[go: up one dir, main page]

TWI847992B - 抗體-藥物結合物之有效的製造方法 - Google Patents

抗體-藥物結合物之有效的製造方法 Download PDF

Info

Publication number
TWI847992B
TWI847992B TW108126115A TW108126115A TWI847992B TW I847992 B TWI847992 B TW I847992B TW 108126115 A TW108126115 A TW 108126115A TW 108126115 A TW108126115 A TW 108126115A TW I847992 B TWI847992 B TW I847992B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
amino acid
manufacturing
buffer
drug conjugate
Prior art date
Application number
TW108126115A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202019972A (zh
Inventor
山口達也
櫻谷憲司
Original Assignee
日商第一三共股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日商第一三共股份有限公司 filed Critical 日商第一三共股份有限公司
Publication of TW202019972A publication Critical patent/TW202019972A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI847992B publication Critical patent/TWI847992B/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一種製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子(linker)(式中，A表示與抗體的結合位置)與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物(antibody-drug conjugate)的製造方法，其特徵在於，包含(i)以還原劑還原抗體的步驟、(ii)使藥物連接子中間體與由(i)步驟所還原的抗體進行反應的步驟、(iii)添加具有硫醇基的試劑而使與(ii)的步驟所殘留之藥物連接子中間體進行反應的步驟、接著(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾而去除源自藥物連接子中間體的副產物的步驟。以及，一種含有該抗體-藥物結合物之醫藥組成物的製造方法。

Description

抗體-藥物結合物之有效的製造方法
本發明係關於包含用於減少凝聚物的生成且同時有效地去除副產物的純化步驟之抗體-藥物結合物的製造方法、及包含該抗體-藥物結合物之醫藥組成物的製造方法。
與癌細胞表面所表現的抗原結合，且使可內化進入細胞的抗體與具有細胞毒性的藥物結合之抗體-藥物結合物(Antibody-Drug Conjugate；ADC)，藉由選擇性地將藥物送達癌細胞，而可期待使藥物累積在癌細胞內，使癌細胞消滅(非專利文獻1~5)。
專利文獻1~9的實施例中記載有抗體-藥物結合物的製造方法。在此等製造方法中，包含利用疏水性層析法或凝膠過濾層析法等層析法的純化步驟。
作為抗體-藥物結合物的一例，已知有將抗體與為拓樸異構酶I抑制劑之依喜替康(Exatecan)的衍生物作為構成要素的抗體-藥物結合物(專利文獻10~14、非專利文獻6~9)。此等抗體-藥物結合物因具有優異的抗腫瘤效果與安全性，故現在正在進行臨床試驗。
專利文獻10~14中，作為用於製造上述抗體-藥 物結合物的方法，記載有將抗體與藥物連接子(linker)中間體進行結合的方法、及將所得的抗體-藥物結合物進行純化的方法。
專利文獻11~13的實施例中，記載有藉由使用含有山梨醇的乙酸緩衝液之超過濾，而將上述抗體-藥物結合物進行純化的見解。又，專利文獻14中，記載有藉由可使用乙酸緩衝液、組胺酸緩衝液、或磷酸緩衝液的超過濾，而將上述抗體-藥物結合物進行純化的見解。然而，正期望開發工業性更優異的抗體-藥物結合物的製造方法。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第2002/098883號
[專利文獻2]國際公開第2005/037992號
[專利文獻3]國際公開第2005/084390號
[專利文獻4]國際公開第2006/086733號
[專利文獻5]國際公開第2007/024536號
[專利文獻6]國際公開第2010/141566號
[專利文獻7]國際公開第2011/039724號
[專利文獻8]國際公開第2012/135517號
[專利文獻9]國際公開第2015/104359號
[專利文獻10]國際公開第2014/057687號
[專利文獻11]國際公開第2015/098099號
[專利文獻12]國際公開第2015/115091號
[專利文獻13]國際公開第2015/155998號
[專利文獻14]國際公開第2017/002776號
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13.
[非專利文獻2]Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537.
[非專利文獻3]Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-452.
[非專利文獻4]Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637.
[非專利文獻5]Howard A. et al., J Clin Oncol 29: 398-405.
[非專利文獻6]Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research (2016) 22(20), 5097-5108.
[非專利文獻7]Ogitani Y. et al., Cancer Science (2016) 107, 1039-1046.
[非專利文獻8]Doi T, et al., Lancet Oncol 2017; 18: 1512-22.
[非專利文獻9]Takegawa N, et al., Int. J. Cancer: 141, 1682-1689 (2017).
[發明概要]
本發明的製造方法之抗體-藥物結合物係由式(1)所示之藥 物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合的抗體-藥物結合物，
Figure 108126115-A0202-12-0004-3
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
作為此抗體-藥物結合物的製造方法，可列舉包含以下步驟的製造方法：
(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟
Figure 108126115-A0202-12-0004-4
接著，(iii)添加具有硫醇基的試劑，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟。
但是，為了製造該抗體-藥物結合物，尤其每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍之抗體-藥物結 合物，需要大量的由式(2)所表示之化合物，伴隨於此，能大量產生源自由式(2)所表示之化合物的副產物。又，製造抗體-藥物結合物時，被要求抑制凝聚物的生成，需要一併考慮抗體部分及藥物連接子部分各自特有的物性而探討反應、純化條件。
本發明的一個課題係提供包含用於有效地去除源自由式(2)所表示之化合物的副產物之純化步驟，且抑制凝聚物的生成之工業性優異的抗體-藥物結合物的製造方法。再者，另一課題為建立包含該抗體-藥物結合物的醫藥組成物之工業性優異的製造方法。
本發明人等為了解決上述課題而進行專心致志地探討，結果發現，藉由在抗體-藥物結合物的純化步驟中進行使用緩衝液的超過濾，且該緩衝液含有由強酸與強鹼而成的鹽，而可有效地去除源自由式(2)所表示之化合物的副產物。再者，發現在抗體-藥物結合物的製造步驟及純化步驟中可抑制凝聚物的生成之反應、純化條件。藉此，提供包含該抗體-藥物結合物的醫藥組成物之工業性優異的製造方法。
亦即，本發明提供以下[1]~[410]。
[1]一種製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0006-5
(式中，A表示與抗體的結合位置)，
其特徵在於，包含以下步驟：
(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟
Figure 108126115-A0202-12-0006-6
(iii)添加具有硫醇基的試劑，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟；接著
(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基(maleimidyl)上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物、及 在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物的步驟。
[2]如[1]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦或其鹽。
[3]如[1]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
[4]如[1]至[3]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[5]如[4]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[6]如[4]或[5]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[7]如[1]至[6]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[8]如[7]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[9]如[4]至[8]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[10]如[9]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[11]如[9]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[12]如[1]至[11]中任一項所記載的製造方法，其中，(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑為N-乙醯半胱胺酸。
[13]如[1]至[12]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[14]如[1]至[12]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[15]如[1]至[12]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[16]如[1]至[12]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[17]如[1]至[12]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[18]如[1]至[17]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[19]如[1]至[18]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.2~1重量%。
[20]如[1]至[18]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為約0.5重量%。
[21]如[1]至[18]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.4~0.6重量%。
[22]如[1]至[18]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.5重量%。
[23]如[1]至[22]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽為氯化鈉。
[24]如[1]至[23]中任一項所記載的製造方法，其在(iv)的步 驟後，包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除由強酸與強鹼而成的鹽的步驟。
[25]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[26]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[27]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[28]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[29]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[30]如[24]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[31]如[24]至[30]中任一項所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[32]如[1]至[31]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[33]如[1]至[31]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[34]如[1]至[33]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[35]如[34]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含 由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[36]如[34]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[37]如[1]至[33]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[38]如[37]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[39]如[38]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[40]如[1]至[33]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[41]如[40]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[42]如[41]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[43]如[1]至[33]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[44]如[43]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而 成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[45]如[44]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[46]如[1]至[45]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[47]如[46]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[48]一種醫藥組合物的製造方法，其係藉由如[1]至[47]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[49]如[48]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[50]如[48]或[49]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[51]如[48]或[49]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[52]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[48]至[51]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[53]如[52]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[54]如[52]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[55]一種製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0012-7
(式中，A表示與抗體的結合位置)，
其特徵在於，包含以下步驟：
(i)以參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0013-8
(iii)添加N-乙醯半胱胺酸，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟；接著
(iv)藉由使用含有氯化鈉的組胺酸緩衝液的超過濾，去除由式(3)所表示之化合物、及由式(4)所表示之化合物的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0013-9
Figure 108126115-A0202-12-0013-10
[56]如[55]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[57]如[56]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[58]如[56]或[57]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[59]如[55]至[58]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[60]如[59]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[61]如[56]至[60]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[62]如[61]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[63]如[61]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[64]如[55]至[63]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[65]如[55]至[63]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[66]如[55]至[63]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[67]如[55]至[63]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[68]如[55]至[63]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv) 的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[69]如[55]至[68]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.2~1重量%。
[70]如[55]至[68]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為約0.5重量%。
[71]如[55]至[68]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.4~0.6重量%。
[72]如[55]至[68]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.5重量%。
[73]如[55]至[72]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用組胺酸緩衝液的超過濾，去除氯化鈉的步驟。
[74]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[75]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[76]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[77]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[78]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩 衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[79]如[73]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[80]如[55]至[79]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[81]如[55]至[79]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[82]如[55]至[81]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[83]如[82]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[84]如[82]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[85]如[55]至[81]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[86]如[85]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[87]如[86]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[88]如[55]至[81]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[89]如[88]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[90]如[89]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[91]如[55]至[81]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[92]如[91]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[93]如[92]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[94]如[55]至[93]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[95]如[94]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[96]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[55]至[95]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝 液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[97]如[96]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[98]如[96]或[97]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[99]如[96]或[97]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[100]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[96]至[99]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[101]如[100]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[102]如[100]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[103]一種製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0019-11
(式中，A表示與抗體的結合位置)，
其特徵在於，將藉由(i)~(iii)步驟所得之包含該抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物之溶液，藉由(iv)步驟而進行純化：
(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0019-12
(iii)添加具有硫醇基的試劑的步驟；
(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物、及在由式(2)所表示之化合物 的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物的步驟。
[104]如[103]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦或其鹽。
[105]如[103]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
[106]如[103]至[105]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[107]如[106]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[108]如[106]或[107]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[109]如[103]至[108]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[110]如[109]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[111]如[106]至[110]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[112]如[111]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[113]如[111]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[114]如[103]至[113]中任一項所記載的製造方法，其中，(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑為N-乙醯半胱胺酸。
[115]如[103]至[114]中任一項所記載的製造方法，其中， (iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[116]如[103]至[114]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[117]如[103]至[114]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[118]如[103]至[114]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[119]如[103]至[114]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[120]如[103]至[119]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[121]如[103]至[120]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.2~1重量%。
[122]如[103]至[120]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為約0.5重量%。
[123]如[103]至[120]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.4~0.6重量%。
[124]如[103]至[120]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.5重量%。
[125]如[103]至[124]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽為氯化鈉。
[126]如[103]至[125]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除由強酸與強鹼而成的鹽的步驟。
[127]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[128]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[129]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[130]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[131]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[132]如[126]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[133]如[126]至[132]中任一項所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[134]如[103]至[133]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[135]如[103]至[133]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[136]如[103]至[135]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[137]如[136]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[138]如[136]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[139]如[103]至[135]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[140]如[139]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[141]如[140]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[142]如[103]至[135]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[143]如[142]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[144]如[143]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[145]如[103]至[135]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[146]如[145]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為 包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[147]如[146]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[148]如[103]至[147]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[149]如[148]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[150]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[103]至[149]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[151]如[150]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[152]如[150]或[151]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[153]如[150]或[151]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[154]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[150]至[153]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[155]如[154]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[156]如[154]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[157]一種製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0025-13
(式中，A表示與抗體的結合位置)，
其特徵在於，將藉由(i)~(iii)步驟所得之包含該抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物之溶液，藉由(iv)步驟而進行純化：
(i)以參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟；
Figure 108126115-A0202-12-0026-14
(iii)添加N-乙醯半胱胺酸的步驟；
(iv)藉由使用含有氯化鈉的組胺酸緩衝液的超過濾，去除由式(3)所表示之化合物、及由式(4)所表示之化合物的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0026-15
Figure 108126115-A0202-12-0027-16
[158]如[157]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[159]如[158]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[160]如[158]或[159]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[161]如[157]至[160]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[162]如[161]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[163]如[158]至[162]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[164]如[163]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[165]如[163]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[166]如[157]至[165]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[167]如[157]至[165]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[168]如[157]至[165]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[169]如[157]至[165]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[170]如[157]至[165]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[171]如[157]至[170]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.2~1重量%。
[172]如[157]至[170]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為約0.5重量%。
[173]如[157]至[170]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.4~0.6重量%。
[174]如[157]至[170]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.5重量%。
[175]如[157]至[174]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用組胺酸緩衝液的超過濾，去除氯化鈉的步驟。
[176]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[177]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[178]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[179]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[180]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[181]如[175]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[182]如[157]至[181]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[183]如[157]至[181]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[184]如[157]至[183]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[185]如[184]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[186]如[184]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[187]如[157]至[183]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[188]如[187]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[189]如[188]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[190]如[157]至[183]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[191]如[190]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[192]如[191]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[193]如[157]至[183]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[194]如[193]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[195]如[194]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[196]如[157]至[195]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[197]如[196]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[198]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[157]至[197]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟之群組的至少一種步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[199]如[198]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[200]如[198]或[199]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[201]如[198]或[199]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[202]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[198]至[201]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[203]如[202]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[204]如[202]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[205]一種製造方法，其係由式(6)所示之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0032-17
(式中，藥物連接子與抗體藉由硫醚鍵而結合，n表示每一抗體的藥物連接子的平均結合數)，其特徵在於，包含以下步驟：
(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0033-18
(iii)添加具有硫醇基的試劑，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟；接著
(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物、及在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物的步驟。
[206]如[205]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦或其鹽。
[207]如[205]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
[208]如[205]至[207]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[209]如[208]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[210]如[208]或[209]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[211]如[205]至[210]中任一項所記載的製造方法，其中， (i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[212]如[211]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[213]如[208]至[212]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[214]如[213]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[215]如[213]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[216]如[205]至[215]中任一項所記載的製造方法，其中，(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑為N-乙醯半胱胺酸。
[217]如[205]至[216]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[218]如[205]至[216]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[219]如[205]至[216]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[220]如[205]至[216]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[221]如[205]至[216]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[222]如[205]至[221]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[223]如[205]至[222]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸 與強鹼而成的鹽的濃度為0.2~1重量%。
[224]如[205]至[222]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為約0.5重量%。
[225]如[205]至[222]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.4~0.6重量%。
[226]如[205]至[222]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.5重量%。
[227]如[205]至[226]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽為氯化鈉。
[228]如[205]至[227]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除由強酸與強鹼而成的鹽的步驟。
[229]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[230]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[231]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[232]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[233]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[234]如[228]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[235]如[228]至[234]中任一項所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[236]如[205]至[235]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[237]如[205]至[235]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[238]如[205]至[237]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[239]如[238]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[240]如[238]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[241]如[205]至[237]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[242]如[241]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[243]如[242]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重 鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[244]如[205]至[237]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[245]如[244]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[246]如[245]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[247]如[205]至[237]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[248]如[247]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[249]如[248]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[250]如[205]至[249]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[251]如[250]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[252]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[205]至[251]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成 的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[253]如[252]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[254]如[251]或[252]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[255]如[251]或[252]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[256]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[252]至[255]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[257]如[256]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[258]如[256]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[259]一種製造方法，其係由式(6)所示之抗體-藥物結合物 的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0039-100
(式中，藥物連接子與抗體藉由硫醚鍵而結合，n表示每一抗體的藥物連接子的平均結合數)，
其特徵在於，包含以下步驟：
(i)以參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0039-20
(iii)添加N-乙醯半胱胺酸，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟；接著
(iv)藉由使用含有氯化鈉的組胺酸緩衝液的超過濾，去除由式(3)所表示之化合物、及由式(4)所表示之化合物的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0040-21
Figure 108126115-A0202-12-0040-23
[260]如[259]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[261]如[260]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[262]如[260]或[261]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[263]如[259]至[262]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[264]如[263]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[265]如[260]至[264]中任一項所記載的製造方法，其中， (i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[266]如[265]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[267]如[265]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[268]如[259]至[267]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[269]如[259]至[267]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[270]如[259]至[267]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[271]如[259]至[267]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[272]如[259]至[267]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[273]如[259]至[272]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.2~1重量%。
[274]如[259]至[272]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為約0.5重量%。
[275]如[259]至[272]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.4~0.6重量%。
[276]如[259]至[272]中任一項所記載的製造方法，其中， 相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.5重量%。
[277]如[259]至[276]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用組胺酸緩衝液的超過濾，去除氯化鈉的步驟。
[278]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[279]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[280]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[281]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[282]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[283]如[277]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[284]如[259]至[283]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[285]如[259]至[283]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[286]如[259]至[285]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[287]如[286]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[288]如[286]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[289]如[259]至[285]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[290]如[289]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[291]如[290]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[292]如[259]至[285]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[293]如[292]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[294]如[293]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[295]如[259]至[285]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[296]如[295]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為 包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[297]如[296]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[298]如[259]至[297]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[299]如[298]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[300]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[259]至[299]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[301]如[300]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[302]如[300]或[301]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[303]如[300]或[301]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[304]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[300]至[303]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[305]如[304]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[306]如[304]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[307]一種製造方法，其係由式(6)所示之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0045-24
(式中，藥物連接子與抗體藉由硫醚鍵而結合，n表示每一抗體的藥物連接子的平均結合數)，
其特徵在於，將藉由(i)~(iii)步驟所得之包含該抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物之溶液，藉由(iv)步驟而進行純化：
(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0046-25
(iii)添加具有硫醇基的試劑的步驟；
(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物、及在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物的步驟。
[308]如[307]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦或其鹽。
[309]如[307]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
[310]如[307]至[309]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[311]如[310]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[312]如[310]或[311]所記載的製造方法，其中，緩衝液為 乙酸緩衝液。
[313]如[307]至[312]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[314]如[313]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
[315]如[310]至[314]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[316]如[315]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[317]如[315]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[318]如[307]至[317]中任一項所記載的製造方法，其中，(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑為N-乙醯半胱胺酸。
[319]如[307]至[318]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[320]如[307]至[318]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[321]如[307]至[318]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[322]如[307]至[318]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[323]如[307]至[318]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[324]如[307]至[323]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[325]如[307]至[324]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.2~1重量%。
[326]如[307]至[324]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為約0.5重量%。
[327]如[307]至[324]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.4~0.6重量%。
[328]如[307]至[324]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽的濃度為0.5重量%。
[329]如[307]至[328]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之由強酸與強鹼而成的鹽為氯化鈉。
[330]如[307]至[329]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除由強酸與強鹼而成的鹽的步驟。
[331]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[332]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[333]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[334]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[335]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[336]如[330]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[337]如[330]至[336]中任一項所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
[338]如[307]至[337]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[339]如[307]至[337]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[340]如[307]至[339]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[341]如[340]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[342]如[340]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[343]如[307]至[339]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[344]如[343]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識 別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[345]如[344]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[346]如[307]至[339]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[347]如[346]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[348]如[347]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[349]如[307]至[339]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗CDH6抗體。
[350]如[349]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[351]如[350]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[352]如[307]至[351]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[353]如[352]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[354]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[307]至 [353]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[355]如[354]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[356]如[354]或[355]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[357]如[354]或[355]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[358]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[354]至[357]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[359]如[358]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[360]如[358]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山 梨醇酯20。
[361]一種製造方法，其係由式(6)所示之抗體-藥物結合物的製造方法，
Figure 108126115-A0202-12-0052-26
(式中，藥物連接子與抗體藉由硫醚鍵而結合，n表示每一抗體的藥物連接子的平均結合數)
其特徵在於，將藉由(i)~(iii)步驟所得之包含該抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物之溶液，藉由(iv)步驟而進行純化：
(i)以參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0052-27
(iii)添加N-乙醯半胱胺酸的步驟；
(iv)藉由使用含有氯化鈉的組胺酸緩衝液的超過濾，去除由式(3)所表示之化合物、及由式(4)所表示之化合物的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0053-28
Figure 108126115-A0202-12-0053-29
[362]如[361]所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
[363]如[362]所記載的製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
[364]如[362]或[363]所記載的製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
[365]如[361]至[364]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
[366]如[365]所記載的製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四 乙酸。
[367]如[362]至[366]中任一項所記載的製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
[368]如[367]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[369]如[367]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[370]如[361]至[369]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[371]如[361]至[369]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[372]如[361]至[369]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[373]如[361]至[369]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[374]如[361]至[369]中任一項所記載的製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[375]如[361]至[374]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.2~1重量%。
[376]如[361]至[374]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為約0.5重量%。
[377]如[361]至[374]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉 的濃度為0.4~0.6重量%。
[378]如[361]至[374]中任一項所記載的製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用之氯化鈉的濃度為0.5重量%。
[379]如[361]至[378]中任一項所記載的製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用組胺酸緩衝液的超過濾，去除氯化鈉的步驟。
[380]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
[381]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。
[382]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7~5.3的範圍。
[383]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.8~5.2的範圍。
[384]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.9~5.1的範圍。
[385]如[379]所記載的製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為5.0。
[386]如[361]至[385]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍。
[387]如[361]至[385]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
[388]如[361]至[387]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER2抗體。
[389]如[388]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[390]如[388]所記載的製造方法，其中，抗HER2抗體為包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[391]如[361]至[387]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗HER3抗體。
[392]如[391]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[393]如[392]所記載的製造方法，其中，抗HER3抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[394]如[361]至[387]中任一項所記載的製造方法，其中，抗體為抗GPR20抗體。
[395]如[394]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[396]如[395]所記載的製造方法，其中，抗GPR20抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[397]如[361]至[387]中任一項所記載的製造方法，其中， 抗體為抗CDH6抗體。
[398]如[397]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
[399]如[398]所記載的製造方法，其中，抗CDH6抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失。
[400]如[361]至[399]中任一項所記載的製造方法，其特徵在於，不包含利用層析法的純化步驟。
[401]如[400]所記載的製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
[402]一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如[361]至[401]中任一項所記載的製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
[403]如[402]所記載的製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
[404]如[401]或[402]所記載的製造方法，其中，賦形劑為蔗糖。
[405]如[401]或[402]所記載的製造方法，其中，賦形劑為海藻糖。
[406]一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如[402]至[405]中任一項所記載的製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：
(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
[407]如[406]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80。
[408]如[406]所記載的製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20。
[409]一種抗體-藥物結合物，其係藉由如[1]至[47]、[55]至[95]、[103]至[149]、[157]至[197]、[205]至[251]、[259]至[299]、[307]至[353]、及[361]至[401]中任一項所記載的製造方法而製造。
[410]一種醫藥組成物，其係藉由如[48]至[54]、[96]至[102]、[150]至[156]、[198]至[204]、[252]至[258]、[300]至[306]、[354]至[360]、及[402]至[408]中任一項所記載的製造方法而製造。
藉由本發明，可提供包含用於抑制凝聚物的生成且同時有效地去除源自由式(2)所表示之化合物的副產物的純化步 驟之抗體-藥物結合物的製造方法。再者，可提供包含該抗體-藥物結合物的醫藥組成物之工業性優異的製造方法。
圖1係顯示在使用組胺酸緩衝液(pH5.0)、或含有0.5%氯化鈉的組胺酸緩衝液(pH5.0)進行超過濾之情形中化合物(3)及化合物(4)的含有率之圖。
圖2係顯示使用組胺酸緩衝液(pH5.0或者pH5.8)、或含有0.4%氯化鈉的組胺酸緩衝液(pH5.0或者pH5.8)進行超過濾之情形中凝聚物的含有率之圖。
圖3係顯示抗HER2抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號1)之圖。
圖4係顯示抗HER2抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號2)之圖。
圖5係顯示抗HER3抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號3)之圖。
圖6係顯示抗HER3抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號4)之圖。
圖7係顯示抗GPR20抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號5)之圖。
圖8係顯示抗GPR20抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號6)之圖。
圖9係顯示抗CDH6抗體重鏈的胺基酸序列(序列識別號7)之圖。
圖10係顯示抗CDH6抗體輕鏈的胺基酸序列(序列識別號 8)之圖。
[用以實施發明的形態]
以下，針對用於實施本發明的較佳形態，一邊參照圖面一邊進行說明。此外，以下所說明的實施形態係揭示本發明的代表性實施形態的一例者，並不藉此限縮解釋本發明的範圍。
1.抗體-藥物結合物
藉由本發明而製造的抗體-藥物結合物係由式(1)所示之藥物連接子，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物，
Figure 108126115-A0202-12-0060-30
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
本發明中，將抗體-藥物結合物之中包含連接子及藥物的部分結構稱為「藥物連接子」。此藥物連接子與在抗體的鏈間的雙硫鍵部位(2處的重鏈-重鏈間、及2處的重鏈-輕鏈間)產生的硫醇基(換言之，半胱胺酸殘基的硫原子)結合。
藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物的藥物連接子，將為拓樸異構酶I抑制劑之依喜替康作為構成要素。依喜替康係由式(5)所示之具有抗腫瘤效果的喜樹鹼衍生物，
Figure 108126115-A0202-12-0061-31
藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物，亦可由式(6)表示，
Figure 108126115-A0202-12-0061-32
於此，藥物連接子與抗體藉由硫醚鍵結合。又，n與所謂平均藥物結合數(DAR；Drug-to-Antibody Ratio)同意義，表示每一抗體的藥物連接子的平均結合數。
藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物，在移動至癌細胞內後，游離出由式(7)所表示之化合物，
Figure 108126115-A0202-12-0061-33
式(7)所表示之化合物被認為是藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物的抗腫瘤活性的本體，被確認具有拓樸異構 酶I阻礙作用(Ogitani Y.et al.,Clinical Cancer Research,2016,Oct 15；22(20)：5097-5108,Epub 2016 Mar 29)。
式(7)所表示之化合物被認為是藉由將藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物的連接子部分進行剪切而產生之由式(8)所表示之化合物的胺縮醛結構進行分解而產生，
Figure 108126115-A0202-12-0062-34
藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物，亦已知具有旁觀者效應(bystander effect)(Ogitani Y.et al.,Cancer Science(2016)107,1039-1046)。此旁觀者效應係在藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物內化進入目標表現癌細胞後，由式(7)所表示之化合物被游離，對於未表現目標的鄰近癌細胞亦造成抗腫瘤效果，藉此而發揮。
2.抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體，可源自任一物種，但較佳為源自人類、大鼠、小鼠、及兔子的抗體。抗體源自人類以外的物種之情形，較佳為使用周知的技術，進行嵌合化或人源化(humanized)。本發明的抗體可為多株抗體，亦可為單株抗體，但較佳為單株抗體。
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體， 較佳為具有可將癌細胞作為目標的性質者，較佳為具備可辨識癌細胞的特性、可與癌細胞結合的特性、被捕捉進癌細胞內而內化的特性、及/或對癌細胞的殺細胞活性等者。
抗體對癌細胞的結合性，可使用流動式細胞測量術進行確認。往癌細胞內的抗體的捕捉，可使用以下方法進行確認：(1)使用與治療抗體結合的二級抗體(螢光標記)，利用螢光顯微鏡，將被捕捉進細胞內的抗體進行可視化的分析(Cell Death and Differentiation(2008)15,751-761)；(2)使用與治療抗體結合的二級抗體(螢光標記)，測定被捕捉進細胞內的螢光量的分析(Molecular Biology of the Cell Vol.15,5268-5282,December 2004)；或(3)使用與治療抗體結合的免疫毒素，所謂當被捕捉至細胞內便釋放毒素而抑制細胞增殖的Mab-ZAP分析(Bio Techniques 28：162-165,January 2000)。作為免疫毒素，亦能使用白喉毒素的觸媒區域與蛋白質G的重組複合蛋白質。
抗體的抗腫瘤活性，在活體外可藉由測定細胞的增殖的抑制活性而確認。例如，可培養過度表現抗體的目標蛋白質的癌細胞株，在培養系統中以各種濃度添加抗體，測定對於灶形成(focus formation)、群落形成及球體增殖的抑制活性。在活體內，例如藉由將抗體投與至已移植高表現目標蛋白質的癌細胞株的裸鼠，測定癌細胞的變化，而可確認抗腫瘤活性。
抗體本身具有抗腫瘤效果一事，較佳為抗體-藥物結合物因結合發揮抗腫瘤效果的化合物，故抗體本身的抗腫瘤效果為非必要。由使抗腫瘤性化合物的細胞毒性在癌細胞中特異性、選擇性發揮之目的而言，較佳為重點在於抗體具有進行內化 而移動至癌細胞內的性質。
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體，可藉由周知手段而取得。例如，可使用此領域所通常實施的方法，將成為抗原的多肽對動物進行免疫，採取活體內所產生的抗體並進行純化，藉此而得。抗原的來源不限定於人類，亦可將源自小鼠、大鼠等人類以外的動物的抗原對動物進行免疫。在此情形中，藉由試驗與所取得之異種抗原結合的抗體與人類抗原的交叉性，可篩選能適用於人類疾病的抗體。
又，亦可遵循周知方法(例如Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497；Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))，使產生對於抗原的抗體之抗體產生細胞與骨髓瘤細胞進行融合而建立融合瘤，獲得單株抗體。
此外，抗原可藉由利用基因操作使編碼抗原蛋白質的基因在宿主細胞中產生而獲得。具體而言，只要製作能表現抗原基因的載體，將其導入宿主細胞，使該基因表現，並純化所表現的抗原即可。使用將由上述基因操作所致之抗原表現細胞、或表現抗原之細胞株對動物進行免疫的方法，藉此亦可取得抗體。
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體，較佳為以使對人類的異種抗原性降低等為目的而人為改變的基因重組型抗體，例如嵌合(Chimeric)抗體、人源化(Humanized)抗體，或較佳為僅具有源自人類的抗體的基因序列之抗體，亦即人類抗體(human antibody)。此等抗體可使用既知方法進行製造。
作為嵌合抗體，可列舉抗體的可變區與恆定區域互 為異種的抗體，例如將源自小鼠或大鼠的抗體的可變區與源自人類的恆定區域接合的嵌合抗體(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81,6851-6855,(1984))。
作為人源化抗體，可列舉僅將異種抗體的互補決定區(CDR；complementarity determining region)組入源自人類的抗體的抗體(Nature(1986)321,p.522-525)、藉由CDR移植法而除了異種抗體的CDR的序列以外亦將異種抗體的一部分架構的胺基酸殘基移植至人類抗體的抗體(國際公開第90/07861號)、使用基因置換突變誘發(gene conversion mutagenesis)策略而人源化的抗體(美國專利第5821337號)。
作為人類抗體，可列舉使用具有包含人類抗體的重鏈與輕鏈的基因之人類染色體片段的人類抗體產生小鼠所作成的抗體(參照Tomizuka,K.et al.,Nature Genetics(1997)16,p.133-143；Kuroiwa,Y.et.al.,Nucl.Acids Res.(1998)26,p.3447-3448；Yoshida,H.et.al.,Animal Cell Technology：Basic and Applied Aspects vol.10,p.69-73(Kitagawa,Y.,Matsuda,T.and Iijima,S.eds.),Kluwer Academic Publishers,1999；Tomizuka,K.et.al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97,p.722-727等)。或者，亦可列舉藉由由人類抗體庫所篩選的噬菌體顯示(phage display)而取得的抗體(參照Wormstone,I.M.et.al,Investigative Ophthalmology & Visual Science.(2002)43(7),p.2301-2308；Carmen,S.et.al.,Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002),1(2),p.189-203；Siriwardena,D.et.al.,Ophthalmology(2002)109(3),p.427-431等)。
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之抗體中，亦包含抗體的修飾物。所謂該修飾物，意指對本發明的抗體施以化學性或生物學性修飾而成者。在化學性修飾物中，包含具有對胺基酸骨架的化學部分的結合、對N-鍵或O-鍵碳水化合物鏈的化學部分的結合之化學修飾物等。在生物學性修飾物中，包含經轉譯後修飾(例如N-鍵或O-鍵型糖鏈的加成、N端或C端的加工、脫醯胺化、天冬醯胺酸的異構化、甲硫胺酸的氧化等)者、藉由使用原核生物宿主細胞使其表現而在N端加成甲硫胺酸殘基者等。又，為了能偵測或分離本發明之抗體或抗原能而標記者，例如酵素標記物、螢光標記物、親和力標記物亦包含在此修飾物的意義中。此各種本發明之抗體的修飾物，有用於抗體的穩定性及血中滯留性的改善、抗原性的減低、抗體或抗原的偵測或分離等。
又，藉由調節與本發明之抗體結合的糖鏈修飾(醣苷化、去海藻糖化等)，能增強抗體依賴性細胞毒性活性。作為抗體的糖鏈修飾的調節技術，已知有國際公開第99/54342號、國際公開第00/61739號、國際公開第02/31140號等，但不限於此等。本發明之抗體中，亦包含經調節該糖鏈修飾的抗體。
此外，在哺乳類培養細胞所生產的抗體，已知其重鏈的羧基末端的離胺酸殘基缺失(Journal of Chromatography A,705：129-134(1995))、又，已知同樣地重鏈羧基末端的甘胺酸、離胺酸的2個胺基酸殘基缺失，且新位於羧基末端的脯胺酸殘基被醯胺化(Analytical Biochemistry,360：75-83(2007))。但是，此等重鏈序列的缺失及修飾，不對抗體的抗原結合能及效應子功能(effector function)(補體的活化、抗體 依賴性細胞毒性作用等)造成影響。因此，在本發明之抗體中，亦包含接受該修飾的抗體及該抗體的機能性片段，亦包含在重鏈羧基末端1或2個胺基酸缺失的缺失體、及被醯胺化的該缺失體(例如羧基末端部位的脯胺酸殘基被醯胺化的重鏈)等。但是，只要保留抗原結合能及效應子功能，則本發明之抗體的重鏈的羧基末端的缺失體不限於上述種類。構成本發明之抗體的2條重鏈，可為選自包含全長及上述缺失體之群組的重鏈之任一種，亦可為組合任二種者。各缺失體的量比能受到產生本發明之抗體的哺乳類培養細胞的種類及培養條件影響，但本發明之抗體，較佳可列舉在2條重鏈雙方的羧基末端的一個胺基酸殘基缺失者。
作為本發明之抗體的同型，可列舉例如IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等，但較佳可列舉IgG1或IgG2。
本發明的抗體-藥物結合物的製造所能使用之抗體，並未特別限制，但可列舉例如抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗TROP2抗體、抗B7-H3抗體、抗CD3抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD37抗體、抗CD56抗體、抗CD98抗體、抗DR5抗體、抗EGFR抗體、抗EPHA2抗體、抗FGFR2抗體、抗FGFR4抗體、抗FOLR1抗體、抗VEGF抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD70抗體、抗PSMA抗體、抗CEA抗體、抗間皮素(Mesothelin)抗體、抗A33抗體、抗CanAg抗體、抗Cripto抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗GPNMB抗體、抗整合素(Integrin)抗體、抗肌腱蛋白-C(Tenascin-C)抗體、抗SLC44A4抗體、抗GPR20抗體、及抗CDH6抗體，較佳可列舉抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗TROP2抗體、抗B7-H3抗體、抗GPR20抗體、及抗CDH6抗體，更佳可列舉抗 HER2抗體、抗HER3抗體、抗GPR20抗體、及抗CDH6抗體。
本發明中，所謂「抗HER2抗體」，表示具有與HER2(Human Epidermal Growth FactorReceptor Type 2；ErbB-2)特異性結合，較佳為藉由與HER2結合而內化至HER2表現細胞的活性的抗體。
作為抗HER2抗體，可列舉例如曲妥珠單抗(Trastuzumab)(美國特許第5821337號)、及帕妥珠單抗(Pertuzumab)(國際公開第01/00245號)，較佳可列舉曲妥珠單抗。
本發明中，所謂「抗HER3抗體」，表示具有與HER3(Human Epidermal Growth FactorReceptor Type 3；ErbB-3)特異性結合，較佳為藉由與HER3結合而內化至HER3表現細胞的活性的抗體。
作為抗HER3抗體，可列舉例如帕曲妥單抗(Patritumab；U3-1287)、U1-59(國際公開第2007/077028號)、MM-121(絲里班圖單抗(Seribantumab))、國際公開2008/100624號所記載的抗ERBB3抗體、RG-7116(倫雪珠單抗(Lumretuzumab))、及LJM-716(依根妥單抗(Elgemtumab))，較佳可列舉帕曲妥單抗、及U1-59。
本發明中，所謂「抗TROP2抗體」，表示具有與TROP2(TACSTD2：腫瘤關聯鈣訊息傳遞因子(Tumor-associated calcium signal transducer 2)；EGP-1)特異性結合，較佳為藉由與TROP2結合而內化至TROP2表現細胞的活性的抗體。
作為抗TROP2抗體，可列舉例如hTINA1-H1L1(國際公開第2015/098099號)。
本發明中，所謂「抗B7-H3抗體」，表示具有與B7-H3(B細胞抗原#7同系物3；PD-L3；CD276)特異性結合，較佳為藉由與B7-H3結合而內化至B7-H3表現細胞的活性的抗體。
作為抗B7-H3抗體，可列舉例如M30-H1-L4(國際公開第2014/057687號)。
本發明中，所謂「抗GPR20抗體」，表示具有與GPR20(蛋白偶聯受體20(G Protein-coupled receptor 20))特異性結合，較佳為藉由與GPR20結合而內化至GPR20表現細胞的活性的抗體。
作為抗GPR20抗體，可列舉例如h046-H4e/L7(國際公開第2018/135501號)。
本發明中，所謂「抗CDH6抗體」，表示具有與CDH6(黏附蛋白-6(Cadherin-6))特異性結合，較佳為藉由與CDH6結合而內化至CDH6表現細胞的活性的抗體。
作為抗CDH6抗體，可列舉例如H01L02(國際公開第2018/212136號)。
3.抗體-藥物結合物的製造所使用之藥物連接子中間體
本發明的抗體-藥物結合物的製造所使用之藥物連接子中間體係由式(2)所表示之化合物，
Figure 108126115-A0202-12-0070-35
由式(2)所表示之化合物，可參考國際公開第2014/057687號、國際公開第2015/098099號、國際公開第2015/115091號、國際公開第2015/155998號、及國際公開第2019/044947號等的記載而進行製造。
4.抗體與藥物連接子中間體的接合(conjugation)
在本發明的抗體-藥物結合物的製造中之抗體與藥物連接子中間體的接合，包含：
(i)以還原劑還原抗體的步驟、
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟、
(iii)添加具有硫醇基的試劑，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟。
(i)的步驟所使用之還原劑，只要可將抗體的鏈間雙硫鍵進行還原者則未被特別限定，但例如可使用參(2-羧乙基)膦或其鹽、二硫蘇糖醇、或2-巰乙醇，較佳可使用參(2-羧乙基)膦或其鹽，更佳可使用參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
(i)的步驟所使用之還原劑的每一分子抗體的當量 (以下，本發明中所謂「當量」，意指莫耳當量)，可依據所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數、及抗體的種類而適當選擇。
例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，還原劑相對於一分子抗體較佳可使用4.1~5.1當量，更佳為4.4~4.8當量，再佳為約4.6當量。於此，所謂「約4.6當量」，較佳為4.5~4.7當量，更佳為4.6當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，還原劑相對於一分子抗體較佳可使用5.5~6.5當量，更佳為5.8~6.2當量，再佳為約6當量。於此，所謂「約6當量」，較佳為5.9~6.1當量，更佳為6.0當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗GPR20抗體(較佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至 234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，還原劑相對於一分子抗體較佳可使用4.3~5.3當量，更佳為4.6~5當量，再佳為約4.8當量。於此，所謂「約4.8當量」，較佳為4.7~4.9當量，更佳為4.8當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗CDH6抗體(較佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，還原劑相對於一分子抗體較佳可使用4.3~5.3當量，更佳為4.6~5當量，再佳為約4.8當量。於此，所謂「約4.8當量」，較佳為4.7~4.9當量，更佳為4.8當量。
(i)的步驟較佳為可在緩衝液中進行。
(i)的步驟所使用之緩衝液的pH較佳為6~8，更佳為6.5~7.5，再佳為6.9~7.4，再佳為7.0~7.3。
(i)的步驟所使用之緩衝液，只要為抗體的鏈間雙硫鍵的還原之際所能使用者則未被特別限制，但例如可使用乙酸緩衝液、組胺酸緩衝液、磷酸緩衝液、哌
Figure 108126115-A0202-12-0072-97
-1,4-雙(2-乙磺酸)(Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid)，以下亦稱為「PIPES」)緩衝液、4-(2-羥乙基)-1-哌
Figure 108126115-A0202-12-0072-98
乙磺酸(4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine ethanesulfonic acid，以下亦稱為「HEPES」)。
例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥 物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，較佳為可使用已調整成pH6~8的乙酸緩衝液，更佳為可使用已利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的乙酸緩衝液，再佳為可使用已利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6.8~7.8的乙酸緩衝液，再佳為利用磷酸氫二鈉水溶液而pH已調整成約7.3的乙酸緩衝液。於此，所謂「約7.3」，較佳為7.1~7.5的範圍，更佳為7.2~7.4的範圍，再佳為7.3。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，較佳為可使用已調整成pH6~8的乙酸緩衝液，更佳為可使用已利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的乙酸緩衝液，再佳為可使用已利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6.5~7.5的乙酸緩衝液，再佳為利用磷酸氫二鈉水溶液而pH已調整成約7的乙酸緩衝液。於此，所謂「約7」，較佳為6.8~7.2的範圍，更佳為6.9~7.1的範圍，再佳為7.0。
藉由使用此緩衝液，可最小化凝聚物的生成。此外，(i)的步驟所使用之緩衝液亦可含有源自製造抗體的緩衝液。
(i)的步驟較佳為在螯合劑的存在進行。螯合劑只要為在抗體的鏈間雙硫鍵的還原之際所能使用者則未被特別限制，但可使用例如乙二胺四乙酸(以下亦稱為「EDTA」)、二乙烯三胺五乙酸、或二醇醚二胺四乙酸，較佳為可使用乙二胺四乙酸。
螯合劑較佳為相對於一分子抗體可使用1~20當量，更佳為相對於一分子抗體1分子可使用3~8當量，再佳為相對於一分子抗體可使用4~6當量，再佳為相對於一分子抗體可使用5當量。
(i)的步驟所使用之緩衝液亦可含有界面活性劑。本發明中，所謂「界面活性劑」，表示具有親水性基與疏水性基，且能被使用作為醫藥品製劑的構成成分之一的物質。作為此種界面活性劑，可列舉例如聚山梨醇酯(包含聚山梨醇酯80(Tween80)、聚山梨醇酯20(Tween20)、及聚山梨醇酯60(Tween60))、聚氧乙烯(polyoxyethylene)(160)聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚氧乙烯蓖麻油、或硫酸月桂酯鈉，更佳可列舉聚山梨醇酯20、或聚山梨醇酯80。
(i)的步驟所使用之緩衝液是否含有界面活性劑、及界面活性劑的種類，可依據所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數、及抗體的種類而適當選擇。
例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列 識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，(i)的步驟所使用之緩衝液，較佳為不含有界面活性劑。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟所使用之緩衝液，含有聚山梨醇酯20，且可較佳地使用。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗GPR20抗體(較佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟所使用之緩衝液，含有聚山梨醇酯80，且可較佳地使用。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗CDH6抗體(較佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟所使用之緩衝液，含有聚山梨醇酯80，且可較佳地使用。
(i)的步驟較佳為可在25~50℃的內溫下進行。
所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接 子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，(i)的步驟較佳為可在30~40℃的內溫下進行，更佳為可在約35℃的內溫下進行。於此，所謂「約35℃」，較佳為33℃~37℃，更佳為34℃~36℃，再佳為35℃。
所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟較佳為可在30~40℃的內溫下進行，更佳為可在約35℃的內溫下進行。於此，所謂「約35℃」，較佳為33℃~37℃，更佳為34℃~36℃，再佳為35℃。
所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗GPR20抗體(較佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟較佳為可在25~35℃的內溫下進行，更佳為可在約30℃的內溫下進行。於此，所謂「約30℃」，較佳為28℃~32℃，更佳為29℃~31℃， 再佳為30℃。
所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗CDH6抗體(較佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，(i)的步驟較佳為可在25~35℃的內溫下進行，更佳為可在約30℃的內溫下進行。於此，所謂「約30℃」，較佳為28℃~32℃，更佳為29℃~31℃，再佳為30℃。
(i)的步驟的反應時間較佳為1~4小時。
(ii)的步驟所使用之由式(2)所表示之化合物的每一分子抗體的當量，可依據所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數、及抗體的種類而適當選擇。
例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，由式(2)所表示之化合物較佳為相對於一分子抗體可使用8~10當量，更佳為8.2~9.2當量，再佳為約8.7當量。於此，所謂「約8.7當量」，較佳為8.5~8.9當量，更佳為8.6~8.8當量，再佳為8.7當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物 連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，由式(2)所表示之化合物較佳為相對於一分子抗體可使用8~10當量，更佳為9~10當量，再佳為約9.5當量。於此，所謂「約9.5當量」，較佳為9.3~9.7當量，更佳為9.4~9.6當量，再佳為9.5當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗GPR20抗體(較佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，由式(2)所表示之化合物較佳為相對於一分子抗體可使用8~10當量，更佳為8.3~9.3當量，再佳為約8.8當量。於此，所謂「約8.8當量」，較佳為8.6~9.0當量，更佳為8.7~8.9當量，再佳為8.8當量。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗CDH6抗體(較佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，由式(2)所表示之化合物較佳為相對於一分子抗體可使用8~10當量，更佳為8.6~9.6當量，再佳為約9.1當量。於此，所謂「約9.1當量」，較 佳為8.9~9.3當量，更佳為9.0~9.2當量，再佳為9.1當量。
由式(2)所表示之化合物較佳為可在已溶解於溶劑的狀態下添加至由(i)的步驟所得的反應液。作為此溶劑，只要為在與抗體的結合反應之際所能使用者則未特別限制，但較佳可使用二甲亞碸、二甲亞碸水溶液、丙酮、或丙酮水溶液，更佳可使用二甲亞碸水溶液，再佳可使用80%二甲亞碸水溶液。再者，此等溶劑較佳為可在含有乙酸的狀態使用。該乙酸較佳為相對於一分子抗體可使用9~10當量。
(ii)的步驟較佳為可在5~25℃的內溫下進行，更佳為可在10~20℃的內溫下進行，再佳為可在約15℃的內溫下進行。於此，所謂「約15℃」，較佳為13℃~17℃，更佳為14℃~16℃，再佳為15℃。
(ii)的步驟的反應時間較佳為0.5~2小時。
(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑，可為了使與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應而使用。換言之，(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑，可為了使多餘的由式(2)所表示之化合物進行淬火而使用。
作為(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑，只要為可與由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基進行反應者則未被特別限制，但可使用例如N-乙醯半胱胺酸及半胱胺酸，較佳可使用N-乙醯半胱胺酸。
(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑較佳為相對於一分子抗體可使用10~50當量，更佳可使用10~30當量。
(iii)的步驟較佳為可在5~25℃的內溫下進行，更佳為可在10~20℃的內溫下進行，再佳為可在約15℃的內溫下 進行。於此，所謂「約15℃」，較佳為13℃~17℃，更佳為14℃~16℃，再佳為15℃。
(iii)的步驟的反應時間較佳為0.5~2小時。
5.抗體-藥物結合物的純化
本發明的抗體-藥物結合物的製造方法，其特徵在於，藉由以下步驟而純化：(i)以還原劑還原抗體的步驟；
(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
Figure 108126115-A0202-12-0080-36
接著，(iii)添加具有硫醇基的試劑的步驟；
將藉此所得之該包含抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物之溶液，進行
(iv)藉由使用含有由強酸與強鹼而成的鹽的緩衝液的超過濾，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物、及在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物的步驟。
本發明中，所謂「抗體-藥物結合物的未純化物或 粗純化物」，意指在剛進行完(i)~(iii)的步驟後之未純化狀態的抗體-藥物結合物、或利用層析法以外的操作(例如超過濾以外的簡易過濾)而呈粗純化狀態的抗體-藥物結合物。作為超過濾以外的簡易過濾，可列舉例如精密過濾(膜過濾器過濾)。
又，上述「抗體-藥物結合物的未純化物或粗純化物」，亦可為以(iv)的步驟所使用之緩衝液成為適當pH之方式調整pH者。此pH調整較佳為可使用乙酸水溶液進行，更佳為可使用10%乙酸水溶液進行。
本發明中，所謂「超過濾」，意指藉由通過具有約0.001μm至約0.05μm的範圍的細孔徑的膜(超過濾膜)進行過濾，而區分大的溶質分子與小的溶質分子，或區分溶質分子與溶劑分子之純化方法。超過濾膜，一般具有1kDa~1000kDa的範圍的截留分子量(Molecular Weight Cut Off，MWCO)。MWCO，一般被定義為藉由此膜而保持90%的球狀溶質的分子量。本發明的超過濾較佳為可使用MWCO為1kDa~100kDa的超過濾膜進行，更佳為可使用30kDa的超過濾膜進行。又，作為超過濾膜的材質，可列舉例如再生纖維素、乙酸纖維素、芳香族聚醯胺、聚乙烯醇、聚碸、聚醚碸、聚偏二氟乙烯、聚乙烯、聚丙烯腈、耐綸、及陶瓷。本發明的超過濾較佳為可使用將再生纖維素作為材質的超過濾膜進行，但不限於此。作為本發明所使用之超過濾膜的例子，可列舉Pellicon(註冊商標)XL Cassette Ultracel(註冊商標)(Merck公司製)、Pellicon(註冊商標)2 Ultracel(註冊商標)(Merck公司製)、及Pellicon(註冊商標)3 Ultracel(註冊商標)(Merck公司製)。此外，超過濾就狹義而言，亦有意指藉由壓力操作或離心操作而強制進行過濾的方法之情 形，另一方面，藉由被動擴散而進行過濾的方法亦有一般被稱為「透析過濾」之情形，但只要是使用超過濾膜，則任一情形皆包含在本發明中的「超過濾」。
本發明中，所謂「凝聚物」，意指能在廣範圍的pH及導電率的條件下穩定之包含蛋白質分子的集合體與其他任意成分之微粒。抗體-藥物結合物製劑中之凝聚物的形成，會成為對接受該製劑的投與的患者造成免疫原性或靜脈疾病的主要原因等，在醫療上，會造成不被期望的影響。因此，在抗體-藥物結合物的製劑化時，要求抑制凝聚物的形成。
(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽之情形，去除在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(i)的步驟所使用之還原劑的化合物，係由式(3)所表示之化合物，
Figure 108126115-A0202-12-0082-37
(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑為N-乙醯半胱胺酸之情形，在由式(2)所表示之化合物的馬來醯亞胺基上加成有(iii)的步驟所使用之具有硫醇基的試劑的化合物，係由式(4)所表示之化合物，
Figure 108126115-A0202-12-0083-38
藉由進行(iv)的步驟，相較於進行(iv)的步驟前，式(3)所表示之化合物、及式(4)所表示之化合物，較佳為可去除97%，更佳為可去除98%，再佳為可去除99%，再佳為可去除100%。
(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為約5。於此，所謂「為約5」，較佳為4.7~5.3的範圍，更佳為4.8~5.2的範圍，再佳為4.9~5.1的範圍，再佳為5.0。藉由以此pH進行超過濾，可抑制凝聚物的生成。本步驟後的凝聚物量較佳為4%以下，更佳為2%以下。此外，原料的抗體本身也含有一定程度的凝聚物，本步驟中的凝聚物量係以包含此等在內的合計量進行偵測。
(iv)的步驟所使用之緩衝液，可列舉例如含有由強酸與強鹼而成的鹽之組胺酸緩衝液、含有由強酸與強鹼而成的鹽之乙酸緩衝液、或含有由強酸與強鹼而成的鹽之磷酸緩衝液，較佳可列舉含有由強酸與強鹼而成的鹽之組胺酸緩衝液。
由強酸與強鹼而成的鹽的濃度，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，較佳為0.2~1重量%，更佳為0.3~0.9重量%，再佳為0.3~0.8重量%，再佳為0.4~0.7重量%，再佳為 約0.5重量%。於此，所謂「大約為0.5重量%」，較佳為0.4~0.6重量%，再佳為0.5重量%。
(iv)的步驟所使用之緩衝液所含的由強酸與強鹼而成的鹽，只要表現本發明效果則未被特別限制，但例如為選自包含氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、及硫酸鉀之群組的至少任一種鹽、或二種以上的組合的鹽，較佳為氯化鈉。
本發明的製造方法較佳為在(iv)的步驟後包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除由強酸與強鹼而成的鹽的步驟。
(v)的步驟所使用之緩衝液的pH，只要表現本發明效果則未被特別限制，但例如為4~6的範圍，較佳為大約為5。於此，所謂「大約為5」，較佳為4.7~5.3的範圍，再佳為4.8~5.2的範圍，再佳為4.9~5.1的範圍，再佳為5.0。
作為(v)的步驟所使用之緩衝液，只要表現本發明效果則未被特別限制，但較佳為可使用組胺酸緩衝液。此組胺酸緩衝液實質上不含有由強酸與強鹼而成的鹽。
根據以上方法，藉由超過濾，可去除源自由式(2)所表示之化合物的副產物，再者，因凝聚物的生成亦可最小化，故可提供不需利用層析法(例如選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種)的純化的工業上優異的純化方法。
6.抗體-藥物結合物的平均藥物結合數的計算
所製造的抗體-藥物結合物的每一分子抗體的平均藥物結合數的計算，例如可利用藉由測定在280nm及370nm此二波長的抗體-藥物結合物與其接合前驅物的UV吸光度而計算的方法 (UV法)、藉由HPLC測定而定量並計算利用還原劑處理抗體-藥物結合物而得之各片段的方法(HPLC法)而進行。
抗體-藥物結合物的每一分子抗體的平均藥物結合數的計算，可參考國際公開第2014/057687號、國際公開第2015/098099號、國際公開第2015/115091號、國際公開第2015/155998號、國際公開第2018/135501號、及國際公開第2018/212136號等的記載而實施。
HPLC法例如可藉由以下方法進行。
(1)HPLC分析用樣本的製備(抗體-藥物結合物的還原)
將抗體-藥物結合物溶液(約1mg/mL，60μL)與二硫蘇糖醇(DTT)水溶液(100mM，15μL)進行混合。將混合物在37℃培養30分鐘，將藉此而已剪切抗體-藥物結合物的鏈間的雙硫鍵的樣本用於HPLC分析。
(2)HPLC分析
HPLC分析可利用依據各抗體性質的測定條件進行。
例如，抗體為抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)、或抗HER3抗體(包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可利用下述測定條件進行HPLC分析。
HPLC系統：Agilent 1290 HPLC系統(Agilent Technologies)
偵測器：紫外線吸光度計(測定波長：280nm)
管柱：PLRP-S(2.1×50mm、8μm、1000Å；Agilent Technologies，P/N PL1912-1802)
管柱溫度：80℃
移動相A：0.04%三氟乙酸(TFA)水溶液
移動相B：包含0.04% TFA的乙腈溶液
梯度程序：29%~36%(0分鐘~12.5分鐘)、36%~42%(12.5~15分鐘)、42%~29%(15分鐘~15.1分鐘)、29%~29%(15.1分鐘~25分鐘)
樣本注入量：15μL
又，抗體為抗GPR20抗體(包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)、或抗CDH6抗體(包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可利用下述條件進行HPLC分析。
HPLC系統：Agilent 1290 HPLC系統(Agilent Technologies)
偵測器：紫外線吸光度計(測定波長：280nm)
管柱：ACQUITY UPLC BEH Phenyl(2.1×50mm、1.7μm、130Å；Waters，P/N 186002884)
管柱溫度：80℃
移動相A：0.10%三氟乙酸(TFA)、包含15%2-丙醇的水溶 液
移動相B：0.075%TFA、包含15% 2-丙醇的乙腈溶液
梯度程序：14%~36%(0分鐘~15分鐘)、36%~80%(15分鐘~17分鐘)、80%~14%(17分鐘~17.01分鐘)、14%(17.01分鐘~25分鐘)
樣本注入量：10μL
(3)資料分析
相對於未結合藥物的抗體的輕鏈(L0)及重鏈(H0)，結合藥物的輕鏈(結合一個藥物的輕鏈：L1)及重鏈(結合一個藥物的重鏈：H1，結合二個藥物的重鏈：H2，結合三個藥物的重鏈：H3)，疏水性與所結合的藥物數量呈比例增加，保持時間變大，因此依序溶出L0、L1、H0、H1、H2、H3。藉由與L0及H0的保持時間比較，可將偵測峰分配至L0、L1、H0、H1、H2、H3的任一者。
因藥物連接子具有UV吸收，故依據藥物連接子的結合數，使用輕鏈、重鏈及藥物連接子的莫耳吸光係數並遵照下述公式進行峰面積值的補正。
Figure 108126115-A0202-12-0087-39
Figure 108126115-A0202-12-0087-40
於此，各抗體中的輕鏈及重鏈的莫耳吸光係數(280nm)，可使用藉由既知的計算方法(Protein Science,1995,vol.4,2411-2423)，從各抗體的輕鏈及重鏈的胺基酸序列所推定的值。
例如，抗體為抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可使用26150作為輕鏈的莫耳吸光係數的推定值，使用81290作為重鏈的莫耳吸光係數的推定值。
又，抗體為抗HER3抗體(包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可使用34690作為輕鏈的莫耳吸光係數的推定值，可使用95000作為重鏈的莫耳吸光係數的推定值。
又，抗體為抗GPR20抗體(包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可使用26210作為輕鏈的莫耳吸光係數的推定值，可使用68990作為重鏈的莫耳吸光係數的推定值。
又，抗體為抗CDH6抗體(包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，可使用31710作為輕鏈的莫耳吸光係數的推定值，可使用79990作為重鏈的莫耳吸光係數的推定值。
藥物連接子的莫耳吸光係數(280nm)，可使用利用巰乙醇或N-乙醯半胱胺酸使各藥物連接子中間體進行反應，而將馬來醯亞胺基轉換成琥珀醯亞胺基硫醚(succinimide thioether)的化合物的實測莫耳吸光係數(280nm)。
遵照下述公式計算相對於峰面積補正值合計的各鏈峰面積比(%)。
Figure 108126115-A0202-12-0089-41
Figure 108126115-A0202-12-0089-42
ALi、AHi：Li、Hi各峰面積補正值。
遵照下述公式計算抗體-藥物結合物中的平均藥物結合數。
平均藥物結合數=(L0峰面積比×0+L1峰面積比×1+H0峰面積比×0+H1峰面積比×1+H2峰面積比×2+H3峰面積比×3)/100×2
本發明中，所謂「抗HER2抗體-藥物結合物」，表示藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物中的抗體為抗HER2抗體之抗體-藥物結合物。
抗HER2抗體較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重 鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體。
抗HER2抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數較佳為7至8，再佳為7.5至8，再佳為約8。
本發明中，所謂「抗HER3抗體-藥物結合物」，表示藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物中的抗體為抗HER3抗體之抗體-藥物結合物。
抗HER3抗體較佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號3中胺基酸編號26至35所記載的胺基酸序列而成的CDRH1、由序列識別號3中胺基酸編號50至65所記載的胺基酸序列而成的CDRH2、及由序列識別號3中胺基酸編號98至106所記載的胺基酸序列而成的CDRH3之重鏈；含有由序列識別號4中胺基酸編號24至39所記載的胺基酸序列而成的CDRL1、由序列識別號4中胺基酸編號56至62所記載的胺基酸序列而成的CDRL2、及由序列識別號4中胺基酸編號95至103所記載的胺基酸序列而成的CDRL3之輕鏈，
更佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號3中胺基酸編號1至117所記載的胺基酸序列而成的重鏈可變區之重鏈；含有由序列識別號4中胺基酸編號1至113所記載的胺基酸序列而成的輕鏈可變區之輕鏈的抗體，
再佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體。
抗HER3抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數較佳為7至8，再佳為7.5至8，再佳為約8。
本發明中，所謂「抗GPR20抗體-藥物結合物」，表示藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物中的抗體為抗GPR20抗體之抗體-藥物結合物。
抗GPR20抗體較佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號5中胺基酸編號45至54所記載的胺基酸序列而成的CDRH1、由序列識別號5中胺基酸編號69至78所記載的胺基酸序列而成的CDRH2、及由序列識別號5中胺基酸編號118至131所記載的胺基酸序列而成的CDRH3之重鏈；含有由序列識別號6中胺基酸編號44至54所記載的胺基酸序列而成的CDRL1、由序列識別號6中胺基酸編號70至76所記載的胺基酸序列而成的CDRL2、及由序列識別號6中胺基酸編號109至117所記載的胺基酸序列而成的CDRL3之輕鏈，
更佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號5中胺基酸編號20至142所記載的胺基酸序列而成的重鏈可變區之重鏈；含有由序列識別號6中胺基酸編號21至129所記載的胺基酸序列而成的輕鏈可變區之輕鏈，
再佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體。
抗GPR20抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數較佳為2至8，更佳為3至8，再佳為7至8，再佳為7.5至8，再佳為約8。
本發明中，所謂「抗CDH6抗體-藥物結合物」，表示藉由本發明而製造之抗體-藥物結合物中的抗體為抗CDH6 抗體之抗體-藥物結合物。
抗CDH6抗體較佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號7中胺基酸編號45至54所記載的胺基酸序列而成的CDRH1、由序列識別號7中胺基酸編號69至78所記載的胺基酸序列而成的CDRH2、及由序列識別號7中胺基酸編號118至130所記載的胺基酸序列而成的CDRH3之重鏈；含有由序列識別號8中胺基酸編號44至54所記載的胺基酸序列而成的CDRL1、由序列識別號8中胺基酸編號70至76所記載的胺基酸序列而成的CDRL2、及由序列識別號8中胺基酸編號109至116所記載的胺基酸序列而成的CDRL3之輕鏈，
更佳為包含以下重鏈及輕鏈的抗體：含有由序列識別號7中胺基酸編號20至141所記載的胺基酸序列而成的重鏈可變區之重鏈；含有由序列識別號8中胺基酸編號21至128所記載的胺基酸序列而成的輕鏈可變區之輕鏈，
再佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體。
抗CDH6抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數較佳為2至8，更佳為3至8，再佳為7至8，再佳為7.5至8，再佳為約8。
7.醫藥組成物的製造
本發明之醫藥組成物係包含本發明之抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物。
此醫藥組成物係可將藉由上述方法所製造(包含純化)之抗體-藥物結合物，進一步施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)的步驟而進行製造：
(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、
(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及
(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整至指定pH的步驟；以及，
(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
(vi)的步驟所添加的緩衝液較佳為與(v)的步驟所能使用的緩衝液相同。因此，作為(vi)的步驟所能使用的緩衝液，較佳為可使用組胺酸緩衝液。
(viii)的步驟所進行之pH的調整，在(vi)的步驟所能使用的緩衝液為組胺酸緩衝液之情形，較佳為可使用組胺酸水溶液。
本發明中，所謂「賦形劑」，表示為了提高醫藥品的成形、處理、及服藥的便利性，以做成一定的大小或濃度為目的所添加的物質。作為此種賦形劑，只要表現本發明效果則未被特別限制，但可列舉例如蔗糖、海藻糖、山梨醇。
作為(ix)的步驟所添加的賦形劑，較佳為可使用蔗糖。
再者，本發明之醫藥組成物較佳為進一步包含界面活性劑。亦即，本發明之醫藥組成物，更佳為包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑、及界面活性劑的醫藥組成物。
此醫藥組成物，可藉由在上述(ix)的步驟之後進一 步施以包含(x)添加界面活性劑的步驟之步驟，而進行製造。
作為(x)的步驟所添加的界面活性劑，較佳為可使用聚山梨醇酯80、或聚山梨醇酯20。
醫藥組成物中的緩衝液、賦形劑、界面活性劑、及抗體-藥物結合物的濃度、以及、醫藥組成物的pH，可依據所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數、及抗體的種類而適當選擇。
例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，作為醫藥組成物中的緩衝液、賦形劑、及界面活性劑，較佳為可使用組胺酸緩衝液(較佳為25mM組胺酸緩衝液)、蔗糖(較佳為9%蔗糖)、及聚山梨醇酯80(較佳為0.03%聚山梨醇酯80)，醫藥組成物中的抗體-藥物結合物的濃度較佳為20mg/mL，醫藥組成物的pH較佳為5.5。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，作為醫藥組成物中的緩衝液、賦形劑、及界面活性劑，較佳為可使用 組胺酸緩衝液(較佳為25mM組胺酸緩衝液)、蔗糖(較佳為9%蔗糖)、及聚山梨醇酯20(較佳為0.03%聚山梨醇酯20)，醫藥組成物中的抗體-藥物結合物的濃度較佳為20mg/mL，醫藥組成物的pH較佳為5.4。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗GPR20抗體(較佳為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，作為醫藥組成物中的緩衝液、賦形劑、及界面活性劑，較佳為可使用組胺酸緩衝液(較佳為10mM組胺酸緩衝液)、蔗糖(較佳為9%蔗糖)、及聚山梨醇酯80(較佳為0.03%聚山梨醇酯80)，醫藥組成物中的抗體-藥物結合物的濃度較佳為20mg/mL，醫藥組成物的pH較佳為5.4。
又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗CDH6抗體(較佳為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，作為醫藥組成物中的緩衝液、賦形劑、及界面活性劑，較佳為可使用組胺酸緩衝液(較佳為10mM組胺酸緩衝液)、蔗糖(較佳為9%蔗糖)、及聚山梨醇酯80(較佳為0.03%聚山梨醇酯80)，醫藥組成物中的抗體-藥物結合物的濃度較佳為20mg/mL，醫藥組成物的pH較佳為 5.4。
8.醫藥組成物的使用
本發明的醫藥組成物，除了適用作為對患者的全身療法以外，亦可局部適用於癌組織並期待治療效果。
本發明的醫藥組成物，可較佳地對哺乳動物使用，更佳為可對人類使用。
作為用於投與本發明的醫藥組成物所能使用的導入路徑，可列舉例如靜脈內、皮內、皮下、肌肉內、及腹腔內的路徑，但較佳為靜脈內。
本發明的醫藥組成物為水性注射劑之情形，較佳為可利用適當稀釋液進行稀釋後，在靜脈內進行點滴投與。作為稀釋液，可列舉葡萄糖溶液、生理食鹽水等，較佳可列舉葡萄糖溶液，更佳可列舉5%葡萄糖溶液。
本發明的醫藥組成物為冷凍乾燥注射劑之情形，較佳為可藉由注射用水進行溶解後，將必要量利用適當稀釋液進行稀釋後，在靜脈內進行點滴投與。作為稀釋液，可列舉葡萄糖溶液、生理食鹽水等，較佳可列舉葡萄糖溶液，更佳可列舉5%葡萄糖溶液。
本發明的醫藥組成物，在對於本發明的抗體-藥物結合物的抗原之親和性，亦即，對於抗原的解離常數(Kd值)的點中，親和性愈高(Kd值愈低)，愈即使為少量的投與量亦可發揮藥效。因此，本發明的醫藥組成物的投與量，亦可基於與抗原的親和性的狀況而設定。在將本發明的醫藥組成物對於人類進行投與之際，例如作為抗體-藥物結合物，只要1次或以1~180日1次 的間隔複數次投與約0.001~100mg/kg(於此，所謂「mg/kg」，意指每1kg人類體重的抗體-藥物結合物的投與量)即可，但較佳為可列舉將0.8mg/kg~8mg/kg以3週1次進行投與的方法。
抗體-藥物結合物的投與量及投與間隔，可依據所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數、及抗體的種類而適當選擇。例如，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER2抗體(較佳為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或包含由序列識別號1所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)之情形，較佳可列舉將0.8mg/kg、1.6mg/kg、3.2mg/kg、5.4mg/kg、6.4mg/kg、7.4mg/kg、或8mg/kg的抗體-藥物結合物以3週1次進行投與的方法，更佳可列舉將5.4mg/kg、6.4mg/kg、7.4mg/kg、或8mg/kg的抗體-藥物結合物以3週1次進行投與的方法，再佳可列舉將5.4mg/kg、或6.4mg/kg的抗體-藥物結合物以3週1次進行投與的方法。又，所製造的抗體-藥物結合物的每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍且抗體為抗HER3抗體(較佳為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體、或該抗體的重鏈羧基末端的離胺酸殘基缺失抗體)之情形，較佳可列舉將1.6mg/kg、3.2mg/kg、4.8mg/kg、5.6mg/kg、6.4mg/kg、8.0mg/kg、9.6mg/kg、或12.8mg/kg的抗體-藥物結合物以3週1次進行投與的方法，更佳可列舉將 4.8mg/kg、5.6mg/kg、或6.4mg/kg的抗體-藥物結合物以3週1次進行投與的方法。
本發明的醫藥組成物，可為了癌的治療而使用，較佳為了選自包含乳癌、胃癌(亦稱為胃腺癌)、大腸癌(亦有稱為結腸直腸癌，包含結腸癌及直腸癌)、肺癌(包含小細胞肺癌及非小細胞肺癌)、食道癌、頭頸部癌(包含唾液腺癌及咽喉癌)、胃食道接合部腺癌、膽道癌(包含膽管癌)、佩吉特氏病(Paget’s disease)、胰臟癌、卵巢癌、子宮癌肉瘤、尿道上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、消化道間質瘤、子宮頸癌、扁平上皮癌、腹膜癌、肝臟癌、肝細胞癌、子宮體癌、腎臟癌、外陰部癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、多形性神經膠質母細胞瘤、骨肉瘤、及黑色素瘤之群組的至少一種的癌的治療而使用。
本發明的醫藥組成物，可作為用於為癌治療的主要治療法之藥物療法的藥劑而選擇使用，作為其結果，使癌細胞的成長緩慢、抑制增殖，進一步可破壞癌細胞。藉由此等作用，在癌患者中，從由癌所致之症狀的解放、可達成QOL的改善、保持癌患者的生命而達成治療效果。即使是未達到破壞癌細胞之情形，藉由癌細胞的增殖的抑制或控制，亦可在癌患者中達成更高的QOL且達成更長期的生存。
除了在此種藥物療法中的以藥物單獨的使用以外，本發明的醫藥組成物亦可在輔助治療中與其他療法組合使用，可與外科手術、放射線療法、荷爾蒙療法等組合。再者，亦可作為術前輔助治療(Neoadjuvant therapy)中的藥物療法而使用。
除了如以上的治療的使用以外，本發明的醫藥組成 物亦可期待壓抑細微的轉移癌細胞的增殖，甚至進行破壞等預防效果。例如，可期待抑制並破壞在轉移過程中位於體液中的癌細胞之效果、剛在任一組織著床後對於細微的癌細胞的抑制、破壞等效果。因此，特別可期待在外科性去除癌後的癌轉移的抑制、預防效果。
本發明的醫藥組成物，亦可與其他癌治療劑併用而投與，藉此可使抗腫瘤效果增強。以此各種目的所使用之其他癌治療劑，亦可與本發明的醫藥組成物同時且分別或連續投與至個體，亦可改變個別的投與間隔而投與。作為此各種癌治療劑，只要為具有抗腫瘤活性的藥劑便無限制，但可列舉例如選自包含愛萊諾迪肯(Irinotecan，CPT-11)、順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、氟尿嘧啶(Fluorouracil，5-FU)、吉西他濱(Gemcitabine)、卡培他濱(Capecitabine)、紫杉醇(Paclitaxel)、歐洲紫杉醇(Docetaxel)、阿黴素(Doxorubicin)、泛艾黴素(Epirubicin)、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、絲裂黴素C(Mitomycin C)、替加氟(Tegafur)-吉美拉西(Gimeracil)-奧替拉西(Oteracil)複合劑、西妥昔單抗(Cetuximab)、帕尼單抗(Panitumumab)、貝伐單抗(Bevacizumab)、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、瑞格非尼(Regorafenib)、三氟胸苷(Trifluridine)-胸苷磷酸化酶抑制劑(Tipiracil)複合劑、吉非替尼(Gefitinib)、厄洛替尼(Erlotinib)、阿法替尼(Afatinib)、氨甲蝶呤(Methotrexate)、培美曲塞(Pemetrexed)、曲妥珠單抗美坦辛(Trastuzumab emtansin)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、泰莫西芬(Tamoxifen)、托瑞米芬 (Toremifene)、氟維司群(Fulvestrant)、亮丙瑞林(Leuprorelin)、戈舍瑞林(Goserelin)、來曲唑(Letrozole)、阿那曲唑(Anastrozole)、及黃體素製劑(Progesterone formulation)之群組的至少一種。
[實施例]
以下舉出實施例更詳細地說明本發明，但本發明不受限於此等。
[實施例1]緩衝液的探討
將包含抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液，利用各種緩衝液(10mM乙酸緩衝液、10mM磷酸緩衝液、或20mM PIPES緩衝液)進行稀釋，添加0.5mol/L的EDTA水溶液後，添加各種弱鹼性水溶液(0.3mol/L的磷酸氫二鈉水溶液(以下亦稱為「aq.Na2HPO4」)、飽和乙酸鈉水溶液(以下亦稱為「aq.CH3COONa」)、或0.5mol/L的碳酸氫鈉水溶液(以下亦稱為「aq.NaHCO3」)，調整成pH7。在37℃攪拌下，相對於一分子抗體，添加4.8當量或4.9當量的參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(以下亦稱為「TCEP」)水溶液(1mg/mL)並進行攪拌，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
一邊將所得之反應液在內溫15℃或25℃進行攪拌，一邊在溶解於80%二甲亞碸水溶液的狀態下添加相對於一分子抗體為9.2當量或9.8當量的由式(2)所表示之化合物(亦稱為化合物(2))，使其與抗體結合。接著，添加50mmol/L的N-乙 醯半胱胺酸水溶液，使多餘的化合物(2)進行淬火，
Figure 108126115-A0202-12-0101-43
藉此，獲得由下式所示之藥物連接子與抗HER2抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER2抗體-藥物結合物，
Figure 108126115-A0202-12-0101-44
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
利用HPLC法測定所得之抗HER2抗體-藥物結合物的DAR。又，利用SEC測定凝聚物的含有率。
將結果揭示於表1。
[表1]
Figure 108126115-A0202-12-0102-45
在表1的結果中，使用以磷酸氫二鈉水溶液調整pH調整的乙酸緩衝液之情形，凝聚物的含有率顯示為最低值。
[實施例2]超過濾步驟的探討(1)
將包含抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液，利用10mM乙酸緩衝液(pH5.5)進行稀釋，添加0.5mol/L的EDTA水溶液(相對於一分子抗體為5當量)後，添加0.3mol/L的磷酸氫二鈉水溶液，調整成pH7.4。
在35~39℃攪拌下，添加0.010mol/L的參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽水溶液(相對於一分子抗體為6當量)，在內溫35~39℃攪拌2.5小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
一邊將所得之反應液在內溫13~17℃進行攪拌，一邊以溶解於80%二甲亞碸水溶液的狀態添加化合物(2)(相對於一分子抗體為12.5當量)，使其與抗體結合。接著，添加0.1mol/L的N-乙醯半胱胺酸水溶液(相對於一分子抗體為35當量)，進一步在相同溫度攪拌1小時，使多餘的化合物(2)淬火後， 使用10%乙酸水溶液，將反應液調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗HER2抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER2抗體-藥物結合物之反應液，
Figure 108126115-A0202-12-0103-46
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之反應液，使用為超過濾膜之Pellicon(註冊商標)XL Cassette Ultracel(註冊商標)(Merck公司製)，利用滾筒幫浦，一邊添加26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)、或含有0.5%氯化鈉的26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，進行超過濾。26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)、及含有0.5%氯化鈉的26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)，相對於所得之反應液，分別使用5倍、10倍、或15倍的量，測定超過濾後之源自化合物(2)的副產物相對於抗體-藥物結合物的含有率。又，作為比較，測定未進行超過濾之情形之源自化合物(2)的副產物的含有率(此情形，將使用的緩衝液量表示為0)。
於此，作為源自化合物(2)的副產物，可列舉在化合物(2)的馬來醯亞胺基加成參(2-羧乙基)膦的化合物，亦即，由式(3)所表示之化合物(亦稱為化合物(3))、及在化合物(2)的馬來醯亞胺基加成N-乙醯半胱胺酸的化合物，亦即，由式(4)所表示 之化合物(亦稱為化合物(4))，
Figure 108126115-A0202-12-0104-47
Figure 108126115-A0202-12-0104-48
源自化合物(2)的副產物的含有率的測定，係藉由利用HPLC法測定化合物(3)及化合物(4)分別對於抗體-藥物結合物的含有率而進行。將結果揭示於表2及圖1。
[表2]
Figure 108126115-A0202-12-0104-51
在表2的結果中，以相同緩衝液量/反應液量進行比較之情形，相較於使用組胺酸緩衝液之情形，使用含氯化鈉的 組胺酸緩衝液之情形的化合物(3)及化合物(4)的含有率顯示為低值。
[實施例3]超過濾步驟的探討(2)
將包含抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液，利用10mM乙酸緩衝液進行稀釋，添加0.5mol/L的EDTA水溶液後，添加0.3mol/L的磷酸氫二鈉水溶液，調整成pH7.3。添加1mg/mL的參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽水溶液並進行攪拌，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
在所得之反應液中，在溶解於80%二甲亞碸水溶液的狀態下添加化合物(2)，使其與抗體結合。接著，添加50mmol/L的N-乙醯半胱胺酸水溶液，使多餘的化合物(2)進行淬火。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗HER2抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER2抗體-藥物結合物之反應溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0105-52
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之反應溶液，使用Pellicon(註冊商標)XL Cassette Ultracel(註冊商標)(Merck公司製)，利用滾筒幫浦，一邊添加組胺酸緩衝液(pH5.0或者pH5.8)、或含有0.4%氯化鈉的組胺酸緩衝液(pH5.0或者pH5.8)一邊使其循環，進行超過濾。此外，組胺酸緩衝液的濃度皆使用10.8mM者。又，組胺酸緩衝液(pH5.0及pH5.8)，相對於所得之反應溶液，分別使用15倍的量。含有0.4%氯化鈉的組胺酸緩衝液(pH5.0及pH5.8)，相對於所得之反應溶液，分別使用10倍的量。利用SEC測定超過濾後的凝聚物的含有率。又，作為比較，測定未進行超過濾之情形的凝聚物的含有率(此情形，將使用的緩衝液量表現為0)。將結果揭示於表3及圖2。
[表3]
Figure 108126115-A0202-12-0106-53
在表3的結果中，相較於使用pH5.8的緩衝液進行超過濾之情形、使用組胺酸緩衝液之情形，使用含氯化鈉的組胺酸緩衝液之情形其凝聚物的含有率顯示為高值。另一方面，即使為使用pH5.0的緩衝液進行超過濾之情形、使用組胺酸緩衝液之情形，或使用含氯化鈉的組胺酸緩衝液之情形，凝聚物的含有率皆顯示相同程度的值。
[實施例4]包含抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物的製 造(1)
將包含抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液(液重量5.4kg：相當抗體120g)置入玻璃反應容器，再者，添加0.01mol/L乙酸緩衝液(4.3L，pH5.5)。在本溶液中添加0.5mol/L EDTA水溶液(8.3mL；相對於抗體為5當量)後，添加0.3mol/L磷酸氫二鈉水溶液，調整成pH7.3。在35~39℃攪拌下，添加0.010mol/L參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽水溶液(390mL；相對於一分子抗體為4.7當量)，在內溫35~39℃攪拌2小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
冷卻所得的反應液，在內溫13~17℃的攪拌下，將利用80%二甲亞碸水溶液(900mL)使化合物(2)(8.2g；相對於一分子抗體為9.7當量)溶解者，耗費20分鐘進行添加，在相同溫度攪拌1小時，使其與抗體結合。接著，添加0.1mol/L N-乙醯半胱胺酸水溶液(210mL；相對於一分子抗體為25當量)，進一步在相同溫度攪拌1小時，使多餘的化合物(2)淬火後，使用10%乙酸水溶液，調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗HER2抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER2抗體-藥物結合物之溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0108-54
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之溶液，使用三片Pellicon(註冊商標)2 Mini Cassette Ultracel(註冊商標)(Merck公司製，0.1m2)，利用滾筒幫浦，一邊添加含有0.5%氯化鈉的26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除源自化合物(2)的副產物。再者，一邊添加26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除氯化鈉。接著，利用組胺酸水溶液調正成pH5.5，再進行濃縮，藉此取得約4L之含有抗HER2抗體-藥物結合物的溶液。
再者，相對於上述溶液中3.86kg份量，添加蔗糖364g並使其溶解。再者，添加含有9%蔗糖的組胺酸緩衝液(pH5.5)，將蛋白質濃度調整成約20mg/mL，獲得包含抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物(5.7kg)。所得之醫藥組成物，其蛋白質濃度：20.4mg/mL，蛋白質產量：112g，每一分子抗體的平均藥物結合數(n)：7.7。
[實施例5]包含抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物的製造(2)
將包含抗HER2抗體(包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液(液重量89g：相當抗體2.0g)置入玻璃反應容器，再者，添加0.01mol/L乙酸緩衝液(72mL、pH5.5)。在本溶液中添加0.5mol/L EDTA水溶液(0.14mL；相對於抗體為5當量)後，添加0.3mol/L磷酸氫二鈉水溶液，調整成pH7.3。在35~39℃攪拌下，添加0.010mol/L參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽水溶液(6.3mL；相對於一分子抗體為4.6當量)，在內溫35~39℃攪拌2小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
冷卻所得的反應液，在內溫13~17℃的攪拌下，添加利用80%二甲亞碸水溶液(13mL)使化合物(2)(140mg；相對於一分子抗體為9.6當量)溶解者，在相同溫度攪拌1小時，使其與抗體結合。接著，添加0.1mol/L N-乙醯半胱胺酸水溶液(3.4mL；相對於一分子抗體為25當量)，進一步在相同溫度攪拌40分鐘，使多餘的化合物(2)淬火後，使用10%乙酸水溶液，調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗HER2抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER2抗體-藥物結合物之溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0110-55
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
在所得之溶液中添加氯化鈉1g後，使用Pellicon(註冊商標)XL Ultracel(註冊商標)(Merck公司製，50cm2)，利用滾筒幫浦，一邊添加含有0.5%氯化鈉的26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除源自化合物(2)的副產物。再者，一邊添加26mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除氯化鈉。接著，一邊利用組胺酸水溶液調整成pH5.5一邊進行濃縮，藉此取得約65g之含有抗HER2抗體-藥物結合物的溶液(64.5g，64.1mL，蛋白質濃度：28.5mg/mL，蛋白質產量：1.83g)。
再者，對於上述溶液之中64g份量，添加含有蔗糖7.7g的組胺酸緩衝液(pH5.5)19mL，再添加含有9%蔗糖的組胺酸緩衝液(pH5.5)，將蛋白質濃度調整成約20mg/mL，獲得包含抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物(93g)。所得之醫藥組成物，其蛋白質濃度：20.3mg/mL，蛋白質產量：1.8g，每一分子抗體的平均藥物結合數(n)：7.8。
[實施例6]包含抗HER3抗體-藥物結合物的醫藥組成物的製造
將包含抗HER3抗體(包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液(液重量43.95kg：相當抗體3.00kg)置入400L單次使用反應器，再者，添加包含聚山梨醇酯20(60.0g)、0.5mol/L EDTA水溶液(224.5g；相對於抗體為5當量)的0.01mol/L乙酸緩衝液(pH5.5，255kg)。在本溶液中添加0.3mol/L磷酸氫二鈉水溶液並調整成pH7.0。在33~37℃攪拌下，添加包含參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(35.1g；相對於一分子抗體為6.0當量)的水溶液(12.3kg)，在內溫33~37℃攪拌2.5小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
冷卻所得的反應液，在內溫12~17℃的攪拌下，將利用包含10%乙酸水溶液(116.4g)的80%二甲亞碸水溶液(21.1kg)使化合物(2)(200.5g；相對於一分子抗體為9.5當量)溶解者，耗費50分鐘進行添加，在相同溫度攪拌0.5小時，使其與抗體結合。接著，添加0.1mol/L N-乙醯半胱胺酸水溶液(3.11kg；相對於一分子抗體為15當量)，進一步在相同溫度攪拌0.5小時，使多餘的化合物(2)淬火後，使用10%乙酸水溶液，調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗HER3抗體藉由硫醚鍵而結合的抗HER3抗體-藥物結合物之溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0112-56
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之溶液，使用四片Pellicon(註冊商標)2 Ultracel(註冊商標)(Merck公司製，2.5m2)，利用自動超過濾裝置，一邊添加含有0.5%氯化鈉的26.5mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除源自化合物(2)的副產物。再者，一邊添加26.5mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除氯化鈉。接著，一邊利用26.5mM組胺酸水溶液調整成pH5.4一邊進行濃縮，藉此取得97.4kg之含有抗HER3抗體-藥物結合物的溶液(96.5L，蛋白質濃度：30.5mg/mL，蛋白質產量：2.94kg)。
再者，對於上述溶液中48.6kg份量，添加包含蔗糖6.29kg的組胺酸緩衝液(pH5.4，24.3kg)，再添加包含聚山梨醇酯20(7.6g)之含有9%蔗糖的組胺酸緩衝液(pH5.4，4.25kg)，將蛋白質濃度調整成約20mg/mL，獲得包含抗HER3抗體-藥物結合物的醫藥組成物(77.1kg)。所得之醫藥組成物，其蛋白質濃度：19.9mg/mL，蛋白質產量：1.49kg，每一分子抗體的平均藥物結合數(n)：7.6。
[實施例7]包含抗GPR20抗體-藥物結合物的醫藥組成物的製造
將包含抗GPR20抗體(包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液(液重量24.2kg：相當抗體0.94kg)置入200L反應器，進一步添加包含聚山梨醇酯80(14.4g)的26mM組胺酸水溶液(57.6kg)。升溫至30℃，添加包含參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(9.06g；相對於一分子抗體為4.9當量)的水溶液(3.17kg)，在內溫30℃攪拌3小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
冷卻所得的反應液，在內溫15℃的攪拌下、將利用包含乙酸(3.7g)的80%二甲亞碸水溶液(7.26kg)使化合物(2)(63.5g；相對於一分子抗體為9.0當量)溶解者，耗費55分鐘進行添加，在相同溫度攪拌0.5小時，使其與抗體結合。接著，添加0.1M N-乙醯半胱胺酸水溶液(1.00kg；相對於一分子抗體為15當量)，進一步在相同溫度攪拌0.5小時，使多餘的化合物(2)淬火後，使用10%乙酸水溶液，調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗GPR20抗體藉由硫醚鍵而結合之抗GPR20抗體-藥物結合物的溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0114-57
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之溶液，使用二片Pellicon(註冊商標)2 Ultracel(註冊商標)(Merck公司製，2.5m2)，利用超過濾裝置，一邊添加含有0.5%氯化鈉的11mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除源自化合物(2)的副產物。再者，一邊添加11mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除氯化鈉。接著一邊利用11mM組胺酸水溶液調整成pH5.4一邊進行濃縮，藉此取得含有抗GPR20抗體-藥物結合物的溶液(31.8kg，蛋白質濃度：29.9mg/mL，蛋白質產量：0.94kg)。
再者，對上述溶液添加包含蔗糖4.00kg的組胺酸緩衝液(pH5.4，14.9kg)，再添加包含聚山梨醇酯80(4.5g)之含有9%蔗糖的組胺酸緩衝液(pH5.4，3.00kg)，將蛋白質濃度調整成約20mg/mL，獲得包含抗GPR20抗體-藥物結合物的醫藥組成物(49.3kg)。所得之醫藥組成物，其蛋白質濃度：19.9mg/mL，蛋白質產量：0.94kg，每一分子抗體的平均藥物結合數(n)：7.8。
[實施例8]包含抗CDH6抗體-藥物結合物的醫藥組成物的製造
將包含抗CDH6抗體(包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體)的溶液(液重量2.56kg：相當抗體100g)置入14L反應器，再添加包含聚山梨醇酯80(1.50g)、0.5M EDTA水溶液(7.54g；相對於抗體為5當量)的100mM組胺酸水溶液(6.00kg)。升溫至30℃，添加包含參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(945mg；相對於一分子抗體為4.8當量)的水溶液(330g)，在內溫30℃攪拌3小時，還原抗體的鏈間雙硫鍵。
冷卻所得的反應液，在內溫15℃的攪拌下，將利用包含10%乙酸水溶液(3.89g)的80%二甲亞碸水溶液(687g)使化合物(2)(6.96g，相對於一分子抗體為9.1當量)溶解者，耗費41分鐘進行添加，利用相同溫度攪拌0.4小時，使其與抗體結合。接著，添加0.1M N-乙醯半胱胺酸水溶液(103g，相對於一分子抗體為15當量)，再利用相同溫度攪拌0.6小時，在使多餘的化合物(2)淬火後，使用10%乙酸水溶液，調整成pH5.0。藉此，獲得包含由下式所示之藥物連接子與抗CDH6抗體藉由硫醚鍵而結合之抗CDH6抗體-藥物結合物的溶液，
Figure 108126115-A0202-12-0116-58
(式中，A表示與抗體的結合位置)。
將所得之溶液，使用一片Pellicon(註冊商標)2 Ultracel(註冊商標)(Merck公司製，0.5m2)，利用超過濾裝置，一邊添加含有0.5%氯化鈉的11mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除源自化合物(2)的副產物。再者，一邊添加11mM組胺酸緩衝液(pH5.0)一邊使其循環，藉此進行超過濾，去除氯化鈉。接著一邊利用11mM組胺酸水溶液調整成pH5.4一邊進行濃縮，藉此取得含有抗CDH6抗體-藥物結合物的溶液(2.97kg，蛋白質濃度：31.8mg/mL，蛋白質產量：93.7g)。
再者，對於上述溶液，添加包含蔗糖(401g)的組胺酸緩衝液(pH5.4，1.67kg)，再添加包含聚山梨醇酯80(437mg)之含有9%蔗糖的組胺酸緩衝液(pH5.4，276g)，將蛋白質濃度調整至約20mg/mL，獲得包含抗CDH6抗體-藥物結合物的醫藥組成物(4.81kg)。所得之醫藥組成物，其蛋白質濃度：20.2mg/mL，蛋白質產量：93.2g，每一分子抗體的平均藥物結合數(n)：7.8。
[序列表非關鍵詞文字]
序列識別號1：抗HER2抗體重鏈的胺基酸序列
序列識別號2：抗HER2抗體輕鏈的胺基酸序列
序列識別號3：抗HER3抗體重鏈的胺基酸序列
序列識別號4：抗HER3抗體輕鏈的胺基酸序列
序列識別號5：抗GPR20抗體重鏈的胺基酸序列
序列識別號6：抗GPR20抗體輕鏈的胺基酸序列
序列識別號7：抗CDH6抗體重鏈的胺基酸序列
序列識別號8：抗CDH6抗體輕鏈的胺基酸序列
<110> 第一三共股份有限公司
<120> 抗體-藥物結合物之有效的製造方法
<130> FP1910
<150> JP2018-139633
<151> 2018-07-25
<160> 8
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2抗體的重鏈
<400> 1
Figure 108126115-A0202-12-0118-60
Figure 108126115-A0202-12-0119-61
Figure 108126115-A0202-12-0120-62
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2抗體的輕鏈
<400> 2
Figure 108126115-A0202-12-0120-63
Figure 108126115-A0202-12-0121-64
<210> 3
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER3抗體的重鏈
<400> 3
Figure 108126115-A0202-12-0121-65
Figure 108126115-A0202-12-0122-66
Figure 108126115-A0202-12-0123-67
<210> 4
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER3抗體的輕鏈
<400> 4
Figure 108126115-A0202-12-0124-68
Figure 108126115-A0202-12-0125-69
<210> 5
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗GPR20抗體的重鏈
<400> 5
Figure 108126115-A0202-12-0125-70
Figure 108126115-A0202-12-0126-71
Figure 108126115-A0202-12-0127-72
<210> 6
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗GPR20抗體的輕鏈
<400> 6
Figure 108126115-A0202-12-0127-73
Figure 108126115-A0202-12-0128-74
<210> 7
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CDH6抗體的重鏈
<400> 7
Figure 108126115-A0202-12-0128-75
Figure 108126115-A0202-12-0129-76
Figure 108126115-A0202-12-0130-77
<210> 8
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CDH6抗體的輕鏈
<400> 8
Figure 108126115-A0202-12-0131-78
Figure 108126115-A0202-12-0132-79
Figure 108126115-A0202-11-0002-2

Claims (32)

  1. 一種抗體-藥物結合物(antibody-drug conjugate)的製造方法，其係由式(1)所示之藥物連接子(drug-linker)，與抗體藉由硫醚鍵而結合之抗體-藥物結合物的製造方法，
    Figure 108126115-A0305-02-0135-1
     (式中，A表示與抗體的結合位置)，其中抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7至8個的範圍；其中該方法包含以下步驟：(i)以參(2-羧乙基)膦或其鹽還原抗體的步驟；(ii)使由式(2)所表示之化合物與由(i)的步驟所還原之抗體進行反應的步驟，
    Figure 108126115-A0305-02-0136-2
     (iii)添加N-乙醯半胱胺酸，使其與(ii)的步驟所殘留之由式(2)所表示之化合物進行反應的步驟；接著(iv)藉由使用含有選自由氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、及硫酸鉀所組成的至少一種鹽、或包含此等之兩種以上的組合的鹽的緩衝液的超過濾，去除式(3)所表示之化合物
    Figure 108126115-A0305-02-0136-3
     、及式(4)所表示之化合物
    Figure 108126115-A0305-02-0137-5
  2. 如請求項1之製造方法，其中，(i)的步驟所使用之還原劑為參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。
  3. 如請求項1之製造方法，其中，(i)的步驟在緩衝液中進行。
  4. 如請求項3之製造方法，其中，緩衝液為利用磷酸氫二鈉水溶液調整成pH6~8的緩衝液。
  5. 如請求項3之製造方法，其中，緩衝液為乙酸緩衝液。
  6. 如請求項3之製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
  7. 如請求項1之製造方法，其中，(i)的步驟在螯合劑的存在下進行。
  8. 如請求項7之製造方法，其中，螯合劑為乙二胺四乙酸。
  9. 如請求項3之製造方法，其中，(i)的步驟所使用之緩衝液含有界面活性劑。
  10. 如請求項9之製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。
  11. 如請求項1之製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7至5.3。
  12. 如請求項1之製造方法，其中，(iv)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
  13. 如請求項1之製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用的鹽的濃度為0.2~1重量%。
  14. 如請求項1之製造方法，其中，相對於(iv)的步驟所使用之緩衝液，(iv)的步驟所使用的鹽的濃度為0.4至0.6重量%。
  15. 如請求項1之製造方法，其中，(iv)的步驟所使用的鹽為氯化鈉。
  16. 如請求項1之製造方法，其中，在(iv)的步驟後，包含(v)藉由使用緩衝液的超過濾，去除步驟(iv)中使用的鹽的步驟。
  17. 如請求項16之製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4~6的範圍。
  18. 如請求項16之製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液的pH為4.7至5.3。
  19. 如請求項16之製造方法，其中，(v)的步驟所使用之緩衝液為組胺酸緩衝液。
  20. 如請求項1至19中任一項之製造方法，其中，抗體-藥物結合物中之每一抗體的藥物連接子的平均結合數為7.5至8個的範圍。
  21. 如請求項1至19中任一項之製造方法，其 中，抗體為抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗GPR20抗體或抗CDH6抗體。
  22. 如請求項21之製造方法，其中，該抗體為抗HER2抗體，且該抗HER2抗體為包含由序列識別號1中胺基酸編號1至449所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號2中胺基酸編號1至214所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體，或包含由序列識別號1所表示的胺基酸序列所組成的重鏈、及由序列識別號2所表示的胺基酸序列所組成的輕鏈而成之抗體。
  23. 如請求項21之製造方法，其中，該抗體為抗HER3抗體，且該抗HER3抗體為包含由序列識別號3所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號4所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體，或抗體之重鏈的羧基末端的離胺酸殘基缺失的變異體。
  24. 如請求項21之製造方法，其中，該抗體為抗GPR20抗體，且該抗GPR20抗體為包含由序列識別號5中胺基酸編號20至472所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號6中胺基酸編號21至234所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體，或抗體之重鏈的羧基末端的離胺酸殘基缺失的變異體。
  25. 如請求項21之製造方法，其中，該抗體為抗CDH6抗體，且該抗CDH6抗體為包含由序列識別號7中胺基酸編號20至471所記載的胺基酸序列而成的重鏈、及由序列識別號8中胺基酸編號21至233所記載的胺基酸序列而成的輕鏈而成之抗體，或抗體之重鏈的 羧基末端的離胺酸殘基缺失的變異體。
  26. 如請求項1至19中任一項之製造方法，其不包含利用層析法的純化步驟。
  27. 如請求項26之製造方法，其中，層析法為選自包含凝膠過濾層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、及親和性層析法之群組的至少一種。
  28. 一種醫藥組成物的製造方法，其係藉由如請求項1至19中任一項之製造方法而製造抗體-藥物結合物，再者，藉由施以包含選自由以下步驟(vi)、(vii)、及(viii)所組成的群組之至少一者的步驟及包含(ix)步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、及賦形劑的醫藥組成物之方法，其中該步驟(vi)、(vii)、(viii)及(ix)分別為：(vi)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加緩衝液的步驟、(vii)將包含抗體-藥物結合物的溶液進行濃縮的步驟、及(viii)將包含抗體-藥物結合物的溶液調整成指定的pH的步驟；以及，(ix)在包含抗體-藥物結合物的溶液中添加賦形劑的步驟。
  29. 如請求項28之製造方法，其中，緩衝液為組胺酸緩衝液。
  30. 如請求項28之製造方法，其中，賦形劑為蔗糖或海藻糖(trehalose)。
  31. 一種醫藥組成物的製造方法，其藉由如請求項28之製造方法而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液及賦形劑的醫藥組成物，再者，藉由施以包含以下步驟的步驟而製造包含抗體-藥物結合物、緩衝液、賦形劑及界面活性劑的醫藥組成物：(x)在該醫藥組成物中添加界面活性劑的步驟。
  32. 如請求項31之製造方法，其中，界面活性劑為聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20。
TW108126115A 2018-07-25 2019-07-24 抗體-藥物結合物之有效的製造方法 TWI847992B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018-139633 2018-07-25
JP2018139633 2018-07-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202019972A TW202019972A (zh) 2020-06-01
TWI847992B true TWI847992B (zh) 2024-07-11

Family

ID=69181569

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108126115A TWI847992B (zh) 2018-07-25 2019-07-24 抗體-藥物結合物之有效的製造方法
TW113105008A TWI865337B (zh) 2018-07-25 2019-07-24 抗體-藥物結合物之有效的製造方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW113105008A TWI865337B (zh) 2018-07-25 2019-07-24 抗體-藥物結合物之有效的製造方法

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210283269A1 (zh)
EP (1) EP3828206A4 (zh)
JP (2) JPWO2020022363A1 (zh)
KR (1) KR20210038904A (zh)
CN (1) CN112566942A (zh)
AU (1) AU2019311557A1 (zh)
BR (1) BR112021001194A2 (zh)
CA (1) CA3107417C (zh)
IL (1) IL280295A (zh)
SG (1) SG11202100653YA (zh)
TW (2) TWI847992B (zh)
WO (1) WO2020022363A1 (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110944667B (zh) * 2017-08-23 2024-08-27 第一三共株式会社 抗体-药物缀合物制剂及其冻干
KR20230041023A (ko) * 2020-07-17 2023-03-23 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-약물 콘주게이트의 제조 방법
CN115884794A (zh) * 2020-07-20 2023-03-31 第一三共株式会社 抗her2抗体药物缀合物与her二聚化抑制剂的组合
JP2023545096A (ja) * 2020-10-09 2023-10-26 アストラゼネカ ユーケー リミテッド 抗体－薬物コンジュゲート及びｐａｒｐ１選択的阻害薬の組み合わせ
WO2022102634A1 (ja) * 2020-11-11 2022-05-19 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートと抗ＳＩＲＰα抗体の組み合わせ
EP4265620A4 (en) * 2020-12-11 2025-01-08 Wigen Biomedicine Tech Shanghai Co Ltd NEW CAMPTOTHECIN DERIVATIVE, COMPOSITION CONTAINING IT AND ITS USE
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
MX2024003277A (es) * 2021-09-15 2024-04-04 Daiichi Sankyo Co Ltd Conjugado de anticuerpo-farmaco para usarse en metodos de tratamiento del cancer resistente a la quimioterapia.
EP4420683A1 (en) * 2021-10-18 2024-08-28 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-cd37 antibody-drug conjugate
JP2024542217A (ja) * 2021-11-17 2024-11-13 石▲薬▼集▲団▼巨石生物制▲薬▼有限公司 抗体－薬物複合体及びその使用
WO2023209591A1 (en) * 2022-04-27 2023-11-02 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate with ezh1 and/or ezh2 inhibitor
CN119255825A (zh) * 2022-05-24 2025-01-03 第一三共株式会社 抗-cdh6抗体-药物缀合物的剂量方案
AU2023328010A1 (en) * 2022-08-25 2025-03-20 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Pharmaceutical composition of antibody drug conjugate
WO2024109840A1 (zh) * 2022-11-22 2024-05-30 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 稠环类化合物及其偶联物和用途
WO2024222662A1 (zh) * 2023-04-23 2024-10-31 石药集团巨石生物制药有限公司 一种抗体偶联药物的用途
CN119522111A (zh) * 2023-05-16 2025-02-25 石药集团巨石生物制药有限公司 一种抗体药物偶联物的药物组合物
WO2025021118A1 (zh) * 2023-07-25 2025-01-30 海南先声再明医药股份有限公司 配体-药物偶联物及其偶联连接子
WO2025054996A1 (en) * 2023-09-15 2025-03-20 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Antibody-drug conjugate

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3315512A1 (en) * 2015-06-29 2018-05-02 Daiichi Sankyo Co., Ltd. Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
AU3657899A (en) 1998-04-20 1999-11-08 James E. Bailey Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
CN101518653B (zh) 1999-06-25 2015-08-19 基因技术股份有限公司 使用抗ErbB抗体-类美坦素偶联物的治疗方法
PL218428B1 (pl) 2000-10-06 2014-12-31 Kyowa Hakko Kogyo Kk Komórka, sposoby wytwarzania przeciwciał, leki zawierające przeciwciała, komórka CHO i przeciwciało klasy IgG
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
AU2005218642B2 (en) 2004-03-02 2011-04-28 Seagen Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
EP2468304A3 (en) 2005-02-11 2012-09-26 ImmunoGen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
NZ716641A (en) 2005-08-24 2017-06-30 Immunogen Inc Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
AR056857A1 (es) 2005-12-30 2007-10-24 U3 Pharma Ag Anticuerpos dirigidos hacia her-3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-3) y sus usos
JP4861019B2 (ja) * 2006-01-31 2012-01-25 独立行政法人科学技術振興機構 ヒトＴＮＦ−αに対する抗体酵素およびその利用
DK2716301T3 (en) 2007-02-16 2017-07-31 Merrimack Pharmaceuticals Inc ANTIBODIES AGAINST ERBB3 AND APPLICATIONS THEREOF
DK2437790T3 (da) 2009-06-03 2019-05-20 Immunogen Inc Konjugeringsfremgangsmåder
TW201116297A (en) 2009-10-02 2011-05-16 Sanofi Aventis Antibodies that specifically bind to the EphA2 receptor
AU2010310748C1 (en) * 2009-10-20 2015-11-26 Abbvie Inc. Isolation and purification of anti-IL-13 antibodies using Protein A affinity chromatography
SG193997A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Immunogen Inc Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity
RU2664465C2 (ru) 2012-10-11 2018-08-17 Дайити Санкио Компани, Лимитед Конъюгат антитело-лекарственное средство
DK2934582T3 (da) * 2012-12-21 2020-02-24 Ichnos Sciences SA Anti-her2-antistofformulering
KR102237803B1 (ko) 2013-12-25 2021-04-09 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 trop2 항체-약물 컨쥬게이트
PT3092010T (pt) 2014-01-10 2018-09-28 Synthon Biopharmaceuticals Bv Método para purificação de conjugados anticorpo-fármaco ligados por cys
ES3005311T3 (en) 2014-01-31 2025-03-14 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-her2 antibody-drug conjugate
IL300540B2 (en) 2014-04-10 2024-08-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Preparation method for drug conjugates - antibody against - HER3
WO2016131409A1 (zh) * 2015-02-17 2016-08-25 上海美雅珂生物技术有限责任公司 抗体药物偶联物
SG10201912173RA (en) * 2016-10-07 2020-02-27 Daiichi Sankyo Co Ltd Therapy for drug-resistant cancer by administration of anti-her2 antibody/drug conjugate
TWI780104B (zh) 2017-01-17 2022-10-11 日商第一三共股份有限公司 抗ｇｐｒ２０抗體及抗ｇｐｒ２０抗體-藥物結合物、以及其製造方法及用途
TWI855528B (zh) 2017-05-15 2024-09-11 日商第一三共股份有限公司 抗體-藥物結合物之製造方法
WO2019044947A1 (ja) 2017-08-31 2019-03-07 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートの改良製造方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3315512A1 (en) * 2015-06-29 2018-05-02 Daiichi Sankyo Co., Ltd. Method for selectively manufacturing antibody-drug conjugate

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Xenopoulos A, et al. "Selectivity improvements in highly charged UF membranes" Desalination 199: Elsevier 2006; 538 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112566942A (zh) 2021-03-26
JP2024050683A (ja) 2024-04-10
EP3828206A4 (en) 2022-04-20
SG11202100653YA (en) 2021-02-25
WO2020022363A1 (ja) 2020-01-30
TWI865337B (zh) 2024-12-01
CA3107417C (en) 2023-10-17
JPWO2020022363A1 (ja) 2021-08-02
TW202019972A (zh) 2020-06-01
KR20210038904A (ko) 2021-04-08
TW202435919A (zh) 2024-09-16
AU2019311557A1 (en) 2021-02-04
US20210283269A1 (en) 2021-09-16
BR112021001194A2 (pt) 2021-04-27
EP3828206A1 (en) 2021-06-02
CA3107417A1 (en) 2020-01-30
IL280295A (en) 2021-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI847992B (zh) 抗體-藥物結合物之有效的製造方法
JP7458981B2 (ja) 抗体－薬物コンジュゲートとチューブリン阻害剤の組み合わせ
BR112020005212A2 (pt) conjugado de anticorpo, kit, composição farmacêutica, e, métodos de tratamento ou prevenção e de diagnóstico de uma doença ou condição.
JP7473474B2 (ja) 抗体－薬物コンジュゲート投与による転移性脳腫瘍の治療
CN113271942A (zh) 抗体-药物缀合物与parp抑制剂的组合
JP2024109885A (ja) 抗ｈｅｒ３抗体－薬物コンジュゲート投与によるｈｅｒ３変異がんの治療
WO2019230645A1 (ja) 抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲート投与によるｈｅｒ２変異がんの治療
JP2019536780A (ja) Ｍｅｔ抗体薬物複合体
US20230277679A1 (en) Method for producing antibody-drug conjugate
TW202508639A (zh) 包含使用活性碳材料之純化步驟的抗體-藥物結合物之製造方法
US20250000991A1 (en) Nectin-4 antibodies and antibody-drug conjugates
WO2024210162A1 (ja) 抗ｍｕｃ１抗体－薬物コンジュゲート投与による薬剤低感受性がんの治療方法
EA046932B1 (ru) Лечение метастатической опухоли головного мозга путем введения конъюгата антитело-лекарственное средство