[go: up one dir, main page]

WO1996003999A1 - Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos - Google Patents

Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos Download PDF

Info

Publication number
WO1996003999A1
WO1996003999A1 PCT/ES1995/000097 ES9500097W WO9603999A1 WO 1996003999 A1 WO1996003999 A1 WO 1996003999A1 ES 9500097 W ES9500097 W ES 9500097W WO 9603999 A1 WO9603999 A1 WO 9603999A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
apolar
extraction
extract
curcuma
polar
Prior art date
Application number
PCT/ES1995/000097
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Eliseo Quintanilla Almagro
Joaquín DIAZ ALPERI
Original Assignee
A.S.A.C. Pharmaceutical International, A.I.E.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from ES9401737A external-priority patent/ES2081264B1/es
Application filed by A.S.A.C. Pharmaceutical International, A.I.E. filed Critical A.S.A.C. Pharmaceutical International, A.I.E.
Priority to US08/624,443 priority Critical patent/US6440468B1/en
Priority to ES95926979T priority patent/ES2197203T3/es
Priority to DK95926979T priority patent/DK0726074T3/da
Priority to EP95926979A priority patent/EP0726074B1/en
Priority to DE69531146T priority patent/DE69531146T2/de
Priority to JP8506227A priority patent/JP3048642B2/ja
Publication of WO1996003999A1 publication Critical patent/WO1996003999A1/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9066—Curcuma, e.g. common turmeric, East Indian arrowroot or mango ginger
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/40—Liliopsida [monocotyledons]
    • A01N65/48—Zingiberaceae [Ginger family], e.g. ginger or galangal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention falls within the technical field of obtaining plant extracts with different medicinal, cosmetic, dietary applications, etc.
  • the present invention provides a process for obtaining apolar and polar extracts of Curcuma that have important applications as free radical scavenging agents and anti-aging agents.
  • Curcumin and other curcuminoids, as well as essential oils obtained from plant extracts of the genus Curcuma and in general from the Zingiberaceae family are useful for the treatment and prophylaxis of various diseases.
  • EP568.001 antiviral agents
  • EP440.885 anti-inflammatory
  • EP319.058 against hair loss
  • EP256.353 malabsorption syndromes treatment
  • US5.108.750 US4,906,471, US4,842,859 (antiplatelet agents and cholesterol), W088 / 05304 (against hepatitis B and AIDS), W088 / 08713 (treatment of neurological disorders), US4,568,546 (antivenom).
  • the antioxidant and coloring properties of curcumin and its derivatives are also known, which is why it is widely used in food and cosmetics as a natural preservative (US5,266,344, KK KOBE SEIKO SHO).
  • curcuminoids 4-hydroxycinnamoyl (feruloyl) methane, bis (4-hydroxycinnamoyl) methane, etc.
  • Turmeric longa ascorbic acid and / or superoxide dismutase (SOD).
  • Curcuminoids have a known antioxidant effect, as well as ascorbic acid and SOD that exert a synergistic effect.
  • curcuminoids can also result from their antioxidant effect.
  • the application EP550.807 (STEIGERWALD ARZNEIMITTELWERK) describes preparations of Curcuma longa useful for the treatment of inflammatory diseases associated with the excessive production of leukotrienes and prostaglandins (Crohn's disease, bronchial asthma, psoriasis, etc.).
  • curcumin exerts its anti-inflammatory action on the one hand participating in the active oxygen and free radical elimination reactions and on the other by inhibiting cyclooxygenase and lipoxygenase, enzymes responsible for the synthesis of prostaglandins and leukotrienes respectively.
  • the present invention provides apolar and polar extracts of Curcuma longa with important properties as free radical scavenging agents and, consequently, cellular anti-aging agents. Also, these extracts have shown the ability to reduce plasma levels of lipid peroxides in humans.
  • oxygenated radicals generated in cells are controlled by cellular defense systems.
  • the excessive generation of such radicals can exceed the protective capacity of the defense system and lead to the oxidation of cellular components, proteins, lipids and DNA.
  • These oxidative processes are relevant in the pathogenesis of diseases such as atherosclerosis and rheumatoid arthritis.
  • the present invention refers to a process for obtaining apolar and polar extracts of Curcuma and the applications of these extracts.
  • Curcuma and, especially, Curcuma longa are tropical plants known since ancient times that belong to the family of the Zingiberáceas and are originally from Asia.
  • Dried Curcuma rhizomes were already used in Asia as a food condiment and as a textile dye. They were also used in folk medicine for the treatment of stomach conditions.
  • Curcuma extracts are yellow pigments called curcuminoids, mainly consisting of: curcumin (diferuloylmethane), demethoxycurcumin (hydroxycinamoylferuloyl methane) and bisdeoxyurcumin (dihydroxycinamoylmethane).
  • the process of the present invention for obtaining the apolar extract of Curcuma longa, is characterized in that it comprises the following operations:
  • step (b) filter the extraction mixture resulting from step (a) and evaporate the solvent from the filtrate obtained under reduced pressure obtaining a brown oleoresin of characteristic odor as a dry residue;
  • step (b) dissolve the oleoresin resulting from step (b) in hot ethyl acetate, in a proportion of 50% w / w and then allow the solution to cool to room temperature for approximately 24 hours, an orange precipitate appearing that separates by filtration;
  • the process of the present invention for obtaining polar extract of turmeric longa is characterized in that it comprises the following operations:
  • step (b) filter the extraction mixture resulting from step (a) and evaporate the water from the filtrate thus obtained under reduced pressure, to obtain a residue that is a hygroscopic solid corresponding to the polar extract of Curcuma longa.
  • the process of the present invention can be carried out by supercritical extraction, for which the Curcuma rhizome, previously cut, dried and pulverized is extracted with ethanol / CO 2 and at a pressure of approximately 260 bar, to obtain the corresponding apolar extract with a curcuminoid purity of 90%.
  • the apolar extract thus obtained is identical to that obtained by solvent extraction as evidenced by its spectroscopic and chromatographic data.
  • the polar extract is obtained whose thin layer chromatography is totally coincident with that of the extract obtained by maceration in water indicated above.
  • the apolar and polar extracts of Curcuma thus obtained have free radical scavenging capacity, in particular, hydroxyl radicals OH ° and superoxide O 2 °, as demonstrated later by the studies carried out by the inventors in this regard.
  • said extracts as also shown below, have a capacity to reduce plasma levels of lipid peroxides in humans. Consequently, they also have beneficial effects on pathologies related to cellular oxidation such as atherosclerosis and rheumatoid arthritis.
  • the present invention also includes compositions and preparations with free radical scavenging capacity, which are effective against aging processes, protection of genetic material and antimutagenic capacity. It also includes compositions and preparations with a capacity to reduce plasma peroxide levels.
  • compositions or preparations contain as active ingredients the polar or apolar extracts of Curcuma longa rhizome obtained by the process of the invention or mixtures thereof, together with pharmaceutical grade excipients suitable for oral administration.
  • oral preparations can be presented in solid form (powders, tablets, dragees, capsules, etc.) or liquid (syrups or suspensions).
  • the present inventors show as a protective agent or free radical scavenger, in addition to the apolar extract of Curcuma longa, in which are curcuminoids, the aqueous or polar extract of Curcuma longa in which there is neither curcumin nor curcuminoids
  • the studies carried out by the aforementioned inventors show that the aqueous extract of Curcuma longa is by itself a potent free radical scavenger, especially superoxide (O 2 o).
  • the application relative to the decrease in plasma lipid peroxide levels is based primarily on the free radical scavenging capacity of the said extracts.
  • biochemical parameters such as total cholesterol, triglycerides, glucose, uric acid, and HDL / cholesterol, which are also considered important in the evaluation of the degree of aging.
  • lipid peroxides the result of oxidation by oxygen-derived free radicals, on polyunsaturated fatty acids that are part of the membrane phospholipids.
  • the present inventors have studied the antioxidant capacity of pharmaceutical compositions based on polar and apolar extracts of Curcuma lonqa. for its action on serum levels of malonaldehyde (MDA) in humans, as an indicator of its ability to block the action of free radicals in the cell membrane.
  • MDA malonaldehyde
  • Curcuma longa is a natural extract that decreases plasma lipid peroxides, which implies a protective mechanism of the cell membrane.
  • Figure 1 Values of the indexes of peroxides for the males in the study.
  • Figure 2 Values of the indexes of peroxides for women in the study.
  • This example illustrates obtaining the apolar extract of Curcuma of the present invention.
  • the extract was filtered and the solvent was evaporated under reduced pressure (0.5 torr) until complete elimination.
  • the yield of oleoresin using this procedure ranged from 12-15% based on the weight of the dry starting rhizome.
  • the oleoresin thus obtained was dissolved in hot ethyl acetate (50% weight) and allowed to stand at room temperature for 24 hours, during which time an orange precipitate appeared.
  • the filtrate was dried under reduced pressure until a second oleoresin darker than the previous one was obtained, whose curcuminoid content ranged from 20% to 25%.
  • the precipitate was recrystallized from ethyl acetate (50% by weight) following the steps mentioned above, thus obtaining curcuminoids with a purity greater than 90%
  • This example illustrates the obtaining of the Curcuma polar extract of the present invention.
  • This method of extraction increases the selectivity of curcumin extraction compared to other curcuminoids.
  • the curcumin present in the apolar fraction shows a thermal degradation as a function of time.
  • the extraction performance at 250 bar has been studied with a flow rate of 3 Kg / h of CO 2 and a particle size between 0.1 and 1 mm at 35 ° C, 40 ° C, 50 ° C, 55 ° C, obtaining the best yields at 55 ° C.
  • Curcuminoid yield has been studied by extracting Curcuma with different proportions of cosolvent (ethanol) in CO 2 .
  • the extract had as its main component the solvent used in the extraction.
  • the solid oleoresin obtained showed a performance similar to the yield obtained by conventional methods but was increased in the selectivity of oleoresin extraction in ethanol extraction versus organic solvent extraction. The results are shown below.
  • the equipment must be equipped with a pump with internal cooling, capable of supplying pressures of 300 bar.
  • a refrigerator is needed to liquefy the CO 2 that leaves the second separator and thus be able to recirculate the CO 2, reducing operating costs.
  • the plant must be equipped with a pressure and temperature control system in the extractor and separators, flow and temperature of the refrigerator.
  • a system of pressure and temperature alarms must be installed in the extractors, separators and heating jackets, as well as the refrigerator to avoid any accident.
  • This Example illustrates a composition according to the present invention, for oral administration, in the form of tablets consisting of:
  • This Example illustrates a liquid composition, according to the present invention, for oral administration, in the form of an emulsion, consisting of:
  • sweetening agents for example, sucrose or fructose
  • flavoring agents for example, sucrose or fructose
  • the autoxidation of pyrogallol has been studied after an induction period of 20 seconds, and for 2 minutes, during which time the absorbance increase is linear at 420 nm.
  • the inhibition of the autoxidation of pyrogallol by turmeric extracts is used to determine the capture capacity on the radical O 2 o.
  • DTPA pyrogallol.
  • DTPA is used as a chelator to eliminate possible interference from ions such as iron, copper or manganese.
  • OH hydroxyl free radical scavenging capacity
  • Ascorbic acid (2 mM) is added and after 30 minutes of incubation at 37 ° C, the reaction is stopped with 1 mL of 17.5% (w / v) trifluoroacetic acid, and measured in an aliquot of 1, 5 mL by spectrophotometry.
  • the competition between the problem extract and the DMSO for the hydroxyl radical (OH o ) generated from the ascorbic / iron system is used to estimate the activity of the hydroxyl radical OH o of the test substance, expressing it as the percentage of inhibition of formaldehyde production.
  • the formaldehyde produced is measured in the previous reaction by adding 2 mL of a reactive mixture of ammonium acetate and acetyl acetone in 50 mM phosphate buffer pH 7.4, on a 1.5 mL aliquot. The mixture is incubated at 58 ° C for 5 minutes and then the samples are immersed in an ice bath, and the 3,5-diacetyl-1,4-dihydrolutin formed at 412 nm is measured.
  • the superoxide free radical scavenging capacity is studied by the inhibition of the formation of diformarán, a highly colored compound that has a maximum absorption at 560 nm.
  • the reaction mixture is composed of 19 mM phosphate buffer pH 7.4 NADH (90 ⁇ M), NBT (43 ⁇ M), extract to be tested (target vehicle), pH 5 (2.7 ⁇ M), all in a volume of 3 , 1 mL.
  • the NBT reduction reaction begins with the addition of PMS and is followed spectrophotomically, by measuring the absorbance at 560 nm and at 20 ° C for 2 minutes to calculate the absorbance increase per ( ⁇ A / min).
  • the following scheme shows the protocol followed:
  • the inhibition percentages for the Smilax Lundeli polar extract are obtained for 5 samples with a concentration of 500 ⁇ g / mL, which is 99.6 ⁇ 0.1% for p ⁇ 0.01.
  • This example aims to demonstrate the action, on the plasma levels of peroxideslipides, of a pharmaceutical composition based on polar and apolar extracts, of Curcuma longa. when administered orally, in the form of two daily tablets containing 7 to 14 mg of curcumin per tablet and 150 to 175 mg of aqueous extract of Curcuma longa. to a group of subjects of both healthy sexes, during a period of two and a half months.
  • peripheral blood was extracted for the determination of the complete blood count, of the parameters of evaluation of the hepatic and renal function; Likewise, the determination of serum lipid and peroxide peroxide levels was determined.
  • the blood count was performed on a Technicon H-1 analyzer (USA).
  • biochemical parameters were performed following standardized methods with reagents from Boehringer-Mannheim (Germany), with a Hitachi 717 autoanalyzer (Japan).
  • the lipid peroxides were determined as malonaldehyde (MDA) by the method of Ohkama, Ohishi and Yagi (Analytical Biochem. 95 351-358 (1979)), modified for serum.
  • MDA malonaldehyde
  • liver enzyme marker enzymes (GOT, GPT, GGT, alkaline phosphatase) as indicators of the toxicity of the product and total, direct and indirect bilirubin, are not altered throughout the entire process, such as it can be seen in the following Table 3.
  • GOT, GPT, GGT, alkaline phosphatase as indicators of the toxicity of the product and total, direct and indirect bilirubin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

La obtención del extracto apolar comprende: (a) extracción de los rizomas con un disolvente orgánico; (b) filtración y evaporación a sequedad del extracto; (c) disolución de la oleorresina resultante en caliente, precipitación dejando enfriar y filtración del sólido; (d) secado y recristalización del sólido para obtener un producto con una pureza en curcuminoides superior al 90 %. La obtención del extracto polar comprende: (a') extracción de los rizomas con agua a 50-70 °C y (b') filtrado y evaporación del agua. Aplicación en la fabricación de composiciones y preparados útiles como captadores de radicales libres y agentes antienvejecimiento, así como agentes reductores de los niveles plasmáticos de peróxidos lipídicos en humanos.

Description

TITULO DE LA INVENCION
Procedimiento para la obtención de extractos apolares y polares de Curcuma y aplicaciones de los mismos.
CAMPO TECNICO DE LA INVENCION
La presente invención se encuadra dentro del campo técnico de la obtención de extractos de plantas con diferentes aplicaciones medicinales, cosméticas, dietéticas, etc.
Más especialmente, la presente invención proporciona un procedimiento para la obtención de extractos apolares y polares de Curcuma que tienen importantes aplicaciones como agentes captadores de radicales libres y agentes antienvejecimiento.
ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR A LA INVENCION
La curcumina y otros curcuminoides, así como aceites esenciales obtenidos de extractos de plantas del género Curcuma y en general de la familia de las Zingiberaceas son útiles para el tratamiento y profilaxis de diversas enfermedades. A titulo de ejemplo, se pueden citar: EP568.001 (agentes antivirales), EP440.885 (antiinflamatorios), EP319.058 (contra la caída del cabello), EP256.353 (tratamiento de síndromes de malabsorción), US5.108.750, US4.906.471, US4.842.859 (agentes antiagregantes plaquetarios y anticolesterol), W088/05304 (contra hepatitis B y sida), W088/08713 (tratamiento de desórdenes neurológicos), US4.568.546 (antiveneno). También son conocidas las propiedades antioxidantes y colorantes de la curcumina y sus derivados por lo que suele emplearse ampliamente en alimentación y cosmética como conservante natural (US5.266.344, KK KOBE SEIKO SHO).
Por otra parte, se sabe que el exceso de oxígeno reactivo y de radicales libres en los tej idos produce alteraciones que conducen al envejecimiento celular prematuro y a la aparición de diversas enfermedades. Dada la creciente preocupación por este fenómeno, no resulta sorprendente que existan numerosos documentos sobre preparación de extractos vegetales con efectos antioxidantes, captadores de radicales libres y por lo tanto útiles en la prevención del envejecimiento celular. Sin embargo, en el caso concreto de extractos de Curcuma longa el número de documentos recuperados no es muy abundante, correspondiendo además en su mayor parte a literatura no patente.
Entre las referencias bibliográficas de las patentes de mayor interés que se encuentran recogidas en los bancos de datos, destaca la solicitud FR2.655.054 (PACIFIC CHEMICAL) sobre agentes de protección celular que contienen curcuminoides (curcumina, 4-hidroxicinamoil (feruloil) metano, bis (4-hidroxicinamoil) metano, etc) obtenidos de Cúrcuma longa, ácido ascórbico y/o superóxido dismutasa (SOD). Los curcuminoides poseen un conocido efecto antioxidante, así como el ácido ascórbico y la SOD que ejercen un efecto sinérgico.
Por otra parte, la actividad antiinflamatoria de los curcuminoides también puede resultar de su efecto antioxidante. En este sentido, la solicitud EP550.807 (STEIGERWALD ARZNEIMITTELWERK) describe preparaciones de Curcuma longa útiles para el tratamiento de enfermedades inflamatorias asociadas con la producción excesiva de leucotrienos y prostaglandinas (enfermedad de Crohn, asma bronquial, psoriasis, etc). Según este documento, la curcumina ejerce su acción antiinflamatoria por una parte participando en las reacciones de eliminación de oxígeno activo y de radicales libres y por otra inhibiendo la ciclooxigenasa y la lipooxigenasa, enzimas responsables de la síntesis de prostaglandinas y leucotrienos respectivamente.
En relación con los procedimientos de extracción de las fracciones polar y apolar de los rizomas de Curcuma longa, se trata de procedimientos convencionales que uuilizan disolventes usuales (líquidos en condiciones normales) o bien CO2 o NO2 líquidos o en condiciones supercríticas, lo que es igualmente usual para la extracción de aromas y aceites esenciales de plantas ( "Carbon dioxide extracted ingredients for fragances", Flavours & Fragances O-5M385P, North Albert Road, Reigate, Surrey RH2 9 ER, Inglaterra).
No obstante, es un campo de notable interés en el que todavía sigue siendo deseable la obtención de extractos más puros el descubrimiento de posibles nuevas aplicaciones de los mismos en el campo médico-farmacéutico, en el cosmético, en el dietético, etc.
En esta línea, la presente invención proporciona unos extractos apolares y polares de Curcuma longa con importantes propiedades como agentes captadores de radicales libres y, consecuentemente, agentes antienvejecimiento celular. Asimismo, estos extractos han mostrado capacidad para reducir los niveles plasmáticos de peróxidos lipidíeos en humanos.
Por otra parte, según los datos bibliográficos es conocido que los radicales oxigenados generados en las células son controlados por los sistemas de defensa celular. La excesiva generación de tales radicales puede exceder la capacidad protectora del sistema de defensa y conducir a la oxidación de los componentes celular, proteínas, lípidos y DNA. Estos procesos oxidativos son relevantes en la patogénesis de enfermedades tales como arterieesclerosis y artritis reumatoide.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION
La presente invención, tal y como se indica en su enunciado se refiere a un procedimiento para la obtención de extractos apolares y polares de Curcuma y las aplicaciones de estos extractos.
Las plantas del género Curcuma y, en especial, la Curcuma longa son plantas tropicales conocidas desde la antigüedad que pertenecen a la familia de las Zingiberáceas y son originarias de Asia. Los rizomas de Curcuma secados ya se utilizaba en Asia como condimento alimentario y como colorante textil. También se empleaban en medicina popular para el tratamiento de afecciones estomacales.
En los últimos años, en la literatura científica han aparecido nuevas aplicaciones farmacológicas: actividad antibacteriana, antiinflamatoria, capacidad de peroxidación lipídica, antihepatóxico y antitumoral.
Los extractos de Curcuma son pigmentos amari- líos denominados curcuminoides, fundamentalmente constituidos por: curcumina (diferuloilmetano), desmetoxicurcumina (hidroxicinamoilferuloil-metano) y bisdesoxicurcumina (dihidroxicinamoilmetano).
El procedimiento de la presente invención, para la obtención del extracto apolar de Curcuma longa, se caracteriza porque comprende las siguientes operaciones:
a) someter a un proceso de extracción en continuo durante unas 48 horas, los rizomas de Curcuma previamente cortados, secados y pulverizados, empleando un disolvente orgánico en una relación rizoma:disolvente de 1:7 peso/volumen, llevándose a cabo el proceso en régimen estacionario para evitar pérdidas de disolvente, para lo cual se va regulando la temperatura del calderín de extracción;
b) filtrar la mezcla de extracción resultante de la etapa (a) y evaporar el disolvente del filtrado obtenido a presión reducida obteniéndose como residuo seco una oleorresina marrón de olor característico;
c) disolver la oleorresina resultante de la etapa (b) en acetato de etilo caliente, en una proporción del 50% p/p y seguidamente dejar enfriar la disolución hasta la temperatura ambiente durante unas 24 horas aproximadamente, apareciendo un precipitado anaranjado que se separa por filtración;
d) secar a presión reducida el filtrado procedente de la etapa anterior para obtener una segunda oleorresina más oscura que la anterior, cuyo contenido en curcuminoides oscila entre 20 y 25%;
e) recristalizar el precipitado resultante en acetato de etilo al 50% (p/p) para obtener un sólido con una pureza en curcuminoides superior al 90%.
Por su parte, el procedimiento de la presente invención para la obtención de extracto polar de cúrcuma longa, se caracteriza porque comprende las siguientes operaciones:
a) someter a un proceso de extracción con agua los rizomas de Curcuma longa, previamente cortados, secados y pulverizados, manteniéndolos en maceración durante unas 24 horas a una temperatura comprendida entre 50 y 70º C;
b) filtrar la mezcla de extracción resultante de la etapa (a) y evaporar el agua del filtrado así obtenido a presión reducida, para obtener un residuo que es un sólido higroscópico correspondiente al extracto polar de Curcuma longa.
Asimismo, el procedimiento de la presente invención se puede llevar a cabo mediante extracción supercrítica, para lo cual el rizoma de Curcuma, previamente cortado, secado y pulverizado se extrae con etanol/CO2 y a una presión de aproximadamente 260 bar, para obtener el correspondiente extracto apolar con una pureza en curcuminoides del 90%. El extracto apolar así obtenido es idéntico al obtenido mediante la extracción con disolventes según lo demuestran sus datos espectroscópicos y cromatográficos. De la misma forma, pero empleando agua como codisolvente se obtiene el extracto polar cuya cromatografía en capa fina es totalmente coincidente con la del extracto obtenido por maceración en agua indicado anteriormente.
Preferentemente la obtención del extracto apolar mencionado anteriormente, mediante extracción supercrítica, se lleva a cabo en las siguientes condicio nes:
- Secado de la Curcuma longa troceada a una temperatura de 50ºC;
- Triturado del rizoma en partículas entre 0,1 y 1 mm;
- Extracción del rizoma de Curcuma longa utilizando etanol, modificado con una pequeña cantidad de CO2 , como disolvente, a 250 bares y 50 º C
- Extracción del etanol presente en la oleorresina con CO2 a 280 bares y 50ºC.
Los extractos apolar y polar de Curcuma así obtenidos tienen capacidad captadora de radicales libres, en concreto, de radicales hidroxilo OHº y superóxido O2º, como se demuestra más adelante por los estudios llevados realizados por los inventores al respecto. Además, dichos extractos, como también se demuestra más adelante, tienen capacidad reductora de los niveles plasmáticos de peróxidos lipídicos en humanos. Consecuentemente, también tienen efectos beneficiosos en patologías relacionadas con la oxidación celular tales como la arterioesclerosis y la artritis reumatoide.
La presente invención incluye también composiciones y preparados con capacidad captadora de radicales libres, los cuales son efectivos contra los procesos de envejecimiento, protección del material genético y capacidad antimutagénica. Asimismo, incluye composiciones y preparados con capacidad reductora de los niveles plasmáticos de peróxidoslipídicos.
Las referidas composiciones o preparados contienen como principios activos los extractos polar o apolar de rizoma de Curcuma longa obtenidos por el procedimiento de la invención o mezclas de los mismos, junto con excipientes de calidad farmacéutica apropiados para la administración por vía oral.
Estos preparados orales pueden presentarse en forma sólida (polvos, comprimidos, grageas, cápsulas, etc) o líquida (jarabes o suspensiones).
De acuerdo con lo expuesto anteriormente, los presentes inventores muestran como agente protector o captador de radicales libres, además del extracto apolar de Curcuma longa, en el que están los curcuminoides, el extracto acuoso o polar de Curcuma longa en el cual no hay curcumina ni curcuminoides. Además, los estudios realizados por los citados inventores, demuestran que el extracto acuoso de Curcuma longa es por sí solo un potente captador de radicales libres, en especial, superóxido (O2º).
La aplicación relativa a la disminución de los niveles de peróxidos lipídicos plasmáticos, está basada fundamentalmente en la capacidad captadora de radicales libres de los referidos extractos.
Dentro del campo del estudio del envejecimiento, se deben evaluar distintas variables que pertenecen a los ámbitos de la fisiología, de la bioquímica y de la psicología. Los trabajos encaminados hacia la gerontología preventiva han desembocado en la confección del perfil de la edad biológica y estilo de vida, que pretenden ser una herramienta que evalúe de la forma más rigurosa y sencilla posible los parámetros más sensibles en lo referente a hábitos vitales como: Tratamiento farmacológico, tabaco, alcohol, ejercicio, sueño, percepción de la propia salud y stress.
Al margen del modo de vida de la población en general existen parámetros bioquímicos como colesterol total, triglicéridos, glucosa, ácido úrico, y HDL/coles- terol, que también se consideran importantes en la evaluación del grado de envejecimiento.
En este sentido, por la gran cantidad de información que genera, es interesante incluir en el perfil de la edad biológica, un parámetro bioquímico, que puede medirse con cierta facilidad en sangre periférica: los peróxidos lipídicos, resultado de la oxidación por parte de los radicales libres derivados del oxígeno, sobre los ácidos grasos poliinsaturados que forman parte de los fosfolípidos de membrana.
Este proceso oxidativo con frecuencia excede la capacidad homeostática de la célula, pudiendo ocurrir un proceso de oxidación anormal e incontrolado con una destrucción masiva de la membrana celular. Es sabido que en la homeostasis de la peroxidación intervienen antioxidantes como los beta-carotenos y los tocoferoles. Por tanto, parece lógico pensar que la administración exógena de una sustancia antioxidante, pueda ser útil para el restablecimiento de este equilibrio celular.
Los presentes inventores, han estudiado la capacidad antioxidante de composiciones farmacéuticas a base de los extractos polar y apolar de Curcuma lonqa. por su acción sobre los niveles séricos de malonaldehido (MDA) en humanos, como indicador de su capacidad de bloqueo de la acción de los radicales libres de la membrana celular. Las conclusiones obtenidas de este estudio son las siguientes:
1.- Curcuma longa es un extracto natural que disminuye los peróxidos lipídicos plasmáticos, lo que implica un mecanismo protector de la membrana celular.
2.- No presenta toxicidad alguna; la toma durante 105 días de Curcuma longa no modifica las pruebas hematológicas hepáticas y renales.
3.- El efecto a nivel de los peróxidos lipidíeos es rápido: a los 45 días ya se detectó un descenso de los mismos, prácticamente en todas las décadas y en ambos sexos.
4.- La inhibición de los peróxidoslipídicos y la captación de los radicales libres, propiedades fundamentales de la Curcuma longa. son una de las bases donde se apoyan las teorías de envejecimiento. BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
Figura 1: Valores de los índices de peróxidoslipídicos para los Varones del estudio.
Figura 2: Valores de los índices de peróxidoslipídicos para las Mujeres del estudio.
MODOS DE REALIZACION DE LA INVENCION
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes Ejemplos, los cuales no pretenden ser limitativos de su alcance.
EJEMPLO 1
Este ejemplo ilustra la obtención del extracto apolar de Curcuma de la presente invención.
Se extrajeron 13-14 kg rizoma de Curcuma seco y molido, en continuo, utilizando 70 litros de diclorometano. La temperatura del calderín se reguló hasta obtener el régimen estacionario.
La extracción se consideró agotada después de 48 horas.
El extracto se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida (0,5 torr) hasta su total eliminación.
El rendimiento de oleorresina utilizando este procedimiento osciló entre 12-15% en base a peso de rizoma seco de partida.
La oleorresina así obtenida se disolvió en acetato de etilo caliente (50% peso) y se dejó estar a temperatura ambiente durante 24 horas, en el transcurso de las cuales fue apareciendo un precipitado anaranjado
(curcuminoides) que se separó por filtración.
El filtrado se secó a presión reducida hasta obtener una segunda oleorresina más oscura que la anterior cuyo contenido en curcuminoides osciló entre el 20% y 25%.
El precipitado se recristalizó en acetato de etilo (50% en peso) siguiendo los pasos mencionados anteriormente, obteniendo así curcuminoides con una pureza superior al 90%.
EJEMPLO 2
Este ejemplo ilustra la obtención del extracto polar de Curcuma de la presente invención.
Se extrajeron 30 Kg de rizomas de Curcuma longa molidos con 300 litros de agua a 70ºC en maceracion durante 24 horas. La solución se filtró a través de placa filtrante y el disolvente se evaporó a presión reducida (0,5 bar) obteniéndose 240 gr de un sólido higroscopico. Rendimiento 8%.
EJEMPLO 3
En este Ejemplo se pone de manifiesto como se ha optimizado el proceso de extracción utilizando fluidos en estado supercrítico, estudiando los siguientes parámetros:
- Estabilidad térmica de los curcuminoides.
- Estudio de la temperatura de extracción.
- Estudio de la presión de alimentación.
- Estudio del tamaño de partícula.
- Estudio de la humedad de la matriz de partida.
- Estudio del caudal del fluido supercrítico.
- Estudio del uso de etanol como cosolvente.
- Extracción por técnicas combinadas.
A partir de los resultados experimentales se han evaluado los costes siendo el proceso óptimo, en el cual están las siguientes fases:
- Secado de la Curcuma longa troceada a una temperatura de 50ºC.
- Triturado del rizoma en partículas entre 0,1 y 1 mm.
- Extracción del rizoma de Curcuma longa utilizando etanol, modificado con una pequeña cantidad de CO2 como disolvente a 250 bares y 50ºC.
- Extracción del etanol presente en la oleorresina con CO2 a 280 bares y 50ºC.
La novedad de esta técnica radica en la utilización de etanol modificado con CO2 para la extracción de la Curcuma longa y por otra parte este método reduce los costes para la extracción de curcumina frente a las técnicas convencionales, extracción con disolventes y/o extracción supercrítica con dióxido de carbono.
Este método de extracción aumenta la selectividad de la extracción de curcumina frente a los otros curcuminoides.
- Estabilidad en la curcumina
La curcumina presente en la fracción apolar muestra una degradación térmica en función del tiempo.
Los resultados indican una pérdida de curcuminoides al aumentar la temperatura, sobre todo al sobrepasar los 50ºC.
Inicialmente se produce una mayor degradación que se estabiliza a partir de 24-48 horas de exposición. La degradación se mantiene en un 2% para temperaturas inferiores a los 50ºC y un 4% a 80ºC.
- Estudio de la temperatura de extracción. Se ha estudiado el rendimiento de extracción a 250 bar con un caudal de 3 Kg/h de CO2 y un tamaño de partícula entre 0,1 y 1 mm a 35ºC, 40ºC, 50ºC, 55ºC, obteniéndose los mejores rendimientos a 55ºC.
- Estudio de la presión de alimentación.
Se ha estudiado el rendimiento de extracción a distintas temperaturas (30ºC, 40ºC, 50ºC) y distintas presiones (100 bar, 150 bar, 200 bar, 250 bar) con un caudal de 3 Kg/h de CO2 y un tamaño de partícula entre 0 , 1 y 1 mm. Para todas las temperaturas estudiadas el rendimiento máximo obtenido ha sido a 250 bares de presión.
- Estudio del tamaño de partícula.
Se ha estudiado el rendimiento de extracción a 50ºC, 250 bar, y un caudal de 3 Kg/h de CO2 para distin tos tamaños de partícula.
El máximo rendimiento se obtuvo para tamaños de partícula entre 0,1 y 1 milímetro.
- Estudio de la humedad de la matriz de partida.
Se ha estudiado el rendimiento de extracción a partir de distintas muestras de rizoma de Curcuma con diferente grado de humedad (80%, 50%, 8%). El mayor rendimiento en curcumina se obtiene trabajando con una humedad en la matriz de partida de 8%, por lo que para la obtención de la fracción apolar el proceso de extracción se efectúa con el sistema deshidratado.
- Estudio del caudal del fluido supercrítico. Se ha observado que conforme disminuye el caudal de disolvente la aparición de efectos difusionales se retrasa, aumentando el efecto de solubilidad e incrementando el rendimiento de extracción. Por otro lado, caudales excesivamente pequeños y/o grandes aumentan el tiempo de extracción.
- Extracción mediante etanol y dióxido de carbono supercrítico.
Se ha estudiado el rendimiento en curcuminoides extrayendo la Curcuma con diferentes proporciones de cosolvente (etanol) en CO2.
El mayor rendimiento en oleorresina se obtuvo utilizando etanol al 96% con un 4% de CO2 , obteniéndose un rendimiento en oleorresina del 11,42% (con un 43% en curcuminoides) que significa un 98% de la cantidad total de la oleorresina en el producto inicial y un rendimiento del 100% en curcuminoides totales.
- Extracción mediante técnicas combinadas.
A partir de extracciones supercríticas a partir de oleorresinas de Curcuma longa obtenidas por extracción con disolvente. Se observó que la extracción era muy rápida al principio pero que iba ralentizándose con el tiempo por solidificación de la oleorresina. Este sólido tenía un aspecto apelmazado y estaba formado por partículas muy finas.
El extracto tenía como principal componente el disolvente utilizado en la extracción.
En estos ensayos se observó la existencia de un efecto cosolvente grande, ya el extracto obtenido se volvió a introducir en el equipo para ver si se podía fraccionar y se observó que era muy poco soluble en CO2 supercrítico.
Se obtuvo una oleorresina con etanol y CO296- 4% a 250 bar y a 50ºC y posteriormente esta oleorresina se extrajo a 280 bar, 50ºC y usando un caudal de 3 Kg/h de CO2.
La oleorresina sólida obtenida mostró un rendimiento similar al rendimiento obtenido por métodos convencionales pero se aumentó en la selectividad de la extracción de la oleorresina en la extracción con etanol frente a la extracción con disolventes orgánicos. Los resultados se muestran a continuación.
Curcumina % Demetoxi % Bisdemetoxi % Oleorresina 34,50% 29,50% 36,00% obtenida por
métodos convencionales
Oleorresina 72,36% 17,76% 9,88% obtenida
con EtOH
- Estimación de costes.
A partir de los estudios anteriores se ha realizado una estimación de costes estudiando diferentes supuestos, calculando el coste por Kg de curcumina. Los diferentes supuestos son:
a.- Partiendo de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante CO2 en estado supercrítico.
1.- Caudal de 3 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,413 Kg/l. Supuesto 1.1.
2.- Caudal de 3 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,573 Kg/l. Supuesto 1.2.
3.- Caudal de 1 Kg/h y densidad aparente de la Curcuma de 0,413 Kg/l. Supuesto 1.3.
b.- Utilizando como materia prima la Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante un proceso en lotes utilizando como disolvente una mezcla de etanol/dióxido de carbono a presión elevada. Supuesto 2.
c.- Partiendo de oleorresina extraída con disolventes orgánicos por métodos convencionales y extrayendo los disolventes presentes mediante CO2 en estado supercrítico. De esta manera se obtiene una oleorresina sólida más concentrada en curcumina. Supuesto 3.
d.- Partiendo de oleorresina extraída con etanol/CO2 a alta presión y extrayendo el etanol presente mediante CO2 en estado supercrítico. De esta manera se obtiene una oleorresina sólida todavía más concentrada en curcumina que la anterior. Supuesto 4.
e.- A partir de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina utilizando etanol en una extracción soxhlet. Supuesto 5. f.- A partir de Curcuma longa y extrayendo la oleorresina mediante CO2 SC modificado con etanol.
1.- Proporción de etanol en el disolvente del 17%. Supuesto 6.1.
2.- Proporción de etanol en el disolvente del 34%. Supuesto 6.2.
Operación.
Para realizar la estimación de costes, se ha considerado una eficacia del 90% del total de la operación.
Figure imgf000017_0001
Se observa que el supuesto más favorable es el supuesto número 4 en el que se extrae el rizoma de Curcuma longa con etanol a presión y posteriormente la oleorresina se purifica por extracción con CO2.
Instalación.
Para poder llevar a cabo la obtención de curcumina a partir de su oleorresina, se necesitan dos extractores y dos separadores, provistos de camisas de calefacción.
El equipo deberá ir equipado con una bomba con refrigeración interna, capaz de suministrar presiones de 300 bar. Además, se necesita un refrigerador para licuar el CO2 que sale del segundo separador y así poder recircular el CO2 abaratando costes de operación.
El hecho de tener dos extractores es para poder realizar un proceso semicontínuo de extracción, ya que durante los tiempos muertos de carga y descarga y presurización de la unidad, el proceso puede seguir funcionando con el otro extractor.
La planta deberá ir equipada con un sistema de control de presión y temperatura en el extractor y separadores, caudal y temperatura del refrigerador. Además, se deberá instalar un sistema de alarmas de presión y temperatura en los extractores, separadores y camisas de calefacción, así como el refrigerador para evitar cualquier accidente.
EJEMPLO 4
Este Ejemplo ilustra una composición de acuerdo con la presente invención, para su administración por vía oral, en forma de comprimidos constituida por:
- Curcuminoides............................................... 15 mg
- Extracto acuoso de Curcuma.................175 mg
- Avicel pH 102............................................. 489 mg
- Almidón........................................................... 45 mg
- Estearato de magnesio................................ 8 mg - Primogel.................................................... 3 mg
- EM compres............................................................ 15 mg
EJEMPLO 5
Este Ejemplo ilustra una composición líquida, de acuerdo con la presente invención, para su administración por vía oral, en forma de emulsión, constituida por:
- Curcuminoides........................................................ 20 mg
- Extracto acuoso de Curcuma........................ 200 mg
junto con cantidades variables de agentes edulcorantes (por ejemplo, sacarosa o fructosa) y de agentes saborizantes
(por ejemplo, esencias de menta o de fresa) y de aceites vegetales en cantidad suficiente para 100 mi de emulsión.
Los siguientes Ejemplos corresponden a los estudios efectuados sobre los extractos de la invención, dirigidos a determinar y evaluar su capacidad captadora de radicales libres, así como su capacidad reductora de peróxidoslipídicos.
EJEMPLO 6
Estudio de la capacidad captadora del radical superóxido (O2º ) por el método del pirogalol.
Se ha estudiado la autoxidación del pirogalol tras un período de inducción de 20 segundos, y durante 2 minutos, tiempo en el que el incremento de absorbancia es lineal a 420 nm. Se emplea la inhibición de la autoxidación del pirogalol por los extractos de cúrcuma, para determinar la capacidad captadora sobre el radical O2º .
La experiencia se realiza a 25º C. El pirogagol se vehiculiza en ácido clorhídrico 10 mM. La reacción se inicia cuando se añade a una solución tampón Tris-ácido cacodílico saturada con aire, pH 8,2 que contiene 1 mM de
DTPA el pirogalol. El DTPA es utilizado como quelante para eliminar posibles interferencias de iones como hierro, cobre o manganeso.
Para los extractos apolares de cúrcuma se encontró un porcentaje de inhibición del 40,92% ± 0,002 (p < 0,01) a una concentración de 16, 129μg/mL en curcuminoides, mientras que la inhibición de la SOD es del 95%. EJEMPLO 7
Estudio de la capacidad captadora del radical hidroxilo (OHº) por el método del DMSO.
Capacidad captadora del radical hidroxilo por el test del DMSO.
Se ha estudiado la capacidad captadora de radicales libres hidroxilo (OHº) por medida del formaldehído generado durante la oxidación del DMSO; potente captador de radicales hidroxilo por el sistema ácido ascórbico/Fe+3. La oxidación se desencadena por el ascorbato y se cataliza de por el Fe+3 a 37º C. La mezcla de reacción está formada de EDTA (0,1 mM), complejo Fe+++ EDTA (1:2) (167 μM) DMSO (33 mM), extracto problema y tampón fosfato 50 mM pH 7,4 en un volumen final de 3 mL.
Se adiciona el ácido ascórbico (2 mM) y después de 30 minutos de incubación a 37º C, la reacción se detiene con 1 mL de ácido trifluoracético al 17,5% (p/v), y se mide en una alícuota de 1,5 mL mediante espectrofotometría.
Se utiliza la competencia entre el extracto problema y el DMSO por el radical hidroxilo (OHº) generado procedente del sistema ascórbico/hierro, para la estimación de la actividad captadora del radical hidroxilo OHº de la sustancia problema, expresándola como el porcentaje de inhibición de la producción de formaldehido.
El protocolo seguido es el siguiente:
Figure imgf000020_0001
Be: Blanco del control
C: Control
Bp: Blanco problema
P: Problema
El formaldehido producido se mide en la reacción anterior por adición de 2 mL de una mezcla reactiva de acetato amónico y acetil acetona en tampón fosfato 50 mM pH 7,4, sobre una alícuota de 1,5 mL. La mezcla se incuba a 58º C durante 5 minutos y seguidamente las muestras se sumergen en un baño de hielo, y se mide la 3,5-diacetil-1,4-dihidrolutina formada a 412 nm.
Los resultados obtenidos fueron: para la mezcla de curcumoides, extracto apolar, fue del
95,13 ± 2,46% (P < 0,01, n = 6) siendo la concentración de la muestra 16,129 μg/mL.
EJEMPLO 8
Estudio de la capacidad captadora del radical superóxido (O2 º ) por el método NADH-fenazinametosulfato- O2º-azul de nitrotetrazolio (NBT).
Se estudia la capacidad captadora de radicales libres superóxido por la inhibición de la formación de diformarán, compuesto altamente coloreado que presenta un máximo de absorción a 560 nm. La mezcla de reacción está compuesta por tampón fosfato 19 mM pH 7,4 NADH (90μM), NBT (43μM), extracto a ensayar (vehículo para el blanco), pH 5 (2,7μM), todo ello en un volumen de 3,1 mL. La reacción de reducción del NBT se inicia con la adición del PMS y es seguida espectrofotométicamente, por medida de la absorban- cia a 560 nm y a 20º C durante 2 minutos para calcular el incremento de absorbancia por ( Δ A/min). El siguiente esquema muestra el protocolo seguido:
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Be : Blanco del control
C: Control
Bp: Blanco problema
P: Problema
Se obtienen los porcentajes de inhibición para el extracto polar de Smilax Lundeli para 5 muestras con una concentración de 500μg/mL, que es del 99,6 ± 0,1 % para p < 0,01.
EJEMPLO 9
Estudio de la capacidad captadora del radical superóxido (O2º ) por el método Xantina-Xantina oxidasa.
Se ha estudiado la capacidad captadora del radical superóxido de la fracción polar de Curcuma longa por el método de la xantina-xantina oxidasa produciéndose una inhibición del 77,95% para una concentración final de 1,25 μ g/mL en curcuminoides. Se ha comprobado que el extracto no inhibe a la enzima, indicando esto que este extracto es un poderoso captador de radicales superóxido. EJEMPLO 10
Estudio de los efectos de los extractos de Curcuma lonqa en los niveles de peróxidos lipídicos en sangre en humanos.
Este ejemplo pretende demostrar la acción, sobre los niveles plasmáticos de peróxidoslipídicos, de una composición farmacéutica a base de extractos polares y apolares, de Curcuma longa. cuando es administrada por vía oral, en forma de dos comprimidos diarios conteniendo de 7 a 14 mg de curcumina por comprimido y de 150 a 175 mg de extracto acuoso de Curcuma longa. a un conjunto de sujetos de ambos sexos sanos, durante un período de dos meses y medio. COMPOSICION DE LOS COMPRIMIDOS DEL PRESENTE EJEMPLO
mg/comprimido
Extracto apolar de Curcuma longa ...................... 60*
Extracto polar de Curcuma longa .................. 175
Avicel pH 102 .......................................... 489
Almidón de maíz ................................. 45
Estearato de magnesio ................................ 8
Primogel ................................................ 3
EM Compress ........................ ................ 15
* Equivalente a 12,5 mg de Curcuminoides
METODO
Se ha estudiado una población de 19 varones y 13 mujeres de edades comprendidas entre 27 y 74 años, tal y como se indica en la siguiente Tabla 1:
TABLA 1: Numero de sujetos estudiados distribuidos por edades y sexo.
Hombres
Figure imgf000023_0001
A estos sujetos, se les extrajo sangre periférica para la determinación del hemograma completo, de los parámetros de evaluación de la función hepática y renal; asimismo se realizó la determinación de la tasa de lípidos y de peróxidoslipídicos en suero.
Tras el conocimiento de los resultados, se inició el tratamiento consistente en dos comprimidos diarios de extracto de Curcuma longa. con el siguiente protocolo: segunda extracción a los quince días tras la administración, con la determinación de los parámetros antes citados. Se mantuvo el seguimiento del protocolo, repitiendo la analítica a los cuarenta y cinco y setenta y cinco días del inicio del estudio. Tras cumplirse este protocolo se procede a un período de descanso en la administración, de treinta días de duración, tras los que se vuelven a determinar los parámetros antes reseñados . METODOS ANALITICOS
El hemograma fue realizado en un analizador H-1 de Technicon (USA) .
Los parámetros bioquímicos fueron realizados siguiendo los métodos estandarizados con reactivos de Boehringer-Mannheim (Alemania), con un autoanalizador Hitachi 717 (Japón).
Los peróxidoslipídicos se determinaron como malonaldehido (MDA) por el método de Ohkama, Ohishi y Yagi (Analytical Biochem. 95 351-358 (1979)), modificado para suero.
RESULTADOS
Los pacientes no refirieron a lo largo del protocolo ninguna de las siguientes manifestaciones: disfagia, pirosis, nauseas, vómitos, diarrea o estreñimiento.
No se observaron alteraciones ni en el hemograma ni en los parámetros bioquímicos, en toda la población estudiada, sin distinción de sexo ni edad. Se observó que los enzimas marcadores de la función hepática, (GOT, GPT, GGT, fosfatasa alcalina) como indicadores de la toxicidad del producto y la bilirrubina total, directa e indirecta, no se ven alterados a lo largo de todo el proceso, como puede apreciarse en la siguiente Tabla 3. En dicha Tabla 3 se muestran los valores iniciales y finales de GOT, GPT, GGT y fosfatasa alcalina distribuidos por grupo
Figure imgf000025_0002
s de edad en función del sexo. Se indican la media y la desviación standard. Las unidades en dicha Tabla son las siguientes:
(a) Tiempo Inicial = Tiempo 0
(b) Tiempo Final = a los 105 días del inicio
(c) Valores de referencia para el método analítico indicado.
Figure imgf000025_0001
Como se refleja en la Figura 1, a los 15 días del tratamiento, se observó en los varones una disminución en torno al 8% en la tasa de peróxidos lipídicos, mientras que a los 45 días del comienzo del tratamiento, la disminución alcanza un valor medio de 34%, de manera que la variación con respecto a la situación a los 15 días del conjunto de los varones sujetos al estudio será de 59%. En las mujeres, a los 15 días se encontró un aumento medio en la tasa de peróxidos lipídicos (de un 26%), (Fig. 2): sin embargo, al cabo de los 45 días, la disminución de la tasa de peróxidos es más evidente (disminuye un 11% de promedio), abarcando prácticamente a la totalidad de los sujetos; estos resultados implican una disminución promedio a los 45 días con respecto a la situación de las mujeres sujetas al estudio a los 15 días, de un 80%.

Claims

REIVINDICACIONES:
1.- Procedimiento para la obtención de extractos apolares y polares de Curcuma, caracterizado porque (I) para la obtención del extracto apolar de Curcuma longa se efectúan las siguientes operaciones:
(a) someter a un proceso de extracción en continuo durante unas 48 horas, los rizomas de Curcuma previamente cortados, secados y pulverizados, empleando un disolvente orgánico en una relación rizoma:disolvente de 1:7 peso/volumen, llevándose a cabo el proceso en régimen estacionario mediante regulación de la temperatura;
(b) filtrar la mezcla de extracción resultante de la etapa (a) y evaporar el disolvente del filtrado obtenido a presión reducida obteniéndose como residuo seco una oleorresina marrón de olor característico;
(c) disolver la oleorresina resultante de la etapa (b) en acetato de etilo caliente, en una proporción del 50% p/p aproximadamente y seguidamente dejar enfriar la disolución hasta la temperatura ambiente durante unas 24 horas aproximadamente, apareciendo un precipitado anaranjado que se separa por filtración;
(d) secar a presión reducida, el filtrado procedente de la etapa anterior para obtener una segunda oleorresina más oscura que la anterior, cuyo contenido en curcuminoides oscila entre 20 y 25%;
recristalizar el precipitado resultante en acetato de etilo al 50% (p/p) aproximadamente, para obtener un sólido con una pureza en curcuminoides superior al 90%;
y porque (II) para la obtención del extracto polar de Curcuma longa se efectúan las siguientes operaciones:
(a') someter a un proceso de extracción con agua los rizomas de Curcuma longa, previamente cortados, secados y pulverizados, manteniéndolos en maceración durante unas 24 horas a una temperatura comprendida entre 50 y 70° C; (b') filtrar la mezcla de extracción resultante de la etapa (a) y evaporar el agua del filtrado así obtenido a presión reducida, para obtener un residuo que es un sólido higroscópico correspondiente al extracto polar de Curcuma longa;
y porque (III) también es posible llevar a cabo las extracciones mediante la técnica de extracción supercrítica empleando etanol/CO2 y a una presión de aproximadamente 260 bar para obtener el correspondiente extracto apolar con una pureza en curcuminoides del 90%; o empleando agua como codisolvente en las mismas condiciones para obtener el extracto polar.
2 . - Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la extracción supercrítica del extracto apolar se efectúa con rizoma de Curcuma longa secado a unos 50ºC y triturado a un tamaño de partícula de 0,1-1 mm, llevándose a cabo la extracción con etanol, modificado con una pequeña cantidad de CO2 como disolvente a 250 bares y 50ºC.
3.- Aplicación de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la reivindicación 1, para la fabricación de composiciones y preparados útiles como agentes captadores de radicales, y agentes antienvejecimiento.
4.- Aplicación según la reivindicación 3, del mencionado extracto polar, para la fabricación de composiciones captadoras de radicales superóxido.
5.- Aplicación de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la reivindicación 1, para la fabricación de composiciones y preparados útiles como agentes reductores de los niveles plasmáticos de peróxidoslipídicos en humanos.
6.- Aplicación de los extractos apolar y polar obtenidos por el procedimiento de la reivindicación 1, para la fabricación de composiciones y preparados con efectos beneficiosos en patologías relacionadas con la oxidación celular.
7.- Aplicación según la reivindicación 6, caracterizada porque dichas patologías son arterieesclerosis y artritis reumatoide.
8.- Aplicación según las reivindicaciones 3 a 7, caracterizada porque la referida composición es oralmente administrable y puede ser sólida o líquida.
PCT/ES1995/000097 1994-08-03 1995-08-03 Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos WO1996003999A1 (es)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/624,443 US6440468B1 (en) 1994-08-03 1995-08-03 Method for obtaining apolar and polar extracts of curcuma and applications thereof
ES95926979T ES2197203T3 (es) 1994-08-03 1995-08-03 Metodo de obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos.
DK95926979T DK0726074T3 (da) 1994-08-03 1995-08-03 Metode til fremstilling af apolære og polære ekstrakter af curcuma og anvendelse af samme
EP95926979A EP0726074B1 (en) 1994-08-03 1995-08-03 Method for obtaining apolar and polar extracts of curcuma and applications thereof
DE69531146T DE69531146T2 (de) 1994-08-03 1995-08-03 Verfahren zur gewinnung von apolaren und polaren extrakten von kurkuma und ihre anwendungen
JP8506227A JP3048642B2 (ja) 1994-08-03 1995-08-03 ウコンの無極性および極性抽出物の取得方法およびその用途

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES9401737A ES2081264B1 (es) 1994-08-03 1994-08-03 Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos.
ESP9401737 1994-08-03
ESP9500912 1995-05-11
ES9500912A ES2092452B1 (es) 1994-08-03 1995-05-11 Nueva aplicacion de los extractos polar y apolar de curcuma longa.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1996003999A1 true WO1996003999A1 (es) 1996-02-15

Family

ID=26154813

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/ES1995/000097 WO1996003999A1 (es) 1994-08-03 1995-08-03 Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos

Country Status (8)

Country Link
US (1) US6440468B1 (es)
EP (1) EP0726074B1 (es)
JP (1) JP3048642B2 (es)
DE (1) DE69531146T2 (es)
DK (1) DK0726074T3 (es)
ES (1) ES2197203T3 (es)
PT (1) PT726074E (es)
WO (1) WO1996003999A1 (es)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0839037A1 (en) * 1995-07-14 1998-05-06 Sabinsa Corporation Bioprotectant composition, method of use and extraction process of curcuminoids
US9814611B2 (en) 2007-07-31 2017-11-14 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Actively controllable stent, stent graft, heart valve and method of controlling same
US9827125B2 (en) 2006-07-31 2017-11-28 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Sealable endovascular implants and methods for their use
US9827093B2 (en) 2011-10-21 2017-11-28 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Actively controllable stent, stent graft, heart valve and method of controlling same

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7220438B2 (en) * 1999-09-23 2007-05-22 Asac Compañia de Biotecnologia Pharmacological activities of Curcuma longa extracts
ES2154610B1 (es) * 1999-09-23 2001-11-16 Asac Compania De Biotecnologia Nuevas actividades farmacologicas de los extractos de curcuma longa.
US6576273B2 (en) * 2000-08-24 2003-06-10 Chr. Hansen A/S Purification process for improving total yield of curcuminoid colouring agent
CN1221190C (zh) * 2001-02-09 2005-10-05 新纪元公司 解烟毒组合物和方法
WO2003090681A2 (en) * 2002-04-24 2003-11-06 Research Development Foundation SYNERGISTIC EFFECTS OF NUCLEAR TRANSCRIPTION FACTOR NF-κB INHIBITORS AND ANTI-NEOPLASTIC AGENTS
CN1674917A (zh) * 2002-06-24 2005-09-28 研究发展基金会 用姜黄素治疗人多发性骨髓瘤
US20040223942A1 (en) * 2003-03-06 2004-11-11 Kao Corporation Skin aging-preventing or improving agent
AU2004320907A1 (en) 2003-08-26 2006-04-13 Research Development Foundation Osteoclastogenesis inhibitors and uses thereof
DE102004002600A1 (de) * 2004-01-15 2005-08-04 Beiersdorf Ag Visualisierung von Sonnenschutzmitteln auf der Haut
IL160950A (en) * 2004-03-18 2008-12-29 Shlomo Navarro Harmful repellents and their incorporation in food packaging
US7887851B2 (en) * 2004-06-07 2011-02-15 Kao Corporation Aromatase activator
JP2009530305A (ja) * 2006-03-17 2009-08-27 ハーバルサイエンス シンガポール ピーティーイー． リミテッド ウコン種を含む抽出物および方法
JP5713517B2 (ja) * 2006-11-30 2015-05-07 山崎 新 春ウコン葉抽出物および化粧料
CN101686725A (zh) * 2007-04-03 2010-03-31 刚迦·拉贾·高卡拉贾 消炎和抗氧化协同作用的膳食补充组合物
US8263141B2 (en) * 2007-07-30 2012-09-11 Mediglobe Ltd. Tablet with remedial composition and methods for treating medical disorders and ailments
IL193129A (en) * 2007-07-30 2013-11-28 Danielkatz A natural preparation for the treatment of gastrointestinal diseases
WO2009066303A2 (en) * 2007-11-22 2009-05-28 Ganga Raju Gokaraju New synergistic phytochemical composition for the treatment of obesity
WO2009080842A1 (es) * 2007-12-21 2009-07-02 Asac Compañía De Biotecnología E Investigación Sa Composiciones fotoprotectoras
MX2010005441A (es) * 2007-12-21 2010-09-03 Asac Compania De Biotecologia Metodo para aumentar la eficacia terapeutica de los curcuminoides y analogos.
US9801756B2 (en) 2012-09-28 2017-10-31 Zoll Circulation, Inc. Intravascular heat exchange catheter and system with RFID coupling
WO2015025263A1 (en) * 2013-08-19 2015-02-26 Plant Lipids Private Limited A novel composition of curcumin with enhanced bioavailability
US9784263B2 (en) 2014-11-06 2017-10-10 Zoll Circulation, Inc. Heat exchange system for patient temperature control with easy loading high performance peristaltic pump
US11359620B2 (en) 2015-04-01 2022-06-14 Zoll Circulation, Inc. Heat exchange system for patient temperature control with easy loading high performance peristaltic pump
US10085951B2 (en) 2014-12-11 2018-10-02 Designs For Health, Inc. Curcuminoid formulations and related methods of treatment
JP6714928B2 (ja) * 2016-02-12 2020-07-01 株式会社東洋新薬 コラゲナーゼ阻害剤
WO2017195220A1 (en) * 2016-05-11 2017-11-16 Deshpande Rajendra Sham Process for extraction of curcuminoids
US11116657B2 (en) 2017-02-02 2021-09-14 Zoll Circulation, Inc. Devices, systems and methods for endovascular temperature control
US11185440B2 (en) 2017-02-02 2021-11-30 Zoll Circulation, Inc. Devices, systems and methods for endovascular temperature control
EP3658161A4 (en) * 2017-07-24 2021-04-21 Sami Labs Limited USED TURMERIC - PROCESS AND COMPOSITIONS THEREOF

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR761734A (fr) * 1932-12-29 1934-03-26 Anna Boerrigter Procédé pour la préparation d'un dérivé du rhizome curcuma
DE2924345C2 (es) * 1979-06-15 1988-05-11 A. Nattermann & Cie Gmbh, 5000 Koeln, De
US4842859A (en) * 1986-09-08 1989-06-27 Yaguang Liu Pharmaceutical compositions for reducing hyperlipidemia and platelet-aggregation
FR2655054A1 (fr) * 1989-11-28 1991-05-31 Pacific Chem Co Ltd Agents de protection des cellules contenant des curcuminoides.
EP0440885A1 (en) * 1990-02-05 1991-08-14 Pt Darya-Varia Laboratoria Combinations of compounds isolated from curcuma SPP as anti-inflammatory agents
EP0550807A2 (de) * 1991-11-14 1993-07-14 Steigerwald Arzneimittelwerk Gmbh Verwendung von Präparaten der Curcuma-Pflanzen
US5266344A (en) * 1988-08-12 1993-11-30 Kabushiki Kaisha Kobe Seiko Sho Method for making tetrahydrocurcumin and a substance containing the antioxidative substance tetrahydrocurcumin
JPH069479A (ja) * 1992-06-26 1994-01-18 Kyodo Kumiai Okinawa Pref Gov Kinousei Shokuhin Kaihatsu Center ウコンからクルクミンを抽出する方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4263333A (en) * 1979-09-12 1981-04-21 General Foods Corporation Curcumin-metal color complexes
US4307117A (en) * 1980-03-27 1981-12-22 General Foods Corporation Stabilized curcumin colorant
FR2488801B1 (fr) * 1980-08-19 1986-08-14 Terumo Corp Extraits a l'eau chaude de l'ecorce du margousier, possedant une activite antineoplastique
DE3228927C2 (de) * 1982-08-03 1991-08-14 Extraktionstechnik Gesellschaft für Anlagenbau mbH, 2000 Hamburg Verfahren zur kontinuierlichen Extraktion von schüttfähigen Feststoffen
US4568546A (en) 1983-05-25 1986-02-04 Vicario Arcos Timoteo Antivenom composition
DE3627010A1 (de) 1986-08-09 1988-02-18 Badmajew Vladimir Pharmazeutikum zur therapie einer schlechten absorption von nahrungsmitteln und von (anderen) oral einzunehmenden medikamenten
US4906471A (en) 1986-09-08 1990-03-06 Yaguang Liu Pharmaceutical composition for the reducing both hyperlipidemia and platelet-aggregation (PHP)
US5108750A (en) 1986-09-08 1992-04-28 Yaguang Liu Pharmaceutical compositions for reducing hyperlipidemia and platelet-aggregation
WO1988005304A1 (en) 1987-01-21 1988-07-28 William Blanc & Cie Processes for the preparation of medicinal compositions, compositions obtained by these processes and use thereof for the preparation of medicines against viral hepatitis b and acquired immunodeficiency syndrome
US4927805A (en) * 1987-02-04 1990-05-22 Mallinckrodt, Inc. Hydrolysis of curcumin
EP0358683A1 (de) 1987-05-14 1990-03-21 BADMAJEW, Vladimir Pharmazeutikum
US5178735A (en) * 1987-09-07 1993-01-12 Chlorine Engineers Process for the supercritical extraction and separation of solid samples
NL8702913A (nl) 1987-12-03 1989-07-03 Vialle Minerals B V Middel voor het bevorderen van de haargroei.
US5072502A (en) * 1990-04-27 1991-12-17 Yoshida Kogyo K. K. Method and apparatus for applying slide fastener end stop
US5120558A (en) * 1991-05-01 1992-06-09 Norac Technologies Inc. Process for the supercritical extraction and fractionation of spices
DE4207739A1 (de) * 1992-03-11 1993-09-16 Sueddeutsche Kalkstickstoff Verfahren zur herstellung von natuerlichen antioxidantien
US5411733A (en) 1992-04-27 1995-05-02 Hozumi; Toyoharu Antiviral agent containing crude drug
GB2276392B (en) * 1993-02-22 1997-03-26 D G P Improved production of natural flavours and fragrances
US5494668A (en) * 1994-07-11 1996-02-27 Patwardhan; Bhushan Method of treating musculoskeletal disease and a novel composition therefor

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR761734A (fr) * 1932-12-29 1934-03-26 Anna Boerrigter Procédé pour la préparation d'un dérivé du rhizome curcuma
DE2924345C2 (es) * 1979-06-15 1988-05-11 A. Nattermann & Cie Gmbh, 5000 Koeln, De
US4842859A (en) * 1986-09-08 1989-06-27 Yaguang Liu Pharmaceutical compositions for reducing hyperlipidemia and platelet-aggregation
US5266344A (en) * 1988-08-12 1993-11-30 Kabushiki Kaisha Kobe Seiko Sho Method for making tetrahydrocurcumin and a substance containing the antioxidative substance tetrahydrocurcumin
FR2655054A1 (fr) * 1989-11-28 1991-05-31 Pacific Chem Co Ltd Agents de protection des cellules contenant des curcuminoides.
EP0440885A1 (en) * 1990-02-05 1991-08-14 Pt Darya-Varia Laboratoria Combinations of compounds isolated from curcuma SPP as anti-inflammatory agents
EP0550807A2 (de) * 1991-11-14 1993-07-14 Steigerwald Arzneimittelwerk Gmbh Verwendung von Präparaten der Curcuma-Pflanzen
JPH069479A (ja) * 1992-06-26 1994-01-18 Kyodo Kumiai Okinawa Pref Gov Kinousei Shokuhin Kaihatsu Center ウコンからクルクミンを抽出する方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D. CHANDRA ET AL.: "Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of volatile oil of curcuma longa (Haldi)", INDIAN J. MED. RES., vol. 60, 1 January 1972 (1972-01-01), pages 138 - 142, XP002013812 *
DATABASE WPI Section Ch Week 9407, Derwent World Patents Index; Class B05, AN 94-053939 (07), XP002013814 *
K.C. SRIVASTAVA ET AL.: "Pharmacological effects of spices: eicosanoid modulating activities and their significance in human health", BIOMEDICAL REVIEWS, vol. 2, 1993, BULGARIAN-AMERICAN CENTER, VARNA, BULG., pages 15 - 29, XP002013810 *
L. SRINIVAS ET AL.: "Turmerin: A water soluble antioxidant peptide from turmeric (curcuma longa)", ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS, vol. 292, no. 2, 1 February 1992 (1992-02-01), ACADEMIC PRESS, INC., pages 617 - 623, XP002013811 *
V.K. SHALINI ET AL.: "Lipid peroxide induced DNA damage: protection by turmeric (Curcuma longa)", MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY, vol. 77, 1987, MARTINUS NIJHOFF PUBL., pages 3 - 10, XP002013813 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0839037A1 (en) * 1995-07-14 1998-05-06 Sabinsa Corporation Bioprotectant composition, method of use and extraction process of curcuminoids
EP0839037A4 (en) * 1995-07-14 1999-03-03 Sabinsa Corp LIFE PROTECTING AGENTS, METHOD FOR USE THEREOF AND EXTRACTION METHOD FOR CURCUMINOIDS
US9827125B2 (en) 2006-07-31 2017-11-28 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Sealable endovascular implants and methods for their use
US9814611B2 (en) 2007-07-31 2017-11-14 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Actively controllable stent, stent graft, heart valve and method of controlling same
US9827093B2 (en) 2011-10-21 2017-11-28 Edwards Lifesciences Cardiaq Llc Actively controllable stent, stent graft, heart valve and method of controlling same

Also Published As

Publication number Publication date
PT726074E (pt) 2003-10-31
JPH09503528A (ja) 1997-04-08
EP0726074A1 (en) 1996-08-14
JP3048642B2 (ja) 2000-06-05
US6440468B1 (en) 2002-08-27
DE69531146D1 (de) 2003-07-31
EP0726074B1 (en) 2003-06-25
DK0726074T3 (da) 2003-10-06
DE69531146T2 (de) 2004-06-03
ES2197203T3 (es) 2004-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO1996003999A1 (es) Procedimiento para la obtencion de extractos apolares y polares de curcuma y aplicaciones de los mismos
Bastos et al. Yerba mate: pharmacological properties, research and biotechnology
Muhamad et al. Influence of solvent polarity and conditions on extraction of antioxidant, flavonoids and phenolic content from Averrhoa bilimbi
Sebai et al. Chemical composition, antioxidant properties and hepatoprotective effects of chamomile (Matricaria recutita L.) decoction extract against alcohol-induced oxidative stress in rat
WO1998009526A1 (en) Antioxidant derived from lentil and its preparation and uses
US20120171186A1 (en) method for producing a nutraceutical composition and the nutraceutical produced by the method
WO2015025263A1 (en) A novel composition of curcumin with enhanced bioavailability
KR101861796B1 (ko) 도라지 종자 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 조성물
ES2843640T3 (es) Procedimiento de preparación de un extracto de matriz vegetal con un compuesto anfifílico no iónico como adyuvante de extracción en medio acuoso
Gogoi et al. Evaluation of antioxidant and hepatoprotective activity of fruit rind extract of Garcinia dulcis (Roxburgh) Kurz
JP2003342122A (ja) 皮膚外用剤
JP5546040B2 (ja) 梅エキス及びその製造方法と使用
KR102143246B1 (ko) 새싹율무 추출물을 유효성분으로 포함하는 만성폐쇄성 페질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 이의 제조 방법
KR20110048401A (ko) 신선초 녹즙 부산물로부터 칼콘 고함유 추출물 제조방법
Caylak Determination of antioxidant and anti-inflammatory properties of Salvia aethiopis/sclarea and synthesized silver nanoparticles
JP4772190B2 (ja) 皮膚美白剤
JP5819334B2 (ja) 滑膜増殖抑制剤
Iqbal et al. Strobilanthes crispus attenuates renal carcinogen, iron nitrilotriacetate (Fe-NTA)-mediated oxidative damage of lipids and DNA
RU2807894C1 (ru) Средство, обладающее антиоксидантным и противовоспалительным действием и способ его получения
El Araby et al. Effect of Foeniculum vulgare and propolis on liver in alloxan diabetic rats
KR20140123658A (ko) 홍화싹 추출물을 유효성분으로 하는 항산화 및 항염증 기능성 조성물
KR100574356B1 (ko) 온도별 다단계 추출법을 이용한 차가버섯 추출물 및 이를함유한 건강보조식품
Oladele et al. Evaluation of anti-inflammatory and membrane stabilizing effects of aqueous root extract of Boerhavia diffusa Linn. in rats
Ahmad et al. Protective role of Punica granatum juice in inhibit nephrotoxicity Induced by amikacin in albino Rabbits
Nizam et al. Antioxidant activity of five different solvent extracts of the edible fruits of Ficus racemosa

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): JP US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1995926979

Country of ref document: EP

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1995926979

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 08624443

Country of ref document: US

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 1995926979

Country of ref document: EP