TWI296523B

TWI296523B - Formulations

Info

Publication number: TWI296523B
Application number: TW094137819A
Authority: TW
Inventors: Salve Pilar Calvo; Barreira Maria Tobio; Jacob Hendrik Beijnen; Bastiaan Nuijen
Original assignee: Pharma Mar Sa
Priority date: 2004-10-29
Filing date: 2005-10-28
Publication date: 2008-05-11
Also published as: BRPI0517238A; RU2382647C2; US20150094313A1; HRP20070374T3; AU2005227421A1; HN2005029978A; JP2006124393A; CN102018714B; AR051653A1; MXPA05011650A; IL182776A0; JO2464B1; JP4268163B2; DE602005001833T2; CY1107773T1; US10322183B2; UY29183A1; SV2006002283A; PA8650801A1; BRPI0517238B1

Description

1296523 九、發明說明： C 明戶斤屬^标冷員3 發明領域本發明係有關於配方。更特定地，本發明係有關於伊 5 特那斯汀組成物及配方，諸如，伊特那斯汀743。 t先前技術2 發明背景伊特那斯汀業經確認，其結構特徵及合成法業經描述。見，例如，R. Sakai，等人，1992, Pro. Natl. Acad. Sci, USA 10 89 ’ 第 11456至 11460頁，“Additional antitumor ecteinascidins

from Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in vivo”； R. Menchaca，等人，2003, J· Org. Chem· 68(23)，第 8859至 8866 頁，“Synthesis of natural ecteinascidins(ET-729, ET-745，ET-759B，ET-637，ET-594)from cyanosafracin B” ； 15 and I. Manzanares，等人，2001，Curr. Med. Chem.— Anti-Cancer Agents，1，第 257至 276 頁，“Advances in the Chemistry and Pharmacology of Ecteinascidins, A Promising New Class of Anticancer Agents” ；及其中之參考資料。這些參考資料係描述伊特那斯汀。伊特那斯汀之實例由 2〇 ET-743、ET-729、ET-745、ET-759A、ET-759B、ET-759C、 ET-770、ET-815、ET-731、ET-745B、ET-722、ET-736、 ET-738、ET-808、ET-752、ET-594、ET-552、ET-637、ET-652、 ET-583、ET-597、ET-596、ET-639、ET-641，及彼等之衍生物（諸如，乙醯基化型、甲醯基化型、曱基化型，及氧化 5 1296523 物型（諸如，N-氧化物型）)提供。文中並未再明球地提供此等伊特那斯汀的結構特徵說明，因為此等參考資料及其中之引文已提供詳細說明；熟悉本技術的任何一般人可直接自文中列舉之資料來源及相 5關的資料來源獲得此種資訊。至少一種該等伊特那斯汀化合物(ΕΤ_743)業經廣泛研究’且其在文中可明確地用於說明本發明之特役。伊特那斯、;丁 743(ΕΤ-743)為自海洋被囊動物海鞘類 (Ecteinascidia turbinata)分離的一種四氫異喹琳生物驗，且 10 其具有以下結構：

含ET-743及藥學上可接受載劑、稀釋劑或賦形劑之藥學組成物在美國專利US5,256,663中申請專利。 ET-743、其化學性質、作用機制及臨床前與臨床研究 15 之最近評論可以在下述資料中找到·· van Kesteren，Ch.等人， 2003，Anti-Cancer Drugs， 14(7)，第 487 至 502 頁： “Yondelis(trabectedin，ET-743): the development of an anticancer agent of marine origin”，及其中之參考資料。 E T-74 3具有可抗各種在無胸線的小鼠中生長的人腫瘤 20 異種移植物（其包括黑色素瘤及卵巢與乳癌）之有效防止惡 1296523 性腫瘤活性。在ET-743之臨床第I期研究中，在罹患肉瘤及乳房與卵巢癌之患者身上發現可成功的反應。因此在罹患各種贅瘤疾病的癌症患者身上所進行之幾種第Π其試驗中目前正 5 在密集研究此種新藥物。如WO 0069441(其完全併入本案以為參考資料)所述，由於ET-743可合併甘露醇及磷酸鹽緩衝劑，所以可以以無菌凍乾產物供應及貯存。較佳配方為一種得自〇 9%氯化鈉或其它合適之輸液載劑、250微克之具有250毫克甘露醇、 10从毫克磷酸單鉀的ET-473，及可調整1^之磷酸的配方。然後重組並稀釋該配方以供靜脈注射使用。如其結構特徵所顯示，Ετ_743為一種複合化學實體。此外，ET-743顯示出有限的水性溶解度，且特別在生物共存形式及配方中，其溶解度很難預測及達成。尤其當製備

包括下述之一或多種的特性之配方：方％，這些特性考驗一般此等應用較一取決於具有方：生物共存性、於環境條件下或於儘可能接近環境溫度之條件下具有儘可能長之適用期的安定性，及可形成於環境或接近環境條件下具有

ET具有有限的水性溶解度。然而藉由將pH調整至4， 1296523 ，可得到合適的ET743濃度。由於ET743在水溶液中之不安定 : 性，所以必需凍態乾燥以增加該藥學產物之貯存安定性。 , 目前，E1V743經調製成無菌凍乾產物，其含250微克活性物，質/每一劑量單位、250毫克甘露醇(作為增體積劑）及用以 5溶解ET-473之0.05M磷酸鹽緩衝劑(pH4)。於冷凍及室溫在長期貯存在，該配方不穩定，因此應該貯存於-15與_25。〇間之溫度下，且防止光線。藉由添加5毫升水而重組以方便注 φ 射，且接著於靜脈内（1V)注射前，在生理鹽水内經稀釋。於環境溫度下該重組溶液之安定性可維持至高24小時。〇貫務上，該含250微克Ετ_743之產物的製法為在模製小玻瓶内凍乾5毫升之含ET-743、甘露醇、磷酸鹽緩衝劑及水的/谷液亦藉由;東乾20宅升該溶液而製得含1毫克et-743之模製小玻瓶。凍乾法典型上包括將該溶液凍結，在主要乾燥期間降 15低壓力以移除藉由昇華而自該已凍結物質產生之水蒸汽， • 並得到半賴物料，錢在次要乾_間增加溫度以移除得自該半乾缝料之殘留水。接著密龍料玻槪。上述習知ET-743配方會產生一些缺點。其中之一為該康乾ET-743配方必需貯存於約_2〇 t下以防止該et %之 20分解才能獲得至少18個月之適用期。此外，ΕΤ-743配方會面臨相當大量抓斯雜質之形成的問題。ET_7G1為於該;東態乾燥法期間及該ETj43配方貯存期間所產奴主㈣質。其係得自ΕΤ·743之水解，且具有以下結構： 8 1296523

然而，雜質之形成會降低或甚至預先阻礙將配方標準化之作用。因此較佳提供其組成物不會由於未受控的雜質形成而輕易及非可預期地改變之實施例的配方及其製法。 5 而且，上述習知ET-743配方方法之另一項缺點在於為了獲得該凍乾配方，必需凍乾具有裝填體積約為5至20毫升之相當大量的溶液。反之，較佳研發可製備具有與ET-743 一樣複雜之化合物之配方的方法，該方法可製備具有較高活性物質濃度之配方，因此可減少欲處理的體積。由於該 10 相當高的裝填體積(5或20毫升），所以在用於凍乾步驟之習知方法中需要時間及能源。就該時間及能源而言，尤其在該次要乾燥步驟中，亦會產生ET-743分解之危險。由於該等ET-743配方作為抗腫瘤劑的潛能，有必要提供一種可以解決習知配方及製法不能處理或不能完全解決 15 的問題之配方。這些問題包括ET-743之安定性問題。ET-743 配方之實施例應該較佳具有令人滿意的凍乾性質，應該較佳容易隨時重組，且其應該較佳具有稀釋性質，諸如，一旦藉由注射流體稀釋時，可提供與用於如文中所述之醫學用途的配方同樣多的所欲特徵。如上述，ET-743配方之實 20 施例於長期貯存期間應該具安定性。此外，該配方及其製 1296523 法應該可符合生物共存性的標準，且因此應該可以至少於用於注射的濃度下，有效地使用非毒性之配方載劑。在母配方内，賦形藥與藥物的交互作用之一般評論係藉由 Akers，MJ在 Journal of phamiaceutical Science，91， 5 2283-2300中提供。該參考資料特別提供有關於增體積劑及溶解保護劑(lyoprotectant)之章節，其包括與凍態乾燥法有關的標的。已預期除了 ET-743外，就本發明而言所研發之該等方法及配方尚可適用於其它伊特那斯汀。 10 本發明一項目標為提供伊特那斯汀之安定配方，及製造此等配方之方法。本發明之一項特定目標為提供一種新安定之E1V743配方。尤其需要避免雜質之形成。更詳細地，最好提供實質上不含ET-701之配方的實施例。 15 而且，本發明之其它目標係有關於可製備具有ET-743 濃度高於藉由習知方法所得到之濃度之E τ-743配方的該製法研發。另外的目標係有關於用以改良如ετ_743一樣複雜之化學貫體之溶解度，最後可增加用於凍乾之溶液中的 ΕΤ-743濃度’且因此在凍乾該配方前，可減少其在該小玻 20瓶内之裝填體積的方法之研發。【韻^明内容^】發明概要根據本發明係提供含ΕΤ-743及雙醣之ΕΤ-743組成物，及製備此等組成物之方法。此等組成物之較隹實施例具有 1296523 藥學純度。本發明之其它實施例係由含伊特那斯汀及雙醣之組成物提供。此等組成物之一些實施例係由含伊特斯那汀（諸如， 5 ET-743)及雙醣之凍乾配方提供。本發明提供製備此等配方之方法。本發明提供在ET-743配方内減少或甚至實質上去除雜質之形成的方法。一些實施例包括在ET-743配方内減少或甚至實質上去除ET-701形成之方法。 10 本發明亦提供更有效處理伊特那斯汀（諸如，ET-743) 配方之方法，其包括用於製造較高濃度配方之方法及當製造凍乾配方時，用於減少小玻瓶之裝填體積的方法。本發明亦提供可溶解複雜化學實體（諸如，伊特那斯汀，其包括，但不限於ET-743)之方法。此等方法可以在用 15 於凍乾之本體溶液中製造更濃縮的ET-743溶液，因此可得到減少的裝填體積。圖式簡單說明第1圖係比較性安定性研究。於5°C下貯存6個月後之 ET-743純度評估。 20 第2圖係比較性安定性研究。於5°C下貯存12個月後之 ET-743純度評估。第3圖係於5°C下貯存9個月期間，在不同配方内所產生之雜質。第4圖係於5°C下貯存3個月期間，該等新配方及3批參 11 1296523 考配方之£丁_743純度％評估的比較。苐5圖係於5 C下貯存3個月期間，在不同配方内所產生之雜質。第6圖係於25°C/65%RH下貯存3個月期間，該等新配 5方及3批參考配方之£1743純度％評估的比較。第7圖係於25 C/65%RH下貯存3個月期間，在不同配方内所產生之雜質。 % 第8圖係於40°C/70%RH下貯存3個月期間，該等新配方之比較性ET-743純度％評估。 10 帛9圖係於4(rc/7G%RH下貯存3個月期間，該等新配方之比較性ET-743純度％評估。 I：實施方式3 較佳實施例之詳細說明 15 20 就本發明而言，我們已發現雙酶類可安定化伊特那斯、汀配方。伊特那斯、汀(其包細丁_743)為複雜的化學實體，就其它不相關的化學物質之作用而言，发龙一在配方中之作用並不能預測。當在配方中含有至少一種伊特那斯灯作為該活性物質（亦即可符合生物共存性的標準，其包括醫學標準）時，此種作用甚至更難預測。在這一方、/ ’我們已進一步發現使用雙醣類作為增體積劑可明顯地滅少於泫、東能軟燃法及ET-743配方貯存期間所形成之雜質。、伊特那斯汀可能低之ET-743 配方，則ET-701被視為雜質，其在該配方内之广在至」當本發明實施例係為提供實質上不含其它 (諸如，ET-701)，或ET-701之含量至少備必 12 1296523 需減少。此外，雙醣類之使用亦可改良貯存條件，其可以使該凍乾配方在廣溫度範圍（其包括冷凍條件及室溫）内長期貯存。如文中使用，例如，在該措辭“安定性ET-743配方”中 5 之名詞“安定性”係指可符合如文中報導之安定性特徵及其同樣語（習知配方並不具有此等安定性特徵，且當藉由習知製法而製得該配方時，其並不能獲得該等安定性特徵）的配方。本發明之實施例的實例係藉由含伊特那斯汀（諸如， 10 ET-743)及雙醣之新穎藥學上可接受的組成物而提供。如前文所述，伊特那斯汀業經廣泛描述。其可見有以下通式（I ):

其中： 15 R5為OH、烷氧基或烷醯氧基； R6為氫、烧基、稀基、快基或芳基； R12為氮、烧基、細基、快基或芳基， 13 1296523 R16為氫、烷基、烯基、炔基或芳基； R17為OH、烷氧基或烷醯氧基； R18為0H、烧氧基或烧醯氧基； R21為Η、OH、CN或另一種親核性基團；及 5 R為氫，而Rb為可選擇性經取代之胺基，或 1^與0可形成羰基官能基=0，或 R、R與彼專所連接之碳可形成四氫異喧琳基。在這些化合物中可根據以下指示選用該等取代基：烧基及烧氧基難具有丨至12個碳原子。更佳的烧基及 10烷氧基種類具有1至、約6個碳原子，且最佳為i、2、3或4個碳原子。在本發明該等化合物中甲基、乙基，及丙基(其包括異丙基)為更特純基。在本發明該等化合物巾甲氧基、乙氧基及丙氧基(其包括異丙氧基)為更特佳烧氧基。另一種更佳的烧基及烧氧基種類具有4至約12個碳原子，又更佳為 15 5至8個碳原子，且最佳為5、6、如個碳原子。如文中使用，除非另有修飾，該名詞“燒基，，係兼指環系及非環系基團，但是環系基團可包含至少三個碳環成份。在本發明該等化合物中較佳之稀基及快基具有一或多個不飽和鍵合驗技⑴碳科。—種更佳輯基或快 2〇基種類具有2至約6個碳原子，且最佳為a、3或4個碳原子。另-種更佳的烯基或块基種類具有4至約12個碳原子又更佳為5至約8個碳原子，且最佳為5、6、7或8個碳原子。如文中使用》亥名„司烯基及“块基，，係兼指環系及非環系基團。在本發明該等化合物中合適之芳基包括單環及多環化 14 1296523 ，合物，其包括含有個別及/或稠芳香基之多環化合物。一 . 般芳基含有自1至3個分離或稠環及6至約18個碳環原子。特佳之芳香基包括經取代或未經取代之苯基、萘基、聯苯基、非基及蒽基。 • 5 合適的烷醯氧基及烷醯基具有2至約20個碳原子，更佳為2至約8個碳原子’又更佳為2至約6個碳原子’甚至更佳為2個碳原子。另一種較佳的烷醯氧基種類具有12至約20個 ^ 碳，又更佳為14至約18個碳原子，且最佳為15、16、17或 18個碳原子。 1〇上述基團可以於一或多個可用的位置經一或多個合適基團取代，該等合適基團包括諸如，OR’、=〇、SR’、SOR’、 S02R’、N〇2、NHR，、N(R，)2、=N-R，、NHCOR，、N(COR，)2、 NHS02R’、CN、鹵素、C(=〇)R，、C02R，、0C(=0)R，，其中、該等R’基各獨立選自由H、OH、N02、NH2、SH、CN、鹵 15 素、=0、C(=0)H、C(=0)CH3、C02H、經取代或未經取代 ^ 之匕至心2烷基、經取代或未經取代之(^至口2烯基、經取代或未經取代之C2至cn炔基及經取代或未經取代之芳基所組成之群組。本發明該等化合物中之合適鹵素取代基包括氟、氯、溴及峨。 20 本發明之較佳化合物為其中一或多個以下定義適用之通式（I )化合物·· R5為烷醯氧基； R6為曱基； R12為甲基； 15 -1296523 R16為甲基； R17為甲氧基； R18 為 OH ; R21為 Η、OH 或 CN ;及 Ra為氫，且Rb為醯胺基，或 ^與以可形成=0，或

Ra、Rb與彼等所連接之碳可形成式（Π)基團：

本發明之化合物實例包括天然伊特那斯汀，諸如，伊特那斯汀743及例如，在US 5,089,273、US 5,478,932、US 5,654,426、US 5,721，362、US 6，124,293、US 5，149,804、 US 09/546,877、US 5,985,876及WO 01/77115 中所揭示之其它1，4橋接之稠伊特那斯汀化合物。更特佳為下式（皿）化合物：

16 15 -1296523 其中

Ra為氫，而Rb為式-NHRf-醯胺基(其中以為烷醯基），或 ^與!^可形成=0，或

Ra、Rb與彼等所連接之碳可形成式（Π)基團：

Rd為烷醯基；及 R21為 Η、0H 或 CN。該等烷醯基可以是乙醯基或更高碳(例如，至高C20)之醯基。因此，本發明之較佳化合物包括：

17 1296523

Me 及具有不同醯基之相關化合物。，汀^特佳朴_㈣3，_伽⑽特那斯、糖適:=:::_類實例包括乳糖、海中的另可用於本發日狀—些實施例 =另外雙酿貫例包括麥芽糖、異麥芽糖、庶糖、異海藻糖、山梨糖、松二 …、及彼等之混合物中之至少一種。杀一糖相二畴， 10 15 斯'、丁 (ΪΓΓ其它實施财，職成物包含—種伊特那 _ °，τ_743)及純糖H絲發H它f施 =，該組成物包含-種伊特那_(諸如，咖 "糖之雙糖。在本發明之其它實施例中，該組成物ϋ 種伊特那斯汀(諸如，Ετ_ JL ^ r ^ …、庶糖之雙醣。在本發明之 ΕΤ=:Γ該組成物包含—種伊特_丁 (諸如，且2 之妓。在轉k料實關中，該雙Γ在伊特那斯梢如，㈣3)及無異麥芽糖之那斯、;丁 (諸如m)zzf，該組成物包含—種伊特热、.滅、准一醣之雙醣。在本發明之其 18 1296523 它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀(諸如，ΕΤ-743) 及無異蔗糖之雙醣。在本發明之其它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀(諸如，ΕΤ743)及無異海藻糖之雙醣。在本發明之其它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀 5 (諸如，ΕΤ-743)及無山梨糖之雙醣。在本發明之其它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀(諸如，ΕΤ-743)及無松二糖之雙醣。在本發明之其它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀（諸如，ΕΤ-743)及無蜜二糖之雙醣。在本發明之其它實施例中，該組成物包含一種伊特那斯汀（諸如， 10 ΕΤ-743)及無龍膽二醣之雙醣。因此，在一些實施例中，本發明該組成物含有小於2 重量％或小於1重量％或小於0.5重量％或小於0.2重量％或小於0.1重量％之乳糖、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、異麥芽糖、纖維二醣、異蔗糖、異海藻糖、山梨糖、松二糖、蜜二糖， 15 及龍膽二醣中之至少一種，較佳各種。如文中使用該名詞“彼等之混合物”及“彼等之組合”係指至少兩種可提供該名詞“彼等之混合物”或“彼等之組合” 的先決基礎之實體。作為說明而非限制，該名詞“含Α、Β、 C，及彼等之混合物中之至少一種的產物”係指符合下述任 20 一項之該產物的實施例：Α在該產物中；Β在該產物中；C 在該產物中；A及B在該產物中；A及C在該產物中；B及C 在該產物中；且A、B及C在該產物中。而且，適用於文中文之化學實體的該等名詞，諸如，“反應”、“形成”，及相關之名詞當然指下述任一項：⑻該化學 19 1296523 實體本身，及(b)該化學實體之形式可以使該實體存在於該反應介質中。同樣地，就一操作或反應步驟而言，將一化學實體命名或提供其化學式，或當在介質（固體或液體，其包括產物、配方，及組合）中將其命名或提供其化學式在文 5 中係指下述任一項：（a)該實體本身，及(b)該實體之形式可以使該實體存在於該介質中。例如，將文中之酸性化學實體命名，係指在其被命名之本文中，該實體存在之任一種形式或形式群。作為說明但非限制，將該化學實體命名為 “氯化鈉”或提供其化學式在文中係指該實體NaCl本身為雙 10 原子分子，其係為氯化鈉存在於該有關介質内之形式；若該有關介質内之氣化鈉係完全或部份解離，其亦指未經解離及/或已解離的化學種類之集合，其包括在此種介質内之經溶劑締合、部份籠敝、與其它種類締合等之種類。文中涉及之任何化合物預定代表此種特定化合物以及 15 某些變異或形式。更詳細地，文中涉及之化合物可具有不對稱中心，因此以不同鏡像異構型存在。文中涉及之該等化合物的所有光學異構物及立體異構物，及彼等之混合物被認為屬於本發明之配方及方法之範圍。因此文中涉及之任何特定化合物預定代表消旋物、一或多種鏡像異構型、 20 一或多種非鏡像異構型、一或多種構形異構型，及彼等之混合物中之任一種。而且，文中涉及之化合物可以以幾何異構物（亦即，順式及反式異構物）、互變異構物或構形異構物存在。另外，文中涉及之任何化合物當存在於該介質内時，係預定代表 20 1296523 水合物、溶劑化物，及多晶形物，及彼等之混合物。此外，文中涉及之化合物可以以經同位素楳§己之形式存在。文中涉及之化合物及彼等之混合物的所有幾何異構物、互變異構物、構形異構物、水合物、溶劑化物、多晶形物，及經 5同位素標記之形式被認為屬於本發明配方及方法的範圍。為了提供更簡明的說明，文中所予之定量式有一部份並未經該名詞“約，，修飾。已知不論是否明確使用該名詞約’’，文中所予之每一種數量係意指實際特定值，且其亦意指可根據本技藝之一般技術而合理推斷之此種特定值的 10近似值，其包括由於用於此種特定值之貫驗及/或測定條件所得到之等值及近似值。就本發明而言，該活性物質或物質群可以得自天然源、半合成法或合成法，其包括各種來源之組合。在該活性物質為伊特那斯汀(諸如，et_743)之實施例中，該ET-743 15可以是，例如，自Ecteinascidia屬之被囊動物（較佳為海鞘類（Ecteinascidiaturbinata)物種）分離的天然源。該ET-743可以得自合成或半合成法。可參考，例如，W0 0069862及 W〇 0187895，其皆完全併入本案以為參考資料。在本發明之實施例中，該活性物質對增體積劑之比率 20係根據該增體積劑之溶解度而測定，且當該配方經凍乾時’其亦根據該增體積劑之凍乾能力而測定。已預計在某些貫施例中該比率（W/W)可以是約1 ·· 1，在其它實施例中約為1 · 5 ’在又其它實施例中約為1 : 10，然而其它實施例表示比率在自約1 : 10至約1 : 1範圍内。已預計其它實施例之 21 1296523 此等比率在自約⑽至如：咖範圍内，又另外實此等比率在自仏刚她：15__。當該活性化入 5 物為抓743時，ET·743對增體積劑之比率(wAv)典型上為: 約1:100至約1:1500，較佳為自m: 至約1:_，豐佳為自m: 250至約1:_，且又更佳為則··伽。該;東乾物質通常存在於含特定量之伊特那斯汁或活性

化合物的小祕中1該活性化合物為ET_743時，活性數量以250微克及1毫克表示。本發明並不受限於特定容器型或設計，其限制條件為 10該容器之預定用途及其標準可令人滿意。本發明之實施例提供一種裝在小玻瓶(較佳為管狀小玻瓶）内之配方。本發明該凍乾配方可經重組及稀釋以得到呈隨時可供靜脈注射之溶液形式的本發明組成物。再組流體之實際數量並非本發明實施例之限定特徵。作為說明但非限制:可 15使用一體積之水以重組根據本發明之凍乾配方實施例。大部份此等體積不超過約20毫升，較佳體積在自約丨毫升至約 15¾升範圍内，更佳在自約1毫升至約1〇毫升範圍内，且又更佳在自約1毫升至約4毫升範圍内。當該活性物質之具體貝例為ET-743時，在此等實施例中之該重組溶液之£丁_743 20濃度至高500微克/毫升，較佳為濃度約5〇微克/毫升、約 i〇〇微克/毫升，及約250微克/毫升。若必要，本發明之重組實施例可進一步經稀釋，該進一步稀釋步驟並非本發明之限定特徵。較佳使用通常為〇·9%氯化鈉或5%葡萄糖之水性系統進行該進一步稀釋步 22 1296523 • 驟。可根據該重組溶液中之該濃度及該稀釋溶液中之所欲 • 濃度而稀釋該重組溶液。 • 可使用根據本發明之ET~743配方的實施例以治療各種 . 癌症，其包括肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、骨肉瘤、卵巢 -5癌、乳癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、間皮瘤、腎癌、子宮内膜癌及肺癌中之任一種，及數種此種癌形式之病症的治療。已知就本文而言，“治療，，係指可致使癌病症(群)之病= • 好轉的作用。亦可使用本發明之ET-743配方的實施例以二療對其它療法尚未表現良好的反應之難醫治的癌病症。: 10且’在使用實驗室組織之試驗(其包括，但不限於m 驗、分析試驗，及模型化測定）中可以使用本發明之 15 20 含伊特那斯聯如，ET_743)之本發明實施例較佳藉由注射投藥。該注射步驟典型上係根據循環基礎而重複，若二：重複’例如]至2°次循環。該循環咖阳做方期’及通常亦包括未注射ET 743期。典型上，行數週’因此，該循環通常包括—或多個之ET-743 是另及3多週完全該循環之時間。較佳為3週之循環 L時ΓΓ㈣以在難叫3怖特別為2 二=射期中根據每週基礎之輪液。較佳為料開始時之單一投藥。該注射時間較佳為約卜3或 23 1296523 24小時。該重組及稀釋溶液可例証本發明之實施例。可以使用可用的方式以靜脈注射方式投予經重組及稀釋之配方。可根據有關劑量限制毒性(Dose Limiting Toxicity)之現有資料 5 的用藥計劃而選用該劑量，該資料可參考，例如，W0 0069441、W0 0236135及W0 0339571，與van Kesteren, Ch· 等人，2003, Anti-Cancer Drugs，14(7)，487-502。這三種WO 專利說明書及van Kesteren之專論併入本案以為特定參考資料。 10 較佳的用藥規定包括·· (a) 在各次循環之間有3週間隔下，以24小時使用靜脈注射方式投予約1.5毫克/米2身體表面積； (b) 在各次循環之間有3週間隔下，以3小時使用靜脈注射方式投予約1·3毫克/米2身體表面積。 15 (c)在各次循環之間有3週間隔下，以3小時使用靜脈注射方式投予約0·580毫克/米2身體表面積。伊特那斯汀（諸如，ΕΤ-743)可以與另一種藥物一起使用。例如，其可以一另一種抗腫瘤藥一起投予。讀者可來考WO 0069441及WO 0236135中所揭示之群組，這兩種專利 20 皆併入本案以為特定參考資料。此等其它藥物之實例包括小紅莓（doxorubicin)、順翻（cisplatin)、太平洋紫杉醇 (paclitaxel)、卡鉑（carboplatin)、聚乙二醇化脂質體小紅每、多舍他昔（docetaxel)、卡佩西他賓（capecitabine)，及吉西他賓（gemcitabine)。可以使用具有其它作用模式之藥物，其包 24 工296523 括地賽米松(dexamethasone)。可以在該伊特那斯汀(諸如， ET-743)之投藥前、期間或其後，投予該其它藥物。可藉由康乾以含該伊特那斯;丁及雙之本體溶液的形式之本發明組成物而製得含伊特那斯汀(諸如，Ετ_743)的^ 5發明配方之實施例。通常，該立體溶液可經緩衝至，例如，約ΡΗ4。可以使用其它可用之緩衝劑，諸如，磷酸鹽/檸檬酸鹽緩衝劑(磷酸鹽緩衝劑及檸檬酸鹽緩衝劑之混合物）、乳酸鹽緩衝劑、抗壞血酸鹽緩衝劑、酒石酸/檸檬酸鹽緩衝劑、碳酸氫鹽/鹽酸緩衝劑、醋酸鹽緩衝劑、琥珀酸鹽緩 10衝劑及甘胺酸/鹽酸緩衝劑。可以使用緩衝劑之混合物。可控制pH於所欲值之生物共存性緩衝劑可提供本發明之另外實施例。該本體溶液可包括其它組份，例如，表面活性劑，諸如’ ♦氧乙稀20山梨糖醇酐單油酸g旨或聚氧乙稀硬脂酸 15醋。其它可使用之表面活性劑包括鱗脂，諸如，卵填脂； I氧乙細-聚氧丙烯共聚物，諸如，治洛尼克(PlUr〇nic)表面活化劑；12-羥基硬脂酸之聚氧乙烯酯，諸如，Solutol表面活化劑；膽固醇之乙氧化物，諸如，二醯基甘油、二烷基甘油；膽汁鹽，諸如，膽酸鈉、去氧膽酸鈉；蔗糖酯，諸 20 如，蔗糖單月桂酸酯、蔗糖單油酸酯；聚乙烯吡咯酮(PVP); 或聚乙烯醇(PVA)。該配方通常以含該凍乾產物之小玻瓶提供。然而，該供應形式並非本發明之限定因素。為了提供含該凍乾產物之小玻瓶，添加該本體溶液至小玻瓶，並凍乾。如文中所 25 1296523 达’本發明之另—目標為提供—種改良伊特 E削)之溶解度以增加該溶㈣之該伊特那二(=，減少進打該綠法前之該小坡瓶__體方=又= 本發明而言，所研發之該方法可以製具具有活物2 高於根據習知料喊狀如物質濃㈣切溶施例。0此使帛树财法所跑Μ 露醇之該習知配方。裝填體積之減少可以於該間節名時間及能源。此外，尤其在次要乾燥時可減少π· 分解之風險。 1〇如前文所述，ΕΤ_743具有有限的水性溶解度，見，例如，van Kesteren，Ch•等人，2〇〇3, Anti—以此灯 Drugs，14(7), 第487至502頁。習知方法可使用緩衝劑將介質之pH調整至4 以溶解ET-743。通常可使用〇·〇5Μ磷酸鹽緩衝劑（pH4)達成 5亥pH控制。就本發明而言，已發現可藉由在酸中形成Ετ_743 15之預溶液而改良該本體溶液内之ET-743溶解度。經由該預溶解作用，該本體溶液及小玻瓶内之ET_743濃度可增加，且該小玻瓶内之裝填體積可減少。在本發明這些實施例中’相對於習知裝填體積，該裝填體積通常可減少約8〇%。作為說明但並非限制，本發明之實施例可以使含0.25毫克 2〇 ET-743之小玻瓶得到1毫升的裝填體積，及使含1毫克 ET-743之小玻瓶得到4毫升的裝填體積。在本發明之其它實施例中，可藉由增加ET-743濃度而選擇性地進一步減少該裝填體積。習知方法包括ET-743、甘露醇及〇·〇5Μ填酸鹽緩衝劑 26 1296523 (pH4)之溶解及使用供注射用之水；由於在該介質内之 ET-743的低溶解度，所以該本體溶液之溶解度受到限制。就本發明而言，已發現在酸溶液内，Ετ_743之預處理可改良ΕΤ-743溶解度及可以使本體溶液具有更高濃度之 5 ΕΤ-743。因此，本發明提供可用於在該本體溶液内改良 ΕΤ-743之溶解度的方法，其包括將Ετ_743溶解在酸性介質内，使具有ΕΤ-743之該介質與該本體溶液之其它組份混合，亚選擇性地調整pH。在本發明之某些說明性但非限制性之實施例中，係使_酸鹽緩_進行pH調整。該酸性介質最好不含有或實質上無緩衝組份，且通常由水性酸組成。根據本發明，用於涞結乾燥之本體溶液的說明性實施例係由於pH下經破酸二氫鈉及磷酸緩衝之£了_743，與作為增體積劑之蔗糖的溶液提供。根據本發明該方法之說明性實施例提供如下：將 15 ET-743溶解在〇.肋粦酸内。然後混合供注射使用之水 (WFI”）、雜二氫卸、蔗糖及ΕΤ·743(其已預溶在〇鳥粦酸内）在持,合七以目視法檢查溶解作用，當可經目視鑑定時，即認糖解制已完全。檢錢職之pH，並調: 至自約1至約5範圍内之值，更佳在自約2至約4 5範圍内，又更U自約3至約4.5範圍内，且最佳藉由緩慢添加合適 ▲之酸而將_整至約切。此猶之較佳實施例為餐，在 ⑴月况下’較佳濃度為約〇1N。可選擇性地添加合適之驗以進仃pH控制。此種驗之較佳實施例為氫氧化鉀(較佳在溶液中），在該情況下，較佳濃度為約〇·1Ν。最後藉由添加合 27 .1296523 適之生物共存性流體(較佳為刪)而調整體積。然後根據所欲劑量裝在小玻瓶内。在本發明之某些實施例中，係藉由使用減少之次要乾燥時間而進行乾步驟。較佳規定包括冷卻至約書⑶ 度，於40至80微巴下進行主要乾燥，費時1〇至5〇小時，並於較佳壓力及於叱以上之溫度下進行次要乾燥費時脈 50小時。就本發明而言，名並立招在其匕規定中，較佳至-40〇C以下之溫度。

10 本發明之實施例包括藉由將產物冷卻至贼以下之溫度而進行來態乾燥。該主要乾燥步驟係於自約_2(rc至約 -26t之溫度及腳微巴之壓力下進行約15至得時。該次要乾燥步驟係於自約：叱至約—之溫度及約刚微巴之壓力下進行約20至40小時。本發明之凍乾配方的實施例適合於明顯高於習知配方 15貯存溫度之溫度下貯存。根據本發明之配方的貯存溫度實例為約+5°C。很容易藉由一般冰箱提供這些溫度。實例實例1 本實例係揭示8種具有習知ET-743配方（具有甘露醇)之 2〇新配方的比較安定性研究。使用乳糖及蔗糖以說明本發明。使用甘露醇進行參考物配方。嘗試使用其它已知增體積劑（諸如，聚葡萄糖(Dextran 40)及聚乙烯吡咯酮（Kollidon 12, PVP))以進行比較。在某些配方中使用表面活性劑聚氧乙烯(8)硬脂酸酯（Myrj 45)或聚氧乙烯2〇山梨糖醇酐單油酸 28 1296523 醋(PolyS〇rbate80)，而在某些配方中並不含有緩衝劑。藉由標準化程序而製備並凍乾本體溶液。製備15〇毫升體積之各配方：稱重用於該最終溶液之磷酸鉀的重量（1〇2克），並使其 5溶解在9〇%最終體積（135毫升）之水中。然後，使用0.1N磷酸將pH調整至pH4.〇。添加7·85毫克ET-743至混合玻璃容器内，並在2/3體積 (90毫升）之該磷酸鉀溶液内藉由磁性攪拌一小時而使其溶解（以目視法檢查溶解現象）。添加該含量之增體積劑及表面活化劑，並使其溶解在 I/3體積之«_驗巾。_，添減溶液至Ετ，743溶液内，並再維持攪拌，費時_小時。添加水使该溶液達最終重量（所有配方皆接受丄·㈣克 /cc之密度）。 15

藉由0.2 2微米纖維錢器而過賴溶液。以5毫升/小玻_鮮，將贿料人25毫升小玻瓶亚維持於^，直_行隸絲法為止。根據下表1進行凍態乾燥：

/東乾後’將小破瓶密封。將兮亥寺小玻瓶移至冷凍區(-20。〇。各小玻瓶之組成物如下述期間，水會蒸發。、n)’應注意於該;東乾程序 29 20 1296523 表π 參考物~ _蔗糖聚葡萄糖 PVP 乳糖 ET-743 0.250毫克 J.250毫克 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克甘露醇 250毫克蔗糖 _500毫克 Dextran 40 500毫克 Kollidon 12 375毫克乳糖 500毫克磷酸二氫鉀 34毫克〜毫克 34毫克 34毫克 34毫克磷酸足量，ρΗ4·〇 J量，ρΗ4·0 足量，ρΗ4.0 足量，ρΗ4.0 足量，ρΗ4.0 供注射使用之水足量，5毫升 ^量，5毫升足量’5毫升足量，5毫升足量，5毫升 ET-poly 8〇 ET-poly 80 sacc ET-p80 saccun 緩衝劑

表Π(續） ΕΤ-743 0.250毫克甘露醇 250毫克蔗糠

Polysorbate 80 50毫克

Myrj 45 磷酸二氫鉀 34毫克磷酸足量，pH4. 供注射使用之水足量，5毫，

ET-myrj 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克 250毫克 500毫克 500毫克 50毫克 50毫克 50毫克 34毫克足量，ρΗ4·0 足量，5毫升 34毫克足量，ρΗ4·0 足量，5毫升足量，5亳升於5±3°C之溫度下進行安定性試驗。於3個月期間在5。(：下所進行這九種配方之純度評估如 5 表ΙΠ及第1圖所示。就顯示較高安定性之配方（參考物、蔗糖、乳糖及ET-poly 80 sacc)而言，延長該安定性試驗至9個月為止，而就乳糖及蔗糖配方而言，由於其具高安定性，所以該安定性試驗甚至延長至12個月為止。表瓜及第2圖中之數據顯示含蔗糖及乳糖之配方具有改良安定性，且純度 10僅降低2%。該降低程度比其它測定之配方所發現之降低程 30 1296523 度明顯較低。表皿 ET-743 純度(％) 參考物蔗糖乳糖 ET-poly 80 sacc 束乾前 98.04 98.34 98.06 97.96 t=0 97.67 98.15 97.21 97.85 1個月 96.06 96.89 96.35 97.72 3個月 94.37 96.64 95.33 97.58 6個月 92.81 97.01 94.07 95.98 9個月 88.17 95.36 94.83 96.01 12個月 96.31 95.22

表瓜（續) ET-743 純度(％) 聚葡萄糖 PVP ET-poly 80 ET-myrj ET-p80 saccun 緩衝劑凍乾前 96.18 97.62 96.45 97.46 97.45 T=0 94.64 93.72 92.46 96.36 95.80 1個月 93.42 91.96 89.38 94.36 91.84 3個月 84.90 90.40 81.18 85.31 88.46 ' 5 如表IV及第3圖所示，當於蔗糖或乳糖存在下調配

ET-743時，該參考配方之主要降解產物(ET-701)明顯減少。 _ 表IV ET-701(%) 參考物蔗糖乳糖 ET-poly 80 sacc t=0 0.188 0.066 0.060 0.050 1個月 0.533 0.063 0.076 0.060 3個月 0.890 0.057 0.054 0.050 6個月 1.732 0.050 0.062 0.050 9個月 3.225 0.050 0.050 0.050 就本發明而言，已發現雙醣類比甘露醇更能改良 ET-743之安定性。此等雙醣之實施例包括乳糖、蔗糖及彼 31 1296523 等之混合物。與含其它習知增體積劑（諸如，聚葡萄糖及聚乙烯°比哈嗣）之其它配方比較，該等含雙醣類之配方的安定性亦改進。測定根據本發明之雙醣配方的實施例於5〇c下至少12個月的安定性。根據本發明之配方的實施例之雜質含 5 量明顯低於習知配方之雜質含量。因此可減少ET-701之存在。本發明之實施例包含至少一種表面活性劑，諸如， Polysorbate 80。這些實施例具有較佳的ET-743溶解度性質及安定性特徵。然而，至少一種表面活化劑之存在並非本發明的限定特徵，且其它實施例並未包含此藥劑(群）。 10 實例2 本研究之目的為比較ET-743之標準配方與5種新配方之安定性。該研究評估於+5°C下該等配方之安定性。所試驗配方之組成物如下（表V)，應注意於凍乾程序期間’水會蒸發：

15 表V 參考物 ETtreal ETP80treal ETP80treal 250 ETP80sacc 250 ETP80trealgl Y250 ET-743 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克 0.250毫克甘露醇 250亳克海藻糖 500毫克 100毫克 100毫克 200毫克蔗糠 100毫克 Polysorbate 80 10毫克 10毫克 10毫克 150毫克甘胺酸 15毫克磷酸二氫鉀 34毫克 34毫克 34毫克 6.8毫克 6.8毫克磷酸足量，pH4.0 足量，pH4.0 足量，pH4.0 足量，pH4.0 足量，ρΗ4Ό 鹽酸足量，ρΗ4.5 供注射使用之水足量，5毫升足量，5毫升足量，5毫升足量，1毫升足量，1毫升足量’ 1亳升使用以下特殊規定製備並凍乾本體溶液。配方:ETtreal、ETP80treal及參考必7 32 1296523 100克重量之各配方的製法如下：稱重用於該最終溶液之磷酸鉀的含量，並使其溶解在 90%最終體積(90毫升）之水中。然後’使用〇1N磷酸將pH 調整至ρΗ4·〇。 5 添加5.0毫克ΕΤ-743至混合玻璃容器内，並在2/3體積 (60毫升）之該磷酸鉀溶液内藉由磁性攪拌一小時而使其溶解（以目視法檢查溶解現象）。添加該含量之增體積劑及表面活化劑，並使其溶解在 1/3體積之該鱗酸鉀溶液中。然後’添加該溶液至£丁_743溶 10 液内，並再維持攪拌，費時一小時。添加水使該溶液達最終重量。藉由0.22微米纖維素濾、器而過渡該溶液，進行過濾、前取出一整份供IPC使用。以5毫升/小玻瓶的標準，將該溶液裝入25毫升小玻瓶内，並維持於-20°c下，直到進行凍態乾燥法為止。配方ETP80sacc 250、ETP80treal 250」ETP80trealglv 250 30克重量之各調配物的製法如下·· 稱重用於該最終溶液之磷酸鉀或甘胺酸的含量，並使其溶解在90%最終體積(27毫升)之水中。然後，使用〇·1Ν磷 20 酸或〇·1Ν HC1將pH調整至ΡΗ4·0。稱重該Polysorbate 80之重量，並添加至1/3體積之該緩衝劑溶液内。添加7.5毫克ET-743至混合玻璃容器内，並在2/3體積 (60毫升）之該磷酸鉀溶液内藉由磁性攪拌一小時而使其溶 33 1296523 解（以目視法檢查溶解現象）。添加該含量之增體積劑及表面活化劑，並使其溶解在 2/3體積之該緩衝劑溶液中。然後，添加該溶液至溶液内，並再維持攪拌，費時1〇分鐘。 5 添加水使該溶液達最終重量。藉由0 · 2 2微米纖維素濾器而過濾該溶液。以1毫升/小玻瓶的標準，將該溶液裝入10毫升小玻觀内，並維持於-20°C下，直到進行凍態乾燥法為止。根據下表VI在所有6種配方中進行珠態乾燥法：

10 表 VI 凍結至-48°C之時間： 2小時30分主要乾燥： 29小時次要乾燥： 36小時凍乾後，將小玻瓶密封。將該等小玻瓶移至冷凍區(-20°c)。於5±3°C下進行安定性試驗。於5°C下所有配方比該參考配方更具安定性。在該等新配方之間並未發現重大差異。表W揭示在研究中的該等配 15 方之ET-743層析純度。

表VH ET-743 純度(％) 參考物 ETtreal ETP80treal ETP80treal 250 ETP80sacc 250 ETP80treal Sly 250 過濾前 98.63 98.30 97.10 97.67 97.22 98.3 過濾後 98.62 98.46 97.27 97.67 97.06 98.46 凍乾後 97.96 98.18 97.65 97.37 97.79 98.18 1個月 97.35 98.22 97.78 96.39 97.40 98.22 2個月 97.65 98.53 98.25 96.61 96.66 98.53 3個月 95.28 97.38 96.93 97.01 97.06 97.38 34 1296523 實例3 製備 6種配方：ET-NF A、ET-NF B、ET-NF C、ET-NF D、 ET-NF E及ET-NF F，並用於不同溫度下進一步進行安定性之研究。 5 選用蔗糖及乳糖作為增體積劑。使用兩種不同緩衝劑：擰檬酸鈉緩衝劑（〇·1Μ，pH4)及磷酸鉀〇·〇5Μ緩衝劑 (pH4)。測試該本體溶液中之兩種不同Ετ_743濃度：0.250 毫克/毫升及0.100毫克/毫升。根據該裝填體積(4毫升對 10毫升)使用兩種不同的凍乾循環。製備供各配方使用之一 1〇群至少125個小玻瓶。就各小玻瓿而言，該本體溶液之組成物如下（表珊），應注思於;東乾程序期間，水會蒸發：表vm 成份 ET-NFA ET-NFB ET-NFC ET-NFD ET-NFE ET-NFF ΕΤ-743 1毫克 1毫克 1毫克 1毫克」毫克 1毫克藏糖 400毫克 — — 1000毫克 1000毫克乳糖 — 400毫克〗〇〇〇毫克 — —— 200亳克檸檬酸單水合物 43·6毫克 43.6毫克 109毫克 109毫克 43.6毫克檸檬酸鈉一水合物 45·12毫克 45.12毫克 112.8毫克 112.8毫克 ——— 45.12毫克填酸一Α舒 — — — — 68毫克 — 磷酸一 — — — 足量，ρΗ4 供注射使用之水 4亳升 4毫升 10毫升 10毫升 10亳升 4毫升使用以下特殊規定以製備及凍乾本體溶液：

15 |己定旦IrNF AB及 ET-NF F 2升檸檬酸約〇·2Μ之製法··將76.96克檸檬酸溶解在2升之置瓶内，並添加供注射使用之水使該溶液達最終體積。 35 1296523 ' 該檸檬酸溶液之最終莫耳濃度為0.183M。 f 2升檸檬酸鈉約0·2Μ之製法：將117.64克檸檬酸鈉溶解 . 在2升之量瓶内，並添加供注射使用之水使該溶液達最終體、積。該檸檬酸鈉溶液之最終莫耳濃度為0.175Μ。， 5 4升檸檬酸緩衝劑(ρΗ4)約0.1Μ之製法：在4升之量瓶内使1125毫升檸檬酸溶液α2Μ與875毫升檸檬酸鈉溶液〇·2Μ 混合。添加供注射使用之水使該溶液達最終體積。檢查該 φ 溶液之ρίί，並調整至ΡΗ4。該檸檬酸緩衝劑溶液之最終莫耳濃度為0.089Μ。 1〇添加143·83毫克之ΕΤ-743至混合玻璃容器内，並藉由磁性攪拌約一小時使其溶解在約8〇%所欲總體積之檸檬酸緩衝劑0.1Μ内（以目視法檢查溶解現象）。 : 然後’添加該含量之蒸糖或乳糖(55克蔗糖配方Α及Β、 ~ 及27·5克乳糖配方F)，並再攪拌該混合物，費時約一小時， 15 直到溶解為止。 • 檢查PH後，藉由添加檸檬酸緩衝劑(ΡΗ4)0· 1Μ而使該溶液達該最終體積。就配方Α而言，必需使用檸檬酸再調整ρΗ 至ΡΗ4。該最終溶液之密度：丨〇4克/升。最終重量為572 毫克。 20 —, 猎由〇·22微米PVDF濾器而過濾該溶液。使用自動泵及經聚矽氧鉑固化之管材(3·2毫米）將該溶 /夜裝入25毫升小玻瓶内。標準裝填體積為4毫升。每隔一定時間（各15瓶小玻瓶)檢查該裝填體積，並若必要’調整裝填體積。 36 1296523 裝填後，放置凍態乾燥堵塞器，並於5°C下將該等小玻瓶裝在凍乾器内。

根據下表K而進行凍態乾燥法：表IX

5 將該等小玻瓶密封。進行最終調整。將該等小玻概移至冷凍區（-20°c)。

配方 ET-NF C及 ET-NF D 1升檸檬酸約0.2M之製法：將38.48克檸檬酸溶解在1升之量瓶内，並添加供注射使用之水使該溶液達最終體積。 10該擰檬酸溶液之最終莫耳濃度為0.183M。 1升檸檬酸鈉約0.2M之製法：將58.82克檸檬酸鈉溶解在1升之量瓶内，並添加供注射使用之水使該溶液達最終體積。該擰檬酸鈉溶液之最終莫耳濃度為〇·Π5Μ。 2升檸檬酸鹽緩衝劑(ΡΗ4)約0.1Μ之製法：在2升之量瓶 15内使850毫升檸檬酸溶液0.2Μ與650毫升擰檬酸鈉溶液〇2Μ 混合。添加供注射使用之水使該溶液達最終體積。檢查該溶液之pH，並調整至ρΗ4。該檸檬酸鹽緩衝劑溶液之最終 37 1296523 • 莫耳濃度為0.089M。 • 添加141·21毫克之ET-743至混合玻璃容器内，並在約 80%所欲總體積之檸檬酸鹽緩衝劑〇· 1M内藉由磁性攪拌約 ' 一小時使其溶解（以目視法檢查溶解現象）。 • 5 添加135克蒸糖或乳糖，並再攪拌該混合物，費時約一小時，直到溶解為止。檢查pH後’藉由添加檸檬酸鹽緩衝劑(pH4)〇1M而使該 _ 溶液達該最終體積。不需要再調整pH。該最終溶液之密度：1.04克/升。最終重量為14〇4毫 10 克。藉由0·45微米PVDF濾器而過濾該溶液。使用自動泵及經聚矽氧鉑固化之管材（3.2毫米）將該溶 — 液裝入25毫升小玻瓶内。標準裝填體積為10毫升。 " 每隔一定時間（各15甑小玻瓶)檢查該裝填體積，且若必 15 要，調整裝填體積。 g 裝填後，放置凍態乾燥堵塞器，並於5°C下將該等小玻瓶裝在凍乾器内。如前述配方ET-NF A、ET-NF B及ET-NF F之方式（表K) 進行凍態乾燥法。 20 由於小玻瓶内之大體積，所建議之循環並不能得到合適之凍態乾燥，並產生崩散現象。為了避免重新製造，所有小玻瓶經10毫升純水重組，檢查一些重組溶液之純度特性，以雙孔堵塞器取代原有堵塞器，並使用以下新循環（表 38 25 X) *

表X

循環步驟壓力凝固點 T(°C) 斜率 (分）保溫時間凍結2 大氣壓 -50°C 6小時 _真空 Ch真空 0.5毫巴昇華 1°乾燥 0.080毫巴 -23〇C · 45分 0.5〇C/分一 1°乾燥 0.080毫巴 -23〇C 80小時 Γ"·· "" —j 2°乾燥 <0.020毫巴 o°c 0.045〇C/分—— 2°乾燥 25〇C 62小時 0.006〇C/分 1—- 塞住 0.010毫巴 25〇C /東乾後，將該等小玻瓶密封。進行最後調整。將該等小玻瓶移至冷凍區（_2〇。〇。

IgL^HT^NF E 添加141.21毫克之ET-743至混合玻璃容器内，並藉由磁性攪拌約1小時而使其溶解在iOSO毫升wfi+3,240毫升之磷酸（1N)内（以目視法檢查溶解現象）。添加135克蔗糖及9.18克磷酸鉀，並再攪拌該混合物，費時約一小時，直到該分子全部溶解為止。檢查pH後，並使用磷酸（1N)再將pH調整至pH4，藉由添加供注射使用之水而使該溶液達最終體積。該最終溶液之密度：1.04克/升。最終重量為1404毫克。藉由0·45微米PVDF濾器而過濾該溶液。使用自動泵及經聚矽氧鉑固化之管材（3.2毫米）將該溶液裝入25毫升小玻瓶内。標準裝填體積為毫升。每隔一定時間（各15槪小玻瓶)檢查該裝填體積，並若必要，調整裝填體積。裝填後，放置/東恶乾燥堵塞器，並於5°c下將該等小玻 1296523 瓶裴在凍乾器内。如前述配方ET-NF a、ΕΤ·Νρ B及ΕΤ_Νρ F之方式（表κ) 進行凍態乾燥法。由於小玻瓶内之大體積，所建議之循環並不能得到合 5適之凍態乾燥，並產生崩散現象。為了避免重新製造，所有小玻瓶經10*升純水重組，檢查一些重組溶液之純度特性，以雙孔堵基器、取代原有堵塞器，且如配方ET_NFC及 ET-NFD之方式（表X)使用新循環。凍乾後，將該等小玻瓶密封。進行最後調整。將該等 10 小玻瓶移至冷;東區（-20°C)。就一切情況而言，可達到所欲ET_743濃度，且各配方之雜質特徵類似。ET-743之濃度並沒有差異，且於製造期間（過濾前及後或裝填後)可發現雜質特徵。在此等含乳糖之配方中，該主體溶液之顏色為微黃色。 15 首先根據所指示的規定凍乾具有4毫升裝填量及1〇毫 _ 升裝填量之配方。然而，具有4毫升裝填量之配方經正確地凍乾，而具有10毫升裝填量之配方卻崩散。在次要乾燥中之壓力變異顯示該凍乾濾餅之崩散及沸騰。以10毫升純水重組配方ET-NF C、ET-NF D及ET-NF E之小玻瓶。檢查配 20 方的純度特徵。由於與本體溶液比較，並未發現該純度特徵之改良，所以決定使用該指定的修正凍乾循環再凍乾該等小玻瓶。如所述凍乾各批可得到良好的結果，不會發生崩散現象，但是有一些會發生底部收縮現象。小玻瓶之ET-743含量在規格(95%至105%)範圍内。雜 40 1296523 .質特徵顯示各配方之相似性，且此等雜質特徵與本體溶液之雜質類似。殘留水含量低於或等於2%，該2%係為1〇毫升裝填量之配方的最大值。 Λ 就所有情況而言，該等重組溶液之pH在pH4與PH4.2之 • 5 間。溶液透明無色，且沒有可見的外來物質或沉殿現象。所有調配物之重組時間類似，且少於30秒。實例4 該研究之目的為調查於不同溫度條件下，在1毫克/小 ® 玻瓶下，ET-743在不同配方(ET-NF A、ET-NF B、ET-NF C、 10 ET-NF D、ET-NF E，及ET-NF F内之安定性。根據實例3製備一批各配方(ET-NF A、ET-NF B、ET-NF C、ET-NF D、ET-NF E及ET-NF F)之130瓶小玻瓶(每一瓶小 — 玻瓶含1毫克ET-743)。 - 於5°C、25°C/65%RH及4(TC/70%RH下進行安定性 ' 15 試驗。 g 第4圖及表X I係表示與三種習知配方（含有et-743、甘露醇及填酸鹽緩衝劑）比較，於5。〇下在貯存期間該等新配方之ET-743純度評估。

Ax I ET-743 純度(％) 參考物1 參考物2 參考物3 ET-NFA ET-NF B t=0 97.70 96.90 97.70 99.06 99.00 1個月 94.70 94.60 94.00 99.28 98.86 2個月 93.80 92.70 93.70 99.21 98.97 3個月 92.50 91.00 91.20 99.22 98.88 41 20 1296523 表x i (續) ET-743 純度(％) ET-NF C ET-NF D ET-NF E ET-NF F t=0 98.83 98.98 99.15 98.88 1個月 98.53 99.03 99.14 98.71 2個月 98.88 99.15 99.21 98.80 3個月 98.86 99.12 99.16 98.92 第6圖及表X Π係表示與三種習知配方（含有ΕΤ-743、甘露醇及磷酸鹽緩衝劑）比較，於25°C/65%RH下在貯存期

間該等新配方的ET-743純度評估。 5 表X Π ET-743 純度(％) 參考物1 參考物2 參考物3 ET-NFA ET-NF B t=o 97.70 96.90 97.70 99.06 99.00 15天 84.70 84.50 89.50 98.97 98.09 1個月 74.50 72.40 81.90 99.08 98.13 2個月 99.10 98.38 3個月 98.98 98.15 表X Π (續) ET-743 純度(％) ET-NF C ET-NF D ET-NF E ET-NF F t=o 98.83 98.98 99.15 98.88 15天 98.35 98.90 99.11 98.31 1個月 98.01 99.03 99.13 98.32 2個月 98.35 98.99 99.10 98.28 3個月 98.33 98.93 99.09 98.14

第8圖及表Vi係表示與一種習知配方（含有ET-743、甘露醇及磷酸鹽緩衝劑）比較，於40°C/70%RH下在貯存期間，該等新配方之ET-743純度評估。 42 1296523 表χιπ

ET-743純度(％) 參考物4 94.92 ET-NFA ET-NFB ET-NFC ET-NFD ET-NFE ET-NFF 99.06 99.00 98.83 98.98 99.15 98.88 99.02 98.10 98.48 98.95 99.12 97.53 98.68 97.08 97.86 98.63 98.89 97.20 98.75 97.33 97.77 98.55 98.71 96.66 98.52 96.99 97.53 97.54 98.47 95.79 98.24 95.92 95.67 94.79 97.84 95.91

此外，第5圖及表XIV係表示與三種習知配方（含有 ΕΤ-743、甘露醇及填酸鹽緩衝劑）比較，於下在貯存期間，該等新配方之ET-701雜質產生。

表XIV ET-701(%) 參考物1 參考物2 參考物3 ET-NF A ET-NF B t=o 0.70 0.84 0.53 0.11 1個月 2.56 3.09 1.73 0.12 2個月 3.45 3.54 2.69 0.12 0.13 3個月 4.61 5.04 4.28 0.13 0.13 表XIV(續) ET-701(%) ET-NF C ET-NF D ET-NF E ET-NFF~~ t=o 0.15 0.16 0.15 0.11 1個月 0.12 0.12 0.14 0.11 ~ 2個月 0.16 0.14 0.15 0.12 3個月 0.16 0.15 0.15 0.12 第7圖及表X V係表示與三種習知配方（含有ET-743、甘露醇及磷酸鹽緩衝劑）比較，於25°C/65%RH下，在貯存期間，該等新配方之ΕΤ_7〇1雜質產生。 43 1296523 表xv ET-701(%) 參考物1 參考物2 參考物3 ET-NF A ET-NF B t=0 0.70 0.84 0.53 0.09 0.11 15天 7.99 8.20 4.22 0.14 0.12 1個月 10.56 14.18 6.86 0.11 0.12 2個月 0.15 0.16 3個月 0.17 0.17 表XV(續) ET-701(%) ET-NF C ET-NF D ET-NF E ET-NF F t=o 0.15 0.16 0.15 0.11 15天 0.18 0.17 0.16 0.13 1個月 0.18 0.18 2個月 0.18 0.19 0.24 0.15 3個月 0.22 0.23 0.24 0.18

如這些圖中所示，該等新配方之安定性高於該等習知配方之安定性。此外，該等習知配方之主要降解產物 5 (ET-701)在該等新配方中明顯地減少。實例5 使用以作為增體積劑之蔗糖為基底的三種新配方供進一步安定性研究。這些新配方在該磷酸鹽緩衝劑莫耳濃度 (0.05M對0.1M)及裝填體積或換言之，該本體溶液中之 10 ET-743濃度（10毫升對4毫升）方面不相同。本實例係描述一批這些配方各至少50小玻瓶之製造。每小玻瓶之配方說明的摘述如下（表XVI)，應注意於凍乾程序期間，水會蒸發： 44 15 1296523

表XVI ET-NFG ET-NFH ET-NFI 濃度(毫克/ 毫升）最終組成物濃度(毫克/ 毫升）最終組成物濃度(毫克/ 毫升）最終組成物成份 ET-743 0.250 1毫克 0.100 1毫克 0.250 1毫克蔗糖 100 400毫克 100 1克 100 400毫克磷酸二氫鉀 6.8 27.2毫克 13.6 136毫克 13.6 54.4毫克磷酸足量至pH4.0 足量pH4.0 足量至pH4.0 足量pH4.0 足量至pH4.0 足量pH4.0 供注射使用之水足量至1毫升 4毫升足量到1毫升 10毫升足量至1毫升 4毫升製備240毫升體積之配方(ET-NF-G及ET-NF-I): 添加62.76毫克之ET-743至混合玻璃容器内，並在192 毫升wfi+lN之填酸(就NF G而言576微升;就NF I而言816微 5 升）内藉由磁性攪拌約1小時而使其溶解（以目視法檢查溶解現象）。添加24克蔗糖(24克）及鱗酸鉀（就NF G而言1.63克；就 NF I而言3.26克）’並再攪;掉該混合物，費時約一小時，直到該混合物溶解為止。 10 檢查pH後，若必要使用1N磷酸再將pH調整至pH4 〇〇，藉由添加供注射使用之水而使該溶液達最終體積。該最終溶液之密度：1.04克/升。最終重量為249.6克。藉由〇·45 微米PVDF濾器而過濾、該溶液。使用自動泵及經聚矽氧鉑固化之管材(3.2毫米）將該溶 15 液裝入25毫升小玻瓶内。標準裝填體積為4毫升。每隔一定時間（各15瓶小玻瓶)檢查該裝填體積，且若必要，調整裝填體積。炎填後’放置;東悲乾無堵基，並於5 °C下將兮等/ j玻 45 1296523 瓶裝在凍乾器内。根據以下參數(表xw)進行凍態乾燥法：表XW_

循環步驟壓力凝固點 T(°C) 斜率(分）保溫時間 Shelves Ta 大氣壓 5°C 凍結束結1 大氣壓 -50°C 1小時50分分凍結2 大氣壓 -50°C 6小時真空 Ch真空 0.5毫巴昇華 1°乾燥 0.080毫巴 -27〇C 45分分 2。乾燥 0.080毫巴 -27〇C 58小時第2次乾燥 2°乾燥 <0.020 毫巴 _ 25〇C 3小時30分 0.25°C/分 2°乾燥 0.010毫巴 25〇C 40小時結束 0.010毫巴 25〇C 凍乾後，將小玻瓶密封。進行最後調整。將該等小玻 5 瓶移至冷凍區（-20°C)。 600毫升體積之配方(ET-NF-H)的製法如下：添加62.76毫克之ET-743至混合玻璃容器内，並在480 毫升wfi+1.44毫升之填酸（1N)内藉由磁性攪拌約1小時而使其溶解（以目視法檢查溶解現象）。 10 添加60克蔗糖及8·16克磷酸鉀，並再攪拌該混合物，費時約一小時，直到該混合物溶解為止。檢查pH後’並使用石粦酸（1Ν)再將pH調整至ρΗ4，藉由添加供注射使用之水而使該溶液達最終體積。該最終溶液之密度：1·04克/升。最終重量為1404毫克。藉由0.45微米PVDF瀘、器而過濾該溶液。使用自動泵及經聚矽氧翻固化之管材(3·2毫米）將該溶液裝入25毫升小玻瓶内。標準裝填體積為4毫升。 46 1296523 每隔一定時間（各15瓶小玻瓶)檢查該裝填體積，且若必要，調整裝填體積。裝填後’放置凍態乾燥堵塞器，並於下將該等小玻瓶裝在凍乾器内。根據以下參數(表XM)進行凍態乾燥法：

循環步驟壓力凝固點 T(°〇斜率(分）保溫時間 Shelves Ta 大氣壓 5°C 束結〉東結1 大氣壓 -50°C 1小時50分〇.5°C/分凍結2 大氣壓 - 50°C 6小時真空 Ch真空 0.5毫巴昇華 1°乾燥 0.080毫巴 -27〇C 45分〇.5°C/分 1°乾燥 0.080毫巴 25〇C 62小時第2次乾燥 2。乾燥 <0.020毫巴 25〇C 3小時30分 0.25°C/分 2°乾燥 25〇C 50小時結束 0.010毫巴 25〇C 凍乾後，將小玻瓶密封。進行最後調整。將該等小玻瓶移至冷凍區（-20°C)。 10 該ET-743含量在規格範圍（95%至105%)内。雜質特徵顯示所有配方皆類似，且與本體溶液之雜質相似。殘留水含量低於2%(其係為該10毫升裝填量之配方的最高值）。就所有情況而言，該等重組溶液之pH在pH4與pH4.28 之間。溶液透明無色，且沒有可見的外來物質或沉澱現象。所有配方之重組時間類似，且小於30秒。於4〇°C /7〇%RH之貯存溫度下，在3個月期間進行安^ 性試驗。第9圖及表X I X係表示於4〇°C/70%RH下，在貝宁子期 47 15 1296523 間’該等新配方之ΕΤ-743純度進展。

表X I X ΕΤ-743 純度（％) ET-NF G ET-NF Η ET-NF I τ=ο 99.18 99.23 99.00 7天 99.04 98.68 15天 98.97 98.86 98.79 1·5個月 98.72 98.61 98.40 2個月 98.29 3個月 97.71 此外，在第8圖中係表示與一種習知配方（含有 ET-743、甘露醇及磷酸鹽緩衝劑）比較之安定性資料。 5 實例4及5中所獲得之結果顯示含雙醣作為增體積劑之所有配方的安定性高於含有甘露醇作為增體積劑之習知配方。ET-NF-G配方為較佳配方。於各種貯存時間（其包括3個月、6個月，及9個月之貯存時間）下，在數種貯存條件（其包括-2(rc、，及25。(：/ 10 60%RH)下貯存後，測試本發明配方之實施例。該檢定結果顯示於-20 C下貯存9個月後殘留至少99.5%ET-743、於4cC 下貝丁存9個月後殘留至，99%ET-743，及於25它/6〇%1^下貯存9個月後殘留至少97%et_743。於坑/6〇%rh下貯存 9個月後，全部雜質（其包括ET_7〇1、Ετ_745，及其它雜質） u不超過1遍。此外，於該貯存條件下貯存9個月後，抓7〇1 雜質之含量不超過0.21%。次文中所列舉之所有參考t料的全文皆併人本案以為參考貧料。根據文中提供之揭示内容很容易瞭解本發明之特徵及優點。基於該揭示内容，可修飾及調整各種條件及用 48 1296523 法，因此產生屬於本發明範圍之實施例。 I：圖式簡單說明3 第1圖係比較性安定性研究。於5°c下貯存6個月後之 ET-743純度評估。 5 第2圖係比較性安定性研究。於5°C下貯存12個月後之 ET-743純度評估。第3圖係於5°C下貯存9個月期間，在不同配方内所產生之雜質。第4圖係於5°C下貯存3個月期間，該等新配方及3批參 10 考配方之ET-743純度％評估的比較。第5圖係於5°C下貯存3個月期間，在不同配方内所產生之雜質。第6圖係於25°C/65%RH下貯存3個月期間，該等新配方及3批參考配方之ET-743純度％評估的比較。 15 第7圖係於25°C/65%RH下貯存3個月期間，在不同配方内所產生之雜質。第8圖係於40°C/70%RH下貯存3個月期間，該等新配方之比較性ET-743純度％評估。第9圖係於40°C/70%RH下貯存3個月期間，該等新配 20 方之比較性ET-743純度％評估。【主要元件符號說明】 (無） 49

Claims

1296523 十、申請專利範圍·· 告本第94137819號專利巾職㈣專利範圍修正本修正日期·· 96年u月 1. -種組成物，其包含一種伊特那斯叫⑽如 5 種雙醣。、久 2. 如申請專利範圍第i項之組成物，其中該伊特含ET-743。 3. 如申請專利範圍第i項之组成物，其中該雙畴係選自由乳糖、海藻糖、隸，及彼等之混合物所組成之群組。 10 4.如申β月專利範圍第2項之組成物’其中該雙膽係選自由乳糖、海藻糖、蔗糖，及彼等之混合物所組成之群組。 5. 如申π專利㈣第3項之組成物，其中該魏為蔗糖。 6. 如申凊專利範圍第4項之組成物，其中該雙膽為簾糖。 7·如申請專利範圍第2項之組成物，其中該抓743對雙醣 15 之比率（w/w)為自約1 : 100至約丨：1500。 8·如申叫專利紅圍第4項之組成物，其中該抓⑷對雙醣之比率(w/w)為自約1 : 100至約1 : 1500。 9·如申請專利範圍第6項之M成物，其中該ET_743對雙醣之比率（w/w)為自約1 : 100至約1 ·· 1500。 20 10·如申凊專利範圍第7、8或9項之組成物，其中該ΕΊν/43 對雙醣之比率(w/w)為自約丨：25〇至約丨·· 6〇〇。 11·如申睛專利範圍第则之組成物，其巾·τ_743對雙釀之比率（w/w)為約1 : 400。 12.如申吻專利範圍第！項之組成物，其進一步包含一種緩 50 1296523 衝劑。 5

10 15

20 13.如申請專利範圍第丨2項之組成物，其中該緩衝劑係選自磷酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、甘胺酸/鹽酸緩衝劑，及彼等之混合物。 14·如申請專利範圍第1或12項之組成物，其進一步包含一種表面活性劑。 15. 如申請專利範圍第η項之組成物，其中該表面活性劑係選自聚氧乙烯20山梨糖醇酐單油酸酯（polyoxyethylene 20 sorbitanmonooleate)、聚氧乙烯40硬脂酸醋(polyoxyl 40 stearate)，及彼等之混合物。 16. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該組成物係呈凍乾配方之形式。 17·如申請專利範圍第16項之組成物，其中該凍乾配方係在小玻瓶内，且其包括一數量之ET-743。 18.如申請專利範圍第17項之組成物，其中該ET-743之含量為約250微克。 19·如申請專利範圍第18項之組成物，其中該小玻瓶含有一種配方，該配方包含：約〇·25毫克ET-743、約100毫克蔗糖’及約6.8毫克磷酸鹽，其中該6.8毫克磷酸鹽係以磷酸二氫鉀計算。 20·如申請專利範圍第17項之組成物，其中該ET-743之含量為約1毫克。 21·如申請專利範圍第2〇項之組成物，其中該小玻瓶含有一種配方，該配方包含：約1.0毫克ET-743、約400毫克蔗 51 1296523 糖，及約27.2毫克磷酸鹽，填酸二氫鉀計算。其中該2 7 · 2毫克磷酸鹽係以 22.-種製備含有伊特那斯汀之康乾配方之小破瓶的方 5 法’其包括妹含有該伊特那斯減_種雙酶之本體溶液(bulk solution) 〇其中該伊特那斯汀為 23·如申請專利範圍第22項之方法 ET-743。 24.-種在ET-743之配方内減少Ετ_斯之形成的方法，其包括;東乾包含ET-743及一種雙_之本體溶液。 K) 25,種製個於綠之本體溶液的方法，其包括將伊特那斯汀溶解在酸性介質内，使該已預溶解之伊特那斯;丁與該本體溶液之其它組份混合，並選擇性地調整該最終溶液之pH。 26. 如申請專利範圍第25項之方法，其中該伊特那斯汀為 15 ET-743。 27. —種製備用於超靜脈注射(uitraven〇us infusi〇n)之溶液的方法，其包括：提供一種含有凍乾伊特那斯汀及雙醣之小玻瓶’添加水以形成重組溶液（reconstituted solution)，並使用水性系統稀釋該重組溶液。 20 28·如中請專利範圍第27項之方法，其中該伊特那斯江為 ET-743。 29·—種藉由申請專利範圍第27項之方法製得之溶液在製備用於藉由靜脈注射而治療癌症的藥物之用途。 52 1296523 I——---- 第94137819號專利申請案圖式修正頁％年/月/Γ日修(更)正替換頁修正曰期·· 97年1戶

,05 ο 5 ο 0 9 9 8 8 (％)刼读審t

第1圖純度(％) 100 η ,·

85 .參考物 •族糠： »乳糖：凍乾前 t = 0 1月 3月丨 6月 9月 12月 80