UA51642C2 - Дезоксирибонуклеїнова кислота, яка кодує білок глутатіон-s-трансферазу, білок - Google Patents
Дезоксирибонуклеїнова кислота, яка кодує білок глутатіон-s-трансферазу, білок Download PDFInfo
- Publication number
- UA51642C2 UA51642C2 UA97084350A UA97084350A UA51642C2 UA 51642 C2 UA51642 C2 UA 51642C2 UA 97084350 A UA97084350 A UA 97084350A UA 97084350 A UA97084350 A UA 97084350A UA 51642 C2 UA51642 C2 UA 51642C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- aia
- sto
- rko
- sas
- uai
- Prior art date
Links
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 28
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 2
- 101150018711 AASS gene Proteins 0.000 claims 1
- 241001103870 Adia Species 0.000 claims 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 claims 1
- VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N bissulfosuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101150024950 sstT gene Proteins 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 89
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 32
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 16
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 16
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 16
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 16
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 16
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 15
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 14
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 14
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 14
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 13
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 13
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 13
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 9
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 9
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 description 7
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 description 7
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 6
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 4
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 4
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- KPQFKCWYCKXXIP-XLPZGREQSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-(methylamino)pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(NC)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 KPQFKCWYCKXXIP-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 3
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 3
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003643 Callosities Diseases 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 241000218652 Larix Species 0.000 description 2
- 235000005590 Larix decidua Nutrition 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N TTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 2
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 description 2
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 2
- AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M cefotaxime sodium Chemical compound [Na+].N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 2
- 150000004687 hexahydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 2
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 150000004686 pentahydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098524 pyridoxine 1 mg Drugs 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- KSLUMEQTEAUMJZ-UHFFFAOYSA-L zinc;sulfate;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O KSLUMEQTEAUMJZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEOOFARANVCQHN-UHFFFAOYSA-N 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,3,4-thiadiazol-2-yl]oxy]acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=NN=C(C(F)(F)F)S1 LEOOFARANVCQHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VONWPEXRCLHKRJ-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-phenylacetamide Chemical compound ClCC(=O)NC1=CC=CC=C1 VONWPEXRCLHKRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 5-trifluoromethyl-1,3,4 -thiadiazol-2-yl residue Chemical group 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011624 Agave sisalana Nutrition 0.000 description 1
- 244000198134 Agave sisalana Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 244000099147 Ananas comosus Species 0.000 description 1
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 240000001879 Digitalis lutea Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 240000000731 Fagus sylvatica Species 0.000 description 1
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 244000028178 Marasmius oreades Species 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101150037649 Miip gene Proteins 0.000 description 1
- 241001190694 Muda Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000018242 Obba <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 244000305267 Quercus macrolepis Species 0.000 description 1
- 235000016976 Quercus macrolepis Nutrition 0.000 description 1
- 244000061121 Rauvolfia serpentina Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 241000530164 Volkameria aculeata Species 0.000 description 1
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- KVRIUMJUWITOGB-UHFFFAOYSA-O azanium;potassium;dinitrate Chemical compound [NH4+].[K+].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O KVRIUMJUWITOGB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229940085298 biotin 10 mg Drugs 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L calcium bis(dihydrogenphosphate) Chemical group [Ca+2].OP(O)([O-])=O.OP(O)([O-])=O YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- BULLHNJGPPOUOX-UHFFFAOYSA-N chloroacetone Chemical compound CC(=O)CCl BULLHNJGPPOUOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-N dCTP Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO[P@](O)(=O)O[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- IANUJLZYFUDJIH-UHFFFAOYSA-N flufenacet Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1N(C(C)C)C(=O)COC1=NN=C(C(F)(F)F)S1 IANUJLZYFUDJIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003864 humus Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 235000019691 monocalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940088174 thiamine 1 mg Drugs 0.000 description 1
- 150000003558 thiocarbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N tris maleate Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)\C=C/C(O)=O POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
- C12N9/1088—Glutathione transferase (2.5.1.18)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Даний винахід стосується нової дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК), що кодує глютатіон-3-трансферазу.
Description
Опис винаходу
Настоящее изобретение относится к новой дезоксирибонуклеийиновой кислоте (ДНК), которую можно 2 применять для трансформации векторов, организмов-хозяев и растений, а также для вьіведения растений с повьішенной устойчивостью к гербицидам, и к белку с соответствующей аминокислотной последовательностью.
Широко известно, что растения можно генетически так изменять, что они начинают проявлять повьішенную устойчивость к определенньм гербицидам. Зто дает возможность использовать гербицидьі, которье при незначительной селективности в остальном обнаруживают полезнье свойства, в культурах таких растений, которье в первоначальной нетрансгенной форме повреждались зтими гербицидами. Путем вьіращивания устойчивьіїх к гербицидам растений возрастаєт вьібор применяемьїх гербицидов, и во многих случаях можно также обойтись относительно мальми количествами гербицидов, например, когда борьба с нежелательньіми растениями может начаться только после их усиленного роста при достижениий в каждом случаєе порога вредности. При зтом существует значительная потребность вьіведения новьїх культурньїх растений, 19 проявляющих повьішенную устойчивость в отношений других гербицидов.
Глутатион-8-трансферазьї являются многофункциональньми белками, которье играют важную роль при обезвреживаниий цитотоксических соединений. Зти ферментьй катализируют коньюгацию восстановленного глутатиона с злектрофильньми гидрофобнькми субстратами, которье могут бьть природного или синтетического происхождения.
Физиологические субстрать! глутатион-5-трансфераз растений и их роль в обмене веществ растений, в частности, неизвестньі. Однако, доказано участие зтих ферментов в обезвреживаниий и, таким образом, в механизме селективности для ряда важньх гербицидов из группьі тиокарбаматов, хлорацетанилида и
З--риацина: Могег Т.)., Тіетеіїег Ю.С., дамжмогеКкі Е.О., Віоспетівігу 22 : 1068-1072 (1983); Мооге К.Е., Юаміев
М.5., ОбСоппеї! К.М., Нагаїпуд Е.І., Міеєдапа к.С., Тіетеїег О.С., Мисівіс Асідв Кев. 14 : 7227-7235 (1983); с 29 (Згоме б., 7апепдо К.Р., Тіттептапп К.Р., Гі М., Тагп М.Р., Тис С.Р.О., Мисіеїс Асіаз Кез. 16:425-438 (1988). Ге)
Согласно изобретению предлагается новая дезоксирибонуклеиновая кислота, кодирующая новьій белок глутатион-5-трансферазу Пс (в дальнейшем "З5ТШс"), имеющую аминокислотную последовательность ЗЕО ІЮ
Мо 2, (при зтом новая ДНК согласно изобретению в дальнейшем обозначается "З5ТПШс-ДНК").
Бьло найдено, что растения, в геном которьїх била вставлена новая З5ТПШс-ДНК, обладают по сравнению с с соответствующими исходньми растениями повьішенной устойчивостью в отношений гербицидов, «І преимущественно в отношений гетероарилоксиацетамидньхх гербицидов.
Новая З5ТШС-ДНК бьла вьіделена из кукурузь! (7еа таувз) сорта Миїйп. Зта ДНК кодирует белок ОБТШсС с ее, аминокислотной последовательностью 5ЕС) ІО Мо 2. В клетках растений две молекуль! белка ОЗТПІС спонтанно - де образуют димерньй активньй фермент (в дальнейшем обозначаєтся как "З5ТПШс-фермент"), которьй
Зо способствует обезвреживанию добавленного гербицида, при зтом растения становятся устойчивьми по о отношению к гербициду.
Предпочтительная ОЗТІППсС-ДНК согласно изобретению имеет последовательность 5ЗЕО ІЮ Мо 1.
Таюке предпочтительна согласно изобретению О5ТПс-ДНК, которая имеется в описанньїх ниже векторньх « плазмидах рЕТППс-З5 Пс и рев-З5ТШс. З
Новая О5ТШсС-ДНК может бьїть одноцепочечной или двуцепочечной, которая дополнительно содержит с комплементарную к каждой отдельной цепи нить.
Із» Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения ЗЗТПС-ДНК на 5 конце предварительно присоединяют действующий в растениях промотор. Для зтого могут бьть использовань обьічнье зффективнье промоторь! растений. Например, следует упомянуть промотор гена малой субьединиць рибулоза-1,5-дифосфат-карбоксилазь (грзс) (см. ЕМВО доигпаї, том 5, Мо 9, 2063-2071 (1986)). Предпочтительно і-й вставляются промоторьї вирусов растений, при зтом следует назвать в качестве примера РНК промотора Самм - 355. Особенно предпочтительно используется известньій конструкт из знхансера Самм 355 и присоединенного к нему в порядке 5 - 3 промотора Самм 355 ("двойной промотор СаммМ 355"). Соответствующий б предпочтительньій конструкт из ЗЗТПС-ДНК и двойного промотора СаммМ имеется в рассматриваемой ниже «їз» 20 векторной плазмиде ре5-З5ТШс. Однако, таюже возможно использовать природньій промотор, регулирующий зкспрессию в 55 ТПс-ДНК в кукурузе сорта Мийп. їз Способ, которьім с З5ТШсС-ДНК в порядке 5' - 3' соединяется 3'-концевая последовательность, может бьїть любьїм и не имеет решающего значения для настоящего изобретения. Предпочтительно вставляют З3'-концевье последовательности растений. Например, может бьть также использована природная концевая 29 последовательность З5ТПс-гена из кукурузь! сорта Мийіп.
ГФ) Дополнительньм обьектом настоящего изобретения является новьій белок З5ТІПШсС с аминокислотной последовательностью ЗЕС ІО Мо 2, а также его новій димер (З35ТПШс-фермент), которьїй, как бьіло указано о вьіше, спонтанно образуется из 2 молекул белка О5ТПс после его образования в клетках растений.
ОБТІШсС-ДНК согласно изобретению может иметься в качестве "чЧужеродной" или "дополнительной" ДНК в 60 векторах (в частности, плазмидах, космидах или фагах), в трансформированньх или трансгенньїх микроорганизмах (преимущественно в бактериях, например, Езспегіспіа соїї или агробактерия Кшптегасіепв), а также в трансформированньїх или трансгенньїх клетках растений и растениях или их ДНК. Зти векторь, микроорганизмь!, клетки растений и растения, а также их ДНК могут бьіть полученьї специалистами в данной области при использований имеющегося описания, в частности, последовательностей ЗЕО ІЮ Мо 1 и ЗЕО ІЮ Мо бо 2, в соответствий с общеизвестньіми и/или обьічньіми способами и методами.
В связи с настоящим изобретением под "чужеродной" ДНК следует понимать такую ДНК, которая обьічно не содержится в определенном геноме прокариот и зукариот (включая растения), но при действии человека (трансформация) соединяется с зтим геномом. "Дополнительной" ДНК является такая ДНК, которая почти всегда имеется в соответствующем геноме прокариот или зукариот, однако, в дополнительном количестве воспринимаєтся зтим геномом в результате воздействия человека (трансформация). "Чужеродная" или "дополнительная" ДНК может бьть встроена в одном или нескольких зкземплярах в соответствии с потребностью и видом представленного случая.
В качестве особенно предпочтительньїх векторов можно назвать векторнье плазмидьї рЕТЗа-О5Т с и у вЗЗ-55ТПс. Оба вектора содержат З5ТПШс-ДНК по изобретению в соответствии с последовательностью 5ЕО ІЮ
Мо 1.
Плазмида рЕТЗа-З5ТШс содержит ЗЗТПС-ДНК в фрагменте Маеії/Ватні. Для построения зтой плазмидь! клонировали 5 ТПІПс-ДНК в соответствии с последовательностью ЗЕО ІЮО Мо 1 в полученньїх при расщеплениий с помощью Маеі и ВатНі положениях вектора рЕТЗа (Момадеп/Мадізоп) (Зішаіег Р.МУ., МойМак В.А., .Мо)/.Віоі. 75 189:113-130; Біде Р.ММ,, у. Мої. Віої. 219: 37-44(1991)). Зта плазмида (5306 П.н.) представлена на фиг.1.
Направление стрелок указьвает направление промотора и гена или О5ТІС-ДНК с стартовьім кодоном АТО. "Атр" означает ген с устойчивостью к ампициллину.
Для конструирования плазмидьї рез-О5 Пс вьіделяли в чистом виде О5ПШС-ДНК в виде фрагмента
Хвра/ВатнНі из вектора рЕТЗа-зЗ5ТШсС и клонировали в плазмиде ВіцйезсгірізЗКІ! ( линеаризированной ХбБаї/Ватні; Зігаїадепе). Затем ОЗ ПІС-ДНК при рестрикционном расщеплении с участием Звзі/Зтаї! бьіла вьіделена из полученной таким образом плазмидь! ВіпйевзсгіріЗКІІ-З5ТШс и лигирована в вектор ркКтТ101 (линеаризированньій Звй/Зта!; Торіег и др. 1987). Затем ОЗТПС-ДНК в виде фрагмента Есокі/Зтаї! бьла вьіделена в чистом виде из полученного таким образом вектора рКТ101-35ТНіс и клонирована в бинарном векторе ре5 (линеаризированном ЕсокКі/Зтаї; МоВ и др. 1994). В возникшем векторе ре5-о5ППШс кодирующая сч дв ОЗППС-ДНК находится под контролем РНК двойного промотора Самм 355. Плазмида ре5-З5ТШс (10000 П.н.) представлена на фіг.2. і)
ОБТІсС-ДНК согласно изобретению может бьіть при необходимости вьіделена специалистами из названньх плазмид в соответствии с общепринятьіми способами и методами.
В качестве особенно предпочтительньїх микроорганизмов, в которье включают предлагаемую ДНК, следует су зо назвать вьіделеннье из Езспегіспіа соїї штаммь! рЕТЗа-О5Тс и рез-З5ТПс. Штамм рЕТЗа-5ТШс содержит плазмиду рЕТЗа-ЗЗТШПс, а штамм рЗБЗ-ЗЗТПсС содержит плазмиду рЗ5-О5Т Іс. Зти штаммь! могут бьть - размноженьії общепринятьми способами. Плазмидьі рЕТЗа-З5ТШс и ре5-О5ТШс могут бьїіть также вьіделень из Ге зтих микроорганизмов в соответствии с общепринятьми способами.
Штамм Евзспегіспіа сої рЕТЗа-С5ТІШс бьл депонирован в Германской Коллекции Микроорганизмов (О5М), (7
Машеродер Вег 16,0-38124 Брауншвейг, Федеративная Республика Германия, по соглашению в соответствий с ю постановлением Будапештского Договора о международном признаниий хранения микроорганизмов для целей патентования (дата депонирования: 17.01.1995). Штамм депонирован под номером О5М 9677.
Как уже указьівалось вьіше, предлагаемую ДНК можно также использовать для создания новьїх растений, проявляющих повьішенную устойчивость по отношению к гербицидам, преимущественно по отношению к « гетероарилоксиацетамидньм гербицидам. Культурьі зтих трансгенньх растений могут бьть обработань - с гербицидами для борьбьї с нежелательньми растениями без нанесения вреда культурньіїм растениям.
Трансгеннье клетки растений (включая протопласть) и растения (включая части растений и семена) с ;» повьішенной устойчивостью по отношению к гербицидам можно получать тем, что (а) один или несколько зкземпляров З5ЗТПШС-ДНК и/ или рекомбинантной ДНК согласно изобретению, бодержащих О5ТПС-ДНК, которне кодируют белок З5ТПШІс, вставляют в геном клеток растений (включая с протопласть) и при необходимости (б) из трансформированньїх клеток растений (включая протопласть) регенерируют полностью - трансформированньсе растения, и при необходимости размножают, и при необходимости б (в) из полученньхх таким образом трансгенньїх растений родительского поколения или из дальнейших Вьіведенньх из них поколений вніращивают желаемьсе части растений (включая семена). ве Стадии (а), (б) и (в) могут «бить проведеньі известньмми способами и методами с использованием обьічньх
Із приемов.
Существует цельй ряд различньїх способов для встрайвания З5ТПс-ДНК, при желаний в виде конструкции с двойньм промотором Самм 355 в виде "чужеродной" или " дополнительной" ДНК в генетический материал растений или клеток растений. Перенос гена может бьіть осуществлен общеизвестньми способами, при зтом специалист без труда может найти подходящий способ. (Ф) Плазмида Ті Адгобрасіегішт (Штегасіепе является особенно удобньім и часто вставляемьм вектором для ка осуществления переноса "чужеродной" или "дополнительной" ДНК в геном двудольньїх или однодольньх растений. Генетический материал, кодирующий белок О5ТПс, вставляется при необходимости вместе с бо регуляторньмми последовательностями ДНК в Т-ДНК подходящих Ті-плазмид (например, 7атрьгузк: и др., 1983) и переносится путем заражения растения, заражения частей растений или тканей растений, как, например, пластинки листьев, стебли, подсемядольнье колена, семядоли, меристемь! и происходящие из них ткани, как, например, вторичнье змбрионь и.каллюсь), или с помощью сокультивирования протопластов Адгобрасіегійт іІштеїасіепх. Альтернативой является инкубирование очищенной ДНК, содержащей желаемьй ген или 65 Желаемую ДНК, в протопластах растений (например, Наїп и др., 1985; Кгепз и др., 1982; Раз2Кому»вкКі и др., 1984) в присутствии поликатионов или солей кальция и полизтиленгликоля.
Включению ДНК может также дополнительно благоприятствовать злектрическое поле (злектропорация) (например, Рготт и др., 1986).
Известньімм способом ДНК может бьіть также введена через луковиць! растений, когда луковицьі! или другие части растений, которне переносят ДНК, "бомбардируют" (физически ускоряемьми частицами (см. заявку ЕР Мо 0 270 356)
Регенерацию растений удается осуществить известньім способом с помощью подходящих питательньїх сред (например, Маду и Маїїда 1976).
В предпочтительном варианте осуществления способа по изобретению клонируют ЗЗТПсС-ДНК из плазмидь! /у/0 ВБЕТтЗа-О5ТШС в бинарном зкспрессирующем векторе (например, МОВ и др. (1994)). Химерная генная конструкция затем переносится в агробактерию ішптегасіепз (Копсл и Зспеї|, 1986).
Альтернативно химерная генная конструкция переносится обьічньїм способом в вектор рез-З5ТШс путем прямого генного переноса в протопласть! растений (например, Наїп и др., 1985). При зтом плазмида может существовать в кругообразной форме, однако, предпочтительно в линейной форме.
При использований зтой плазмидь с репортерньм геном бьли затем провереньі на зкспрессию З5ТШС устойчивне к канамицину протопласть.
Трансформированнье (трансгенньюе) растения или клетки растений получаются известньми способами, например, путем трансформации пластинок листьев (например, Ногесп и др. 1985) с помощью сокультивирования регенерирующих протопластов растений или клеточньїх культур с агробактерией їШтегасіепх (например, Магпоп и др. 1979, Наїп и др. 1985) или путем прямой трансфекции ДНК.
Подтверждение и доказательство получающихся трансформированньїх растений осуществляется либо путем селекции для зкспрессии репортерного гена, например, путем фосфорилирования канамицинсульфата іп мйго (Кеїзз и др., 1984; Зспгеїіпег и др., 1985), либо путем зкспрессии нопалинсинтазь (по Аегіз и др., 1983), либо с ОЗТс путем анализа с применением Нозерн-блоттинга и Вестерн-блоттинга. Белок З5ТПс может также бьіть сч Обнаружен в трансформированньмх растениях известньм способом при анализе Вестерн-блот-тингом с помощью специфических антител. і)
Культивирование трансформированньїх клеток растений, как и регенерация в полнье растения, удается с помощью общеизвестньїх способов, в каждом случае с использованием подходящих питательньх сред.
Как трансформированньсе клетки растений, так и трансформированнье растения, содержащие З5ТШсС-ДНК с зо согласно изобретению, проявляют значительно более вьісокую устойчивость по отношению к гербицидам, в частности, по отношению к гетероарилоксиацетамидньїм гербицидам. -
В связи с настоящим изобретением вьіражение "растения" означает как полнье растения, так и части «о растений, такие, как листья, семена, клубни, черенки и так далее. "Клетки растений" включают протопласть, линии клеток, каллюсьі растений и так далее. "Материал для размножения" означает растения и клетки -- з5 растений, которье могут бьіть использованьі для размножения трансформированньх растений и клеток ю растений.
К растениям, которье при встраийваний (трансформации) З5ТШсС-ДНК согласно изобретению могут приобрести повьішенную устойчивость по отношению к гербицидам, относятся практически все растения.
Особую потребность в приобретении устойчивости естественно испьітьївают культурнье растения, такие, как « 470 леснье растения, например, пихта, ель, лжесуга, сосна, лиственница, бук и дуб, а таюке растения, в с поставляющие пищевье средства и сьірье, например, зерновье (в частности, пшеница, рожь, ячмень, овес,
Й просо, рис и кукуруза), картофель, бобовье (как стручковье плодьі и, в частности, люцерна, соевье бобьї), а овощи (в частности, различньсе сорта капусть! и томатьї), фрукть! (в частности, яблоки, груши, вишня, виноград, цитрусовье, ананасьї и бананьї), пальмовое масло, кустарники чая, какао и кофе, табак, сизальская пенька и Хпопчатник, а таюке лекарственнье растения, как раувольфия и дигиталис. Как особенно предпочтительнье с упоминаются картофель, сахарная свекла, сахарньй тростник, зерновье, например, пшеница, ячмень и сорго, и рис. Преимущественно З5ТПШсС-ДНК согласно изобретению встрайваєтся в геном растений как "чужеродная" - днк. б Преимущественно, гербицидь, в отношений которьх согласно изобретению может бьть проявлена повьішенная устойчивость, относятся к группе гетероарилоксиацетамидов. Особенно предпочтительнь! при ве зтом гетероарилоксиацетамидьі общей формульі (І),
Ко) него-сно-СОо-мА 182 (І) в которой
Неї означаєт в данном случае замещенньй гетероароматический остаток преимущественно с пятичленньім (Ф. кольцом, содержащим преимущественно, как минимум, один атом азота и один атом серьї или атом кислорода, г при зтом особенно предпочтительньм остатком следует назвать 5-трифторметил-1,3,4-тиадиазол-2-ильньй остаток; 60 В" может означать замещенньій алкил или алкоксигруппу (в каждом случає предпочтительно содержащую от 1 до 4 атомов углерода); и
В? может означать замещенньй арильньй остаток (предпочтительно фениль-ньй остаток, которьй предпочтительно замещен галогеном).
Такие гербицидьї уже хорошо известнь (сравните, например, заявку ЕР Мо 18 497 и соответствующий патент 65 США Мо 4 645 525, заявку ЕР Мо 94 541 и соответствующий патент США Мо 4 585 471, а также заявку ЕР Мо 348 737 и соответствующий патент США Мо 4 968 342). Упомянутье в указанньїх источниках гербицидьі особенно предпочтительнь в связи с настоящим изобретением.
В частности предпочитается придание растениям устойчивости по отношению к упомянутому в заявке ЕР Мо 348 737 и в соответствующем опатенте США Мо 4 968 342 гербициду с химическим названием:
М-изопропил-Іч-(4-фторфенил) амид (5б-трифторметил-1,3,4-тиадиазол-2-ил-окси)уксусной кИслОтьІ (предложенное торговое название: тиафлуамид). Зта устойчивость позволяет вводить упомянутьій гербицид также в такие культурь, которье в нерезистентной форме бьли заражень! гербицидом неприемлемьм способом.
Настоящее изобретение подробнее поясняется следующими примерами осуществления: 70 Ї. Вніделение ОЗППсС-ДНК из кукурузь!.
При ввіделений О5ЗТІсС-ДНК используются известнье способь! и методьі молекулярной биологии, которье, например, описьїваются в, следующем справочнике: Мапіаїйів Т., Ргйвсп Е.Р., Затргоок у): МоіІесшціаг сіопіпд, А
Ї арогаюгу Мапиаї; Соїд Зргіпуд Набог І арогайогу, второе издание, 1989.
Для вьіделения ЗЗТПШсС-ДНК сначала вьіделяют белок в чистом виде из зтиолированньїх ростков кукурузь! 7/5 (Жеа тауз) сорта Мийп (1) и полностью определяют аминокислотную последовательность с помощью анализа последовательности белка (2). Таюке из ростков кукурузьі вьіделяют мРНК (3) и с помощью обратной транскриптазьї ферментативно переводят в кКДНК (4). Полученную таким образом кДНК встраийвают в качестве матрицьї! в полимеразную цепную реакцию (Миїйїз К.В., Раіоопа Р. А., (1987), Меїйодз Епгутої. 155:335-350) для вьіделения 5 ПШс-ДНК. 1. Вьіделение ОЗТПс-белка из кукурузьі, сорта Мийіп
Для очистки О5ТПс-белка ростки кукурузь! переводят в удобное для переработки состояние и смешивают с 0,2М Трис/НСІ, рН7,86, 1мММ зтилендиаминтетрауксусной кислотой (ЗДТК) (2мл/г живого веса). Суспензию центрифугируют и белковую фракцию надосадочной жидкости получают при фракционированном осаждений сульфатом аммония с насьщщением 30905 и 7095. Вьіделение ОЗТІПс-белка осуществляют при хроматографии на с г следующих колонках в приведенньїх буферах:
А) Сефадекс О-100 (среда для разделения на декстрановой основе), обьем 500мл (Ріпатасіа) і)
Буфер: А: 50ОММ фосфат калия, рН7,З
Б) ДдДЗАЗ-сефароза (матрица из поперечно-сшитой агарозьі с о ковалентно присоединенной дизтиламинозтильной группой), обьем 5Омл (РНагтасіа) с зо Буфер А: 10ММ фосфат калия, рН7,З
Буфер Б: 1,0М фосфат калия, рН7,З -
Градиент: 0-10095 Б в 500мл «я
В) Глутатион-сульфобромфталеин-агароза, обьем 2Омл (Зідта)
Буфер: А: 50ОММ фосфат калия, рН7,З --
Буфер: Б: 50мММ фосфат калия, рН8,О, 5мМ глутатион ю
Г) Моно 0 НК 5/5 (анионообменная смола на основе поперечно-сшитой агарозьіь с заряженньми триметиламмонийметильньми группами, размер частиц 10 ж 5мкм), обьем 1мл (РНагтасіа)
Буфер: А: 20мМ Трис/НеЇ, рН7,5
Буфер: Б: 20мМ Трис/НСІ, рНе,0, 1,0М хлористьій натрий «
Градиент: 0-25905Б в 20мл шщ с 2. Анализ последовательности СЗТ ПІс-белка
Вьіделенньй из кукурузь! (сорта Мшіп) ЗЗТПс-белок подвергают восстановлению, карбоксиметилированию ;» и диализу против 0, 2М гидрокарбомата аммония (Сіагег А.М., Оеіапде К ., Зідтап 0. 5., (1975), "Спетісаї! тоайісайоп ої ргоїеіпв", изд. ЕІземіег Віотедісаї Ргезз, Амстердам). Последующее расщепление белка
Зндопротеазами Авр-М (с чистотой для секвенирования, Берингер Маннхайм) или трипсином (обработанньм с М-тозил-Ї -рбенилаланинхлорметилкетоном, УМогіпіпдіоп) проводят при 23"С в течение 16 часов при соотношений белок - протеаза 1 : 100. Реакцию расщепления прекращают при добавлений 0,195 трифторуксусной кислоть. - Нерастворимьсе пептидьі отделяются при центрифугированийи, растворимье пептидь!ї отделяют друг от друга с
Ге» помощью обращенно-фазовой вьісокозффективной жидкостной хроматографии в следующих условиях: т» 50 Колонка: Мудас С 18 (гель для разделения на основе двуокиси кремния с алифатическими цепочками (Сів)), О,46бсм Х 25см
Ге Злюент А: 0,195 трифторуксусная кислота
Злюент Б: 0,195 трифторуксусная кислота, 9095 ацетонитрил
Градиент: О - 6095 Б в 4Омин
Скорость потока: 0, 25мл/мин
ГФ) Аминокислотную последовательность вьіделенньїх пептидов определяют с помощью секвенаторов белка
ГФ 470А и 473А (Аррієй Віозувіетв). Полная белковая последовательность ОЗП ПШс-белка представлена последовательностью ЗЕО ІЮ Мо 2. во З. Вьіделение поли(А) ї- мРНК из кукурузь (сорт Миіп)
О5ТІПС-ДНК, мРНК и соответствующие кДНК содержат нуклеотиднье последовательности, которье могут бьїть производньіми друг друга. Для вьіделения О5ЗТІПс-ДНК сначала приготавливают полиаденилированную
МРНК из зтиолированньїх ростков кукурузьі. Вьіделение осуществляют с помощью шариков фирмь! Динал с олигр(тимидин)о5 в соответствии с протоколом изготовителя (ЮБупаї, Осло, Норвегия; дЧакорзеп К.5., Вгеїмоїд
Е., (1990), Мисієвїс Асідз Кев. 18:3669). Зтот способ очистки поли(А) ї- мРНК основьіваєтся на связьіваний пар 65 оснований между поли(А)- остатки мРНК на 3 конце и остатками олиго(тимидина), которье ковалентно связьіваются на поверхности магнитньїх металлических шариков (шарики фирмь! Бупаї). На мг таких шариков вставляют 0,2мг растительного материала. Вьіделенная таким способом мРНК используется для ферментативного синтеза кДНК без дальнейшей очистки. 4. Ферментативньй синтез кКДНК
Получение кДНК проводится с помощью "Рігвї 5ігапа СОМА 5Зупіпезів Кі (Рпапгтасіа Р-І/. Віоспетісаї5 Іпс.).
Зтот способ основьівается на ферментативной активности вирусньїх ДНК-полимераз (обратньїх транскриптаз), которье синтезируют ДНК по матрице РНК (Мапіаїйіз Т., Ргіївсп Е. Е., Затрбгоок ., (1982), МоІесшаг Сіопіпд: А
Ї арогаюгу Мапиаї, Сода 5ргіпд Набог І арогайогу. 70 В соответствий с данньіми изготовителя реакцию проводят следующим образом: бБмкм поли(А) ї- мРНК из кукурузьі сорта Миййп смешивали с їмкм 0О,5М дитиозритрита, їмкм праймера (тимидин) 15-1811мкм реакционной смеси (основная реакционная смесь), состоящей из обратной транскриптазь! мьіши, 135мММ Трис/НСІ, рН8В,З, 204мМ хлористого калия, 27мММ хлористого магния, 0,24мг/мл бьчьего сьівороточного альбумина, 54ММ дезоксиаденозин-5'--рифосфата, дезоксицитидин-5'-трифосфата, 7/5 дезок-сигуанозин-5і-трифосфата, тимидин-5'-трифосфата.
После проведения реакции в течение одного часа при 37" мРНК удаляют при щелочном гидролизе.
Синтезированную кДНК осаждают и используют в качестве матриць! в полимеразной цепной реакции. 5. Амплификация, клонирование и установление последовательности 5 ТПс-ДНК.
Для вьіделения З5ППсС-ДНК нуклеотидную последовательность, кодирующую О5ТІІс, сначала подвергают го амплификации с помощью полимеразной цепной реакции (Миїййз К.В., Раіїсопа РЕА, (1987), Меїйодз Епгутої). 155:335-350). Матрицей для реакции служит кКДНК, полученная из мРНК кукурузь Для специфического обогащения З5ТПс-ДНК используют праймер 1 (прямой) согласно последовательности ЗЕО ІЮ Мо З и праймер 2 (обратньй) согласно последовательности ЗЕО ІЮ Мо 4.
Получают реакционнье смеси следующего состава: с бмкм кКДНК (20Онг/мкл) 1мкм 5О0мкМ праймера і) 1мкм 50мкМ праймера 2 4мкл 250мМкМ дезоксиаденозин 0-05 0 - трифосфата, дезоксицитидин о - 05- трифосфата, дезоксигуанозин-5-трифосфата, тимидин-5'-трифосфата с зо бмкл 200мММ Трис/НСІ, рН8,8,100мММ хлористого калия, бОмММ сульфата аммония, 15мМ хлористого магния, 1965 Тритона Х-100 -
Замкл водь. Ге
Полимеразную цепную реакцию осуществляют в термоустройстве для управления циклом при амплификации гена при полимеразной цепной реакции (9600-ТНнегтосусієг, Регкіп ЕІтег). --
В качестве устойчивой к нагреванию полимеразьь прибавляют 1мкл бляшкообразующей единиць ю
ДНК-полимеразь! (5ігаїадепе, 2500Ед./мл). Всего проводят З5 реакционньх циклов при следующих температурах и времени реакции: 45 секунд при 94"С, 45 секунд при 58"С, 45 секунд при 7276.
Амплифицированньй фрагмент ДНК, содержащий кодирующую С5ТПШс нуклеотидную последовательность, очищают с помощью злектрофореза на агарозном геле и, как уже описьшвали, клонируют в векторе рЕТЗа. « ЛПолную последовательность ДНК СЗТШС-ДНК (ЗЕБО 10 Мо 1) определяют с помощью набора для шщ с секвенирования последовательностей ДНК с использованием секвеназь! (Опігей біа(ез Віоспетіса!, Сіемеїапа) . (Запдег Р., Соцівоп К., (1975), 9У.Мої. Віої. 94:441-448). и?» ІЇ. Трансформация риса
Трансформация риса (Огуга займа) может бьіть проведена в соответствии со способами, описанньми в спедующей литературе: с лапд Н. М, Мапд Н., Кесп БЕ. Ї, Соїаз Т. 9., Юамів А. 5, Миїйїїдап В. 9., (1988). Тгапздепіс гісе ріапів ргодисей Бу еіІесігорогайоп-теаваіїйеа ріазтіа иріаке іпіо ргоіоріавів. Ріапі СеїЇ Кер. 7:379-384. - папу МУ, МУ К., (1988). ЕПісіепі гедепегайоп ої ігапздепіс ріапів їот гісе ргооріазаїв апа сотесну
Ге» гедшаїей ехргезвіоп ої (Пе Тогеідп депе іп (пе ріапі. Тпеог. Аррі. Сеп. 76:835-840.
ЗПпітатоїо К., Тегада К. Ігажа Т., Ецітоїю Н, (1989). РегпШе (гапздепіс гісе ріапів гедепегайїей їот ве ігапаїогтеай ргоїоріазів. Маїшге 338:274-276.
Ге бана 5. К., Рефетпапз А. ОЮаца К. Роїйукиз 1. (1990).СепеїйісаПйу епдіпеегед ТепШе іпаїіса-гісе гесомегей їот ргоїоріазі. ВіосФесппої!. 6:736-740.
Науазпітоїо А. їі 7., Мигаії М., (1990). А роїуе(йуієеєпе сіусоІтеадіайївй (гапвіогтайоп вувіет ог дв ргодисНоп ої Тепіе (гапздепіс гісе ріапів. Ріапі РНузіої!. 93:857-863.
Для переноса вектора ре5-О5ТІс в рмсе использовали способ Науазпітоїйо и др. (1990) без изменений. (Ф, Устойчивье к канамицину трансформанть! бьіли проконтролированьі в зкспериментах с Нозерн-блоттингом ка на зкспрессию З5ТПс-белка обнаружили с помощью специфических антител. Ферментативная активность белка может бьть продемонстрирована в зкстракте-сьрце трансформированньїх растений риса по наличию во катализируемой ферментом модификации гербицида, М-изопропил-М-(4-фторфенил)амида (5б-трифторметил-1,3,4-тиа диазол-2-ил-окси)уксусной кислоть.
Трансгеннье растения риса проявляют устойчивость по отношению к указанному гербициду по сравнению с нетрансформированньіми контрольньіми растениями.
ПІ. Трансформация табака 65 а) Культивирование побегов табака и вьіделение протопластов табака:
Табак (Реййї Намаппа 5КІ) размножают при стерильном культивирований побегов на среде ЛС без гормонов
(іпзтеїег ЗКооод, (1965)). С промежутками примерно в 6 - 8 недель пересаживают кусочки побегов на свежую среду ЛО. Культурьі побегов содержатся при освещении 12 часов (1000-3000лк) в помещений для культивирования при 24-26".
Для вьіделения протопластов листьев около 2г листьев (длиной примерно 3-5см) разрезают чистьїм лезвием на маленькие кусочки (0,5 х см). Листовой материал инкубируют в 20мл ферментного раствора, состоящего из средьі КЗ (Маду и Маїїда, 1976). 04М сахарозьі, рН5,б, 296 целлюлазьії К10 (Зеп/а), 0,590 мацероцима К10 (Зегма), в течение 14-16 часов при комнатной температуре. Затем протопласть! отделяют от остатков клеток при фильтрации через стальное сито 0,Змм и 0,їмм. Фильтрат центрифугируют 10 минут при 100 Х 49. Во время /о такого центрифугирования интактнье протопластьь вспльшают и собираются в слой на поверхности ферментного раствора. Осадок из остатков клеток и ферментньйй раствор отсасьвают с помощью стеклянного капилляра. К предварительно очищенньм протопластам добавляют свежую среду КЗ (0,4М сахароза как осмотический раствор) до 1Омл и заново дают им вспльіть. Среду для промьівки отсасьівают, а протопласть разбавляют до 1-2 Х 10 б/мл для культивирования или последующего заражения агробактериями 75 (сокультивированиеє). Концентрацию протопластов определяют в счетной камере. б) Построение вектора рзБ-О5ТШс и перенос ов агробактерию іштеїасіеєпе ОБЗТІШС-ДНК и последовательность Шайна-Дальгарно вьірезались в виде фрагмента Храі/ВатнНі из вектора рЕТЗа-О5Т Пс, подвергались очистке и клонированию в плазмиде Віцевзсгірі ПІ БК т/- (Зігаїадепе, а доМПа, Калифорния), в дальнейшем обозначаемой как рВе-зЗКІИІ. Использовались рестрикционнье сайтьії ХраІ и Ватні. Затем еЗТШсС-ДНК вьірезали по сайтам рестрикции З85іЇ и Зтаї из вектора рВ5-ЗКІІ-З5ТІПс, вьіделяли и лигировали в вектор рКТ101 (линеаризированньій 5Зв8і/ Зтаї!) (Торіег К., Маїгей М., Сгопепрогп В., Зспеї! 9., Зіеіпріїї Н.
Н., (1987), Мисівїс Асідз Кев. 14:5890).
Затем О5ТІС-ДНК вьіделяли в чистом виде как фрагмент ЕсоКіІ/Зта! из вектора ркКТІОІ-5ТШсС и клонировали в зкспрессирующем векторе рез (линеаризированном ЕсокіІ/зтаї!, (МОВ А. и др.,Мо!ес. Вгеєаіпда. с 1:15-26(1995)).
Вместо названньх векторов могут бьть задействованьіь любье другие зкспрессирующие векторь! и і9) промежуточнье векторьї, содержащие соответствующие рестрикционнье сайть, при зтом специалист, располагая вьішеупомянутьми данньіми, может легко сделать подходящий вьібор. Получающийся в результате промежуточньій вектор рез-ОЗТПс. которьій содержит З5ТПШсС-ДНК, переносится на Адгорасіегішт (шптегасіепв, Ге содержащий функциональньй участок міг (Копса и Зспеї, 1986, мап Націє и др., 1983). в) Трансформация регенерирующих протопластов табака путем сокультивирования с Аадгобрасіегійт М
Штпегїасієпв (Те)
В дальнейшем используєется способ Мартона и др., 1979, с небольшими изменениями. Протопласть вьіделяют, как описано, и инкубируют при плотности 1-2 х 105/мл в среде КЗ (0,4 М сахароза, А-нафтилуксусная -- кислота в концентрации 0,1мг/мл, 0,2мг кинетина) в течение 2 дней в темноте и 1-2 дня при слабом освещений юю (500люк) при 2670.
Как только появляются первье части протопластов, прибавляют к Змл регенерирующих протопластов ЗОмкл суспензии агробактериий согласно разделу б) в минимальном количестве средьі! А (Ам) (плотность около 109 « агробактерий/мл). Продолжительность сокультивирования составляет 3-4 дня при 20"С в темноте. После чего клетки табака помещают в пробирки для центрифугирования емкостью 12мл, разбавляют морской водой - с (бООмоОсм/кг) до 1Омл и осаждают центрифугированием при 60 Х 49 в течение 10 минут. Зту процедуру промьїівки а повторяют еще 1-2 раза, чтобьї удалить наибольшую часть агробактерии. Клеточную суспензию культивируют » при плотности 5 Х 107/мл в среде КЗ (0,3М сахароза) с А-нафтилуксусной кислотой в концентрации мг/л, кинетином в концентрации 0,2мг/л и цефалоспориновьім антибиотиком цефотаксимом в концентрации 50Омг/л.
Клеточную суспезию каждую неделю разбавляют свежей средой КЗ, и величина осмотического давления средь! 1 постепенно понижается с уменьшением молярности раствора сахарозь! на 0,05М (около бОмОсм/кг) за неделю. - Селекцию с канамицином канамицинсульфат 1О0Омг/л /ЗБідта/, ббОмг/г активного канамицина) начинают через 2-3 недели после сокультивирования в агарозе, применяя "шариковьй тип культивирования" (ЗНАШНО и др., б» 1983). Устойчивне к канамицину колониий можно различить на фоне оставшихся колоний через 3-4 недели после їз 20 начала селекции. г) Прямая трансформация протопластов табака с ДНК. Трансформация с использованием нитрата кальция и кі» полизтиленгликоля.
В чашке Петри осторожно смешивают около 1092 протопластов в 180мкл средьї КЗ с 20мкл водного раствора
ДНК, содержащего 20мкг плазмидьї р5-ОЗТПс. Плазмиду рЗ5-О5ТШс получают известньм способом из 22 плазмид рЕТЗа-О5ЗТІс, рЕТ101, рВ5-5КІЇ и ре5. Затем осторожно прибавляют 200мкл раствора для слияния
ГФ) (0,1М азотнокисльй кальций, 0.45М маннит, 25956 полизтиленгликоль/ЛЗГ 6000/, рНУ). Через 15 минут добавляют бмл промьівного раствора (0,275М азотнокисльїй кальций, рНб) и еще через 5 минут протопласть де переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 60 Х 4д. Осадок после центрифугирования помещают в небольшое количество средьі КЗ и культивируют, как описано в следующем ниже разделе. 60 Альтернативно можно трансформировать протопласть по Наїп и др., 1985. д) Культивирование инкубированньх с ДНК протопластов и селекция устойчивьїх к канамицину каллюсов:
Для описьіваемьїх далее культивирования и селекции устойчивьїх к канамицину колоний используется модифицированная методика "шарикового типа культивирования" (ЗПЙЙШШОо и др., 1983). Через неделю после обработки протопластов с помощью ДНК (сравните с разделом г) смешивают в чашке Петри диаметром 5см бо суспензию клеток (Змл) с Змл средь! КЗ (0,3М сахароза ж гормон; 1,296 низкоплавящаяся агароза (Морские
Коллоидьі)). Для зтой цели агарозу в сухом виде автоклавируют и после добавления средь КЗ бьістро кипятят в микроволновой печи. После затвердевания агарозьі кружочки агарозь! ("шарики") вместе с включенньіми внутрь микрокаллюсами табака переносят для дальнейшего культивирования и селекции в чашки Петри диаметром 10см и прибавляют по 10мл средьї КЗ (0,3М сахароза, А-нафтилуксусная кислота в концентрации мг/л, кинетин в концентрации 0,2мг/л) и ка-нсамицинсульфат /ООмг/л/ (Зідта). Жидкую среду заменяют каждую неделю. При зтом осмотическое давление средь! ступенчато понижается. За неделю в обмениваемой среде (КЗ т канамицин) молярная концентрация сахарозьі понижаєтся на 0, О5М (около ббмОсм). Схема селекции устойчивьмх к канамицину колоний табака после трансформации с помощью ДНК: 0о4МмозМмо25МмоОо2гомМОо5МмМОлОоМ Сахароза в жидкой среде п вс Кк 1 2 З А 5 6 Недели после поглощения ДНК /5 (Среда КЗ А-нафтилуксусная кислота 1мг/л, кинетин 0,2мг/л)
П - поглощение ДНК
В - включение в агарозу
С - селекция с канамицином ( канамицинсульфат 10Омг/л)
К - устойчивьне к канамицину колонийи, которне можно однозначно различить на фоне е) Регенерация устойчивьїх к канамицину растений:
Как только устойчивье к канамицину колоний достигают диаметра около 0,5см, половину помещают на среду для регенерации (среда ЛС, 295 сахароза, бензиламинопурин (БАП) в концентрации 0,5мг/л) и вьідерживают при освещениий в течение 12 часов (3000-5000лк) и при температуре 247"С в помещений для культивирования. Другую половину размножают в виде культурьі каллюса на среде ЛО с А-нафтилуксусной кислотой в концентрации мг/л, кинетином в концентрации 0,2мг/л, БАП в концентрации 0,Імг/л и с 29 канамицинсульфатом в концентрации 100Омг/л. Когда регенерированнье побеги достигают величиньі около їсм, (У их внірезают и помещают на 1/2 средьі ЛО (195 сахароза, 0,895 агар) без регуляторов роста для того, чтобьі они пустили корни. Побеги пускают корни на 1/2 средьь ЛО с канамицинсульфатом в концентрации 1О0Омг/л, а позднее их пересаживают в землю. ж) Трансформация пластинок листьев под действием агробактериий (Ште-тасіепв. см 3о Для трансформации пластинок листьев (Ногесп и др., 1985) листья длиной 2-3см после стерильного Й культивирования побегов нарезают пластинками диаметром в 1см и инкубируют с суспензией соответствующих со агробактерии (около 10У/мл) (сравните с разделом в) в среде Ам, см. ниже) примерно в течение 5 минут.
Зараженнье кусочки листьев вьідерживают в среде Мигазпіде и ЗКосд (МС) без гормонов в течение 3-4 дней 7 ов при температуре около 2470. В течение зтого времени агробактерия прорастаєт на кусочках листьев. Зти ю кусочки листьев затем промьівают в среде МС (БАП 0,5мг/ мл, А-нафтилуксусная кислота 0,1мг/мл) и помещают на подобную среду (0,895 агар) с цефотаксимом в концентрации Б5ООмкг/мл и канамицинсульфатом в концентрации 1О0Омкг/мл. Через две недели среду следует обновить. Трансформированнье устойчивье к канамицину побеги виднь! через следующие 2-3 недели. « 20 Биохимические способь! доказательства трансформации -о
Ферментативньй тест с неомицин-фосфотрансферазой (НФТ І): с Активность НФТ ІІ в тканях растений определяют путем іп зйш фосфорилирования канамицина, как описано :з» КеїВ и др. (1984) и модифицировано ЗспНгеїйег и др. (1985), следующим образом. При прибавлений стеклянного порошка гомогенизируют во льду 5Омг ткани растений в 5Омкл буфера для зкстракции (1095 глицерина, 595 2-меркаптозтанола, 0,195 додецилсульфата натрия, 0,02595 бромфенолового синего, 62, 5ММ Трис, рНб 8) и в сл течение 10 минут центрифугируют при 4"С в центрифуге Зппендорфа. Надосадочную жидкость в количестве
БОмкл переносят в нативньй полиакриламидньй гель (145 Х 110 Х 1,2мм; гель для разделения: 1095 -й акриламида, 0,3395 бисакриламида, 0,375М Трис, рНев,б, гель для сбора: 595 акриламида, 0,16595 о бисакриламида, 0.125М Трис, рНб,8) и подвергают злектрофорезу в течение ночи при 4"С и 60В. Как только 5р ндикатор бромфеноловьй синий вьіделяется из геля, гель промьувают дваждь! дистиллированной водой в т» течение 10 минут и один раз ЗО минут буфером для реакции (67мММ Трис-малеат, рН7,1; 42мММ хлористьй
Кз магний, 400мММ хлористьйй аммоний). Гель помещают на стеклянную пластину такого же размера и покрьівают сверху 40мл 190-ной агарозьі в буфере для реакции, содержащем в качестве субстратов канамицинсульфат (20мкг/ мл) и меченньй ЗР. аденозин-5'-трифосфат (Атегвпат) с радиоактивностью 20-200мкКи. Сзндвич-гель 5Б инкубируют ЗО минут при комнатной температуре, а затем на агарозу укладьвают лист фосфоцеллюлозной бумаги Р8І (У/паїгтап). На него укладьівают в четьіре слоя фильтровальную бумагу ЗММ (УУпаїтап) и несколько (Ф) бумажньїх полотенец. Перенос фосфорилированного іп зіш радиоактивного канамицинфосфата на бумагу Ра81 ка прекращаєтся через 3-4 часа. Бумагу Р8І инкубируют 30 минут в растворе протеиназь К и 190 додецилсульфата натрия при 60"С, а затем промьівают 3-4 раза в 250мл 10ММ фосфатного буфера с рН7,5 при 60 80"С, сушат и подвергают авторадиографии в течение 1-12 часов при -70"С (пленка Кодак ХАК5Б).
Все результать! в процентах как в вьішеупомянутьїх, так и в приводимьїх далее примерах, рассчитьіваются как весовне проценть, если не указано иначе.
В полученньїх таким образом в соответствии с вьиішеуказанньми примерами клетках растений и растениях присутствие З5ТШС-ДНК устанавливали с помощью анализа с использованием Саузерн-блоттинга. Зкспрессию 65 ОТІШсС-ДНК подтверждали анализом с использованием Нозерн-блоттинга и Вестерн-блоттингом с помощью специфических антител.
Далее описьіваются некоторне средьі, применяемьсе при трансформации растений или клеток растений:
Среда Ам 3,Бг вторичного кислого фосфата калия 1,5г первичного кислого фосфата калия
ОБГ цитрата натрия б 1г сульфата магния гептагидрата 1г сульфата аммония 70 2г глюкозь! в 1Лл
Среда для стерильного культивирования побегов табака
Макрозлементь 1/2 концентрации солей средьї МС
Микрозлементь 1/2 концентрации солей средьї МС 75 ЕРе-ЗДТК (среда Мигазпіде и ЗКосад)
Миосинозит 100 мг/л
Сахароза 10 мг/л
Агар 8 мг/л
Витаминьх 1 мг/л пантотенат кальция биотин 10 мг/л никотиновая кислота 1 мг/л пиридоксин 1 мг/л тиамин 1 мг/л с о рН5,7 перед автоклавированием
Среда КЗ
Для культивировния табака МісойМапа (арасит рей Намаппа ЗК1, табака Місомнапа (арасит УУізсопвіп 38 и протопластов табака Місойапа ріутадіпігоїїа (Маду и Маїїда, 1976) с
Макрозлементь 25Омг/л З нитрат аммония І«о) нитрат калия. 2500Омг/л хлористьій кальций дигидрат У9ООмг/л -- сульфат магния гептагидрат 25Омг/л юю мононатрийфосфат сгидрат 15Омг/л вторичньй кисльій фосфат кальция гидраї БОмг/л
Микрозлементь Змг/л « орто-борная кислота сульфат марганца (2) гидрат 1Омг/л шщ с сульфат цинка тетрагидрат 2мг/л йодистьій калий 0,7Бмг/л ;» молибдат натрия дигидрат 0,25мг/л сульфат меди (2) пентагидрат 0,025мг/л хлорид кобальта (2) гексагидрат 0,025мг/л 1 Бе-9ЗДТК 37,2мг/л динатриевая соль ЗДТК - сульфат железа (2) гептагидрат 27 ,вмг/л б Инозит 10Омг/л їз» 50 Сахароза 137мг/л (-0,4М)
Кз Ксилоза 250 мг/л
Витаминьх мг/л никотиновая кислота 5Б пиридоксин 1мг/л тиамин 1Омг/л
Ф) Гормонь мг/л з А-нафтилуксусная кислота кинетин 0,2 мг/л 60 рн, стерилизовать на фильтре
Среда Линсмайера и Скуга (І іпетаїег и ЗКосо, 1965)
Для культивирования регенерирующих протопластов и для культивирования ткани опухолей табака и каллюса. Среда Линсмайера и Скуга (ЛО) представляет из себя среду Мурашиге и Скуга (Мигазспіде и ЗКосад, бо 1962) со следующими модификациями:
Тиамин используется в более вьісокой концентрации 0,4мг/л вместо 0,1мг/л;
Глицин, пиридоксин и никотиновая кислота отсутствуют.
Макрозлементь! 165Омг/л нитрат аммония нитрат калия 1900Омг/л хлористьій кальций дигидрат 44Омг/л сульфат магния гептагидрат З7Омг/л первичньй кисльій фосфат калия /17Омг/л
Микрозлементь 6б,2мг/л орто-борная кислота сульфат марганца(2) гидрат 22,Змг/л сульфат цинка тетрагидрат 8,бмг/л йодистьій калий 0,8Змг/л молибдат натрия дигидрат 0,25мг/л сульфат меди (2) пентагидрат 0,025мг/л хлорид кобальта (2) гексагидрат 0,025мг/л
Бе-ЗДТК 37,2мг/л динатриевая соль ЗДТК сульфат железа (2) гептагидрат 27 ,вмг/л
Инозит 10Омг/л
Сахароза ЗОмг/л
Агар мг/л
Витаминь 0О4мг/л с тиамин
Гормонь мг/л о
А-нафтилуксусная кислота кинетин /0,2мг/л с зо рно5,7
Повьішенная устойчивость трансформированньїх согласно изобретению растений поясняется следующим в опьтом: «я
Подтверждение повьішенной устойчивости трансформированньх растений:
Для доказательства повьішенной устойчивости по отношению к обладающим гербицидньм действием -
З5 Гетерооксиацетамидам определяют заражение трансформированньх согласно изобретению растений при ю сравнений с о контрольньми растениями. В качестве испьітьшаемого гербицида используют
М-изо-пропил-М-(4-трифторфенил)амид (5-трифторметил-1,3,4-тиадиазол-2-ил-окси) уксусной кислоть.
Семена поколения Е1 трансформированньїх растений помещают в оранжерее в горшки (диаметром 11см) с землей, содержащей 395 перегноя. Вьіращивание растений осуществляют при температуре 23"С и « относительной влажности воздуха 70 - 8095. Обработка вьішеназванньм гербицидом в форме 7090-ного Ше) с смачиваемого порошка производится через 24 часа после внісаживания семян с использованием концентраций, соответствующих затраченному количеству в 2000-4000г активного вещества/га. ;» Оценку производят через 20 дней после обработки гербицидом. Оцениваєется в процентах общий вред, нанесенньій трансгенньмм растениям, по сравнению с соответствующими контрольньми растениями, которье біли обработань! такими же концентрациями активного вещества. «сл Трансформированньюе табачнье растения, в которье встрайвали О5ТПШсС-ДНК согласно изобретению, показали четкую повьішенную устойчивость по отношению к вьісоким затраченньм количествам гербицида - (2000-4000г/га) по сравнению с нетрансформированньіми соответствующими контрольньіми растениями.
Ф Протокол последовательностей (1) Общая информация: о (Ї) Заявитель: з (А) Название: Байер.АГ (Б) Улица: Байерверк (В) Город: Леверкузен (Г) Страна: Германия (Д) Почтовьй индекс: Ю-51368
Ф) (Е) Телефон: 0214/30 66400 ка (Ж) Телефакс: 0214/30 3482 (3) Телекс: 85 101 -265 (а) 60 (ї) Название изобретения: Дезоксирибонуклеийновая кислота, кодирующая глутатион-5-трансферазу, (ії) Число последовательностей: 4 (м) Форма компьютерного представления данньх: (А) Носитель данньх: дискета (Б) Компьютер: ІВМ-совместимьй ПК 65 (В) Операционная система: РС-0О5/М5-005 (Г) Программное обеспечение: Раїепіїп КеїІеазе 841.0, версия я. 30
(2) Информация к 5ЕО ІЮ Мо 1: () Характеристика последовательности: (А) Длина: 666 пар нуклеотидов (Б) Вид: нуклеотид (В) Форма цепи: однонитевая (Г) Топология: линейная (і) Вид молекуль!: КДНК (ії) Гипотетическая: нет 70 (ім) Антисмьісловая: нет (М) Признак: (А) Название/код: СО5 (Б) Положение: 1.663 (хї) Описание последовательности: ЗЕО ІЮ Ме 1:
АТО осо ССтТ СТО ДАО СТО ТАС соб АТО ССО СТО ТОССССААСсТо сто 048
Меї Аа Рго Ге Гуз Ге Туг Сіу Меї Рго Ге бег Рго Азп Ма! Маї 1 5 10 15 сво ото бос АС ото СТО АС АС Ас оС Сто АС То ОАБАТОСТС 96
Агд Ма! Ага Трг Маі беи Азп Сій Суб Сіу Се Авр Рів Сім Пе Маї 20 25 Кі
ССС ТС БАС СТО АСС АС СОС ОС САС АС САб ССС САС ТІССТоОоСС 0144 с
Рго Ма Ар Сцец Тіт Типг Су Аа Нів Гуз Сіп Рго Ар Рпе Гец Аа Ге) 35 40 45
СТО ААС ССтТ То ОС САС АТС ССО ОСТ СТО ОТО БАС ОбБА БАС ОАА сте 192
Кей Авп Рго Ре Сіу Сіп Пе Рго Аа Сец Ма! Азр Су Авр Сіш Ма! 5О 5Б во «І
Сто То БАб ТоС СОТ обо АТО ААС боб ТАС АТС ОСС АОСААСТАСОСОо 0240 ем Рве Сію бег Аг Аа Пе Авп Аго Туг Ме Аа бег Гу Туг Аа с 55 70 75 80 іс) тов сдо бос АС5 САС Сто Сто СОС осо Со осо тсо Со сс ААОСТОо 288
Зег бі Сіу Тиг Авр іеи Ге Рго Аа Тпг Аа Зег Аїа Аа Туз Тец в 85 90 95 бАо То тоб Сто САС ото СА То САС САС ТТ ССАС ССО ААСоСо То 0336 - с Січ Ма! Тгр Ге СІМ Маї Сі Зег Ніє Ніз Ре Ніз Рго Азп Аа Зег
ГІ з» 100 105 по п ссо сто ото то САС сто Сто сто Асо СС сто сто обссосососсСосС зва
Ро Гей ма! Рпе Сіп їец Гец Ма! Аго Рго Гей Гей Сіу Сіу Аа Рго 115 120 125 -й
БАС ССО осо То То СА ААО САС Со СА СаО СТО ОСС ААС То Сто 432
Авр Аа Аіа Ма! Ма! Сію Цуз Нів Аа Сім Сіп Гец Аа Гуз Ма! ей 20 ї 130 135 140
САС сто ТАС САС Сб САС СТО СС СОС ААС ААС ТАС сто осССобо САС 0480
Авр ма! Туг СІЧ Аа Нів Гей Аа Аг Авл Гуз Туг Ген Аа Сіу Авр 145 150 155 160 25 (Ф) САС ТТ АСОо Сто ОСС ЗАС ОСС АС САС осо ТоСтТАССТОСТоТАССТо 0528 ке Сі Рпе Тік Ге Аа Азр Аа Азп Ніз Аіа Зег Туг Геи ей Туг ей 165 170 175 60
АВС ААО СС ССС Ас СС обо сто сто осо осо осбооССсСАСОТСААО 576
Зег Гуз Тиг Рго Гуз Аа Сіу Ге Ма! Аа Аа Агу Рго Нів ма! Гув 180 185 180 бо осо тоб тоб САС ССС АТС ОСС ОСС Со СОС Осо ТС САВААСАСОСТС 624
Аа Тр Тгр Сім Аа Ме Аа Аіа Аг Рго Аа Рбе Сіп Гуз Тиг Маї 195 200 205 сс сс АТО ССС тТО ССС соб ССО сос тос тос Тоо ост ТА вве
Аа Аза Пе Рго Ге Рго Рго Рго Рго Зег Зег Зег Аа 210 215 220 (2) Информация к последовательности ЗЕО ІЮ Мо 2: 70 () Характеристика последовательности: (А) Длина: 221 аминокислота (Б) Вид: аминокислота (Г) Топология: линейная (ї) Вид молекуль!: белок (хі) Описание последовательности: БЕО ІЮ Мо 2:
Меї Аіа Рго їец Гуз Ге Туг Сіу Меї Рго Гей Зег Рго Авп Маї Ма! 1 5 10 15
Аг Ма! Аіа Тиг Маі Гец Азп іш (уз СУ Ге Авр Рве Сім Ме Маї 20 25 зо
Рго Ма! Азр Гей Тпг Тиг Су Ага Ніз Гуз Сіп Рго Авр Рпе Г ем Аа 35 40 45 Ге щі 6)
І ги Авп Рго Ріє Су іп Іе Рго Аа Г еи Маїі Авр Су Ар Сіц Ма! 50 55 60 с «
Геч Ріе Сіш бег Агу Ліа Ме Авзп Аго Туг Ге Аа 5ег | уз Туг Аа в5 то 75 во ісе) «--
Зо Вег Сіи Су Тиг Авр Гец Г еи Рго Аа Тіт Аа Зег Аа Аа І ув Гей іт) 85 90 95
Сн Ма! Тгр Гей Січ Маї Сім бег Ні Ні Рпе Нів Рго Авп Аа Зег З 70 100 105 110 с ;»
Рго Гц Ма! Ріє Сіп І ец І. еи Маї Агу Рго І ги Геи Сіу Су Аа Рго 115 120 125 1 - Авр Аа Аа Уаї Маї Си Гуз Ні Аа Сім Сіп І еи Аа (уз Ма) Геи 130 135 140 (22) г»
Кз Азр Маї Туг Сіс Аїа Ніз І еи Аа Агу Азп Гуз Туг І ем Аа Сіу Авр 145 150 155 160 іме) 60 65
Сім Рпе Тиг Гец Аа Авзр Аіа Авп Ні Аа Зег Туг Гец Ге Туг їеч 165 170 175
Зег уз Тиг Ріо Гуз Аіа Сіу Теми Ма! Аіа Аіа Агд Рго Нів Маї (уз 180 185 190
Аа Тгр Ттр СіІн Аа Пе Аа Аа Агд Рго Аіа Ре Сіп Гув Тниг Ма! 195 200 205
Аа Аа Пе Рго Мей Рго Рго Рго Ріо Бег бЗег Зег Аа 210 215 220 (2) Информация к последовательности ЗЕО ІЮ Мо 3: () Характеристика последовательности: (В) Длина: 33 парьї нуклеотидов (Б) Вид: нуклеотид (С) Форма цепи: однонитевая (Г) Топология: линейная (і) Вид молекуль!: КДНК (ії) Гипотетическая: нет сч (ім) Антисмьісловая: нет (хі) Описание последовательности: 5ЕО ІЮ. Мо З: і) (2) Информация к последовательности ЗЕО ІЮ. Мо;а: () Характеристика последовательности: (А) Длина: 30 пар нуклеотидов с зо (Б) Вид: нуклеотид (В) Форма цепи: однонитевая - (Г) Топология: линейная Ге (і) Вид молекуль!: КДНК (ії) Гипотетическая: нет -- (ім) Антисмьісловая: нет ю (хі) Описание последовательности: ЗЕО ІЮО Мо 4:
Claims (1)
- Формула винаходу « й | | -с 1. ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота), яка кодує білок глутатіон-З-трансферазу Шс (С5ТШс) з послідовністю: . и? 1 - (о) ЧК» Ко) іме) 60 б5Мес Аїа Рко Пец Пує Пес Тук бсіу Мес Рко Пец бек Рко Авп Уаі1ї Уаї 1 5 10 15 Ак Маї Аза Тих Маї цей Авп біш Пув сіу цей Авр Рібе Сі І1їе Уаї 20 25 30 то Ркго УМаї Авр цемч ТЕХ Тахг Сіу Аз1а Нів Пцув сСіп Рко Авр Рпе Без А1а 35 40 45 Бех Авп оРхо Ре сіу біп І1е Ркго Аїа Пео Маї Авр біу Авр бі Уаї 50 55 60 Бец Рпе бі Бех Аку Аїа І1єе Авп Аку Тук І1е А1а бек Був Тух Аїа 7 вв 10 15 во бек січ біу Тих Авр Пец Пцец Рко Аїа Тах А1а бек А1а Аї1а цув Печ с25 . 85 90 95 о біц Уаї Тер Пес біц Уаї біц Бех Нів Нів Рпе Нів Рхко Авп А1а бех 100 105 110 см «Її Рхо Печ Уа1і1 Рпе біп Печ Пем УМа1ї Акд Рко Печ Пец біу біу А1їа рРко о 115 120 125 «- Авр Аїа Аїа Маї Уаї бій Пув Нів Аїа біч Сіп цен А1їа був уаї це що 130 135 140 « Авр Ма1 Тух бій А1їа Нів Пеш Аїа Акд Авп ув Тух Печ А1їа б1іу Авр з с 145 150 155 160 ;» бі Рпе Тих Пец А1ї1а Авр А1їа Азп Нів Аїа Бех Тух Пцец Пец Тух Пец 165 170 175 с - Бех Пув Тих Ртхо Пув А1їа біу еп Уаї Аїа А1їа Аку Рко Ніє Уаї цув б 180 185 190 їз ще Аїа Тер Тер Січ Аза І1їе А1їа А1а Агуд Рко Аїа Ріе сіп Цув ТЬг Уаї 195 200 205 ГФ) Аза Аїа Іїе Рко цеч Рко Рко Рко Ркго бек бек Бех А1їа ко 210 215 2202. ДНК згідно з п. 1, яка відрізняється тим, що має послідовність бо 65АТС ССс ССТ Сто Адо Сто ТАС боб АТС ССО СТО ТСС ССС ААС сто сте 48 Меє АДіа Рко Пец Пув Печ Тух сіу Меї Рго Пец бех Рко Авп Уаії Уаї 1 5 10 15СОС СТО ОСС АСС СТО СТО ААС САС ААС СОС СТО САС ТТС бАб АТО сто 96 Агу Маї Аїа Тік Уаії реп Авп біз Пув б1іу Пес Авр Рре біц І1е Уаї1 70 20 25 зо ССС СТО БАС СТО СС СС оо ОСС САС ААо САС сСссС БАС ТТо сто сс 144 Ркго Маї Авр Пец Тіх Тпх біу Аїа Нів був біп Рко Авр Ріре їеч Аза 35 40 45 СТО ААС СсСтТ ТТо ОС САС АТС соб сстТ Сто СТ САС ОСА САС САА сте 192 Грец Авп о Рко Рпе Ссіу біп І1е Рко Аіа Пес УМаї Авр с1у Авр січ Уаї 50 55 60 СТО ТТС САС тес сот осо АТС ААС СОС ТАС АТС СС АС АС ТАС осо 240 БПеч Ррпе бі бек Акгу А1ї1а І1е Авп Ак Тухк Іїе А1а Бех Пув Тух А1а с 65 70 75 80 о ТСС САС Сас АСсо сАС сто сте ссо со дес осо Тео осо осо Адо сто 288 беїх біц біу Тпт Азр цем печ Рко А1а ТЬх А1їа бек Аза Аїа цув бехм Га 85 90 35 «г (Се) «- ІС о) - с ;»1 - (о) їз 50 що)Ф) ко бо б5САС Ото Тс СТО сАб сто СА тоб САС САС ТТС САС ССб ААсС ссо тес 336 сій Чаї Тхр Печ сії Уаї біз бек Нів Ніє Рье Ні Рко Авп діа бех 100 105 110 ССО сто Сто ТТС САС Сто Сто сто Асс о соб сто сто сос о сос вес ссс 384 Рхо Пец Уаї Рпе біп цец Пец Уаї Акд Рко цей цеч біу сіу Аїа Рго 70 115 120 125 САС Со Со сто СТО САб ААС САС Со САС САб Сто ОСС Адб сто сте 432 Авр Аїа Аїа Уаї Уаї біз Пуз Нів Аїа бій біп Пез Аїа Пув Уаї цец 130 135 140 САС СТО ТАС САС сСб САС СТО ССС СОС ААС о ААб ТАС СТО бСС боб САС 480 Авр Маї Тук біч А1ї1а Нів Пец А1їа Акд Авп Пув Тук Пцеч Аза Сіу Авр 145 150 155 160 САС ТТС АСО СТО ОСС САС ОСС ААС САС бос тес ТАС Сто сто ТАС сте 528 біз ВБе Трх Пец А1їа Авр Аїа Аво Нів Аза бек Тухг Пеп Пец Тух Беч с 165 170 175 Ге) АСС ААС АСС ССС ААб осСс боб Сто сто ссс ссс СОС ССС САС Сто ддо 576 Бех ПСує Тк Рко Пув Аіїа б1у Пцеч Уаї Аїа А1їа Акд Рко Нів Уаї цЦув с 180 185 190 чЕ (Се) ССС То тоб бАб бсСС АТС ОСС ССС сс ссс ОСС ТТ САС дАб дес сте 624 «- Аїа Тер Тер біч Аїа І1е Аїа Аїа Аку Рго Аїа Рі біп цПув ТЬхк Уаї 3о , 195 200 205 юю ССС сс АТС Сссс тто сСесС ссс о ссо ССС тес Тос тоб ост ТбА 666 « Аїа Аїа І1е Рко Пеш Руо Рко Рко Рко Бех бех Бех А1а З с 70 210 215 220З. ДНК згідно з п. 1, яка відрізняється тим, що має послідовність ДНК З5ТШс, яка міститься у векторній . а плазміді рРЕТЗа- СО5ТІс.4. ДНК згідно з будь яким з пп. 1-3, яка відрізняється тим, що існує у формі дволанцюгової ДНК, яка містить ДНК згідно з будь-яким пп. 1-3 та комплементарний до неї ДНК-ланцюг.с 5. ДНК згідно з будь яким з пп. 1-4, яка відрізняється тим, що на 5-кінці кодуючої послідовності знаходиться діючий в рослинах промотор.- 6. ДНК згідно з п. 5, яка відрізняється тим, що промотором є Самм 355 або подвійний промотор СаММ 355, Ге» що складається з енхансера Самм 355 і промотору СаММ 355.7. ДНК згідно з п. 5, яка відрізняється тим, що представляє собою конструкт, що містить ДНК ОЗТПІСс і ве подвійний промотор Самм 355, як він представлений у векторній плазміди реб5-О5 Пс. Ге 8. Білок з амінокислотною послідовністю, представленою в п. 1.9. Білок згідно з п. 8, який відрізняється тим, що існує в димерній формі. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 12, 15.12.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і Ф) науки України. іме) бо б5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19501840A DE19501840A1 (de) | 1995-01-23 | 1995-01-23 | Desoxyribonukleinsäure und ihre Verwendung |
| PCT/EP1996/000068 WO1996023072A1 (de) | 1995-01-23 | 1996-01-10 | Für glutathion-s-transferase kodierende desoxyribonukleinsäure und ihre verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA51642C2 true UA51642C2 (uk) | 2002-12-16 |
Family
ID=7752046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA97084350A UA51642C2 (uk) | 1995-01-23 | 1996-10-01 | Дезоксирибонуклеїнова кислота, яка кодує білок глутатіон-s-трансферазу, білок |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5968796A (uk) |
| EP (1) | EP0805865A1 (uk) |
| JP (1) | JPH10512451A (uk) |
| CN (1) | CN1169160A (uk) |
| AU (1) | AU4484996A (uk) |
| BR (1) | BR9606780A (uk) |
| CA (1) | CA2210901A1 (uk) |
| DE (1) | DE19501840A1 (uk) |
| RU (1) | RU2169196C2 (uk) |
| UA (1) | UA51642C2 (uk) |
| WO (1) | WO1996023072A1 (uk) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6063570A (en) | 1997-09-05 | 2000-05-16 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Soybean glutathione-S-transferase enzymes |
| US6096504A (en) * | 1997-09-05 | 2000-08-01 | E. I. Du Pont Nemours And Company | Maize glutathione-S-transferase enzymes |
| US6168954B1 (en) * | 1997-09-05 | 2001-01-02 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Soybean glutathione-S-transferase enzymes |
| AU1185499A (en) * | 1998-09-30 | 2000-04-17 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Soybean glutathione-s-transferase enzymes |
| WO2000018937A1 (en) * | 1998-09-30 | 2000-04-06 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Maize glutathione-s-transferase enzymes |
| AU2924800A (en) * | 1999-03-03 | 2000-09-21 | Syngenta Limited | Use of glutathione-s-transferase to increase stress tolerance in plants |
| CN103194466B (zh) * | 2013-04-24 | 2014-05-07 | 昆明理工大学 | 一种岷江百合谷胱甘肽S-转移酶基因LrGSTU5及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MA20977A1 (fr) * | 1986-05-19 | 1987-12-31 | Ciba Geigy Ag | Plantes tolerant les herbicides contenant le gene de gluthathione S-Transferase |
| US5714365A (en) * | 1990-07-20 | 1998-02-03 | Roussel Uclaf | Sucrose phosphate synthetase isolated from maize |
| GB9114259D0 (en) * | 1991-07-02 | 1991-08-21 | Ici Plc | Plant derived enzyme and dna sequences |
-
1995
- 1995-01-23 DE DE19501840A patent/DE19501840A1/de not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-01-10 BR BR9606780A patent/BR9606780A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-01-10 RU RU97114451/13A patent/RU2169196C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-01-10 CA CA002210901A patent/CA2210901A1/en not_active Abandoned
- 1996-01-10 AU AU44849/96A patent/AU4484996A/en not_active Abandoned
- 1996-01-10 EP EP96900929A patent/EP0805865A1/de not_active Withdrawn
- 1996-01-10 WO PCT/EP1996/000068 patent/WO1996023072A1/de not_active Application Discontinuation
- 1996-01-10 CN CN96191572A patent/CN1169160A/zh active Pending
- 1996-01-10 US US08/875,034 patent/US5968796A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-10 JP JP8522574A patent/JPH10512451A/ja active Pending
- 1996-10-01 UA UA97084350A patent/UA51642C2/uk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0805865A1 (de) | 1997-11-12 |
| CN1169160A (zh) | 1997-12-31 |
| RU2169196C2 (ru) | 2001-06-20 |
| CA2210901A1 (en) | 1996-08-01 |
| US5968796A (en) | 1999-10-19 |
| JPH10512451A (ja) | 1998-12-02 |
| WO1996023072A1 (de) | 1996-08-01 |
| AU4484996A (en) | 1996-08-14 |
| DE19501840A1 (de) | 1996-07-25 |
| BR9606780A (pt) | 1997-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2256856T3 (es) | Proceso de seccion de celulas transgenicas. | |
| US9756871B2 (en) | TAL-mediated transfer DNA insertion | |
| ES2247590T3 (es) | Modificacion del contenido en almidon de plantas. | |
| US20140363561A1 (en) | Tal-mediated transfer dna insertion | |
| JPH03504798A (ja) | 植物類においてリジン過剰生産を誘導する方法 | |
| JP2004254705A (ja) | マンノースまたはキシロースに基づく陽性選択 | |
| EA002980B1 (ru) | Химерная конструкция, включающая, по крайней мере, два гена устойчивости растений к гербицидам, линия растительных клеток, содержащая указанную конструкцию, растение, устойчивое, по крайней мере, к двум гербицидам, и способ обработки растений гербицидами | |
| JPH1080289A (ja) | 植物において活性であるフォスフィノトリシン耐性遺伝子及びその使用 | |
| HU221515B (en) | Transgenic plants with improved biomass production | |
| UA51642C2 (uk) | Дезоксирибонуклеїнова кислота, яка кодує білок глутатіон-s-трансферазу, білок | |
| Qi et al. | Regeneration and transformation of Crambe abyssinica | |
| JP5164093B2 (ja) | イネの病原菌に対する抵抗性を高める方法及び病原菌耐性イネ形質転換体 | |
| WO2006095749A1 (ja) | 植物でのペプチドの発現・集積方法 | |
| JP2003511049A (ja) | プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ遺伝子を利用した作物の収量またはバイオマスの増大方法 | |
| JP3755876B2 (ja) | 選択マーカーを含まない組換え植物の作出方法、ならびに該方法により作出される組換え植物 | |
| KR100775037B1 (ko) | 복합스트레스 내성 식물체 제조용 재조합 발현벡터 및이를 이용한 복합스트레스 내성 식물체의 제조방법 | |
| KR100974302B1 (ko) | 페투인이 발현된 감자 식물체 | |
| JP4823919B2 (ja) | 除草剤耐性遺伝子及びその利用 | |
| US9796981B2 (en) | Methods for transforming tarwi and for producing molecular farming products in transgenic tarwi seed | |
| KR100480479B1 (ko) | 프로토포르피리노겐 옥시다아제의 엽록체 및 미토콘드리아동시발현을 이용한 작물의 제초제 저항성 증대 방법 및 이유전자를 제초제 저항성 선발 마커로 사용하는 형질전환세포주 선발 방법 | |
| US20110016579A1 (en) | Gene of transporter selective to mugineic acid-iron complex | |
| JP3954149B2 (ja) | カタラーゼ遺伝子を導入した耐冷性イネ及びこの耐冷性イネに由来するカタラーゼの製造方法 | |
| LaManna | Plastid Transformation Biotechnology: Increasing Efficiency and Expanding Application | |
| WO2024015781A2 (en) | Compositions and methods for soybean plant transformation | |
| CN1753989A (zh) | Tps植物基因构建体和转化体 |