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TW202415382A - 脂質體藥物組合物及其製備方法和用途 - Google Patents

脂質體藥物組合物及其製備方法和用途 Download PDF

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TW202415382A
TW202415382A TW112137564A TW112137564A TW202415382A TW 202415382 A TW202415382 A TW 202415382A TW 112137564 A TW112137564 A TW 112137564A TW 112137564 A TW112137564 A TW 112137564A TW 202415382 A TW202415382 A TW 202415382A
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treprostinil
acid
aqueous phase
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TW112137564A
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姚萌
石曉晴
林一峯
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大陸商上海濟煜醫藥科技有限公司
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Abstract

本發明提供了一種脂質體及其組合物，其作為藥物載體時，通過特定載藥條件製程獲得1)高載藥量(最高載藥量不低於18%)；2)當低於最高載藥量(18%)時，包封率不低於85%。本發明還提供所述脂質體及其組合物的製備方法和作為藥物載體中的用途。由本發明所述的脂質體製備的藥物脂質體-曲前列尼爾脂質體對治療外周動脈閉塞性疾病或肺動脈高壓具有較好的療效。

Description

脂質體藥物組合物及其製備方法和用途
本發明主張享有： 於2022年9月30日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202211216387.5，名稱為「一種脂質體、藥物組合物及其製備方法和應用」的先申請案的優先權； 於2023年9月22日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202311236761.2，名稱為「一種脂質體藥物組合物及其應用」的先申請案的優先權； 於2023年9月26日向中國國家知識產權局提交的，專利申請號為202311260280.5，名稱為「一種脂質體藥物組合物及其製備方法和應用」的先申請案的優先權； 所述先申請案的全文通過引用的方式結合於本發明中。
本發明屬於藥物領域，具體涉及一種脂質體藥物組合物及其製備方法和用途。
脂質體是藉由包含內部水性介質的脂質雙層形成的囊泡。脂質體已經用作各種治療劑的載體，以提供改善的遞送特性，例如增強藥物在血液內的迴圈時間、減少細胞毒性、持續釋放藥物以及將特定藥物遞送到選定的組織。當利用脂質體進行治療藥物的遞送時，需要較高的藥物包封率及藥含量以降低潛在的磷脂輔料毒性。
US8932627B2及US20190022004A1前案技術，使用醋酸鹽或碳酸氫鹽將藥物以分子形態負載於脂質體中，藥物以離子形態貯存在內水相中，並通過調控藥物的釋放速率來治療呼吸系統疾病。然而，使用醋酸鹽或碳酸氫鹽的處方負載藥物獲得的藥物脂質體載藥量有限。有研究提出在脂質體製劑中使用碳酸氫鹽會導致氣體堆積，其會破壞和使脂質體不穩定，並且引起過早的藥物釋放，由於其對脂質體的破壞性和不穩定作用，而建議應避免以碳酸氫鹽作為裝載劑。
近年來，許多研究者通過遠端裝載技術(例如，pH梯度法或者硫酸銨梯度法)將弱鹼性藥物有效裝載入脂質體內水相，並提高其藥物的包封率。但弱酸性藥物脂質體的研究相對較少。弱酸性藥物脂質體製劑的開發仍然存在許多未解決的問題，例如弱酸性藥物的裝載量不高或包封率不佳等，本發明的技術進一步提高了藥物裝載量，以期在臨床應用中能夠提高患者順應性和治療效果。
為改善上述技術問題，本發明藉由如下技術方案實現：
本發明提供一種脂質體藥物組合物，包括弱酸性藥物和脂質體；所述脂質體為如下中的一種： (1)所述脂質體包括磷脂和內水相；或 (2)所述脂質體包括磷脂、內水相和外水相； 其中，所述內水相包括葡甲胺與弱酸； 所述外水相使脂質體懸浮。
根據本發明的實施方案，所述弱酸性藥物包裹在脂質體的內水相中，包裹了弱酸性藥物的脂質體懸浮在外水相中。
根據本發明的實施方案，所述弱酸性藥物的pKa在2~7之間。
根據本發明的實施方案，所述弱酸性藥物的載藥量不低於18%，例如為18%至40%，還可以為19%-30%，或者20-25%，如20.5%、21%、21.5%、22%、22.5%、23%、23.3%、23.5%或35%。
根據本發明的實施方案，所述藥物脂質體的包封率不低於85%，較佳不低於90%。根據本發明的實施方案，當所述弱酸性藥物的載藥量低於18%時，較佳藥物脂質體的包封率不低於85%，較佳不低於90%。更較佳地，所述藥物脂質體的載藥量不低於18%，且所述藥物脂質體的包封率不低於85%，較佳不低於90%。
根據本發明的實施方案，所述弱酸性藥物可以選自：前列腺素類、解熱鎮痛類、喹啉羧酸抗菌類、干擾素基因刺激因子(STING)受體中的至少一種藥物； 根據本發明的實施方案，所述前列腺素類藥物如曲前列尼爾、貝前列素、伊洛前列素、卡前列素、利馬前列素、依前列醇、前列地爾、烏諾前列酮，或它們的衍生物(如藥學上可以接受的鹽、酯或前藥)；所述解熱鎮痛類藥物如阿司匹林、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸鈉，或它們的衍生物(如藥學上可以接受的鹽、酯或前藥)；所述喹啉羧酸類抗菌藥物如萘啶酸、吡咯嘧酸、氟喹啉酸、西他沙星、環丙沙星、依諾沙星，或它們的衍生物(如藥學上可以接受的鹽、酯或前藥)；所述STING藥物如MSA-2、STING agonist-7、Vadimezan，或它們的衍生物(如藥學上可以接受的鹽、酯或前藥)。
根據本發明的實施方案，所述內水相的pH為4.0~10.5，例如4.5~10.0、6.5~10.5，較佳為4.97~9.52；
根據本發明的實施方案，所述內水相的pH為4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5，較佳為8.5。
根據本發明的實施方案，所述內水相中葡甲胺提供了內水相的陽離子部分，而所述弱酸提供了內水相中的陰離子部分。
根據本發明的實施方案，所述弱酸選自「羧酸」，例如選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸、乳酸或其組合。較佳為甲酸、乙酸、丙酸或其組合。
與現有技術公開的內容不同，本發明的實施方案中所述內水相不含碳酸鹽或碳酸氫鹽，而是通過葡甲胺和弱酸共同實現內水相體系。
根據本發明的實施方案，所述葡甲胺在內水相中的濃度為0.1~0.8 M，例如0.2~0.6 M，較佳為0.3~0.4 M，如0.3 M、0.35 M、0.4 M；
根據本發明的實施方案，所述弱酸在內水相中的濃度為0.1~0.8 M，例如0.2~0.6 M，如0.2 M、0.211 M、0.268 M、0.286 M、0.3 M、0.35 M、0.40 M、0.5 M、0.6 M；
根據本發明的實施方案，所述葡甲胺與弱酸為葡甲胺與乙酸；較佳地，所述葡甲胺與乙酸在內水相中的濃度為0.30~0.40 M。
根據本發明的實施方案，所述磷脂具有雙層脂質結構，所述雙層脂質由氫化大豆卵磷脂(HSPC)、膽固醇(CHOL)和二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)構成，莫耳比為3:(1-3):(0.025-0.225)，例如3:(2-3):(0.025-0.075)、3:(1.5-2.5):(0.025-0.075)。
根據本發明的實施方案，所述雙層脂質由氫化大豆卵磷脂(HSPC)、膽固醇(CHOL)和二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)構成，莫耳比為3:2:(0.025-0.225)，例如3:2:(0.025-0.15)，較佳為3:2:(0.025-0.075)。
根據本發明的實施方案，所述磷脂在脂質體組合物中的濃度為1~100 mg/mL，例如1~50 mg/mL、1~20 mg/mL，而在本發明的脂質體藥物組合物的製備過程中，磷脂的使用濃度還例如1~15 mg/mL、1.2~5.0 mg/mL，較佳為1.3~4.5 mg/mL、1.4~4.18 mg/mL。
根據本發明的實施方案，所述脂質體的粒徑為50~500 nm，例如100~200 nm，較佳為100~150 nm、120~180 nm、130~160 nm、140~190 nm。
根據本發明的實施方案，所述外水相為pH為4.5~6.5的緩衝液。
根據本發明的實施方案，實現外水相相應pH值的緩衝液為本領域公知的，並無特別限定。本領域常用的緩衝液選自HEPES、氯化鈉、蔗糖、枸櫞酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液中的一種或幾種，根據本發明的較佳實施方案，所述緩衝液可以選自枸櫞酸鹽緩衝液；所述緩衝液的濃度為0.05 M~0.25 M，例如為0.08M~0.2 M，較佳為0.09~0.12 M。
根據本發明的實施方案，所述脂質體具有內水相pH高，外水相pH低的pH梯度特性，其中外水相的pH值高於弱酸藥物的pKa。
本發明還提供一種基於所述脂質體藥物組合物的曲前列尼爾脂質體，其中，所述脂質體藥物組合物中的弱酸性藥物為曲前列尼爾或其衍生物，所述曲前列尼爾或其衍生物包裹於所述脂質體的內水相，所述內水相中包含葡甲胺；
根據本發明的實施方案，所述曲前列尼爾的衍生物選自曲前列尼爾的水合物、溶劑合物或絡合物；或者選自曲前列尼爾的藥學上可接受的鹽、酯或其前藥等，如曲前列尼爾鈉鹽、曲前列尼爾鉀鹽、曲前列尼爾二乙醇胺鹽、曲前列尼爾甲酯、曲前列尼爾乙酯、曲前列尼爾的富馬醯基二酮呱啶前藥。
根據本發明的實施方案，所述曲前列尼爾或其衍生物的載藥量不低於18%，當低於最高載藥量(18%)時，包封率不低於85%，較佳不低於90%。
所述的曲前列尼爾分子結構如下：
本發明還提供所述曲前列尼爾或其衍生物的脂質體在製備藥物中的用途。
根據本發明的實施方案，所述藥物為治療肺動脈高壓、肺高血壓、肺纖維化、間質性肺疾病、慢性阻塞性肺病、哮喘、缺血性疾病、心臟衰竭、動脈硬化、術後抗凝血、視網膜中央靜脈阻塞、血栓性微血管病、周圍性血管疾病、心肺移植等疾病的藥物。
根據本發明的實施方案，所述藥物為治療外周動脈閉塞性疾病或肺動脈高壓藥物。
本發明還提供所述曲前列尼爾或其衍生物的脂質體在治療外周動脈閉塞性疾病或肺動脈高壓的方法，包括給與患者治療有效量的曲前列尼爾或其衍生物的脂質體。本發明還提供用於治療外周動脈閉塞性疾病或肺動脈高壓的曲前列尼爾或其衍生物的脂質體。
本發明還提供了一種脂質體藥物組合物的製備方法，該方法包括，將脂質體負載至少一種弱酸性藥物，較佳地，所述弱酸性藥物的載藥量不低於18%。
根據本發明的實施方案，所述脂質體的製備方法，包括以下步驟： (1)油相製備：按重量份，稱取氫化大豆卵磷脂、二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000和膽固醇溶於乙醇得到油相； (2)水相製備：將葡甲胺溶於水後，加入乙酸調節pH，得到水相，即內水相； (3)乳化-擠出：將所述油相和水相混合後得到初乳，進一步將初乳經過聚碳酸酯膜擠出，得到所述脂質體。
根據本發明的實施方案，所述氫化大豆卵磷脂(HSPC)、膽固醇(CHOL)和二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)的莫耳比為3:2:(0.025-0.225)，例如3:2:(0.025-0.15)，較佳為3:2:(0.025-0.075)。
根據本發明的實施方案，所述脂質體的製備方法還包括超濾的步驟：將步驟(3)得到的脂質體用枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝液進行超濾，置換脂質體外相介質並去除有機溶劑，得到所述脂質體。
根據本發明的實施方案，當所述脂質體包括外水相時，所述脂質體的製備方法還包括將所述脂質體分散於外水相，得到含外水相的脂質體；
根據本發明的實施方案，所述外水相為pH為4.5~6.5的緩衝液；
根據本發明的實施方案，實現外水相相應pH值的緩衝液為本領域公知的，並無特別限定。本領域常用的緩衝液選自HEPES、氯化鈉、蔗糖、枸櫞酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液中的一種或幾種，較佳為枸櫞酸鹽緩衝液；所述緩衝液的濃度為0.05 M~0.25 M，例如為0.08 M~0.2 M。
根據本發明的實施方案，所述脂質體藥物組合物的製備方法，包括以下步驟：將弱酸性藥物溶解在外水相中，與所述脂質體的溶液混合，得到所述脂質體藥物組合物；其中所述脂質體的濃度為1.0~20 mg/ml，較佳為1.0 ~ 5.0 mg/ml(以磷脂濃度計)。
根據本發明的實施方案，所述脂質體藥物組合物的製備方法，包括以下步驟： (1)將所述弱酸性藥物溶於枸櫞酸鈉水溶液中，得到藥物溶液； (2)將所述脂質體的溶液與枸櫞酸鹽緩衝液混合，得到載體溶液； (3)將所述藥物溶液加入到所述載體溶液中進行負載，得到所述脂質體藥物組合物。
有益效果
本發明提供的藥物脂質體的載藥量高或者包封率高。其中，該藥物脂質體的載藥量高(最高載藥量不低於18%)；所述藥物脂質體當低於最高載藥量(18%)時，包封率不低於85%，較佳不低於90%。較佳地，本發明的藥物脂質體還同時具有載藥量高(例如不低於18%)和包封率高(例如不低於85%，較佳不低於90%)的效果。
下文將結合具體實施例對本發明的技術方案做更進一步的詳細說明。應當理解，下列實施例僅為示例性地說明和解釋本發明，而不應被解釋為對本發明保護範圍的限制。凡基於本發明上述內容所實現的技術均涵蓋在本發明旨在保護的範圍內。
除非另有說明，以下實施例中使用的原料和試劑均為市售商品，或者可以通過已知方法製備。
本發明所述的載藥量(LE)用重量百分比來表示。包封率(EE)和載藥量(LE)的定義及解釋如下： 包封率 EE% = (1 – W f /W t ) × 100%                  (公式1) 式中W f 表示在外部介質中的游離藥物的量；W t 表示脂質體懸液中藥物的總量。
使用以下公式2計算脂質體藥物組合物的載藥量： LE% = [W e / W m ] ×100% = [(W t × EE%) / (W l + W t× EE% ) ] ×100%                               (公式2) 式中LE表示脂質體中藥物的載藥量百分數；W e 表示包封於脂質體內的藥物量；W m 表示載藥脂質體的總重量(包含脂質體載體和包載藥物的量)。其中，W t 為脂質體懸液中總藥物量；EE%為包封率；W l 為脂質體載體的總脂質含量。
實驗設備：pH計(梅特勒，S220K)；集熱式恆溫加熱磁力攪拌器(上海豫康科教儀器設備有限公司，DF-101S)；小試脂質體擠出器(ATS EX200，氮氣源動力)；超速離心機(Backman，MAX-XP)； HPLC(Agilent1260 ，USA)；奈米鐳射細微性儀(malvern，ZS90)；切向流超濾設備(Millipore Pellicon)；
實驗物料：曲前列尼爾鈉(Porton)；氫化大豆磷脂醯膽鹼(HSPC)(Lipoid)；二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)(Lipoid)；膽固醇(CHOL)(日本精化)；碳酸氫鈉(NaHCO 3)，醋酸鈉(NaAc)，葡甲胺(MEG)(merck)；其他物料均為常用注射級輔料。
一般實驗程序
1.曲前列尼爾脂質體組合物的製備
實施例1：曲前列尼爾脂質體的製備
(1) 空白脂質體的製備：首先，稱取HSPC 2.367 g，CHOL 0.78 g和DSPE-mPEG2000 0.21 g(HSPC / CHOL / DSPE-mPEG2000=3 / 2 / 0.075(莫耳比))，加入到潔淨乾燥的容器中，加入11.3 g無水乙醇，密封，於60~65℃下溶解，得到脂質溶液。然後，將上述脂質溶液注入至內水相(如葡甲胺溶液或碳酸氫鈉溶液，以0.3M，pH=8.5的碳酸氫鈉溶液作為內水相為例，為注入至86.7 g碳酸氫鈉溶液)，在60~65℃下攪拌水合20 min；乳化結束後，於60~65℃下，將初乳經過小試脂質體擠出器進行擠出，0.6~1.0 MPa壓力下，經200 nm和/或100 nm的聚碳酸酯膜多次擠出，使樣品粒徑為100~200 nm，PDI小於0.2。然後，將樣品冷卻至常溫，使用切向流TFF過濾設備將脂質體外相介質置換成pH5.5的0.05 M枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝液，超濾後的空白脂質體於2~8℃保存備用。
(2) 曲前列尼爾脂質體的製備：將曲前列尼爾鈉溶解在0.05 M枸櫞酸鈉溶液中，然後按照一定的理論投藥量(例如，理論載藥量為22%(w/w))，將曲前列尼爾鈉溶液投入到上述空白脂質體中，加入適量枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝液使脂質體外相中枸櫞酸-枸櫞酸鈉濃度調整至0.09~0.12 M，並在35~45℃下孵育30~60 min，得到曲前列尼爾脂質體組合物。
一般分析方法
1.曲前列尼爾脂質體組合物的定量表徵
a.對照品溶液配製：
精密稱取約10 mg曲前列尼爾鈉原料藥置於50 ml量瓶中，加2.5 ml純化水溶解，並用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為曲前列尼爾納對照品溶液。
b.游離和總曲前列尼爾濃度：
精密量取脂質體藥物組合物溶液1 ml置20 ml量瓶中，加入甲醇約3 ml輕輕搖晃，除去產生的氣泡後，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。取樣進HPLC分析，測定組合物中曲前列尼爾總含量。
游離曲前列尼爾測定：取曲前列尼爾脂質體1 ml至超速離心管中，在參數為(溫度：4℃，轉速：100000 rpm，時間：30 min)超速離心機中離心，30 min後取出樣品，取上清液進HPLC分析；
HPLC具體管柱層析條件如下：
名稱 管柱層 析條件
管柱層析管柱 Kromasil 10-5-C 18(250×4.6，5 μm)
柱溫 35℃
波長 271 nm
流速 1.0 ml/min
進樣量 20 μl
進樣室溫度 20℃
流動相A 0.1%三氟乙酸水溶液
流動相B 0.1%三氟乙酸乙腈溶液
等度洗脫 時間(分鐘) 流動相A(%) 流動相B(%)
0 45 55
15 45 55
c.包封率(EE)和載藥量(LE)：
本發明所述的包封率(EE)和載藥量(LE)的定義及解釋已在上文描述，結合具體的分析方法，公式補充如下：
包封率 EE% = (1 – C f /C t ) × 100%  = (公式1-1) 式中C f 表示外部介質中的游離藥物的量；C t 表示脂質體懸液中藥物的總量；A c 為藥物總含量的峰面積；A b 為游離藥物的峰面積；a為總藥物含量的稀釋倍數，20。
使用以下公式3計算脂質體藥物組合物的濃度： (公式3) C為脂質體組合物的濃度，mg/ml；W std 為對照品的稱樣量，mg；A std 五針對照品溶液的峰面積平均峰面積；T為對照品中主藥的含量，%；D為對照品溶液的稀釋體積；A sample 為脂質體藥物總含量溶液的峰面積；a為脂質體藥物總含量溶液的稀釋體積。
d.平均粒徑和多分散性指數(PdI)：
取30 µl曲前列尼爾脂質體組合物，用純化水稀釋至2ml，混勻，通過動態光散射原理，利用瑪律文奈米雷射細微性儀，進樣檢測(參數：溫度25℃，折射係數1.33，平衡時間120s，迴圈3次)組合物的粒徑分佈和多分散係數。
實施例中所述陽離子和陰離子表示提供相應離子的物料濃度並非物料電離後的離子濃度。
實施例 1.不同載藥鹽種類的不同投料比的曲前列尼爾脂質體組合物
為了研究不同載藥鹽種類對曲前列尼爾脂質體載藥的影響，根據如前段標題「一般實驗程序」的「1.曲前列尼爾脂質體組合物的製備」中所述的程式製備了包含不同內水相(碳酸氫鈉(NaHCO 3)、醋酸鈉(NaAc)、葡甲胺-乙酸(MEG-HAc)，pH約8.5)和不同載藥量的曲前列尼爾脂質體組合物，其具有如表1中所示的特定曲前列尼爾脂質體。
曲前列尼爾脂質體組合物的定量表徵，包括曲前列尼爾脂質體的理論投料比(即理論載藥量)、包封率和載藥量，其根據如前段標題為「一般分析方法」的「1.曲前列尼爾脂質體組合物的定量表徵」所述的程式進行。
由下表的結果可見：由於脂質體內水相容積有限，隨著投料量的增加，藥物的載藥量呈現先增大(從8.22%增加至19.72%)，後基本維持不變的趨勢，故投料量為21%時，包封率為87.55%，載藥量為19.72%，但後續投料量再增加，而載藥量基本保持不變，故會導致包封率顯著下降。其二，高投料量時，葡甲胺處方的曲前列尼爾脂質體的最大載藥量為19.72%，而其他處方(如碳酸氫鈉或者醋酸鈉等)均無法突破18%；低投料量時，葡甲胺處方的包封率也能夠不低於85%，甚至不低於90%，以實施例C001為例，其載藥量僅為8.22%，但包封率可以達到97.86%。而其他處方即便在載藥量為17.39%時，包封率也僅為75.65%，且大部分比較例中的包封率都顯著低於60%。
從下表還可以看出，C003相較於比較例A001或者B001，均為相同的投料比21%，但葡甲胺處方的包封率87.55%，高於碳酸氫鈉或者醋酸鈉的75.65%或79.59%，而載藥量更是19.72%，也是明顯高於17.39%或者17.84%。同樣的，其他相同投料比的條件，也均是本發明的葡甲胺處方優於碳酸氫鈉或者醋酸鈉處方。
表1 不同載藥鹽製備的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 載藥鹽類 理論投料比* (%) EE (%) 載藥量(%)
陽離子 陰離子
比較例 比較例A001 Na+ (0.4M) HCO3 – (0.4M) 21 75.65 17.39
比較例A002 27 53.82 16.66
比較例A003 32 37.49 14.75
比較例A004 36 32.70 15.53
比較例B001 Na+ (0.3M) Ac- (0.3M) 21 79.59 17.84
比較例B002 27 57.02 17.52
比較例B003 32 45.37 17.53
比較例B004 36 36.41 16.87
實施例 實施例C001 MEG (0.3M) HAc (0.29M) 8 97.86 8.22
實施例C002 15 96.54 14.79
實施例C003 21 87.55 19.72
實施例C004 27 64.30 18.84
實施例C005 32 52.26 19.14
實施例C006 36 42.99 18.83
備註：*理論投料比表示理論載藥量(誤差±5%以內)。脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
實施例 2.不同粒徑的葡甲胺-乙酸載藥鹽的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」製備包含不同粒徑(100~150 nm、150~200 nm)的曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：具有不同粒徑的曲前列尼爾脂質體組合物的包封率和載藥量見下表2。從表中可以看出，在140~190 nm的粒徑範圍內，曲前列尼爾脂質體的包封率和載藥量相當。
表2 不同粒徑的曲前列尼爾組合物
編號 Size (nm) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C007 127.5 79.58 18.28
實施例C008 135.0 84.36 18.44
實施例C003 141.9 87.55 19.72
實施例C009 149.1 86.69 19.25
實施例C010 189.4 86.69 19.76
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；載藥鹽陰離子為HAc(0.29 M)；理論投料比為21%(誤差±5%以內)。
實施例 3不同內水相濃度的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」製備包含不同濃度的葡甲胺-乙酸(葡甲胺濃度為0.20 ~ 0.60 M，pH為8.5)的曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，當理論投料比較高為21%時，水相濃度為0.30~0.40 M時製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)；當理論投料比低於18%時，水相濃度在0.30~0.40 M之間製得的曲前列尼爾脂質體可獲得高包封率(包封率不低於90%)。
表3-1 高理論投料比-不同內水相(葡甲胺)濃度的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 載藥鹽陽離子MEG濃度 (M) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C003 0.30 87.55 19.72
實施例C011 0.35 82.49 18.92
實施例C012 0.40 78.37 18.32
比較例 比較例C013 0.20 52.76 13.04
比較例C014 0.25 72.87 17.13
備註：載藥鹽陰離子為HAc；理論投料比為21%(誤差±5%以內)；脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
表3-2低理論投料比 -不同內水相(葡甲胺)濃度的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 載藥鹽陽離子濃度(M) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C015 0.30 96.54 14.79
實施例C016 0.35 95.82 15.28
實施例C017 0.40 95.69 15.05
備註：載藥鹽陰離子為HAc；理論投料比為15%(誤差±5%以內)；脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
實施例 4不同磷脂處方的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」製備包含不同磷脂處方的曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，在高理論投料比時，HSPC、CHOL和DSPE-mPEG2000的莫耳比為3 / 2 / (0.025-0.150)時，製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)；HSPC、CHOL和DSPE-mPEG2000的莫耳比為3 /(2~3)/ 0.075時，製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)和高包封率(不低於85%)。
表4-1 不同磷脂處方的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 磷脂處方及組成莫耳比 (HSPC/CHOL/DSPE-mPEG2000) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C018 3 / 2 / 0.025 79.44 19.02
實施例C019 3 / 2 / 0.050 82.68 19.45
實施例C003 3 / 2 / 0.075 87.55 19.72
實施例C020 3 / 2 / 0.150 81.71 18.32
比較例 比較例C021 3 / 2 / 0.225 82.41 16.94
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；載藥鹽陰離子為HAc(0.29 M)；理論投料比為21%(誤差±5%以內)；脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
表4-2 不同磷脂處方的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 磷脂處方及組成莫耳比 (HSPC/CHOL/DSPE-mPEG2000) EE (%) 載藥量(%)
比較例 比較例C022 3 / 1 / 0.075 63.26 16.29
比較例C023 3 / 1.5 / 0.075 58.46 14.93
實施例 實施例C003 3 / 2 / 0.075 87.55 19.72
實施例C024 3 / 2.5 / 0.075 87.96 18.51
實施例C025 3 / 3 / 0.075 88.72 18.50
備註：載藥鹽陽離子為MEG；載藥鹽陰離子為HAc；理論投料比為21%(誤差±5%以內)。上述脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
實施例 5不同內水相pH的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」，調整內水相乙酸的用量(0.21~0.40M)，製備不同內水相pH處方的曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，內水相溶液中的乙酸濃度在0.21~0.40M，對應的內水相溶液pH為9.52~4.97時，製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)。
表5 不同內水相pH的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 陰離子及其pH EE (%) 載藥量(%)
乙酸(M) pH
實施例 實施例C026 0.40 4.97 81.17 19.87
實施例C027 0.35 5.26 80.23 19.63
實施例C028 0.30 6.50 81.40 19.52
實施例C029 0.29 8.55 86.91 19.36
實施例C030 0.27 9.01 85.22 19.19
實施例C031 0.21 9.52 85.42 19.08
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；理論投料比為22.3%(誤差±5%以內)；粒徑範圍為100~200 nm。
實施例 6不同內水相陰離子的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」製備不同內水相陰離子處方的曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，保持內水相pH為8.5，乙酸作為內水相陰離子，製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)；戊酸和乳酸作為內水相陰離子，在理論投料比低於18%時，製得的曲前列尼爾脂質體可獲得高包封率(包封率不低於85%)。葡萄糖酸、蘋果酸、檸檬酸、磷酸在本組合物中不適宜作為提供梯度的陰離子。
表6 不同內水相酸的種類的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 陰離子 理論投料比(%) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C003 乙酸 21.9 87.55 19.72
實施例C032 戊酸 13.9 94.06 13.18
實施例C033 乳酸 14.2 87.25 12.63
比較例 比較例C034 葡萄糖酸 1.1 14.91 0.17
比較例C035 蘋果酸 1.1 25.22 0.29
比較例C036 檸檬酸 1.1 20.99 0.23
比較例C037 磷酸 5.3 41.39 2.28
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；上述脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
實施例 7不同弱酸性藥物種類的脂質體藥物組合物
按照上述「一般實驗程序」製備的脂質體組合物，分別負載不同藥物，並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，負載不同藥物的脂質體組合物均具有高載藥量(不低於18%)。
表7 不同弱酸性藥物的脂質體藥物組合物
編號 藥物 EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C003 曲前列尼爾鈉 87.55 19.72
實施例C038 貝前列素鈉 81.42 18.72
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；載藥鹽陰離子為HAc(0.29 M)；理論投料比為22%(誤差±5%以內)；脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
實施例 8曲前列尼爾脂質體藥物組合物
按照上述「一般實驗程序」製備的脂質體組合物，負載曲前列尼爾鈉，並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，負載曲前列尼爾的脂質體組合物具有高載藥量和高包封率。
表8 曲前列尼爾脂質體藥物組合物
編號 理論投料比(%) 粒徑(nm) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C003 21 141.9 87.55 19.72
實施例C039 22 136.3 91.13 20.37
實施例C040 29 182.8 72.63 23.32
實施例C041 20 138.6 90.50 18.00
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；載藥鹽陰離子為HAc(0.29 M)。
實施例 9不同磷脂濃度的曲前列尼爾脂質體組合物
按照上述「一般實驗程序」，保持投料比一致，按照不同磷脂濃度投料製備曲前列尼爾脂質體組合物。並按照上述的一般分析方法對脂質體組合物進行分析。
結果：從表中可以看出，當理論投料比為22%時，載藥時的組合物，其磷脂濃度1.4~4.18 mg/ml範圍內製備的曲前列尼爾脂質體具有高載藥量(不低於18%)。
表9 不同磷脂濃度的曲前列尼爾脂質體組合物
編號 投料磷脂 (mg/ml) EE (%) 載藥量(%)
實施例 實施例C042 4.18 76.57 18.05
實施例C003 2.09 87.55 19.72
實施例C043 1.40 82.32 18.88
比較例 比較例C044 8.35 59.04 14.38
比較例C045 6.26 66.12 15.51
比較例C046 1.04 76.71 17.66
備註：載藥鹽陽離子為MEG(0.30 M)；載藥鹽陰離子為HAc(0.29 M)；理論投料比為22%(誤差±5%以內)；脂質體的粒徑範圍是100~150 nm之間。
以上對本發明技術方案的實施方式進行了示例性的說明。應當理解，本發明的保護範圍不拘囿於上述實施方式。凡在本發明的精神和原則之內，本發明所屬技術領域中具有通常知識者所做的任何修改、均等替換、改進等，均應包含在本發明申請專利範圍的保護範圍之內。
無

Claims (10)

  1. 一種脂質體藥物組合物，包括弱酸性藥物和脂質體； 所述脂質體為如下中的一種： (1)所述脂質體包括磷脂和內水相； (2)所述脂質體包括磷脂、內水相和外水相； 其中，所述內水相包括葡甲胺與弱酸，所述內水相的pH為4.0~10.5，例如4.5~10.0、6.5~10.5，較佳為4.97~9.52； 所述外水相使脂質體懸浮； 所述弱酸性藥物包裹在脂質體的內水相中，包裹了弱酸性藥物的脂質體懸浮在外水相中。
  2. 如請求項1所述的脂質體藥物組合物，其中，所述弱酸性藥物的pKa在2~7之間； 較佳地，所述弱酸性藥物選自：前列腺素類、解熱鎮痛類、喹啉羧酸抗菌類、干擾素基因刺激因子(STING)受體，或它們的衍生物(如藥學上可以接受的鹽、酯或前藥)中的至少一種藥物； 較佳地，所述前列腺素類藥物選自曲前列尼爾、貝前列素、伊洛前列素、卡前列素、利馬前列素、依前列醇、前列地爾、烏諾前列酮，或它們的衍生物；所述解熱鎮痛類藥物選自阿司匹林、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸鈉，或它們的衍生物；所述喹啉羧酸類抗菌藥物選自萘啶酸、吡咯嘧酸、氟喹啉酸、西他沙星、環丙沙星、依諾沙星，或它們的衍生物；所述STING藥物選自MSA-2、STING agonist-7、Vadimezan，或它們的衍生物； 較佳地，所述藥物脂質體的載藥量低於18%，其包封率不低於85%，較佳不低於90%； 較佳地，當所述弱酸性藥物的載藥量不低於18%，不高於40%。
  3. 如請求項1或2所述的脂質體藥物組合物，其中，所述弱酸選自羧酸，例如選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、異丁酸、戊酸、異戊酸、乳酸或其組合；較佳為甲酸、乙酸、丙酸或其組合； 較佳地，所述葡甲胺在內水相中的濃度為0.1~0.8 M，例如0.2~0.6 M，較佳為0.3~0.4 M； 較佳地，所述弱酸在內水相中的濃度為0.1~0.8 M，例如0.2~0.6 M。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的脂質體藥物組合物，其中，所述葡甲胺與弱酸為葡甲胺與乙酸；較佳地，所述葡甲胺與乙酸在內水相中的濃度為0.30~0.40 M。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的脂質體藥物組合物，其中，所述磷脂具有雙層脂質結構，所述雙層脂質由氫化大豆卵磷脂(HSPC)、膽固醇(CHOL)和二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)構成，莫耳比為3:(1-3):(0.025-0.225)，較佳為3:2:(0.025-0.150)； 較佳地，所述磷脂在脂質體組合物中的濃度為1~100 mg/mL，例如1~50 mg/mL、1~20 mg/mL。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的脂質體藥物組合物，其中，所述脂質體的粒徑為50~500 nm，例如100~200 nm； 較佳地，所述脂質體具有內水相pH高，外水相pH低的pH梯度特性。
  7. 如請求項1至6中任一項所述的脂質體藥物組合物，其中，所述外水相為pH為4.5~6.5的緩衝液； 較佳地，所述緩衝液選自HEPES、氯化鈉、蔗糖、枸櫞酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液中的一種或幾種，較佳為枸櫞酸鹽緩衝液；所述緩衝液的濃度為0.05 M~0.25 M，例如為0.08 M~0.2 M，較佳為0.09~0.12 M。
  8. 一種基於如請求項1至7中任一項所述的脂質體藥物組合物的曲前列尼爾脂質體，其中，所述脂質體藥物組合物中的弱酸性藥物為曲前列尼爾或其衍生物，所述曲前列尼爾或其衍生物包裹於所述脂質體的內水相； 較佳地，所述曲前列尼爾的衍生物選自曲前列尼爾的水合物、溶劑合物或絡合物，或者選自曲前列尼爾的藥學上可接受的鹽、酯或其前藥等，如曲前列尼爾鈉鹽、曲前列尼爾鉀鹽、曲前列尼爾二乙醇胺鹽、曲前列尼爾甲酯、曲前列尼爾乙酯、曲前列尼爾的富馬醯基二酮呱啶前藥。
  9. 一種如請求項8所述的曲前列尼爾脂質體或其衍生物在製備藥物中的用途； 較佳地，所述藥物為治療肺動脈高壓、肺高血壓、肺纖維化、間質性肺疾病、慢性阻塞性肺病、哮喘、缺血性疾病、心臟衰竭、動脈硬化、術後抗凝血、視網膜中央靜脈阻塞、血栓性微血管病、周圍性血管疾病、心肺移植等疾病的藥物； 較佳地，所述藥物為治療外周動脈閉塞性疾病或肺動脈高壓藥物。
  10. 一種如請求項1至7中任一項脂質體藥物組合物的製備方法，該方法包括，將脂質體負載至少一種弱酸性藥物； 較佳地，所述弱酸性藥物的載藥量不低於18%； 較佳地，所述脂質體藥物組合物的製備方法，包括以下步驟：將弱酸性藥物溶解在外水相中，與所述脂質體的溶液混合，得到所述脂質體藥物組合物；其中所述脂質體的濃度為1.0~20 mg/ml，較佳為1.0 ~ 5.0 mg/ml(以磷脂濃度計)； 較佳地，所述脂質體藥物組合物的製備方法，包括以下步驟： (1)將所述弱酸性藥物溶於枸櫞酸鈉水溶液中，得到藥物溶液； (2)將所述脂質體的溶液與枸櫞酸鹽緩衝液混合，得到載體溶液； (3)將所述藥物溶液加入到所述載體溶液中進行負載，得到所述脂質體藥物組合物。
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