩＮ発現量を比較してもよい。これによって、例えば、経時的に発現量が増加すれば、重症化の可能性が高くなった等の判断が可能であり、経時的に発現量が低下すれば、重症化の可能性が低くなったまたは治癒してきた等の判断が可能である。
＜試験試薬＞
　本発明の試験試薬は、前述のように、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、前記本発明の試験方法に用いることを特徴とする。本発明の試験方法は、ＲＩＦＩＮの発現測定試薬を、前記本発明の試験方法に用いることが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の試験試薬によれば、前記本発明の試験方法を簡便に実施できる。
　前記発現測定試薬は、前記ＲＩＦＩＮの発現が測定できればよく、前記発現測定試薬の種類は、特に制限されない。前記ＲＩＦＩＮの発現測定試薬は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質の発現測定試薬でもよく、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡの発現測定試薬でもよい。
　前者は、例えば、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質があげられ、具体例として、抗体またはその抗原結合断片があげられる。この場合、本発明の試験試薬は、例えば、さらに、ＲＩＦＩＮタンパク質と前記抗体またはその抗原結合断片との結合を検出する検出物質を含むことが好ましい。前記検出物質は、例えば、前記抗体またはその抗原結合断片に対する検出可能な標識化抗体と、前記標識に対する基質等の組合せがあげられる。
　後者は、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子のｍＲＮＡを逆転写により増幅する試薬があげられ、具体例として、ポリｄＴ、ランダムプライマー、逆転写酵素、ｄＮＴＰ、ＤＮＡポリメラーゼ、プライマー等があげられる。前記プライマーは、例えば、ＲＩＦＩＮ遺伝子の塩基配列に基づいて適宜設計できる。
＜マラリアの重症化の診断方法および診断試薬＞
　本発明のマラリアの重症化の診断方法は、被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する工程を含むことを特徴とする。また、本発明のマラリアの重症化の診断試薬は、リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含むことを特徴とする。本発明診断方法および診断試薬は、例えば、前記本発明の試験方法および試験試薬の説明を援用できる。
＜マラリア治療薬の使用＞
　本発明は、マラリアの治療に使用するためのリフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質である。本発明は、マラリア治療薬の製造のためのリフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質の使用である。本発明のマラリア治療薬の使用は、例えば、前記本発明の治療薬、治療方法、スクリーニング方法、マーカー、試験方法、および試験試薬の説明を援用できる。
　以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［実施例１］
　ＬＩＬＲＢ１が、熱帯熱マラリア原虫が感染した赤血球に結合することを確認した。
（１）ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの調製
　ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ融合タンパク質をコードするプラスミド（ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ発現ベクター）は、下記参考文献１の方法と同様にして作製した。また、ビオチン化されたＬＩＬＲＢ１－Ｆｃタンパク質を生産するため、Ｃ末端にAviTagが付与されたＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ発現ベクター（Ａｖｉ－ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ発現ベクター）は、ＬＩＬＲＢ１－ＦｃをコードするポリヌクレオチドをｐＣＡＧＧＳ発現ベクターに挿入することにより、作製した。前記ＬＩＬＲＢ１－ＦｃおよびＡｖｉ－ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ発現ベクターは、トランスフェクション試薬（PEI Max、Polysciences Inc.社製）を用い、添付のプロトコルに従い、２９３Ｔ細胞（RIKEN Cell Bankより入手）に導入した。そして、前記２９３Ｔ細胞を培養することにより、ＬＩＬＲＢ１－ＦｃおよびＡｖｉ－ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃを含む培養上清を取得した。Protein Aを用いて、得られた培養上清からＬＩＬＲＢ１－ＦｃおよびＡｖｉ－ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃを精製した。
参考文献１：Hirayasu, K. et al., “Microbially cleaved immunoglobulins are sensed by the innate immune receptor LILRA2.”, Nat. Microbiol., 2016, vol. 1, Article number:16054
（２）熱帯熱マラリア原虫臨床株の調製
　熱帯熱マラリア原虫（以下、「原虫」ともいう）の臨床株は、タイ国のメーホンソーン県メーサリエン郡（Mae Sariang district, Mae Hong Son Province）に居住するマラリア患者（患者１～７）から分離し、限界希釈することで調製した。前記臨床株は、ヒト赤血球（日本赤十字社から入手、Ｏ型、ヘマトクリット２％）を添加したRPMI-1640培地（20% AlbuMAXI（商標）、25 mmol/L HEPES、0.225%重炭酸ナトリウム、0.38 mmol/L ヒポキサチンおよび10 g/mL ゲンタマイシンを含有）で培養した。培養条件は、９０％Ｎ２、５％ＣＯ２、および５％Ｏ２雰囲気下とし、培養温度は、３７℃とした。
（３）熱帯熱マラリア原虫の培養
　原虫株３Ｄ７、ＣＤＣ１、Ｋ１、ＦＣＲ３およびＤｄ２、ならびに前記臨床株は、ヒト赤血球を含む１０％ヒト血清含有RPMI-1640培地で培養した。後述する遺伝子組換え原虫は、１０％ヒト血清および25 ng/mL ピリメタミン（ＳＩＧＭＡ社製）含有RPMI-1640培地で維持した。５％Ｄ－ソルビトールを用い、原虫は、リング期（Ring Stage）に同期させた。また、トロホゾイト期（trophozoite stage）およびシゾント期（schizont stage）の原虫は、パーコール密度勾配遠心分離法（ＧＥヘルスケア社製）により調製した。各熱帯熱マラリア原虫は、ＰＣＲによりマイコプラズマ汚染を定期的に検査した。
（４）ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃと感染赤血球との結合
　ＬＩＬＲＢ１－ＦｃをＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ　Ｆｃ抗体と混合し、複合体を形成させた。つぎに、前記複合体を、３Ｄ７株または前記臨床株（患者１由来）を感染させた感染赤血球とインキュベートすることにより、前記感染赤血球を、前記複合体で染色した。前記染色後、得られたサンプルをフローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、前記原虫を感染させなかった以外は同様にして、コントロール２は、ＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ　Ｆｃ抗体のみを用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図１に示す。
　図１は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図１において、（Ａ）は、原虫を感染させなかった赤血球の結果を示し、（Ｂ）は、３Ｄ７株を感染させた感染赤血球の結果を示し、（Ｃ）は、前記臨床株を感染させた感染赤血球の結果を示す。図１（Ａ）～（Ｃ）において、横軸は、前方散乱光（ＦＳＣ）を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量（Fc-binding-APC）を示す。図１（Ａ）～（Ｃ）に示すように、コントロール１および２では、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合が観察されなかった。これに対して、実施例（LILRB1-Fc）では、３Ｄ７株または前記臨床株のいずれの原虫が感染した感染赤血球に対しても、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの感染赤血球への結合が観察された。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃが、熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することがわかった。
［実施例２］
　ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、熱帯熱マラリア原虫の臨床株が感染した赤血球に結合することを確認した。
　前記患者１～７から分離された原虫の臨床株を用い、前記実施例１と同様にして、感染赤血球を、ＬＩＬＲＢ１－ＦｃとＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ　Ｆｃ抗体との複合体で染色した。また、前記感染赤血球は、核染色剤（Vybrant（登録商標）DyeCycle（商標）Green）を用いて、核染色を実施した。前記染色後、得られたサンプルをフローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、前記臨床株を感染させなかった以外は同様にして、コントロール２は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに代えて、ＬＩＬＲＡ２－Ｆｃ融合タンパク質を添加した以外は同様にして解析した。なお、ＬＩＬＲＡ２－Ｆｃは、前記参考文献１と同様にして作製した。これらの結果を図２に示す。
　図２は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図２において、横軸は、核染色剤（Nuclear staining-VG）の蛍光強度を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示す。また、図中の数値は、実施例における核染色剤陽性であり、かつＬＩＬＲＢ１－Ｆｃが結合する赤血球の割合を示す。図２に示すように、コントロール１（Uninfected erythrocytes）およびコントロール２（黒色のプロット）では、臨床分離株の感染を示す、核染色剤陽性群において、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これに対して、実施例（グレーのプロット）では、患者１、３、４および６由来の臨床株が感染した赤血球に対して、効率よく結合した。なお、患者２および５由来の原虫が感染した感染赤血球において、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これは、原虫が感染赤血球の表面上に発現させる抗原を、宿主の状態により変化させることによると推定される。なお、この推定は、本発明を何ら制限しない。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、熱帯熱マラリア原虫の臨床株が感染した感染赤血球に結合することがわかった。
［実施例３］
　ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、異なるステージまたは異なる種類の熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することを確認した。
　前記実施例１（３）に記載の方法により、リング期に同期させた原虫が感染した感染赤血球、トロホゾイト期の原虫が感染した感染赤血球、およびシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を調製した。前記原虫は、患者６由来の原虫を用いた。そして、前記臨床株に代えて、前記リング期、トロホゾイト期またはシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。また、ステージの異なる原虫に代えて、ＣＤＣ１株、Ｋ１株、ＦＣＲ３株、Ｄｄ２株を用いた以外は同様にして、解析した。さらに、コントロールは、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに代えて、ＬＩＬＲＡ２－Ｆｃを添加した以外は同様にして解析した。これらの結果を図３に示す。
　図３は、フローサイトメトリーの結果を示すドットプロットである。図３において、横軸は、核染色剤（Nuclear staining-VG）の蛍光強度を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示す。図３において、（Ａ）は、異なるステージの原虫が感染した感染赤血球の結果を示し、（Ｂ）は、異なる種類の原虫が感染した感染赤血球の結果を示す。また、図３（Ａ）において、各ドットプロットは、左から、リング期の原虫が感染した感染赤血球の結果（ring）、トロホゾイト期の原虫が感染した感染赤血球の結果（mid trophozoite）、およびシゾント期の原虫が感染した感染赤血球の結果（schizont）を示す。図３（Ｂ）において、各ドットプロットの上の名称は、原虫株の名称を示す。また、図３において、図中の数値は、実施例における核染色剤陽性群であり、かつＬＩＬＲＢ１－Ｆｃが結合する赤血球の割合を示す。図３（Ａ）に示すように、いずれのステージの原虫が感染した感染赤血球においても、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃが結合した。ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃは、特に、トロホゾイト期またはシゾント期の原虫が感染した感染赤血球によく結合した。また、図３（Ｂ）に示すように、コントロール（黒色のプロット）では、原虫の感染を示す、核染色剤陽性群において、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これに対して、実施例（グレーのプロット）では、ＣＤＣ１株、Ｋ１株、およびＤｄ２株のいずれの原虫が感染した感染赤血球においても、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合が観察された。なお、ＦＣＲ３株が感染した感染赤血球において、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの感染赤血球への結合が観察されなかった。これは、原虫が感染赤血球の表面上に発現させる抗原を、宿主の状態により変化させることによると推定される。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、異なるステージおよび異なる種類の熱帯熱マラリア原虫が感染した感染赤血球に結合することがわかった。また、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＭＨＣクラス１分子を認識することが知られている。しかしながら、実施例１～３で使用している赤血球には、ＭＨＣクラス１分子は発現していない。このため、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃは、赤血球上に発現する熱帯熱マラリア原虫由来の分子をリガンドして結合していることがわかった。
［実施例４］
　ＬＩＬＲＢ１タンパク質のリガンドが、ＲＩＦＩＮタンパク質であることを確認した。また、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、様々なＲＩＦＩＮタンパク質と結合することを確認した。
（１）熱帯熱マラリア原虫３Ｄ７株を用いたクローニング
　ＡＰＣ標識抗ＩｇＧ－Ｆｃ抗体を後述のＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ融合タンパク質と混合し、複合体を形成させた。つぎに、前記複合体を、３Ｄ７株が感染した感染赤血球に結合させた。さらに、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合した感染赤血球を富化した。前記富化後の感染赤血球を限界希釈し、原虫の単クローンを取得した。具体的には、富化された感染赤血球内の原虫について、５％Ｄ－ソルビトールの存在下で培養することにより、リング期に同期させた。新たな培地に交換後、さらに４８時間の培養後、シゾント後期の原虫を、６３（ｖ／ｖ）％パーコール（Amersham Pharmacia Biotech社製）密度勾配遠心分離法により精製した。精製された原虫は、培養液（１０％Ｏ型ヒト血清含有RPMI-1640培地、parasitemia：１％、hematocrit：２％）と混合し、Ｔ－７５フラスコで培養した。前記培養は、ＢＮＰ－１１０インキュベータ（タバイエスペック株式会社製）を用い、９０％Ｎ２、５％ＣＯ２、および５％Ｏ２雰囲気下で、３７℃１時間実施した。前記培養後、前記フラスコのキャップを固く閉め、１細胞の赤血球に対して複数の原虫の感染が生じないように、オービタルシェーカーを用い、１００ｒｐｍで、前記フラスコを振盪した。前記フラスコ中の原虫のステージは、２時間毎にギムザ染色で確認した。前記原虫の大半が、リング期に移行したことを確認後、前記原虫を含む培養液を、新たな培養液（３％ヘマトクリット）により希釈した。前記希釈された原虫（０．５原虫／０．２ｍＬ）を９６ウェルのフラットボトムプレートに播種した。そして、半量の培養液を４８時間毎に交換し、２週間培養した。前記培養後、１プレートあたり約２０ウェルにおいて、前記原虫が、検出された。各ウェルについて、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合する赤血球を含むか否かは、フローサイトメトリー解析により、スクリーニングした。これにより、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合するＦ２クローンと、ＬＩＬＲＢ１タンパク質が結合しないＤ１１クローンを取得した。
（２）ＬＩＬＲＢ１リガンドの同定
　前記実施例１（１）で得られたＡｖｉ－ＬＩＬＲＢ１－ＦｃをＢｉｒＡビオチンリガーゼでビオチン化した。つぎに、感染赤血球のゴースト細胞を調製した。具体的には、感染赤血球のゴースト細胞は、感染赤血球と、RPMI-1640培地をＤＤＷ（２回蒸留水）で５倍希釈した低浸透液（感染赤血球の体積４０倍量）とを混合し、４℃、１５分間インキュベート後、１５０００ｒｐｍ、１５分間遠心し、さらに、低浸透液で３回洗浄することで取得した。なお、Ｆ２クローンおよびＤ１１クローンのシゾント期の原虫が感染した感染赤血球を用いて、前記感染赤血球のゴースト細胞を調製した。つぎに、Ｆ２クローンおよびＤ１１クローンのシゾント期の原虫が感染した感染赤血球から得たゴースト細胞を、ビオチン化ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃとインキュベート後、0.25 mmol/L 3,3-dithiobis(sulfosuccinimidyl propionate) (DTSSP、Thermo Scientific社製)で架橋処理した。その後、ゴースト細胞をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で洗浄し、２－メルカプトエタノール無しのサンプルバッファーでボイルした。前記ボイル後、ストレプトアビジンセファロースを用いて、ボイル後のサンプルからＬＩＬＲＢ１－Ｆｃを含む共沈物を得た。前記共沈物は、50 mmol/L ＤＴＴ（ジチオトレイトール）で溶出し、トリプシン処理後、質量分析（LC-MS/MS）に供した。MS/MSスペクトルは、ソフトウェア（Mascot）を用いて解析した。コントロールは、ビオチン化ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃで処理していないゴースト細胞を用いた以外は、同様にして解析した。また、同様の解析を独立して、さらに１回実施した。
　この結果、独立した２回のいずれの解析においても、Ｆ２クローンが感染した感染赤血球のみから、ＲＩＦＩＮタンパク質の部分配列と一致するアミノ酸配列（ＦＨＥＹＤＥＲ（配列番号３６））が得られた。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、原虫の感染により発現する赤血球上のＲＩＦＩＮタンパク質をリガンドとすることがわかった。
（３）遺伝子組換え原虫の作製
　ＲＩＦＩＮ遺伝子は、熱帯熱マラリア原虫において複数種類存在することが知られている。そこで、様々なＲＩＦＩＮ遺伝子を発現する遺伝子組換え原虫を作製し、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、ＲＩＦＩＮタンパク質との結合を確認した。具体的には、ＲＩＦＩＮ遺伝子を発現する遺伝子組換え原虫を作製するために、前記ＲＩＦＩＮタンパク質のアミノ酸配列に基づき、対応するゲノム領域の塩基配列を特定した。そして、前記ゲノム領域の塩基配列に基づき、プライマーを設計し、前記プライマーを用いてイントロンを含む各ＲＩＦＩＮ遺伝子の全長を３Ｄ７株のゲノムからＰＣＲにより増幅した。得られた増幅断片を、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに挿入することにより、１９種類のＲＩＦＩＮ遺伝子が挿入されたＰｆＣＥＮ５発現ベクターを取得した。つぎに、挿入されたＲＩＦＩＮ遺伝子の定常領域および可変領域の塩基配列を解読し、前記塩基配列が、3D7 genome version 3（release 32、PlasmoDB、http://plasmodb.org）と一致することを確認した。また、得られたＰｆＣＥＮ５発現ベクターのｃＤＮＡの塩基配列を、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに特異的なプライマー（5’-TTATCCTTATTTTTTAATAACTGCC-3’（配列番号３７）および5’-GTTCGTGGCATTCCAC-3’（配列番号３８））を用いて解読した。その結果、いずれのＰｆＣＥＮ５発現ベクターにおいても、イントロンは正確にスプライシングされていた。なお、ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに導入されていたＲＩＦＩＮ遺伝子は、下記の通りである。
（ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに導入されていたＲＩＦＩＮ遺伝子）
PF3D7_1254800、PF3D7_0223100、PF3D7_1100400、PF3D7_0632700、PF3D7_0700200、PF3D7_0100200、PF3D7_0900200、PF3D7_0600300、PF3D7_1480000、PF3D7_0100400、PF3D7_0632200、PF3D7_1254400、PF3D7_1479700、PF3D7_0632400、PF3D7_0101000、PF3D7_1000200、PF3D7_0732200、PF3D7_0937500、PF3D7_1300400
　遺伝子組換え原虫を作製するため、新鮮な赤血球にＲＩＦＩＮ－ＰｆＣＥＮ５発現ベクターをエレクトロポレーションでトランスフェクション後、前記赤血球に、３Ｄ７株を感染させた。前記感染から４日後、ピリメサミン含有RPMI-1640培地で前記感染赤血球を培養した。その後、遺伝子組換え原虫は、ヒト赤血球を添加した25 ng/mLピリメサミンおよび１０％ヒト血清含有RPMI-1640培地で、培養および維持した。また、コントロールの遺伝子組換え原虫は、ＧＦＰ遺伝子を挿入したＰｆＣＥＮ５発現ベクターを用いた以外は、同様にして作製した。
（４）ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との結合の確認
　前記臨床株に代えて、前記遺伝子組換え原虫を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。コントロールは、前記遺伝子組換え原虫に代えて、前記コントロールの遺伝子組換え原虫を用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図４に示す。
　図４は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図４において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図４において、図中の実線で示すヒストグラムは、実施例を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロールを示す。また、各ヒストグラムの上の名称は、遺伝子組換え原虫に導入されたＲＩＦＩＮ遺伝子名を示す。図４に示すように、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃは、いずれのＲＩＦＩＮ遺伝子が導入された遺伝子組換え原虫に対しても結合した。すなわち、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃは、いずれのＲＩＦＩＮタンパク質とも結合した。また、ＬＩＬＲＢ１は、PF3D7_1254800（配列番号４）、PF3D7_0223100（配列番号３）、PF3D7_1100400（配列番号６）、PF3D7_0632700（配列番号９）、PF3D7_0700200（配列番号５）、およびPF3D7_0100200（配列番号１）がコードするタンパク質に対し、特に強く結合した。なお、前記ＰｆＣＥＮ５発現ベクターに代えて、ＲＩＦＩＮ遺伝子のＣ末端にＨｉｓタグが付加されたＰｆＣＥＮ５発現ベクターを用いた場合も、同様の結果が得られた。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、様々なＲＩＦＩＮタンパク質と結合することがわかった。
［実施例５］
　ＬＩＬＲＢ１タンパク質が、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合することを確認した。
　ＲＩＦＩＮ遺伝子（PF3D7_1254800）のＮ末端側の保存領域またはＣ末端側の可変領域（それぞれ、配列番号４のアミノ酸配列における３９～１３９番目および１６６～２７５番目のアミノ酸領域）をコードするポリヌクレオチドと、ＰＩＬＲαの膜貫通領域および細胞内領域（配列番号３９のアミノ酸配列における１９６～２５６番目のアミノ酸領域）をコードするポリヌクレオチドとを連結し、ｐＭＥ１８ｓ発現ベクターに挿入した。これにより、ＲＩＦＩＮ遺伝子の保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターおよび可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを作製した。前記融合タンパク質の発現ベクターにより発現する保存領域を含む融合タンパク質（配列番号４０）および可変領域を含む融合タンパク質（配列番号４１）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
ＰＩＬＲαタンパク質のアミノ酸配列（配列番号３９）
MALLISLPGGTPAMAQILLLLSSACLHAGNSERSNRKNGFGVNQPESCSGVQGGSIDIPFSFYFPWKLAKDPQMSIAWRWKDFHGEFIYNSSLPFIHEHFKGRLILNWTQGQTSGVLRILNLKESDQTRYFGRVFLQTTEGIQFWQSIPGTQLNVTNATCTPTTLPSTTAATSAHTQNDITEVKSANIGGLDLQTTVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDPKENPKDNNIVYASISLSSPTSPGTAPNLPVHGNPQEETVYSIVKAK
保存領域を含む融合タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４０）
MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLECECELYMSNYDNDPEMKRVMQQFHDRTTQRFHEYDDRMIEKRQKCKDRCNKEIEKIILKDKIEKELTETFATLNTNITNEDIPTCICKKSVADKIEKTCLKITVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDP
可変領域を含む融合タンパク質のアミノ酸配列（配列番号４１）
MRAWIFFLLCLAGRALAASDYKDDDDKLEYETINAFIAKTIEELEGIPGITKLFGAKISQFVTPAVFRKPMSLVETILSEKKKLCLCAANKNELLCRGMNPNVPETLPKKIEVAVNEVLSSVNDTWATATTPTTFFTNPITVGLATAAAVFLVGVLGLIVFLWWKRRRQGQKTKAEIPAREPLETSEKHESVGHEGQCMDP
　つぎに、２９３Ｔ細胞に、前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、前記保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターまたは前記可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを導入した。この際に、同時にＧＦＰ遺伝子を含む発現ベクターを、前記２９３Ｔ細胞に導入した。そして、前記感染赤血球に代えて、前記ベクター導入後の２９３Ｔ細胞を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、解析した。また、コントロール１は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに代えて、ＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体を添加した以外は同様にして解析した。コントロール２は、前記ベクター未導入の２９３Ｔ細胞を用いた以外は同様にして解析した。これらの結果を図５に示す。
　図５は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図５において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量（LILRB1-Fc binding-APC）またはＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体の結合量（ＦＬＡＧ－ＡＰＣ）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図５において、各ヒストグラムは、左から、可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターを導入された２９３Ｔ細胞の結果（Variable region）および保存領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターの結果（Conserved region）を示す。図５において、図中の実線で示すヒストグラムは、実施例またはコントロール１を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロール２を示す。なお、図５は、ＧＦＰ陽性細胞にゲートをかけて示している。図５の下段のヒストグラムに示すように、ＡＰＣ標識化抗ＦＬＡＧ抗体での染色により、保存領域を含む融合タンパク質および可変領域を含む融合タンパク質が、同程度発現していることが確認できた。図５の上段のヒストグラムに示すように、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃは、可変領域を含む融合タンパク質に結合するのに対し、保存領域を含む融合タンパク質にはほとんど結合しなかった。これらの結果から、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域により結合することがわかった。すなわち、ＬＩＬＲＢ１タンパク質は、ＲＩＦＩＮタンパク質の保存領域と比較して、ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に対して、より特異的に結合することがわかった。
［実施例６］
　ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することを確認した。
（１）組換えＲＩＦＩＮタンパク質の調製
　Ｃ末端にＨｉｓタグが付加された組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、以下のようにして調製した。まず、ＲＩＦＩＮ（PF3D7_1254800）のＣ末端側の可変領域（配列番号４のアミノ酸配列における１６６～２７５番目のアミノ酸領域）のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドについて、コドン最適化を行なった。つぎに、コドン最適化されたポリヌクレオチドを、Ｎ末端にＨｉｓタグを付加可能なｐＥＴ－１５ｂ発現ベクターに挿入した。得られたｐＥＴ－１５ｂ発現ベクターを用いて、常法により、大腸菌（E. Coli BL21（DE3））の形質転換を行なった。得られた形質転換体をＩＰＴＧ（イソプロピル-β-チオガラクトピラノシド）存在下で培養し、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を発現させた。前記発現後、形質転換体を回収および破砕し、TALON metal affinity chromatographyを用い、破砕液から組換えＲＩＦＩＮタンパク質を精製した。そして、精製後の組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、リフォールディングした。
（２）ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞の調製
　ＬＩＬＲＢ１をコードするポリヌクレオチドを、ｐＭＸｓ発現ベクターに挿入した。つぎに、２９３Ｔ細胞に、前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を発現する発現ベクターを導入した。これにより、ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞を取得した。
（３）組換えＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合
　前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質発現２９３Ｔ細胞と、前記精製後の組換えＲＩＦＩＮタンパク質を混合し、インキュベートした。前記インキュベート後、さらに、ＡＰＣ標識化抗Ｈｉｓ抗体（clone 28-75、ＷＡＫＯ社製）で染色した。得られたサンプルについて、フローサイトメトリーにより解析した。この結果を図６に示す。
　図６は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図６において、横軸は、横軸は、ＲＩＦＩＮの結合量（RIFIN-binding-APC）を示し、縦軸は、カウント数を示す。図６に示すように、組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１に結合した。この結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合することがわかった。
［実施例７］
　ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してシグナルを誘導することを確認した。
（１）レポーター細胞の作製
　ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞は、下記参考文献２と同様にして作製した。具体的には、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞は、マウスＴ細胞ハイブリドーマに、ＮＦＡＴ－ＧＦＰ、ＦＬＡＧ－ｔａｇｇｅｄ　ＤＡＰ１２、およびＬＩＬＲＢ１の細胞外ドメインとＰＩＬＲβとを融合させた融合タンパク質をレトロウィルスで遺伝子導入することで取得した。
参考文献２：Shiroishi, M. et al., “Efficient leukocyte Ig-like receptor signaling and crystal structure of disulfide-linked HLA-G dimer.", J. Biol. Chem., 2006, vol.281, pages 10439-10447, 
（２）レポーターアッセイ
　前記実施例６（１）で作製した組換えＲＩＦＩＮタンパク質（１０μｇ／ｍＬ）を９６ウェルプレートに固相化した。つぎに、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞を、１×１０５細胞／ウェルとなるように播種し、１６時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＬＩＬＲＢ１シグナルにより生じるＧＦＰの発現を、フローサイトメトリーにより解析した。コントロール１は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を固相化しなかった以外は同様にして、解析した。また、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質に代えて、実施例４（３）のPF3D7_1254800をコードするベクターが導入された遺伝子組換え原虫を用いた以外は同様にして、解析した。コントロール２は、遺伝子組換え原虫を添加せず、レポーター細胞のみを用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図７に示す。
　図７は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図７において（Ａ）は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を用いた結果を示し、（Ｂ）は、遺伝子組換え原虫を用いた結果を示す。図７（Ａ）において、横軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示し、縦軸は、カウント数を示し、実線で示すヒストグラムは、実施例を示し、グレーで示すヒストグラムは、コントロール１を示す。また、図７（Ｂ）において、横軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示し、縦軸は、側方散乱光（ＳＳＣ）を示す。図７（Ａ）に示すように、コントロール１では、ＧＦＰの発現が誘導されないのに対し、組換えＲＩＦＩＮタンパク質の添加群では、ＧＦＰの発現が誘導された。また、図７（Ｂ）に示すように、コントロール２（Control）では、ＧＦＰの発現が誘導されないのに対し、遺伝子組換え原虫の添加群では、ＧＦＰが誘導された。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してシグナルを誘導することがわかった。
［実施例８］
　ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＢ細胞の活性化を抑制することを確認した。
（１）ＲＩＦＩＮタンパク質発現ＣＨＯ細胞の作製
　前記トランスフェクション試薬を用い、添付のプロトコルにしたがって、前記実施例５の可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターと、ＣＤ８を発現する発現ベクターとを、ＣＨＯ細胞（RIKEN Cell Bankより入手）にトランスフェクションした。そして、autoMACS（登録商標）Pro Separator（Miltenyi Biotec社製）を用い、ＣＤ８陽性ＲＩＦＩＮ陽性細胞を分離した。
（２）Ｂ細胞の活性の測定
　末梢血単核球（PBMC）はフィコール密度勾配遠心分離法により健常者血液から分離した。つぎに、ＰＢＭＣと、ＣＤ８陽性ＲＩＦＩＮ陽性細胞とを、１：２の割合（細胞数の比）で混合し、２４時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＰＢＭＣを、Ｋ３ＣｐＧ（２μｇ／ｍＬ）で３日間刺激した。前記刺激後、培養上清を回収し、前記培養上清中のＩｇＭ濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。コントロール１は、ＰＩＬＲαの膜貫通領域に代えて、ヒトＭＤＡ５（human melanoma differentiation-associated protein 5）を融合させた融合タンパク質を含む発現ベクターを用いた以外は同様にして、測定した。また、ＰＢＭＣと、前記遺伝子組換えマラリアが感染した感染赤血球とを１：１００の割合（細胞数の比）で混合し、１６時間培養した以外は同様にして、測定した。コントロール２は、ＰＢＭＣのみを用い、Ｋ３ＣｐＧで刺激しなかった以外は同様にして、コントロール３は、前記遺伝子組換えマラリアに代えて、ＧＦＰを導入した遺伝子組換えマラリアを用いた以外は同様にして、測定した。これらの結果を図８に示す。
　図８は、ＩｇＭの産生量を示すグラフである。図８（Ａ）および（Ｂ）において、横軸が、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＩｇＭの産生量を示す。図８（Ａ）に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を膜上に発現するＣＨＯ細胞（LILRB1+RIFIN-CHO）と共培養した場合、細胞膜上にＲＩＦＩＮタンパク質が発現しないコントロール１（Mock-CHO）と比較し、ＩｇＭの産生量が低下した。また、図８（Ｂ）に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現する遺伝子組換え原虫(LILRB1+RIFIN-transgenic)と共培養した場合、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現しないコントロール３（Mock-transgenic）と比較して、ＩｇＭの産生量が低下し、バックグラウンド（コントロール２（Control））と同程度のＩｇＭ産生量となった。Ｂ細胞は、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を発現していることが知られている。このため、これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介して、Ｂ細胞の活性化を抑制することがわかった。
［実施例９］
　ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＮＫ細胞の活性化を抑制することを確認した。
（１）ＲＩＦＩＮタンパク質発現Ｋ５６２細胞の作製
　ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞は、下記参考文献３を参照し、レトロウイルス遺伝子発現システムにより樹立した。具体的には、前記実施例５の可変領域を含む融合タンパク質を発現する発現ベクターから、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを切り出し、ｐＭＸ発現ベクターに挿入した。得られたｐＭＸ発現ベクターおよびＰＬＡＴ－Ｅレトロウイルスパッケージング細胞を用い、前記発現ベクターを含むレトロウイルスを調製した。そして、前記レトロウイルスを、前記Ｋ５６２細胞（東北大学加齢医学研究所から入手）に感染させることにより、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞（RIFIN-K562）を作製した。
参考文献３：Morita, S.et.al., “Plat-E: an efficient and stable system for transient packaging of retroviruses.”, Gene therapy, 2000, vol. 7, pages 1063-1066
（２）ＮＫ細胞の活性の測定
　15 μmol/L Calcein AM (Thermo Fisher Scientific社製)を含む完全培地（組成：１０％熱不活化ＦＣＳ含有、フェノールレッド不含RPMI-1640培地）の存在下、RIFIN-K562を３７℃３０分間培養することにより、標識化した。前記標識化後、前記完全培地で２回洗浄し、RIFIN-K562を５×１０３／１００μＬとなるように前記完全培地で懸濁した。ＮＫ細胞株であるＮＫＬ細胞（Lanier博士（カルフォルニア大学）から入手）は、２回完全培地で洗浄した。前記洗浄後、ＮＫＬ細胞およびRIFIN-K562を、Ｅ：Ｔ比（ＮＫ細胞株の細胞数：RIFIN-K562の細胞数）が、５０：１、２５：１または１２．５：１となるように９６ウェルプレートに播種した。前記播種後、前記プレートを１００×ｇ、５分間遠心し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で、４時間培養した。つぎに、前記プレートを１５００ｒｐｍ、２分間遠心し、培養上清の蛍光をTriStar LB941（Berthold Technologies社製）で測定した（実験放出、experimental release）。また、RIFIN-K562を、２％Triton X-100含有完全培地で処理することにより、最大放出（maximamu release）を測定した。コントロールは、ＮＫＬ細胞を播種しなかった以外は同様にして、測定した（自然放出、spontaneous release）。ＮＫ細胞の活性（溶解率）は、下記式（１）により算出した。コントロールは、RIFIN-K562に代えて、Ｋ５６２細胞を用いた以外は同様にして、算出した。これらの結果を図９に示す。なお、ＮＫＬ細胞株がＬＩＬＲＢ１を発現していることは、フローサイトメトリーにより確認している。
　溶解率＝（実験放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）　・・・（１）
　図９は、ＮＫ細胞の活性を示すグラフである。図９において、横軸は、Ｅ：Ｔ比を示し、縦軸は、溶解率（Lysis（％））を示す。図９に示すように、ＲＩＦＩＮタンパク質を発現するＫ５６２細胞と共培養した場合、コントロールと比較して、ＮＫ細胞の溶解率が低下した。すなわち、ＲＩＦＩＮタンパク質により、ＮＫ細胞の活性化が抑制された。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介してＮＫ細胞の活性化を抑制することがわかった。
［実施例１０］
　重症のマラリア患者では、軽症のマラリア患者（非重症のマラリア患者）と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いことを確認した。
　タンザニアの重症のマラリア患者（ｎ＝９）または軽症のマラリア患者（ｎ＝３０）から採血した。前記採血後、ＬＩＬＲＢ１－ＦｃまたはＬＩＬＲＡ２－Ｆｃ（コントロール）を固相化したペトリディッシュに血液を播種し、培養した。前記培養開始後２４時間以内に前記ペトリディッシュを洗浄し、ペトリディッシュに結合していない原虫が感染した感染赤血球を除去した。ペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球は、グルタールアルデヒドで固定後、ギムザ染色し、カウントした。そして、各患者について、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃを固相化したペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球の数から、ＬＩＬＲＡ２－Ｆｃを固相化したペトリディッシュに結合した原虫が感染した感染赤血球の数を引き、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合する感染赤血球の数を算出した。なお、重症のマラリア患者は、脳性マラリアの患者および重症貧血の患者とした。また、脳性マラリアの患者は、Blantyre coma score＜３と定義し、重症貧血の患者は、blood haemoglobin ＜５ｇ／ｄＬと定義した。また、Blantyre coma scoreおよびblood haemoglobinは、前述の方法により算出した。また、軽症のマラリア患者は、非重症のマラリア患者とした。これらの結果を図１０に示す。
　図１０は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合する感染赤血球の数を示すグラフである。図１０において、横軸は、患者の種類を示し、縦軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合する感染赤血球の数（IEs binding to LILRB1(Relative number of IESs)）を示す。図１０に示すように、重症のマラリア患者は（severe Malaria）は、軽症のマラリア患者（non-severe Malaria）と比較して、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃに結合する感染赤血球の数が有意に高かった。これらの結果から、重症のマラリア患者では、軽症のマラリア患者と比較して、ＬＩＬＲＢ１タンパク質の結合性が高いことがわかった。すなわち、重症のマラリア患者の感染赤血球では、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と結合するＲＩＦＩＮタンパク質がよく発現しているため、ＬＩＬＲＢ１タンパク質と感染赤血球との相互作用が生じ、マラリアの重症化に関与していると推定された。なお、この推定は、本発明を何ら制限しない。
［実施例１１］
　ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用の阻害が、マラリアの重症化の抑制に重要であることを確認した。
　前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質をビーズに固相化した。つぎに、前記固相化ビーズと、２２２名のタンザニア人由来の血漿とをそれぞれ反応させた。前記反応後、前記固相化ビーズに結合したＩｇＧの結合を、Luminex（Thermo Fisher Scientific社製）により解析し、ＲＩＦＩＮタンパク質結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を算出した（RIFIN-1）。カットオフ値は、マラリアを罹ったことのない４３名のヨーロッパドナーの平均値の２ＳＤとした。また、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質に代えて、PF3D7_1254200の可変領域の組換えＲＩＦＩＮタンパク質を用いた以外は同様にして、算出した（RIFIN-2）。なお、前記割合は、年齢毎に算出した。これらの結果を図１１に示す。
　図１１は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示すグラフである。図１１において、横軸は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質の種類および年齢を示し、縦軸は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合性のＩｇＧを有するタンザニア人の割合を示す。また、各組換えＲＩＦＩＮタンパク質は、左から、１歳まで（０－１）、１歳を超え３歳まで（１－３）、３歳を超え６歳まで（３－６）、６歳を超え１０歳まで（６－１０）、１０歳を超え１５歳まで（１０－１５）、１５歳を超え３０歳まで（１５－３０）、および３０歳を超え６０歳まで（３０－６０）のタンザニア人における結果を示す。図１１に示すように、２種類のＲＩＦＩＮタンパク質に対して、いずれの年齢においても同程度のＩｇＧ抗体の獲得がみられた。また、ＲＩＦＩＮタンパク質に対するＩｇＧ抗体は、１～３歳という早期に獲得されることがわかった。これらの結果から、ＲＩＦＩＮタンパク質が感染初期において重要であり、宿主側の防御免疫において重要なターゲットとなっていると推定された。このことから、生体において、ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用を阻害することにより、マラリアの重症化が抑制できることが推定された。なお、これらの推定は、本発明を何ら制限しない。
［実施例１２］
　抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＬＩＬＲＢ１タンパク質とＲＩＦＩＮタンパク質との相互作用を阻害できることを確認した。また、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できることを確認した。
（１）抗ＲＩＦＩＮ抗体含有血清の調製
　抗ＲＩＦＩＮ抗体を作製するために、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を、アジュバント（TiterMax Gold、TiterMax USA, Inc.社製）と混和し、マウス（Balb/c（ｎ＝２）およびICR（ｎ＝２））に免疫した。具体的には、６週齢のメスのBalb/cマウスとICRマウスに、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を１匹あたり５０μｇずつ、感染動物実験施設において免疫した。２週間後採血し、血清を得た。
　マウス血清中の抗ＲＩＦＩＮ抗体の有無を調べるために、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質を固相化したビーズ（RIFINビーズ）への結合を調べた。具体的には、RIFINビーズは、 Aldehyde／Sulfate Latex beads（3.8μm、invirtogen社製、 A37304）に、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質をカップリングすることにより作製した。そして、RIFINビーズと、ＰＢＳで100倍希釈した各血清を１５分間インキュベートした。つぎに、ＰＢＳで洗浄後、抗mouse IgG抗体（Jackson社製、５μｇ／ｍＬ）で１５分間染色した。前記染色後、RIFINビーズを、フローサイトメトリーにより解析した。この結果、いずれの血清も、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する抗体、すなわち、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含むことが確認できた。
（２）抗ＲＩＦＩＮ抗体によるＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合阻害
　抗ＲＩＦＩＮ抗体が、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との相互作用を阻害するかどうかを調べるために、RIFINビーズへのＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合を抗ＲＩＦＩＮ抗体含有血清で阻害できるかどうかを解析した。具体的には、前記RIFINビーズと、ＰＢＳで１００倍希釈した各血清を１５分間インキュベートした。つぎに、ＰＢＳで洗浄後、前述のように、ＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ　Ｆｃ抗体と複合体を形成させたＬＩＬＲＢ１－Ｆｃ（１０μｇ／ｍＬ）で１５分間染色した。前記染色後、RIFINビーズを、フローサイトメトリーで解析した。コントロール１は、前記血清を添加しなかった以外は同様にして、コントロール２は、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を免疫していないマウス由来の血清を用いた以外は同様にして、コントロール３は、複合体を形成していないＡＰＣ標識化抗ＩｇＧ　Ｆｃ抗体のみを用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図１２に示す。
　図１２は、フローサイトメトリーの結果を示すヒストグラムである。図１２において、横軸は、ＬＩＬＲＢ１－Ｆｃの結合量を示し、縦軸は、カウント数を示す。図１２に示すように、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含まないコントロール１および２では、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合が観察された。これに対して、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含む血清を添加した場合、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合は阻害され、バックグラウンド（コントロール３）と同程度となった。これらの結果から、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害できることがわかった。
（３）抗ＲＩＦＩＮ抗体によるＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルの抑制
　９６ウェルプレートに、前記組換えＲＩＦＩＮタンパク質（１０μｇ／ｍＬ）を固相化した。つぎに、前記ＬＩＬＲＢ１レポーター細胞を、１×１０５細胞／ウェルとなるように播種した。さらに、前記血清を、１００倍希釈となるように各ウェルに添加し、１８時間培養した。培養温度は、３７℃とし、５％ＣＯ２雰囲気下で実施した。前記培養後、ＬＩＬＲＢ１シグナルにより生じるＧＦＰの発現を、フローサイトメトリーにより解析した。コントロールは、組換えＲＩＦＩＮタンパク質を免疫していないマウス由来の血清を用いた以外は同様にして、解析した。これらの結果を図１３に示す。
　図１３は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。図１３において、横軸は、サンプルの種類を示し、縦軸は、ＧＦＰの発現量（LILRB1-GFP reporter）を示す。図１３に示すように、コントロールでは、ＧＦＰの発現が誘導されるのに対し、抗ＲＩＦＩＮ抗体を含む血清を添加した場合、ＧＦＰの発現は、ほとんど誘導されなかった。また、前述のように、抗ＲＩＦＩＮ抗体は、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する。このため、これらの結果から、抗ＲＩＦＩＮ抗体により、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害することにより、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できることがわかった。
　前述のように、生体において、ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合により、マラリアの重症化を誘導していると推定される。また、このマラリアの重症化は、ＲＩＦＩＮタンパク質が、ＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルにより、Ｂ細胞、ＮＫ細胞等の免疫細胞の活性化を抑制することに起因すると考えられる。抗ＲＩＦＩＮ抗体等のＲＩＦＩＮタンパク質と、ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質は、前述のように、ＲＩＦＩＮタンパク質によるＬＩＬＲＢ１タンパク質を介したシグナルを抑制できる。したがって、本発明の結合阻害物質、誘導物質、および発現抑制物質により、直接または間接的に、ＲＩＦＩＮタンパク質とＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害することで、生体においてマラリアの重症化を抑制できるといえる。
　以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。
　この出願は、２０１７年１１月２８日に出願された日本出願特願２０１７―２２８２２６を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。
＜付記＞
　上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする、マラリア治療薬。
（付記２）
前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質の少なくとも一方である、付記１記載のマラリア治療薬。
（付記３）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する、付記２記載のマラリア治療薬。
（付記４）
前記結合物質は、抗体またはその抗原結合断片を含む、付記２または３記載のマラリア治療薬。
（付記５）
前記誘導物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質もしくはＲＩＦＩＮタンパク質の部分、またはこれらをコードする核酸を含む、付記１から４のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記６）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含む、付記５記載のマラリア治療薬。
（付記７）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮタンパク質を含む、付記１から６のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記８）
前記結合阻害物質の誘導物質およびアジュバントを含む、付記１から７のいずれかに記載のマラリア治療薬。
（付記９）
前記発現抑制物質は、前記ＲＩＦＩＮ遺伝子または前記ＬＩＬＲＢ１遺伝子のｍＲＮＡの発現を抑制する物質、発現したｍＲＮＡを切断する物質および発現したｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を抑制する物質からなる群から選択された少なくとも一つである、付記１記載のマラリア治療薬。
（付記１０）
患者に、付記１から９のいずれかに記載のマラリア治療薬を投与することを特徴とする、マラリアの治療方法。
（付記１１）
被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法。
（付記１２）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記被検物質との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１３）
前記被検物質を生体に投与する工程、
前記生体から生体試料を取得する工程、
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と、前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と、前記生体試料との共存下、前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質と前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質との結合を阻害した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１４）
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に前記被検物質を接触させる工程、
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質と前記被検物質との結合を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮタンパク質または前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合した前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１５）
前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現系に前記被検物質を共存させて、前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１を発現させる工程、
前記発現系における前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現を検出する工程、および
前記ＲＩＦＩＮまたは前記ＬＩＬＲＢ１の発現量が、前記被検物質を共存させていないコントロールの発現系よりも低い前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する工程を含む、付記１１記載のスクリーニング方法。
（付記１６）
前記被検物質が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、および核酸からなる群から選択された少なくとも一つである、付記１１から１５のいずれかに記載のスクリーニング方法。
（付記１７）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする、マラリア重症化マーカー。
（付記１８）
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、付記１７記載のマラリア重症化マーカー。
（付記１９）
被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする、マラリアの重症化の危険度を試験する方法。
（付記２０）
前記測定工程において、ＲＩＦＩＮの発現量を測定する、付記１９記載の試験方法。
（付記２１）
前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量を、基準値と比較することにより、前記被検者のマラリアの重症化の危険度を試験する試験工程を含み、
前記基準値が、健常者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量またはマラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量である、付記２０記載の試験方法。
（付記２２）
前記試験工程において、前記被検者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量が、前記健常者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも高い場合、前記マラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量と同じ場合または、前記マラリアの重症患者の生体試料におけるＲＩＦＩＮの発現量よりも高い場合に、前記被検者は、マラリアが重症化する危険性があるとする、付記２１記載の試験方法。
（付記２３）
前記生体試料が、血液を含む、付記１９から２２のいずれかに記載の試験方法
（付記２４）
前記生体試料が、赤血球を含む、付記１９から２３のいずれかに記載の試験方法。
（付記２５）
前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、付記１９から２４のいずれかに記載の試験方法。
（付記２６）
前記ＲＩＦＩＮの発現は、ＲＩＦＩＮタンパク質の発現およびＲＩＦＩＮ　ｍＲＮＡの発現の少なくとも一方である、付記１９から２５のいずれかに記載の試験方法。
（付記２７）
リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
付記１９から２６のいずれかに記載の試験方法に用いることを特徴とする、試験試薬。
（付記２８）
前記発現測定試薬は、ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質、およびＲＩＦＩＮと前記結合物質との結合を検出する検出試薬を含む、付記２７記載の試験試薬。
（付記２９）
前記発現測定試薬は、ＲＩＦＩＮ遺伝子　ｍＲＮＡを逆転写により増幅する試薬である、付記２７記載の試験試薬。
　以上説明したように、本発明のマラリア治療薬によれば、マラリアを治療できる。このため、本発明は、例えば、臨床分野等において極めて有用である。

Claims (15)

  1. リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を含むことを特徴とする、マラリア治療薬。
  2. 前記結合阻害物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質および前記ＬＩＬＲＢ１タンパク質に結合する結合物質の少なくとも一方である、請求項１記載のマラリア治療薬。
  3. 前記ＲＩＦＩＮタンパク質に結合する結合物質は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域に結合する、請求項２記載のマラリア治療薬。
  4. 前記結合物質は、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項２または３記載のマラリア治療薬。
  5. 前記誘導物質は、ＲＩＦＩＮタンパク質もしくはＲＩＦＩＮタンパク質の部分、またはこれらをコードする核酸を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
  6. 前記ＲＩＦＩＮタンパク質の部分は、前記ＲＩＦＩＮタンパク質の可変領域を含む、請求項５記載のマラリア治療薬。
  7. 前記ＲＩＦＩＮタンパク質は、ＬＩＬＲＢ１結合性ＲＩＦＩＮタンパク質を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
  8. 前記結合阻害物質の誘導物質およびアジュバントを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のマラリア治療薬。
  9. 患者に、請求項１から８のいずれか一項に記載のマラリア治療薬を投与することを特徴とする、マラリアの治療方法。
  10. 被検物質から、リフィン（ＲＩＦＩＮ）タンパク質と白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）タンパク質との結合を阻害する結合阻害物質、前記結合阻害物質の誘導物質、またはＲＩＦＩＮもしくはＬＩＬＲＢ１の発現抑制物質を、マラリア治療用候補物質として選択することを特徴とする、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法。
  11. リフィン（ＲＩＦＩＮ）であることを特徴とする、マラリア重症化マーカー。
  12. 前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、請求項１１記載のマラリア重症化マーカー。
  13. 被検者の生体試料におけるリフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現を測定する測定工程を含むことを特徴とする、マラリアの重症化の危険度を試験する方法。
  14. 前記ＲＩＦＩＮは、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー１（ＬＩＬＲＢ１）結合性ＲＩＦＩＮである、請求項１３記載の試験方法。
  15. リフィン（ＲＩＦＩＮ）の発現測定試薬を含み、
    請求項１３または１４記載の試験方法に用いることを特徴とする、試験試薬。

     
PCT/JP2018/043698 2017-11-28 2018-11-28 マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬 WO2019107387A1 (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019557256A JPWO2019107387A1 (ja) 2017-11-28 2018-11-28 マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬
US16/767,929 US20210187002A1 (en) 2017-11-28 2018-11-28 Antimalarial drug, malaria treatment method, screening method for candidate substance for malaria treatment, malaria severity marker, method for testing risk of severe malaria, and test reagent

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2017-228226 2017-11-28
JP2017228226 2017-11-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019107387A1 true WO2019107387A1 (ja) 2019-06-06

Family

ID=66664501

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2018/043698 WO2019107387A1 (ja) 2017-11-28 2018-11-28 マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20210187002A1 (ja)
JP (1) JPWO2019107387A1 (ja)
WO (1) WO2019107387A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11802155B2 (en) 2020-05-01 2023-10-31 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. ILT-binding agents and methods of use thereof

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABDEL-LATIF, M. S. ET AL.: "Antibodies to Plasmodium falciparum Rifin Proteins Are Associated with Rapid Parasite Clearance and Asymptomatic Infections", INFECT. IMMUN., vol. 71, no. 11, November 2003 (2003-11-01), pages 6229 - 6233, XP055615271 *
CH 'NG, J. H. ET AL.: "Epitopes of anti-RIFIN antibodies and characterization of rif-expressing Plasmodium falciparum parasites by RNA sequencing", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 7, no. 43190, 24 February 2017 (2017-02-24), pages 1 - 11, XP055615254 *
GOEL, S. ET AL.: "RIFINs are adhesins implicated in severe Plasmodium falciparum malaria", NATURE MEDICINE, vol. 21, no. 4, 9 March 2015 (2015-03-09), pages 314 - 317, XP055615249 *
KALMBACH, Y. ET AL.: "Increase in annexin V-positive B cells expressing LILRB1/ILT2/ CD 85j in malaria", EUROPEAN CYTOKINE NETWORK, vol. 17, no. 3, September 2006 (2006-09-01) - 6 September 2006 (2006-09-06), pages 175 - 180, XP055615273 *
KAUR, J. ET AL.: "2TM proteins': an antigenically diverse superfamily with variable functions and export pathways", PEERJ, vol. 6, no. e4757, 11 May 2018 (2018-05-11), pages 1 - 28, XP055615265 *
SAITO, F. ET AL.: "Immune evasion of Plasmodium falciparum by RIFIN via inhibitory receptors", NATURE, vol. 552, 29 November 2017 (2017-11-29) - 7 December 2017 (2017-12-07), pages 101 - 105, XP055615261 *
TAN, J. ET AL.: "A LAIR1 insertion generates broadly reactive antibodies against malaria variant antigens", NATURE, vol. 529, 2016, pages 105 - 109, XP055296952, doi:10.1038/nature16450 *
WAHLGREN, M. ET AL.: "Variant surface antigens of Plasmodium falciparum and their roles in severe malaria", NATURE REVIEWS MICROBIOLOGY, vol. 15, no. 8, 12 June 2017 (2017-06-12) - August 2017 (2017-08-01), pages 479 - 491, XP055615272 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11802155B2 (en) 2020-05-01 2023-10-31 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. ILT-binding agents and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2019107387A1 (ja) 2020-12-17
US20210187002A1 (en) 2021-06-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10426822B2 (en) Cancer vaccine composition
KR101304243B1 (ko) ＨＬＡ-Ａ2 양성 환자용 글리피칸-3(ｇｌｙｐｉｃａｎ-3)유래의 암 거절항원 펩티드 및 그를 포함하는 의약
US20070031432A1 (en) Tumor antigen
US10383925B2 (en) Cancer antigen EEF2
CA2696591A1 (en) Cdh3 peptide and medicinal agent comprising the same
EP1536006A1 (en) Cancer antigens and utilization thereof
CN102428102A (zh) 诱导XAGE-1b特异性免疫反应的肽及其利用
WO2019107387A1 (ja) マラリア治療薬、マラリアの治療方法、マラリア治療用候補物質のスクリーニング方法、マラリア重症化マーカー、マラリアの重症化の危険度を試験する方法および試験試薬
US10197577B2 (en) Serum antibody assay for determining protection from malaria, and pre-erythrocytic subunit vaccines
WO2006138449A2 (en) Method for identifying a mhc class ii-dependent tumor-associated t helper cell antigen
JP2022017865A (ja) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞傷害性Ｔ細胞エピトープペプチド及びその利用
US8252293B2 (en) Binding domain of Plasmodium reticulocyte binding proteins
US8080369B2 (en) Methods for activating peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) by administering human immunodeficiency virus (HIV) Tat under physiological oxygen levels
CA3226437A1 (en) Antigen binding proteins specifically binding ct45
WO2022207874A1 (en) T-cell receptors specific for hepatitis c virus peptides

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18884534

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019557256

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 18884534

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1