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TWI714525B - 用於治療細菌感染之單內醯胺（ｍｏｎｏｂａｃｔａｍ）有機化合物 - Google Patents

用於治療細菌感染之單內醯胺（ｍｏｎｏｂａｃｔａｍ）有機化合物 Download PDF

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TWI714525B
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Abstract

本發明概言之係關於式I之抗細菌性化合物，
Figure 104109243-A0202-11-0001-402
如本文進一步闡述，及其醫藥上可接受之鹽及調配物。在某些態樣中，本發明係關於使用該等化合物治療諸如由革蘭氏陰性細菌(Gram-negative bacteria)引起之彼等感染之方法。

Description

用於治療細菌感染之單內醯胺(MONOBACTAM)有機化合物
本發明係關於新穎β-內醯胺化合物以及其製備及用途。具體而言，本發明係關於其中內醯胺環為單環之新穎β-內醯胺化合物及其治療細菌感染、尤其由革蘭氏陰性細菌(Gram-negative bacteria)引起之彼等之用途。
在過去幾十年中，抗微生物抗藥性頻率及其與嚴重傳染病之關聯正以驚人的速率增加。院內病原體之抗藥性日益盛行尤其令人不安。在美國每年超過2百萬的院內感染中，50%至60%係由細菌之抗微生物抗性菌株引起。對通常使用之抗細菌劑之高抗藥率會增加發病率、死亡率及與院內感染相關之成本。在美國，認為院內感染導致或引起每年超過77,000的死亡且每年花費約$50億至$100億。
革蘭氏陰性抗藥性之重要原因包括克雷伯氏肺炎菌(Klebsiella pneumoniae)、大腸桿菌(Escherichia coli)及奇異變形桿菌(Proteus mirabilis)中之廣譜β-內醯胺酶(ESBL)、絲胺酸碳氫黴烯酶(KPC)及金屬-β-內醯胺酶(例如NDM-1)，腸桿菌屬(Enterobacter)種類及弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacter freundii)中之高含量第三代頭孢菌素(AmpC)β-內醯胺酶抗性，以及在假單胞菌屬(Pseudomonas)、不動桿菌屬(Acinetobacter)及窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)中觀察到之多重抗 藥性基因抗細菌藥抗性之問題因存在抗多種抗細菌藥之細菌菌株而變得複雜。舉例而言，具有NDM-1金屬-β-內醯胺酶之克雷伯氏肺炎菌在攜載NDM-1之同一質體上通常攜載其他絲胺酸-β-內醯胺酶。
因此，業內需要新穎抗細菌藥，尤其可有效地針對現有抗藥性微生物或不易受新細菌抗性之發展影響的抗細菌性化合物。本發明提供該等化合物。
本發明包括新穎化合物、包括該等化合物之醫藥調配物及使用該等化合物及組合物治療患有細菌感染之患者的方法。化合物係單內醯胺，其包含單環狀β-內醯胺環，且通常藉由抑制青黴素(penicillin)結合蛋白(PBP)起作用，該等蛋白質參與為正常細菌細胞壁所需之肽聚糖之生物合成。此類別之一些已知成員包括胺曲南(aztreonam)及卡蘆莫南(carumonam)。其他單內醯胺化合物揭示於WO2013/110643及WO2012/073138中。該等化合物主要有效地針對革蘭氏陰性細菌。
本發明化合物可用於治療由以下細菌引起之感染：腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，包括沙門桿菌屬(Salmonella)、大腸桿菌、克雷伯氏肺炎菌、變形桿菌屬(Proteus)、腸桿菌屬、沙雷氏菌屬(Serratia)及檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)，包括病原體，例如不易受先前單內醯胺(如胺曲南)影響之產KPC克雷伯氏肺炎菌，以及非發酵細菌，包括綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa)、不動桿菌屬、伯克氏菌屬(Burkholderia)、莫拉菌屬(Moraxella)及窄食單胞菌屬。
本發明化合物可單獨或與其他抗生素組合使用，且可與加強針對某些病原體之本發明化合物之活性或降低針對某些病原體之本發明化合物之細菌抗性的頻率或程度之化合物(例如β-內醯胺酶抑制劑)組合使用。適於與本發明化合物組合使用之β-內醯胺酶抑制劑包括阿維巴坦(avibactam)、三唑巴坦(tazobactam)、舒巴克坦(sulbactam)及克拉 維酸(clavulanic acid)。
在一個態樣中，本發明提供式(I)化合物：
Figure 104109243-A0202-12-0003-405
或其醫藥上可接受之鹽，其中：Z係CR4或N；R1係H或C1-C4烷基；R2係選自由以下組成之群：H、C1-C4烷基及-COOH
或R1及R2與其所附接之碳一起形成選自以下之環：C3-C6環烷基環及含有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之4-6員雜環；R3選自H、-COOH及-L1-W-(CH2)0-2-X-R5；R4係H或鹵基；每一L1獨立地係直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；W係鍵、O、NH或S；X係苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5-6員雜芳基環；其中苯基及5-6員雜芳基視情況經一或兩個選自以下之基團取代：C1-4烷基、羥基、-CN、F、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)及-N(C1-4烷基)2；R5選自
Figure 104109243-A0202-12-0004-406
 其中R1b、R2b及R3b獨立地係氫、羥基、CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基，其中每一(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基可經一個、兩個或三個獨立地選自Y之取代基取代，且其中R2b及R3b可視情況與其所鍵結之氮原子一起形成包括0或1個選自N、O及S之其他雜原子之5至7員雜環基，該雜環基視情況經Y取代；Y選自F、CN、-NH2、Q、-L2-C(O)NR10-L2-Q、-L2-NR10-C(O)-L2-Q、-L2-OR10、-L2-N(R10)2、-L2-N+(R11)3、-L2-NR10-C(O)R10、-L2-NR10-L2-N(R10)2、-L2-O-C(O)OR10、-L2-O-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-OR11、-L2-C(=NR10)-N(R10)2、-CON(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-R10、-L2-C(O)N(R10)2、-L2-O-SO3R10；L2在每次出現時獨立地係鍵或視情況經NH2、OH或F取代之直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；Het係4-6員雜芳基或雜環，其中雜芳基環含有1至4個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經一或兩個選自以下之基團取代：Y、OH、NH2、-C(O)NR10 2及視情況經一或兩個Y取代之C1-4烷基；且 雜環含有1或2個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經至多三個選自以下之基團取代：鹵基、Y、視情況經一或兩個選自Y、=NR10、=N-OR10、=N-CN及側氧基之基團取代之C1-4烷基；且Het視情況稠合至含有至多兩個選自N-R10、O及S之雜原子作為環成員之5員或6員雜環或雜芳基環，且視情況經一或兩個R16取代；R10及R12獨立地係H或視情況經一或兩個選自OH、NH2或Q之基團取代之C1-4烷基；Q選自-L2-N(R13)2、-L2-N+(R14)3、-L2-NR13-C(=NR13)-N(R13)2、-L2-NR13-CR13(=NR13)、-L2-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy、-L2-Cy-L2-R13、-L2-Cy-L2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-N(R13)2、-L2-SO2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-R13、-L2-NR13-L2-Ar、-L2-S-L2-Cy、-L2-NR13-(C=O)-O-R13、
Figure 104109243-A0202-12-0005-407
 每一Cy獨立地係3-6員環烷基或含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之3-6員雜環基且視情況稠合至5-6員芳基或雜芳基環，其中每一Cy視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；Ar係苯基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；R11在每次出現時獨立地係C1-4烷基；且同一N上之兩個R10或兩個R11或兩個R12可環化形成視情況經C1-4 烷基、C1-4烷氧基、羥基或側氧基取代之4-6員雜環；R13在每次出現時獨立地係H或視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；R14在每次出現時獨立地係視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；其中同一N上之兩個R13或兩個R14可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、胺基或側氧基取代之4-6員雜環；R15係H、鹵基、C1-4烷基、CN或-O(C1-4烷基)；每一R16獨立地係鹵基、C1-4烷基、-NH2、CN或-O(C1-4烷基)；或其醫藥上可接受之鹽；包括該等本文所揭示化合物之變體。
在另一態樣中，本發明提供抑制細菌生長或調節細菌感染之毒力的方法，其中該方法包含向需要該抑制之患者投與式(I)化合物。
在另一態樣中，本發明提供治療患有革蘭氏陰性細菌感染之個體的方法，其包含向有需要之個體投與抗細菌有效量之式(I)化合物視情況與醫藥上可接受之載劑之組合。在某些實施例中，個體係哺乳動物，且在一些實施例中，個體係人類。
革蘭氏陰性細菌可具有選自以下各項之屬：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、摩根菌屬(Morganella)、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬、不動桿菌屬、類桿菌屬(Bacteroides)、伯克氏菌屬、曲狀桿菌屬(Campylobacter)、奈瑟菌屬(Neisseria)及窄食單胞菌屬。具體而言，可治療由檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬或不動桿菌屬之種類引起之細菌感染。用於該治療之具體細菌種類包括弗氏檸檬酸桿菌、柯氏檸檬酸桿菌(Citrobacter koseri)、陰溝腸桿 菌(Enterobacter cloacae)、糞腸桿菌(Enterobacter faecalis)、糞便腸內菌(Enterobacter faecium)、大腸桿菌、克雷伯氏肺炎菌、產酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、摩根氏桿菌(Morganella morganii)、奇異變形桿菌、沙門桿菌、黏質沙雷氏菌、綠膿桿菌及鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumanii)以及雙道類桿菌(Bacteroides bivius)、脆弱類桿菌(Bacteroides fragilis)、洋蔥伯克氏菌(Burkholderia cepacia)、空腸曲桿菌(Campylobacter jejuni)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)及嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。
在另一態樣中，本發明提供向發酵或非發酵革蘭氏陰性細菌投與抑制量之式(I)化合物之方法。在向發酵或非發酵革蘭氏陰性細菌投與抑制量之式(I)化合物之方法的某一實施例中，革蘭氏陰性細菌係伯克氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、奈瑟菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬及不動桿菌屬之種類。用於該等方法之具體細菌種類包括弗氏檸檬酸桿菌、柯氏檸檬酸桿菌、陰溝腸桿菌、糞腸桿菌、糞便腸內菌、大腸桿菌、克雷伯氏肺炎菌、產酸克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningiditis)及洋蔥伯克氏菌，摩根氏桿菌、奇異變形桿菌、沙門桿菌、黏質沙雷氏菌、綠膿桿菌及鮑氏不動桿菌，以及雙道類桿菌、脆弱類桿菌、洋蔥伯克氏菌、空腸曲桿菌、淋病奈瑟菌、及嗜麥芽窄食單胞菌。
在另一實施例中，本發明提供向革蘭氏陰性細菌(例如腸桿菌科)投與抑制量之式(I)化合物之方法；在一些實施例中，革蘭氏陰性細菌選自由以下組成之群：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬及不動桿菌屬之種類。
本發明之另一實施例提供醫藥組合物，其包含有效量之式(I)化 合物與醫藥上可接受之載劑或賦形劑之組合。如本文所使用之「有效量」係指足以減輕感染係嚴重程度或症狀之量，或可有效地降低患者之細菌載量之量。
提供本發明之醫藥組合物，其包括本文所述化合物中之任一者及醫藥上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物包括另一治療劑或β內醯胺酶抑制劑。
在另一態樣中，本發明提供醫藥組合，其包含本發明化合物及另一治療劑或β內醯胺酶抑制劑或視情況二者。
本發明提供用於抑制革蘭氏陰性細菌之存活及群體生長之新穎化合物、方法以及用於治療哺乳動物、尤其人類個體之細菌感染的新穎方法及組合物。本文所提供之化合物可調配成以下醫藥調配物及藥劑：可用於抑制細菌生長或細菌感染之嚴重程度或持續時間或治療患有易受式(I)化合物抑制影響之細菌感染的個體之方法。本發明亦提供該等化合物在製備藥劑及醫藥調配物中之用途、該等化合物在抑制細菌生長中之用途及該等化合物在治療需要該治療之個體(例如感染革蘭氏陰性細菌或對該感染具有尤高風險之個體)的細菌感染中之用途。
本發明之其他態樣論述於本文中。
出於解釋本說明書之目的，除非另有規定或上下文明顯矛盾，否則應用以下定義。適宜時，以單數形式使用之術語亦將包括複數形式，且反之亦然。
定義
本說明書所用術語具有以下含義： 如本文所使用，術語「個體」係指動物。在某些態樣中，動物係哺乳動物。個體亦指例如靈長類動物(例如人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥及諸如此類。在某些實施例中，個體係人類。
如本文所使用，術語「抑制」(「inhibition」或「inhibiting」)係指減輕或阻抑給定病況、症狀或病症或疾病，或顯著降低生物活性或過程之基線活性，或降低細菌群體之活力、數量或生長速率。
在一個實施例中，如本文所使用，術語「治療」(「treating」或「treatment」)任一疾病或病症係指改善該疾病或病症(即，減緩或阻止或降低該疾病或其至少一種臨床症狀的發展)。在另一實施例中，「治療」(「treating」或「treatment」)係指減輕或改善包括彼等患者不能感受到之物理參數中的至少一個物理參數。在另一實施例中，「治療」(「treating」或「treatment」)係指在物理方面調節疾病或病症(例如，穩定可感受到之症狀)或在生理學方面調節疾病或病症(例如，穩定物理參數)或二者皆有。在另一實施例中，「治療」(「treating」或「treatment」)係指預防或延遲疾病或病症之開始或發展或進展。
除非本文另外指明或上下文明顯矛盾，否則如本文所使用，在本發明上下文(尤其在申請專利範圍之上下文)中使用之術語「一」(「a」、「an」)、「該」及類似術語皆理解為涵蓋單數及複數二者。
除非本文另外指明或上下文另外明顯矛盾，否則本文所述之所有方法可以任何適宜順序實施。本文所提供之任何及所有實例或實例性語言(例如「例如」)僅意欲用於更好地闡釋本發明且不對在其他方面主張之本發明範疇加以限制。
術語「抗細菌劑」係指在實驗室中合成或改質之具有殺菌或抑菌活性之藥劑。此上下文中之「活性」劑將抑制綠膿桿菌及/或其他 革蘭氏陰性細菌之生長。術語「抑制生長」指示降低具體細菌群體數量之增長速率。因此，該術語包括細菌群體增加但速率降低之情形、以及群體停止生長之情形、以及群體中細菌數量減少或群體甚至消失之情形。
「視情況經取代」意指所提及基團可在一或多個位置經任一個下文所列示基團或該等基團之任一組合取代。該取代涉及使用另一部分替代未經取代之基團之氫原子；因此，可添加至任何未經取代基團中之取代基數量等於未經取代基團上之氫原子數。若無另外規定，則「視情況經取代」意指可添加至多至三個非氫取代基。
如本文所使用，「鹵基」或「鹵素」可為氟、氯、溴或碘。
如本文所使用之「C1-C6烷基」或「C1-6烷基」表示具有1至6個碳原子之直鏈或具支鏈烷基。若規定碳原子數不同(例如C8或C3)，則該定義應作相應修改，例如「C1-C4烷基」將包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基。
如本文所使用之「C1-C6烷氧基」或「C1-6烷氧基」表示具有1至6個碳原子之直鏈或具支鏈烷氧基。若規定碳原子數不同(例如C8或C3)，則該定義應作相應修改，例如「C1-C4烷氧基」將代表甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基。
如本文所使用之「C1-C4-鹵烷基」或「C1-4鹵烷基」表示具有1至4個碳原子之直鏈或具支鏈烷基，其中至少一個氫已經鹵素替代。若規定碳原子數不同(例如C6或C3)，則該定義應作相應修改，因此「C1-C4鹵烷基」將代表至少一個氫經鹵素取代之甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基，例如其中鹵素係氟：CF3CF2-、(CF3)2CH-、CH3-CF2-、CF3CF2-、CF3、CF2H-、CF3CF2CHCF3或CF3CF2CF2CF2-。
如本文所使用之「C3-C8-環烷基」或「C3-8環烷基」係指3至8個碳原子之飽和單環烴環。該等基團之實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。若規定碳原子數不同(例如C3-C6)，則該定義應作相應修改。
「4至8員雜環基」、「5至6員雜環基」、「3至10員雜環基」、「3至14員雜環基」、「4至14員雜環基」及「5至14員雜環基」分別係指含有1至7個、1至5個或1至4個選自由氮、氧及硫組成之群之雜原子的4至8員、5至6員、3至10員、3至14員、4至14員及5至14員雜環，其可為飽和、部分飽和的。「雜環」可與「雜環基」互換使用。雜環基團可附接至雜原子或碳原子。術語「雜環基」包括單環基團、稠合環基團及橋接基團。該雜環基之實例包括(但不限於)吡咯啶、六氫吡啶、六氫吡嗪、噁唑啶、吡咯啶酮、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫噻喃、四氫吡喃、1,4-二噁烷、1,4-氧硫雜環己烷、8-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-8-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、8-氧雜-3-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜-二環[2.2.1]庚烷、2,5-二氮雜-二環[2.2.1]庚烷、氮雜環丁烷、伸乙基二側氧基、氧雜環丁烷及噻唑啶。較佳地，除非另外規定，否則雜環或雜環基係飽和或部分飽和單環基團，且含有5-7個環原子，具有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員。在一些實施例中，雜環基進一步包括含有1或2個雜原子(例如N、O或S)作為環成員且包含兩個稠合3員、4員、5員或6員環之二環系統，例如3-氮雜二環[3.1.0]己烷、8-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-8-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、8-氧雜-3-氮雜-二環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜-二環[2.2.1]庚烷、2,5-二氮雜-二環[2.2.1]庚烷。
「雜芳基」係完全不飽和之(芳香族)環。術語「雜芳基」係指具有1至8個選自N、O或S之雜原子之5-14員單環或二環或三環芳香族環 系統。通常，雜芳基係5-10員環系統(例如，5-6員單環或8-10員二環)或5-6員環系統。除非另外規定，否則雜芳基較佳係含有至多4個選自N、O及S之雜原子作為環成員之經分離之5-6員環。典型雜芳基包括呋喃、異噻唑、噻二唑、噁二唑、吲唑、吲哚、喹啉、2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；、2-或3-吡咯基；1-、2-、4-或5-咪唑基；1-、3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基、3-、4-或5-異噻唑基、2-、4-或5-噁唑基、3-、4-或5-異噁唑基、3-或5-(1,2,4-三唑基)、4-或5-(1,2,3-三唑基)、四唑基、三嗪、嘧啶、2-、3-或4-吡啶基、3-或4-嗒嗪基、3-、4-或5-吡嗪基、2-吡嗪基及2-、4-或5-嘧啶基。
術語「羥基(hydroxy)」或「羥基(hydroxyl)」係指基團-OH，或當用作基團名稱(例如羥基烷基)之一部分時，其係指經-OH取代之所命名基團。
本文闡述本發明之多個實施例。應認識到，在每一實施例中規定之特徵可與其他規定特徵組合以提供其他實施例。以下經編號實施例代表本發明之一些態樣。
1.一種式(I)化合物：
Figure 104109243-A0202-12-0012-408
或其醫藥上可接受之鹽，其中：Z係CR4或N；R1係H或C1-C4烷基； R2係選自由以下組成之群：H、C1-C4烷基及-COOH
或R1及R2與其所附接之碳一起形成選自以下之環：C3-C6環烷基環及含有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之4-6員雜環；R3選自H、-COOH及-L1-W-(CH2)0-2-X-R5；R4係H或鹵基；每一L1獨立地係直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；W係鍵、O、NH或S；X係苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5-6員雜芳基環；其中苯基及5-6員雜芳基視情況經一或兩個選自以下之基團取代：C1-4烷基、羥基、-CN、F、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)及-N(C1-4烷基)2；R5選自
Figure 104109243-A0202-12-0013-409
 其中R1b、R2b及R3b獨立地係氫、羥基、CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基，其中每一(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基可經一個、兩個或三個獨立地選自Y之取代基取代，且其中R2b及R3b可視情況與其所鍵結之氮原子一起形成包括0或1個選自N、O及S之其他雜原子之5至7員雜環基，該雜環基視情況經Y 取代；Y選自F、CN、-NH2、Q、-L2-C(O)NR10-L2-Q、-L2-NR10-C(O)-L2-Q、-L2-OR10、-L2-N(R10)2、-L2-N+(R11)3、-L2-NR10-C(O)R10、-L2-NR10-L2-N(R10)2、-L2-O-C(O)OR10、-L2-O-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-OR11、-L2-C(=NR10)-N(R10)2、-CON(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-R10、-L2-C(O)N(R10)2、、-L2-O-SO3R10；L2在每次出現時獨立地係鍵或視情況經NH2、OH或F取代之直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；Het係4-6員雜芳基或雜環，其中雜芳基環含有1至4個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經一或兩個選自以下之基團取代：Y、OH、NH2、-C(O)NR10 2及視情況經一或兩個Y取代之C1-4烷基；且雜環含有1或2個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經至多三個選自以下之基團取代：鹵基、Y、視情況經一或兩個選自Y、=NR10、=N-OR10、=N-CN及側氧基之基團取代之C1-4烷基；且Het視情況稠合至含有至多兩個選自N-R10、O及S之雜原子作為環成員之5員或6員雜環或雜芳基環，且視情況經一或兩個R16取代；R10及R12獨立地係H或視情況經一或兩個選自OH、NH2或Q之基團取代之C1-4烷基；Q選自-L2-N(R13)2、-L2-N+(R14)3、-L2-NR13-C(=NR13)-N(R13)2、-L2-NR13-CR13(=NR13)、-L2-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy、-L2-Cy-L2-R13、-L2-Cy-L2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-N(R13)2、-L2-SO2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-R13、-L2-NR13-L2-Ar、-L2-S-L2-Cy、-L2-NR13-(C=O)-O-R13、
Figure 104109243-A0202-12-0015-410
 每一Cy獨立地係3-6員環烷基或含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之3-6員雜環基且視情況稠合至5-6員芳基或雜芳基環，其中每一Cy視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；Ar係苯基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；R11在每次出現時獨立地係C1-4烷基；且同一N上之兩個R10或兩個R11或兩個R12可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基或側氧基取代之4-6員雜環；R13在每次出現時獨立地係H或視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；視情況，當R13係C1-4烷基時，其可經-OR14、-NHR14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代；R14在每次出現時獨立地係視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；其中同一N上之兩個R13或兩個R14可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、胺基或側氧基取代之4-6員雜環；R15係H、鹵基、C1-4烷基、CN或-O(C1-4烷基)；每一R16獨立地係鹵基、C1-4烷基、-NH2、CN或-O(C1-4烷基)；或其醫藥上可接受之鹽。
應理解，表B中之每一化合物(包括實例1-152之化合物)係本發明 之實施例且意欲在實施例1之範疇內。
2.一種式(IA)化合物：
Figure 104109243-A0202-12-0016-411
或其醫藥上可接受之鹽，其中：Z係CR4或N；R1係H或C1-C4烷基；R2係選自由以下組成之群：H、C1-C4烷基及-COOH
或R1及R2與其所附接之碳一起形成選自以下之環：C3-C6環烷基環及含有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之4-6員雜環；R3選自H、-COOH及-L1-W-(CH2)0-2-X-R5；R4係H或鹵基；每一L1獨立地係直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；W係鍵、O、NH或S；X係苯基或含有1-3個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5-6員雜芳基環；其中苯基及5-6員雜芳基視情況經一或兩個選自以下之基團取代：C1-4烷基、羥基、-CN、F、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)及-N(C1-4烷基)2；R5選自
Figure 104109243-A0202-12-0017-412
 其中R1b、R2b及R3b獨立地係氫、羥基、CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或4員、5員、6員或7員雜環基，其中每一(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或4員、5員、6員或7員雜環基可經一個、兩個或三個獨立地選自Y之取代基取代，且其中R2b及R3b可視情況與其所鍵結之氮原子一起形成包括0或1個選自N、O及S之其他雜原子之5至7員雜環基，該雜環基視情況經Y取代；Y選自F、CN、-NH2、Q、-L2-C(O)NR10-L2-Q、-L2-NR10-C(O)-L2-Q、-L2-OR10、-L2-N(R10)2、-L2-N+(R11)3、-L2-NR10-C(O)R10、-L2-NR10-L2-N(R10)2、-L2-O-C(O)OR10、-L2-O-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-OR11、-L2-C(=NR10)-N(R10)2、-CON(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-R10、-L2-C(O)N(R10)2、、-L2-O-SO3R10；L2在每次出現時獨立地係鍵或直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；Het係5-6員雜芳基或雜環，其中雜芳基環含有1至4個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經一或兩個選自以下之基團取代：Y、視情況經一或兩個Y取代之C1-4烷基、NH2及-C(O)NR10 2，且雜環含有1或2個選自N、O及S之雜原子作為環成員且視情況經至多三個選自以下之基團取代：鹵基、Y、視情況經一或兩個選自Y、=NR10、 =N-OR10、=N-CN及側氧基之基團取代之C1-4烷基；且Het視情況稠合至含有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5員或6員雜環或雜芳基環，且視情況經一或兩個R16取代；R10及R12獨立地係H或視情況經Q取代之C1-4烷基；Q選自-L2-N(R13)2、-L2-N+(R14)3、-L2-NH-C(=NH)-NH2、-L2-C(=NH)-NH2、
Figure 104109243-A0202-12-0018-413
 R11在每次出現時獨立地係C1-4烷基；且同一N上之兩個R10或兩個R11或兩個R12可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基或側氧基取代之4-6員雜環；R13在每次出現時獨立地係H或視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；R14在每次出現時獨立地係視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；其中同一N上之兩個R13或兩個R14可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、胺基或側氧基取代之4-6員雜環；R15係H、鹵基、C1-4烷基、CN或-O(C1-4烷基)；每一R16獨立地係鹵基、C1-4烷基、-NH2、CN或-O(C1-4烷基)；或其醫藥上可接受之鹽。
在式(I)或(IA)化合物之某些實施例中，由-O-CR1R2R3表示之基團選自
Figure 104109243-A0202-12-0018-414
及
Figure 104109243-A0202-12-0018-415
。
3.根據實施例1或實施例2之化合物，其中R1及R2各自為甲基，且 R3係-COOH。
4.根據實施例1或實施例2之化合物，其中R1及R2與其皆附接之碳一起形成環丙烷環，且R3係-COOH。
5.根據實施例1或實施例2之化合物，其中R1及R2皆為H，且R3係-COOH。
6.根據前述實施例中任一者之化合物，其中Z係CH。
7.根據實施例1至6中任一者之化合物，其中Z係N。
8.根據前述實施例中任一者之化合物，其中Het係含有1-4個氮原子作為環成員之5員雜芳基環且視情況經Y取代。在一些該等實施例中，Het係視情況經Y取代之三唑。
9.根據實施例8之化合物，其中Het選自吡咯、吡唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、1,3,4-三唑及1,2,3,4-四唑且視情況如實施例8中所提供經取代。
10.根據實施例8之化合物，其中Het係視情況經-L2-N(R10)2或L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2取代之1,2,3-三唑-2-基。
11.根據實施例8之化合物，其具有下式：
Figure 104109243-A0202-12-0019-416
其中R17選自-CH2-G1-(CH2)1-4-G2及-CH2-G1-Rx-(CH2)0-2-G2，G1選自-NH-、-NMe-、-NH-C(=NH)-及-NH-C(=NH)-NH-，G2選自-NH2、-NHMe、-NH-C(=NH)-NH2、氮雜環丁烷及吡咯啶；且Rx係選自環丁基、氮雜環丁烷及吡咯啶之環。
12.根據實施例8之化合物，其中Het係視情況經-L2-N(R10)2或L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2取代之1,2,3-三唑-1-基。
13.根據實施例8之化合物，其中Het係視情況經-L2-N(R10)2或L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2取代之1,2,4-三唑-1-基。
14.根據實施例1至7中任一者之化合物，其中Het係經側氧基取代且視情況進一步經Y取代之飽和環。
15.根據實施例14之化合物，其中Het選自吡咯啶-2-酮、噁唑啶-2-酮及咪唑啶-2-酮，且視情況經Y取代。在該等化合物之具體實施例中，Het選自：
Figure 104109243-A0202-12-0020-474
及
Figure 104109243-A0202-12-0020-475
，其中虛鍵指示Het至式(I)或(IA)之剩餘部分之附接點，且(Y)0-1代表可附接至環上之任一可用位置之可選取代基Y。
16.根據實施例14之化合物，其中Het係噁唑啶-2-酮且視情況經-L2-N(R10)2或L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2取代。
17.根據實施例14之化合物，其中Het係在5位上經呈R構形之-L2-N(R10)2或L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2取代之噁唑啶-2-酮。
18.根據前述實施例中任一者之化合物，其具有式(II)之結構：
Figure 104109243-A0202-12-0020-419
 或其醫藥上可接受之鹽。
19.根據實施例1或實施例2之化合物，其具有式(IIIa)或(IIIb)：
Figure 104109243-A0202-12-0021-420
其中R17係Y或視情況經一或兩個Y取代之C1-4烷基。
20.根據實施例1或實施例2之化合物，其中---O-CR1R2R3選自
Figure 104109243-A0202-12-0021-421
21.根據實施例1或實施例20之化合物，其中Het選自
Figure 104109243-A0202-12-0021-422
Figure 104109243-A0202-12-0022-423
Figure 104109243-A0202-12-0023-424
22.根據實施例1至16中任一者之化合物，其中L2係-(CH2)1-3-。
23.根據實施例18之化合物，其中Het選自：
Figure 104109243-A0202-12-0023-425
24.根據實施例18之化合物，其中Het選自：
Figure 104109243-A0202-12-0023-426
25.根據實施例19、23或25之化合物，其中Y選自Q、-L2-OR10、-L2-N(R10)2、-L2-N+(R11)3、-L2-NR10-C(O)R10、-、-L2-O-C(O)OR10、-L2-O-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-N(R10)2、-L2-C(=NR10)-N(R10)2、-CON(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2及-L2-NR10-C(=NR10)-R10。
另一選擇為，根據實施例19、23或24之化合物，其中Y具有式-L2-NR10-L2-N(R10)2，例如Y可係諸如-CH2-NR10-(CH2)2-3-N(R10)2等基 團；在該等化合物之具體實施例中，R10係H。
26.根據實施例6至25中任一者之化合物，其中R3具有式
Figure 104109243-A0202-12-0024-427
。
27.根據實施例26之化合物，其中R3係
Figure 104109243-A0202-12-0024-428
 其中R3b選自H、氮雜環丁烷、吡咯啶及六氫吡啶。
28.根據前述實施例中任一者之化合物，其係醫藥上可接受之鹽。
29.一種醫藥組合物，其包含根據前述實施例中任一者之化合物及至少一種醫藥上可接受之賦形劑。
30.一種治療革蘭氏陰性細菌感染之方法，其包含向需要該治療之個體投與根據實施例1至27中任一者之化合物或根據實施例29之醫藥組合物。
31.根據實施例30之方法，其中該細菌感染係由以下細菌之種類引起：伯克氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、腦膜炎菌(Meningitidis)、摩根菌屬、假單胞菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、不動桿菌屬、類桿菌屬、曲狀桿菌屬、奈瑟菌屬或窄食單胞菌屬細菌。
32.根據實施例30之方法，其中該細菌感染係由腸桿菌科之種類引起之院內肺炎、腹內感染或尿路感染。
33.根據實施例1至27中任一者之化合物，其用作藥劑。
34.根據實施例33之化合物，其中該藥劑係抗細菌劑。
35.根據實施例33之化合物，其中該抗細菌劑係用於治療由以下細菌之種類引起之革蘭氏陰性細菌感染：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、假單胞菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、不動桿菌屬、類桿菌屬、伯克氏菌屬、曲狀桿菌屬、奈瑟菌屬或窄食單胞菌屬。
36.一種醫藥組合，其包含根據實施例1至27中任一者之化合物及第二治療劑。
在上述式(I)化合物及各個實施例中，肟較佳具有此處所顯示之構形：
Figure 104109243-A0202-12-0025-429
在任一上述實施例之一些情況下，除非另外規定，否則R2及R3中之一者而非兩者代表-COOH。
在上述化合物之許多實施例中，Het並非吡啶。在較佳實施例中，Het係5員雜芳基或雜環。
當任一上述實施例中之R3具有式-L1-W-(CH2)0-2-X-R5時，X可係苯基。在該等實施例中之一些中，L1係CH2。在一些該等實施例中，W係O。在該等實施例中之一些中，R5係具有下式之基團：
Figure 104109243-A0202-12-0026-430
 其中R1b、R2b及R3b係如針對上文實施例1所闡述。在該等實施例中之某些中，R5具有式
Figure 104109243-A0202-12-0026-431
，其中R1b及R2b各自代表H，且R3b可係H或雜環基(例如4-六氫吡啶基)。適宜地，在該等實施例中，R1係H且R2係H或COOH。
在另一態樣中，本發明提供：
‧醫藥組合，其包含(a)第一治療劑，其係本發明化合物，例如本文所述之式(I)或其任一子式之化合物，及(b)如上文所述之第二治療劑。
‧如上文所定義之方法，其包含例如同時或依序共投與治療有效量之本發明化合物(例如本文所述之式(I)或其任一子式之化合物)及如上文所述之第二治療劑。
如本文所使用之術語「共投與」或「組合投與」或諸如此類意欲涵蓋向單一患者投與所選治療劑，且意欲包括該等藥劑無需藉由相同投與途經或同時投與之治療方案。固定組合亦在本發明之範疇內。投與本發明之醫藥組合與僅施用其醫藥活性成份之單療法相比可產生有益效應，例如協同治療效應。
本發明組合之每一組份可單獨、一起或以其任一組合來投與。
本發明化合物與任一其他藥劑可以單獨劑型進行調配。另一選擇為，為減少投與患者之劑型數量，本發明化合物與任一其他藥劑可 以任一組合一起調配。舉例而言，本發明抑制劑化合物可以一種劑型進行調配，而另一藥劑可以另一種劑型一起調配。任何單獨劑型皆可同時或在不同時間投與。
另一選擇為，本發明組合物包含如本文所述之另一藥劑。每一組份皆可以個別組合物、組合組合物或以單一組合物形式存在。
本發明化合物可藉由下文之一般合成途徑來合成，該等合成途徑之特定實例更詳細闡述於實例中。
本發明化合物及中間體亦可根據彼等熟習此項技術者通常已知之方法彼此轉化。
在本文範疇內，除非上下文另外指明，否則僅將不為本發明化合物之具體期望最終產物之成份且易於移除之基團稱為「保護基團」。該等保護基團對官能基之保護、保護基團本身及其裂解反應闡述於例如標準參考著作中，例如J.F.W.McOmie,「Protective Groups in Organic Chemistry」，Plenum Press,London及New York 1973；T.W.Greene及P.G.M.Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」，第3版，Wiley,New York 1999；「The Peptides」；第3卷(編輯：E.Gross及J.Meienhofer),Academic Press,London及New York 1981，「Methoden der organischen Chemie」(Methods of Organic Chemistry),Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974；H.-D.Jakubke及H.Jeschkeit,「Aminosäuren,Peptide,Proteine」(Amino acids,Peptides,Proteins),Verlag Chemie,Weinheim,Deerfield Beach,and Basel 1982；及Jochen Lehmann,「Chemie der Kohlenhydrate：Monosaccharide und Derivate」(Chemistry of Carbohydrates：Monosaccharides and Derivatives),Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1974。保護基團之特徵在於其可易於藉由例如溶劑分解、還原、光解或另一選擇為在生理學條件下(例如藉由酶 裂解)移除(即，並不發生不期望之二級反應)。
本發明化合物之具有至少一個鹽形成基團之鹽可以彼等熟習此項技術者已知之方式製備。例如，本發明化合物之具有酸基團之鹽可藉由例如以下方式來形成：用金屬化合物(例如適宜有機羧酸之鹼金屬鹽，例如2-乙基己酸之鈉鹽)、有機鹼金屬或鹼土金屬化合物(例如相應的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，例如鈉或鉀氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)、相應的鈣化合物或氨或適宜有機胺來處理該等化合物，較佳使用化學計量量或僅較小過量之鹽形成劑。本發明化合物之酸加成鹽係以常用方式藉由例如用酸或適宜陰離子交換試劑處理該等化合物來獲得。本發明化合物之含有酸性及鹼性鹽形成基團(例如游離羧基及游離胺基)之內鹽可藉由例如用例如弱鹼將鹽(例如酸加成鹽)中和至等電點或藉由用離子交換劑處理來形成。
可根據彼等熟習此項技術者已知之方法將鹽轉化成游離化合物。金屬鹽及銨鹽可藉由例如用適宜酸處理來轉化，且酸加成鹽可藉由例如用適宜鹼性劑處理來轉化。
可根據本發明獲得之異構物之混合物可以彼等熟習此項技術者已知之方式分離成個別異構物；非鏡像異構物可藉由例如在多相溶劑混合物之間分配、重結晶及/或例如矽膠上之層析分離或藉由例如反相管柱上之中壓液相層析來分離，且外消旋物可藉由例如使用光學純之鹽形成試劑形成鹽來分離，且由此獲得之非鏡像異構物混合物可藉助例如分段結晶或光學活性管柱材料上之層析來分離。
可根據標準方法(例如，使用層析方法、分佈方法、(重)結晶及諸如此類)對中間體及最終產物實施處理及/或純化。
下列內容通常適用於上文及下文所提及之所有製程。
用於製備本發明化合物之所有製程步驟皆可在彼等熟習此項技術者已知之反應條件下實施，該等條件包括彼等所特定提及者：在溶 劑或稀釋劑不存在或(習慣上)存在下，該等溶劑或稀釋劑包括(例如)對所用試劑呈惰性並使其溶解之溶劑或稀釋劑；在觸媒、縮合劑或中和劑(例如離子交換劑，例如陽離子交換劑，例如，呈H+形式，此端視反應及/或反應物之性質而定)不存在或存在下；在低溫、常溫或高溫下(例如約-100℃至約190℃之溫度範圍內，包括(例如)約-80℃至約150℃，例如在-80℃至-60℃下，在室溫下，在-20℃至40℃下或在回流溫度下)；在常壓下或在密閉器皿中，適宜時，該器皿係在壓力下及/或在惰性氣氛中，例如在氬或氮氣氛中。
在該等反應之所有階段，可將所形成異構物之混合物分離成個別異構物(例如，非鏡像異構物或鏡像異構物)或分離成任何期望之異構物混合物(例如，外消旋物或非鏡像異構物之混合物)。
除非在闡述該等製程時另外指明，否則可自其選擇彼等適用於任一具體反應之溶劑的溶劑包括彼等所特定提及者，或(例如)水、酯(例如低碳鏈烷酸低碳烷基酯，例如乙酸乙酯)、醚(例如脂肪族醚，例如二乙醚)或環醚(例如四氫呋喃或二噁烷)、液體芳香族烴(例如苯或甲苯)、醇(例如甲醇、乙醇或1-丙醇或2-丙醇)、腈(例如乙腈)、鹵代烴(例如二氯甲烷或氯仿)、醯胺(例如二甲基甲醯胺或二甲基乙醯胺)、鹼(例如雜環氮鹼，例如吡啶或N-甲基吡咯啶-2-酮)、羧酸酐(例如低碳烷酸酐，例如乙酸酐)、環狀、直鏈或具支鏈烴(例如環己烷、己烷或異戊烷、甲基環己烷)或彼等溶劑之混合物(例如水溶液)。該等溶劑混合物亦可藉由(例如)層析或分配用於處理中。
本發明化合物(包括其鹽)亦可以水合物形式獲得，或其晶體可包括(例如)用於結晶之溶劑。可存在不同結晶型。
用於合成本發明化合物之所有起始材料、結構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑及觸媒皆市面有售，或可藉由熟習此項技術者已知之有機合成方法產生。
術語「光學異構物」或「立體異構物」係指本發明給定化合物中可存在之各種立體異構物構型中之任一者且包括幾何異構物。應瞭解，取代基可附接至碳原子之對掌性中心。術語「對掌性」係指具有與其鏡像夥伴不可重疊之性質的分子，而術語「非對掌性」係指與其鏡像夥伴可重疊之分子。因此，本發明包括化合物之鏡像異構物、非鏡像異構物或外消旋物。「鏡像異構物」係為彼此之不可重疊鏡像之立體異構物對。鏡像異構物對之1：1混合物為「外消旋」混合物。若適宜，該術語係用於指示外消旋混合物。「非鏡像異構物」係具有至少兩個不對稱原子且彼此不為鏡像之立體異構物。根據Cahn-lngold-Prelog R-S系統來指定絕對立體化學。當化合物係純淨鏡像異構物時，每一對掌性碳之立體化學可指定為R或S。絕對構形未知之拆分化合物可端視其在鈉D線波長下旋轉平面偏振光之方向(右旋或左旋)而指定為(+)或(-)。本文所闡述之某些化合物含有一或多個不對稱中心或軸且可由此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構物形式，該等形式可根據絕對立體化學定義為(R)-或(S)-。
端視起始材料及程序之選擇，化合物可以一種可能異構物或其混合物之形式存在，例如純淨光學異構物或異構物混合物，例如外消旋物及非鏡像異構物混合物，此端視不對稱碳原子之數量而定。本發明意欲包括所有該等可能的立體異構物，包括外消旋混合物、非鏡像異構物混合物及光學純形式。可使用對掌性合成子或對掌性試劑來製備光學活性(R)-及(S)-異構物或使用習用技術來進行拆分。若化合物含有雙鍵，則取代基可為E或Z構形。若化合物含有經二取代之環烷基，則環烷基取代基可具有順式或反式構形。本發明亦欲包括所有互變異構物形式。
任何所得異構物混合物皆可基於其成份之物理化學差異(例如)藉由層析及/或分段結晶分離成純淨或實質上純淨之幾何或光學異構 物、非鏡像異構物、外消旋異構物。
可藉由已知方法將最終產物或中間體之任何所得外消旋物拆分成光學對映體，例如，藉由分離使用光學活性酸或鹼獲得之其非鏡像異構物鹽並釋放光學活性酸性或鹼性化合物。具體而言，由此可採用鹼性部分藉由(例如)分段結晶用光學活性酸(例如酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二乙醯基酒石酸、二-O,O'-對-甲苯甲醯基酒石酸、苯乙醇酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸)形成之鹽將本發明化合物拆分成其光學對映體。亦可使用對掌性吸附劑藉由對掌性層析(例如高壓液體層析(HPLC))來拆分外消旋產物。
此外，本發明化合物(包括其鹽)亦可以其水合物形式獲得，或包括用於其結晶之其他溶劑。本發明化合物可固有地或經設計與醫藥上可接受之溶劑(包括水)形成溶劑合物；因此，本發明意欲涵蓋溶劑化及未溶劑化形式二者。術語「溶劑合物」係指本發明化合物(包括其醫藥上可接受之鹽)與一或多種溶劑分子之分子複合物。該等溶劑分子係彼等在醫藥領域中常用且已知對接受者無害者，例如水、乙醇及諸如此類。術語「水合物」係指溶劑分子為水的錯合物。
本發明化合物(包括其鹽、水合物及溶劑合物)可固有地或經設計形成多形體。
如本文所使用，術語「鹽」係指本發明化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」包括具體而言「醫藥上可接受之鹽」。術語「醫藥上可接受之鹽」係指保留本發明化合物之生物有效性及性質且通常為生物上或其他方面合意之鹽。在許多情形下，本發明化合物能夠藉助所存在胺基及/或羧基或其相似基團形成酸性及/或鹼性鹽。
可使用無機酸及有機酸來形成醫藥上可接受之酸加成鹽，例如乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯 茶鹼、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八烷酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、巴莫酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟乙酸鹽。
可自其衍生鹽之無機酸包括(例如)鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及諸如此類。
可自其衍生鹽之有機酸包括(例如)乙酸、丙酸、羥乙酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸及諸如此類。可使用無機鹼及有機鹼來形成醫藥上可接受之鹼加成鹽。
可自其衍生鹽之無機鹼包括(例如)銨鹽及來自週期表第I行至第XII行之金屬。在某些實施例中，鹽係衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅及銅；尤其適宜之鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。
可自其衍生鹽之有機鹼包括(例如)一級、二級及三級胺、包括天然經取代胺之經取代胺、環胺、鹼性離子交換樹脂及諸如此類。某些有機胺包括異丙胺、苄星鹽、膽酸鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、六氫吡嗪及胺丁三醇。
本發明之醫藥上可接受之鹽可自鹼性或酸性部分藉由習用化學方法來合成。一般而言，該等鹽可藉由使游離酸形式之該等化合物與化學計量量的適宜鹼(例如Na、Ca、Mg或K氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或諸如此類)反應來製備，或藉由使游離鹼形式之該等化合物與化學計量量的適宜酸反應來製備。該等反應通常係在水或有機溶劑、 或二者之混合物中實施。一般而言，若可行，則期望使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。其他適宜鹽可參見(例如)「Remington's Pharmaceutical Sciences」，第20版，Mack Publishing公司，Easton,Pa.,(1985)；及「Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use」，Stahl及Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。
本文所給出之任一式亦欲代表本發明化合物之未經標記形式以及經同位素標記之形式。經同位素標記之化合物具有由本文所給出之式繪示之結構，只是一或多個原子經具有所選原子質量或質量數之原子替代。可納入本發明化合物中之同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，例如分別為2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本發明包括多種經同位素標記之本發明化合物，例如彼等存在放射性同位素(例如3H及14C)者或彼等存在非放射性同位素(例如2H及13C)者。該等經同位素標記之化合物可用於代謝研究(14C)、反應動力學研究(例如，2H或3H)、檢測或成像技術(例如正電子發射斷層掃描術(PET)或單光子發射電腦化斷層掃描術(SPECT)，包括藥物或基質組織分佈分析)或患者之放射性治療。具體而言，經18F標記之本發明化合物對於PET或SPECT研究可尤其合意。經同位素標記之本發明化合物通常可藉由彼等熟習此項技術者已知之習用技術來製備，或可藉由與彼等闡述於隨附實例及製備中者類似之製程使用經適當同位素標記之試劑替代先前採用的非標記試劑來製備。
此外，使用較重同位素、尤其氘(即，2H或D)取代可提供某些治療優點，此歸因於較大代謝穩定性，例如活體內半衰期延長或劑量需求降低或治療指數改良。應理解，將此背景下之氘視為本發明化合物之取代基。此一較重同位素(特定而言氘)之濃度可定義為同位素富集 係數。如本文所使用之術語「同位素富集係數」意指指定同位素之同位素豐度與天然豐度之間的比率。若本發明化合物中之取代基表示為氘，則該化合物每一指定氘原子之同位素富集係數為至少3500(在每一指定氘原子處納入52.5%氘)、至少4000(納入60%氘)、至少4500(納入67.5%氘)、至少5000(納入75%氘)、至少5500(納入82.5%氘)、至少6000(納入90%氘)、至少6333.3(納入95%氘)、至少6466.7(納入97%氘)、至少6600(納入99%氘)或至少6633.3(納入99.5%氘)。
本發明之醫藥上可接受之溶劑合物包括彼等其中結晶溶劑可經同位素取代者，例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
含有能夠起氫鍵之供體及/或受體作用之基團的本發明化合物可能夠使用適宜共晶體形成劑來形成共晶體。該等共晶體可藉由已知共晶體形成程序自本發明化合物製備。該等程序包括在結晶條件下在本發明化合物之溶液中與共晶體形成劑一起研磨、加熱、共昇華、共熔融、或接觸並分離藉此形成之共晶體。適宜共晶體形成劑包括彼等闡述於WO 2004/078163中者。因此，本發明進一步提供包含本發明化合物之共晶體。
除非本文另外指明或上下文另外明顯矛盾，否則本文所述之所有方法可以任何適宜順序實施。本文所提供之任何及所有實例或實例性語言(例如「例如」)僅意欲用於更好地闡釋本發明且不對在其他方面主張之本發明範疇加以限制。
本發明提供新穎化合物、包括該等化合物之醫藥調配物及治療革蘭氏陰性細菌感染之方法。具體而言，該等化合物適用於治療由以下細節引起之感染：伯克氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、腦膜炎菌、摩根菌屬、假單胞菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、不動桿菌屬、類桿菌屬、曲狀桿菌屬、奈瑟菌屬或窄食單胞菌屬細菌，包括本文所命名之種類。
使用較重同位素(例如氘，即2H)取代可提供某些治療優點，此歸因於較強代謝穩定性，例如活體內半衰期延長或劑量需求降低，且因此在一些情況下較佳。舉例而言，不可交換烴鍵處之氘取代(例如，C-H)可阻滯活體內差向異構及/或代謝氧化。
經同位素標記之本發明化合物(即式(I)化合物)通常可藉由熟習此項技術者已知之習用技術來製備，或可藉由與彼等闡述於隨附實例及製備部分中者類似之製程使用經適當同位素標記之試劑替代先前採用的非標記試劑來製備。
在另一態樣中，本發明提供治療患有革蘭氏陰性細菌感染之個體之方法，該方法包含以下步驟：向有需要之個體投與抗細菌有效量之本發明化合物(例如式I化合物或其鹽)與醫藥上可接受之載劑。
本發明化合物亦可用於治療患有或易受以下疾病影響之患者：肺炎、敗血症、囊性纖維化、傷口、複雜糖尿病足或複雜尿路感染及由革蘭氏陰性病原體引起之性傳播疾病。本發明化合物亦可用於由以下細菌之種類引起之病況中：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬、不動桿菌屬、類桿菌屬、伯克氏菌屬、曲狀桿菌屬、奈瑟菌屬或窄食單胞菌屬。具體而言，由以下細菌之種類引起之細菌感染可藉由本文方法來治療：檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬、大腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、摩根菌屬、變形桿菌屬、沙門桿菌屬、沙雷氏菌屬、假單胞菌屬或不動桿菌屬。用於該治療之具體細菌種類包括弗氏檸檬酸桿菌、柯氏檸檬酸桿菌、陰溝腸桿菌、糞腸桿菌、糞便腸內菌、大腸桿菌、克雷伯氏肺炎菌、產酸克雷伯氏菌、摩根氏桿菌、奇異變形桿菌、沙門桿菌、黏質沙雷氏菌、綠膿桿菌及鮑氏不動桿菌，以及雙道類桿菌、脆弱類桿菌、洋蔥伯克氏菌、空腸曲桿菌、淋病奈瑟菌及嗜麥芽窄食單胞菌。
本發明化合物亦可與用於治療個體之細菌感染之其他藥劑(例如具或不具式I之另一抗生素劑)組合使用，或與增強本發明化合物之抗細菌活性之化合物、包括加強劑(例如β-內醯胺酶抑制劑(BLI))組合使用。適於與本發明化合物(包括式(I)及其子屬之化合物)組合使用之BLI包括阿維巴坦、克拉維酸、舒巴克坦、三唑巴坦及下式之其他化合物
Figure 104109243-A0202-12-0036-432
其中M係H或醫藥上可接受之陽離子，且R代表CN、-C(O)NR1R2或視情況經取代之5-6員雜環或雜芳基。適宜醯胺包括以下之彼等：其中R1係H或C1-4烷基，且R2係視情況經取代之C1-4烷基、視情況經取代之C1-4烷氧基、視情況經取代之C1-4烷基胺基、視情況經取代之C5-6雜環基或-NH-C(O)-R3，其中R3係視情況經取代之C1-4烷基、視情況經取代之C1-4烷氧基、視情況經取代之C1-4烷基胺基、視情況經取代之C5-6雜環基。該等化合物中之每一雜環或雜芳基含有1-2個選自N、O及S之雜原子作為環成員，且每一視情況經取代之基團可經1-2個選自以下之基團取代：CN、鹵基、-OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、胺基、C1-4烷基胺基、二(C1-4烷基)胺基、-COO(C1-4烷基)及5-6員雜環基。適宜此式化合物闡述於WO2008/039420、WO2009/091856、WO2013/122888、WO2010/126820、WO2009/091856、WO2013/038330、US2013/0225554、WO2013149121、WO2013149136、WO2014141132及WO2014/033560中。
術語「組合」意指呈一種劑量單元形式之固定組合，或用於組合投與之套組或說明書(其中本發明化合物及組合成份可同時獨立地投與或在時間間隔內單獨投與，該等時間間隔尤其容許該等組合成份 展示協作效應(例如協同效應))、或其任一組合。
本發明之實施例提供本發明化合物與第二治療劑之醫藥組合。在一些實施例中，第二治療劑係抗細菌劑。用於本發明醫藥組合中之抗細菌劑之非限制性實例可選自以下之群：(1)巨環內酯或酮內酯，例如紅黴素(erythromycin)、阿奇黴素(azithromycin)、克拉黴素(clarithromycin)及泰利黴素(telithromycin)；(2)β-內醯胺，包括青黴素，例如青黴素G、青黴素V、甲氧西林(methicillin)、苯唑西林(oxacillin)、氯唑西林(cloxacillin)、二氯唑西林、萘夫西林(nafcillin)、胺苄青黴素(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、卡本西林(carbenicillin)、替卡西林(ticarcillin)、美洛西林(mezlocillin)、哌拉西林(piperacillin)、阿洛西林(azlocillin)、替莫西林(temocillin)；頭孢菌素(cephalosporin)，例如頭孢噻吩(cepalothin)、頭孢匹林(cephapirin)、頭孢華定(cephradine)、頭孢利定(cephaloridine)、頭孢唑啉(cefazolin)、頭孢羥唑(cefamandole)、頭孢呋辛(cefuroxime)、頭孢力新(cephalexin)、頭孢丙烯(cefprozil)、頭孢可若(cefaclor)、氯碳頭孢(loracarbef)、頭孢西丁(cefoxitin)、頭孢美唑(cefinetazole)、頭孢噻肟(cefotaxime)、頭孢唑肟(ceftizoxime)、頭孢曲松(ceftriaxone)、頭孢哌酮(cefoperazone)、頭孢他啶(ceftazidime)、頭孢克肟(cefixime)、頭孢泊肟(cefpodoxime)、頭孢布烯(ceftibuten)、頭孢地尼(cefdinir)、頭孢匹羅(cefpirome)、頭孢吡肟(cefepime)；及碳氫黴烯類，例如多尼培南(doripenem)、亞胺培南(imipenem)、美羅培南(meropenem)及PZ-601；(3)糖肽，例如萬古黴素(vancomycin)及替考拉寧(teicoplanin)；(4)喹諾酮，例如萘啶酮酸(nalidixic acid)、歐索林酸(oxolinic acid)、諾氟沙星(norfloxacin)、培氟沙星(pefloxacin)、依諾沙星(enoxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、環丙沙 星(ciprofloxacin)、替馬沙星(temafloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、氟洛沙星(fleroxacin)、格裡沙星(grepafloxacin)、帕氟沙星(sparfloxacin)、曲發沙星(trovafloxacin)、克林沙星(clinafloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、西他沙星(sitafloxacin)、加雷沙星(ganefloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)及帕珠沙星(pazufloxacin)；(5)抗細菌性磺醯胺及抗細菌性對胺基苯磺醯胺，包括對-胺基苯甲酸、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺異噁唑、磺胺甲噁唑及酞醯磺胺噻唑；(6)胺基苷類，例如鏈黴素(streptomycin)、新黴素(neomycin)、康黴素(kanamycin)、巴龍黴素(paromycin)、慶大黴素(gentamicin)、妥布黴素(tobramycin)、阿米卡星(amikacin)、奈替米星(netilmicin)、觀黴素(spectinomycin)、西索米星(sisomicin)、地貝卡星(dibekalin)及異帕米星(isepamicin)；(7)四環素，例如四環素、氯四環素、去甲基氯四環素、米諾四環素、氧四環素、美他環素(methacycline)、去氧羥四環素、替吉環素(tigecycline)；(8)利福黴素類(Rifamycins)，例如利福平(亦稱為立汎黴素(rifampin))、利福噴汀(rifapentine)、利福布汀(rifabutin)、苯并噁嗪利福黴素及利福昔明(rifaximin)；(9)林可醯胺類(Lincosamides)，例如林可黴素(lincomycin)及克林黴素(clindamycin)；(10)鏈陽性菌素類(Streptogramins)，例如奎奴普丁(quinupristin)及達夫普丁(daflopristin)；(11)噁唑啶酮類，例如利奈唑胺(linezolid)或特地唑胺(tedizolid)； (12)多黏菌素(Polymyxin)、黏菌素及多黏菌素E；(13)甲氧苄啶(Trimethoprim)及枯草菌素(bacitracin)；(14)驅藥幫浦抑制劑；(15)β-內醯胺酶抑制劑，包括阿維巴坦及其類似物及上文所述之彼等。
第二抗細菌劑可與本發明化合物組合投與，其中第二抗細菌劑係在本發明化合物之前、同時或之後投與。當期望同時投與本發明化合物與第二藥劑且投與途徑相同時，本發明化合物可與第二藥劑一起調配成同一劑型。含有本發明化合物及第二藥劑之劑型之實例係靜脈內投與。替代性實例係肌內投與包含本發明化合物及第二藥劑之溶液。
本文所述之化合物及組合物可與一或多種用作免疫調節劑之治療劑(例如共刺激分子之活化劑或免疫抑制分子之抑制劑或疫苗)組合使用或投與。程式化死亡受體1(PD-1)蛋白係細胞調節劑之擴大CD28/CTLA4家族之抑制成員(Okazaki等人(2002)Curr Opin Immunol 14：391779-82；Bennett等人(2003)J.Immunol.170：711-8)。PD-1係在活化B細胞、T細胞及單核球上表現。PD-1係負調控TCR信號之免疫抑制蛋白(Ishida,Y.等人(1992)EMBO J.11：3887-3895；Blank,C.等人(Epub 2006年12月29日)Immunol.Immunother.56(5)：739-745)，且在慢性感染中上調。PD-1與PD-L1之間之相互作用可用作免疫檢查點，其可引起例如浸潤淋巴球減少、T細胞受體介導之增殖減少及/或癌性或經感染細胞之免疫逃避(Dong等人(2003)J.Mol.Med.81：281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10：5094-100)。免疫阻抑可藉由抑制PD-1與PD-L1或PD-L2之局部相互作用來逆轉；該效應在阻斷PD-1與PD-L2之相互作用時亦係加和的(Iwai等人(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci. USA 99：12293-7；Brown等人(2003)J.Immunol.170：1257-66)。免疫調節可藉由結合至免疫抑制蛋白(例如，PD-1)或調節抑制蛋白之結合蛋白(例如，PD-L1、PD-L2)來達成。
在一個實施例中，本發明之組合療法包括為免疫檢查點分子之抑制分子之抑制劑或拮抗劑的免疫調節劑。在另一實施例中，免疫調節劑結合至通常抑制免疫抑制檢查點分子之蛋白質。當與抗細菌性化合物組合使用時，該等免疫調節劑可增強抗微生物反應，且因此相對於單獨使用抗細菌性化合物之治療增強效能。
術語「免疫檢查點」係指CD4及CD8 T細胞之細胞表面上之分子群。該等分子可有效地用作下調或抑制適應性免疫反應之「制動器」。免疫檢查點分子包括(但不限於)直接抑制免疫細胞之程式化死亡受體1(PD-1)、細胞毒性T淋巴球抗原4(CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40及LAG3。可作為免疫檢查點抑制劑用於本發明方法中之免疫治療劑包括(但不限於)以下各項之抑制劑：PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4及/或TGFR β。抑制分子之抑制可藉由在DNA、RNA或蛋白質層級上抑制來實施。在一些實施例中，可使用抑制核酸(例如，dsRNA、siRNA或shRNA)來抑制抑制分子之表現。在其他實施例中，抑制信號之抑制劑係多肽，例如結合至抑制分子之可溶性配體或抗體或其抗原結合片段。
「與......組合」並不意欲暗示療法或治療劑必須同時投與及/或經調配以一起遞送，但該等遞送方法在本文所述之範疇內。免疫調節劑可與一或多種本發明化合物及視情況一或多種其他療法或治療劑同步、在其之前或之後投與。呈組合形式之治療劑可以任一順序投與。一般而言，每一藥劑將以對該藥劑確定之劑量及/或時間表投與應進一步瞭解，用於此組合中之治療劑可以單一組合物一起投與或以不 同組合物單獨投與。一般而言，預期用於組合中之每一治療劑係以不超過個別利用其時之量的量來使用。在一些實施例中，用於組合中之量將低於個別利用之彼等。
在某些實施例中，本文所述之抗細菌性化合物係與一或多種為PD-1、PD-L1及/或PD-L2之抑制劑之免疫調節劑組合投與。每一該抑制劑可係抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。該等免疫調節劑之實例為業內已知。
在一些實施例中，免疫調節劑係選自MDX-1106、Merck 3475或CT-011之抗PD-1抗體。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫黏附素(例如，包含融合至恆定區(例如，免疫球蛋白序列之Fc區)之PD-L1或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分之免疫黏附素)。
在一些實施例中，免疫調節劑係D-1抑制劑，例如AMP-224。
在一些實施例中，免疫調節劑係PD-L1抑制劑，例如抗PD-L1抗體。
在一些實施例中，免疫調節劑係選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105之抗PD-L1結合拮抗劑。MDX-1105(亦稱為BMS-936559)係WO2007/005874中所述之抗PD-L1抗體。抗體YW243.55.S70係WO 2010/077634中所述之抗PD-L1。
在一些實施例中，免疫調節劑係尼沃魯單抗(nivolumab，CAS登記號：946414-94-4)。尼沃魯單抗之替代性名稱包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。尼沃魯單抗係特異性阻斷PD-1之完整人類IgG4單株抗體。尼沃魯單抗(純系5C4)及特異性結合至PD-1之其他人類單株抗體揭示於US 8,008,449、EP2161336及WO2006/121168中。
在一些實施例中，免疫調節劑係抗PD-1抗體派姆單抗(Pembrolizumab)。派姆單抗(亦稱為拉波裡單抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®；Merck)係結合至PD-1之人類化IgG4單株抗體。派姆單抗及其他人類化抗PD-1抗體揭示於Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2)：134-44；US 8,354,509、WO2009/114335及WO2013/079174中。
在一些實施例中，免疫調節劑係結合至PD1之人類化IgG1k單株抗體易普利姆瑪(Pidilizumab，CT-011；Cure Tech)。易普利姆瑪及其他人類化抗PD-1單株抗體揭示於WO2009/101611中。
可作為免疫調節劑用於本文所揭示方法中之其他抗PD1抗體包括AMP 514(Amplimmune)以及US 8,609,089、US 2010028330及/或US 20120114649中所揭示之抗PD1抗體。在一些實施例中，抗PD-L1抗體係MSB0010718C。MSB0010718C(亦稱為A09-246-2；Merck Serono)係結合至PD-L1之單株抗體。
在一些實施例中，免疫調節劑係結合至PD-L1之人類Fc最佳化IgG1單株抗體MDPL3280A(Genentech/Roche)。針對PD-L1之MDPL3280A及其他人類單株抗體揭示於美國專利第7,943,743號及美國公開案第20120039906號中。可作為免疫調節劑用於本發明方法之其他抗PD-L1結合劑包括YW243.55.S70(參見WO2010/077634)、MDX-1105(亦稱為BMS-936559)及WO2007/005874中所揭示之抗PD-L1結合劑。
在一些實施例中，免疫調節劑係AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如WO2010/027827及WO2011/066342中所揭示)，其係阻斷PD1與B7-H1之間之相互作用的PD-L2 Fc融合物可溶性受體。
在一些實施例中，免疫調節劑係抗LAG-3抗體，例如BMS-986016。BMS-986016(亦稱為BMS986016)係結合至LAG-3之單株抗 體。BMS-986016及其他人類化抗LAG-3抗體揭示於US 2011/0150892、WO2010/019570及WO2014/008218中。
在某些實施例中，本文所揭示之組合療法包括共刺激分子或抑制分子(例如共抑制配體或受體)之調節劑。
在一個實施例中，共刺激分子之共刺激調節劑(例如激動劑)選自以下各項之激動劑(例如，激動性抗體或其抗原結合片段或可溶性融合物)：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配體。
在另一實施例中，本文所揭示之組合療法包括為共刺激分子之免疫調節劑，例如與包括CD28、CD27、ICOS及/或GITR之共刺激結構域之正信號相關之激動劑。
實例性GITR激動劑包括例如GITR融合蛋白及抗GITR抗體(例如，二價抗GITR抗體)，例如美國專利第6,111,090號、歐洲專利第090505B1號、美國專利第8,586,023號、PCT公開案第WO 2010/003118號及第2011/090754號中所述之GITR融合蛋白，或例如美國專利第7,025,962號、歐洲專利第1947183B1號、美國專利第7,812,135號、美國專利第8,388,967號、美國專利第8,591,886號、歐洲專利第EP 1866339號、PCT公開案第WO 2011/028683號、PCT公開案第WO 2013/039954號、PCT公開案第WO2005/007190號、PCT公開案第WO 2007/133822號、PCT公開案第WO2005/055808號、PCT公開案第WO 99/40196號、PCT公開案第WO 2001/03720號、PCT公開案第WO99/20758號、PCT公開案第WO2006/083289號、PCT公開案第WO 2005/115451號、美國專利第7,618,632號及PCT公開案第WO 2011/051726號中所述之抗GITR抗體。
在一個實施例中，所用免疫調節劑係可溶性配體(例如，CTLA-4-Ig)或結合至PD-L1、PD-L2或CTLA4之抗體或抗體片段。舉例而言，抗PD-1抗體分子可與例如抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗(ipilimumab))組合投與。實例性抗CTLA4抗體包括曲美力木單抗(Tremelimumab)(IgG2單株抗體，可自Pfizer購得，先前稱為替西木單抗(ticilimumab)、CP-675,206)；及伊匹單抗(CTLA-4抗體，亦稱為MDX-010，CAS編號477202-00-9)。
在一個實施例中，抗PD-1抗體分子係在使用如本文所述之本發明化合物治療後投與。
在另一實施例中，抗PD-1或PD-L1抗體分子係與抗LAG-3抗體或其抗原結合片段組合投與。在另一實施例中，抗PD-1或PD-L1抗體分子係與抗TIM-3抗體或其抗原結合片段組合投與。在其他實施例中，抗PD-1或PD-L1抗體分子係與抗LAG-3抗體及抗TIM-3抗體或其抗原結合片段組合投與。本文所列舉抗體之組合可單獨(例如作為單獨抗體)或結合(例如作為雙特異性或三特異性抗體分子)投與。在一個實施例中，投與包括抗PD-1或PD-L1抗體分子及抗TIM-3或抗LAG-3抗體或其抗原結合片段之雙特異性抗體。在某些實施例中，使用本文所列舉抗體之組合來治療癌症，例如如本文所述之癌症(例如，實體腫瘤)。可在業內已知之動物模型中測試上述組合之效能。舉例而言，測試抗PD-1及抗LAG-3之協同效應之動物模型闡述於例如Woo等人(2012)Cancer Res.72(4)：917-27)中。
可用於組合療法中之實例性免疫調節劑包括(但不限於)例如阿夫土株單抗(afutuzumab，可自Roche®購得)；非格司亭(pegfilgrastim，Neulasta®)；雷利竇邁(lenalidomide，CC-5013、Revlimid®)；沙利竇邁(thalidomide，Thalomid®)、艾迪美(actimid，CC4047)；及細胞介素，例如IL-21或IRX-2(包括介白素1、介白素2及干擾素γ之人類細胞 介素之混合物，CAS 951209-71-5，可自IRX Therapeutics購得)。
可與本發明之抗細菌性化合物組合使用之該等免疫調節劑的實例性劑量包括約1mg/kg至10mg/kg、例如3mg/kg之抗PD-1抗體分子之劑量及約3mg/kg之抗CTLA-4抗體、例如伊匹單抗的劑量。
使用本發明之抗細菌性化合物與免疫調節劑之組合之方法實施例的實例包括該等：
i.一種治療個體之細菌感染之方法，其包含向個體投與如本文所述之式(I)化合物及免疫調節劑。
ii.根據實施例i之方法，其中免疫調節劑係共刺激分子之活化劑或免疫檢查點分子之抑制劑。
iii.根據實施例i及ii中任一者之方法，其中共刺激分子之活化劑係以下中之一或多者之激動劑：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3及CD83配體。
iv.根據上述實施例i-iii中任一者之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑選自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4及TGFR β。
v.根據實施例i-iii中任一者之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑選自PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4之抑制劑或其任一組合。
vi.根據實施例i-v中任一者之方法，其中免疫檢查點分子之抑制劑係結合至免疫檢查點分子之可溶性配體或抗體或其抗原結合片段。
vii.根據實施例i-vi中任一者之方法，其中抗體或其抗原結合片段來自IgG1或IgG4(例如，人類IgG1或IgG4)。
viii.根據實施例i-vii中任一者之方法，其中改變(例如突變)抗體或其抗原結合片段以增加或降低以下中之一或多者：Fc受體結合、抗體糖基化、半胱胺酸殘基數、效應細胞功能或補體功能。
ix.根據實施例i-viii中任一者之方法，其中抗體分子係具有針對PD-1或PD-L1之第一結合特異性及針對TIM-3、LAG-3或PD-L2之第二結合特異性的雙特異性或多特異性抗體分子。
x.根據實施例i-ix中任一者之方法，其中免疫調節劑係選自尼沃魯單抗、派姆單抗或易普利姆瑪之抗PD-1抗體。
xi.根據實施例i-x中任一者之方法，其中免疫調節劑係選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105之抗PD-L1抗體。
xii.根據實施例i-x中任一者之方法，其中免疫調節劑係抗LAG-3抗體分子。
xiii.根據實施例xii之方法，其中抗LAG-3抗體分子係BMS-986016。
xiv.根據實施例i-x中任一者之方法，其中免疫調節劑係以下列劑量藉由注射(例如，皮下或靜脈內)投與之抗PD-1抗體分子：約1mg/kg至30mg/kg，例如約5mg/kg至25mg/kg、約10mg/kg至20mg/kg、約1mg/kg至5mg/kg或約3mg/kg，例如每週一次至每2週、每3週或每4週一次。
xv.根據實施例xiv之方法，其中抗PD-1抗體分子係以約10mg/kg至20mg/kg之劑量每隔一週投與。
xvi.根據實施例xv之方法，其中抗PD-1抗體分子(例如尼沃魯單抗)係以約1mg/kg至3mg/kg、例如約1mg/kg、2mg/kg或3mg/kg之劑量每兩週靜脈內投與。
xvii.根據實施例xv之方法，其中抗PD-1抗體分子(例如尼沃魯 單抗)係以約2mg/kg之劑量以3週間隔靜脈內投與。
語言化合物之「有效量」係為治療或預防細菌感染及/或本文所述之疾病或病況所需或足以治療或預防該等疾病的量。在實例中，化合物之有效量係足以治療個體之細菌感染之量。在另一實例中，化合物之有效量係足以治療個體之細菌感染、例如(但不限於)綠膿桿菌及諸如此類之量。有效量可端視諸如個體之大小及體重、疾病之類型或本發明之具體化合物等因素而變化。舉例而言，本發明化合物之選擇可影響構成「有效量」者。熟習此項技術者將能夠研究本文所含之要素且在無過多實驗的情況下確定本發明化合物之有效量。
投與方案可影響構成有效量者。本發明化合物可在細菌感染開始之前或之後投與個體。通常，將該化合物投與經診斷患有細菌感染及需要該治療之個體。此外，可每天或依序投與若干分開劑量以及交錯劑量，或可連續輸注該劑量，或可濃注注射。此外，可如藉由治療或預防狀況之緊急程度所指示按比例增加或減小本發明化合物之劑量。通常，本發明化合物將在至少5天、更通常至少7天或至少10天或至少14天之時程內投與。
本發明化合物可用於治療如本文所述之狀態、病症或疾病或用於製造用來治療該等疾病之醫藥組合物。本發明提供使用本發明化合物治療該等疾病或使用具有本發明化合物之醫藥製劑治療該等疾病之方法。
語言「醫藥組合物」包括適於投與哺乳動物(例如人類)之製劑。當本發明化合物係作為醫藥投與哺乳動物(例如人類)時，其可以原狀或作為含有例如0.1%至99.5%(更佳0.5%至90%)活性成份與醫藥上可接受之載劑之組合的醫藥組合物給予。
片語「醫藥上可接受之載劑」為業內所公認且包括適於向哺乳動物投與本發明化合物之醫藥上可接受之材料、組合物或媒劑。載劑 包括參與將個別藥劑自身體之一個器官或部分攜載或輸送至身體之另一器官或部分的液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。在可與調配物之其他成份相容且不損害患者之意義上，每一載劑必須係「可接受的」。可用作醫藥上可接受之載劑之材料之一些實例包括：糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，例如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可油及栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，例如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱源水；等滲鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；及用於醫藥組合物中之其他無毒相容物質。在一些實施例中，醫藥上可接受之載劑在與本發明化合物組合之前係無菌的。
在一些實施例中，本發明之醫藥組合物包含經編號實施例中任一者之化合物及至少一種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。在某些實施例中，本發明之醫藥組合物包含經編號實施例中任一者之化合物及至少兩種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
潤濕劑、乳化劑及潤滑劑(例如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂)以及著色劑、釋放劑、包覆劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於該等組合物中。
醫藥上可接受之抗氧化劑之實例包括：水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉及諸如此類；油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及諸如此類；及金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸 (EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸及諸如此類。
本發明調配物包括彼等適於經口、經鼻、吸入、局部、經皮、經頰、舌下、經直腸、經陰道及/或非經腸投與者。通常，本發明化合物將以通常為等滲之溶液(例如鹽水或葡萄糖溶液)形式靜脈內投與。調配物可以便捷方式存於單位劑型中且可藉由製藥領域中熟知之任何方法來製備。可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成份之量通常應為產生治療效應之化合物的量。一般而言，以100%計，此量將介於約1%至約99%活性成份、較佳約5%至約70%、最佳約10%至約30%範圍內。
製備該等調配物或組合物之方法包括使本發明化合物與載劑及視情況一或多種輔助成份混合之步驟。一般而言，該等調配物係藉由以下方式來製備：使本發明化合物與液體載劑或微細固體載劑或二者均勻且充分地混合，且隨後(若需要)使產物成型。
適於經口投與之本發明調配物可呈下列形式：膠囊、扁囊劑、丸劑、錠劑、菱形錠劑(使用矯味基質，通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠)、粉末、顆粒；或作為水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；或作為水包油型或油包水型液體乳液；或作為酏劑或糖漿；或作為軟錠劑(使用惰性基質，例如明膠及甘油、或蔗糖及阿拉伯膠)及/或作為漱口劑及諸如此類，每一者皆含有預定量之本發明化合物作為活性成份。本發明化合物亦可以濃注、糖劑或糊劑形式投與。
在用於經口投與之本發明固體劑型(膠囊、錠劑、丸劑、糖衣藥丸、粉末、顆粒及諸如此類)中，可將活性成份與一或多種醫藥上可接受之載劑(例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)及/或任一以下成份混合：填充劑或增量劑，例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及/或矽酸；黏合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯膠；保濕劑，例如甘油；崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、 馬鈴薯或樹薯澱粉、海藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉；溶液阻滯劑，例如石蠟；吸收加速劑，例如四級銨化合物；潤濕劑，例如鯨蠟醇及甘油單硬脂酸酯；吸收劑，例如高嶺土及膨潤土；潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物；及著色劑。在膠囊、錠劑及丸劑之情形下，醫藥組合物亦可包含緩衝劑。在使用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及諸如此類等賦形劑之軟質及硬質填充明膠膠囊中，亦可使用類似類型之固體組合物作為填充劑。
可藉由壓製或模製來製備錠劑，其視情況含有一或多種輔助成份。壓製錠劑可使用黏合劑(例如，明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，羥乙酸澱粉鈉或交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑來製備。可藉由在適宜機器中模製經惰性液體稀釋劑潤濕之粉末狀化合物之混合物來製備模製錠劑。
本發明醫藥組合物之錠劑及其他固體劑型(例如糖衣藥丸、膠囊、丸劑及顆粒)可視情況經刻痕或使用諸如腸溶包膜及醫藥調配技術中熟知之其他包衣等包衣及外殼來製備。亦可使用(例如)提供期望釋放性質之不同比例之羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質、脂質體及/或微球體對其進行調配以便在其中提供活性成份的緩慢或控制釋放。該等固體劑型可藉由(例如)經由細菌截留過濾器過濾或藉由納入滅菌劑來進行滅菌，該等滅菌劑呈可在使用前即刻溶解於無菌水或一些其他無菌可注射介質中的無菌固體組合物形式。該等組合物亦可視情況含有遮光劑且亦可為視情況以延遲方式僅(或優先)在胃腸道之某一部分中釋放活性成份的組合物。可使用之包埋用組合物的實例包括聚合物質及蠟。若適宜，則活性成份亦可呈含有一或多種上述賦形劑之微囊封形式。
用於經口投與本發明化合物之液體劑型包括醫藥上可接受之乳 液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性成份外，液體劑型可含有業內常用之惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑；增溶劑及乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(具體而言，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及去水山梨醇之肪酸酸酯及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服組合物亦可包括佐劑，例如潤濕劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、矯味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。
除活性化合物外，懸浮液可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚環氧乙烷山梨醇及去水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂及黃蓍膠及其混合物。
用於直腸或陰道投與之本發明醫藥組合物之調配物可以栓劑形式存在，其可藉由混合一或多種本發明化合物與一或多種適宜非刺激性賦形劑或載劑來製備，該等適宜非刺激性賦形劑或載劑包含例如可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸酯，且其在室溫下為固體但在體溫下為液體，且因此可在直腸或陰道腔中融化並釋放活性化合物。
適於陰道投與之本發明調配物亦包括含有諸如業內已知適宜之載劑之陰道栓劑、陰道塞、乳霜、凝膠、糊劑、發泡體或噴霧劑調配物。
用於局部或經皮投與本發明化合物之劑型包括粉末、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳霜、洗劑、凝膠、溶液、貼片及吸入劑。活性化合物可在無菌條件下與醫藥上可接受之載劑並與可能需要之任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。
除本發明之活性化合物外，該等軟膏、糊劑、乳霜及凝膠可含有賦形劑，例如動物及植物脂肪、油、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石及氧化鋅或其 混合物。
除本發明化合物之外，粉末及噴霧劑可含有賦形劑，例如乳糖、滑石、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末或該等物質之混合物。噴霧劑可另外含有常用推進劑，例如氯氟烴類及未經取代之揮發性烴類，例如丁烷及丙烷。
經皮貼片具有額外優點，即提供本發明化合物至身體之受控遞送。該等劑型可藉由將化合物溶解或分散於適當介質中來製備。亦可使用吸收促進劑來增加該化合物經過皮膚之通量。該通量之速率可藉由提供速率控制膜或將活性化合物分散於聚合物基質或凝膠中來加以控制。
眼用調配物、眼用軟膏、粉末、溶液及諸如此類亦涵蓋於本發明範疇內。
適用於非經腸投與之本發明醫藥組合物包含一或多種本發明化合物以及一或多種醫藥上可接受之無菌等滲之含水或不含水溶液、分散液、懸浮液或乳液、或無菌粉末，該等無菌粉末可在即將使用前重構成無菌可注射溶液或分散液，該等醫藥組合物可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、可使調配物與預期接受者之血液等滲之溶質或懸浮劑或增稠劑。
可用於本發明醫藥組合物中之適宜水性及非水性載劑的實例包括水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、聚乙二醇及諸如此類)及其適宜混合物、植物油(例如橄欖油)及可注射有機酯(例如油酸乙酯)。例如，可藉由使用諸如卵磷脂等包衣材料、維持所需粒徑(在分散劑之情形下)及使用表面活性劑維持適當流動性。
該等組合物亦可含有佐劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑及分散劑。微生物作用之預防可藉由納入各種抗細菌及抗真菌劑來確保，例如，對羥基苯甲酸、氯丁醇、苯酚山梨酸及諸如此類。亦可期望該 等組合物中包括等滲劑，例如糖、氯化鈉及諸如此類。此外，可藉由納入延遲吸收之藥劑(例如，單硬脂酸鋁及明膠)達成可注射醫藥形式之長效吸收。
在一些情形下，為延長藥物效應，期望減緩來自皮下或肌內注射之藥物的吸收。此可藉由使用具有較差水溶性之結晶或非晶型材料的液體懸浮液來實現。因此，藥物吸收速率取決於其溶解速率，而溶解速率繼而可取決於晶體大小及結晶形式。另一選擇為，藉由將非經腸投與之藥物形式溶解或懸浮於油媒劑中來達成該藥物之延遲吸收。
可注射儲積形式係藉由在生物可降解聚合物(例如聚交酯-聚乙醇酸交酯)中形成標的化合物之微囊封基質來製備。端視藥物對聚合物之比率及所用具體聚合物之性質，可控制藥物釋放之速率。其他生物可降解聚合物之實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。儲積可注射調配物亦可藉由將藥物包裹入與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備。
可經口、非經腸、經局部或經直腸給予本發明製劑。當然，其係藉由適於每一投與途徑之形式來給予。舉例而言，其係以錠劑或膠囊形式藉由注射、吸入來投與；以眼用洗劑、軟膏、栓劑等形式藉由注射、輸注或吸入來投與；以洗劑或軟膏形式局部投與；及以栓劑形式經直腸投與。靜脈內投與較佳。
如本文所使用之片語「非經腸投與」及「以非經腸方式投與」意指除經腸及局部投與以外之投與模式，通常係藉由注射且包括(不限於)靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、莢膜內、眼窩內、心臟內、皮內、腹膜腔內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內及胸骨內注射及輸注。
如本文所使用之片語「全身性投與」、「以全身方式投與」、「外周性投與」及「以外周方式投與」意指以除直接進入中樞神經系統以 外之方式投與化合物、藥物或其他材料，使得其進入患者全身且由此進行代謝及其他類似過程，例如皮下投與。
該等化合物可藉由任何適宜投與途徑投與人類及其他動物用於療法，包括以例如噴霧劑形式經口、經鼻；以粉末、軟膏或滴劑形式經直腸、陰道內、非經腸、腦池內及經局部，包括經頰及舌下。
無論所選投與途徑如何，可以適宜水合形式使用之本發明化合物及/或本發明之醫藥組合物係藉由彼等熟習此項技術者已知之習用方法調配成醫藥上可接受之劑型。
本發明醫藥組合物中活性成份之實際劑量值可有所變化，以獲得可有效地達成具體患者、組合物及投與模式之期望治療反應而對患者無毒之活性成份量。
所選劑量值將端視眾多種因素而定，該等因素包括所用本發明具體化合物或其酯、鹽或醯胺之活性、投與路徑、投與時間、所用具體化合物之排泄速率、治療之持續時間、與所用具體化合物組合使用之其他藥物、化合物及/或材料、所治療患者之年齡、性別、體重、病況、一般健康狀況及先前病史及已為醫學技術中所熟知之類似因素。
一般而言，本發明化合物之適宜日劑量係可有效地產生治療效應之劑量之化合物量。此一有效劑量通常將端視上述因素而定。一般而言，在用於指示抗細菌效應時，患者之本發明化合物之靜脈內及皮下劑量將介於約5mg至約150mg/公斤體重/天、更佳約15mg至約115mg/kg/天、且仍更佳約20mg至約85mg/kg/天範圍內。有效量係治療細菌感染之量。
若需要，活性化合物之有效日劑量可以2、3、4、5、6或更多個子劑量來投與，該等子劑量係以適宜間隔在全天內、視情況以單位劑型或以連續輸注分開投與。
儘管本發明化合物可單獨投與，但較佳以醫藥組合物形式投與該化合物。
如實施例中所定義之化合物可藉由以下一般合成途徑來合成，其特定實例更詳細闡述於實例中。
一般合成反應圖
一種用於合成具有式(I)之化合物之方法闡述於反應圖A中。遵循「光延(Mitsunobu)」方案，醇A-1可轉化成A-2，前提係雜環具有足夠酸性來參與光延反應。A-2之磺醯基化提供A-3，可使用TFA或甲酸對A-3實施去保護，以產生A-4。
Figure 104109243-A0202-12-0055-433
可如反應圖B中所概述獲取中間體A-3之1-連接之1,2,3三唑類似物。A-1中之醇轉化成離去基團，且用疊氮化物替代離去基團以獲得B-2，可對B-2實施磺醯基化且根據Sharpless之方法使其與炔烴在「點擊化學」條件下反應，以獲得B-4。另一選擇為，可使用B-2實施「點擊化學」，然後進行磺醯基化。
反應圖B
Figure 104109243-A0202-12-0056-434
雜環中間體A-2亦可如反應圖C中所概述、藉由烷基化胺(例如C-1)來獲得。適宜烷基化試劑包括烷基鹵化物或環氧化物。C-1之烷基化亦可藉由用經適當官能化及保護之醛還原性胺化來實現。C-2之環化可使用羰基化劑(如CDI)來實現。該等化合物中基團Y之實例包括氧或NR5，例如NH。
Figure 104109243-A0202-12-0056-435
另一選擇為，藉由用官能化胺烷基化自B-1獲得官能化胺C-2。內醯胺雜環可以類似方式藉由用溴化羧酸酯烷基化C-1、然後實施鹼催化之環化來獲得。
可藉由取代經適當保護之氮雜環丁酮中間體中之離去基團引入雜環來產生中間體A-2。適宜保護基團包括用於胺之Cbz及用於氮雜環丁酮之DMB。對Cbz基團去保護、然後使用經適當官能化及保護之酸D-6醯化，獲得A-2，如反應圖D中所概述。
Figure 104109243-A0202-12-0057-436
亦在光延條件下使用經保護中間體(例如D-1)引入雜環，如反應圖A中所概述。D-1亦轉化成相應的疊氮化物，其遵循與反應圖B中所概述類似之序列用於「點擊化學」以引入1-連接之1,2,3三唑。亦可使用D-1來產生可轉化成雜環之官能化胺衍生物，如反應圖C中所述。
類型A-3之中間體亦可藉由反應圖E中所概述之序列來組裝，藉此在偶合步驟後引入肟部分。
反應圖E
Figure 104109243-A0202-12-0058-437
式(I)化合物係自通常可購得之化合物使用熟習此項技術者已知之該等一般反應圖及程序以及本文所提供之方法及實例來製備。
實例
藉由下列實例進一步闡釋本發明，該等實例不應解釋為具有進一步限制性。在整個實例中使用之分析係可接受的。該等分析中效能之展示可預測個體中之效能。
一般條件
質譜係在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系統上使用電噴霧、化學及電子碰撞電離方法自以下構形之一系列儀器來獲取：Waters ACQUITY UPLC系統且配備有ZQ 2000或SQD MS系統，其(M+1)係指化學物質之質子化分子離子，(M+)係指未經質子化之四級銨陽離子，(M+Na)係指納入鈉之離子，且(M-1)係指化學物質之去質子化分子離子。
在Bruker AVANCE 500MHz或Varian 400MHz NMR光譜儀上、使用ICON-NMR、在TopSpin程式控制下運行NMR光譜。除非另外指明，否則光譜係在298K下量測，且相對於溶劑共振來參考。
儀器
MS方法：使用具有Agilent 6110質譜儀之Agilent 1100 HPLC系統
方法2m_酸性： 管柱 Kinetex C18 50×2.1mm,2.6μm
管柱溫度 50℃
溶析劑 A：H2O，B：乙腈，二者皆含有0.1% TFA
流速 1.2mL/min
梯度 2%至88% B，1.30min；0.15min95% B
方法2m_酸性_極性：管柱 Kinetex C18 50×2.1mm,2.6μm
管柱溫度 50℃
溶析劑 A：H2O，B：乙腈，二者皆含有0.1% TFA
流速 1.2mL/min
梯度 1%至30% B，1.30min；0.15min 98% B
縮寫：ACN 乙腈
app 表觀
ATP 5'-三磷酸腺苷
BINAP 外消旋2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘
Boc 第三丁基羧基
br 寬峰
brs 寬單峰
BSA 牛血清白蛋白
CDI 1,1'-羰基二咪唑
d 雙重峰
dd 雙重峰之雙重峰
DCM 二氯甲烷
DCE 1,2-二氯乙烷
DIAD 偶氮二甲酸二異丙基酯
DIPEA 二異丙基乙胺
DME 1,4-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲基亞碸
EDTA 乙二胺四乙酸
ESI 電噴霧電離
EtOAc 乙酸乙酯
g 克
h 小時
HATU 1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽
HBTU 1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-苯并三唑鎓六氟磷酸鹽(1-)3-氧化物
HCl 鹽酸
HOBt 1-羥基苯并三唑
HPLC 高效液相層析
LCMS 液相層析及質譜
m 多重峰
m-CPBA 3-氯過苯甲酸
MeOH 甲醇
MS 質譜
mg 毫克
min 分鐘
mL 毫升
mmol 毫莫耳
m/z 質荷比
NMR 核磁共振
p 噴替酸
PdCl2(dppf)-CH2Cl2 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲烷錯合物
PPh3 三苯基膦
ppm 百萬份數
PyBOP 苯并三唑-1-基氧基三吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽
q 四重峰
rac 外消旋
rt 室溫
Rt 滯留時間
s 單峰
t 三重峰
TBME 甲基第三丁基醚
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
Tris．HCl 胺基叁(羥基甲基)甲烷鹽酸鹽
中間體之製備 中間體A：甲烷磺酸((2S,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基酯.
Figure 104109243-A0202-12-0061-438
在0℃下，向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(5.37g,13.41mmol)及TEA(3.72 mL,26.8mmol)於DCM中之溶液中添加MsCl(1.15mL,14.75mmol)。在0℃下攪拌1h後，用水/DCM將其稀釋且分離各層。用DCM(2×)萃取水層，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。將粗殘餘物吸收於甲苯中且濃縮(2×)，提供灰白色固體狀標題化合物。其係以原樣用於後續反應中。LCMS：Rt=0.86min,m/z=479.2(M+1)方法2m_酸性。
中間體B：((2H-四唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯.
Figure 104109243-A0202-12-0062-439
向裝填有(2H-四唑-5-基)甲胺(1.67g,16.85mmol)、Boc酸酐(3.86g,17.70mmol)及水(16.85mL)之燒瓶中添加NaOH(4N,4.42mL,17.70mmol)。在室溫下將所得懸浮液攪拌12h，然後冷卻至0℃，隨後添加HCl(1N)直至pH=4-5。藉由過濾收集沈澱且將母液冷卻至0℃並用HCl(1N)再酸化直至pH=4-5。再收集沈澱且與第一批合併，用庚烷洗滌批次以提供白色固體狀標題化合物(2.74g,82%)。LCMS：Rt=0.38min,m/z=200.2(M+1)方法2m_酸性。
中間體C：((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯.
Figure 104109243-A0202-12-0062-440
向2H-[1,2,4]三唑-3-基-甲胺鹽酸鹽(583mg,4.33mmol)及Boc-酸酐(993mg,4.55mmol)於水(5.78mL)中之溶液中添加NaOH(4N,1.137mL,4.55mmol)。攪拌48h後，藉由過濾收集白色沈澱。將固體懸浮於庚烷中，超音波處理，然後過濾，用庚烷洗滌濾餅。LCMS：Rt=0.41min,m/z=199.2(M+1)方法2m_酸性。
中間體D：3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)噁唑啶-2-酮.
Figure 104109243-A0202-12-0063-441
步驟1：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(((2-羥基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向甲烷磺酸((2S,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基酯(6.43g,13.4mmol)於乙腈(44.8ml)中之溶液中添加乙醇胺(8.13ml,134mmol)，然後添加DIEA(7.0ml,40mmol)。將溶液加熱至80℃並保持20h，隨後將其冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(4.47g,75%)。LCMS：Rt=0.60min,m/z=444.2(M+1)。
步驟2：((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(((2-羥基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(4.47g,10.08mmol)於氯仿(50ml)中之溶液中添加CDI(4.90g,30.2mmol)。在室溫下攪拌30min後，將其在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-5%)純化粗殘餘物，提供白色泡沫狀標題化合物(3.84g,81%)。LCMS：Rt=0.76min,m/z=470.1(M+1)。
步驟3：((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係以與實例4、步驟2類似之方式、使 用ACN：水(2：1,136mL)中之((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(3.84g,8.18mmol)、K2S2O8(3.10g,11.5mmol)及K2HPO4(1.852g,10.6mmol)、同時在90℃下加熱40min來製備。再添加K2S2O8(663g,2.45mmol)及K2HPO4(370mg,2.13mmol)且將其再加熱3h。再添加K2S2O8(332mg,1.23mmol)及K2HPO4(185mg,1.06mmol)，並將其再加熱2h，隨後將其在真空中濃縮，移除大部分ACN。用鹽水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層。經由矽膠層析(0-100% EtOAc-庚烷，然後10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供米色泡沫狀標題化合物(1.61g,62%)。LCMS：Rt=0.51min,m/z=320.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)噁唑啶-2-酮. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(96mg,0.30mmol)及Pd/C 10% Degussa型101(10%,64mg)於EtOH：MeOH(4：1,1.5mL)經1h來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.11min,m/z=186.0(M+1)方法2m_酸性。
中間體E：(4-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基乙醯基)噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁基酯.
Figure 104109243-A0202-12-0064-442
在0℃下，向2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙酸(2.72g,9.99mmol)及HATU(3.80,10.0mmol)於DCM：DMF(3：1,33.3mL)中之漿液中添加DIPEA(2.91mL,16.7mmol)。添加(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(1.39g,8.33mmol) 於DCM：DMF(1：1,32mL)中之溶液，然後添加DMF(3mL)洗滌液。攪拌48h後，用EtOAc(150mL)/鹽水(140mL)稀釋深色溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水溶液，且用鹽水(70mL)洗滌合併之有機層。用EtOAc再萃取鹽水層洗滌液。經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，提供紅色固體狀標題化合物(2.38g,68%)。LCMS：Rt=0.59min,m/z=422.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.85(s,1H),9.70(d,J=9.3Hz,1H),8.52(d,J=1.6Hz,1H),8.48(s,1H),8.44(s,1H),7.96(s,1H),5.28(ddd,J=9.3,5.2,1.5Hz,1H),4.45(dd,J=14.2,5.3Hz,1H),4.36(dd,J=14.1,7.6Hz,1H),4.18(dt,J=7.6,5.3Hz,1H),1.47(s,9H)。
中間體F：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-(2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
Figure 104109243-A0202-12-0065-443
在0℃下，向(4-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基乙醯基)噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(200mg,0.475mmol)於DMF(4.75mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(367mg,2.40mmol)。攪拌16h，將其在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，0-50%)純化，提供淺黃色固體狀標題化合物(110mg,46%)。LCMS：Rt=0.54min,m/z=501.9(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 11.87(s,1H),9.75(d,J=9.2Hz,1H),8.94(s,1H),8.44(s,1H),8.34(s,1H),5.25(dd,J=9.1,5.4Hz,1H),4.75(dd,J=14.3,4.9Hz,1H),4.61(dd,J=14.4,7.6Hz,1H),4.43(dt, J=7.6,5.2Hz,1H),1.49(s,9H)。
中間體G：((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯
Figure 104109243-A0202-12-0066-444
步驟1：(R,E)-1-(2,4-二甲氧基苯基)-N-((2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)亞甲基)甲胺. 其係根據Hubschwerlen,C.及Schmid,G.Helv.Chim.Acta 1983,66,2206-2209所述之程序、藉由添加MgSO4來製備。在0℃下經20min，向(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲醛(Carbosynth LLC,346g,43%於DCM中，1.143mol)及MgSO4(278g)於DCM(1.5L)中之懸浮液中添加2,4-二甲氧基苄基胺(193g,1.154mol)。在室溫下攪拌2h後，將其過濾，用DCM(2×250mL)洗滌濾餅。母液直接用於步驟2中。
步驟2：2-((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮. 其係根據Hubschwerlen,C.及Schmid,G.Helv.Chim.Acta 1983,66,2206- 2209所述之程序來製備。將TEA(322mL,2.31mol)添加至來自步驟1之粗母液中後，將其冷卻至0℃，然後經30min之時段添加2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)乙醯氯(284.3g,1.272mol)於DCM(1L)中之溶液。將混合物升溫至室溫且再攪拌16h，隨後將其用水(2×1L)、飽和NaHCO3(1L)、鹽水(1L)洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供淺黃色固體狀粗標題化合物(631g，假設定量)。經純化樣品之1H NMR(EtOAc-庚烷，40%-60%)與文獻報導之數據完全匹配。
步驟3：(3S,4S)-3-胺基-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)氮雜環丁-2-酮. 經20min，向粗2-((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮(631g,1.143mol，來自步驟2之假設定量轉化)於EtOH(8.2L)中之溶液中添加肼水合物(235mL,50%-60%，約4mol)。將所得混合物加熱至回流並保持3h，冷卻至室溫，過濾，用EtOH洗滌且在真空中濃縮。將殘餘物於EtOAc(4L)中製成漿液，過濾且用水(2×1L)洗滌。
步驟4：((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向冷卻至0℃之來自步驟3(EtOAc,4L)之粗有機溶液中添加飽和NaHCO3(2.05L)，然後經1h逐滴添加氯甲酸苄基酯(205mL,1.435mol)。在室溫下攪拌2h後，分離各層且用EtOAc(2×50mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。用MeOH(2L)處理粗殘餘物，過濾且用MeOH(2×200mL)洗滌，以提供白色固體狀純標題化合物(155g)。將母液冷卻至-20℃並保持12h且藉由過濾收集所得沈澱，提供額外標題化合物(90g，45%合併產率，經4個步驟)。LCMS：m/z=471.1(M+1)。
步驟5：((2S,3S)-2-((R)-1,2-二羥基乙基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4- 側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(267g,0.567mol)於THF(3L)中之溶液中添加TsOH‧H2O(43.6g,0.229mol)於水(0.75L)中之溶液。將雙層加熱至70℃並保持16h，然後冷卻至室溫，用飽和NaHCO3中和至pH=7且在真空中濃縮。將所得混合物過濾，用水洗滌並乾燥，以提供淡黃色固體狀標題化合物(240g,98%)。LCMS：m/z=431.1(M+1)。
步驟6：((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-甲醯基-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2S,3S)-2-((R)-1,2-二羥基乙基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(240g,0.557mol)於EtOAc(4.5L)中之溶液中添加過碘酸鈉(132g,0.617mol)於水(1.125L)中之溶液，且將雙層加熱至50℃並保持2h，隨後將其冷卻至室溫且分離各層。用EtOAc(500mL)萃取水層，且用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，以提供淺黃色固體狀標題化合物(218g,98%)。LCMS：m/z=399.0(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.32(d,J=3.2Hz,1H),8.19(d,J=8.5Hz,1H),7.39-7.23(m,5H),7.16(d,J=8.3Hz,1H),6.53(d,J=2.4Hz,1H),6.47(dd,J=8.3,2.4Hz,1H),5.00-4.96(m,2H),4.90(dd,J=8.5,5.8Hz,1H),4.38(d,J=14.5Hz,1H),4.29(d,J=14.5Hz,1H),4.05(dd,J=5.9,3.3Hz,1H),3.73(s,3H),3.70(s,3H)。
步驟7：((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下，向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-甲醯基-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(218g,0.546mol)於DCM：MeOH之混合物(4：1,2.25L)中之溶液中逐份添加硼氫化鈉(41.3g,1.09mol)。在0℃下將所得混合物攪拌2h，隨後用冷水(1L)將其驟冷30min且分離各層。用DCM(3×200mL)萃取水層，且用 水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供灰白色固體狀標題化合物(208g,95%)。LCMS：m/z=401.2(M+1)；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.37-7.29(m,5H),7.21-7.18(m,1H),6.46-6.49(m,2H),5.82(bd,J=9.6Hz,1H),5.18-5.08(m,3H),4.45(d,J=14.4Hz,1H),4.28(d,J=14.4Hz,1H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.76-3.72(m,1H),3.63-3.52(m,2H),1.87(dd,J=9.6,4.0Hz,1H)。
中間體H：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯
Figure 104109243-A0202-12-0069-445
步驟1：((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係根據Mastalerz等人J.Med.Chem. 1988,31,1190來製備。向中間體G(208g,0.529mol)於ACN(4L)中之溶液中添加過硫酸鉀(243g,0.899mol)，然後添加磷酸二鉀(147.4g,0.846mol)於水(2L)中之溶液。將所得混合物加熱至90℃並保持4h，然後冷卻至室溫且在真空中濃縮，移除大部分ACN。用EtOAc(1L,2×200mL)萃取混合物，且用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-己烷，50%-100%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(86g,65%)。分析數據與文獻中所報導之數據 完全匹配。
步驟2：(2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-銨乙酸鹽. 向((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(25g,100mmol)於MeOH(350mL)中之溶液中添加C載Pd(10%潤濕，2.5g)，然後添加AcOH(11.4mL,200mmol)。將混合物抽空且再裝填H2(3×)，使最終壓力達到50psi。在室溫下將其攪拌2h，然後排出，經矽藻土過濾且在真空中濃縮，提供淺棕色油狀粗標題化合物(22g)，其直接用於步驟3中。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-(((2-(苯并[d]噻唑-2-基硫基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)-噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(85g,116.4mmol)於DMF(200mL)中之溶液中添加(2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-銨乙酸鹽(22g,100mmol，來自步驟2之假設定量)於DMF(100mL)中之溶液，然後添加DIPEA(52.2mL,300mmol)。將混合物升溫至室溫且再攪拌16h，隨後將其在真空中濃縮且經由矽膠層析(EtOAc-己烷，25%-100%)純化，提供淺黃色固體狀粗標題化合物(44g,83%)。LCMS：m/z=526.1(M-1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.94(s,1H),8.02(d,J=7.8Hz,1H),7.30(s,1H),6.48(s,1H),5.43(dd,J=7.4,4.7Hz,1H),4.25(m,1H),4.02(dd,J=8.6,4.3Hz,1H),3.86(m,2H),1.56(s,3H),1.55(s,3H),1.52(s,9H),1.44(9H,s)。
中間體I：(Z)-2-(((2-(苯并[d]噻唑-2-基硫基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯
向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(50g,116.4mmol)及 2,2’-二苯并噻唑基二硫化物(54.2g,163mmol)於DCM(1L)中之懸浮液中添加三苯基膦(44.3g,168.8mmol)，然後逐滴添加TEA(22.7mL,163mmol)。攪拌16h後，將混合物濃縮且直接用於製備中間體H。LCMS：m/z=579.0(M+1)。
中間體J：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯
Figure 104109243-A0202-12-0071-446
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(碘甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 經5min，向中間體H(44.0g,83.4mmol)、三苯基膦(43.7g,166.8mmol)及咪唑(11.4g,166.8mmol)於DCM中之溶液中逐份添加碘(42.3g,166.8mmol)。在室溫下攪拌16h後，將其用DCM(300mL)稀釋，用飽和Na2S2O3(200mL)、水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由管柱層析(EtOAc-己烷，25%-75%)純化粗殘餘物，提供黃色固體狀標題化合物(33g,62%)。LCMS：m/z=638.0(M-1)。1H NMR數據與WO2012073138(A1)中所述之數據完全匹配。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-4-側氧基氮雜環丁- 3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(碘甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(24.0g,37.6mmol)於THF(200mL)中之溶液中添加TEA(10.5mL,75.2mmol)，然後添加四丁基疊氮化銨(13.9g,48.9mmol)。將混合物升溫至室溫且再攪拌16h，隨後將其傾倒至冷水(200mL)中並用EtOAc(3×100mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析純化粗殘餘物，提供淺黃色固體狀標題化合物(17.0g,82%)。LCMS：m/z=551.0(M-1)。1H NMR數據與WO2012073138(A1)中所述之數據完全匹配。
中間體K：(2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸
Figure 104109243-A0202-12-0072-447
向中間體J(500mg,0.905mmol)於DMF(8mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(1.38g,9.05mmol)。在室溫下攪拌4h後，將其用EtOAc(50mL)稀釋且用水、然後用鹽水洗滌直至pH=7。經Na2SO4乾燥有機層並在真空中濃縮，提供淺黃色固體狀標題化合物(500mg,87%)。LCMS：m/z=629.85(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.85(s,1H),9.10(d,J=8.9Hz,1H),8.63(s,1H),7.27(d,J=11.1Hz,1H),6.55(s,1H),5.37-5.13(m,1H),3.83-3.54(m,2H),1.46-1.41(m,4H),1.43-1.35(m,7H)。
中間體L：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(胺基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯
Figure 104109243-A0202-12-0073-448
在氮下，向中間體J(17.0g,30.8mmol)於EtOH(300mL)中之溶液中添加C載Pd(10%潤濕，2.0g)。將混合物抽空且再裝填H2(3×)，使最終壓力達到50psi。在室溫下將其攪拌2h，然後排出，經矽藻土過濾且在真空中濃縮，提供淺黃色固體狀粗標題化合物(15.5g,96%)。LCMS：m/z=527.1(M-1)。1H NMR數據與WO2012073138(A1)中所述之數據完全匹配。
中間體M：4-(丁-3-炔-1-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯
Figure 104109243-A0202-12-0073-449
向1-Boc-六氫吡嗪(0.5g,2.68mmol)於乙腈(2.5mL)中之溶液中添加K2CO3(0.55g,4.02mmol)，然後添加4-溴-1-丁炔(0.39g,2.95mmol)。在60℃下將混合物加熱6h，使其達到室溫，用水稀釋且用EtOAc(2×15mL)萃取。用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空下濃縮，以提供標題化合物(0.55g,86%)；LCMS：m/z=239.10(M+1)。方法2minLowp。
中間體N：N,N,N-三甲基-2-側氧基-2-(丙-2-炔-1-基胺基)乙銨溴化物
Figure 104109243-A0202-12-0074-450
步驟1：2-溴-N-(丙-2-炔-1-基)乙醯胺 經5min之時段，向冷卻至0℃之溴乙醯溴(2.1g,10.34mmol)及三乙胺(1.5mL,10.34mmol)於DCM(20mL)中之溶液中逐滴添加炔丙基胺(0.57g,10.34mmol)於DCM(10mL)中之溶液，在整個過程中維持攪拌。在0℃下將混合物攪拌2h，隨後過濾固體且在真空中濃縮濾液。經由管柱層析(60-120目二氧化矽，50% EtOAc：己烷)純化粗殘餘物，提供灰白色固體狀標題化合物(1.3g,72%)；LCMS：m/z=176.2(M+1)；方法2minLowpH；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 6.68(brs,1H),4.09(dd,J=5.4,2.6Hz,2H),3.90(s,2H),2.28(t,J=2.6Hz,1H)。
步驟2：N,N,N-三甲基-2-側氧基-2-(丙-2-炔-1-基胺基)乙銨溴化物. 向2-溴-N-(丙-2-炔-1-基)乙醯胺(0.6g,3.4mmol)於乙腈(5mL)中之溶液中添加三甲胺(30%於MeOH中，5mL)。在室溫下將混合物攪拌16h，並在真空中濃縮。將所得殘餘物與醚一起研磨，獲得標題化合物(780mg,97%)；LCMS：m/z=155.1(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 9.03(t,J=5.3Hz,1H),4.17(s,2H),3.95(dd,J=5.4,2.6Hz,2H),3.23(s,9H),2.09(s,1H)。
中間體O：2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)-N-(丙-2-炔-1-基)乙醯胺
Figure 104109243-A0202-12-0074-451
向2-溴-N-(丙-2-炔-1-基)乙醯胺(0.7g,3.98mmol)於DCM(10mL)中之溶液中逐滴添加N-甲基六氫吡嗪(0.66mL,5.96mmol)。在室溫下 將反應混合物攪拌16h，用DCM稀釋且用水及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機層並在真空中濃縮。將粗殘餘物與醚-戊烷一起研磨，提供標題化合物(0.38g,49%)；LCMS：m/z=196.15(M+1)；1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 8.06(d,J=6.1Hz,1H),3.86(dd,J=5.9,2.5Hz,2H),3.07(t,J=2.5Hz,1H),2.91(s,2H),2.47-2.25(m,8H),2.15(s,3H)。
中間體P：4-乙炔基-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽
Figure 104109243-A0202-12-0075-452
其係根據Rubinsztajn等人Tetrahedron Lett. 1992,33,14,1821-1824來製備。在0℃下，向4-乙炔基吡啶鹽酸鹽(500mg,3.58mmol)於DCM(50mL)中之懸浮液中緩慢添加NaHCO3溶液(飽和水溶液，10mL)。攪拌5min後，分離各層且用DCM(2×10mL)萃取水溶液。經Na2SO4乾燥合併之有機層，在真空中濃縮且使其經受高真空達10min。將粗殘餘物溶解於DCM(10mL)中，冷卻至0℃並逐滴添加三氟甲磺酸甲酯(450μL,3.94mmol)。在0℃下攪拌30min後，添加醚且收集沈澱並乾燥，提供淺棕色固體狀標題化合物(870mg,91%)。分析數據與文獻所報導之值一致。
中間體Q：4-乙炔基-1,3-二甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽
Figure 104109243-A0202-12-0075-453
步驟1：3-甲基-4-((三甲基矽基)乙炔基)吡啶. 向4-溴-3-甲基吡啶鹽酸鹽(5.0g,24.0mmol)於THF(經脫氣，80mL)中之溶液中添加 碘化銅(450mg,2.40mmol)及三乙胺(20.0mL,143.9mmol)。脫氣15min後，添加四三苯基膦鈀(830mg,0.72mmol)及三甲基矽基乙炔(6.10mL,43.16mmol)。在50℃下將混合物加熱16h，然後冷卻至室溫並過濾。經由矽膠層析(EtOAc-己烷，10%)純化粗殘餘物，以提供透明深色油狀標題化合物(3.95g,87%)。
步驟2：4-乙炔基-3-甲基吡啶. 其係根據WO2013/028590中所述之方法來製備。向4-乙炔基-3-甲基吡啶(3.79g,20mmol)於THF(50mL)中之溶液中添加TBAF(1M於THF中，40mL,40mmol)。在室溫下攪拌1h後，在真空中濃縮溶液。經由矽膠層析(EtOAc-己烷，20%-40%)純化粗殘餘物，提供灰白色固體狀標題化合物(1.70g,72%)。
步驟3：4-乙炔基-1,3-二甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽
其係根據Rubinsztajn等人Tetrahedron Lett. 1992,33,14,1821-1824來製備。在0℃下，向4-乙炔基-3-甲基吡啶(420mg,3.58mmol)於DCM(10mL)中之溶液中逐滴添加三氟甲磺酸甲酯(450μL,3.94mmol)。在0℃下攪拌30min後，添加醚且收集沈澱並乾燥，提供淺棕色固體狀標題化合物(863mg,86%)。
中間體R：((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯
Figure 104109243-A0202-12-0076-454
向N-Boc-炔丙基胺(1.60g,10.3mmol)於DMF：MeOH之混合物(4：1,10mL)中之溶液中添加三甲基矽基疊氮化物(2.0mL,15.2mmol)及CuI(95mg,0.50mmol)。將所得混合物加熱至100℃並保持16h，隨後將其在真空中濃縮且經由矽膠層析純化，提供淺黃色油狀標題化合物(2.0g,99%)；LCMS：m/z=196.9(M-1)。
中間體S：
Figure 104109243-A0202-12-0077-455
步驟1：((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(碘甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下經10min，向中間體G(10g,25mmol)、三苯基膦(19.6g,75mmol)及咪唑(5.1g,75mmol)於DCM(150mL)中之溶液中逐份添加碘(19g,75mmol)。在室溫下攪拌4h後，將其用飽和Na2S2O3溶液、水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。將粗殘餘物懸浮於EtOAc(150mL)中且攪拌16h，隨後將其過濾，然後用丙酮及MeOH洗滌，提供白色固體狀標題化合物(9.8g,77%)。LCMS：m/z=510.8(M+1)。
步驟2：((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下，向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(碘甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(5.00g,9.80mmol)於THF(100mL)中之溶液中添加TEA(2.73g,19.6mmol)，然後添加四丁基疊氮化銨(3.62g,12.7mmol)於THF中之溶液。在室溫下攪拌16h後，將其過濾且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(3.4g,81%)。
步驟3：向((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(3.00g,7.06mmol)於DCM(6mL)中 之溶液中添加DMSO：水：第三丁醇(1：1：1,6mL)、丁-3-炔-1-基胺基甲酸第三丁基酯(2.19g,14.1mmol)、CuSO4(56mg,0.35mmol)及L-抗壞血酸鈉(2.01mg,10.6mmol)。在室溫下攪拌3h後，部分濃縮混合物且添加水，隨後藉由過濾收集固體。將濾餅懸浮於DCM中，過濾且濃縮濾液，提供淺黃色固體狀標題化合物(假設定量)。
步驟4：向來自步驟3之產物(7.06mmol)於ACN(50mL)中之溶液中添加過硫酸鉀(3.82g,14.1mmol)，然後添加磷酸二鉀(3.08g,17.7mmol)於水(25mL)中之溶液。將所得混合物加熱至90℃並保持4h，然後冷卻至室溫，過濾且在真空中濃縮，移除大部分ACN。用EtOAc萃取濾液並在真空中濃縮。用己烷及丙酮洗滌粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(1.72g,57%，經2個步驟)。LCMS：m/z=431.1(M+1)。
中間體T
Figure 104109243-A0202-12-0078-456
步驟1：遵循光延反應之一般程序。向中間體G(5.00g,12.5mmol)、((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(2.97mg,15.0mmol)、三苯基膦(3.93mg,15.0mmol)及DIAD(3.0mL,15mmol)於THF(100mL)中之溶液中。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-5%)純化，提供白色泡沫狀標題化合物(12.6g，污染有三苯基氧化膦)。
步驟2：向來自步驟1之產物(12.5mmol)於ACN(150mL)中之溶 液中添加過硫酸鉀(6.76g,25.0mmol)及磷酸二鉀(5.44g,31.2mmol)於水(75mL)中之溶液。將所得混合物加熱至90℃並保持4h，然後冷卻至室溫，用水稀釋且用EtOAc萃取。在真空中濃縮有機層且經由矽膠層析純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(2.23g,41%，經2個步驟)。LCMS：m/z=428.9(M-1)。
中間體U：
Figure 104109243-A0202-12-0079-457
步驟1：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 使用中間體G(5.00g,12.5mmol)、酞醯亞胺(1.83g,12.5mmol)、三苯基膦(3.93g,15.0mmol)、DIAD(3.03g,15.0mmol)及THF(150mL)實施光延反應之一般程序。攪拌16h後，過濾所形成之沈澱，提供白色固體狀標題化合物(5.67g,85%)。
步驟2：((2R,3S)-2-(胺基甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(4.40g,8.31mmol)於DCM：MeOH(5：1,60mL)中之溶液中添加 肼水合物(1.50g,25.0mmol)。攪拌16h後，過濾掉沈澱且濃縮濾液，提供白色固體狀標題化合物(定量)。
步驟3：向((2R,3S)-2-(胺基甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(8.31mmol)於DCM：MeOH(13：1,43mL)中之溶液中添加(R)-(環氧乙烷-2-基甲基)胺基甲酸第三丁基酯。攪拌16h後，將其在真空中濃縮且經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-10%)純化，提供白色泡沫狀標題化合物(2.2g,46%)。
步驟4：在0℃下，向來自步驟3之產物(2.20g,3.85mmol)於DCM(100mL)中之溶液中添加CDI(1.12g,6.92mmol)。在15℃下攪拌2h後，在真空中濃縮溶液。經由矽膠層析(MeOH-DCM,1%-5%)純化粗殘餘物，以提供白色泡沫狀標題化合物(2.10g,91%)。
步驟5：向來自步驟4之產物(2.10g,3.51mmol)於ACN(40mL)中之溶液中添加過硫酸鉀(1.89g,7.02mmol)及磷酸二鉀(1.52g,8.75mmol)於水(20mL)中之溶液。將所得混合物加熱至90℃並保持4h，然後冷卻至室溫且過濾。濃縮濾液，用EtOAc萃取且濃縮有機層。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-5%)純化粗殘餘物，提供淺黃色固體狀標題化合物(660mg,42%)。LCMS：m/z=449.09(M+1)。
中間體V：
Figure 104109243-A0202-12-0080-458
步驟1：(1H-1,2,3-三唑-4-基)甲醇. 向炔丙基醇(11.2g,200mmol)於DMF(160mL)及MeOH(40mL)中之溶液中添加CuI(1.9g,10mmol)及三甲基矽基疊氮化物(34.6g,300mmol)。加熱至100℃並保持16h後，將反應混合物冷卻至室溫且經由矽藻土過濾。在真空中濃縮濾液，以提供標題化合物(假設定量)。將粗化合物以原樣用於下一步驟中。
步驟2：4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑. 向(1H-1,2,3-三唑-4-基)甲醇(30g,200mmol)於DCM(160mL)中之溶液中添加咪唑(20.4g,300mmol)，然後逐份添加固體狀TBDMS-C1(33.3g,220mmol)。在室溫下攪拌16h後，經由矽藻土過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。將殘餘物溶解於EtOAc(500mL)中且用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-己烷，5%-30%)純化粗殘餘物，以提供淡黃色固體狀標題化合物(30.2g,71%)。
步驟3：((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下，向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(0.94g,2.34mmol)、4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑(0.5g,2.34mmol)及PPh3(0.74g,2.81mmol)於THF(20mL)中之溶液中緩慢添加DIAD(0.57g,2.81mmol)。在室溫下攪拌16h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(EtOAc-己烷，20%-30%)純化粗殘餘物，以提供淡黃色固體狀標題化合物(1.25g,89%)。LCMS：m/z=594.3(M-1)。
步驟4：((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2- 基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(1.25g,2.1mmol)於CH3CN(20mL)中之溶液中添加K2S2O8(0.73g,2.7mmol)，然後添加K2HPO4(0.84g,4.8mmol)於水(10mL)中之溶液。在90℃下攪拌1h後，再添加K2S2O8(0.23g,0.84mmol)。在90℃下再加熱2h後，在真空中濃縮反應混合物。用EtOAc(2×30mL)萃取殘餘物。用水、鹽水洗滌合併之有機層，用Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,1%-3%)純化粗殘餘物，以提供淺黃色固體狀標題化合物(0.44g,47%)。LCMS：m/z=446.2(M+1)。
步驟5：((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 經15min之時段，向((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(10.8g,24.4mmol)於THF(100mL)中之溶液中緩慢添加TBAF(1M於THF中，26.6mL,26.6mmol)。在室溫下攪拌1.5h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,1%-5%)純化粗殘餘物，以提供淺黃色固體狀標題化合物(6.8g,85%)。LCMS：m/z=330.0(M+1)。
步驟6：(3S,4R)-3-胺基-4-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)氮雜環丁-2-酮.
向((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(1.54g,4.65mmol)於EtOH(50mL)及EtOH(25mL)中之溶液中添加Pd/C(10%,0.51g,4.65mmol)。在室溫下攪拌4h後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以提供標題化合物(假設定量)。將粗製物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.12min,m/z=198.0(M+1)方法2m_酸性。
中間體W：氯化3-(銨基甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽
Figure 104109243-A0202-12-0083-459
步驟1：N-(吡啶-3-基甲基)乙醯胺
其係根據Plater等人Org.Biomol.Chem. 2009,7,1633來製備。在10℃下，向吡啶-3-基甲胺(9.42ml,92mmol)於水(103ml)中之溶液中添加乙酸酐(10.47ml,111mmol)，以內部溫度不會升高至25℃以上之速率攪拌。再攪拌18h後，在真空中濃縮溶液，然後與甲苯(3×)共蒸發，以提供透明油狀標題化合物(14.22g，定量)。LCMS：Rt=0.12min,m/z=151.1(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.49(d,J=2.4Hz,2H)7.65(dd,J=7.8,1.6Hz,1H)7.24-7.30(m,1H)6.49-6.59(m,1H)4.43(d,J=6.0Hz,2H)2.02(s,3H)。
步驟2：碘化3-(乙醯胺基甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽
在0℃下，向N-(吡啶-3-基甲基)乙醯胺(13.89g,92mmol)於DCM中之溶液中添加碘甲烷(8.10mL,129mmol)。在10min後移除冷卻浴，且在室溫下將溶液攪拌19h，隨後將其在真空中濃縮且以粗製物用於步驟3中。LCMS：Rt=0.18min,m/z=164.9(M+)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.87-8.91(m,2H)8.58(brs,1H)8.42(d,J=8.0Hz,1H)8.09(t,J=7.0Hz,1H)4.43(d,J=5.9Hz,2H)4.35(s,3H)1.92(s,3H)
步驟3：氯化3-(銨基甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽
將碘化3-(乙醯胺基甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽(26.9g,92mmol)於HCl(6N,307mL,1.84mol)中之懸浮液加熱至100℃並保持3h。在減壓下(浴溫度80℃)濃縮溶液。將所得紅色油狀物固化過夜，且與 MeOH一起研磨並過濾，以提供灰白色固體狀標題化合物(8.76g,49%)。將濾液濃縮成紅色油狀物，將其靜置4天後，收集所形成之固體且用冷MeOH洗滌，提供第二收穫物(6.5g,36%)。LCMS：Rt=0.11min,m/z=123.0(M+)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 9.18(s,1H)9.03(d,J=6.0Hz,1H)8.66(d,J=8.1Hz,1H)8.45(brs,3H)8.24(t,J=7.0Hz,1H)4.38(s,3H)4.30(s,2H)。
可使用上述中間體及藉由相同方法製備之類似化合物藉由本文所提供之合成反應圖來製備式(I)化合物。以下實例闡釋所選式(I)化合物之合成且提供可適用於合成其他式(I)化合物之方法。
實例1. 2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.將中間體L(100mg,0.190mmol)、4-溴丁酸甲酯(25μL,0.194mmol)及TEA(27μL,0.194mmol)於DMF(1.3mL)中之溶液加熱至70℃並保持16h同時攪拌，隨後則將熱升高至90℃。再加熱6h後，將其用HCl(1N)及EtOAc稀釋。用EtOAc(2×)萃取水層，且用LiCl溶液(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(50%-100% EtOAc-庚烷，然後0-7% MeOH-EtOAc)純化粗殘餘物，提供泡沫狀標題化合物(21mg,18%)。LCMS：Rt=0.88min,m/z=595.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用 SO3‧DMF(111mg,0.725mmol)處理DMF(725μL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(43mg,0.072mmol)。在室溫下將溶液攪拌30min，然後用EtOAc稀釋且傾倒至LiCl溶液(5%水溶液)中。用EtOAc(2×)萃取水溶液，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供白色固體狀粗標題化合物(55mg)。LCMS：Rt=0.77min,m/z=675.3(M+1)方法2m_酸性。其未經進一步純化即用於步驟3中。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0085-460
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(55mg,0.072mmol)、DCM(720μL)及TFA(333μL,4.32mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(6mg,16%)。LCMS：Rt=0.35min,m/z=519.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.17(s,1H),5.46(d,J=5.8Hz,1H),4.71-4.64(m,1H),3.92(dd,J= 14.7,8.7Hz,1H),3.71-3.55(m,2H),3.49(dd,J=14.7,4.1Hz,1H),2.42(td,J=8.0,4.8Hz,2H),2.08(p,J=7.6Hz,2H),1.55(s,3H),1.54(s,3H)。
實例2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在80℃下在微波中，將中間體L(500mg,0.949mmol)及(2-溴乙氧基)(第三丁基)二甲基矽烷(204μl,0.949mmol)於ACN(3.2mL)中之溶液加熱30min，然後在室溫下保持12h。在微波中將其再加熱至100℃並保持45min，然後在室溫下保持12h，隨後將其用EtOAc稀釋且用碳酸鈉(2M)洗滌，經硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(0-100% EtOAc-庚烷，然後10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(111mg,17%)。LCMS：Rt=1.03min,m/z=685.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.17(d,J=8.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.30(br s,1H)5.57-5.50(m,1H)4.09-4.01(m,1H)3.77-3.61(m,3H)3.09(dd,J=12.6,3.7Hz,1H)2.87-2.71(m,3H)1.56(s,6H)1.53(s,9H)1.44(s,9H)0.86(s,9H)0.03(s,3H),0.03(s,3H)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((2-羥基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係根據Seki等人Synlett 1995,609-611來製備。向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基) 胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(111mg,0.162mmol)於DMF：NMP(2.7：1,1.62mL)中之溶液中添加氟化銨氫氟酸鹽(37.0mg,0.648mmol)。攪拌65h後，用水稀釋溶液且用EtOAc萃取。經硫酸鈉乾燥有機層且在真空中濃縮，以提供粗標題化合物(92mg,99%)。粗材料直接用於步驟3中。LCMS：Rt=0.76min,m/z 571.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係根據PCT國際申請案2011061760來製備。用CDI(131mg,0.806mmol)處理2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((2-羥基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(92mg,0.161mmol)於氯仿(806μl)中之溶液。在室溫下攪拌3h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。藉由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，提供橙色油狀標題化合物(91mg,95%)。LCMS：Rt=0.86min,m/z=597.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(234mg,1.525mmol)處理2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(91mg,0.153mmol)於DMF(體積：763μl)中之溶液。在室溫下攪拌1h後，將其用EtOAc稀釋，用鹽水(3×)洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供橙色固體狀標題化合物(100mg,97%)。LCMS： Rt=0.78min,m/z=677.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0088-461
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(100mg,0.148mmol)、DCM(1.5mL)及TFA(569μl,7.39mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(10mg,12%)。LCMS：Rt=0.32min,m/z=521.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.33(d,J=8.8Hz,1H),6.89(s,1H),5.22(dd,J=8.8,5.7Hz,1H),4.23-4.11(m,3H),3.75-3.62(m,2H假設；被水遮住),3.60-3.51(m,1H假設；被水遮住),3.34(dd,J=14.6,5.5Hz,1H),1.44(s,3H),1.40(s,3H)。
實例3：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三 丁基酯. 用三乙醯氧基硼氫化鈉(1.377g,6.17mmol)處理中間體L(650mg,1.234mmol)及(2-側氧基乙基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基酯(365mg,1.234mmol)於DCE(12.3ml)中之溶液。在室溫下攪拌18h後，將其用飽和NaHCO3驟冷且用EtOAc萃取。用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(435mg,45%)。LCMS：Rt=1.00min,m/z=792.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.11(d,J=9.0Hz,1H),8.35(s,1H),7.89(d,J=7.7Hz,2H),7.67(d,J=7.5Hz,2H),7.41(t,J=7.2Hz,2H),7.32(td,J=7.4,1.2Hz,2H),7.27(s,1H),7.19(t,J=5.7Hz,1H),5.20(dd,J=9.1,5.0Hz,1H),4.30(d,J=6.8Hz,2H),4.24-4.17(m,1H),3.76(ddd,J=8.8,5.3,3.7Hz,1H),3.11-2.97(m,2H),2.76(dd,J=12.5,3.7Hz,1H),2.63-2.52(m,3H),1.45(s,9H),1.42(s,3H),1.39(s,3H),1.38(s,9H)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 用六氫吡啶(1.1mL,11mmol)處理2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(435mg,0.549mmol)於DMF(2.75mL)中之溶液。在室溫下攪拌1h後，將其用甲苯稀釋且濃縮(3×)。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(238mg,64%)。LCMS：Rt=0.68min,m/z=570.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.12(d,J=8.9Hz,1H),8.38(s,1H), 8.31(s,1H),7.21(s,1H),5.17(dd,J=8.3,4.9Hz,1H),3.76(dt,J=8.7,4.7Hz,1H),2.81-2.51(m,6H),1.44(s,9H),1.41(s,3H),1.39(s,3H),1.38(s,9H)。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(100mg,0.151mmol)於氯仿(756μl)中之溶液中添加CDI(98mg,0.604mmol)，然後添加TEA(105μl,0.756mmol)。在室溫下攪拌1h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(73mg,81%)。其係以粗製物用於步驟4中。LCMS：Rt=0.70min,m/z=596.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(94mg,0.613mmol)處理2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(73mg,0.123mmol)於DMF(613μl)中之溶液。在室溫下攪拌2h後，將其用EtOAc稀釋，用鹽水(3×)洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(99mg)。LCMS：Rt=0.74min,m/z=676.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙 基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0091-462
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(99mg,0.147mmol)、DCM(1.47mL)及TFA(566μl,7.35mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(4.8mg)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=520.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.25(dd,J=9.0,5.0Hz,1H),6.83(s,1H),5.21(dd,J=9.0,5.8Hz,1H),4.06-4.00(m,1H),3.65(dd,J=14.5,4.7Hz,1H),3.33-3.30(m,1H假設；被水遮住),3.25(dd,J=14.5,6.9Hz,2H假設；被水遮住),3.17(ddd,J=16.7,8.6,6.7Hz,2H),1.43(s,3H),1.42(s,3H)。
實例4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：在攪拌的同時，向75mL壓力容器中裝填中間體A(1.50g,3.13mmol)、中間體B(1.108g,4.70mmol)、K2CO3(1.733g,12.54mmol)、NaI(564mg,3.76mmol)及DMF(10mL)，然後加熱至70℃。3h後，再添加中間體B(1.108g,4.70mmol)、K2CO3(1.733g,12.54mmol)及NaI(394mg,2.63mmol)且持續加熱。總共加熱8h後，將其 冷卻至室溫，用EtOAc/鹽水稀釋且分離各層。用EtOAc(2×)萃取水層且用鹽水(3×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。將粗殘餘物與具有相同規模及程序之另一樣品合併且經由矽膠層析(丙酮-DCM,0-30%)純化，提供白色固體狀標題化合物A(2.15g,60%)及標題化合物B(443mg,12%)。A-LCMS：Rt=0.97min,m/z=582.3(M+1)方法2m_酸性；B-LCMS：Rt=0.93min,m/z=582.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：其係根據Mastalerz等人J.Med.Chem. 1988,31,1190來製備。向化合物A(2.15g,3.70mmol)於ACN：水(2：1,61.5mL)中之溶液中添加K2S2O8(1.40g,5.18mmol)，然後添加K2HPO4(837mg,4.81mmol)。將所得混合物加熱至90℃並保持1.5h，隨後再添加K2S2O8(300mg,1.11mmol)及K2HPO4(167mg,0.961mmol)。在90℃下再加熱3.5h後，將其用ACN稀釋且在真空中濃縮，移除大部分ACN。用水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc(5×)萃取水層，且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM,50%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(785mg,49%)。LCMS：Rt=0.77min,m/z=432.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,ACN-d 3)δ 7.49-7.30(m,5H),6.76(br s,1H),6.55-6.41(m,1H),5.85(brs,1H),5.03-5.21(m,3H),4.88-4.71(m,2H),4.52-4.43(m,3H),4.39-4.24(m,1H),1.50-1.35(m,9H)。
步驟3：((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-四唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據Malmström等人Bioorg.Med.Chem.Lett. 2012,22,5293中所述之程序來製備。將來自步驟2之化合物(785mg,1.819mmol)於EtOAc：MeOH(5：1,65mL)中之溶液抽空且用氬(2×)回填，然後添加C載Pd(10%,581mg)。將系統抽空且用H2(3×)回填。攪拌21h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗 滌，在真空中濃縮，吸收於甲苯上且再濃縮(3×)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.37min,m/z=298.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(938mg,2.18mmol)於DCM：DMF(5：1,8.5mL)中之溶液中添加DIPEA(953μL,5.46mmol)，然後添加HATU(830mg,2.18mmol)。向所得溶液中添加((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-四唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(541mg,1.82mmol)於DCM：DMF(5：1,8.5mL)中之溶液。在室溫下將溶液攪拌1h，然後在真空中濃縮，溶解於EtOAc中且用鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層且用鹽水(3×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM,30%-50%)純化粗殘餘物，提供紫色固體狀標題化合物(897mg,70%)。LCMS：Rt=1.01min,m/z=709.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
用SO3‧DMF(432mg,2.82mmol)處理DMF(2mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(200mg,0.282 mmol)。紫色溶液立即變成綠色。攪拌20min後，再添加SO3‧DMF(432mg,2.82mmol)。再20min後，再添加SO3‧DMF(432mg,2.82mmol)。20min後，用EtOAc/鹽水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，以提供標題化合物(185mg,83%)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=789.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0094-463
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(185mg,0.234mmol)、DCM(2.34mL)及TFA(1.08mL,14.06mmol)經1.5h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(55.5mg,45%)。LCMS：Rt=0.30min,m/z=533.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.34(d,J=8.8Hz,1H),8.55(br s,3H),7.34(br s,2H),6.73(s,1H),5.37(dd,J=8.7,5.5Hz,1H),5.19-5.13(m,1H),5.01-4.94(m,1H),4.62-4.57(m,1H),4.43-4.37(m,2H),1.38(s,3H)1.34(s,3H)。
實例5：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-(胍基甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0095-464
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(20mg,0.038mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(11.6mg,0.079mmol)於DMF(376μL)中之溶液中添加DIPEA(26.2μL,0.150mmol)。在室溫下攪拌12h後，在真空中濃縮溶液。添加甲苯且將其再濃縮(3×)。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(11mg,45%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=575.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 7.49-7.04(m,5H),6.74(br s,1H),5.26(br s,1H),5.14-5.07(m,1H),4.98-4.90(m,1H),4.65(br s,2H),4.59-4.52(m,1H),1.36(s,3H),1.34(s,3H)。
實例6：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：其係在90℃下以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,12.6mL)中的實例4、步驟1中獲得之適宜四唑異構物(442mg,0.760mmol)、K2S2O8(288mg,1.064mmol)及K2HPO4(172mg,0.988mmol)經1.5h製備。再添加K2S2O8(62mg,0.228mmol)及K2HPO4(42 mg,0.198mmol)且將其再加熱3.5h，然後冷卻至室溫，用ACN稀釋並在真空中濃縮，移除大部分ACN。用水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc(5×)萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層。經由矽膠層析(丙酮-DCM,50%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(179mg,54%)。LCMS：Rt=0.72min,m/z=432.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-四唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOAc：MeOH(10：1,13.8mL)中之步驟1之產物(179mg,0.415mmol)及C載Pd(10%,132mg)經21h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.37min,m/z=298.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
其係在0℃下以與實例4、步驟3類似之方式、使用DCM：DMF(5：1,3.6mL)中之(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(214mg,0.498mmol)、DIPEA(953μL,5.46mmol)及HATU(830mg,2.18mmol)、然後使用((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-四唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(123mg,0.415mmol)於DCM：DMF(4.3：1,3.7mL)中之溶液製備。在室溫下攪拌1h後，使其經受相同處理，然後經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化，提供淺紫色固體狀標題化合物(174mg,59%)。LCMS：Rt=1.03min,m/z=709.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙- 2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
其係在室溫下以與實例4、步驟4類似之方式、使用DMF(1.4mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(100mg,0.141mmol)及SO3‧DMF(216mg,1.41mmol)經20min製備。使其經受相同處理以提供標題化合物(100mg,89%)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=789.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0097-465
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(100mg,0.126mmol)、DCM(1.26mL)及TFA(584μL,7.58mmol)經1.5h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(18.7mg,28%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=533.2(M+1)方法 2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.21(d,J=8.8Hz,1H),7.28(s,2H),6.79(s,1H),5.35(dd,J=8.8,5.8Hz,1H),4.79-4.61(m,2H),4.59-4.53(m,1H),4.47-4.35(m,2H),1.36(br s,6H)。
實例7：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1，化合物1：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
步驟1，化合物2：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
其係在70℃下以與實例4、步驟1類似之方式、使用DMF(10mL)中之中間體A(1.0g,2.1mmol)、5-甲基-2H-四唑(527mg,6.27mmol)、K2CO3(1.44g,10.5mmol)、NaI(470mg,3.13mmol)經4h製備。無需添加其他試劑。冷卻至室溫後，將其用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，提供固體狀標題化合物1(680mg,70%)及標題化合物2(221mg,23%)。1-LCMS：Rt=0.87min,m/z=467.2(M+1)方法2m_酸性；2-LCMS：Rt=0.80min,m/z=467.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係在90℃下以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,7.4mL)中之((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(202mg,0.433mmol)、K2S2O8(164mg,0.606mmol)及K2HPO4(98mg,0.563mmol)經1.5h製備。再添加K2S2O8(35mg,0.13mmol)及K2HPO4(20mg,0.11mmol)且將其再加熱30min，然後冷卻至室溫，然後在真空中濃縮。用EtOAc稀釋混合物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾 燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(111mg,81%)。LCMS：Rt=0.58min,m/z=317.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.43-7.30(m,5H),6.34(br s,1H),6.01(br s,1H),5.28-5.21(m,1H),5.20-5.12(m,3H),4.92(dd,J=14.3,3.9Hz,1H),4.68(dd,J=14.2,7.9Hz,1H),4.48-4.27(m,2H),2.53(s,3H)。
步驟3：(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)氮雜環丁-2-酮. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOAc：MeOH(5：1,7.0mL)中之((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(111mg,0.351mmol)及C載Pd(10%,50mg)經3h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.14min,m/z=183.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係在0℃下以與實例4、步驟3類似之方式、使用DCM：DMF(2：1,3.0mL)中之(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(130mg,0.302mmol)、DIPEA(158μL,0.906mmol)及HATU(138mg,0.362mmol)、然後使用(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(55mg,0.30mmol)於DCM：DMF(2：1,3.0mL)中之溶液來製備。在室溫下攪拌1h後，將其在真空中濃縮，溶解於EtOAc中，用水、然後用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，提供固體狀標題化合物(179mg,99%)。LCMS：Rt=0.93min,m/z=594.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙- 2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
其係在室溫下以與實例4、步驟4類似之方式、使用DMF(3.0mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(179mg,0.302mmol)及SO3‧DMF(462mg,3.02mmol)經1h製備。用EtOAc稀釋溶液，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.80min,m/z=674.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸. 使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(203mg,0.302mmol)、DCM(3.0mL)及TFA(1.39mL,18.1mmol)經2h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(37mg,24%)。LCMS：Rt=0.35min,m/z=518.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.03(s,1H),5.37(d,J=5.5Hz,1H),5.08-4.97(m,1H),4.90-4.80(m,2H),2.35(s,3H),1.32(s,3H),1.31(s,3H)。
實例8：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係在90℃下以與實例4、步驟2類似之方 式、使用ACN：水(2：1,7.9mL)中之((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(221mg,0.474mmol)、K2S2O8(179mg,0.663mmol)及K2HPO4(107mg,0.616mmol)經1.5h製備。再添加K2S2O8(38.4mg,0.142mmol)及K2HPO4(21.5mg,0.123mmol)且將其再加熱30min，然後冷卻至室溫，然後在真空中濃縮。用EtOAc稀釋混合物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(97mg,65%)。LCMS：Rt=1.00min,m/z=317.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮.
其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOH：MeOH(5：1,3.0mL)中之((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(97mg,0.31mmol)及C載Pd(10%,50mg)經3h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.11min,m/z=183.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係在0℃下以與實例4、步驟3類似之方式、使用DCM：DMF(2：1,3.0mL)中之(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(130mg,0.302mmol)、DIPEA(158μL,0.906mmol)及HATU(115mg,0.302mmol)、然後使用(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(55mg,0.30mmol)於DCM：DMF(2：1,3.0mL)中之溶液製備。在室溫下攪拌1h後，將其在真空中濃縮，溶解於EtOAc中，用水、然後用鹽水洗 滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，提供固體狀標題化合物(133mg,74%)。LCMS：Rt=0.92min,m/z=594.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係在室溫下以與實例4、步驟4類似之方式、使用DMF(2.24mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(133mg,0.224mmol)及SO3‧DMF(343mg,2.24mmol)經1h製備。用EtOAc稀釋溶液，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.85min,m/z=674.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0102-466
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-1H-四唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(151mg,0.224mmol)、DCM(2.24mL)及TFA(1.04mL,13.45mmol)經2h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19 ×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(14.4mg,11%)。LCMS：Rt=0.55min,m/z=518.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.04(s,1H),5.37(d,J=5.5Hz,1H),4.83-4.77(m,1H),4.76-4.54(m,2H假設；被溶劑遮住),2.48(s,3H),1.35(s,3H),1.33(s,3H)。
實例9：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在攪拌的同時，向20mL微波瓶中裝填中間體A(250mg,.0522mmol)、1,2,4-三唑(54mg,0.784mmol)、K2CO3(215mg,1.56mmol)、NaI(94mg,0.63mmol)及DMF(2mL)，然後加熱至70℃。4h後，再添加1,2,4-三唑(54mg,0.784mmol)、K2CO3(215mg,1.56mmol)及NaI(94mg,0.63mmol)且持續加熱。總共加熱7h後，將其冷卻至室溫，用DCM/鹽水稀釋且分離各層。用DCM萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。添加甲苯且將其在真空中濃縮(40℃浴)。經由矽膠層析(丙酮-庚烷，50%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(156mg,66%)。LCMS：Rt=0.77min,m/z=452.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,61.5mL)中之((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(101mg,0.224mmol)、K2S2O8(85mg,0.313mmol)及K2HPO4(50.7mg,0.291mmol)、同時在90℃下加熱2h來製備。再添加K2S2O8(18.1mg,0.067 mmol)及K2HPO4(10.1mg,0.058mmol)且再加熱1.5h。再添加K2S2O8(18.1mg,0.067mmol)及K2HPO4(10.1mg,0.058mmol)並再加熱1小時。將其用ACN稀釋且在真空中濃縮，移除大部分ACN。用水/DCM稀釋混合物，然後添加EtOAc且分離各層。用EtOAc(5×)萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層。經由矽膠層析(10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(38mg,56%)。LCMS：Rt=0.50min,m/z=302.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,ACN-d 3)δ 8.17(s,1H),7.92(s,1H),7.49-7.31(m,4H),6.82-6.74(m,1H),6.67(br s,1H),5.18-5.01(m,3H),4.49-4.42(m,1H),4.37-4.30(m,1H),4.21(q,J=5.4Hz,1H)。
步驟3：(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮. 向((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(38mg,0.126mmol)於MeOH(5mL)中之溶液中添加Pd黑(6.7mg,0.063mmol)，然後添加甲酸(339μL,8.83mmol)。攪拌1h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌，且在真空中濃縮濾液。將溶液凍乾且粗材料直接用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.14min,m/z=168.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(81mg,0.19mmol)於DCM(800μL)中之漿液中添加DIPEA(88μL,0.504mmol)，然後添加HATU(72mg,0.190mmol)。添加幾滴DMF以均質化混合物。向所得溶液中添加(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(21mg,0.126mmol)於DCM(1mL)中之溶液。攪拌1.5h後，用水/DCM將其稀 釋且分離各層。用DCM萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(47mg,65%)。LCMS：Rt=0.88min,m/z=579.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
用SO3‧DMF(116mg,0.760mmol)處理DMF(760μL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(44mg,0.076mmol)。攪拌1h後，用EtOAc/鹽水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.81min,m/z=659.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0105-467
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(50.1mg,0.076mmol)、DCM(760μL)及TFA(351μl,4.56mmol)實施酸介導之 去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(14.8mg,34%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=503.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.39(d,J=8.83Hz,1H),8.52(s,1H),8.02(s,1H),6.74(s,1H),5.28(dd,J=8.8,5.4Hz,1H),4.74-4.64(m,1H),4.58(d,J=6.9Hz,1H),4.32(d,J=5.7Hz,1H),1.37(s,3H)1.41(s,3H)。
實例10：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：在攪拌的同時，將甲烷磺酸((2S,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基酯(3.10g,6.48mmol)、((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(1.926g,9.72mmol)、K2CO3(1.35g,9.72mmol)及NaI(1.165g,7.78mmol)於DMF(20mL)中製成漿液，且加熱至70℃。3h後，再添加((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(1.926g,9.72mmol)、K2CO3(1.35g,9.72mmol)及NaI(777mg,8.10mmol)，且將其再加熱4h，隨後將其用EtOAc/水稀釋並分離各層。用EtOAc(2×)萃取水層且用鹽水(3×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-庚烷，0-70%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物A(1.16g,31%)及標題化合物B(375mg,10%)。A-LCMS：Rt=0.87min,m/z=581.2(M+1)方法2m_酸性；B-LCMS：Rt=0.94min,m/z=581.2(M+1)方法2m_酸性；B-1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.86(s,1H),7.44-7.31(m,4H),7.29(s,3H),6.90(d,J=8.2Hz,1H),6.49-6.37(m,2H),5.25-5.04(m,3H),4.54-4.43(m,2H),4.43-4.22(m,3H),4.13(d,J=5.4Hz,1H),3.90-3.71(m,7H),1.36-1.51(m,9H)。
步驟2：其係以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,33.3mL)中之來自步驟1之一種異構物(1.16g,2.00mmol)、K2S2O8(756mg,2.80mmol)及K2HPO4(452mg,2.60mmol)、同時在90℃下加熱1.5h來製備。再添加K2S2O8(162mg,0.599mmol)及K2HPO4(90mg,0.52mmol)且再加熱3.5h，隨後將其在真空中濃縮，移除大部分ACN。用水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc(5×)萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層。經由矽膠層析(丙酮-DCM,0-100%)純化粗殘餘物以提供標題化合物(416mg,48%)。LCMS：Rt=0.71min,m/z=431.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,ACN-d 3)δ 8.08(s,1H),7.49-7.25(m,5H),6.82-6.60(m,2H),5.81-5.62(m,1H),5.21-5.03(m,3H),4.48-4.07(m,6H),1.46-1.33(m,9H)。
步驟3：((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據Malmström等人Bioorg.Med.Chem.Lett. 2012,22,5293中所述之程序來製備。將步驟2之產物(416mg,0.966mmol)於EtOAc：MeOH(5：1,32.2mL)中之溶液抽空且用氬(2×)回填，然後添加C載Pd(10%,103mg)。將系統抽空且用H2(3×)回填。攪拌21h後添加MeOH(282μL)。再攪拌4h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌，在真空中濃縮，吸收於甲苯上且再濃縮(3×)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.33min,m/z=297.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(47mg,0.109 mmol)於DCM：DMF(12：1,6.5mL)中之漿液中添加DIPEA(505μL,2.89mmol)，然後添加HATU(440mg,1.16mmol)。向所得溶液中添加((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(286mg,0.964mmol)於DCM：DMF(14：1,7.5mL)中之溶液。攪拌1h後，將其用水/EtOAc稀釋且分離各層。用EtOAc萃取水層且用鹽水(3×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM,70%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(428mg,63%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=708.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(433mg,2.83mmol)處理DMF(2.0mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(200mg,0.283mmol)。攪拌20min後，用EtOAc/鹽水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=788.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0109-468
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(223mg,0.283mmol),DCM(2.89mL)及TFA(1.31ml,16.98mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(99mg,65%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=532.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.45(d,J=8.5Hz,1H),8.53(s,1H),8.39(br s,3H),7.32(s,2H),6.74(s,1H),5.23(dd,J=8.5,5.7Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.62-4.55(m,1H),4.32-4.27(m,1H),4.16-4.08(m,2H),1.36(s,3H)1.43(s,3H)。
實例11：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-(胍基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0109-469
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(25mg,0.047mmol)及吡唑-1-甲脒 鹽酸鹽(10.9mg,0.099mmol)於DMF(470μL)中之溶液中添加DIPEA(33μL,0.188mmol)。在室溫下攪拌12h後，在真空中濃縮溶液。添加甲苯且將其再濃縮(3×)。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(16mg,52%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=574.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.45(br s,1H),8.47(s,1H),7.86(br s,1H),7.31(br s,3H),6.74(br s,1H),6.55(s,1H),5.22(br s,1H),4.69-4.59(m,1H),4.60-4.50(m,1H),4.45-4.36(m,2H),4.34-4.26(m,1H),1.35(s,3H)1.41(s,3H)。
實例12：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：其係以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,10.4mL)中之來自實例10、步驟1之產物的一種異構物(361mg,0.622mmol)、K2S2O8(235mg,0.870mmol)及K2HPO4(115mg,0.808mmol)、同時在90℃下加熱1.5h來製備。再添加K2S2O8(50mg,0.187mmol)及K2HPO4(23mg,0.162mmol)且再加熱3.5h，隨後將其在真空中濃縮，移除大部分ACN。用水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc(5×)萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層。經由矽膠層析(丙酮-DCM,0-100%)純化粗殘餘物以提供標題化合物(155mg,58%)。LCMS：Rt=0.71min,m/z=431.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據實例7、步驟3來製備。將步驟1之產物(134mg,0.311mmol)於EtOAc：MeOH(5：1,10.4mL)中之溶液抽空且用氬(2×)回填，然後添加C載Pd(10%,33 mg)。將系統抽空且用H2(3×)回填。攪拌21h後添加MeOH(282μL)。再攪拌4h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌，在真空中濃縮，吸收於甲苯上且再濃縮(3×)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.38min,m/z=297.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(160mg,0.373mmol)於DCM：DMF(30：1,3.1mL)中之漿液中添加DIPEA(163μL,0.933mmol)，然後添加HATU(142mg,0.373mmol)。向所得溶液中添加((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(92mg,0.311mmol)於DCM：DMF(30：1,3.1mL)中之溶液。攪拌1h後，將其在真空中濃縮且吸收於EtOAc/鹽水中。分離各層且用EtOAc萃取水層。用鹽水(3×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM,70%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(128mg,58%)。LCMS：Rt=0.97min,m/z=708.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(277mg,1.81mmol)處理DMF(1.3mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸 第三丁基酯(128mg,0.181mmol)。攪拌20min後，用EtOAc/鹽水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.90min,m/z=788.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0112-470
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(143mg,0.181mmol)、DCM(1.81mL)及TFA(837μl,10.9mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(60mg,62%)。LCMS：Rt=0.28min,m/z=532.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.23(d,J=9.1Hz,1H),8.40(br s,3H),8.06(s,1H),7.59-7.27(m,2H),6.84(s,1H),5.37(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),4.61-4.51(m,1H),4.49-4.34(m,3H),4.25(dd,J=15.3,5.8Hz,1H),1.37(s,6H)。
實例13：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-(胍基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側 氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0113-471
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(25mg,0.047mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(10.9mg,0.099mmol)於DMF(470μL)中之溶液中添加DIPEA(33μL,0.188mmol)。在室溫下攪拌12h後，在真空中濃縮溶液。添加甲苯且將其再濃縮(3×)。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(13mg,42%)。LCMS：Rt=0.29min,m/z=574.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 7.96-7.78(m,1H),7.41-6.96(m,5H),6.80-6.71(m,1H),6.55(s,1H),5.42-5.32(m,1H),4.75-4.63(m,1H),4.62-4.42(m,1H),4.39-4.28(m,1H),1.38(s,3H)1.34(s,3H)。
實例14：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在攪拌的同時，將甲烷磺酸((2S,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基酯(860mg,1.80mmol)、吡啶-2(1H)-酮(855mg,8.99mmol)、K2CO3(1.74g,12.6mmol)及NaI(746mg,4.49mmol)於DMF(6.9mL)中製成漿液，且加熱至80℃。4h後，將其冷卻 至室溫，用EtOAc稀釋且用鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物以提供標題化合物(304mg,35%)。LCMS：Rt=0.79min,m/z=478.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.39-7.28(m,6H),7.07(d,J=5.9Hz,1H),6.93-6.85(m,1H),6.55(d,J=9.0Hz,1H),6.40(d,J=2.4Hz,1H),6.35(dd,J=8.2,2.4Hz,1H),6.10-6.02(m,1H),5.87(d,J=7.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.93(br s,1H),4.63(d,J=14.5Hz,1H),4.27-4.10(m,1H),3.97(d,J=9.0Hz,2H),3.88(d,J=14.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.76(s,3H)。
步驟2：((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 其係以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,9.9mL)中之((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(361mg,0.622mmol)、K2S2O8(225mg,0.833mmol)及K2HPO4(135mg,0.773mmol)、同時在90℃下加熱1.5h來製備。再添加K2S2O8(45mg,0.17mmol)及K2HPO4(26.9mg,0.155mmol)且再加熱30min，隨後將其濃縮，再溶解於EtOAc中，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(157mg,81%)。LCMS：Rt=0.56min,m/z=328.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3，化合物1：1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮.
步驟3，化合物2：1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)六氫吡啶-2-酮. 其係根據實例7、步驟3來製備。將((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(157mg,0.480mmol)於EtOH：MeOH(5：1,4.8mL)中之溶液抽空且 用氬(2×)回填，然後添加C載Pd(10%,33mg)。將系統抽空且用H2(3×)回填。攪拌3h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌且在真空中濃縮。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟4，化合物1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
步驟4，化合物2：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(60mg,0.14mmol)於DCM：DMF(1：1,1.4mL)中之漿液中添加DIPEA(73μL,0.42mmol)，然後添加HATU(63.7mg,0.168mmol)。20min後，向所得溶液中添加1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)吡啶-2(1H)-酮及1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)六氫吡啶-2-酮(90mg，約0.46mmol)於DCM(200μL)中之混合物溶液。攪拌1h後，將其在真空中濃縮且吸收於EtOAc中，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物1(54mg)及標題化合物2(30mg)。A-LCMS：Rt=0.88min,m/z=605.2(M+1)方法2m_酸性；B-LCMS：Rt=0.90min,m/z=609.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(151mg,0.986mmol)處理DMF(493μL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4- ((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(30mg,0.049mmol)。攪拌1h後，用EtOAc稀釋溶液，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.78min,m/z=689.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0116-472
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基六氫吡啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(34mg,0.049mmol)、DCM(494μL)及TFA(228μl,2.96mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(5.2mg,17%)。LCMS：Rt=0.63min,m/z=533.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.02(s,1H),5.27(d,J=5.5Hz,1H),4.59-4.48(m,1H),3.61(d,J=4.7Hz,2H),3.48-3.37(m,1H),3.32(d,J=5.9Hz,1H),2.34-2.13(m,2H),1.78-1.57(m,4H),1.39(br s,6H)。
實例15：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基) 胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0117-473
步驟1：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(205mg,1.34mmol)處理DMF(893μL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(54mg,0.089mmol)。攪拌1h後，用EtOAc稀釋溶液，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.76min,m/z=685.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸. 使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基吡啶-1(2H)-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(61mg,0.089mmol)、DCM(891μL)及TFA(412μl,5.35mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC (XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(9.6mg,19%)。LCMS：Rt=0.57min,m/z=529.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.59(d,J=6.7Hz,1H),7.56-7.48(m,1H),7.05(s,1H),6.50(d,J=9.0Hz,1H),6.39(t,J=6.7Hz,1H),5.30(d,J=5.9Hz,1H),4.47(dd,J=14.5,2.7Hz,1H),4.07(dd,J=14.5,8.6Hz,1H),1.37(s,3H),1.36(s,3H)。
實例16：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(5-胺基-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOH：MeOH(4：1,8.3mL)中之((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(250mg,0.830mmol)及C載Pd(10%,125mg)經3h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.13min,m/z=168.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2p,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)乙酸(129mg,0.299mmol)於DCM：DMF(1：1,3mL)中之漿液中添加DIPEA(157μL,0.897mmol)，然後添加HATU(136mg,0.359mmol)。20min後，向所得溶液中添加(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(50mg,0.299mmol)於DCM中之溶液。攪拌2h後，將其在真空中濃縮且吸收於EtOAc中，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃 縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(100mg,58%)。LCMS：Rt=0.82min,m/z=580.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.用SO3‧DMF(396mg,2.59mmol)處理DMF(1.7mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(100mg,0.173mmol)。攪拌1h後，用EtOAc稀釋溶液，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.74min,m/z=660.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(5-胺基-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0119-309
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(114mg,0.173mmol)、DCM(1.7mL)及TFA(800μl,10.4mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60 mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(46mg,46%)。LCMS：Rt=0.42min,m/z=504.0(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.42(d,J=8.6Hz,1H),8.65(s,1H),8.21(br s,2H),8.10(s,1H),5.22(dd,J=8.6,5.5Hz,1H),4.67-4.58(m,1H),4.56-4.47(m,1H),4.28(q,J=5.5Hz,1H),1.39(s,3H),1.34(s,3H)。
實例17：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)乙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)乙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(108mg,0.269mmol)於DCM(2.7mL)中之溶液中添加DIPEA(141μL,0.808mmol)，然後添加HATU(113mg,0.296mmol)。20min後，向所得溶液中添加(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(50mg,0.299mmol)於DCM中之溶液。攪拌1h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(106mg,72%)。LCMS：Rt=0.78min,m/z=551.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(278mg,1.82mmol)處理DMF(1.8mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)乙酸第三丁基酯(100mg, 0.182mmol)。攪拌1h後，用EtOAc稀釋溶液，用冰冷水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.71min,m/z=631.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)乙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0121-310
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(97mg,0.154mmol)、DCM(1.54mL)及TFA(711μl,9.23mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(22.7mg,22%)。LCMS：Rt=0.28min,m/z=475.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.50(d,J=9.0Hz,1H),8.56(s,1H),8.07(s,1H),6.80(s,1H),5.25(dd,J=9.0,5.9Hz,1H),4.69-4.49(m,4H),4.36(dt,J=7.4,4.9Hz,1H)。
實例18：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側 氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(其係根據Yamawaki等人Bioorg.Med.Chem.Lett. 2007,15,6716-6732來製備)(150mg,0.279mmol)於DCM：DMF(1：1,2.8mL)中之溶液中添加DIPEA(146μL,0.837mmol)，然後添加HATU(127mg,0.335mmol)。20min後，向所得溶液中添加(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(51mg,0.31mmol)於DCM中之溶液。攪拌1h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(147mg,77%)。LCMS：Rt=0.98min,m/z=687.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(328mg,2.14mmol)處理DMF(2.14mL)中之1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(147mg,0.214mmol)。攪拌1h後，用EtOAc稀釋溶液，用冰冷水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.89min,m/z=767.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0123-311
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(164mg,0.214mmol)、DCM(2.14mL)及TFA(989μl,12.8mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(50mg,41%)。LCMS：Rt=0.29min,m/z=501.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.31(d,J=9.0Hz,1H),8.59(s,1H),8.09(s,1H),6.83(s,1H),5.26(dd,J=9.0,5.5Hz,1H),4.67(dd,J=14.5,4.3Hz,1H),4.49-4.39(m,1H),4.33(ddd,J=7.4,5.5,4.3Hz,1H),1.34-1.27(m,4H)。
實例19：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOAc：MeOH(5：1,24mL)中之中間體T(1.20g,2.79mmol)及C載Pd(10%,830mg)經19h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.41min,m/z=297.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲 基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(其係根據Yamawaki等人Bioorg.Med.Chem.Lett. 2007,15,6716-6732來製備)(1.50g,2.79mmol)於DCM(15mL)中之溶液中添加DIPEA(1.22mL,6.98mmol)及HATU(1.11g,2.93mmol)。升溫至室溫後，((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(827mg,2.79mmol)於DCM：DMF(1.7：1,12.7mL)中之溶液。攪拌1h後，將其用DCM稀釋且用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-90%)純化粗殘餘物，以提供紫色油狀標題化合物(1.92g,84%)。LCMS：Rt=1.08min,m/z=816.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(3.60g,23.5mmol)處理DMF(20mL)中之1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.92g,2.35mmol)。攪拌30min後，用EtOAc/水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc萃取水溶液，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供紫色泡沫狀標題化合物(1.98g,94%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=896.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)- 2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0125-312
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(1.98g,2.21mmol)、DCM(18.4mL)及TFA(10.2mL,133mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化一半粗殘餘物，提供灰白色粉末狀標題化合物(300mg，約50%)。LCMS：Rt=0.29min,m/z=530.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.69(s,1H),7.04(br s,1H),5.43(d,J=5.5Hz,1H),4.93-4.78(m,2H),4.74-4.67(m,1H),4.22-4.12(m,2H),1.36-1.20(m,2H),1.20-1.00(m,2H)。
實例20：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(胍基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0126-313
在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸(582mg,1.10mmol)於DMF(12mL)中之溶液中添加吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(322mg,2.20mmol)及DIPEA(1.54mL,8.80mmol)。在室溫下攪拌16h後，用甲苯(60mL)稀釋溶液，使緻密油狀物析出。傾析頂層且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化剩餘油狀物，提供灰白色粉末狀標題化合物(240mg,37%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=572.2(M+H)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.59(s,1H),6.99(br s,1H),5.43(d,J=5.5Hz,1H),4.91-4.75(m,2H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.70(dd,J=8.2,6.3Hz,1H),4.41-4.34(m,2H),1.20(br s,2H),1.05(br s,2H)。亦獲得E-異構物。LCMS：Rt=0.33min,m/z=572.2(M+H)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.58(s,1H),7.46(br.s.,1H),5.45(br.s.,1H),4.84(s,3H),4.37(s,2H),1.33-1.08(m,4H)。.
實例21：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺 基)氧基)乙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)乙酸第三丁基酯. 向(Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(100mg,0.249mmol)、中間體D(51mg,0.27mmol)及HATU(123mg,0.324mmol)於DMF(1.25mL)中之溶液中添加DIPEA(131μL,0.747mmol)。攪拌4h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由急驟層析(0-10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(118mg,83%)。LCMS：Rt=0.81min,m/z=569.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3S,4R)-3-((Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(159mg,1.04mmol)處理DMF(2.14mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)乙酸第三丁基酯(118mg,0.208mmol)。攪拌30min後，用EtOAc稀釋溶液，用冰冷鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.72min,m/z=649.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)乙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0128-314
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-((2-(第三丁氧基)-2-側氧基乙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(135mg,0.208mmol)、DCM(1.04mL)及TFA(801μl,10.4mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(25mg,23%)。LCMS：Rt=0.25min,m/z=493.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.41(d,J=9.1Hz,1H)6.86(s,1H)5.24(dd,J=9.0,5.8Hz,1H)4.62(s,2H)4.20-4.11(m,3H)3.72-3.63(m,2H)3.40-3.31(m,2H假設；被水遮住)。
實例22：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(854mg,1.59mmol)、中間體D(324mg,1.75mmol)及HATU(785mg,2.07mmol)於DMF(7.9mL)中之溶液中添加DIPEA(832μL,4.77mmol)。攪拌1h後，將其傾倒至水中且用EtOAc萃取。 將鹽水添加至水層中，且將其進一步用EtOAc(3×)萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(0-10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供米色泡沫狀標題化合物(1.09g,97%)。LCMS：Rt=0.97min,m/z=705.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，用SO3‧DMF(448mg,2.84mmol)處理DMF(7.0mL)中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.00g,1.42mmol)。在室溫下攪拌2h後，將溶液傾倒至冰冷鹽水中且用EtOAc(3×)萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層且在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.90min,m/z=785.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0129-315
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(1.10g,1.40mmol)、DCM(7.0mL)及TFA(5.39mL,70.0mmol)實施酸介導之去保護之一般 程序。在室溫下1h後再添加TFA(3.24mL,42.0mmol)，且再30min後用DCM稀釋溶液並在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(178mg,23%)。LCMS：Rt=0.30min,m/z=518.9(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.27(d,J=9.0Hz,1H)6.92(s,1H)5.23(dd,J=9.1,5.7Hz,1H)4.12-4.23(m,3H)3.72-3.62(m,2H假設；被水遮住)3.61-3.52(m,1H假設；被水遮住)3.26(dd,J=14.5,5.9Hz,1H)1.36(s,4H)。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.23(s,1H),5.48(d,J=5.8Hz,1H),4.71-4.65(m,1H),4.44(t,J=8.2Hz,2H),3.89-3.73(m,3H),3.54(dd,J=14.9,4.9Hz,1H),1.65-1.56(m,2H),1.56-1.46(m,2H)。
實例23：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在室溫下，將中間體L(500mg,0.949mmol)及(R)-環氧丙烷(996μl,14.2mmol)於DCM(1.9ml)中之溶液攪拌16h，隨後觀察到沈澱。再添加(R)-環氧丙烷(332μl,4.75mmol)。再3h後，再添加(R)-環氧丙烷(500μl,7.14mmol)。再攪拌24h後，將其在真空中濃縮且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(185mg,33%)。LCMS：Rt=0.82min,m/z=585.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(185mg,0.316mmol)於氯仿(3.16mL)中之溶液中添加CDI(257mg,1.58mmol)。在室溫下攪拌20min後，用EtOAc/水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc萃取水層並經Na2SO4乾燥合併之有機層，且在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM,0-100%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(81mg,42%)。LCMS：Rt=0.92min,m/z=611.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(203mg,1.33mmol)處理DMF(1.33mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(81mg,0.133mmol)。在室溫下攪拌20min後，用EtOAc/鹽水稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，提供固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.84min,m/z=691.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸
Figure 104109243-A0202-12-0132-316
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-甲基-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(92mg,0.133mmol)、DCM(1.33mL)及TFA(615μL,7.98mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(18.6mg,23%)。LCMS：Rt=0.39min,m/z=535.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.29(d,J=8.8Hz,1H),6.85(s,1H),5.22(dd,J=8.8,5.7Hz,1H),4.55(dt,J=13.5,6.5Hz,1H),4.15(q,J=6.0Hz,1H),3.72-3.63(m,2H),3.34-3.27(m,2H),1.46(s,3H),1.42(s,3H),1.28(d,J=6.3Hz,3H)。
實例24：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胍基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0132-317
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)- 2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(30.1mg,0.055mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(16.1mg,0.110mmol)於DMF(548μl)中之溶液中添加DIPEA(38.3μl,0.219mmol)。在室溫下攪拌5h後，在真空中濃縮溶液且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化，提供白色粉末狀標題化合物(17.5mg,49%)。LCMS：Rt=0.30min,m/z=592.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 6.97(s,1H),5.31(d,J=5.9Hz,1H),4.74(dtd,J=9.3,5.9,3.2Hz,1H),4.55(ddd,J=9.2,5.9,3.1Hz,1H),3.86(t,J=9.3Hz,1H),3.66(dd,J=15.0,9.5Hz,1H),3.53(dd,J=15.5,3.2Hz,1H),3.47-3.34(m,3H),1.39(s,3H),1.37(s,3H)。
實例25：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
步驟1：(((R)-3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係以與實例4、步驟3類似之方式、使用EtOH：MeOH(5：1,3mL)中之中間體U(1.16g,2.28mmol)及C載Pd(10%,246mg)經19h製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟2：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)-噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(1.29g,2.28mmol)及HATU(909mg,2.39mmol)於DMF：DCM(3：1,9.0mL)中之溶液中添加DIPEA(1.0mL,5.72mmol)。在0℃下攪拌15min後，添 加(((R)-3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-5-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(715mg,2.28mmol)於DMF：DCM(1：1,9mL)中之溶液，然後添加DMF(1.5mL)洗滌液。在室溫下1.2h後，將其用EtOAc稀釋且用LiCl(5%水溶液)洗滌。用EtOAc(3×)萃取水層，且用LiCl(5%水溶液)、NaHCO3(飽和水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，5%-90%)純化粗殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(1.357g,72%)。LCMS：Rt=1.04min,m/z=834.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)-甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，用SO3‧DMF(748mg,4.88mmol)處理DMF(8.1mL)中之1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)-噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.357g,1.627mmol)。在室溫下攪拌2h後，用EtOAc/LiCl(5%水溶液)稀釋溶液且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層，且用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.96min,m/z=914.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0135-318
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)-甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(725mg,0.794mmol)、DCM(8.0mL)及TFA(3.7mL,48.0mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(231mg,52%)。LCMS：Rt=0.41min,m/z=548.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.18(d,J=8.8Hz,1H),8.00(t,J=5.8Hz,3H),6.83(s,1H),5.22(dd,J=8.8,5.9Hz,1H),4.68(tdd,J=9.0,5.8,3.4Hz,1H),4.24(ddd,J=9.3,5.9,3.6Hz,1H),3.75(t,J=8.8Hz,1H假設；被水遮住),3.61(dd,J=8.7,5.8Hz,1H假設；被水遮住),3.41(dd,J=14.7,9.0Hz,1H),3.30(dd,J=14.7,3.7Hz,1H),3.25-3.05(m,2H),1.40-1.27(m,4H)。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.18(d,J=2.4Hz,1H),5.45(d,J=5.8Hz,1H),5.02-4.93(m,1H),4.70(ddd,J=9.2,5.8,3.7Hz,1H),4.04(t,J=9.2Hz,1H),3.78(dd,J=15.0,9.0Hz,1H),3.60-3.56(m,1H),3.54(dd,J=11.3,3.6Hz,1H),3.40(s,1H),3.38(d,J=2.0Hz,1H),1.57-1.49(m,2H),1.49-1.40(m,2H)。
實例26：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胍基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0136-319
向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷-甲酸(0.795mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(234.8mg,1.602mmol)於DMF(7.0mL)中之溶液中添加DIPEA(1.20mL,8.06mmol)。在室溫下攪拌19h後，在真空中濃縮溶液且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化，提供白色粉末狀標題化合物(177mg,37%)。LCMS：Rt=0.47min,m/z=590.1(M+H)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.15(d,J=8.9Hz,1H),7.62(br s,1H),7.24(s,3H),6.81(s,1H),5.23(dd,J=8.9,5.9Hz,1H),4.60-4.51(m,1H),4.23(ddd,J=9.0,5.8,3.7Hz,1H),3.70(t,J=8.8Hz,1H),3.52(dd,J=8.8,5.4Hz,1H),3.49-3.44(m,1H),3.43-3.34(m,3H),1.38-1.24(m,4H)。
實例27：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 向碳載鈀(823mg,0.774mmol)於EtOAc/MeOH(5：1,16.8mL)中之懸浮液中一次性添加中間體s(1.11g,2.58mmol)。將系統抽空且用H2(3×)回填。攪拌19h後，用EtOAc稀釋混合物，經由矽藻土過濾，用MeOH-EtOAe(20%,100mL ×3)洗滌且在真空中濃縮，提供灰白色粉末狀粗標題化合物(730mg)。LCMS：Rt=0.37min,m/z=297.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(1.32g,2.46mmol)於DCM(12mL)中之漿液中添加DIPEA(1.08mL,6.16mmol)，然後添加HATU(0.984g,2.59mmol)。將反應混合物升溫至室溫，且添加((1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(0.73g,2.5mmol)於DCM：DMF(1.7：1,9.6mL)中之溶液。攪拌1.3h後，觀察到色彩自黃色變成深紫色，隨後將其用DCM稀釋，用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-90%)純化粗殘餘物，提供紫色泡沫狀標題化合物(1.62g,81%)。LCMS：Rt=1.05min,m/z=816.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.58g,1.94mmol)於DMF(15mL)中之溶液中添加SO3‧DMF複合物(2.97g,19.4mmol)。攪拌45min後，將其用EtOAc(120mL)、鹽水(80mL)、水(40mL)稀釋且分離各層。用EtOAc(2×20mL)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，以提 供紫色泡沫狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.96min,m/z=896.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0138-320
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(1.74g,1.94mmol)、DCM(19.4mL)及TFA(8.95mL,116mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。在室溫下3h後，將其冷卻至0℃且再添加TFA(200μL,2.6mmol)，隨後將其升溫至室溫。在室溫下再1h後，將其冷卻至0℃且再添加TFA(200μL,2.6mmol)，亦升溫至室溫。在室溫下再1h後，將其用DCM稀釋且在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化一半粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(140mg，約23%)。LCMS：Rt=0.27min,m/z=530.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.07(s,1H),7.08-6.99(m,1H)5.42-5.31(m,1H),4.88-4.74(m,2H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),4.74-4.68(m,1H),4.20(s,2H),1.36-1.23(m,2H),1.23-1.07(m,2H)。
實例28：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(胍基甲基)- 1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0139-321
向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2 oxo亞乙基)胺基)氧基)環丙烷-甲酸(559mg,1.06mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(310mg,2.12mmol)於DMF(12mL)中之溶液中添加DIPEA(1.48mL,8.45mmol)。在室溫下攪拌16h後，用甲苯(20mL)稀釋溶液，使緻密油狀物析出。傾析頂層且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化剩餘油狀物，提供白色粉末狀標題化合物(240mg,39%)。LCMS：Rt=0.28min,m/z=572.0(M+H)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.09(s,1H),7.18(s,1H),5.52(d,J=5.4Hz,1H),4.97(dd,J=14.1,5.5Hz,1H),4.91(q,J=5.5Hz,1H),4.84-4.76(m,1H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),4.55(s,2H),1.49-1.36(m,2H),1.34-1.23(m,2H)。亦獲得E-異構物。LCMS：Rt=0.32min,m/z=572.0(M+H)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.37(d,J=9.6Hz,1H),8.11(s,1H),7.41(s,1H),7.13(s,2H),6.50(s,1H),5.18(dd,J=9.6,5.3Hz,1H),4.97(d,J=13.5Hz,1H),4.76-4.58(m,1H), 4.52(dd,J=16.11,7.70Hz,1H),4.26-4.05(m,2H),1.86-2.08(m,1 H),1.34-1.07(m,6 H)。
實例29：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸.
步驟1：(R)-2-氯丙酸第三丁基酯. 其係根據Wright等人Tetrahedron Lett. 1997,38,7345來製備。向500mL玻璃彈殼中裝填硫酸鎂(4.21g,35.0mmol)及DCM(43.8mL)。在劇烈攪拌的同時，向此懸浮液中逐滴添加硫酸(486μL,8.75mmol)。攪拌15min後，添加(R)-2-氯丙酸(950mg,8.75mmol)，然後添加第三丁醇(4.20ml,43.8mmol)。將彈殼密封且在室溫下攪拌19h，隨後小心地添加碳酸氫鈉(飽和水溶液，100mL)，此時所有固體已溶解。分離各層且用DCM(2×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮(20℃浴，50毫巴)，以提供淺粉色油狀標題化合物(1.36g,94%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 4.29(q,J=6.9Hz,1H)1.65(d,J=6.9Hz,3H)1.49(s,9H)。
步驟2：(S)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)氧基)丙酸第三丁基酯. 其係根據Yamawaki等人Bioorg.Med.Chem. 2007,15,6716來製備。向N-羥基酞醯亞胺(517mg,3.17mmol)及碳酸鉀(657mg,4.76mmol)於DMF(4.5mL)中之漿液中添加(R)-2-氯丙酸第三丁基酯(522mg,3.17mmol)。漿液變成黏性後再添加DMF(4.5mL)。攪拌5d後，將其用EtOAc稀釋且傾倒至LiCl溶液(5%水溶液，90mL)中。用EtOAc(3×)萃取水層且用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-50%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(348mg,38%)。LCMS：Rt=0.89min,m/z=314.0(M+23)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz, CDCl3)δ 7.87-7.81(m,2H),7.75(dd,J=5.5,3.1Hz,2H),4.79(q,J=6.8Hz,1H),1.61(s,3H),1.46(s,9H)。
步驟3：(S)-2-(胺基氧基)丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(S)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)氧基)丙酸第三丁基酯(73.3mg,0.252mmol)於DCM(體積：500μL)中之溶液中添加甲基肼(13.5μL,0.252mmol)。在0℃下攪拌3h後，過濾掉固體且在真空中濃縮濾液，提供透明油狀標題化合物(假設定量)。
步驟4：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向中間體E(62.2mg,0.148mmol)於MeOH(1mL)中之溶液中添加(S)-2-(胺基氧基)丙酸第三丁基酯(24mg,0.15mmol)於DCM(300μL)中之溶液。攪拌6d後，添加乙酸(8.5μl,0.15mmol)。4d後，再添加乙酸(8.5μl,0.15mmol)。再24h後，將其在真空中部分濃縮，然後用EtOAc/水稀釋。分離各層且用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(MeOH-DCM,0-10%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(20.2mg,24%)。LCMS：Rt=0.81min,m/z=565.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((S)-1-(第三丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸第三丁基酯(20.2mg,0.036mmol)於DMF(400μl)中之溶液中添加SO3‧DMF(54.8mg,0.358mmol)。攪拌2.5h後，將其用EtOAc/LiCl(5%水溶液)稀釋且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層，且 用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.74min,m/z=645.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0142-322
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((S)-1-(第三丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(23mg,0.036mmol)、DCM(357μL)及TFA(165μL,2.14mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(7.9mg,36%)。LCMS：Rt=0.40min,m/z=489.0(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.69(s,1H),8.18(s,1H),7.20(s,1H),5.54(d,J=5.7Hz,1H),4.96-4.67(m,4H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),1.44(d,J=7.0Hz,3H)。
實例30：(R)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸.
步驟1：(S)-2-氯丙酸第三丁基酯. 其係根據Wright等人Tetrahedron Lett. 1997,38,7345來製備。向500mL玻璃彈殼中裝填硫酸鎂(21.7g,181mmol)及DCM(182mL)。在劇烈攪拌的同時，向此 懸浮液中逐滴添加硫酸(2.5mL,45mmol)。攪拌15min後，添加(S)-2-氯丙酸(5.0g,45mmol)，然後添加第三丁醇(21.6ml,226mmol)。將彈殼密封且在室溫下攪拌19h，隨後將其冷卻至0℃，且小心地添加碳酸氫鈉(飽和水溶液，350mL)，此時所有固體已溶解。分離各層且用DCM(2×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮(20℃浴，50毫巴)，以提供淺黃色油狀標題化合物(7.64g,96%)(93%純度)。1H NMR數據與先前製備之鏡像異構物完全匹配。
步驟2：(R)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)氧基)丙酸第三丁基酯. 向N-羥基酞醯亞胺(3.71g,22.1mmol)及碳酸鉀(4.58g,33.1rnmol)於DMF(55mL)中之漿液中添加(S)-2-氯丙酸第三丁基酯(4.30g,24.3mmol)。攪拌72h後，將漿液加熱至40℃且再保持16h，此時將其用EtOAc/LiCl(5%水溶液)稀釋並分離各層。用EtOAc(2×)萃取水層，且用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供灰白色固體狀標題化合物(5.45g,85%)。LCMS：Rt=0.88min,m/z=313.9(M+23)方法2m_酸性。
步驟3：(R)-2-(胺基氧基)丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(R)-2-((1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)氧基)丙酸第三丁基酯(69.6mg,0.239mmol)於DCM(478μL)中之溶液中添加甲基肼(12.8μL,0.239mmol)。在0℃下攪拌3h後，過濾掉固體且在真空中濃縮濾液，提供透明油狀標題化合物(假設定量)。
步驟4：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((R)-1-(第三丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向中間體F(110mg,0.219mmol)於MeOH(2mL)中之溶液中添加(R)-2-(胺基氧基)丙酸第三丁基酯(38.5mg,0.239mmol)於DCM：MeOH (2：1,600μL)中之溶液，然後添加DCM(400μL)洗滌液。攪拌16h後，將其在真空中部分濃縮，然後用EtOAc/水稀釋且分離各層。用EtOAc(2×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮，提供白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.74min,m/z=645.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：(R)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0144-323
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((R)-1-(第三丁氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(141mg,0.219mmol)、DCM(2.19mL)及TFA(1.0mL,13mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(35.5mg,29%)。LCMS：Rt=0.42min,m/z=489.0(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.58(s,1H),8.06(s,1H),7.06(s,1H),5.41(d,J=5.6Hz,1H),4.81-4.52(m,4H假設；被溶劑峰部分遮住),1.29(d,J=7.0Hz,3H)。
實例31：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)-苯氧基)丙酸.
步驟1：4-(4-((S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯. 向(S,Z)-2-(((1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(1-(第三丁氧基羰基)六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(其係根據WO2013110643來製備，72mg,0.085mmol)、(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮(15.7mg,0.094mmol)及HATU(42.2mg,0.111mmol)於DMF(854μL)中之溶液中添加DIPEA(44.8μL,0.256mmol)。攪拌3h後，將其用EtOAc稀釋，用水、NaHCO3(飽和水溶液)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供橄欖色膜狀標題化合物(82mg,87%)。LCMS：Rt=0.97min,m/z=992.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((S)-1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(1-(第三丁氧基羰基)六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(45.9mg,0.299mmol)處理DMF(500μL)中之4-(4-((S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(99mg,0.10mmol)。攪拌40min後，再添加SO3‧DMF(45.9mg,0.299mmol)。1.3h後，再添加SO3‧DMF(45.9mg,0.299mmol)。再攪拌30min後，將溶液傾倒至冰冷鹽水中且用EtOAc萃取。分離各層並經Na2SO4乾燥有機層且在真空中濃縮，提供灰白色固體狀標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.97min,m/z=1073.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)-苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0146-324
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-((((S)-1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(1-(第三丁氧基羰基)六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(0.085mmol)、DCM(850μL)及TFA(327μL,4.25mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(12mg,17%)。LCMS：Rt=0.41min,m/z=706.2(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.55(d,J=7.4Hz,1H)9.40(br s,1H)9.01(br s,1H)8.53-8.71(m,1H)8.41(s,1H)7.92(s,1H)7.67(d,J=9.0Hz,2H)7.21(br s,2H)7.03(d,J=7.8Hz,1H)6.76(s,1H)5.17-5.24(m,1H)4.94(d,J=3.9Hz,1H)4.46-4.53(m,2H)4.37-4.45(m,1H)4.25-4.32(m,1H)3.88(br s,1H)3.39(br s,4H)2.92(t,J=11.5Hz,2H)2.05-2.14(m,2H)1.79(d,J=11.0Hz,2H)。
實例32：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丁烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0147-325
LCMS：Rt=0.58min,m/z=515.0(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.75(s,1H),8.22(s,1H),7.23(s,1H),5.56(d,J=5.6Hz,1H),4.95-4.85(m,2H),4.86-4.82(m,1H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),4.78-4.70(m,1H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),2.61-2.46(m,2H),2.38-2.27(m,2H),2.00-1.89(m,2H)。
實例33：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(氰基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0147-326
LCMS：Rt=0.57min,m/z=542.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.19(d,J=9.0Hz,1H),7.71(s,1H),6.65(s,1H),5.43-5.23(m,1H),4.93-4.84(m,1H),4.76-4.67(m,1H),4.47(ddd,J=8.71,5.4,3.5Hz,1H),4.07(d,J=1.6Hz,2H),1.35(s,6H)。
實例34：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-胺基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0148-327
LCMS：Rt=0.50min,m/z=517.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.54(d,J=2.5Hz,1H),6.97(s,1H),6.00(d,J=2.4Hz,1H),5.40(d,J=5.8Hz,1H),4.69(q,J=5.5Hz,1H),4.43(d,J=5.4Hz,2H),1.31(d,J=1.8Hz,6H)。
實例35：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-胺基-1H-吡唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0148-328
LCMS：Rt=0.39min,m/z=517.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.86(s,1H),7.56(s,1H),6.90(s,1H),5.35(d,J=5.9Hz,1H),4.72-4.67(m,1H),4.54-4.49(m,2H),1.28(s,3H),1.27(s,3H)。
實例36：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-((1-甲基吡咯啶-1-鎓-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0149-329
LCMS：Rt=0.55min,m/z=600.3(M+)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.50(s,1H),9.34(s,1H),7.94(s,1H),7.27(s,2H),6.72(s,1H),5.33(dd,J=8.6,5.6Hz,1H),4.82(dd,J=15.1,9.2Hz,1H),4.69-4.53(m,4H),3.60-3.50(m,2H),3.46-3.33(m,2H),2.95(s,3H),2.14-2.00(m,4H),1.35(s,3H),1.29(s,3H)。
實例37：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((胺甲醯基氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0149-330
LCMS：Rt=0.53min,m/z=576.0(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.23(d,J=9.3Hz,1H),7.70(s,1H),6.74(s,1H),6.59(br s,2H),5.31(dd,J=9.2,5.4Hz,1H),4.94(s,2H),4.91(dd,J=14.3,3.2Hz,1H),4.72(dd,J=14.2,9.0Hz,1H),4.42(ddd,J=8.8,5.5,3.1Hz,1H),1.38(s,3H),1.37(s,3H)。
實例38：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-1-磺基-4-((4-((磺基氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0150-331
LCMS：Rt=0.43min,m/z=612.9(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.71(s,1H),6.96-7.11(m,1H),5.40(d,J=5.5Hz,1H),4.98(s,2H),4.93-4.65(m 3H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住),1.34(s,6H)。
實例39：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2-胺基-4,5-二氫-1H-咪唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0150-332
LCMS：Rt=0.30min,m/z=520.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 12.63(br s,1H)9.12(d,J=8.6Hz,1H)7.74(d,J=15.3Hz,3H)7.31-7.49(m,2H)6.77(s,1H)5.22(dd,J=8.5,5.8Hz,1H)4.24(dt,J=7.1,5.3Hz,1H)3.76-3.85(m,1H)3.59-3.73(m,2H)3.43-3.55(m,3H)1.43(s,3H)1.41,(s,3H)。
實例40：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((E)-2-(氰基亞胺基)咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0151-333
LCMS：Rt=0.33min,m/z=544.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.29(d,J=9.1Hz,1H)7.74(br s,1H)6.85(s,1H)5.20(dd,J=8.8,5.7Hz,1H)4.10-4.17(m,1H)3.72-3.81(m,1H)3.62(dd,J=14.7,6.8Hz,1H)3.48-3.56(m,1H)3.31-3.42(m,3H)1.43(s,3H)1.41,(s,3H)。
實例41：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(2-胺基乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸
Figure 104109243-A0202-12-0151-334
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向中間體K(100mg,0.158mmol)及丁-3-炔-1-基胺基甲酸第三丁基酯(54mg,0.32mmol)於DMSO：水：第三丁醇 (1：1：1,3mL)中之混合物中添加CuSO4(13mg,0.079mmol)及L-抗壞血酸鈉(32mg,0.16mmol)。過夜攪拌後，用EtOAc及水稀釋混合物。分離各層且用EtOAc(3×)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。用二乙醚/戊烷洗滌粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(80mg,63%)。LCMS：m/z=799.8(M-1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(2-胺基乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸. 在0℃下，向(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(110mg,0.137mmol)於DCM(1.4mL)中之溶液中添加TFA：DCM(1：1,4.2mL)，然後添加三乙基矽烷(65μL,0.411mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min且緩慢升溫至室溫。在室溫下2h後，將其在真空中濃縮且與MTBE：庚烷(1：2)一起研磨，隨後觀察到固體。藉由反相製備型HPLC(C18管柱，含有0.1%甲酸改質劑之乙腈：水溶劑系統)純化粗固體，以提供標題化合物(5mg,7%)；LCMS：m/z=543.9(M-1)；1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ 8.06(s,1H),6.95(s,1H),5.44(d,J=5.8Hz,1H),4.66(q,J=6.0Hz,1H),4.95-4.83(m,2H假設；被水遮住),3.29-3.24(m,2H),3.07(t,J=6.5Hz,2H),1.54(s,3H),1.52(s,3H)。
實例42：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(2-(六氫吡嗪-1-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(2-(4-(第三丁氧基羰基)六氫吡嗪-1-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1- 基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向中間體K(90mg,0.142mmol)及4-(丁-3-炔-1-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(34mg,0.14mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,2.16mL)中之溶液中添加CuSO4(2.5mg,0.016mmol)及L-抗壞血酸鈉(5mg,0.15mmol)。過夜攪拌後，用EtOAc及水稀釋混合物。分離各層且用EtOAc(3×)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。用二乙醚/戊烷洗滌粗殘餘物，提供標題化合物(120mg，粗製物)；LCMS：m/z=871.4(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(2-(六氫吡嗪-1-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸
Figure 104109243-A0202-12-0153-335
在0℃下，向(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(2-(4-(第三丁氧基羰基)六氫吡嗪-1-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(120mg,0.138mmol)於DCM(1.4mL)中之溶液中添加TFA：DCM(1：1,4.2mL)，然後添加三乙基矽烷(65μL,0.411mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min且緩慢升溫至室溫。在室溫下2h後，將其在真空中濃縮且與MTBE：庚烷(1：2)一起研磨，隨後觀察到固體。藉由反相製備型HPLC(C18管柱，含有0.1%甲酸改質劑之乙腈：水溶劑系統)純化粗固體，以提供標題化合物(9.3mg,11%)；LCMS：m/z=612.8(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO- d 6)δ 9.67(s,1H),7.99(s,1H),7.30(s,2H),6.66(s,1H),5.27(dd,J=8.8,5.5Hz,1H),4.82(dd,J=14.7,4.0Hz,1H),4.68(dd,J=14.7,6.6Hz,1H),4.24(td,J=5.9,4.2Hz,1H),3.10(t,J=5.2Hz,4H),2.76(t,J=7.0Hz,2H),2.64-2.54(m,6H),1.37(s,3H),1.30(s,3H)。
實例43：(3S,4R)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((4-((2-(三甲基銨基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
步驟1：2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)-N,N,N-三甲基-2-側氧基乙銨溴化物. 向中間體K(100mg,0.158mmol)及N,N,N-三甲基-2-側氧基-2-(丙-2-炔-1-基胺基)乙銨溴化物(50mg,0.212mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,3mL)中之溶液中添加CuSO4(2.5mg,0.016mmol)及L-抗壞血酸鈉(5mg,0.15mmol)。將混合物攪拌過夜且用冰冷水驟冷，隨後過濾所得固體並在真空中乾燥，以提供粗標題化合物(50mg,40%)；LCMS：m/z=784.85(M-1)。
步驟2：(3S,4R)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((4-((2-(三甲基銨基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0154-336
在0℃下，向2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基- 1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)-N,N,N-三甲基-2-側氧基乙銨溴化物(50mg,0.0635mmol)於DCM(640μL)中之漿液中添加TFA：DCM(1：1,1.92mL)，然後添加三乙基矽烷(31μL,0.19mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min且緩慢升溫至室溫。在室溫下2h後，將其在真空中濃縮且與MTBE：庚烷(1：2)一起研磨，隨後觀察到固體。藉由反相製備型HPLC(C18管柱，含有0.1%甲酸改質劑之乙腈：水溶劑系統)純化粗固體，以提供標題化合物(11mg,27%)。LCMS：m/z=630.9(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.40(d,J=8.6Hz,1H),9.06(t,J=5.6Hz,1H),8.06(s,1H),7.32(s,2H),6.71(s,1H),5.28(dd,J=8.6,5.5Hz,1H),4.89-4.64(m,2H),4.38(t,J=5.1Hz,2H),4.22(q,J=5.3Hz,1H),4.08(s,2H),3.22(s,9H),1.33(s,3H),1.26(s,3H)。
實例44：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向中間體K(100mg,0.158mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,1.5mL)中之溶液中添加N-Boc-炔丙基胺(50mg,0.321mmol)、CuSO4(13mg,0.079mmol)及L-抗壞血酸鈉(48mg,0.237mmol)。使所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌3h。然後將其用EtOAc及鹽水稀釋並分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，然後在真空中濃縮，以提供粗標題化合物(120mg,96%)；LCMS：m/z=787.95 (M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0156-337
在0℃下，向(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(120mg,0.15mmol)於DCM(1.5mL)中之漿液中添加TFA：DCM(1：1,4.5mL)，然後添加三乙基矽烷(72μL,0.45mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min且緩慢升溫至室溫。在室溫下2h後，將其在真空中濃縮且與MTBE：庚烷(1：2)一起研磨，隨後觀察到固體。藉由反相製備型HPLC(C18管柱，含有0.1%甲酸改質劑之乙腈：水溶劑系統)純化粗固體，以提供標題化合物(11.3mg,14%)。LCMS：m/z=528.9(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.47(d,J=8.5Hz,1H),8.25(s,1H),7.30(s,2H),6.75(s,1H),5.27(dd,J=8.6,5.6Hz,1H),4.82(qd,J=14.9,5.0Hz,2H),4.23(q,J=5.1Hz,1H),4.09(s,2H),1.37(s,3H),1.32(s,3H)。
實例45：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(胍基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0157-338
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(銨基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸三氟乙酸鹽(150mg,0.122mmol)於DCM(10mL)中之溶液中添加DIPEA(100μL,0.610mmol)，然後添加N,N-二-Boc-1H-吡唑-1-甲脒(42mg,0.134mmol)。在室溫下將溶液攪拌過夜，隨後將其在真空中濃縮，添加水且將其凍乾72h，以提供粗標題化合物(210mg，假設定量轉化率)。LCMS：m/z=772.1(M-1)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(胍基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
酸介導之去保護之一般程序. 在0℃下，向2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(0.15mmol，假設定量轉化率)於DCM(1.5mL)中之溶液中添加TFA(689μL,9mmol)。10min後移除冷卻 浴。4h後，在室溫下將其用DCM(1.5mL)稀釋且在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(X-Bridge,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之乙腈-水，1mL/min)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(2.7mg,3%)。LCMS：m/z=572.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.91(s,1H),6.80(s,1H),5.31(d,J=5.2Hz,1H),4.54(s,1H),4.35(s,2H),3.50-3.35(m,2H),1.19(s,3H),1.18(s,3H)。
實例46：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向中間體K(100mg,0.158mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,1mL)中之溶液中添加2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)-N-(丙-2-炔-1-基)乙醯胺(47mg,0.24mmol)、CuSO4(13mg,0.079mmol)及L-抗壞血酸鈉(48mg,0.237mmol)。將所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌3h。然後將其用EtOAc及鹽水稀釋並分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，然後在真空中濃縮，以提供粗標題化合物(110mg,84%)；LCMS：m/z=829.1(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0159-339
在0℃下，向(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2-(4-甲基六氫吡嗪-1-基)乙醯胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(120mg,0.13mmol)於DCM(1.3mL)中之漿液中添加TFA：DCM(1：1,3.9mL)，然後添加三乙基矽烷(62μL,0.39mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min且緩慢升溫至室溫。在室溫下2h後，將其在真空中濃縮且與MTBE：庚烷(1：2)一起研磨，隨後觀察到固體。藉由反相製備型HPLC(C18管柱，含有0.1%甲酸改質劑之乙腈-水溶劑系統)純化粗固體，以提供標題化合物(9mg)。LCMS：m/z=669.75(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.40(d,J=8.7Hz,1H),8.25(s,1H),8.00(s,1H),7.33(s,2H),6.71(s,1H),5.29(dd,J=8.7,5.6Hz,1H),4.88-4.60(m,2H),4.34(d,J=5.7Hz,2H),4.24(q,J=5.3Hz,1H),3.20-2.87(m,8H),2.77(s,3H),1.34(s,3H),1.30(s,3H)。
實例47：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(羥基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向中間體K(126mg,0.20mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,1.5mL)中之溶液中添加炔丙基醇(24μL,0.40 mmol)、CuSO4(16mg,0.10mmol)及L-抗壞血酸鈉(59mg,0.30mmol)。將所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌3h。然後將其冷凍並凍乾。使用HP21樹脂(ACN-水，10%-100%)純化粗殘餘物，以提供淺棕色固體狀標題化合物(100mg,73%)；LCMS：m/z=687.1(M-1)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0160-340
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(羥基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(100mg,0.145mmol)、DCM(4mL)及TFA(1mL,13mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(T3,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之乙腈-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(22mg,29%)。LCMS：m/z=530.9(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 12.50(br s,1H),9.36(d,J=9.2Hz,1H),7.97(s,1H),7.50(br s,2H),6.70(s,1H),5.28(dd,J=8.8,5.2,Hz,1H),4.86(dd,J=14.4,4.0Hz,1H),4.69(dd,J=14.8,7.2Hz,1H),4.48(s,2H),4.27-4.21(m,1H),1.35(s,3H),1.34(s,3H)。
實例48：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-(1-甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
步驟1：4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽. 在0℃下，向中間體K(85mg,0.134mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,1.0mL)中之溶液中添加4-乙炔基-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽(72μL,0.27mmol)、CuSO4(11mg,0.067mmol)及L-抗壞血酸鈉(40mg,0.201mmol)。使所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌3h，隨後將其用水(5mL)稀釋。用水(2mL)洗滌所得沈澱並經由N2流乾燥，提供呈含有其N-磺醯基化氮雜環丁酮類似物之淺棕色固體狀混合物形式之標題化合物(80mg)；LCMS：m/z=748.1(M-1)。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(1-甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯. 用SO3‧DMF(80mg,0.52mmol)處理DMF(1mL)中之4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽(70mg,0.10mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16h，然後在真空中濃縮且藉由HP21樹脂(ACN-水，10%-100%)純化，提供米色固體狀標題化合物(24mg,31%)。LCMS：m/z=748.1(M-1)。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-(1-甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0162-341
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(1-甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯(24mg,0.032mmol)、DCM(1.2mL)及TFA(0.3mL,3.9mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XBridge,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(7.9mg,41%)。LCMS：m/z=592.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 8.76(s,1H),8.62(d,J=6.8Hz,2H),8.19(d,J=6.4Hz,2H),6.76(s,1H),5.42(d,J=5.2Hz,1H),4.98-4.81(m,2H；被殘餘溶劑峰部分遮住),4.66-4.54(m,1H假設：被殘餘溶劑峰遮住),4.22(s,3H),1.30(s,3H),1.27(s,3H)。
實例49：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-(1,3-二甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(1,3-二甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯. 在0℃下，向中間體K(120mg,0.19mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,1.5mL)中之溶液中添加4-乙炔基-1,3-二甲基吡啶-1-鎓三氟甲烷磺酸鹽(107mg,0.38mmol)、CuSO4(15mg,0.095mmol)及L-抗壞血酸鈉(56mg,0.285mmol)。使所得混合物 逐漸升溫至室溫且攪拌3h，隨後將其用水(10mL)稀釋。用水(5mL)洗滌所得沈澱並乾燥。使用HP21樹脂(ACN-水，10%-100%)純化粗殘餘物，提供淺棕色固體狀標題化合物(80mg,55%)；LCMS：m/z=762.2(M-1)。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-(1,3-二甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0163-342
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(1,3-二甲基吡啶-1-鎓-4-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯(24mg,0.032mmol)、DCM(1.2mL)及TFA(0.3mL,3.9mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(T3,30×150mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(12mg,62%)。LCMS：m/z=606.1(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 8.65(s,1H),8.57(s,1H),8,49(d,J=5.6Hz,1H),8.27(d,J=6.8Hz,1H),6.74(br s,1H),5.47(d,J=5.2Hz,1H),4.97-4.88(m,3H),4.21(s,3H),2.46(s,3H),1.30(s,3H),1.28(s,3H)。
實例50：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(三甲基矽基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向中間體J(120mg,0.19mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,2.0mL)中之溶液中添加三甲基矽基乙炔(100μL,0.724mmol)、CuSO4(29mg,0.181mmol)及L-抗壞血酸鈉(108mg,0.543mmol)。使所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌4h，隨後將其用鹽水(5mL)稀釋且用EtOAc(3×10mL)萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,7%)純化粗殘餘物，提供淺棕色固體狀標題化合物(170mg,72%)；LCMS：m/z=651.2(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係根據WO2013/028590中所述之方法來製備。向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(三甲基矽基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(140mg,0.261mmol)於THF(4mL)中之溶液中添加TBAF(1M於THF中，860μL,0.86mmol)。在室溫下攪拌16h後，再添加TBAF(1M於THF中，1.0mL,1.0mmol)。再攪拌48h後，在真空中濃縮溶液。經由矽膠層析(MeOH-DCM,7%)純化粗殘餘物，提供灰白色固體狀標題化合物(84mg,68%)。LCMS：m/z=579.2(M+1)。
步驟3：(2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(222mg,1.45mmol)處理DMF(2mL)中之2-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(84mg,0.145mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16h，然後用EtOAc(50mL)及水稀釋。分離各層且用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮，提供淺黃色固體狀粗標題化合物(84mg,88%)。LCMS：m/z=657.1(M-1)。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0165-343
使用(2R,3S)-2-((1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(80mg,0.121mmol)、DCM(4mL)及TFA(1mL,13mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(T3,30×150mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(12mg,20%)。LCMS：m/z=500.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.95(s,1H),7.67(s,1H),7.04(s,1H),5.38(d,J=5.6Hz,1H),4.88-4.80(m,1H),4.78-4.70(m,2H假設；被溶劑殘餘峰遮住),1.34(s,6H)。
實例51：1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H- 1,2,3-三唑-4-甲酸.
步驟1：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(第三丁氧基羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向中間體K(157mg,0.248mmol)於DMSO：水：第三丁醇之混合物(1：1：1,2.0mL)中之溶液中添加丙炔酸第三丁基酯(68μL,0.496mmol)、CuSO4(20mg,0.124mmol)及L-抗壞血酸鈉(198mg,0.372mmol)。將所得混合物逐漸升溫至室溫且攪拌3h，隨後將其用水(20mL)稀釋並用EtOAc(3×50mL)萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層，在真空中濃縮，溶解於水中且凍乾，提供淺黃色固體狀標題化合物(180mg,96%)；LCMS：m/z=759.3(M+1)。
步驟2：1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2-羧基丙-2-基)氧基)亞胺基)乙醯胺基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0166-344
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(第三丁氧基羰基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(180mg,0.237mmol)、DCM(8mL)及TFA(2mL,26mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(T3,30×150mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(35mg,27%)。LCMS：m/z= 544.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 8.43(s,1H),6.99(s,1H),5.38(d,J=5.2Hz,1H),4.92-4.71(m,3H；被溶劑殘餘峰部分遮住),1.33(s,6H)。
實例52：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
光延反應之一般程序. 在0℃下，向中間體H(300mg,0.569mmol)、((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(135mg,0.682mmol)及三苯基膦(178mg,0.682mmol)於THF(10mL)中之溶液中逐滴添加DIAD(145mg,0.682mmol)。在室溫下攪拌16h後，濃縮溶液且矽膠層析(MeOH-DCM,2%-5%)純化，提供黃色泡沫狀標題化合物(300mg,75%)。LCMS：m/z=706.2(M+1)。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(476mg,3.11mmol)處理DMF(5mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(220mg,0.311mmol)。在室溫下將溶液攪拌48h，然後在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供標題化合物(82mg,33%)。LCMS：m/z=786.2(M-1)。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0168-345
在室溫下，將(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(82mg,0.104mmol)與甲酸(2.0mL)一起攪拌5h，此會移除兩個Boc基團。在真空中濃縮後，將材料溶解於DCM(1.5mL)中，冷卻至0℃且用TFA(0.5mL,6.5mmol)處理1h，隨後將其在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(T3,30×150mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(17.2mg,31%)。LCMS：m/z=529.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.67(s,1H),6.92(s,1H),5.39(d,J=5.6Hz,1H),4.86-4.74(m,3H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.16(s,2H),1.25(s,3H),1.23(3H,s)。
實例53：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(胍基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0169-346
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(60mg,0.089mmol)及吡唑-1-甲醯胺鹽酸鹽(16mg,0.11mmol)於DMF(3mL)中之溶液中添加DIPEA(45μ.L,0.27mmol)。攪拌16h後，將溶液濃縮且用醚洗滌。藉由反相製備型HPLC(XBridge,30×150mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(7.5mg,15%)。LCMS：m/z=571.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.55(s,1H),6.78(s,1H),5.38(d,J=5.2Hz,1H),4.82-4.76(m,1H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.76-4.72(m,2H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.32(s,2H),1.15(s,3H),1.14(s,3H)。
實例54：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 使用中間體H(300mg,0.569mmol)、1,2,3-三唑(47mg,0.682mmol)、三苯基膦(178mg,0.682mmol)、DIAD(145mg,0.682mmol)及THF(10mL)實施光延反應之一般程序。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-5%)純化，提供黃色泡沫狀標題化合物(320mg,97%)。LCMS：m/z=579.2(M+1)。
步驟2：(2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三 丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(846mg,5.53mmol)處理DMF(5mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(320mg,0.553mmol)。在室溫下將溶液攪拌24h，然後在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供標題化合物(70mg,19%)。LCMS：m/z=657.1(M-1)。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0170-347
在室溫下，將(2R,3S)-2-((2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(70mg,0.11mmol)與甲酸(2.0mL)一起攪拌4h，然後在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(XBridge,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(8.1mg,15%)。LCMS：m/z=500.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.60(s,2H),6.94(s,1H),5.39(d,J=5.2Hz,1H),),4.83-4.78(m,2H),4.78-4.68(m,1H假設；被溶劑殘餘峰遮住),1.26(s,3H),1.25(s,3H)。
實例55：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 使用中間體H(300mg,0.569mmol)、4-甲基-1,2,3-三唑(83mg,0.683mmol)、三苯基膦(179mg,0.683mmol)、DIAD(138mg,0.648mmol)及THF(8mL)實施光延反應之一般程序。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-4%)純化，提供黃色泡沫狀標題化合物(160mg,47%)。LCMS：m/z=591(M-1)。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(413mg,2.70mmol)處理DMF(5mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(160mg,0.270mmol)。在室溫下將溶液攪拌16h，然後在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供標題化合物(77mg,43%)。LCMS：m/z=671.1(M-1)。
步驟3：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0172-348
在室溫下，將(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(67mg,0.10mmol)與甲酸(1.5mL)一起攪拌3.5h，然後在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(XBridge,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(13.7mg,27%)。LCMS：m/z=514.9(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.39(s,1H),6.94(s,1H),5.38(d,J=5.6Hz,1H),4.80-4.60(m,3H假設；被溶劑殘餘峰遮住),2.10(s,3H),1.26(s,3H),1.25(s,3H)。
實例56：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 將甲酸醯肼(27.4mg,0.456mmol)及原甲酸三乙酯(67.6mg,0.456mmol)於MeOH(5mL)中之溶液加熱至回流並保持4h。冷卻至40℃後，添加中間體L(120mg,0.228mmol)且將混合物加熱至回流並再保持20h。冷卻至室溫後，在真空中蒸發溶劑且將所得殘餘物溶解於EtOAc中，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(0-10% MeOH-EtOAc)純化粗殘餘物，提供泡沫狀標題化合物(95mg,72%)。 LCMS：m/z=529.1(M+1)。
步驟2：(2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(251mg,1.64mmol)處理DMF(2mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(95mg,0.16mmol)。在室溫下將溶液攪拌24h，隨後再添加SO3‧DMF(502mg,3.28mmol)且將溶液再攪拌72h。將其用水稀釋並用EtOAc(2×)萃取。用鹽水(2×)洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，提供固體狀標題化合物(77mg)。LCMS：m/z=657.1(M-1)。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0173-349
使用(2R,3S)-2-((4H-1,2,4-三唑-4-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(77mg,0.117mmol)、DCM(3mL)及TFA(1mL,13.0mmol)經2h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XBridge,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，1mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(5.6mg,10%)。LCMS：m/z=500.8 (M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 8.52(s,2H),6.90(s,1H),5.30(d,J=5.6Hz,1H),4.56(m,2H),4.42(q,1H),1.30(s,6H)。
實例57：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在室溫下，將中間體L(250mg,0.475mmol)及(R)-(環氧乙烷-2-基甲基)胺基甲酸第三丁基酯(410mg,2.38mmol)於DCM(3ml)中之溶液攪拌16h，然後在真空中濃縮。藉由矽膠層析(MeOH-DCM,4%-10%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(250mg,75%)。LCMS：m/z=698.1(M-1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(250mg,0.357mmol)於DCM(10mL)中之溶液中添加CDI(104mg,0.643mmol)。在15℃下攪拌2h後，在真空中濃縮溶液。經由矽膠層析(MeOH-DCM,3%-5%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(155mg,60%)。LCMS：m/z=724.0(M-1)。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)- 4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(130mg,0.854mmol)處理DMF(1mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(155mg,0.213mmol)。在室溫下將溶液攪拌2h，隨後將其在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供白色固體狀標題化合物(160mg,93%)。LCMS：m/z=804.0(M-1)。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0175-350
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((R)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(160mg,0.199mmol)、DCM(1.5mL)及TFA(500μL,6.49mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(85.8mg,78%)。LCMS：m/z=548.0(M+1)；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 6.93(s,1H),5.23(d,J=5.6Hz,1H),4.76-4.69(m,1H),4.54-4.49(m,1H),3.84(t,J=9.6Hz,1H),3.56(dd,J=14.8,9.6 Hz,1H),3.41-3.34(m,2H),3.21-3.11(m,2H),1.34(s,3H),1.32(s,3H)。
實例58：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在室溫下，將中間體L(400mg,0.760mmol)及(S)-(環氧乙烷-2-基甲基)胺基甲酸第三丁基酯(658mg,3.80mmol)於DCM(4ml)中之溶液攪拌16h，然後在真空中濃縮。藉由矽膠層析(MeOH-DCM,4%-10%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(390mg,73%)。LCMS：m/z=700.1(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(390mg,0.557mmol)於DCM(20mL)中之溶液中添加CDI(162mg,1.00mmol)。在15℃下攪拌2h後，在真空中濃縮溶液。經由矽膠層析(MeOH-DCM,3%-5%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(168mg,41%)。LCMS：m/z=726.1(M+1)。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((S)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)- 4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 用SO3‧DMF(142mg,0.926mmol)處理DMF(1mL)中之2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(168mg,0.231mmol)。在室溫下將溶液攪拌2h，隨後將其在真空中濃縮且用HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供白色固體狀標題化合物(155mg,83%)。LCMS：m/z=804.0(M-1)。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0177-351
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-(((S)-5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(155mg,0.192mmol)、DCM(1.5mL)及TFA(500μL,6.49mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化一半粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(21.8mg，約82%)。LCMS：m/z=547.8(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 6.96(s,1H),5.27(d,J=6.0Hz,1H),4.80-4.78(m,1H),4.52-4.47(m,1H),3.75-3.66(m,2H),3.49-3.45(m,1H),3.32-3.16(m,3H),1.37(s,3H),1.35(s,3H)。
實例59：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(胍基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0178-352
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(0.096mmol)及吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(21mg,0.144mmol)於DMF(3mL)中之溶液中添加DIPEA(100μL,0.576mmol)。在室溫下攪拌16h後，在真空中濃縮溶液且用醚洗滌。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(29mg,51%)。LCMS m/z=589.8(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 6.93(s,1H),5.26(d,J=6.0Hz,1H),4.65-4.55(m,1H),4.52-4.45(m,1H),3.69-3.61(m,2H),3.44-3.30(m,4H),1.34(s,3H),1.32(s,3H)。
實例60：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1，化合物A：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
步驟1，化合物B：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
在攪拌的同時，將甲烷磺酸((2S,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基酯(3.74g,8.0mmol)、3-甲基-1H-1,2,4-三唑(2.00g,24.0mmol)、K2CO3(6.64g,48.0mmol)及NaI(2.88g,17.2mmol)於DMF(16mL)中製成漿液，且加熱至70℃。24h後，在真空中濃縮混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%)純化粗殘餘物，以提供灰白色固體狀標題化合物(1.64g，合併44%)(不可分離之混合物)。LCMS：m/z=466.2(M+1)。
步驟2，化合物A：((2R,3S)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
步驟2，化合物B：((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯.
其係根據Mastalerz等人J.Med.Chem. 1988,31,1190來製備。向化合物A/B、步驟1(1.60g,3.44mmol)於ACN：水(2：1,45mL)中之溶液中添加K2S2O8(1.86g,6.88mmol)，然後添加K2HPO4(1.50g,8.60mmol)。將所得混合物加熱至90℃並保持4h，隨後將其冷卻至室溫，然後用EtOAc稀釋且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，以提供白色固體狀標題化合物(混合物，670mg,62%)。經由對掌性HPLC(Chiralcel-OJ,2×25cm,EtOH-己烷，18%)進一步純化混合物，提供化合物A(250mg)及化合物B(240mg)。
步驟3：(3S,4R)-3-胺基-4-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮.
將((2R,3S)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(250mg,0.79mmol)及C載Pd(10%,100mg)於MeOH(20mL)中之漿液抽空且用H2(3×)回填，使最終壓力達到35psi。攪拌2h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌且在真空中濃 縮濾液。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(310mg,0.72mmol)、(3S,4R)-3-胺基-4-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(130mg,0.72mmol)及EDCI(150mg,0.79mmol)於DMF(5mL)中之溶液中添加吡啶(64μL,0.79mmol)。在室溫下攪拌24h後，再添加(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(310mg,0.72mmol)及EDCI(150mg,0.79mmol)以及HOBt(110mg,0.79mmol)及DIPEA(250μL,1.44mmol)。再攪拌16h後，將其在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,5%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(230mg,54%)。LCMS：m/z=593.0(M+1)。
步驟S：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.用SO3‧DMF(594mg,3.88mmol)處理DMF(4mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(230mg,0.388mmol)。攪拌24h後，在真空中濃縮溶液。使用HP21樹脂(ACN-水，5%-50%)純化粗殘餘物，提供淺黃色固體狀標題化合物(100mg,38%)。LCMS：m/z=673.1(M+1)。
步驟6：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-甲基-1H- 1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0181-353
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(100mg,0.149mmol)、DCM(4.0mL)及TFA(1.0mL,13.0mmol)經3h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(50mg,65%)。LCMS：m/z=514.7(M-1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ 9.40(d,J=8.4Hz,1H),8.72(br s,1H),6.78(s,1H),5.25(dd,J=8.8,5.6Hz,1H),4.61(dd,J=14.4,5.2Hz,1H),4.47(dd,J=14.4,6.0Hz,1H),4.33(dd,J=6.0,5.2Hz,1H),2.30(s,3H),1.42(s,3H),1.38(s,3H)。
實例61：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮.
將((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(240mg,0.76mmol)及C載Pd(10%,100mg)於MeOH(20mL)中之漿液抽空且用H2(3×)回填，使最終壓力達到35 psi。攪拌2h後，經矽藻土過濾混合物，用MeOH洗滌且在真空中濃縮濾液。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(310mg,0.72mmol),(3S,4R)-3-胺基-4-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(130mg,0.72mmol)及EDCI(150mg,0.79mmol)於DMF(5mL)中之溶液中添加吡啶(64μL,0.79mmol)。在室溫下攪拌24h後，將其在真空中濃縮。經由矽膠層析(10% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(190mg,45%)。LCMS：m/z=593.0(M+1)。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.用SO3‧DMF(466mg,3.04mmol)處理DMF(4mL)中之2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(180mg,0.304mmol)。攪拌24h後，在真空中濃縮溶液。使用HP21樹脂(ACN-水，0-50%)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(80mg,39%)。LCMS：m/z=671.0(M+1)。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0183-354
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(80mg,0.119mmol)、DCM(4.0mL)及TFA(1.0mL,13.0mmol)經3h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(15mg,24%)。LCMS：m/z=514.8(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.86(s,1H),6.89(s,1H),5.36-5.28(m,1H),4.78-4.66(m,1H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.54-4.44(m,1H),4.42-4.30(m,1H),2.35(s,3H),1.25(s,6H)。
實例62：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(亞胺代甲酰胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0183-355
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸(100mg,0.159mmol)及甲亞胺乙酯 鹽酸鹽(17.4mg,0.159mmol)於DMF(1mL)中之溶液中添加DIPEA(41mg,0.32mmol)。攪拌2h後，再添加甲亞胺乙酯鹽酸鹽(9.0mg,0.082mmol)及DIPEA(20mg,0.16mmol)。再4h後，濃縮溶液且用醚洗滌。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供呈脒互變異構物之混合物形式之標題化合物(15.5mg,18%)。LCMS：m/z=556.8(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.73(s,0.4H),7.65(s,0.6H),7.57(m,1H),6.83(s,1H),5.37(d,J=5.6Hz,1H),4.80-4.61(m,3H假設；被溶劑殘餘峰遮住)4.48(s,0.4H),4.45(s,0.6H),1.17(s,3H),1.15(s,3H)。
實例63：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(羥基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((S)-9-羥基-2,2-二甲基-5,7-二氧雜-11-氮雜-2-矽十二烷-12-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(胺基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(500mg,0.95mmol)於DCM(5mL)中之溶液中添加(S)-三甲基(2-((環氧乙烷-2-基甲氧基)甲氧基)乙基)矽烷(485mg,2.38mmol)。在室溫下攪拌12h後，再添加2.5當量(S)-三甲基(2-((環氧乙烷-2-基甲氧基)甲氧基)乙基)矽烷。在室溫下再攪拌12h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(155mg,22%)。LCMS：m/z=731.4(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧 基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-(((S)-2-側氧基-5-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲氧基)甲基)噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 在0℃下，向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((S)-9-羥基-2,2-二甲基-5,7-二氧雜-11-氮雜-2-矽十二烷-12-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(155mg,0.21mmol)於DCM(10mL)中之溶液中添加CDI(62mg,0.38mmol)。在<15℃下攪拌2h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,3%-5%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(130mg,81%)。LCMS：m/z=755.3(M-1)。
步驟3：(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-(((S)-2-側氧基-5-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲氧基)甲基)噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 向2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-(((S)-2-側氧基-5-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲氧基)甲基)噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(130mg,0.17mmol)於DMF(1mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(105mg,0.69mmol)。在室溫下攪拌2h後，在真空中濃縮反應混合物。經由HP21樹脂(CH3CN-水，10%-50%)純化粗混合物，以提供標題化合物(140mg,97%)。LCMS：m/z=705.42(M-SEM)。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(羥基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0186-356
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-(((S)-2-側氧基-5-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲氧基)甲基)噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(140mg,0.17mmol)、DCM(2mL)及TFA(1mL)經3h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(28mg,30%)。LCMS：m/z=549.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.00(s,1H),5.23(d,J=5.2Hz,1H),4.80-4.70(m,1H),4.45-4.40(m,1H),4.10-3.95(m,2H),3.77(t,J=9.2Hz,1H),3.49(t,J=7.6Hz,2H),3.39(m,1H),1.39(s,3H),1.38(s,3H)。
實例64：(S)-2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
步驟1：(4-(2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)乙醯基)噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係以與中間體E類似之方式、使用DMF(20mL)中之中間體D(0.776g,4.19mmol),2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙酸(1.141g,4.19mmol)、HATU(3.071g,8.08mmol)、然後使用DIPEA(3.66mL,20.95mmol)來製備。LCMS：Rt=0.60min,m/z=440.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3S,4R)-3-(2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係以與中間體F類似之方式、使用DMF(5.7mL)中之(4-(2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)乙醯基)噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(500mg,1.138mmol)、DMF：SO3(523mg,3.41mmol)來製備。LC/MS：Rt=0.54min；m/z=520.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(1-(第三丁氧基羰基)六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 向(3S,4R)-3-(2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(170mg,0.328mmol)於CHCl3(2mL，比率：1)及EtOH(6mL，比率：3)中之溶液中添加(S)-4-(4-(2-(胺基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(其係根據WO2013110643來製備，193mg,0.328mmol)。攪拌2h後，添加AcOH(19μL,0.328mmol)。12h後，再添加(3S,4R)-3-(2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(170mg,0.328mmol)於3：1 CHCl3：EtOH中之溶液。攪拌45h後，將其在真空中濃縮，且使用HP21樹脂(10%-100% ACN-水)純化粗殘餘物，提供灰白色固體狀標題化合物(117mg,33%)。LCMS：Rt=0.96min,m/z=1091.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(S)-2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0188-357
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(1-(第三丁氧基羰基)六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(117mg,0.107mmol)、DCM(5.3mL)及TFA(0.413mL,5.37mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(23mg,28%)。LC/MS：Rt=0.42min,m/z=724.5(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 9.53(d,J=7.57Hz,1 H),9.43-9.36(m,2H),9.01(br s,1 H),8.53-8.36(m,2H),7.72(d,J=8.5Hz,3H),7.26(br s,2H),7.15(d,J=8.8Hz,2H),6.82(s,1H),5.19(dd,J=8.7,5.8Hz,1H),5.02(t,J=3.8Hz,1H),4.51-4.42(m,2H),4.12-3.96(m,3H),3.90-3.81(m,1H),3.73(d,J=7.3Hz,1H),3.69-3.62(m,1H),3.58-3.53(m,1H),3.20-3.16(m,1H),2.98-2.85(m,1H)2.13-2.04(m,1H),1.85-1.72(m,1H)。
實例65：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-((胺磺醯基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0189-358
其係以與實例53類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸TFA鹽粗化合物(200mg,0.318mmol)、氯磺醯基胺基甲酸第三丁基酯(68mg,0.318mmol)、DIPEA(113mL,0.636mmol)及DMF(1mL)來製備。LCMS：m/z=609.1(M-1)。1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.65(s,1H),6.98(s,1H),5.40(d,J=6.0Hz,1H),4.85-4.83(m,1H),4.76-4.74(m,2H),4.13(s,2H),1.26(s,3H),1.25(s,3H)。
氯磺醯基胺基甲酸第三丁基酯之製備：向第三丁醇(3.2g,36.9mmol)於苯(13mL)中之溶液中添加氯磺酸異氰酸酯(3.5mL,36.6mmol)。在室溫下攪拌2h後，用己烷驟冷反應混合物。在冰浴中冷卻混合物，獲得白色固體沈澱。將固體過濾，用己烷洗滌，乾燥且立即用於下一步驟中(3.2g,41%)。
實例66：(S)-3-(4-(N-(2-胺基乙基)甲脒基)苯氧基)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0189-359
其係以與實例31類似之方式、使用((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯及(S,Z)-2-(((1-(二苯甲基氧基)-3-(4-(N-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)甲脒基)苯氧基)-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(其係根據WO2013110643來製備)來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.25min,m/z=695.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.48(s,3H),8.99(s,1H),8.21(s,4H),7.89(s,4H),7.82-7.77(m,2H),7.71(s,1H),7.22(dd,J=10.5,8.2Hz,4H),6.72(s,1H),5.33(dd,J=9.3,5.5Hz,1H),4.99(dd,J=5.7,3.3Hz,1H),4.90(ddd,J=12.8,8.0,3.9Hz,1H),4.78-4.68(m,2H),4.51-4.36(m,3H),4.08(s,3H),3.13(s,2H)。
實例67：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(2-胺基乙基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0190-360
其係以與實例66類似之方式、使用(3S,4R)-4-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-3-胺基氮雜環丁-2-酮來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.25min,m/z=666.1(M+1)方法2m_酸性。
實例68：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(氮雜環丁-3-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0191-361
其係以與實例64類似之方式、使用中間體F及(S)-3-(4-(2-(胺基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.35min,m/z=678.2(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ 13.68-13.03(m,1 H),10.02(d,J=5.9Hz,1 H),9.57-9.51(m,2 H),9.05(br s,1 H),8.91-8.76(m,2 H),8.39(s,1 H),7.91(s,1 H),7.69(d,J=8.5Hz,2 H),7.30(br s,2 H),6.92(d,J=8.8Hz,2 H),6.80(s,1H),5.12-5.04(m,2H),4.74-4.66(m,1H),4.54(d,J=8.8Hz,1H),4.49-4.35(m,3H),4.31-4.16(m,5 H)。
實例69：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基丙基)胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸化合物與甲酸(1：1).
Figure 104109243-A0202-12-0192-362
其係以與實例28類似之方式、使用1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸(20mg,0.038mmol)、(3溴丙基)胺基甲酸第三丁基酯(60mg,0.252mmol)、DIPEA(0.1mL,0.572mmol)及DMF(0,5mL)來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,19×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.29min,m/z=587.1(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(500MHz,D2O)δ 8.31(s,1H),8.14(s,1H),6.93(s,1H),5.32(d,J=5.1Hz,1H),4.86-4.78(m,2H),4.73-4.66(m,1H假設；被溶劑殘餘峰遮住),4.29(s,2H),3.04-3.01(m,2H),2.97-2.92(m,2H),1.96(p,J=7.9Hz,2H),1.22-1.11(m,2H),1.10-0.96(m,2H)。
實例70：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-胺基乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,5,8-三氮雜十二烷基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(100mg,0.176mmol)於DCE(1.8mL)中之溶液中添加(2-側氧基乙基)胺基甲酸第三丁 基酯(27.9mg,0.176mmol)。攪拌2h後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(112mg,0.527mmol)。12h後，用飽和NaHCO3驟冷反應混合物且用EtOAc萃取。用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。其係以粗製物用於步驟2中。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係以與實例3步驟3類似之方式、使用2-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,5,8-三氮雜十二烷基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(135mg,0.189mmol)、CDI(46.1mg,0.284mmol)、TEA(132μl,0.947mmol)及氯仿(1.9mL)來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LC/MS：Rt=1.02min,m/z=739.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係以與實例3、步驟4類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(60mg,0.081mmol)、SO3‧DMF(124mg,0.812mmol)、DMF(812μl)來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LC/MS：Rt=0.94min,m/z=819.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-胺基乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4- 基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0194-363
使用DCM(500μL)中之(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(42mg,0.051mmol)、TFA(237μl,3.08mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.2mg,4%)。LC/MS：Rt=0.35min,m/z=563.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 1H NMR 6.99(s,1 H),5.32(d,J=5.9Hz,1 H),4.56-4.50(m,1 H),3.70(dd,J=15.1,9.6Hz,1 H),3.59-3.49(m,1 H),3.463.30(m,4 H),3.29-3.20(m,2 H),3.08-3.02(m,2 H),1.40(s,3 H),1.38(s,3 H)。
實例71：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-((S)-吡咯啶-3-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0194-364
其係以與實例64類似之方式、使用中間體F及(R)-3-(4-((S)-2-(胺 基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.39min,m/z=692.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ 9.52(d,J=7.6Hz,3 H),9.11(br s,1 H),8.92-8.78(m,2 H),8.40(s,1 H),7.92(s,1 H),7.67(d,J=8.8Hz,2 H),7.30(br s,2 H),6.90(d,J=9.1Hz,2 H),6.80(s,1 H),5.11-5.04(m,2 H),4.58-4.51(m,1 H),4.48-4.35(m,4 H),4.25-4.20(m,1 H),3.53-3.44(m,1 H),2.35-2.25(m,1 H),2.20-2.11(m,1 H)。
實例72：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(羥基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-(苄基氧基)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係以與實例63步驟1類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(胺基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(200mg,0.38mmol)、(R)-2-((苄基氧基)甲基)環氧乙烷(623mg,3.8mmol)、DCM(2mL)來製備。經由矽膠層析(MeOH-DCM,4%-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(126mg,48%)。LCMS：m/z=691.3(M+1)。
步驟2：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 其係以與實例63步驟2類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2- ((((R)-3-(苄基氧基)-2-羥基丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(126mg,0.182mmol)、CDI(53mg,0.33mmol)、DCM(5mL)來製備。經由矽膠層析(MeOH-DCM,3%-5%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(76mg,58%)。LCMS：m/z=715.3(M-1)。
步驟3：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯. 其係以與實例63步驟3類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(76mg,0.11mmol)、SO3‧DMF(65mg,0.42mmol)、DMF(1mL)來製備。經由HP21樹脂(CH3CN-水，10%-50%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(80mg,95%)。LCMS：m/z=797.3(M+1)。
步驟4：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(羥基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0197-365
向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(2R,3S)-2-(((R)-5-((苄基氧基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯(80mg,0.1mmol)於DCM(10mL)中之溶液中添加BCl3(1M於DCM中，0.6mL)。在室溫下攪拌15min後，用EtOH驟冷反應混合物且在真空中濃縮。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(1.1mg,2%)。LCMS：m/z=549.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.96(s,1H),5.29(d,J=5.2Hz,1H),4.48(m,2H),3.73-3.35(m,6H),1.36(s,3H),1.35(s,3H)。
實例73：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-((R)-吡咯啶-3-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0197-366
其係以與實例64類似之方式、使用中間體F及(S)-3-(4-((S)-2-(胺基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,30×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.39min,m/z=692.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ 9.52(d,J=7.6Hz,3 H),9.11(br s,1 H),8.92-8.78(m,2 H),8.40(s,1 H),7.92(s,1 H)7.67(d,J=8.8Hz,2 H),7.30(br s,2 H),6.90(d,J=9.1Hz,2 H),6.80(s,1 H),5.11-5.04(m,2 H),4.51-4.58(m,1 H),4.48-4.35(m,4 H),4.25-4.19(m,1 H),3.53-3.44(m,1 H),2.35-2.26(m,1 H),2.29-2.11(m,1 H)。
實例74：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-胺甲醯基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0198-367
其係以與實例4類似之方式、使用(1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-羰基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：m/z=544.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 8.41(s,1H),6.94(s,1H),5.36-5.32(m,1H),4.75-4.50(m,3H，被溶劑殘餘峰部分遮住),1.23(s,6H)。
實例75：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(5-胺基-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基 亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0199-368
其係以與實例31類似之方式、使用2-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-側氧基乙酸來製備。LCMS：Rt=0.305min,m/z=707.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,D2O)：δ 8.02(s,1 H),7.66(s,1 H),7.43(d,J=8.8Hz,2 H),6.77(d,J=9.1Hz,2 H),5.24(d,J=5.9Hz,1 H),5.10-5.06(m,1 H),4.44-4.29(m,4 H),4.01-3.88(m,1 H),3.49(d,J=13.6Hz,2 H),3.21-2.99(m,2 H),2.33-2.23(m,2H),1.92-1.80(m,2 H)。
實例76：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-胺基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0199-369
其係以與實例1類似之方式、使用(S)-4-溴-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丁酸甲酯來製備。LCMS：m/z=532.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.99(s,1H),5.31(d,J=6.0Hz,1H),4.70-4.58(m,1H),4.02(t,J=9.6及9.2Hz,1H),3.85(dd,J=9.6及9.2Hz,1H),3.59(m,1H),3.47(m,1H),3.34(dd,J=14.8及2.4Hz,1H),2.48(m,1H),2.01(m, 1H),1.39(s,3H),1.37(s,3H)。
實例77：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-((1r,3S)-3-胺基環丁基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0200-370
其係以與實例31類似之方式、使用(S)-2-(胺基氧基)-3-(4-(N-((1r,3S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)環丁基)甲脒基)苯氧基)丙酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.39min,m/z=692.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.83-9.76(m,1H),9.51(d,J=8.1Hz,1H),9.33(br s,1H),8.71(br s,1H),8.39(s,1H),8.05-7.97(m,3H),7.91(s,1H),7.66(d,J=8.5Hz,2H),7.30(br s,2H),6.89(d,J=9.2Hz,2H),6.80(s,1H),5.13-5.04(m,2H),4.55-4.49(m,1H),4.47-4.33(m,3H),4.24-4.16(m,2H),3.97-3.86(m,1H),2.69-2.52(m,4H)。
實例78：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(3-胺基丙基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0200-371
其係以與實例67類似之方式、使用(S)-2-(胺基氧基)-3-(4-(N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)甲脒基)苯氧基)丙酸二苯甲基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。LCMS：Rt=0.38min,m/z=680.2(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.59-9.47(m,2H),9.34(s,1H),8.88(s,1H),8.37(s,1H),7.90(s,1H),7.79-7.67(m,3H),7.66-7.62(m,2H),7.29(s,2H),6.94-6.88(m,2H),6.80(s,1H),5.10(dd,J=8.1,5.5Hz,1H),5.06(dd,J=5.0,2.7Hz,1H),4.56-4.48(m,1H),4.48-4.35(m,3H),4.26-4.19(m,1H),2.90(dd,J=8.9,5.5Hz,3H),1.96-1.83(m,2H)。
實例79：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-((6-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)吡啶-3-基)氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0201-372
其係以與實例68類似之方式、使用中間體F及(R)-4-(5-(2-(胺基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)吡啶脒基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。LCMS：Rt=0.29min,m/z=707.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.71(d,J=7.8Hz,1 H),9.58(br s,1 H),9.24(br s,1 H),8.45-8.40(m,1H),8.36(s,1H),8.27-8.21(m,1H),8.12(d,J=8.6Hz,1 H),7.84(s,1 H),7.65-7.59(m,1H),7.24(br s,2 H),6.77(s,1 H),6.50(s,1 H),5.18-5.11(m,1H),5.09-5.03(m,1H),4.64-4.58(m,1H),4.55-4.49(m, 1H),4.48-4.42(m,1H),4.23(q,J=5.5Hz,1H),3.96-3.85(m,1H),3.45-3.40(m,2H),2.94-2.83(m,2H),2.10-2.02(m,2H),1.92-1.81(m,2H)。
實例80：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-胍基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0202-373
其係以與實例20類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-胺基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸及1H-吡唑-1-甲脒HCl來製備。LCMS：m/z=576.2(M+1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.95(s,1H),5.31(d,J=6.0Hz,1H),4.72-4.57(m,1H),4.27(t,J=9.6及9.2Hz,1H),3.85(dd,J=9.6Hz,1H),3.59(t,J=9.2,8.8Hz,1H),3.49(q,1H),3.34(dd,1H),2.46(m,1H),1.88(m,1H),1.35(s,3H),1.33(s,3H)。
實例81：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-((1R,5S,6s)-3-氮雜二環[3.1.0]己-6-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0203-374
其係以與實例31類似之方式、使用(1R,5S,6s)-6-(4-((R)-2-(胺基氧基)-3-(二苯甲基氧基)-3-側氧基丙氧基)苯甲脒基)-3-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-甲酸第三丁基酯水合物來製備。LCMS：Rt=0.42min,m/z=704.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.70(br s,1H),9.56-9.45(m,2H),9.14-8.96(m,2H),8.54(br s,1H),8.36(s,1H),7.88(s,1H),7.63(d,J=7.9Hz,2H),7.28(br s,2H),6.88(d,J=9.6Hz,2H),6.78(s,1H),5.10-5.02(m,2H),4.54-4.48(m,1H),4.45-4.35(m,3H),4.23-4.17(m,1H),3.61-3.54(m,4H),2.73-2.68(m,1H),2.25(br s,2H)。
實例82：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((E)-2-甲氧基乙烯基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在-78℃下，向(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(10.34g,30.2mmol)於THF(100mL)中之懸浮液中緩慢添加KHMDS(於甲苯中)(66.3ml,33.1mmol)。攪拌30min後，在-78℃下將上文製備之葉立德溶液(ylide soln)添加至((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-甲醯基-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(3g,7.53mmol)於THF(38ml)中之溶液中。3h後，用飽和NaHCO3(60mL)驟冷反應混合物，且將其攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，且分 離各層。用EtOAc(2×)萃取水層，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-60%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.6g,49%)以及反式異構物(0.8g,25%)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=427.0(M+1)。方法2m_酸性。
步驟2：((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-(2-側氧基乙基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((E)-2-甲氧基乙烯基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(1.58g,3.70mmol)於二噁烷(37ml)中之溶液中添加HCl(7.4ml,7.4mmol)，且加熱至50℃並保持4h。冷卻至室溫後，用飽和NaHCO3驟冷反應混合物且用EtOAc(3×)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，用Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-80%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.89g,58%)。LCMS：Rt=0.86min,m/z=413.0(M+1)。方法2m_酸性。
步驟3：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((E)-2-(羥基亞胺基)乙基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向羥基胺鹽酸鹽(160mg,2.25mmol)及碳酸氫鈉(2.4mL,2.23mmol)於水(6mL)中之溶液中添加((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-(2-側氧基乙基)氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(886mg,2.15mmol)於EtOH(200μL)中之溶液，然後添加EtOH(200μL)洗滌液。攪拌20h後，在真空中部分濃縮反應混合物且於DCM與鹽水之間分配。用DCM(2×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.76min,m/z=428.1(M+1)。方法2m_酸性。
步驟4：在0℃下，向((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((E)-2-(羥基亞胺基)乙基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(403mg,0.94mmol)及N-Boc-炔丙基胺(156mg,0.97mmol)於DCM(12mL)中之 溶液中逐滴添加次氯酸鈉(5%,2.6mL,1.89mmol)。攪拌18h後，用DCM及水稀釋反應混合物。用DCM(2×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-80%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(127mg,23%)。LCMS：Rt=0.96min,m/z=581.2(M+1)。方法2m_酸性。
步驟5：向來自步驟4之中間體(279mg,0.48mmol)於乙腈(4.6mL，比率：2)及水(2.3mL，比率：1)中之溶液中添加過二硫酸鉀(169mg,0.62mmol)及磷酸氫二鉀(192mg,1.1mmol)，且加熱至90℃。3h後，再添加過二硫酸鉀(81mg,0.3mmol)，並加熱至90℃。再加熱2h後，用NaHCO3驟冷反應混合物且用EtOAc(3×)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-80%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(71mg,34%)。LCMS：Rt=0.77min,m/z=431.0(M+1)。方法2m_酸性。
步驟6：((Z)-4-胺基-5-((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)-2-側氧基戊-3-烯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯. 向來自步驟5之中間體(84mg,0.20mmol)於EtOH(1.9mL，比率：2)及MeOH(0.93mL，比率：1)中之溶液中添加Pd-C(22mg,20μmol)，且用N2吹掃。為燒瓶配備H2氣球，抽空且用H2(3×)回填。1.5h後，經由矽藻土過濾反應混合物，用MeOH(3×)洗滌。在真空中濃縮濾液且與甲苯共沸。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.39min,m/z=229.1(M+1)。方法2m_酸性。
步驟7：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-胺基-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-側氧基戊-2-烯-1-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
其係以與實例4步驟4類似之方式、使用(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)- 2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(100mg,0.23mmol)、HATU(89mg,0.23mmol)、DIPEA(68μl,0.39mmol)、((Z)-4-胺基-5-((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)-2-側氧基戊-3-烯-1-基)胺基甲酸第三丁基酯(58mg,0.19mmol)及DCM：DMF(3：1,2mL)來製備。79mg.LCMS：Rt=0.98min,m/z=710.4(M+1)。方法2m_酸性。
步驟8：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯. 向2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-胺基-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-側氧基戊-2-烯-1-基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(77mg,0.108mmol))於乙醇(0.4mL)中之溶液中添加羥基胺鹽酸鹽(19mg,0.27mmol)及碳酸鉀(18mg,0.13mmol)，且加熱至60℃。6h後，在真空中部分濃縮反應混合物並於EtOAc與水之間分配。用EtOAc(3×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由管柱層析(EtOAc-庚烷，5%-90%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(13mg,17%)。LCMS：Rt=1.04min,m/z=708.3(M+1)。方法2m_酸性。
步驟9：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.
其係以實例4步驟5與類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基) 胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(13mg,18μmol)、SO3‧DMF(16.8mg,0.11mmol)、DMF(200μl)來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.94min,m/z=788.4(M+1)。方法2m_酸性。
步驟10：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(胺基甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0207-375
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((5-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)異噁唑-3-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(10.9mg,14μmol)、TFA(70μl,0.91mmol)及DCM(0.2mL)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(Xselect CSH,19×100mm,5μM,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.7mg,17%)。LCMS：Rt=0.48min,m/z=532.1(M+1)。方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O)δ 6.85(s,1H),6.52(s,1H),5.38(d,J=5.6Hz,1H),4.26(s,2H),3.22(dd,J=16.2,7.1Hz,2H),3.10(dd,J=16.2,6.0Hz,1H),1.33(s,3H),1.29(s,3H)。
實例83：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((苄基(甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0208-376
其係以與實例52類似之方式、使用N-((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-N-甲基-1-苯基甲胺來製備。LCMS：m/z=634.1(M-1)。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.79(s,1H),7.40-7.31(m,5H),6.89(s,1H),5.43(d,J=5.2Hz,1H),4.96-4.89(m,1H),4.87-4.83(m,2H),4.70-4.60(m,2H,與D2O信號部分重疊),4.36(s,2H),2.64(s,3H),1.28(s,3H),1.27(s,3H)。
實例84：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-(N-(六氫吡啶-4-基)甲脒基)苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0208-377
其係以與實例31類似之方式、使用((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.44min,m/z=735.3(M+1)。方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.63-9.48(m,1H),9.45-9.33(m,2H),9.02(s,1H),8.56(br s,1H),8.44(br s,1H),8.22(s,3H),7.74-7.67(m,3H),7.26(br s,2H),7.19(d,J=8.6Hz,2H),6.72(s,1H),5.38-5.30 (m,1H),5.01-4.96(m,1H),4.93-4.86(m,1H),4.77-4.68(m,1H),4.49-4.35(m,3H),4.08(br s,2H),3.85(br s,2H),2.96-2.84(m,2H),2.13-2.03(m,2H),1.83-1.70(m,2H)。
實例85：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((氮雜環丁-3-基甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(218mg,0.39mmol)於DCM(5mL)及DMF(1ml)中之溶液中添加DIPEA(0.11mL,0.61mmol)、HATU(170mg,0.446mmol)及(3S,4R)-3-胺基-4-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(80mg,0.41mmol)。在0℃下攪拌1h後，用DCM稀釋反應混合物，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-5%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(250mg,86%)。LCMS：Rt=0.98min,m/z=717.3(M+1)。方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(440mg,0.614mmol)於THF(4mL)中之溶液中添加MnO2(1.2g,13.51mmol)。在室溫下攪拌20h後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，用THF(20mL)洗滌。濃縮 濾液，且經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-5%)純化殘餘物，以提供標題化合物(300mg,68%)。LCMS：Rt=1.04min,m/z=715.3(M+H)。方法2m_酸性。
步驟3：3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(150mg,0.21mmol)於DCE(4ml)中之溶液中添加3-(胺基甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(78mg,0.420mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉(66.7mg,0.315mmol)及DMF(0.4mL)。在室溫下攪拌3h後，用飽和NaHCO3驟冷反應混合物且用10% EtOH/DCM(40mL)稀釋。分離有機層，用Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.55min,m/z=885.5(M+1)。方法2m_酸性。
步驟4：3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯. 向3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(186mg,0.21mmol)及飽和NaHCO3(4ml,0.210mmol)於DCM(4mL)中之溶液中添加Boc2O(137mg,0.630mmol)。在室溫下攪拌12h後，分離各反應混合物層。用DCM萃取水層，且用鹽水洗滌合併之有機層， 經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(EtOAc-庚烷，50%-80%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(120mg,58%)。LCMS：Rt=1.24min,m/z=985.7(M+1)。方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)((1-(第三丁氧基羰基)氮雜環丁-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係以與實例19步驟3類似之方式、使用3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(120mg,0.122mmol)、SO3‧DMF(192mg,1.22mmol)及DMF(1.2mL)來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=1.12min,m/z=1065.7(M+1)。方法2m_酸性。
步驟6：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((氮雜環丁-3-基甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0211-378
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)((1-(第三丁氧基羰基)氮雜環丁-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(130mg,0.122 mmol)、TFA(0.56mL,7.32mmol)及DCM(1.5mL)實施酸介導之去保護之一般程序。6.3mg.LCMS：Rt=0.47min,m/z=599.3(M-+1)。方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.82(s,1 H),7.10(s,1 H),5.61(d,J=5.9Hz,1 H),5.01(q,J=5.6Hz,1 H),4.95-4.85(m,2 H),4.36(s,2 H),4.26-4.15(m,2 H)4.11-3.97(m,2 H),3.46-3,30(m,3 H),1.26(s,2 H),1.20-1.05(m,2 H)。
實例86：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-胺基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0212-379
其係以與實例76類似之方式、使用(R)-4-溴-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丁酸甲酯來製備。LCMS：m/z=532.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.96(s,1H),5.28(d,J=6.0Hz,1H),4.53(m,1H),3.96(t,J=10.0及9.2Hz,1H),3.85(dd,J=10.4 & 10.0Hz,1H),3.58(m,1H),3.44(m,1H),3.31(dd,1H),2.47(m,1H),1.96(m,1H),1.34(s,3H),1.34(s,3H)。
實例87：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
步驟1：((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((2,5-二側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 使用中間體G(10.0g,25mmol)、咪唑啶-2,4-二酮(2.5g,25mmol)、三苯基膦(7.9g,30mmol)、DIAD(6.1g,30mmol)及THF(200mL)實施光延反應之一 般程序。藉由過濾收集稍微污染有三苯基氧化膦之所得沈澱(8.3g,69%)。LCMS：m/z=481.0(M-1)。
步驟2：3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2,4-二側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯. 向((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((2,5-二側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(4.60g,9.54mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(2.30g,10.5mmol)於DCM(55mL)中之溶液中添加DMAP(0.150g,1.33mmol)。在室溫下3h後，添加水，隨後分離各層。經Na2SO4乾燥有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析純化粗殘餘物，提供標題化合物(4.20g,75%)。
步驟3：3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2,4-二側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯. 其係以與實例4、步驟2類似之方式、使用ACN：水(2：1,30mL)中之3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2,4-二側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯(900mg,1.70mmol)、K2S2O8(280mg,2.89mmol)及K2HPO4(680mg,2.91mmol)、同時在90℃下加熱4h來製備。冷卻至室溫後，過濾混合物且在真空中濃縮濾液，移除大部分ACN。用水/EtOAc稀釋混合物且分離各層。用EtOAc萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-6%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(170mg,23%)。LCMS：m/z=431.0(M-1)。
步驟4：3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-4-羥基-2-側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯. 在0℃下，向3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2,4-二側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯(170mg,0.390mmol)於EtOH(10mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(30mg,0.78mmol)。在0℃下3h 後，用飽和NH4Cl(水溶液)驟冷混合物且在真空中部分濃縮。用DCM萃取雙層且經Na2SO4乾燥有機層並在真空中濃縮。將所得殘餘物以原樣用於步驟5中。LCMS：m/z=457.1(M+Na)。
步驟5：3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯. 在0℃下，向3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-4-羥基-2-側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯(160mg,0.368mmol)於DCM(5mL)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(31μL,0.41mmol)，然後添加TEA(0.15mL,1.1mmol)。在0℃下攪拌1h後，在真空中濃縮溶液且經由矽膠層析(MeOH-DCM,2%-5%)純化，提供標題化合物(100mg,65%)。LCMS：m/z=415.1(M-1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.02(s,1H),7.41-7.27(m,5H),7,06(d,J=8.4Hz,1H),6.61(d,J=3.2Hz,1H),6.15(d,J=3.2Hz,1H),5.21-5.09(m,3H),4.30(dd,J=14.4,9.6Hz,1H),4.01-3.94(m,1H),3.49(dd,J=14.8,3.2Hz,1H),1.46(s,9H)。
步驟6：3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯. 將3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯(490mg,1.18mmol)及碳載鈀(10wt%,140mg)於MeOH(60mL)中之混合物抽空且用H2(3×)回填，使最終壓力達到30psi。攪拌2h後，經由矽藻土過濾混合物且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,6%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(50mg,25%)。
步驟7：3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯. 其係以與實例4步驟4類似之方式、使用(Z)-2-(((1-(第三 丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(117mg,0.276mmol)、HATU(105mg,0.276mmol)、DIPEA(36mg,0.28mmol)、3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯(65mg,0.23mmol)及DMF(5mL)來製備。經由矽膠層析(MeOH-DCM,3%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(140mg,88%)。LCMS：m/z=694.0(M+1)。
步驟8：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((3-(第三丁氧基羰基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁基酯(140mg,0.202mmol)於DMF(1.0mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(185mg,1.21mmol)。在室溫下4h後，在真空中濃縮溶液且經HP21樹脂(ACN-水，10%-50%)純化，提供標題化合物(90mg,58%)。LCMS：m/z=772.3(M-1)。
Figure 104109243-A0202-12-0215-380
步驟9：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸. 使用3-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2-側氧基-2,3-二氫-1H-咪唑-1-甲酸第三丁 基酯(自3-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2,4-二側氧基咪唑啶-1-甲酸第三丁基酯製備)(90mg,1.16mmol)、TFA(0.5mL,6.4mmol)及DCM(1.5mL)實施酸介導之去保護之一般程序。經由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，以提供灰白色固體狀標題化合物(15.6mg,60%)。LCMS：m/z=516.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.98(s,1H),6.41(d,J=2.8Hz,1H),6.30(d,J=2.8Hz,1H),5.30(d,J=6.0Hz,1H),4.54-4.52(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.84-3.79(m,1H),1.35(s,3H),1.34(s,3H)。
實例88：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-胍基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0216-381
其係以與實例20類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-胺基-2-側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸及1H-吡唑-1-甲脒HCl來製備。LCMS：m/z=574.1(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 6.93(s,1H),5.28(d,J=5.6Hz,1H),4.53(m,1H),4.24(t,J=9.6及9.2Hz,1H),3.85(dd,J=9.2及9.2Hz,1H),3.51(m,1H),3.40(t,J=9.2 & 8.8Hz,1H),3.32(dd,1H),3.34(dd,1H),2.43(m,1H),1.87(m,1H),1.36(s,3H),1.32(s,3H)。
實例89：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(((R)-吡咯啶-3-基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0217-382
其係以與實例85類似之方式、使用(R)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.46min,m/z=599.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.86(s,1 H),7.16(s,1 H),5.60(d,J=5.5Hz,1 H),4.99(s,1 H),4.90(d,J=3.9Hz,2 H),4.46(d,J=5.1Hz,2H),4.20-4.14(m,1 H),3.82(dd,J=13.1,8.0Hz,1 H),3.65-3.38(m,2 H),2.67-2.57(m,1 H),2.31-2.20(m,1 H),1.34(t,J=4.3Hz,3 H),1.25-1.19(m,2 H)。
實例90：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(2.5g,4.43mmol)於DCM(78mL)及DMF(15ml)中之溶液中添加DIPEA(1.2ml,7.00mmol)、HATU(1.9g,5.13mmol)及(3S,4R)-3-胺基-4-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)氮雜環丁-2-酮(0.92g,4.67mmol)。在0℃下攪拌1h後，用 DCM稀釋反應混合物，用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-5%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(2.5g,75%)。LCMS：Rt=0.98min,m/z=717.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.8g,2.57mmol)於THF(21ml)中之溶液中添加MnO2(4.9g,56.5mmol)。在室溫下攪拌20h後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，用THF(250mL)洗滌。濃縮濾液，且經由矽膠層析純化殘餘物(MeOH-DCM,0-5%)，以提供標題化合物(1.4g,76%)。LCMS：Rt=1.04min,m/z=715.3(M+H)。方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(370mg,0.52mmol)於DCE(4mL)中之溶液中依序添加(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(180mg,1.04mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(165mg,0.78mmol)。在室溫下攪拌16h後，用DCM稀釋反應混合物，用飽和NaHCO3(水溶液)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，以獲得標題化合物(假設定量)。將粗殘餘物以 原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.99min,m/z=873.2(M+1)。方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(0.45g,0.52mmol)於DMF(6mL)中之溶液中添加Boc-酸酐(0.24mL,1.04mmol)。在室溫下攪拌18h後，添加DIPEA(0.18mL,1.04mmol)。攪拌36h後，將反應混合物傾倒至水中且用DCM萃取。用5% LiCl、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-60%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.40g,80%)。LCMS：Rt=1.26min,m/z=973.3(M+H)。方法2m_酸性。
步驟5：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(0.40g,0.41mmol)於DMF(5mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(0.63g,4.12mmol)。在室溫下攪拌1h後，用EtOAc稀釋反應混合物，用5% LiC(水溶液)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾 且在真空中濃縮，以獲得標題化合物(0.42g,97%)。LCMS：Rt=1.10min,m/z=1053.6(M+H)。方法2m_酸性。
步驟6：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0220-383
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(0.5g,0.48mmol)、DCM(2.5mL)及TFA(1mL,13mmol)經1.5h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(123mg,42%)。LCMS：Rt=0.31min,m/z=587.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.39(br s,1H),7.76(s,1 H),7.22(s,2 H),6.73(s,1 H),5.33(dd,J=9.0,5.5Hz,1 H),4.84(dd,J=14.3,4.5Hz,1 H),4.73-4.61(m,1 H),4.61-4.48(m,1 H),4.27-4.14(m,2 H),3.02-2,89(m,3 H),2.85(t,J=7.4Hz,3 H),1.85(p,J=7.5Hz,3H)1.32-1.04(m,6 H)；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.90(s,1H),7.15(s,1H),5.67(d,J=5.5Hz,1H),5.12-5.04(m,1H),5.04-4,88(m,2H),4.45(s,2H),3.30-3.22(m,2H),3.16(t,J=7.6Hz,2H),2.24-2.08(m,2H),1.37-1.26(m,2H),1.26-1.08(m,2H)。
實例91：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-(((S)-吡咯啶-3-基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0221-384
其係以與實例90類似之方式、在使用(S)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.3min,m/z=599.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.18(d,J=9.0Hz,1 H),9.04-8.59(m,2 H),7.79(s,1 H),7.24(br s,2 H),6.72(s,1 H),5.35(dd,J=9.0,5.5Hz,1 H),4.93-4.81(m,1 H),4.68-4.60(m,1 H),4.55(s,1 H),4.24(br s,2 H),3.95-3.79(m,1 H),2.27-2.11(m,1 H),2.04-1.90(m,1 H),1.38-1.06(m,4 H)。
實例92：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(胺基甲基)氮雜環丁-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0221-385
其係以與實例90類似之方式、使用(氮雜環丁-3-基甲基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.46min,m/z=599.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.84(s,1 H)7.11(s,1 H)5.56(d,J=5.5Hz,1 H)5.00(m,1 H)4.89(m,2 H)4.52(s,2 H)4.35(m,2 H)4.23-4.03(m,2 H)3.38-3.21(m,3 H)1.31(m,2 H)1.18(m,2 H)。
實例93：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((1r,3R)-3-胺基環丁基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0222-386
其係以與實例90類似之方式、使用((1r,3r)-3-胺基環丁基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.46min,m/z=599.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.82(s,1 H),7.09(s,1 H),5.58(d,J=5.9Hz,1 H),5.04-4.84(m,3 H),4.31(s,2 H),4.14-4.00(m,2 H),2.81-2.60(m,4 H)1.26(s,2 H),1.19-1.06(m,2 H)。
實例94：(((Z)-(1-(5-胺基-1,2,4-噻二唑-3-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環 丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0223-387
其係以與實例90類似之方式、使用(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)-1,2,4-噻二唑-3-基)乙酸來製備。LCMS：Rt=0.29min,m/z=588.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.53-9.29(m,1 H),8.15(s,2 H),7.75(s,1 H)5.40-5.28(m,1 H),4.82-4.69(m,1 H),4.63(s,2 H),4.21(d,J=5.1Hz,2 H),3.00-2.91(m,2 H),2.85(s,2 H),1.91-1.74(m,2 H),1.37-1.04(m,4 H)。
實例95：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((2,4-二側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0223-388
其係以與實例54類似之方式、使用1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯及噁唑啶-2,4-二酮來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=533.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.23(s,1 H),5.42(d,J=5.9Hz,1 H),4.86-4.83(m,3 H),4.07(dd,J=14.5,9.8Hz,1 H),3.72(dd,J=14.5, 3.9Hz,1 H),1.58-1.52(m,2 H),1.51-1.45(m,2 H)。
實例96：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((3-胺基丙基)胺基)甲基)-2H-四唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0224-389
其係以與實例54類似之方式、使用1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯及5-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-四唑來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=588.4(M+1)方法2m_酸性：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.41(br s,1 H),7.78(s,1 H),7.24(s,1 H),6.75(s,1 H),5.38-5.32(m,1H),4.86(dd,J=14.3,4.5Hz,1 H),4.72-4.63(m,1H),4.61-4.55(m,1H),4.28-4.16(m,1H),3.01-2.94(m,1H),2.87(t,J=7.4Hz,1 H),1.92-1.82(m,1H),1.33-1.18(m,2 H),1.18-1.08(m,1 H)。
實例97：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0224-390
其係以與實例26類似之方式、使用(2-溴乙基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.380min,m/z=591.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 6.93(s,1H),5.28(d,J=5.8Hz,1H),3.85(t,J=9.3Hz,1H),3.68(dd,J=15.0,8.1Hz,1H),3.46-3.36(m,2H),3.25-3.01(m,5H),2.60(s,1H),1.30-1.21(m,2H),1.18-1.09(m,2H)。
實例98：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0225-391
其係以與實例31類似之方式、使用1-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-4-甲基-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-酮及(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸來製備。LCMS：m/z=531.0(M-1)；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.67(s,1H),7.02(s,1H),5.36(d,J=5.6Hz,1H),4.70-4.60(m,1H，被溶劑殘餘峰部分遮住),4.14(dd,J=15.2及7.6Hz,1H),3.96(dd,J=15.2及4.8Hz,1H),3.14(s,3H),1.37(s,3H),1.35(s,3H)。
實例99：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((二甲基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0226-392
其係以與實例54類似之方式、使用N,N-二甲基-1-(2H-1,2,3-三唑-4-基)甲胺來製備。LCMS：m/z=560.2(M+1)；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.80(s,1H),6.98(s,1H),5.43(d,J=4.8Hz,1H),4.94-4.88(m,1H),4.85-4.80(m,2H),4.32(s,2H),2.75(s,6H),1.28(s,6H)。
實例100：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((甲基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0226-393
其係以與實例54類似之方式、使用((2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：m/z=544.1[M-H]-；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.73(s,1H),7.02(s,1H),5.42(d,J=5.6Hz,1H),4.92-4.86(m,1H),4.82-4.78(m,2H),4.22(s,2H),2.60(s,3H),1.30(s,6H)。
實例101：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-胺基乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0227-394
步驟1：((2R,3S)-2-(3,3-二溴烯丙基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下，向PPh3(302.4mg,1.15mmol)於DCM(1mL)中之溶液中添加CBr4(192mg,0.58mmol)。10min後，逐滴添加((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-(2-側氧基乙基)氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯(其係以與實例82步驟2類似之方式製備，152.7mg,0.29mmol)於DCM(800μL)中之溶液，然後添加DCM(800μL)洗滌液。20min後，用DCM及水稀釋反應混合物，且分離各層。用DCM(2×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(0-40% EtOAc-庚烷)純化殘餘物，以提供標題化合物(162 mg,82%)。LCMS：Rt=1.2min,m/z=689.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-(丙-2-炔-1-基)氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯. 在-78℃下，將第三丁基鋰(0.291mL,0.494mmol)添加至((2R,3S)-2-(3,3-二溴烯丙基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯(162mg,0.235mmol)於THF(體積：3.4mL)中之溶液中。15min後，用NH4Cl驟冷反應混合物，且用水及EtOAc稀釋。分離各層，且用EtOAc(2×)萃取有機層。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-Hept,0-40%)純化殘餘物，以提供標題化合物(98mg,79%)。LCMS：Rt=1.08min,m/z=529.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯. 向((3S,4R)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-側氧基-4-(丙-2-炔-1-基)氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯(95.6mg,0.18mmol)於DMSO(1.2mL)、第三丁醇(1.2mL)及水(1.2mL)之混合物中之溶液中添加硫酸銅(H)五水合物(4.5mg,0.018mmol)、L-抗壞血酸鈉(35.8mg,0.18mmol)及N-Boc-2-疊氮基乙胺(76mg,0.39mmol)。攪拌12h後，再添加硫酸銅(II)五水合物(10.6mg,0.23當量)、L-抗壞血酸鈉(37.4mg,1.04當量)及N-Boc-2-疊氮基乙胺(82.1mg,2.44當量)。攪拌總共4天後，用EtOAc及水稀釋反應混合物。分離各層，且用EtOAc(2×)萃取水層。用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-40%)純化殘餘物，以提供標題化合物(57.2mg,44%)。LCMS：Rt=1.06min,m/z=715.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H- 1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯. 其係以與實例82步驟5類似之方式、使用((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯(57.2mg,0.080mmol)、CH3CN(762μl)、水(381μl)、過二硫酸鉀(31mg,0.12mmol)及磷酸氫二鉀(19mg,0.109mmol)來製備。20.2mg.LCMS：Rt=0.89min,m/z=565.3(M+1)。方法2m_酸性。
步驟5：(2-(4-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯. 向((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)(4-甲氧基苄基)胺基甲酸苄基酯(20.2mg,0.036mmol)於MeOH(0.68mL)中之漿液中添加Pd黑(19mg,0.018mmol)及甲酸(31μl,0.711mmol)。在室溫下攪拌3h後，再添加Pd黑(9.7mg)。在室溫下再攪拌5.5h後，經由纖維素過濾反應混合物，用MeOH溶析，且在真空中濃縮濾液。其未經進一步純化即用於步驟6中。LCMS：Rt=0.396min,m/z=311.1(M+1)。方法2m_酸性。
步驟6：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯.
其係以與實例82步驟7類似之方式、使用(Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(18.55mg,0.043mmol)、HATU(17.7mg,0.047mmol)、DCM：DMF(1：3,800μl)、DIPEA(18.86μl,0.108mmol)、(2-(4-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯(11.17mg,0.036mmol)來製備。6.5 mg。LCMS：Rt=0.971min,m/z=722.4(M+1)。方法2m_酸性。1H NMR(400MHz，甲醇-d 4)δ 7.82(s,1H),7.32(s,1H),5.34(d,J=4.9Hz,1H),4.43(t,J=5.9Hz,3H),4.19(dt,J=9.3,4.5Hz,1H),4.09(q,J=7.1Hz,1H),3.54-3.45(m,3H),3.13(ddd,J=15.0,11.8,6.0Hz,2H),2.93(dd,J=15.2,9.6Hz,1H),2.01(s,2H),1.53(d,J=1.4Hz,14H),1.49(s,7H),1.46(d,J=1.7Hz,15H),1.38(s,14H),1.23(t,J=7.1Hz,3H)。
步驟7：(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係以與實例82步驟9類似之方式、使用2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸第三丁基酯(6.5mg,9.00μmol)、DMF(200μl)、SO3‧DMF(5.8mg,0.037mmol)來製備。其未經進一步純化即用於步驟8中。LCMS：Rt=0.911min,m/z=802.1(M+1)。方法2m_酸性。
步驟8：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-胺基乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸. 使用(2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(第三丁氧基)-2-甲基-1-側氧基丙-2-基)氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(7.22mg,9.00μmol)、DCM(200μl)及TFA(50μl,649μmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘 餘物，提供標題化合物(1.2mg,24%)。LCMS：Rt=0.487min,m/z=546.2(M+1)。方法2m_酸性。
實例102：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0231-395
其係以與實例90類似之方式、使用(2-胺基乙基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=573.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.24(d,J=9.0Hz,1.0 H),7.75(s,1 H),7.22(s,2 H),6.71(s,1 H),5.42-5.28(m,1 H),4.86(dd,J=14.3,4.1Hz,1 H),4.72-4.59(m,1 H),4.53(ddd,J=7.4,5.5,4.3Hz,1 H),4.24-4.09(m,2 H),3.10-2.97(m,5 H),1.34-1.19(m,3 H),1.19-1.06(m,1H)。
實例103：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((氮雜環丁-3-基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0232-396
其係以與實例90類似之方式、使用3-胺基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=585.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,D2O)δ 7.84(s,1H),7.14(s,1H),5.60(d,J=5.6Hz,1H),5.04-4.87(m,3H),4.52-4.36(m,5H),4.35(s,1H),1.35-1.29(m,2H),1.24-1.14(m,2H)。
實例104：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(亞胺代甲酰胺基甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0232-397
其係以與實例26類似之方式、使用甲亞胺乙酯-HCl來製備。LCMS：Rt=0.29min,m/z=575.0(M+1)方法2m_酸性。
實例105：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((3-氰基-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0233-398
其係以與實例54類似之方式、使用1H-1,2,4-三唑-3-甲腈來製備。LCMS：m/z=526.0[M-H]-；1H NMR(400MHz,D2O)δ 8.57(s,1H),6.90(s,1H),5.34(br s,1H),5.20-4.77(m,3H),1.31(s,6H)。
實例106：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-胺基氮雜環丁-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0233-399
其係以與實例90類似之方式、使用(2-側氧基乙基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備，只是在磺醯基化步驟中存在另一處理。在40℃下，用MeOH中之吡啶將粗磺醯基化產物處理1h以移除氮雜環丁烷上之過磺醯基化產物。LCMS：Rt=0.30min,m/z=585.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,D2O)δ 7.76(s,1 H),7.03(s,1 H),5.50(d,J=5.5Hz,1 H),4.97-4.89(m,1 H),4.89-4.77(m,2 H),4.56-4.48(m,3 H),4.46-4.35(m,3 H),1.29-1.18(m,2 H),1.15-1.08(m,2 H)。
實例107：(S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙 基)胺基)氧基)-3-(4-甲脒基苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0234-400
其係以與實例68類似之方式、使用(R)-2-(胺基氧基)-3-(4-(N-(第三丁氧基羰基)甲脒基)苯氧基)丙酸二苯甲基酯(其係根據WO2013110643來製備)來製備。LCMS：Rt=0.30min,m/z=623.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.14(s,2 H),8.68(br s,2 H),8.37(s,1H),7.90(s,1H),7.77-7.70(m,2 H),7.28(br s,2 H),6.95(br s,1H),6.79(s,1 H),6.55(br s,1 H),5.19-5.11(m,1H),5.07-4.98(m,1H),4.54-4.39(m,3H),4.28-4.22(m,1H)。
實例108：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(6.66g,12.38mmol)於DCM(61.9ml，比率：1)及DMF(61.9ml，比率：1)中之溶液中添加DIPEA(6.49ml,37.2mmol)及HATU(5.65g,14.86mmol)。20min後，添加(3S,4S)-3-胺基-4-(羥基甲基)氮雜環丁-2-酮(1.44g,12.38mmol)。在室溫下攪拌2h後，在真空中濃縮反應混合物且用EtOAc稀釋。用水、鹽水洗滌有機層，經 Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(丙酮-DCM)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(4.4g,56%)。LCMS：Rt=0.97min,m/z=636.1(M+1)，方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：11.80(br s,1H),9.08(d,J=9.0Hz,1 H),8.41(s,1 H),7.48-7.32(m,5 H),7.32-7.15(m,6 H),6.84(s,1 H),5.20(ddd,J=9.2,5.1,0.9Hz,1 H),4.77(t,J=5.3Hz,1 H),3.76-3.70(m,1H),3.62-3.48(m,1 H),3.47-3.33(m,1 H),1.56-1.33(m,13 H)。
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1g,1.57mmol)於THF(15.7ml)中之溶液中添加TEA(0.66ml,4.7mmol)及MsCl(25μl,0.32mmol)。2h後，用EtOAc稀釋反應混合物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，提供標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=714.1(M+1)，方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(1.3g,1.82mmol)於DMF(20ml)中之溶液中添加NaI(0.82g,5.5mmol)及疊氮化鈉(0.83g,12.8mmol)。在60℃下攪拌6h後，用冰冷水驟冷反應混合物且用EtOAc萃取。用水、鹽水洗滌合併之有機層，經無水Na2SO4乾燥，在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化粗 殘餘物，以提供標題化合物(689mg,57%)。LCMS：Rt=1.02min,m/z=661.1(M+1)，方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(胺基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(疊氮基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(689mg,1.04mmol)於THF(10mL)及MeOH(1.3mL)中之溶液中添加Ph3P(301mg,1.15mmol)。12h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-100%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(369mg,56%)。LCMS：Rt=0.88min,m/z=635.1(M+1)，方法2m_酸性。
步驟5：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(胺基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(199mg,0.29mmol)於DCE(2.9mL)中之溶液中添加(2-側氧基乙基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基酯(84mg,0.30mmol)及三乙醯氧基硼氫化鈉(181mg,0.86mmol)。12h後，用飽和NaHCO3(水溶液)驟冷反應混合物，用EtOAc稀釋，且分離各層。用EtOAc萃取剩餘水層，且用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-100%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(150mg,58%)。LCMS：Rt=1.10min,m/z=900.0(M+1)，方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.16(d,J=9.0Hz,1 H),8.35(s,1H),7.87(d,J=7.4Hz,2 H),7.66(d,J=7.4Hz,2 H),7.45-7.18(m,16 H),6.83(s,1H),5.24-5.17(m,1H),4.28(d, J=6.7Hz,2 H),4.19(d,J=6.3Hz,1 H),3.79-3.67(m,1 H),3.03-2.95(m,2H),2.73-2.63(m,1H),1.54-1.37(m,13H)。
步驟6：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(150mg,0.167mmol)於DCM(1.7mL)中之溶液中添加六氫吡啶(16.50μl,0.167mmol)。2h後，在真空中濃縮反應混合物且於CH3CN/水混合物中凍乾，以提供標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.93min,m/z=678.5(M+1)，方法2m_酸性。
步驟7：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-胺基乙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(90mg,0.133mmol)於氯仿(2.7mL)中之溶液中添加CDI(43.1mg,0.266mmol)及TEA(111μl,0.797mmol)。12h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-100%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(46mg,49%)。LCMS：Rt=0.95min,m/z=704.0(M+1)，方法2m_酸性。
步驟8：(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸，(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基) 噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((3-側氧基-1,2,4-氫化三嗪-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸. 向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(46mg,65μmol)於DMF(654μl)中之溶液中添加SO3‧DMF(100mg,0.654mmol)。在室溫下攪拌2h後，用EtOAc稀釋反應混合物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，以提供標題化合物(50mg,98%)。LCMS：Rt=0.84min,m/z=784.0(M+1)，方法2m_酸性。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟9：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0238-401
使用(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-側氧基-4-((3-側氧基-1,2,4-氫化三嗪-1-基)甲基)氮雜環丁烷-1-磺酸(48mg,61μmol)、DCM(0.61mL)及TFA(0.28mL,3.7mmol)經4h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(3.6mg,10%)。LCMS：Rt=0.45min,m/z=518.1(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,D2O)：δ 7.01(s,1 H),5.32(d,J=5.5Hz,1 H),4.53-4.39(m,1 H),3.61(dd,J=14.8,6.9Hz,1 H),3.56-3.41(m,2 H),3.35-3.21(m,3 H),1.46-1.19(m,4 H)。
實例109：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4,5-雙(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：在0℃下，向亞胺基二碳酸二-第三丁基酯(1.02g,4.60mmol)於DMF(14mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.19g,4.83mmol)。移除冷浴，且再添加DMF(20mL)。攪拌15min後，快速添加1,4-二氯丁-2-炔(0.91ml,9.20mmol)。在室溫下攪拌12h後，將反應混合物傾倒至冷LiCl溶液(5%水溶液)中。用EtOAc(3×)萃取水層，且用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-10%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(467mg,33%)。LCMS：Rt=1.07min,m/z=326.0(M+Na)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.13(t,J=1.9Hz,2 H)4.40(t,J=1.9Hz,2 H),1.57-1.51(m,18H)。
步驟2：其係根據Sharpless,K.B.Synthesis. 2005,9,1514中所述之程序來製備。向來自步驟1之中間體(466mg,1.53mmol)於1,4-二噁烷(5.8mL)及水(1.9mL)中之溶液中添加疊氮化鈉(401mg,6.17mmol)，然後添加氯化銨(167.8mg,3.14mmol)。加熱至75℃並保持11h後，將反應混合物傾倒至分液漏斗中，且分離各層。用EtOAc(3×)萃取水溶液。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-40%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(224mg,41%)。LCMS：Rt=0.90min,m/z=354.1(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.87(s,2H),4.56(s,2H),1.50(s,18H)。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(疊氮基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2S,3S)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(202mg,0.32mmol)、來自步驟2之中間體(136mg,0.38mmol)及三苯基膦(100mg,0.38mmol)於THF(4mL)中之漿液中逐滴添加DIAD(0.079mL,0.38mmol)。在室溫下攪拌12h後，用DCM稀釋反應混合物且在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-70%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物。LCMS：Rt=1.27min,m/z=971.5(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.38(d,J=9.1Hz,1H),8.56(d,J=1.7Hz,1H),7.45-7.38(m,5H),7.32-7.20(m,7H),6.84(s,1H),5.41(dd,J=9.0,5.2Hz,1H),4.78(d,J=1.5Hz,2H),4.51(d,J=1.2Hz,2H),4.48-4.42(m,2H),4.37-4.30(m,1H),1.42(d,J=39.1Hz,31H)。
步驟4：(2R,3S)-2-((4-(疊氮基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(疊氮基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(103mg,0.11μmol)於DMF(530μl)中之溶液中添加SO3‧DMF(33.5mg,0.21mmol)。在室溫下攪拌3h後，用EtOAc稀釋反應混合物，用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，以提供 標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=1.16min,m/z=1051.6(M+1)，方法2m_酸性。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。
步驟5：(2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在N2下，向(2R,3S)-2-((4-(疊氮基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(111mg,0.11mmol)於EtOAc(1.1mL)及EtOH(0.22mL)中之溶液中添加Pd-C(22mg,0.021mmol)。將系統抽空且用H2(3×)回填。在室溫下攪拌4h後，經由矽藻土過濾反應混合物，用EtOAc及EtOH洗滌。在真空中濃縮濾液以提供標題化合物(假設定量)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=1.06min,m/z=1025.7(M+1)，方法2m_酸性。
步驟6：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4,5-雙(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0241-175
使用(2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-5-((雙(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(109mg,0.11μmol)、DCM(1.1mL)及TFA (0.49mL,6.36mmol)經2h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(12mg,19%)。LCMS：Rt=0.46min,m/z=559.2(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.01(s,1H),5.45(d,J=5.6Hz,1H),4.87(dq,J=11.2,5.6Hz,2H),4.77(dd,J=25.1,5.8Hz,2H),4.19(s,3H),1.23-0.98(m,4H)。
實例110：2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-3-(4-甲脒基苯氧基)丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0242-176
其係以與實例107類似之方式、使用((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.29min,m/z=652.1(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.53(d,J=8.9Hz,2 H),7.43(s,1 H),7.03(s,1 H),6.82(d,J=8.9Hz,2 H),5.35-5.28(m,1 H),4.97-4.91(m,1 H),4.77-4.70(m,1 H),4.61-4.55(m,2 H),4.38-4.29(m,1H),4.27-4.19(m,1H),4.00(s,2H)。
實例111：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((3-(2-胺基乙基)脲基)甲基)-2-側氧基噁唑啶-3-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0243-177
其係以與實例26類似之方式、使用(2-(1H-咪唑-1-甲醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=634.3(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δ 9.18(d,J=8.8Hz,1 H),7.68(br s,2 H),7.28(br s,2 H),6.82(s,1H),6.41(t,J=5.9Hz,1H),6.31-6.20(m,1H),5.23(dd,J=8.9,5.83Hz,1H),4.52-4.44(m,1H),4.24-4.12(m,1H),3.69-3.58(m,1H),2.90-2.75(m,2H),1.38-1.27(m,4H)。
實例112：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-((六氫吡啶-4-基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0243-178
其係以與90類似之方式、使用4-胺基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=613.5(M+1)方法2m_酸性；1H NMR (400MHz,D2O)：δ 7.73(s,1 H),7.00(s,1 H),5.49(d,J=5.6Hz,1 H),4.90(q,J=5.5Hz,1 H),4.85-4.74(m,2 H),4.33(s,2 H),3.53-3.37(m,2 H),3.09-2.88(m,2 H),2.29(t,J=12.5Hz,2 H),1.87-1.66(m,2 H),1.25-1.12(m,2 H),1.11-0.95(m,2 H)。
實例113：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((2-側氧基氮雜環丁-1-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0244-179
其係以與實例1類似之方式、使用3-溴丙酸來製備。LCMS：m/z=503.0[M-H]-；1H NMR(400MHz,D2O)δ 6.95(s,1H),5.27(d,J=5.2Hz,1H),4.52-4.43(m,1H),3.66-3.60(m,1H),3.36-3.31(m,2H),3.28(m,1H),2.76(t,J=3.6Hz,2H),1.36(s,3H),1.35(s,3H)。
實例114：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胍基丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0244-180
其係以與實例90類似之方式、使用N-(3-胺基丙基)-N'-第三丁氧基羰基胍及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4- 基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.55min,m/z=629.4(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.80(s,1 H),7.05(s,1 H),5.68-5.57(m,1 H),5.05-4.90(m,2 H),4.84-4.79(m,1 H),4.34(s,2 H),3.29-3.21(m,2 H),3.19-3.08(m,2 H),2.02-1.91(m,2 H),1.29-0.94(m,4 H)。
實例115：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基丙基)(甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0245-181
其係以與實例90類似之方式、使用(3-(甲基胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.53min,m/z=601.4(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.91(s,1 H),7.06(s,1 H),5.55(d,1 H,J=6.1Hz),5.06-4.88(m,3 H),4.49(s,2 H),3.26-3.15(m,2H),3.06(t,2 H,J=7.5Hz),2.89(s,3 H),2.20-2.07(m,2H),1.30-1.07(m,4H)。
實例116：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-(甲基胺基)丙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜 環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0246-182
其係以與實例90類似之方式、使用(3-胺基丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.48min,m/z=601.4(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.82(s,1 H),7.09(s,1 H),5.66-5.53(m,1 H),5.03-4.87(m,3 H),4.37(s,2 H),3.21-3.05(m,4 H),2.68(s,3H),2.17-2.02(m,2 H),1.30-1.04(m,4 H)。
實例117：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-(甲基胺基)乙基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0246-183
其係以與實例90類似之方式、使用(2-胺基乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜 環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.44min,m/z=587.2(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.82(s,1 H),7.09(s,1 H),5.58(d,J=5.5Hz,1 H),5.02-4.82(m,3 H),4.42(s,2 H),3.55-3.40(m,4H),2.75(s,3 H),1.30-1.04(m,4 H)。
實例118：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((4-胺基丁基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0247-184
其係以與實例90類似之方式、使用(4-胺基丁基)胺基甲酸第三丁基酯及步驟3中之1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.32min,m/z=601.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.71(s,1 H),6.99(s,1 H),5.48(d,J=5.6Hz,1 H),4.95-4.69(m,3 H),4.24(s,2 H),3.00(t,J=7.3Hz,2 H),2.87(t,J=7.1Hz,2 H),1.77-1.51(m,4 H),1.23-1.12(m,2 H),1.12-0.90(m,2 H)。
實例119：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：(3-(3-苯甲醯基硫基脲基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據Jubian等人Angew.Chem,1995,107,1343及Rasmussen等人Synthesis,1988,456所述之程序製備。向異硫氰酸苯甲醯基酯(0.93g,5.70mmol)於丙酮(10mL)中之溶液中添加(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.95g,5.45mmol)。在60℃下加熱2.5h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-40%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(0.83g,43%)。LCMS：Rt=0.93min,m/z=338.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(3-硫脲基丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據Jubian等人Angew.Chem,1995,107,1343及Rasmussen等人Synthesis,1988,456所述之程序製備。向(3-(3-苯甲醯基硫基脲基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.83g,2.45mmol)於MeOH(15mL)中之溶液中添加氫氧化鈉水溶液(1.96mL,2.45mmol)。在室溫下攪拌2h後，在真空中濃縮反應混合物且與甲苯共沸。經由矽膠層析(9% MeOH-DCM與1% NH4OH)純化粗殘餘物，提供標題化合物(0.83g,43%)。LCMS：Rt=0.47min,m/z=234.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 其係根據Jubian等人.Angew.Chem,1995,107,1343及Rasmussen等人Synthesis,1988,456所述之程序製備。向(3-硫脲基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.29g,1.28mmol)於MeOH(8mL)中之溶液中添加碘甲烷(80μL,1.29mmol)。在室溫下攪拌18h後，將聚合物載體上之二碳酸酯(0.5g,3.5mmol NaCO3/g樹脂)添加至反應混合物中。30min後，過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以獲得期望產物以及N-甲基化產物(3-(3-甲基硫基脲基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.28g,87%,2：1比率)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.44min及0.49min,m/z=248.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(3-亞胺基-11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸. 在室溫下，向(3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(32.1mg,87μmol)於二噁烷(1mL，比率：2)中之溶液中添加三乙胺(30μL,0.22mmol)、1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸(實例19,23mg,43μmol)及DMF(0.5mL，比率：1)。加熱至60℃並保持17h後，用EtOAc及水稀釋反應混合物。分離水層，在真空中濃縮，與甲苯共沸，並在高真空上乾燥，以獲得標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.51min,m/z=729.6(M+1)，方法2m_酸性。
步驟5：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0249-185
使用1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(3-亞胺基-11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸(37mg,15μmol)、DCM(0.8mL)及TFA(0.2mL,2.60mmol)經1.5h實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型 HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(5.2mg,20%)。LCMS：Rt=0.39min,m/z=629.2(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.77(s,1H),7.15(s,1H),5.63(d,J=5.7Hz,1H),5.06-4.99(m,1H),4.98-4.89(m,2H),4.57(s,2H),3.39-3.34(m,2H),3.14-3.06(m,2H),2.01(p,J=7.2Hz,2H),1.39-1.29(m,2H),1.26-1.15(m,2H)。
實例120：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0250-186
其係以與實例119類似之方式、使用(3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.30min,m/z=629.1(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(500MHz,D2O)δ 7.97(s,1 H),7.05(s,1 H),5.42(d,J=5.4Hz,1 H),4.87-4.78(m,1 H),4.45(s,1 H),3.24(t,J=6.9Hz,1 H),2.98-2.93(m,1 H),2.64(s,1 H),1.87(dt,J=14.9,7.18Hz,3 H),1.33-1.25(m,3 H),1.21-1.10(m,4 H)。
實例121：2-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)-2-甲基丙酸.
Figure 104109243-A0202-12-0251-187
其係以與實例54類似之方式、使用吡咯啶-2,5-二酮來製備。LCMS：Rt=0.55min,m/z=533.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6：D2O(1：1))：δ 6.94(s,1 H),5.18(d,J=5.9Hz,1 H),4.53-4.43(m,1 H),3.96-3.86(m,1H),3.36-3.25(m,1 H)2.53(s,4 H),1.40(s,3 H)1.37(s,3 H)。
實例122：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2-側氧基咪唑啶-1-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0251-188
其係以與實例108類似之方式、使用1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯來製備。非鏡像異構物A：3.1mg。LCMS：Rt=0.65min,m/z=547.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.12(s,1H),5.39(d,J==6.8Hz,1H),4.60-4.56(m,1H),3.84(t,J=9.9Hz,1H),3.59-3.53(m,1H),3.48-3.41(m,2H),3.21-3.09(m,3H),1.46(br s,3H),1.36(br s,3H)。
非鏡像異構物B：2.9mg，LCMS：Rt=0.65min,m/z=547.1 (M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.12(s,1H),5.42(d,J=5.6Hz,1H),4.61-4.54(m,1H),4.16-4.08(m,1H),3.82-3.72(m,2H),3.55-3.49(m,1H),3.27-3.15(m,3H),1.47(br s,3H),1.37(br s,3H)。
實例123：3-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-((1-羧基環丙氧基)亞胺基)乙醯胺基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)-N,N,N-三甲基丙-1-銨.
Figure 104109243-A0202-12-0252-189
其係以與實例90類似之方式、使用N1,N1,N1-三甲基丙烷-1,3-二銨2,2,2-三氟乙酸鹽來製備。LCMS：Rt=0.51min,m/z=629.5(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.81(s,1 H),7.09(s,1 H),5.70-5.63(m,1 H),5.03-4.93(m,3 H),4.83-4.82(m,1 H),4.37(s,2 H),3.44-3.37(m,2 H),3.22-3.16(m,2 H),3.07(s,9 H),2.26-2.17(m,2 H),1.29-1.10(m,4 H)。
實例124：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-胺基丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧 基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(178mg,0.25mmol)及DIPEA(65μL,0.37mmol)於DCM(2.5mL)中之溶液中添加MsCl(25μL,0.32mmol)。在0℃下1h後，用DCM(10mL)稀釋反應混合物，用0.2N HCl及飽和NaHCO3洗滌。經Na2SO4乾燥有機層，在真空中濃縮以提供標題化合物(190mg,96%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=1.05min,m/z=795.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在-5℃下，向NH4OH水溶液(2mL,28-30wt%)於EtOH(2mL，比率：1)及THF(2mL，比率：1)中之溶液中逐滴添加1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(190mg,0.24mmol)於THF(1mL)中之溶液。在-5℃下攪拌1h且在室溫下攪拌12h後，用40mL DCM稀釋反應混合物且用10mL飽和NaHCO3水溶液洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,5%-10%)純化殘餘物，以提供標題化合物(120mg,49%)。LCMS：Rt=0.87min,m/z=716.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁酸(30.7mg,0.15mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加DIPEA(35μL,0.20mmol)及HATU(65mg,0.17mmol)。10min後，添加1-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(90mg,0.10mmol)。在0℃下攪拌1h後，用DCM(40mL)稀釋反應混合物，用2M Na2CO3水溶液(20mL)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,5%-10%)純化殘餘物，以提供標題化合物(42mg,46%)。LCMS：Rt=1.07min,m/z=901.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(42mg,47μmol)於DMF(0.47mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(74mg,0.47mmol)。在室溫下攪拌5h後，再添加10當量SO3‧DMF且在室溫下攪拌2h。用EtOAc(60mL)及鹽水(40mL)稀釋反應混合物，且分離各層。用EtOAc(40mL)萃取水層。用Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾且在真空中濃縮，以提供標題化合物(45.3mg,99%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.96min,m/z=981.6(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-胺基丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0255-190
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(47mg,48μmol)、DCM(0.5mL)及TFA(0.2mL,2.87mmol)經2h實施酸介導之去保護之一般程序。在真空中濃縮反應混合物，且將殘餘物於DCM與冰水之間分配。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化水層，提供標題化合物。LCMS：Rt=0.53min,m/z=615.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.63(s,1 H),7.05(s,1 H),5.58-5.49(m,1 H),4.96-4.83(m,3 H),4.41(br s,2 H),3.06-2.90(m,2 H),2.44-2.28(m,2 H),1.98-1.83(m,2 H),1.38-1.04(m,4 H)。
實例125：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-((1r,3R)-3-胺基環丁基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0255-191
其係以與實例119類似之方式、使用((1r,3r)-3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.33 min,m/z=641.0(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.72(s,1 H),7.10(s,1 H),5.58(d,J=5.5Hz,1 H),5.01-4.95(m,1H),4.89-4.85(m,2H),4.53(s,2 H),4.25-4.17(m,1H),4.05-3.95(m,1H),2.69-2.59(m,2H),2.58-2.48(m,2H),1.34-1.27(m,2H),1.19-1.12(m,2H)。
實例126：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(氮雜環丁-3-基甲基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯.
((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯2,2,2-三氟乙酸鹽之製備.向NH-Boc[((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯](368mg,0.86mmol)於DCM(4mL)中之溶液中添加TFA(1.05mL,13.68mmol)。在室溫下攪拌1h後，在真空中濃縮反應混合物，以獲得呈TFA鹽形式之標題化合物(假設定量)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.43min,m/z=331.0(M+1)方法2m_酸性。
3-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-1H-吡唑-1-甲脒基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯之製備.在0℃下，向雙-Boc-吡唑甲脒(2.49g,8.01mmol)、N-Boc-3-羥基甲基氮雜環丁烷(1.50g,8.01mmol)及三苯基膦(2.10g,8.01mmol)於THF(80mL)中之溶液中逐滴添加DIAD(1.62g,8.01mmol)。在室溫下攪拌12h後，在真空中濃縮反應混合物，且將殘餘物溶解於10% EtOAc/庚烷中以研磨三苯基氧化膦。在真空中濃縮濾液且經由矽膠管柱層析(EtOAc-庚烷，0-35%)進行層 析，以提供標題化合物(1.6g,41%)。LCMS：Rt=1.12min,m/z=480.0(M+1)方法2m_酸性。
3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯之製備.向((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯2,2,2-三氟乙酸鹽(340mg,0.77mmol)於二噁烷(6mL)中之溶液中添加DIPEA(0.147mL,0.842mmol)及3-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-1H-吡唑-1-甲脒基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(367mg,0.765mmol)於二噁烷(1mL)中之溶液。加熱至60℃並保持12h後，在真空中濃縮反應混合物且經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-95%)純化，以提供標題化合物(390mg,69%)。LCMS：Rt=0.94min,m/z=742.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：3-((3-((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯. 抽空後，向3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(390mg,0.526mmol)於EtOH(10mL)及MeOH(10.00mL)中之溶液中添加Pd/C(5%,112mg,53μmol)及氫氣球，並用H2回填。1h後，經矽藻土墊過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以提供標題化合物(302mg,95%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.74min,m/z=608.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：3-((3-((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁 氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯. 向3-((3-((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(309mg,0.51mmol)及(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(273mg,0.51mmol)於DMF(6mL，比率：1)及DCM(6mL，比率：1)中之溶液中添加HATU(232mg,0.61mmol)，然後添加DIPEA(0.22mL,1.27mmol)。在室溫下攪拌12h後，將EtOAc添加至反應混合物中且用水、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-95%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(330mg,58%)。LCMS：Rt=1.15min,m/z=1127.8(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-3-((1-(第三丁氧基羰基)氮雜環丁-3-基)甲基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向3-((3-((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(330mg,0.29mmol)於DMF(2mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(359mg,2.34mmol)於DMF(1mL)中之溶液。在室溫下攪拌5h後，用EtOAc稀釋反應混合物且用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮，以提供標題化合物(300mg,85%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=1.25min,m/z=1208.7(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(氮雜環丁-3-基甲基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基 氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0259-192
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-3-((1-(第三丁氧基羰基)氮雜環丁-3-基)甲基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(300mg,0.248mmol)、DCM(3mL)及TFA(1.90mL,24.85mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,19×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，24mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(19mg,12%)。LCMS：Rt=0.32min,m/z=641.3(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.26(br s,1 H),8.79(br s,3 H),7.78-7.54(m,3H),7.14(s,2 H),6.84(s,1 H),5.06(br s,1 H),4.88(dd,J=14.1,3.94Hz,1 H),4.70-4.59(m,1H),4.54-4.46(m,1H),4.35(d,J=3.8Hz,2 H),4.00-3.89(m,2H),3.76-3.65(m,2H),3.08-2.94(m,1H),1.30-1.09(m,4H)。
實例127：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(胺基甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(1.8g,4.04mmol)於MeOH(60mL)中之溶液中添加MeOH預洗滌之DOWEX-50W-X4 100-200(3.60g,4.04mmol)樹 脂。在室溫下攪拌2h後，過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以獲得標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.52min,m/z=332.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 向((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(1.33g,4.01mmol)及雙-Boc-吡唑甲脒(1.37g,4.42mmol)於THF(50mL)中之溶液中添加三苯基膦(1.16g,4.42mmol)，然後添加DIAD(0.89g,4.42mmol)。在室溫下攪拌12h後，在真空中濃縮反應混合物。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-90%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.73g,69%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=624.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：向((2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(320mg,0.51mmol)於CH3CN(2mL)中之溶液中添加Boc-胺基甲基氮雜環丁烷(105mg,0.56mmol)。加熱至70℃並保持1h後，在真空中濃縮反應混合物以提供標題化合物。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.91min,m/z=742.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁-1-基)((第三丁氧基羰基)亞胺基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 抽空後，向來自步驟3之化合物(570mg,0.77mmol)於EtOH(10mL)及MeOH(10mL)中之溶液中添加Pd/C(5%,16.35mg,77μmol)及氫氣球且用H2回填。4h後，經矽藻土墊過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以 提供標題化合物(302mg,95%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.68min,m/z=608.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 其係以與實例126步驟3類似之方式、使用((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)((3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁-1-基)((第三丁氧基羰基)亞胺基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(460mg,0.76mmol)、(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(407mg,0.76mmol)、DMF(8mL)、DCM(8mL)、HATU(345mg,0.91mmol)及DIPEA(0.33μL,1.89mmol)來製備。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-100%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.65g,76%)。LCMS：Rt=1.15min,m/z=1127.9(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸.在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(650mg,0.58mmol)於DMF(3mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(883mg,5.77mmol)於DMF(1mL)中之溶液。在室溫下攪拌12h後，用EtOAc稀釋反應混合物且用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空 中濃縮，以提供標題化合物(假設定量)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=1.18min,m/z=1208.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(胺基甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0262-193
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((N,N'-雙(第三丁氧基羰基)-3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(690mg,0.57mmol)、DCM(3mL)及TFA(2.1mL,27.4mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。經由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(98mg,27%)。LCMS：Rt=0.32min,m/z=641.3(M+1)，方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.73(s,1H),8.06(s,1H),7.72-7.54(m,3H),7.18(s,2H),6.74(s,1H),5.25(dd,J=8.9,5.5Hz,1H),4.88(dd,J=14.2,4.3Hz,1H),4.65(dd,J=14.2,7.7Hz,1H),4.53(ddd,J=7.6,5.6,4.4Hz,1H),4.46-4.31(m,2H),4.15(td,J=8.7,5.0Hz,2H),3.96-3.81(m,2H),3.11(d,J=7.3Hz,2H假設；被水部分遮住)，2.91(p,J=6.8Hz,1H),1.26-1.11(m,2H),1.08-0.95(m,2H)。
實例128：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧 基-4-((4-((3-(六氫吡啶-4-基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0263-194
其係以與實例119類似之方式、使用4-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.32min,m/z=655.1(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.73(s,1 H),7.14(s,1 H),5.59(d,J=5.6Hz,1 H),5.01-4.94(m,1 H),4.90-4.84(m,1 H),4.80(s,1 H),4.54(s,2 H),3.80-3.71(m,1 H),3.48(d,J=13.4Hz,2 H),3.10(t,J=12.5Hz,2 H),2.21(d,J=12.9Hz,2 H),1.85-1.71(m,2H),1.38-1.31(m,2 H),1.24-1.16(m,2 H)。
實例129：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-胺基乙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0263-195
其係以與實例119類似之方式、使用(2-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=615.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.63(s,1 H),7.02(s,1 H),5.49(d,J=5.6Hz,1 H),4.88(q,J=5.6Hz,1 H),4.77(d,J=5.6Hz,2 H),4.44(s,2H),3.48(t,J=5.9Hz,2 H),3.14(t,J= 5.9Hz,2 H),1.28-1.15(m,2 H),1.12-1.00(m,2 H)。
實例130：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((1-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-2-((4-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(500mg,1.12mmol)於MeOH(15mL)中之溶液中添加DOWEX-50W-X4 100-200(1g,1.12mmol)樹脂。在室溫下攪拌3h後，過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液，以獲得標題化合物(假設定量)。LCMS：Rt=0.51min,m/z=332.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(385mg,1.16mmol)於THF(10mL)中之溶液中添加二氧化錳(2.0g,23mmol)。在室溫下攪拌12h後，再添加1g MnO2且再攪拌1h。經矽藻土過濾反應混合物，用MeOH洗滌。在真空中濃縮濾液以獲得標題化合物(340mg,89%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.61min,m/z=330.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：在0℃下，向((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(340mg,1.03mmol)及Boc-1,3-二胺基丙烷(360mg,2.07mmol)於DCE(16mL)及THF(6mL)中之溶液中添加三乙醯氧基硼氫化鈉(328mg,1.55mmol)。在室溫下攪拌18h後，在真空中濃縮反應混合物，再溶解於DCM中，用5%碳酸氫鈉、鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且在真空中濃縮，以獲得標 題化合物(470mg,93%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.64min,m/z=488.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：向DIPEA(0.17mL,0.96mmol)及來自步驟3之產物(470mg,0.96mmol)於二噁烷(15mL)中之溶液中添加雙-Boc-吡唑甲脒(359mg,1.16mmol)。加熱至60℃並保持3h後，在真空中濃縮反應混合物且經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，20%-100%)純化，以提供標題化合物(130mg,18%)。LCMS：Rt=0.93min,m/z=730.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：其係以與實例126步驟2類似之方式、使用來自步驟4之產物(130mg,0.178mmol)、EtOH(5mL)及甲醇(3mL)、Pd/C(5%,37.9mg,18μmol)來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中(100mg,94%)。LCMS：Rt=0.70min,m/z=596.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 其係以與實例126步驟3類似之方式、使用來自步驟5之產物(100mg,0.168mmol)、3-((3-((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)胍基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(309mg,0.51mmol)及(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(90mg,0.17mmol)、DMF(3mL)、DCM(2mL)、HATU(83mg,0.22mmol)及DIPEA(73μL,0.42mmol)來製備。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，15%-90%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(110mg,59%)以及雙-Boc產物。LCMS：Rt=1.13min,m/z=1115.7(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 其係以與實例126步驟4類似之方式、使用1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(110mg,99μmol)、DMF(2mL)、SO3‧DMF(121mg,0.79mmol)於DMF(1mL)中之溶液、然後再140mg SO3‧DMF來製備。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中(假設定量)。LCMS：Rt=1.15min,m/z=1195.9(M+1)方法2m_酸性。
步驟8：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((1-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0266-196
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((2,3-雙(第三丁氧基羰基)-1-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(118mg,99μmol)、DCM(2mL)及TFA(2.0mL,26mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。經由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘 物，提供標題化合物(5.1mg,8%)。LCMS：Rt=0.28min,m/z=629.4(M+1)。方法2m_酸性。
實例131：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0267-307
其係以與實例90類似之方式、使用(4-胺基-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.33min,m/z=615.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.76(s,1 H),7.03(s,1 H),5.52(d,J=5.6Hz,1 H),4.97-4.90(m,1 H),4.88-4.74(m,2 H),4.31(s,2 H),3.18-3.08(m,2 H),2.04-1.94(m,2 H),1.29(s,6 H),1.23-1.18(m,2 H),1.14-0.99(m,2 H)。
實例132：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((4-胺基-2-甲基丁-2-基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0267-198
其係以與實例90類似之方式、使用(3-胺基-3-甲基丁基)胺基甲酸第三丁基酯(因胺受阻而無需Boc保護)來製備。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.49min,m/z=615.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)：δ 7.86(s,1 H),7.16(s,1 H),5.62(d,J=5.4Hz,1 H),5.07-4.91(m,2 H),4.88-4.79(m,3 H),4.40(s,2 H),3.23-3.13(m,2 H),2.22-2.12(m,2 H),1.49(s,6 H),1.39-1.11(m,4H)。
實例133：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((2-胺基乙氧基)羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1H-咪唑-1-甲酸2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基酯. 向CDI(218mg,1.30mmol)於DCM(4mL)中之溶液中添加(2-羥基乙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.22mL,1.37mmol)於DCM(1mL)中之溶液。在室溫下攪拌1h後，將反應混合物直接用於DCM中用於下一步驟。
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-二甲基-3,8-二側氧基-4,9-二氧雜-2,7-二氮雜十一烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(90mg,0.13mmol)於DCM(2mL)中之溶液中添加1H-咪唑-1-甲酸2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基酯(0.59ml,0.19mmol)於DCM(0.6mL)中之溶液。在室溫下攪拌12h後，再添加3當量1H-咪唑-1-甲酸2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙基酯(1.18ml,0.38mmol)。在室溫下再攪拌60h後，將反應混合物於DCM (40mL)與水(20mL)之間分配。用Na2SO4乾燥有機層，過濾並在真空中濃縮。經由急驟層析(MeOH-DCM,0-5%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(64mg,56%)。LCMS：Rt=1.09min,m/z=903.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(10,10-二甲基-3,8-二側氧基-4,9-二氧雜-2,7-二氮雜十一烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-二甲基-3,8-二側氧基-4,9-二氧雜-2,7-二氮雜十一烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(108mg,0.120mmol)於DMF(1.2mL)中之溶液中添加SO3‧DMF(189mg,1.20mmol)。在室溫下攪拌5h後，用EtOAc(60mL)及鹽水(20mL)稀釋反應混合物。用EtOAc(20mL)萃取水層。用Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾且在真空中濃縮，以獲得標題化合物(68mg,58%)。將粗殘餘物以原樣用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.96min,m/z=983.6(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((2-胺基乙氧基)羰基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0269-199
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺 基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(10,10-二甲基-3,8-二側氧基-4,9-二氧雜-2,7-二氮雜十一烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(68mg,69μmol)、DCM(0.7mL)及TFA(0.32mL,4.15mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(19mg,44%)。LCMS：Rt=0.54min,m/z=617.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.67(s,1 H),7.10(s,1 H),5.60-5.52(m,1 H),5.01-4.84(m,3 H),4.43-4.37(s,2 H),4.35-4.27(m,2 H),3.33-3.25(m,2 H),1.36-1.13(m,4 H)。
實例134：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2-胺基乙醯胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0270-200
其係以與實例124類似之方式、使用2-((第三丁氧基羰基)胺基)乙酸來製備。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.48min,m/z=587.2(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.68(s,1 H),7.12(s,1 H),5.57-5.53(m,1 H),4.96(m,3 H),4.51(s,2 H),3.84(s,2 H),1.35(m,4 H)。
實例135：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-胺基乙基)脲基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基 噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0271-201
其係以與實例133類似之方式、使用步驟2中之(2-(1H-咪唑-1-甲醯胺基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯(不含額外鹼)來製備。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.51min,m/z=616.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.62(s,1H),7.07(s,1H),5.55-5.49(m,1H),4.97-4.86(m,3H),4.34(s,2H),3.44-3.35(m,2H),3.12-3.03(m,2H),1.36-1.10(m,4H)。
實例136：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)脲基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0271-202
其係以與實例133類似之方式、使用步驟2中之(3-(1H-咪唑-1-甲醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(不含額外鹼)來製備。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物。LCMS：Rt=0.52min,m/z=630.4(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O) δ 7.60(s,1H),7.07(s,1H),5.57-5.48(m,1 H),4.97-4.86(m,3H),4.32(s,2H),3.18(m,2H),2.97(m,2H),1.79(m,2 H),1.33(m,4H)。
實例137：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-((1-羧基環丙氧基)-亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-((((1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
步驟1：氯化3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽.
向3-(銨基甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽(147mg,0.755mmol)於THF：EtOH(1：1,1.26mL)中之懸浮液中逐滴添加三乙胺(175μl,1.26mmol)，然後逐滴添加1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷-甲酸二苯甲基酯(200mg,0.252mmol)於THF(500μL)中之溶液。在室溫下攪拌20h後，在真空中濃縮混合物，然後再溶解於DMSO中，且藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化，提供白色固體狀標題化合物(50mg,23%)。LCMS：Rt=0.85min,m/z=821.3(M+)方法2m_酸性。
步驟2：氯化3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽.
其係以與實例85、步驟4類似之方式、使用氯化3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧 基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽(50mg,0.058mmol)、Boc-酸酐(0.027mL,0.115mmol)、NaHCO3(飽和水溶液，1.22mL)及DCM(1.15mL)來製備。LCMS：Rt=0.99min,m/z=921.3(M+)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)((1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
其係以與實例19、步驟3類似之方式、使用氯化3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)(第三丁氧基羰基)-胺基)甲基)-1-甲基吡啶-1-鎓鹽(49mg,0.051mmol)、SO3‧DMF(78mg,0.51mmol)及DMF(1mL)來製備。LCMS：Rt=0.99min,m/z=1002(M+)方法2m_酸性。
步驟4：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-((1-羧基環丙氧基)-亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-((((1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0273-203
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)((1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)甲基)胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2- 基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯(53mg,0.053mmol)、TFA(81μl,1.1mmol)及DCM(72mL)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色粉末狀標題化合物(13mg,35%)。LCMS：Rt=0.30min,m/z=635.3(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 9.00(s,1H),8.78-8.67(m,2H),7.97(t,J=7.1Hz,1H),7.86(s,1H),6.93(s,1H),5.75(d,J=5.3Hz,1H),5.11(dd,J=14.4,3.7Hz,1H),5.06-4.99(m,1H),4.70-4.46(m,4H),4.38(s,3H),3.77-3.62(m,1H),1.35-1.26(m,1H),1.20-1.10(m,2H),0.93-0.82(m,1H)。
實例138：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-胺基六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯.
將1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(64mg,0.081mmol)及碘化鈉(18.1mg,0.121mmol)於DMF(700μL)中攪拌14h，隨後添加碳酸銫(33.4mg,0.103mmol)及六氫吡啶-4-基胺基甲酸第三丁基酯(17.7mg,0.089mmol)。再攪拌3h後，用EtOAc及LiCl(5%水溶液)溶液稀釋混合物。用EtOAc(2×)萃取水層，且用LiCl(5%水溶液)溶液、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(1%-8% MeOH-DCM)純化粗殘餘物，提 供灰白色固體狀標題化合物(52.6mg,73%)。LCMS：Rt=0.98min,m/z=899.7(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(53mg,59μmol)於DMF(293μL)中之溶液中添加SO3‧DMF(24.3mg,0.159mmol)。在室溫下攪拌2h後，再添加SO3‧DMF(24.3mg,81μmol)。再攪拌16h後，在真空中濃縮溶液。將粗材料直接用於步驟3中。LCMS：Rt=0.97min,m/z=979.9(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-胺基六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0275-204
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)六氫吡啶-1-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(58mg,59μmol)、DCM(590μL)、茴香醚(13μL,0.12mmol)及TFA(273μL,3.54mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm, C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供灰白色粉末狀標題化合物(2.7mg,7.3%)。LCMS：Rt=0.50min,m/z=613.4(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.93(s,1H),7.12(s,1H),5.59(d,J=5.5Hz,1H),5.07-5.00(m,1H),4.99-4.96(m,1H),4.93-4.90(m,1H),4.39(s,2H),3.75-3.62(m,2H),3.63-3.51(m,1H),3.28-3.08(m,2H),2.33(d,J=13.7Hz,2H),2.04-1.89(m,2H),1.38-1.11(m,4H)。
實例139：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-((1-羧基環丙氧基)亞胺基)乙醯胺基)-2-((4-(((6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓-6-基)硫基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
步驟1：氯化6-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫基)-6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓鹽.
其係以與實例138、步驟1類似之方式、使用1-(((Z)-(1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(54mg,0.068mmol)、碘化鈉(17.2mg,0.115mmol)、碳酸銫(24.5mg,0.075mmol)、氯化6-巰基-6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓鹽(13.4mg,0.075mmol)及DMF(600μL)來製備。在真空中濃縮漿液，且經由反相製備型HPLC(XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供白色固體狀標題化合物(19.7mg,34%)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=840.4(M+)方法2m_酸性。
步驟2：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓-6-基)硫基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
其係以與實例138、步驟2類似之方式、使用氯化6-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)硫基)-6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓鹽(21mg,0.025mmol)、DMF(250μL)、SO3‧DMF(18.9mg,0.123mmol)、然後再使用SO3‧DMF(22.3mg,0.146mmol)來製備。將粗材料直接用於步驟3中。LCMS：Rt=0.92min,m/z=921.7(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(2R,3S)-3-((Z)-2-(2-胺基噻唑-4-基)-2-((1-羧基環丙氧基)亞胺基)-乙醯胺基)-2-((4-(((6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓-6-基)硫基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯.
Figure 104109243-A0202-12-0277-205
其係以與實例138、步驟3類似之方式、使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((6,7-二氫-5H-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓-6-基)硫基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸酯(23mg,0.025mmol)、茴香醚(5.5μL,0.050mmol)、TFA(116μL,1.50mmol)及DCM(300μL)來製備。藉由反相製備型HPLC (XSelect CSH,30×100mm,5μm,C18管柱；含有0.1%甲酸改質劑之ACN-水，60mL/min)純化粗殘餘物，提供標題化合物(1.5mg,8%)。LCMS：Rt=0.60min,m/z=654.4(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 9.02(d,J=4.8Hz,2H),7.84(s,1H),7.17(s,1H),5.65(d,J=5.8Hz,1H),5.12-4.97(m,3H),4.94-4.89(m,1H),4.64-4.50(m,4H),4.09(s,2H),1.48-1.36(m,2H),1.32-1.24(m,2H)。
實例140：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-((1s,3S)-3-胺基環丁基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0278-206
其係以與實例119類似之方式、使用((1S,3S)-3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)環丁基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.49min,m/z=641.2(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 7.61(s,1H)7.00(s,1H)5.47(d,J=5.6Hz,1H)4.91-4.84(m,1H)4.79-4.76(m,3H)4.41(s,3H)3.78(t,J=7.6Hz,1H)3.51(t,J=8.0Hz,1H)2.84-2.67(m,1H)2.12(d,J=9.7Hz,1H)1.23-1.19(m,2H)1.05(d,J=4.5Hz,2H)。
實例141：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-((3-((S)-吡咯啶-3-基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0279-207
其係以與實例119類似之方式、使用(S)-3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.49min,m/z=640.8(M+1)方法2m_酸性；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 7.62(s,1H)7.00(s,1H)5.49(d,J=5.6Hz,1H)4.83-4.91(m,1H)4.80-4.75(m,2H)4.44(s,2H)4.30(t,J=4.0Hz,1H)3.60-3.18(m,5H)2.38-2.24(m,1H)2.04(dq,J=12.5,6.5Hz,1H)1.24-1.12(m,2H)1.04(br s,2H)。
實例142：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基-2-(((3S,4R)-2-側氧基-4-((4-((3-((R)-吡咯啶-3-基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0279-208
其係以與實例119類似之方式、使用(R)-3-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.29min,m/z=641.1(M+1)方法2m；1H NMR(400MHz,D2O)δ ppm 7.62(s,1H)7.01(s,1H)5.49(d,J=5.6Hz,1H)4.87(q,J=5.7Hz,1H)4.80-4.75(m,2H)4.44(s,2H)4.31(t,J=4.0Hz,1H)3.61-3.20(m,4H)2.41-2.21(m,1H)2.08-2.00(m,1H)1.18(m,2H)1.14(m,2H)。
實例143：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
步驟1：4-(疊氮基甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑 向1-溴-2-丁炔(640μL,7.31mmol)於1,4-二噁烷/水(3：1,36mL)中之溶液中添加疊氮化鈉(1.901g,29.2mmol)，然後添加氯化銨(782mg,14.6mmol)。將漿液加熱至75℃並保持8h。分離各層且用EtOAc(3×)萃取水溶液。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以產生粗材料(833mg,78%)，其直接用於步驟2中。LCMS：Rt=0.35min,m/z=138.9(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((5-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯將4-(疊氮基甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑(803mg,5.81mmol)、Boc-酸酐(1.36mL,5.88mmol)及Pd-C(157mg,0.148mmol)於EtOH(39mL)中之漿液抽空且再裝填H2(3×)。在H2下將反應混合物攪拌1h 45min。經由矽藻土過濾所得黑色懸浮液且用EtOAc溶析。在真空中濃縮濾液。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-60%)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(878mg,71%)。LCMS：Rt=0.82min,m/z=213.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：在0℃下，向((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(331mg,0.826mmol)、((5-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(235.3mg,1.109mmol)及三苯基膦(265.6mg,1.013mmol)於THF(8.3mL)中之溶液中逐滴添加DIAD(0.210mL,1.016mmol)。在室溫下攪拌2h後，將反應混合物濃縮至矽膠上。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-60%)純化提供期望化合物(360mg,73%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=595.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：將來自上述步驟之產物(步驟4)(396.8mg,0.667mmol)、K2S2O8(243mg,0.870mmol)及K2HPO4(268.1mg,1.539mmol)於ACN/水(2：1,9.4mL)中之漿液加熱至90℃並保持2h。再添加K2S2O8(55.6mg,0.200mmol)且繼續再加熱2h。在真空中部分濃縮反應混合物，然後用NaHCO3驟冷並用EtOAc(3×)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-90%)純化，然後經由HPLC(OBD C18,5μ,30×100mm，含有0.1% TFA之30%-70% ACN/H2O緩衝液，經18min，60mL/min)純化，提供白色固體狀期望化合物(157mg,53%)。LCMS：Rt=0.80min,m/z=445.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 向N2沖洗之含有來自上述步驟之產物(93.2mg,0.210mmol)及Pd-C(18mg)之燒瓶中添加乙醇(1.6mL)，然後添加甲醇(0.4mL)。將漿液抽空且用H2(3×)回填。在H2下將反應混合物攪拌2h。經由矽藻土過濾所得黑色懸浮液，用甲醇溶析。在真空中濃縮濾液且將粗殘餘物以原樣用於步驟6中。LCMS：Rt=0.46min,m/z==311.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(120mg,0.213mmol)、((2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(65.2mg,0.210mmol)及HATU(86mg,0.22mmol)於DMF(2.1mL)中之溶液中添加DIPEA(0.073mL,0.420mmol)。攪拌16h後，用EtOAc稀釋反應 混合物且用LiCl溶液(5%水溶液)洗滌。用EtOAc(3×)萃取水層，且用LiCl溶液(5%水溶液)、飽和NaHCO3、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-90%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(144mg,82%)。LCMS：Rt=1.12min,m/z=830.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(140mg,0.170mmol)於DMF(848μl)中之溶液中添加SO3‧DMF(54.4mg,0.355mmol)。將反應混合物攪拌2.5h，隨後再添加SO3‧DMF(27.4mg,0.170mmol)。再22h後，用EtOAc稀釋溶液且傾倒至冷LiCl溶液(5%，水溶液)中。分離各層且使用EtOAc(2×)萃取水層。用LiCl(5%水溶液)、鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮，以提供163.1mg粗材料，其未經進一步純化即用於步驟8中。LCMS：Rt=1.01min,m/z=910.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟8：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0282-209
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(155mg,0.170mmol)、DCM(1.70mL)、茴香醚(37μL,0.34mmol)及TFA(0.787mL,10.2mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSELECT C18,5μ,30×100mm，含有0.1%甲酸之1%-20% ACN/H2O緩衝液，經18min，60mL/min)純化粗材料，提供灰白色固體狀標題化合物(55mg,57%)。LCMS：Rt=0.49min,m/z=544.1(M+1)方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.04(s,1H),5.46(d,J=5.6Hz,1H),4.91-4.84(m,1H),4.84-4.76(m,1H),4.62-4.56(m,1H假設；被溶劑殘餘峰遮住)，4.13(s,2H),2.16(s,3H),1.32-1.18(m,2H),1.18-1.00(m,2H)。
實例144：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
步驟1：(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 向(((第三丁氧基羰基)胺基)(1H-吡唑-1-基)亞甲基)胺基甲酸第三丁基酯(500mg,1.611mmol)、(3-羥基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(282mg,1.611mmol)及三苯基膦(634mg,2.417mmol)溶解於THF(16mL)中之冰冷溶液中添加DIAD(470μl,2.417mmol)，且攪拌16h。在真空中濃縮反應混合物並經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(600mg,80%)。LCMS：Rt=1.02min,m/z=468.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((Z)-4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4- 側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸. 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(胺基甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸(33.9mg,0.062mmol)及(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(54.2mg,0.116mmol)於DMF(624μl)中之溶液中添加DIPEA(32.7μl,0.187mmol)。在室溫下攪拌16h後，在真空中濃縮溶液且其未經進一步純化即以原樣使用。LCMS：Rt=0.75min,m/z=943.7(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)胍基)甲基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0284-210
使用1-(((Z)-(1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-(((2R,3S)-2-((4-((Z)-4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-11,11-二甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-5-甲基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸(58.5mg,0.062mmol)、DCM(621μL)、茴香醚(20.4μL,0.186mmol)及TFA(427μL,4.55mmol)實施酸介導之去保護之一般程序。用冰冷水(1mL)稀釋反應混合物並分離各層。用水(1mL)萃取有機層並用DCM(1mL)洗滌合併之水層，且然後藉由反相製備型HPLC(XSELECT C18,5μ,30×100mm，含有0.1%甲酸之1%-20% ACN/H2O緩衝液，經18min，60mL/min)純化。合併純部分且凍乾，提供灰白 色固體狀標題化合物(19mg,44%)。LCMS：Rt=0.54min,m/z=643.2(M+1)方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.11(s,1H),5.62(d,J=5.6Hz,1H),5.01-4.94(m,1H),4.91-4.74(m,2H假設；被溶劑殘餘峰遮住)，4.50(br s,2H),3.36(t,J=6.9Hz,2H),3.11(t,J=7.8Hz,2H),2.29(s,3H),2.01(p,J=7.2Hz,2H),1.35-1.25(m,2H),1.21-1.05(m,2H)。
實例145：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-(3-(3-胺基丙基)胍基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
步驟1：1-(2H-1,2,3-三唑-4-基)乙醇. 向丁-3-炔-2-醇(3.63g,50.2mmol)於DMF(40ml)及MeOH(10ml)中之溶液中添加疊氮基三甲基矽烷(10.22ml,75mmol)。在100℃下將反應混合物加熱16h。將反應物冷卻並經由矽藻土墊過濾。將濾液濃縮至約25ml且直接用於下一步驟中。LCMS：Rt=0.16min,m/z=113.8(M+1)方法2m_酸性_極性。
步驟2：4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑.在0℃下，向1-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙醇(50.2mmol)及咪唑(5.13mg,75mmol)於DCM(50ml)中之溶液中添加TBDPSC1(14.6mL,55.2mmol)。在室溫下攪拌過夜後，經由矽藻土墊過濾混合物且然後濃縮至乾燥。將所得殘餘物溶解於EtOAc中，用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥且濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，5%-25%)純化粗殘餘物，提供黃色油狀標題化合物(8.16g,46%)。LCMS：Rt=1.09min,m/z=352.1(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.71(d,J=6.5Hz,2H)7.64-7.54(m,3 H)7.49-7.28(m,6H)5.14(q,J=6.3Hz,1H)1.46(dd,J=6.3,3.0Hz,3H)1.08(s,9H)。
步驟3：((2R,3S)-2-((4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-2H- 1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在0℃下，向4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-1H-1,2,3-三唑(2.42g,6.88mmol)、((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(2.76g,6.88mmol)及PPh3(2.17mg,8.26mmol)於THF(35ml)中之溶液中逐滴添加DIAD(1.60ml,8.26mmol)。在室溫下將反應物攪拌5h，且然在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-60%)純化粗殘餘物，提供固體狀標題化合物(4.32g,85%)。LCMS：Rt=1.12min,m/z==734(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：((2R,3S)-2-((4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在室溫下，向((2R,3S)-2-((4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(2.50g,3.41mmol)於ACN/水(2：1,45mL)中之溶液中添加K2S2O8(1.57mg,5.79mmol)及K2HPO4(949mg,5.45mmol)。在氮下將混合物加熱至90℃且攪拌6h。在真空中濃縮反應混合物以移除ACN。向所得漿液中添加EtOAc及水。分離有機層並用EtOAc(2×)萃取水層。合併有機部分，用Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-60%)純化粗殘餘物，提供標題化合物(1.35g,68%)。LCMS：Rt=1.18min,m/z=584.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：((2R,3S)-2-((4-(1-羥基乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在室溫下，將胺基甲酸((2R,3S)-2-((4-(1-((第三丁基二苯基矽基)氧基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)酯(1.35g,2.31mmol)及TBAF(1M於THF中，4.63ml,4.63mmol)於THF(23ml)中之混合物攪拌3h。移 除溶劑且經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化殘餘物，以提供淺黃色固體狀標題化合物(450mg,56%)。LCMS：Rt=0.53min,m/z=346.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：(1-(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)((Z)-((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 在0℃下，向((2R,3S)-2-((4-(1-羥基乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(460mg,1.33mmol)、(E)-(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(455mg,1.465mmol)及三苯基膦(419mg,1.60mmol)於THF(7ml)中之溶液中逐滴添加DIAD(0.311ml,1.598mmol)。在室溫下將反應物攪拌過夜並濃縮至乾燥。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-60%)純化粗殘餘物，提供淺黃色固體狀標題化合物(190mg,22%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=638.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：在室溫下，將(1-(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)((Z)-((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(190mg,0.298mmol)及(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(57.1mg,0.328mmol)於ACN(1490μl)中之混合物攪拌16h。然後在真空中移除溶劑且經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，50%-80%)純化粗殘餘物，提供期望化合物(100mg,45%)。LCMS：Rt=0.91min,m/z=744.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟8：在氫下，將自步驟7獲得之產物(100mg,0.134mmol)及10% Pd/C(30mg,0.134mmol)於EtOH(2ml)及MeOH(1ml)中之混合物攪拌4h。經由矽藻土墊過濾掉鈀且移除溶劑以獲得粗材料，其未經進一步純化即用於步驟9中。LCMS：Rt=0.68min,m/z=610.4 (M+1)方法2m_酸性。
步驟9：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-12,12-二甲基-10-側氧基-11-氧雜-3,5,9-三氮雜十三烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(76mg,0.13mmol)及DIPEA(35.1μl,0.201mmol)於DCM/DMF(2：1,1.34mL)中之溶液中添加HATU(61.1mg,0.161mmol)。在0℃下將此混合物攪拌30min。向此中添加自步驟8獲得之產物(82mg,0.13mmol)。在0℃下將反應混合物攪拌30min，然後用EtOAc稀釋(60ml)，用飽和Na2CO3水溶液、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，40%-60%)純化粗殘餘物，提供淺黃色固體狀標題化合物(150mg,99%)。LCMS：Rt=1.12min,m/z=1129.8(M+1)方法2m_酸性。
步驟10：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((E)-3-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-12,12-二甲基-10-側氧基-11-氧雜-3,5,9-三氮雜十三烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸 在0℃下，向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-12,12-二甲基-10-側氧基-11-氧雜-3,5,9-三氮雜十三烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(150mg,0.133mmol)於DMF(1ml)中之溶液中添加SO3‧DMF複合物(203mg,1.33mmol)。在室溫下攪拌2.5h後，用EtOAc稀釋溶液，用冷鹽水洗滌， 用Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。將粗殘餘物以原樣用於步驟11中。LCMS：Rt=1.15min,m/z=1210.5(M+1)方法2m_酸性。
步驟11：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-(3-(3-胺基丙基)胍基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0289-211
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((E)-3-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-12,12-二甲基-10-側氧基-11-氧雜-3,5,9-三氮雜十三烷-2-基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(0.133mmol)、TFA(410μl,5.32mmol)、茴香醚(29μL,0.27mmol)及DCM(1.33mL)實施酸介導之去保護之一般程序。將反應混合物冷卻至0℃且用DCM及冰水稀釋，隨後分離各層。藉由反相製備型HPLC(XSELECT,C18 5μm 30×100mm；含有0.1%甲酸之ACN-水)純化水層，提供白色粉末狀標題化合物(34mg,39%)。LCMS：Rt=0.52min,m/z=643.2(M+1)方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O，報告為非鏡像異構物之1：1混合物)δ 7.79(s,1H)7.77(s,1H),7.12(s,1H),7.12(s,1H),5.64(d,J=5.6Hz,1H),5.61(d,J=5.6Hz,1H),5.05-4.73(m,8H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住)，3.39-3.32(m,4H),3.13-3.05(m,4H),2.00(p,J=7.0Hz,4H),1.64(d,J=3.6Hz,3H),1.63(d,J=3.7Hz,3H),1.37-1.28(m,4H),1.21-1.12(m,4H)。
實例146：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((3-胺基丙基)胺基)乙基)- 2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
步驟1：(R)-甲烷磺酸丁-3-炔-2-基酯. 在0℃下，向R-(+)-3-丁炔-2-醇(1000mg,14.27mmol)及DIPEA(3.72ml,21.4mmol)於DCM(50ml)中之溶液中添加甲烷磺醯氯(1.44mL,18.6mmol)。在0℃下將混合物攪拌2h，然後用DCM稀釋，用HCl(0.2N，水溶液)、然後用飽和NaHCO3洗滌。經Na2SO4乾燥有機層且在真空中濃縮，提供淺橙色油狀標題化合物(2.093g,99%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 5.28(m,J=6.7,2.1Hz,1H)3.12(s,3H)2.71(d,J=2.2Hz,1H)1.66(d,J=6.7Hz,3H)。
步驟2：(S)-(3-(丁-3-炔-2-基胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯.將(R)-甲烷磺酸丁-3-炔-2-基酯(2189mg,14.77mmol)於ACN(10ml)中之溶液逐滴添加至(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(2831mg,16.25mmol)及碳酸鉀(2446mg,17.72mmol)於ACN(50ml)中之懸浮液中。在室溫下將反應混合物攪拌24h，隨後過濾漿液且在真空中濃縮濾液。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-8%)純化粗殘餘物，以提供淺橙色油狀標題化合物(570mg,17%)。LCMS：Rt=0.43min,m/z=227.0(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：(S)-丁-3-炔-2-基(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 在室溫下，將(S)-(3-(丁-3-炔-2-基胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(570mg,2.52mmol)、二碳酸二-第三丁基酯(1.10g,5.04mmol)及飽和NaHCO3溶液(水溶液，17mL)於DCM(16.8mL)中之混合物攪拌16h，隨後分離兩層並經Na2SO4乾燥有機層且在真空中濃縮。經由矽膠層析(MeOH-DCM,0-5%)純化，提供黏性油狀標題化合物(710mg,86%)。LCMS：Rt=0.99min,m/z=327.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：(S)-(1-(2H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 將(S)-丁-3-炔-2-基(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(710mg,2.18mmol)、疊氮基三甲基矽烷(452μl,3.26mmol)及碘化銅(I)(21mg,0.11mmol)於DMF/MeOH(1：1,3.4mL)中之混合物加熱至100℃並保持8h。冷卻後，經由矽藻土墊過濾混合物，且在真空中濃縮濾液並經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-80%)純化，以提供油狀標題化合物(636mg,79%)。LCMS：Rt=0.78min,m/z=370.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：在0℃下，向(S)-(1-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(636mg,1.72mmol)、((2S,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(羥基甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(689mg,1.72mmol)及三苯基膦(542mg,2.07mmol)於THF(8.6mL)中之溶液中逐滴添加DIAD(402μl,2.07mmol)。在室溫下攪拌5h後，在真空中濃縮混合物。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-60%)純化提供白色固體狀期望化合物(970mg,75%)。LCMS：Rt=1.08min,m/z=752.1(M+1)方法2m_酸性。
步驟6：在氮下，將自步驟5獲得之產物(970mg,1.29mmol)、K2S2O8(611mg,2.19mmol)及K2HPO4(360mg,2.06mmol)於ACN/水(2：1,15mL)中之混合物加熱至90℃並保持4h。在真空中濃縮反應混合物以移除ACN。將混合物於EtOAc/水之間分配且分離各層。用EtOAc萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機部分，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，50%-100%)純化提供期望化合物(443mg,57%)。LCMS：Rt=0.95min,m/z=602.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯. 在氫下，將自步驟6獲得之產物(443mg,0.736mmol) 及10% Pd/C(100mg)於EtOH/MeOH(2：1,15mL)中之混合物攪拌4h，隨後經矽藻土過濾混合物且在真空中移除溶劑，以獲得標題化合物(假設定量)，其未經進一步純化即直接使用。LCMS：Rt=0.68min,m/z=468.3(M+1)方法2m_酸性。
步驟8：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯
在0℃下，向(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(416mg,0.736mmol)、((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-胺基-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.736mmol)及DIPEA(193μl,1.10mmol)於DCM/DMF(5：1,7.3mL)中之混合物中添加HATU(308mg,0.810mmol)。在0℃下攪拌1h後，將其用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，50%-90%)純化提供紅色固體狀期望化合物(700mg,96%)。LCMS：Rt=1.17min,m/z=987.7(M+1)方法2m_酸性。對掌性SFC分析(SFC-X5,CO2/EtOH=90/10,SFC=5ml/min,AD管柱，Rt=12.28min)確認其為單一非鏡像異構物。
步驟9：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((S)-1-((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 在0℃下，向DMF(3.5ml)中之1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑- 4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(700mg,0.709mmol)中添加SO3‧DMF(760mg,4.96mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌2h，隨後再添加3當量SO3‧DMF且再攪拌2h。用EtOAc稀釋反應混合物，用LiCl(5%，水溶液，2×)、鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮，以獲得標題化合物(假設定量)，其未經進一步純化即以原樣使用。LCMS：Rt=1.07min,m/z=1067.6(M+1)方法2m_酸性。
步驟10：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((3-胺基丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0293-212
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-((S)-1-((第三丁氧基羰基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(0.709mmol)、茴香醚(153mg,1.42mmol)、TFA(273μl,35.5mmol)及DCM(7.1mL)實施酸介導之去保護之一般程序。將反應混合物冷卻至0℃且用DCM及冰水稀釋。劇烈攪拌後，分離兩層且藉由反相製備型HPLC(XSELECT,C18,5μm 30×100mm，含有0.1甲酸之ACN-水)純化水層，提供白色固體狀標題化合物(110mg,25%)。LCMS：Rt=0.50min,m/z=601.3(M+1)方法2m_酸性_極性；1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.87(s,1H)7.04(s,1H)5.61(d,J=5.6Hz,1H)5.04-4.97(m,1 H) 4.89(d,J=5.4Hz,2H)4.69-4.62(m,1H)3.13-3.00(m,4H)2.04(t,J=4.0Hz,2H)1.68(d,J=6.9Hz,3H)1.23(t,J=3.9Hz,2H)1.11-1.02(m,2H)。
實例147：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0294-214
其係以與實例119類似之方式、使用(2-(2-((亞胺基(甲基硫基)甲基)胺基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁基酯來製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=659.0(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(500MHz,D2O)δ ppm 7.61(s,1H)6.99(s,1H)5.47(d,J=5.7Hz,1H)4.87(q,J=5.6Hz,1H)4.42(s,2H)3.66-3.54(m,4H)3.32(t,J=5.0Hz,2H)3.13-3.06(m,2H)1.28-0.93(m,4H)。
實例148：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)-1-甲基胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
步驟1：(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯. 向(((第三丁氧基羰基)胺基)(1H-吡唑-1-基)亞甲基)胺基甲酸第三丁基酯(500mg,1.61mmol)、(3-羥基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(282mg,1.611mmol)及三苯基膦(634mg,2.42mmol)於THF(16mL)中之冰冷溶液中添加DIAD(470μl,2.42mmol)。在室溫下將混合物攪拌16h，隨後在真空中移除揮發物。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，0-100%)純化提供期望化合物 (600mg,80%)。LCMS：Rt=1.02min,m/z=468.4(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 在室溫下，將((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(360mg,1.09mmol)及MnO2(2.36g,27.2mmol)於THF(11mL)中之混合物攪拌2h，隨後經由矽藻土墊過濾混合物且濃縮。將所得材料(340mg,95%)以原樣用於步驟3中。
步驟3：((2R,3S)-2-((4-((甲基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯. 向((2R,3S)-2-((4-甲醯基-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(340mg,1.03mmol)於DCE(10mL)中之溶液中添加MeNH2(1032μl,2.065mmol)。在室溫下攪拌1h後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉(438mg,2.07mmol)且將混合物攪拌過夜，隨後在0℃下將其用飽和NaHCO3(水溶液)驟冷並用EtOAc(2×)萃取。合併有機萃取物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。將所得粗材料(假設定量)以原樣用於步驟4中。
步驟4：將((2R,3S)-2-((4-((甲基胺基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(93mg,0.27mmol)、(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(((第三丁氧基羰基)亞胺基)(1H-吡唑-1-基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(152mg,0.324mmol)、DIPEA(94μl,0.540mmol)於ACN(1800μl)中之溶液加熱至90℃過夜。在真空中移除所有揮發物且經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化粗殘餘物，提供期望化合物。LCMS：Rt=0.94min,m/z=744.6(M+1)方法2m_酸性。
步驟5：在氫下，將來自步驟4之產物(46mg,0.062mmol)及C載Pd(10wt%,23mg)於EtOH/MeOH(4：1,620μL)中之混合物攪拌16h。 經由矽藻土墊過濾反應混合物並濃縮，且所得材料(假設定量)未經進一步純化即以原樣使用。
步驟6：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-2,11,11-三甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯. 將(Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙酸(30.9mg,0.057mmol)、DIPEA(30.1μl,0.172mmol)及HATU(26.2mg,0.069mmol)於DCM/DMF(1：1,574μl)中之溶液攪拌20min，隨後添加來自步驟5之產物(35mg,0.057mmol)。將所得混合物再攪拌2h，此時在真空中移除揮發物且用EtOAc稀釋材料，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化提供期望化合物。LCMS：Rt=1.11min,m/z=1029.9(M+1)方法2m_酸性。
步驟7：(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-2,11,11-三甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸. 向1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-2,11,11-三甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸二苯甲基酯(32mg,0.028mmol)於DMF(283μl)中之冰冷溶液中添加SO3‧DMF(43.4mg,0.283mmol)。攪拌2h後，用EtOAc稀釋反應混合物，用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。粗殘餘物未經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟8：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-胺基丙基)-1-甲基胍基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸
Figure 104109243-A0202-12-0297-215
使用(2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((二苯甲基氧基)羰基)環丙氧基)亞胺基)-2-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)噻唑-4-基)乙醯胺基)-2-((4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁氧基羰基)亞胺基)-2,11,11-三甲基-9-側氧基-10-氧雜-2,4,8-三氮雜十二烷基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁烷-1-磺酸(27mg,0.022mmol)、TFA(103μl,1.34mmol)及DCM(223μl)實施酸介導之去保護之一般程序。藉由反相製備型HPLC(XSELECT C18,5μ,30×100mm，含有0.1%甲酸之ACN/H2O緩衝液)純化粗材料，提供白色固體狀標題化合物(1.1mg,7%)。LCMS：Rt=0.32min,m/z=643.3(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(500MHz,D2O)δ ppm 7.65(s,1H)7.00(s,1H)5.48(d,J=5.7Hz,1H)4.89-4.83(m,1H)4.60-4.45(m,2H)3.25(td,J=6.9,3.6Hz,2H)2.95(t,J=7.7Hz,2H)2.91(s,3H)1.98-1.74(m,2H)1.23-1.10(m,2H)1.05-1.00(m,2H)。
實例149：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-(胺基甲基)氮雜環丁烷-1-羰基)氧基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0298-216
其係以與實例126類似之方式、使用步驟2中之3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基酯來製備。LCMS：Rt=0.52min,m/z=643.2(M+1)方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O)δ 7.83(s,1H),7.11(s,1H),5.61(d,J=5.3Hz,1H),5.25-5.16(m,2H),5.08-4.97(m,2H),4.93-4.86(m,1H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住)，4.22(t,J=8.6Hz,2H),3.89-3.77(m,2H),3.32(d,J=7.6Hz,2H),3.07-2.95(m,1H),1.49-1.37(m,2H),1.34-1.19(m,2H)。
3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基酯之製備. 其係以與類似之方式實例4、步驟2、使用ACN：水(2：1,7.2mL)中之3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基酯(410mg,0.591mmol)、K2S2O8(272mg,1.01mmol)及K2HPO4(165mg,0.946mmol)、同時在90℃下加熱5h來製備。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，30%-90%)純化粗殘餘物，提供固體狀標題化合物(80mg,25%)。LCMS：Rt=0.78min,m/z=544.2(M+1)方法2m_酸性。
3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)氮雜環丁烷-1-甲酸(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-4-側氧基氮雜環丁-2- 基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基酯之製備.向20mL閃爍瓶中裝填((2R,3S)-1-(2,4-二甲氧基苄基)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(660mg,1.37mmol,在中間體V之製備期間以副產物形式獲得)、CDI(252mg,1.51mmol)及DCM(11.4mL)。攪拌2h後，添加(氮雜環丁-3-基甲基)胺基甲酸第三丁基酯(383mg,2.06mmol)且將其再攪拌16h。在真空中濃縮混合物並經由矽膠層析(EtOAc-庚烷，40-90%)純化，提供固體狀標題化合物(410mg,43%)。Rt=0.94min,m/z=694.3(M+1)方法2m_酸性。
實例150：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((S)-3-胺基吡咯啶-1-甲脒基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0299-217
其係以與實例127類似之方式、使用步驟3中之(S)-吡咯啶-3-基胺基甲酸第三丁基酯來製備。Rt=0.25min,m/z=641.4(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 10.55-10.15(m,1H),8.06-7.78(m,1H),7.66(d,J=1.4Hz,1H),7.59(br s,2H),7.20(s,2H),6.74(d,J=3.9Hz,1H),5.23(ddd,J=14.6,8.8,5.5Hz,1H),4.90(dt,J=13.8,3.7Hz,1H),4.71-4.60(m,1H),4.59-4.35(m,3H),3.90(br s,1H),3.70-3.38(m,3H假設；與水峰重疊)，2.30-2.15(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.30-1.13(m,2H),1.13-0.98(m,2H)。
實例151：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-((3-胺基丙基)胺基)乙基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基 噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0300-218
其係以與實例146類似之方式、使用步驟2中之3-溴丁-1-炔來製備。LCMS：Rt=0.50min,m/z=601.2(M+1)方法2m_酸性_極性。1H NMR(400MHz,D2O，報告為非鏡像異構物之1.3：1混合物)δ 7.94(s,0.75H),7.90(s,1H),5.69(d,J=5.6Hz,0.75H),5.64(d,J=5.6Hz,1H),5.08(q,J=5.5Hz,1.8H),4.97(q,J=9.3,7.7Hz,3.9H),4.76-4.68(m,1.7H假設；被溶劑殘餘峰部分遮住)，3.24-3.02(m,7.5H),2.21-2.02(m,3.8H),1.76(d,J=7.0Hz,2.35H),1.73(d,J=6.9Hz,3.1H),1.41-1.21(m,4.9H),1.20-1.08(m,2.5H)。
實例152：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-胺基乙基)磺醯基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
步驟1：甲烷磺酸(2-(((2R,3S)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-4-側氧基氮雜環丁-2-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-基)甲基酯. 在0℃下，向((2R,3S)-2-((4-(羥基甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基氮雜環丁-3-基)胺基甲酸苄基酯(100mg,0.302mmol，在中間體V之製備期間獲得)於DCM(3.0mL)中之溶液中添加TEA(84μL,0.60mmol)，然後添加甲烷磺醯氯(28.2μL,0.362mmol)。在室溫下攪拌2h後，用DCM稀釋溶液，用NaHCO3(飽和，水溶液)、鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。粗殘餘物未經額外純化即使用。LCMS：Rt=0.66min,m/z=410.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟2：其係以與實例138、步驟1類似之方式、使用DMF(12.8mL)中之來自步驟1之產物(525mg,1.28mmol)、(2-巰基乙基)胺基甲酸第三丁基酯(273mg,1.53mmol)、碘化鈉(192mg,1.28mmol)及碳酸銫(836mg,2.56mmol)來製備。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化粗殘餘物，以提供產物(190mg,30%)。LCMS：Rt=0.80min,m/z=491.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟3：在0℃下，向來自步驟2之產物(190mg,0.387mmol)於DCM(3.9mL)中之溶液中添加m-CPBA(147mg,0.852mmol)。攪拌1h後，將其於水/DCM之間分配。用DCM萃取水層且經Na2SO4乾燥合併之有機層並在真空中濃縮。經由矽膠層析(EtOAc-庚烷)純化粗殘餘物，提供產物(148mg,73%)。LCMS：Rt=0.72min,m/z=523.2(M+1)方法2m_酸性。
步驟4：1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-胺基乙基)磺醯基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-2-基)甲基)-4-側氧基-1-磺基氮雜環丁-3-基)胺基)-1-(2-胺基噻唑-4-基)-2-側氧基亞乙基)胺基)氧基)環丙烷甲酸.
Figure 104109243-A0202-12-0301-219
其係以與實例4、步驟3-6類似之方式製備。LCMS：Rt=0.31min,m/z=622.1(M+1)方法2m_酸性。1H NMR(500MHz,D2O)δ 7.90(s,1H),7.15(s,1H),5.59(d,J=5.7Hz,1H),5.03(q,J=5.6Hz,1H),4.91(d,J=5.6Hz,2H),4.78(s,2H假設；被溶劑殘餘峰遮住)，3.63-3.58(m,2H),3.54-3.50(m,2H),1.41-1.33(m,2H),1.24(t,J=3.2Hz,2H)。
細菌篩選及培養
自-70℃冷凍之原液藉由在35℃下在環境空氣中在5%血液瓊脂(Remel,Lenexa,Kans.)上兩次連續過夜傳代培養細菌分離物。品質控制及綠膿桿菌ATCC 27853)係來自美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC；Rockville,Md.)，且PAO1接受自Dr.K.Poole。
大腸桿菌同基因型菌株菌株NB27273-CDY0026(親代)、NB27273-CDY0033(KPC2)及NB27273-CDY0030(SHV12)之構築
自Keio轉座子插入集合獲得菌株NB27273(BW25113 pspB：：Kmr)。該菌株具有經康黴素抗性標記物替代之pspB基因(BW25113 pspB：：Kmr)。經由FLP重組酶使用公開方法使此菌株自pspB中之轉座子復原。使用所得菌株BW25113 pspB作為宿主用於多拷貝載體表現關鍵β-內醯胺酶。如下建立引導β-內醯胺酶之組成型表現之多拷貝質體：藉由DNA2.0(Palo Alto,CA)製備編碼大腸桿菌KPC2及SHV12β-內醯胺酶之密碼子最佳化合成基因。每一合成片段經設計在其末端含有NotI及NcoI限制位點，此容許連接至NotI/NcoI消化之pET28a(+)衍生物中用於蛋白質表現。該等載體中之插入物用作模板DNA用於編碼KPC2及SHV12之基因之PCR擴增，分別使用引子對E225(tcgcCTCGAGgcgactgcgctgacgaatttgg)(SEQ ID NO：1)及E202(aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc)(SEQ ID NO：2)及E227(tcgcCTCGAGgcgagcccgcaaccgctgga)(SEQ ID NO：3)及E204(aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc)(SEQ ID NO：4)。密碼子最佳化核苷酸序列及相關引子識別資訊顯示於下文中：
SHV12
Figure 104109243-A0202-12-0302-220
Figure 104109243-A0202-12-0303-221
Figure 104109243-A0202-12-0303-222
(SEQ ID NO：5)
E227 TCGCCTCGAGGCGAGCCCGCAACCGCTGGA(SEQ ID NO：6)
E204 AATCGAATTCTTAACGCTGCCAGTGCTCAATC(SEQ ID NO：7)
REV.COMP.E204 GATTGAGCACTGGCAGCGTTAAGAATTCGATT(SEQ ID NO：8)
KPC2
Figure 104109243-A0202-12-0303-223
Figure 104109243-A0202-12-0304-308
Figure 104109243-A0202-12-0304-225
(SEQ ID NO：9)
E225 TCGCCTCGAGGCGACTGCGCTGACGAATTTGG(SEQ ID NO：10)
E202 AATCGAATTCTTACTGACCATTAACGCCCAAGC(SEQ ID NO：11)
REV.COMP.E202 GCTTGGGCGTTAATGGTCAGTAAGAATTCGATT (SEQ ID NO：12)
加下劃線處=編碼BL之DNA
然後用XhoI及EcoRI消化PCR產物，且將其連接至以類似方式消化之質體pAH63-pstS(BlaP)中。質體pAH63-pstS(BlaP)係質體pAH63(J Bacteriol：183(21)：6384-6393)之衍生物，其係藉由將質體pBAD(J Bacteriol.1995年7月177(14)：4121-30)之TEM-1(bla)啟動子及信號肽編碼區選殖至質體pAH63中來製備。使用引子對E192(ttcaCTGCAGtgaacgttgcgaagcaacggC)(SEQ ID NO：13)及E194(TCGAggatcctcgagagcaaaaacaggaaggcaaaatgccg)(SEQ ID NO：14)自pBAD PCR擴增此片段，用PstI及BamHI消化且插入以類似方式消化之質體pAH63中。因此，來自基於pAH63-pstS(BlaP)之構築體之β-內醯胺酶的表現為組成型的，且提供信號序列以將該等蛋白質引導至胞外質。然而，基於質體pAH63之載體係用於以單拷貝插入基因組中，以提供較高表現量以容許更靈敏地檢測化合物對β-內醯胺酶之敏感性，含於該等載體中之表現插入物移動至可複製多拷貝載體pBAD-Kan(J Bacteriol.1995 Jul.177(14)：4121-30)。為實現此目標，使用引子E269(ccgTCTAGAcggatggcctttttgcgtttc)(SEQ ID NO：15)及用於KPC2構築體之E202(aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc)(SEQ ID NO：16)及用於SHV12構築體之E204(aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc)(SEQ ID NO：17)自其相應載體，對涵蓋β-內醯胺酶基因與相關TEM啟動子及信號序列之插入物實施PCR擴增。然後用XbaI及EcoRI消化該等片段，且各自插入已經相同酶消化之pBAD18-kan中以產生一對分別表現KPC2及SHV12之多拷貝載體。將該等載體轉化至BW25113 pspB中以產生菌株NB27273-CDY0033(表現KPC2)及NB27273-CDY0030(表現SHV12)。pBAD18-kan載體亦含有TEM啟動子區域及信號序列(但缺少任何完整的β-內醯胺酶基因)，且使用標準方案轉化至BW25113 pspB中以產生對照菌株NB27273-CDY0026。藉由驗證對為KPC2或SHV12之已知受質之實例 測試抗生素之敏感性降低來確認β-內醯胺酶之表現。
敏感性測試
根據臨床及實驗室研究所(Clinical and Laboratories Institute，CLSI)導則藉由培養液微量稀釋法來測定最小抑制濃度(MIC)。簡言之，將新鮮過夜細菌培養物懸浮於無菌鹽水中，且調節至0.5麥克法蘭(McFarland)濁度標準。然後將細菌懸浮液稀釋於陽離子調節之Mueller-Hinton培養液(MHB II；BBL)中，以產生約5×105個菌落形成單位(CFU)/mL之最終接種體。在等效於100%二甲基亞碸(DMSO)中之百倍最高期望最終濃度之濃度下製備抗生素之靠模板。然後藉由用多通道吸量管連續兩倍稀釋來稀釋靠模抗生素板。用無菌水以1：10稀釋化合物之所得稀釋系列，從而產生10% DMSO最終濃度。將體積為10μL之藥物稀釋系列轉移至96孔分析板。用90μL細菌懸浮液接種分析板且在35℃-37℃下培育20hr。在600nm下使用微量滴定板讀取器(Molecular Devices)以及藉由使用讀取鏡進行視覺觀察來讀取分析板。將化合物之防止可見生長之最低濃度記錄為MIC。根據CLSI之導則藉由測試針對實驗室品質控制菌株之胺曲南來監測分析之性能。
參考化合物：出於比較，在本文中使用以下已知單內醯胺化合物： 參考化合物1：胺曲南
Figure 104109243-A0202-12-0306-226
參考化合物2：卡蘆莫南
Figure 104109243-A0202-12-0307-227
參考化合物3：BAL30072
Figure 104109243-A0202-12-0307-228
參考化合物4：Aicuris WO2013110643
Figure 104109243-A0202-12-0307-229
Figure 104109243-A0202-12-0307-230
Figure 104109243-A0202-12-0308-231
菌株1：大腸桿菌NB27273-CDY0026(親代)
菌株2：大腸桿菌NB27273-CDY0033(KPC2)
菌株3：大腸桿菌NB27273-CDY0030(SHV12)
表A中之數據顯示本發明化合物具有良好的針對大腸桿菌(包括對若干已知單內醯胺及舒巴克坦抗生素顯示強抗性之菌株)之抗細菌功效。
所選本發明化合物之活性數據提供於下表中。對大腸桿菌菌株25922及含有KPC-2(來自克雷伯氏肺炎菌之已知碳氫黴烯酶)之大腸桿菌測試化合物，以確定最小抑制濃度(MIC)，以mg/L表示。應注意，使鑑別為甲酸鹽之化合物在分離期間經受凍乾，此在一些情形下會移除一些甲酸，因此彼等鹽之甲酸鹽含量可能小於化學計量。
Figure 104109243-A0202-12-0308-232
Figure 104109243-A0202-12-0309-233
Figure 104109243-A0202-12-0310-234
Figure 104109243-A0202-12-0311-235
Figure 104109243-A0202-12-0312-236
Figure 104109243-A0202-12-0313-237
Figure 104109243-A0202-12-0314-238
Figure 104109243-A0202-12-0315-239
Figure 104109243-A0202-12-0316-240
Figure 104109243-A0202-12-0317-241
Figure 104109243-A0202-12-0318-242
Figure 104109243-A0202-12-0319-243
Figure 104109243-A0202-12-0320-244
Figure 104109243-A0202-12-0321-245
Figure 104109243-A0202-12-0322-246
Figure 104109243-A0202-12-0323-247
Figure 104109243-A0202-12-0324-248
Figure 104109243-A0202-12-0325-249
Figure 104109243-A0202-12-0326-250
Figure 104109243-A0202-12-0327-251
Figure 104109243-A0202-12-0328-252
Figure 104109243-A0202-12-0329-253
Figure 104109243-A0202-12-0330-254
Figure 104109243-A0202-12-0331-255
Figure 104109243-A0202-12-0332-256
Figure 104109243-A0202-12-0333-257
Figure 104109243-A0202-12-0334-258
Figure 104109243-A0202-12-0335-259
Figure 104109243-A0202-12-0336-260
Figure 104109243-A0202-12-0337-261
Figure 104109243-A0202-12-0338-262
Figure 104109243-A0202-12-0339-263
可藉由本文所述之相同方法，自已知起始材料藉由使用普通技術容易地製備其他化合物。預期具有相似生物活性之該等化合物之實例包括：
Figure 104109243-A0202-12-0339-264
Figure 104109243-A0202-12-0340-265
Figure 104109243-A0202-12-0341-266
彼等熟習此項技術者僅使用常規實驗即可認識或能夠確定本文所述特定實施例及方法之許多等效內容。該等效內容意欲涵蓋於以下申請專利範圍之範疇內。
<110> 瑞士商諾華公司
<120> 用於治療細菌感染之單內醯胺(MONOBACTAM)有機化合物
<130> PAT056170
<160> 17
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 1
Figure 104109243-A0202-12-0342-267
<210> 2
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 2
Figure 104109243-A0202-12-0342-268
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 3
Figure 104109243-A0202-12-0342-269
<210> 4
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 4
Figure 104109243-A0202-12-0343-270
<210> 5
<211> 866
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 5
Figure 104109243-A0202-12-0343-271
<210> 6
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 6
Figure 104109243-A0202-12-0344-272
<210> 7
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 7
Figure 104109243-A0202-12-0344-273
<210> 8
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 8
Figure 104109243-A0202-12-0344-274
<210> 9
<211> 884
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 9
Figure 104109243-A0202-12-0344-275
Figure 104109243-A0202-12-0345-276
<210> 10
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 10
Figure 104109243-A0202-12-0345-277
<210> 11
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 11
Figure 104109243-A0202-12-0345-278
<210> 12
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 12
Figure 104109243-A0202-12-0345-279
<210> 13
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 13
Figure 104109243-A0202-12-0346-280
<210> 14
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 14
Figure 104109243-A0202-12-0346-281
<210> 15
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 15
Figure 104109243-A0202-12-0346-282
<210> 16
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 16
Figure 104109243-A0202-12-0346-283
<210> 17
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成寡核苷酸
<400> 17
Figure 104109243-A0202-12-0346-284
Figure 104109243-A0202-11-0003-404

Claims (16)

  1. 一種式(I)化合物，
    Figure 104109243-A0305-02-0350-1
     或其醫藥上可接受之鹽，其中：Z係CR4或N；R1係H或C1-C4烷基；R2係選自由以下組成之群：H、C1-C4烷基及-COOH或R1及R2與其所附接之碳一起形成選自以下之環：C3-C6環烷基環及含有至多兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之4至6員雜環；R3選自H、-COOH及-L1-W-(CH2)0-2-X-R5；R4係H或鹵基；每一L1獨立地係直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；W係鍵、O、NH或S；X係苯基或含有1至3個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5至6員雜芳基環；其中該等苯基及5至6員雜芳基視情況經一或兩個選自以下之基團取代：C1-4烷基、羥基、-CN、F、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)及-N(C1-4烷基)2；R5選自
    Figure 104109243-A0305-02-0351-2
     其中R1b、R2b及R3b獨立地係氫、羥基、CN、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基，其中每一(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、(C3-C6)環烷基或含有N、O或S作為環成員之4員、5員、6員或7員雜環基可經一個、兩個或三個獨立地選自Y之取代基取代，且其中R2b及R3b可視情況與其所鍵結之氮原子一起形成包括0或1個選自N、O及S之其他雜原子之5至7員雜環基，該雜環基視情況經Y取代；Y選自F、CN、-NH2、Q、-L2-C(O)NR10-L2-Q、-L2-NR10-C(O)-L2-Q、-L2-OR10、-L2-N(R10)2、-L2-N+(R11)3、-L2-NR10-C(O)R10、-L2-NR10-L2-N(R10)2、-L2-O-C(O)OR10、-L2-O-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-N(R10)2、-L2-NR10-C(O)-OR11、-L2-C(=NR10)-N(R10)2、-CON(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2、-L2-NR10-C(=NR10)-R10、-L2-C(O)N(R10)2、、-L2-O-SO3R10；L2在每次出現時獨立地係鍵或視情況經NH2、OH或F取代之直鏈或具支鏈C1-4伸烷基；Het係4至6員飽和雜環，其中該雜環含有1或2個選自N、O及S之雜原子作為環成員且Het係經側氧基取代且視情況進一步 經Y取代；R10及R12獨立地係H或視情況經一或兩個選自OH、NH2或Q之基團取代之C1-4烷基；Q選自-L2-N(R13)2、-L2-N+(R14)3、-L2-NR13-C(=NR13)-N(R13)2、-L2-NR13-CR13(=NR13)、-L2-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy、-L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy、-L2-Cy-L2-R13、-L2-Cy-L2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-N(R13)2、-L2-SO2-N(R13)2、-L2-NR13-SO2-R13、-L2-NR13-L2-Ar、-L2-S-L2-Cy、-L2-NR13-(C=O)-O-R13、
    Figure 104109243-A0305-02-0352-3
     每一Cy獨立地係3至6員環烷基或含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之3至6員雜環基，且視情況稠合至5至6員芳基或雜芳基環，其中每一Cy視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；Ar係苯基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、C1-3鹵烷基、R14、羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2；R11在每次出現時獨立地係C1-4烷基；且同一N上之兩個R10或兩個R11或兩個R12可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基或側氧基取代之4至6員雜環；R13在每次出現時獨立地係H或視情況經羥基、-OR14、-NHR14、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取 代之C1-4烷基；R14在每次出現時獨立地係視情況經羥基、C1-4烷氧基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代之C1-4烷基；其中同一N上之兩個R13或兩個R14可環化形成視情況經C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、胺基或側氧基取代之4至6員雜環；R15係H、鹵基、C1-4烷基、CN或-O(C1-4烷基)；每一R16獨立地係鹵基、C1-4烷基、-NH2、CN或-O(C1-4烷基)。
  2. 如請求項1之化合物，其中R1及R2與其皆附接之碳一起形成環丙烷環，且R3係-COOH。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中Z係CH。
  4. 如請求項1之化合物，其中Het選自吡咯啶-2-酮、噁唑啶-2-酮及咪唑啶-2-酮，且視情況經Y取代。
  5. 如請求項1之化合物，其具有式(II)之結構：
    Figure 104109243-A0305-02-0353-4
     或其醫藥上可接受之鹽。
  6. 如請求項1之化合物，其中---O-CR1R2R3選自
    Figure 104109243-A0305-02-0353-5
    Figure 104109243-A0305-02-0354-6
  7. 如請求項1之化合物，其中Het選自
    Figure 104109243-A0305-02-0354-7
  8. 如請求項1之化合物，其係醫藥上可接受之鹽。
  9. 如請求項1之化合物，其係選自：
    Figure 104109243-A0305-02-0354-8
    Figure 104109243-A0305-02-0355-9
    Figure 104109243-A0305-02-0356-10
    Figure 104109243-A0305-02-0357-11
    Figure 104109243-A0305-02-0358-12
    Figure 104109243-A0305-02-0359-13
     及其醫藥上可接受之鹽。
  10. 如請求項1之化合物，其係
    Figure 104109243-A0305-02-0359-14
     或其醫藥上可接受之鹽。
  11. 如請求項1之化合物，其用於療法。
  12. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至10中任一項之化合物及至少一種醫藥上可接受之賦形劑。
  13. 一種如請求項1至10中任一項之化合物之用途，其用於製造用來治療革蘭氏陰性細菌感染之藥劑，其中該革蘭氏陰性細菌感染 係由以下細菌之種類引起：伯克氏菌屬(Burkholderia)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、腸桿菌屬(Enterobacter)、大腸桿菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腦膜炎菌(Meningitidis)、摩根菌屬(Morganella)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、變形桿菌屬(Proteus)、沙門桿菌屬(Salmonella)、沙雷氏菌屬(Serratia)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、類桿菌屬(Bacteroides)、曲狀桿菌屬(Campylobacter)、奈瑟菌屬(Neisseria)及窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)細菌。
  14. 一種如請求項12之醫藥組合物之用途，其用於製造用來治療革蘭氏陰性細菌感染之藥劑，其中該革蘭氏陰性細菌感染係由以下細菌之種類引起：伯克氏菌屬(Burkholderia)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、腸桿菌屬(Enterobacter)、大腸桿菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腦膜炎菌(Meningitidis)、摩根菌屬(Morganella)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、變形桿菌屬(Proteus)、沙門桿菌屬(Salmonella)、沙雷氏菌屬(Serratia)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、類桿菌屬(Bacteroides)、曲狀桿菌屬(Campylobacter)、奈瑟菌屬(Neisseria)及窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)細菌。
  15. 如請求項13或14之用途，其中該細菌感染係由腸桿菌科(Enterobacteriaceae)之種類引起之院內肺炎、腹內感染或尿路感染，該腸桿菌科之種類為大腸桿菌。
  16. 一種醫藥組合，其包含如請求項1至10中任一項之化合物及第二治療劑，其中該第二藥劑為β-內醯胺酶抑制劑。
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