第 80106522 號 (民國32年3月|>日送呈）-附件四 β(; 經濟部中央標準局員工消費合作社印t 五、 發明説明 ( 1 / /、 ii ' ··> 1 —丨 ______ 固 -"· \ ΑΊι 本 發 明 偽 有 m 箝 相 成 作 用 » 以C -末端氮雜- 胺 基 藍 胺 裂 備 肽 類 之 方 法 〇 本 發 明 之 巨 的 為 發 展 一 種 藉 固 相 合 成 作 用製備具C- 末 端 氮 雜 -胺基藍胺之肽類之Ί Κ V 肖旋化作甩方法。 本 發 明 之 百 的 傺 由 式 I 肽 類 之 製 法 逹 成 (X) η -A -nh2 (I ) 式 中 X 為 —* 痼 天 然 或 非 天 然 胺 基 酸 9 氮 雜 -按基酸或亞胺基 m 9 Η 為 一 屆 1 至 50 , 最好1 至 30 之 整 数 » 且 A 為 —* m 氮 雜 -胺基酸， 及 其 生 理 上 可 忍 受 之 發 類 » 該 裂 法 包 括 將 — 膣 間隔 基 轉·化 成 一 種 可 m 化 之 形 式 » 後 者 與 一 種 適 當 甲 酸衍 生 物 反 應 後 I m 舆 — 種 適 當 胺 基 m 肼 反 應 1 適 當 時將 保 • 護 基 国 轉 化 成 一 種 對 不 穩 定 或 對 弱 酸 不 穩 定 之保 護· 基 團 1 依 此 方 式 得 到 之 間 隔 基 與 一 種 樹 脂 厲 合 ,由 C - 末 端 逐 步 合 成 所 m 肽 類 9 m 製 m 樹 脂 上 之 肽 且若 適 當 時 » 將 之 轉 化 成 其 生 理 上 可 忍 受 之 m 類 1 天 然 或 非 天 然 胺 基 酸 若 呈 對 掌 性 時 > 可 呈 D或L型 〇 以 α -胺基酸較佳。 可述及之實例為 ： Aad , Abu , Abu , 7 Abu ABz ,2A8 2 , β Aca , Ach , Acp , Adpd, -R 3 — - -------------------- --------裝------訂----- 球 (-"間*:''''.背而之注'spJf!再塡寫本頁). 本纸張5:中围國家揉迆（CNS)甲4規格（210 X 297公贷） 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（2 ) Ahb, Aib, /?Aib, Ala, >3Ala, ΔΑΙβ, Alg, All，Ama, Amt, Ape, A p m , Apr ， A r g, A s n, Asp, A s u f A z e , Azi, B a i , Bph, Can, Cit, Cys, (Cys)-7, Cyta， Daad， Dab, Dadd, Dap, Dapm, D a s u , D j e n , D p a , Dtc， F e1 , Gin, Glu, Gly, Guv, h A 1 a , h A r g , hCys, h G 1 n , hGlu, His, hlle, h L e u , h L y s , h M e t , hPhe，hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, 3 H y p , lie, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn· Leu, Lsg, Lys, β L y s, Δ L y s, Met, Him, Min, n A r g , Hie, H v a , 0 1 y » Orn， Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, ΔΡ「ο, Pse， Pya， Pyr, P z a , Q i n, Ros, S a r, Sec, Sen, Ser, Thi， >9 T h i , Thr， Thy，Thx, Tia, Tie，Tly· Trp, Trta, Tyr, Val， Nal, Tbg， Npg， Cha, Chg， Thia (參見例 如：胡本惠爾（Houben-Weyl),有機化學方法（Methoden der organischen Chemie)，第 XV/1 與 2卷，司徒嘉特 (Stuttgart) ， 1974)。 氮雜-胺基酸係衍生自天然或非天然胺基酸，其中 心-C H R -或-C Η -單位分別被-H R -或-N Η -取代。可述及之 實例為氮雜甘胺酸，氮雜纈胺酸，氪雜白胺酸，氮雜異 白胺酸與氮雜苯基丙胺酸。 亞胺基酸通常偽指該胺基經單取代之天然或非天然 胺基酸。此時可特別述及經Ci-C8烷基取代之化合物， —Λ —- (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 裝· •\# - 線< 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 Λ6 B 6_ 五、發明説明（3 ) 該烷基則可再視需要呈單不飽和或雙不飽和，且可經至 多3掴選自下列之相同或相異自由基取代：氳硫基；羥 基；G-Ct-烷氧基；胺基甲醛基；h-Ce-烷醯氧基；羧 基；Ci-b-烷氧羰基；F;C1; Br; I;胺基；脒基，該脒 基可視需要經一個，二個或二個Ci-Ce_院基取代，脏基 ，該胍基可視需要經一値或二偁苄氣羰基或經一痼，二 個，三値或四個Ct-Ce-烷基取代；h-c?-烷胺基；二-匸1-[7_院胺基；〇1-〇6_院氣幾胺基；[7_〇5-芳院氣激基 ;Ct-Qs-芳烷氧羰胺基；苯基Ci-U-烷氧基；9 -芴基甲 氧羰胺基；Ct-Ce-烷磺醯基；Ct-Cs-烷亞磺醯基；Ci-c6-烷硫基；羥胺基；羥亞胺基；胺磺醯基。 亦適合者為選自下列之雜環：吡咯啶-2-羧酸；六 氫毗啶-2-羧酸；1, 2, 3, 4 -四氫異喹啉-3-羧酸；十 氫異睡啉-3-羧酸；八氫吲晬-2-羧酸；十氫_啉-2-羧 酸；八氫環戊[b]吡咯-2-羧酸；2 -氮雜-雙環[2, 2, 2] 辛烷-3-羧酸；2-氮雜-雙環[2,2,1]庚烷-3-羧酸；2-氪 雜雙環[3,1,0]己烷-3-羧酸；2-氮雜螺環[4, 4]壬烷 -3-羧酸；2-氮雜螺環〔4, 5]癸烷-3-羧酸；螺環〔 (雙環[2, 2, 1]庚烷）-2, 3 -吡咯啶-5-羧酸；螺環[( 雙環[2, 2, 2]辛烷）-2, 3 -吡咯啶-5-羧酸；2-氮雜三 環[4,3,0,1 6·9]癸烷-3-羧酸；十氫環庚[b]吡咯-2-羧 酸；八氫環戊[c ]毗咯-2 -羧酸；八氫異吲晬-1 -羧酸；2 -5 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 線· 太R 冷试）fl Ψ s ea Ψ4Μ3.格（210x297公贷） A6 B6 五、發明説明（（X ) ，3, 3a, 6a -六氫環戊[b】吡咯-2-羧酸；2, 3, 3a, 4 ,5 , 7 a -六氫吲呜-2 -羧酸；四氫噻唑-4 -羧酸；異吗唑 啶-3 -羧酸；唑啶-3 -羧酸；羥基脯胺酸-2 -羧酸；所 有該等雜環均可視需要經取代： 經濟部中央標準局印製
(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝. .訂· •線· 甲 4(210X 297公沒） 295589 A6 _B6_ 五、發明説明（5 ) 式工化合物之鹽類持定言之偽指製藥上可使用或無 毒之鹽類。待別適合者為龄金屬或鹺土金颶鹽類，與生 理上可忍受之胺形成之發類，及與無機酸或有機酸如， 例如： H C L , Η B r , H2 S 04 , H3 P 〇4 ,馬來酸，富馬酸， 檸檬酸，酒石酸與乙酸等形成之鹽類。 進行該製法時，宜使一種式I化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-
經濟部屮央標準局貝工消费合作社印製 式中 Y1 , Y2 , Y3 , Y4與Y5為氫 ，G - C4 -烷基，G - C4 -烷氧基或 -〇-(CH2 )n-COOH, -(CH2 )n-COOH 或- NH-C〇-(CH2 )-COOH ，其中該等自由基可為相同或相異者，但至少一値自 由基為-0-(CH2)n-C00H , -(CH2)n-COOH 或-NH-CO- (CH2)n-COOH, η為一個1至6之整數，最好為1至3,且 R1為氫或G-Ce-烷氣-Cs-Ce-芳基，最好為4 -甲氧笨基 .與一種矽烷化劑，例如：三级丁基二甲矽烷基氯， 三级丁基苯基矽烷基氣，三甲基氮矽烷，尤指三甲基 氯矽烷，於一種適於此目的之溶劑中如，例如：THF ，乙腈，二氛甲烷，二甲基甲醯胺或其混合物中進行， 且缠使該矽烷化化合物經一種氯甲酸衍生物，尤指經 .^_ 線- 太《.张 R 泞 ii Ifl 巾 Η H 甲格（210x297公 A 6 B 6 五、發明説明（6 ) 取代之酯衍生物，轉化成式Μ化合物。 Η-
R^OC- hn
經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 式中 Rl、γι,γ2,γ3,Υ4與ys如上述定義，且 R2·為Ce-Qz-芳基，該芳基可經吸電子取代基，最好經硝 基與鹵素，例如：F或CL,取代， 依此方式得到之式Μ化合物則與一種式IV胺基酵肼 R3 - X-CO-NH-NH-R4 (IV ) 式中 X為如上述定義之天然或非天然胺基酸或亞胺基酸， R3為一痼對鹼不穩定或對弱酸或氫化作用不穩定之保護 基圍，如，例如：脲烷保護基（參見例如：Hubbuch, Kontakte (Me「ke) 1 979, N0.3,第 14至 23頁），且 R4 為 Ci - Ce -院基，C3 _ Cs -環院基，C6 _ 〇2 _ 芳基，Ce _ 〇2 _ 芳基-Ci-Ce-烷基，雜芳基或雜芳基一Ci—Ce — 烷基 或氫，於一種適於式JI與IV化合物之溶劑如，例如 :DMF中反應，産生式V化合物。 -8 - " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂- 線· 太紙從K 中ΊΜ3格（210x297公货） 五、發明説明（7 )
A 6 B6 經濟部+央標準局员工消費合作杜印製 式中R1、R3、R4與Y1 , Y2 . Y3 , Y4與Y5如上述定義，若R3 為一値對氫化作用不穩定之保護基團，最好苄氣羰基時 ，此保護基團可於Pd觸媒上進行之氫化作用排除，且在 接續之反應前，轉化成一個對鹼不穩定之脲烷保護基團 ,最好為Fmoc,或一個對弱酸不穩定之脲烷保護基圃， 最好為Bpoc,缠使式V化合物（式中R1、R4、Y1、Y2、 Y3、Y4與Y5如上述定義，且ft3為一籲對鐮或弱酸不穩定 之脲烷保護基團）與胜肽化學上常用之偶合劑，經由-0 -(CH2 )n-C00H, _(CH2 )n-C00H 或- HH-C〇-(CH2 )n-C00H 基 園與樹脂偶合.排除保護基R3,再使受對鹺不穩定或對 弱酸不穩定之胺基一保護基團暫時保護且可視需要呈其 活化衍生物形式之天然或非天然胺基酸，亞胺基酸或氮 雜-胺基酸逐步偶合，且待合成作用完成後，以一種適 當強酸處理樹脂，釋出式I肽類，同時或接缠進行適當 方式消除暫時引入之側鏈保護基。 式IV化合物之製備偽使該天然或非天然胺基酸或亞 胺基酸與適當肼類依胜肽學上習知之偶合方法反應。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- ,?τ_ 線_ 太紱铬兄泞m Ψ S3 Μ 谁ί CNS〗中4抝格ί 2〗0 乂 297公炒） 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製 A6 B 6_ 五、發明説明（8 ) 烷基可為直鐽或分支。相應之說明亦適用於衍生自 該等烷基之自由基如，例如：烷氣基，烷硫基，烷胺基 ，二烷胺基與烷醯基。待定言之，烷基為匕-!^-烷基。 環烷基亦指經烷基取代之自由基如，例如：4 -甲基 環己基或2, 3-二甲基環戊基。 鹵素為氟、氯，溴或碘，尤指氟或氯。 Cs-Gz-芳基為例如：苯基或萘基，最好為苯基。雜 芳基為一痼5至7員單環糸或8至10員雙環条芳香環糸 自由基，該自由基可經苯並稠合且可包含一傾，二個， 三個或四個選自：H、0、S、NO、S0與S02之自由基作為 雜組員，且偽經1至6個羥基或一値，二値或三餾選自下 列之相同或相異自由基取代：F, Cl, Br, I;羥基，單 _，二一或三羥基-G-C4-烷基；三氟甲基；甲醯基； 羧醯胺基；單或二-Ct-U-烷胺羰基；硝基；G-C7-烷 氣基；h - C7 -烷基；G - C7 -烷氣羰基，胺基；Ct - C7 -烷 胺基；二-G-Ct-烷胺基；羧基；羧甲氣基；胺基-h-C7 -烷基；C! -C7 -烷胺-C7 -烷基；二-Ct -C7 -烷胺 -(^-烷基：匕-^ 烷氧羰甲氣基；胺基甲醛基；胺磺酷 基；-C7 -烷氣磺醯基；Q -C8 -烷磺醯基；磺基-Ct -C8 -烷基；胍基- h-Ca-烷基與h-Cs-烷氣羰基及/或經氣單 二-或三取代。可待別述及：呋喃基，噻盼基，眯唑 基，毗唑基，阱唑基，異阱唑基，噻唑基，異噻唑基， —1 0 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 太《.带 Κ /ί 1Λ 用 Ψ 因 K «:拽miCNS) Ψ4».格（210x297公 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 A 6 __B6_ 五、發明説明（3 四脞基，吡啶基，毗阱基，嘧啶基，吲呤基，異吲哚基 ，吲唑基，酞阱基，喹啉基，異喹啉基，喹畊啉基，睫 唑啉基，噌啉基，/S-忭啉基或此等自由之苯並稠合衍 生物。 若必須防止副反應或為了合成待定肽類時，該胺基酸， 氮雜-胺基酸或亞胺基酸之側鏈中之保護基團可再受到 適當保護基團保護（參見例如：T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis " , New York, John Wiley & Sons , 1981 ； Hubbuch, Kontakte (Merck) 1979, NO. 3，第 14_23 頁；Buellesbuch, Kontakte (Merc|〇 1 980, H0.1，第 23 -25頁），主要使用 Arg (Tos) ,Arg ( Mts) , Arg(Mtr), Arg (Pms) , Asp (0Bz1) , Asp (OtBU) , CyS (4-MeBz1) , CyS ( Acm) , CyS (StBu), Glu (OBzl) , GLu (OtBu) , His(Tos), His (Fmoc) , His (Dnp), Lys(Cl-2), Lys(Boc), Met(O) , Ser (Bzl). Ser(tBu), Thr(Bzl), Thr(tBu)。側練上之官能基亦可 能如例如：EP-A263 521(H0E86/F253)所述，經蕕基化 (glycosylated)〇 作為載體材料使用之樹脂為市售商品或可由使用者 製備，如，例如：烷氣苄酵一樹脂•胺甲基-樹脂或二 苯甲胺基-樹脂。以胺甲基二苯甲胺基- (BHA)或甲基 二苯甲胺基-樹脂（MBHA)較佳。其承載量則由胺基酸與/ -1 1 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· ，訂_ 線· 太m Ψ 因 B3 屮4姐格（210乂297公·ϊί·) A 6 B6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（ 或元素分析決定。 適當間隔基係指例如：述於 Atherton ，ShepPard 之 Perspectives in Peptide Chemistry ’第 101-117 頁 Uarger, Basel 1981); EP-A264 802(H0E86/F259) ,EP-A287 882(H0E87/F101)與 EP-A322 348(H0E 87/ F386K)之間隔基.及其衍生物，如，例如：彼等己消去 保護基團者。以4 一羧化丙氣一 4·-甲氣二苯甲胺（4_ Carboxjrlatoproxy_4,_Bethoxy_benzhydrylamine)|Sl 5 一羧化乙基一 2, 4_二甲氣_4’一甲氣二苯甲胺（5 -carboxy latoethy 1 - 2 , 4 - dieethoxy - 4 ,— methoxybenzhydrylainine)較佳 〇 式V及其他胺基酸衍生物之間隔基可使用胜肽合成 作用上可使用之活化劑作為偶合劑，參見例如：Houben -Weyl ,有機化學方法（Methoden der Organ i schen Chomie),第 XV/2 卷· Stuttgart 1974,但尤指碩化二 亞胺如，例如：N、H’-二環己基碩化二亞胺，N、Ν’-二 異丙基磺化二亞胺或Ν -乙基-fT- (3 -二甲胺丙基）«化二 亞胺。進行此偶合作用時.可直接添加胺基酸衍生物與 活化劑及（若適當時）一種抑制消旋作用之添加物如： 例如一二甲胺毗啶，1一羥基苯並三唑（HOBt) (W. Koenig, R.Geiger, Ber. 103 (1970)788-798)或 3 -瘦基 -4-氣-3,4-二氫苯並三阱（“01^)(1#.1(〇6以8，1{.〇61叾6「 -12- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装< 訂 線- A 6 B6 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 五、發明説明（》1 ，Chem.Ber.103(1970)2034-2040)至樹脂中，或者胺基 酸衍生物如：對稱性酸酐或HOBt或 HOOBt酯之前活化作 用可分開進行，且含已活化物質之適當溶劑溶液可加至 可進行偶合作用之胜肽-樹脂上。 式V與胺基酸衍生物之間隔基與上述一種活化劑之 偶合作用與活化作用可在二甲基醯胺中或二氯甲烷中或 此二者之混合物中進行。該活化之胺基酸衍生物之用量 通常超過1.5至4倍。若發生不完全之偶合作用時，胜肽 -樹脂之α -胺基不需事先進行去封端作用即重覆偶合反 應，該去封端作用係接缅之下一個胺基酸之偶合作用所 必需者。 偶合反應之成功與否可使用述於例如：E.Kaise「等 人（Anal.Biochem.34(1970)595)之茚滿三酮反應檢視。該 合成作用亦自動化進行，例如，使用Applied Biosystems 之430A型胜肽合成機，可使用儀器製造商所提供之合成 程式或採用使用者本身所設計之合成程式。當使用受 Fmoc基團保護之胺基酸衍生物時，特別宜使用後者。 裂解樹脂上之胜肽醛胺時，以胜肽合成作用上常用 之適當強酸處理（例如：三氟乙酸），添加陽離子捕捉物 質如：苯酚，甲酚，硫甲酚，苯甲08,硫苯甲醚，乙二硫醇 ，二甲硫，乙基甲基硫或固相合成作用上常用之類似陽離 « 子捕捉物質，可單獨使用或使用二種或多種此等輔劑之混 -13- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂_ 線_ 大址帒尺泞Li m屮因因定燋淮（CNSW4姒格（210乂的7公熗） 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製 A6 B 6_ 五、發明説明（12) 合物。此時，亦可使用經一種適當溶劑如，例如：二氛 甲烷，稀釋之三氟乙酸。當裂解樹脂上之間隔基時，同 時消去側鐽之保護基團。 依此方式得到之粗肽類經由Sephadex之層析作用， 離子交換樹脂或HPLC純化。 以製備 Ac-D-NalQi-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser-ia -L-Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2 與 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-Azagly-NH (Zoladex)之固相合成法較佳。 採用下列縮寫： BSA 雙三甲矽烷乙醯胺 Cha 環己基丙胺酸 Chg 環己基甘胺酸 DCC 二環己基磺化二亞胺 DIC 二異丙基磺化二亞胺 DMAP二甲胺基吡啶 F hoc 9-芴基甲氣羰基 HOBt 1-羥基苯並三唑 H00Bt3-羥基-4-氣-3-, 4-二氫-1, 2, 3-苯並三 Hal 萘基丙胺酸 Npg 新戊基甘胺酸 Pmc 2 , 2 , 5 , 7 , 8-五甲基色谋-6-磺醛基 —14 — (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 裝- 訂_ 線· 太尺泠熵丨fl Φ a囚定技iMCiNSW4姐柊（210x297公贽） 五、發明説明（0) 酸酸 胺胺 甘丙 基喃基 丁呋吩 级氫噻 三 四 2 明 發 本 明 說 例 實 列 下 A6 B6 限 設 以 加 未 並 (請先M讀背面之注意事項再填寫本页) •裝. •綠· 經濟部中央標準局印製 甲 4(210X 297公沒） A 6 B6 五、發明説明（\\ ) 實例1 a)5-矮化乙基（carboxylatoethyl)-2，4-二甲氧- 4’-甲 氧二苯甲胺 使17.5克5 -羧化乙基-2、4 -二甲氣- 4’-甲氣苯酮肟 溶於450毫升1: 1乙醇與DMF之混合物中，並添加2毫升 濃NH3。添加Pt/C觸媒後，於常壓下進行氫化作用5天 。反應完成後，抽吸過濾觸媒，濃縮濾液，産物經醚沉 澱析出。産物未再純即可使用。 (b)H-(對硝苯氣羰基）-5-羧化乙基（carboxylatoethyl) -2、 4-二甲氣-4’-甲氧二苯甲胺 添加1 0克實例1 a )標題化合物至1 0 0毫升4 : 1 T H F / DMF混合物中，並於室溫下添加2.1當量雙三甲矽烷乙醯 胺（B S A )。該懸浮液在短時間内呈完全清澈，該澄清溶液 再攪拌2小時。添加3克氱甲酸硝基苯酯，缠攆拌混合 物1小時。反應完成後，於高度真空下排除溶劑。殘質 與300毫升水混合，以乙酸乙酯萃取得之油。以IN KHSfk 溶液與水洗滌乙酸乙酯相。有機相經MgS04脱水，並蒸發 至乾。以HMR, IR與MS鑑定殘質（12克）。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 {請先閱讀背面之注意事须再填宵本頁) .訂· .綠· N-(對硝苯氧羰基）-5-羧化乙基-2、4-二甲氣- 4’-甲 氣二苯甲胺則再與胺基醯肼反應，産生適當之經取代之 物質。 1C)苄氣羰基一4 — 脯胺基氮雜甘胺酸（5 —羧化乙基 -1 6 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐) 295589 A6 __ B6 五、發明説明\ 5 ) (carboxylatoethyl) -2、4-二甲氣- 4'-甲氣二苯甲 基）醛胺 使3.27克苄氣羰基-脯胺基醯肼鹽酸鹽與 6.94克實 例lb)之摞題化合物溶於40毫升二甲基甲醛胺（DMF)中， 並添加3當量N -乙基嗎啉與觸媒量之二甲胺基吡啶（DMAP) 反應16小時。反應完成後，蒸發混合物至乾。以乙酸乙 酯/ 丁醇吸收殘質，並以NaHOa飽和溶液，IN KHS04 溶 液與水洗滌有機相。有機相經MgS04脱水，過濾後，蒸 發至乾。殘質可自純乙酸乙酯中再結晶。得到6.6克標 題化合物。 FAB-MS ： 641 (M + L i+ ) IR ： C0 1695 cm" -NMR(DMSO) ： δ ： 3 . 7s (6H , 0 C H3 ) p p a ld)9 -芴基甲氣羰基-L -脯胺基氮雜甘胺酸（5 -羧化乙基（ carboxylatoethyl)2、 4-二甲氣-4’-甲氣二苯甲基） -醯胺 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 {請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .訂· •綠. 使26.5克實例1C)標題化合物溶於300毫升甲醇中， 並添加2克Pd/c觸媒。1小時後完成氫化作用。濾除觸 媒，蒸發濾液至乾。殘質（17. 5克）未再經純化，溶於80 毫升水與80毫升二氣陸園之混合物中，並與8克碩酸氫 納與1 7克N - ( 9 —芴基甲氣羰氣基）琥珀醯亞胺（F m 〇 c-ONSu)混合。反匾1天。反應成後，混合物經一種淨化濾 -17 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐) A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（1 6 ) 劑過濾。以2NH2S04調整濾液至PH6,並真空蒸發至80毫 升之體積。以100毫升水稀釋混合物，並以乙酸乙酯與 正丁醇（8.5: 1.5)混合物萃取。以50%飽和Nacl溶液洗 滌有機相，並蒸發至乾。殘質經500克矽謬，使用乙酸 乙酯過濾。得到20克標題化合物。 FAB-MS ： 729 (H + L i+ ) IR ： C0 1 695 cm"1 le) 實例Id)標題化合物與聚苯乙烯樹脂之偶合作用 使1.0克胺甲基聚苯乙烯樹脂（承載1.07毫莫耳）與 1.2克實例Id)標題化合物懸浮在10毫升二甲基甲醛胺中 ,並添加216毫升1-羥基苯並三唑（HOBt)與0.75毫升二 異丙基碩化二亞胺（DIC)。反應一夜，直到茚滿三酮試驗 顯示反應完全為止。濾出樹脂，並以二甲基甲醛胺與二 氯甲烷洗滌，並完全真空乾燥。樹脂之脯胺酸承載量為 0. 51 (毫莫耳/克）。 lf) Ac-D-HaI(2)-p-Cl-D-Phe-D-Trp -Ser-Tyr-D-Ser ( a -L-Rha) - Leu-Arg-Pr〇-Azagly-NH2 以20¾強度之六氫吡啶/二甲基甲醯胺溶液（2X3分 鐘，2x8毫升）消去實例le)化合物之9-芴基甲氣羰基- Να -胺基-保護基團。再以H -甲基吡咯啶_ (5x10毫升）洗滌 樹脂，並進行下列循環步驟，於樹脂上合成胜肽（得自 實例1 C之7 8 5毫克樹脂）： —以20%六氫吡啶DMF溶液消去Fnoc保護基團 —1 8 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公釐） (請先閱請背面之注意事項再填寫本页) .装· .訂· .綠. A6 B6 五、發明説明（1 7) —以DMF/N-甲基吡咯啶酮洗滌樹脂 -當HOBt使用二異丙基磺化二亞胺作為活化劑時，於原 位進行活化作用，與Finoc -胺基酸偶合（1.5毫莫耳胺 基酸，2.25毫莫耳HOBt , 1.6毫莫耳二異丙基碩化二 亞胺）。 若偶合作用不完全時（凱薩試驗（Kaiser test )), 重覆偶合作用步驟。所使用之最一値胺基酸為Fboc-D-Nal(2)-0H。與乙酸酐反應，引入N-末端乙醛基。 固相合成作用完成後，洗滌樹脂（D M F , C H2 C 12 ), 並完全乾燥。得到1 . 3 5克經取代之樹脂。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) •打. _線. 使乾燥之樹脂懸浮在室溫下之0.75毫升乙二硫酵中 。15分鐘後，添加7.5毫升三氣乙酸，並攆拌懸浮液1.5 小時。之後，濾出樹脂，並以80%強度之三氟乙酸徹底 洗滌。真空蒸發濾液，並以30毫升水吸收。添加NaHC03 調至PH6-7,以正戊醇（4x30毫升）振盪荦取胜肽。蒸發 正戊醇相，並以10毫升甲醇/H2 0(9:1)吸收，並添加 0.5克1(2(：03。攪拌混合物30分鐘，過濾，並濃縮濾液。 以100毫升正戊醇吸收殘質，以水洗滌有機相。有機相 經MgS04脱水，並過濾，蒸發。得到740毫克粗産物。 於Sephadex G25(1M乙酸）上及於矽醪上進行層析，産生 185毫克純標題化合物。 FAB-MS1531(M + H+ )0 -1 9 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）