TW202446787A

TW202446787A - 膠原蛋白生產程序

Info

Publication number: TW202446787A
Application number: TW113118437A
Authority: TW
Inventors: 羅漢華茲; 杜銀明; 丹尼爾杜彭
Original assignee: 美商Ｈｔｌ生物科技創新股份有限公司
Priority date: 2023-05-17
Filing date: 2024-05-17
Publication date: 2024-12-01
Also published as: WO2024238910A1

Abstract

本揭露係關於包含重組膠原蛋白及疏水性胺基酸的粉末組成物，及用於製備此類組成物的程序。亦提供使用本文所述之組成物的方法。

Description

膠原蛋白生產程序

電子提交序列表之參照

與本申請案一同提出之ASCII文字檔案（名稱：4431_102PC01_SequenceListing_ST26；大小：2,868位元組；及建立日期：2024年5月15日）中之電子提交序列表的內容完整地以引用方式併入本文中。

本發明係有關於膠原蛋白生產程序。

膠原蛋白係人體中最重要的蛋白質之一，且存在於諸如軟骨、骨骼、肌腱、韌帶、及皮膚等結締組織中，並且其係人類細胞的細胞外基質中的主要蛋白質。動物源膠原蛋白在醫療及化妝品領域中經常作為活性成分使用，例如作為組織移植及局部皮膚處理的組分。

在本領域中，噴霧乾燥通常用以將有價值的活性成分之穩定性及化學完整性延長，因為乾燥配方相對於它們的溶劑化對應物一般會表現改善的穩定性、延長的保質期、及較低的運輸成本。

雖然噴霧乾燥提供諸多優點，但此項通用技術並非總是能夠輕鬆適應每種活性成分或配方。例如，由於噴霧乾燥程序導致粉末中的黏附性及水分含量，粒子性質（諸如粒徑及粒子形態）及製程良率經常是難以掌控的。因此，仍需要保持高良率及產物完整性的用於製備某些噴霧乾燥活性成分（諸如膠原蛋白）之程序。同樣地，需要具有合適流動特性及外觀的噴霧乾燥膠原蛋白產物。

本揭露提供一種噴霧乾燥組成物，其包含：重組膠原蛋白片段，其與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性；及疏水性胺基酸，其中該組成物係一粉末。在一些實施例中，該重組膠原蛋白片段未羥基化(unhydroxylated)。在一些實施例中，該重組膠原蛋白片段經羥基化(hydroxylated)。

在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該組成物中。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。

在一些實施例中，該疏水性胺基酸係白胺酸。在一些實施例中，該白胺酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該組成物中。在一些實施例中，該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。在一些實施例中，該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。在一些實施例中，該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。在一些實施例中，該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。

在一些實施例中，該疏水性胺基酸係選自由異白胺酸、白胺酸、纈胺酸、及苯丙胺酸所組成之群組。在一些實施例中，該疏水性胺基酸係異白胺酸。在一些實施例中，該疏水性胺基酸係纈胺酸。在一些實施例中，該疏水性胺基酸係苯丙胺酸。

在一些實施例中，該噴霧乾燥粉末在室溫下係水溶性的。在一些實施例中，該噴霧乾燥粉末進一步包含助流劑。在一些實施例中，該噴霧乾燥粉末不包含助流劑。在一些實施例中，該組成物進一步包含防腐劑。在一些實施例中，該防腐劑係山梨酸鉀。在一些實施例中，該防腐劑係苯甲酸鈉。在一些實施例中，該組成物包含pH調節劑。在一些實施例中，該pH調節劑係檸檬酸。

在一些實施例中，該粉末具有約30°至約60°的一靜止角。在一些實施例中，該粉末具有約48.5°的一靜止角。在一些實施例中，該粉末具有約50°的一靜止角。

在一些實施例中，本揭露提供一種用於製備如請求項1之噴霧乾燥組成物的程序，其包含：a)製備一水性混合物以形成一進料溶液，該水性混合物包含與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性的該重組膠原蛋白片段、該疏水性胺基酸、及去離子水；b)透過一過濾器來過濾該進料溶液，以形成一經過濾溶液；及c)對該經過濾溶液進行噴霧乾燥，以形成該粉末。在一些實施例中，該程序進一步包含巴氏殺菌。

在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該噴霧乾燥組成物中。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。在一些實施例中，該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。

本揭露之額外實施例及優點將部分闡述於以下實施方式中，並將自實施方式中產生，或可藉由本揭露之實踐得知。

應理解的是，前述發明內容及以下實施方式兩者僅係例示性及解釋性的，且不限制申請專利範圍之範疇。

本文所提供之標題並非本揭露之各種實施例的限制，其可藉由參考整個說明書定義。亦應理解的是，本文所使用之用語僅用於描述特定實施例之目的，而非意欲進行限制，因為本揭露之範疇將僅受隨附申請專利範圍限制。定義

為了方便起見，以下提供說明書、實例、及隨附申請專利範圍中使用之一些用語及片語的含義。除非另有說明或從上下文中隱含，否則以下用語及片語包括以下提供之含義。提供此等定義以幫助描述特定實施例，且並非意欲限制所請求保護之技術，因為技術之範疇僅受申請專利範圍限制。除非另有定義，否則本文所使用之所有技術及科學用語具有與所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的相同含義。若在所屬技術領域中用語之用法與其在本文所提供之定義之間有明顯差異，則以說明書內提供之定義為準。

用以描述一元件或組分的不定冠詞「一(a/an)」意指存在此等元件或組分中的一個或至少一個。儘管在習知上採用此等冠詞以表示經修飾的名詞是單數名詞，但如本文中所使用，冠詞「一」亦包括複數，除非在特定情況下另有說明。類似地，如本文中所使用，定冠詞「該(the)」亦表示經修飾的名詞可係單數或複數，同樣地除非在特定情況下另有說明。

如本文中所使用，用語「約(about)」意指在由所屬技術領域中具有通常知識者判定之特定值之可接受誤差範圍內，此部分取決於該值之測量或判定方式，亦即測量系統之限制。例如，根據所屬技術領域之實務，「約」可意指在3個或多於3個標準偏差內。替代地，「約」可意指給定值之多達10%的範圍（例如多達10%、多達5%、或多達1%）。

數字或一系列數字前之用語「至少(at least)」係理解為包括與用語「至少」相關聯之數字、及從上下文中可清楚看出之邏輯上可包括的所有後續數字或整數。當至少出現在一系列數字或範圍之前時，應理解的是，「至少」可修飾該系列或範圍中之數字之各者。例如，「至少3 (at least 3)」意指至少3、至少4、至少5等。當至少出現在方法步驟中之組件之前時，則該組件係包括在該步驟中，而額外組件係可選的。

如本文中所使用，用語「包含(comprises/comprising)」、「具有(having)」、「包括(including)」、「含有(containing)」、及類似者係開放式用語，意指「包括但不限於(including, but not limited to)」。在本文所揭示之給定實施例「包含」某些元件之情況下，應理解的是，本揭露亦具體設想並揭示「基本上由該等元件所組成」及「由該等元件所組成」之實施例。

如本文中所使用，用語「基本上由……所組成(consists essentially of/consisting essentially of)」及類似者將被解讀為半封閉式用語，意指不包括實質上影響實施例之基本及新穎特徵的其他成分。

如本文中所使用，用語「由……所組成(consists of/consisting of)」及類似者將被解讀為封閉式用語，使得「由一組特定元件所組成」之實施例排除該實施例中未指定之任何元件、步驟、或成分。

如本文中所使用，用語「測量(measure)」及其變體可涵蓋諸如「判定(determine)」、「計算(calculate)」、及其變體等相應用語的含義。

當應用於膠原蛋白及膠原蛋白片段時，用語「經修飾 (modified)」係指包含與生物活性分子之胺基酸序列至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一或相似之胺基酸序列的膠原蛋白片段。在一些實施例中，經修飾的膠原蛋白片段包含與天然或先前經工程改造序列之胺基酸序列至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一之胺基酸序列。經修飾的序列可包含對天然或先前經工程改造分子的胺基酸序列的添加、刪除、取代、或其組合。例如，與天然膠原蛋白序列相比，經修飾的膠原蛋白片段可併入或刪除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、或更多的胺基酸殘基。可做此類選擇以修改重組膠原蛋白的鬆散度或緊密度。膠原蛋白的羥基化程度相關於膠原蛋白三螺旋的鬆散度或緊密度。經修飾的膠原蛋白片段亦可包括對多肽的化學修飾，諸如半胱胺酸殘基、或羥基化或糖基化的殘基之間的交聯。如本文中所使用，用語「變體(variant)」及「序列變體(sequence variant)」係指與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一之多肽序列。

當應用於載體、賦形劑、或穩定劑（其等可用於本文所述之組成物中）時，用語「醫藥上可接受 (pharmaceutically acceptable)」及「化妝品上可接受(cosmetically acceptable)」係指在所採用的劑量及濃度下對接受者無毒的載體、賦形劑、或穩定劑。

如本文中所使用，「溶解度(solubility)」係指在指定溫度及pH下，溶解於給定體積的溶劑中的物質的量，以例如形成飽和溶液。溶解度可例如使用搖瓶溶解度法（ASTM: E 1148-02，用於水溶解度測量的標準測試方法，標準手冊第11.05卷）來判定。溶解度可在任何pH下判定。溶解度可在20℃與40℃之間的任何溫度下測試。例如，溶解度可在大約pH 7.0至7.4及大約37℃下判定。 A.膠原蛋白

用語「膠原蛋白(collagen)」係指已知的膠原蛋白類型中之任一者，包括膠原蛋白I型至XXVIII型，以及任何其他的膠原蛋白，無論是天然的、合成的、半合成的、或是重組的。用語「膠原蛋白」包括膠原蛋白、膠原蛋白片段、類膠原蛋白、三螺旋膠原蛋白、α鏈、單體、明膠、三聚體及其組合。如本文中所使用，膠原蛋白係至少28種不同膠原蛋白類型之家族的通用名稱。

膠原蛋白具有獨特的胺基酸組成物；其胺基酸殘基中之幾乎三分之一係甘胺酸；另外15%至30%係脯胺酸殘基或4-羥脯胺酸(hydroxyproline, Hyp)殘基。羥離胺酸亦係膠原蛋白的特徵。此等羥基化胺基酸殘基（其係作為轉譯後修飾的結果而形成）透過涉及橋接水分子的分子內氫鍵來賦予膠原蛋白穩定性。在組織(tissue)中的膠原蛋白含量可藉由測量其羥脯胺酸含量來判定。羥脯胺酸含量可藉由本領域中已知的方法來測量，例如藉由液相層析質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)。膠原蛋白含有Gly-X-Y序列的許多重複迭代，其中X經常係脯胺酸，且Y經常係4-羥脯胺酸。

含有此類胺基酸殘基取代的膠原蛋白變體可藉由多種已知的方法來產生，包括基因工程改造技術及體外肽合成。膠原蛋白變體亦可藉由離胺酸羥化酶及/或脯胺酸羥化酶的表現變化從而藉由改變羥離胺酸及/或羥脯胺酸在給定的分子中的量來產生，其中羥化酶基因（重組的或以其他方式產生的）表現於宿主細胞中，以用於重組膠原蛋白或其衍生物的表現。羥脯胺酸含量可藉由本領域中已知的方法來測量，例如藉由液相層析質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)。

任何類型的膠原蛋白，包括膠原蛋白I型至XXVIII型，皆適合用於本文所述之組成物及程序。 B.重組膠原蛋白及重組膠原蛋白片段

如本文中所使用，用語「重組膠原蛋白(recombinant collagen)」係指至少28種不同的天然存在的膠原蛋白類型之家族，其包括但不限於使用重組技術所製備的膠原蛋白I型至XXVIII型。

在一些實施例中，本文所述之重組膠原蛋白可係重組膠原蛋白片段。重組膠原蛋白片段可係能夠形成原膠原蛋白(tropocollagen)（三聚體膠原蛋白(trimeric collagen)）的天然膠原蛋白分子的完整胺基酸序列的片段，或者該片段可係經修飾的膠原蛋白分子或截斷的膠原蛋白分子的片段，其具有與天然膠原蛋白胺基酸序列（或其原纖維形成區域、或實質上包含[Gly-X-Y]n的區段）至少70、80、90、95、96、97、98、或99%同一或相似之胺基酸序列。在特定實施例中，用語「重組膠原蛋白」係指任何已知類型的重組膠原蛋白，包括在PCT/US2022/027016中所描述者，其全文以引用方式併入本文中。

在一些實施例中，本文所述之膠原蛋白片段可具有根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列。在一些情況下，本文所述之膠原蛋白片段可具有根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列。在一些實施例中，膠原蛋白片段可與SEQ ID NO: 1具有至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約9%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或100%之序列同一性或相似性。

SEQ ID NO: 1的胺基酸序列係：DVKSGVAVGGLAGYPGPAGPPGPPGPPGTSGHPGSPGSPGYQGPPGEPGQAGPSGPPGPPGAIGPSGPAGKDGESGRPGRPGERGLPGPPGIKGPAGIPGFPGMKGHRGFDGRNGEKGETGAPGLKGENGLPGENGAPGPMGPRGAPGERGRPGLPGAAGARGNDGARGSDGQPGPPGPPGTAGFPGSPGAKGEVGPAGSPGSNGAPGQRGEPGPQGHAGAQGPPGPPGINGSPGGKGEMGPAGIPGAPGLMGARGPPGPAGANGAPGLRGGAGEPGKNGAKGEPGPRGERGEAGIPGVPGAKGEDGKDGSPGEPGANGLPGAAGERGAPGFRGPAGPNGIPGEKGPAGERGAPGPAGPRGAAGEPGRDGVPGGPGMRGMPGSPGGPGSDGKPGPPGSQGESGRPGPPGPSGPRGQPGVMGFPGPKGNDGAPGKNGERGGPGGPGPQGPPGKNGETGPQGPPGPTGPGGDKGDTGPPGPQGLQGLPGTGGPPGENGKPGEPGPKGDAGAPGAPGGKGDAGAPGERGPPAIAGIGGEKAGGFAPYYG。

在一些實施例中，本文所述之膠原蛋白片段可具有約350個胺基酸至約600個胺基酸的胺基酸鏈長，且可與SEQ ID NO: 1具有至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約9%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%、或100%之序列同一性或相似性。

在一些實施例中，重組膠原蛋白可包含膠原蛋白片段的水解產物，其中經水解的片段可具有的序列可係SEQ ID NO: 1的一部分。在一些實施例中，水解產物可與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性。在一些實施例中，重組膠原蛋白可包含重組膠原蛋白片段的序列變體，其具有約50 kDa的分子量，且與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性。例如，此類片段及變體的實例係揭示於PCT/US2022/027016中，且如PCT/US2022/027016中所揭示之與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有約85%之序列同一性的各種此類水解產物，及與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性的各種此類序列變體，皆明確地以引用方式併入本文中。

在一些實施例中，在膠原蛋白或膠原蛋白片段中存在的離胺酸、脯胺酸、或離胺酸及脯胺酸的殘基可羥基化。在一些實施例中，在膠原蛋白片段中存在的離胺酸、脯胺酸、或離胺酸及脯胺酸的殘基未羥基化。在一些實施例中，在重組膠原蛋白片段中，離胺酸、脯胺酸、或離胺酸及脯胺酸的殘基中之約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、17%、約18%、約19%、或約20%、（或任何中間值或子範圍）可羥基化。 C.粉末組成物及噴霧乾燥的益處

本揭露提供一種噴霧乾燥粉末組成物，其包含膠原蛋白（諸如SEQ ID NO: 1的膠原蛋白）、或其片段或變體、及賦形劑（諸如疏水性胺基酸）。在一些實施例中，膠原蛋白可與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性的膠原蛋白片段。在一些實施例中，膠原蛋白片段可未羥基化。在一些實施例中，膠原蛋白片段可羥基化。

在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白可以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的比存在。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約5至約95 (wt/wt)。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約10至約90 (wt/wt)。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約15至約85 (wt/wt)。在其他實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約20至約80 (wt/wt)。在一些實施例中，膠原蛋白可係與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性的重組膠原蛋白片段，且疏水性胺基酸可係白胺酸。在一些實施例中，膠原蛋白可係SEQ ID NO: 1，且疏水性胺基酸可係白胺酸。在一些實施例中，白胺酸與重組膠原蛋白片段的比可係15:85 (wt/wt)。在一些實施例中，白胺酸與重組膠原蛋白片段的比可係20:80 (wt/wt)。

有利且令人驚訝的是，使用疏水性胺基酸以製備本文所述之噴霧乾燥粉末消除使用額外賦形劑以管控本文所述之噴霧乾燥粉末之流動特性的需要。在一些實施例中，疏水性胺基酸可選自由異白胺酸、白胺酸、纈胺酸、及苯丙胺酸所組成之群組。在一些實施例中，疏水性胺基酸可係異白胺酸。在一些實施例中，疏水性胺基酸可係白胺酸。在一些實施例中，疏水性胺基酸可係纈胺酸。在一些實施例中，疏水性胺基酸可係苯丙胺酸。

在一些實施例中，噴霧乾燥粉末組成物在室溫下可係水溶性的。

在一些實施例中，噴霧乾燥粉末組成物可進一步包含助流劑，且尤其是水溶性助流劑。在一些實施例中，本文所述之組成物不包含助流劑，且尤其是不包含非水溶性助流劑。在一些實施例中，本文所述之組成物不包含燻矽(fumed silica)。在一些實施例中，本文所述之組成物不包含沉澱矽(precipitated silica)。

在一些實施例中，噴霧乾燥組成物可進一步包含防腐劑。在一些實施例中，防腐劑可係山梨酸鉀。在一些實施例中，防腐劑可係苯甲酸鈉。在一些實施例中，噴霧乾燥組成物可包含pH調節劑，諸如但不限於檸檬酸。防腐劑及pH調節劑可單獨或一起包括在組成物中，各自的量足以（單獨或共同）提供抗微生物活性，使得組成物可儲存一段長時間，亦即1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、或更長。在其他實施例中，噴霧乾燥組成物可不含或實質上不含防腐劑及pH調節劑中的任一者或兩者，但由於在包裝之前或期間足以滅菌或以其他方式殺死組成物中存在的任何微生物的一或多項處理，故可具有上述的保質期（亦即1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、或更長）。在一些實施例中，處理可包含熱處理。在一些實施例中，處理可包含輻射處理。在一些實施例中，處理可包含巴氏殺菌。在一些實施例中，處理可包含以上所提供的任何處理的組合。

在一些實施例中，粉末可具有約30°至約60°的靜止角測量值。在一些實施例中，粉末可具有48.5°的靜止角測量值。在一些實施例中，粉末可具有50°的靜止角測量值。靜止角(angle of repose)係相對於水平面最陡的下降角或傾斜角的測量值，在該水平面上材料可堆疊而不會突然塌落。 D.用於製備本文所揭示之組成物的程序

本揭露提供一種用於製備本文所述之噴霧乾燥組成物的程序，其包含：a)製備一水性混合物以形成一進料溶液，該水性混合物包含i)重組膠原蛋白片段，其與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性；ii)疏水性胺基酸；及iii)去離子水；b)透過一過濾器來過濾該進料溶液，以形成一經過濾溶液；及c)對該經過濾溶液進行噴霧乾燥，以形成該粉末。在一些實施例中，該程序進一步包含巴氏殺菌。在一些實施例中，本揭露提供一種用於製備本文所述之噴霧乾燥組成物的程序，其包含：a)製備一水性混合物以形成一進料溶液，該水性混合物包含i)重組膠原蛋白片段，其與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性；ii)疏水性胺基酸；及iii)去離子水；b)過濾進料溶液，以形成經過濾溶液；c)對該經過濾溶液進行巴氏殺菌；及d)對該經巴氏殺菌的溶液進行噴霧乾燥，以形成該粉末。

在一些實施例中，一種噴霧乾燥組成物可藉由以下來進行巴氏殺菌：a)將一進料溶液轉移至一夾套槽中；b)攪動該溶液；c)將該夾套槽中的該溶液加熱至適合對該溶液進行巴氏殺菌的溫度；d)使溶液保持在該溫度下足以對該溶液進行巴氏滅菌的一段時間；及e)冷卻該溶液。在一些實施例中，可將該溶液加熱至約60℃至約95℃的溫度。在一些實施例中，可將該溶液加熱約5分鐘至約60分鐘的時間。在某些實施例中，可在約130℃下對該經過濾溶液進行巴氏殺菌約15秒。

在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白可以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的比存在。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約5至約95 (wt/wt)。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約10至約90 (wt/wt)。在一些實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約15至約85 (wt/wt)。在其他實施例中，疏水性胺基酸與膠原蛋白的比可係約20至約80 (wt/wt)。

在一些實施例中，篩可具有約0.01 mm至約1 mm的篩網大小。在一些實施例中，篩可具有約0.5 mm的篩網大小。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約0.1 mm至約1.5 mm的噴嘴直徑。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約0.7 mm的噴嘴直徑。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約180℃至約240℃的入口溫度。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有220℃的入口溫度。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約80℃至約160℃的出口溫度。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約140℃的出口溫度。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約100 m ³/hr至約6000 m ³/hr的乾燥空氣流速。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約346 m ³/hr的乾燥空氣流速。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約0.5 kg/hr至約500 kg/hr的液體進料速率。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約2 kg/hr的液體進料速率。

在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有約0.1巴至約100巴的霧化空氣壓力。在一些實施例中，噴霧乾燥設備可具有1.9巴的霧化空氣壓力。

在一些實施例中，程序可進一步包含抗微生物處理。在一些實施例中，抗微生物處理可包含乾熱處理。

在一些實施例中，本文所述之組成物可藉由上述程序來製備。在一些實施例中，組成物可具有約80%至約100%的噴霧乾燥產率，其中噴霧乾燥產率係計算為從噴霧乾燥回收的粉末的質量佔進料溶液之固體含量的總質量的百分比。在一些實施例中，組成物可具有醫藥上可接受、及化妝品上可接受的流動特性。 E.使用方法

本文所揭示之粉末組成物可有益地調配，以用於包括但不限於以下的用途：藥物組成物，其經調配以用於任何投予途徑，包括鼻內、口服（例如錠劑或膠囊）、腸胃外、鞘內、腦室內、肺、皮下、或室內。包括本文所揭示之粉末組成物的注射劑可以習知形式來製備為液體溶液或懸浮液、適合於在注射之前在液體中溶解或懸浮的固體形式、或乳液。

用於腸胃外投予的製劑包括可隨時在使用之前與溶劑組合的無菌乾燥可溶性粉末產品，其包括皮下注射錠劑、可隨時用於注射的無菌懸浮液、可隨時在正要使用之前與載體組合的無菌乾燥不溶性產品、及無菌乳液。

包含本文所述之粉末組成物的局部混合物可經製備以用於局部及全身投予。所得的混合物可係溶液、懸浮液、乳液或類似者，且可調配成乳膏、凝膠、軟膏、乳液、溶液、酏劑、洗劑、懸浮液、酊劑、糊劑、泡沫、氣霧劑、灌洗劑、噴霧劑、栓劑、繃帶、皮膚貼片、或適合局部投予的任何其他配方。

本文所述之組成物亦可調配為氣霧劑，以用於局部施用，諸如藉由吸入。實例

以下所呈現之實例僅係出於說明之目的而提供，且本文所述之實施例不應以任何方式解讀為限於此等實例。相反，實施例應解讀為涵蓋由於本文所提供之教示而變得明顯的任何及所有改變。 實例：重組膠原蛋白與白胺酸的噴霧乾燥

SEQ ID NO: 1的胺基酸序列係使用各種數量的白胺酸來調配。在以下的實施例中，片語「進料溶液(feed solution)」係指重組膠原蛋白與白胺酸的水溶液。進料溶液的組成物係以各溶質的重量百分比來表示。例如，包含10 wt% SEQ ID NO. 1的2000克進料溶液具有200克SEQ ID NO. 1作為溶質。

由Hemraj Engineering（孟買）所製造的「Lab2」噴霧乾燥機經用於2個收集點組態中，其中粉末係在旋風集塵器(cyclone)及袋式集塵器(baghouse)中沉降。雙流體的共流噴嘴用以霧化液體進料。以下報告的產率僅考慮從旋風集塵器所收集到的產物。實例 1 ： SEQ ID NO. 1 之無賦形劑噴霧乾燥

使用表1中所示之操作參數來對包含11.25 wt% SEQ ID NO: 1的4160克水性進料溶液進行噴霧乾燥。表 1

參數	設定
噴嘴直徑	0.7 mm
入口溫度	220℃
出口溫度	140℃
乾燥空氣流速	346 m ³/hr
液體進料速率	2 kg/hr
霧化空氣壓力	1.9巴

從旋風集塵器收集到噴霧乾燥粉末（335克），以質量計對應於76%的產率。粉末有黏性及吸濕性。粉末具有的靜止角測量值係60°，指示流動特性「非常差」。實例 2 ：使用白胺酸： SEQ ID NO: 1 之比係 20:80 的噴霧乾燥

將包含11.38 wt% SEQ ID NO: 1的2201克水溶液添加至585克去離子水。將白胺酸（62.6克）添加至此混合物，且隨後將所得的混合物透過0.5 mm篩來過濾。所得的溶液之固體含量係10.2%。隨後使用表1中所示之操作參數來對溶液（2273克）進行噴霧乾燥。

從旋風集塵器收集到總共210克粉末，以質量計對應於91%的產率。粉末具有的靜止角測量值係48.5°，指示相對於不含賦形劑的SEQ ID NO: 1粉末而言流動特性有改善。粉末亦具有可接受的流動特性。

藉由粒徑篩析層析法(Size Exclusion Chromatography, SEC)分析所得的粉末，且結果如圖1A中所示。對於SEC分析，1份之粉末溶解在99份水中，以形成1%的溶液。噴霧乾燥產物的SEC跡線與噴霧乾燥進料的SEC跡線重疊。在11.5分鐘滯留時間處的噴霧乾燥產物小峰值係由白胺酸所導致。在噴霧乾燥產物與噴霧乾燥進料溶液的峰值輪廓之間的相似性指示在噴霧乾燥期間產品完整性變化最小。峰值高度的差異係由於樣品濃度的差異所造成。實例 3 ：使用白胺酸 :SEQ ID NO: 1 之比係 6:94 的噴霧乾燥

將包含12.01 wt% SEQ ID NO: 1的2125克水溶液與17克白胺酸混合。隨後將所得的混合物透過0.5 mm篩過濾。經過濾溶液的固體含量係12.47%。利用表1中所示之操作參數來對經過濾溶液（2052克）進行噴霧乾燥。從旋風集塵器收集到總共229克粉末，以質量計對應於89%的產率。粉末具有的靜止角測量值係58.5°，指示流動特性「非常差」。實例 4 ：使用白胺酸： SEQ ID NO: 1 之比係 10:90 的噴霧乾燥

將包含12.01 wt% SEQ ID NO: 1的2260克水溶液與32克白胺酸混合。隨後將所得的混合物透過0.5 mm篩過濾。經過濾溶液的固體含量係13.06%。使用表1中所示之操作參數來對經過濾溶液（2155克）進行噴霧乾燥。從旋風集塵器收集到總共241.4克粉末，以質量計對應於86%的產率。粉末具有的靜止角測量值係57°，這指示流動特性「非常差」。實例 5 ：使用白胺酸： SEQ ID NO: 1 之比係 15:85 的噴霧乾燥

將包含11.14 wt% SEQ ID NO: 1的2240克水溶液添加至205克去離子水。將白胺酸（43.9克）添加至此混合物，且隨後將所得的混合物透過0.5 mm篩來過濾。經過濾溶液的固體含量係11.73%。使用表1中所示之操作參數來對經過濾溶液（2225克）進行噴霧乾燥。從旋風集塵器收集到總共231克粉末，以質量計對應於88.5%的產率。粉末具有的靜止角測量值係50°，指示相對於不含賦形劑的SEQ ID NO: 1粉末而言黏性較小，且具有可接受的流動特性。

藉由粒徑篩析層析法(Size Exclusion Chromatography, SEC)分析所得的粉末，且結果如圖1B中所示。對於SEC分析，1份之粉末溶解在99份水中，以形成1%的溶液。噴霧乾燥產物的SEC跡線與噴霧乾燥進料的SEC跡線重疊。在11.5分鐘滯留時間處的噴霧乾燥產物小峰值係由白胺酸所導致。在噴霧乾燥產物與噴霧乾燥進料溶液的峰值輪廓之間的相似性指示在噴霧乾燥期間產品完整性變化最小。峰值高度的差異係由於樣品濃度的差異所造成。實例 6 ：使用防腐劑進行噴霧乾燥，接著進行乾熱處理

將0.35克山梨酸鉀添加至包含11.5 wt% SEQ ID NO: 1的1000克水溶液。添加6.4克10% (wt/wt)檸檬酸溶液，以將混合物的pH降低至6.0至6.1。隨後使用表1中所示之操作參數來對溶液進行噴霧乾燥。

從旋風集塵器收集到總共92克粉末，以質量計對應於79%的產率。將此粉末的一部分真空包裝在邁拉(Mylar)袋中。隨後，將袋子放置於95℃下的烤箱中90分鐘。

在熱處理之前及之後測量生物負荷量。同樣地測量不含任何防腐劑的比較例中的生物負荷量。此等結果顯示於表2中。表 2

樣本	總好氧性生菌數 (Total Aerobic Plate Count, TAPC) (cfu/g)
100% SEQ ID NO. 1	2,000
99% SEQ ID NO. 1 + 0.7%檸檬酸+ 0.3%山梨酸鉀，熱處理之前	13,000
99% SEQ ID NO. 1 + 0.7%檸檬酸+ 0.3%山梨酸鉀，熱處理之後	400

應理解的是，實施方式章節（而非發明內容及摘要章節）係意欲用於解譯申請專利範圍。發明內容章節及摘要章節可闡述由（多位）發明人設想之本發明之一或多個但非所有例示性實施例，因此並非意欲以任何方式限制本發明及隨附申請專利範圍。

無

圖1A至圖1B係粒徑篩析層析法(Size Exclusion Chromatography, SEC)之圖表，其等顯示以下的峰值輪廓：1)在噴霧乾燥之前的一組成物，其包含重組膠原蛋白片段及白胺酸（「噴霧乾燥進料溶液(spray drying feed solution)」）；及2)在噴霧乾燥之後的相同組成物（「噴霧乾燥產物(spray dried product)」）。

［圖1A］顯示白胺酸與重組膠原蛋白之比係20:80 (wt/wt)的一混合物之峰值輪廓。

［圖1B］顯示白胺酸與重組膠原蛋白之比係15:85 (wt/wt)的一混合物之峰值輪廓。

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Claims

一種噴霧乾燥組成物，其包含：重組膠原蛋白片段，其與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性；及疏水性胺基酸，其中該組成物係一粉末。
如請求項1之噴霧乾燥組成物，其中該重組膠原蛋白片段未羥基化(unhydroxylated)。
如請求項1之噴霧乾燥組成物，其中該重組膠原蛋白片段經羥基化(hydroxylated)。
如請求項1至3中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該組成物中。
如請求項4之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。
如請求項4之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。
如請求項4之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。
如請求項4之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。
如請求項1至8中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸係白胺酸。
如請求項9之噴霧乾燥組成物，其中該白胺酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該組成物中。
如請求項10之噴霧乾燥組成物，其中該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。
如請求項10之噴霧乾燥組成物，其中該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。
如請求項10之噴霧乾燥組成物，其中該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。
如請求項10之噴霧乾燥組成物，其中該白胺酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。
如請求項1至8中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸係選自由異白胺酸、白胺酸、纈胺酸、及苯丙胺酸所組成之群組。
如請求項15之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸係異白胺酸。
如請求項15之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸係纈胺酸。
如請求項15之噴霧乾燥組成物，其中該疏水性胺基酸係苯丙胺酸。
如請求項1至18中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該噴霧乾燥粉末在室溫下係水溶性的。
如請求項1至19中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該噴霧乾燥粉末進一步包含助流劑。
如請求項1至19中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該噴霧乾燥粉末不包含助流劑。
如請求項1至21中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該組成物進一步包含防腐劑。
如請求項22之噴霧乾燥組成物，其中該防腐劑係山梨酸鉀。
如請求項22之噴霧乾燥組成物，其中該防腐劑係苯甲酸鈉。
如請求項1至24中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該組成物包含pH調節劑。
如請求項25之噴霧乾燥組成物，其中該pH調節劑係檸檬酸。
如請求項1至25中任一項之噴霧乾燥組成物，其中該粉末具有約30°至約60°的一靜止角。
如請求項27之噴霧乾燥組成物，其中該粉末具有約48.5°的一靜止角。
如請求項27之噴霧乾燥組成物，其中該粉末具有約50°的一靜止角。
一種用於製備如請求項1之噴霧乾燥組成物的程序，其包含： a) 製備一水性混合物以形成一進料溶液，該水性混合物包含與SEQ ID NO: 1中所示之胺基酸序列具有至少約85%之序列同一性的該重組膠原蛋白片段、該疏水性胺基酸、及去離子水； b) 過濾，以形成一經過濾溶液；及 c) 對該經過濾溶液進行噴霧乾燥，以形成該粉末。
如請求項30之程序，其進一步包含巴氏殺菌。
如請求項30或31之程序，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段以約1至約99 (wt/wt)至約30至約70 (wt/wt)之範圍內的重量比存在於該噴霧乾燥組成物中。
如請求項30至32中任一項之程序，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約5:95。
如請求項30至32中任一項之程序，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約10:90。
如請求項30至32中任一項之程序，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約15:85。
如請求項30至32中任一項之程序，其中該疏水性胺基酸與該重組膠原蛋白片段的比係約20:80。