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WO2011096374A1 - 新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物 - Google Patents

新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物 Download PDF

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WO2011096374A1
WO2011096374A1 PCT/JP2011/051974 JP2011051974W WO2011096374A1 WO 2011096374 A1 WO2011096374 A1 WO 2011096374A1 JP 2011051974 W JP2011051974 W JP 2011051974W WO 2011096374 A1 WO2011096374 A1 WO 2011096374A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
iodobenzyl
bleomycin
blm
compound
cobalt
Prior art date
Application number
PCT/JP2011/051974
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English (en)
French (fr)
Inventor
醇 安東
逸子 安東
昌宏 黒田
右 金澤
Original Assignee
国立大学法人 岡山大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人 岡山大学 filed Critical 国立大学法人 岡山大学
Priority to JP2011552771A priority Critical patent/JPWO2011096374A1/ja
Publication of WO2011096374A1 publication Critical patent/WO2011096374A1/ja

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0491—Sugars, nucleosides, nucleotides, oligonucleotides, nucleic acids, e.g. DNA, RNA, nucleic acid aptamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to a novel iodobenzyl-bleomycin compound.
  • the present invention also relates to a metal complex of an iodobenzyl-bleomycin compound and various metal atoms, for example, a novel iodobenzyl-cobalt-bleomycin compound (hereinafter sometimes referred to as “iodobenzyl-Co-bleomycin compound”).
  • iodobenzyl-Co-bleomycin compound a novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound.
  • Diagnostic imaging is a device that uses X-rays, ultrasound, electromagnetic waves (including electromagnetic waves emitted from radioisotopes), etc., and images and observes lesions throughout the body including the head, chest, and abdomen. An inspection to be performed.
  • diagnostic agents for malignant tumors for SPECT include gallium citrate ( 67 Ga) and thallium chloride ( 201 Tl).
  • diagnostic imaging agents for inflammatory lesions include gallium citrate ( 67 Ga) and indium ( 111 In) labeled leukocytes.
  • sodium iodide As the radiopharmaceutical for treating thyroid cancer and its metastases, sodium iodide (131 I) is, as the for the treatment of low-grade non-Hodgkin's lymphoma and mantle cell lymphoma, ibritumomab Ma Booch tiuxetan - 90 Y And radiopharmaceuticals that treat a limited number of malignant tumors. However, there are still no radiopharmaceuticals to treat common malignant tumors.
  • Non-patent Document 1 As image diagnostic agents that may be a radiopharmaceutical of diagnosing general malignancies, bleomycin (non-patent document 1) is an anticancer agent, 57 Co- bleomycin conjugated with radioactive cobalt (57 Co) is synthesized The possibility of a positive drawing agent for malignant tumor tissue was reported (Non-patent Documents 2-4).
  • 67 Ga gallium citrate
  • 67 Ga has three types of gamma rays, 296 keV, 184 keV, and 93 keV, and measurement for image creation was not easy, but the point 123 I (one type of 160 keV gamma rays) is easy to measure and good quality Images can be created.
  • 67 Ga has a long physical half-life of 78 hours, which increases patient exposure, while 123 I has a physical half-life of 13 hours, which reduces patient exposure and is beneficial to the patient.
  • thallium chloride ( 201 Tl) When thallium chloride ( 201 Tl) is used, it is difficult to draw a malignant tumor lesion because many normal organs accumulate more than the accumulation in the malignant tumor lesion. In addition, thallium chloride ( 201 Tl) measures 69-80 keV mercury KX rays, so the energy is weak and the image becomes unclear when drawing with SPECT.
  • the physical half-life of 201 Tl is as long as 74 hours, but 123 I can produce high-quality images as described above, and the physical half-life is short, which reduces patient exposure and is beneficial to patients. is there.
  • 57 Co- bleomycin bleomycin is an anticancer agent to bind the radioactive cobalt (57 Co), compared to normal organs (except kidney), it was reported in conjunction that a large amount accumulate in malignant tissue (Non-Patent Documents 2-4). Therefore, it was experimentally used as a positive drawing agent for malignant tumor tissue, but because of the long physical half-life of 57 Co, which is 270 days, it was radioactively released by the Ministry of Health at that time in terms of radioactive contamination of the environment and human exposure. Not allowed as a medicine.
  • gallium citrate When conventional gallium citrate ( 67 Ga) is used, it accumulates in the liver, kidneys, bones and the like in addition to inflamed tissues, which hinders detection of inflamed tissues. As described above, 67 Ga is more difficult to measure for image drawing than 123 I, and at the same time has the disadvantage of increasing patient exposure.
  • indium (111 an In) labeled leukocytes indium leukocytes obtained from the patient (111 In) - labeled with oxine is intended to be administered to the patient, used in complex is very limited.
  • bleomycin bound to cobalt has a strong ability to accumulate malignant tumors.
  • 57- Co has a long physical half-life of 270 days, so it does not change the biological properties of Co-bleomycin on malignant tumor accumulation, and does not change the radioisotope (RI) to Co-bleomycin.
  • RI radioisotope
  • the following two methods can be considered as a method for labeling Co-bleomycin with RI.
  • the first method is a method of synthesizing RI-labeled bleomycin in which RI (or a reagent thereof) is bound to bleomycin, and then binding cobalt to synthesize RI-labeled Co-bleomycin.
  • Co-bleomycin is synthesized in advance, and then RI (or its reagent) is bound to synthesize RI-labeled Co-bleomycin.
  • the Co- bleomycin produced by the conventional method was tried labeling the above three RI, 131 I - In can not be labeled, 125 I- Bolton Hunter reagent, the 125 I-PIB reagent Co-bleomycin can be labeled with low yield.
  • Co-bleomycin labeled with 125 I-Bolton Hunter reagent obtained in a small amount was examined for malignant tumor accumulation in Erlich cancer subcutaneously transplanted mice, but strong malignant tumor accumulation was not observed.
  • An object of the present invention is to provide a novel iodobenzyl-bleomycin compound.
  • the present invention is capable of accumulating in a malignant tumor having a biological property related to malignant tumor accumulation of a metal complex of an iodobenzyl-bleomycin compound and various metal atoms, for example, an iodobenzyl-Co-bleomycin compound.
  • Another object of the present invention is to provide a method for synthesizing a metal complex of the iodobenzyl-bleomycin compound and of the iodobenzyl-bleomycin compound and various metal atoms.
  • It is another object of the present invention to provide a test agent and test method for malignant tumors or inflamed tissues, and a malignant tumor therapeutic agent, characterized by using the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound.
  • the inventors of the present invention added iodobenzyl iodide synthesized from iodobenzyl alcohol and iodine as starting materials to the terminal amino group of bleomycin, whereby iodobenzyl-Co having malignant tumor accumulation ability.
  • the present invention was completed by successfully synthesizing a novel iodobenzyl-bleomycin compound for producing metal complexes such as bleomycin.
  • this invention consists of the following. 1. An iodobenzyl-bleomycin compound characterized by comprising a benzyl group substituted with an iodine atom in R of bleomycin represented by the general formula (I). 2. 2. The iodobenzyl-bleomycin compound according to item 1, wherein R in the general formula (I) has a structure represented by the formula (II). 3. 3. The iodobenzyl-bleomycin compound according to item 2, wherein the iodine atom of the benzyl group represented by formula (II) is located at the meta position. 4). 4.
  • the method for synthesizing the iodobenzyl-Co-bleomycin compound according to item 6, comprising the following steps: 1) a step of synthesizing iodobenzyl iodide; 2) adding cobalt to bleomycin to synthesize Co-bleomycin; 3) A step of adding iodobenzyl-Co-bleomycin compound by adding Co-bleomycin dissolved in methanol to the iodobenzyl iodide prepared above. 8).
  • the method for synthesizing the iodobenzyl-Co-bleomycin compound according to item 6, comprising the following steps: 1) step of synthesizing 'iodobenzyl iodide; 2) 'adding bleomycin dissolved in methanol to the iodobenzyl iodide prepared above to synthesize an iodobenzyl-bleomycin compound; 3) 'A step of adding cobalt to the iodobenzyl-bleomycin compound prepared above to synthesize an iodobenzyl-Co-bleomycin compound.
  • a test for malignant tumors or inflamed tissues comprising the iodobenzyl-Co-bleomycin compound according to item 5 above.
  • a malignant tumor therapeutic agent comprising the iodobenzyl-Co-bleomycin compound according to item 5 as an active ingredient.
  • 12 6. A method for examining a malignant tumor or an inflamed tissue, comprising using the iodobenzyl-Co-bleomycin compound according to item 5 above.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can be easily synthesized.
  • the iodobenzyl-bleomycin compound of the present invention can form complexes with various metal atoms, and these complexes may be used for medical purposes.
  • Possible metal atoms that can form useful complexes include cobalt, iron, rhodium, ruthenium, tin, manganese, nickel, palladium, chromium, antimony, vanadium, and the like.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention has the ability to accumulate malignant tumors by conventional Co-bleomycin, and if labeled with 123 I or 124 I, can be drawn clearly with the labeled iodine. Also, 123 I has a physical half-life of 13 hours and 124 I has a physical half-life of 4.2 days, compared to 57 Co-bleomycin where the physical half-life of radioactive cobalt ( 57 Co) was 270 days.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can reduce patient exposure and reduce radioactive contamination of the environment.
  • the physical half-life length of 124 I is 4.2 days, so it can be synthesized before the date of use and transported over a long distance. There are medical economic advantages.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound labeled with 131 I that emits beta rays is accumulated in the malignant tumor tissue and the malignant tumor cells are irradiated with the beta rays, a therapeutic effect on the malignant tumor is expected.
  • FIG. 3 shows a synthetic scheme for adding iodobenzyl iodide to the terminal amino group site of bleomycin demethyl A 2 or cobalt-bleomycin demethyl A 2 .
  • Example 1 Is a diagram illustrating a 3- 125 I- Akuchiguramu of iodobenzyl iodide and Co- thin layer chromatography after reaction bleomycin demethyl A 2.
  • Example 1 Is a diagram illustrating a 3- 125 I- autoradiogram and Akuchiguramu of iodobenzyl -Co- bleomycin 3A thin layer chromatography.
  • Example 1 3- 125 I- iodobenzyl - shows the autoradiogram and Akuchiguramu tlc bleomycin. (Example 2)
  • the present invention relates to a novel iodobenzyl-bleomycin compound.
  • the present invention also relates to metal complexes of iodobenzyl-bleomycin compounds such as iodobenzyl-Co-bleomycin compounds with various metal atoms.
  • Bleomycin has a structure represented by the following general formula (I).
  • various bleomycins are specified by the structure of R shown in Table 1.
  • the case where the structure of R shown in Table 1 is modified, for example, by binding an iodo compound, is referred to as “bleomycin compound”, and is simply distinguished from the case of “bleomycin”.
  • the iodobenzyl-bleomycin compound of the present invention is characterized by containing a benzyl group substituted with an iodine atom in R (terminal amino group) of bleomycin represented by the general formula (I).
  • the iodobenzyl-bleomycin compound has a structure in which R in the general formula (I) is represented by the formula (II).
  • the position of the iodine atom is not particularly limited and may be any of the meta position, the para position, and the ortho position, but is most preferably located at the meta position.
  • the substituted iodine atom may be radioactive or non-radioactive.
  • radioactive iodine atom it may be any one selected from 123 I, 124 I, 125 I or 131 I, 123 I and 124 I are suitable for diagnostic imaging, and malignant tumor treatment. 131 I is preferred, and 125 I is preferred for basic research.
  • the present invention provides a metal with any of the above-mentioned iodobenzyl-bleomycin compounds and any metal atom selected from cobalt, copper, iron, rhodium, ruthenium, tin, manganese, nickel, palladium, chromium, antimony, vanadium, etc. It extends to complexes.
  • the iodobenzyl- (metal atom) -bleomycin compound of the present invention is synthesized by binding a metal atom, such as cobalt, to the iodobenzyl-bleomycin compound synthesized as described above according to the conventional method of synthesizing (metal atom) -bleomycin.
  • the iodobenzyl- (metal atom) -bleomycin compound of the present invention is synthesized by adding iodobenzyl iodide to the terminal amino group of (metal atom) -bleomycin synthesized by a method known per se and reacting. You can also.
  • the metal complex of the iodobenzyl-bleomycin compound of the present invention and a metal atom is most preferably an iodobenzyl-Co-bleomycin compound.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound can also be synthesized by binding cobalt to the iodobenzyl-bleomycin compound synthesized as described above according to the conventional method for synthesizing Co-bleomycin.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can also be synthesized by adding iodobenzyl iodide to the terminal amino group of Co-bleomycin synthesized by a method known per se and reacting it.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can be synthesized by a method including a step of adding iodobenzyl iodide to the terminal amino group of bleomycin or Co-bleomycin.
  • a method for synthesize iodobenzyl -Co- bleomycin compounds of the present invention have the general formula (I) and among the various bleomycin shown in Table 1, it is particularly preferable to use bleomycin demethyl A 2.
  • iodobenzyl iodide to bleomycin demethyl A 2 or Co-bleomycin demethyl A 2 .
  • cobalt may be bonded to bleomycin in advance or may not be bonded.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can be synthesized by a method including the following steps 1) to 3). In the following, either step 1) or 2) may be performed first. 1) A step of synthesizing iodobenzyl iodide. 2) A step of adding cobalt to bleomycin to synthesize Co-bleomycin. 3) A step of adding an iodobenzyl-Co-bleomycin compound by adding Co-bleomycin dissolved in methanol to the synthesized iodobenzyl iodide.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can also be produced by a synthesis method including the following steps 1) ′ to 3) ′.
  • Iodobenzyl iodide can be synthesized using iodobenzyl alcohol and iodine ions as starting materials based on the synthesis scheme of FIG.
  • 125 I ⁇ is illustrated as an iodine ion added to iodobenzyl alcohol.
  • 123 I ⁇ , 124 I ⁇ , or 131 I ⁇ may be a radioactive iodine ion, or non-radioactive.
  • the iodine ion may be used.
  • the iodine atom of the benzene ring of the synthesized iodobenzyl iodide is located at the meta position in FIG.
  • iodobenzyl iodide was synthesized in, for example, a iodobenzyl iodide 125 I is located in the meta position 3 125 I- iodobenzyl iodide (3- 125 I-iodobenzyliodide: hereinafter "3-125 I-BZI ”) and it can be shown, those located in the ortho position 2- 125 I-BzI, those located at the para position can be shown as 4- 125 I-BzI.
  • the method of adding iodobenzyl iodide to the above 3) Co-bleomycin or the above 2) ′ bleomycin that is, the step of adding iodobenzyl iodide to the terminal amino group of Co-bleomycin or bleomycin is shown in FIG. It can be based on the synthesis scheme shown in FIG.
  • the method of adding cobalt to the bleomycin of the above 2) or the iodobenzyl bleomycin compound of the above 3) ′ for example, can be a method known per se. Specifically, for example, it can be based on the description of Non-Patent Document 2-4.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention retains the malignant tumor accumulation property of conventional Co-bleomycin and can be drawn clearly with labeled iodine.
  • 123 I has a physical half-life of 13 hours and 124 I has a physical half-life of 4.2 days, so that the physical half-life of radioactive cobalt ( 57 Co) is 270 days.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can reduce patient dose and ambient radioactive contamination.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound labeled with 131 I that emits beta rays is accumulated in malignant tumor tissue and irradiated with malignant tumor cells with beta rays, a therapeutic effect on the malignant tumor is expected.
  • This compound is the first to discover a compound labeled with a nuclide that emits beta rays and accumulates in large amounts in general malignant tumors.
  • the present invention relates to a method for producing an iodobenzyl-Co-bleomycin compound, a diagnostic agent for a malignant tumor or inflammatory tissue containing the iodobenzyl-Co-bleomycin compound, a therapeutic agent for a malignant tumor containing the compound as an active ingredient, It extends to a method for examining malignant tumors or inflamed tissues using a compound.
  • the dosage is not particularly limited.
  • a therapeutic agent for malignant tumor containing the compound as an active ingredient is used in combination with a therapeutic agent known per se, or when the therapeutic agent for malignant tumor of the present invention is administered without using a therapeutic agent known per se, etc.
  • the appropriate dose can be easily selected.
  • the dose is appropriately set depending on the disease, weight, age, sex, etc. of the patient.
  • the active ingredient can be used in the range of about 0.01 to 1000 mg per adult day.
  • a malignant tumor therapeutic agent and a malignant tumor or inflamed tissue test agent containing the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention as an active ingredient the compound and a pharmacologically and pharmaceutically acceptable carrier Or it can be used with an additive.
  • carriers or additives include appropriate buffers such as phosphate buffer, isotonic agents such as physiological saline, etc., for example, solubilizers or solubilizers, isotonic agents, pH adjusters, Examples of the stabilizer include ascorbic acid, and examples of the pH adjuster include hydrochloric acid and sodium hydroxide.
  • Malignant tumors or inflamed tissues can be examined by using a test drug containing the iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention as an image diagnostic drug. Since the compound has the property of being specifically taken up by malignant tumors, it is possible to image malignant tumors by detecting the radiation emitted from the compound using nuclear medicine inspection techniques such as PET and SPECT. .
  • the malignant tumor that can be examined with the compound of the present invention is not particularly limited as long as the compound can specifically accumulate, and for example, esophagus, stomach, pancreas, large intestine, lung, brain, ovary, breast, skin, Examples include malignant tumors existing in the uterus.
  • an image diagnosis can also be performed for the inflamed tissue.
  • 3-iodobenzyl alcohol (3-iodobenzyl alcohol) and radioactive iodine ion 125 I - 3 125 produced as a starting material I- iodobenzyl iodide and (3- 125 I-BzI) was added, was synthesized 3- 125 I- iodobenzyl -Co- bleomycin compound (3- 125 I-Bz-Co -BLM).
  • R of general formula (I) the following is shown in formula (III) 3- 125 I-Bz -Co-BLM is proposed structure.
  • the 3- 125 I-BzI (3.3 ⁇ M / starting 20 ⁇ l of 3-iodobenzyl alcohol) and was produced by the reaction of Co-BLM-dA 2 3- 125 I-Bz-Co-BLM, silica gel thin layer chromatography Separated (Rf 0.34 to 0.41).
  • the autoradiogram and actigram of thin-layer chromatography of this isolate are shown in FIG.
  • a fluoro image analyzer TM FLA-7000 manufactured by Fuji Photo Film Co., Ltd. was used for producing these autoradiograms and actigrams.
  • 3-iodobenzyl alcohol starting material is reduced to 0.33MyuM, the ratio at which radioactivity was the reaction product of the combined 3-125 I-BZI and Co-BLM-dA 2 further detail observed to increase, in FIG. 4 the resulting 3- 125 I-Bz-Co- BLM as shown in, 3A (Rf 0.39 ⁇ 0.48) , it was found that divides into two as 3B (Rf 0.35 ⁇ 0.43). Therefore 3A, 3B was separated by silica gel thin layer chromatography separately, to obtain a single 3- 125 I-Bz-Co- BLM 3A and 3- 125 I-Bz-Co- BLM 3B.
  • Figure 5 shows an example of the actigram and autoradiogram of the separated 3A silica gel thin layer chromatography.
  • Co-BLM-dA 2 About 3 times the amount of CoCl 2 is added to the aqueous solution of BLM-dA 2 to prepare three types of pH 6.0, 6.5 and 7.0, followed by freeze-drying. did.
  • 3-iodobenzyl alcohol 0.33MyuM, others above the conducted just as to obtain a high specific radioactivity 3- 125 I-BzI.
  • 3-iodobenzyl alcohol likewise performed using 2-iodobenzyl alcohol and 4-iodobenzyl alcohol to give the respective 2-125 I-BZI and 4- 125 I-BzI.
  • 3A having a radiochemical purity of 98% or more was obtained as shown in FIG.
  • 3B having a purity of 98% or more was obtained.
  • Tumor-bearing mice Male scid mice (8 weeks old) purchased from Clea Japan Co., Ltd. were transplanted with Ehrlich ascites tumor cells (approximately 4 ⁇ 10 7 cells) subcutaneously in the thigh. It used for experiment when it became the magnitude
  • Uptake rate of each 3- 125 I-Bz-Co- BLM of each tissue was expressed in uptake rate for each tissue 1 g in the case where the injection amount is 100% (% / g). Since there was variation in the body weight of the mice, in order to make the results easier to compare, the body weight was standardized to 100 g in the calculation (uptake rate (% / g) ⁇ mouse body weight (g) ⁇ 100 was calculated).
  • Table 3 shows the malignant tumor tissue / organ tissue-uptake ratio per unit weight. At 1 hour after administration, the organs of 1.0 or less (more concentrated than malignant tumor tissue) were blood, liver, and kidney, but after 3 hours, they became two organs, liver and kidney.
  • Tables 4 and 5 The results of the biodistribution of 3- 125 I-Bz-Co- BLM 3A and 3B in tumor-bearing mice are shown in Tables 4 and 5.
  • Table 4 shows the uptake rate per 1 g of each tissue (when weight is unified to 100 g) 1 hour and 3 hours after administration.
  • the uptake rates of malignant tumor tissues were 0.319% / g, 0.280% / g, 3 hours after 3A, and 0.331% / g, 0.259% / g after 1 hour, 3 hours, respectively. there were. Accumulation in the kidney was very large, and accumulation in the liver was also large. There was no significant difference between 3A and 3B, but all organs were smaller after 3 hours than after 1 hour.
  • Table 5 shows the malignant tumor tissue / organ tissue-uptake ratio per unit weight.
  • the organs of 1.0 or less were blood, liver, kidney, and lung 1 hour after administration, but after 3 hours, they became 2 types of organs, liver and kidney. It was. From these results, it was found that 3 hours after administration, 3A and 3B were accumulated in malignant tumor tissue more than normal organ tissue except kidney and liver.
  • Example 1-2 Inflammatory Tissue Accumulation of Various 125 I-Bz-Co-BLM
  • confirmation of the inflamed tissue accumulation of various 125 I-Bz-Co-BLM was performed using inflammation-initiating substances.
  • Inflamed mice 0.2 ml of turpentine oil was injected subcutaneously into the back of male ddY mice (5 weeks old) purchased from Japan SLC Co., and used for experiments 5 days later.
  • 3- 125 I-Bz- BLM injection solutions and 3- 125 I-Bz-Co- BLM was obtained by injection solutions and bearing mice
  • 3- 125 I-Bz-BLM and 3- 125 I-Bz -Co-BLM was dissolved in physiological saline to prepare the following two types of physiological saline solutions for injection.
  • 3- 125 I-Bz-BLM saline solution content 20 [mu] g ⁇ 30 [mu] g in 0.3 ml, approximately 10KBq
  • 3- 125 I-Bz-Co- BLM saline solution content 20 [mu] g ⁇ 30 [mu] g in 0.3 ml, approximately 10KBq
  • Tumor-bearing mice Male scid mice (8 weeks old) purchased from Clea Japan Co., Ltd. were transplanted with Ehrlich ascites tumor cells (approximately 4 ⁇ 10 7 cells) subcutaneously in the thigh. It used for experiment when it became the magnitude
  • novel iodobenzyl-bleomycin compound of the present invention complexes with various metal atoms can be formed, and these complexes may be used for medical purposes.
  • Possible metal atoms that can form useful complexes include cobalt, iron, rhodium, ruthenium, tin, manganese, nickel, palladium, chromium, antimony, vanadium, and the like.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention has the ability to accumulate malignant tumors by conventional Co-bleomycin, and if labeled with 123 I or 124 I, can be drawn clearly with the labeled iodine.
  • 123 I has a physical half-life of 13 hours and 124 I has a physical half-life of 4.2 days, compared to 57 Co-bleomycin where the physical half-life of radioactive cobalt ( 57 Co) was 270 days.
  • the novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound of the present invention can reduce patient exposure and reduce radioactive contamination of the environment.
  • the present invention 124 In the case of a novel iodobenzyl-Co-bleomycin compound labeled with I, it can be manufactured before the date of use due to its long physical half-life and can be transported over a long distance, which is advantageous in terms of medical economy.
  • the iodobenzyl-Co-bleomycin compound labeled with 131 I that emits beta rays is accumulated in malignant tumor tissue and irradiated with malignant tumor cells with beta rays, a therapeutic effect on the malignant tumor is expected.

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Abstract

　新規なヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を提供する。また、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体、例えばヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の悪性腫瘍集積性に関する生物学的性質が従来よりも優れた、悪性腫瘍に集積可能な金属錯体を提供する。さらに、本発明は当該ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物の、及びヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体の合成方法を提供する。　ヨードベンジルアルコールとヨウ素を出発原料として合成したヨードベンジルヨウ化物を、ブレオマイシンの末端アミノ基に付加させることにより、合成した新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物による。

Description

新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物
　本発明は、新規なヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に関する。また、本発明はヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体、例えば新規なヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物（以下、「ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物」という場合もある。）に関する。さらには、当該新規金属錯体を含む悪性腫瘍等の検査薬、悪性腫瘍治療薬および悪性腫瘍等の検査方法に関する。
　本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願、特願２０１０－０２４６２８号優先権を請求する。
　画像診断とは、Ｘ線、超音波、電磁波（放射性同位元素から放射される電磁波を含む）などを利用した装置で、頭部、胸部、腹部をはじめとする全身の病変部を画像化して観察する検査をいう。SPECT（Single Photon Emission CT；単光子放出断層像）用の悪性腫瘍の画像診断薬としては、クエン酸ガリウム（67Ga）、塩化タリウム（201Tl）が挙げられる。炎症性病変の画像診断薬としては、クエン酸ガリウム（67Ga）、インジウム（111In）標識白血球が挙げられる。また、甲状腺癌およびその転移巣を治療する放射性医薬品としては、ヨウ化ナトリウム（131I）が、低悪性度非ホジキンリンパ腫やマントル細胞リンパ腫の治療用としては、イブリツモマブーチウキセタン－90Yのような限られた種類の悪性腫瘍を治療する放射性医薬品が挙げられる。しかしながら、一般の悪性腫瘍を治療する放射性医薬品はまだない。一般の悪性腫瘍を診断する放射性医薬品となる可能性がある画像診断用薬として、 抗癌剤であるブレオマイシン（非特許文献１）に、放射性コバルト（57Co）を結合させた57Co-ブレオマイシンが合成され、悪性腫瘍組織の陽性描画剤の可能性が報告された（非特許文献２－４）。
　従来技術の問題点として、以下が挙げられる。
i) 従来のクエン酸ガリウム（67Ga）を使用する場合は、悪性腫瘍病巣以外にも肝臓、腎臓、骨などにも多く集積し、悪性腫瘍の検出に障害となった（非特許文献５）。67Gaには296keV、184keV、93keVの３種のガンマー線があり、画像作成用の計測が容易でなかったが、その点123I（160keVのガンマー線が１種類）は計測が容易で良質の画像を作成することができる。67Gaは物理的半減期が78時間と長いので、患者の被曝が多くなるが、123Iは物理的半減期が13時間なので、患者の被曝線量が減少し、患者に有利である。
ii)塩化タリウム（201Tl）を使用する場合は、悪性腫瘍病巣への集積よりもさらに多く集積する正常臓器が多いので、悪性腫瘍病巣を描画することが困難である。さらに塩化タリウム（201Tl）では69～80keVの水銀のK-X線を測定するので、エネルギーが弱く、SPECTで描画する場合に画像が不鮮明になる。201Tlの物理的半減期は74時間と長いが、123Iは上記のごとく良質の画像作成が可能であり、かつ物理的半減期が短いので、患者の被曝線量が減少し、患者に有利である。
iii)抗癌剤であるブレオマイシンに放射性コバルト（57Co）を結合させた57Co-ブレオマイシンは、正常臓器（腎臓を除く）に比較して、悪性腫瘍組織に多量に集積することが併せて報告された（非特許文献２－４）。そこで、悪性腫瘍組織の陽性描画剤として試験的に使用されたが、57Coの物理的半減期が270日と長いために、環境の放射性汚染と人体の被曝の点から、当時の厚生省から放射性医薬品として許可されなかった。
　従来のクエン酸ガリウム（67Ga）を使用する場合は、炎症組織以外にも肝臓、腎臓、骨などに多く集積し、炎症組織の検出に障害となる。上述のごとく67Gaは画像描画用の測定については、123Iより困難であると同時に、患者の被曝線量が多くなる欠点がある。インジウム（111In）標識白血球による炎症部位の描画には、患者から採取した白血球をインジウム（111In）－オキシンで標識して、その患者に投与するものであり、煩雑で使用が非常に制限される。
　コバルトと結合したブレオマイシンが強い悪性腫瘍集積性を持つことは、上述の如く周知の事実である。上述の如く、57Coの物理的半減期が270日と長いために、Co-ブレオマイシンの悪性腫瘍集積性に関する生物学的性質を変化させることなく、Co-ブレオマイシンに放射性同位元素（radioisotope：RI）を結合させて悪性腫瘍に集積させ、悪性腫瘍の診断および治療を行なうことについて、検討がなされている。 
　Co-ブレオマイシンをRIで標識する方法として、以下の二種の方法が考えられる。第１の方法は、ブレオマイシンにRI（またはその試薬）を結合したRI標識ブレオマイシンを合成し、次にコバルトを結合させてRI標識Co-ブレオマイシンを合成する方法である。第２の方法は、Co-ブレオマイシンを前もって合成し、次にRI（またはその試薬）を結合させてRI標識Co-ブレオマイシンを合成する方法である。第１の方法として、まずはじめにブレオマイシンを放射性ヨウ素イオン131I-、125I-ボルトンハンター(Bolton-Hunter)試薬、125I-PIB試薬で各々標識したところ、この３種類のRIともに高収率でブレオマイシンに結合し、RI標識ブレオマイシンを製造することができる。このRI標識ブレオマイシンに塩化コバルト（CoCl2）を作用させ、RI標識Co-ブレオマイシンの製造を試みたが、この３種のいずれにもコバルトは結合しなかった。第２の方法として、従来の方法で作製したCo-ブレオマイシンを、上記３種のRIで標識を試みたところ、131I-では標識できず、125I-ボルトンハンター試薬、125I-PIB試薬では低い収率ながら、Co-ブレオマイシンを標識することができる。少量ながら得られた125I-ボルトンハンター試薬などで標識されたCo-ブレオマイシンをエ－ルリッヒ癌皮下移植マウスで悪性腫瘍集積性を調べたが、強い悪性腫瘍集積性は認められない。
Natural and artificial bleomycins: Chemistry and antitumour activities. Pure Appl. Chem. 28 665-680 (1971) 悪性腫瘍親和性RI化合物-RI標識Bleomycinについて-核医学８巻４号、296（1971） The Tumor Specific Localizing Agents for Radioisotope Image - The Preparation o f Labeled Bleomycin and Their Distributions in the Tumor Bearing Mice, Radioisotopes 21 118-120 (1972) Tumor Scanning with 57Co-Bleomycin, Radioisotopes 21 436-438 (1972) Tumour affinity of 203Pb-chloride: comparison with 67Ga-citrate and 201T1-chloride, Nuclear Medicine Communications 15 39-46 (1994)
　本発明は、新規なヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を提供することを課題とする。また本発明は、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体、例えばヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の悪性腫瘍集積性に関する生物学的性質が、従来よりも優れた悪性腫瘍に集積可能な金属錯体を提供することを課題とする。さらに、本発明は当該ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物の、及びヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体の合成方法を提供することを課題とする。さらには、当該新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を用いることを特徴とする、悪性腫瘍または炎症組織の検査薬および検査方法、並びに悪性腫瘍治療薬を提供することを課題とする。
　本発明者らは、研究を重ねた結果、ヨードベンジルアルコールとヨウ素を出発原料として合成したヨードベンジルヨウ化物を、ブレオマイシンの末端アミノ基に付加させることで、悪性腫瘍集積性を有するヨードベンジル-Co-ブレオマイシンなどの金属錯体を作製するための新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を合成することに成功し、本発明を完成した。
　即ち本発明は、以下よりなる。
１．一般式(I)に示すブレオマイシンのＲにおいて、ヨウ素原子で置換されたベンジル基を含むことを特徴とする、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
 ２．前記一般式(I)におけるＲが、式(II)に示す構造からなる、前項１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 ３．式(II)に示すベンジル基のヨウ素原子が、メタ位に位置する、前項２に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
４．置換されたヨウ素原子が、123I、124I、125Iまたは131Iから選択されるいずれかである前項１～３のいずれか１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
５．前項１～４のいずれか１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に、コバルトが結合してなる、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物。
６．ヨードベンジルヨウ化物を、ブレオマイシンの末端アミノ基に付加する工程を含む、前項５に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成方法。
７．以下の工程を含む、前項６に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成方法：
１）ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程；
２）ブレオマイシンにコバルトを加え、Co-ブレオマイシンを合成する工程；
３）上記作製したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したCo-ブレオマイシンを加え、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成する工程。
８．以下の工程を含む、前項６に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成方法：
１）’ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程；
２）’上記作製したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したブレオマイシンを加え、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を合成する工程；
３）’上記作製したヨードベンジル－ブレオマイシン化合物にコバルトを加え、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成する工程。
９．ブレオマイシンが、ブレオマイシンデメチルA2である、前項６～８のいずれか１に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成方法。
１０．前項５に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を含む、悪性腫瘍または炎症組織の検査薬。
１１．前項５に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を有効成分として含む悪性腫瘍治療薬。
１２．前項５に記載のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を用いることを特徴とする悪性腫瘍または炎症組織の検査方法。
　本発明の新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物によれば、容易に本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成することができる。本発明の当該ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物は種々の金属原子と錯体を作ることができ、これらの錯体は医学利用ができる可能性がある。有用な錯体を作る可能性のある金属原子としてコバルトの他、銅、鉄、ロジウム、ルテニウム、錫、マンガン、ニッケル、パラジウム、クロム、アンチモン、バナジウム等が考えられる。本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、従来のCo-ブレオマイシンによる悪性腫瘍集積性を有し、123Iまたは 124Iで標識すれば、標識されたヨードにより鮮明に描画することができる。また、123Iの物理的半減期は13時間であり、124Iの物理的半減期は4.2日なので、放射性コバルト（57Co）の物理的半減期が270日であった57Co-ブレオマイシンに比べ、本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物では、患者の被曝線量を減少させることができ、かつ環境の放射能汚染を減少させることができる。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物で悪性腫瘍病巣や炎症組織を描画（SPECTによる）すれば、従来のクエン酸ガリウム（67Ga）や塩化タリウム（201Tl）を使用する場合よりもはるかに鮮明に描画でき、かつ患者の被曝線量が減少することができる。現在PET（陽電子放出断層像）検査に使用されている18Fの物理的半減期は110分であることから、18Fを標識物質とするPET検査用化合物の場合は、要時合成することが必要とされる。本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の場合は、例えば124Iの物理的半減期の長さが4.2日であることから、使用日以前に合成して、長距離の輸送が可能であり、医療経済上利点がある。
　また、ベータ線を放射する131Iで標識したヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を悪性腫瘍組織に集積させて、ベータ線で悪性腫瘍細胞を照射すれば、悪性腫瘍の治療効果が期待される。ベータ線を放射する核種で標識した化合物で、一般の悪性腫瘍へ多量に集積しうる化合物の発見はこの化合物が最初である。
ヨードベンジルヨウ化物の合成スキームを示す図である。 ブレオマイシンデメチルA2またはコバルト－ブレオマイシンデメチルA2の末端アミノ基部位に、ヨードベンジルヨウ化物を付加するための合成スキームを示す図である。 3-125I-ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の薄層クロマトグラフィーのオートラジオグラムとアクチグラムを示す図である。（実施例１） 3-125I-ヨードベンジルヨウ化物とCo-ブレオマイシンデメチルA2の反応後の薄層クロマトグラフィーのアクチグラムを示す図である。（実施例１） 3-125I-ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン3Aの薄層クロマトグラフィーのオートラジオグラムとアクチグラムを示す図である。（実施例１） 3-125I-ヨードベンジル-ブレオマイシンの薄層クロマトグラフィーのオートラジオグラムとアクチグラムを示す図である。（実施例２）
　本発明は、新規なヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に関する。また、本発明は例えばヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物などのヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と各種金属原子との金属錯体に関する。
　まず初めに、ブレオマイシンとヨード化合物の結合体であるヨードベンジル－ブレオマイシン化合物について、説明する。ブレオマイシンは、下記一般式(I)に示す構造からなる。ここにおいて、各種ブレオマイシンは表１に示すＲの構造により特定される。本明細書において、表１に示すＲの構造が、例えばヨード化合物が結合するなどにより修飾されている場合を、「ブレオマイシン化合物」といい、単に「ブレオマイシン」という場合と区別して用いられる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　本発明のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物は、一般式(I)に示すブレオマイシンのＲ（末端アミノ基）において、ヨウ素原子で置換されたベンジル基を含むことを特徴とする。当該ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物は、具体的には前記一般式(I)におけるＲが式(II)に示す構造からなる。式(II)においてヨウ素原子の位置は特に限定されず、メタ位、パラ位、オルト位の何れであってもよいが、メタ位に位置するのが最も好適である。上記において、置換されたヨウ素原子は、放射性であっても良いし、非放射性であってもよい。放射性ヨウ素原子の場合は、123I、124I、125Iまたは131Iから選択されるいずれかであればよく、画像診断用には123I、124Iが好適であり、悪性腫瘍治療用には131Iが好適であり、基礎研究用には125Iが好適である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　本発明は、上述のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に、さらにコバルト、銅、鉄、ロジウム、ルテニウム、錫、マンガン、ニッケル、パラジウム、クロム、アンチモン、バナジウム等から選択されるいずれかの金属原子との金属錯体にも及ぶ。本発明のヨードベンジル-（金属原子）-ブレオマイシン化合物は、上述により合成したヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に、従来の（金属原子）-ブレオマイシンの合成方法に準じて金属原子、例えばコバルトを結合し、合成することもできる。また、本発明のヨードベンジル-（金属原子）-ブレオマイシン化合物は、自体公知の方法で合成された（金属原子）-ブレオマイシンの末端アミノ基にヨードベンジルヨウ化物を加えて反応させることにより、合成することもできる。本発明のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物と金属原子との金属錯体として、最も好適にはヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物が挙げられる。
　ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、上述により合成したヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に、従来のCo-ブレオマイシンの合成方法に準じてコバルトを結合し、合成することもできる。また、自体公知の方法で合成されたCo-ブレオマイシンの末端アミノ基にヨードベンジルヨウ化物を加えて反応させることにより、本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成することもできる。
　以下、詳細に本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成方法について、説明する。本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、ブレオマイシンまたはCo-ブレオマイシンの末端アミノ基に、ヨードベンジルヨウ化物を付加する工程を含む方法により合成することができる。本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成するには、一般式(I)および表１に示す各種ブレオマイシンのうち、特にブレオマイシンデメチルA2を用いるのが好適である。具体的には、ブレオマイシンデメチルA2またはCo-ブレオマイシンデメチルA2にヨードベンジルヨウ化物を付加し、合成することができる。ヨードベンジルヨウ化物を付加する場合、ブレオマイシンには、コバルトを予め結合させていても良いし、結合していないものであってもよい。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、具体的には、以下の１）～３）の工程を含む方法により合成することができる。以下において、１）または２）の工程は、いずれが先であっても良い。
１）ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程。
２）ブレオマイシンにコバルトを加え、Co-ブレオマイシンを合成する工程。
３）上記合成したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したCo-ブレオマイシンを加え、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成する工程。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、以下の工程１）’～３）’の工程を含む合成方法によっても作製することができる。
１）’ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程。
２）’上記作製したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したブレオマイシンを加えて、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を合成する工程。
３）’上記作製したヨードベンジル－ブレオマイシン化合物にコバルトを加え、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を合成する工程。
　ヨードベンジルヨウ化物は、図１の合成スキームに基づき、ヨードベンジルアルコールとヨウ素イオンを出発原料として合成することができる。図１では、ヨードベンジルアルコールに付加するヨウ素イオンとして125I-を例示しているが、このほか、123I-、124I-または131I-の放射性ヨウ素イオンであってもよいし、非放射性のヨウ素イオンであってもよい。また、合成されたヨードベンジルヨウ化物のベンゼン環のヨウ素原子は、図１ではメタ位に位置するが、パラ位またはオルト位に位置していても良い。このようにして合成されたヨードベンジルヨウ化物は、例えば、125Iがメタ位に位置するヨードベンジルヨウ化物を3-125I-ヨードベンジルヨウ化物（3-125I-iodobenzyliodide：以下「3-125I-BzI」）と示すことができ、オルト位に位置するものは2-125I-BzI、パラ位に位置するものは4-125I-BzIのように示すことができる。
　上記３）のCo-ブレオマイシン、または上記２）’のブレオマイシンに、ヨードベンジルヨウ化物を付加する方法、即ち、Co-ブレオマイシンまたはブレオマイシンの末端アミノ基にヨードベンジルヨウ化物を付加する工程は、図２に示す合成スキームに基づくことができる。
　上記２）のブレオマイシン、または上記３）’のヨードベンジルブレオマイシン化合物にコバルトを付加する方法、例えばCoCl2を加える方法は、自体公知の方法に従うことができる。具体的には、例えば非特許文献２－４の記載に基づくことができる。
　本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、従来のCo-ブレオマイシンが有する悪性腫瘍集積性を保持し、標識されたヨードにより鮮明に描画することができる。また、放射性ヨウ素原子のうち、123Iの物理的半減期は13時間であり、124Iの物理的半減期は4.2日であるので、放射性コバルト（57Co）の物理的半減期が270日であった57Co-ブレオマイシンに比べ、本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物では、患者の被曝線量の減少と周囲の放射能汚染の減少をさせることができる。
　本発明の123Iで標識したヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物で悪性腫瘍病巣や炎症組織を描画（SPECTによる）すれば、従来のクエン酸ガリウム（67Ga）や塩化タリウム（201Tl）を使用する場合よりもはるかに鮮明に描画でき、かつ患者の被曝線量が減少することができる。また、PET検査に使用されている18Fの物理的半減期は110分であることから、18Fを標識物質とする場合は、使用時に調製し、限られた時間内に使用することが必要とされるが、本発明の124Iで標識した新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の場合は、その物理的半減期の長さから、使用日以前に合成して、長距離の輸送が可能であり、医療経済上利点がある。
　ベータ線を放射する131Iで標識したヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を悪性腫瘍組織に集積させて、ベータ線で悪性腫瘍細胞を照射すれば、悪性腫瘍の治療効果が期待される。ベータ線を放射する核種で標識した化合物で、一般の悪性腫瘍へ多量に集積する化合物の発見はこの化合物が最初である。
　本発明は、ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の製造方法、当該ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を含む悪性腫瘍または炎症組織の検査薬、また当該化合物を有効成分として含む悪性腫瘍治療薬、さらには当該化合物を用いる悪性腫瘍または炎症組織の検査方法にも及ぶ。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を有効成分として含む悪性腫瘍治療薬の場合、その投与量は特に限定されない。例えば、当該化合物を有効成分として含む悪性腫瘍治療薬と自体公知の治療薬とを併用する場合、あるいは、自体公知の治療薬を併用せずに、本発明の悪性腫瘍治療薬を投与する場合など、あらゆる投与方法において適宜投与量が容易に選択できる。投与量は、患者の疾患、体重、年齢、性別等により適宜設定される。例えば、静脈注射する場合には有効成分を成人一日あたり0.01～1000mg程度の範囲で用いることができる。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を有効成分として含む、悪性腫瘍治療薬、および悪性腫瘍または炎症組織の検査薬の場合には、当該化合物と薬理学的および製剤学的に許容しうる担体または添加物とともに用いることができる。そのような担体または添加物としては、リン酸緩衝液等の適当な緩衝剤、生理食塩水等の等張剤等のほか、例えば溶解剤若しくは溶解補助剤、等張化剤、pH調整剤、安定化剤、および粘着剤等を挙げることができ、安定化剤としては、例えばアスコルビン酸などが挙げられ、pH調整剤としては、塩酸、水酸化ナトリウムなどが挙げられる。
　本発明のヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を含む検査薬を画像診断用薬として用いることで、悪性腫瘍または炎症組織を検査することができる。当該化合物が悪性腫瘍に特異的に取り込まれる性質を有することから、PETやSPECT等の核医学検査技術を用いて当該化合物から放出される放射線を検出することにより、悪性腫瘍のイメージングが可能である。本発明の化合物で検査しうる悪性腫瘍は、当該化合物が特異的に集積しうる悪性腫瘍であれば特に制限されず、例えば食道、胃、膵臓、大腸、肺、脳、卵巣、乳房、皮膚、子宮などに存在する悪性腫瘍が挙げられる。同様に、当該化合物が炎症組織に特異的に取り込まれる性質を有することから、炎症組織についても画像診断することができる。
　以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明は下記の実施例の範囲に限定されることはない。
（実施例１）ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の合成
１）合成の概要
　本実施例では、一般式(I)に示すブレオマイシンのうちブレオマイシンデメチルA2（bleomycin demethyl A2, 以下「BLM-d-A2」）に、コバルトを結合させたコバルト－ブレオマイシンデメチルA2（Co-bleomycin demethyl A2, 以下「Co-BLM-d-A2」）を作製した。次にCo-BLM-d-A2の末端アミノ基に、図１および図２に示すごとく、3-ヨードベンジルアルコール(3-iodobenzyl alcohol)と放射性ヨウ素イオン125I-を出発原料として製造した3-125I-ヨードベンジルヨウ化物(3-125I-BzI)を付加させて、3-125I-ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物(3-125I-Bz-Co-BLM)を合成した。一般式(I)のＲが、以下の式(III)に示す3-125I-Bz-Co-BLMは推定構造である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　3-125I-BzI（3.3μM/20μlの3-ヨードベンジルアルコールから出発）とCo-BLM-d-A2の反応で生成した3-125I-Bz-Co-BLMを、シリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離した（Rf 0.34～0.41）。この分離物の薄層クロマトグラフィーのオートラジオグラムとアクチグラムを図３に示した。これらのオートラジオグラムおよびアクチグラムの作製にはフルオロ・イメージアナライザーTM FLA-7000（富士写真フィルム株式会社製）を使用した。
　出発原料の3-ヨードベンジルアルコールを0.33μMに減少させ、比放射能を高めて合成した3-125I-BzIとCo-BLM-d-A2の反応生成物をさらに詳しく観察したところ、図４に示すごとく生成した3-125I-Bz-Co-BLMは、3A（Rf 0.39～0.48）、3B（Rf 0.35～0.43）のように２つに分かれることが分かった。そこで3A、3Bを別々にシリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離して、単一の3-125I-Bz-Co-BLM 3Aと3-125I-Bz-Co-BLM 3Bを得た。
　図５には分離した3Aのシリカゲル薄層クロマトグラフィーのアクチグラムとオートラジオグラムの例を示した。
　出発原料の3-ヨードベンジルアルコールの代わりに、2-ヨードベンジルアルコール、4-ヨードベンジルアルコールを使用して上記と同様の方法で、各々2-125I-Bz-Co-BLM 2A（Rf 0.42～0.47）、2B（Rf 0.36～0.42）、4-125I-Bz-Co-BLM 4A（Rf 0.43～0.50）、4B（Rf 0.34～0.45）を得た。これらの3A、3B、2A、2B、4Aおよび4Bを動物実験に使用した。
２）合成方法
(i) BLM-d-A2: ブレオマイシンA2硫酸塩を、減圧下に、100℃で約80時間加熱して製造した。
(ii) Co-BLM-d-A2: BLM-d-A2の水溶液にモル数で約３倍量のCoCl2を加え、約pH6.0、6.5、7.0の３種を調製後、凍結乾燥して製造した。
(iii) 3-125I-ヨードベンジルヨウ化物(3-125I-iodobenzyliodide, 以下「3-125I-BzI」)、2-125I-ヨードベンジルヨウ化物(2-125I-iodobenzyliodide, 以下「2-125I-BzI」)および4-125I-ヨードベンジルヨウ化物(4-125I-iodobenzyliodide, 以下「4-125I-BzI」)の合成
　3-ヨードベンジルアルコール(3.3μM/20μl)、Na125I溶液(5 MBq/100μl)、硫酸銅溶液(100mg/ml)30μl、2,5-ジヒドロキシ安息香酸溶液(0.25mM/ml)80μl、および塩化第一スズ二水和物4mgをクエン酸溶液（1mM/ml）20μlに溶かしたものを試験管に加えて攪拌しながら、沸騰水浴中で60分間加熱した。
　次に、この反応で生成した3-125I-ヨードベンジルアルコール(3-125I-iodobenzylalcohol)をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水後、四ヨウ化二リンで3-125I-BzIとした（Iwata R., Pascali C., Bogni A., Horvath G., Kovacs Z., Yanai K., Ido T. : A new convenient method for the preparation of 4-[18F]fluorobenzyl halides . 
Applied Radiation and Isotopes 52 87-92 (2000)）。3-125I-BzIを含むこのジクロロメタン溶液を水洗し、ジクロロメタン層を分取後、硫酸ナトリウムで脱水した。分取したジクロロメタン層からこの溶媒を溜去して3-125I-BzIを得た。
　比放射能を高めるために、3-ヨードベンジルアルコールを0.33μMに減少し、その他は上記と全く同様に行ない、高比放射能の3-125I-BzIを得た。3-ヨードベンジルアルコールの代わりに、2-ヨードベンジルアルコールおよび4-ヨードベンジルアルコールを使用して同様に行い、各々2-125I-BzIおよび4-125I-BzIを得た。
(iv) 3-125I-Bz-Co-BLMの合成方法
　上記の3-125I-BzIを加えた試験管に、上記のCo-BLM-d-A2 1.5 mg（pH 6.0、6.5、7.0のいずれのpHで調整したものも使用可能であった）とメタノール 1 mlを加えて溶かし、約80℃で30分間加熱した。この反応で得られた3-125I-Bz-Co-BLMを10％酢酸アンモニウム：メタノール（１：１）を展開溶媒とするシリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離した。
　3-125I-BzIの代わりに、2-125I-BzIおよび4-125I-BzIを使用して、3-125I-BzIの場合と同様に行った。
３）3-125I-Bz-Co-BLMの合成結果
　シリカゲル薄層クロマトグラフィーで展開後、そのプレートのシリカゲル層から3-125I-Bz-Co-BLM（3Aと3Bに未分離、Rf 0.34～0.41）を溶媒（メタノール：生理食塩水＝１：１）で抽出分取した（図３）。5MBqのNa125Iを使用した場合に0.5MBq～0.75MBqの3-125I-Bz-Co-BLM（3Aと3Bに未分離）が得られた。放射化学的に極めて安定で、放射化学的純度98％以上であり、３週間後でも不純物はほとんど認められなかった。
　高比放射能3-125I-BzIから合成した3-125I-Bz-Co-BLMのシリカゲル薄層クロマトグラフィーのアクチグラムを図４に示した。図に示したごとく3-125I-Bz-Co-BLMは3A（Rf 0.39～0.48）、3B（Rf 0.35～0.43）の２つのピークを示した。3A、3Bを同じ溶媒（メタノール：生理食塩水＝１：１）で別々に抽出した。5 MBqのNa125Iを使用した場合、3A（ピーク3Aの3-125I-Bz-Co-BLM）約55 kBq、3B（ピーク3Bの3-125I-Bz-Co-BLM）約70 kBqを得た。得られた3Aを10％酢酸アンモニウム：メタノール（１：１）を展開溶媒とするシリカゲル薄層クロマトグラフィーで展開したところ、図５に示す如く放射化学的純度98％以上の3Aが得られた。3Bについても同様に98％以上の純度の高いものが得られた。これら3A、3Bは放射化学的に安定で、３週間後でもほとんど分解物は認められなかったが、3Aから3Bへの移行、またはその逆への移行があるものと推定された。
　同じ方法で、2-125I-BzIからは2-125I-Bz-Co-BLM 2A(Rf 0.42～0.47)約85kBqと2B（Rf 0.36～0.42）約75kBqを得た。4-125I-BzIからは4-125I-Bz-Co-BLM 4A（Rf 0.43～0.50）と4B（Rf 0.34～0.45）ともに約60kBqを得た。これらの化合物も放射化学的純度98％以上の物が得られ、かつ放射化学的に安定で、３週間後でもほとんど分解物は認められなかった。2Aと2B、4Aと4Bの間にも、3Aと3Bの場合と同様の関係があるものと推定された。
４）小括
　3-ヨードベンジルアルコールを3.3μM使用して合成を始めた場合は、Na125Iの使用量に対する3-125I-BzIの放射化学的収率が50％以上であり、3-125I-Bz-Co-BLMの収率は10～15％であった。比放射能を高めるために、3-ヨードベンジルアルコールを0.33μM使用した場合は3-125I-ヨードベンジルアルコールの収率が低く、そのため3-125I-BzIの収率も低くなり、3-125I-Bz-Co-BLM 3A（1.1％）、3B（1.4％）の収率も低くなった。2-125I-Bz-Co-BLM 2A（1.7％）、2B（1.5％）および4-125I-Bz-Co-BLM 4A（1.2％）、4B（1.2％）についても同様であった。これらの化合物は放射化学的に非常に安定であった。
（実験例１－１）各種125I-Bz-Co-BLMの腫瘍集積性
　本実験例では、担癌動物による各種125I-Bz-Co-BLMの悪性腫瘍集積性を確認した。
１）各種125I-Bz-Co-BLM注射液と担癌マウス
　実施例１で得た各種125I-Bz-Co-BLMを生理食塩水に溶かし、以下の７種類の注射用の生理食塩水溶液を調製した。
3-125I-Bz-Co-BLM（3Aと3Bに未分離）生理食塩水溶液（0.3ml中の含有量20μg～60μg、約10ｋBq）
3-125I-Bz-Co-BLM 3A生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5ｋBq）
3-125I-Bz-Co-BLM 3B生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5ｋBq）
2-125I-Bz-Co-BLM 2A生理食塩水溶液（同40μg～60μg、約5ｋBq）
2-125I-Bz-Co-BLM 2B生理食塩水溶液（同40μg～60μg、約5ｋBq）
4-125I-Bz-Co-BLM 4A生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5ｋBq）
4-125I-Bz-Co-BLM 4B生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5ｋBq）
　担癌マウス：日本クレア（株）から購入した雄のscidマウス（８週齢）の大腿皮下にエールリッヒ腹水癌細胞（約4×107個）を移植し、その６日後の腫瘍結節が約1 cmの大きさになったときに実験に使用した。
２）担癌マウスにおける実験方法
　上記担癌マウスに、尾静脈より上記の3-125I-Bz-Co-BLM（3Aと3B未分離）を含む生理食塩水溶液（約10 kBq、0.3 ml）を注射し、1 時間、3 時間、6 時間、12時間および24時間後に各々５匹ずつエーテル麻酔下に屠殺して、悪性腫瘍組織および主要な臓器組織を摘出した。摘出後、ただちにこれら組織の一部の重量を測定後、放射能をウエル型シンチレーションカウンターで測定した。各組織の各3-125I-Bz-Co-BLMの取込率は、注射量を100％とした場合の各組織1 gへの取込率（％/g）で表した。マウスの体重にバラツキがあるので、結果を比較しやすくするため、計算で体重を100 gに統一した（取込率（％/g）×マウス体重（g）÷100の式で計算した）。
　3-125I-Bz-Co-BLM 3Aおよび3B、 2-125I-Bz-Co-BLM 2Aおよび2B、4-125I-Bz-Co-BLM 4Aおよび4Bの各生理食塩水溶液については、上記担癌マウスに静注1 時間後および3 時間後に５匹ずつエーテル麻酔下に屠殺して、その後は3-125I-Bz-Co-BLMの場合と同様に処理した。
３）担癌マウスにおける各種125I-Bz-Co-BLMの体内分布の結果
　表２に担癌マウスにおける3-125I-Bz-Co-BLM（3Aと3B未分離）の投与1 時間、3 時間、6 時間、12時間および24時間後の各組織1 g（体重を100 gに統一した場合）あたりへの取込率を示した。脳および骨への取込みは非常に少なく、正確に測定することが困難であったので、表２に示さなかった。
　悪性腫瘍組織への取込率は1 時間後が0.35％/gで、時間が経過すると減少した。正常臓器組織への取込率も1 時間以後ほとんどの組織で経時的に減少した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　表３に単位重量当たりの悪性腫瘍組織／各臓器組織―取込比を示した。投与1 時間後では、1.0以下（悪性腫瘍組織よりも集積が多い）の臓器が血液、肝臓、腎臓であったが、3 時間以後では肝臓と腎臓の２つの臓器となった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　 担癌マウスにおける3-125I-Bz-Co-BLM 3Aおよび3Bの体内分布の結果を表４および表５に示した。
　 表４には投与1 時間後および3 時間後の各組織1 g（体重を100gに統一した場合）あたりへの取込率を示した。悪性腫瘍組織の取込率は3Aの1 時間後、3 時間後で各々0.319％/g、0.280％/g、3Bの1 時間後、3 時間後で各々0.331％/g、0.259％/gであった。腎臓への集積が非常に多く、肝臓にも多く集積した。3Aと3Bの間に大きな差はないが、すべての臓器で1 時間後よりも3 時間後の方が小さかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　表５に単位重量当たりの悪性腫瘍組織／各臓器組織－取込比を示した。3A、3Bとも投与1 時間後では1.0以下（悪性腫瘍組織よりも集積が多い）の臓器が血液、肝臓、腎臓、肺であったが、3 時間後では肝臓と腎臓の二種の臓器となった。この結果から投与3 時間後には腎臓、肝臓を除けば3A、3Bとも正常臓器組織に比較して悪性腫瘍組織には十分多く集積していることがわかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　担癌マウスにおける4-125I-Bz-Co-BLM 4Aおよび4Bの体内分布の結果を表６および表７に示した。全体的には3-125I-Bz-Co-BLM 3A、3Bの場合に類似しているが、悪性腫瘍の陽性描画剤（臨床的に使用する場合は125Iを123Iまたは124Iに変える）として考えた場合には3-125I-Bz-Co-BLM よりも劣っていた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　4-125I-Bz-Co-BLM 4Aおよび4Bと同様に2-125I-Bz-Co-BLM 2Aおよび2Bの結果を表８および表９に示した。この化合物は悪性腫瘍の陽性描画剤（臨床的に使用する場合は125Iを123Iまたは124Iに変える）として考えた場合には4-125I-Bz-Co-BLM よりもさらに劣る結果であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
４）悪性腫瘍陽性描画剤としての評価
　ベンジル基のベンゼン環の２番、３番、または４番の炭素に放射性ヨード原子を結合させた125I-Bz-Co-BLMの悪性腫瘍陽性描画剤（臨床的に使用する場合SPECT用には125Iを123I、PET用には124Iに変える）としての可能性を担癌マウスでテストした結果、これらいずれの化合物もその可能性があると考えられた。その中で、今回の動物実験では３番の炭素に放射性ヨード原子を結合させた3-125I-Bz-Co-BLM 3A、3Bがより適していると考えられた。3Aと3Bは本質的に同じ性質を示すものと考えられ、4Aと4B、2Aと2Bも同様であると考えられた。
（実験例１－２）各種125I-Bz-Co-BLMの炎症組織集積性
　本実験例では、炎症惹起動物による各種125I-Bz-Co-BLMの炎症組織集積性の確認を行なった。
１）各種125I-Bz-Co-BLM注射液と炎症惹起マウス
　実施例１で得た各種125I-Bz-Co-BLMを生理食塩水に溶かし、以下６種類の注射用の生理食塩水溶液とした。
3-125I-Bz-Co-BLM 3A生理食塩水溶液（0.3ml中の含有量20μg～30μg、約5 kBq）
3-125I-Bz-Co-BLM 3B生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5 kBq）
2-125I-Bz-Co-BLM 2A生理食塩水溶液（同40μg～60μg、約5 kBq）
2-125I-Bz-Co-BLM 2B生理食塩水溶液（同40μg～60μg、約5 kBq）
4-125I-Bz-Co-BLM 4A生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5 kBq）
4-125I-Bz-Co-BLM 4B生理食塩水溶液（同20μg～30μg、約5 kBq）
　炎症惹起マウス：日本SLC(株)から購入した雄のddY系マウス（５週齢）の背部皮下にテレビン油0.2ml注入し、その５日後に実験に使用した。
２）炎症惹起マウスにおける実験方法
　上記の3-125I-Bz-Co-BLM 3A生理食塩水溶液（約5 kBq、0.3 ml）を上記炎症惹起マウス５匹に尾静脈より注射し、3 時間後にエーテル麻酔下に屠殺して、炎症組織および主要な臓器組織を摘出した。その後は実験例１－１の２）に記載の担癌マウスと同手法により処理して、組織１ｇへの取込率（％/g）を求めた。3-125I-Bz-Co-BLM 3B、 2-125I-Bz-Co-BLM 2Aおよび2B、4-125I-Bz-Co-BLM 4Aおよび4Bについても同様に行った。
３）炎症惹起マウスにおける各種125I-Bz-Co-BLMの体内分布の結果
　 結果は表１０、表１１および表１２に示した。静注3 時間後では炎症組織への取込率は大きかった。その値は腎臓への取込率よりは小さいが、3A、3Bでは肝臓取込率に匹敵する値であり、4A、4Bでも同様であった。2A、2Bでは腎臓取込率、肝臓取込率についで大きかった。
４）炎症組織陽性描画剤としての評価
　125I-Bz-Co-BLMの各3A、3B、4A、4B、2Aおよび2Bともに炎症組織にも取り込まれ、その取込率は悪性腫瘍組織よりも大きかった。炎症組織に多く取り込まれることは125Iに代えて123Iまたは124Iで標識するならば、炎症組織の描画剤として使用できる可能性があることを示すものである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
（実施例２）ヨードベンジル-ブレオマイシン化合物の合成
１）合成の概要
　本実施例では、3-125I-ヨードベンジル-ブレオマイシン化合物(3-125I-Bz-BLM)の合成について説明する。一般式(I)に示すブレオマイシンのうちBLM-d-A2の末端アミノ基に、図１および図２に示すごとく、3-ヨードベンジルアルコール(3-iodobenzyl alcohol)と放射性ヨウ素イオン125I-を出発原料として製造した3-125I-ヨードベンジルヨウ化物(3-125I-BzI)を付加させて、3-125I-ヨードベンジル-ブレオマイシン化合物(3-125I-Bz-BLM)を合成した。一般式(I)のＲが、以下の式(III)に示す3-125I-Bz-BLMは推定構造である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
  
　3-125I-BzI（3.3μM/20μlの3-ヨードベンジルアルコールから出発）とBLM-d-A2の反応で生成した3-125I-Bz-BLMを、シリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離した（Rf 0.40～0.44）。この分離物の薄層クロマトグラフィーのオートラジオグラムおよびアクチグラムを図６に示した。このオートラジオグラムおよびアクチグラムの作製にはフルオロ・イメージアナライザーTM FLA-7000（富士写真フィルム株式会社製）を使用した。
２）合成方法
(i) BLM-d-A2: ブレオマイシンA2硫酸塩を、減圧下に、100℃で約80時間加熱して製造した。
(ii) 3-125I-ヨードベンジルヨウ化物（以下「3-125I-BzI」）の合成
　3-ヨードベンジルアルコール(3.3μM/20μl)、Na125I溶液(2 MBq/100μl)、硫酸銅溶液(100mg/ml)30μl、2,5-ジヒドロキシ安息香酸溶液(0.25mM/ml)80μl、および塩化第一スズ二水和物4mgをクエン酸溶液（1mM/ml）20μlに溶かしたものを試験管に加えて攪拌しながら、沸騰水浴中で60分間加熱した。
　次に、この反応で生成した3-125I-ヨードベンジルアルコール(3-125I-iodobenzylalcohol)をジクロロメタンで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水後、四ヨウ化二リンで3-125I-BzIとした（Iwata R., Pascali C., Bogni A., Horvath G., Kovacs Z., Yanai K., Ido T. : A new convenient method for the preparation of 4-[18F]fluorobenzyl halides. Applied Radiation and Isotopes 52 87-92 (2000)）。3-125I-BzIを含むこのジクロロメタン溶液を水洗し、ジクロロメタン層を分取後、硫酸ナトリウムで脱水した。分取したジクロロメタン層からこの溶媒を溜去して3-125I-BzIを得た。
(iii) 3-125I-Bz-BLMの合成方法
　上記の3-125I-BzIを加えた試験管に、上記のBLM-d-A2 2.1 mgとメタノール 1 mlを加えて溶かし、約80℃で30分間加熱した。この反応で得られた3-125I-Bz-BLMを10％酢酸アンモニウム：メタノール（１：１）を展開溶媒とするシリカゲル薄層クロマトグラフィーで分離した。
３）3-125I-Bz-BLMの合成結果
　シリカゲル薄層クロマトグラフィーで展開後、そのプレートのシリカゲル層から3-125I-Bz-BLM（Rf 0.40～0.44）を溶媒（メタノール：生理食塩水＝１：１）で抽出分取した。2 MBqのNa125Iを使用した場合に約0.2 MBqの3-125I-Bz-BLMが得られた。放射化学的純度は約95％であったが、放射化学的には安定であった。
４）3-125I-Bz-Co-BLMの作製
　上記の3-125I-Bz-BLMの約半分にCoCl2（0.71μM）を加えて、約pH 7に調整後、30分間室温で撹拌して作製した。
（実験例２）3-125I-Bz-BLMおよび3-125I-Bz-Co-BLMの腫瘍集積性
　本実験例では、担癌動物による3-125I-Bz-BLMおよび3-125I-Bz-Co-BLMの悪性腫瘍集積性を確認した。
１）3-125I-Bz-BLM注射液 および3-125I-Bz-Co-BLM注射液と担癌マウス
　実施例２で得た3-125I-Bz-BLM および3-125I-Bz-Co-BLMを生理食塩水に溶かし、以下の２種類の注射用の生理食塩水溶液を調製した。
3-125I-Bz-BLM生理食塩水溶液（0.3ml中の含有量20μg～30μg、約10ｋBq）
3-125I-Bz-Co-BLM生理食塩水溶液（0.3ml中の含有量20μg～30μg、約10ｋBq）
　担癌マウス：日本クレア（株）から購入した雄のscidマウス（８週齢）の大腿皮下にエールリッヒ腹水癌細胞（約4×107個）を移植し、その６日後の腫瘍結節が約1 cmの大きさになったときに実験に使用した。
２）担癌マウスにおける実験方法
　上記担癌マウスに、尾静脈より上記の3-125I-Bz-BLM生理食塩水溶液（0.3 ml）を注射し、３時間後にエーテル麻酔下に５匹を屠殺して、悪性腫瘍組織および主要な臓器組織を摘出した。摘出後、ただちにこれら組織の一部の重量を測定後、放射能をウエル型シンチレーションカウンターで測定した。各組織の3-125I-Bz-BLMの取込率は、注射量を100％とした場合の各組織1 gへの取込率（％/g）で表した。マウスの体重にバラツキがあるので、結果を比較しやすくするため、計算で体重を100 gに統一した（取込率（％/g）×マウス体重（g）÷100の式で計算した）。
　3-125I-Bz-Co-BLM生理食塩水溶液についても3-125I-Bz-BLM生理食塩水溶液の場合と同様にマウスに0.3 mlを注射し、同様に処理した。
３）担癌マウスにおける3-125I-Bz-BLMおよび 3-125I-Bz-Co-BLMの体内分布の結果
　表１３に担癌マウスにおける3-125I-Bz-BLMおよび3-125I-Bz-Co-BLMの投与３時間後の各組織1 g（体重を100 gに統一した場合）あたりへの集積性（取込率）を調べた。
　悪性腫瘍組織への取込率は3-125I-Bz-BLMでは0.123％/gであったが、3-125I-Bz-Co-BLMでは0.242％/gであった。3-125I-Bz-BLMにCoCl2を加えて、約pH 7に調整後、30分間室温で撹拌して作製した3-125I-Bz-Co-BLMについても悪性腫瘍組織への優れた集積性を示した。一方、Coを含まない3-125I-Bz-BLMはCoを含むものより悪性腫瘍への取込率が著しく少ないものの集積性は認められた。また、正常臓器組織への取込率は両化合物間に大きな差はなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　以上詳述したように、本発明の新規ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物によれば、種々の金属原子と錯体を作ることができ、これらの錯体は医学利用ができる可能性がある。有用な錯体を作る可能性のある金属原子としてコバルトの他、銅、鉄、ロジウム、ルテニウム、錫、マンガン、ニッケル、パラジウム、クロム、アンチモン、バナジウム等が考えられる。本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物は、従来のCo-ブレオマイシンによる悪性腫瘍集積性を有し、123Iまたは 124Iで標識すれば、標識されたヨードにより鮮明に描画することができる。また、123Iの物理的半減期は13時間であり、124Iの物理的半減期は4.2日なので、放射性コバルト（57Co）の物理的半減期が270日であった57Co-ブレオマイシンに比べ、本発明の新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物では、患者の被曝線量を減少させることができ、かつ環境の放射能汚染を減少させることができる。
　本発明の123Iで標識したヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物で悪性腫瘍病巣や炎症組織を描画(SPECTによる)すれば、従来のクエン酸ガリウム（67Ga）や塩化タリウム（201Tl）を使用する場合よりもはるかに鮮明に描画でき、かつ患者の被曝線量が減少することができる。また、PET検査に使用されている18Fの物理的半減期は110分であることから、18Fを標識物質とする場合は、要時調製することが必要とされるが、本発明の124Iで標識した新規ヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物の場合は、その物理的半減期の長さから、使用日以前に製造して、長距離の輸送が可能であり、医療経済上利点がある。
　ベータ線を放射する131Iで標識したヨードベンジル-Co-ブレオマイシン化合物を悪性腫瘍組織に集積させて、ベータ線で悪性腫瘍細胞を照射すれば、悪性腫瘍の治療効果が期待される。

Claims (12)

  1. 一般式(I)に示すブレオマイシンのＲにおいて、ヨウ素原子で置換されたベンジル基を含むことを特徴とする、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
  2. 前記一般式(I)におけるＲが、式(II)に示す構造からなる、請求項１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
  3. 式(II)に示すベンジル基のヨウ素原子が、メタ位に位置する、請求項２に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
  4. 置換されたヨウ素原子が、123I、124I、125Iまたは131Iから選択されるいずれかである請求項１～３のいずれか１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物。
  5. 請求項１～４のいずれか１に記載のヨードベンジル－ブレオマイシン化合物に、コバルトが結合してなる、ヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物。
  6. ヨードベンジルヨウ化物を、ブレオマイシンの末端アミノ基に付加する工程を含む、ヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物の合成方法。
  7. 以下の工程を含む、請求項６に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物の合成方法：
    １）ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程；
    ２）ブレオマイシンにコバルトを加え、コバルト－ブレオマイシンを合成する工程；
    ３）上記作製したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したコバルト－ブレオマイシンを加え、ヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物を合成する工程。
  8. 以下の工程を含む、請求項６に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物の合成方法：
    １）’ヨードベンジルヨウ化物を合成する工程；
    ２）’上記作製したヨードベンジルヨウ化物に、メタノールに溶解したブレオマイシンを加え、ヨードベンジル－ブレオマイシン化合物を合成する工程；
    ３）’上記作製したヨードベンジル－ブレオマイシン化合物にコバルトを加え、ヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物を合成する工程。
  9. ブレオマイシンが、ブレオマイシンデメチルA2である、請求項６～８のいずれか１に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物の合成方法。
  10. 請求項５に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物を含む、悪性腫瘍または炎症組織の検査薬。
  11. 請求項５に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物を有効成分として含む悪性腫瘍治療薬。
  12. 請求項５に記載のヨードベンジル－コバルト－ブレオマイシン化合物を用いることを特徴とする悪性腫瘍または炎症組織の検査方法。
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