TWI851607B

TWI851607B - 良性腫瘤之預防或治療藥

Info

Publication number: TWI851607B
Application number: TW108136125A
Authority: TW
Inventors: 杉山治夫
Original assignee: 日商癌免疫研究所股份有限公司; 日商住友製藥股份有限公司
Priority date: 2018-10-05
Filing date: 2019-10-04
Publication date: 2024-08-11
Also published as: TW202027777A; JPWO2020071551A1; MX2021003938A; KR102901715B1; US12440546B2; EP3865146A4; KR20210073540A; AU2019352354B2; WO2020071551A1; CN113395976B; AU2019352354A1; CN113395976A; CA3115240A1; US20220008528A1; EP3865146A1; JP7393752B2; NZ774631A

Abstract

本發明提供一種良性腫瘤之預防或治療藥。本發明提供一種包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子之良性腫瘤之預防或治療藥。於特定之實施形態中，本發明提供一種包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子之良性腫瘤之預防或治療藥。於較佳之實施形態中，本發明之良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之預防或治療藥包含殺手型及/或輔助型WT1肽。於進而較佳之實施形態中，上述WT1肽為WT1₁₂₆ 殺手肽及/或WT1₃₅ 輔助肽。於另一態樣中，提供一種對WT1肽特異性之CTLs及WT1特異性輔助T細胞之誘導方法、以及呈現WT1肽之樹突狀細胞之誘導方法。

Description

良性腫瘤之預防或治療藥

本發明係關於一種用於預防或治療良性腫瘤之醫藥、方法等。於1個具體例中，本發明係關於一種家族性腺瘤病之預防或治療藥。

良性腫瘤係病理學上不具有惡性所見之腫瘤。瞭解良性腫瘤與惡性腫瘤不同，不表現出轉移或浸潤傾向。良性腫瘤大部分無症狀，但於腫瘤直徑較大之情形時，有因壓迫其他組織等而表現出症狀或者惡化之情況，有必需治療或預防之情況。因此，治療劑或預防劑鮮為人知。

家族性大腸腺瘤病係具有抑癌基因APC異型缺失之遺傳病。自20歲左右開始大腸中具有APC異型缺失之腺細胞產生APC基因之同型缺失，於大腸各處腺瘤發病，然後，因該腺瘤而大腸癌發病。作為治療，初期利用內視鏡切除腺瘤，但其後，腺瘤密集而無法切除，並且因腺瘤而癌發病，故而多數情況下將大腸全部摘除。係一種外顯率為100%、所有帶因者於20歲左右發病之極其悲慘之疾病。於日本有6,000人左右之患者。

雖已知阿司匹林對家族性大腸腺瘤病中之腺瘤、腺癌之發病預防及/或發展抑制有效果，但效果較弱，又，伴隨阿司匹林之副作用之消化道出血之危險。

威爾姆斯瘤基因WT1係作為參與作為小兒腎腫瘤之威爾姆斯瘤之腫瘤形成之基因單離(參照非專利文獻1)。該基因係編碼與細胞增殖及細胞分化之調節機構、以及細胞凋亡及組織發育相關之鋅指轉錄因子之基因。

[先前技術文獻] [非專利文獻]

[非專利文獻1]Gessler,M.等人，Nature，第343卷，774-778頁，1990年

本發明者等人進行努力研究，結果發現WT1肽疫苗對抑制及/或延遲家族性大腸腺瘤病等良性腫瘤中之腺瘤之發病、或者抑制及/或延遲自腺瘤之症狀之發生有效，且發現對治療及預防不存在進行全摘除術以外之根本治療方法且難治性之家族性大腸腺瘤病等良性腫瘤有用。本發明者等人發現家族性大腸腺瘤病等良性腫瘤之患者之腺瘤表現WT1癌抗原，故而設想WT1癌疫苗對抑制及/或延遲家族性大腸腺瘤病等良性腫瘤中之腺瘤之發病、或者抑制及/或延遲自腺瘤之症狀之發生有效，從而完成本發明。

本發明係基於良性腫瘤之腺瘤之細胞表現WT1蛋白質這一驚奇之發現者。於本技術領域中，眾所周知於惡性腫瘤之癌細胞中高表現WT1蛋白質，可容易預料WT1肽疫苗於惡性腫瘤中之有用性。本發明係首次明確作為良性腫瘤之家族性大腸腺瘤病之腺瘤之細胞表現WT1蛋白質，想到於一般良性腫瘤中提供一種治療劑或預防劑。除此以外，WT1肽疫苗之有效性受WT1蛋白質之表現形式(表現量等)影響，故而即便於發現於腺瘤中表現WT1蛋白質之情形時，亦無法合理地預測WT1肽疫苗之有效性。就該方面而言，本發明首次證實了WT1肽疫苗對良性腫瘤亦有效，發現了由先前技術無法預測之效果。

因此，本發明提供以下。

(項目X1)

一種良性腫瘤之預防或治療藥，其包含WT1肽或其類似物。

(項目X2)

如項目X1所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物包含殺手型及/或輔助型。

(項目X3)

如項目X1或項目X2所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物包含WT1₁₂₆殺手肽及/或WT1₃₅輔助肽。

(項目X4)

如項目X1至項目X3中任一項所記載之良性腫瘤之預防或治療藥，其包含編碼WT1肽或其類似物之核酸分子。

(項目X5)

如項目X1至項目X4中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述核酸分子包含RNA及/或DNA。

(項目X6)

如項目X1至項目X5中任一項所記載之預防或治療藥，其進而包含佐劑。

(項目X7)

如項目X1至項目X6中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述佐劑為Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

(項目X8)

如項目X1至項目X7中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤表現WT1。

(項目X9)

如項目X1至項目X8中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。

(項目X10)

如項目X1至項目X9中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。

(項目X11)

如項目X1至項目X10中任一項所記載之預防或治療藥，其特徵在於1週投予1次。

(項目X12)

一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法，其特徵在於包括如下步驟：於如上述項目X中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球，或者將如上述項目X中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該末梢血液單核球，自該末梢血液單核球誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目X13)

一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1呈現樹突狀細胞之誘導方法，其特徵在於包括如下步驟：於如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞，或者將如上述項目X中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，誘導WT1呈現樹突狀細胞。

(項目X13A)

如項目X12或13所記載之方法，其進而包含如項目X1至項目X11中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目X14)

一種用於誘導WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之組合物，其包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，用於預防或治療良性腫瘤。

(項目X15)

一種用於誘導WT1呈現樹突狀細胞之組合物，其包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，用於預防或治療良性腫瘤。

(項目X15A)

如項目X14或項目X15所記載之組合物，其進而包含如項目X1至項目X13中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目X16)

一種用於預防或治療良性腫瘤之組合物，其包含WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目X17)

一種用於預防或治療良性腫瘤之組合物，其包含WT1呈現樹突狀細胞。

(項目X17A)

如項目X16或項目X17所記載之組合物，其進而包含如項目X1至項目X13中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

又，本發明提供以下。

(項目1)

一種良性腫瘤之預防或治療藥，其包含WT1肽或其類似物。

(項目2)

如項目1所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物包含殺手型及/或輔助型。

(項目3)

如項目1或2所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物包含WT1₁₂₆殺手肽、WT1₂₃₅殺手肽及/或WT1₃₅輔助肽、或者包含於任一胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1個~數個胺基酸而成之胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。

(項目4)

如項目1至3中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係包含選自RMFPNAPYL(序列編號2)、RYFPNAPYL(序列編號46)、YMFPNAPYL(序列編號14)、CYTWNQMNL(序列編號45)、CMTWNQMNL(序列編號3)、C-CYTWNQMNL(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)、及C-CMTWNQMNL(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)中之任一胺基酸序列之肽、或其藥學上所容許之鹽。

(項目5)

如項目1至4中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目6)

如項目1至5中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目7)

如項目1至6中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係進而包含一種以上之包含選自由以下之胺基酸序列： WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)

所組成之群中之胺基酸序列之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。

(項目8)

如項目1至7中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽、及包含胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。

(項目9)

如項目1至8中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目10)

一種良性腫瘤之預防或治療藥，其包含編碼WT1肽或其類似物之核酸分子。

(項目11)

如項目10所記載之預防或治療藥，其中上述核酸分子包含RNA及/或DNA。

(項目12)

如項目1至11中任一項所記載之預防或治療藥，其進而包含佐劑。

(項目13)

如項目1至12中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述佐劑為Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

(項目14)

如項目1至13中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤表現WT1。

(項目15)

如項目1至14中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。

(項目16)

如項目1至15中任一項所記載之預防或治療藥，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。

(項目17)

如項目1至16中任一項所記載之預防或治療藥，其特徵在於1週投予1次。

(項目18)

一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法，其包括如下步驟：於如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球，或者將如上述項目中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該末梢血液單核球，自該末梢血液單核球誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目19)

一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1呈現樹突狀細胞之誘導方法，其包括如下步驟：於如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞，或者將如上述項目中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，誘導WT1呈現樹突狀細胞。

(項目19A)

如項目18或19所記載之方法，其進而包含如項目1至17中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目20)

(項目21)

(項目21A)

如項目20或21所記載之組合物，其進而包含如項目1至19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目22)

(項目23)

(項目23A)

如項目22或23所記載之組合物，其進而包含如項目1至19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目A1)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括對該受驗體投予有效量之WT1肽或其類似物之步驟。

(項目A2)

如項目A1所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物包含殺手型及/或輔助型。

(項目A3)

如項目A1或A2所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物包含 WT1₁₂₆殺手肽、WT1₂₃₅殺手肽及/或WT1₃₅輔助肽、或者包含於任一胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1個~數個胺基酸而成之胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。

(項目A4)

如項目A1至A3中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係包含選自RMFPNAPYL(序列編號2)、RYFPNAPYL(序列編號46)、YMFPNAPYL(序列編號14)、CYTWNQMNL(序列編號45)、CMTWNQMNL(序列編號3)、C-CYTWNQMNL(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)、及C-CMTWNQMNL(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)中之任一胺基酸序列之肽、或其藥學上所容許之鹽。

(項目A5)

如項目A1至A4中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目A6)

如項目A1至A5中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目A7)

如項目A1至A6中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係進而包含一種以上之包含選自由以下之胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)所組成之群中之胺基酸序列之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。

(項目A8)

如項目A1至A7中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目A9)

如項目A1至A8中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目A10)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括對該受驗體投予有效量之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之步驟。

(項目A11)

如項目A10所記載之方法，其中上述核酸分子包含RNA及/或DNA。

(項目A12)

如項目A1至A11中任一項所記載之方法，其中上述WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子與佐劑併用。

(項目A13)

如項目A1至A12中任一項所記載之方法，其中上述佐劑為 Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

(項目A14)

如項目A1至A13中任一項所記載之方法，其中上述良性腫瘤表現WT1。

(項目A15)

如項目A1至A14中任一項所記載之方法，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。

(項目A16)

如項目A1至A15中任一項所記載之方法，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。

(項目A17)

如項目A1至A16中任一項所記載之方法，其特徵在於上述WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子1週投予1次。

(項目A18)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括如下步驟：於如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球，或者將如上述項目中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該末梢血液單核球，藉此，自該末梢血液單核球誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞；及對該受驗體投予所生成之該WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目A19)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括如下步驟：於如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞，或者將如上述項目中任一項所記載之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，藉此，誘導WT1呈現樹突狀細胞；及對該受驗體投予所生成之該樹突狀細胞。

(項目A19A)

如項目A18或A19所記載之方法，其進而包含如項目A1至A17中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目A20)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括如下步驟：對該受驗體投予由WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子所誘導之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之有效量。

(項目A21)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括如下步驟：對該受驗體投予由WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子所誘導之WT1呈現樹突狀細胞之有效量。

(項目A21A)

如項目A20或A21所記載之方法，其進而包含如項目A1至A19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目A22)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括對該受驗體投予有效量之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之步驟。

(項目A23)

一種預防或治療受驗體之良性腫瘤之方法，其包括對該受驗體投予有效量之WT1呈現樹突狀細胞之步驟。

(項目A23A)

如項目A22或A23所記載之方法，其進而包含如項目A1至A19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目B1)

一種WT1肽或其類似物，其用於預防或治療良性腫瘤。

(項目B2)

如項目B1所記載之WT1肽或其類似物，其包含殺手型及/或輔助型。

(項目B3)

如項目B1或B2所記載之WT1肽或其類似物，其包含WT1₁₂₆殺手肽、WT1₂₃₅殺手肽及/或WT1₃₅輔助肽、或者包含於任一胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1個~數個胺基酸而成之胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。

(項目B4)

如項目B1至B3中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係包含選自RMFPNAPYL(序列編號2)、RYFPNAPYL(序列編號46)、YMFPNAPYL(序列編號14)、CYTWNQMNL(序列編號45)、CMTWNQMNL(序列編號3)、 C-CYTWNQMNL(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)、及C-CMTWNQMNL(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)中之任一胺基酸序列之肽、或其藥學上所容許之鹽。

(項目B5)

如項目B1至B4中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目B6)

如項目B1至B5中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目B7)

如項目B1至B6中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係進而包含一種以上之包含選自由以下之胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)

(項目B8)

如項目B1至B7中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係包含式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目B9)

如項目B1至B8中任一項所記載之WT1肽或其類似物，其係包含式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目B10)

一種編碼WT1肽或其類似物之核酸分子，其用於預防或治療受驗體之良性腫瘤。

(項目B11)

如項目B10所記載之核酸分子，其包含RNA及/或DNA。

(項目B12)

如項目B1至B11中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其與佐劑併用。

(項目B13)

如項目B1至B12中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其中上述佐劑為Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

(項目B14)

如項目B1至B13中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其中上述良性腫瘤表現WT1。

(項目B15)

如項目B1至B14中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。

(項目B16)

如項目B1至B15中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。

(項目B17)

如項目B1至B16中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者核酸分子，其特徵在於1週投予1次。

(項目B18)

如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者如上述項目中任一項所記載之核酸分子，其用於預防或治療良性腫瘤，用於誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞，且該WT1肽或其類似物與源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球一起培養，或者將該核酸分子導入至該末梢血液單核球，藉此，誘導該WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目B19)

如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者如上述項目中任一項所記載之核酸分子，其用於預防或治療良性腫瘤，用於誘導WT1呈現樹突狀細胞，且該WT1肽或其類似物與源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞一起培養，或者將該核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，藉此，誘導該WT1呈現樹突狀細胞。

(項目B19A)

如項目B18或B19所記載之WT1肽或其類似物、或核酸分子，其進而包含如項目B1至B17中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目B20)

一種WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，其用於預防或治療良性腫瘤，用於誘導WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目B21)

一種WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，其用於預防或治療良性腫瘤，用於誘導WT1呈現樹突狀細胞。

(項目B21A)

如項目B20或B21所記載之WT1肽或其類似物、或核酸分子，其進而包含如項目B1至B19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目B22)

一種WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞，其用於預防或治療受驗體之良性腫瘤。

(項目B23)

一種WT1呈現樹突狀細胞，其用於預防或治療受驗體之良性腫瘤。

(項目B23A)

如項目B22所記載之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞或B23所記載之WT1呈現樹突狀細胞，其進而包含如項目B1至B19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目C1)

一種WT1肽或其類似物之用途，其用於製造良性腫瘤之預防或治療藥。

(項目C2)

如項目C1所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物包含殺手型及/或輔助型。

(項目C3)

如項目C1或C2所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物包含WT1₁₂₆殺手肽、WT1₂₃₅殺手肽及/或WT1₃₅輔助肽、或者包含於任一胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1個~數個胺基酸而成之胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。

(項目C4)

如項目C1至C3中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係包含選自RMFPNAPYL(序列編號2)、RYFPNAPYL(序列編號46)、YMFPNAPYL(序列編號14)、CYTWNQMNL(序列編號45)、CMTWNQMNL(序列編號3)、C-CYTWNQMNL(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)、及C-CMTWNQMNL(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)中之任一胺基酸序列之肽、或其藥學上所容許之鹽。

(項目C5)

如項目C1至C4中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目C6)

如項目C1至C5中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係式(3)：[化2]

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。

(項目C7)

如項目C1至C6中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係進而包含一種以上之包含選自由以下之胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)

(項目C8)

如項目C1至C7中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目C9)

如項目C1至C8中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

(項目C10)

一種編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之用途，其用於製造良性腫瘤之預防或治療藥。

(項目C11)

如項目C10所記載之用途，其中上述核酸分子包含RNA及/或DNA。

(項目C12)

如項目C1至C11中任一項所記載之用途，其中上述WT1肽或其類似物、或者核酸分子與佐劑併用。

(項目C13)

如項目C1至C12中任一項所記載之用途，其中上述佐劑為Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

(項目C14)

如項目C1至C13中任一項所記載之用途，其中上述良性腫瘤表現WT1。

(項目C15)

如項目C1至C14中任一項所記載之用途，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。

(項目C16)

如項目C1至C15中任一項所記載之用途，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。

(項目C17)

如項目C1至C16中任一項所記載之用途，其特徵在於上述WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子1週投予1次。

(項目C18)

如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或者如上述項目中任一項所記載之核酸分子之用途，其用於製造用於預防或治療良性腫瘤之WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞，且該WT1肽或其類似物與源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球一起培養，或者將該核酸分子導入至該末梢血液單核球，藉此，誘導該WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目C19)

如上述項目中任一項所記載之WT1肽或其類似物、或如上述項目中任一項所記載之核酸分子之用途，其用於製造用於預防或治療良性腫瘤之WT1呈現樹突狀細胞，且該WT1肽或其類似物與源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞一起培養，或者將該核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，藉此，誘導該WT1呈現樹突狀細胞。

(項目C19A)

如項目C18或C19所記載之用途，其進而包含如項目C1至C17中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目C20)

一種WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子之用途，其用於製造用於預防或治療良性腫瘤之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

(項目C21)

一種WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子之用途，其用於製造用於預防或治療良性腫瘤之WT1呈現樹突狀細胞。

(項目C21A)

如項目C20或C21所記載之用途，其進而包含如項目C1至C19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

(項目C22)

一種WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之用途，其用於製造良性腫瘤之預防或治療藥。

(項目C23)

一種WT1呈現樹突狀細胞之用途，其用於製造良性腫瘤之預防或治療藥。

(項目C23A)

如項目C22或C23所記載之用途，其進而包含如項目C1至C19中任一項或複數項所記載之1個或複數個特徵。

於本發明中，意味著上述1個或複數個特徵除所明示之組合以外，亦可進而加以組合而提供。若視需要閱讀以下之詳細說明而瞭解，則業者瞭解本發明之進一步之實施形態及優點。

根據本發明，達成良性腫瘤之預防、延遲及治療。於例示性之實施形態中，藉由本發明，達成家族性大腸腺瘤病之預防、延遲及治療。於另一態樣中，藉由本發明，達成由良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之腺瘤所產生之症狀之預防、延遲及治療。

進而，本發明之WT1肽癌疫苗除投予部位之皮膚發紅、腫脹以外，無嚴重之副作用，安全性非常高。因此，WT1肽癌疫苗可安全且容易地投予至大部分良性腫瘤患者及家族性大腸腺瘤病患者，不論就患者之QOL(Quality of life，生活質量)之觀點而言，抑或就由避免內視鏡切除或手術所帶來之醫療費減輕之經濟效果之觀點而言，均可謂優於先前技術。

圖1係表示於人類家族性大腸腺瘤病患者之腺瘤中表現WT1蛋白質之顯微鏡照片。左邊之照片表示腺瘤組織之照片，右邊之照片表示正常腺管之照片。於兩張照片中，較淡之染色表示WT1蛋白質，較濃且染色成圓形之區域表示核。

圖2係表示APC^Min/+小鼠中之WT1蛋白質之表現之顯微鏡照片。自上往下依序表示5倍、10倍、20倍之倍率下之顯微鏡照片。各照片之左下方表示比例尺，自上往下依序表示500μm、250μm、100μm之長度。各組織之右下方之照片表示組織之整個圖像中放大之區域。於任一照片中，均較濃之染色表示WT1蛋白質，染色成圓形之區域表示核。

圖3係表示APC^Min/+小鼠中之WT1蛋白質之表現之顯微鏡照片。放大倍率為40倍，照片之左下方表示表示100μm之長度之比例尺。較濃之染色表示WT1蛋白質，染色成圓形之區域表示核。

圖4表示對APC^Min/+小鼠投予WT1肽疫苗之實驗之投予方案。上方之橫軸表示APC^Min/+小鼠之週齡、疫苗之投予時間、及使之安樂死並供於分析之時間。於上方之橫軸上，下部之數字表示小鼠之週齡，上部之較短之箭頭表示投予疫苗之時間，上部之較長之箭頭表示使之安樂死並供於分析之時間。橫軸之下方表示WT1疫苗與對照疫苗之組成。

圖5係表示由投予WT1肽疫苗所帶來之腺瘤之發病之抑制的圖表。圖表之縱軸表示每一小腸之腺瘤數，左側之散佈圖表示投予WT1肽疫苗之APC^Min/+小鼠之結果，右側之散佈圖表示投予對照疫苗之APC^Min/+小鼠之結果。各散佈圖中之橫線表示平均值，圖表之上部表示有意義差檢定之結果。

圖6係表示藉由投予WT1肽疫苗而WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加之圖表。圖表之縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度，左側之散佈圖表示投予WT1肽疫苗之APC^Min/+小鼠之結果，右側之散佈圖表示投予對照疫苗之APC^Min/+小鼠之結果。各散佈圖中之橫線表示平均值，圖表之上部表示有意義差檢定之結果。

圖7係表示WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之回歸分析之圖表。圖表之縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度，橫軸表示每一小腸之腺瘤數。各點係將WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之腺瘤數及WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度繪圖於圖表上而成者。圖表中之直線表示回歸直線，於右側自上往下依序表示相關係數(R)、回歸直線之函數式、決定係數(R²)。

圖8表示對APC^Min/+小鼠投予WT1肽疫苗之實驗之投予方案。上方之橫軸表示APC^Min/+小鼠之週齡、疫苗之投予時間、及使之安樂死並供於分析之時間。於上方之橫軸上，下部之數字表示小鼠之週齡，上部之較短之箭頭表示投予疫苗之時間，上部之較長之箭頭表示使之安樂死並供於分析之時間。橫軸之下方表示WT1疫苗與對照疫苗之組成。

圖9係表示於人類非遺傳性大腸腺瘤病患者之腺瘤中表現WT1蛋白質之顯微鏡照片。自左起第1張照片表示正常腺管之照片，右側3張照片分別表示自3名非遺傳性大腸腺瘤病患者所獲得之腺瘤組織之照片。於所有照片中，較淡之染色表示WT1蛋白質，較濃且染色成圓形或橢圓形之區域表示核。各照片之下方表示WT1蛋白質之表現水準，(-)表示表現水準較低，(+)表示表現水準較高。

圖10表示對APC^Min/+小鼠投予包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物之實驗的投予方案。橫軸表示APC^Min/+小鼠之週齡、疫苗之投予時間、及使之安樂死並供於分析之時間。於橫軸上，下部之數字表示小鼠之週齡，上部之箭頭表示投予疫苗之時間、及使之安樂死並供於分析之時間。

圖11係表示由投予包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物所帶來之腺瘤之發病之抑制的圖表。圖表之縱軸表示每一小腸之腺瘤數，左側之散佈圖表示投予WT1肽疫苗之APC^Min/+小鼠之結果，右側之散佈圖表示投予對照疫苗之APC^Min/+小鼠之結果。各散佈圖中之橫線表示平均值，圖表之上部表示有意義差檢定之結果。

圖12係表示藉由投予包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物而WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加之圖表。圖表之縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度，左側之散佈圖表示投予包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物之APC^Min/+小鼠的結果，右側之散佈圖表示投予對照疫苗之APC^Min/+小鼠之結果。各散佈圖中之橫線表示平均值，圖表之上部表示有意義差檢定之結果。

圖13係表示包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物投予群與對照疫苗投予群之回歸分析的圖表。圖表之縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度，橫軸表示每一小腸之腺瘤數。各點係將包含本說明書中式(3)所表示之化合物及WT1₃₅肽之混合物投予群與對照疫苗投予群之腺瘤數、及WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度繪圖於圖表上而成者。圖表中之直線表示回歸直線，於右側自上往下依序表示相關係數(R)、回歸直線之函數式、決定係數(R²)。

以下，一面示出最佳之形態一面說明本發明。應瞭解於本說明書之整體，單數形式之表現只要未特別提及，則亦包含其複數形式之概念。因此，應瞭解單數形式之冠詞(例如於英語之情形時，為「a」、「an」、「the」等)只要未特別提及，則亦包含其複數形式之概念。又，應瞭解本說明書中所使用之用語只要未特別提及，則以該領域中通常使用之含義使用。因此，只要未另外定義，則本說明書中所使用之所有專業用語及科學技術用語具有與本發明所屬之領域之業者一般瞭解者相同之含義。於發生矛盾之情形時，本說明書(包括定義在內)優先。

以下，適當說明本說明書中特別使用之用語之定義及/或基本技術內容。

(用語之定義)

於本說明書中，「WT1(Wilms Tumor Gene 1，Wilms腫瘤基因1)」、「WT1蛋白質」或「WT1肽」係指包含威爾姆斯瘤(WT1)基因產物或其類似物之至少一部分(可為全部)之多肽。作為「WT1蛋白質」，具體而言，代表性地可較佳地列舉包含449個胺基酸之人類WT1蛋白質(序列編號1)、或包含於該胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1個或數個(較佳為約2~6個)胺基酸而成之胺基酸序列之蛋白質。插入之胺基酸或置換之胺基酸可為由基因編碼之20種胺基酸以外之非天然胺基酸。「WT1肽」係指包含構成WT1蛋白質之一部分胺基酸序列之肽。於本說明書中，於稱為「WT1」或「WT1肽」之情形時，只要未特別說明，則包含變異型WT1。又，於本說明書中，於提及WT1或WT1肽之情形時，只要未特別說明，則係指人類之WT1。

本發明中所使用之WT1肽之長度並無特別限定，較佳為包含約7個~約30個胺基酸者。較佳之WT1肽具有與HLA分子結合所呈現之抗原肽之序列之規則性(模體(motif))，具有與HLA分子之結合能力。與HLA分子之結合能力可利用該技術領域中已知之方法調查。作為此種方法，例如有Rankpep、BIMAS、SYFPEITHI等利用電腦之方法、與具有對HLA分子之結合能力之已知之WT1肽之競爭結合試驗等。作為本發明中可使用之WT1肽，於本說明書中(WT1肽)之項進行說明，於WO2016/093326中亦進行說明，該等係以參考之形式引用。

本發明中所使用之較佳之WT1肽係使殺手T細胞及/或輔助 T細胞活化。殺手T細胞及/或輔助T細胞之活化可單獨之肽負責，亦可複數種肽負責(分工)。又，本發明之醫藥組合物中所使用之WT1肽可為1種，亦可為複數種。又，本發明之醫藥或醫藥組合物中所使用之WT1肽可為殺手WT1肽，或者可為輔助WT1肽，亦可將該等進行混合而使用。本發明之WT1肽可為單獨之肽，亦可為複數種肽之偶聯物、混合物或組合。作為更佳之WT1肽，可包含殺手WT1肽與輔助WT1肽之組合。例如作為此種組合之例，可列舉WO2014/157692中所記載之化合物或組合物等。

於本說明書中，「良性腫瘤」係病理學上不具有惡性所見之腫瘤，瞭解與惡性腫瘤不同。不表現出轉移或浸潤傾向。良性腫瘤之診斷不一定意味著臨床預後良好。例如腦幹部產生之低非典型性腦膜瘤為良性腫瘤，但難以治療，且壓迫腦幹而預後不良，故而為臨床惡性，因此多數情況下亦必需治療或預防。作為良性腫瘤，可列舉：家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、或胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤等，但並不限定於該等。

於本說明書中，「家族性大腸腺瘤病」、「家族性結腸息肉病」、「家族性腺瘤樣息肉病」或「FAP」之用語可互換使用，係指以抑癌基因APC(adenoma polyposis coli，腺瘤性結腸息肉)之變異為特徵，腸道形成多個腺瘤之遺傳病，分類為良性腫瘤。於本說明書中，家族性大腸腺瘤病亦包含Gardner綜合征等腸道以外之組織之腫瘤併發之疾病。作為代表性家族性大腸腺瘤病之模型動物，可列舉APC^Min/+小鼠(Jackson研究所，Bar Harbor，Maine，USA)，但並不限定於此。

於本說明書中，「殺手型」、「殺手肽」等用語意指具有使細胞毒殺性T細胞(CTL、殺手T細胞)活化之能力之肽。殺手T細胞之活化係指殺手T細胞所具有之細胞毒殺活性增大，及/或殺手T細胞之數量增大。是否為「殺手(型)」代表性地藉由以下之試驗而判定。即，可藉由利用流式細胞儀等方法，於T細胞之表面表現CD8而判定。代替性地，亦可藉由利用⁵¹Cr釋出分析及乳酸脫氫酶(LDH)分析等而測定目標細胞毒殺活性而判定。於較佳之實施形態中，本發明之WT1肽具有該殺手型活性。

MHC於人類中被稱為人類白血球型抗原(HLA)。相當於MHC I類分子之HLA分為HLA-A、B、Cw、F及G等。作為「MHC I類拘束性」，較佳為可列舉：HLA-A拘束性、HLA-B拘束性或HLA-Cw拘束性。

關於HLA之各亞型，已知有多型(對偶基因)。作為HLA-A之多型，可列舉：HLA-A1、HLA-A0201、HLA-A24等27種以上，作為HLA-B之多型，可列舉：HLA-B7、HLA-B40、HLA-B4403等59種以上，作為HLA-Cw之多型，可列舉：HLA-Cw0301、HLA-Cw0401、HLA-Cw0602等10種以上。於該等多型中，較佳為可列舉HLA-A0201或HLA-A24。

本發明中之「WT1肽」係包含序列編號1所記載之人類之WT1之胺基酸序列中連續之7~30個殘基之胺基酸的部分肽。

本發明中之「MHC I類拘束性」意指與作為主要組織相容性抗原(Major Histocompatibility Complex，MHC)之I類之MHC I類分子結合而誘導CTL的特性。「MHC I類拘束性WT1肽」係於體外及/或體內與MHC I類抗原結合，以複合體之形式呈現之肽，且意指該複合體被前驅物T細胞識別，結果誘導CTL之肽，故而與WT1殺手肽同義。「MHCI類拘束性WT1肽」之胺基酸殘基為7~30，較佳為7~15，更佳為8~12，進而較佳為8~11，最佳為8或9。

作為「MHC I類拘束性WT1肽」，例如可列舉：於序列編號1所表示之人類WT1之胺基酸序列中自2位、3位、4位、6位、7位、10位、17位、18位、20位、23位、24位、26位、29位、30位、32位、33位、37位、38位、39位、40位、47位、63位、64位、65位、70位、73位、80位、81位、82位、83位、84位、85位、86位、88位、92位、93位、96位、98位、99位、100位、101位、104位、107位、110位、118位、119位、120位、123位、125位、126位、128位、130位、136位、137位、138位、139位、141位、143位、144位、146位、152位、161位、163位、165位、168位、169位、174位、177位、179位、180位、185位、187位、191位、192位、194位、202位、204位、206位、207位、208位、209位、210位、211位、213位、217位、218位、219位、221位、222位、223位、225位、227位、228位、230位、232位、233位、235位、239位、240位、242位、243位、244位、250位、251位、252位、260位、261位、263位、269位、270位、272位、273位、276位、278位、279位、280位、285位、286位、287位、289位、292位、293位、294位、295位、298位、299位、301位、302位、303位、306位、309位、312位、313位、315位、316位、317位、318位、319位、324位、325位、326位、327位、329位、332位、334位、337位、340位、343位、345位、347位、349位、351位、354位、356位、358位、362位、363位、364位、366位、368位、371位、372位、373位、375位、379位、383位、384位、386位、387位、389位、390位、391位、 394位、396位、401位、406位、408位、409位、410位、412位、415位、416位、417位、418位、419位、420位、423位、424位、425位、426位、427位、428位、429位、432位、433位、434位、436位、437位、439位、440位或441位開始之9個胺基酸殘基之肽、或包含其改型體之肽(參照國際公開第2014/157692號)。國際公開第2014/157692號係其整體以參考之形式引用至本說明書中。

作為「MHC I類拘束性WT1肽」，較佳為可列舉：包含選自以下之胺基酸序列：RMFPNAPYL(序列編號2)、CMTWNQMNL(序列編號3)、ALLPAVPSL(序列編號52)、SLGEQQYSV(序列編號53)及RVPGVAPTL(序列編號54)

中之任一胺基酸序列之肽、或包含於選自序列編號2、3、52、53及54中之任一胺基酸序列中含有胺基酸殘基之改型之改型胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。進而較佳為可列舉包含選自序列編號2、3、52、53及54中之任一胺基酸序列之肽。

於本發明中之「WT1肽或其類似物」為殺手肽之情形時，意指包含於胺基酸序列中含有胺基酸殘基之改型之改型胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽。

本發明中之「包含於胺基酸序列中含有胺基酸殘基之改型之改型胺基酸序列且具有CTL誘導活性之肽」亦被稱為「改型殺手肽」。該改型殺手肽意指包含於胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1~3個胺基酸而成之胺基酸序列，與MHC I類結合，誘導CTL之肽。作為被置換之胺基酸之置換位置，於為包含9個殘基之胺基酸序列之肽之情形時，可列舉：1位(N末端)、2位、3位及9位。附加(亦包含插入)之胺基酸之數量通常為1個~數個，較佳為1~3個，更佳為1個或2個，進而較佳為1個。作為較佳之附加位置，可列舉C末端。缺失之胺基酸之數量較佳為1。改型中附加之胺基酸或置換之胺基酸可為由基因所編碼之20種胺基酸以外之非天然胺基酸。

作為改型殺手肽，例如可列舉如下所述之肽。

作為RMFPNAPYL(序列編號2)之改型殺手肽之RYFPNAPYL(序列編號46)(參照國際公開第2003/106682號)；FMFPNAPYL(序列編號13)、RLFPNAPYL(序列編號18)、RMMPNAPYL(序列編號25)、RMFPNAPYV(序列編號28)或YMFPNAPYL(序列編號14)(參照國際公開第2009/072610號)；作為CMTWNQMNL(序列編號3)之改型殺手肽之CYTWNQMNL(序列編號45)(參照國際公開第2002/79253號)；Xaa-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(序列編號55)(本序列中Xaa表示Ser或Ala)或Xaa-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(序列編號56)(本序列中Xaa表示Ser、Ala、Abu、Arg、Lys、Orn、Cit、Lue、Phe或Asn)(參照國際公開第2004/026897號)；作為ALLPAVPSL(序列編號52)之改型殺手肽之 AYLPAVPSL(序列編號57)(參照國際公開第2003/106682號)；作為SLGEQQYSV(序列編號53)之改型殺手肽之FLGEQQYSV(序列編號58)、SMGEQQYSV(序列編號59)或SLMEQQYSV(序列編號60)(參照國際公開第2009/072610號)；或作為RVPGVAPTL(序列編號54)之改型殺手肽之RYPGVAPTL(序列編號61)(參照國際公開2003/106682號)。

作為不為包含序列編號：1所記載之人類之WT1之胺基酸序列中連續之8~35個殘基之胺基酸之部分肽的胺基酸序列，例如可列舉如下所述之胺基酸序列(參照國際公開2007/063903號)。

C-CYTWNQMNL(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)或C-CMTWNQMNL(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)。

於本發明之改型殺手肽中，例如如下所述之二聚物亦包含多聚肽(參照國際公開第2014/157692號)。

式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物、式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物、或式(4)

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物。

於本說明書中，「輔助型」、「輔助肽」等用語意指具有使輔助T細胞活化之能力之肽。輔助T細胞之活化係指輔助T細胞所具有之輔助B細胞之抗體產生或殺手T細胞之活化等的功能增大，及/或輔助T細胞之數量增大。是否為「輔助(型)」代表性地藉由以下之試驗而判定。即，可藉由利用流式細胞儀等方法，於T細胞之表面表現CD4而判定。代替性地，亦可藉由利用免疫染色法分析以抗原刺激目標細胞，抗原特異性地產生IFN-α及IFN-γ等細胞激素而判定。

本發明中之「MHC II類拘束性」意指與MHC II類分子結合而誘導輔助T細胞之特性。

相當於MHC II類分子之HLA分為HLA-DR、DQ及DP等亞型。作為「MHC II類拘束性」，較佳為可列舉：HLA-DR拘束性、HLA-DQ拘束性或HLA-DP拘束性。

因此，本發明中之「MHC II類拘束性WT1肽」tp意指於體外及/或體內與MHC II類抗原結合，誘導輔助T細胞之肽。「MHC II類拘束性WT1肽」之胺基酸殘基數為7~30，較佳為14~30。

於本發明中之「WT1肽或其類似物」為輔助肽之情形時，意指包含於胺基酸序列中含有胺基酸殘基之改型之改型胺基酸序列且具有輔助T細胞誘導活性之肽。

本發明中之「包含於胺基酸序列中具有胺基酸殘基之改型之改型胺基酸序列且具有輔助T細胞誘導活性之肽」亦被稱為「改型輔助肽」。該改型輔助肽意指包含於胺基酸序列中缺失、置換及/或附加1~3個胺基酸而成之胺基酸序列，與MHC II類結合，誘導輔助T細胞之肽。附加(亦包含插入)之胺基酸之數量較佳為1~3。缺失之胺基酸之數量較佳為1~5。改型中附加之胺基酸或置換之胺基酸可為由基因所編碼之20種胺基酸以外之非天然之胺基酸。

作為改型輔助肽，例如可列舉如下所述之肽。

作為SGQARMFPNAPYLPSCLES(序列編號69)之改型輔助肽之SGQAYMFPNAPYLPSCLES(序列編號70)(參照國際公開第2004/063217號)SGQARMFPNAPYLPSC(序列編號71)或SGQAYMFPNAPYLPSC(序列編號72)；或者PGCNKRYFKLSHLQMHSRK(序列編號49)、PGCNKRYFKLSHLQMHSRKH(序列編號62)、CNKRYFKLSHLQMHSRK(序列編號64)、CNKRYFKLSHLQMHSRKH(序列編號65)或CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(序列編號66)；或者WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)或WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)。

本發明之「WT1肽或其類似物」藉由採用殺手肽與輔助肽之組合物，亦具有殺手型及輔助型兩者之活性。作為殺手型及輔助型兩者之活性者，例如可列舉如下所述者。

包含一種以上之選自由式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物、式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物、及式(4)

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)所表示之化合物所組成之群中之化合物、或其藥學上所容許之鹽、及包含選自由以下之胺基酸序列：CNKRYFKLSHLQMHSRK(序列編號63)、CNKRYFKLSHLQMHSRKH(序列編號64)、CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(序列編號65)、WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)

所組成之群中之胺基酸序列之肽、或其藥學上所容許之鹽的組合物；包含式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽、及包含胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物；及包含式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

於本說明書中，「佐劑」意指對於主劑(例如本發明中之WT1肽)之助劑。於本發明中，佐劑係指於治療藥或預防藥中增強或改良WT1肽所引起之免疫應答之物質。於本發明中，作為佐劑，例如可為氫氧化鈉、氫氧化鋁、磷酸鈣、磷酸鋁、明礬、PEPES或羧基乙烯基聚合物等沈澱性佐劑，或者亦可為液態石蠟、羊毛脂、弗氏、Montanide ISA763AVG、Montanide ISA51、弗氏不完全佐劑或弗氏完全佐劑等油性佐劑。

於本說明書中，「腺瘤」係指息肉中癌化之危險性較高者。「息肉」係指形成於小腸、大腸或直腸等腸組織之內壁的蘑菇狀或疣狀之隆起性病變之統稱。腺瘤為腫瘤性息肉，變化為大腸癌等癌之危險性較高。

於腺瘤中，大腸中發病之腺瘤被統稱為「大腸腺瘤」。作為大腸腺瘤，存在有遺傳性大腸腺瘤(例如家族性大腸腺瘤病等)及非遺傳性大腸腺瘤病。「非遺傳性大腸腺瘤病」係指不以APC基因中之變異為特徵，以生活習慣、飲食生活、飲酒、吸煙、壓力等為要因，於腸道形成多個腺瘤之疾病，被分類為良性腫瘤。

於在本說明書中使用之情形時，「治療」係指阻止已經發病之本發明之目標疾病、障礙或症狀之發展，較佳為將其治癒。關於治療效果之判定，可根據「用於判定實體癌之治療效果之新準則」(RECIST)<可自http：//www.jcog.jp/doctor/tool/C 150 0010.pdf獲得>或其最新版進行。藉由WHO或RECIST基準之斟酌效果之定義如下所示。

WHO=World Health Organization(世界衛生組織)、RECIST=Response Evaluation Criteria in Solid Tumors(實體癌之效果判定準則)、CR=complete response(完全奏效)、PR=partial response(部分奏效)、SD=stable disease(穩定)，PD=progressive disease(發展)

於本說明書中，「治療藥(劑)」廣義上係指可治療目標狀態(例如家族性大腸腺瘤病等疾病等)之所有藥劑。於本發明之一實施形態中，「治療藥」可為包含有效成分、及藥理學上所容許之1種或其以上之載體之醫藥組合物。醫藥組合物例如可將有效成分與上述載體進行混合，利用製劑學之技術領域中已知之任意之方法製造。又，治療藥只要為用於治療者，則使用形態並無限定，可單獨為有效成分，亦可為有效成分與任意成分之混合物。又，上述載體之形狀並無特別限定，例如可為固體或液體(例如緩衝液)。

於在本說明書中使用之情形時，「預防」係指於本發明之目標疾病、障礙或症狀發生之前，利用某些方法，不產生該疾病、障礙或症狀或至少使其延遲，或者使之成為即便產生疾病、障礙或症狀之原因本身，亦不產生由其引起之障礙之狀態。

於本說明書中，「預防藥(劑)」廣義上係指可預防目標狀態(例如家族性大腸腺瘤病等疾病等)之所有藥劑。

於在本說明書中使用之情形時，「改善」係指完全或部分地終止或減輕已經發病之本發明之目標疾病、障礙或症狀之發展。

於本說明書中，「受驗體(者)」係指成為本發明之預防或治療等之對象者(例如人類等生物或自生物取出之細胞、血液、血清等)。

於本說明書中，「末梢血液單核球」或「PBMC」係指包含自末梢血液分離之單核球或淋巴細胞之單核球或單核細胞。末梢血液單核球包含T細胞、B細胞、NK細胞、單核球及樹突狀細胞等多種血球細胞。藉由刺激末梢血液單核球，可分化為細胞毒殺性T細胞或輔助T細胞等。

於本說明書中，例如將對WT1特異性之細胞毒殺性T細胞及輔助T細胞分別稱為「WT1特異性細胞毒殺性T細胞」及「WT1特異性輔助T細胞」。藉由使用本發明中所記載之WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，可誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞及/或WT1特異性輔助T細胞。

於本說明書中，「未成熟樹突狀細胞」係指藉由使肽、細胞等致敏，可呈現針對該肽或細胞等之抗原的樹突狀細胞。藉由刺激未成熟樹突狀細胞，可分化為呈現特定肽之樹突狀細胞等。

於本說明書中，例如將呈現WT1之樹突狀細胞分別稱為「WT1呈現樹突狀細胞」。藉由使用本說明書中所記載之WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，可誘導WT1呈現樹突狀細胞。

抗原呈現細胞或殺手T細胞或輔助T細胞之誘導或活化方法為業者所公知。於體內，可藉由將WT1肽投予至對象而對該等細胞進行誘導或活化。於體外，例如可藉由使包含源自對象之淋巴細胞之試樣與WT1肽和HLA分子之複合體進行反應，而獲得殺手T細胞。又，例如亦可於WT1肽之存在下培養源自對象之末梢血液單核球，自該末梢血液單核球誘導WT1特異性CTL。又，例如亦可藉由於WT1肽之存在下培養源自對象之未成熟抗原呈現細胞，經由HLA分子而誘導呈現WT1肽之抗原呈現細胞。未成熟抗原呈現細胞係指可以成熟而成為抗原呈現細胞之細胞，可例示未成熟樹突狀細胞等。又，例如亦可將WT1肽添加至抗原呈現細胞，使輔助T細胞活化。本發明之醫藥或組合物中所使用之抗原呈現細胞或殺手T細胞或輔助T細胞可為使用任一WT1肽或其衍生物、或者核酸分子所誘導或活化者。可將如此誘導或活化之抗原呈現細胞或殺手T細胞或輔助T細胞投予至對象、較佳為獲得該等細胞之對象，進行良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防。

本說明書中所使用之(WT1肽等之)「類似物」、「衍生物」、「類似物」或「變異體」並無限定，較佳為含有包含與成為對象之蛋白質(例如WT1肽)實質上同源之區域之分子，此種分子係於各種實施形態中，於同一尺寸之胺基酸序列中，或於與利用該領域中公知之電腦同源性程式進行比對而比對之序列進行比較時，至少30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90%、95%或99%一致，或者編碼此種分子之核酸可於(高度)嚴格之條件、中度嚴格之條件、或不嚴格之條件下，與編碼構成要素蛋白質之序列雜交。其係分別藉由胺基酸置換、缺失及附加而將蛋白質改型而成之產物，意指其衍生物可不一定為相同之程度但仍表現出原本之蛋白質之生物功能的蛋白質。例如藉由本說明書中所記載或該領域中公知之適當且可利用之體外分析，亦可調查此種蛋白質之生物功能。本說明書中所使用之「功能上活性」或「具有功能活性」係指於本說明書中，本發明之多肽、即片段或衍生物根據相關之態樣，具有生物活性等蛋白質之結構功能、控制功能或生化功能。

於本發明中，WT1肽之片段係包含WT1肽之任意之區域之多肽，只要作為本發明之目標(例如肽疫苗)發揮作用，則可不一定具有天然WT1肽之所有生物功能。

於本說明書中，「蛋白質」、「多肽」、「寡肽」及「肽」於本說明書中以相同之含義使用，係指任意之長度之胺基酸之聚合物。該聚合物可為直鏈，可為支鏈，亦可為環狀。胺基酸可為天然者，可為非天然者，亦可為經改型之胺基酸。又，該用語可包含與複數條多肽鏈之複合體裝配而成者。又，該用語亦包含天然或人工改型而成之胺基酸聚合物。作為此種改型，例如包含雙硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或者任意之其他操作或改型(例如與標記成分之結合體化)。又，該定義例如包含：包含胺基酸之1種或2種以上之類似物之多肽(例如包含非天然胺基酸等)、肽樣化合物(例如類肽)及該領域中公知之其他改型。於本說明書中，「胺基酸」係具有胺基及羧基之有機化合物之統稱。於本發明之實施形態之蛋白質或酵素包含「特定之胺基酸序列」時，該胺基酸序列中之任一胺基酸可受到化學修飾。又，該胺基酸序列中之任一胺基酸亦可形成鹽或溶劑合物。又，該胺基酸序列中之任一胺基酸可為L型或D型。於此種情形時，亦可謂本發明之實施形態之蛋白質包含上述「特定之胺基酸序列」。作為蛋白質中所包含之胺基酸於生物內受到之化學修飾，例如已知有N末端修飾(例如乙醯化、肉豆蔻醯化等)、C末端修飾(例如醯胺化、糖基磷脂醯肌醇附加等)、或側鏈修飾(例如磷酸化、糖鏈附加等)等。胺基酸只要滿足本發明之目的，則可為天然者，亦可為非天然者。

於本說明書中，「聚核苷酸」、「寡核苷酸」及「核酸」於本說明書中以相同之含義使用，係指任意之長度之核苷酸之聚合物。又，該用語包含「寡核苷酸衍生物」或「聚核苷酸衍生物」。「寡核苷酸衍生物」或「聚核苷酸衍生物」係指包含核苷酸之衍生物，或者核苷酸之間之鍵與通常不同之寡核苷酸或聚核苷酸，可互換使用。作為此種寡核苷酸，具體而言，例如可例示：2'-O-甲基-核糖核苷酸、寡核苷酸中之磷酸二酯鍵轉換為硫代磷酸酯鍵而成之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之磷酸二酯鍵轉換為N3'-P5'亞磷醯胺鍵而成之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之核糖與磷酸二酯鍵轉換為肽核酸鍵而成之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之尿嘧啶經C-5丙炔基尿嘧啶置換之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之尿嘧啶經C-5噻唑尿嘧啶置換之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之胞嘧啶經C-5丙炔基胞嘧啶置換之寡核苷酸衍生物、寡核苷酸中之胞嘧啶經啡

修飾胞嘧啶(phenoxazine-modified cytosine)置換之寡核苷酸衍生物、DNA中之核糖經2'-O-丙基核糖置換之寡核苷酸衍生物、及寡核苷酸中之核糖經2'-甲氧基乙氧基核糖置換之寡核苷酸衍生物等。除非另有說明，又，特定之核酸序列與明確表示之序列同樣地，意味著包含其保守性改型而成之改型體 (例如退化密碼子置換物)及互補序列。具體而言，退化密碼子置換物可藉由製作1種或其以上之所選擇之(或所有)密碼子之第3個位置經混合鹼基及/或脫氧肌苷殘基取代之序列而達成(Batzer et al.,Nucleic Acid Res.19：5081(1991)；Ohtsuka et al.,J.Biol.Chem.260：2605-2608(1985)；Rossolini et al.,Mol.Cell.Probes 8：91-98(1994))。於本說明書中，又，「核酸」係與基因、cDNA、mRNA、寡核苷酸及聚核苷酸可互換地使用。於本說明書中，「核苷酸」可為天然者，亦可為非天然者。

於本說明書中，「基因」係指規定遺傳性狀之因子，「基因」有時指「聚核苷酸」、「寡核苷酸」及「核酸」。

於本說明書中，基因之「同源性」係指2個以上之基因序列相對於相互之一致性之程度，一般，具有「同源性」係指一致性或類似性之程度較高。因此，某2個基因之同源性越高，則該等序列之一致性或類似性越高。2種基因是否具有同源性可藉由序列之直接比較而調查，或者於核酸之情形時，可利用嚴格之條件下之雜交法調查。於直接比較2個基因序列之情形時，於該基因序列間DNA序列代表性地至少50%一致之情形時，較佳為於至少70%一致之情形時，更佳為於至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之情形時，該等基因具有同源性。因此，於本說明書中，「同源物」或「同源基因產物」意指發揮與本說明書中進而記載之複合體之蛋白質構成要素相同之生物功能之另一物種、較佳為哺乳動物、更佳為人類中之蛋白質。又，此種同源物亦有時亦稱為「直系同源基因產物」。瞭解只要符合本發明之目的，則亦可使用此種同源物、同源基因產物、直系同源基因產物等。

胺基酸可利用其一般公知之3種字元符號或IUPAC-IUB生化命名委員會(Biochemical Nomenclature Commission)所建議之1種字元符號中之任一種，於本說明書中提及。核苷酸亦同樣地，可藉由一般瞭解之1種字元碼而提及。於本說明書中，胺基酸序列及鹼基序列之類似性、一致性及同源性之比較係使用作為序列分析用工具之BLAST，使用缺省參數而算出。一致性之檢索例如可使用NCBI之BLAST2.7.1(2017.10.19發行)進行。本說明書中之「一致性」之值通常指使用上述BLAST，於缺省條件下進行比對時之值。但是，於藉由參數之變更而出現更高之值之情形時，將最高之值設為一致性之值。於在複數個區域評價一致性之情形時，將其中之最高之值設為一致性之值。「類似性」係除一致性以外，亦將類似之胺基酸計算在內之數值。

於本發明之一實施形態中，「數個」例如可為10、8、6、5、4、3或2個，亦可為該等任一值以下。已知受到1個或數個胺基酸殘基之缺失、附加、插入、或藉由其他胺基酸之置換之多肽維持其生物活性(Mark et al.,Proc Natl Acad Sci USA.1984 Sep；81(18)：5662-5666.、Zoller et al.,Nucleic Acids Res.1982 Oct 25；10(20)：6487-6500.、Wang et al.,Science.1984 Jun 29；224(4656)：1431-1433.)。經缺失等之蛋白質例如可利用定點突變法、隨機突變法、或使用蛋白質噬菌體庫之生物淘選法等而製作。作為定點突變法，例如可使用KOD-Plus-Mutagenesis Kit(TOYOBO CO.,LTD.)。自導入有缺失等之變異型蛋白質選擇具有與野生型相同之活性之蛋白質可藉由進行FACS(Fluorescence activated Cell Sorting，螢光激活細胞分選)分析或ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，酵素結合免疫吸附分析)等各種特性化而實現。

於本發明之一實施形態中，作為一致性等之數值之「70%以上」例如可為70%以上、75%以上、80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、99%以上或100%，亦可為該等成為起點之數值之任意2個值之範圍內。上述「一致性」係按照如上所述之公知之方法計算2個或複數間胺基酸序列中同源之胺基酸數之比率。若具體進行說明，則於計算比率之前，使要比較之胺基酸序列群之胺基酸序列對齊，為了使同一胺基酸之比率最大，必要之情形時於一部分胺基酸序列導入間隙。用於對齊之方法、比率之計算方法、比較方法、及與該等相關之電腦程式係於該領域中自先前以來眾所周知(例如上述BLAST等)。於本說明書中，「一致性」及「類似性」只要未特別說明，則可以藉由NCBI之BLAST所測定之值表示。於利用BLAST比較胺基酸序列時之演算法中，可以缺省設定而使用Blastp。測定結果係以相似性或一致性之形式數值化。

於本說明書中，「於嚴格(之)條件下進行雜交之聚核苷酸」係指該領域中慣用之周知之條件。藉由以選自本發明之聚核苷酸中之聚核苷酸作為探針，使用菌落雜交法、噬菌斑雜交法或南方墨點雜交法等，可獲得此種聚核苷酸。具體而言，意指如下聚核苷酸：藉由使用將源自菌落或噬菌斑之DNA固定化之過濾器，於0.7~1.0M之NaCl存在下，於65℃下進行雜交後，使用0.1~2倍濃度之SSC(saline-sodiumcitrate，鹽水檸檬酸鈉)溶液(1倍濃度之SSC溶液之組成為150mM氯化鈉、15mM檸檬酸鈉)，於65℃條件下清洗過濾器而可鑑定。「嚴格之條件」例如可採用於下之條件。(1)為了進行清洗，使用低離子強度及高溫度(例如於50℃下使用0.015M之氯化鈉/0.0015M之檸檬酸鈉/0.1%之十二烷基硫酸鈉)；(2)於雜交中使用甲醯胺等改性劑(例如於42℃下使用50%(v/v)甲醯胺與0.1%牛血清白蛋白/0.1%聚蔗糖/0.1%之聚乙烯吡咯啶酮/50mM之pH值6.5之磷酸鈉緩衝液、及750mM之氯化鈉、75mM檸檬酸鈉)；或(3)於包含20%甲醯胺、5×SSC、50mM磷酸鈉(pH值7.6)、5×鄧哈特溶液、10%硫酸葡聚糖及20mg/ml之改性剪切大馬哈魚精子DNA之溶液中，於37℃下培養一晚，其次於約37-50℃下利用1×SSC清洗過濾器。再者，甲醯胺濃度可為50%或其以上。清洗時間可為5、15、30、60或120分鐘、或者該等以上。作為影響雜交反應之嚴格度之要素，考慮溫度、鹽濃度等複數個要素，詳細內容可參照Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,Wiley Interscience Publishers,(1995)。「高度嚴格之條件」之例係0.0015M氯化鈉、0.0015M檸檬酸鈉、65~68℃、或0.015M氯化鈉、0.0015M檸檬酸鈉及50%甲醯胺、42℃。可依據雜交、Molecular Cloning 2nd ed.,Current Protocols in Molecular Biology,Supplement 1-38,DNA Cloning 1：Core Techniques,A Practical Approach,Second Edition,Oxford University Press(1995)等實驗書中所記載之方法進行。此處，較佳為自於嚴格之條件下進行雜交之序列排除僅包含A序列或僅包含T序列之序列。中度嚴格之條件例如可基於DNA之長度，由業者容易地決定，示於Sambrook等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第3號，Vol.1,7.42-7.45 Cold Spring Harbor Laboratory Press,2001，而且，關於硝化纖維素過濾器，包含使用5×SSC、0.5% SDS、1.0mM之EDTA(pH值8.0)之預清洗溶液、約40-50℃下之約50%甲醯胺、2×SSC-6×SSC(或約42℃下之約50%甲醯胺中之Stark溶液(Stark's solution)等其他相同之雜交溶液)之雜交條件；及約60℃、0.5×SSC、0.1% SDS之清洗條件。因此，本發明中所使用之多肽亦包含由於高度或中度嚴格之條件下與編碼本發明中特別記載之多肽之核酸分子雜交之核酸分子所編碼的多肽。

本發明之WT1肽較佳為可為「純化」或「單離」者。於本說明書中，「純化之」物質或生物因子(例如核酸或蛋白質等)係指去除天然伴隨該物質或生物因子之至少一部分因子而成者。因此，通常，純化之生物因子中之該生物因子之純度高於該生物因子通常存在之狀態(即濃縮)。本說明書中所使用之用語「純化」意指存在較佳為至少75重量%、更佳為至少85重量%、進而更佳為至少95重量%、而且最佳為至少98重量%之同型生物因子。本發明中所使用之物質或生物因子較佳為「純化之」物質。本說明書中所使用之「單離之」物質或生物因子(例如核酸或蛋白質等)係指實質上去除天然伴隨該物質或生物因子之因子而成者。本說明書中所使用之用語「單離」根據其目的進行變動，故而無須一定以純度表示，必要之情形時，意指存在較佳為至少75重量%、更佳為至少85重量%、進而更佳為至少95重量%、而且最佳為至少98重量%之同型生物因子。本發明中所使用之物質較佳為「單離之」物質或生物因子。

於本說明書中，「片段」係指相對於全長之多肽或聚核苷酸(長度為n)，具有1~n-1之序列長度之多肽或聚核苷酸。片段之長度可根據其目的而適當變更，例如作為其長度之下限，於為多肽之情形時，可列舉3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50個及其以上之胺基酸，又，此處未具體列舉之整數所表示之長度(例如11等)亦可適合作為下限。又，於為聚核苷酸之情形時，可列舉5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100個及其以上之核苷酸，又，此處未具體列舉之整數所表示之長度(例如11等)亦可適合作為下限。瞭解於本說明書中，此種片段例如於全長者作為癌疫苗發揮作用之情形時，只要該片段本身亦具有作為癌疫苗之功能，則落入至本發明之範圍內。

於本說明書中，關於「生物功能」，對某一基因或與其相關之核酸分子或多肽提及時，係指該基因、核酸分子或多肽於生物內或生物外可具有之特定之功能，其中，例如可列舉殺手T細胞或輔助T細胞之活化等，但並不限定於該等。於本說明書中，生物功能可藉由對應之「生物活性」而發揮。於本說明書中，「生物活性」係指某一因子(例如聚核苷酸、蛋白質等)可具有之活性，包含發揮各種功能(例如殺手T細胞或輔助T細胞之活化)之活性。「生物活性」可為於生物內發揮之活性，亦可為藉由分泌等而於生物外發揮之活性。例如於某一因子為酵素之情形時，其生物活性包含該酵素活性。此種生物活性可利用該領域中周知之技術測定。因此，「活性」係指表示或明確結合(直接或間接中之任一種)或者影響應答(即，多少具有應答暴露或刺激之可測定之影響)之各種可測定之指標，例如亦可包含與本發明之多肽或聚核苷酸直接結合之化合物之親和性、或者例如某些刺激後或現象後之上游或下游之蛋白質之量或其他類似之功能之標準。

於本說明書中，基因、聚核苷酸、多肽等之「表現」係指該基因等於體內受到一定之作用而成為另一形態。較佳為指基因、聚核苷酸等進行轉錄及轉譯而成為多肽之形態，又，進行轉錄而製作mRNA亦為表現之一態樣。因此，於本說明書中，「表現產物」包含此種多肽或蛋白質、或mRNA。更佳為此種多肽之形態可為轉譯後受到處理者。例如WT1之表現水準可利用任意之方法決定。具體而言，藉由評價WT1之mRNA之量、WT1蛋白質之量以及WT1蛋白質之生物活性，可知曉WT1之表現水準。WT1之mRNA或蛋白質之量可利用如本說明書之其他部位所詳述之方法或其他該領域中公知之方法決定。

於本說明書中，「功能等效物」係指相對於成為對象之原本之實體，目標功能相同但結構不同之任意者。因此，瞭解本發明之「WT1肽」之功能等效物不與序列編號1具有同一序列，但包含其變異體或改型體(例如胺基酸序列改型體等)，其具有WT1肽所具有之生物作用；以及於發揮作用時可變化為該具有WT1肽所具有之生物作用之變異體或改型體者(例如包含編碼其變異體或改型體之核酸、及包含該核酸之載體、細胞等)。瞭解於本發明中，WT1肽之功能等效物即便未特別提及，亦可與WT1肽同樣地使用。功能等效物可藉由檢索資料庫等而找出。於本說明書中，「檢索」係指利用電子或生物或其他方法，利用某一核酸鹼基序列，找出具有特定之功能及/或性質之其他核酸鹼基序列。作為電子檢索，可列舉：BLAST(Altschul et al.,J.Mol.Biol.215：403-410(1990))、FASTA(Pearson & Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 85：2444-2448(1988))、Smith and Waterman法(Smith and Waterman,J.Mol.Biol.147：195-197(1981))、及Needleman and Wunsch法(Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.48：443-453(1970))等，但並不限定於該等。作為生物檢索，可列舉：嚴格雜交、將基因組DNA貼附於尼龍膜等而成之微陣列或貼附於玻璃板而成之微陣列(微陣列分析)、PCR(polymerase chain reaction，聚合酶鏈反應)及原位雜交等，但並不限定於該等。意味著於本說明書中，本發明中所使用之基因應亦包含藉由此種電子檢索、生物檢索所鑑定之對應基因。

作為本發明之功能等效物，可使用於胺基酸序列中插入、置換或缺失、或者於其一末端或兩末端附加1個或複數個胺基酸而成者。於本說明書中，「於胺基酸序列中插入、置換或缺失、或者於其一末端或兩末端附加1個或複數個胺基酸」意指利用定點突變誘發法等周知之技術方法，或者藉由天然變異，藉由天然可產生之程度之複數個數量之胺基酸之置換等進行改型。改型胺基酸序列可為插入、置換及/或缺失、或者於其一末端或兩末端附加例如1~4個、較佳為1~3個、尤佳為1~2個或1個胺基酸而成者。改型胺基酸序列較佳為可為其胺基酸序列於序列編號1~5之任一胺基酸序列中具有1個或複數個(較佳為1個或數個或者1、2、3或4個)保守性置換之胺基酸序列。此處，「保守性置換」意指以實質上不改變蛋白質之功能之方式，以另一化學上類似之胺基酸殘基置換1個或複數個胺基酸殘基。例如可列舉：將某一疏水性殘基藉由另一疏水性殘基進行置換之情形；將某一極性殘基藉由具有相同之電荷之另一極性殘基進行置換之情形等。可進行此種置換之功能上類似之胺基酸係每種胺基酸於該領域中公知。若列舉具體例，則作為非極性(疏水性)胺基酸，可列舉：丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、脯胺酸、色胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸等。作為極性(中性)胺基酸，可列舉：甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、麩醯胺、天冬醯胺、半胱胺酸等。作為具有正電荷之(鹼性)胺基酸，可列舉：精胺酸、組胺酸、離胺酸等。又，作為具有負電荷之(酸性)胺基酸，可列舉：天冬胺酸、麩胺酸等。

(WT1肽)

於本發明中，作為WT1肽，可列舉誘導細胞毒殺性T細胞或輔助T細胞之活化之源自WT1蛋白質之肽。作為WT1肽，可列舉：誘導細胞毒殺性T細胞之活化之WT1殺手肽；及誘導輔助T細胞之活化之WT1輔助肽。作為WT1殺手肽，可列舉源自WT1蛋白質之包含8~12個胺基酸之肽，較佳為可列舉包含8~9個胺基酸之肽。又，尤佳為WT1₁₂₆肽：Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu(序列編號2)、或WT1₂₃₅肽：Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(序列編號3)、或式(3)

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之WT1₁₂₆肽與WT1_235m肽之偶聯物。作為WT1輔助肽，可列舉源自WT1蛋白質之包含14~20個胺基酸之肽，較佳為可列舉包含16~18個胺基酸之肽。又，尤佳為WT1₃₅肽(Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly Ser Leu；序列編號4)、或WT1₃₃₂肽：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His)(序列編號5)。於WT1肽中缺失、置換或附加1個或數個胺基酸而成之改型肽亦可用作本發明中之WT1肽。作為此種改型肽，可列舉：WT1₁₂₆肽之改型肽、WT1₂₃₅肽之改型肽、WT1₃₅肽之改型肽及WT1₃₃₂肽之改型肽。

作為WT1₁₂₆肽之改型肽，自N末端起第4~8個胺基酸殘基與自WT1₁₂₆肽之N末端起第4~8個胺基酸殘基(PNAPY)相同之肽較為適合。作為此種WT1₁₂₆肽之改型肽，較佳為包含以下之序列編號6~44之任一者所記載之胺基酸序列的肽。

WT1₁₂₆P1G肽(GMFPNAPYL；序列編號6)

WT1₁₂₆P1A肽(AMFPNAPYL；序列編號7)

WT1₁₂₆P1V肽(VMFPNAPYL；序列編號8)

WT1₁₂₆P1L肽(LMFPNAPYL；序列編號9)

WT1₁₂₆P1I肽(IMFPNAPYL；序列編號10)

WT1₁₂₆P1M肽(MMFPNAPYL；序列編號11)

WT1₁₂₆P1W肽(WMFPNAPYL；序列編號12)

WT1₁₂₆P1F肽(FMFPNAPYL；序列編號13)

WT1₁₂₆P1Y肽(YMFPNAPYL；序列編號14)

WT1₁₂₆P2V肽(RVFPNAPYL；序列編號15)

WT1₁₂₆P2Q肽(RQFPNAPYL；序列編號16)

WT1₁₂₆P2A肽(RAFPNAPYL；序列編號17)

WT1₁₂₆P2L肽(RLFPNAPYL；序列編號18)

WT1₁₂₆P2I肽(RIFPNAPYL；序列編號19)

WT1₁₂₆P3I肽(RMIPNAPYL；序列編號20)

WT1₁₂₆P3L肽(RMLPNAPYL；序列編號21)

WT1₁₂₆P3G肽(RMGPNAPYL；序列編號22)

WT1₁₂₆P3A肽(RMAPNAPYL；序列編號23)

WT1₁₂₆P3V肽(RMVPNAPYL；序列編號24)

WT1₁₂₆P3M肽(RMMPNAPYL；序列編號25)

WT1₁₂₆P3P肽(RMPPNAPYL；序列編號26)

WT1₁₂₆P3W肽(RMWPNAPYL；序列編號27)

WT1₁₂₆P9V肽(RMFPNAPYV；序列編號28)

WT1₁₂₆P9A肽(RMFPNAPYA；序列編號29)

WT1₁₂₆P9I肽(RMFPNAPYI；序列編號30)

WT1₁₂₆P9M肽(RMFPNAPYM；序列編號31)

WT1₁₂₆P1D肽(DMFPNAPYL；序列編號32)

WT1₁₂₆P1E肽(EMFPNAPYL；序列編號33)

WT1₁₂₆P1H肽(HMFPNAPYL；序列編號34)

WT1₁₂₆P1K肽(KMFPNAPYL；序列編號35)

WT1₁₂₆P1N肽(NMFPNAPYL；序列編號36)

WT1₁₂₆P1P肽(PMFPNAPYL；序列編號37)

WT1₁₂₆P1Q肽(QMFPNAPYL；序列編號38)

WT1₁₂₆P1S肽(SMFPNAPYL；序列編號39)

WT1₁₂₆P1T肽(TMFPNAPYL；序列編號40)

WT1₁₂₆P2I&P9I肽(RIFPNAPYI；序列編號41)

WT1₁₂₆P2I&P9V肽(RIFPNAPYV；序列編號42)

WT1₁₂₆P2L&P9I肽(RLFPNAPYI；序列編號43)

WT1₁₂₆P2L&P9V肽(RLFPNAPYV；序列編號44)

作為WT1₂₃₅肽之改型肽，可例示：包含或由WT1₂₃₅：Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(序列編號3)或WT1_235m：Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(序列編號45)所構成之肽、包含或由序列編號3或45之胺基酸序列所構成之肽之二聚物、包含或由序列編號3或45之胺基酸序列所構成之肽之胱胺酸體、及包含或由於上述胺基酸序列中置換、缺失或附加1個或數個胺基酸而成之胺基酸序列所構成之肽等，但並不限定於該等。於WT1₂₃₅肽之改型肽中，WT1_235m肽係HLA-A*24：02(日本人最多之HLA型)拘束性WT1肽，治療有效性高於野生型WT1₂₃₅肽，對水之可溶性優異，故而尤佳。

作為該等改型肽，例如可列舉如下所述者。

Cys-Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(序列編號47)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)或Cys-Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(序列編號48)(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)藉由修飾N末端半胱胺酸殘基之硫醇基，尤其是物理化學性質及穩定性優異(參照國際公開第2007/063903號)。

就廣泛覆蓋HLA亞型之觀點而言，作為本實施形態中之WT1肽之改型肽，較佳為包含分別與不同之HLA之亞型對應之複數種肽。例如，較佳為包含與HLA亞型A2型對應之上述肽或其藥學上所容許之鹽、及與HLA亞型A24型對應之上述肽或其藥學上所容許之鹽兩者。於此種情形時，例如醫藥組合物可為包含式(1)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽者：

[式中，X^a及Y^a表示單鍵，腫瘤抗原肽A表示包含選自以下之胺基酸序列：RMFPNAPYL(序列編號2)、ALLPAVPSL(序列編號52)、SLGEQQYSV(序列編號53)、RVPGVAPTL(序列編號：7)、YMFPNAPYL(序列編號14)及VLDFAPPGA(序列編號68)中之任一胺基酸序列之肽，腫瘤抗原肽A之C末端胺基酸之羰基與式(1)中之羥基鍵結，R₁表示氫原子或腫瘤抗原肽B，腫瘤抗原肽B表示序列與腫瘤抗原肽A不同且包含選自以下之胺基酸序列：CMTWNQMNL(序列編號3)及CYTWNQMNL(序列編號45)中之任一胺基酸序列之肽，腫瘤抗原肽B之半胱胺酸殘基之硫醚基與式(1)中之硫醚基鍵結]。

上述式(1)所表示之化合物藉由半胱胺酸殘基形成雙硫鍵等，於溶液中對氧化劑等之穩定性優異，作為醫藥品原料具有一定之品質。

又，於本實施形態中之WT1肽之改型肽包含上述式(1)所表示之化合物(WT1殺手肽之結合體)之情形時，藉由於體內由ERAP1所引起之N末端之半胱胺酸殘基之間之雙硫鍵之還原斷鍵，結合體被分解，生成與不同之HLA亞型對應之2種表位。如式(1)所表示之結合體，於體內生成與不同之HLA亞型對應之複數種表位之結合體可根據對象而與不同之HLA亞型廣泛對應，能夠以一個結合體覆蓋較大之群，故而可於對象中有效率地誘導CTL(參照國際公開2014/157692號，再者，國際公開2014/157692號係其整體以參考之形式引用至本說明書中)。

本實施形態中之「腫瘤抗原肽A」係包含7~30個殘基之胺基酸之MHC I類拘束性WT1肽。於式(1)中，腫瘤抗原肽A之N末端胺基酸之胺基與式(1)中之Ya鍵結，C末端胺基酸之羰基與式(1)中之羥基鍵結。

又，上述式(1)所表示之化合物可為式(2)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物，亦可為式(3)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物，亦可為式(4)：

(式中，C與C之間之鍵表示雙硫鍵)

所表示之化合物。

作為WT1₃₅肽之改型肽，只要為於序列編號4所表示之胺基酸序列中置換、缺失或附加1個或數個胺基酸而成之胺基酸序列，則並無特別限定。

作為WT1₃₃₂肽之改型肽，只要為於序列編號5所表示之胺基酸序列中置換、缺失或附加1個或數個胺基酸而成之胺基酸序列，則並無特別限定。於較佳之實施形態中，作為WT1₃₃₂肽之改型肽，包含序列編號5所表示之WT1₃₃₂肽之第3位、第6位、第8位及/或第11位之胺基酸殘基置換為選自第3位：苯丙胺酸、色胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、第6位：纈胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、第8位：天冬醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、麩醯胺、離胺酸、天冬胺酸、第11位：天冬胺酸、麩胺酸、麩醯胺中之任一胺基酸殘基之胺基酸序列的肽較為適合。

其中，作為WT1₁₂₆肽之改型肽，較佳為WT1₁₂₆P1F肽(序列編號13)、WT1₁₂₆P2L肽(序列編號18)、WT1₁₂₆P3M肽(序列編號25)或WT1₁₂₆P9V肽(序列編號28)，更佳為WT1₁₂₆P2L肽、WT1₁₂₆P3M肽或WT1₁₂₆P9V肽，進而較佳為WT1₁₂₆P9V肽。

作為本發明之預防或治療藥中之WT1肽，較佳為WT1₁₂₆肽、WT1₁₂₆P1F肽、WT1₁₂₆P2L肽、WT1₁₂₆P3M肽或WT1₁₂₆P9V肽。更佳為WT1₁₂₆肽、WT1₁₂₆P2L肽、WT1₁₂₆P3M肽或WT1₁₂₆P9V肽，進而較佳為WT1₁₂₆肽或WT1₁₂₆P9V肽，尤佳為WT1₁₂₆肽。

又，作為WT1肽，亦可使用WT1肽之衍生物。例如作為WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽之衍生物，可列舉於包含上述9、16或18個連續之胺基酸之胺基酸序列之N末端及/或C末端結合各種物質而成者等。例如可結合胺基酸、肽、該等之類似物等。於此種物質與WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽、或該等之改型肽結合之情形時，該等物質例如藉由生物內酵素等，或藉由細胞內處理等過程進行處理，最終產生包含上述9、16或18個胺基酸之肽，於細胞表面呈現，藉此可引起WT1特異性CTL反應，但不限於理論。

本實施形態中之WT1肽或其類似物亦可進而包含WT1輔助肽。於本實施形態中之WT1肽或其類似物進而含有包含選自由CNKRYFKLSHLQMHSRK(序列編號63)、CNKRYFKLSHLQMHSRKH(序列編號64)、CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(序列編號65)、WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號66)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)所組成之群中之胺基酸序列之肽的情形時，亦可進而含有包含選自上述群中之其他胺基酸序列之肽及/或其以外之其他WT1輔助肽。

WT1肽可利用該技術領域中通常使用之方法製造。例如可利用Peptide Synthesis,Interscience,New York,1966；The Proteins,Vol 2,Academic Press Inc.,New York,1976；肽合成，丸善股份有限公司，1975；肽合成之基礎與實驗，丸善股份有限公司1985；醫藥品之開發續第14卷‧肽合成，廣川書店，1991等所記載之肽合成方法合成。

作為WT1肽及改型肽之篩選方法，例如以下方法較簡便，故而較佳：使用具有良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之幾名患者之PBMCs(末梢血液單核球)，於僅1次肽之刺激下進行IFN γ分析，選擇反應較佳之肽。

於本發明中，編碼上述WT1蛋白質或WT1肽之DNA或RNA等聚核苷酸亦可用作預防或治療藥之有效成分。即，藉由將編碼WT1蛋白質或WT1肽之聚核苷酸插入至適當之載體、較佳為表現載體後，投予至包括人類之動物，可於生物內產生癌免疫。作為聚核苷酸，可列舉：DNA、RNA等，較佳為DNA或RNA。聚核苷酸之鹼基序列可基於對良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者具有免疫原性之WT1蛋白質或WT1肽之胺基酸序列而決定。該聚核苷酸例如可利用公知之DNA或RNA合成法、PCR法等製造。含有此種編碼WT1蛋白質或WT1肽之DNA之預防或治療藥亦為本發明之一。作為WT1蛋白質或WT1肽，較佳為WT1肽，更佳為WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽、或其改型肽、或其組合，進而較佳為WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽或WT1₃₅肽、或其改型體肽、或其組合，最佳為式(3)所表示之化合物(WT1₁₂₆肽與WT1₂₃₅肽之偶聯物)與WT1₃₅肽之組合。作為插入上述DNA之表現載體，並無特別限定。再者，RNA可不插入至載體，直接用作組合物之有效成分。

本發明之預防或治療藥可含有佐劑。作為佐劑，只要為於投予成為抗原之WT1蛋白質或WT1肽之情形時，與該等一起或者與WT1蛋白質或WT1肽分開投予，非特異性地提高對該抗原之免疫應答之物質，則並無限定。作為佐劑，例如可列舉沈澱性佐劑或油性佐劑。作為沈澱性佐劑，例如可列舉：氫氧化鈉、氫氧化鋁、磷酸鈣、磷酸鋁、明礬、PEPES或羧基乙烯基聚合物等。油性佐劑較佳為可使油包圍抗原水溶液而形成膠束者，例如具體而言，可列舉：液態石蠟、羊毛脂、弗氏、Montanide ISA763AVG、Montanide ISA51、弗氏不完全佐劑或弗氏完全佐劑等。佐劑亦可混合2種以上而使用。較佳為油性佐劑。本發明之預防或治療藥中之佐劑之調配量只要為非特異性地提高對抗原之免疫應答之量，則並無特別限定，只要根據佐劑之種類等適當選擇即可。

本發明之預防或治療藥可藉由經口投予、或非經口投予、例如腹腔內投予、皮下投予、皮內投予、肌內投予、靜脈內投予或鼻腔內投予等而投予。又，作為非經口投予，亦可列舉如下投予方法：將預防或治療藥塗抹於皮膚，或者使貼附劑含有預防或治療藥而貼附於皮膚，藉此經皮吸收作為有效成分之WT1蛋白質或WT1肽。進而，本發明之預防或治療藥亦可藉由吸收等而投予。較佳為藉由非經口投予而投予。更佳為藉由皮內投予或皮下投予而投予。皮內投予、皮下投予之體之部位例如較佳為上臂等。

本發明之預防或治療藥根據投予路徑，可採用各種製劑形態、例如固體製劑、液狀製劑等。例如可採用用於經口投予之內服用固體劑或內服用液劑、或者用於非經口投予之注射劑等。

作為用於經口投予之內服用固體劑，可列舉：錠劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑等。

於內服用固體劑中，WT1蛋白質或WT1肽直接或者與添加劑進行混合或造粒(例如攪拌造粒法、流動層造粒法、乾式造粒法、滾動攪拌流動層造粒法等)，按照常規方法製造。例如若為膠囊劑，則可藉由填充膠囊等而製造，若為錠劑，則可利用打錠劑等製造。添加劑可適當調配1種或2種以上。作為添加劑，例如可列舉：乳糖、甘露醇、葡萄糖、微晶纖維素、玉米澱粉等賦形劑；羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮、鎂鋁矽酸鹽等結合劑；玉米澱粉等分散劑；羧甲基纖維素鈣等崩解劑；硬脂酸鎂等潤滑劑；麩胺酸、天冬胺酸等增溶劑；穩定劑；羥丙基纖維素、羥丙甲纖維素、甲基纖維素等纖維素類、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯醇等合成高分子類等水溶性高分子；白糖、粉糖、蔗糖、果糖、葡萄糖、乳糖、還原麥芽糖糖漿、粉末還原麥芽糖糖漿、葡萄糖果糖液糖、果糖葡萄糖液糖、蜂蜜、山梨糖醇、麥芽糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、阿斯巴甜、糖精、糖精鈉等甜味劑等。

顆粒劑或錠劑可視需要經包衣劑等被覆，又，該包衣可為2層以上之層。作為包衣劑，例如可列舉：白糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯等。於製造為膠囊劑之情形時，可適當選擇上述賦形劑，與WT1蛋白質或WT1肽均等地混合，或者將利用適當之包衣劑對粒狀或製成粒狀者實施包衣而成者填充至膠囊，或者利用於適當之膠囊基劑(明膠等)中加入甘油或山梨糖醇等而增加塑性之膠囊基劑進行包裝成形。於該等膠囊基劑中，可視需要加入著色劑或保存劑(二氧化硫；對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯等對羥苯甲酸酯類)等。膠囊劑包含硬膠囊或軟膠囊。

作為用於經口投予之內服用液劑，可列舉：水劑、懸浮劑‧乳劑、糖漿劑、乾糖漿劑等用時溶解型製劑、酏劑等。於此種內服用液劑中，WT1蛋白質或WT1肽係於內服用液劑中溶解、懸浮或乳化於一般使用之稀釋劑中。作為稀釋劑，例如可列舉：純化水、乙醇或該等之混合溶液等。進而，該液劑亦可含有濕潤劑、懸浮劑、乳化劑、甜味劑、調味劑、芳香劑、保存劑或緩衝劑等。又，乾糖漿劑例如可將WT1蛋白質或WT1肽與例如白糖、粉糖、蔗糖、果糖、葡萄糖或乳糖等進行混合等而製造。又，乾糖漿劑亦可按照常規方法製成顆粒。

作為用於非經口投予之劑型，可列舉：注射劑、軟膏劑、凝膠劑、乳霜劑、貼附劑、噴霧劑、噴灑劑等，較佳為注射劑。例如較佳為WT1蛋白質或WT1肽與慣用之載體一起製成注射劑。

作為用於非經口投予之注射劑，可為水性注射劑或油性注射劑中之任一種。於採用水性注射劑之情形時，可藉由按照公知之方法，例如於在水性溶劑(注射用水、純化水等)中適當添加醫藥上所容許之添加劑而成之溶液中混合WT1蛋白質或WT1肽後，利用過濾器等進行過濾並殺菌，繼而填充至無菌容器中而製備。作為醫藥上所容許之添加劑，例如可列舉：上述佐劑；氯化鈉、氯化鉀、甘油、甘露醇、山梨糖醇、硼酸、硼砂、葡萄糖、丙二醇等等張劑；磷酸緩衝液、乙酸緩衝液、硼酸緩衝液、碳酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、三羥甲基胺基甲烷緩衝液、麩胺酸緩衝液、ε-胺基己酸緩衝液等緩衝劑；對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、氯丁醇、苄醇、氯化苄烷銨、脫氫乙酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、硼酸、硼砂等保存劑；羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、聚乙烯醇、聚乙二醇等增黏劑；亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、檸檬酸鈉、抗壞血酸、二丁基羥基甲苯等穩定劑；鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、乙酸等pH值調整劑等。又，於注射劑中，亦可進而調配適當之增溶劑、例如乙醇等醇；丙二醇、聚乙二醇等多元醇；聚山梨醇酯80、聚氧乙烯氫化蓖麻油50、脫脂酸卵磷脂、普朗尼克多元醇等非離子界面活性劑等。又，例如亦可含有牛血清白蛋白、匙孔螺血氰蛋白等蛋白質；胺基葡聚糖等多糖等。於採用油性注射劑之情形時，作為油性溶劑，例如可使用芝麻油或大豆油等，亦可調配苯甲酸苄酯或苄醇等作為增溶劑。所製備之注射液通常填充至適當之安瓿或小瓶等。注射劑等液狀製劑亦可藉由冷凍保存或冷凍乾燥等，去除水分而保存。冷凍乾燥製劑於用時加入注射用蒸餾水等，進行再溶解而使用。

又，作為本發明之預防或治療藥之其他形態，亦可於脂質體中混合WT1蛋白質或WT1肽，進而視需要含有多糖及/或調配於癌疫苗組合物中之其他成分。

本發明之預防或治療藥之投予量根據使用之WT1蛋白質或WT1肽、或DNA、或患者之年齡體重、對象疾病等亦不同，例如於包含WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽等WT1肽之疫苗組合物之情形時，作為WT1肽量，較佳為1天每體重約0.1μg~1mg/kg。又，WT1肽之投予量通常為0.0001mg~1000mg，較佳為0.01mg~1000mg，更佳為0.1mg~10mg，較佳為於數天~數個月1次投予該量。

進而，作為本發明之預防或治療藥之投予方法，亦可列舉如下方法：自良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者之末梢血液收集PBMCs，自其中取出樹突狀細胞，對本發明之預防或治療藥中作為有效成分所包含之肽、例如WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽、或者DNA或RNA等聚核苷酸施加脈衝，藉由皮下投予至患者等使之返回至患者。作為於樹突狀細胞中對WT1肽等施加脈衝時之條件，只要發揮本發明之效果，則並無特別限定，可採用通常之條件。

於將編碼WT1蛋白質或WT1肽之核酸分子用於預防或治療藥之情形時，較佳為以將該核酸分子導入至良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者之樹突狀細胞之方式投予預防或治療藥。作為將核酸分子導入至良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者之樹突狀細胞之方法，例如可列舉如上所述自良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者採取樹突狀細胞，藉由電氣脈衝於該樹突狀細胞導入核酸分子之方法。由導入至樹突狀細胞之核酸分子表現之WT1蛋白質或WT1肽呈現於該樹突狀細胞表面，故而藉由使對核酸分子施加過脈衝之樹突狀細胞返回至良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之患者之體內，可於生物內快速產生癌免疫。此種將編碼WT1蛋白質或WT1肽之核酸分子導入至受驗體之樹突狀細胞之癌之治療或預防方法係本發明之較佳之實施形態之一。於上述實施形態中，作為核酸分子，可為DNA及RNA中之任一種，較佳為RNA。

本發明之另一態樣係關於一種WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法，其係於WT1蛋白質或WT1肽之存在下培養源自受驗體之末梢血液單核球，或者將編碼該等之核酸分子導入至該末梢血液單核球，藉此自該末梢血液單核球誘導WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。末梢血液單核球所源自之受驗體並無特別限定。作為WT1蛋白質或WT1肽，可列舉：WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽、或其改型肽，WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽較為適合。例如藉由於WT1₁₂₆肽或WT1₂₃₅肽之存在下培養源自受驗體之末梢血液單核球，自末梢血液單核球中之CTLs前驅細胞誘導WT1特異性 CTLs。於在WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽之存在下培養源自受驗體之末梢血液單核球之情形時，自末梢血液單核球中之輔助T細胞前驅細胞誘導WT1特異性輔助T細胞。源自受驗體之末梢血液單核球之培養條件並無特別限定，可於通常之條件下進行培養。如此獲得之CTLs及輔助T細胞分別識別WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽及WT1₃₃₂肽。因此，若使用由本發明所誘導之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞，則可特異性地毒殺WT1高表現腫瘤細胞，可治療及/或預防作為對象之良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)。作為將WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞投予至受驗體之方法，並無特別限定，例如可與上述預防或治療藥同樣地投予。

本發明之另一態樣係關於一種用於誘導WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之套組，其包含WT1蛋白質或WT1肽作為必需構成成分。較佳為該套組用於上述源自受驗體之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法。此種套組除WT1蛋白質或WT1肽以外，例如亦可包含末梢血液單核球之獲取機構、佐劑、反應容器等。若使用此種套組，則可高效率地誘導識別WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽等癌抗原之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞。

於本發明之再一實施形態中，係關於一種呈現WT1蛋白質或WT1肽之樹突狀細胞之誘導方法，其係於WT1蛋白質或WT1肽之存在下培養源自受驗體之未成熟樹突狀細胞，或者將編碼該等之核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，藉此自該未成熟樹突狀細胞誘導呈現該WT1蛋白質或WT1肽之樹突狀細胞。作為WT1蛋白質或WT1肽，可列舉：WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽或其改型肽，WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽較為適合。作為編碼WT1蛋白質或WT1肽之核酸分子，可列舉編碼WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽或其改型肽者，編碼WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽者較為適合。作為核酸分子，可使用DNA及RNA中之任一種，RNA較為適合。未成熟樹突狀細胞所源自之受驗體並無特別限定。未成熟樹突狀細胞例如包含於末梢血液單核球等，故而亦可於WT1₁₂₆肽、WT1₂₃₅肽、WT1₃₅肽或WT1₃₃₂肽之存在下培養此種細胞。若將如此獲得之樹突狀細胞投予至受驗體，則高效率地誘導上述WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞，藉此可治療及/或預防受驗體之良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)。作為將樹突狀細胞投予至受驗體之方法，並無特別限定，例如可與上述預防或治療藥同樣地投予。

(較佳之實施形態)

以下，說明本發明之較佳之實施形態。瞭解以下提供之實施形態係為了更充分地瞭解本發明而提供者，本發明之範圍不應限定於以下之記載。因此，可知業者可參考本說明書中之記載，於本發明之範圍內適當進行改變。又，瞭解本發明之以下之實施形態可單獨使用或者組合該等而使用。

又，以下說明之實施形態均表示綜合或具體例。以下之實施形態所示之數值、形狀、材料、構成要素、步驟、步驟之順序等係一例，並不旨在限定申請專利範圍。又，關於以下之實施形態中之構成要素中表示最上位概念之獨立請求項中未記載的構成要素，作為任意之構成要素進行說明。

(預防或治療藥)

於一個態樣中，本發明提供一種包含WT1肽或其類似物之良性腫瘤之預防或治療藥。雖顯示WT1於惡性腫瘤之癌細胞中高表現，但良性腫瘤中之表現未知。本發明係基於在良性腫瘤之細胞中表現WT1蛋白質這一驚奇發現者，提供一種良性腫瘤之新治療方法。

於1個實施形態中，本發明之良性腫瘤表現WT1。本發明之WT1肽作為癌抗原發揮作用，增強CTLs之細胞毒殺活性及/或輔助T細胞之活性，藉此發揮對良性腫瘤之細胞之細胞毒殺活性，故而本發明之WT1肽疫苗對表現WT1之良性腫瘤具有治療有效性，但不限於理論。又，WT1蛋白質之表現並不限定於特定之良性腫瘤，於遺傳性、非遺傳性各種良性腫瘤中可見。因此，瞭解有不僅遺傳性，後天良性腫瘤亦表現WT1蛋白質之情況，對此種類型之良性腫瘤，可使用本發明之技術進行治療或預防。於1個實施形態中，良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤及血管瘤所組成之群。

於一個實施形態中，本發明提供一種包含WT1肽或其類似物之家族性大腸腺瘤病之預防或治療藥。雖顯示WT1肽或其類似物對血管新生病之治療有效，但無法預料對難治性且迄今為止只有切除事實上才有治療方法之家族性大腸腺瘤病之治療或預防有效果。本發明係對只有切除事實上才有治療方法之家族性大腸腺瘤病提供一種新治療方法，為無需切除之治療或預防，作為有助於生活質量(Quality of Life)(QOL)之改善者有用。

於1個實施形態中，本發明之WT1肽可為1種，亦可為複數種。又，本發明之醫藥或組合物中所使用之WT1肽可為殺手WT1肽，或者可為輔助WT1肽，亦可混合該等而使用。更佳為包含殺手型WT1肽及輔助型WT1肽兩者。於本發明中，亦可使用WT1肽之二聚物。WT1肽之二聚物可藉由於具有半胱胺酸殘基之2個WT1肽之間形成雙硫鍵而獲得。本發明之醫藥組合物中所使用之WT1肽可為1種，或亦可為複數種。

WT1肽是否於對象中發揮治療或預防效果取決於WT1肽是否與對象之HLA型對應。目前，關於多數WT1肽，已知符合何種HLA型，故而可根據對象之HLA型選擇本發明中所使用之WT1肽。又，亦可於本發明之醫藥組合物中使用複數種WT1肽，與廣泛之對象對應。

於1個較佳之實施形態中，本發明中所使用之WT1肽為WT1₁₂₆殺手肽、WT1₂₃₅殺手肽、WT1₃₅輔助肽及/或WT1₃₃₂輔助肽。較佳為該WT1肽包含選自WT1₁₂₆肽及WT1₂₃₅肽中之殺手肽、及選自WT1₃₅及WT1₃₃₂肽中之輔助肽兩者。可知於本發明中，WT1肽若包含殺手肽及輔助肽，則有超過單獨使用之效果的效果，但不希望被理論束縛。

於另一態樣中，本發明之WT1肽包含式(3)所表示之化合物及WT1₃₅輔助肽兩者。上述式(3)所表示之化合物與WT1₃₅輔助肽之組合係於申請人所知之範圍內，未知對良性腫瘤發揮預防及/或治療有效性。

於另一態樣中，本發明提供一種包含編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之良性腫瘤之預防或治療藥。

於某一實施形態中，本發明提供一種包含編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之家族性大腸腺瘤病之預防或治療藥。於此情形時，本發明之醫藥組合物中之有效成分可謂為編碼WT1肽之聚核苷酸，但並不限定於此。聚核苷酸之鹼基序列可基於WT1肽之胺基酸序列決定。聚核苷酸例如可利用化學合成法等公知之DNA或RNA合成方法、PCR法等製造。

於一個實施形態中，本發明之預防或治療藥包含編碼上述WT1肽或其類似物之DNA。

於另一實施形態中，本發明之預防或治療藥包含編碼上述WT1肽或其類似物之RNA。

於另一實施形態中，本發明之預防或治療藥包含編碼上述WT1肽或其類似物之RNA及DNA。

於1個實施形態中，本發明之預防或治療藥除上述成分以外，亦包含佐劑。

於1個較佳之實施形態中，本發明中所使用之佐劑包含Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。

於1個實施形態中，本發明之預防或治療藥係1週投予1次。

亦可將本發明之醫藥或組合物與用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之醫藥併用。

本發明之醫藥或組合物之投予路徑並無特別限定，作為較佳之投予路徑之例，可列舉：皮內投予、皮下投予、經皮投予、經黏膜投予(例如滴眼、滴鼻、舌下等)。

本發明之醫藥或組合物之劑形並無特別限定，例如可為注射用液劑、滴眼用液劑、滴鼻用液劑、洗劑、乳霜劑、貼劑、舌下錠、口含錠等劑形。該等劑形可利用業者充分已知之方法製造、投予。

使用本發明之醫藥或組合物之情形時之WT1肽之投予量可考慮WT1肽之種類、投予路徑、劑形、疾病之種類、疾病之程度、對象之健康狀態等而適當變更。一般，WT1肽之投予量係成人每天0.1μg/kg~1 mg/kg。關於WT1肽之種類、投予路徑、劑形，亦可同樣地適當變更。本發明之醫藥或組合物除醫藥上所容許之載體或賦形劑以外，例如亦可包含氫氧化鋁之類之適當之佐劑。或者本發明之醫藥或組合物亦可包含封入至脂質體中之WT1肽。

於本實施形態中，關於例如為式(2)或式(3)所表示之化合物之WT1肽之投予量，可於導入期，隔2週成人每天將3.5mg投予至皮內合計1~5次，於維持期，隔1個月或2個月成人每天將3.5mg投予至皮內合計3~6次。

可於投予量為成人每天1.0mg以上、2.5mg以上、5.0mg以上、10mg以上、15mg以上、20mg以上或25mg以上、或者100mg以下、50mg以下、40mg以下、30mg以下、25mg以下、20mg以下、15mg以下、10mg以下、5.0mg以下或2.5mg以下之範圍內投予。具體投予量例如可為成人每天0.5mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、3.5mg、4.0mg、4.5mg、5.0mg、5.5mg、6.0mg、6.5mg、7.0mg、7.5mg、8.0mg、8.5mg、9.0mg、9.5mg或10mg等。

投予間隔可於1週~1年之間適當選擇，例如可以1天以上、1週以上、2週以上、3週以上、1個月以上、2個月以上、3個月以上、4個月以上、5個月以上或6個月以上、或者1年以下、9個月以下、6個月以下、5個月以下、4個月以下、3個月以下、2個月以下、1個月以下、3週以下、2週以下或1週以下之間隔投予。作為具體投予間隔，例如可為1天、3天、5天、1週、2週、3週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月或1年等。

投予次數可於合計1~100次之間適當選擇，例如可以1次以上、2次以上、3次以上、4次以上、5次以上、6次以上、7次以上、8次以上、9次以上或10次以上、或者100次以下、50次以下、40次以下、30次以下、20次以下、15次以下、10次以下、9次以下、8次以下、7次以下、6次以下、5次以下、4次以下、3次以下或2次以下之次數投予。作為具體投予次數，例如可為1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次或12次等。

於另一態樣中，本發明提供一種WT1肽或其類似物、或者編碼WT1肽或其類似物之核酸分子，其用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者。

於再一態樣中，本發明係關於一種WT1肽或其類似物、或者編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之用途，其用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者，或者用於製造用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之醫藥組合物。進而，本發明提供一種用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之方法，其包括將WT1肽或其類似物、或者編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之有效量投予至必需其之受檢體的步驟。於進一步之態樣中，本發明係關於一種WT1肽或其類似物、或者編碼WT1肽或其類似物之核酸分子之用途，其用於製造用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之醫藥。於再一態樣中，本發明亦關於一種用於良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之方法，其特徵在於對必需良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療及預防中之任一者或兩者之對象投予WT1肽或其類似物、或者編碼WT1肽或其類似物之核酸分子。於該等態樣中，包含本說明書中所記載之上述內容之所有說明亦適用。

(免疫細胞之誘導方法)

於另一態樣中，本發明提供一種用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法，其特徵在於包括如下步驟：於本說明書中所記載之任一WT1肽或其類似物之存在下培養源自必需良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療之受驗體之末梢血液單核球，或者將編碼該等之核酸分子導入至上述末梢血液單核球，藉此自上述末梢血液單核球誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該誘導方法中亦適用。

於另一態樣中，本發明提供一種用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之WT1呈現樹突狀細胞之誘導方法，其特徵在於包括如下步驟：於本說明書中所記載之任一WT1肽或其類似物之存在下培養源自必需良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之治療之受驗體之未成熟樹突狀細胞，或者將編碼該等之核酸分子導入至上述未成熟樹突狀細胞，藉此誘導WT1呈現樹突狀細胞。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該誘導方法中亦適用。

於另一態樣中，本發明提供一種用於誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞及/或WT1特異性輔助T細胞之組合物，其包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該組合物中亦適用。

於再一態樣中，本發明提供一種用於誘導WT1呈現樹突狀細胞之組合物，其包含WT1肽或其類似物、或者編碼其之核酸分子，用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該組合物中亦適用。

於再一態樣中，本發明提供一種用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之組合物，其包含WT1特異性細胞毒殺性T細胞及/或WT1特異性輔助T細胞。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該組合物中亦適用。

於再一態樣中，本發明提供一種用於預防或治療良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之組合物，其包含WT1呈現樹突狀細胞。業者瞭解(預防或治療藥)中所記載之任意之說明於該組合物中亦適用。

(製造方法)

本發明之肽或衍生物、或者核酸分子可利用該技術領域中通常使用之製造方法製造。該等製造方法可基於熟悉免疫方法、分子生物方法、生化方法、微生物方法者之知識，適當改良。具體而言，本發明之肽或衍生物、或者核酸分子可進行基於天然WT1蛋白質之胺基酸序列(例如序列編號1)或核酸序列之設計，亦可藉由微生物表現系統等製造。製造方法中之起始原料及中間物可以市售品之形式購買，或者可依據公知文獻中所記載之方法取得或自公知化合物依據公知之方法取得。又，該等起始原料及中間物只要不給製造步驟帶來障礙，則亦可使用該等之類似物。

(一般技術)

本說明書中所使用之免疫方法、分子生物方法、生化方法、微生物方法係該領域中周知且慣用者，記載於Sambrook J.et al.(1989).Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor及其3rd Ed.(2001)；Ausubel,F.M.(1987).Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience；Ausubel,F.M.(1989).Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience；Innis,M.A.(1990).PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications,Academic Press；Ausubel,F.M.(1992).Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates；Ausubel,F.M.(1995).Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates；Innis,M.A.et al.(1995).PCR Strategies,Academic Press；Ausubel,F.M.(1999).Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Wiley,and annual updates；Sninsky,J.J.et al.(1999).PCR Applications：Protocols for Functional Genomics,Academic Press、附錄實驗醫學「基因導入&表現分析實驗法」羊土公司，1997等，該等係相關之部分(可為全部)以參考之形式引用至本說明書中。

(註釋)

於本說明書中，「或」係於可採用文章中所列舉之事項之「至少1個以上」時使用。「或者」亦相同。於本說明書中，於明確記載為「2個值之範圍內」之情形時，該範圍亦包含2個值本身。

本說明書中所引用之科學文獻、專利、專利申請案等參考文獻係其整體分別以與具體記載者相同之程度，以參考之形式引用至本說明書中。

以上，為了容易理解，示出較佳之實施形態而說明本發明。以下，基於實施例說明本發明，但上述說明及以下之實施例僅為了例示而提供，並非基於限定本發明之目的提供。因此，本發明之範圍既不限定於本說明書中具體記載之實施形態，亦不限定於實施例，僅由申請專利範圍而限定。

[實施例]

以下記載實施例。以下之實施例中所使用之生物之操作於必要之情形時遵守大阪大學或監督機關所規定之基準。試劑類使用具體記載於實施例中之製品，但亦可以其他製造商(Sigma-Aldrich、FUJIFILM Wako Pure Chemical、Nacalai Tesque、R&D Systems、USCN Life Science INC、Thermo Fisher Scientific、關東化學、Funakoshi、東京化成、Merck等)之同等品代替。

(小鼠)

於以下之實施例中，小鼠使用Apc^Min/+(C57BL/6J)小鼠(Jackson研究所，Bar Harbor，Maine，USA)。小鼠係遵守大阪大學動物實驗規定，利用大阪大學醫學部附屬動物實驗設施之無特定微生物(SPF)之封閉設施飼養。

(試劑)

於以下之實施例中，作為MHC I類(H-2D^b)-結合肽之WT1_126-134(RMFPNAPYL，9a.a)、及作為MHC II類(H-2I-A^b)-結合肽之WT1_35-52(WAPVLDFAPPGASAYGSL，18a.a.)係自SIGMA Genosys(石狩，日本) 購買。式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物中所使用之各原料係由大日本住友製藥股份有限公司(大阪，日本)供應。肽係於使用之前保存於-20℃下。肽係溶解於磷酸緩衝生理食鹽水(PBS；137mM之NaCl、2.7mM之KCl、8.1mM之Na₂HPO₄、1.47mM之KH₂PO₄)中，保存於-20℃下。弗氏不完全佐劑(IFA)、Montanide ISA 51係自Seppic S.A.(Orsay，France)購買。

(實施例1：家族性大腸腺瘤病之腺瘤中之WT1蛋白質之表現)

於本實施例中，顯示於人類家族性大腸腺瘤病患者之腺瘤中表現WT1蛋白質。

(實驗方法)

利用福馬林固定家族性大腸腺瘤病之人類患者之小腸及大腸後，利用石蠟進行包埋，將石蠟塊薄切為3μm之厚度。為了減輕內源性過氧化酶反應，利用3% H₂O₂溶液處理石蠟切片後，利用二甲苯進行脫蠟，利用乙醇階段性地再水合後，於10mM之Tris-EDTA緩衝液((10mM之Tris、1mM之EDTA(ethylenediamine tetraacetic acid，四乙酸乙二胺)(pH值9.0))中，於油浴中、於70℃下加熱25分鐘，於110℃下加熱25分鐘，於室溫下冷卻3小時而進行抗原活化。藉由經PBST(PBS+0.05% Tween20(註冊商標))稀釋100倍之抗WT1 6FH2小鼠單選殖抗體(Dako Cytomation,Inc.，Carpinteria，CA)，使處理後之切片於4℃下反應一晚。其後，使Dako REAL Envision HRP RABBIT/MOUSE(Dako Cytomation)於37℃下反應30分鐘。使用Dako REAL Envision檢測系統過氧化酶/DAB+、兔/小鼠(Dako Cytomation)，按照操作說明書，使WT1蛋白質可視化。其後，對切片進行蘇木精染色。

(結果)

將實施例1之結果示於表2及圖1。表2示出源自各患者之標本中之腺瘤、正常腺管及纖維母細胞中之WT1蛋白質的表現量。於表2中，顯示腺瘤中之WT1蛋白質之表現量比正常腺管中之表現量明顯增大。於圖1中，較淡之染色表示WT1蛋白質，較濃且染色成圓形之區域表示核。於腺瘤中可見WT1蛋白質之表現，但於正常腺管中未見WT1蛋白質之表現。

(實施例2：APC^Min/+小鼠中之WT1蛋白質之表現)

於本實施例中，顯示於作為家族性大腸腺瘤病之模型小鼠之APC^Min/+小鼠之小腸腺瘤中，表現WT1蛋白質。

(實驗方法)

利用福馬林固定20週齡之Apc^Min/+(C57BL/6J)小鼠之小腸及大腸後，利用石蠟進行包埋，將石蠟塊薄切為3μm之厚度。將石蠟切片利用二甲苯進行脫蠟，利用乙醇階段性地再水合後，於10mM之檸檬酸緩衝液((10mM之檸檬酸鈉、0.05% Tween20(pH值6.0))中，照射微波15分鐘，進行抗原活化。藉由經含山羊血清PBS稀釋100倍之抗WT1 6FH2小鼠單選殖抗體(Dako Cytomation,Inc.，Carpinteria，CA)，使處理後之切片於4℃下反應一晚。然後，使經含山羊血清PBS稀釋100倍之生物素化抗小鼠IgG抗體(Vector Labs.，Burlingame，CA)於37℃下反應30分鐘。為了減輕內源性過氧化酶反應，利用3% H₂O₂溶液進行處理後，使用Vectastain ABC kit(Vector Labs.)，按照操作說明書，使WT1蛋白質可視化。其後，將切片進行蘇木精染色。

(結果)

將實施例2之結果示於圖2及3。圖2自上往下依序表示5倍、10倍、20倍之倍率下之顯微鏡照片，圖3表示40倍之倍率下之顯微鏡照片。於圖2及3中，較濃之染色表示WT1蛋白質，染色成圓形之區域表示核。於作為家族性大腸腺瘤病之模型小鼠之Apc^Min/+小鼠之小腸腺瘤中，可見WT1蛋白質之表現。

(實施例3：對家族性大腸腺瘤病模型小鼠投予WT1肽疫苗)

於本實施例中，示出對APC^Min/+小鼠投予WT1肽疫苗之實驗之投予方案。

(實驗方法)

將WT1肽疫苗之投予方案示於圖4。將100μg之WT1_126-134殺手肽與45μg之WT1_35-52輔助肽之混合物、或PBS分別利用IFA Montanide ISA51佐劑進行乳液化，分別作為WT1肽疫苗或對照疫苗。於4~5週齡之Apc^Min/+之小鼠之側腹皮內投予WT1肽疫苗或對照疫苗。免疫係自出生後第5週開始，以1週1次之頻度進行8次。於最終免疫10天後使免疫之小鼠安樂死，進行進一步之分析。再者，WT1肽疫苗之投予如以下之表3所示，不帶來器官損傷。

(實施例4：藉由投予WT1肽疫苗而預防及治療腺瘤)

於本實施例中，顯示藉由對APC^Min/+小鼠投予WT1肽疫苗，預防腺瘤之發病，治療腺瘤。

(實驗方法)

使用藉由實施例3中所記載之投予方案所獲得之小鼠。自最終免疫10天後安樂死之小鼠採取全腸。小腸分為8~10個組份，大腸分為盲腸及升結腸。各組份於縱向切開，利用PBS進行清洗後，夾於濾紙，於4%多聚甲醛/磷酸緩衝液中，於4℃下固定24小時以上。固定之腸組織利用1%亞甲基藍溶液染色後，於立體顯微鏡下進行觀察，計算腺瘤(息肉)數。WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之間之腺瘤(息肉)數之差係藉由Student's t檢驗而進行統計分析。

(結果)

將實施例4之結果示於圖5。圖表之橫軸係左側表示投予WT1疫苗之群，右側表示投予對照疫苗之群，縱軸表示每一小腸之腺瘤數。於WT1肽疫苗投予群中，每一小腸之腺瘤數之平均值為約29個，相對於此，於對照疫苗投予群中為約34個，顯示藉由投予WT1肽疫苗，顯著抑制腺瘤之發病，進而治療腺瘤。

(實施例5：由WT1肽疫苗之投予所引起之WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之增加)

於本實施例中，顯示藉由對APC^Min/+小鼠投予WT1肽疫苗，WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加。

(實驗方法)

使用藉由實施例3中所記載之投予方案所獲得之小鼠。自最終免疫10天後安樂死之小鼠採取脾細胞。將紅血球溶解後，將細胞利用H-2D^b WT1四聚物(MBL，愛知，日本)進行染色，進而利用抗小鼠CD3抗體(17A2，BioLegend，San Diego，CA)及抗小鼠CD8抗體(KT15，MBL，愛知，日本)進行染色。染色之細胞係利用FACSCanto進行分析，測定CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度。WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之間之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度之差係藉由Student's t檢驗而進行統計分析。

(結果)

將實施例5之結果示於圖6。圖表之橫軸係左側表示投予WT1肽疫苗之群，右側表示投予對照疫苗之群，縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物頻度。於WT1疫苗投予群中，CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度之平均值為約0.6%，相對於此，於對照疫苗投予群中為約0.2%，顯示藉由投予WT1疫苗，WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加。

(實施例6：統計分析)

於本實施例中，顯示實施例4中之腺瘤數與實施例5中之WT1四聚物 ⁺CD3⁺CD8⁺T細胞可見相關。

(實驗方法)

將自實施例4所獲得之每一小腸之腺瘤數、及自實施例5所獲得之CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度藉由Microsoft Excel(註冊商標)而繪圖於散佈圖中。進而對該等結果，藉由Excel之皮爾森相關係數對相關關係進行統計分析。

(結果)

根據實施例6之結果，可見WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之腺瘤(息肉)數及WT1四聚物頻度表現出較弱之相關關係。

(實施例7：單劑下之實施例)

於本實施例中，示出對APC^Min/+小鼠投予殺手型及輔助型兩者之WT1肽疫苗之情形、與僅投予殺手型或輔助型WT1肽疫苗之單劑之情形之腺瘤之發病之預防及治療效果中的比較。

(實驗方法)

將WT1肽疫苗之投予方案示於圖8。將100μg之WT1_126-134殺手肽與45μg之WT1_35-52輔助肽之混合物、單獨100μg之WT1_126-134殺手肽、單獨45μg之WT1_35-52輔助肽或PBS分別利用IFA Montanide ISA51佐劑進行乳液化。於5週齡之Apc^Min/+之小鼠之側腹皮內投予殺手肽與輔助肽之混合物、單獨殺手肽、單獨輔助肽、或僅PBS之對照疫苗。免疫係自出生後第5週開始，以1週1次之頻度進行8次。於最終免疫10天後使免疫之小鼠安樂死，進行進一步之分析。

(實施例8：其他良性腫瘤中之WT1之表現)

於本實施例中，顯示於非遺傳性大腸腺瘤中亦表現WT1。

(實驗方法)

自非遺傳性大腸腺瘤發病之人類患者(3名)摘除腺瘤組織，利用與實施例1相同之方法，將WT1蛋白質及核進行染色。

(結果)

將實施例8之結果示於圖9。於圖9中，自左起第1張表示正常腺管之顯微鏡圖像，右側之3張圖像表示非遺傳性大腸腺瘤之腺瘤組織之顯微鏡圖像。於圖9中，較淡之染色表示WT1蛋白質，較濃且染色成圓形或橢圓形之區域表示核。於腺瘤中可見WT1蛋白質之表現，但於正常腺管中未見WT1蛋白質之表現。

(實施例9：對家族性大腸腺瘤病模型小鼠投予式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物)

於本實施例中，示出對APC^Min/+小鼠投予作為WT1肽疫苗之式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物之實驗之投予方案。

(實驗方法)

將WT1肽疫苗之投予方案示於圖10。利用PBS溶解WT1肽疫苗，將包含WT1肽疫苗之溶解液及PBS單獨利用IFA Montanide ISA51佐劑進行乳液化，分別作為WT1肽疫苗或對照疫苗。於4~5週齡之Apc^Min/+之小鼠之側腹皮內投予WT1肽疫苗或對照疫苗。免疫係自出生後第4~5週開始，以1週1次之頻度進行6次。於最終免疫7天後使免疫之小鼠安樂死，進行進一步之分析。

(實施例10：藉由投予式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物而預防及治療腺瘤)

於本實施例中，顯示藉由對APC^Min/+小鼠投予式(3)之化合物與 WT1_35-52輔助肽之混合物，預防腺瘤之發病，治療腺瘤。再者，式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物之投予如以下之表4所示，不帶來器官損傷。

(實驗方法)

使用藉由實施例9中所記載之投予方案所獲得之小鼠。自最終免疫7天後安樂死之小鼠摘除各器官，測定其重量。小腸分為8~10個組份。各組份於縱向切開，利用PBS進行清洗後，夾於濾紙，於4%多聚甲醛/磷酸緩衝液中，於4℃下固定24小時以上。固定之腸組織利用1%亞甲基藍溶液染色後，於立體顯微鏡下進行觀察，計算腺瘤(息肉)數。WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之間之腺瘤(息肉)數之差係藉由Student's t檢驗而進行統計分析。

(結果)

將實施例10之結果示於圖11。圖表之橫軸係左側表示投予WT1肽疫苗之群，右側表示投予對照疫苗之群，縱軸表示每一小腸之腺瘤數。於WT1肽疫苗投予群中每一小腸之腺瘤數之平均值為約37.2個，相對於此，於對照疫苗投予群中為約43.7個。因此，藉由投予WT1肽疫苗，可見抑制腺瘤之發病，進而治療腺瘤之傾向。

(實施例11：由式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物之投予所引起之WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之增加)

於本實施例中，顯示藉由對APC^Min/+小鼠投予式(3)之化合物與WT1_35-52輔助肽之混合物，WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加。

(實驗方法)

使用藉由實施例9中所記載之投予方案所獲得之小鼠。自最終免疫7天後安樂死之小鼠採取脾細胞。將紅血球溶解後，將細胞利用H-2D^b WT1四聚物(MBL，愛知，日本)進行染色，進而利用抗小鼠CD3抗體(17A2，BioLegend，San Diego，CA)、抗小鼠CD8抗體(KT15，MBL，愛知，日本)及7-AAD Viability Staining Solution(Bioscience，San Diego，CA)進行染色。染色之細胞係利用FACSCanto進行分析，去除7-AAD⁺之死細胞組份，測定CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度。WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之間之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度之差係藉由Student's t檢驗而進行統計分析。

(結果)

將實施例11之結果示於圖12。圖表之橫軸係左側表示投予WT1肽疫苗之群，右側表示投予對照疫苗之群，縱軸表示CD3⁺CD8⁺細胞中之H-2D^b WT1四聚物頻度。於WT1肽疫苗投予群中，CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度之平均值為約0.13%，相對於此，於對照疫苗投予群中為約0.04%，顯示藉由投予WT1肽疫苗，WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞增加。

(實施例12：統計分析)

於本實施例中，顯示實施例10中之腺瘤數與實施例11中之WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞可見相關。

(實驗方法)

將自實施例10所獲得之每一小腸之腺瘤數、及自實施例11所獲得之CD3⁺CD8⁺T細胞中之H-2D^b WT1四聚物⁺CD3⁺CD8⁺T細胞之頻度藉由Microsoft Excel(註冊商標)而繪圖於散佈圖中。進而對該等結果，藉由Excel之皮爾森相關係數對相關關係進行統計分析。

(結果)

根據實施例12之結果，證實WT1肽疫苗投予群與對照疫苗投予群之腺瘤(息肉)數及WT1四聚物頻度表現出較高之相關關係，WT1特異性免疫強力作用於腫瘤之抑制。

(註釋)

如上所述，使用本發明之較佳之實施形態例示了本發明，但瞭解本發明應僅由申請專利範圍而解釋其範圍。瞭解本說明書中所引用之專利、專利申請案及其他文獻之內容本身應與具體記載於本說明書中者同樣地，其內容作為對本說明書之參考而引用。瞭解本案係伴隨對日本特許廳於2018年10月5日提出之日本專利特願2018-190461主張優先權者，其內容應全部作為對本說明書之參考而引用。

[產業上之可利用性]

本發明係對良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之預防、延遲及治療、以及由良性腫瘤(例如家族性大腸腺瘤病)之腺瘤所產生之症狀之預防、延遲及治療有用。本發明之WT1肽疫苗係就避免內視鏡切除等手術，無嚴重之副作用，安全性非常高之方面而言，具有有用性。

[序列表非關鍵文字]

序列編號1 人類WT1蛋白質之全長胺基酸序列

序列編號2 人類WT1₁₂₆肽之胺基酸序列

序列編號3 人類WT1₂₃₅肽之胺基酸序列

序列編號4 人類WT1₃₅肽之胺基酸序列

序列編號5 人類WT1₃₃₂肽之胺基酸序列

序列編號6 人類WT1₁₂₆P1G肽之胺基酸序列

序列編號7 人類WT1₁₂₆P1A肽之胺基酸序列

序列編號8 人類WT1₁₂₆P1V肽之胺基酸序列

序列編號9 人類WT1₁₂₆P1L肽之胺基酸序列

序列編號10 人類WT1₁₂₆P1I肽之胺基酸序列

序列編號11 人類WT1₁₂₆P1M肽之胺基酸序列

序列編號12 人類WT1₁₂₆P1W肽之胺基酸序列

序列編號13 人類WT1₁₂₆P1F肽之胺基酸序列

序列編號14 人類WT1₁₂₆P1Y肽之胺基酸序列

序列編號15 人類WT1₁₂₆P2V肽之胺基酸序列

序列編號16 人類WT1₁₂₆P2Q肽之胺基酸序列

序列編號17 人類WT1₁₂₆P2A肽之胺基酸序列

序列編號18 人類WT1₁₂₆P2L肽之胺基酸序列

序列編號19 人類WT1₁₂₆P2I肽之胺基酸序列

序列編號20 人類WT1₁₂₆P3I肽之胺基酸序列

序列編號21 人類WT1₁₂₆P3L肽之胺基酸序列

序列編號22 人類WT1₁₂₆P3G肽之胺基酸序列

序列編號23 人類WT1₁₂₆P3A肽之胺基酸序列

序列編號24 人類WT1₁₂₆P3V肽之胺基酸序列

序列編號25 人類WT1₁₂₆P3M肽之胺基酸序列

序列編號26 人類WT1₁₂₆P3P肽之胺基酸序列

序列編號27 人類WT1₁₂₆P3W肽之胺基酸序列

序列編號28 人類WT1₁₂₆P9V肽之胺基酸序列

序列編號29 人類WT1₁₂₆P9A肽之胺基酸序列

序列編號30 人類WT1₁₂₆P9I肽之胺基酸序列

序列編號31 人類WT1₁₂₆P9M肽之胺基酸序列

序列編號32 人類WT1₁₂₆P1D肽之胺基酸序列

序列編號33 人類WT1₁₂₆P1E肽之胺基酸序列

序列編號34 人類WT1₁₂₆P1H肽之胺基酸序列

序列編號35 人類WT1₁₂₆P1K肽之胺基酸序列

序列編號36 人類WT1₁₂₆P1N肽之胺基酸序列

序列編號37 人類WT1₁₂₆P1P肽之胺基酸序列

序列編號38 人類WT1₁₂₆P1Q肽之胺基酸序列

序列編號39 人類WT1₁₂₆P1S肽之胺基酸序列

序列編號40 人類WT1₁₂₆P1T肽之胺基酸序列

序列編號41 人類WT1₁₂₆P2I&P9I肽之胺基酸序列

序列編號42 人類WT1₁₂₆P2I&P9V肽之胺基酸序列

序列編號43 人類WT1₁₂₆P2L&P9I肽之胺基酸序列

序列編號44 人類WT1₁₂₆P2L&P9V肽之胺基酸序列

序列編號45 人類WT1_235m肽之胺基酸序列

序列編號46 人類WT1₁₂₆肽之改型體之胺基酸序列

序列編號47 人類WT1₂₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號48 人類WT1₂₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號49 人類WT1₁₂₂肽之改型體之胺基酸序列

序列編號50 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號51 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號52 人類WT1₁₀肽之胺基酸序列

序列編號53 人類WT1₁₈₇肽之胺基酸序列

序列編號54 人類WT1₁₂₆肽之改型體之胺基酸序列

序列編號55 人類WT1₂₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號56 人類WT1₂₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號57 人類WT1₂₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號58 人類WT1₁₀肽之改型體之胺基酸序列

序列編號59 人類WT1₁₈₇肽之改型體之胺基酸序列

序列編號60 人類WT1₁₈₇肽之改型體之胺基酸序列

序列編號61 人類WT1₁₂₆肽之改型體之胺基酸序列

序列編號62 人類WT1₁₂₂肽之改型體之胺基酸序列

序列編號63 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號64 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號65 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號66 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號67 人類WT1₃₅肽之改型體之胺基酸序列

序列編號68 人類WT1₃₇肽之胺基酸序列

序列編號69 人類WT1₁₂₂肽之胺基酸序列

序列編號70 人類WT1₁₂₂肽之改型體之胺基酸序列

序列編號71 人類WT1₁₂₂肽之改型體之胺基酸序列

序列編號72 人類WT1₁₂₂肽之改型體之胺基酸序列

Claims

一種WT1肽或其類似物之用途，其係用於製造預防或治療良性腫瘤之組合物，其中上述WT1肽或其類似物係式(2)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽，或者係式(3)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。
如請求項1之用途，其中上述WT1肽或其類似物係式(2)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。
如請求項1之用途，其中上述WT1肽或其類似物係式(3)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物、或其藥學上所容許之鹽。
如請求項1之用途，其中上述WT1肽或其類似物係進而包含一種以上之包含選自由以下之胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)、CWAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號50)及WAPVLDFAPPGASAYGSLC(序列編號51)所組成之群中之胺基酸序列之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。
如請求項4之用途，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(2)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽、及包含胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。
如請求項4之用途，其中上述WT1肽或其類似物係包含式(3)：
(式中，C與C之間之鍵表示C殘基係藉由雙硫鍵連接)所表示之化合物或其藥學上所容許之鹽、及包含胺基酸序列：WAPVLDFAPPGASAYGSL(序列編號4)之肽或其藥學上所容許之鹽的組合物。
一種編碼如請求項1之WT1肽或其類似物之核酸分子之用途，其係用於製造預防或治療良性腫瘤之組合物。
如請求項7之用途，其中上述核酸分子包含RNA及/或DNA。
如請求項1之用途，其中該組合物進而包含佐劑。
如請求項9之用途，其中上述佐劑為Montanide(註冊商標)ISA51佐劑。
如請求項1之用途，其中上述良性腫瘤表現WT1。
如請求項1至11中任一項之用途，其中上述良性腫瘤選自由家族性大腸腺瘤病、非遺傳性大腸腺瘤、胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤、腦膜瘤、神經鞘瘤、各臟器之上皮性腺瘤、乳頭狀瘤、非上皮性肌瘤、脂肪瘤、軟骨瘤、血管瘤所組成之群。
如請求項12之用途，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病或非遺傳性大腸腺瘤。
如請求項13之用途，其中上述良性腫瘤為家族性大腸腺瘤病。
如請求項1至11中任一項之用途，其中該組合物係1週投予1次。
一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞之誘導方法，其包括如下步驟：於如請求項1至6中任一項之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的末梢血液單核球，或者將如請求項7或8之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該末梢血液單核球，自該末梢血液單核球誘導WT1特異性細胞毒殺性T細胞(CTLs)及/或WT1特異性輔助T細胞。
一種用於預防或治療良性腫瘤之WT1呈現樹突狀細胞之誘導方法，其包括如下步驟：於如請求項1至6中任一項之WT1肽或其類似物之存在下培養源自需要治療良性腫瘤之受驗體的未成熟樹突狀細胞，或者將如請求項7或8之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子導入至該未成熟樹突狀細胞，誘導WT1呈現樹突狀細胞。
一種用於誘導WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之組合物，其係用於預防或治療良性腫瘤，且包含如請求項1至6中任一項之 WT1肽或其類似物、或者如請求項7或8之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子。
一種用於誘導WT1呈現樹突狀細胞之組合物，其係用於預防或治療良性腫瘤，且包含如請求項1至6中任一項之WT1肽或其類似物、或者如請求項7或8之編碼WT1肽或其類似物之核酸分子。
一種如請求項18之WT1特異性CTLs及/或WT1特異性輔助T細胞之用途，其係用於製造預防或治療良性腫瘤之組合物。
一種如請求項19之WT1呈現樹突狀細胞之用途，其係用於製造預防或治療良性腫瘤之組合物。