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WO2005065633A1 - Utilisation de composes capables d'agir sur la voie metabolique controlee par la dopachrome tautomerase trp-2 comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications - Google Patents

Utilisation de composes capables d'agir sur la voie metabolique controlee par la dopachrome tautomerase trp-2 comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications Download PDF

Info

Publication number
WO2005065633A1
WO2005065633A1 PCT/FR2004/003070 FR2004003070W WO2005065633A1 WO 2005065633 A1 WO2005065633 A1 WO 2005065633A1 FR 2004003070 W FR2004003070 W FR 2004003070W WO 2005065633 A1 WO2005065633 A1 WO 2005065633A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hair
metabolic pathway
dopachrome tautomerase
melanocytes
acting
Prior art date
Application number
PCT/FR2004/003070
Other languages
English (en)
Inventor
Bruno Bernard
Stéphane COMMO
Original Assignee
L'oreal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by L'oreal filed Critical L'oreal
Publication of WO2005065633A1 publication Critical patent/WO2005065633A1/fr

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/06—Preparations for styling the hair, e.g. by temporary shaping or colouring
    • A61Q5/065—Preparations for temporary colouring the hair, e.g. direct dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/58—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing atoms other than carbon, hydrogen, halogen, oxygen, nitrogen, sulfur or phosphorus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/10—Preparations for permanently dyeing the hair
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/70—Biological properties of the composition as a whole

Definitions

  • the present invention relates to the cosmetic use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase, as a protective agent for melanocytes in the hair follicle.
  • this compound is intended to combat the disappearance of melanocytes from the hair follicle by maintaining and / or regenerating the population of active bulb melanocytes and quiescent melanocytes in the upper region of the hair follicle.
  • the hair follicle is a tubular invagination of the epidermis which penetrates to the deep layers of the dermis.
  • the lower part, or hair bulb, itself has an invagination in which the dermal papilla is found.
  • the lower part of the bulb is a cell proliferation zone where the precursors of the keratinized cells constituting the hair are found. The ascending cells from these precursors gradually keratinize in the upper part of the bulb, and this set of keratinized cells will form the hair shaft.
  • the color of hair and body hair is based in particular on the presence in variable quantities and ratios of two groups of melanins: eumelanins (brown and black pigments) and pheomelanins (red and yellow pigments).
  • the pigmentation of the hair and the hairs requires the presence of melanocytes at the level of the bulb of the hair follicle. These melanocytes are in an active state, that is to say that they synthesize melanins. These pigments are transmitted to the keratinocytes intended to form the hair shaft which will lead to the growth of a pigmented hair or hair. This structure is hereinafter called “follicular pigmentation unit”.
  • melanogenesis involves at least three enzymes: tyrosinase, DOPAchrome tautomerase (TRP-2, for Tyrosinase Related Protein 2) and DHICAoxydase (TRP-1, for Tyrosinase Related Protein 1).
  • Tyrosinase is the enzyme that initiates the biosynthesis of melanins. It is also described as the limiting enzyme for melanogenesis.
  • TRP-2 catalyzes the tautomerization of DOPAchrome into 5,6-Dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA).
  • DOPAchrome undergoes spontaneous decarboxylation to form 5,6-dihydroxyindole (DHI).
  • DHI 5,6-dihydroxyindole
  • TRP-1 oxidizes the molecules of DHICA to form derivatives of quinones (Pawelek JM and Chakraborty AK. The enzymology of melanogenesis. In: Nordlund JJ, Boissy RE, Hearing VJ, King RA , Ortonne JP. The Pigmentary System: Physiology and Pathophysiology.
  • TRP-2 tyrosinase
  • TRP-1 The three enzymes, tyrosinase, TRP-2 and TRP-1, appear to be specifically involved in melanogenesis. In addition, the activity of these three enzymes has been described as necessary for the maximum biosynthesis activity of eumelanins.
  • TRP-2 has been observed in the hair of black mice, both in active melanocytes of the bulb and in quiescent melanocytes of the outer epithelial sheath.
  • DOPAchrome tautomerase activity is increased during the anagen phase in black mice.
  • no clear correlation has been established between the expression of TRP-2 and the intensity of pigmentation (Sturm et al. 1995).
  • TRP-2 has also been described as conferring on the melanocytes which express it a resistance to agents damaging DNA such as cis-diamminedichloroplatinum (II) (Chu et al. 2000 and Pak et al. 2000). These results suggest that TRP-2 would also be involved in a function independent of melanogenesis, the enzyme could play a cytoprotective role.
  • II cis-diamminedichloroplatinum
  • the hair and the hair undergo a cycle.
  • This cycle includes a growth phase (anagen phase), a degeneration phase (catagen phase) and a rest phase (telogen phase) after which a new anagen phase will develop.
  • the follicular pigmentation unit must also be cyclically renewed.
  • melanogenic enzymes will be expressed in the melanocytes of the bulb throughout the duration of the anagen phase but will no longer be expressed during the catagen and telogen phases.
  • the normal melanocyte cycle in the human hair follicle requires the presence of quiescent melanocytes in the upper region of the hair follicle, otherwise known as the "reservoir", which will be cyclically activated to regenerate the follicular pigmentation unit.
  • This cell renewal mechanism participating in the maintenance of pigmentation is specific to the follicular pigmentation unit; it is not found in the epidermal pigmentation unit.
  • the Applicant has found that the progression of canities is associated with a decrease in the number of melanocytes in the hair bulbs, which, although in a limited number, synthesize and transfer the melanins.
  • the Applicant has also unexpectedly and surprisingly observed that the population of quiescent melanocytes of the upper region of the human hair follicle (also called "reservoir") is also reduced during the canities process, white hair having only a few - or no longer any - melanocytes, unlike the infundibulum and the epidermis surrounding this gray hair. This disappearance affects prematurely and specifically the melanocytes contained in the hair.
  • the Applicant has also unexpectedly found that the TRP-2 enzyme is not expressed in the melanocytes of pigmented human hair follicles (brown, black and red) in the Caucasian, Asian and African individual. This enzyme is detected neither in the active melanocytes of the bulb, nor in the quiescent melanocytes of the upper region of the human hair follicle while it is expressed in the epidermis and infundibulum of the Caucasian, African and Asian individual. .
  • the absence of TRP-2 is associated with the early disappearance of melanocytes which do not express it, i.e., quiescent melanocytes from the upper region of the hair follicle and active melanocytes from the bulb.
  • TRP2 which plays a role in melanogenesis (melanin synthesis) at the level of the epidermal pigmentation unit, plays a different and hitherto unknown role, namely a cytoprotective role: the presence of a compound capable of acting on the metabolic pathway of TRP2 makes it possible to maintain and / or regenerate the population of quiescent melanocytes of the upper region of the hair follicle and the population of active melanocytes of the bulb and thus favor the cyclic renewal of the follicular unit ensuring the maintenance of pigmentation of hair, eyelashes and / or body hair.
  • the Applicant has identified a means of maintaining and / or regenerating the population of melanocytes of the hair follicle responsible for hair pigmentation: indeed, it has shown that it is possible to act on the metabolic pathway controlled by TRP-2.
  • TRP-2 has a metabolic activity which makes it possible to protect melanocytes according to three distinct processes: (i) TRP-2 transforms a toxic M1 metabolite into a non-toxic M'1 metabolite; (ii) TRP-2 transforms a non-toxic metabolite M2 into another non-toxic metabolite M'2 thus preventing the production of a toxic metabolite M "2 which would be produced from M2 without the intervention of TRP-2; ( iii) TRP-2 transforms a non-toxic metabolite M3 into a metabolite M'3 beneficial to the survival of melanocytes.
  • a compound capable of acting on the metabolic pathway of TRP-2 to protect the melanocytes of the hair follicle can act in three ways: (1) by compounds capable of degrading or capturing the toxic metabolite M1; (2) by compounds capable of capturing the toxic metabolite M "2 and / or capable of slowing down its production; (3) by compounds capable of promoting the production of the metabolite M'3.
  • the Applicant has evaluated the cytoprotective activity of compounds capable of acting on the metabolic pathway of TRP2 under conditions inducing apoptosis and / or senescence of melanocytes in the hair follicle. She has thus developed a means to prevent and / or limit and / or stop the development of canities and even to maintain the natural pigmentation of hair and / or gray or white hair.
  • a first object of the invention relates to the cosmetic use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase, as a protective agent for the melanocytes of the hair follicle.
  • agent protecting the melanocytes of the hair follicle means an agent capable of protecting the melanocytes of the hair follicle in particular against cytotoxic agents responsible for senescence and / or apoptosis of melanocytes in the hair follicle.
  • cytotoxic agents there may be mentioned molecules with genotoxic characters and molecules inducing oxidative stress such as TNF alpha, lipofuscins, ceroids, TGF beta, Fas / CD95 ligand, UIL1 beta, ferrous and cuprous ions , genotoxic chemical compounds such as cisplatin and oxaloplatin, or compounds such as cyclophosphamide.
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase as defined according to the invention is intended to combat the disappearance of melanocytes from the hair follicle by maintaining and / or regenerating the population of active melanocytes in the bulb and quiescent melanocytes from the upper region of the hair follicle.
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase according to the invention is also intended to promote the cyclic renewal of the follicular pigmentation unit.
  • the subject of the invention relates to the use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase to prevent and / or limit and / or stop the development of canities.
  • the subject of the invention also relates to the use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase to maintain the natural pigmentation of the hair and / or gray hair.
  • TRP-2 DOPAchrome tautomerase
  • PBA LP-boronophenylalanine
  • compositions for combating canities comprising in a cosmetically acceptable medium, at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase (TRP-2) as defined above in exclusion from the PBA.
  • TRP-2 DOPAchrome tautomerase
  • An object of the invention is also a composition for combating canities, comprising in a cosmetically acceptable medium, at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase (TRP-2) as defined above associated with another active ingredient chosen from agents for combating scaling conditions of the scalp, agents promoting hair regrowth, plant extracts with pro-pigmenting activity.
  • TRP-2 DOPAchrome tautomerase
  • composition according to the invention comprises an amount of compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase between 0.001% and 10% by weight by volume, preferably between 0.01 and 5% by weight by volume and even more preferably between 0.1 and 1% by weight by volume.
  • composition according to the invention can be administered orally or applied to the skin (on any cutaneous area of the body covered with hair) and / or the scalp.
  • the composition according to the invention may contain, the compound or compounds capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase in solution in a food liquid such as an aqueous or hydroalcoholic solution, possibly flavored. They can also be incorporated in a solid ingestible excipient and be presented for example in the form of granules, pills, tablets or dragees. They can also be placed in solution in a conditioned liquid food itself possibly in unmanageable capsules.
  • composition of the invention can be in all the dosage forms normally used, particularly in cosmetology.
  • a preferred composition of the invention is a cosmetic composition suitable for topical application to the scalp and / or the skin.
  • the composition which can be used according to the invention may in particular be in the form of an aqueous, hydroalcoholic or oily solution or of dispersion of the lotion or serum type, of emulsions of liquid or semi-liquid consistency of the milk type, obtained by dispersion of a fatty phase in an aqueous phase (O / W) or vice versa (W / O), or of suspensions or emulsions of soft consistency of the aqueous or anhydrous cream or gel type, or of microcapsules or microparticles, or vesicular dispersions of the ionic and / or nonionic type.
  • compositions can thus be in the form of an ointment, a tincture, a cream, an ointment, a powder, a patch, a soaked tampon, a solution, an emulsion or a vesicular dispersion, a lotion, a gel, a spray, suspension, shampoo, aerosol or foam.
  • They can be anhydrous or aqueous. It can also consist of solid preparations constituting soaps or cleaning bars.
  • composition which can be used according to the invention may in particular be a composition for hair care, and in particular a shampoo, a styling lotion, a treatment lotion, a styling cream or gel, a composition of dyes (in particular oxidation dyes ) possibly in the form of coloring shampoos, restructuring hair lotions, mask.
  • a composition for hair care and in particular a shampoo, a styling lotion, a treatment lotion, a styling cream or gel, a composition of dyes (in particular oxidation dyes ) possibly in the form of coloring shampoos, restructuring hair lotions, mask.
  • the cosmetic composition according to the invention will preferably be a cream, a hair lotion, a shampoo or a conditioner.
  • the amounts of the various constituents of the compositions which can be used according to the invention are those conventionally used in the fields considered.
  • the proportion of the fatty phase can range from 5% to 80% by weight, and preferably from 5% to 50% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the oils, waxes, emulsifiers and co-emulsifiers used in the composition in the form of an emulsion are chosen from those conventionally used in the cosmetic field.
  • the emulsifier and the co-emulsifier are present in the composition in a proportion ranging from 0.3% to 30% by weight, and preferably from 0.5 to 20% by weight relative to the total weight of the composition .
  • the emulsion can, in addition, contain lipid vesicles.
  • the fatty phase can represent more than 90% of the total weight of the composition.
  • the composition will be such that the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase is encapsulated in a coating such as microspheres, nanospheres, oleosomes or nanocapsules, the coating will be chosen according to the chemical nature of the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • microspheres can be prepared according to the method described in patent application EP 0 375 520.
  • the nanospheres may be in the form of an aqueous suspension and be prepared according to the methods described in patent applications FR 0015686 and FR 0101438.
  • the oleosomes consist of an oil-in-water emulsion formed by oily globules provided with a lamellar liquid crystal coating dispersed in an aqueous phase (see patent applications EP 0 641 557 and EP 0 705 593).
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase may also be encapsulated in nanocapsules consisting of a lamellar coating obtained from a silicone surfactant (see patent application EP 0 780 115), the nanocapsules may also be prepared based on water-dispersible sulfonic polyesters (see patent application FR 0113337).
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase may also be complexed on the surface of cationic oily globules, whatever their size (see patent applications EP 1 010 413, EP 1 010 414, EP 1 010 415, EP 1 010416, EP 1 013 338, EP 1 016 453, EP 1 018 363, EP 1 020 219, EP 1 025 898, EP 1 120 101, EP 1 120 102, EP 1 129 684, EP 1 160 005 and EP 1 172,077).
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase can finally be complexed on the surface of nanocapsules or nanoparticles provided with a lamellar coating (see EP 0 447 318 and EP 0 557 489) and containing a cationic surfactant on the surface (see the references cited above for cationic surfactants).
  • a composition such as the coating containing the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase has a diameter less than or equal to 10 ⁇ m is preferred.
  • the diameter is understood to mean the largest dimension of the vesicle.
  • the composition according to the invention may also contain adjuvants customary in the cosmetic field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, odor absorbers and coloring matter.
  • adjuvants customary in the cosmetic field such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, odor absorbers and coloring matter.
  • the amounts of these various adjuvants are those conventionally used in the cosmetic field, and for example from 0.01% to 10% of the total weight of the composition.
  • These adjuvants depending on their nature, can be introduced into the fatty phase, into the aqueous phase and / or into the lipid spherules.
  • emulsifiers used in the invention there may be mentioned for example glycerol stearate, polysorbate 60 and the PEG-6 / PEG-32 / glycol stearate sold under the name Tefose ® 63 by the company Gattefosse.
  • solvents which can be used in the invention mention may be made of lower alcohols, in particular ethanol and isopropanol, propylene glycol.
  • hydrophilic gelling agents which can be used in the invention, mention may be made of carboxyvinyl polymers (carbomers), acrylic copolymers such as acrylate / alkyl acrylate copolymers, polyacrylamides, polysaccharides such as hydroxypropylcellulose, natural gums and clays, and, as lipophilic gelling agents, mention may be made of modified clays such as bentones, metal salts of fatty acids such as aluminum stearates and hydrophobic silica, ethylcellulose, polyethylene.
  • carboxyvinyl polymers carboxyvinyl polymers
  • acrylic copolymers such as acrylate / alkyl acrylate copolymers
  • polyacrylamides polysaccharides
  • polysaccharides such as hydroxypropylcellulose
  • natural gums and clays and, as lipophilic gelling agents
  • modified clays such as bentones, metal salts of fatty acids such as aluminum stearates and hydrophobic silica
  • compositions which can be used according to the invention can combine at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of TRP-2 with other active agents.
  • active agents there may be mentioned by way of example: the agents modulating the differentiation and / or the proliferation and / or the pigmentation of skin cells such as retinol and its esters, vitamin D and its derivatives, estrogens such as estradiol, cAMP modulators such as POMC derivatives, adenosine, or forskolin and its derivatives, prostaglandins and their derivatives, triiodotrionine and its derivatives; - extracts of plants such as those of Iridaceae or soy, extracts which may or may not contain isoflavones;
  • - anti-free radical agents such as ⁇ -tocopherol or its esters, superoxide dismutases or its mimetics, certain metal chelating agents or ascorbic acid and its esters;
  • anti-seborrhoeics such as certain sulfur amino acids, 13-cis retinoic acid, cyproterone acetate;
  • agents for combating desquamative conditions of the scalp such as zinc pyrithione, selenium disulfide, climbazole, undecylenic acid, Ketoconazole, piroctone olamine (octopirox) or ciclopiroctone (ciclopirox); in particular, it may be active stimulating regrowth and / or promoting the slowing down of hair loss, we can more particularly cite without limitation:
  • Nicotinic acid esters including in particular tocopherol nicotinate, benzyl nicotinate and C ⁇
  • antibacterial agents such as macrolides, pyranosides and tetracyclines, and in particular Erythromycin;
  • estriol or analogues such as estriol or analogues, or thyroxine and its salts
  • - antiandrogenic agents such as oxendolone, spironolactone, diethylstilbestrol and flutamide;
  • the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase is associated with another active agent chosen from agents for combating desquamative conditions of the scalp, agents promoting hair regrowth, plant extracts with propellant activity. .
  • Another object of the present invention relates to a cosmetic treatment process for canities characterized in that a composition as defined above is administered or applied to the area to be treated, comprising at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • the invention also relates to a cosmetic treatment process intended to maintain the natural pigmentation of gray and white hair and / or body hair, characterized in that a composition as defined is administered or applied to the area to be treated. previously comprising at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • the methods of treatment of canities and pigmentation of gray and white hair and / or body hair can also consist of the ingestion of a composition comprising at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • the areas to be treated can be, for example and without any limitation, the scalp, the eyebrows, the mustache and / or the beard and any area of the skin covered with hair.
  • the methods of cosmetic treatment of canities and natural pigmentation of gray and white hair and / or body hair consist in applying a composition comprising at least one compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • the cosmetic treatment methods for combating canities and / or for maintaining the natural pigmentation of gray and white hair and / or hair may for example consist in applying the composition to the hair and the scalp, in the evening, keeping the composition overnight and optionally shampoo in the morning or wash the hair with this composition and leave it in contact again for a few minutes before rinsing.
  • the composition according to the invention has proved to be particularly advantageous when it is applied in the form of a hair lotion, optionally rinsed or even in the form of a shampoo.
  • the present invention relates to a method of identifying a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • This method comprises the prior step of identifying the metabolites involved in the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase which is described in Example 3 below.
  • the method of identifying a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase comprises the following steps: a- cultivation of a cell population, preferably a population of melanocytes, preferably which does not express little or no DOPAchrome tautomerase; b- addition to the culture medium of a compound for which it is desired to test the capacity to act on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase; c- incubation of the cell population for a sufficiently long time to allow the compound evaluated to be active; d- extraction of cellular metabolites; e- analysis of the metabolite (s) sought; f- selection of the compounds which act on the rate of the metabolites sought.
  • cell cultures are performed in an incubator at 37 C, 5% C0 2.
  • step (a) can be carried out according to the following protocol: the melanocytes are seeded on D0 with RPMI-1640 medium (Gibco BRL - 42401) containing 5% fetal vow serum, 1% glutamine and 0.5 % of antibiotics. The cells are maintained under these conditions 12 to 72 hours before being treated.
  • RPMI-1640 medium Gibco BRL - 42401
  • Step (b) can be carried out according to the following protocol: the melanocytes are treated in culture with the compound for which it is desired to test the capacity to act on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase for a time necessary to reveal this property, this time can be between 1 hour and 72 hours.
  • the cells are exposed to a condition inducing oxidative stress or even apoptosis or even senescence, it may be, for example, a pro apoptotic (TNF ⁇ ), the absence of a survival factor (IGF-1), treatment with cis-platinum (Pak BJ et al., 2000, Melanoma Res.
  • Step (e) can be carried out using any analytical method suitable for the characterization or quantification of the metabolite (s) sought, for example high performance liquid chromatography (HPLC), nuclear magnetic resonance (NMR), liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS), gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), or infrared spectrometry.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • LC-MS liquid chromatography coupled to mass spectrometry
  • GC-MS gas chromatography coupled to mass spectrometry
  • infrared spectrometry infrared spectrometry.
  • the invention also relates to the use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase capable of being identified by the method described above in a cosmetic treatment process for preventing and / or limiting and / or stop the development of canities and / or to maintain the natural pigmentation of the hair and / or of the gray or white hairs.
  • the invention finally relates to the use of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase capable of being identified by the method described above for the preparation of a cosmetic composition intended to prevent and / or limit and / or stop the development of canities and / or maintain the natural pigmentation of hair and / or gray or white hair.
  • the invention also relates to a method for evaluating the cytoprotective activity of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase capable of being identified by the method described above, comprising the following steps: a - culturing a population of melanocytes in a medium limiting the expression of TRP-2 to a weak basal expression; b- addition of a compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase to the culture medium; c- exposure of the cells to a condition inducing apoptosis or senescence; d- measurement of cytotoxicity; e- selection of compounds capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase with a cytoprotective effect.
  • the cell cultures are carried out in an oven, at 37 ° C., 5% C0 2 .
  • step (a) can be carried out according to the following protocol: the melanocytes are seeded on D0 with M2 medium (PromoCell, Heidelberg, D).
  • the medium After a time necessary for the adhesion of the cells of between 2 and 18 hours, the medium is replaced by a medium in which the melanocytes express little or no the
  • TRP-2 (weak basal expression): DMEM: F12 (Gibco BRL - 42400-044), Ultroser G (Gibco BRL - 15950-017) 0.5%, PC-1 (BioWhittaker 344022) 0.5%, bFGF (Pepro Tech Inc 100-18B) 5 ng / ml, heparin (Sigma H-3149) 75 ng / ml , 1% antibiotics, 1% glutamine. The cells are kept in this culture medium for the time between 12 and 72 hours necessary for the reduction of the expression of TRP-2.
  • Step (b) can be carried out according to the following protocol: the melanocytes are treated in culture with the compound capable of acting on the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • Step (c) can be carried out for example according to the following protocol: the cells are treated with cis-platinum (for example between 5 and 50 ⁇ M) in the culture medium for the time necessary for the induction of apoptosis , this time is generally between 12 and 24 hours.
  • cis-platinum for example between 5 and 50 ⁇ M
  • Step (d) can be carried out for example according to the following protocol: the cytotoxicity can be measured using the “Cell Proliferation Kit II (XTT)” kit implemented according to the protocol given by the supplier (Roche 1- 465-015). Apoptosis can be quantified using the "Cell Death Detection ELISA plus” kit, implemented according to the protocol given by the supplier (Roche 1 774 425).
  • XTT Cell Proliferation Kit II
  • Apoptosis can be quantified using the "Cell Death Detection ELISA plus” kit, implemented according to the protocol given by the supplier (Roche 1 774 425).
  • Figure 1 this figure brings together different photographs representing the distribution of melanocytes in the hair follicle during the anagen phase viewed under a microscope.
  • (A) is a series of shots of the outer epithelial sheath enlarged 40 times
  • (B) is a series of shots of the outer epithelial sheath (centered on the stem) magnified 20 times
  • (C) is a series of shots of the bulb magnified 20 times.
  • (1) represents a very dark hair, (2) a moderately pigmented hair, (3) to (5) hair of different shades of gray and (6) a white hair.
  • FIG. 2 These photographs make it possible to visualize the expression of TRP-2 in the melanocytes of the epidermis and the hair (external epithelial sheath and hair bulb). Immunohistological study analyzed by confocal laser microscopy.
  • Figure 3 These photographs represent the results obtained after the implementation of the Western Blot tests described in Example 2B.
  • Example 1 immunohistochemical revelation of melanocytes in the hair follicles at different stages of bleaching. by labeling the protein pMel- I
  • the primary antibody (Ac) NK1-beteb specifically recognizing the protein pMel-17 (Monosan, Paris, F) is diluted 1/40 in PBS - Tween 0.05%, containing 10% normal serum (X0907, DAKO , Trappes, F).
  • the primary Ac is incubated for 18 hours on the hair at + 04 ° C.
  • Secondary Ac coupled to biotin (E-433, DAKO, Trappes, F) is diluted to 1/400 and incubated for 30 minutes.
  • the hair is then incubated in the presence of streptavidin-biotin-peroxidase (K-0377, DAKO, Trappes, F), and finally the immunolabelling is revealed in the presence of 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC kit-101) , Sigma, Saint Quentin Fallavier, F).
  • streptavidin-biotin-peroxidase K-0377, DAKO, Trappes, F
  • AEC kit-101 3-amino-9-ethylcarbazole
  • Example 2 Demonstration of the differential expression of DOPAchrome tautomerase in the melanocytes of hair follicles and of the epidermis in the Caucasian individual.
  • a scalp biopsy fragment containing hair follicles is included in tissue-Tek-OCT (Miles, Naperville, IL, USA) and then frozen on carbo-ice. The frozen biopsy is then cut (7 ⁇ m) using a cryostat (CM3050, Leica, Rueil-Malmaison, F).
  • Biopsy fragments are incubated in the dispase (2.4 U / ml, Boehringer Mannheim, D) overnight at + 04 ° C.
  • the epithelial compartment is separated from the dermis using forceps under binocular.
  • the epithelial structures are then micro-dissected to separate the hair follicles and the epidermis, then sorted.
  • the primary Ac NK1- beteb specifically recognizing the protein pMel-17 (1/40, Monosan, Paris, F), and ⁇ PEP ⁇ h (1/2000, Dr VJ.Hearing, NIH, Bethesda, MD, USA) specifically recognizing the human TRP2 protein (Virador et al. 2001) are incubated simultaneously for 18 hours at +04 C C on whole hair and epithelial flaps of skin, and 30 minutes at room temperature on frozen sections.
  • the secondary Goat Ac directed against immunoglobulins (Ig) G2b coupled with Cy3 is diluted to 1/80, and the secondary Ac directed against Ig coupled with Cy5 (111-175-144, Jackson Immunoresearch Lab. Inc. West Grove, PA, USA) is diluted to 1/500 and incubated simultaneously on the samples for 30 minutes. Immunostaining is analyzed by confocal laser microscopy (LSM510, Cari Zeiss, Oberkochen, D).
  • the hair follicles are isolated after treatment of scalp biopsies with dispase (2.4 U / ml, Boehringer Mannheim, D) at night at + 04 ° C. After isolation, the hair follicles are micro-dissected to isolate the part of the hair bulb. 80 hair bulbs thus isolated are placed in a suitable lysis buffer for protein extraction and western blot analysis.
  • the Western blot (see protocol in Maniatis et al.) Is carried out with the following antibodies: ⁇ PEP ⁇ h, polyclonal antibody specific for human TRP-2 given by Dr VJ Hearing (NIH, Bethesda, USA), and T311, monoclonal antibody specific for human tyrosinase (Novocastra, New Castle, UK).
  • tyrosinase is detected in the extracts of the hair bulb.
  • the enzyme is not detected in extracts of the outer epithelial sheath.
  • Expression tyrosinase is regulated. This enzyme is not or little expressed in inactive melanocytes (not producing melanin), this is the case for melanocytes contained in the inter follicular scalp of a Caucasian individual.
  • TRP-2 DOPAchrome tautomerase
  • Example 3 Identification of the metabolites involved in the metabolic pathway of DOPAchrome tautomerase.
  • TRP-2 The identification of metabolites modulated by DOPAchrome tautomerase (TRP-2) is obtained by comparing the metabolome of two distinct melanocytic lines only by the differential expression of TRP-2.
  • the specific differential expression of TRP-2 is obtained: a- either by ectopic expression of TRP-2 obtained after transfection of any appropriate vector containing the coding region of the human gene TYRP2 (for example as described in genebank n ° S69231, No. NM_001922, No. AJ000503) in a melanocyte line which does not constitutively express TRP-2; b- either by neutralizing the expression of TRP-2, for example by the siRNA method in a melanocyte line which constitutively expresses TRP-2.
  • oligonucleotide capable of causing the extinction of the messenger RNA coding for TRP2
  • the following 3 nucleotide sequences may be used (positions 838, 1589 and 2164 respectively of the gene coding for TRP2):
  • the SEQ IDs of odd number correspond to the 5 'antisense strand; the SEQ IDs of even number correspond to the 5 'sense strand.
  • the two populations Mel-A and Mel-A1 are cultivated strictly under the same conditions of environment, temperature, etc. for 24 to 48 hours.
  • the two cell populations are cultivated under oxidative stress conditions or under conditions promoting apoptosis or even under conditions promoting senescence by using, for example, a pro-apoptotic factor (TNF ⁇ ), the absence of a survival factor (IGF-1), of treatment with cis-platinum (Pak BJ et al., 2000, Melanoma Res.
  • TNF ⁇ pro-apoptotic factor
  • IGF-1 survival factor
  • Cell metabolites are then extracted under suitable conditions, for example as described in Lazzarino G et al. Analytical Biochemistry 2003, 322: 51-59, or also in Gonzalez B et al. Yeast 1997.13: 1347-1555, or Raamsdonk LM et al. Nat Biotechnol. 2001, 19; 45-50.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • LC-MS liquid chromatography coupled to mass spectrometry
  • GC-MS gas chromatography coupled to mass spectrometry
  • infrared spectrometry for example high performance liquid chromatography (HPLC), nuclear magnetic resonance (NMR), liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS), gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), or infrared spectrometry.
  • HPLC high performance liquid chromatography
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • LC-MS liquid chromatography coupled to mass spectrometry
  • GC-MS gas chromatography coupled to mass spectrometry
  • infrared spectrometry for example high performance liquid chromatography (HPLC), nuclear magnetic resonance (NMR), liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS), gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), or infrared spectrometry.
  • This lotion is applied daily to the areas to be treated and preferably to the entire scalp for at least 10 days and preferably 1 to 2 months. There is then a decrease in the appearance of white or gray hair and a repigmentation of gray hair.
  • Hydroxy propyl cellulose sold under the name Klucell G by the company Hercules 2 g
  • This shampoo is used for each wash with an exposure time of approximately one minute. Prolonged use, of the order of two months, leads to the gradual repigmentation of gray hair.
  • This shampoo can also be used as a preventive measure to delay the bleaching of hair.
  • This gel is applied to the areas to be treated twice a day (morning and evening) with a terminal massage. After three months of application, a repigmentation of the hairs or hair of the treated area is observed.

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Abstract

La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomérase (TRP-2), en tant qu'agent protecteur des mélanocytes du follicule pileux et à son utilisation, notamment pour lutter contre la canitie. L'invention concerne également des compositions cosmétiques particulières pour lutter contre la canitie comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomérase (TRP­-2) et à leurs utilisations. L'invention se rapporte également à un procédé de traitement de la canitie ainsi qu'à un procédé de maintien de la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs par l'application d'une composition cosmétique comprenant au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomérase. L'invention se rapporte en outre à une méthode pour identifier un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomérase (TRP-2) ainsi qu'à une méthode d'évaluation de son activité cytoprotectrice.

Description

Utilisation de composés capables d'agir sur la voie métabolique contrôlée par la DOPAchrome tautomerase TRP-2 comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications
La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase, en tant qu'agent protecteur des melanocytes du follicule pileux. En particulier, ce composé est destiné à lutter contre la disparition des melanocytes du follicule pileux en maintenant et/ou régénérant la population des melanocytes actifs du bulbe et des melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux.
Le follicule pileux est une invagination tubulaire de Pépiderme qui s'enfonce jusqu'aux couches profondes du derme. La partie inférieure, ou bulbe pileux, comporte elle-même une invagination dans laquelle se trouve la papille dermique. La partie inférieure du bulbe est une zone de prolifération cellulaire où se trouvent les précurseurs des cellules kératinisées constituant le cheveu. Les cellules en ascension issues de ces précurseurs se kératinisent progressivement dans la partie supérieure du bulbe, et cet ensemble de cellules kératinisées formera la tige pilaire.
La couleur des cheveux et des poils repose notamment sur la présence en quantités et ratios variables de deux groupes de mélanines : les eumélanines (pigments bruns et noirs) et les phéomélanines (pigments rouges et jaunes). La pigmentation du cheveu et des poils requiert la présence de melanocytes au niveau du bulbe du follicule pileux. Ces melanocytes sont dans un état actif, c'est-à-dire qu'ils synthétisent des mélanines. Ces pigments sont transmis aux kératinocytes destinés à former la tige pilaire ce qui conduira à la pousse d'un cheveu ou d'un poil pigmenté. Cette structure est appelée ci-après « unité folliculaire de pigmentation ».
Chez les mammifères, la mélanogénèse implique au moins trois enzymes : la tyrosinase, la DOPAchrome tautomerase (TRP-2, pour Tyrosinase Related Protein 2) et la DHICAoxydase (TRP-1 , pour Tyrosinase Related Protein 1 ). La tyrosinase est l'enzyme qui initie la biosynthèse des mélanines. Elle est également décrite comme étant l'enzyme limitante de la mélanogénèse.
La TRP-2 catalyse la tautomérisation du DOPAchrome en acide 5,6-Dihydroxyindole-2- carboxylique (DHICA). En l'absence de TRP-2, le DOPAchrome subit une décarboxylation spontanée pour former le 5,6-dihydroxyindole (DHI). DHICA et DHI sont tous deux des précurseurs de pigments, TRP-1 oxyde les molécules de DHICA pour former des dérivés de quinones (Pawelek JM and Chakraborty AK. The enzymology of melanogenesis. In: Nordlund JJ, Boissy RE, Hearing VJ, King RA, Ortonne J-P. The Pigmentary System: Physiology and Pathophysiology. New York: Oxford university press; 1998. p. 391-400). Les trois enzymes, tyrosinase, TRP-2 et TRP-1 , apparaissent spécifiquement impliquées dans la mélanogénèse. De plus, l'activité de ces trois enzymes a été décrite comme nécessaire à l'activité maximale de biosynthèse des eumélanines. L'expression de TRP-2 a été observée dans les poils de souris noires, à la fois dans les melanocytes actifs du bulbe et dans les melanocytes quiescents de la gaine épithéliale externe. De plus, il est connu que l'activité DOPAchrome tautomerase est augmentée pendant la phase anagène chez la souris noire. Cependant aucune corrélation claire n'a été établie entre l'expression de TRP-2 et l'intensité de la pigmentation (Sturm et al. 1995). Par ailleurs, TRP-2 a également été décrite comme conférant aux melanocytes qui l'expriment une résistance à des agents endommageant l'ADN tel que le cis- diamminedichloroplatinum(ll) (Chu et al. 2000 et Pak et al. 2000). Ces résultats suggèrent que TRP-2 serait aussi impliquée dans une fonction indépendante de la mélanogénèse, l'enzyme pourrait jouer un rôle cytoprotecteur.
Le cheveu et le poil subissent un cycle. Ce cycle comprend une phase de croissance (phase anagène), une phase de dégénérescence (phase catagène) et une phase de repos (phase télogène) à la suite de laquelle une nouvelle phase anagène se développera. En raison de ce cycle pilaire, et contrairement à l'unité de pigmentation épidermique, l'unité folliculaire de pigmentation doit également être cycliquement renouvelée.
Ce processus a été récemment décrit chez l'homme (Commo S. et Bernard B., 2000, Pigment Cell Res. 13:253-259). Il a plus particulièrement été montré qu'au cours de la transition télogène-anagène, une partie des melanocytes inactifs contenus dans la capsule télogène prolifère, se positionne autour de la papille dermique du bulbe naissant et commence à exprimer des enzymes nécessaires à la synthèse de mélanines : cette population de melanocytes correspond aux melanocytes actifs du bulbe. En parallèle, l'autre partie des melanocytes reste inactive dans la région supérieure du follicule pileux : cette population de melanocytes correspond aux melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux.
Ces enzymes mélanogènes seront exprimées dans les melanocytes du bulbe pendant toute la durée de la phase anagène mais ne seront plus exprimées pendant les phases catagène et télogène. Le cycle normal des melanocytes dans le follicule pileux humain requiert la présence de melanocytes quiescents dans la région supérieure du follicule pileux, région autrement nommée « réservoir », qui seront cycliquement activés pour régénérer l'unité folliculaire de pigmentation. Ce mécanisme de renouvellement cellulaire participant au maintien de la pigmentation est spécifique de l'unité folliculaire de pigmentation ; on ne le retrouve pas dans l'unité épidermique de pigmentation.
II est admis que la canitie (blanchissement naturel des cheveux) est associée à une diminution de mélanine dans la tige pilaire. La cause de cette diminution n'est pas à ce jour élucidée. Plusieurs hypothèses sont avancées, elle pourrait être liée à une diminution de l'activité mélanogène, par analogie au mécanisme de pigmentation de la peau, mais également à une altération du transfert des mélanines ou à une diminution du nombre de melanocytes dans le bulbe (Tobin et Paus, 2001) ; aucune démonstration n'a permis à ce jour de valider l'une ou l'autre de ces hypothèses.
Or la Demanderesse a mis en évidence deux résultats qui valident pour la première fois l'hypothèse selon laquelle la canitie serait liée à une diminution du nombre de melanocytes actifs dans le bulbe et une diminution du nombre de melanocytes quiescents dans la région supérieure du follicule pileux. Cette diminution et/ou disparition précoce des melanocytes est spécifique au follicule pileux et n'affecte pas de façon visible l'épiderme.
Jusqu'à présent, on pensait en effet que des melanocytes quiescents étaient présents dans les follicules pileux de cheveux blancs (Takada et al. 1992, Horikawa et al. 1996, Jenner et Randall 2000).
Or, la Demanderesse a constaté que la progression de la canitie est associée à une diminution du nombre de melanocytes dans les bulbes pileux, qui, bien qu'en nombre restreint, synthétisent et transfèrent les mélanines. La Demanderesse a également observé de façon inattendue et surprenante que la population de melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux humain (encore appelée « réservoir ») est également diminuée au cours du processus de canitie, les cheveux blancs ne possédant plus que quelques - voire plus aucun - melanocytes, contrairement à l'infundibulum et l'épiderme avoisinant ces cheveux blancs. Cette disparition affecte prématurément et spécifiquement les melanocytes contenus dans les cheveux.
Il apparaît donc nécessaire de lutter contre la disparition des melanocytes des follicules pileux humains, processus affectant à la fois les melanocytes actifs des bulbes et les melanocytes quiescents de la région supérieure des follicules pileux, pour lutter contre la canitie. Par ailleurs, la Demanderesse a également constaté de façon inattendue que l'enzyme TRP-2 n'est pas exprimée dans les melanocytes des follicules pileux humains pigmentés (bruns, noirs et roux) chez l'individu caucasien, asiatique et africain. Cette enzyme n'est détectée ni dans les melanocytes actifs du bulbe, ni dans les melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux humain alors qu'elle est exprimée dans l'épiderme et l'infundibulum de l'individu caucasien, africain et asiatique. L'absence de TRP-2 est associée à la disparition précoce des melanocytes qui ne l'expriment pas, c'est-à-dire, les melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux et les melanocytes actifs du bulbe.
La Demanderesse a donc mis en évidence que TRP2, qui joue un rôle dans la mélanogénèse (synthèse de mélanine) au niveau de l'unité épidermique de pigmentation, joue un rôle différent et méconnu jusqu'ici, à savoir un rôle cytoprotecteur : la présence d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de TRP2 permet de maintenir et/ou régénérer la population de melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux et la population de melanocytes actifs du bulbe et favoriser ainsi le renouvellement cyclique de l'unité folliculaire garant du maintien de la pigmentation des cheveux, cils et/ou poils.
La Demanderesse a identifié un moyen de maintenir et/ou régénérer la population de melanocytes du follicule pileux responsables de la pigmentation des cheveux : en effet, elle a montré qu'il était possible d'agir sur la voie métabolique contrôlée par TRP-2.
TRP-2 a une activité métabolique qui permet de protéger les melanocytes suivant trois processus distincts : (i) TRP-2 transforme un métabolite M1 toxique en un métabolite M'1 non toxique ; (ii) TRP-2 transforme un métabolite M2 non toxique en un autre métabolite M'2 non toxique empêchant ainsi la production d'un métabolite M"2 toxique qui serait produit à partir de M2 sans l'intervention de TRP-2 ; (iii) TRP-2 transforme un métabolite M3 non toxique en un métabolite M'3 bénéfique à la survie des melanocytes.
Ainsi selon l'invention, un composé capable d'agir sur la voie métabolique de TRP-2 pour protéger les melanocytes du follicule pileux peut agir de trois façons : (1) par des composés capables de dégrader ou capter le métabolite M1 toxique ; (2) par des composés capables de capter le métabolite M"2 toxique et/ou capables de freiner sa production ; (3) par des composés capables de favoriser la production du métabolite M'3.
Par ailleurs, la Demanderesse a évalué l'activité cytoprotectrice de composés capables d'agir sur la voie métabolique de TRP2 dans des conditions induisant l'apoptose et/ou la sénescence des melanocytes du follicule pileux. Elle a ainsi mis au point un moyen pour prévenir et/ou limiter et/ou stopper le développement de la canitie et même de maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs.
Ainsi un premier objet de l'invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase, en tant qu'agent protecteur des melanocytes du follicule pileux.
Par 'agent protecteur des melanocytes du follicule pileux', on entend un agent capable de protéger les melanocytes du follicule pileux notamment contre des agents cytotoxiques responsables de la sénescence et/ou de l'apoptose des melanocytes du follicule pileux. Parmi les agents cytotoxiques, on peut citer des molécules à caractères génotoxiques et des molécules induisant un stress oxydatif comme le TNF alpha, les lipofuscines, les céroïdes, le TGF beta, le ligand de Fas/CD95, UIL1 beta, les ions ferreux et cuivreux, des composés chimiques génotoxiques comme le cisplatine et l'oxaloplatine, ou encore des composés comme le cyclophosphamide.
En particulier, le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase tel que défini selon l'invention est destiné à lutter contre la disparition des melanocytes du follicule pileux en maintenant et/ou en régénérant la population des melanocytes actifs du bulbe et des melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux.
Le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase selon l'invention est également destiné à favoriser le renouvellement cyclique de l'unité folliculaire de pigmentation. En particulier, l'objet de l'invention concerne l'utilisation d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase pour prévenir et/ou limiter et/ou arrêter le développement de la canitie.
L'objet de l'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase pour maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris.
Le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase (TRP-2) pourra notamment être le PBA (L-P-boronophénylalanine) qui réagit avec le DHI en complexant le catechol du DHI évitant ainsi l'oxydation du DHI en dérivés cytotoxiques.
Un autre objet de l'invention est une composition pour lutter contre la canitie, comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase (TRP-2) tel que défini précédemment à l'exclusion du PBA.
Un objet de l'invention est également une composition pour lutter contre la canitie, comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase (TRP-2) tel que défini précédemment associé à un autre actif choisi parmi les agents de lutte des états desquamatifs du cuir chevelu, des agents favorisant la repousse des cheveux, des extraits végétaux à activité pro-pigmentante.
La composition selon l'invention comprend une quantité de composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase comprise entre 0.001 % et 10 % en poids par volume, préférentiellement entre 0,01 et 5% en poids par volume et encore plus préférentiellement entre 0,1 et 1% en poids par volume.
La composition selon l'invention peut être administrée par voie orale ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps recouverte de poils) et/ou le cuir chevelu.
Par voie orale, la composition selon l'invention peut contenir, le ou les composés capables d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase en solution dans un liquide alimentaire tel qu'une solution aqueuse ou hydroalcoolique, éventuellement aromatisée. Ils peuvent également être incorporés dans un excipient solide ingérable et se présenter par exemple sous forme de granulés, de pilules, de comprimés ou de dragées. Ils peuvent également être placés en solution dans un liquide alimentaire conditionné lui-même éventuellement dans des capsules ingérables.
Selon le mode d'administration, la composition de l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées, particulièrement en cosmétologie. Une composition préférée de l'invention est une composition cosmétique adaptée à une application topique sur le cuir chevelu et/ou la peau.
Pour une application topique, la composition utilisable selon l'invention peut être notamment sous la forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ou de dispersion du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Elle peut ainsi se présenter sous forme d'onguent, de teinture, de crème, de pommade, de poudre, de timbre, de tampon imbibé, de solution, d'émulsion ou de dispersion vésiculaire, de lotion, de gel, de spray, de suspension, de shampooing, d'aérosol ou de mousse. Elles peuvent être anhydres ou aqueuses. Elle peut également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.
La composition utilisable selon l'invention peut en particulier être une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une composition de teintures (notamment teintures d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooings colorants, des lotions restructurantes pour les cheveux, de masque.
La composition cosmétique selon l'invention sera préférentiellement une crème, une lotion capillaire, un shampooing ou un après-shampooing.
Les quantités des différents constituants des compositions utilisables selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. Lorsque la composition utilisable selon l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5% à 80% en poids, et de préférence de 5% à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les cires, les émulsionnants et les co-émulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique. L'émulsionnant et le co- émulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3% à 30% en poids, et de préférence de 0,5 à 20% en poids par rapport au poids total de la composition. L'émulsion peut, en outre, contenir des vésicules lipidiques.
Lorsque la composition utilisable selon l'invention est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90% du poids total de la composition.
Dans une variante de l'invention, la composition sera telle que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est encapsulé dans un enrobage tel que des microsphères, des nanospheres, des oléosomes ou des nanocapsules, l'enrobage sera choisi selon la nature chimique du composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
A titre d'exemple, les microsphères pourront être préparées selon la méthode décrite dans la demande de brevet EP 0 375 520.
Les nanospheres pourront se présenter sous forme de suspension aqueuse et être préparées selon les méthodes décrites dans les demandes de brevet FR 0015686 et FR 0101438.
Les oléosomes consistent en une émulsion huile dans eau formée par des globules huileux pourvus d'un enrobage cristal liquide lamellaire dispersé dans une phase aqueuse (voir les demandes de brevet EP 0 641 557 et EP 0 705 593).
Le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase pourra aussi être encapsulé dans des nanocapsules consistant en un enrobage lamellaire obtenu à partir d'un tensio-actif siliconé (voir la demande de brevet EP 0 780 115), les nanocapsules pourront également être préparées à base de polyesters sulfoniques hydrodispersibles (voir la demande de brevet FR 0113337). Le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase pourra également être complexé à la surface de globules huileux cationiques, quelques soit leur taille (voir les demandes de brevet EP 1 010413, EP 1 010 414, EP 1 010415, EP 1 010416, EP 1 013 338, EP 1 016 453, EP 1 018 363, EP 1 020 219, EP 1 025 898, EP 1 120 101 , EP 1 120 102, EP 1 129 684, EP 1 160 005 et EP 1 172 077).
Le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase peut enfin être complexé à la surface de nanocapsules ou nanoparticules pourvues d'un enrobage lamellaire (Voir EP 0 447 318 et EP 0 557 489) et contenant un tensio-actif cationique à la surface (voir les références citées précédemment pour les tensio-actifs cationiques).
En particulier, on préférera une composition telle que l'enrobage contenant le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase a un diamètre inférieur ou égale à 10 μm. Lorsque l'enrobage ne forme pas une vésicule sphérique, on entend par diamètre la dimension la plus grande de la vésicule.
De façon connue, la composition selon l'invention peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les additifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique, et par exemple de 0,01% à 10% du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse et/ou dans les sphérules lipidiques. Comme huiles ou cires utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles végétales (fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol), les huiles animales (perhydrosqualène), les huiles de synthèse (huile de Purcellin), les huiles ou cires siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers), les cires d'abeille, de carnauba ou paraffine. On peut ajouter à ces huiles des alcools gras et des acides gras (acide stéarique).
Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60 et le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefose® 63 par la société Gattefosse. Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.
Comme gélifiants hydrophiles utilisables dans l'invention, on peut citer les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que l'hydroxypropylcellulose, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, éthylcellulose, polyéthylène.
Les compositions utilisables selon l'invention peuvent associer au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de TRP-2 à d'autres agents actifs. Parmi ces agents actifs, on peut citer à titre d'exemple : - les agents modulant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation des cellules de la peau tels que le rétinol et ses esters, la vitamine D et ses dérivés, les oestrogènes tels que l'oestradiol, les modulateurs de l'AMPc tels que les dérivés de POMC, l'adénosine, ou la forskoline et ses dérivés, les prostaglandines et leurs dérivés, la triiodotrionine et ses dérivés ; - des extraits de végétaux tels que ceux d'Iridacées ou de soja, extraits pouvant alors contenir ou non des isoflavones ;
- des extraits de micro-organismes ;
- les agents anti-radicaux libres tels que l'α-tocophérol ou ses esters, les superoxyde dismutases ou ses mimétiques, certains chelatants de métaux ou l'acide ascorbique et ses esters ;
- les anti-séborrhéiques tels que certains acides aminés soufrés, l'acide 13-cis rétinoïque, l'acétate de cyprotérone ;
- les autres agents de lutte contre les états desquamatifs du cuir chevelu comme le zinc pyrithione, le disulfure de sélénium, le climbazole, l'acide undécylénique, le Kétoconazole, la piroctone olamine (octopirox) ou la ciclopiroctone (ciclopirox) ; en particulier, il pourra s'agir d'actifs stimulant la repousse et/ou favorisant le ralentissement de la chute des cheveux, on peut plus particulièrement citer à titre non limitatif :
- les esters d'acide nicotinique, dont notamment le nicotinate de tocophérol, le nicotinate de benzyle et les nicotinates d'alkyles en C<|-Cg comme les nicotinates de méthyle ou d'hexyle ; - les dérivés de pyrimidine, comme le 2,4-diamino 6-piperidinopyrimidine 3-oxyde ou "Minoxidil" décrit dans les brevets US 4,139,619 et US 4,596,812 ; l'Aminexil ou 2,4 diamino pyrimidine 3 oxyde décrit dans WO96/09048 ;
- les agents inhibiteur de la lipoxygenase ou inducteur de la cyclooxydase favorisant la repousse des cheveux comme ceux décrits par la Demanderesse dans la demande de brevet européen EP 0 648 488 ;
- les agents antibactériens tels que les macrolides, les pyranosides et les tétracyclines, et notamment l'Erythromycine ;
- les agents antagonistes de calcium, comme la Cinnarizine, la Nimodipine et la Nifedipine ;
- des hormones, telles que l'estriol ou des analogues, ou la thyroxine et ses sels ;
- des agents antiandrogènes, tels que l'oxendolone, la spironolactone, le diéthylstilbestrol et la flutamide ;
- des inhibiteurs stéroïdiens ou non stéroïdiens des 5-α-réductases tels que ceux décrits par la Demanderesse dans les demandes de brevet européen EP 0 964 852 et
EP 1 068 858 ou encore le finastéride ;
- des agonistes des canaux potassiques dépendant de l'ATP tels que la cromakalim et le nicorandil ;
- des extraits végétaux à activité pro-pigmentante comme les extraits de chrysanthème tels que décrits dans FR 2768343 et les extraits de Sanguisorba décrits dans
FR 2782920A1.
De préférence, le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est associé à un autre actif choisi parmi les agents de lutte des états desquamatifs du cuir chevelu, des agents favorisant la repousse des cheveux, des extraits végétaux à activité propigmentante.
Un autre objet de la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique de la canitie caractérisé en ce qu'on administre ou qu'on applique sur la zone à traiter une composition telle que définie précédemment comprenant au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
L'invention se rapporte aussi à un procédé de traitement cosmétique destiné à maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs caractérisé en ce qu'on administre ou qu'on applique sur la zone à traiter une composition telle que définie précédemment comprenant au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
Les procédés de traitement de la canitie et de pigmentation des cheveux et/ou des poils gris ou blancs peuvent également consister en l'ingestion d'une composition comprenant au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
Les zones à traiter peuvent être, par exemple et sans aucune limitation, le cuir chevelu, les sourcils, la moustache et/ou la barbe et toute zone de la peau recouverte de poils.
Plus particulièrement, les procédés de traitement cosmétique de la canitie et de pigmentation naturelle des cheveux et/ou poils gris ou blancs consistent à appliquer une composition comprenant au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
Les procédés de traitement cosmétique pour lutter contre la canitie et/ou pour maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs peut par exemple consister à appliquer la composition sur les cheveux et le cuir chevelu, le soir, garder la composition toute la nuit et éventuellement effectuer un shampooing le matin ou laver les cheveux à l'aide de cette composition et à laisser à nouveau en contact quelques minutes avant de rincer. La composition conforme à l'invention s'est révélée particulièrement intéressante lorsqu'elle est appliquée sous forme de lotion capillaire, éventuellement rincée ou même sous forme d'un shampooing.
Dans un autre de ses objets, la présente invention se rapporte à une méthode d'identification d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
Cette méthode comprend l'étape préalable d'identification des métabolites impliqués dans la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase qui est décrite à l'exemple 3 ci-après.
La méthode d'identification d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase comprend les étapes suivantes : a- mise en culture d'une population cellulaire, de préférence une population de melanocytes, de préférence qui n'exprime pas ou peu la DOPAchrome tautomerase ; b- ajout dans le milieu de culture d'un composé pour lequel on souhaite tester la capacité d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase ; c- incubation de la population cellulaire un temps suffisamment long pour permettre au composé évalué d'être actif ; d- extraction des métabolites cellulaires ; e- analyse du ou des métabolites recherchés ; f- sélection des composés qui agissent sur le taux des métabolites recherchés.
Dans un mode de réalisation particulière de la méthode d'identification d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase, les cultures cellulaires sont réalisées en étuve, à 37CC, 5% C02.
En particulier l'étape (a) pourra être réalisée selon le protocole suivant : les melanocytes sont ensemencés à J0 avec du milieu RPMI-1640 (Gibco BRL - 42401) contenant 5% de sérum de vœu fœtal, 1 % glutamine et 0,5% d'antibiotiques. Les cellules sont maintenues dans ces conditions 12 à 72 heures avant d'être traitées.
L'étape (b) pourra être réalisée selon le protocole suivant : les melanocytes sont traités en culture par le composé pour lequel on souhaite tester la capacité d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase pendant un temps nécessaire pour révéler cette propriété, ce temps peut-être compris entre 1 heure et 72 heures. Dans un mode particulier de réalisation de l'étape (b), les cellules sont exposées à une condition induisant un stress oxydatif ou encore l'apoptose ou encore la sénescence, il pourra s'agir, par exemple, d'un facteur pro-apoptotique (TNF α), de l'absence d'un facteur de survie (IGF-1), d'un traitement par le cis-platine (Pak B.J. et al., 2000, Melanoma Res. 10 :499-505) ou l'oxaliplatine, d'un agent toxique (cyclophosphamide), d'un stress oxydatif (H202,, diethylmaleate) (voir Vaux D.L. & Strasser A., 1996, Proc.Natl.Acad.Sci. 93 :2239-2244), peu de temps après l'ajout du composé pour lequel on souhaite tester la capacité d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
L'étape (e) pourra être réalisée à l'aide de n'importe quelle méthode d'analyse adaptée à la caractérisation ou à la quantification du ou des métabolites recherchés, par exemple chromatographie liquide à haute performance (HPLC), résonance magnétique nucléaire (NMR), chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS), chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS), ou encore spectrométrie infra rouge.
L'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase susceptible d'être identifié par la méthode décrite ci-dessus dans un procédé de traitement cosmétique pour prévenir et/ou limiter et/ou arrêter le développement de la canitie et/ou pour maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs.
L'invention se rapporte enfin à l'utilisation d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase susceptible d'être identifié par la méthode décrite ci-dessus pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou limiter et/ou arrêter le développement de la canitie et/ou à maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris ou blancs.
L'invention se rapporte encore à une méthode d'évaluation de l'activité cytoprotectrice d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase susceptible d'être identifié par la méthode décrite précédemment, comprenant les étapes suivantes : a- mise en culture d'une population de melanocytes dans un milieu limitant l'expression de la TRP-2 à une expression basale faible ; b- ajout d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase au milieu de culture ; c- exposition des cellules à une condition induisant l'apoptose ou la sénescence ; d- mesure de la cytotoxicité ; e- sélection des composés capables d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase avec un effet cytoprotecteur.
Dans un mode de réalisation particulier, les cultures cellulaires sont réalisées en étuve, à 37°C, 5% C02.
En particulier, l'étape (a) pourra être réalisée selon le protocole suivant : les melanocytes sont ensemencés à J0 avec du milieu M2 (PromoCell, Heidelberg, D).
Après un temps nécessaire à l'adhérence des cellules compris entre 2 et 18 heures, le milieu est remplacé par un milieu dans lequel les melanocytes expriment peu ou pas la
TRP-2 (expression faible basale) :DMEM :F12 (Gibco BRL - 42400-044), Ultroser G (Gibco BRL - 15950-017) 0,5%, PC-1 (BioWhittaker 344022) 0,5%, bFGF (Pepro Tech Inc 100-18B) 5 ng/ml, héparine (Sigma H-3149) 75 ng/ml, 1% antibiotiques, 1% glutamine. Les cellules sont maintenues dans ce milieu de culture le temps compris entre 12 et 72 heures nécessaire à la diminution de l'expression de TRP-2.
L'étape (b) pourra être réalisée selon le protocole suivant : les melanocytes sont traités en culture par le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase.
L'étape (c) pourra être réalisée par exemple selon le protocole suivant : les cellules sont traitées au cis-platine (par exemple entre 5 et 50 μM) dans le milieu de culture pendant le temps nécessaire à l'induction de l'apoptose, ce temps est généralement compris entre 12 et 24 heures.
L'étape (d) pourra être réalisée par exemple selon le protocole suivant : la cytotoxicité peut être mesurée à l'aide du kit « Cell Prolifération Kit II (XTT) » mis en œuvre selon le protocole donné par le fournisseur (Roche 1-465-015). L'apoptose peut être quantifiée à l'aide du kit "Cell Death Détection ELISA plus", mis en œuvre selon le protocole donné par le fournisseur (Roche 1 774 425).
Figures
Figure 1 : cette figure rassemble différentes photographies représentant la distribution de melanocytes dans le follicule pileux lors de la phase anagène visualisée au microscope.
Légendes :
(A) est une série de clichés de la gaine épithéliale externe grossie 40 fois, (B) est une série de clichés de la gaine épithéliale externe (centrés sur la tige) grossie 20 fois et (C) est une série de clichés du bulbe grossie 20 fois.
(1) représente un cheveu très foncé, (2) un cheveu modérément pigmenté, (3) à (5) des cheveux de différentes nuances de gris et (6) un cheveu blanc.
Figure 2 : Ces photographies permettent de visualiser l'expression de TRP-2 dans les melanocytes de l'épiderme et du cheveu (gaine épithéliale externe et bulbe pileux). Etude immunohistologique analysée en microscopie confocale laser. Figure 3 : Ces photographies représentent les résultats obtenus après la mise en œuvre des essais de Western Blot décrits à l'exemple 2B.
Exemple 1 - révélation immunohistochimiαue des melanocytes dans les follicules pileux à différents stades de blanchissement. par marquage de la protéine pMel- I
Plus de 120 follicules pileux isolés à partir de biopsies issues de 8 donneurs âgés de 49 à 71 ans ont été étudiés.
A - Protocole d'isolement des follicules pileux entiers (Commo S and Bernard BA Pigment Cell Res 2000 ;13 :253-259) Des fragments de biopsie sont incubés dans la dispase (2,4 U/ml, Boehringer Mannheim, D) la nuit à +04°C. Les cheveux sont ensuite isolés à l'aide de pinces sous binoculaires.
B - Protocole d'immunomarquaαe sur follicules pileux entiers (Commo S and Bernard BA Pigment Cell Res 2000 ;13 :253-259)
Les cheveux entiers sont fixés dans l'éthanol à -20°C pendant 10 minutes. Chaque étape des procédures de fixation et de marquage est suivie de lavages au tampon phosphate (pH 7,4 (PBS))-Tween20 0,05%. Sauf précision, toutes les étapes se font à température ambiante. Les péroxydases endogènes de l'échantillon sont neutralisées en incubant l'échantillon dans une solution de peroxyde d'hydrogène à 0,1% pendant 10 minutes. Pour bloquer les sites de fixation non spécifiques, l'échantillon est incubé avec du lait écrémé 1%, 15 minutes. L'anticorps (Ac) primaire NK1-beteb reconnaissant spécifiquement la protéine pMel-17 (Monosan, Paris, F) est dilué au 1/40 dans du PBS - Tween 0,05%, contenant 10 % de sérum normal (X0907, DAKO, Trappes, F). L'Ac primaire est incubé 18 heures sur les cheveux à +04°C. L'Ac secondaire couplé à la biotine (E-433, DAKO, Trappes, F) est dilué au 1/400 et incubé 30 minutes. Le cheveu est ensuite incubé en présence de streptavidine-biotine-péroxydase (K-0377, DAKO, Trappes, F), et finalement l'immunomarquage est révélé en présence de 3-amino-9- éthylcarbazole (AEC) (AEC kit-101, Sigma, Saint Quentin Fallavier, F).
En comparant les clichés (B1) à (B5) de la figure 1 , on constate que la diminution de pigmentation du cheveu est associé à une diminution de mélanine dans le bulbe et à une diminution de melanocytes dans le bulbe (voir C1 à C5). Le cheveu blanc dont la tige est dépourvue de mélanine (B6) ne contient pas de mélanocyte dans le bulbe (C6). Les cheveux gris et blanc contiennent une quantité variable de melanocytes dans la partie haute de la gaine épithéliale externe, cette quantité pouvant même être nulle dans le cas du cheveu blanc (A3 à 6) à la différence des cheveux pigmentés (A1 et 2).
Exemple 2 - mise en évidence de l'expression différentielle de la DOPAchrome tautomerase dans les melanocytes de follicules pileux et de l'épiderme chez l'individu caucasien.
A - Etude immunohistologique analysée en microscopie confocale laser
A.1 - Obtention de coupes congelées de follicule pileux (Commo S and Bernard BA Pigment Cell Res 2000 ;13 :253-259)
Un fragment de biopsie de scalp contenant des follicules pileux est inclus dans du tissue-Tek-OCT (Miles, Naperville, IL, USA) et ensuite congelé sur de la carbo-glace. La biopsie congelée est ensuite coupée (7 μm) à l'aide d'une cryostat (CM3050, Leica, Rueil-Malmaison, F).
A.2 - Protocole d'isolement des follicules pileux entiers et des lambeaux épithéliaux de peau (Commo S and Bernard BA Pigment Cell Res 2000 ;13 :253-259) Des fragments de biopsie sont incubés dans la dispase (2,4 U/ml, Boehringer Mannheim, D) la nuit à +04°C. Le compartiment épithélial est séparé du derme à l'aide de pinces sous binoculaire. Les structures épithéliales sont ensuite micro-disséquées pour séparer les follicules pileux et l'épiderme, puis triées.
A.3 - Protocole d'immunomarquaαe sur follicules pileux entiers, lambeau de peau et coupe congelée
Les cheveux entiers, les lambeaux épithéliaux de peau et les coupes congelées sont fixés dans l'éthanol à -20°C pendant 10 minutes. Chaque étape des procédures de fixation et de marquage est suivie de lavages au tampon phosphate (pH 7,4 (PBS))- Tween20 0,05%. Sauf précision, toutes les étapes se font à température ambiante. Les péroxydases endogènes de l'échantillon sont neutralisées en incubant l'échantillon dans une solution de peroxyde d'hydrogène à 0,1% pendant 10 minutes. Pour bloquer les sites de fixation non spécifiques, l'échantillon est incubé avec du lait écrémé 1%, 15 minutes. Les anticorps (Ac) primaires sont dilués dans du PBS - Tween 0,05%, contenant 10 % de sérum normal (X0907, DAKO, Trappes, F). Les Ac primaires NK1- beteb reconnaissant spécifiquement la protéine pMel-17 (1/40, Monosan, Paris, F), et αPEPδh (1/2000 , Dr VJ.Hearing, NIH, Bethesda, MD, USA) reconnaissant spécifiquement la protéine TRP2 humaine (Virador et al. 2001) sont incubés simultanément 18 heures à +04CC sur les cheveux entiers et les lambeaux épithéliaux de peau, et 30 minutes à température ambiante sur les coupes congelées. L'Ac secondaire de chèvre dirigé contre les immunoglobulines (Ig) G2b couplé à la Cy3 (M32410, TEBU, le Perray en Yveline, F) est dilué au 1/80, et l'Ac secondaire dirigé contre les Ig couplé à la Cy5 (111-175-144, Jackson Immunoresearch Lab. Inc. West Grove, PA, USA) est dilué au 1/500 sont incubés simultanément 30 minutes sur les échantillons. Les immunomarquages sont analysés en microscopie confocale laser (LSM510, Cari Zeiss, Oberkochen, D).
Conclusion des observations : on constate sur la figure 2 la présence de TRP-2 dans les melanocytes de l'épiderme, en revanche, cette enzyme n'est exprimée ni dans les melanocytes de la gaine épithéliale du follicule pileux, ni dans les melanocytes du bulbe pileux.
B - étude biochimique par analyse en Western Blot
B.1 - Protocole d'extraction de protéine de follicules pileux humains et de melanocytes (Commo S et al. Differentiation 2000 ;66 : 157-164)
- Extraction protéique à partir de bulbes pileux : les follicules pileux sont isolés après traitement de biopsies de scalp à la dispase (2,4 U/ml, Boehringer Mannheim, D) la nuit à +04°C. Après isolement, les follicules pileux sont micro-disséqués pour isoler la partie du bulbe pileux. 80 bulbes pileux ainsi isolés sont placés dans un tampon de lyse approprié pour extraction protéique et analyse en western blot.
- Extraction protéique à partir de culture de melanocytes : Les melanocytes cultivés en milieu M2 (PromoCell, Heidelberg, D) sont lysés avec un même tampon de lyse approprié pour extraction protéique et analyse en western blot.
Le Western blot (voir protocole dans Maniatis et al.) est réalisé avec les anticorps suivants : αPEPδh, anticorps polyclonal spécifique de la TRP-2 humaine donné par Dr VJ Hearing (NIH, Bethesda, USA), et T311, anticorps monoclonal spécifique de la tyrosinase humaine (Novocastra, New Castle, UK).
On observe (figure 3) que la tyrosinase est détectée dans les extraits de bulbe pileux. L'enzyme n'est pas détectée dans les extraits de gaine épithéliale externe. L'expression de la tyrosinase est régulée. Cette enzyme n'est pas ou peu exprimée dans les melanocytes inactifs (ne produisant pas de mélanine), c'est le cas des melanocytes contenus dans le scalp inter folliculaire d'individu caucasien.
Par ailleurs, la DOPAchrome tautomerase (TRP-2) n'est détectée ni dans les extraits de bulbe ni dans les extraits de gaine épithéliale externe. L'expression de la TRP-2 ne suit pas celle de la tyrosinase et l'induction de la mélanogénèse, elle n'est pas exprimée dans les melanocytes actifs des bulbes pileux.
Exemple 3 - Identification des métabolites impligues dans la voie métaboligue de la DOPAchrome tautomerase.
L'identification des métabolites modulés par la DOPAchrome tautomerase (TRP-2) est obtenue en comparant le métabolome de deux lignées mélanocytaires distinctes uniquement par l'expression différentielle de la TRP-2. L'expression différentielle spécifique de TRP-2 est obtenue : a- soit par expression ectopique de TRP-2 obtenue après transfection de n'importe que vecteur approprié contenant la région codant du gène humain TYRP2 (par exemple tel que décrit dans genebank n°S69231 , n°NM_001922, n°AJ000503) dans une lignée de melanocytes qui n'exprime pas de façon constitutive TRP-2 ; b- soit par neutralisation de l'expression de TRP-2 par exemple par la méthode du siRNA dans une lignée de melanocytes qui exprime de façon constitutive TRP-2. Comme oligonucléotide double brin capable de provoquer l'extinction de l'ARN messager codant pour la TRP2, on pourra utiliser les 3 séquences nucléotidiques suivantes (positions 838, 1589 et 2164 respectivement du gène codant pour TRP2) :
Les SEQ ID de numéro impair correspondent au brin 5' antisens ; les SEQ ID de numéro pair correspondent au brin 5' sens.
838 SEQ ID N°1 : 5'- AACATCCATTCCTTGAGTCCTCCTGTCTC -3" SEQ ID N°2 : 5'- AAAGGACTCAAGGAATGGATGCCTGTCTC -3'
1589
SEQ ID N°3: 5'- AAGTGATGAGCCTTCATAATTCCTGTCTC -3' SEQ ID N°4: 5'- AAAATTATGAAGGCTCATCACCCTGTCTC -3' SEQ ID N°5 : 5'- AATCCTCACTGTTCCTTCTTGCCTGTCTC -3'
SEQ ID N°6 : 5'- AACAAGAAGGAACAGTGAGGACCTGTCTC -3'
La fonctionnalité de ces séquences siRNAs, comme inhibiteurs spécifiques de la TRP2, est vérifiée par une mesure en Western blot de l'extinction de l'expression de la TRP2 dans des melanocytes en présence de ces siRNAs sous forme de duplex (brin antisens et brin sens).
A partir d'une population de mélanocyte Mel-A on obtient ainsi une deuxième population cellulaire Mel-A1 distincte uniquement par l'expression de TRP-2.
Les deux populations Mel-A et Mel-A1 sont cultivées strictement dans les mêmes conditions de milieu, de température, etc.. pendant 24 à 48 heures. Dans une condition particulière les deux populations cellulaires sont cultivées dans des conditions de stress oxydatifs ou dans des conditions favorisant l'apoptose ou encore dans des conditions favorisant le sénescence en utilisant par exemple, d'un facteur pro-apoptotique (TNF α), de l'absence d'un facteur de survie (IGF-1), d'un traitement par le cis-platine (Pak B.J. et al., 2000, Melanoma Res. 10 :499-505) ou l'oxaliplatine, d'un agent toxique (cyclophosphamide), d'un stress oxydatif (H202,, diethylmaleate) (voir Vaux D.L. & Strasser A., 1996, Proc.Natl.Acad.Sci. 93 :2239-2244).
On réalise ensuite une extraction des métabolites cellulaires dans des conditions adaptées, par exemple telles que décrites dans Lazzarino G et al. Analytical Biochemistry 2003,322 :51-59, ou encore dans Gonzalez B et al. Yeast 1997,13 :1347- 1355, ou encore Raamsdonk LM et al. Nat Biotechnol. 2001 ,19 ;45-50.
Les métabolites extraits sont ensuite analysés par une méthode adaptée par exemple chromatographie liquide à haute performance (HPLC), résonance magnétique nucléaire (NMR), chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS), chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS), ou encore spectrométrie infra rouge.
Les taux différents de certains métabolites identifiés entre les populations Mel-A et Mel- A1 caractérisent les métabolites impliqués dans la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase. Exemple 4 - Compositions
- lotion capillaire
Composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase 0,5 g
Propylène glycol 20 g
Ethanol 95° 30 g
Eau qsp 100 g
Cette lotion est appliquée quotidiennement sur les zones à traiter et de préférence sur l'ensemble du cuir chevelu pendant au moins 10 jours et préférentiellement 1 à 2 mois. On constate alors une diminution de l'apparition des cheveux blancs ou gris et une repigmentation des cheveux gris.
- shampooing traitant
Composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase 1 ,5 g
Polyglycéryl 3-hydroxylarylether 26 g
Hydroxy propyl cellulose vendue sous la dénomination de Klucell G par la société Hercules 2 g
Conservateurs ps
Ethanol 95° 50 g
Eau qsp 100 g
Ce shampooing est utilisé à chaque lavage avec un temps de pose d'environ d'une minute. Un usage prolongé, de l'ordre de deux mois, conduit à la repigmentation progressive des cheveux gris.
Ce shampooing peut également être utilisé à titre préventif afin de retardé le blanchiment des cheveux.
- Gel traitant
Composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase 0,75 g
Huiles essentielles d'Eucalyptus 1 g Econozole 0,2 g
Lauryl polyglycéryl 6 cetearyl glycoether 1,9 g Conservateurs qs
Carbopol 934P vendu par la société BF Goodrich Corporation 0,3 g
Agent de neutralisation qs pH 7
Eau qsp 100 g
Ce gel est appliqué sur les zones à traiter deux fois par jour (matin et soir) avec un massage terminal. Après trois mois d'application, on observe une repigmentation des poils ou cheveux de la zone traitée.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation cosmétique d'un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase, en tant qu'agent protecteur des melanocytes du follicule pileux.
2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est destiné à lutter contre la disparition des melanocytes du follicule pileux en maintenant et/ou en régénérant la population des melanocytes actifs du bulbe et des melanocytes quiescents de la région supérieure du follicule pileux.
3. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est destiné à favoriser le renouvellement cyclique de l'unité folliculaire de pigmentation.
4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est destiné à prévenir et/ou limiter et/ou arrêter le développement de la canitie.
5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est destiné à maintenir la pigmentation naturelle des cheveux et/ou des poils gris.
6. Composition cosmétique pour lutter contre la canitie comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase à l'exclusion du PBA.
7. Composition cosmétique pour lutter contre la canitie comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable au moins un composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase associé à un autre actif choisi parmi les agents de lutte des états desquamatifs du cuir chevelu, des agents favorisant la repousse des cheveux, des extraits végétaux à activité propigmentante.
8. Composition selon la revendication 6 ou 7, caractérisée en ce que le composé capable d'agir sur la voie métabolique de la DOPAchrome tautomerase est encapsulé dans un enrobage tel que des microsphères, des nanospheres, des oléosomes ou des nanocapsules.
9. Composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisée en ce qu'elle est adaptée à une application topique sur le cuir chevelu et/ou sur les zones de la peau recouvertes de poils.
10. Procédé de traitement cosmétique de la canitie, caractérisé en ce qu'on administre ou qu'on applique sur la zone à traiter une composition selon l'une des revendications 6 à 9.
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006070101A1 (fr) * 2004-12-22 2006-07-06 L'oreal Utilisation d'un compose capable d'augmenter le taux de glutathion dans les melanocytes pour le traitement de la canitie
AU2006334734B2 (en) * 2006-01-13 2012-07-19 Poxel Sas Combination of triazine derivatives and insulin sensitisers

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2930775B1 (fr) 2008-04-30 2010-05-21 Oreal Utilisations de bnipxl-beta dans la canitie precoce

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0759292A1 (fr) * 1995-04-28 1997-02-26 L'oreal Utilisation de derivés de l'hormone stimulatrice des melanocytes de type alpha pour stimuler la pousse des cheveux
FR2762784A1 (fr) * 1997-04-30 1998-11-06 Yutaka Mishima Agent de blanchiment de la peau
WO2002030372A1 (fr) * 2000-10-09 2002-04-18 L'oreal Procede de traitement de la canitie.
WO2003103568A2 (fr) * 2002-06-11 2003-12-18 L'oreal Utilisation d'un agent inducteur de l'expression de la dop achrome tautomerase (trp-2) comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications
WO2003103616A2 (fr) * 2002-06-11 2003-12-18 L'oreal Utilisation d'un agent mimetique de l'activite de la dopachrome tautomerase (trp-2) comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications
WO2004030661A2 (fr) * 2002-10-03 2004-04-15 Psimei Pharmaceuticals Plc Compositions therapeutiques

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0759292A1 (fr) * 1995-04-28 1997-02-26 L'oreal Utilisation de derivés de l'hormone stimulatrice des melanocytes de type alpha pour stimuler la pousse des cheveux
FR2762784A1 (fr) * 1997-04-30 1998-11-06 Yutaka Mishima Agent de blanchiment de la peau
WO2002030372A1 (fr) * 2000-10-09 2002-04-18 L'oreal Procede de traitement de la canitie.
WO2003103568A2 (fr) * 2002-06-11 2003-12-18 L'oreal Utilisation d'un agent inducteur de l'expression de la dop achrome tautomerase (trp-2) comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications
WO2003103616A2 (fr) * 2002-06-11 2003-12-18 L'oreal Utilisation d'un agent mimetique de l'activite de la dopachrome tautomerase (trp-2) comme agent protecteur des melanocytes du follicule pileux et applications
WO2004030661A2 (fr) * 2002-10-03 2004-04-15 Psimei Pharmaceuticals Plc Compositions therapeutiques

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROTA ET AL: "Comparative analysis of melanins and melanosomes produced by various coat color mutans", BIOSIS, 1995, XP002234438 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006070101A1 (fr) * 2004-12-22 2006-07-06 L'oreal Utilisation d'un compose capable d'augmenter le taux de glutathion dans les melanocytes pour le traitement de la canitie
US8481762B2 (en) 2004-12-22 2013-07-09 L'oreal Administration of compounds that increase glutathione levels in the melanocytes for the treatment of canities
AU2006334734B2 (en) * 2006-01-13 2012-07-19 Poxel Sas Combination of triazine derivatives and insulin sensitisers

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