[go: up one dir, main page]

WO2010062143A2 - Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물 - Google Patents

Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2010062143A2
WO2010062143A2 PCT/KR2009/007056 KR2009007056W WO2010062143A2 WO 2010062143 A2 WO2010062143 A2 WO 2010062143A2 KR 2009007056 W KR2009007056 W KR 2009007056W WO 2010062143 A2 WO2010062143 A2 WO 2010062143A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cancer
l1cam
composition
expression
anticancer
Prior art date
Application number
PCT/KR2009/007056
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2010062143A3 (ko
WO2010062143A9 (ko
Inventor
홍효정
민정기
윤현호
이중회
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생명공학연구원 filed Critical 한국생명공학연구원
Priority to US13/131,445 priority Critical patent/US20110293600A1/en
Priority to CN2009801545949A priority patent/CN102325547A/zh
Priority to CA2750147A priority patent/CA2750147A1/en
Priority to JP2011538553A priority patent/JP2012509935A/ja
Priority to EP09829350A priority patent/EP2357003A4/en
Priority to AU2009320542A priority patent/AU2009320542A1/en
Publication of WO2010062143A2 publication Critical patent/WO2010062143A2/ko
Publication of WO2010062143A3 publication Critical patent/WO2010062143A3/ko
Publication of WO2010062143A9 publication Critical patent/WO2010062143A9/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Definitions

  • the present invention relates to an anticancer composition
  • an anticancer composition comprising a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM and an anticancer agent, and more particularly, to inhibits the expression of L1CAM-specific anti-L1CAM antibody, L1CAM as a substance that inhibits the activity of L1CAM.
  • Oligonucleotide that inhibits the invention of L1CAM as a substance, and a substance selected from cisplatin, gemcitabine, 5-fluorouracil and Taxol as an anticancer agent the two substances may be administered alone
  • the present invention relates to an anticancer composition that effectively treats cancer, particularly L1CAM-expressing cancer, by exhibiting a synergistic therapeutic effect.
  • L1 cell adhesion molecule is an endogenous membrane glycoprotein belonging to immunoglobulin superfamily cell adhesion molecules (CAMs) that mediate cell-to-cell adhesion at the cell surface.
  • CAMs immunoglobulin superfamily cell adhesion molecules
  • One of the integral membrane glycoproteins has a molecular weight of 220 kDa.
  • L1CAM was originally found in neurons and its function is known as neuron migration, neurite outgrowth and cell migration. L1CAM has been known to be expressed in several normal tissues in addition to neural tissues, and has recently been found in several cancer cells.
  • European patent application EP 1 172 654 and US patent application US 2004/0259084 provide for the diagnosis and diagnosis of ovarian cancer or endometrial cancer, provided that L1CAM is a marker for the presence of ovarian cancer, endometrial cancer or the predisposition of such cancer.
  • L1CAM protein is a very specific marker of ovarian cancer or endometrial cancer in body fluids or tissues.
  • US patent application US 2004/0115206 includes agents that induce cancer cell death such as breast cancer, colorectal cancer, cervical cancer using antibodies that specifically bind to L1CAM, means for using the antibody for cell death, and L1CAM antibodies.
  • a modified pharmaceutical composition which inhibits cell growth and induces cell death by contacting the cell with an effective amount of an anti-L1CAM antibody capable of inhibiting cell growth and inducing cell death in cancer cells. It is.
  • a monoclonal antibody (A10-A3) was obtained by immunizing mice with a biliary tract cancer cell line, and it was confirmed that the A10-A3 antibody specifically recognized L1CAM. It was confirmed that L1CAM was expressed on the surface of biliary tract cancer cells using -A3 antibody. From the statistical analysis of the relationship between the expression rate and the survival rate of biliary tract cancer patients, the mortality rate of the group with high L1CAM expression rate was higher We confirmed that L1CAM acts as a poor prognositic factor for biliary tract cancer, confirming that it is significantly higher than the low group mortality rate.
  • L1CAM may have an excellent diagnostic or therapeutic effect on biliary tract cancer.
  • Anticancer drugs are drugs that exhibit cytotoxicity or cytostatic effects on cancer cells by acting on various metabolic pathways of cancer cells, and the anticancer drugs developed so far are metabolic antagonists, Vegetable alkaloids, topoisomerase inhibitors, alkylating agents, anticancer antibiotics, hormones and other drugs can be classified. Anticancer drugs vary in intracellular targets, depending on the drug, blocking the DNA replication, transcription and translation processes of the cell or disrupting the action of proteins important for cell survival. The effects on these intracellular targets are subsequently processed through necrosis or apoptosis. Kills cells. The metabolic pathways in which these anticancer drugs work are not specific to cancer cells but are also the same for normal cells.
  • anticancer drugs So far, more than 50 anticancer drugs have been developed, and there are differences in the anticancer agents used depending on the type and characteristics of the cancer, and they are used for cancer treatment alone or in combination with other anticancer therapies.
  • the most commonly used anticancer agents include DNA alkylating agents (cyclophosphamide, ifosfamide), metabolic agents (methotrexate, folate inhibitors, 5-fluorouracil ( 5-fluorouracil, pyrimidine inhibitors), microtubule inhibitors (vincristine, vinblastine, paclitaxel), DNA intercalators (doxorubicin, cisplatin ( cisplatin), and hormonal therapies (tamoxifen, flutamide).
  • DNA alkylating agents cyclophosphamide, ifosfamide
  • metabolic agents metalhotrexate, folate inhibitors, 5-fluorouracil ( 5-fluorouracil, pyrimidine inhibitors), microtubule inhibitors (vincristine
  • Cisplatin was developed in 1968 as a cytotoxic anticancer agent and is known to inhibit cell division by binding to double strands of DNA and connecting with neighboring DNA to inhibit the separation of DNA strands. Cisplatin is the most widely used anticancer agent and is particularly used for the treatment of solid cancers such as ovarian cancer, testicular cancer and head and neck cancer. However, its use is limited in cancers that have acquired resistance to cisplatin as an intrinsic or exogenous factor (Andrews, PA and Howell, SB. (1990) Cancer cells; Kelley, sl and Rozencweig, M (1989) Eur. J. Clin. Oncol. 25: 1135-1140; Perez, RP et al. (1990) pharmacol. Ther. 48: 19-27; and Timmer-Bosscha, H. et al. (1992) Br. J. Cancer 66 : 227-238). Therefore, there is a need for treatment through co-administration with inhibitors to induce resistance.
  • Gemcitabine (2'-deoxy-2 ', 2'-difluorocytidine) is a nucleoside analogue that is an anticancer agent that inhibits cell proliferation through the synthesis of DNA.
  • Bladder cancer, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer It is used to treat solid cancers such as biliary tract cancer, and pancreatic cancer.
  • Gemcitabine is clinically very effective but its concentration is very limited because of side effects such as anemia, leukocytosis and neutropenia, increased liver efficiency, vomiting, and high fever. Therefore, there is a need to develop a combination therapy that can increase the therapeutic efficacy while reducing the concentration of gemcitabine.
  • 5-fluorouracil is a metabolic antagonist with cytotoxicity. It is an anticancer agent used for the treatment of solid cancers such as gastrointestinal cancer, breast cancer, and head and neck cancer, and is widely used in combination with other anticancer agents.
  • solid cancers such as gastrointestinal cancer, breast cancer, and head and neck cancer
  • the combination of calcium salts of leucovorin and folinic acid is known to be very effective in the treatment of solid cancer (Malet-martino M et al. Clinical studies of three oral prodrugs of 5-fluorouracil (5). -fluorouracil) (Capecitabine, UFT, S-1): A review.Oncologist 2002; 4 (4) 228-323).
  • DPD dihydropyrimidine dehydrogenase
  • Docetaxel Docetaxel, Taxol
  • paclitaxel is an anticancer agent used to treat solid tumors or malignant tumors with high metastasis. Is disclosed.
  • the amount of docetaxel used is 60-300 mg / m 2 , which varies from patient to patient, and is usually injected over a period of 3 weeks at a concentration of 60-100 mg / m 2 via intravenous route (Texbook of Medical Oncology, Franco Cavelli). et al., Martin Dunitz Ltd., p.4623 (1997)).
  • Many clinical studies have demonstrated the efficacy of docetaxel, particularly in the treatment of breast cancer, and it is generally known that its efficacy can be seen after 1-2 treatments.
  • the mechanism of action of docetaxel has been shown to increase the assembly of microtuble and to inhibit the depolymerization of tubulin.
  • the inventors of the present invention have been studying active ingredients having an excellent effect as anticancer agents, by using a combination of conventional anticancer agents and substances that inhibit the activity or expression of L1CAM, which can be used as a single agent, can provide a remarkably effective anticancer agent. It confirmed and completed this invention.
  • An object of the present invention includes a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM and an anticancer agent, and exhibits a synergistic therapeutic effect than when the two substances are administered alone, effectively for the treatment of cancer, especially cancer expressing L1CAM It is to provide a composition.
  • an anticancer composition comprising a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM and an anticancer agent according to the present invention, by simultaneously, separately or sequentially using a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM included therein and an anticancer agent, Compared to each of the pharmacological effects of these substances alone, it has a much stronger and significant cancer cell growth and death effect, thereby treating cancer, especially ovarian cancer, endometrial cancer, cervical cancer, breast cancer, known as L1CAM-expressing carcinoma. It is very useful for various cancers such as colorectal cancer, melanoma, neuroblastoma, biliary tract cancer, lung cancer and pancreatic cancer.
  • Figure 1 is a result of analyzing the cell proliferation inhibitory effect after administration of L1CAM-expressing antibody A10-A3 and cisplatin to L1CAM-expressing L1CAM and cisplatin, respectively, or in combination
  • B) is a result of analyzing apoptosis induction effect after administration of L1CAM antibody A10-A3 and cisplatin to L1CAM-expressing bile duct cancer cell line (SCK), or in combination, respectively,
  • Figure 2 is a group of mice (10 mice each) in combination with mIgG, L1CAM antibody A10-A3, cisplatin, or A10-A3 and cisplatin in a mouse (xenograft) model transplanted with L1CAM expressing cholangiocarcinoma cell line (SCK). ) Shows the growth of cancer,
  • Figure 5 (A) is a result of comparing the expression level of mRNA and protein of L1CAM in cell lines that inhibited L1CAM expression using a specific siRNA for L1CAM in the biliary cancer cell line (SCK) expressing L1CAM and control cells. ,
  • Figure 5 (B) shows a cell proliferation inhibitory effect by the combined administration of cisplatin in the cell line that inhibited the expression of L1CAM using a specific siRNA for L1CAM in the biliary cancer cell line (SCK) expressing L1CAM and control cells Is,
  • FIG. 5 (C) shows the effect of inducing apoptosis by co-administration of cisplatin in a cell line which inhibited L1CAM expression using a specific siRNA for L1CAM in a biliary cancer cell line (SCK) expressing L1CAM and a control cell line. to be.
  • SCK biliary cancer cell line
  • the present invention relates to a composition for anticancer comprising the following (a) and (b) as an active ingredient simultaneously, separately or sequentially used:
  • the composition of the present invention may comprise a substance for inhibiting the activity of L1CAM as (a).
  • the activity inhibitor is an anti-L1CAM antibody that specifically recognizes L1CAM known as cancer cell surface antigen or secreted surface antigen.
  • Such antibodies include both monoclonal antibodies and chimeric and humanized antibodies thereto, and may include antibodies known in the art, in addition to novel antibodies, which may be prepared by methods well known in the art. Can be.
  • the antibodies included in the composition of the present invention can be easily produced by known monoclonal antibody production techniques and known methods for chimeric and humanizing such monoclonal antibodies.
  • methods for preparing monoclonal antibodies can be performed by preparing hybridomas using B lymphocytes from immunized animals (Koeher and Milstein, 1976, Nature, 256: 495), or phage display (phage). display) technology, but is not limited thereto.
  • the antibody library using phage display technology is a method of expressing an antibody on a phage surface by obtaining an antibody gene from B lymphocytes without producing hybridomas.
  • Phage display technology can overcome many of the existing difficulties associated with generating monoclonal antibodies by B-cell immortalization.
  • Typical phage display techniques include the steps of: 1) inserting oligonucleotides of random sequence into the gene region corresponding to the coat protein pIII (or pIV) N-terminus of the phage; 2) expressing a fusion protein of a portion of the native coat protein and a polypeptide encoded by the oligonucleotide of the random sequence; 3) processing a receptor material capable of binding to the polypeptide encoded by the oligonucleotide; 4) eluting peptide-phage particles bound to the receptor using low pH or binding competitive molecules; 5) amplifying the eluted phage in the host cell by panning; 6) repeating the method to obtain the desired amount; And 7) determining the sequence of the active peptide from the DNA sequence of the phage clones selected by panning.
  • L1CAM-specific anti-L1CAM production method is, for example, by a phage display method that picks out an antibody binding to L1CAM from a human antibody library by panning, or by immunizing mice with L1CAM protein to prepare a library or to prepare a hybridoma. It may be by a method for producing an antibody that binds to L1CAM. More preferably, the antibody is A10-A3, which is an anti-L1CAM antibody described in Korean Patent No. 10-0756051 and / or Korean Patent Laid-Open No. 10-2008-0018149, and such A10-A3 antibody is known from the above-mentioned documents. It can be produced by a method as described in, preferably produced by secretion by accession number KCTC 10909BP.
  • anti-L1CAM antibodies include functional antigenic fragments of antibody molecules, as well as complete forms having the full length of two heavy chains and two light chains, as long as they have the property of binding to specifically recognize L1CAM.
  • the functional antigenic fragment of an antibody molecule means the fragment which has at least antigen binding function, and includes Fab, F (ab '), F (ab') 2 , Fv, etc.
  • the anticancer composition may include a substance that inhibits the expression of L1CAM as (a). Inhibiting the expression of L1CAM by using substances that inhibit the expression of L1CAM in cancer cells expressing L1CAM reduces the effect of L1CAM, which plays a role in the growth and metastasis of cancer cells, thereby enabling cancer treatment.
  • the substance that inhibits the expression of L1CAM is selected from the group consisting of siRNA, shRNA and antisense oligonucleotide, more preferably 5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3 'sequence (SEQ ID NO: 1) SiRNA containing.
  • siRNA refers to a small nucleic acid molecule of about 20 nucleotides in size that can mediate RNA interference or gene silencing
  • shRNA refers to 5-9 bases of the sense and antisense sequences of the siRNA target sequence.
  • Short hairpin RNA short hairpin RNA
  • RNAi RNA interference
  • the method for preparing siRNA included in the composition of the present invention includes a method of chemically synthesizing siRNA directly (Sui G et al., (2002) Proc Natl Acad Sci USA 99: 5515-5520), a method of synthesizing siRNA using in vitro transcription ( Brummelkamp TR et al., (2002) Science 296: 550-553), but are not limited thereto.
  • shRNA overcomes disadvantages such as high cost of biosynthesis of siRNA, short time maintenance of RNA interference effect due to low cell transfection efficiency, and uses adenovirus, lentivirus and plasmid expression vector system from promoter of RNA polymerase III.
  • shRNA can be introduced into a cell to express it, and it is widely known that such shRNA is converted into an siRNA having an accurate structure by an siRNA processing enzyme (Dicer or Rnase III) present in the cell to induce silencing of a target gene.
  • an siRNA processing enzyme Diicer or Rnase III
  • antisense refers to a sequence and subnucleotide sequence of nucleotide bases, wherein the antisense oligomers hybridize to the target sequence in RNA by Watson-Crick base pairing, allowing formation of mRNA and RNA: oligomeric heterodimers, typically within the target sequence. Refers to oligomers with interunit backbones. The oligomer may have exact sequence complementarity or approximate complementarity to the target sequence. These antisense oligomers can alter or process the processing of mRNA, which blocks or inhibits translation of mRNA and produces splice variants of the mRNA. Thus, the antisense oligomers of the invention are antisense oligomers complementary to the mRNA of the L1CAM gene.
  • composition of the present invention includes (b) for administering an anticancer agent in combination with (a).
  • anticancer agent is a generic term for known drugs used in the treatment of conventional cancers that act on various metabolic pathways of cancer cells and exhibit cytotoxicity or cytostatic effects on cancer cells. Metabolism inhibitors, vegetable alkaloids, topoisomerase inhibitors, alkylating agents, anticancer antibiotics, hormones and other drugs. Substances that inhibit the activity or expression of L1CAM and particularly anticancer agents included in the composition according to the present invention include cisplatins such as cisplatin, carboplatin and heptaplatin, gemcitabine, 5-fluoro Taxols such as 5-urauracil and docetaxel and its derivatives paclitaxel are preferred, and particularly preferred anticancer agents are cisplatin. These anticancer agents can be manufactured by a well-known method, or can use a commercial item.
  • the substance that inhibits the activity or expression of the L1CAM and the anticancer agent may be mixed and administered at the same time, but each may be administered separately or simultaneously or serially or separately.
  • two active ingredients may be alternately administered, or one may be administered continuously followed by the other.
  • the composition should just contain the substance which suppresses the activity or expression of L1CAM, and an anticancer agent as an active ingredient, and may be a drug of any form.
  • the mixture containing two active ingredients may be comprised, and may be comprised as a single agent, respectively.
  • the combination refers to the formulation of two or more active ingredients in one formulation
  • the term single agent refers to the inclusion of one active ingredient in one formulation, wherein the active ingredients are determined according to their pharmacological and pharmacokinetic properties.
  • Different formulations may be prepared and combined.
  • the therapeutic agent in the case where the two active ingredients are monosaccharides means a medicament used in combination of single agents that can be used singly. If the two active ingredients are single agents, they may be in the form of a kit in which both components are present at once.
  • the anticancer composition of the present invention may be administered daily or intermittently, and the number of administrations per day may be administered once or divided into several times. When two active ingredients are each single, the number of administrations may be the same or different.
  • the anticancer composition of the present invention can be formulated by a known method alone or with a suitable pharmaceutically acceptable carrier or excipient as described below.
  • suitable pharmaceutically acceptable carrier or excipient include oral, injectable or external preparations such as soft capsules, hard capsules, tablets and syrups.
  • Pharmaceutically acceptable carriers include any of the standard pharmaceutical carriers used in known formulations such as sterile solutions, tablets, coated tablets and capsules.
  • such carriers include polyvinylpyrrolidone, dextrin, starch, milk, sugar, certain types of clays, gelatin, stearic acid, talc, vegetable oils (e.g. cooking oil, cottonseed oil, coconut oil, almond oil, peanut oil).
  • Excipients such as oily esters such as neutral fatty acid glycerides, mineral oil, petrolatum, animal fats and oils, and cellulose derivatives (e.g. crystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, methyl cellulose); Or other known excipients.
  • Such carriers may also include antioxidants, wetting agents, viscosity stabilizers, flavoring agents, color additives and other ingredients. Compositions containing such carriers can be formulated by known methods.
  • compositions of the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount for the treatment of cancer.
  • Typical dosage levels and proportions of (a) and (b) materials can be optimized using standard clinical techniques.
  • the present invention relates to a method for treating cancer using the anticancer composition.
  • the treatment method of the present invention includes administering the anticancer composition to the human body in a pharmaceutically effective amount.
  • the anticancer composition may be administered orally, subcutaneously, intraperitoneally, in pulmonary, and intranasally, and is administered by a suitable method including topical administration if necessary for local treatment.
  • Non-oral infusions include intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal or subcutaneous administration.
  • Preferred modes of administration are intravenous injection, subcutaneous injection, intradermal injection, intramuscular injection and instillation injection.
  • the dosage of the substances may vary depending on various factors, and the route of administration also includes various factors such as the patient's age, duration of administration, weight, severity of the disease, whether the patient is conscious and the type of concomitant drug. It is possible to use various routes of administration orally or parenterally. It is also possible to administer each separately separately or simultaneously, or separately over time.
  • the present invention relates to the use of the anticancer composition for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer.
  • the cancer may be included without limitation the cancer treated by the composition, for example, biliary tract cancer, endometrial cancer, cervical cancer, breast cancer, colon cancer, ovarian cancer, melanoma, neuroblastoma, lung cancer or pancreatic cancer Can be mentioned.
  • the manufacture of a medicament for treating cancer can be prepared by well-known or known techniques in the art, as well as the above-mentioned methods.
  • the present invention relates to the use of the composition for containing cancer for the treatment of cancer.
  • the cancer may be included without limitation the cancer treated by the composition, for example, biliary tract cancer, endometrial cancer, cervical cancer, breast cancer, colon cancer, ovarian cancer, melanoma, neuroblastoma, lung cancer or pancreatic cancer Can be mentioned.
  • the inventors of L1CAM to determine whether cancer cell proliferation is more effectively inhibited than when each alone when administered anti-L1CAM antibody and anti-cancer agent to L1CAM-expressing cancer cells
  • A10-A3 a monoclonal antibody that inhibits action
  • gemcitabine a monoclonal antibody that inhibits action
  • 5-fluorouracil a monoclonal antibody that inhibits action
  • each of them exhibits a superior synergistic effect than when administered alone to express cancer treatment, especially L1CAM. It is effective against various cancers known as ovarian cancer, endometrial cancer, cervical cancer, breast cancer, colon cancer, melanoma, neuroblastoma, biliary tract cancer, lung cancer and pancreatic cancer.
  • All cancer cell lines were cultured in a 37 ° C. incubator with 5% carbon dioxide using the following medium containing 10% fetal bovine serum (Gibco).
  • SCK biliary cancer cell line
  • SK-OV3 ovarian cancer cell line
  • DMEM Well GENE
  • the A10-A3 antibody used as anti-L1CAM antibody was prepared by the method disclosed in Korean Patent Laid-Open No. 10-2008-0018149.
  • Each cancer cell was counted by 2 x 10 5 cells in 3 ml of medium, cultured in 6 well plates, cisplatin and A10-A3 (10 ⁇ g / ml) alone or in combination, and then the cells were treated at 37 ° C. Incubated for 72 hours in a CO 2 reactor. The cells were recovered and counted the dead and living cells in 0.2% Tryphan Blue solution, and the living cells in the total cells were calculated as percentages. As a result, in the group treated with cisplatin and A10-A3 (10 ⁇ g / ml) alone, it was confirmed that the proliferation of these cancer cells was 30-50% inhibited. The synergistic effect of inhibiting cell proliferation was confirmed (FIG. 1A).
  • apoptosis experiments were performed to determine whether apoptosis was induced more effectively when A10-A3 and cisplatin were co-administered to L1CAM.
  • This experiment uses the principle that DNA breaks down when cells die.
  • Each cancer cell line was counted by 2 x 10 4 cells in 100 ⁇ l of medium and incubated in a 96 well plate, and treated with cisplatin and A10-A3 (10 ⁇ g / ml) alone or in combination. , Incubated for 24 hours. After 24 hours, the medium was removed and washed with PBS buffer, and then the cell lysis solution (RIPA buffer) was reacted at 37 ° C. for 30 minutes.
  • RIPA buffer cell lysis solution
  • DNA-specific biotin was bound to the lysed cell solution and 20 ⁇ l was transferred to a 96-well plate containing streptavidin, followed by 80 ⁇ l of immunoreagent to confirm absorbance at 405 nm. It was. As a result, when a combination of A10-A3 and cisplatin (cisplatin), it was confirmed that apoptosis was significantly increased compared to the group treated alone (Fig. 1 (B)).
  • Nude mouse Balb / c nu / nu was purchased from SLC (Japan) via central laboratory animal history. Age and weight ranged from 6-8 weeks of age and 18-22g, and were purified for 1 week at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology. Subsequently, 1 ⁇ 10 7 cells of SCK cells were implanted into 40 subcutaneous cells. After one week, when tumor volume reached 100-200 mm 3 , randomly divided into four groups of 10 animals. A10-A3 was treated three times a week at a concentration of 10 mg / kg, and cisplatin was treated twice a week at a concentration of 3 mg / kg.
  • the control group was treated with the same amount of mIgG instead of A10-A3, and the same amount of saline instead of cisplatin.
  • the mass and tumor weight of nude mice were measured three times a week.
  • the proliferative inhibitory effect was about 30%, whereas the co-administered group showed a clear inhibitory effect of more than 70% ( 2).
  • Example 2 In the same manner as in Example 2, when A10-A3 and gemcitabine were administered in combination, it was analyzed whether cell proliferation was inhibited more effectively than when administered alone. As a result, in the group treated with gemcitabine and A10-A3 (10 ⁇ g / ml) alone, the proliferation of these cancer cells was 20-25% (biliary cancer, SCK) or 20-40% (ovarian cancer, SK-OV3). It was confirmed that the inhibition, when combined treatment was confirmed a synergistic effect of suppressing the cell growth of about 40-60% (Fig. 3 (A)).
  • Example 2 In the same manner as in Example 2, when A10-A3 and 5-fluorouracil were administered in combination, the cell proliferation was more effectively inhibited than when administered alone. As a result, the proliferation of these cancer cells in the group treated with 5-fluorouracil and A10-A3 (10 ⁇ g / ml) alone was 20-40% (biliary cancer, SCK) or 20-30%. (Ovarian cancer, SK-OV3) It was confirmed that the inhibition, when combined treatment was confirmed a synergistic effect of suppressing the cell growth of about 40-50% (Fig. 4).
  • SiRNA specific for L1CAM (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3 ', SEQ ID NO: 1) and nonspecific siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', SEQ ID NO: 2) to knock down L1CAM expression in biliary cancer cell line SCK )
  • 1ml Trizol reagent (Invitrogen) was treated at room temperature for 5 minutes.
  • the solution was treated with 0.2ml chloroform and shaken vigorously about 15 times, followed by reaction at room temperature for 3 minutes. After centrifugation at 4 ° C.
  • siRNA specific for L1CAM (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3 ', SEQ ID NO: 1) and nonspecific siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', SEQ ID NO: 2) to knock down L1CAM expression in biliary cancer cell line SCK )
  • siRNA specific for L1CAM 5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3 ', SEQ ID NO: 1
  • nonspecific siRNA 5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', SEQ ID NO: 2
  • PBST PBS + 0.1% Tween 20
  • the reacted nitrocellulose membrane was reacted for 2 hours by adding a known anti-L1CAM antibody A10-A3 as the primary antibody. After washing 5 times with the PBST buffer solution, and reacted with an HRP (horseradish peroxidase) conjugate (1: 5000 Sigma) of anti-mouse IgG for 1 hour. After washing 5 times with PBST buffer, it was developed with ECL detection reagent (Amersham biosciences). As a result, it was confirmed that the total protein expression amount of L1CAM was reduced in the group treated with the specific siRNA compared to the control treated with non-specific siRNA for L1CAM (Fig. 5 (A) below).
  • Example 6-3 Analysis of cell proliferation inhibitory effect and induction of apoptosis by co-administration of siRNA and anticancer agent that inhibit L1CAM expression
  • siRNA for L1CAM (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3 ', SEQ ID NO: 1) and nonspecific siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3') to knock down expression of L1CAM in biliary cancer cell line SCK expressing L1CAM , SEQ ID NO: 2) were each transduced and incubated for 72 hours. Thereafter, the cell proliferation experiment and the apoptosis experiment were performed by the method described in ⁇ Example 2>.
  • an anticancer composition comprising a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM and an anticancer agent according to the present invention, by simultaneously, separately or sequentially using a substance that inhibits the activity or expression of L1CAM included therein and an anticancer agent, Compared to each of the pharmacological effects of these substances alone, it has a much stronger and significant cancer cell growth and death effect, thereby treating cancer, especially ovarian cancer, endometrial cancer, cervical cancer, breast cancer, known as L1CAM-expressing carcinoma. It is very useful for various cancers such as colorectal cancer, melanoma, neuroblastoma, biliary tract cancer, lung cancer and pancreatic cancer.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 L1CAM의 활성을 억제하는 물질로서 L1CAM에 특이적인 항-L1CAM 항체, L1CAM의 발현을 억제하는 물질로서 L1CAM의 발명을 억제하는 올리고 뉴클레오티드, 및 항암제로서 시스플라틴, 젬시타빈(gemcitabine), 5-플루오로우라실 및 탁솔에서 선택되는 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 항암용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 그에 포함되는 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 동시에, 별도로 또는 순차적으로 병용함으로써, 이들 물질을 단독으로 처리한 각각의 약리학적 효과에 비해 훨씬 강력하면서도 유의적인 암세포 성장 및 사멸 효과를 나타내어 암의 치료에 매우 유용하다.

Description

Ｌ１ＣＡＭ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물
본 발명은 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 L1CAM의 활성을 억제하는 물질로서 L1CAM에 특이적인 항-L1CAM 항체, L1CAM의 발현을 억제하는 물질로서 L1CAM의 발명을 억제하는 올리고 뉴클레오티드, 및 항암제로서 시스플라틴, 젬시타빈(gemcitabine), 5-플루오로우라실 및 탁솔에서 선택되는 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는, 상기 두 물질을 단독으로 투여하였을 때보다 상승적인 치료효과를 나타내어 암, 특히 L1CAM을 발현하는 암을 효과적으로 치료하는 항암용 조성물에 관한 것이다.
L1CAM (L1 cell adhesion molecule)은 세포 표면에서 세포간부착(cell-to-cell adhesion)을 중개하는 면역글로불린 수퍼패밀리 세포부착단백질들(immunoglobulin superfamily cell adhesion molecules, CAMs)에 속하는 내재성 막 당단백질(integral membrane glycoprotein)중 하나로서, 그 분자량은 220 kDa에 달한다. L1CAM은 원래 뉴런에서 발견되었으며 그 기능은 뉴런의 이동, 신경돌기의 성장 및 세포 이동으로 알려져 있다. L1CAM은 신경조직 외에도 몇몇 정상조직에서 발현하는 것으로 알려졌으며, 최근에는 여러 암세포에서도 발견되기 시작하였다.
L1CAM과 암과의 연관성은, L1CAM이 흑색종 (melanoma), 신경아세포종 (neuroblastoma), 난소암 및 대장암 등 여러 암에서 발현되는 것이 보고되었으며 (Takeda, et al., J. Neurochem. 66:2338-2349, 1996; Thies et al, Eur. J. Cancer, 38:1708-1716, 2002; Arlt et al., Cancer Res. 66:936-943, 2006; Gavert et al., J. Cell Biol. 168:633-642, 2005), 막 결합 형 (membrane bound form) 외에도 절단된 산물 (cleavage product)이 세포 외로 분비되는 것이 발견되었다 (Gutwein et al., FASEP J. 17(2):292-4, 2003). 그리고 최근 암세포의 성장에 중요한 역할을 하는 분자의 하나로 탐색됨으로써 (Primiano, et al., Cancer Cell. 4(1):41-53 2003), 암치료의 새로운 타겟으로 부상되었다 (US2004/0115206 A1 출원 2004.6.17). 최근 L1CAM에 대한 항체가 난소암세포의 성장과 전이를 억제함이 밝혀졌다 (Arlt, et al., Cancer Res. 66:936-943. 2006).
유럽 특허출원 EP 1 172 654 및 미국 특허출원 US 2004/0259084호는, L1CAM이 난소암, 자궁내막암 또는 그러한 암의 소인의 존재에 대한 표식이 된다는 전제 하에, 난소암 또는 자궁내막암의 진단 및 예후를 위해 환자의 샘플에서 L1CAM의 항체를 통해 L1CAM 수준을 결정하는 것을 특징으로 하는 수단 및 세포 독성을 가진 약물과 L1CAM 항체 및 그 부분을 결합시켜 충분한 양으로 환자에게 투여하여 암을 치료하는 방법에 대해 개시하고 있다. 그러나 이 문헌들은 단지 L1CAM 단백질이 체액 또는 조직에서 난소암 또는 자궁내막암의 매우 특이적인 마커임을 기재하고 있을 뿐이다.
미국 특허출원 US 2004/0115206호는 L1CAM에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 유방암, 대장암, 자궁경부암등 암세포 사멸을 유도하는 제제, 세포 사멸을 위해 상기 항체를 사용하는 수단 및 L1CAM 항체가 포함된 약제학적 조성물에 관하여 개시하면서, 암세포에서 세포 성장을 저해하고 세포사를 유도할 수 있는 유효량의 항 L1CAM 항체를 세포에 접촉(contacting)시키는 것에 의해 세포의 성장을 억제하고 세포 사멸을 유도하는 것이 개시되어 있다.
또한, 국제출원 PCT/EP2005/008148은 난소 및 자궁내막암에서 과발현되는 L1CAM 단백질 및 그들의 발현을 저해하는 조성물 및 이를 이용하여 난소 및 자궁내막암을 예방 및 치료하는 방법을 제공한다. 이 문헌은 L1CAM 단백질의 기능을 저해하는 L1CAM 항체 및 그의 유도체를 포함하는 조성물이 난소암 및 자궁내막암의 기능을 억제하여 암세포의 이동 및 진전을 저지하여 암의 치료가 가능하다고 기재하고 있다.
최근, 대한민국특허출원 제10-2007-0084868호에서는 담도암 세포주로 생쥐를 면역시켜 단일클론항체(A10-A3)를 얻고, A10-A3 항체가 L1CAM을 특이적으로 인식함을 확인하였으며, 상기 A10-A3 항체를 이용하여 L1CAM이 담도암 세포 표면에 발현함을 확인하였고, 담도암 환자의 L1CAM의 발현율과 생존율과의 관계에 대한 통계학적 분석 결과로부터, L1CAM 발현율이 높은 그룹의 사망률이 L1CAM 발현율이 낮은 그룹의 사망률보다 확실히 높음을 확인하여 L1CAM이 담도암의 나쁜 예후 인자(poor prognositic factor)로서 작용함을 기재하였으며, 인 비트로(in vitro)와 인 비보(in vivo) 동물실험을 통해서 L1CAM에 대한 항체가 담도암 세포의 성장, 이동 또는 침윤을 억제하는 효과가 있음을 밝힘으로써, L1CAM이 담도암에 대한 탁월한 진단 또는 치료 효과를 가질 수 있음을 기재하고 있다.
최근 연구에 따르면 L1CAM이 C2-세라미드(C2-ceramide), 스타우로스포린(staurosporine), 시스플라틴(cisplatin), 그리고 hypoxia에 의한 난소암의 세포사를 억제하는 기능을 보고하고 있으며 (Stoeck A. et al Gynecol Oncol. 2007;104(2):461-469), 시스플라틴(cisplatin)을 처리한 난소암, 췌장암 세포에서 L1CAM이 증가되어 있음을 보고하고 있다.
그러나 위의 어느 문헌들도 L1CAM의 작용을 저해하는 항체와 항암제의 병용 투여 시 상승적인 암치료 효능을 관찰한 것에 대해서는 기재하고 있지 않다.
항암제란 암세포의 각종 대사경로에 작용하여 암세포에 대하여 세포독성(cytotoxicity)이나 성장억제효과(cytostatic effects)를 나타내는 약제를 총칭하며, 지금까지 개발된 항암제는 그 작용기전과 화학구조에 따라 대사길항제, 식물성 알칼로이드, 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 알킬화제, 항암성 항생물질, 호르몬제 및 기타 약제로 분류할 수 있다. 항암제들은 약제에 따라 세포 내 표적이 다양한데, 세포의 DNA복제, 전사 및 번역과정을 차단하거나 세포생존에 중요한 단백질의 작용을 방해하며, 이러한 세포 내 표적에의 영향은 이후 necrosis나 apoptosis의 과정을 통해 세포를 사멸케 한다. 이러한 항암제가 작용하는 대사경로는 암세포에만 특이한 것이 아니고 정상세포에도 동일하기 때문에 항암제 투여 시 정상조직의 손상, 즉 독성은 불가피하다고 할 수 있다. 그러나 암세포와 정상세포의 대사 사이에는 양적인 차이가 존재하고 이로 인하여 항암제는 암조직에 보다 큰 독성을 나타내게 되는 바 이러한 항암제의 선택적 독성(selective toxicity)을 이용하여 임상적으로 항암화학요법이 가능하며, 치료학적 지수(therapeutic index)가 클수록 정상조직의 독성은 피하면서 암세포를 없앨 수 있어 안전한 항암제라고 할 수 있다.
지금까지 50여개 이상의 항암제가 개발되었으며, 암의 종류 및 특성에 따라 사용되는 항암제도 차이가 있으며 단독 혹은 다른 항암요법과 병용하여 암치료에 이용되고 있다. 가장 일반적으로 사용되는 항암제로는 DNA 알킬화제 (시클로포스파미드(cyclophosphamide), 이포스파미드(ifosfamide)), 대사길항제 (메톡트렉세이트(methotrexate), 폴레이트(folate) 저해제, 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 피리미딘 저해제), 미세소관(microtubule) 저해제 (빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 파클리탁셀(paclitaxel)), DNA 삽입물질(intercalators) (독소루비신(doxorubicin), 시스플라틴(cisplatin)), 그리고 호르몬 치료제 (타목시펜(tamoxifen), 플루타미드(flutamide)) 등이 개발되었다.
시스플라틴(Cisplatin)은 1968년 세포독성을 가진 항암제로 개발되었으며 DNA의 이중 가닥에 결합해 이웃한 DNA와 서로 연결시켜서 DNA 가닥의 분리를 저해함으로써 세포 분열(cell division)을 억제하는 것으로 알려져 있다. 시스플라틴은 가장 광범위하게 사용되는 항암제로 특히 난소암, 고환암 및 두경부암과 같은 고형암 치료에 사용되고 있다. 그러나 내재적 혹은 외래적 요인으로 시스플라틴에 대해서 내성을 획득한 암들에 있어서는 그 사용이 제한적이다 (Andrews, P.A. and Howell, SB.(1990) Cancer cells.; Kelley, s.l. and Rozencweig, M (1989) Eur. J. Clin. Oncol. 25:1135-1140; Perez, R.P. et al. (1990) pharmacol. Ther. 48:19-27; and Timmer-Bosscha, H. et al. (1992) Br. J. Cancer 66:227-238). 따라서 내성을 유도하는 인자에 대한 저해제와 병용투여를 통한 치료가 요구되고 있다.
젬시타빈(Gemcitabine) (2'-데옥시-2',2'-디플루오로시티딘)은 뉴클레오사이드 유사체로서 DNA의 합성을 통해서 세포증식을 억제하는 항암제로 방광암, 유방암, 폐암, 난소암, 담도암, 및 췌장암과 같은 고형암 치료에 이용되고 있다. 젬시타빈은 임상학적으로 그 효능은 매우 우수하나 빈혈, 백혈구 및 중성구감소증, 간에서의 효수증가, 구토, 및 고열과 같은 부작용이 심각하기 때문에 사용되는 농도가 매우 제한적이다. 따라서 젬시타빈의 농도를 감소시키면서 치료 효능은 증가시킬 수 있는 병용치료제 개발이 요구되고 있다.
5-플루오로우라실(5-fluorouracil)은 세포독성을 가진 대사길항제로서 위장암, 유방암, 그리고 두경부암 등 고형암 치료에 이용되고 있는 항암제이며 특히 다른 항암제와의 병용투여로 널리 이용되고 있다. 특히 류코보린(leucovorin) 그리고 포리닌산(folinic acid)의 칼슘염과 병용투여시 고형암 치료에 매우 효과적인 것으로 알려져있다 (Malet-martino M et al. Clinical studies of three oral prodrugs of 5-플루오로우라실(5-fluorouracil) (Capecitabine, UFT, S-1): A review. Oncologist 2002;4(4)228-323). 그러나 경구 투여에 따른 세포독성과 낮은 생체 이용률로 인하여 정맥 투여만 가능하다는 단점과 정맥 투여시 85%이상이 DPD(dihydropyrimidine dehydrogenase)효소에 의해 불활성되기 때문에 DPD의 강한 활성을 나타내는 환자를 치료하는데 있어서는 제한적이다. 따라서 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)의 효능을 증가시키기 위해서는 다른 항암제와 병용투여가 요구되고 있다 (Malet-martino M et al.).
도세탁셀(Docetaxel, Taxol)과 그것의 유도체인 파클리탁셀(paclitaxel)은 고형암이나 전이성이 강한 악성종양을 치료하는데 사용되는 항암제로서, 유럽 특허EP 0 253 738과 국제 공개 특허 WO 92/09589는 도세탁셀의 제조 방법에 대해서 개시하고 있다. 도세탁셀의 사용량은 60-300 mg/m2으로 환자에 따라 매우 다르며, 일반적으로 정맥투여경로를 통해서 60-100 mg/m2의 농도로 3주간 1시간 이상 주입된다 (Texbook of Medical Oncology, Franco Cavelli et al., Martin Dunitz Ltd., p.4623 (1997)). 많은 임상학적 연구들에서, 특히 유방암 치료에 있어 도세탁셀의 효능이 검증되었으며, 일반적으로 그 효능은 1-2 치료 후에 볼 수 있다고 알려져 있다. 도세탁셀의 작용기전은 미세소관(microtuble)의 회합(assembly)을 증가시키고 튜불린(tublin)의 탈극화(depolymerization)를 억제시키는 것으로 밝혀졌다.
본 발명자들은 항암제로서 탁월한 효과를 가지는 유효한 성분을 연구하던 중 각각 단일제제로 이용할 수 있는 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질과 기존의 항암제를 병용함으로써, 현저하게 효과가 우수한 항암제를 제공할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하되, 상기 두 물질을 단독으로 투여하였을 때보다 상승적인 치료효과를 나타내어 암, 특히 L1CAM을 발현하는 암을 효과적으로 치료하는 항암용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물을 투여하는 경우, 그에 포함되는 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 동시에, 별도로 또는 순차적으로 병용함으로써, 이들 물질을 단독으로 처리한 각각의 약리학적 효과에 비해 훨씬 강력하면서도 유의적인 암세포 성장 및 사멸 효과를 나타내어 암의 치료, 특히 L1CAM을 발현하는 암종으로 알려진 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 흑색종, 신경아세포종, 담도암, 폐암 및 췌장암과 같은 다양한 암에 대해 매우 유용하다.
도 1의 (A)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)에 L1CAM에 대한 항체 A10-A3와 시스플라틴을 각각, 혹은 병용 투여한 후, 세포증식 억제 효과를 분석한 결과이며, 도 1의 (B)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)에 L1CAM에 대한 항체 A10-A3와 시스플라틴을 각각, 혹은 병용 투여한 후, 세포사멸 유도효과을 분석한 결과이며,
도 2는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)를 이식한 마우스 (xenograft) 모델에서 mIgG, L1CAM에 대한 항체 A10-A3, 시스플라틴, 혹은 A10-A3와 시스플라틴을 병용 투여한 마우스 군들 (각 10마리)에서 암의 성장 정도를 나타낸 결과이며,
도 3의 (A) 및 (B)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)와 난소암세포주 (SK-OV3)에 L1CAM에 대한 항체 A10-A3와 젬시타빈을 각각, 혹은 병용 투여한 후, 세포증식 억제 효과를 분석한 결과이며,
도 4의 (A)와 (B)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)와 난소암세포주 (SK-OV3)에 L1CAM에 대한 항체 A10-A3와 5-플루오로우라실을 각각 혹은 병용 투여한 후, 세포증식 억제 효과를 분석한 결과이며,
도5의 (A)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)에 L1CAM에 대한 특이 siRNA를 이용하여 L1CAM의 발현을 저해시킨 세포주와 대조군 세포주에서 L1CAM의 mRNA 및 단백질의 발현양을 비교한 결과이며,
도 5의 (B)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)에 L1CAM에 대한 특이 siRNA를 이용하여 L1CAM의 발현을 저해시킨 세포주와 대조군 세포주에서 시스플라틴의 병용투여에 의한 세포증식 저해효과를 나타낸 결과이며,
도 5의 (C)는 L1CAM을 발현하는 담도암 세포주(SCK)에 L1CAM에 대한 특이 siRNA를 이용하여 L1CAM의 발현을 저해시킨 세포주와 대조군 세포주에서 시스플라틴의 병용투여에 의한 세포사멸 유도효과를 나타낸 결과이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 하기의 (a) 및 (b)를 동시에, 별도로 또는 순차적으로 병용하기 위해 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물에 관한 것이다:
(a) L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질; 및
(b) 항암제.
구체적인 일 양태로서, 본 발명의 조성물은 상기 (a)로서 L1CAM의 활성을 억제하는 물질을 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 활성억제물질은 암세포 표면 항원 또는 분비된 표면 항원으로 알려진 L1CAM을 특이적으로 인식하는 항-L1CAM 항체이다. 이러한 항체는 단일클론항체 및 이에 대한 카이메릭 항체 및 인간화 항체를 모두 포함하는 것이고, 신규한 항체 외에 이미 당해 기술분야에서 공지된 항체들도 포함될 수 있으며, 이들은 당해 분야에서 잘 알려진 방법에 의해 제조할 수 있다. 예로써, 본 발명의 조성물에 포함되는 항체는 공지의 단일클론항체 제조기술 및 이러한 단일클론항체를 카이메릭화, 인간화 하는 공지의 방법에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론항체를 제조하는 방법은 면역된 동물로부터 얻은 B 림프구를 사용하여 하이브리도마를 제조함으로써 수행될 수 있거나(Koeher and Milstein, 1976, Nature, 256:495), 파지 디스플레이(phage display) 기술을 이용함으로써 수행될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
파지 디스플레이 기술을 이용한 항체 라이브러리는 하이브리도마를 제작하지 않고 바로 B 림프구로부터 항체 유전자를 얻어 파지(phage) 표면에 항체를 발현시키는 방법이다. 파지 디스플레이 기술을 이용하면 B-세포 불멸화(immortalization)에 의해 단일클론항체를 생성하는데 관련된 기존의 많은 어려움이 극복될 수 있다. 일반적인파지 디스플레이 기술은 1) 파지의 외피 단백질(coat protein) pⅢ (또는 pⅣ) N-말단에 해당하는 유전자 부위에 무작위 서열의 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)를 삽입하는 단계; 2) 천연형의 외피 단백질 일부와 상기 무작위 서열의 올리고뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 융합 단백질을 발현시키는 단계; 3) 상기올리고뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드와 결합할 수 있는 수용체 물질을 처리하는 단계; 4) 수용체에 결합된 펩티드-파아지 입자들을 낮은 pH나 결합 경쟁력 있는 분자를 이용하여 용출시키는 단계; 5) 패닝(panning)에 의하여 용출된 파아지를 숙주 세포 내에서 증폭시키는 단계; 6) 원하는 양을 얻기 위해 상기 방법을 반복하는 단계; 및 7) 패닝에 의해 선별된 파지 클론들의 DNA 서열로부터 활성이 있는 펩티드의 서열을 결정하는 단계로 구성된다.
따라서 L1CAM 특이적인 항-L1CAM 제조방법은 예컨대 인간 항체 라이브러리로부터 L1CAM에 결합하는 항체를 패닝에 의해 골라내는 파지 디스플레이 방법에 의하거나, L1CAM 단백질로 생쥐를 면역시켜 라이브러리를 제조하거나 하이브리도마를 제조하여 L1CAM에 결합하는 항체를 제조하는 방법에 의할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 상기 항체는 대한민국 등록특허 제10-0756051호 및/또는 대한민국 공개특허 제10-2008-0018149호에 기재된 항-L1CAM 항체인 A10-A3이며, 이러한 A10-A3 항체는 상기 공지 문헌에 기재된 바와 같은 방법에 의해 생산될 수 있으며, 바람직하게는 수탁번호 KCTC 10909BP에 의해 분비되어 생산된다.
상기 항-L1CAM 항체는 L1CAM을 특이적으로 인식하는 결합의 특성을 갖는 한, 2개의 중쇄와 2개의 경쇄의 전체 길이를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 항원성 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 항원성 단편이란, 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등이 있다.
또 다른 구체적인 일 양태로서, 상기 항암용 조성물은 상기 (a)로서 L1CAM의 발현을 억제하는 물질을 포함할 수 있다. L1CAM을 발현하는 암세포에서 L1CAM의 발현을 억제하는 물질들을 이용하여 L1CAM의 발현을 억제시키면, 암세포의 성장과 전이 역할을 하는 L1CAM의 작용이 줄어들어, 암치료가 가능하다. 바람직하게는, 상기 L1CAM의 발현을 억제하는 물질은 siRNA, shRNA 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드(antisense oligonucleotide)로 구성되는 군으로부터 선택되고, 더욱 바람직하게는 5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3' 서열(서열번호 1)을 포함하는 siRNA이다.
용어 "siRNA"는 RNA 간섭 또는 유전자 사일런싱(silencing)을 매개할 수 있는 약 20 뉴클레오티드 크기의 작은 핵산 분자를 의미하며, "shRNA"는 siRNA 타겟 서열의 센스 및 안티센스 서열이 5-9개의 염기로 구성된 루프(loop)를 사이에 두고 위치한 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA)를 의미한다. 최근 유전자 수준에서 단백질의 발현을 조절하기 위한 방법으로 RNA 간섭(RNA interference, RNAi) 현상을 이용한 방법이 연구되고 있으며, 일반적으로 siRNA는 상보적인 서열을 갖는 mRNA에 특이적으로 결합하여 단백질 발현을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 조성물에 포함되는 siRNA를 제조하는 방법에는 siRNA를 직접 화학적으로 합성하는 방법(Sui G 등, (2002) Proc Natl Acad Sci USA 99:5515-5520), 인 비트로 전사를 이용한 siRNA의 합성법(Brummelkamp TR 등, (2002) Science 296:550-553) 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 shRNA는 siRNA의 고가의 생합성 비용, 낮은 세포 형질감염 효율로 인한 RNA 간섭 효과의 단시간 유지 등의 단점을 극복하기 위한 것으로 RNA 중합효소 Ⅲ의 프로모터로부터 아데노 바이러스, 렌티 바이러스 및 플라스미드 발현 벡터 시스템을 이용하여 이를 세포 내로 도입하여 발현시킬 수 있으며, 이러한 shRNA는 세포 내에 존재하는 siRNA 프로세싱 효소(Dicer or Rnase Ⅲ)에 의해 정확한 구조를 갖는 siRNA로 전환되어 목적 유전자의 사일런싱을 유도함이 널리 알려져 있다.
용어 "안티센스"는 안티센스 올리고머가 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해 RNA 내의 표적 서열과 혼성화되어, 표적 서열 내에서, 전형적으로 mRNA와 RNA:올리고머 헤테로이중체의 형성을 허용하는, 뉴클레오티드 염기의 서열 및 서브유닛간 백본을 갖는 올리고머를 지칭한다. 올리고머는 표적 서열에 대한 정확한 서열 상보성 또는 근사 상보성을 가질 수 있다. 이 안티센스 올리고머는 mRNA의 번역을 차단 또는 저해하고 mRNA의 스플라이스 변이체를 생산하는 mRNA의 프로세싱 과정을 변화시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 안티센스 올리고머는 L1CAM 유전자의 mRNA에 상보적인 안티센스 올리고머이다.
또한, 본 발명의 조성물은 상기 (b)로서 항암제를 (a)와 병용 투여 하기 위해 포함한다.
용어 "항암제"란 암세포의 각종 대사경로에 작용하여 암세포에 대하여 세포독성(cytotoxicity)이나 성장억제효과(cytostatic effects)를 나타내는 기존의 암 치료에 사용되는 공지의 약제를 총칭하는 것이며, 지금까지 개발된 대사길항제, 식물성 알칼로이드, 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 알킬화제, 항암성 항생물질, 호르몬제 및 기타 약제를 모두 포함하는 것이다. 본 발명에 따른 조성물에 포함되어 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질과 특히 상승 효과를 나타내는 항암제로는 시스플라틴, 카보플라틴 및 헵타플라틴과 같은 시스플라틴(cisplatin)류, 젬시타빈, 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 및 도세탁셀 및 그의 유도체인 파클리탁셀과 같은 탁솔류가 바람직하며, 특히 바람직한 항암제는 시스플라틴이다. 이러한 항암제들은 공지의 방법에 의해 제조하거나 혹은 시판품을 사용할 수 있다.
본 발명에서, 상기 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질과, 항암제는 혼합하여 동시에 투여하는 것도 가능하지만, 각각을 별개로 동시 또는 연쇄적으로, 혹은 시간을 두고 별개로 투여하는 것도 가능하다. 동시에 투여하는 것이 아닌 경우는, 예를 들면 두 유효 성분을 교대로 번갈아 투여하거나 혹은 하나를 계속해서 투여한 후 다른 하나를 투여하는 것도 가능하다.
본 발명에 있어서 조성물은 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질, 및 항암제를 유효 성분으로 함유하고 있으면 되며, 어떤 형태의 약제여도 가능하다. 예를 들면, 두 유효 성분을 포함한 합제를 구성해도 좋고, 각각 단제로서 구성되어도 좋다. 여기에서 합제란, 하나의 제제에 2 가지 이상의 유효 성분을 배합한 것을 말하며, 단제란 하나의 제제에 하나의 유효 성분을 함유한 것을 말하며, 이때 상기 유효 성분들은 각각의 약리, 약동학적 특성에 따라 각기 다른 제형으로 제조되어 합쳐질 수도 있다. 본 발명에 있어서, 두 유효 성분이 단제인 경우의 치료제는 각각 단일로 이용이 가능한 단제를 조합하여 이용하는 약제를 의미한다. 두 유효 성분이 단제인 경우는, 두 성분을 한 번에 갖춘 형태인 키트의 형태일 수도 있다.
또한, 본 발명의 항암용 조성물은, 매일 투여 또는 간헐적으로 투여할 수도 있으며, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 수회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 두 유효 성분이 각각 단제인 경우의 투여 횟수는 같은 횟수일 수도, 다른 횟수일 수도 있다.
본 발명의 항암용 조성물은, 그들만 혹은 이하에서 설명하는 것과 같은 적당한 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 공지의 방법으로 제제화 할 수 있다. 이와 같은 제형의 구체적인 예로서는, 연질캡슐제, 경질캡슐제, 정제, 시럽제 등의 경구제, 주사제 또는 외용제를 들 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체에는 멸균용액, 정제, 코팅정 및 캡슐과 같은 공지된 제형들에 사용되는 표준의 제약학적 담체 중 어느 것이든 포함된다. 전형적으로 이러한 담체는 폴리비닐피롤리돈, 덱스트린, 전분, 밀크, 당, 특정 종류의 클레이, 젤라틴, 스테아린산, 탈크, 식물성 기름 (예를 들면 식용유, 면실유, 코코넛유, 아몬드유, 낙화생유를 들 수 있다) 중성지방산 글리세라이드 등의 유상 에스테르, 광물유, 바세린, 동물유지, 셀룰로오스 유도체(예를 들면 결정셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스를 들 수 있다) 등의 부형제, 또는 기타 다른 공지의 부형제를 포함한다. 이러한 담체에는 또한 산화방지제, 습윤제, 점도안정제, 풍미제, 색소 첨가제 및 다른 성분들이 포함될 수 있다. 이러한 담체를 함유하는 조성물은 주지된 방법에 의해 제형화 될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 암 치료를 위해 약학적 유효량으로 투여될 수 있다. 전형적인 투여량 수준 및 (a) 및 (b) 물질의 비율은 표준 임상적 기술을 사용하여 최적화할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 항암용 조성물을 이용하여 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명의 치료방법은 상기 항암용 조성물을 약학적 유효량으로 인체 내에 투여하는 것을 포함한다. 상기 항암용 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의해 투여된다. 비 경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다. 바람직한 투여방식은 정맥 주사, 피하주사, 피내 주사제, 근육주사 및 점적 주사이다.
앞서 언급한 바와 같이, 상기 물질들의 투여량은 다양한 요소에 의해 달라질 수 있으며, 그 투여 경로 또한 환자의 연령, 투여기간, 체중, 질환의 중증도, 환자의 의식 여부, 병용 약물의 종류 등과 같은 다양한 요소에 의해 경구 또는 비경구의 다양한 투여 경로를 사용할 수 있다. 또한, 각각을 별개로 동시 또는 연쇄적으로, 혹은 시간을 두고 별개로 투여하는 것도 가능하다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 암 치료용 의약을 제조하기 위한 상기 항암용 조성물의 용도에 관한 것이다.
구체적으로, 상기 암은 본 조성물에 의해 치료되는 암은 제한없이 포함될 수 있으나, 그 예로 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 또는 췌장암을 들 수 있다.
상기 암 치료용 의약의 제조는 상기에서 언급한 방법 뿐만 아니라, 당해 기술 분야에 있어서 주지 또는 공지의 기술에 의해 제조될 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 함암용 조성물의 암 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
구체적으로, 상기 암은 본 조성물에 의해 치료되는 암은 제한없이 포함될 수 있으나, 그 예로 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 또는 췌장암을 들 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 본 발명자는 L1CAM을 발현하는 암세포들에게 항-L1CAM 항체와 항암제를 병용 투여시 각각을 단독으로 투여했을 때보다 효과적으로 암세포증식이 억제되는 지 알아보기 위해서, L1CAM의 작용을 저해하는 단일클론항체인 A10-A3와, 시스플라틴(cisplatin), 젬시타빈 및 5-플루오로우라실을 병용 투여한 결과, 최대 80%까지 암세포의 증식을 억제함을 확인함으로써, 각각의 단독 투여시보다 탁월한 상승 효과를 나타냄을 확인하였다. 또한, L1CAM을 발현하는 담도암 세포주에서 L1CAM의 발현을 넉다운(knockdown)시키기 위해 L1CAM에 대한 특이적인 siRNA를 형질 도입하여 배양한 후에 세포증식 실험과 세포사멸 실험을 실시한 결과 담도암 세포주에서 L1CAM의 발현을 억제 시켰을 때, 시스플라틴(cisplatin)에 의한 증식 저해효과 및 세포사멸 유도의 상승 효과가 있음을 확인하였다.
이러한 본 발명에 따른 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 조성물을 투여하는 경우, 이들 각각을 단독으로 투여했을 때보다 탁월한 상승적인 치료효과를 나타내어 암의 치료, 특히 L1CAM을 발현하는 암종으로 알려진 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 흑색종, 신경아세포종, 담도암, 폐암 및 췌장암과 같은 다양한 암에 대해 효과적이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 암세포의 배양
암세포주는 모두 10% 우태아혈청(Gibco사)을 함유하는 다음과 같은 배지를 이용하여 5% 이산화탄소가 유지되는 37℃ 항온 배양기에서 배양하였다. SCK(담도암 세포주), SK-OV3 (난소암 세포주)는 DMEM(Well GENE사) 배지를 이용하였다. SCK 세포주는 김대곤박사(전북대학교 의과대학)로부터 얻었고, 난소암 암세포주는 ATCC로부터 구입하였다.
실시예 2. L1CAM에 대한 항체와 시스플라틴(cisplatin)의 병용투여에 의한 암세포 증식저해 및 암세포 사멸의 상승효과 분석
L1CAM을 발현하는 암세포들에게 L1CAM의 작용을 저해하는 단일클론항체인 A10-A3와 시스플라틴(cisplatin)을 병용 투여 시 각각을 단독으로 투여했을 때보다 효과적으로 세포증식이 억제되는 지 알아보기 위해서, 세포증식 실험을 수행하였다.
항-L1CAM 항체로서 사용한 A10-A3 항체는 대한민국 공개특허 제10-2008-0018149호에 개시된 방법에 의해 제조하였다.
각각의 암세포들을 3 ml의 배지 내에 2 x 105 cells 씩 계수하여 6 well plate에서 배양하고, 시스플라틴(cisplatin) 및 A10-A3 (10 μg/ml)를 단독 혹은 병용 처리한 후, 세포를 37℃ CO2 반응기에서 72시간 동안 배양하였다. 그리고 세포를 회수하여 0.2% 트리판 블루(Tryphan Blue) 용액에서 죽은 세포와 살아있는 세포를 계수하여, 전체 세포 중에 살아있는 세포를 백분율로 계산하였다. 그 결과, 시스플라틴(cisplatin) 및 A10-A3 (10 μg/ml)를 단독으로 처리한 군에서 이들 암세포들의 증식이 30-50% 저해되는 것을 확인 할 수 있었으며, 병용처리 시에는 최대 80% 정도의 세포증식이 억제되는 상승 효과를 확인할 수 있었다 (도 1의 (A)).
또한 L1CAM에 대한 A10-A3와 시스플라틴(cisplatin)의 병용 투여 시 보다 효과적으로 세포사멸이 유도되는 지 알아보기 위해서, 세포사멸 실험을 수행하였다. 본 실험은 세포가 사멸을 일으키면 DNA가 조각나는 원리를 이용하였다. 각각의 암세포주들을 100 μl의 배지 내에 2 x 104cells씩 계수하여 96 웰 플레이트(well plate)에서 배양하고, 시스플라틴(cisplatin) 및 A10-A3 (10 μg/ml)를 단독 혹은 병용 처리한 후, 24시간을 배양 하였다. 24시간 후, 배지를 제거하고 PBS 완충용액으로 세척한 다음, 세포용해액(RIPA buffer)을 37℃에서 30분간 반응 시켰다. 이렇게 용해된 세포액에 DNA 특이적인 바이오틴(biotin)을 결합시키고 스트렙타비딘(streptavidin)이 결합 되어있는 96 웰 플레이트에 20 μl를 옮긴 후, 여기에 80 μl의 immunoreagent를 반응시켜 OD 405nm에서 흡광도를 확인하였다. 그 결과, A10-A3와 시스플라틴(cisplatin)을 병용처리 하였을 때, 단독으로 처리한 군에 비해서 세포사멸이 뚜렷이 증가되었음을 확인 할 수 있었다 (도 1의 (B)).
상기 결과는 L1CAM에 대한 항체와 시스플라틴(cisplatin)의 병용 투여 시 암세포의 치료 효능을 증가시킬 수 있음을 제시하고 있다.
실시예 3. 생쥐 동물 모델에서 A10-A3와 시스플라틴(cisplatin)의 병용 투여에 의한 암 성장 저해효과 분석
누드 마우스 Balb/c nu/nu를 중앙실험동물사를 통해 SLC (일본)에서 구입하였다. 주령 및 체중은 6~8주령 및 18~22g으로 한국생명공학연구원에서 1주일 순화시켰다. 그 후, 40마리의 피하에 1x107cells의 SCK 세포를 이식하였으며, 1주일 후, 종양 용적이 100-200mm3되었을 때, 무작위로 10마리씩 4개의 군으로 분리 하였다. 그리고 A10-A3는 10 mg/kg 농도로 1주일에 3회씩 처리하였으며, 시스플라틴(cisplatin)은 3 mg/kg 농도로 1주일에 2회씩 처리 하였다. 대조군에는 A10-A3 대신 mIgG를 같은 양으로 처리 하였고, 시스플라틴(cisplatin) 대신 식염수를 같은 양 처리 하였다. 누드 마우스의 질량과 종양 무게를 1주일에 3회씩 측정하였다. 그 결과, A10-A3와 시스플라틴(cisplatin)을 단독으로 처리한 군에서는 약 30% 정도의 증식 저해 효과를 확인 할 수 있었던 반면, 병용 투여한 군에서는 70% 이상의 뚜렷한 저해 효과를 확인 할 수 있었다 (도 2).
실시예 4. L1CAM에 대한 항체와 젬시타빈(gemcitabine)의 병용투여에 의한 암세포 증식 저해효과 분석
상기 <실시예 2>의 방법과 동일하게 A10-A3와 젬시타빈(gemcitabine)을 병용 투여 시 각각을 단독으로 투여했을 때보다 효과적으로 세포증식이 억제되는 지 분석하였다. 그 결과, 젬시타빈 및 A10-A3 (10 μg/ml)를 단독으로 처리한 군에서 이들 암세포들의 증식이 20-25% (담도암, SCK) 혹은 20-40% (난소암, SK-OV3) 저해되는 것을 확인 할 수 있었으며, 병용처리 시에는 40-60% 정도의 세포증식이 억제되는 상승 효과를 확인할 수 있었다 (도 3의 (A)).
상기 결과는 L1CAM에 대한 항체와 젬시타빈의 병용 투여 시 암세포의 치료 효능을 증가시킬 수 있음을 제시하고 있다.
실시예 5. L1CAM에 대한 항체와 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)의 병용투여에 의한 암세포 증식 저해효과 분석
상기 <실시예 2>의 방법과 동일하게 A10-A3와 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)을 병용 투여 시 각각을 단독으로 투여했을 때보다 효과적으로 세포증식이 억제되는 지 분석하였다. 그 결과, 5-플루오로우라실(5-fluorouracil) 및 A10-A3 (10 μg/ml)를 단독으로 처리한 군에서 이들 암세포들의 증식이 20-40% (담도암, SCK) 혹은 20-30% (난소암, SK-OV3) 저해되는 것을 확인할 수 있었으며, 병용처리 시에는 40-50% 정도의 세포증식이 억제되는 상승 효과를 확인할 수 있었다 (도 4).
상기 결과는 L1CAM에 대한 항체와 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)의 병용 투여 시 암세포의 치료 효능을 증가시킬 수 있음을 제시하고 있다.
실시예 6-1. 역전사 연쇄 중합 반응(RT-PCR)에 의한 L1CAM의 mRNA 발현 확인
담도암 세포주 SCK에서 L1CAM의 발현을 넉다운(knockdown)시키기 위해 L1CAM에 대한 특이적인 siRNA (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3', 서열번호 1)와 비특이적인 siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', 서열번호 2)를 각각 형질도입한 후, 72시간 동안 배양하였다. 배양된 담도암세포의 전체 RNA를 분리 하기 위해서 1ml Trizol reagent(Invitrogen 사)를 상온에서 5분 동안 처리하였다. 여기에 0.2ml chloroform을 처리하여 15회 정도 강하게 흔들어 준 후, 상온에서 3분 반응시켰다. 4℃에서 14000 rpm으로 15분 동안 원심 분리하여, 상층의 투명 부분 400μl를 다른 튜브로 옮기고 같은 양의 이소프로판올을 처리한 후, 상온에서 10분 반응시켰다. 다시 4℃에서 14000 rpm으로 15분 동안 원심 분리하여, 상층액을 버리고 75% 에탄올로 세척하였다. 이렇게 추출한 RNA 2ug에 oligo(d)T, dNTP, RNase 저해제와 역전사 효소를 넣어 42℃에서 1시간 반응 시켜 cDNA를 합성하였다. 이 cDNA에 L1CAM 프라이머, dNTP, Taq 중합효소를 이용하여 30초/95℃, 30초/56℃ 및 30초/72℃ 30회 연쇄 중합반응을 시키고, 72℃에서 10분간 중합반응을 수행하였다. 그 결과, L1CAM에 대한 비특이적인 siRNA를 처리한 대조군에 비해서 특이적인 siRNA를 처리한 군에서 L1CAM의 전체 발현양이 감소한다는 것을 확인하였다 (도 5의 (A)의 위쪽 도면)
실시예 6-2. 웨스턴 블러팅(Western blotting)에 의한 L1CAM의 단백질 발현 확인
담도암 세포주 SCK에서 L1CAM의 발현을 넉다운(knockdown)시키기 위해 L1CAM에 대한 특이적인 siRNA (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3', 서열번호 1)와 비특이적인 siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', 서열번호 2)를 각각 형질 도입하여 72시간 동안 배양한 후, 웨스턴 블러팅을 이용하여 단백질 수준에서 L1CAM의 발현을 확인하였다. siRNA를 처리한 세포주의 전체 단백질을 분리하기 위하여 500 μl 세포 용해액(RIPA buffer)을 처리한 후, 여기서 얻어진 단백질들을 10% SDS-PAGE에서 분리하였고, 니트로셀룰로즈 막으로 옮겨 웨스턴 블럿을 수행하였다. 니트로셀룰로즈 막을 5% 탈지유(skim milk)가 함유된 PBST(PBS + 0.1% Tween 20) 완충용액에서 1시간 동안 반응 시킨 후, 상기 PBST 완충용액으로 두 차례 이상 세척하였다. 상기 반응된 니트로셀룰로즈 막을 공지의 항-L1CAM 항체 A10-A3를 1차 항체로 첨가하여 2 시간 동안 반응시켰다. 상기 PBST 완충용액으로 5차례의 세척 후 항-마우스 IgG의 HRP(horseradish peroxidase) conjugate (1:5000 Sigma)로 1 시간 반응시켰다. 다시 PBST 완충용액으로 5차례의 세척 후, ECL 검출 시약(Amersham biosciences)으로 발색시켰다. 그 결과, L1CAM에 대한 비특이적인 siRNA를 처리한 대조군에 비해서 특이적인 siRNA를 처리한 군에서 L1CAM의 전체 단백질 발현양이 감소되었음을 확인하였다 (도 5의 (A) 아래 도면).
실시예 6-3. L1CAM의 발현을 억제하는 siRNA와 항암제 병용투여에 의한 세포증식 억제효능 및 세포사멸 유도효과 분석
L1CAM을 발현하는 담도암 세포주 SCK에서 L1CAM의 발현을 넉다운(knockdown)시키기 위해 L1CAM에 대한 특이적인 siRNA (5'-GCCAATGCCTACATCTACGTT-3', 서열번호 1)와 비특이적인 siRNA (5'-CAGTCGCGTTTGCGACTGG-3', 서열번호 2)를 각각 형질 도입하여 72시간 동안 배양하였다. 그 후에 <실시예 2>에서 실시했던 방법으로 세포증식 실험과 세포사멸 실험을 실시하였다. 도 5의 (B) 및 (C)에 나타난 바와 같이, 담도암 세포주 SCK에서 L1CAM의 발현을 억제 시켰을 때, 시스플라틴(cisplatin)에 의한 증식 저해효과 및 세포사멸 유도효과가 증가하는 것을 확인 할 수 있었다. 상기 결과들은 L1CAM의 작용을 억제하는 항체뿐만 아니라, 발현을 억제하는 siRNA와 항암제를 병용 투여하였을 때에도 암치료 상승효능이 있음을 제시하고 있다.
본 발명에 따른 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물을 투여하는 경우, 그에 포함되는 L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 동시에, 별도로 또는 순차적으로 병용함으로써, 이들 물질을 단독으로 처리한 각각의 약리학적 효과에 비해 훨씬 강력하면서도 유의적인 암세포 성장 및 사멸 효과를 나타내어 암의 치료, 특히 L1CAM을 발현하는 암종으로 알려진 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 흑색종, 신경아세포종, 담도암, 폐암 및 췌장암과 같은 다양한 암에 대해 매우 유용하다.
Figure PCTKR2009007056-appb-I000001
Figure PCTKR2009007056-appb-I000002

Claims (13)

  1. 하기의 (a) 및 (b)를 동시에, 별도로 또는 순차적으로 병용하기 위해 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물:
    (a) L1CAM의 활성 또는 발현을 억제하는 물질; 및
    (b) 항암제
    이때, 상기 L1CAM의 활성을 억제하는 물질은 L1CAM 특이적인 항-L1CAM 항체, 그의 항원성 결합 단편, 및 항-L1CAM 항체 또는 그 항원성 결합 단편의 변이체로 이루어진 군에서 선택되는 것이고, L1CAM의 발현을 억제하는 물질은 L1CAM의 발현을 억제하는 올리고 뉴클레오티드이며,
    상기 항암제는 시스플라틴(cisplatin), 젬시타빈(gemcitabine), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 도세탁셀 및 파클리탁셀에서 선택되는 것을 특징으로 한다.
  2. 제1항에 있어서, L1CAM의 발현을 억제하는 올리고 뉴클레오티드는 L1CAM을 암호화하는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA 및 shRNA로 이루어진 군에서 선택되는 것인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항-L1CAM 항체가 수탁번호 KCTC 10909BP의 하이브리도마에 의해 분비되는 A10-A3 항체인 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 siRNA는 서열번호 1로 정의되는 서열로 구성되는 것인 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항암제는 시스플라틴인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 암세포의 성장을 억제하거나 암세포를 사멸시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 암은 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 및 췌장암으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항암용 조성물은 상기 (a) 및 (b)를 각각 포함하는 독립한 단제의 형태로 제형화 된 것임을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제1항의 항암용 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 암은 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 및 췌장암으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
  11. 암 치료용 의약을 제조하기 위한 제1항의 조성물의 용도.
  12. 제11항에 있어서, 상기 암은 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 및 췌장암으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 용도.
  13. 담도암, 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 대장암, 난소암, 흑색종, 신경아세포종, 폐암 또는 췌장암의 치료를 위한 제1항의 조성물의 용도.
PCT/KR2009/007056 2008-11-27 2009-11-27 Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물 WO2010062143A2 (ko)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13/131,445 US20110293600A1 (en) 2008-11-27 2009-11-27 Anticancer Composition Comprising Antitumor Agent and Substance Having Inhibitory Effects on L1CAM Activity and Expression
CN2009801545949A CN102325547A (zh) 2008-11-27 2009-11-27 含有抗癌剂和对l1cam的活性和表达具有抑制作用的物质的抗癌组合物
CA2750147A CA2750147A1 (en) 2008-11-27 2009-11-27 Anticancer composition comprising antitumor agent and substance having inhibitory effects on l1cam activity and expression
JP2011538553A JP2012509935A (ja) 2008-11-27 2009-11-27 Ｌ１ｃａｍの活性または発現を抑制する物質および抗癌剤を含む抗癌用組成物
EP09829350A EP2357003A4 (en) 2008-11-27 2009-11-27 COMPOSITION AGAINST CANCER WITH AN ANTI-TUMOR ACTIVE SUBSTANCE AND A SUBSTANCE CONDENSING THE L1CAM ACTIVITY AND EXPRESSION
AU2009320542A AU2009320542A1 (en) 2008-11-27 2009-11-27 Anticancer composition comprising antitumor agent and substance having inhibitory effects on L1CAM activity and expression

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2008-0118921 2008-11-27
KR1020080118921A KR20100060351A (ko) 2008-11-27 2008-11-27 Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를포함하는 항암용 조성물

Publications (3)

Publication Number Publication Date
WO2010062143A2 true WO2010062143A2 (ko) 2010-06-03
WO2010062143A3 WO2010062143A3 (ko) 2010-09-23
WO2010062143A9 WO2010062143A9 (ko) 2010-11-25

Family

ID=42226277

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2009/007056 WO2010062143A2 (ko) 2008-11-27 2009-11-27 Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20110293600A1 (ko)
EP (1) EP2357003A4 (ko)
JP (1) JP2012509935A (ko)
KR (1) KR20100060351A (ko)
CN (1) CN102325547A (ko)
AU (1) AU2009320542A1 (ko)
CA (1) CA2750147A1 (ko)
WO (1) WO2010062143A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011004379A1 (en) * 2009-07-10 2011-01-13 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Compositions and methods for treating cancer

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101271964B1 (ko) * 2010-07-08 2013-06-07 강원대학교산학협력단 담낭암 치료용 약제학적 조성물 및 이를 이용한 담낭암의 성장, 전이 억제 및 치료 방법
JP6703947B2 (ja) * 2013-09-18 2020-06-03 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター がん転移の阻害
EP3493846B1 (en) 2016-08-02 2025-05-07 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Treating metastatic cancer and model systems for metastatic disease
WO2018124851A1 (ko) * 2016-12-30 2018-07-05 강원대학교 산학협력단 L1cam 단백질에 특이적으로 결합하는 항체; 및 피리미딘 유사체 및/또는 플라틴계 항암제를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
AU2023370350A1 (en) * 2022-10-26 2025-05-29 Curon Biopharmaceutical (Shanghai) Co., Limited Humanized l1cam antibody-drug conjugate

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0253738A1 (fr) 1986-07-17 1988-01-20 Rhone-Poulenc Sante Dérivés du taxol, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO1992009589A1 (fr) 1990-11-23 1992-06-11 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Procede de preparation de derives du taxane, nouveaux derives obtenus et compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1172654A1 (en) 2000-07-10 2002-01-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Diagnostic method based on the detection of the L1 adhesion molecule for ovarian and endometrial tumors
US20040115206A1 (en) 2002-10-24 2004-06-17 Thomas Primiano Antibody-mediated induction of tumor cell death
KR20070084868A (ko) 2006-02-22 2007-08-27 삼성전자주식회사 무선 수신장치에서 자가 보상방법
KR100756051B1 (ko) 2006-04-03 2007-09-07 한국생명공학연구원 Ｌ1ｃａｍ 단백질에 대한 새로운 단일클론항체, 이를분비하는 하이브리도마 및 이의 제조방법
KR20080018149A (ko) 2006-08-23 2008-02-27 한국생명공학연구원 담도암 치료용 약제학적 조성물 및 이를 이용한 담도암의성장, 전이 억제 및 치료 방법

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008046459A1 (en) * 2006-10-16 2008-04-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Treatment of chemotherapy- or radiotherapy-resistant tumors using an l1 interfering molecule
WO2008046529A1 (en) * 2006-10-16 2008-04-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Treatment of chemotherapy- or radiotherapy-resistant tumors using an l1 interfering molecule
PT2170956E (pt) * 2007-06-15 2015-02-05 Medigene Ag Tratamento de tumores utilizando um anticorpo anti-l1 específico

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0253738A1 (fr) 1986-07-17 1988-01-20 Rhone-Poulenc Sante Dérivés du taxol, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
WO1992009589A1 (fr) 1990-11-23 1992-06-11 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Procede de preparation de derives du taxane, nouveaux derives obtenus et compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1172654A1 (en) 2000-07-10 2002-01-16 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Diagnostic method based on the detection of the L1 adhesion molecule for ovarian and endometrial tumors
US20040259084A1 (en) 2000-07-10 2004-12-23 Peter Altevogt Diagnostic and therapeutic methods based on the l1 adhesion molecule for ovarian and endometrial tumors
US20040115206A1 (en) 2002-10-24 2004-06-17 Thomas Primiano Antibody-mediated induction of tumor cell death
KR20070084868A (ko) 2006-02-22 2007-08-27 삼성전자주식회사 무선 수신장치에서 자가 보상방법
KR100756051B1 (ko) 2006-04-03 2007-09-07 한국생명공학연구원 Ｌ1ｃａｍ 단백질에 대한 새로운 단일클론항체, 이를분비하는 하이브리도마 및 이의 제조방법
KR20080018149A (ko) 2006-08-23 2008-02-27 한국생명공학연구원 담도암 치료용 약제학적 조성물 및 이를 이용한 담도암의성장, 전이 억제 및 치료 방법

Non-Patent Citations (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREWS, P.A., HOWELL, SB., CANCER CELLS., 1990
ARLT ET AL., CANCER RES., vol. 66, 2006, pages 936 - 943
BRUMMELKAMP T R ET AL., SCIENCE, vol. 296, 2002, pages 550 - 553
FRANCO CAVELLI ET AL.: "Textbook of Medical Oncology", 1997, MARTIN DUNITZ LTD., pages: 4623
GAVERT ET AL., J. CELL BIOL., vol. 168, 2005, pages 633 - 642
GUTWEIN ET AL., FASEP J., vol. 17, no. 2, 2003, pages 292 - 4
KELLEY, S.L., ROZENCWEIG, M, EUR. J. CLIN. ONCOL., vol. 25, 1989, pages 1135 - 1140
KOEHER, MILSTEIN, NATURE, vol. 256, 1976, pages 495
MALET-MARTINO M ET AL.: "Clinical studies of three oral prodrugs of 5-fluorouracil (Capecitabine, UFT, S-1): A review", ONCOLOGIST, vol. 4, no. 4, 2002, pages 228 - 323
PEREZ, R.P. ET AL., PHARMACOL. THER., vol. 48, 1990, pages 19 - 27
PRIMIANO ET AL., CANCER CELL., vol. 4, no. 1, 2003, pages 41 - 53
STOECK A. ET AL., GYNECOL ONCOL., vol. 104, no. 2, 2007, pages 461 - 469
SUI G., PROC NATL ACAD SCI USA, vol. 99, 2002, pages 5515 - 5520
TAKEDA ET AL., J. NEUROCHEM., vol. 66, 1996, pages 2338 - 2349
THIES ET AL., EUR. J. CANCER, vol. 38, 2002, pages 1708 - 1716
TIMMER-BOSSCHA, H. ET AL., BR. J. CANCER, vol. 66, 1992, pages 227 - 238

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011004379A1 (en) * 2009-07-10 2011-01-13 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Compositions and methods for treating cancer

Also Published As

Publication number Publication date
WO2010062143A3 (ko) 2010-09-23
KR20100060351A (ko) 2010-06-07
US20110293600A1 (en) 2011-12-01
AU2009320542A1 (en) 2011-06-30
EP2357003A2 (en) 2011-08-17
CN102325547A (zh) 2012-01-18
EP2357003A4 (en) 2013-01-23
WO2010062143A9 (ko) 2010-11-25
CA2750147A1 (en) 2010-06-03
JP2012509935A (ja) 2012-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2010062143A2 (ko) Ｌ１ｃａｍ의 활성 또는 발현을 억제하는 물질 및 항암제를 포함하는 항암용 조성물
EA019595B1 (ru) СПЕЦИФИЧНЫЕ ИНГИБИТОРЫ PDGFRβ
JP7453915B2 (ja) 栄養製品
TWI855989B (zh) 藉由投予抗her3抗體－藥物複合體之egfr－tki抗性之非小細胞肺癌的治療方法
UA128575C2 (uk) Способи та композиції для прогнозування терапевтичної ефективності лікування онкологічних захворювань та прогнозу онкологічних захворювань
CN115135322A (zh) 包含哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号传导抑制剂作为有效成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物
JP2003527441A (ja) 細胞周期を阻止する薬剤及び抗体を含む医薬
Wang et al. Epidermal growth factor receptor vIII enhances tumorigenicity and resistance to 5-fluorouracil in human hepatocellular carcinoma
WO2013165061A1 (ko) Ｓｃｆ 또는 이의 수용체를 억제하는 물질을 포함하는 혈관 투과성 관련 질환의 치료 또는 예방용 조성물
KR102352127B1 (ko) Mitf 억제제를 유효성분으로 함유하는 골수-유래 억제세포 저해용 조성물
AU2018350983A1 (en) Beta catenin nucleic acid inhibitor molecule
WO2023068820A1 (ko) 암 치료 또는 예방용 조성물
WO2022031859A2 (en) Methylmalonic acid and metabolism thereof is a cancer biomarker and target
KR101855900B1 (ko) Setd1a의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 함유하는 항암제 내성 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN101712960A (zh) Mac-2BP肿瘤抗原基因、蛋白、抗体及其用途
WO2024177440A1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 균주를 포함하는 항암보조제
KR20140144934A (ko) Ｃｔｈｒｃ１의 발현 및 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 췌장암 치료 및 전이억제용 조성물
KR102654518B1 (ko) Lsp1 결핍 t 세포
KR102739632B1 (ko) 항-cd20 키메릭 항원 수용체를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이의 제조 방법
KR20200022187A (ko) Nono의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 방사선 민감성 증진용 조성물
WO2022075482A1 (ja) がん治療用医薬
WO2025017003A1 (en) Method for boosting the efficacy of immunotherapy and enhancing the host immune response
KR20250004821A (ko) 항체-약물 접합체와 ezh1 및/또는 ezh2 억제제의 조합
WO2016064034A1 (en) Composition for inhibiting cancer stem cell growth and cancer metastasis containing tspyl5 expression or activation inhibitor
KR20230132715A (ko) Nmur2 억제제를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980154594.9

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09829350

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2750147

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011538553

Country of ref document: JP

Ref document number: 2750147

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009829350

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2009320542

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20091127

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13131445

Country of ref document: US

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01E

Ref document number: PI0921323

Country of ref document: BR

ENPW Started to enter national phase and was withdrawn or failed for other reasons

Ref document number: PI0921323

Country of ref document: BR