UA121866C2 - АНТИТІЛО ДО Ig<font face="Symbol">b </font>ЛЮДИНИ - Google Patents
АНТИТІЛО ДО Ig<font face="Symbol">b </font>ЛЮДИНИ Download PDFInfo
- Publication number
- UA121866C2 UA121866C2 UAA201702067A UAA201702067A UA121866C2 UA 121866 C2 UA121866 C2 UA 121866C2 UA A201702067 A UAA201702067 A UA A201702067A UA A201702067 A UAA201702067 A UA A201702067A UA 121866 C2 UA121866 C2 UA 121866C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- amino acid
- human
- antibody
- heavy chain
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 336
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 141
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 136
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 136
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 136
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 35
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 27
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 26
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 22
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 21
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 21
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 21
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims description 20
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 19
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 18
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 claims description 18
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 18
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 16
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 16
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 10
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 claims description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 3
- 230000036252 glycation Effects 0.000 claims description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- NPWMTBZSRRLQNJ-VKHMYHEASA-N (3s)-3-aminopiperidine-2,6-dione Chemical compound N[C@H]1CCC(=O)NC1=O NPWMTBZSRRLQNJ-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 claims 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 5
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 abstract 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 84
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 34
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 25
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 25
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 7
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 7
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 101100508103 Homo sapiens IDE gene Proteins 0.000 description 3
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 3
- 102100021496 Insulin-degrading enzyme Human genes 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000033699 familial Guillain-Barre syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 235000019988 mead Nutrition 0.000 description 2
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 2
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- ZUYKJZQOPXDNOK-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)-2-thiophen-2-ylcyclohexan-1-one;hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CSC=1C1(NCC)CCCCC1=O ZUYKJZQOPXDNOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJERAXSSDSHLGE-UHFFFAOYSA-N 4-(2-fluorophenyl)-1,3,8-trimethyl-6h-pyrazolo[3,4-e][1,4]diazepin-7-one;hydrochloride Chemical compound Cl.N=1CC(=O)N(C)C(N(N=C2C)C)=C2C=1C1=CC=CC=C1F NJERAXSSDSHLGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000723298 Dicentrarchus labrax Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101100377706 Escherichia phage T5 A2.2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000852815 Homo sapiens Insulin receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000628693 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 25 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 101150104906 Idh2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020482 Maltose-Binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101100436483 Mus musculus Atp7a gene Proteins 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026737 Serine/threonine-protein kinase 25 Human genes 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150046722 idh1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 229960001594 tiletamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/02—Preparation of hybrid cells by fusion of two or more cells, e.g. protoplast fusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Винахід стосується антитіла до Іgβ людини. Також винахід стосується полінуклеотиду, експресуючого вектора, клітини-хазяїна, способу одержання антитіла до Іgβ людини, фармацевтичної композиції, що містить антитіло до Іgβ людини, та способу для профілактики або лікування аутоімунного захворювання.
Description
Галузь техніки 0001) Наданий винахід належить до нового антитіла проти Ід8 людини, яке є придатним як активний інгредієнт фармацевтичної композиції.
Попередній рівень техніки 00021 В-клітинний рецептор (ВСК) складається з молекул мембранного імуноглобуліну (тід), зібраних з гетеродимерами Ідса (СО79А) і ДВ (СО79В). Антиген зв'язується з тід і забезпечує агрегацію рецепторів і субодиниці Іда/Лор передає сигнал всередину В-клітини (Мої.
Іттипої., Мої. 41, р. 599-613, 2004). 0003) Стосовно сімейства білків рецептора Есу (Есук), який являє собою Ес-рецептор до антитіла ідо, були описані ЕсукКІа (СОб64А), ЕсукКПа (СО32А) і ЕсукКШа (СО16А), які володіють імуноактивними функціями, і ЕсукІїБ (СО0328) який володіє імуносупресивними функціями.
Опубліковано, що, коли ВСЕ і ЕсукІІЬ у В-клітинах є зшитими через імунний комплекс дос, активність В-клітин пригнічується, і, таким чином, проліферація В-клітин і утворення антитіл пригнічуються (Маї. Нем. Іттипої., Мої. 10, р. 328-343, 2010; Маї. Неум. Іттипо)., Мої. 8, р. 34-47, 2008; Маї. Нем. Іттипої., Мої. 2, р. 580-592, 2002). (0004) Опубліковано, що регуляція активності В-клітин за допомогою такого ЕсукІІЬ у значній мірі бере участь у патології аутоїмунних захворювань, таких як ревматоїдний артрит і системний червоний вовчак. 0005) Відносно ревматоїдного артриту опубліковано, що у мишей з нокаутом Есук гуморальний імунітет не регулюється відповідним чином (Маїиге, Мої. 379, р. 346-349, 1996; ..
Ітітипої., Мої. 163, р. 618-622, 1999), і підвищується схильність до індукованого колагеном артриту (У. Ехр. Мей., Мої. 189, р. 187-194, 1999). Крім того, підтверджували, що експресія
ЕсуКІІЬ у В-клітини пам'яті у пацієнтів з ревматоїдним артритом знижується (9. Іттипої., Мої. 190, р. 6015-6022, 2013).
І0006| Відносно системного червоним вовчака опубліковано, що початок захворювання системного червоного вовчака значно пригнічується у трансгенної миші, у якої експресія ЕсуКкІІЬ є підвищеною конкретно у В-клітинах (9. Ехр. Мед., Мої. 205, р. 883-895, 2008). Підтверджували, що відносно миші з нокаутом ЕсСукКіІІр з'являються самореактивні В-клітини або плазматичні клітини, і спонтанно розвивається стан захворювання системного червоного вовчака (Іттипкйу,
Ко) Мої. 13, р. 277-285, 2000; 9). Ехр. Меад., Мої. 207, р. 2767-2778, 2010). Крім того, опубліковано збільшення експресії ЕсукІІЬ у В-клітинах пам'яті у пацієнтів з системним червоним вовчаком (.).
Ехр. Меад., Мої. 203, р. 2157-2164, 2006; 9. Іттипої., Мої. 178, р. 3272-3280, 2007) і взаємозв'язок між генетичним поліморфізмом у трансмембранній ділянці ЕсСукІІр клітини і частотою початку системного червоного вовчака (Агійгіїй5 Кпеит., Мої. 46, р. 1242-1254, 2002).
І0007| Крім того, пригнічення утворення антитіл за допомогою регуляції активності В-клітин через ЕСуКІІЬ є ефективним для лікування аутоїмунного захворювання, при якому аутоантитіло пов'язане з патологічним станом. 0008) Ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура являє собою аутоїмунне захворювання, при якому аутоантитіло проти тромбоцитів пацієнта призводить до руйнування тромбоцитів (Ашоіттип. Вем., Мої. 13, р. 577-583, 2014). Опубліковано, що у тварини, якій вводять антитіло проти тромбоцитів, індукується тромбоцитопенія (Вг. у). Наетагйоі., Мої. 167, р. 110-120, 2014), а збільшення аутоантитіла є ефективним для лікування ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури (Тег. Арнег. Оіаї. Мої. 16, р. 311-320, 2012; І ирив, Мої. 22, р. 664-674, 2013).
І0009| Таким чином, у випадку, якщо можна розробити моноклональне антитіло, яке зшиває
ВСЕ ї ЕсукІІБ ї підвищує імуносупресивну функцію ЕсукіІЬ, очікують, що таке моноклональне антитіло є придатним для профілактики або лікування аутоїмунних захворювань, таких як ревматоїдний артрит, системний червоний вовчак і ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура.
І0010) Відносно антитіла, яке зшиває ВСК і ЕсукКІІр, опубліковано САКТ, яке являє собою біспецифічне антитіло проти Ід8 ії ЕсукІЬ (патентний документ 1 і непатентний документ 1), |і антитіло проти СО19 5267Е/І 328Е, яке містить варіабельну ділянку, що зв'язується з СО19, який є частиною комплексу ВСК, і Ес-ділянку, афінність якої до ЕсукіІІр, є підвищеною (патентний документ 2 і непатентний документи 2 і 3). Серед них, зокрема, розглядають антитіло проти СО19 5267Е/І 328Е і підтверджують його інгібуючу дію відносно активності В- клітин, у яких стимулюють ВСЕ, і його знижувальну дію на концентрацію титру антитіла людини в крові у миші, якій трансплантували мононуклеарні клітини периферичної крові (РВМС) людини (патентний документ 2 і непатентні документи 2 і 3).
Пов'язана галузь
Патентний документ
І0011) (Патентний документ 1) УМО 2012/018687 бо ІПатентний документ 2) МО 2008/150494
Непатентний документ 00121 |Непатентний документ 1) Агійгійі5 5 Кпешптаїієт (05) 2010; 62(7): 1933-1943
ІНепатентний документ 2) МоїІесшціаг Іттипоїоду (05) 2008; 45(15): 3926-3933
ІНепатентний документ 3) Те доигпаї ої Ітітипоїоду (05) 2011; 186(7): 4223-4233
Опис винаходу
Завдання, що підлягають розв'язанню за допомогою винаходу 0013) Метою наданого винаходу є надання антитіла проти 98 людини, яке зшиває ВСК і
ЕсуМІІЬ і володіє більшою імуносупресивною функцією, ніж імуносупресивна функція антитіла на відомому рівні техніки.
Засоби розв'язання завдань 0014) У результаті ретельного дослідження з одержання антитіла проти ІДД людини автори наданого винаходу одержували ряд антитіл проти 98 людини, що містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОК1, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 31 до 35 5ЕО ІЮ МО: 2, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 50 до 65 5ЕО ІЮ МО: 2, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності с номерами амінокислот від 98 до 108 5ЕО ІО МО: 2, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОКІ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 24 до 38 5ЕО ІЮ МО: 4, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 54 до 60 5ЕО ІЮ МО: 4, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 93 до 101 5ЕО ІО МО: 4, у яких константна ділянка важкого ланцюга антитіла являє собою константну ділянку ІДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328ММ (приклади 1-3), і було виявлено, що ці антитіла зв'язуються з В людини на В-клітинах людини (приклади 4 і 5) і інгібують активацію В-клітин людини, індуковану антитілом проти І9М (приклад 6). У результаті надають описане вище антитіло проти
ІОВ людини, таким чином, виконуючи наданий винахід. Крім того, виявлено, що антитіло пригнічує титр антитіла людини в плазмі на моделі переносу РВМС людини на мишах МОО (приклад 7) і пригнічує специфічне до антигену антитіло, без впливання на спільні титри антитіл у плазмі на моделі сенсибілізації антигеном ТТхХ на мавпах (приклад 8). 0015) Таким чином, наданий винахід належить до наступного нижче винаходу як речовина
Зо або спосіб, який знаходить застосування у медицині або промисловості. (1) Антитіло проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить
СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 31 до 35
ЗЕО І МО: 2, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 50 до 65 5ЕО ІЮ МО: 2, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 98 до 108 5ЕО ІЮО МО: 2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить
СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 24 до 38
ЗЕО І МО: 4, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 54 до 60 5ЕО ІЮ МО: 4, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 93 до 101 5ЕО ІЮ МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку Іду! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2б680 і І 328УУ. (2) Антитіло проти др людини за пунктом (1) вище, яке являє собою гуманізоване антитіло. (3) Антитіло проти ЗВ людини за пунктом (1) вище, вибране з групи, яка складається з наступних нижче 1)-4): 1) Антитіло проти В людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІО МО: 6, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 8, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
Гз28М; 2) Антитіло проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5БЕО ІЮО МО: 2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і
Гз28М; 3) Антитіло проти ДВ людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 1 до 119 5ЕО ІЮО МО: 10, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІО МО: 12, і константну ділянку важкого ланцюга, яка бо являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і
ІГ 328, і 4) Антитіло проти ЗВ людини, яке одержують у результаті посттрансляційної модифікації антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(3). (4) Антитіло проти ІВ людини за зазначеним вище пунктом (3), що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО: 6, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІО МО: 8, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку (ДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328УУ. (5) Антитіло проти ЗВ людини за зазначеним вище пунктом (3), що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО: 2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІО МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328УУ. (б) Антитіло проти ІВ людини за зазначеним вище пунктом (3), що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО: 10, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮО МО: 12, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку (Ду! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328УУ. (7) Антитіло проти 98 людини, яке одержують у результаті посттрансляційної модифікації антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (4)-(6). (8) Антитіло проти В людини за кожним з зазначених вище пункту (3) або (7), де посттрансляційна модифікація являє собою піроглутамілірування на М-кінці варіабельної ділянки важкого ланцюга і/або делецію лізину на С-кінці важкого ланцюга. (9) Антитіло проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(8), що містить константну ділянку легкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку Їдк людини. (10) Антитіло проти Ід8 людини за зазначеним вище пунктом (1), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 8. (11) Антитіло проти Ід8 людини за пунктом (1), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 4. (12) Антитіло проти І98 людини за зазначеним вище пунктом (1), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІО МО: 10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої БЕО ІЮО МО: 12. (13) Антитіло проти Ід8 людини, яке одержують у результаті посттрансляційної модифікації антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(12). (14) Антитіло проти (98 людини за зазначеним вище пунктом (13), де посттрансляційна модифікація являє собою піроглутамілірування на М-кінці варіабельної ділянки важкого ланцюга і/або делецію лізину на С-кінці важкого ланцюга. (15) Антитіло проти ЯВ людини за зазначеним вище пунктом (13), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448
ЗБЕО ІЮО МО: 6, у якій глутамін амінокислоти під номером 1 модифікований у піроглутамінову кислоту, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ
МО:8. (16) Антитіло проти В людини за зазначеним вище пунктом (13), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448
ЗЕО ІО МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої
ЗЕО І МО. (17) Антитіло проти ЯВ людини за зазначеним вище пунктом (13), що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448
ЗЕО ІЮО МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої
ЗЕО ІЮ МО:12. (18) Полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти І98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6). (19) Полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти І98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6). бо (20) Експресуючий вектор, що містить полінуклеотид за зазначеним вище пунктом (18) і/або
(21) Клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором за зазначеним вище пунктом (20), вибраному з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(а): (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ЗВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6), і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (Б) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(б), і експресуючий вектор, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ДВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6); і (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти 948 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6). (22) Клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором за зазначеним вище пунктом (20), вибраним з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(а): (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ЗВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13), і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (р) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ЗВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13), і експресуючий вектор, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ДВ людини за кожним з
Зо зазначених вище пунктів (10)-(13); і (4) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти 948 людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13). (23) Спосіб одержання антитіла проти (ЗВ людини, що включає культивування клітини(тин)- хазяїна(ів), вибраний з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(с), для експресії антитіла проти 98 людини: (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6), і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (р) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти В людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6), і експресуючий вектор, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; і (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ДВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(6), і клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла. (24) Спосіб одержання антитіла проти (ЗВ людини, що включає культивування клітини(тин)- хазяїна(ів), вибраних з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(с), для експресії антитіла проти 98 людини: (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13), і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (р) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13), і експресуючий вектор, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; і бо (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (10)-(13), і клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла. (25) Антитіло проти Ід38 людини, яке одержують способом за зазначеним вище пунктом (23). (26) Антитіло проти Ід38 людини, яке одержують способом за зазначеним вище пунктом (24). (27) Фармацевтична композиція, яка містить антитіло проти ЗВ людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(17), (25) і (26) і фармацевтично прийнятний ексципієнт. (28) Фармацевтична композиція, яка містить антитіло проти 98 людини за зазначеним вище пунктом (10), антитіло проти (ЗОВ людини за зазначеним вище пунктом (15) і фармацевтично прийнятний ексципієнт. (29) Фармацевтична композиція за будь-яким з зазначених вище пунктів (27) або (28), яка являє собою фармацевтичну композицію для профілактики або лікування аутоіїмунного захворювання. (30) Фармацевтична композиція за зазначеним вище пунктом (29), де аутоімунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру. (31) Спосіб для профілактики або лікування аутоїмунного захворювання, що включає введення терапевтично ефективної кількості антитіла проти І98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(17), (25) і (26). (32) Спосіб за зазначеними вище пунктами (1)-(17), (25) і (26), де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру. (33) Антитіло проти І98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(17), (25) і (26) для застосування для профілактики або лікування аутоімунного захворювання. (34) Антитіло проти ІВ людини за зазначеним вище пунктом (33), де аутоімунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру. (35) Використання антитіла проти 98 людини за кожним з зазначених вище пунктів (1)-(17), (25) і (26) для виробництва фармацевтичної композиції для профілактики або лікування
Зо аутоїмунного захворювання. (36) Використання за зазначеним вище пунктом (35), де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру.
Ефекти винаходу
ЇО01б6| Антитіло проти 9ДВ о людини за наданим винаходом володіє чудовою імуносупресивною дією за допомогою інгібування активації В-клітин, і його можна використовувати як засіб для профілактики або лікування аутоїмунних захворювань, таких як системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит і ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура.
Короткий опис креслень
І0017| На фіг. 1 продемонстрована інгібуюча дія гуманізованого антитіла проти ІВ на індуковану антитілом до ІДМ клітинну проліферацію у В-клітинах людини. По вертикальній осі зазначена швидкість проліферації В-клітин, і по горизонтальній осі зазначена концентрація антитіла (мкг/мл), що додається. 0018) На фіг. 2 продемонстрована інгібуюча дія гуманізованого антитіла проти ІВ на підвищення титрів антитіла (ЯМ людини в плазмі, індуковане переносом РВМС людини миші
МОЄ. По вертикальній осі зазначений титр антитіла (ЯМ людини в плазмі (мкг/мл), і по горизонтальній осі зазначений час (доба) після переносу РВМС людини миші МО.
І0019| На фіг. 3 продемонстрована інгібуюча дія гуманізованого антитіла проти ІдЮВ на підвищення титрів антитіла ІДЕ людини в плазмі, індуковане переносом РВМС людини миші
МОСС. По вертикальній осі зазначений титр антитіла ІДЕ людини в плазмі (нг/мл), і по горизонтальній осі зазначений час (доба) після переносу РВМС людини миші МО.
І0020| На фіг. 4 продемонстрована інгібуюча дія гуманізованого антитіла проти ІВ на підвищення антитіла проти адсорбованого правцевого токсину в плазмі, що викликається імунізацією адсорбованим правцевим токсином мавпи. По вертикальній осі зазначений титр антитіла проти адсорбованого правцевого токсину в плазмі (Ед/мл), і по горизонтальній осі зазначений час (доба) після імунізації адсорбованим правцевим токсином мавпи.
І0021| На фіг. 5 продемонстрована дія гуманізованого антитіла проти Ідр8 спільного титру антитіла ІДМ у плазмі мавпи, імунізованої адсорбованим правцевим токсином. По вертикальній осі зазначений спільний титр антитіла ІДМ у плазмі (Ед/мл), і по горизонтальній осі зазначений бо час (доба) після імунізації адсорбованим правцевим токсином мавпи.
00221 На фіг. 6 представлена дія гуманізованого антитіла проти ДВ проти спільного титру антитіла ІдА у плазмі мавпи, імунізованої адсорбованим правцевим токсином. По вертикальній осі зазначена спільний титр антитіла ІдДА у плазмі (Ед/мл), і по горизонтальній осі зазначений час (доба) після імунізації адсорбованим правцевим токсином мавпи.
І0023| На фіг. 7 представлена дія гуманізованого антитіла проти Ід8 проти спільного титру антитіла до у плазмі мавпи, імунізованої адсорбованим правцевим токсином. По вертикальній осі зазначений спільний титр антитіла дос у плазмі (Ед/мл), і по горизонтальній осі зазначений час (доба) після імунізації адсорбованим правцевим токсином мавпи.
Варіанти здійснення винаходу 0024) Далі у наданому описі більш докладно описаний наданий винахід.
І0025) Існує п'ять класів антитіла дс, І9М, ІдА, їд4О і (ЗЕ. Основна структура молекули антитіл сформована важкими ланцюгами з молекулярною масою від 50000 до 70000 і легкими ланцюгами з молекулярною масою від 20000 до 30000 у кожному з класів у сукупності. Важкий ланцюг, як правило, складається з поліпептидного ланцюга, що містить приблизно 440 амінокислот, має відмінну структуру для кожного з класів, і його позначають як Іду, Іди, да, до і
Ідє, що відповідає дос, ІМ, ІдА, дО і Ід4Е, відповідно. Крім того, для дО існує чотири підкласи
ІЧО1, Ід2, ІдОЗ і Ідс4, і важкі ланцюги, що відповідно відповідають їм, позначають як Ідх1, Ідх2,
ІЧУЗ ї Іду4. Легкий ланцюг, як правило, складається з поліпептидного ланцюга, що містить 220 амінокислот, два типи з яких тип І. і тип К є відомими, і їх позначають як ІдА і Ідк. У конфігурації пептиду основної структури молекул антитіл два гомологічні важкі ланцюги і два гомологічні легені ланцюги зв'язані дисульфідними зв'язками (зв'язок 5-5) і нековалентними зв'язками, і їх молекулярна маса становить 150000 до 190000. Два види легких ланцюгів можуть бути спареними з будь-яким важким ланцюгом. Відповідні молекули антитіл, як правило, складаються з двох ідентичних легких ланцюгів і двох ідентичні важких ланцюгів.
І0026| Що стосується внутрішньоланцюгових зв'язків 5-5, чотири зв'язки 5-5 містяться у важкому ланцюгу (п'ять у р- і є-ланцюгах), і два з них містяться у легкому ланцюгу; на 100-110 амінокислотних залишків формується одна петля, і така стерична структура є схожою серед петель, і її позначають як структурну одиницю або домен. Домен, що розташовується на боці аміно-кінця (бік М-кінця) у важкому ланцюгу і легкому ланцюгу, амінокислотна послідовність яких
Зо не є сталою навіть у випадку зразка з того самого класу (підкласу) того ж виду тварини, позначають як варіабельну ділянку, і відповідні домени позначають як варіабельну ділянку важкого ланцюга і варіабельну ділянку легкого ланцюга. Амінокислотна послідовність боку карбокси-кінця (бік С-кінця) з варіабельної ділянки є практично сталою у кожному класі або підкласі, і її позначають як константну ділянку.
І0027| Антигенна ділянка зв'язування антитіла складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга і варіабельної ділянки легкого ланцюга, і специфічність зв'язування залежить від амінокислотної послідовності цієї ділянки. З іншого боку, види біологічної активності, такі як зв'язування з комплементами і різними клітинами, відображає відмінності у структурах константної ділянки у кожному класі Ід. Слід розуміти, що варіабельність варіабельних ділянок легких ланцюгів і важких ланцюгів в основному обмежена трьома невеликими гіперваріабельними ділянками, які присутні в обох ланцюгах, і ці ділянки позначають як визначальні комплементарність ділянки (СОК: СОМКІ, СОК2 і СОКЗ з боку М-кінця). Частину варіабельної ділянки, що залишилася, позначають як каркасну ділянку (ЕК), і вона є відносно сталою. (0028) Антитіло проти 938 людини за наданим винаходу
Антитіло проти ІВ людини за наданим винаходу належить до антитіла проти 98 людини, що володіє наступними нижче характеристиками.
Антитіло проти (98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить
СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 31 до 35
ЗЕО І МО: 2, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 50 до 65 5ЕО ІЮ МО: 2, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 98 до 108 5ЕО ІЮО МО: 2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить
СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 24 до 38
ЗЕО І МО: 4, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 54 до 60 5ЕО ІЮ МО: 4, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 93 до 101 5ЕО ІЮ МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку Іду! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і І 328УУ. 0029) В одному з варіантів здійснення антитіло проти (98 людини за наданим винаходу являє собою гуманізоване антитіло. "Гуманізоване антитіло" у наданому описі означає антитіло бо у формі, що містить СОК, що одержують з антитіла миші та інших ділянок антитіла, які одержують з антитіла людини. Спосіб одержання гуманізованого антитіла відомий у даній галузі, і його можна одержувати з посиланням на ОБР Мо. 5225539, 6180370 і т.п. 0030) В одному з варіантів здійснення антитіло проти 9В людини за наданим винаходу являє собою антитіло проти І98 людини, описане у кожному з наступних нижче пунктів 1)-3): 1) антитіло проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІО МО: 2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
Гз28М; 2) антитіло проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІО МО: 6, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 8, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і
І 328УМ, і 3) антитіло проти І9В людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5БЕО ІЮ МО: 10, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІО МО: 12, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
Гз28М.
ІЇ0031| Номер залишку відносно до введення мутацій амінокислот у константній ділянці антитіла, що використовується у наданому описі, відповідає індексу ЄЮ (Кабаї еї аї., 1991,
Зедицепсев5 ої Ргоїєїп5 ої Іттипоіодіса! Іпієгеві, Бій Ед., Опйей 5іаїез Рибріїс Неайй з5егмісе,
Маїіопа! Іпоійше ої Неайп, ВеїШезаа). 52390 являє собою заміну серину в положенні 239 амінокислоти відповідно до індексу ЕЮ за Кабаї еї аїЇ. у константній ділянці Ду! людини аспарагіновою кислотою. Н2б680 являє собою заміну гістидину в положенні 268 амінокислоти відповідно до індексу ЄЮ за Кабаї еї аіІ. у константній ділянці (ДУ! людини аспарагіновою кислотою. І 328УМ являє собою заміну лейцину в положенні 328 амінокислоти відповідно до індексу ЄЮ за Кабаї еї аї. у константній ділянці Іду! людини триптофаном. Приклади константної ділянки Іду! людини, що несуть мутації амінокислот 52390, Н2680 і І328УУ, включають константну ділянку ЇДУїЇ людини, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 120 до 449 5ЕО ІЮО МО: 2.
І0032| Що стосується константної ділянки легкого ланцюга антитіла проти 948 людини за наданим винаходом, можна вибирати будь-яку з константної ділянки Ідл і Їдк, але переважно є константна ділянка дк людини. Приклади константної ділянки дк людини включають константну ділянку ЇдДкК людини, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 113 до 218 5ЕО ІЮО МО: 4. 0033) В одному з варіантів здійснення антитіло проти (98 людини за наданим винаходом являє собою антитіло проти І98 людини, вибране з будь-якого з наступних пунктів і1)-іїї): ї) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 4; і) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІО МО: 6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 8; і ії) антитіла проти ДВ людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІО МО: 10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної
БО послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12. (0034) Відомо, що коли антитіло експресується у клітинах, антитіло зазнає модифікації після трансляції. Приклади посттрансляційної модифікації включають відщеплення лізину на С-кінці важкого ланцюга карбоксипептидазою; модифікацію глутаміну або глутамінової кислоти на М- кінці важкого ланцюга та легкого ланцюга до піроглутамінової кислоти піроглутаміліруванням; глікозилірування; окиснення; деамідирування та глікірування, і відомо, що такі посттрансляційні модифікації виникають у різних антитілах (дошигпаї! ої Рпагтасешііса! Зсіепсев5, Мої. 97, р. 2426- 2447, 2008). (0035) Антитіло проти ЗВ людини за наданим винаходом належить до антитіла проти дв людини, яке зазнає посттрансляційної модифікації. Приклади антитіла проти 98 людини за бо наданим винаходом, яке зазнає посттрансляційної модифікації, включають антитіла проти дв людини, які зазнають піроглутамілірування на М-кінці варіабельної ділянки важкого ланцюга і/або делеції лізину на С-кінці важкого ланцюга. У даній галузі відомо, що така посттрансляційна модифікація внаслідок піроглутамілірування на М-кінці і делеції лізину на С-кінці не виявляє якого-небудь впливу на активність антитіла (Апаїуїіса! Віоспетівігу, Мої. 348, р. 24-39, 2006).
І0036| Наприклад, антитіла проти І9ВД людини за наданим винаходом включають антитіло проти І9В людини, описане у будь-якому з наступних нижче пунктів 1)-3): 1) антитіло проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності 5БЕО ОО МО: 2, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти і/або лізин під номером амінокислоти 449 видаляють, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 4; 2) антитіло проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності 5ЕСО ОО МО: 6, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти і/або лізин під номером амінокислоти 449 видаляють, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІО МО: 8; і 3) антитіло проти 948 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 10, у якій глутамінову кислоту під номером амінокислоти 1 модифікують до піроглутамінової кислоти і/або лізин під номером амінокислоти 449 видаляють, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12.
І0037| В одному з варіантів здійснення антитіло проти (98 людини за наданим винаходом являє собою антитіло проти І98 людини, вибране з будь-якого з наступних нижче пунктів 1)-іїї): ї) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІО МО: 2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 4; і) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО: 6, у якій глутамін під номером амінокислоти 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 8; і ії) антитіла проти ДВ людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від Її до 448 ЗЕО ІЮО МО: 10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12. 0038) Будь-який фахівець у даній галузі може одержувати злиту форму антитіла та інший пептид або білок, а також може одержувати модифіковану форму, з якою зв'язується модифікуючий засіб на підставі наданого винаходу, і антитіло за наданим винаходом належить до антитіла у цих формах. Інші пептиди або білки, що використовуються для злиття, не є конкретно обмеженими за умови, що активність зв'язування антитіла не знижується, і їхні приклади включають сироватковий альбумін людини, різні пептиди-мітки, штучний спіральний пептид-мотив, мальтоза-зв'язувальні білки, глутатіон-5-трансферазу, різні токсини, інші пептиди або білки, здатні підтримувати мультимеризацію і т.п. Модифікуючий засіб, що використовується для модифікації конкретно не обмежений за умови, що активність зв'язування антитіла не знижується, і їхні приклади включають поліетиленгліколь, цукрові ланцюги, фосфоліпіди, ліпосоми, низькомолекулярні сполуки і т.п. (0039) "Антитіло проти Іф людини" у наданому описі означає антитіло, що зв'язується з др людини. Чи зв'язується "антитіло проти 98 людини" з (48 людини підтверджують відомими способами вимірювання активності зв'язування. Приклади способу вимірювання активності зв'язування включають спосіб твердофазного імуноферментного аналізу (ЕГ ІЗА) і т.п. У випадку використання ЕГІ5ЗА, наприклад, 948 людини! білок Ріад (наприклад, який кодується основною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 13) піддають твердненню на планшеті ЕГІЗА і додають до нього тестоване антитіло, яке повинно реагувати. Після взаємодії вторинне антитіло, таке як антитіло проти ІдС, мічене ферментом, таким як пероксидаза хріну (НЕР) або т.п., взаємодіє, і його відмивають, а потім можливо підтверджувати, чи зв'язується тестоване антитіло з 98 людини шляхом ідентифікації зв'язування вторинного антитіла за допомогою вимірювання активності з використанням реагенту, що детектує активність (наприклад, у випадку мічення НЕР, Вт- спетіїштіпезсепсе ЕГІЗА БЗибрзігає (РОБ) (Коспе Оіадповіїс5 Іпс.)). Як конкретний спосіб вимірювання можна використовувати спосіб, описаний у прикладі 4 нижче. (0040) Антитіло проти Ідд8 людини за наданим винаходом включає на додаток до зв'язування з 98 людини антитіло, що зв'язується з 98, що одержується від інших тварин (наприклад, др мавпи), за умови, що антитіло зв'язується з 948 людини. 0041) Як спосіб оцінювання активності антитіла проти (98 людини за наданим винаходом можна оцінювати активність зв'язування на В-клітинах людини або активність інгібування бо активації В-клітин людини, що індукується стимуляцією ВСК. Як способи оцінювання такої активності можна використовувати способи, описані у прикладах 5 і б нижче. Переважно антитіло проти Ід98 людини за наданим винаходом володіє активністю зв'язування з Ідф8 людини і інгібування активації В-клітин людини, активованої стимуляцією ВСЕ. (0042) Фахівець у даній галузі може легко одержувати антитіло проти І938 людини за наданим винаходом відомим у даній галузі способом на підставі інформації послідовності важкого ланцюга і легкому ланцюга антитіла за наданим винаходом, яке описано у наданому описі.
Антитіло проти (98 людини за наданим винаходом не є конкретно обмеженим, і його можна одержувати способом, описаним у розділі "Спосіб одержання антитіла проти 98 людини за наданим винаходом і антитіла проти 98 людини, що одержуються способом", описаним нижче.
І0043| Антитіло проти (98 людини за наданим винаходом додатково очищають за мірою необхідності, формулюють загальноприйнятим способом, його і можна використовувати для профілактики або лікування аутоїмунних захворювань, таких як системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит, ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура, важка міастенія, хвороба Грейва, оптичний нейромієліт, аутоїмунна гемолітична анемія, звичайна пухирчатка, синдром антифосфоліпідних антитіл, асоційований з АМСА васкуліт, синдром Шегрена, тиреоїдит
Хашимото, хронічна запальна демієлінізувальна нейропатія або синдром хронічної втоми. (0044) Полінуклеотид за наданим винаходом
Полінуклеотид за наданим винаходом належить до полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти др людини за наданим винаходом. 0045) В одному з варіантів здійснення полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ЗВ людини за наданим винаходом, являє собою полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 2, полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 6, або полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої БЕО ІЮ МО: 10.
І0046| Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕБЕО ІЮ МО: 2, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 1 або 15. Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕБЕО ІЮО МО: 6, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену 5ЕО ІЮ МО: 5. Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 10, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену 5ЕО ІЮО МО: 9.
І0047| В одному з варіантів здійснення полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти ІВ людини за наданим винаходом, являє собою полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 4, полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 8, або полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 12. (0048) Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 4, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену ЗЕО ІО МО: 3. Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 8, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену 5ЕО І МО: 7. Приклади полінуклеотиду, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої БЕО ІЮО МО: 12, включають полінуклеотид, що містить основну послідовність, представлену ЗЕО ІЮО МО: 11. 0049) Фахівець у даній галузі може легко одержувати полінуклеотид за наданим винаходом відомим у даній галузі способом на основі основної послідовності. Наприклад, полінуклеотид за наданим винаходом можна синтезувати відомим у даній галузі способом синтезу генів. Як спосіб синтезу генів можна використовувати різні способи, такі як спосіб синтезу генів антитіла, описаний в М/О90/07861, відомий фахівцеві у даній галузі. 0050) Експресуючий вектор за наданим винаходом. бо Експресуючий вектор за наданим винаходом належить до експресуючого вектору, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти І98 людини за наданим винаходом, експресуючого вектору, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і експресуючого вектора, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла. 0051) Експресуючий вектор, що використовується для експресії полінуклеотиду за наданим винаходом, не є конкретно обмеженим за умови, що полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і/або полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти дв людини за наданим винаходом, можна експресувати у різних клітинах-хазяїнах еукаріотичних клітин (наприклад, клітинах тварин, клітинах комах, рослинних клітинах і дріжджах) і/або прокаріотичних клітинах (наприклад, Ев5сПпегіспіа сої) і можна одержувати поліпептиди, що кодуються ними. Приклади експресуючого вектору включають плазмідні вектори, вірусні вектори (наприклад, аденовірус або ретровірус) і т.п. Переважно можна використовувати рЕЕб.4 або рЕЕ12.4 (І опа ВіоіІодісв, Іпос.).
І0052| Експресуючий вектор за наданим винаходом може містити промотор, який є функціонально зв'язаним з полінуклеотидом за наданим винаходом. Приклади промотору для експресії полінуклеотиду за винаходом клітинами тварин включають одержуваний з вірусу промотор, такий як СММ, К5М або 5МУ40, промотор актину, промотор Та ЕЕ (фактору елонгації) і промотор теплового шоку. Приклади промоторів для експресії полінуклеотиду за винаходом бактеріями (наприклад, Е5сПпегіспіа) включають промотор ігр, промотор Іас, промотор /РІ і промотор їас. Крім того, приклади промоторів для експресії полінуклеотиду за винаходом дріжджами включають промотор САЇГ1, промотор САЇ 10, промотор РНО5, промотор РОК, промотор САР і промотор АН. 0053) У випадку використання клітини тварини, клітини комахи або дріжджів як клітини- хазяїна експресуючий вектор за наданим винаходом може містити ініціюючий кодон і термінуючий кодон. У цьому випадку експресуючий вектор за наданим винаходом може містити енхансерну послідовність, нетрансльовану ділянку на 5'-кінці та 3'-кінці генів, що кодують антитіло за наданим винаходом або важкий ланцюг або легкий ланцюг, послідовність сигналу секреції, ділянку сплайсингу, ділянку поліаденілірування або одиницю реплікації. Коли як клітини-хазяїна використовують Езспегіспіа соїї, експресуючий вектор за наданим винаходом може містити ініціюючий кодон, термінуючий кодон, ділянку термінатора і одиницю реплікації. У цьому випадку експресуючий вектор за наданим винаходом може містити селективний маркер (наприклад, гени стійкості до тетрацикліну, гени стійкості до ампіциліну, гени стійкості до канаміцину, гени стійкості до неоміцину або гени дигідрофолатредуктази), які, як правило, використовують за мірою необхідності. (0054) Трансформована клітина-хазяїн за наданим винаходом
Трансформована клітина-хазяїн за наданим винаходом належить до клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором за наданим винаходом, який вибраний з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(а): (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (р) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти ДВ людини за наданим винаходом, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти Іф людини за наданим винаходом, і (4) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла проти ДВ людини за наданим винаходом.
І0055| Приклади переважної трансформованої клітини-хазяїна за наданим винаходом включають клітину-хазяїна трансформовану експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти др людини за наданим винаходом, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує бо легкий ланцюг антитіла, і клітину-хазяїна, трансформовану експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти др людини за наданим винаходом, і експресуючий вектор, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла.
І0056| Трансформована клітина-хазяїн конкретно не є обмеженою за умови, що клітина-
Б хазяїн є придатною для використовуваного експресуючого вектору, трансформована експресуючим вектором і може експресувати антитіло. Приклади трансформованої клітини- хазяїна включають різні клітини, такі як природні клітини або штучно створені клітини, які, як правило, використовують у галузі, до якої належить наданий винахід, (наприклад, клітини тварин (наприклад, клітини СНО-КІ15М), клітини комах (наприклад, 59), бактерії (наприклад,
Ебспегіспіа), дріжджі (наприклад, Засспаготусе5 або Ріспіа) або т.п... Переважно можна використовувати культивовані клітини, такі як клітини СНО-КІЗМ, клітини СНО-ОС 44, клітини293 або клітини М50.
І0О57| Спосіб трансформації клітини-хазяїна не є конкретно обмеженим, і, наприклад, можна використовувати спосіб з використання фосфату кальцію або спосіб електропорації. 0058) Спосіб одержання антитіла проти Ід98 людини за наданим винаходом і антитіло проти
І9В людини, що одержують способом
Спосіб одержання антитіла проти (98 людини за наданим винаходом включає спосіб одержання антитіла проти 98 людини за допомогою культивування клітини(тин)-хазяїна(їів), вибраної з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (а)-(с), для експресії антитіла проти
ІВ людини: (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; (Б) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла, і (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що
Зо містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, і клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла. 0059) Спосіб одержання антитіла проти 98 людини за наданим винаходом не є конкретно обмеженим за умови, що він включає етап культивування трансформованих клітин-хазяїв за наданим винаходом для експресії антитіла проти 948 людини. Приклади переважних клітин- хазяїв, що використовуються у способі, включають переважні трансформовані клітини-хазяїв за наданим винаходом, як описано вище.
І0060| Трансформовану клітину-хазяїна можна культивувати відомими способами. Умови культивування, наприклад, температура, рп середовища для культивування і час культивування вибирають відповідним чином. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою клітину тварини, приклади середовища для культивування включають середовище для культивування МЕМ, доповнене приблизно від 5 95 до 20 95 ембріональною телячою сироваткою (5сіепсе, Мої. 130, р. 432-437, 1959), середовище для культивування ОМЕМ (Мігоіоду, Мої. 8, р. 396, 1959), середовище для культивування КРМІ1640 (9). Ат. Мей. Ав55обс., МОЇ. 199, р. 519, 1967) і середовище для культивування 199 (Ехр. ВіоїЇ. Мед., Мої. 73, р. 1-8, 1950). ри середовища для культивування переважно становить приблизно від б до 8, і культивування, як правило, проводять при приблизно від 302 до 402 приблизно протягом від 15 годин до 72 годин при вентиляції повітря і перемішуванні за необхідністю. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою клітину комахи, як середовище для культивування можна використовувати, наприклад, середовище Грейса для культивування (Ргос. МаїЇ. Асай. Зсі. ОБА, Мої. 82, р. 8404, 1985), доповнене ембріональною телячою сироваткою. ри середовища для культивування переважно становить приблизно від 5 до 8, і культивування, як правило, проводять при приблизно від 2020 до 402С протягом приблизно від 15 годин до 100 годин при вентиляції повітря і перемішуванні за необхідністю. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою ЕзспПегіспіа соїї або дріжджі, як середовище для культивування придатним є, наприклад, рідке середовище для культивування, доповнене джерелами живильних речовин. Переважно, щоб живильне середовище для культивування включала джерело вуглецю, неорганічне джерело азоту або органічно джерело азоту, необхідний для росту трансформованої клітини-хазяїна. Приклади джерела вуглецю включають глюкозу, декстран, розчинний крохмаль і сахарозу, і приклади неорганічного бо джерела азоту або органічного джерела азоту включають амонійні солі, нітратні солі,
амінокислоти, рідкий кукурудзяний екстракт, пептон, казеїн, м'ясний екстракт, макуха соєвих бобів і екстракт картоплі. За бажанням можна вводити інші живильні речовини (наприклад, неорганічні солі (наприклад, хлорид кальцію, дигідрофосфат натрію і хлорид магнію), вітаміни) і антибіотики (наприклад, тетрациклін, неоміцин, ампіцилін і канаміцин). ри середовища для культивування переважно становить приблизно від 5 до 8. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою ЕбсПегіспіа соїї, переважні приклади середовища для культивування включають середовище для культивування І В і середовище для культивування МОУ (Мої. Сіо., Соїа 5ргіпд
Нагбог І абогагогу, Мої. 3, А2.2). Культивування, як правило, проводять при приблизно від 1420 до 432С протягом приблизно від З годин до 24 годин при вентиляції повітря і перемішуванні за необхідністю. У випадку, коли клітина-хазяїн являє собою дріжджі, як середовище для культивування можна використовувати, наприклад, мінімальне середовище Беркхолдера (Ргос.
Майн. Асайд, зЗсі, ОБА, Мої. 77, р. 4505, 1980). Культивування, як правило, проводять при приблизно від 202 до 352 протягом приблизно від 14 годин до 144 годин при вентиляції повітря і перемішуванні за необхідністю. У результаті проведення культивування описаним вище чином можливо експресувати антитіло проти Ід8 людини за наданим винаходом. 0061) Спосіб одержання антитіла проти 98 людини за наданим винаходом може включати відновлення, переважно виділення або очищення антитіла проти 98 людини з трансформованої клітини-хазяїна на додаток до культивування трансформованої клітини- хазяїна за наданим винаходом для експресії антитіла проти (98 людини. Приклади способу виділення або очищення включають способи з використанням розчинності, такої як висалювання і спосіб осадження розчинником, способи з використанням різниці молекулярної маси, такі як діаліз, ультрафільтрація і гель-фільтрація, способи з використанням електричного заряду, такі як іонообмінна хроматографія і хроматографія на гідроксиапатиті, способи з використанням специфічної афінності, такі як афінна хроматографія, способи з використанням різниці у гідрофобності, такі як обернено-фазова високоефективна рідинна хроматографія, і способи з використанням різниці ізоелектричної точки, такі як ізоелектрофокусування з електрофорезом. Переважно антитіло, що накопичується у супернатанті культури, можна очищати різними хроматографічними способами, наприклад, колоночною хроматографією з використанням колонки з білком А або колонки з білком 0.
Зо І0062| Антитіло проти І98 людини за наданим винаходом також належить до антитіла проти
ІОВ людини, що одержується способом одержання антитіла проти В людини за наданим винаходом. (0063) Фармацевтична композиція за наданим винаходом
Фармацевтичні композиції за наданим винаходом включають фармацевтичну композицію, що містить антитіло проти ЗВ людини за наданим винаходом і фармацевтично прийнятні ексципієнти. Фармацевтичну композицію за наданим винаходом можна одержувати способом, як правило, що використовується з ексципієнтами, а саме, ексципієнтами для лікарського препарату або носіями для лікарського препарату, як правило, що використовуються у даній галузі. Приклади лікарських форм фармацевтичних композицій включають парентеральний лікарський засіб, такий як лікарський засіб, що ін'єктується, і лікарський засіб для краплинного введення, і їх можна вводити за допомогою внутрішньовенного введення, підшкірного введення або т.п. При одержанні лікарських засобів можна використовувати ексципієнти, носії і домішки відповідно до лікарських форм у фармацевтично прийнятному діапазоні.
І0064| Фармацевтичні композиції за наданим винаходом можуть містити багато видів антитіл проти ЗВ людини за наданим винаходом. Наприклад, наданий винахід належить до фармацевтичної композиції, що містить антитіло, яке не піддається посттрансляційній модифікації, і антитіло, яке одержується у результаті посттрансляційної модифікації антитіла.
І0065) В одному з варіантів здійснення фармацевтична композиція за наданим винаходом містить антитіло проти Ід98 людини, вибране з групи, яка складається з наступних нижче пунктів (1)-(3), і антитіла проти 98 людини, яке одержується у результаті посттрансляційної модифікації антитіла проти 98 людини: (1) антитіла проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО: 6, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 8, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
Гз28М; (2) антитіла проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5БЕО ІЮ МО: 2, бо варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
І 328МУ, і (3) антитіла проти 98 людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5БЕО ІЮ МО: 10, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІО МО: 12, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇДУ! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і
Гз28М.
І0066б| Фармацевтичні композиції за наданим винаходом включають фармацевтичну композицію, що містить антитіло, у якому лізин на С-кінці важкого ланцюга видаляють, антитіло, яке зазнало посттрансляційної модифікації на М-кінці, антитіло, у якому лізин на С-кінці важкого ланцюга видаляють, і яке піддавалось посттрансляційній модифікації на М-кінці, і/або антитіло, яке містить лізин на С-кінці важкого ланцюга і не піддавалось посттрансляційній модифікації на
МІ-кінці.
І0067| В одному з варіантів здійснення фармацевтична композиція за наданим винаходом, що містить антитіло проти 98 людини, містить фармацевтичну композицію, що містить два або більше антитіл проти 98 людини, вибраних з наступних нижче пунктів (1)-(4): (1) антитіла проти І9Д людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕБО ІЮО МО: 2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 4; (2) антитіла проти 93 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності ЗБЕО ОО МО: 2, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 4; (3) антитіла проти 93 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО: 2, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 4, і
Зо (4) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІО МО: 4.
І0068) В одному з варіантів здійснення фармацевтична композиція за наданим винаходом, що містить антитіло проти 98 людини, включає фармацевтичну композицію, що містить два або більше антитіл проти 98 людини, вибраних з наступних нижче пунктів (1)-(4): (1) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕБО ІЮ МО: 6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 8; (2) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності ЕС ІЮ МО: 6, у якій глутамін під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 8; (3) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІО МО: 6, у якій глутамін під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІО МО: 8, і (4) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 8. 0069) В одному з варіантів здійснення фармацевтична композиція за наданим винаходом, що містить антитіло проти 98 людини, містить фармацевтичну композицію, що містить два або більше антитіл проти 98 людини, вибраних з наступних нижче пунктів (1)-(4): (1) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від Її до 448 5ЕО ІЮО МО: 10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12; (2) антитіла проти 938 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності 5ЕО 10 МО: 10, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12; бо (3) антитіла проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІО МО: 10, у якій глутамінову кислоту під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО: 12, і (4) антитіла проти І9Д людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІО МО: 10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО: 12.
І0О70І Крім того, в одному з варіантів здійснення фармацевтична композиція за наданим винаходом являє собою фармацевтичну композицію, описану нижче: фармацевтичну композицію, що містить антитіло проти 98 людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІО МО: 6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮО МО: 8, антитіло проти ЗВ людини, що містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІО МО: 6, у якій глутамін під номером 1 амінокислоти модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО: 8, і фармацевтично прийнятний ексципієнт. 0071) Кількість антитіла проти 98 людини за наданим винаходом, що додають до складу, змінюється залежно від ступеня симптомів пацієнта, віку пацієнта, лікарської форми лікарського засобу, який слід використовувати, титру зв'язування антитіла або т.п., і, наприклад, можна використовувати кількість, що додається, приблизно від 0,001 мг/кг до 100 мг/кг.
І0072| Фармацевтичну композицію за наданим винаходом можна використовувати як засіб для лікування аутоїмунних захворювань, таких як системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит, ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура, важка міастенія, хвороба Грейва, оптичний нейромієліт, аутоїмунна гемолітична анемія, звичайна пухирчатка, синдром антифосфоліпідних антитіл, асоційований з АМСА васкуліт, синдром Шегрена, тиреоїдит Хашимото, хронічна запальна демієлінізувальна нейропатія, синдром хронічної втоми або т.п.
І0073| Наданий винахід належить до фармацевтичної композиції для профілактики або лікування системного червоного вовчака, ревматоїдного артриту або ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури, що містить антитіло проти (98 людини за наданим винаходом.
Крім того, наданий винахід належить до способу для профілактики або лікування системного
Зо червоного вовчака, ревматоїдного артриту або ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури, що включає введення терапевтично ефективної кількості антитіла проти В людини за наданим винаходом. Крім того, наданий винахід належить до антитіла проти 98 людини за наданим винаходом для застосування для профілактики або лікування системного червоного вовчака, ревматоїдного артриту або ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури. Крім того, наданий винахід належить до використання антитіла проти В людини за наданим винаходом для виробництва фармацевтичної композиції для профілактики або лікування системного червоного вовчака, ревматоїдного артриту або ідіопатичної тромбоцитопенічної пурпури.
І0074| Описаний наданий винахід і нижче надані конкретні приклади, що приводяться для кращого розуміння, але вони являють собою тільки приклади і наданий винахід не обмежений ними.
Приклади 0075) Що стосується деталей з використанням комерційно доступних наборів або реагентів, тестування проводять відповідно до прикладеного протоколу, якщо не зазначене інше. 0076) Приклад 1: одержання білків ІЧВ-Ріад людини і мавпи
Одержували Білок, у якому мітка Ріад зв'язується з 948 людини (білок (98 людини-Ріад) і білок, у якому мітка Ріад зв'язується з Ід9Д38 мавпи (білок І948-Ріад мавпи). Ген 98 людини-Ріаа (ЗЕО ІЮ МО: 13) вводили у вектор 5 рЕЕб.4 (І опла Віоіодісв5, Іпс.). Ген І9В мавпи-Ріая (5ЕО ІЮ
МО: 14) вводили в 55 вектор рЕЕб.4 (І опа Віоіодіс5, Іпс.). Відповідні одержувані вектори трансфікували з генами і клітині ЕгеесіуЇе 293 (І їе Тесппоїодіє5, Іпс.) з використанням реагенту
ЕгеебвІуїе МАХ (Ше Тесппоіодіє5з, Іпс.). Відповідні клітини культивували у суміші для культивування, що не вміщує сироватку, з використанням середовища Егеезіуе 293 Ехргезвіоп (Се Тесппоїодіе5, Іпс.) протягом 1 тижня і одержували супернатанти культур, що відповідно містять білок (ЗВ людини-Ріад і білок (98 мавпи-Ріад. Білки виділяли з використанням афінного гелю з антитілом проти Ріад М2 (ЗІСМА-АГОКІСН Согрогайноп) з одержуваних супернатантів культур, а потім використовували для наступного тестування.
І0077| Приклад 2: одержання антитіла проти 948 людини
Для одержання антитіла проти І98 людини білок 98 людини-Ріад і білок (98 мавпи-Ріад, що одержують у прикладі 1, ін'єктували миші СЗН/Недутв55іс-Ірг/рг (дарап 51 С, Іпс.) разом з ад'ювантом для викликання імунної відповіді для проведення імунізації. Мишу імунізували кілька бо разів і проводили кінцеву імунізацію. Відповідно до загальноприйнятого способу екстрагували селезінку і лімфовузол у імунізованої миші і збирали лімфоцити та зливали клітини з мієломними клітинами миші ЗР2/О (АТСС СТІ -1581), одержуючи, таким чином, гібридому.
Одержували зразок гібридоми з лімітувальним розведенням і моноклонували гібридому.
Відповідні клони розмножували та культивували, середовище для культивування заміняли на
ЗЕМ для гібридоми (І іїе Тесппоіодіеє5, Іпс.), яке являє собою середовище для культивування, що не містить сироватку, а потім культивували клони протягом від З до 5 діб. Антитіло виділяли з одержуваного супернатант культури з використанням набору для очищення антитіла (Ргоїеїп с Рипіїсацйіоп Кії; Ргоїеив, Іпс.).
І0078| Відносно антитіл, що одержують з відповідних клонів, оцінювали активність зв'язування з білками 98 людини-Ріад і 98 мавпи-Ріад і активність зв'язування з В-клітинами людини та В-клітинами мавпи. У результаті було виявлено, що антитіло, яке позначають як
СІ 6 40, зв'язувалося з білками Ід98 людини-Ріад і (98 мавпи-Ріад і володіло високою активністю зв'язування з В- клітинами людини та В-клітинами мавпи. Відносно СІ б 40 клонували гени, що кодують важкий ланцюг і легкий ланцюг, з гібридоми та проводили визначення послідовності.
І0079| Приклад 3: одержання гуманізованого антитіла
СОК важкого ланцюга та легкого ланцюга СІ 6 40 трансплантували в інші антитіла людини та одержували ряд генів важких ланцюгів і легких ланцюгів гуманізованих антитіл.
Конструювали експресуючий вектор, що містить гени важкого ланцюга та легкого ланцюга відповідних гуманізованих антитіл, з використанням вектору О5 (І оп7а Віоіодісв, Іпс.). Зокрема, гени, що кодують сигнальні послідовності (М. М/пішШе еї аї., Ргоївіп Епод., Мої. 1, р. 499-505, 1987), і ген константної ділянки ІДУ! людини (що складається з основної послідовності основних номерів від 358 до 1350 5ЕО ІЮО МО: 1), що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328УУ, відповідно лігували на 5'-кінці та 3"-кінці генів варіабельної ділянки важкого ланцюга відповідних гуманізованих антитіл, а потім гени важкого ланцюга вводили у вектор З5 рЕЕб.4. Крім того, гени, що кодують сигнальні послідовності (М. У/пішШе еї аї!., зазначена вище), і гени константної ділянки к-ланцюга людини (що складається з основної послідовності основних номерів від 337 до 657 ЗЕО ІЮ МО: 3) відповідно лігували на 5'-кінці та 3'-кінці генів варіабельної ділянки легкого ланцюга відповідних гуманізованих антитіл, а потім гени легкого ланцюга вводили у вектор 05
РЕЕ12.4.
Зо ІЇ0080| Основна послідовність важкого ланцюга одержуваного гуманізованого антитіла
СІ6 40т12 ООМУ представлена ЗЕО ІО МО: 1 і 15, амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю представлена 5ЕО ІЮ МО: 2, основна послідовність легкого ланцюга антитіла представлена 5ЕО ІЮ МО: 3, і амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю представлена 5ЕБО ОО МО: 4. Варіабельна ділянка важкого ланцюга, представлена 5ЕО ІЮО МО: 2, складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІО МО: 2, і кожна з СОК1І, СОК2 ії СОКЗ важкого ланцюга складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 31 до 35, від 50 до 65 і від 98 до 108 5ЕО
ІО МО: 2. Варіабельна ділянка легкого ланцюга, представлена ЗЕО ІЮО МО: 4, складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮО МО: 4, і кожна з СОМ,
СОК2 ї СОКЗ легкого ланцюга складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 24 до 38, від 54 до 60 і від 93 до 101 5ЕО ІЮ МО: 4.
ІЇ0081| Основна послідовність важкого ланцюга одержуваного гуманізованого антитіла
СІ6 40т14 ООУУ представлена 5ЕО ІО МО: 5, амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю, представлена ЗЕО ІЮ МО: 6, основна послідовність легкого ланцюга антитіла представлена 5ЕО ІЮ МО: 7, і амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю, представлена 5ЕО ІЮ МО: 8. Варіабельна ділянка важкого ланцюга, представлена 5ЕО ІЮО МО: 6, складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮО МО: 6, ії СОКІ, СОКО2 і СОКЗ важкого ланцюга відповідно складаються з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 31 до 35, від 50 до 65 і від 98 до 108 5ЕО
БО ІО МО: 6. Варіабельна ділянка легкого ланцюга, представлена ЗЕО ІО МО: 8, складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮО МО: 8, і СОРМ1, СОР і
СОМКЗ легкого ланцюга відповідно складаються з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 24 до 38, від 54 до 60 і від 93 до 101 5ЕО ІЮО МО: 8.
І0082| Основна послідовність важкого ланцюга одержуваного гуманізованого антитіла
СІ6 40т16 ООУУ представлена 5ЕО ІО МО: 9, амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю, представлена ЗЕО ІЮ МО: 10, основна послідовність легкого ланцюга антитіла, представлена 5ЕО ІО МО: 11, і амінокислотна послідовність, що кодується основною послідовністю, представлена ЗЕО ІЮ МО: 12. Варіабельна ділянка важкого ланцюга 5ЕО ІЮ МО: 10 складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО: 10, 60 і СОКІ1, СОК2 ії СОКЗ важкого ланцюга відповідно складаються з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 31 до 35, від 50 до 65 і від 98 до 108 5ЕО ІЮО МО: 10. Варіабельна ділянка легкого ланцюга, представлена 5ЕО ІО МО: 12, складається з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО: 12, і СОКІ1, СОК2 і СОКЗ легкого ланцюга відповідно складаються з амінокислотної послідовності номерів амінокислот від 24 до 38, від 54 до 60 і від 93 до 101 5ЕО ІО МО: 12. (0083) СОКІ, СОК2 і СОКЗ кожного з важких ланцюгів, представлених ЗЕО ІЮ МО: 6 і 10, є такими ж як СОКІ, СОК2 ї СОКЗ важкого ланцюга, представленого 5ЕО ІЮО МО: 2, і СОКІ, СОК2 і СОКЗ кожного з легких ланцюгів, представлених ЗЕО ІЮО МО: 8 і 12, є такими ж як СОК1, СОК2 і СОКЗ легкого ланцюга, представленого 5ЕО ІЮ МО: 4. (0084| Для одержання кожного гуманізованого антитіла, описаний вище вектор О5, у який відповідно вводили гени важкого ланцюга та легкого ланцюга кожного антитіла, розщеплювали з використанням рестрикційного ферменту Мої! і Рми! і проводили лігування з використанням набору Гідайоп-Сопмепіепсе (МІРРОМОЕМЕ Со., Ца.), таким чином, конструюючи вектор, що несе два гени, в який вводили обидва гени важкого ланцюга та легкого ланцюга. Потім вектор, що несе два гени трансфікували з використанням Ехрігесіатіпе 293 (Ше Тесппоіодіев, Іпс.) і культивували протягом 5 діб у клітинах Ехрі 293 (І е Тесппоіодієв5, Іпс.), що культивуються у середовищі для експресії Ехрі 293 (І їе Тесппоіодіе5, Іпс.) приблизно при 3000000 клітин/мл.
Потім одержували очищені антитіла відповідних гуманізованих антитіл з використанням білка о (СЕ Неайсаге дарап Согрогайоп) з одержуваних супернатантів культур. Що стосується конститутивної експресії антитіла експресували за допомогою трансфекції описаним вище вектором, що несе два гени клітин СНО-К15М (І опа ВіоіІодісв5, Іпс.). Потім одержували очищені антитіла відповідних гуманізованих антитіл з використанням МаббеїЇесі Зиге (СЕ Неайнсаге
У9арап Согрогаїйоп) з супернатантів культур. У результаті аналізу модифікації амінокислот відповідних очищених гуманізованих антитіл у більшій частині очищених антитіл делеція лізину на С-кінці важкого ланцюга зустрічалася у СІ6б6 40т12 ОМ, піроглутамілірування на М-кінці важкого ланцюга та делеція лізину на С-кінці важкого ланцюга зустрічалися у Сб 40т14 ООМУ, і делеція лізину на С-кінці важкого ланцюга зустрічалася у Сб 40т16 ООМУ.
І0085) Приклад 4: аналіз ЕГІ5А антигену
Для вимірювання антигензв'язувальної активності гуманізованого антитіла використовували
Зо ЕІ ІЗА для антигену. Одержували білок 98 людини-БРіІад, що одержують у прикладі 1, з забуференим Тті5 фізіологічним розчином (ТВ5; УМмаКо Риге Спетіса! Іпаивігев5, (а.), таким чином, щоб концентрація становила 5000 нг/мл, додавали у білий планшет МОМС Махізогр 384 (планшет Махізогр 384: Мипс Согрогайоп) у кількості 15 мкл на ямку, а потім піддавали твердненню при кімнатній температурі протягом 1 години. Одержуваний продукт двічі промивали ТВ5-Т (0,05 95 Плуееп-20, що містить ТВ5: ММако Риге Спетіса! Іпаивігев5, Ц.), додавали до нього 120 мкл блокувального засобу (ВіосКіпяа Опе: Масаїаі їездиє, Іпс.), одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 1 години та видаляли розчин. Одержували серійне розведення (8 етапів з кінцевою концентрацією від 0,46 нг/мл до 1 мкг/мл) відповідних гуманізованих антитіл, що одержують у прикладі 3, з використанням розведеного розчину, що одержують додаванням тієї ж кількості блокувального засобу та ТВ5, а потім додавали до нього у кількості кількість 15 мл. Одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 1 години, промивали промивною рідиною ТВ5-Т три рази та додавали до нього 20 мкл міченого пероксидазою хріну (НЕР) антитіла кролика проти Ід людини (ббаКо Ца.), яке розводили у 3000 разів розведеним розчином. Потім, одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 1 години, а потім промивали промивною рідиною
ТВ5-Т три рази. Потім до нього додавали 30 мкл субстрату Вт-Спетііїштіпезсепсе ЕГПІЗА (РОБ) (Коспе Оіадповііїс5 Іпс.), який являє собою хемілюмінесцентний реагент для детекції і вимірювали кількість хемілюмінесценції за допомогою лічильника ЕпмМізіоп (РеккіпЕІтег, Со., да.). Тим же способом проводили аналіз ЕЇГ І5А для антигену з використанням білка Ід8 мавпи-
Ніад, що одержують у прикладі 1. Коли розраховували активності зв'язування у відповідних концентраціях тестованих антитіл, вимірювана кількість ямки, у яку не додавали тестоване антитіло, приймали за 0 95 і величину збіжності максимальної активності тестованого антитіла приймали за 10095. Аналізували розраховувані активності зв'язування та розраховували значення ЕС50О тестованих антитіл шляхом апроксимації кривої. 0086) У результаті величини ЕС5О білків (98 людини-Ріад і (948 мавпи-Ріад Сб 40т12 ОМ відповідно становили 128 нг/мл і 183 нг/мл. Величини ЕС5О білків (98 людини-Ріад і (98 мавпи-
Над СІ 6 40т14 ОМ відповідно становили 100 нг/мл і 106 нг/мл. Величини ЕС5О білків др людини-БРіад і (98 мавпи-РІад СІ б 40іпт16 ЮОМУ відповідно становили 132 нг/мл і 118 нг/мл.
Підтверджували, що всі відповідні гуманізовані антитіла володіли високими активностями 60 зв'язування з обома білками 938 людини-Ріад і 98 мавпи-Ріаа.
І0087| Приклад 5: аналіз РАС5 РВМС людини та мавпи
Для оцінювання активності зв'язування гуманізованих антитіл з клітинами людини та мавпи проводили аналіз сортування клітин (ЕАС5), що активовується флуоресценцією, на РВМС людини та мавпи з показником СО20, який є маркером В-клітин, з використанням В-клітин, що містяться у РВМС, як мішені. РВМС мавпи одержували розведенням крові мавпи у тій же кількості РВ5 (Се Тесппоіодіє5, Іпс.), розшаровуючи розведену кров у тій же кількості фіколу (СЕ Неаййсаге дарап Согрогайоп) і проводячи обробку центрифугуванням при кімнатній температурі та при 1500 об./хв. протягом 30 хвилин. Потім РВМС людини (АЇїСеїЇ5, Іпс.) або
РВМС мавпи висівали у кількості 200000 на ямку у 96-ямковий планшет (Сгеїпег Віо-Опе) у суспендованому стані у 30 мл буфера для забарвлення (Весіоп, ОісКіпбоп Соптрапу).
Одержували серійне розведення (4 етапу з кінцевою концентрацією 0,03 нг/мл до 30 мкг/мл) кожного з гуманізованих антитіл, що одержують у прикладі 3, з використанням буфера для забарвлення і додавали 30 мкл серійного розведення. Одержуваний продукт залишали на льоді протягом 30 хвилин, промивали буфером для забарвлення три рази та додавали до нього 40 мкл розчину, що містить мічений фікоеритрином фрагмент Есу кози дб проти людини (З9АСКБОМ, Іпс.), який розводили у 200 разів буфером для забарвлення, і мічене алофікоціаніном антитіло миші проти СО20 (Весіоп, біскіпбоп Сотрапу), розведене у 8 разів буфером для забарвлення. Одержуваний продукт залишали на льоді протягом 30 хвилин і двічі промивали буфером для забарвлення, вимірювали інтенсивність флуоресценції з використанням ЕАСБАгтау (Весіоп, РісКіпбоп Сотрапу), а потім розраховували середню інтенсивність флуоресценції:МЕ!). Для аналізу використовували БРіожмуо (ТОМУ рІСІТАЇ.
ВІОГ ОС Со., Ца.).
І0088| У результаті підтверджували, що всі відповідні гуманізовані антитіла володіли високими активностями зв'язування з В-клітинами людини та мавпи.
І0089| Приклад 6: оцінювання індукованої антитілом проти (ЯМ проліферативної активності клітин
Для оцінювання інгібуючої дії гуманізованих антитіл відносно активації В-клітин людини у результаті стимуляції ВСК оцінювали індуковану антитілом проти ДМ проліферативну активність клітин у В-клітинах людини. Антитіло проти (ЯМ активує В-клітини, забезпечуючи
Зо агрегацію ВСЕ. Зв'язування антитіла з ВСЕ і ЕсукІІБ мобілізує ЕсуКІЇЬ до ВСЕ і, таким чином, можна інгібувати проліферацію В-клітин. У цьому прикладі як антитіло порівняння використовували антитіло проти СО19 5267Е// 328Е (патентний документ 2). Як контрольне антитіло використовували антитіло ДС! людини (АБ проти КІН) проти КІН (гемоціанін морського блюдечка), яке є антигеном, що не зустрічається у живому організмі (МО 2013/094723). Потім В-клітини людини (АїІСеїЇ5, Іпс.) висівали у кількості 30000 на ямку у 96- ямковому планшеті (Імакі, Со., ЦЯ.) з використанням 60 мкл середовища для культивування
ВРМІ (БІСМА-АГОКІСН Согрогайоп). Потім одержували серійне розведення (З етапу з кінцевою концентрацією від 0,3 нг/мл до 30 мкг/мл) відповідних повних антитіла людини, що одержують у прикладі 3, антитіла проти СО19 5267Е/ 328Е або АБ проти КІН і додавали у кількості 20 мкл з використанням середовища для культивування КРМІ. Додавали 20 мкл антитіла проти (ДМ (ЧАСКЗОМ, Іпс.), що одержують таким чином, що його кінцеву концентрацію у середовищі для культивування ЕРМІ доводили до 5 мкг/мл, і інкубували у інкубаторі СОг протягом 4 діб. Потім проводили аналіз клітинної проліферації з використанням СейПТйег-Сіо (Рготеда К.К.). Крім того, у цьому прикладі одержували групу без додавання тестованого антитіла/без додавання антитіла проти ІМ і групу без додавання тестованого антитіла/з додаванням антитіла проти ДМ відповідно як негативний контроль та позитивний контроль, а потім проводили тестування.
Відповідні антитіла тестували у двох повтореннях.
І0090| На фіг. 1 представлені результати швидкості проліферації В-клітин людини.
Швидкості проліферації групи введення тестованого антитіла розраховували шляхом прийняття групи без додавання тестованого антитіла/без додавання антитіла проти (ЯМ як негативний контроль (швидкість проліферації: 095) і групи без додавання тестованого антитіла/без додавання антитіла проти (ДМ як позитивний контроль (швидкість проліферації: 100 95). Це означає, що інгібуюча активність відносно ВСЕ. тестованого антитіла є більша, коли значення швидкості проліферації є меншим. 0091) Як продемонстровано на фіг. 1, незважаючи на те, що швидкість проліферації у 30 мкг/мл антитіла проти СО19 5267Е/І 328Е становила 52,3 95, швидкості проліферації у 30 мкг/мл
СІб6 40т12 ООМУ, СІ6 40т14 ООУМ її С16 40т16 ООМУ відповідно становили 2,8 95, 20,2 95 і 23,2 96. Таким чином, очевидно, що всі описані вище повністю приналежні людині антитіла володіють сильною інгібуючою активністю відносно індукованої антитілом проти ІДМ клітинної бо проліферації у В-клітинах людини у порівнянні з антитілом проти СО19 5267Е/ 328Б.
0092) Приклад 7: оцінювання ефективності лікарського засобу на моделі переносу РВМС людини миші МОСС
З метою підтвердження ефективності гуманізованого антитіла відносно до утворення антитіл іп мімо оцінювали дію різних антитіл при введенні для лікування відносно підвищення титрів антитіла людини, індукованого переносом РВМС людини миші МОЄ. У наданій моделі вважаються, що В-клітини людини, штучним чином активовані у результаті розпізнавання чужорідного об'єкта (миші), диференціюються у клітини (попередники) плазми у організмі мишії, і надана модель є придатною для оцінювання фармакологічної дії тестованого лікарського засобу відносно активності клітин В-серій людини.
І0093| РВМС людини (АЇїЇСеї5, Іпс.) суспендували при 10000000 клітин/мл в РВЗ (Умако Риге
Спетісаї! Іпаивігіез, Ма.) і вводили у хвостову вену самцеві миші МОСС у віці 11 тижнів (Іп-мімо
Зсієепсе, Іпс.) у кількості 0,25 мл (2500000 клітин). На добу 34 (доба 34 після переносу РВМС) вимірювали масу та відбирали зразок крові. Вимірювали титр антитіла (ЯМ людини та ІДЕ у плазмі з використанням ЕГІЗА (ВеїПпу! Гарогаїйогіе5, Іпс.). Групування проводили на підставі титру антитіла ІДМ людини, ІДЕ у плазмі і даних маси.
І0094| У цьому прикладі як антитіло порівняння використовували антитіло проти СО19
З267Е/І 328Б. Як контрольне антитіло використовували Ар проти КІН. Миші вводили 10 мг/10 мл/кг тестованого антитіла шляхом підшкірного введення на добу 35 і добу 42. Відбір зразків крові проводили на добу 42 і 49 і вимірювали титр антитіла (ЯМ людини та ІДЕ у плазмі з використанням ЕГІЗА (Веїйїйуї І арогайогіє5, Іпс.). Тестування проводили у одиниці групи з 4 або 5 тварин. Результати тестування представлені як "середнє значення-стандартна помилка".
Визначення значущої відмінності групи Ар проти КІН і різних груп тестованого антитіла проводили з використанням І-критерію Стьюдента та випадок, де значення р становило менш 0,05, вважали статистично значущим. Описане вище визначення проводили з використанням
СтарпРаа Ргіхт (версія 5.04).
І0095| На фіг. 2 представлена дія тестованого антитіла відносно титру антитіла (ЯМ людини в плазмі. Титр антитіла ІМ людини в плазмі значно знижувався СІіб 40т12 ОМ і
СІ16 40т14 ООМУ у порівнянні з АБ КІН. Дія зниження СІб6 40т12 ООУМ і СІ16 40т14 ОМ відносно титру антитіла (ЯМ людини в плазмі проявлялася дуже рано, і її розпізнавали з
Зо першого тижня після того, як починали введення (доба 42). При цьому для антитіла проти СО19 5267Е// 328Е дія зниження відносно титру антитіла (ДМ людини в плазмі була значущою тільки після 2 тижнів після того, як починали введення (доба 49). 0096) Потім на фіг. З представлена дія тестованого антитіла відносно титру антитіла ЧЕ людини в плазмі. В СІ6 40т12 ОМ і С16 40т14 ООМУ титр антитіла ІДЕ людини в плазмі швидко та значущо знижувався у порівнянні з АБ проти КІН. При цьому в групі антитіла проти
СОр19 5267Е/ 328Е, титр антитіла ЩЕ людини у плазмі не знижувався.
І0097| Як презентовано на фіг. 2 і 3, очевидно, що обидва описаних вище СІ 6 40т12 ЮР і
СІ6 40т14 ООМ/ володіють сильними інгібуючими активностями відносно підвищення титру антитіла людини у порівнянні з антитілом проти СО19 5267Е/ 328БЕ.
І0098| Приклад 8: оцінювання ефективності лікарського засобу на моделі сенсибілізації антигеном ТТхХ на мавпах
Специфічний до антигену ТТх Ід одержували шляхом однократної сенсибілізації антигеном адсорбованого правцевого токсину (ТТх) мавпи. У наданій моделі можна оцінювати спільні титри антитіл у плазмі на додаток до специфічного до антигену ТТх Ідс у плазмі. Таким чином, у наданій моделі можна оцінювати безпеку на додаток до ефективності при лікуванні аутоїмунних захворювань. 0099) З використанням самця яванського макака (район походження: Китай, у віці З року або старше) змішували від 2 мг/кг до 5 мг/кг (0,05 мл/кг: ОБР Согрогайоп) золазепаму гідрохлориду та від 2,5 мг/кг до 5 мг/кг тілетаміну гідрохлориду під анестезією та проводили сенсибілізацію ТТх (добу сенсибілізації встановлювали як доба 0). Сенсибілізацію ТТхХ проводили за допомогою ін'єкцій 0,6 мл/мавпу правцевого токсину (ТТх, 10 ФОд./мл, ОепКка зеїка Со., На.) у м'яз стегна і 0,6 мл/мавпу (відповідно 50 мкл до 12 місць) у задню частину внутрішньошкірно. Що стосується груп обробки використовували групу носія (розчинник (20 мм буфера цитрату натрію /120 мм, Масі (ри: 6,0); КОНЛМ ВІО Со., Її.) 1 мл/кг, п-3) і групу введення антитіла (10 мг/1 мл/кг, гуманізоване антитіло СІб6 40т14 ООМУ (розведене розчинником), п-3). Час введення встановлювали на добу 14 після сенсибілізації ТТхХ і проводили введення у вену у дозі 1 мл/кг під час пробудження.
ІО100| Після введення СІ6 40т14 ЮОУМ описаному вище яванському макаку відбирали зразок крові у моменти часу, наприклад, через 4 години, 72 години, 168 годин і 336 годин і бо піддавали обробці центрифугою, а потім виділяли плазму. Концентрацію лікарських засобів у плазмі вимірювали з використанням робочої станції (зугоїартм хР (Суго5 АВ). Як спосіб та диск використовували компактні диски 200-3УУ-001-А і Віоапу 200 (Сугоз АВ). Крім того, як стверділий антиген та антитіла, що детектується, використовували мічений біотином рекомбінантний
СО79В людини (Моморгоїеїп, Іпс.) і мічене АІеха антитіло кози проти дб людини (Зошпвегп
ВіотесппоЇїоду Авз5осіасе5, Іпс.). Як наведено у таблиці 1, концентрація лікарських засобів у плазмі Сб 40т14 ООУМ підтримувалася під час періоду оцінювання моделі. Таблиця 1 перехід концентрації лікарських засобів у плазмі відносно гуманізованого антитіла проти Ід8 у мавпи
Таблиця 1:
Концентрація лікарських | Концентрація лікарських | Концентрація лікарських засобів у плазмі засобів у плазмі засобів у плазмі індивідуума 1 (мг/мл) індивідуума 2 (мг/мл) індивідуума З (мг/мл) години години годин годин
ІО101|| У описаного вище яванського макака відбирали зразок крові у моменти часу на добу 13 (через 13 діб після того, як яванського макака імунізували адсорбованим правцевим токсином), добу 14, добу 17, добу 21 і добу 28, проводили обробку центрифугуванням і виділяли плазму. Для вимірювання антитіла проти адсорбованого правцевого токсину (Ідс проти ТТх) у виділеній плазмі використовували ЕГІЗА для антигену. Адсорбованим правцевим токсином (Оєспка Зеїка Со., а.) розводили у 20 разів фосфатно-сольовим буфером (РВ5; УМаКко Риге
Спетісаї Іпаивзігіе5, Ца.), додавали у 96-ямковий планшет МОМС Махізогр (96-ямковий планшет
Махізогр: Мипс Согрогайіоп) у кількості 100 мкл на ямку, а потім проводили тверднення при 420 протягом однієї ночі. Одержуваний продукт промивали РВ5-Т (0,05 95 Пиуееп-20, що містить
РВ5: Тпепто 5сіепійіс, пс.) чотири рази, додавали до нього 200 мкл блокувального засобу (блокувальний казеїн в РВ5; І йе Тесппоїодіеє5, Іпс.), одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 2 годин і видаляли розчин. Потім до нього додавали 100 мкл виділеної плазми та 100 мкл зразка для калібрувальної кривої відповідно. Як зразок для калібрувальної кривої використовували зразок, змішаний з плазмою, що збирається через 21 добу та 23 доби після імунізації яванського макака адсорбованим правцевим токсином, його кількість доводили до 100 Од/мл і використовували серійні розведення (від 0,488 мОд/мл до 500 мОд/мл), одержувану з використанням блокувального засобу як розведений розчин.
Одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 2 годин, промивали промивною рідиною РВЗ-Т чотири рази та додавали до нього 100 мкл міченого пероксидазою хріну (НКР) антитіла коза проти ІдС мавпи (Могаіс, Іпс.), яке розводили у 3000 разів
Зо блокувальним засобом. У подальшому одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 1 години, а потім промивали промивною рідиною РВ5-Т чотири рази.
Потім проводили вимірювання з використанням системи ТМВ Місгожеї! Регохідахе Зибзігаїе (КРІ,, Іпс.). Вимірювали оптичну густину за допомогою ЗресігаМмах (МоїІесшіаг Оемісев, Іпс.).
ІО102)| На фіг. 4 представлена дія тестованого антитіла відносно титру антитіла проти адсорбованого правцевого токсину у плазмі. Титр антитіло проти адсорбованого правцевого токсину у плазмі (дО проти ТТх) знижувався у групі СІ 6-40і114 ЮОМУ у порівнянні з групою носія.
ІО103) Спільні титри антитіла (І9М, ІдА і Ідс) у плазмі, що виділяють у яванського макака на добу 14, добу 17, добу 21 і добу 28-:вимірювали наступним нижче способом. Поліклональне антитіло кролика проти (ЯМ мавпи (СОМАМСЕ, Іпс.) і поліклональне антитіло кролика проти ІА людини (Веїпу! І абогафогіе5, Іпс.) розводили у 100 разів, 500 разів і 1000 разів фосфатно- сольовим буфером (РВ5: Улако Риге Спетісаї Іпдивігіе5, Ц.), додавали у 96-ямковий планшет
МОМС Махізогр (96-ямковий планшет Махізогр: Мипс Согрогайоп) у кількості 100 мкл, а потім піддавали твердненню при 42С протягом однієї ночі. Одержуваний продукт промивали РВ5-Т (0,05 95 Гуееп-20, що містить РВ5: Тпепто зсіепійс, Іпс.) чотири рази, додавали до нього 200 мкл блокувального засобу (блокувальний казеїн у РВ5; І їе ТесппоЇодіе5, Іпс.) і залишали одержуваний продукт при кімнатній температурі протягом 1 години, і промивали промивною рідиною РВ5-Т чотири рази. Одержували серійне розведення зразка для калібрувальної кривої і зібраної плазми мавпи з використанням блокувального засобу як розведений розчин та додавали 100 мкл серійного розведення. Як зразок для калібрувальної кривої розводили плазму, що одержують від нормального яванського макака, а потім використовували.
Одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 2 годин, промивали промивною рідиною РВ5З-Т чотири рази та розводили мічене пероксидазою хріну (НЕР) антитіло проти антитіла ІДМ мавпи (КРІ, Іпс.), мічене пероксидазою хріну (НЕР) антитіло проти антитіла
ІЧА людини (Веїпйуї І абогайогієв, Іпс.) і мічене пероксидазою хріну (НЕР) антитіло проти антитіла 9 мавпи (КРІ., Іпс.) відповідно у 1000 разів, 5000 разів і 3000 разів блокувальним засобом і додавали у кількості 100 мкл відповідно. Потім одержуваний продукт залишали при кімнатній температурі протягом 2 годин, а потім промивали промивною рідиною РВ5-Т чотири рази. Потім проводили вимірювання з використанням системи ТМВ Місгоу"еі! Регохідазе Зибзігаїе (КРІ,
Іпс.). Оптичну густину вимірювали за допомогою 5ресігаМах (Моїесшаг Оемісев, Іпс.).
І0О104| На фіг. 5, 6 і 7 представлена дія тестованих антитіл відносно спільних титрів антитіл (ОМ, ІдДА і дес) у плазмі. Сб 40т14 ООМУ не впливав на спільні титри антитіла (І9ЧМ, ІдДА і Ідс) у плазмі у порівнянні з групою носія.
ІО105) На підставі результатів, описаних вище, очевидно, що Сіб6 40іт14 ЮОМУ пригнічує специфічне до антигену антитіло, не проявляючи впливу на спільні титри антитіл у плазмі. Крім того, також очевидно, що Сі! б 40іт14 ЮОУМ володіє прекрасними показниками безпеки на додаток до ефективності під час лікування аутоїмунних захворювань.
Промислова придатність (0106) Антитіло проти 938 людини за наданим винаходом є придатним для профілактики та лікування аутоїмунних захворювань. Крім того, полінуклеотид, експресуючий вектор, трансформована клітина-хазяїн і способи одержання антитіла за наданим винаходом є придатними для одержання антитіла проти Ід8 людини.
Список послідовностей у вільній формі
І0107| Під числом з заголовком «223» списку послідовностей наведений опис "штучної послідовності". Зокрема, основні послідовності, представлені 5ЕО ІО МО: 1 і З списку послідовностей, являють собою основні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга е
СІ6 40т12 ООМУ, відповідно, і амінокислотні послідовності, представлені 5ЕО ІО МО: 2 і 4, являють собою амінокислотні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга, що кодуються
ЗЕО ІЮ МО: 1 ії 3, відповідно. Основні послідовності, представлені 5ЕО ІЮО МО: 5 і 7 списку послідовностей, являють собою основні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга
СІ6 40т14 ООМУ, відповідно, і амінокислотні послідовності, представлені з«ЕО ІЮО МО: 6 і 8, являють собою амінокислотні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга, що кодуються
ЗЕО ІЮ МО: 5 і 7, відповідно. Основні послідовності, представлені 5ЕО ІЮ МО: 9 і 11 списку послідовностей, являють собою основні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга
СІ6 40т16 ООМУ, відповідно, і амінокислотні послідовності, представлені ЗЕО ІЮО МО: 10 ї 12 списку послідовностей, являють собою амінокислотні послідовності важкого ланцюга та легкого ланцюга, що кодуються ЗЕО ІЮО МО: 9 їі 11, відповідно. Основна послідовність, представлена
ЗЕО ІЮ МО: 13 списку послідовностей, являє собою основну послідовність гена 98 людини-Ріаяд, і основна послідовність, представлена 5ЕО ІЮ МО: 14 списку послідовностей, являє собою основну послідовність гена Ід8 мавпи-Ріад. Основна послідовність, представлена ЗЕО ІО МО: 15 списку послідовностей, являє собою основну послідовність важкого ланцюга Сб 40т12 ООМУ.
Claims (25)
1. Антитіло до 940 людини, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 31 до 35 50 ЗЕО ІЮ МО:2, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 50 до 65 5ЕО ІЮО МО:2, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 98 до 108 5ЕО ІЮ МО:2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОМ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 24 до 38 ЗЕО ІЮ МО:4, СОК2, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот 55 від 54 до 60 5ЕО ІЮО МО:4, і СОКЗ, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 93 до 101 5ЕО ІЮО МО:4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку Іду! людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2г680 і І 328МУ.
2. Антитіло до ІдрД людини за п. 1, вибране з групи, яка складається з наступних пунктів (1)- (4): бо (1) антитіла до др людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО:6, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮО МО:8, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇЧуїЇ людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і І з28МУ; (2) антитіла до др людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 5ЕО ІЮ МО2, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮО МО:4, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇЧуїЇ людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і І з28МУ; (3) антитіла до др людини, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 119 БЕО ІО МО:10, варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 112 5ЕО ІЮ МО:12, і константну ділянку важкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку ЇЧуїЇ людини, що несе мутації амінокислот 52390, Н2680 і І 328УУ, і (4) антитіла до 9р людини, яке одержують у результаті посттрансляційної модифікації антитіла до 94Др людини за будь-яким з зазначених вище пунктів (1)-(3), де посттрансляційна модифікація вибрана з делеції лізину на С-кінці важкого ланцюга карбоксипептидазою; модифікації глутаміну або глутамінової кислоти на М-кінці важкого ланцюга та легкого ланцюга до піроглутамінової кислоти піроглутамілуванням; глікозилуванням; окисненням; деамідуванням та глікуванням.
3. Антитіло до Ідр людини за п. 2, вибране з групи, яка складається з наступних від (1) до (4): (1) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; (2) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої зЕО ІЮ МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної Ко) послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:4; (3) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:12; і (4) антитіла до 9р людини, яке одержують у результаті посттрансляційної модифікації антитіла до ІДД людини, за будь-яким з зазначених вище пунктів (1)-(3), де посттрансляційна модифікація вибрана з делеції лізину на С-кінці важкого ланцюга карбоксипептидазою; модифікації глутаміну або глутамінової кислоти на М-кінці важкого ланцюга та легкого ланцюга до піроглутамінової кислоти піроглутамілуванням; глікозилуванням; окисненням; деамідуванням та глікуванням.
4. Антитіло до ІдрД людини за п. 3, вибране з групи, яка складається з наступних від (1) до (6): (1) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; (2) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО:6, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:8; (3) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої зЕО ІЮ МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної БО послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:4; (4) антитіло до 9р людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮ МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО 4; (5) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:12; і (6) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:12.
5. Антитіло до Ідр людини за п. 4, що є антитілом до Ідр людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:8.
6. Антитіло до Ідр людини за п. 4, яке є антитілом до ІддД людини, що містить важкий ланцюг, який складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮ МО:6, в якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО:8.
7. Полінуклеотид, вибраний з групи, яка складається з наступних від (1) до (3): (1) полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до Ід людини за (1) з п. 2, і полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (1) з п. 2; (2) полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до Ід людини за (2) з п. 2, і полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (2) з п. 2; і (3) полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до Ід людини за (3) з п. 2, і полінуклеотиду, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (3) з п. 2.
8. Полінуклеотид, що містить наступне з (1)-(2): (1) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до ІдрД людини за п. 5; і (2) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до ІДД людини за п. 5.
9. Експресуючий вектор, що містить будь-який з наступних (1)-(3): (1) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до І9Д людини за (1) з п. 2, і полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (1) з п. 2; (2) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до І9Д людини за (2) з п. 2, і полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (2) з п. 2; і Зо (3) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до І9Д людини за (3) з п. 2, і полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до Ідр людини за (3) з п. 2.
10. Експресуючий вектор, що містить наступне з (1) і (2): (1) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до ІдрД людини за п. 5; і (2) полінуклеотид, який містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла до ІДД людини за п. 5.
11. Клітина-хазяїн, вибрана з групи, яка складається з наступних пунктів (а)-(ї): (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (1) зп. 2, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (1) з п. 2; (р) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (2) з п. 2, їі полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (2) з п. 2; (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (3) з п. 2, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (3) з п. 2; (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (1) зп. 2, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (1) з п. 2. (є) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (2) з п. 2, їі експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (2) зп. 2; 1 () клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (3) з п. 2, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (3) з п. 2;
12. Клітина-хазяїн, вибрана з групи, яка складається з наступних пунктів (а)-(Б): (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за п. 5, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла; і (Б) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за п. 5, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла.
13. Спосіб одержання антитіла до 9р людини, що включає культивування клітини(ин)- хазяїна(їв), вибраної(их) з групи, яка складається з наступних пунктів (а)-(), для експресії антитіла до Ідр людини: (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (1) зп. 2, їі полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (1) з п. 2; (Б) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (2) з п. 2, їі полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (2) з п. 2; (с) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (3) з п. 2, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (3) з п. 2; (а) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (1) зп. 2, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (1) з п. 2; (є) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (2) з п. 2, їі експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (2) з п. 2; ()) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що Зо містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (3) з п. 2, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (3) з п. 2; (9) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (1) з пп. 2, і клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (1) з п. 2; (п) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (2) з п. 2, їі клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (2) зп. 2; 1 (і) клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за (3) з п. 2, і клітини-хазяїна, трансформованої експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за (3) з п. 2.
14. Спосіб одержання антитіла до 9р людини, що включає культивування клітини(ин)- хазяїна(їв), вибраної(их) з групи, яка складається з наступних пунктів (а)-(с), для експресії антитіла до Ідр людини: (а) клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за п. 5, і полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за п. 5; (р) клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за п. 5, і експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за п. 5; і (с) клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує важкий ланцюг антитіла до др людини за п. 5, і клітина-хазяїн, трансформована експресуючим вектором, що містить полінуклеотид, що містить основну послідовність, що кодує легкий ланцюг антитіла за п. 5.
15. Фармацевтична композиція, що містить антитіло до (93 людини, вибране з групи, яка складається з наступного від (а) до (с), і фармацевтично прийнятний ексципієнт: (а) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:8, і/або антитіла до 9Д людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 ЗБЕО ІЮО МО:6, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:8; (Б) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:4, і/або антитіла до 9Д людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 ЗЕО ІЮО МО:2, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:4; і (с) антитіла до ЗД людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:12, і/або антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 ЗЕО ІЮО МО:10, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:12.
16. Фармацевтична композиція, яка містить: (1) антитіло до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; і/або (2) антитіло до ї9р людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО:6, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легсий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮО МО:8; і фармацевтично прийнятний ексципієнт. Зо
17. Фармацевтична композиція за п. 16, яка являє собою фармацевтичну композицію для профілактики або лікування аутоїмунного захворювання.
18. Фармацевтична композиція за п. 17, де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру.
19. Спосіб профілактики або лікування аутоїмунного захворювання, що включає введення терапевтично ефективної кількості: (1) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; і/або (2) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕО ІЮО МО:6, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легсий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої ЗЕО ІЮ МО:8.
20. Спосіб за п. 19, де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру.
21. Застосування (1) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої БЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; і/або (2) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕБО ІЮ МО:б, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8, для профілактики або лікування аутоїмунного захворювання.
22. Застосування за п. 21, де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру.
23. Застосування (1) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої БЕО ІЮ МО:6, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8; і/або (2) антитіла до др людини, яке містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності з номерами амінокислот від 1 до 448 5ЕБО ІЮ МО:б, у якій амінокислоту глутамін під номером 1 модифікують до піроглутамінової кислоти, і легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, представленої 5ЕО ІЮ МО:8, для виробництва фармацевтичної композиції для профілактики або лікування аутоїмунного захворювання.
24. Застосування за п. 23, де аутоїмунне захворювання являє собою системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит або ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру.
25. Антитіло до Ідр людини за п. 2, яке є злитою формою з антитіла та іншого пептиду або білка або модифікованою формою, з якою зв'язується модифікуючий агент. ЗЕ у | що -в. ВВ проти КІВ
Ах. З ше як а щи су зд ї стук КЕ т жо Ч хо їх ол ко есте тсте їз Еш и НЕО що 3 щі Ше о ТОВ ай дюни кк ЖК жо Ще суки го ее їх я Крот мк с ян ССУУЄ Бо жо І "Ж Б дес а Р в. ща чо "у ее вити ТО ТИ і | й со зате нн нн НН КК ОК мг мА
ЗІ. я ж х вкОЗа ще с х ; «ек де ворот КІН я "В Ку Без й пл і шк с дру КОХ : ЕН. Ж : шен в що ї кає З Я щк Ж ж ки Моюкх РУК мня й сх ши шо пк хо, яко - 5 хе М ОО ЦЕУХ
5. ї ме й - - що Б Е шк Ба жо. ск ск є. ек. Я В в я т «ак антитіла проти хе ? ї с- ї ВИШНЯ х во ї вай ї Уч ЕЕ хх х решеетУ еШ ж. Ото БОБ лЛОВЕ ку Ж Е ве к, з ння г о ОХ ї сви ї ко 5 х хх дн ЕВ Ши Шк я5 ЕЕ в З ИЙ «ік ож
Б х. : 000 я ЖК Я в пре 5 шк СО що Б де ка Я хе КК ; жо оса ВИШ о ще З . їх Сів Ка шк ЖЕ ОБ г щ Енн шин ОХ КЗ є «ще. КЗ доба ще г. З Ж ОО - АвВлвети КМ ї ее еф с еф КІ Те 7 як бій зо ОТ ж зав. й хх «йе М Щи СИХ Я КК ЩО ї - сх щі «А В хх й п «ОВ зваужх Ж рю укамюменх сиве яв Ко -е ее вила ЕМ що зе | х шин ОК ї - Щ ще ве ї ткхх Я сек ЕЕ Е м ЕК: ЗШ ож, ях Шо См ЗВ яК Ж се їх У ах «ос. х л. їх хх с ся о ї ї е ее ї ІЗ Я ї і Ро- бе | ке її -- че В ї що 5 ке Й т. щої ї сс а що ІЗ хз їй Ша - : : нн
ЇВ. її нн м а а ка а С В М ва аа я що доба
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014160141 | 2014-08-06 | ||
| PCT/JP2015/072162 WO2016021621A1 (ja) | 2014-08-06 | 2015-08-05 | 新規抗ヒトＩｇβ抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA121866C2 true UA121866C2 (uk) | 2020-08-10 |
Family
ID=55263882
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201702067A UA121866C2 (uk) | 2014-08-06 | 2015-08-05 | АНТИТІЛО ДО Ig<font face="Symbol">b </font>ЛЮДИНИ |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10316086B2 (uk) |
| EP (1) | EP3178929B1 (uk) |
| JP (1) | JP6627761B2 (uk) |
| KR (1) | KR102488214B1 (uk) |
| CN (1) | CN106574259B (uk) |
| AR (1) | AR102042A1 (uk) |
| AU (1) | AU2015300080B2 (uk) |
| CA (1) | CA2957313C (uk) |
| ES (1) | ES2886443T3 (uk) |
| IL (1) | IL250404B (uk) |
| MA (1) | MA40321A (uk) |
| MX (1) | MX2017001642A (uk) |
| MY (1) | MY181914A (uk) |
| PH (1) | PH12017500201B1 (uk) |
| PL (1) | PL3178929T3 (uk) |
| PT (1) | PT3178929T (uk) |
| RU (1) | RU2710532C2 (uk) |
| SG (1) | SG11201700885SA (uk) |
| TW (1) | TWI681971B (uk) |
| UA (1) | UA121866C2 (uk) |
| WO (1) | WO2016021621A1 (uk) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201412658D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| GB201412659D0 (en) | 2014-07-16 | 2014-08-27 | Ucb Biopharma Sprl | Molecules |
| GB201601077D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody molecule |
| GB201601075D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies molecules |
| GB201601073D0 (en) | 2016-01-20 | 2016-03-02 | Ucb Biopharma Sprl | Antibodies |
| JP7538131B2 (ja) | 2019-01-28 | 2024-08-21 | 上海拓界生物医薬科技有限公司 | 抗ｃｄ７９ｂ抗体、その抗原結合フラグメントおよびそれらの医薬用途 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101254302B (zh) * | 1999-05-07 | 2011-05-11 | 杰南技术公司 | 使用与b细胞表面标志结合的拮抗剂治疗自身免疫病 |
| US20020150573A1 (en) * | 2000-11-10 | 2002-10-17 | The Rockefeller University | Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy |
| CA2461529A1 (en) * | 2001-09-25 | 2003-04-03 | Immuno-Biological Laboratories Co., Ltd. | Recombinant anti-osteopontin antibody and use thereof |
| US20090068178A1 (en) | 2002-05-08 | 2009-03-12 | Genentech, Inc. | Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin |
| WO2006130855A2 (en) * | 2005-06-01 | 2006-12-07 | California Institute Of Technology | Method of targeted gene delivery using viral vectors |
| CA2624081C (en) * | 2005-09-29 | 2014-09-16 | Medimmune, Inc. | Method of identifying membrane ig specific antibodies and use thereof for targeting immunoglobulin-producing precursor cells |
| CN102719444B (zh) * | 2006-09-01 | 2016-12-14 | 人类多细胞株治疗学公司 | 人或人源化免疫球蛋白在非人转基因动物中增强的表达 |
| EP3392273A1 (en) * | 2007-05-30 | 2018-10-24 | Xencor, Inc. | Methods and compositions for inhibiting cd32b expressing cells |
| PL2474557T3 (pl) | 2007-07-16 | 2015-02-27 | Genentech Inc | Przeciwciała anty- CD79b i immunokoniugaty i sposoby stosowania |
| IL295449A (en) | 2008-01-31 | 2022-10-01 | Genentech Inc | and fusion antibody-drug-cd79b engineered antibodies cysteine- |
| CN103154025B (zh) | 2010-08-02 | 2015-07-01 | 宏观基因有限公司 | 共价双抗体及其用途 |
| UA116479C2 (uk) | 2013-08-09 | 2018-03-26 | Макродженікс, Інк. | БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ |
-
2015
- 2015-08-05 UA UAA201702067A patent/UA121866C2/uk unknown
- 2015-08-05 RU RU2017106743A patent/RU2710532C2/ru active
- 2015-08-05 AU AU2015300080A patent/AU2015300080B2/en active Active
- 2015-08-05 ES ES15829154T patent/ES2886443T3/es active Active
- 2015-08-05 US US15/501,626 patent/US10316086B2/en active Active
- 2015-08-05 SG SG11201700885SA patent/SG11201700885SA/en unknown
- 2015-08-05 MA MA040321A patent/MA40321A/fr unknown
- 2015-08-05 AR ARP150102510A patent/AR102042A1/es unknown
- 2015-08-05 PT PT158291542T patent/PT3178929T/pt unknown
- 2015-08-05 TW TW104125426A patent/TWI681971B/zh active
- 2015-08-05 IL IL250404A patent/IL250404B/en unknown
- 2015-08-05 EP EP15829154.2A patent/EP3178929B1/en active Active
- 2015-08-05 MY MYPI2017700380A patent/MY181914A/en unknown
- 2015-08-05 KR KR1020177003135A patent/KR102488214B1/ko active IP Right Grant
- 2015-08-05 JP JP2016540256A patent/JP6627761B2/ja active Active
- 2015-08-05 CA CA2957313A patent/CA2957313C/en active Active
- 2015-08-05 WO PCT/JP2015/072162 patent/WO2016021621A1/ja active Application Filing
- 2015-08-05 MX MX2017001642A patent/MX2017001642A/es unknown
- 2015-08-05 CN CN201580042306.6A patent/CN106574259B/zh active Active
- 2015-08-05 PL PL15829154T patent/PL3178929T3/pl unknown
-
2017
- 2017-02-02 PH PH12017500201A patent/PH12017500201B1/en unknown
-
2019
- 2019-04-23 US US16/392,418 patent/US11059889B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7259107B2 (ja) | Ｐｄ－１アゴニスト抗体およびその使用 | |
| TWI823895B (zh) | 抗b7-h4抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
| JP7215759B2 (ja) | ４－１ｂｂ抗体およびその製造方法と使用 | |
| AU2021330067A1 (en) | CCR8 antibody and application thereof | |
| UA121866C2 (uk) | АНТИТІЛО ДО Ig<font face="Symbol">b </font>ЛЮДИНИ | |
| JP2021526012A (ja) | Ｃｔｌａ−４を標的とする抗体、その調製方法および使用 | |
| CN117964759A (zh) | 调节由细胞表达的生物活性的抗体 | |
| US20210070875A1 (en) | Anti-c5ar antibody and preparation method and use thereof | |
| US20230416362A1 (en) | Anti-tigit antibodies and methods of use | |
| CN113508139A (zh) | 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途 | |
| US20230139700A1 (en) | Development and application of immune cell activator | |
| US20230090901A1 (en) | Novel antibodies | |
| AU2017207082B2 (en) | Anti-Myl9 antibody | |
| US11685778B2 (en) | Anti-human LAG-3 monoclonal antibody and use thereof | |
| US9371391B2 (en) | Anti-human IL-23 receptor antibody and encoding polynucleotides | |
| CA3180470A1 (en) | Anti-human nr1 antibody derivative | |
| CA3150462A1 (en) | Anti-cd19 antibodies and uses thereof | |
| CN112375146B (zh) | 检测Anti-CD19 CAR表达水平的抗独特性抗体及其应用 | |
| WO2024118923A2 (en) | Btla agonist antibodies and uses thereof | |
| CN118215686A (zh) | 靶向pd-l1和cldn18.2的双特异性抗体及其制备方法和应用 |