TW309427B - - Google Patents

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309427 A7 一 B7 五、發明説明（1 ) [發明領域] (請先閱讀背面之注意事項再填窝本頁) 本發明係繭於用於預防及治療臞部各種疾病及其後遣症 ，並預防其復發症狀之_品。 [發明背景] 臑血管疾病（”鼸血管疾病”一詞，在此係指由例如局部 缺血所引起之各種鼸细胞及大臞内血管之疾病）像由於所 謂之臛部缺血而突然發生，其中臞部之血流降至W值或低 於W值•其係由於血管收»，鼸部栓塞，或臞部栓嫌所引 起之血管閉塞而毫生。鼠利諾等人UirUo et al. [Brain Res., 377: 344-347(1982)發現，對沙 RUerbil)施 M 短 暫之腦部缺血時*在2〜3日後觀察到所謅的延*神經细胞 死亡，亦即，播慢及延*性的海禺_ «神《细_死亡。酿 然有入試圈在中檷損傷後（例如，局部缺血）鬭明神經原變 性之過程•然而至目前此等循制仍未明瞭。 經濟部中央揉準局員工消費合作社印装 根據軎斯礴及班特森（Siesjoe and Bengtsson)[J. Cereb . B 1 οod F 1 ο» Metab. , 9 : 127 ( 1 989)]對局部缺血 之研究，麩«酸堪從雎突鑲络前儺被釋出至胞突揍合裂’ 其後在胞突接合後供结合於麩*酸堪受艚。因而促進鈣離 子之注入细_内，及鈣*子從细脑内《存位置之釋出。輿 此同時，由於腺苷三磷酸釀活性降低使得细胞内鈣雛子之 排出被抑制。结果细胞内鈣雛子濃度升高，造成神經细胞 死亡。與细胞外鈣雛子谶度比較，细胞内鈣雛子濃度極低 。當细胞内鈣離子濃度升高至某一陏段，則细胞無法生存 為周知。然而细胞内鈣離子濃度之壜加所導致神經细胞之 本纸诛尺度適用t國國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -4 - 809427 A7 B7 經濟部中央樣準局貝工消费合作杜印製 五、發明説明（2) • -,- • - ：； ；./; 死亡«程仍尚未明臃。 亦有報告顧示，在腦部缺血，有一種鶼鈣素，其為鈣结 合蛋白被活化[Picone et. al.，《I. Cere.b.. Blood Flow Me tab. , 9 : 805-8 1 1 (1989)]，鶼钙衆依存蛋白激赡之活 性被改變[Churn et al.· Stroke, 21 :1715-1721(1990)] 及福精（fodrin)之分解，其為一種鶼鈣素结合畑胞#架蛋 白，被臞部缺血疾病所促進[Sefbert et a 1 . , Brail Res . , 49 2 ： 366-370 (1989)] ° 在另一方面，有報告指出，擁鳄索拜卡丙（ca[pain)加 速福精之分解[H a r r i s e t a 1 .，J . B i ο 1 . C h e · , 2 6 4 : 17401-17 40 8(1989)]及三氟°比畊*其為具有_鈣素抑制效 果之化合物，可抑制福精之分解[Seubert et al.， Synapse, 1: 20-24(1987)]°然而至目前為止尚未有此等 現象與神經细胞死亡有闞之報告。 雖然吾人鑲為具有钃鈣素抑制效果之籌品可應用於抗高 血颳藥物，抗晒峡炎藥物’抗不整臁蕖榭’及治麖精神分 裂，或基於其血管擴張效應用以改良臞部循環之藥榭’然 而至目前為止尚未有抑制神錁细臃損傷之效果被證實°再 格瑞等人（Kogure et al.)管報告指出’由其實驗结果’ W-7, —種具有钃鈣素抑制效果之物質，並無抑制延鱺神 络细胞死亡之效果’故其作為藥品應用於攤耗素抑制爾以 治療腰血管疾病之效果已被否定（Kogure et a1·’ Tanpakushitsu. Kakusan, Koso, 35： 1254(1990))]° 有報吿指出，酿P塞晚化合物’其亦具有抑制醬耗素之效 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家棵準（CNS ) A4洗格（210X297公釐） 309427 經濟部中央樣準局貝工消费合作社印裝 A7 B7五、發明説明（3 ) 果，《其抗氧化繭效果可舒解臞部缺血之疾病He et ai. ,Stroke, 23： 1287-1291)(1992)]° 由於近年來正趨向高龄社會，包括臞血管疾病及阿爾滋 海默氏病之臞疾患之螬加，已成為臞重的社會問鼴。已知 該等疾病之根源在於各種因素所造成之鼸神經綑胞死亡。 例如，臞血管疾病係由鼸部缺血所引起，且該等疾病之臞 重性與缺血期有闞。輕微缺血會產生輕撤問鼸’而畏期缺 血會造成騸部之不可逆損傷。由於成热的神經原不會經由 细胞分裂而再生，因此’該等疾病成為永久的組孅變化並 強烈地影響預後。 因此，治療鼷血管疾病並舒減其後遺症Μ抑制神經细胞 死亡乃極為有用。再者，有人提出基於》胞费架蛋白之加 速退化所致之神經细胞死亡會造成阿爾滋海默氐病。因此 ，神經细胞死亡之抑制亦可用於預防和治療阿爾滋海默氐 病，並鑀解其後遣症。 若在神經细胞疾病中，细睢内鈣雛子濃度蝤加所引起之 摘鈣素*度活動，可«使用撕鈣素抑制麵來抑制，則神® 细胞之死亡可被抑制。 延«神經细胞死亡在臞血管疾病突發後數天發生。本發 明人發現，在胞髓漿之鶼鈣素含*從早期陏段關始降低（ 更具«言之*甚至在缺血後1小時即已發生）’而在膜部份 之腾鈣素含最增加。此在通悬之鈣離子被添加至海馬均質 時，吾人即已觀察到同揉現象。有人指出^鈣繡子在腦部 缺血之病人係结合於攜鈣鬵，且其某一部份«移至胞臢两 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家揉準（CNS ) Α4规格（210Χ297公釐） A7 B7 經濟部中夬標率局負工消費合作社印袈 五、發明説明（4 ) 1 1 0 本發明人進 —* 步 Η 明 在 胞 Μ 所 含 有 之 细 鼴 η 架 蛋 白 取 1 1 I 福 精（fodrin)之變質係被添加之鈣雛子所加速 $ 且 該 瘺 眄 1 I 素 结合於分解 產 物 〇 jt 1 1 本發明人進一步發現 1 在 沙 醒 之 驅 部 缺 血 檐 式 9 在 神 m 细 Μ 讀 背 1 I 胞 死亡前禰精 之 分 解 即 已 被 加 速 9 因 此 9 纆 檢 驗 化 合 物 A 面 之 注 1 I 及 B，各化合物對觴鈣素具有离蠼揮性* 且具廣泛的鶼鈣 意 事. 項 1 1 素 抑制效果* m 之 發 規 在 臞 部 缺 血 之 早 期 m 段 9 該 等 化 合 再 填 寫 1 ， 物 抑制瘺眄素 m 移 至 胞 膜 » 並 抑 制 福 精 之 分 解 f 接 蕃 並 抑 頁 \ 制 神經细胞之 死 亡 f 而 完 成 本 發 明 〇 1 1 [發明之要約] 1 1 本發明係闞於一傭神經保護蕖品 f 其 特 徽 為 包 含 作 為 活 性 I 訂 1 1 成 分之鶼鈣素 抑 制 m 0 本發明係進 而 鼷 於 一 種 抑 制 騮 细 胞 死 亡 蕖 品 其 特 微 為 I 1 包 含作為活性 成 分 之 擁 鈣 素 抑 制 蘭 〇 1 1 本發明偽亦 鼷 於 種 抑 m 神 經 细 胞 死 亡 之 藥 品 ， 其特徽 1* 1 | 為 包含作為活 性 成 分 之 钃 m 素 抑 制 m 0 本發明係亦 Μ 於 種抑制臁神經顧胞死亡之藥品 > 其 特 1 1 I 激 為包含作為 活 性 成 分 之 钃 m 素 抑 制 繭 0 1 本發明偽亦Μ於- -種 在 臞 部 缺 血 之 神 m 保 護 蕖 & t 其 特 微 1 為 包含作為活 性 成 分 之 撕 m 素 抑 制 麵 0 1 I 本發明礙^ W於 一 種 在 臞 部 缺 血 之 抑 制 臞 m 胞 死 亡 之 蕖 品 1 1 9 其特徽為包 含 作 為 活 性 成 分 之 霱 m 素 抑 制 爾 〇 1 1 本發明亦闞 於 一 種 在 臞 部 缺 血 之 抑 制 神 經 细 胞 死 亡 之 藥 1 1 品 *其特微為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 腾 m 素 抑 m 麵 〇 1 1 本紙張尺度逋用中國两家揉準（CNS >A4规格（210X297公釐） -7 r. -Τ'.» A·· A7 B7 經洚部t央橾隼局貝工消費合作社印製 .¾.. - - .^-.-^. 五、發明説明（5 ) 1 1 本 發 明 偽 亦 H 於 —* 種 在 Η 部 缺 血 之 抑 « _ 神 經 畑 胸 死 亡 1 1 I 之蕖 > 其 特 微 為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 钃 鈣 素 抑 制 劑 0 1 1 本 發 明 係 亦 鼷 於 —_. 稽 神 經 保 護 蕖 品 $ 其 特 徽 為 包 含 作 為 請 it 1 « I 活性 成 分 之 化 合 物 9 其 抑 制 瘺 m 素 结 合 於 畑 胞 骨 架 蛋 白 〇 讀 背 1 1 本 發 明 係 亦 闞 於 種 抑 Μ 脚 臞 细 胞 死 亡 之 藥 St 9 其特徽為 ii 之 注 1 1 包含作為活性成分之化合物 * 其 抑 制 m m 素 结 合 於 细 胞 骨 意 事 1 項 I 架蛋 白 再 〇 填 寫 本 發 明 亦 鼷 於 一 種 抑 制 神 經 细 胞 死 亡 之 藥 品 $ 其 特 徽 為 頁 1 包含 作 為 活 性 成 分 之 化 合 物 f 其 抑 制 撕 鈣 素 结 合 於 细 胞 1 1 架蛋 白 〇 | 本 發 明 係 亦 鼷 於 一 種 抑 制 臞 神 經 m 胞 死 亡 之 藥 品 其 特 1 訂 激為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 化 物 其 抑 制 鶼 m 素 结 合 於 细 1 1 胞费 架 蛋 白 0 1 1 本 發 明 係 醑 於 一 種 在 臞 部 缺 血 之 神 m 保 護 m 品 参 其 特 戡 1 I 為包 含 作 為 活 性 成 分 之 化 合 物 9 其 抑 制 擁 鈣 素 结 合 於 佃 胞 骨架 蛋 白 〇 1 I 本 發 明 係 亦 Η 於 一 種在臞部缺血之抑制腰緬睢死亡之藥 1 1 品， 其 特 徽 為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 化 合 物 9 其 抑 制 攘 m 素 1 结合 於 细 胞 骨 架 蛋 白 〇 1 1 本 發 明 係 亦 鬮 於 種 在 臞 部 缺 血 之 抑 制 神 經 迪 胞 死 亡 之 1 1 蕖品 9 其 特 激 為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 化 合 物 9 其 抑 制 m m 1 I | 素结 合 於 细 胞 骨 架 蛋 白 0 1 1 本 發 明 係 亦 闞 於 種 在 臞 部 缺 血 之 抑 制 騸 神 m 缅 胞 死 亡 1 1 之蕖 品 其 特 激 為 包 含 作 為 活 性 成 分 之 化 合 物 $ 其 抑 制 鶼 1 1 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS > A4规格（210X297公釐） -8 S09427 at Β7 經濟部中央櫟準局—工消费合作社印装 五、發明説明（6 ) 鈣素结合於緬胞骨架蛋白。 本發明係亦鼷於一種神經保護蕖品，其特激為包含一種 作為活性成分之化合物•可抑制细胞骨架蛋白之分解。 本發明係亦醐於一種抑制腰细胞死亡之藥品，其特戡為 包含一種作為活性成分之化合物，可抑制细胞#架蛋白之 分解。 本發明係亦矚於一種抑制神娌细胞死亡之藥品，其特數 為包含一種作·為活性成分之化合物，可抑制》胞骨架蛋白 之分解。 本發明係亦醑於一種抑树臞神經细胞死亡之藥品，其特 激為包含一種作為活性成分之化合物，可抑制细胞骨架蛋 白之分解。 本發明係亦闞於一種在脯部缺血之神經保護藥品’其特 激為包含一種作為活性成分之化合物，其可抑制细胞骨架 蛋白之分解。 本發明係亦翡於一種在臞部缺血之抑制臞神經迪胞死亡 之藥品，其特數為包含一種作為活性成分之化合物，其可 抑制细胞#架蛋白之分解。 本發明係亦Μ於一種在臞部缺血之抑制神經细鼸死亡之藥 品，其特戡為包含一種作為活性成分之化合物，其可抑制 迪胞骨架蛋白之分解。 本發明係亦闞於一種在臞部缺血之抑制臑神經细胞死亡 之藥品，其特激為包含一種作為活性成分之化合物’其可 抑制细胞骨架蛋白之分解。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度逋用中面國家#筚（CNS ) Α4规格（210X297公釐） 經济部中央櫟準局貝工消费合作社印装 309427 at _B7_五、發明説明（7 ) 在本說明軎中：神《保»_品”一詞，係指為抑制神經缅 胞死亡*因而可價防*舒解或治療因此等神埋佃胞死亡所 引起之臞部功能各種疾病所用之蕖品。 [發明說明] 吾人錤為，撕鈣素抑制麵為可應用於治療循瓖器官疾患 之_品•例如抗高血臞藥•抗晒映炎蕖•抗不螫轚_，及 改善臛部循*或治療精神興常之蕖。然而本發明人等發現 *顧示攤鈣素抑制朗可用於治療臑血管疾病。亦即•娜鈣 素抑制朗！在治療禱鈣素通度活性所引起之各種疾病極為有 用。尤其是，其對預防或治療臞血管疾病（例如1臞梗塞 ，臞栓子，暫時性臞部缺血，臑部栓塞），臞部改質性疾 病（例如，阿爾滋海默氏疾病，巴金森氏病）及其他臞部疾 病（例如，蕖物成瘾，氣«中毒，外傷性臞部疾病），及因 而引起之疾病（例如，自主性壓制（depressed voluntariness)，抑響及記慵方面之疾病）*等極為有效。 當然*本發明係醞於治療由擄鈣素之»度活性所引起之 各種疾病•其待微為投與癱鈣素抑制繭者。 本發明之神纆保護藥品可以口脈或非口臌。 本發明之神纆保謂鑄品之蘭量，依照患者情況，年齡， «重及蹏重程度可以瓛當地改變。在口眼投瓣之情況，可 投與成人之繭量為1〜l〇〇〇»g/day，最佳為1〇〜500ig/day 。可一次投輿或分數次投輿。投輿之形式可為錠鬵，謬囊 ，粉末及颗粒。製備方面，可由周知之方法製進，而所使 用之添加劑亦為習知技術所常用•例如賦形酬，獮潸嫌及 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙浪尺度逋用中«國家揉率（CNS Μ4Λ格（210X297公釐） 10 五、發明説明（8 ) A7 B7 黏合爾。 在非口腋投輿之情況，可對成人投輿繭量1〜500l|8/day 最佳為10ag〜20〇Bg/day。作為ft隹之投與經路，可為皮 下靜脈吋注射及靜脈滴注注入。 本發明之神纆保罐藥S可Μ周知之方法S製成一製麵° 目前使用化合物Β之一配方，被應用於在此所速之實驗’

將以實施例揭示。 [Κ方例1] (1) 化合物Β 1〇8 (2) 乳糖 50g (3) 玉米澱粉 15g (4) 羥丙基纖維素 8g (5) 羥甲基澱粉納 7g (6) 硬胞酸鎂 U 經濟部中央櫺準局負工消费合作社印装 上述之成分（1)，（2)，（3)及（5)為被均勻地混合於一流 鱺化床粒化櫬，並使用作為黏合繭之該成分（4)之6X水溶 液加以粒化。其後加入成分（5)並均匀地混合，以產生欲 製成綻劑之粉末。接著，該粉末被配製成8ι·直徑之1〇〇粒 錠劑，各含成分（1) lOOng。 [配方例 2] (1)化合物B 2g (2 ) 0 . 1 Η 堪酸 1 5 0 g (3)葡萄耱 50g (4)注射用蒸饑水 本纸張又度逋用中國國家標準（CNS)A4洗格（210X297公釐） -u - Ί--------(r------訂------I (請先W請背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉率局WC工消费合作社印装 A7 ___ B7五、發明説明（9 ) 上述之成分（1)，（2)，及（3)被混合一起’且注射用蒸 «水進而被加入，以讕整全部«積成為1〇〇〇»1。如此獲得 之溶液經由0.2m 濾器被滅菌通濾，並以吸最管吸取 至10ml安瓿。 吾人期望本發明之神埋保籮藥品，在輿其他藥品併用時 可產生預防或治療各種疾病之加成或多蘧妷果。該等蕖品 之例包含改善皤部循環蕖品（例如：肉桂派n比烷順丁烯二 酸堪），改菩腯部代謝之籣物（例如：引醭本雇 (idebenone)，引顫羅真（ideloxa-zine)，影響精神蕖物 (例如，琉眯派酮，丙眯嗪，苯甲二氮草），降低顱内颸之 藥物（例如，甘油），抗高血懕藥物，血管擴張謂（例如， 唑喃胺）|解热 嫌瘠莆，抗炎類固酵•血小板破«繭（例 N^ 如，氯节邊啶），抑_凝血劑（例如，肝制凝鬵），分解罐 維蛋白爾（例如*組縑胞漿素原活化莆），利尿繭•抗高脂 血症（例如，丙丁酚），治療消化性潰麝蕖物•血液代替物 ，肝病用藥及惡性腫痼甩蕖。 為進一步詳细說明本發明，並不予限制本發明起見，茲 舉例如下。 [蕖理資驗例1]鶼鈣素抑制效果 該化合物之鶼鈣素抑制效果•係由該化合物對钃鈣素依 存嫌酸二a旨酵（PDE)之抑制效果作為指摞來評價。本實驗係 改良湯普森法來進行[周期性核苷酸研究之進展， 69(1979)]。亦即，50mM三羥甲基氩基甲烷緩衡爾 (tris butter)(pH75，含 5fflM MgCl2* 及 牛血清蛋白 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) / 訂 j 本紙張尺度逋用t國國家揉準（CNS ) A4洗格（210X297公釐） 12 A7 __ B7 五、發明説明（10 ) 素），1»M CaCl2，[3 H]-CGMP，钃鈣索（CaM ·取自牛臞） ，CaM-PDE(痛«素依存燐酸二脂醇，取自牛腦）及一榛本 被混合一起並在30¾培育1〇分鑪°在於沸水浴中加熱1分 鏞並中止反應之後，加入铊毒且最终混合榭在 30t!反應10分鐮，Μ將PDE所形成之5’-GMP轉化成烏糞核 糖苷。其次，未反應之CGHP被一離子交換樹胞（AGI-X8)所 吸收。然後，該混合物被钂心且上濟物之放射性係以液® 閃嫌計败器测量。如此所测定之4及&化合物之抑制效果（ 以IC5(J表示）各為3.93w Μ及5.泌tfM。另一方面，所使用之 作為對照组化合物之W-7的1〇5〇為33.5« [蕖理實施例2]海馬嫣鈣素细胞内定位之效果 沙鼠之海馬«Μ20·Μ三S甲基氨基甲烷媛銜液（PH7.5) 被均質化。該缓衡液含〇. ι·μ亮肽素，〇. i»m-pmsf及 O.Olag/nl抑肽酶。在加人1·Μ*ί化鈣水溶液或IWEGTA[乙 烯-雙（氧伸乙基氰*)四黼酸’ 經滸部t央樣準局負工消费合作杜印製 [-CH20CH2CH2H(CHZC00H)2)2]，並在 371C 培胄 30分鏡。該 均質在100,000s被雛心，分雛成為上潇液（可瘠部份）及沉 »物（胞膜部份）。沉濉物W 〇 . IXLubro 1 PX溶解。其後可 溶部份及胞臢部份之篛鈣素含量由放射免疫测定所決定。 可溶部份中钃鈣素含悬_添加氱化鈣之水溶液至海馬均質 *並與以EGTA處理者比較，含量有大糰減少。相反地，在 睢膜部份之攜鈣素含量，係藉添加氰化1^水溶液而增加。 化合物A(10« M)可大幅抑制鈣雛子所遒成擁转素含量之改 善。表1期示其结果。 13 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度逋用中國國家揉奉（CNS ) A4规格（210X297公釐） 85.11.15 本 A7 B7 五、發明説明（ 另一方面，在GTA之存在下· W-7及丨L·旮物A對鶼鈣素之 行為並無彩響》 _1_海馬«中纗鈣素之细胞内定位效果（1)攜钙素含ft ( “ g/^g蛋白質）

轼驗姐 對照姐 1 bH EGTA 可溶部份 4 · 5 土 0 . 13 12. 3± 0.77' 0 . 83 ± 0 . 04' 1nM CaC 1 2 0. 1 u M CaC 1 ζ + 1.75±0.5 2 1 0>w Μ化合物A 右幸；P<0.01 vs.對照組 胞_部份 8 · 8 ± 0 · 25 7·6 ± 0.40 1 1 · 4 土 0 . 34" 7 · 1 土 0 · 50 請 先 Μ 讀 背 Λ 之 注 項· 再一 Η 本衣 頁 訂 < 艟 分 0 之 I ,髄 ^ 0^ 0 被 均 者時 II 1 0 ^ 動 頸 之ail<J 沙後 動 及 時 ο 1X /IV A 物 合 化 將 ο 定 決 所 定 測 8 说 新 簠 液 血 許 允 疫維 免纖 射基 放甲 由5* 10. 含於 素浮 鈣懸 Μ濟部中央標準局貝工消費合作社印製 素部部 份 物 動 之 峙後 小 血 丨缺 部 驪 在 1 含 素 鈣 纗 之 前 血 缺 部 腦 與 投 胆□ 並 溶 可 /IX 漿 驩 胞 在 0 胞 而 低 減0 大0 小 含 素 鈣 攜 之 份 0 簧 加 埔 之 ft 素 加眄 坩鶼 而到 反察 卻觀 最份 部 膜 胞 在 時 小 份 部0 胞 细。 制果 抑結 地其 幅示 大顯 A 2 物表 驗 實 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0 ；< 297公釐） 後 血 缺 部 腦 在 合 化 而 加 埔 之 0 含 素 Ur> AT 攜 14 修正貫 S09427 A7 B7 五、發明説明（12 ) 表 海馬《中钃鈣鬵之细胞内定位效果（2) 攜鈣素含量(M W通g蛋白質） 經濟部中央揉窣局員工消费合作杜印製 試 驗 組 胞tt 嫌 部 份 胞嫌 部 份 實 驗 1 一 般 組 2 • 1 土 0 . 12 2 .1 土 0 . 1Q 臞 部 缺 血 1 • 7 土 0 . 08 2 .7 士 0 . 22 (1小 時 後 ) 實 驗 2 ： 般 阻 1 .0 土 0 . 06 1 .3 土 0 . 10 臈 部 缺 血 1 • 1 土 0 . 05 1 .9 士 0 . 10 (2 4小時後） 腦 部 缺 血 + 1 .3 土 0 . 08 1 .4 土 0 . 05 化 合 物 A ( 100 B g ;/k ：g ) ：P < 0 . 05 %% : P < 0 .0 丨1 v S . -般組. η = 1 0 - 12 • 此 等 蕖 理 實 例 表示 在 fcyl 期 颺 部 缺 血 陏段 9 细 胞 中 擔 m 素 定 位 之 變 化 0 該 等變 化 與 添 加 鈣 離 子 於海 度 均 質 所 引 起 之 變 化 相 U 0 進 而 ，具 有 強 大 抑 制 m 钙 素效 果 之 化 合 物 A » 在 添 加 鈣 m 子 (試管中） 及 在 腦 部 缺 血 棋型 中 9 可 抑 制 擄 鈣 素 在 细 胞 中 定 位 之變 化 〇 [藥理實施例 3] 鈣 離子 對 细 胞 骨 架 蛋 白 福精 分 解 之 效 果 將 從 沙 鼠 取 出 之 海馬 « Η 20 丨βΜ三 羥 甲 基氰 基 甲 烷 嫒 衢 液 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (PH7.5)均質化。在添加ImM CaCU或IbM EGTA後，在37T： 本纸張尺度逋用中國國家揉丰（CNS ) A4规格（210X297公釐） -15 ~ 五、發明説明（13 ) A7 B7 培育1小時。其後均霣在l〇,〇〇〇Xg鼴心30分癟 在Μ SDS-PAGE分*上潇液部份所含之蛋白質後，該番 式吸去法（western b 1 o 11 i n g )之使用福精抗_、5¾子 西 經濟部十央棣率局ecx消免合作社印製 轨在

OC -Spectrin)及癱拷素抗髓（嫌羊抗牛篇转索）來· EGTA治療下，禳精之安定分解麋物（i 40-1 50KDah 察到。然而，在Ca “被添加時，有分解產物之瓣 鼉 啊出珣， 由於擄鈣鬵之西式吸去法结果，鶼鈣索所指定之版 用畎被觐 察到。此與祺精及裼精分解麄物所指定之螬吠抽似〜 w W «乎相 同，此顯示钃鈣素不僅興福精结合，更與其分〜 w嫌苟结合 [藥理寶施例4]臞部缺血撗型之禰精攣化 沙鼠之顰動脈二者均被结紮10分鐘Μ製儋一膽部缺血供 型。並在允許血液麈新流_4,24, 48小時之後，取出海琢 «，艚以含有〇.1·Μ亮肽素，O.UM PMSF及0.15·Μ抑ttw 之2〇·Μ三理甲基_基甲嫁鑀衡液（PH7.5)均質化，在 ΙΟ,ΟΟΟΧ g離心30分鼸後，上濟液中之蛋白質被sds_page 所分獯。其後《精及其分解產物係如獼理實譫例3所描述 之方法霆定。化合物B(100ig/kg)在漏部缺血1小時前被投 與並在48小時後評估。在正常之沙»偵测到少量之福精分 解產物。另一方面，在臞部缺血携型之情形，在允許血液 重新流動後4小時出現分解產物•且在48小時後觀察到隳 吠。埴些因腦部缺血所產生之福精分解產物，在以具有強 大的钃眄索抑制效果之化合物B治療下，欏少被偵澜到。 [蕖理實施例51臞部缺血播型中’海馬觼神經Μ胞之變化 當暫時性的臞部缺血被撫於一沙氟，海馬體细胞之壞死 % 本纸張尺度逋用中國«家操率（匚阳）八4规格（210><297公釐} 16 85. 4. 27 補充 A7 B7 五、發明説明（14) 在此後之數天被觀察到。此種變化稱為延蠼神娌细胞死亡 。沙艱被施以臞部缺血5分鏞。其後7天·此動物被犧牲I 且殘留於海馬MCAIS域之神經细胞被計敝。大部份之海 馬MCAI綑Μ因臞部缺血而死亡•當在臞部缺血後1小時口 服投與沙》化合物Α或Β (100ig/ke)時•神經细胞之保護效 果很濟楚地顯現。表3顥示其结果。 _3 在臞部缺血棋型中·海馬神錁緬胞之變化 正常 腦部缺血 騸部缺血+化合物 腦部缺血+化合物 海馬神纆细胞密度 194± 6. 1 9 ± 1 . 3 98 ± 22 . 0^ 131 ± 21 . 2·料 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 P<0.01vs.臞部缺血姐.n = 9-10. [蕖理實雎例 6]在小鼠«内對氮負荷造成之缺氧性死亡 之作用 每一試驗組及對照組使用9至10隻小鼠。經口投與被檢 藥之後80分鏑•將小联一隻一隻地放入投有排氣孔之通明 容器（容積：500·1),Μ5000·1/分之速度通人氣氣。澜定 從通氮氣開始至呼吸停止為止之存活時間。轼_姐及對照 姐之存活時間被報告於表4。 ---------ί-私------訂------^ (請先閲讀背面之注f項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐} L7 修正頁 A7 B7 五、發明説明U4-A) 皇 劑最 叟數 存活時間 存活時間蝤加率 g/k g ) (秒 (I) 化合物B 對照姐 30 0 1 0 32 . 203 ± 0.87 1 0 27 . 989 ± 0.8428 15.0 化 合 物A 10 9 3 1.033 土 0.694 1 . 2 30 9 36.544 土 1.261^ 19.2 100 9 39·422 士 2.210*讦 28.6 對 照 組 0 9 30.655 土 0.3783 — 請先閲讀背面之注^項^^荈本頁 經濟部中央梯华局貝工消费合作社印製 ： P < 0 . 0 1 [參考例 1]5,6 -二甲氣基-1-(3,4-二甲縝基¥基>-1丨丨-吲 唑-3-羧乙酿。 將5,6 -二甲氧基-1H -吲唑-3 -羧乙酯（250.2g)懸浮於二 甲基亞瞩（5000β1· K分子篩4A乾煉），其後加人甲氧鋰 (3 8 . 0 g )·且混合物在室溫报拌。在室溫攢伴1小時後。在 室溫時，於10分鐮内逐滴加人3,4 -二甲氧¥«(185.6g)[ 由336.48，3,4-二甲氣苯甲酵，300«(1灞塩酸及500議1二乙 基醚所製備]。其後在室溜攪伴此浞合物1小峙。在加入 3 , 4 -二甲氧节氯（5 5 . 6 g )後，在室溫报拌此绲合物1小時。 進而，加入3,4-二甲氧苄氧（55.6g)，且在室溫下將此混 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) A4规格（210X 297公釐）

17-A

♦正W 經濟部中夬樣隼局具工消費合作杜印装 A 7 B7 五、發明説明U5 ) 合物再行攪伴1小時。反靡之潘合嫌—龜播拌，—*傾入 冰水（30000·1)。上液Μ傾析除去，而殘潼溶解於氣仿 (ΙΟΟΟΟβΙ)，經《酸納乾燥，在獷臛下逢瀘並蒸轚。如此 所獲得之殘渣（49 7.0g)_使用矽繆管柱（氯仿/四氩化礙/ 乙酸乙釀=5/5/1，矽膠2fcgX9，擄蕃Μ乙酸乙_/己烷 = 2/1，矽膠2kgx 4)分雛並摊化。所獲得之析出液Μ乙酸 乙_再结暴。因而獲得嫌狀结晶形狀之205.0g5, 6-二甲氧 基-1-(3,4-二甲氣基节基）-111-噸唑-3-嫌乙_(·.?.: 138-141¾ ) » IR (KBr)cm'1: 1728, 1496, 1266, 1216, 1204, 1138, 1022. ^-NMRS (ppm, CDC13)： 1.49 (3H, t, J = 6.8 Hz), 3,78 (3H, s), 3.8.5 (6H, s), 3.95 (3H, s), 4.53 (2H, q, J =.6.8 Hz), 5.58 (2H, s), 6.63 (1H, s), 6.76 (1H, s), 6.80 (2H, s), 7.56 (1H, s). 元素分析： CziHz^NzOe計算值：C, 62.99 %; Η, 6.04 %; N, 7.00 %. 實獮值：C, 62.83 %; K, 5.99 %; N, 6.93 %. [參考例2]5.6-二甲氣基-1-(3,4-二-瓤基节基）-1H-吲唑 -3-甲酵 5, 6-二甲氧基-1-( 3,4-二甲氧藝Τ碁）-11-嗜哇-3-嫌鼸 (2 0 5 . 0 g)在研钵研磨，並在室邋下•«浮於四氯呋嚷 (1500·1)。其後，加入_氫化»(96.8g)，並在富«下攪 拌此混合物。甲酵（300·1)在30分鐘内逐癎地壽醑被滴入 。在滴入完成後，反應港合物被加熱至50 t：並攪拌5小時 本纸張尺度逋用中國國家檫率（CNS ) Α4规格（210X297公釐) -18 - ' (請先»请背面之注$項再填寫本頁)

k I 裝. 訂 r線 309427 A7 _B7__ 五、發明説明（i6 ) 。在加入蘭氣化納（19.及甲酵（60·1)後，潘合物在室 溫下攪拌蝤夜。其後反應潺合物在*拌下UH1〜2)按比例 加入漘堪酸（200*1) *水（5000·1)及冰（lkg)之混合榭。對 此水曆，碳酸氬»之»和水»液在室«下被加入並攪拌， 直到pH變成大的8 »鏟果•有無色騰騰沉轚。該沉轚籌以 過謙收集，水洙（500·1Χ 2)，並疼解於«仿（100 00·1)， 經确酸納乾燥，ift濾，且癢莆在濟Μ下被綦發》因而獾得 無色固«(185.2g)。软固S康轍並不》涛化，莳直接用在 後續之反應。 各別地，小量之固臞衋榭被取释•並由乙醇再苗轟Μ雇 生嫵色穢形结晶U.P. : 187〜1881C)。 IR (KBr)cm_1: 3272， 1520， 1470， 1438， 1418 1318， 1284, 1256， 1210, 1166, 1140, 1062, 1026, 870, 834. lH-NMR6 (ppm, CDClj)： 3,77 (3H, s), 3.82 (3H, s), 3.87 (3H, s), 3.92 (3H, s), ! 4.97 (2H, s), 5.40 (2H, s), 6.62 (1H, s), 6.69 (1H, m), i 5.75 (2H, m), 7.13 (1H, s). 經滌部t夬揉窣局負工消費合作社印裝 [參考例3] 3-jC甲骞-5,6-二甲勰基-1-(3,畚-二尹嫌碁T碁 .參；霉？ )-1H-吲唑

mmM (请先《请背面之注意事項再填寫本頁) 5 , 6-二甲氧基-1- (3，4-二甲氣基节纂）-Σ-醫 吲唑（184.Os)在室灌下溶於二氬甲嫌（1500^1 籯撇 :養 •反應漘合物被冰冷卻並*拌之。然後蘧賺酿6二^鐘f ^ (75.4·1)在20分鏞内被滴入其中。反應灌合嫌在翥鸛_钃 拌，且二氯甲烷（3500·Π被加人。然後从鼸1 本纸張尺度逍用中國國家揉率（CNS ) Α4规格（210X297公釐） 經洚部中央揉率局負工消免合作社印裝 A7 _B7__五、發明説明（w) (lOOOal)之餹和水溶液濟洗’經碴酸鑰乾燥•邊謙’溶繭 在滅壓下被蒸發°因而獲得189.7g無色固體。該固鼸並不 被纯化，而直接用於後鱭之反應。 ^-NMRS (ppm, CDC13)： 3.78 (3H, s), 3.84 (3H, s), 3.88 (3H, s), 3.95 (3H, s), 4.95 (2H, s), 5.44 (2H, s), 6.65 (1H, s), 6.71 (3H, m), 7.10 (1H, s). [參考例4]5,6-二甲氣基-1-(3,4-二甲蜒碁节基）-1 H-吲唑 -3-乙臍 3-氯甲基-5,6-二甲氣-1-(3,4-二甲親基节薯）-1Η-呼哇 (187.0g)溶解於二甲基亞1(1〇〇〇»1)，且溶«在室濉下攪 拌。其後，在研钵研磨好的概化納（134.0s)被加入》反窳 混合物在50t：攪拌2小時。使反應混合物画復至室藝，-儺 入水中（1 5 0 0 1)並攪拌1小時。此沉«之困*由邋蠢晚集 之，以水潇洙（1〇〇〇·1χ 3)，溶解於«仿（5<Η>α酶1)，fll «I 酸納乾嫌，鳜癱，並在滅屋下蒸發。囲藤囊蠢_使 用矽謬管柱（癱仿/乙酵=50/1，矽謬2k播蕃驀， 乙酸乙»/己烷=3: 1)鰭化，以唐生111.0g白捺色固臛產 物。該固β產榭不被典化下，而直癀使用於後_反應。 ^-NMRS (ppm, CDCI3): 3.80 (3H, s), 3.84 (3H, s), 3.89 (3H, s), 3.94 (3H, s), 4.02 (2H, s), 5.43 (2H, s), 6.66 (1H, s), 6.72 (2H, m), 6.69 (1H, m), 7.06 (1H, m). [參考例5 ] 5 , 6 -二甲氧基- ι- (3,4-二甲氣基苄基）-ih -吲唑 本紙張埴用中爵_料準（CNS ( 210X297公麈 1 _ « 〇 _ --------《r装—-----訂-----Γ線 (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁) B7 五、發明説明（18 ) 經濟部4,夬揉皋局身工消費合作社印装 -3-酗酸 5，6-二甲氧基-1-(3,4-二甲氧基节基）-in-吲唑-3-乙膦 (lll.Og)在室瀟下攪伴並使嫌浮於乙酵（1000b1)。其後加 入氫氣化納10N水溶液，混合物在回流下加热2小時。使反 應混合物回復至室邋，且乙鼸（約100〇Β1)在減壓下被蒸發 。其後加入水（2000·1)並攪拌混合物蠼夜。在遶靡掉不可 溶物後，加入醚（500«1)·溶於有懺溶劑之物質_播索有 櫬曆而移去。水靥鞴加入澹堪酸而鑕螯pH至4〜5。因而獾 得一沉《固《。該沉《固«以過濾收集並部份被乙酵再结 晶。因而獾得41.0g5,6-二甲氧基-1-(3,4-二甲氧基节基 )-1Η-吲唑-3-乙酸。該產物在不被進一步纯化下，直接使 用於後麝之反磨。 lH-NMRS (ppm, CDClj)： 3.77 (3H, s), 3.84 (3H, 4.03 (2H, s), 5-44 (2H, 6.77 (1H, in), 6-96 (1H, [參考例6Π - < (5 , 6-二甲氧基-1-(3· 4-二咿瓤_肀基）-1H-吲唑-3-基）乙鼸基]-4-(3-氧-2-甲基苯基）-六氫吡畊 將5,6-二甲«基-1-( 3,4-二甲氧基T基）-1H-吲唑-3-乙 酸（41.〇8)騄浮於二氣甲烷（50〇1|1)°其後加入二班化2,2-二吡啶（24.58)及三苯膦（30.0S)，且在室邋下攪伴混合物 。其次，將溶解於二氯甲烷（200·1)之（3-K-2 -甲苯碁）六 氫吡畊（23.5g)在5分鏞内滴人，並將琨合物在室通下攪拌 30分鱸。其後加人二氦甲烷（1000·η於反應混合物。在W 本纸張尺度逍用中«*家樣準（CNS ) A4規格（—210X297公釐） ~ 21 - ~ (请先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) s) , 3.88 (3H, s), 3.91 (3H, s), s), 6.64 (lHr s), 5.7 2 (2H, in), Α7 Β7 五、發明説明（19 ) 水濟洗後，有櫬曆绠醣酸納乾燥，壜癉並在滅壓下蒸發。 如此獾得之殘渣以矽膠管柱（乙酸乙己烷=2/1,矽膠 2kg)纯化Μ產生61.5g無色固«。該固鱧產物在無鈍化下 用於後續反應°取出小最之豪镌並由乙.酵再结晶。因而獾 得無色後狀结晶U.p. : 165〜169它）。 IR(KBr)cm'1: 1652, 1516, 1264, 1236. lH-NMRS (ppm, CDC13)： 1.24 (1.5H, t, J = 7.3 Hz, Meof EtOH), 1.65 (4H, s), 2.55 (2H, m)r 2.75 (2H, m) , 3.72 (1H, m, CH2 of StOH), 3-76 (3H, s), 3.78 (3H, s), 3.89 (3H, s), 3.94 (3H, s), 4.09 (2H, s), 5.41 (2H, s), 6.65 (1H, s), 6.69 (2H, m), 6.73 (1H, s), 7.03 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.09 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.19 (1H, s). [參考例7]3-(2-(4-(3-籯-2-甲笨基）-1-六籮》比畊基）乙基 丄5,6-二甲氧基-1-(3,4-二甲节基）-1 Η-吲唑（化合物A) ---------Γ _裝— (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) 訂 經汫部中央樣準局Λ工消費合作社印«. 將1-((5,6-二甲氧基-1-(3,4-二甲籌基节基）-1Η-吲哇 -3-基）乙醢基）-4-( 3-翥-2-甲基苯纂）六雪吡畊（60,5g)懸 浮於四氳呋晴（1000 ·1)。其後加入1.0莫耳薩烷四鬣呋喃 错合物四氫呋哺溶液（500·1)，此滙合物在画流加觴2小時 。反應混合物被冷卻至室溫且加入水（30·1) Μ分觯*悬試 購。在減壓下使四氫呋哺蒸發後，加入Λ堪酸（300·1)且 反應物在50t：攪拌1小時。使水曆回復至室湿*並以礙酸 鉀贓化。其後Μ氯仿（300»1)萃取，有懺靥並«雄酸納乾 烯，通《，並在滅壓下蒸發。如此獾得之殘渣_使用矽應 本紙佚尺度適用中««家橾準（（：1^)八4规格（210父297公釐） 22 303427 Α7 Β7 五、發明説明（20 ) 管柱（«仿/乙酵40/1)鲔化。因而罄搏一無色固β (50.0&)該襄舂由乙鐮再鯓晶Μ產生46.3g嫵色嫌狀鏟矗 (•.P. : 148〜150t：)。 IR(KBr)cm-1: 1518, 1466, 1454, 1260, 1236, 1140, 1022, 1004. ^-NMRS (ppm, CDClj)： 2.35 (3H, s), 2.85 (2H, m), 3.02 (4H, m), 3.26 (2H, m), 3.78 (3H, s), 3.83 (3H, s), 3,87 (3H, s), 3.94 (3H, s), 5.43 (2H, s), 6.62 (1H, S), 6.72 (2H, s), 6.78 (1H, m), 6.96 (1H, m), 7.11 (3H, m).- 元素分析：C3lH37N*0*Clst 算值：_ C, 65.^9 %; H, 6.60 %； N, 9.91 %； Cl, 6.27 %. 實» 值:C,. 65了65 %; H, 6.59 %; N, 9.53 %; Cl, 6.36 %.

[參考例8] 5, 6-二甲鬈基-1-(1-三輦y基-4-味蟾塞 >甲基 哇 _3_ 甲醇在研体研磨5，6 -二甲鬓翥-1- _ ί-基-1H-吲唑-3-嫌乙 _ (222_<IS) .涉fir，·*:呋哺（1300·1)並Μ冰/水冷欲 ---Ml—·. . -节..感v: (請先»讀背面之法意事項再填寫本頁) 經滌部中央揉窣局另工消費合作社印装 贰甲氧基乙鴛基》籯化嫌（5.4H-笨灌麻，Ca · 250.0*1) 一瑾攪拌，一肇以冰/水冷欲，挎鱒Ϊ0分繼。加入一蠊《Τ 和碕酸納水癢液於反磨瀵合鬱Μ »拌1小時。其後加入雄 酸納，並縵誨潘合榭。孅謙器之礙酸蝤係以热氯仿清洗(500nix 5)。在濃鐮邊濾物後獲得一嫵色固霡（220.1g)。 該產物以氱仿再结晶Mi«生181.0g無色穢形结晶[·,Ρ.:115〜120Ό (伴鼸分解）]。 本纸張尺度逋用中國國家櫺準（CNS ) Α4洗格（210X297公羡） 23 A7 B7 五、發明説明（21 IRiKBrJcm'1： 3Γ16, 3172, 3008, 2936, 1510, 1488, 1472, 1444,1302, 1260, 1172, 1156, 1128, 1102, 1036, 1014, 836, 764, 746, 702, 678, 666, 636. lH~NMRS (ppm, CDCI3)： 3.91 (3H, s), 3.92 (3H, s), 4.92 (2H, s), 5.44 (2H, s), 6.76 (1H, s), 6.95 (1H, s), 7.05 (5H, m), 7.26 (1H, s, CHCI3), 7.28 (1H, s), 7.31 (l〇H, m), 7.46 (1H, s). 鐘济部_央橾準局—工消费合作社印*. 元素分析C33H30N«〇3 . CHCU計算值：ρ αλ _ C, 62.83; H, 4.81; N, 8.62.W 测值：C, 62.50; H, <t.63; K, 8.42. ·[參考例9]3-氛甲基-5.6-二甲氧基-1-(1-三笨甲基-4-味 唑基）甲基-1 Η-吲唑 在研钵研磨5 , 6-二甲鴒基-1 - (1 -三苯甲基-本-_ _塞咿 基-1H-吲唑-3-甲酵（180.0g)，並在籯讎膊隽洋聆d轚 甲烷（1700·1)，其後W冰/水冷欲。其次“在入 亞逋鼸（二）鳜（48.6·1)。反麝灌合鬌籌之嫌 ,-· ·/ ; .·.*»< >·ΤΪ|Ί·. t r·. Hi* " · · 'ί.；'和水溶液（2000·1)並M氩仿（5000·1)孳耽》在由臁’鼸I»輟 嫌後，在滅壓下遢濉並蒸發，獾得一嫵色賺轚（165.1 ?)。 該固麵在無鮪化下直接用於後鑄反靡》 Ή-NMRS (ppm, CDC13)： 3.95 (3H, s), 4.09 (3H, s), 4.83 (2Hf s), 5.67 (2H, s), 7.02 (8H, m), 7.37 (l〇H, m), 7.88 (1H, br). [參考例10]5,6-二甲氣基-1-(1-三苯甲霱-4-明嚙基）甲基 -ltt-ήΙ 唑-3-乙醣 本纸張用t·«家橾準（CNS ) Λ4*ΜΙ· ( 210X297公釐） -Ζ4 ~ --------f r裝------訂-----y (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部t夬橾準局貝工演費合作社印S- A 7 B7 五、發明説明（22 ) 將3-氣甲基-5,6-二甲氧綦-1-(1-三苯甲基-4-味唑蔫） 甲基-1H-"?丨哇（165.0g)Jft浮於二甲亞;Jfii (12.00·1)，並在室 »攪拌此瘩液。其後將研体所研磨之氰化鉀（43.6g)加入 。在70TC*拌1小時後，反應潘合物變成均勻並繾明。反 應混合镞回復至室醬並在激烈攪拌時價入水中（ 1 5000·1) 。應麝懺伴1小時，沉《之固«以邊灘收集，Μ水濟洙 (1000»1 X 3) ·溶解於籯仿（5000·1)，經破酸鲥乾嫌，澹 賺並在減爵下蒸S。如此所獲得之殘渣藉使用矽膠管柱（ 乙酸乙酗）«化，Μ產生108.7g之白楝色固體。該固讎產 物在無典化下直揍使用於後鱅之反靡。 ^-NMRS (ppm, CDC13): 3.92 (3H, s), 3.94 (3H, s), 3.97 (2H, s), 5.42 (2H, s), 6.79 (1H, s), 7.00 (1H, s), 7.02 (1H, s), 7.06 (5H, ra), 7.30 (10H, m), 7.46 (1H, s).

[參考例11] 5, 6-二甲勰基-1-(1-三苯甲基-4-眯哦基）甲基 -1H-嗍唑-3-乙酸 在室瀣下將5,6-二甲氧基-1-(1-三苯甲基-4-眯睡基）甲 基-1H-吲唑-3-乙腑（107.0g)»浮於乙醇（1000·丨）。其後 加入10N氩氣化《I水瀋液（由400 s篇氣化»及100·1水製備） ，混合榭在回流下加热6小時。使反蜃灞合物回復至室檯 並倒入水（5000·1)其後Μ 10Χ堪蒙水霹嫌钃整pH至3〜4» 结果有無色固«沉«。然後*_之，並以水（5〇〇·1Χ3)淸 洙。如此獾得之固體豪物»解於氯仿（5000il)，络确酸納 乾嫌•遇濾，並在減歷下蒸發。如此所獲得之圃《產物 本纸浪尺度適用中國國家棣準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） 25 --------/ I裝------订-----f線 (请先s#1r<&'之注意事項再填寫本頁) 309427 經濟部中央樣準局属工消费合作社印製 A7 B7___五、發明説明（23 ) (134.0g)並不《化而直接用於後續之反靡° lH-NMRS (ppm, CDCl3): 3.84 (3H, s), 3.87 (3H, s), 3.89 (2H, s), 5.43 (2H, s), 6·‘76 (1H, s), 6.88 (1H, s), 6.93 (1H, s), 7·03 (5H’ … 7.28 (10H, m), 7.48 (1H, s). [參考例1214-(3-氯-2-甲基苯基）-卜（（5,6-二__甲氣基 -1-(1-三苯甲基-4-眯唑基）甲基-1H-吲哇-3-基）乙醣）六 氲吡岍。 將5,6-二甲氧*-1-(1-三苯甲基-4-味_基）甲基-1卜吲 唑-3-鴯酸（134.0g)懸浮於二氯甲烷（1〇〇〇 *丨）°其後加入 二硪化2,2-二吡啶（63.5g)及三苯臑（75.6g)，並在室瀛攪 拌混合物（該懸浮液變成《明且均勻）。其次•在二鸶甲烷 (20〇1«1)之4-(3-氮-2-甲基苯基）六鷲吡|#(60.7^)在5分_ 内滴入，且混合物在室»被攪拌5小時。在滅壓下，二鳜 甲烷從反應混合物蒸發。在殘渣加入热乙酸乙賺並«拌。 结果有固tt沉灘。之後Μϋ濾收集，以乙酸乙洙 (500·1Χ 2)並以空氣乾燥，以產生u〇.4g無色固髓β讅固朦龕 物Μ矽膠管柱（氯仿/乙》=30/1)純化*以康生134.9s無色 固tt。其次，由乙酵再结轟Μ產生120.0g瓣色嫌吠结A (m. p. 1 03-1 05 勺）。 IR(KBr)cm'1: 1646, 1628, 1508, 1466, 1450, 1430, 1260, 750, 702. (請先W請背面之注意事項再填寫本頁) I!--------KI-丨装丨

--訂I 本纸張尺度逋用中國·家操準（CNS ) A4规格（210X297公着) 26 經济部t央搮準扃貝工消费合作社印装 A7 B7五、發明説明（24 ) lH-NMRS (ppm, CDCX3): 1.23 (1.2H, t, J = 6·8 Hz, Me of BtOH), 2.28 (3H, s) 2.55 (2H, m)f 2.73 (2H, m), 3.67 (4H, m), 3.71 (〇.8H, q, J » 6.8 Hz, CH2 of EtOH), 3.90 (3H, s), 3.93 (3H, s), 4.03 (2H, s), 5.43 (2H, S), 6.68 (1H, s), S.72 (1H, d, J =8.3 Hz), S.90 (1H, s), 7.03 (7H, m), 7.14 (1H, s), 7.27 (l〇H, in), 7.41 (1H, s).元素分析： C«5fU3He03Cl*0.4Et0H Hz〇計算值： C, 70.10 %? 5.70 %； Nf 10.70 %; Clf 4.72 %. 實餚值：C, 70.02 Η, 5·78 N， 10.60 %; Cl, 5.1L %· 「參考例13]3-(2-U-(3-氯-2-甲基苯基）-1-六氯B比岍基） 乙基）-5 ,6-二甲氣某-1- (4-咪畦基甲蔫）-1 Η-吲畦（化合物 L έ 1. m i m m m ^^^1 J6^· n^— I (请先《請背*-之注意事項再填窝本]f) B) 將4-(3-氯-2-甲基苯基）-1-((5,6-二甲籌基-1-(1-三苯 甲基一4-眯睡基）甲基）吲嘍-3-基）乙隐.碁）六Μ >%吩 (120.0g)嫌浮於四氬呋哺（1〇〇〇»1)。其檐’加入1. 0Μ-藝 焼四氫呋哺雄合物.（800·1) *且溫合_在囲'灌下加分 鐘。反應混合物被冷卻至室澹’並加入水（3〇»1)以分_邊 量試繭。在減屋下蒸發四籯呋喃後•加入濃堪酸（15〇·1) ，水（200·1)及乙酵（40il)·並在50Ό攪拌此潘合物1小時 。水跚在室湩下攪拌並以已β以礦酸舞鹹化之籯仿 (30 OOnl)萃取。有機靥»疏酸納乾燥，璏濾，並在減壓下 蒸發。如此獲得之殘潼以矽膠管柱靥析法（氯仿/乙酵 = 40/1)肫化，以產生無色固髓產物。其以異丙酵興丙醚再 结：晶並因而獾得71g無色穢狀结晶U.p. : 143-144.5X3)。 訂 線 本紙張尺度埴用中國國家樣準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 27 309427 A 7 B7 經濟部中央橾率局員工消費合作钍印装 五、發明説明（25) IR(KBr)cm'1: 1510, 1464, 1432, 1272, 1238, 1206, 1006. LH-NMRS (ppm, CDClj): 2.34 (3H, s), 2.78 (4H, m), 2.90 (2H, m), 2.97 (4H, m), 3.17 (2H, m), 3.90 (3H, s), 3.91 (3H, s), 5.45 (2H, s), 6.83 (1H, s), 6.84 (1H, s), 6.92 (1H, m), 7.00 (1H, s), 7.09 (2H, m), 7.52 (1H, s). 元素分析： C2eH3 tNeOzCl計算值： C, 63.09 %? H, 6.31 %? N, 16.98 %? Cl, 7.16 實瀰值：C, 62.93 %; H, S.30 %; N, 16.88 %; Cl, 7.L6 %. 本發明人等已閨明：1)禱鈣素之細胞內定位，僳由於騰部缺 血或鈣離子之添加，而被鈣難子瀟度之壜加所改變。2)被 活化的鬌转鬵（结合鈣離子之霱鳄素）着移至姗謙齡並輿鸛 褢（lining)»胞膜之蛋白質-褊精结合，Μ加速m糝之分 解；及3)實驗之化合物A及B，興既存之攤索揮Μ嫌比輓 具有較彊之效果，可抑Μ神經細Κ之死亡。換包縿說*本 發明人等已矚明鼸鈣鬵之活性及褥精分解之加瓛，在_» 缺血所造成之神經细胞死亡扮濟了重*的角色。因此，具 有抑__銬素不正常活勤之化學物質可作為_品而使用於 神經損傷。 本發明已詳緬描述並參照特定實癱例•而對热悉該項技 藝人而言，可在不邋背本發明之精神及籍園下作種種之 變化及修正。 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度逍用中國家揉準（CNS > A4规格（210X297公釐） 28 309祕.15 ——附一件-一 化合物B對於砂鼠之過度缺血樣本所達到之效果 [方法] 將砂鼠之頸主勖脈兩側•结％ 5分_ •使砂鼠呈腦缺血 狀態以後*再使顆主動脈之血液流通。在砂鼠揉本已經作 成之一個星期後•殺掉砂鼠* Μ計算其殘留在海馬CAL中 之腦神經细胞敝目。 在砂鼠呈腦缺血狀態開始之後2小時*將懋濁在0. 5¾ MC 中之化合物B> Wl〇〇ms/kg之用ϋ藉口服方式給予砂鼠。 [结果] 動物（隻数） 假手術姐（20) 病戆對象組（18) 投藥組（16) 腦神络细胞數目 185 士 3.53 10 士 3 . 20 162 ± 5 . 25 [討論] 本方法係對砂醱•胞以外科手術之處置·雖然對於假手 術姐有進行手術，但是並沒有對餒手術組之«動脈進行结 紮 > 而使得傾手術姐並沒有成為缺血狀態。在呈缺血狀態 之砂&中*其所殘存之腦神經细胞數目大幅度地減少。相 對於里缺血狀《之砂鼠*可以很濟楚地發琨到•在化合物 Β給藥姐中V有幾乎和未圼所諝缺血狀鼷之骽手術姐楢同 程度之臞神經姗胞败目》 本方法係形成臞缺血狀戆，Μ明白地_示出臞之低氧狀 雄對於臞神«赃胞所缠成之影響。如上所述》化合梅Β可 Κ臞蓍地抑韆由於低氧狀籯所道成之腦神經曲胞死亡*而 具有相當良好之》乘。

Claims (1)

1. 降正 補充 公告本 A8 B8 C8 D8 85. 4. 2 7 修正本 申請專利範圍 1. 一種用於抑制臞部缺血所引起之騮神錁细胞死亡之靨 藥組成物*其特緻為含有3-(2-(4-(3-氯-2-甲基苯基）-ΙΑ» 吡哺基 ）乙基 ）-5,6-二 甲氧基 -1-(3,4-二甲氧 基苄基 ） -1H-呼睡，或3-(2-(4-(3-氯-2-甲苯基）-1-六麓啪叻基） 乙基）-5,6 -二甲氧基-1-(4-睥唑基甲基）-1Η -吲唑作為有 效成份。 2. 如申請専利篛圃第1項之翳槩姐成物·其中臞部缺血 係基於腦血管陣鼷之臞部缺血者。 3. 如申請專利範國第2項之《藥組成物，其中腦血管陣 礙係基於臞梗塞、臞栓子、暫時性鼸部缺血或臞血栓之臞 血管陣礙者。 4. 如申請専利範園第1項之翳蕖姐成物·其中臞神經细 胞死亡抑制作用係基於抑制纗鈣素與细胞骨架蛋白之结合 及/或抑制细胞骨架蛋白之分解者。 5. 如申請専利練第1項之霤蕖組成物·其中臞神經细 胞死亡抑制作用係基於抑制擁鈣素與细胞骨架蛋白之结合 者0 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (請先Μ績背面之注意事項再填湾本頁) 6. 如申請專利範鼷第1項之轚藥組成物·其中腦神娌细 胞死亡抑制作甩係基於抑制细胞骨架蛋白之分解者。 7. —種用於抑制缺氧死亡之翳稱組成物，其特微為含有 3-(2-(4-(3-氯-2-甲基笨基）-1-六氮》比叻基）乙基）-5,6-二甲氧基-1-( 3,4 -二甲氧基笮基）-1丨彳-吲唑，或3-(2-(4-(3-氣-2-甲苯基）-；!-六氳吡叻基）乙基）-5,6-二甲氧基-1-(4-咪唑基甲基）-1 H-吲唑作為有效成份。 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS > Λ4規格（210Χ297公釐）