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WO2009049734A2 - Kosmetisches verfahren zum erhöhen der pigmentierung von haut unter verwendung von melanozytenvorläuferzellen - Google Patents

Kosmetisches verfahren zum erhöhen der pigmentierung von haut unter verwendung von melanozytenvorläuferzellen Download PDF

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Publication number
WO2009049734A2
WO2009049734A2 PCT/EP2008/007684 EP2008007684W WO2009049734A2 WO 2009049734 A2 WO2009049734 A2 WO 2009049734A2 EP 2008007684 W EP2008007684 W EP 2008007684W WO 2009049734 A2 WO2009049734 A2 WO 2009049734A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
skin
cells
precursor cells
melanocyte
skin area
Prior art date
Application number
PCT/EP2008/007684
Other languages
English (en)
French (fr)
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WO2009049734A3 (de
Inventor
Thomas Hunziker
Original Assignee
Euroderm Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Euroderm Gmbh filed Critical Euroderm Gmbh
Priority to EP08802219.9A priority Critical patent/EP2209463B1/de
Priority to US12/682,988 priority patent/US20100310526A1/en
Priority to CA2702771A priority patent/CA2702771A1/en
Priority to AU2008314236A priority patent/AU2008314236A1/en
Publication of WO2009049734A2 publication Critical patent/WO2009049734A2/de
Publication of WO2009049734A3 publication Critical patent/WO2009049734A3/de

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
    • C12N5/0626—Melanocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
    • A61K8/985—Skin or skin outgrowth, e.g. hair, nails
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/04—Preparations for care of the skin for chemically tanning the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells

Definitions

  • the present invention relates to a method for increasing the pigmentation of skin according to the preamble of claim 1. It further relates to the use of melanocyte progenitor cells according to claim 7 and a method for producing a suspension according to claim 11.
  • the object according to the invention is achieved by a method having the features of claim 1, by the use of melanocyte precursor cells according to claim 7 and by a method according to claim 11.
  • a method of enhancing skin pigmentation which comprises applying melanocyte progenitor cells from hair root sheaths of a first skin area of a donor to a second skin area of a recipient.
  • the inventive method serves the cosmetic purpose of
  • the method according to the invention of claim 1 thus serves a non-therapeutic purpose.
  • melanocyte progenitor cells or stem cells from hair root sheaths, in particular from epithelial hair root sheaths, of a first skin area to a second skin area serves to increase the pigmentation of the second skin area by pigment formation on the second skin area by forming in particular melanocytes from the precursor cells with their known contribution to pigmentation of the skin.
  • the pigmentation is correspondingly changeable to the external circumstances-such as, for example, the strength or the duration of a solar irradiation-and thus adapts cosmetically advantageously in a natural manner to the pigmentation of the skin area surrounding the second skin area.
  • melanocyte precursor cells in contrast to the application of, for example, interfollicular melanocytes, also has the advantage of comparatively unlimited availability. While the extraction of melanocytes is usually accompanied by a removal of skin and thus comes only to increase the pigmentation of a limited skin area in question - and also associated with a surgical intervention in the integrity of the skin at the donor site - melanocyte precursor cells can be relatively simple and in large quantities obtained from hair root sheaths. The Application of melanocyte progenitor cells thus implies their advantageously high availability.
  • the application can be carried out, for example, by means of a suspension with 10 2 -10 9 , in particular with 10 5 -10 7 cells / ml, for example by means of syringe or spray or in a biocompatible fleece.
  • the cells can be used as vital or growth-arrested cells (eg growth-arrested by means of mitomycin C or irradiation) or else as cell extracts (such as, for example, lyophilisates, sonicates). Media conditioned by these cells can also be used for this purpose.
  • a biocompatible solution eg PBS, fibrin
  • a biocompatible carrier eg hyaluronan, collagen
  • the cells can be used as vital or growth-arrested cells (eg growth-arrested by means of mitomycin C or irradiation) or else as cell extracts (such as, for example, lyophilisates, sonicates). Media conditioned by these cells can also be used for this purpose.
  • melanocyte progenitor cells further implies their advantageously simple and thus repeatedly feasible extraction.
  • the process of obtaining these melanocyte precursor cells prior to their application can be performed comparatively easily and painlessly.
  • This process also carries no complication risk.
  • the hair used for cell production for example, by plucking of head hair, in particular of
  • Anagenhaaren in particular be won by the Capillitium, which means a further advantage over the use of cells of other origin, especially of interfollicular melanocytes.
  • the melanocyte progenitor cells can come from a donor and be applied to this again.
  • the first skin area and the second skin area can thus be skin areas of one and the same animal.
  • the melanocyte precursor cells may also be derived from a donor and applied to a different recipient. It is irrelevant whether donor and recipient human or animal are. A transmission from animal to human and vice versa is included in the invention.
  • “melanocyte progenitor cells” are understood as meaning both autologous and allogeneic and xenogenic melanocyte precursor cells or stem cells.
  • precursor cells can be done by simply applying to the skin.
  • the cells by means of z.
  • fibrin glue on the second skin area and protected with a Okissesions ver.
  • Embodiment as an additional step on the recovery of the melanocyte progenitor cells.
  • winning in the first instance means separating the melanocyte precursor cells from the first skin area.
  • it may also comprise a detachment of the melanocyte progenitor cells from the first skin area.
  • This release can, for example, a simple plucking of hair, in particular
  • Anagen hairs from the scalp include.
  • Melanocyte progenitor cells in particular also originate from this recipient himself.
  • the donor and recipient can thus be identical. If this is the case, there is no need for, or diminished, efforts that typify or match due to genetic differences between the donor and the donor Affect recipients. In addition, there are no risks of transmission - eg infections - from the donor to the recipient.
  • the step of "winning” can also be a step or a plurality of
  • Count steps by which the cells obtained are prepared for their application This can be done by preparing a melanocyte precursor cell suspension directly or after in vitro propagation.
  • this suspension may comprise biocompatible substances such as PBS, and / or fibrin and / or a biocompatible carrier such as, for example, hyaluronan or collagen.
  • keratinocyte precursor cells are additionally applied. This can be done simultaneously with the step of applying the
  • Melanocyte progenitor cells take place.
  • the keratinocyte and the melanocyte progenitor cells can also be applied offset in time.
  • what has been stated above for obtaining the melanocyte precursor cells also applies to the keratinocyte precursor cells.
  • what has been said above about the origin of the cells (animal, human, autogenic, autologous, etc.) applies to the keratinocyte precursor cells.
  • An advantage which can be achieved in each case by means of the method according to the invention of these last two embodiments is that the common and possibly simultaneous use of melanocyte progenitor cells and keratinocyte precursor cells leads to favored growth after their common application to the second skin area.
  • the inventors of the present method attribute this to chemical, biochemical and / or biological interactions between said progenitor cell types. You could observe that this advantage already occurs when the natural mixing ratio of keratinocyte progenitor cells to melanocyte progenitor cells, as it is for example present in the hair root sheaths of the first skin area, is also maintained in the mixture of these cells applied to the second skin area.
  • Preparing the second skin area may include, for example, removing the epidermis, or parts thereof, of the second skin area.
  • the latter is possible, for example, by means of dermabrasion or superficial laser application with the associated advantages known to those skilled in the art.
  • Preparing can also include the application of a suitable solution.
  • a suitable solution An example of this is a fibrin solution which prepares the second area of the skin for the later uptake of the precursor cells and for their better adhesion and, above all, growth on the second area of the skin.
  • the precursor cells applied to the second skin area are stimulated to accelerate the formation of pigments.
  • Such stimulation can be done by means of UV exposure. This activates the transferred melanocyte progenitor cells and can, for. B. by means of broadband UV, narrow band UVB, PUVA or excimer laser irradiation.
  • This stimulation leads advantageously to a pigmentation and the structure of the epidermal pigment unit.
  • a stimulation for example, by means of ultraviolet exposure can take place once or repeatedly.
  • the irradiation should advantageously be below the erythema threshold. Twice irradiation per week until the desired pigmentation of the second area of the skin has been found to be effective. More frequent or less frequent irradiation is also possible.
  • the object according to the invention is furthermore achieved by the use of melanocyte precursor cells according to the features of claim 7.
  • Advantageous further developments are also the subject matter of the subclaims.
  • the present invention further provides a method for manufacturing a
  • the progenitor cells - be it the melanocyte progenitor cells or keratinocyte progenitor cells - to solve enzymatically from the hair root sheath of a hair removed.
  • the enzymatic detachment can be carried out, for example, by means of a trypsin / EDTA solution.
  • This solution may be 0.8% and room temperature, for example. 20 0 C, have.
  • the solution causes a detachment of the epithelial cells from the hair shaft.
  • An advantage of this procedure is, in particular, that the potential use of enzymes can be used to avoid an adverse effect on, for example, the treated progenitor cells.
  • the enzymatic detachment is therefore particularly gentle on the cells to be recovered.
  • steps of this method include stopping enzymatic detachment by the addition of human serum, centrifuging the suspension to obtain a sediment, and resuspending the cell-containing sediment in a thrombin solution, which provides for immediate fixation of the applied cells in a thin layer Allow application to previously applied fibrinogen and thus allows a homogeneous, non-occlusive application in each body region.
  • the method comprises in further preferred embodiments - each independently of one another - the steps: transferring the precursor cells or the suspension or the sediment into a biocompatible solution, introducing the precursor cells or the suspension or the sediment into a biocompatible carrier and / or producing a cell extract.
  • the separated hair roots were incubated for 25 min in trypsin / EDTA solution, 0.8%, at room temperature.
  • epithelial cells detached from the hair shaft.
  • the reaction was stopped by addition of human serum.
  • the vitality of the cells measured with the trypan blue exlusion was more than 50%.
  • the cell suspension was centrifuged at 500 g and the cell-containing sediment was suspended in 2 ml of a thrombin solution.
  • the area on the back of the hand intended to increase the pigmentation was de-epidermized after thorough disinfection by dermabrasion.
  • the cell suspension was applied.
  • the treatment area was then covered occlusively with a conventional wound dressing. A dressing change took place every three days. Following reepithelialization completed within two weeks, the treatment area was exposed twice weekly to broad spectrum ultraviolet below the erythema threshold. A complete alignment of the pigmentation of the treated skin area with surrounding skin could thus be achieved over eight weeks.
  • suitable active ingredients such as topical or systemic corticosteroids or topical calcineurin inhibitors may be used for a limited period of time.
  • the present invention proposes a cosmetic method for increasing the pigmentation of skin with the steps of applying Melanocyte progenitor cells from hair root sheaths obtained from a first skin area of a donor to a second skin area of a recipient. Further proposed is the use of melanocyte progenitor cells to increase the pigmentation of skin, as well as a method for producing a suspension with precursor cells from the hair root sheath.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung schlägt ein kosmetisches Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut mit den Schritten Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden, welche von einem ersten Hautbereich eines Spenders gewonnen wurden, auf einen zweiten Hautbereich eines Empfängers, vor. Ferner wird die Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut sowie ein Verfahren zum Herstellen einer Suspension mit Vorläuferzellen aus der Haarwurzelscheide vorgeschlagen.

Description

Beschreibung
Kosmetisches Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut unter Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 1. Sie betrifft ferner die Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen gemäß dem Anspruch 7 und ein Verfahren zum Herstellen einer Suspension nach Anspruch 1 1.
Aus der Praxis sind Personen bekannt, deren Haut an einer oder mehreren Stellen eine Minderpigmentierung gemessen an anderen Hautarealen aufweisen. Diese Minderpigmentierung kann mehr oder weniger blass gegenüber regulär pigmentierter Haut wirken und wird von manchen der Betroffenen als ästhetisch bzw. kosmetisch störend empfunden. Im Zeitalter des Faceliftings, der Verwendung von Botox zur Verbergung von Falten und dem Absaugen von Fett aus kosmetischen Gründen besteht daher der Wunsch, auch eine Erhöhung bzw. eine Verstärkung der Pigmentierung bestimmter Hautbereiche bewirken zu können.
Erfindungsgemäße Aufgabe ist es daher, ein geeignetes Verfahren zum Erhöhen bzw. Verstärken der Pigmentierung von Haut sowie ein Verfahren zum Herstellen einer hierbei geeigneten Zelllösung sowie Applikationsmodalitäten derselben anzugeben. Die erfindungsgemäße Aufgabe wird gelöst durch ein Verfahren mit den Merkmalen des Anspruchs 1, durch die Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen gemäß dem Anspruch 7 sowie durch ein Verfahren gemäß dem Anspruch 1 1. Gemäß Anspruch 1 wird ein Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut vorgeschlagen, welches ein Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden eines ersten Hautbereichs eines Spenders auf einen zweiten Hautbereich eines Empfängers umfasst.
Das erfindungsgemäße Verfahren dient dem kosmetischen Zweck der
Erhöhung der Pigmentierung von Haut des zweiten Hautbereichs und damit dem
Erfüllen ästhetischer Ansprüche der mit dem Verfahren behandelten Personen. Das erfindungsgemäße Verfahren des Anspruchs 1 dient somit einem nicht- therapeutischen Zweck.
Das Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen bzw. -Stammzellen aus Haarwurzelscheiden, insbesondere aus epithelialen Haarwurzelscheiden, eines ersten Hautbereichs auf einen zweiten Hautbereich dient der Erhöhung der Pigmentierung des zweiten Hautbereichs durch Pigmentbildung am zweiten Hautbereich durch Ausbildung insbesondere von Melanozyten aus den Vorläuferzellen mit deren bekanntem Beitrag zur Pigmentierung der Haut. Die Pigmentierung ist dabei den äußeren Umständen - wie bspw. der Stärke oder der Dauer einer Sonneneinstrahlung - entsprechend veränderbar und passt sich somit kosmetisch vorteilhaft auf natürliche Weise der Pigmentierung des den zweiten Hautbereich umgebenden Hautareals an.
Das Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen bringt im Gegensatz zum Aufbringen von bspw. interfollikulären Melanozyten ferner den Vorteil einer vergleichsweise unbegrenzten Verfügbarkeit mit sich. Während die Gewinnung von Melanozyten i.d.R. mit einer Entnahme von Haut einhergeht und damit nur zur Erhöhung der Pigmentierung eines begrenzten Hautareals in Frage kommt - und zudem mit einem chirurgischen Eingriff in die Integrität der Haut an der Entnahmestelle einhergeht - können Melanozytenvorläuferzellen vergleichsweise einfach und in hoher Stückzahl aus Haarwurzelscheiden gewonnen werden. Das Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen impliziert somit deren vorteilhaft hohe Verfügbarkeit.
Das Aufbringen kann bspw. mittels einer Suspension mit 102 -109, insbesondere mit 105 -107 Zellen/ml, bspw. mittels Spritze oder Spray oder in einem biokompatiblen Vlies erfolgen.
Dies kann in einer biokompatiblen Lösung (z. B. PBS, Fibrin) oder mittels eines biokompatiblen Trägers (z. B. Hyaluronan, Kollagen) erfolgen. Die Zellen können dabei als vitale oder wachstumsarretierte (z. B. mittels Mitomycin C oder Bestrahlung wachstumsarretierte) Zellen oder auch als Zellextrakte (wie z. B. Lyophilisate, Sonicate) eingesetzt werden. Auch von diesen Zellen konditionierte Medien können zu diesem Zweck eingesetzt werden.
Das Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen impliziert ferner deren vorteilhaft einfache und somit wiederholt durchführbare Gewinnung. So kann der Vorgang des Gewinnens dieser Melanozytenvorläuferzellen vor ihrer Aufbringung vergleichsweise einfach und schmerzfrei durchgeführt werden. Dieser Vorgang birgt ferner kein Komplikationsrisiko. So können die zur Zellgewinnung verwendeten Haare bspw. durch ein Auszupfen von Kopfhaaren, insbesondere von
Anagenhaaren, insbesondere vom Capillitium gewonnen sein, was einen weiteren Vorteil gegenüber der Verwendung von Zellen anderer Herkunft, insbesondere von interfollikulären Melanozyten bedeutet.
Die Melanoytenvorläuferzellen können dabei von einem Spender stammen und bei diesem auch wieder aufgebracht werden. Der erste Hautbereich und der zweite Hautbereich können somit Hautbereiche ein und desselben Lebewesens sein. Die Melanoytenvorläuferzellen können jedoch auch von einem Spender stammen und bei einem von diesem verschiedenen Empfänger aufgebracht werden. Dabei ist es unerheblich, ob Spender und Empfänger Mensch oder Tier sind. Auch eine Übertragung von Tier auf Mensch und umgekehrt ist von der Erfindung umfasst. Unter „Melanozytenvorläuferzellen" werden erfϊndungsgemäß sowohl autologe als auch allogene und xenogene Melanozytenvorläuferzellen-bzw. -Stammzellen verstanden.
Das Aufbringen der Vorläuferzellen kann hierbei durch einfaches Auftragen auf die Haut erfolgen. Dabei können die Zellen mittels z. B. Fibrinkleber auf dem zweiten Hautbereich fixiert und mit einem Okklusionsverband geschützt werden.
Aber auch jede andere geeignete Form des Aufbringens z. B. durch Integration der Zellen in biologische oder synthetische Matrices ist erfindungsgemäß möglich.
Vorteilhafte Weiterbildungen des erfindungsgemäßen Verfahrens sind dabei jeweils Gegenstand der Unteransprüche.
So weist das erfindungsgemäße Verfahren in einer bevorzugten
Ausführungsform als zusätzlichen Schritt das Gewinnen der Melanozytenvorläuferzellen auf.
Gewinnen im Sinne des Patents bedeutet zunächst das Trennen der Melanozytenvorläuferzellen vom ersten Hautbereich. Es kann erfindungsgemäß auch ein Lösen der Melanozytenvorläuferzellen vom ersten Hautbereich umfassen.
Dieses Lösen kann bspw. ein einfaches Auszupfen von Haaren, insbesondere
Anagen-Haaren aus der Kopfhaut, umfassen.
Dabei können die auf der Haut des Empfängers aufgebrachten
Melanozytenvorläuferzellen insbesondere auch von diesem Empfänger selber stammen. Spender und Empfänger können somit identisch sein. Ist dies der Fall, so entfallen - oder verringern sich - vorteilhaft Bemühungen, welche ein Typisieren oder Matchen aufgrund von genetischen Unterschieden zwischen Spender und Empfänger betreffen. Zudem entfallen Risiken der Übertragung - bspw. von Infektionen - vom Spender auf den Empfänger.
Zum „Gewinnen" von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden kann erfϊndungsgemäß neben dem Trennen der Melanozytenvorläuferzellen vom ersten Bereich - oder alternativ hierzu - auch das Isolieren der
Melanozytenvorläuferzellen aus den Haarwurzelscheiden, insbesondere aus epithelialen Haarwurzelscheiden, zählen.
Zum Schritt des „Gewinnens" kann auch ein Schritt oder eine Mehrzahl von
Schritten zählen, mittels welcher die gewonnenen Zellen zu ihrem Aufbringen vorbereitet werden. Dies kann mittels Herstellen einer Melanozytenvorläuferzellen-Suspension direkt oder nach in vitro Vermehrung geschehen. Diese Suspension kann neben den Melanozytenvorläuferzellen biokompatible Substanzen wie PBS, und/ oder Fibrin und/ oder einen biokompatiblen Träger wie bspw. Hyaluronan oder Kollagen umfassen.
In einer weiter bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsform wird vorgeschlagen, dass zusätzlich Keratinozytenvorläuferzellen aufgebracht werden. Dies kann gleichzeitig mit dem Schritt des Aufbringens der
Melanozytenvorläuferzellen erfolgen. Die Keratinozyten- und die Melanozytenvorläuferzellen können jedoch auch zeitlich versetzt aufgebracht werden. In einer weiter bevorzugten Ausführungsform gilt das oben zum Gewinnen der Melanozytenvorläuferzellen Gesagte ebenso für die Keratinozytenvorläuferzellen. Auch das oben zur Herkunft der Zellen (Tier, Mensch, autogen, autolog, usw.) Gesagte trifft auf die Kerotinozytenvorläuferzellen zu.
Ein mittels des erfindungsgemäßen Verfahrens dieser beiden zuletzt genannten Ausführungsformen jeweils erzielbarer Vorteil liegt darin, dass die gemeinsame und ggf. auch gleichzeitige Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen und Keratinozytenvorläuferzellen zu einem begünstigten Wachstum nach ihrem gemeinsamen Aufbringen auf den zweiten Hautbereich führt. Die Erfinder des vorliegenden Verfahrens führen dies auf Interaktionen chemischer, biochemischer und/ oder biologischer Art zwischen den genannten Vorläuferzellen-Typen zurück. Sie konnten beobachten, dass dieser Vorteil bereits dann auftritt, wenn das natürliche Mischungsverhältnis von Keratinozytenvorläuferzellen zu Melanozytenvorläuferzellen, wie es bspw. in den Haarwurzelscheiden des ersten Hautbereichs vorliegt, auch in der auf den zweiten Hautbereich aufgebrachten Mischung dieser Zellen beibehalten wird.
In einer wiederum weiter bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird der zweite Hautbereich zur Aufnahme der
Melanozytenvorläuferzellen - und ggf. auch der Keratinozytenvorläuferzellen - vorbereitet. Diese Vorbereitung erlaubt besonders wirksam ein Anwachsen der aufgebrachten Vorläuferzellen auf dem zweiten Hautbereich.
Das Vorbereiten des zweiten Hautbereichs kann bspw. ein Entfernen der Epidermis, oder Teilen hiervon, des zweiten Hautbereichs umfassen. Letzteres ist bspw. mittels Dermabrasio oder oberflächlicher Laserapplikation mit den hiermit verbundenen, dem Fachmann bekannten Vorteilen möglich.
Zum Vorbereiten kann auch das Aufbringen einer geeigneten Lösung zählen. Als Beispiel sei hier eine Fibrin-Lösung genannt, welche den zweiten Hautbereich zur späteren Aufnahme der Vorläuferzellen und zu deren besseren Anhaften und vor allem Anwachsen am zweiten Hautbereich vorbereitet.
In einer wiederum weiter bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsform des Verfahrens werden die auf den zweiten Hautbereich aufgebrachten Vorläuferzellen zum beschleunigten Aufbau von Pigmenten stimuliert. Eine solche Stimulierung kann mittels UV-Belichtung erfolgen. Diese aktiviert die transferierten Melanozytenvorläuferzellen und kann z. B. mittels Breitband-UV, Schmalband-UVB, PUVA oder Excimer-Laser-Bestrahlung erfolgen.
Dieses Stimulieren führt vorteilhaft zu einer Pigmentierung sowie dem Aufbau der epidermalen Pigmenteinheit. Eine Stimulierung bspw. mittels Ultraviolett-Belichtung kann einmalig oder wiederholt erfolgen. Die Bestrahlung sollte dabei vorteilhaft jeweils unterhalb der Erythem-Schwelle liegen. Eine zweimalige Bestrahlung pro Woche bis zur Erzielung der gewünschten Pigmentierung des zweiten Hautbereichs hat sich dabei als wirkungsvoll erwiesen. Eine häufigere oder weniger häufige Bestrahlung ist ebenfalls möglich.
Die erfindungsgemäße Aufgabe wird ferner gelöst durch die Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen gemäß den Merkmalen des Anspruchs 7. Vorteilhafte Weiterbildungen sind auch hierbei wiederum Gegenstand jeweils der Unteransprüche.
Da mit dem Verfahren mit den Merkmalen des Anspruchs 7 dieselben
Vorteile wie mit dem oben beschriebenen Verfahren gemäß dem Anspruch 1 erzielbar sind, wird zur Vermeidung von Wiederholungen an dieser Stelle explizit auf deren obenstehende Diskussion verwiesen.
Die vorliegende Erfindung gibt ferner ein Verfahren zum Herstellen einer
Suspension zum Verwenden in einem der oben diskutierten Verfahren an, wobei auch hierbei vorteilhafte Weiterbildungen wiederum Gegenstand der Unteransprüche sind. So ist bei dem erfindungsgemäßen Verfahren des Anspruchs 1 1 vorgesehen, die Vorläuferzellen - seien es die Melanozytenvorläuferzellen oder die Keratinozytenvorläuferzellen - enzymatisch von der Haarwurzelscheide eines entnommenen Haars zu lösen. Die enzymatische Ablösung kann bspw. mittels einer Trypsin/EDTA-Lösung erfolgen. Diese Lösung kann 0,8 %-ig vorliegen und Zimmertemperatur, bspw. 20 0C, aufweisen. Die Lösung bewirkt insbesondere eine Ablösung der epithelialen Zellen vom Haarschaft.
Zur enzymatischen Ablösung kann eine Inkubation in Trypsin, 0,1 % bis 10 %, besonders zwischen 0,5 % bis 4 %, in PBS über 10 - 50, insbesondere über 15 - 30 min, erfolgen.
Vorteilhaft an diesem Vorgehen ist insbesondere, dass durch die mögliche Verwendung von Enzymen eine nachteilige Auswirkung auf etwa die behandelten Vorläuferzellen vermieden werden kann. Die enzymatische Ablösung ist daher besonders schonend für die zu gewinnenden Zellen.
Weitere mögliche Schritte dieses Verfahrens umfassen das Stoppen des enzymatischen Ablösens durch die Zugabe von Humanserum, das Zentrifugieren der Suspension zum Erhalten eines Sediments sowie das erneute Suspendieren des zellhaltigen Sediments in einer Thrombin-Lösung, welche eine sofortige Fixierung der aufgebrachten Zellen in dünner Schicht bei der Applikation auf vorangehend aufgebrachtes Fibrinogen erlaubt und somit eine homogene, nicht zu okklusive Applikation in jeder Körperregion ermöglicht.
Das Verfahren umfasst in weiteren bevorzugten Ausführungsformen - jeweils unabhängig voneinander - die Schritte: Überführen der Vorläuferzellen oder der Suspension oder des Sediments in eine biokompatible Lösung, Einbringen der Vorläuferzellen oder der Suspension oder des Sediments in einen biokompatiblen Träger und/ oder Herstellen eines Zellextraktes. Im Folgenden wird ein exemplarisches Ausführungsbeispiel detailliert beschrieben.
So wurden bei einer Person mit einem seit Jahren unverändert bestehenden
Vitiligoherd von rund zehn Quadratzentimetern Fläche am Handrücken 50 Anagenhaare aus der Kopfhaut gezupft. Die abgetrennten Haarwurzeln wurden für 25 min in Trypsin/EDTA-Lösung, 0,8 %-ig, bei Zimmertemperatur inkubiert. Hierbei lösten sich epitheliale Zellen vom Haarschaft. Die Reaktion wurde durch Zugabe von Humanserum beendet. Die mit der Trypanblau-Exlusion gemessene Vitalität der Zellen lag dabei bei über 50 %. Die Zellsuspension wurde bei 500 g zentrifugiert, und das zellhaltige Sediment wurde in 2 ml einer Thrombin-Lösung suspendiert. Die zur Erhöhung der Pigmentierung vorgesehene Fläche am Handrücken wurde nach eingehender Desinfektion mittels Dermabrasio de- epidermisiert. Nach Aufbringen von 2 ml einer Fibrin-Lösung auf die Wundfläche wurde die Zellsuspension aufgetragen. Das Behandlungsareal wurde anschließend mit einem herkömmlichen Wundverband okklusiv abgedeckt. Ein Verbandswechsel erfolgte alle drei Tage. Nach einer innerhalb von zwei Wochen abgeschlossenen Reepithelisierung wurde das Behandlungsareal zwei Mal wöchentlich mit Breitspektrum-Ultraviolett unterhalb der Erythem-Schwelle belichtet. Eine vollständige Angleichung der Pigmentierung des behandelten Hautbereichs an eine diesen umgebende Haut konnte auf diese Weise im Verlauf von acht Wochen erzielt werden.
Zum Unterdrücken einer Autoimmunreaktion können im Falle einer Vitiligo zeitlich begrenzt geeignete Wirkstoffe wie topische oder systemische Kortikosteroide oder topische Calcineurin-Inhibitoren eingesetzt werden.
Die vorliegende Erfindung schlägt ein kosmetisches Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut mit den Schritten Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden, welche von einem ersten Hautbereich eines Spenders gewonnen wurden, auf einen zweiten Hautbereich eines Empfängers, vor. Ferner wird die Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut sowie ein Verfahren zum Herstellen einer Suspension mit Vorläuferzellen aus der Haarwurzel scheide vorgeschlagen.

Claims

Ansprüche
1. Kosmetisches Verfahren zum Erhöhen der Pigmentierung von Haut, gekennzeichnet durch den Schritt:
Aufbringen von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden, welche von einem ersten Hautbereich eines Spenders gewonnen wurden, auf einen zweiten Hautbereich eines Empfängers.
2. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt:
Gewinnen der Melanozytenvorläuferzellen aus dem ersten Hautbereich, welcher insbesondere ein erster Hautbereich des Empfängers ist.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Vorbereiten der gewonnenen Melanozytenvorläuferzellen vor dem Aufbringen.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Aufbringen von Keratinozytenvorläuferzellen.
5. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, gekennzeichnet durch den Schritt Vorbereiten des zweiten Hautbereichs zur Aufnahme der Vorläuferzellen.
6. Verfahren nach einem der vorangegangenen Ansprüche, gekennzeichnet durch den Schritt
Stimulieren der Vorläuferzellen zum Aufbau von Pigmenten.
7. Verwendung von Melanozytenvorläuferzellen aus Haarwurzelscheiden eines ersten Hautbereichs eines Spenders zur Erhöhung der Pigmentierung eines zweiten Hautbereichs eines Empfängers.
8. Verwendung nach Anspruch 7, wobei Spender und Empfänger identisch sind.
9. Verwendung nach Anspruch 7 oder 8, wobei zusätzlich Keratinozytenvorläuferzellen verwendet werden.
10. Verwendung nach einem der Ansprüche 7 bis 9, unter Stimulierung der im ersten Hautbereich aufgebrachten Zellen zum Aufbau von Pigmenten.
11. Verfahren zum Herstellen einer Suspension zur Verwendung in einem der Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, mit dem Schritt
Enzymatisches Ablösen von Vorläuferzellen von der Haarwurzelscheide.
12. Verfahren nach Anspruch 1 1 , gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Stoppen des enzymatischen Ablösens durch die Zugabe von Humanserum.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 1 oder 12, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Zentrifugieren der Suspension zum Erhalten eines Sediments.
14. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 1 bis 13, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Suspendieren des zellhaltigen Sediments, insbesondere in einer Thrombin- Lösung.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 1 bis 14, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Überführen der Vorläuferzellen oder der Suspension oder des Sediments in eine biokompatible Lösung.
16. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 1 bis 15, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Einbringen der Vorläuferzellen oder der Suspension oder des Sediments in einen biokompatiblen Träger.
17. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 1 bis 16, gekennzeichnet durch den zusätzlichen Schritt
Herstellen eines Zellextraktes.
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