[go: up one dir, main page]

TW202409060A - 用於降低脂酶活性之方法 - Google Patents

用於降低脂酶活性之方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202409060A
TW202409060A TW112116319A TW112116319A TW202409060A TW 202409060 A TW202409060 A TW 202409060A TW 112116319 A TW112116319 A TW 112116319A TW 112116319 A TW112116319 A TW 112116319A TW 202409060 A TW202409060 A TW 202409060A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
polysorbate
protein
months
concentration
Prior art date
Application number
TW112116319A
Other languages
English (en)
Inventor
曉林 湯
里歐尼德 布瑞杜
約翰 瑪帝拉
Original Assignee
美商再生元醫藥公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商再生元醫藥公司 filed Critical 美商再生元醫藥公司
Publication of TW202409060A publication Critical patent/TW202409060A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本發明係提供包括一特異性與人類介白素-4受體α(hIL-4Rα)結合之抗體的醫藥調配物。除了抗-IL-4Rα抗體之外，此調配物可含有一或多種緩衝劑、至少一種胺基酸、至少一種糖和一包括聚山梨醇酯、聚乙二醇或泊洛沙姆(poloxamer)的界面活性劑。本發明亦提供用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥調配物的方法，其可包括將藥物在酸性條件、攪拌應激、熱應激下進行陰離子交換層析及額外的離子交換或粒徑篩析層析。在一方面，此醫藥調配物在脂酶的存在下並不具有明顯的目視不可見顆粒(subvisible particle)形成，且在儲存期間和經受熱和其他物理應激後展現相當程度的抗體穩定性。

Description

用於降低脂酶活性之方法
相關申請案之交互參照
本申請案係以引用的方式併入於2022年5月2日申請的美國臨時專利申請案第63/337,532號、2023年1月3日申請的臨時專利申請案第63/436,850號和2023年5月1日申請的臨時專利申請案第63/499,441號之優先權和權益。 序列表
本申請案含有以.xml格式電子建檔的序列表且係以全文引用的方式併入本文中。該.xml副本係於2023年1月31日創建，名稱為070816-03480.xml，大小為180,926字元組。
本發明係關於治療性蛋白調配物之領域。更特言之，本發明係關於具有降低的酯酶或脂酶活性及/或降低的游離脂肪酸顆粒形成之醫藥調配物領域。
在藥物產品中，以蛋白為基礎的生物治療劑為一類重要的藥物，其提供高等級的選擇性、效力和功效，正如過去數年間大量增加的單株抗體(mAb)臨床試驗所證明的。就臨床和商業上可行的生物治療劑之一關鍵方面為藥品在製造過程以及保存期限方面的穩定性。界面活性劑，例如聚山梨醇酯，通常用來增強以蛋白為基礎的生物治療劑產品之物理穩定性。超過70%的市售單株抗體治療劑含有0.001%至0.2%的聚山梨醇酯(一種界面活性劑)，用以賦予以蛋白為基礎的生物治療劑物理穩定性。
聚山梨酯的酵素性水解已被認為是生物治療製劑中聚山梨酯降解的主要途徑。聚山梨醇酯的降解可能在藥物產品之生產過程期間由酯酶或脂酶的共純化所造成。聚山梨醇酯水解導致游離的脂肪酸釋放，其可能驅動藥物產品中不欲的顆粒形成。此等顆粒可能為可見或不可見的；目視不可見顆粒的直徑通常為150微米或100微米以下。
因此，對於具有降低的酯酶或脂酶活性和降低的游離脂肪酸顆粒形成之藥物產品及其製造方法存有需求。
已開發出用於降低組成物或調配物中酯酶活性、降低組成物或調配物中脂酶活性、降低聚山梨醇酯降解和降低脂肪酸顆粒形成的產品和方法。在一方面，係將包括感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本進行疏水相互作用層析用以產生相較於未進行疏水相互作用層析的樣本，具有降低的酯酶及/或脂酶活性、降低的聚山梨酯降解/或降低的游離脂肪酸顆粒的形成之調配原料藥(drug substance)及/或藥物產品。在一方面，係將包括感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本使用高負載pH進行陰離子交換層析用以產生相較於未進行高負載pH陰離子交換層析的樣本，具有降低的酯酶及/或脂酶活性、降低的聚山梨醇酯降解及/或降低的脂肪酸顆粒形成之調配原料藥及/或藥物產品。
在一方面，包括感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本係以包括高濃度油酸，例如≥98%油酸的聚山梨醇酯調配，用以產生相較於未以聚山梨醇酯調配的樣本，具有降低的酯酶及/或脂酶活性、降低的聚山梨醇酯降解及/或降低的脂肪酸顆粒形成之調配原料藥及/或藥物產品。另一種選擇，在一方面，包括感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本係以泊洛沙姆188或PEG3350調配，用以產生相較於未以泊洛沙姆188或PEG3350調配的樣本，具有降低的酯酶及/或脂酶活性、降低的聚山梨醇酯降解及/或降低的脂肪酸顆粒形成之調配原料藥及/或藥物產品。在某些方面，此感興趣蛋白為抗-IL4Rα抗體。在某些方面，此抗-IL-4Rα抗體為度普利尤單抗(Dupilumab)。
在一方面，係將包括感興趣蛋白、脂肪酸酯和酯酶或脂酶的調配原料藥進行應激，例如攪拌應激或熱應激，使酯酶或脂酶失活，降解酯酶或脂酶，及/或降低酯酶或脂酶活性，其可能造成高分子量(HMW)之酯酶或脂酶及/或藥物蛋白形成。然後可將該物質進行過濾及/或分離，例如使用陽離子交換層析或粒徑篩析層析，用以移除HMW物類並產生相較於未進行應激及/或過濾/分離的樣本，具有降低的酯酶或脂酶活性、降低的聚山梨醇酯降解及/或降低的游離脂肪酸顆粒形成之調配原料藥及/或藥物產品。在某些方面，此感興趣蛋白為抗-IL4Rα抗體。在某些方面，此抗-IL-4Rα抗體為度普利尤單抗(Dupilumab)。
本揭示文係提供用於製造具有降低的酯酶或脂酶之醫藥組成物的另外方法。在某些方面，這些方法可包括將包含感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本進行陰離子交換層析，其中載入到層析管柱之樣本的pH係介於約7.8和約8.3之間。
在某些另外的方面，用於製造具有降低的酯酶或脂酶活性之醫藥組成物方法可包括(a)將包含感興趣蛋白和酯酶或脂酶的樣本進行應激條件，用以形成具有失活的酯酶或脂酶的樣本；及(b)以此失活的酯酶或脂酶調配該樣本，產生具有降低的酯酶或脂酶活性之醫藥組成物。
在一方面，該感興趣蛋白為一抗體、抗體衍生的蛋白、抗體片段、單株抗體、雙特異性抗體、融合蛋白、抗體-藥物接合物或治療蛋白。
在一方面，該調配步驟係於該樣本中加入一脂肪酸酯。在一特定方面，該脂肪酸酯為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。在一特定方面，該脂肪酸酯為聚山梨醇酯80，且在該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。在更特定的方面，該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。
在一方面，該應激條件係包括攪拌應激及/或熱應激。在一特定方面，該攪拌應激係包括以50至500 rpm、200至300 rpm、約50 rpm、約75 rpm、約100 rpm、約125 rpm、約150 rpm、約200 rpm、約225 rpm、約250 rpm、約275 rpm、約300 rpm、約325 rpm、約350 rpm、約375 rpm、約400 rpm、約425 rpm、約450 rpm、約47 5rpm或約500 rpm震盪該樣本。在另外特定方面，該攪拌應激係包括震盪該樣本歷時1至96小時、24至48小時、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約12小時、約18小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時、約60小時、約72小時、約84小時或約96小時。
在另外的特定方面，該熱應激係包括在約20°C至約60°C、約25°C至約55°C、約40°C至約50°C、從約44°C至約46°C、約20°C、約25°C、約30°C、約35°C、約40°C、約45°C、約50°C、約55°C，或約60°C下儲存該樣本。在一更特定方面，該儲存為1天至6個月、3天至3個月、1週至2個月、半個月至1個月、約1天、約2天、約3天、約1週、約2週、約半個月、約3週、約4週、約1個月、約5週、約6週、約7週、約8週、約2個月、約3個月、約3.5個月，約4個月，約4.5個月，約5個月，約5.5個月，或約6個月。
在一方面，此方法進一步係包括在步驟(b)之前將具有失活的酯酶或脂酶的該樣本進行過濾、富集或層析分離，用以移除失活的脂酶及/或蛋白HMW物類。在一特定方面，該層析分離係包括陽離子交換層析。在另外的特定方面，該層析分離係包括粒徑篩析層析。
在一方面，該調配步驟係包括將賦形劑加到該樣本中。
本揭示文係提供用於製造具有降低的酯酶或脂酶活性之醫藥組成物的進一步方法。在某些方面，該方法可包括(a)將收取的抗體進行親和層析；(b)將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體在約3至約4的pH下進行病毒失活，然後將pH調節到約5至約8；(c)將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析；(d)將匯集自步驟(c)溶析液的該抗體以流通模式進行疏水相互作用層析；(e)將匯集自步驟(d)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾；(f)將來自步驟(e)之包含感興趣抗體和酯酶或脂酶的樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的酯酶或脂酶活性的醫藥組成物。
在其他方面，此等方法可包括(a)將收取的抗體進行親和層析；(b)將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體於約3至約4的pH進行病毒失活，然後將pH調整至約5至約8；(c)將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析；(d)將匯集自步驟(c)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾；(e)將來自步驟(d)包括一感興趣抗體和酯酶或脂酶之樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的酯酶或脂酶活性的醫藥組成物。
在一方面，此等方法進一步係包括將醫藥組成物進行過濾、富集或層析分離，用以移除HMW物類。在一特定方面，層析分離係包括離子交換層析、陽離子交換層析或粒徑篩析層析。
在一方面，載入AEX管柱之樣本的pH係介於約7.8至約8.3之間。
本揭示文係提了用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的方法。在某些方面，此等方法可包括藉由將包含感興趣蛋白、酯酶或脂酶和脂肪酸酯的樣本進行陰離子交換(AEX)層析來降低組成物中酯酶或脂酶的活性，其中載入AEX管柱中的樣本之pH係介於約7.8至約8.3之間。
在一方面，此方法進一步係包括將AEX層析後所形成的樣本進行熱應激或攪拌應激，用以降低酯酶或脂酶活性之步驟。在一特定方面，此方法進一步係包括將該經應激的樣本進行層析分離，用以移除該酯酶或脂酶的HMW物類。
在一方面，此方法進一步係包括加入泊洛沙姆188或PEG3350，用以產生一包含具有降低的酯酶或脂酶活性和穩定性增加之醫藥組成物的調配物。在一特定方面，此調配物實質上無聚山梨醇酯。在另外特定方面，該泊洛沙姆188的濃度係從0.005%至5%，從0.05%至2.5%，從0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。又在另外的特定方面，該PEG3350的濃度係從0.005%至5%，從0.05%至2.5%，從0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。
本揭示文係提供用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的另外方法。在某些方面，此等方法可包括(a)將收取的重組蛋白以流通模式進行陰離子交換層析；(b)將來自步驟(a)的流通溶離份以流過模式進行疏水相互作用層析；及(c)將分離自步驟(b)的重組蛋白以聚山梨醇酯80調配，其中該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。
在一方面，該油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。
在一方面，載入陰離子交換層析管柱中的樣本之pH為約7.8至約8.3，約7.9至約8.2，約7.8，約7.9，約8.0，約8.1，約8.2，或約8.3。
在某些方面，此感興趣蛋白或重組蛋白為抗-IL4Rα抗體。在某些方面，此抗-IL-4Rα抗體為度普利尤單抗(Duplimumab)。
當結合下列說明和附圖考量時，能更佳地理解和瞭解本發明之這些和其他方面。下列說明，在指出其各方面和許多具體詳情的同時，係以說明而非限制的方式提供。在本發明之範圍內可進行許多取代、修改、添加或重排。
治療性大分子的調配方式不僅要讓分子適合投予病患，亦要在儲存期間維持其穩定性。例如，除非溶液調配得當，否則液體溶液中的治療性抗體易於降解、聚集及/或不欲的化學修飾。液體調配物中抗體的穩定性不僅取決於調配物中所使用的賦形劑種類，亦取決於賦形劑相對於彼此之量和比例。治療調配物亦可能在儲存期間隨時間形成顆粒物質。顆粒可能為可見或不可見的；目視不可見顆粒的直徑通常在150微米或100微米以下。具有高蛋白濃度(例如30 mg/mL或更高濃度)之調配物更易於聚集和形成目視不可見顆粒(subvisible particle)。
聚山梨醇酯20(PS20)和聚山梨醇酯80(PS80)為生物醫藥蛋白調配物中最常用於增進蛋白穩定性並保護蛋白產品免於聚集和變性之非離子界面活性劑(Martos et al., J Pharm Sci. 106(7):1722-1735 (2017); Kiese et al., J Pharm Sci 97(19):4347-4366 (2008); Dwivedi et al., Int J Pharm 552(1-2):422-436 (2018))。然而，已有報告指出，聚山梨醇酯，包括聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80，在脂酶的存在下會降解，其隨著時間使調配物中形成目視不可見顆粒。
已知PS可能經由二個主要路徑降解：自動氧化和水解(Dwivedi et al.; Kishore et al., Pharm Res. 28(5): 1194-1210 (2011); Larson et al., J Pharm Sci. 109(10):633-639 (2020); Kishore et al. J Pharm Sci. 100(2):721-731 (2011))。酵素性水解被認為是高濃度蛋白調配物中PS降解的主要路徑，其造成游離脂肪酸(FFA)的堆積，可能驅動藥物產品中不欲的顆粒形成。氧化為PS降解的第二個主要途徑，其導致過氧化物、醛、酮和短鏈酯化POE山梨醇酐/異山梨醇種類的形成(Kishore et al. 2011a; Larson et al.; Kishore et al. 2011b; Donbrow et al., J Pharm Sci. 67(12):1676-1681 (1978); Yao et al. Pharm Res. 26(10):2303-2313 (2009))。PS水解已被認為是對藥品品質較大威脅，因為此過程不僅降低PS濃度，而且由於累積的FFA溶解度低，亦與顆粒形成有關，尤其是在2°C-8°C的儲存溫度下(Doshi et al., J Pharm Sci. 110(2):687-692 (2021); Saggu et al., J Pharm Sci. 110(3):1093-1102 (2021); Doshi et al. Mol Pharm. 12(11):3792-3804 (2015))。
存在藥物產品中的殘餘脂酶或酯酶為PS水解的主要原因(Chiu et al., Biotechnol Bioeng. 114(5):1006-1015 (2017); Hall et al. J Pharm Sci. 105(5):1633-1642 (2016); Labrenz et al. J Pharm Sci. 103(8):2268-2277 (2014); McShan et al. PDA J Pharm Sci Technol. 70(4):332-345 (2016); Zhang et al. J Pharm Sci. 109(11):3300-3307 (2020); Zhang et al. J Pharm Sci. 109(9):2710-2718 (2020))。在多個下游純化步驟後，最終藥物產品中殘餘的脂肪酶量通常非常低(＜10 ppm)，且PS降解的後果可能直到在典型儲存溫度(2°C-8°C)儲存數月或數年之後才明顯。
不希望受限於理論，咸信在倉鼠、大鼠、小鼠、人類和牛中為高度保守的假定類-磷脂酶B-2(PLBL2)在特定的處理下係與某些類別的蛋白共純化。其他酯酶或脂酶亦可能與感興趣蛋白共純化，濃度太低而無法可靠地偵測出，但卻夠高而足以具有可測量的脂酶活性，最終造成聚山梨醇酯的損失、產生游離脂肪酸及形成可見的或目視不可見的顆粒。因此，需要具有降低的肪酶活性、降低的酯酶活性和降低的脂肪酸顆粒形成之藥物產品以及其製備方法。
文中所揭示的為具有降低的脂酶活性、降低的酯酶活性和降低的脂肪酸顆粒形成之新穎藥物產品、組成物和調配物，以及其製備方法。發明者們意外地發現，可將一疏水相互作用層析(HIC)步驟加到感興趣蛋白的製造過程中，用以有效地移除酯酶和脂酶活性並防止藥物產品中形成顆粒。再者，已發現陰離子交換(AEX)層析步驟的最適化條件，可藉由改善習用的pH負載條件有效地降低酯酶和脂酶活性。發明者們另外發現聚山梨醇酯含量，特別是聚山梨醇酯80，可以高油酸濃度最適化，使得即使在含有酯酶或脂酶活性的藥物產品中也僅形成極少的脂肪酸顆粒。亦研究了聚山梨醇酯的替代界面活性劑，且令人驚訝地發現PEG3350和泊洛沙姆188可成功地穩定蛋白，同時阻抗酯酶或脂酶活性，從而防止脂肪酸顆粒形成。在製造原料藥之後，進一步令人驚奇地發現，共純化的酯酶或脂酶可藉由施以應激成功地失活及/或移除，例如可能造成酯酶或脂酶降解之攪拌應激或熱應激，降低脂酶活性。施以應激亦可能導致高分子量(HMW)物類的形成。使用例如分子量過濾或層析，例如陽離子交換層析或粒徑篩析層析，可從原料藥中移除HMW物類。本發明之這些和其他方面係進一步詳細闡述如下。
除非另有說明，否則所有文中所用的技術和科學術語係具有如本發明所屬技術之一般技術者所正常理解之相同意義。雖然在施行或試驗時可使用任何該等與文中所述的方法和物質類似或相當者，但特定的方法和物質為目前所述。
術語「一」應了解係指「至少一」，術語「約」和「大約」應了解為允許標準變化，如本項技術之一般技術者所理解的，且其中係提供範圍，包括端點。如文中所用，術語「包含」係指非限制性的且請了解係指「包含」。
如文中所用，術語「蛋白」或「感興趣蛋白」可包括具有共價連接的醯胺鍵之任何胺基酸聚合物。蛋白係包括一或多條胺基酸聚合物鏈，在本項技術中通常稱為「多肽」。「多肽」係指由胺基酸殘基、相關的天然生成結構變體及其經由胜肽鍵相連接的合成非天然生成的類似物所組成的聚合物。「合成胜肽或多肽」係指非天然生在的胜肽或多肽。可例如，使用自動多肽合成儀來合成合成的胜肽或多肽。各種固相胜肽合成方法已為熟習本項技術者所知。蛋白可包含一或多個多肽用以形成單一功能性生物分子。在另外的示例方面，蛋白可包括抗體片段、奈米抗體、重組抗體嵌合體、細胞激素、趨化素、胜肽荷爾蒙及諸如此類。感興趣蛋白可包括任何的生物治療蛋白、用於研究或治療的重組蛋白、陷阱蛋白和其他嵌合受體Fc-融合蛋白、嵌合蛋白、抗體、單株抗體、多株抗體、人類抗體、雙特異性抗體和抗原-結合蛋白。
可使用重組細胞為基礎的製造系統來製造蛋白，例如昆蟲桿狀病毒系統、酵母系統(例如，畢赤酵母(Pichia sp.))和哺乳動物系統(例如，CHO細胞和CHO衍生物如CHO-Kl細胞)。有關新近討論生物治療性蛋白及其製造的評論，請參見Ghaderi et al., “Production platforms for biotherapeutic glycoproteins.  Occurrence, impact, and challenges of non-human sialylation” (Darius Ghaderi et al., Production platforms for biotherapeutic glycoproteins. Occurrence, impact, and challenges of non-human sialylation, 28 BIOTECHNOLOGY AND GENETIC ENGINEERING REVIEWS 147–176 (2012)，其教導全文係以引用的方式併入本文中。在某些方面，蛋白係包括修飾、加合物和其他共價連接的基團。這些修飾、加合物和基團包括，例如親和素、鏈黴親和素、生物素、聚醣(例如，N-乙醯半乳糖胺、半乳糖、神經胺酸、N-乙醯葡糖胺、岩藻糖、甘露糖和其他單醣)、PEG、聚組胺酸、FLAGtag、麥芽糖結合蛋白(MBP)、幾丁質結合蛋白(CBP)、麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)myc-表位、螢光標記和其他染劑及諸如此類。蛋白可以組成和溶解度為基準分類，且因此可包括簡單蛋白，例如球蛋白和纖維蛋白；接合蛋白，例如核蛋白、糖蛋白、黏蛋白、色素蛋白、磷蛋白、金屬蛋白和脂蛋白；及衍生蛋白，例如初級衍生蛋白和次級衍生蛋白。
如文中所用，術語「重組蛋白」係指由於已導入適當宿主細胞之重組表現載體上所攜帶的基因轉錄和轉譯之結果而產生的蛋白。在特定方面，重組蛋白可為一抗體，例如嵌合抗體、人源化抗體或全人類抗體。在特定方面，重組蛋白可為選自下列組成之群的同型抗體：IgG、IgM、IgA1、IgA2、IgD或IgE。在特定方面，此抗體分子為全長抗體(例如，IgGl)，或另一種選擇此抗體可為一片段(例如，Fc片段或Fab片段)。 抗體
術語「抗體」，如文中所用，希望係指藉由雙硫鍵相互連接的四條多肽鏈，二條重(H)鏈和二條輕(L)鏈之免疫球蛋白分子以及其多聚體(例如IgM)；然而，僅由重鏈(亦即，缺乏輕鏈)所組成的免疫球蛋白分子亦涵蓋在術語「抗體」的定義中。各重鏈係包括一重鏈可變區(文中縮寫為HCVR或VH)及一重鏈恆定區。此重鏈恆定區係包括三個區，CH1、CH2和CH3。各輕鏈係包括一輕鏈可變區(文中縮寫為LCVR或VL)及一輕鏈恆定區。輕鏈恆定區係包括一個結構域(CL1)。VH和VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間散佈著較保守性區域，稱為框架區(FR)。各VH和VL係由三個CDR和四個FR所組成，以下列順序由胺基端排列至羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
在某些方面，此感興趣蛋白為人類抗體。術語「人類抗體」，如文中所用，希望係包括具有衍生自人類生殖細胞系免疫球蛋白序列之可變區和恆定區的抗體。本揭示文之人抗體可包括並非由人類生殖細胞系免疫球蛋白序列所編碼的胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機或定點突變或藉由活體內體細胞突變所導入的突變)，例如在CDR中及特別是在CDR3中。然而，術語「人類抗體」，如文中所用，不希望包括其中衍生自另一哺乳動物物種，例如小鼠的生殖細胞系CDR序列已嫁接至人類框架序列的抗體。
介白素4(IL-4)和介白素13(IL-13)為驅動過敏和第2型T幫手細胞(Th2)極化發炎過程的關鍵細胞激素。IL-4和IL-13訊號傳遞系經由異二聚體受體複合物媒介，其中IL-4受體α(IL-4Rα)為IL-4和IL-13訊號傳遞的共享受體亞單元。因此，IL-4Rα為一具吸引力的治療標靶，因為其提供阻斷IL-4和IL-13訊號傳遞之單一標靶。在某些方面，此感興趣蛋白為一抗-IL-4R抗體或其抗原-結合片段。抗hIL-4Rα的抗體係描述於例如美國專利編號5,717,072、7,186,809和7,605,237中。
在一些方面，此抗IL-4R抗體為一人類IgG抗體。在各種方面，此抗-IL-4R抗體為同型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或混合同型的人類抗體。在某些方面，此抗-IL-4R抗體為人類IgG1抗體。在某些方面，此抗-IL-4R抗體為人類IgG4抗體。在上文或文中所論述的任何方面中，此抗-IL-4R抗體可包括人類κ輕鏈。在上文或文中所論述的任何方面中，此抗-IL-4R抗體可包括人類λ輕鏈。
本揭示文之抗體，在某些方面，可為重組的人類抗體。術語「重組的人類抗體」，如文中所用，希望係包括藉由重組方法製備、表現、創建或分離的所有人類抗體，例如使用轉染到宿主細胞中的重組表現載體表現的抗體、從重組的、組合的人類抗體庫所分離的抗體，從就人類免疫球蛋白基因而言為基因轉殖的動物(例如小鼠)所分離的抗體(參見例如Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295)或藉由涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列之任何其他方法所製備、表現、創建或分離的抗體。此等重組人類抗體具有衍生自人類生殖細胞系免疫球蛋白序列的可變區和恆定區。然而，在某些方面，此等重組人類抗體係經活體外致突變(或，當使用就人類Ig序列而言為動物基因轉殖時，為活體內體細胞致突變)，且因此重組抗體之V H和V L區的胺基酸序列，為衍生自和與人類生殖細胞系V H和V L序列相關的同時，可能並非天然存在於活體內人類抗體生殖細胞系儲庫中之序列。
術語「抗體」，如文中所用，亦包括完整抗體分子的抗原結合片段術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」及諸如此類，如文中所用，係包括特異性結合一抗原用以形成一複合物之任何天然生成的、酵素性可獲得的、合成的或基因工程的多肽或糖蛋白。抗體之抗原結合片段可例如使用任何適合的標準技術，例如蛋白水解消化或涉及編碼抗體可變結構域和視需要恆定結構域的DNA操作和表現之重組基因工程技術，從完整的抗體分子衍生。此DNA為已知的及/或容易從例如市售來源、DNA庫(包括例如噬菌體-抗體庫)獲得，或可經合成。DNA可以化學，或藉由使用分子生物學技術定序和操作，例如，將一或多個可變及/或恆定結構域排列成適合的構型，或導入密碼子，創造半胱胺酸殘基，修飾，添加或刪除胺基酸等。
如文中所用，「抗體片段」係包括完整抗體的一部分，例如，舉例而言，抗體的抗原結合區或可變區。抗體片段的實例包括，但不限於Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv片段、Fv片段、dsFv雙抗體、dAb片段、Fd'片段、Fd片段和分離的互補決定區(CDR)區域，以及從抗體片段所形成的三抗體、四抗體、線性抗體、單鏈抗體分子和多特異性抗體。Fv片段為免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變區之組合，而ScFv蛋白為其中免疫球蛋白輕鏈和重鏈可變區係藉由胜肽連接子相連接的重組單鏈多肽分子。在某些方面，抗體片段係包括親代抗體的足夠胺基酸序列，其為與親代抗體結合相同抗原之片段；在某些方面，一片段係以與親代抗體相當的親和力結合此抗原及/或與親代抗體競爭與此抗原結合。可藉由任何方式製造抗體片段。例如，抗體片段可藉由完整抗體的片段化以酵素性或化學性產生及/或其可從編碼部分抗體序列的基因重組來產生。另一種選擇或另外地，抗體片段可全部或部分以合成產生。抗體片段可視需要包括單鏈抗體片段。另一種選擇或另外地，抗體片段可包括例如藉由雙硫鍵連接一起的多條鏈。抗體片段可視需要包括多分子復合物。功能性抗體片段典型地係包括至少約50個胺基酸及更典型地係包括至少約200個胺基酸。
術語「雙特異性抗體」係包括能選擇性結合二或多個表位的抗體。雙特異性抗體一般係包括二條不同的重鏈，各重鏈特異性結合一不同的表位—在二個不同的分子上(例如，抗原)或在相同的分子上(例如，在相同的抗原上)。若雙特異性抗體能選擇性結合二個不同的表位(一第一表位和一第二表位)，則第一重鏈對第一表位的親和力一般比第一重鏈對第二表位的親和力低至少一到二個或三個或四個數量級，反之亦然。由雙特異性抗體所辨識的表位可在相同或不同的靶標上(例如，在相同或不同的蛋白上)。例如，可藉由組合辨識相同抗原之不同表位的重鏈來製造雙特異性抗體。例如，編碼辨識相同抗原之不同表位的重鏈可變序列的核酸序列可與編碼不同重鏈恆定區的核酸序列融合，且此等序列可在表現一免疫球蛋白輕鏈的細胞中表現。
一典型的雙特異性抗體係具有二條重鏈，其各自具有三個重鏈CDR，接著一CHl結構域、絞鏈、CH2結構域和CH3結構域，以及不賦予抗原結合特異性但可與各重鏈結合的免疫球蛋白輕鏈，或可與各重鏈結合並可結合由重鏈抗原結合區所結合的一或多個表位，或可與各重鏈結合並能使一或二條重鏈與一或二個表位結合。BsAb可分為二大類，該等帶有Fc區(類-IgG)者和該等缺乏Fc區者，後者通常比包括Fc的IgG和類-IgG雙特異性分子小。類-IgG bsAb可具有不同的形式，例如，但不限於triomab、旋鈕入孔洞抗體IgG(kih IgG)、crossMab、orth-FabIgG、雙可變結構域Ig(DVD-Ig)、二合一或雙作用Fab(DAF)、IgG單鏈Fv(IgG-scFv)或κλ體。非-類-IgG不同形式包括串聯scFv、雙抗體形式、單鏈雙抗體、串聯雙抗體(TandAbs)、雙親和靶向分子(DART)、DART-Fc、奈米抗體或對藉由對接-和-鎖定(dock-and-lock)(DNL)方法所產生的抗體(Gaowei Fan, Zujian Wang & Mingju Hao, Bispecific antibodies and their applications, 8 JOURNAL OF HEMATOLOGY & ONCOLOGY 130; Dafne Müller & Roland E. Kontermann, Bispecific Antibodies, HANDBOOK OF THERAPEUTIC ANTIBODIES 265–310 (2014)，其全部教導係併入本文中)。製造bsAb的方法不限於以二種不同雜交瘤細胞株體細胞融合為基礎的四倍體技術、涉及化學交聯劑的化學接合以及利用重組DNA技術的遺傳方法。
如文中所用「多特異性抗體」係指對至少二種不同抗原具有結合特異性的抗體。雖然此等分子通常僅結合二種抗原(亦即雙特異性抗體，bsAb)，但文中所揭示的系統和方法亦可處理具有額外特異性的抗體，例如三特異性抗體和KIH三特異性抗體。
術語「單株抗體」如文中所用不限於經由雜交瘤技術所產生的抗體。單株抗體可藉由本項技術中可用或已知的任何方式衍生自一單一選植株，包括任何真核、原核或噬菌體選植株。可使用本項技術中已知的廣泛各種技術，包括使用雜交瘤、重組和噬菌體展示技術或其組合，製備可用於本揭示文的單株抗體。
「分離的抗體」，如文中所用，希望係指實質上無具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，特異性結合hIL-4Rα的分離的抗體為實質上無特異性結合hIL-4Rα以外的抗原之抗體)。
術語「特異性結合」或諸如此類係指抗體或其抗原結合片段與抗原形成一複合物，其在生理條件下為相當穩定的。特異性結合其特徵為至少約1x10 -6M或更大的解離常數。測定二個分子是否特異性結合之方法已為本項技術所熟知並包括，例如平衡透析、表面電漿共振及諸如此類。然而，特異性結合hIL-4Rα的分離抗體可能與其他抗原，例如來自其他物種的IL-4Rα分子(直系同源物)具有交叉反應性。在本揭示文的內容中，結合hIL-4Rα以及一或多種另外抗原的多特異性(例如，雙特異性)抗體被視為「特異性結合」hIL-4Rα。再者，一分離的抗體可能實質上無其他細胞物質及/或化學物。然而，在某些情況下，一分離的抗體可能與由產生抗IL-4R抗體的哺乳動物細胞系(例如，CHO細胞)所表現的磷脂酶共純化。
根據本揭示文之特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段，係包括分別包含SEQ ID NO：3-4-5之胺基酸序列的重鏈互補決定區HCDR1-HCDR2-HCDR3。根據本揭示文之特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括分別包含SEQ ID NO：6-7-8之胺基酸序列的輕鏈互補決定區LCDR1-LCDR2-LCDR3。在特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括分別包含SEQ ID NO：3-4-5-6-7-8之胺基酸序列的CDR，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3。
在特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括分別包含SEQIDNO:3-4-5之胺基酸序列的重鏈互補決定區HCDR1-HCDR2-HCDR3，和具有與SEQIDNO:1的胺基酸序列具有至少90%序列相同性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性)的重鏈可變區(HCVR)。在特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括分別包含SEQIDNO: 6-7-8之胺基酸序列的輕鏈互補決定區LCDR1-LCDR2-LCDR3，和具有與SEQIDNO:2的胺基酸序列具有至少90%序列相同性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性)的輕鏈可變區(HCVR)。在特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括：分別包含SEQIDNO:3-4-5之胺基酸序列的重鏈互補決定區HCDR1-HCDR2-HCDR3，和具有與SEQIDNO:1的胺基酸序列具有至少90%序列相同性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性)的重鏈可變區(HCVR)；以及分別包含SEQIDNO: 6-7-8之胺基酸序列的輕鏈互補決定區LCDR1-LCDR2-LCDR3，及具有與SEQIDNO:2的胺基酸序列具有至少90%序列相同性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列相同性)的輕鏈可變區(HCVR)。
在特定方面，此抗hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)。在特定方面，此抗-hIL-4R抗體或其抗原結合片段係包括一包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)。在特定方面，此抗hIL-4R抗體或抗原結合片段係包括一對包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列的HCVR/LCVR胺基酸序列對。在某些方面，此抗IL-4R抗體係包括一分別包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列的HCVR/LCVR，和人類IgG1重鏈恆定區。在某些方面，此抗IL-4R抗體係包括一分別包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列的HCVR/LCVR，和人類IgG4重鏈恆定區。在某些方面，此抗IL-4R抗體係包括一分別包含SEQ ID NO：1/2之胺基酸序列的HCVR/LCVR，和人類IgG1或IgG4重鏈恆定區。在某些方面，此抗IL-4R抗體係包括一包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的重鏈，和一包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的輕鏈。在某些方面，此抗-IL-4R抗體為度普利尤單抗。
可用於本揭示文方法之內文中的其他抗-IL-4R抗體包括，例如，本項技術中已知和稱為AMG317的抗體(Corren et al., 2010, Am J Respir Crit Care Med., 181(8):788-796)，或MEDI 9314，或美國專利號7,186,809、美國專利號7,605,237、美國專利號7,638,606、美國專利號8,092,804、美國專利號8,679,487、美國專利號8,877,189、美國專利號10,774,141；美國專利申請公開案號US2021/0238294；或國際專利公開案號WO2019/228405、WO2020/096381、WO 2020/135471、WO2020/135710或WO 2020/239134中所述之任何抗-IL-4R抗體，其各自內容係以引用的方式併入本文中。
在某些方面，此抗-IL-4R抗體係包括下表1中所列的一或多個CDR、HCVR及/或LCVR序列。
包含在本發明之醫藥調配物內的抗體或其抗原結合片段之量可依照調配物所欲的特定性質以及此調配物所希望使用的特定情況和目的而變。在特定方面，此醫藥調配物可含有約1 mg/mL至約500 mg/mL的抗體；約5 mg/mL至約250 mg/mL的抗體；約5 mg/mL至約200 mg/mL的抗體；約15 mg/mL至約200 mg/mL的抗體；約25 mg/mL至約200 mg/mL的抗體；約50 mg/mL至約200 mg/mL的抗體；約100 mg/mL至約200 mg/mL的抗體；約125 mg/mL至約175 mg/mL的抗體；或約150 mg/mL至約200 mg/mL的抗體。例如，本揭示文之調配物可為包括約1 mg/mL；約2 mg/mL；約5 mg/mL；約10 mg/mL；約15 mg/mL；約20 mg/mL；約25 mg/mL；約30 mg/mL；約35 mg/mL；約40 mg/mL；約45 mg/mL；約50 mg/mL；約55 mg/mL；約60 mg/mL；約65 mg/mL；約70 mg/mL；約75 mg/mL；約80 mg/mL；約85 mg/mL；約90 mg/mL；約95 mg/mL；約100 mg/mL；約105 mg/mL；約110 mg/mL；約115 mg/mL；約120 mg/mL；約125 mg/mL；約130 mg/mL；約135 mg/mL；約140 mg/mL；約145 mg/mL；約150 mg/mL；約155 mg/mL；約160 mg/mL；約165 mg/mL；約170 mg/mL；約175 mg/mL；約180 mg/mL；約185 mg/mL；約190 mg/mL；約195 mg/mL;或約200 mg/mL之特異性與hIL-4Rα結合之抗體或其抗原結合片段的液體調配物。在特定方面，此醫藥調配物為可含有5 ± 0.5 mg/mL至200 ± 20 mg/mL的抗體；15 ± 1.5 mg/mL至200 ± 20 mg/mL的抗體；25 ± 2.5 mg/mL至200 ± 20 mg/mL的抗體；50 ± 5 mg/mL至200 ± 20 mg/mL的抗體；100 ± 10 mg/mL至200 ± 20 mg/mL的抗體；150 ± 10 mg/mL的抗體；或175 ± 10 mg/mL’抗體之液體調配物。在某些方面，此醫藥調配物係含有140 ± 5 mg/mL至160 ± 5 mg/mL的抗-IL-4R抗體。在某些情況下，此醫藥調配物係含有165 mg/mL ± 5 mg/mL至185 mg/mL ± 5 mg/mL的抗-IL-4R抗體。在某些情況下，此醫藥調配物係含有150 mg/mL ± 5 mg/mL的抗-IL-4R抗體。在某些情況下，此醫藥調配物係含有175 mg/mL ± 5 mg/mL的抗-IL-4R抗體。
本揭示文係涵蓋具有不同於文中所揭示的示例分子之胺基酸序列但保留結合同源抗原，例如hIL-4R之能力的抗體。當與親代序列相較時，此等變體分子可包括一或多個胺基酸添加、刪除或取代，但展現出與文中所論述之抗體基本上等同的生物活性。
本揭示文係包括與文中所述的任何示例抗體為生物等效之抗原結合分子。在某些方面，此抗原結合分子為度普利尤單抗的生物等效物。若，例如，二種抗體為醫藥同等物或醫藥替代物，當在相似的實驗條件下以單劑量或多劑量的相同莫耳劑量給藥時，其吸收率和吸收程度並無顯示出顯著差異，則其係被視為是生物等效的。若某些抗體在吸收程度上為相等的但其吸收速率不同，則其將被視為等效物或醫藥替代物，但仍可被視為生物等效，因為此等吸收速率上的差異為有意為之，並反映在標籤中，對於例如，在長期使用上，達到有效體內藥物濃度並非必需的，並被視為對所研究的特定藥物產品為醫學上不顯著的。
在一方面，若二種抗體在其安全性、純度和效力上並無臨床上有意義的差異，則其為生物等效的。在一方面，若病患可在參考產品和生物產品之間轉換一或多次，當相較於無此轉換之持續治療時，並不會增加不良效應之風險，包括致免疫性的臨床顯著變化或降低有效性，則此二種抗體為生物等效的。
生物等效性可藉由活體內和活體外方法驗證。生物等效性測量包括，例如，(a)在人類或其他哺乳動物中的活體內試驗，其中係以血液、血漿、血清或其他生物液體中的抗體或其代謝物的濃度作為時間的函數進行測量；(b)與人體活體內生物利用性數據相關並合理預測之活體外試驗；(c)在人體或其他哺乳動物中的活體內試驗，其中係以抗體(或其靶標)的適當急性藥理效用作為時間的函數進行測量；和(d)建立一抗原結合蛋白之安全性、有效性或生物利用性或生物等效性之控制良好的臨床試驗。 醫藥調配物
如文中所用，「樣本」可得自生物過程的任何步驟，例如細胞培養液(CCF)、收取的細胞培養液(HCCF)、下游處理中的任何步驟、原料藥(DS)或包含最終調配產品的藥物產品(DP)。
術語「組成物」、「調配物」和「調配的原料藥」(FDS)如本揭示文中所用係指包含在藥物產品中的二或更多種醫藥成份之組合。組成物、調配物或FDS可為，例如，包括一活性醫藥成份如抗體，和賦形劑如安定劑或界面活性劑之液體組成物。組成物、調配物或FDS可包括多種賦形劑。組成物、調配物或FDS亦可包括其他組成份，例如與感興趣蛋白共純化的宿主細胞蛋白。
術語「藥物產品」(DP)如本揭示文中所用係指包括一定量的FDS用於包裝、運輸或給藥之劑型。例如，藥物產品可為裝有一定體積的FDS供投予病患之預充填注射器。
如文中所用，「蛋白醫藥產品」、「生物醫藥產品」、「醫藥調配物」、「醫藥組成物」或「生物治療劑」係包括在性質上可為完全或部分生物性的活性成份。在一方面，蛋白醫藥產品可包括胜肽、蛋白、融合蛋白、抗體、抗原、疫苗、胜肽-藥物接合物、抗體-藥物接合物、蛋白-藥物接合物、細胞、組織或其組合。在另外方面，蛋白醫藥產品可包括重組、工程化、修飾、突變或截短形式之胜肽、蛋白、融合蛋白、抗體、抗原、疫苗、胜肽-藥物接合物、抗體--藥物接合物、蛋白-藥物接合物、細胞、組織或其組合。
在某些方面，本發明之醫藥調配物係包括：(i)特異性與hIL-4Rα結合的人抗體；(ii)一或多種緩衝劑；(iii)熱安定劑；(iv)界面活性劑(例如，有機共溶劑)；和(v)黏度調節劑。若額外的組份不顯著干擾調配物的黏度和穩定性，則這些組份可包括在本揭示文之調配物中。包括在本揭示文中的特定示例組份和調配物係詳述如下。
本揭示文之醫藥調配物，在特定方面可為流體調配物。如文中所用，詞語「流體調配物」係指在約2ºC至約45ºC主要以流體狀態存在的至少二種組份的混合物。流體調配物尤其包括液體調配物。流體調配物，依照其特定的組成份而定，可為低、中或高黏度。 宿主蛋白
如文中所用，術語「宿主細胞蛋白」(HCP)係包括衍生自一製造重組蛋白之宿主細胞的蛋白。宿主細胞蛋白可為過程-相關的雜質，其可能衍生自製造過程並可能包括三大類：細胞基質衍生的、細胞培養衍生的和下游衍生的。細胞基質衍生的雜質包括，但不限於源自宿主生物體的蛋白和核酸(宿主細胞基因組、載體或總DNA)。細胞培養衍生的雜質包括，但不限於誘導劑、抗生素、血清和其他培養基組份。下游衍生的雜質包括，但不限於酵素、化學物和生化處理試劑(例如溴化氰、胍、氧化劑和還原劑)、無機鹽類(例如重金屬、砷、非金屬離子)、溶劑、載劑、配體(例如單株抗體)和其他可浸出物。
基於許多可測量的因子，生物治療產品中宿主細胞蛋白的存在可被認為是更高或更低的風險。其中一個因子為生物治療產品中HCP雜質的濃度或豐度(數量)。HCP在夠低的豐度下可能沒有明顯的影響，如，例如藉由ELISA或質譜法測量。HCP的量可能代表相當大的風險，其可能視為是產品中不可接受的量並可能作為關鍵品質屬性(CQA)進行監測，其可能依HCP的特定身份而定。可能已知特定的HCP在特定量上存在風險，例如取決於作為酵素的HCP之酵素活性量。
相關地，HCP存在的關鍵性可能取決於此HCP的功能，特別是與生物治療產品之組份相關的功能。例如，可能或已知降解存在感興趣生物治療產品中的聚山梨醇酯之HCP酯酶或脂酶可能會密切監測，並可能對生物治療產品中允許存在多少HCP雜質具有較低的閾值。其他特別關注的HCP可能為，例如，可能或已知降解生物治療產品中感興趣蛋白的蛋白酶，或當施予一對象時可能或已知引起免疫反應之致免疫性HCP。 液相層析
如文中所用，術語「液相層析」係指一種其中由液體所攜帶的生物/化學混合物可因組份流經(或進入)固定液相或固相時的差異分佈結果而將組份分離之過程。液相層析的非限制性實例包括逆相液相層析、離子交換層析、粒徑篩析層析、親和層析、疏水相互作用層析、親水相互作用層析或混合模式層析。使用層析法分離的分析物具有獨特的滯留時間，反映了分析物通過層析管柱的速度。可使用層析圖比較分析物，層析圖係將一滯留時間繪製在一軸上，並將測量信號繪製在另一軸上，其中測量信號可由例如UV偵測或螢光偵測產生。在某些方面，可將包括至少一酯酶或脂酶的樣本，例如一原料藥，進行應激，例如攪拌應激或熱應激，及隨後進行層析步驟用以移除任何HMW物類。
在特定方面，將生物樣本進行親和層析來製造一感興趣蛋白可能為有利的。層析物質能選擇性或特異性地與感興趣蛋白結合或相互作用。此等層析物質的非限制性實例包括A蛋白和G蛋白。亦包括，包含例如能與感興趣蛋白結合或相互作用的蛋白或其部分之層析物質。
親和層析可涉及讓一生物樣本經受包括一適合A蛋白樹脂的管柱。當用於文中時，術語「A蛋白」係涵蓋從其天然來源回收的A蛋白、合成產生的A蛋白(例如，藉由胜肽合成或藉由重組技術)，以及其保留結合具有C H2/C H3區之蛋白能力的變體。在特定方面，A蛋白樹脂可藉由與分子的Fc部分特異性相互作用(若分子具有該區)，用於以親和力為基礎的製造和分離各種抗體同型。
有數種市售來源的A蛋白樹脂。適合的樹脂包括，但不限於 MabSelect PrismA、MabSelect SuRe™、MabSelect SuRe LX、MabSelect、MabSelect SuRe pcc、MabSelect Xtra、來自 Cytiva的rProtein A Sepharose、ProSep HC、ProSep Ultra、來自EMD Millipore的ProSep Ultra Plus、來自ThermoFisher的MabCapture，以及來自JSR Life Sciences的Amsphere™ A3。
親和管柱可在樣本載入之前以適合的緩衝液平衡。載入管柱後，可使用適合的清洗緩衝液將管柱清洗一或多次。然後可使用適當的溶析緩衝液，例如，甘胺酸-HCl、乙酸或檸檬酸溶析管柱。可使用熟習本項技術者熟知的技術例如UV偵測器監測溶析液。可收集感興趣的溶離份及然後準備進一步處理。
陽離子交換層析(CEX)係使用陽離子交換層析物質。陽離子交換層析可進一步細分為例如強陽離子交換(SCX)或弱陽離子交換，其係依照所用的陽離子交換層析物質而定。具有磺酸基團(S)的陽離子交換層析物質可用於強陽離子交換劑，而具有羧甲基基團(CM)的陽離子交換層析物質可用於弱陽離子交換劑。強陽離子交換劑包括，例如使用甲基硫酸鹽功能基團的SOURCE S和使用磺丙基功能基團的SP Sepharose。弱陽離子交換劑包括，例如，使用羧甲基功能基團的CM-纖維素。SCX可能為較佳的，因為可在不會失去強陽離子交換劑的電荷下使用範圍更廣的pH緩衝液，而得以有效分離具有廣pI範圍的分析物。
可從許多公司取得不同名稱的陽離子交換層析物質，例如，Bio-Rex、Macro-Prep CM(可得自美國加州赫拉克勒斯的BioRad Laboratories)、弱陽離子交換劑WCX 2(可得自Ciphergen, Fremont, CA, USA)、Dowex MAC-3(可得自Dow chemical company, Midland, Mich., USA)、Mustang C(可得自Pall Corporation, East Hills, N.Y., USA)、Cellulose CM-23、CM-32、CM-52、hyper-D 和 partisphere(可得自Whatman plc, Brentford, UK)、Amberlite IRC 76、IRC 747、IRC 748、GT 73(可得自Tosoh Bioscience GmbH, Stuttgart, Germany)、CM 1500、CM 3000(可得自BioChrom Labs, Terre Haute, Ind., USA)和CM-Sepharose Fast Flow(可得自GE Healthcare, Life Sciences, Germany)。此外，市售的陽離子交換樹脂進一步包括固定在瓊脂糖上的羧甲基纖維素、Bakerbond ABX、磺丙基(SP) (例如SP-Sepharose Fast Flow或SP-Sepharose High Performance，可得自GE Healthcare-Amersham Biosciences Europe GmbH, Freiburg, Germany)和固定在瓊脂糖上的磺醯基(例如 S-Sepharose Fast Flow，可得自GE Healthcare, Life Sciences, Germany)。
陽離子交換層析物質包括進行離子交換和疏水性相互作用技術組合的混合模式層析物質(例如，Capto adhere、Capto MMC、MEP HyperCell、Eshmuno HCX等)、進行陰離子交換和陽離子交換技術之組合的混合模式層析物質(例如羥基磷灰石、陶瓷羥基磷灰石等)及諸如此類。在某些方面，CEX可用於從樣本中移除HMW物類，例如移除在攪拌或熱應激後聚集成HMW物類的蛋白。
在某些方面，包括感興趣蛋白的樣本係進行至少一個陰離子交換(AEX)分離步驟。陰離子交換填充床層析係以結合實體(目標蛋白或雜質)與固定在層析媒劑上的功能基團之間的離子相互作用為基礎。效能可能為移動相、功能基團和樹脂主架構的函數。陰離子交換物質與陽離子交換物質的使用部分係以感興趣蛋白的局部電荷為基礎。陰離子交換層析可與其他層析製程組合使用，例如親和層析、粒徑篩析層析、疏水相互作用層析以及熟習技術者已知的其他層析模式。
在層析分離的背景下，層析管柱係用來容納層析支撐物質(樹脂或固相)。將包括感興趣蛋白的樣本載入一特定的層析柱。然後可使用適合的清洗緩衝液將管柱進行一或多個清洗步驟。未吸附到樹脂上的樣本組份可能會流過管柱。已吸附到樹脂上的組份可使用適當的溶析緩衝液差異性溶析。
陰離子試劑可由下列組成之群中選出：乙酸鹽、氯化物、甲酸鹽及其組合。陽離子劑可由下列組成之群中選出：Tris、精胺酸、鈉及其組合。緩衝劑可由下列組成之群中選出：吡啶、哌𠯤、L-組胺酸、Bis-Tris、Bis-Tris丙烷、咪唑、N-乙基嗎福啉、TEA(三乙醇胺)、Tris、嗎福啉、N-甲基二乙醇胺、AMPD(2- 胺基-2-甲基-1,3-丙二醇)、二乙醇胺、乙醇胺、AMP(2-胺基-2-甲基-1-丙醇)、哌𠯤、1,3-二胺基丙烷和哌啶。
填充的陰離子交換層析管柱、陰離子交換膜裝置、陰離子交換單片裝置或深度過濾媒劑可以結合-溶析模式、流通模式或混合模式操作，其中蛋白表現出與層析物質結合且亦可使用與載入緩衝劑相同或實質上相似的緩衝劑從此等物質中清洗出。
在結合-溶析模式中，管柱或膜裝置首先在特定蛋白將吸附到以樹脂為基礎的基質的條件下以具有適當離子強度和pH的緩衝液調節。例如，在進料載入期間，由於靜電吸引，感興趣蛋白可吸附到樹脂上。以平衡緩衝液或具有不同pH及/或電導度的另外緩衝液清洗管柱或膜裝置後，藉由增加溶析緩衝液的離子強度(亦即電導度)與溶質競爭陰離子交換基質的帶電部位來進行產品回收。改變pH及因而改變溶質的電荷為進行溶質溶析的另外方式。導電度或pH的變化可能是漸進的(梯度溶析)或逐步的(分步溶析)。
在流通模式中，管柱或膜裝置係在一選定的pH和導電度下操作，使得感興趣蛋白不會與樹脂或膜結合，同時酸性物質將保留在管柱上或相較於感興趣蛋白將具有具有一獨特的溶析樣貌。在此策略的背景下，酸性物類將在適合的條件下與層析物質相互作用或結合，而感興趣蛋白和感興趣蛋白的特定聚集物及/或片段將流過層析管柱。
在某些方面，AEX步驟係以負離子模式(流通模式)進行，其中帶負電荷的過程相關雜質被吸附到固定的帶正電荷之配體上，而感興趣蛋白則流過。
在某些方面，載入AEX管柱之樣本的pH(「載入的pH」)可經選擇用以降低樣本中的酯酶或脂酶活性。在某些方面，AEX負載pH可為約7.8，約7.9，約8.0，約8.1，約8.2，約8.3，介於約7.8和約8.3之間，介於約7.8和約8.0之間，介於約8.0和約8.3之間，或介於約8.0和約8.2之間。
陰離子交換樹脂的非限制實例包括二乙基胺基乙基(DEAE)、四級胺基乙基(QAE)和四級胺(Q)基團。另外的非限制性實例包括：Poros 50PI和Poros 50HQ，其為一種具有由交聯的聚[苯乙烯-二乙烯基苯]所組成之骨架的剛性聚合物微珠，；Poros 50XQ；Capto Q Impres和Capto DEAE，其為高流動瓊脂糖珠；Capto Adhere；Q Sepharose Fast Flow；Toyopearl QAE-550、Toyopearl DEAE-650 和 Toyopearl GigaCap Q-650，其為聚合物基珠；Fractogel® EMD TMAE Hicap，其為一種具有觸角型離子交換劑的合成聚合樹脂，；Sartobind STIC® PA nano，其為一種具有初級胺配體的鹽-耐受層析膜；Sartobind Q nano，其為一種強陰離子交換層析膜；CUNO BioCap，其為一種由無機助濾劑、精製纖維素和離子交換樹脂所建構的zeta-plus深度過濾媒劑；XOHC，其為一種由無機助濾劑、纖維素和混合纖維素酯所建構的深層過濾媒劑；和Unosphere Q。在某些方面，係選擇具有較大的孔徑的樹脂，用於增加暴露於帶負電荷物類的表面積。
可加入添加劑例如聚乙二醇(PEG)、清洗劑、胺基酸、糖、離液劑用以增強分離效能，達到更佳的分離、回收及/或產物品質。
粒徑篩析層析(SEC)或凝膠過濾係仰賴組份的分離作為其分子粒徑的函數。分離係依物質在多孔固定相中花費的時間相較於在流體中時間而定。分子駐留在孔隙中的概率係依分子和孔隙的大小而定。此外，物質滲透到孔隙中的能力係由大分子的擴散遷移力來決定，其就小的大分子而言為較高的。非常大的大分子可能根本無法穿透固定相的孔隙；而就非常小的大分子而言，穿透的概率接近於一。較大分子尺寸之組份通過固定相的速度更快，而小分子尺寸的組份具有較長通過固定相孔隙的路徑且因此在固定相中滯留更久。
從SEC管柱溶析出的分析物以溶析時間為基準可分離成溶離份。例如，比感興趣蛋白之功能形式，例如單體形式更早溶析的分析物可廣泛地歸類為高分子量(HMW)物類。HMW溶離份可進一步細分為例如極高分子量(vHMW)溶離份和二聚物溶離份(代表感興趣蛋白二聚物之溶析時間)。比感興趣蛋白之功能形式更晚溶析的分析物可廣泛地歸類為為低分子量(LMW)物類，並可進一步細分為LMW溶離份和較晚的尾部溶離份。類似地，除了感興趣蛋白，例如脂酶之外，樣本組份可能形成更高和更低分子量的物類，其可使用SEC分離。
層析物質可包括粒徑篩析物質，其中粒徑篩析物質為樹脂或膜。用於粒徑篩析的基質較佳地為惰性凝膠介質，其可為交聯多醣的複合物，例如球形微珠形式的交聯瓊脂糖及/或葡聚醣。交聯程度決定了存在膨脹凝膠微珠中的孔隙大小。大於特定尺寸的分子不會進入凝膠微珠，且因此快速度通過層析床。較小的分子，如清洗劑、蛋白、DNA及諸如此類，根據其大小和形狀以不同程度進入凝膠微珠，在其通過層析床時會受到阻礙。因此，分子一般係以遞減的分子大小順序溶析出。在某些方面，SEC可用於從樣本中移除HMW物類，例如移除在攪拌或熱應激後聚集成HMW物類的蛋白。
術語「疏水性相互作用媒劑」係指支撐結構和疏水基團的組合，其中疏水基團係固定在支撐結構上。媒劑可為層析媒劑的形式，例如，以填充床柱形式保持的微珠或其他顆粒，以膜的形式，或可容納一包含感興趣蛋白和污染物之液體的任何形式。因此，支撐結構包括瓊脂糖微珠(例如sepharose)、矽氧微珠、纖維素膜、纖維素微珠、親水性聚合物微珠等。疏水基團為媒劑的作用端，其係與疏水分子和蛋白的疏水表面結合。可藉由選擇疏水基團來控制媒劑的疏水性程度。例如，可將下列基團固定到媒劑基質上用以產生疏水性增加的疏水性相互作用媒劑，亦即從低疏水性到高疏水性：醚、丁基、辛基和苯基。烷基可為直鏈或支鏈的。就疏水相互作用層析和媒劑的綜述，請參見Kuczewski et al., “Development of a polishing step using a hydrophobic interaction membrane adsorber with a PER.C6®-derived recombinant antibody,” Biotech. Bioeng. 105(2):296-305 (2010)；Roettger和Ladisch, “Hydrophobic interaction chromatography,” Biotechnol Adv. 7(1):15-29 (1989)；Shukl和Sanchayita, “Process for purifying proteins in a hydrophobic interaction chromatography flow-through fraction,” 美國專利編號7,427,659 B2, Sep. 23, 2008；及Müller和Franzreb, “Suitability of commercial hydrophobic interaction sorbents for temperature-controlled protein liquid chromatography under low salt conditions,” J. Chroma. A 1260:88-96 (2012)。
疏水性相互作用媒劑係用於稱為疏水相互作用層析(HIC)的方法中，並用於將感興趣蛋白與產品和製程相關的污染物分離。當感興趣蛋白為於宿主細胞中製造及/或從宿主細胞純化時，此產品和製程相關的污染物稱為宿主細胞蛋白(HCP)。來自中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，一種常見的生物治療劑製造宿主細胞之HCP可稱為CHOP(中國倉鼠卵巢蛋白)。在某些情況下，係將含有感興趣蛋白(POI)和HCP之混合物施用於設計用來促進POI中的疏水性基團與HIC媒劑的疏水基團結合之緩衝液中的HIC媒劑。POI藉由結合疏水基團黏附在HIC媒劑上，而某些HCP無法結合並出現在清洗緩衝液中。然後使用一促進POI從HIC疏水基團解離的緩衝液溶析POI，從而將POI與不欲的HCP分離。
在某些情況下，HIC疏水基團係優先與某些污染物結合，例如HCP，並從HIC流通液中收集POI。本揭示文闡述了以流通模式使用HIC的實例，其中污染物HCP之群族，包括酯酶活性，仍保持與疏水性相互作用媒劑結合。
在某些情況下，設計用來結合具有親脂屬性的特定蛋白之親和層析可代替HIC或與HIC協同使用。因為某些酯酶，例如一般而言脂酶，或特言之磷脂酶，係與三酸甘油酯或磷脂結合，因此可使用模擬該等脂質的分子來捕捉酯酶。例如，「荳蔻醯化ADP核糖基化因子1」(又稱為「myrARF1」)可用於捕捉脂酶並讓POI保持未結合及流過。就製備myrARF1親和管柱，myrARF1可經由N-羥基琥珀醯亞胺活化與Q-sepharose結合(參見Morgan et al., “Identification of phospholipase B from Dictyostelium discoideum reveals a new lipase family present in mammals, flies and nematodes, but not yeast,” Biochem. J. 382: 441-449 (2004))。 質譜
如文中所用，術語「質譜儀」係包括能夠鑑別特定分子種類並測量其精確質量之裝置。此術語係指包括任何可在其中表徵一多肽或胜肽之分子偵測器。質譜儀可包括三個主要部分：離子來源、質量分析儀和偵測器。離子來源的角色為製造氣相離子。分析物原子、分子或團簇可轉移到氣相中並同時(如電噴霧電離)或經由個別的過程離子化。離子來源的選擇取決於應用。
在某些方面，質譜儀可為串聯質譜儀。如文中所用，術語「串聯質譜」係包括一種其中藉由使用多階的質量選擇和質量分離來獲得樣本分子上的結構資訊之技術。一先決條件為此樣本分子係轉化為氣相並離子化，以便在第一個質量選擇步驟之後以可預測和可控制的方式形成碎片。MS/MS或MS 2之執行可藉由首先選擇和分離一前驅物離子(MS 1)，並將其片段化用以獲得有意義的資訊。串聯MS已成功地與廣泛各種分析儀組合來執行。就特定應用所組合之分析儀可藉由許多不同的因素，例如靈敏度、選擇性和速度，以及尺寸、成本和可用性來決定。串聯MS法的主要二類為空間串聯和時間串聯，但亦有其中時間串聯分析儀在空間偶合或與空間串聯分析儀偶合之混合體。串聯空間質譜儀係包括離子來源、前驅物離子活化裝置和至少二個非捕捉質量分析儀。可設計特定的m/z分離功能，以便在儀器的一個部分中選擇離子，在中間區域解離，然後將產物離子傳輸到另外的分析儀供m/z分離和數據採擷。在時間串聯中，離子來源中產生的質譜儀離子可在相同的物理裝置中被捕捉、隔離、片斷化和m/z分離。
由質譜儀所鑑定的胜肽可用作為完整蛋白及其轉譯後修飾或其他修飾之替代代表。其可用於藉由相關聯實驗和理論MS/MS數據來定性蛋白，後者是從蛋白序列數據庫中可能的胜肽所產生。定性可包括，但不限於定序蛋白片段之胺基酸、測定蛋白定序、測定蛋白再次定序、定位轉譯後修飾或鑑定轉譯後修飾，或可比性分析或其組合。
在某些示例方面，質譜儀可在奈米電噴灑(nanoelectrospray)或奈米噴灑(nanospray)上操作。術語「奈米電噴灑」或「奈米噴灑」如文中所用係指在非常低的溶劑流速下進行電噴灑，典型地每分鐘數百奈升的樣本溶液或更低，通常不使用外部溶劑輸送。形成奈米電噴灑的電噴灑輸液裝置可使用靜態奈米電噴灑發射器或動態奈米電噴灑發射器。靜態奈米電噴灑發射器係在較長時間內對小樣本(分析物)溶液體積進行連續分析。動態奈米電噴灑發射器係使用毛細管柱和溶劑輸送系統在質譜儀分析之前對混合物進行層析分離。
在某些方面，質譜分析可在天然條件下進行。如文中所用，術語「天然條件」可包括在保存分析物中的非共價相互作用之條件下進行質譜分析。就天然MS的詳細評論，請參考下列評論：Elisabetta Boeri Erba & Carlo Petosa, The emerging role of native mass spectrometry in characterizing the structure and dynamics of macromolecular complexes, 24 PROTEIN SCIENCE 1176–1192 (2015)。
如文中所用，術語「數據庫」係指可能存在於樣本中的蛋白序列之編譯合集，例如FASTA格式的檔案形式。相關的蛋白序列可能衍生自正在研究之物種的cDNA序列。可用於搜尋相關蛋白序列的公共數據庫包括由例如Uniprot或Swiss-prot所託管的數據庫。可使用在文中稱為「生物資訊學工具(bioinformatics tool)」的工具搜訊數據庫。生物資訊學工具係提供針對數據庫中所有可能的序列搜尋未解釋之MS/MS譜圖的能力，以及提供已解釋(註釋)的MS/MS譜圖之輸出。此等工具的非限制示例有Mascot (www.matrixscience.com)，Spectrum Mill (www.chem.agilent.com)，PLGS (www.waters.com)，PEAKS (www.bioinformaticssolutions.com)，Proteinpilot (download.appliedbiosystems.com/proteinpilot)，Phenyx (www.phenyx-ms.com)，Sorcerer (www.sagenresearch.com)，OMSSA (www.pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/omssa/)，X!Tandem (www.thegpm.org/TANDEM/)，Protein Prospector (prospector.ucsf.edu/prospector/mshome.htm)，Byonic (www.proteinmetrics.com/products/byonic)或Sequest (fields.scripps.edu/sequest)。 調配物賦形劑
本揭示文之醫藥調配物係包括一或多種賦形劑。術語「賦形劑」，如文中所用，係指添加到調配物中用以提供所欲的稠度、黏度或穩定效用的任何非治療劑。
本揭示文之醫藥調配物亦可包括一緩衝劑或緩衝系統，其係用於維持穩定的pH並幫助穩定感興趣蛋白。在某些方面，此緩衝劑或緩衝系統係包括至少一種具有緩衝範圍與pH 5.5至6.3之範圍完全或部分重疊的緩衝液。在各種方面，此調配物的pH為5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2或6.3。在某些方面，此調配物具有5.9±0.3之pH。在某些方面，此調配物具有5.9±0.2之pH。在某些方面，此調配物具有5.9±0.1之pH。在特定方面，此緩衝液係包括組胺酸緩衝劑。在特定方面，此緩衝液包括乙酸鹽緩衝劑。在特定方面，此緩衝液(例如，組胺酸及/或乙酸鹽)係以約1 mM至約40 mM，約5 mM至約30 mM，約10 mM至約15 mM；或約15 mM至約25 mM的濃度存在。在某些方面，此緩衝液係包括濃度15 mM至25 mM之組胺酸緩衝劑。在某些方面，此緩衝液係包括濃度20 mM ± 2 mM的組胺酸緩衝劑。在某些情況下，此組胺酸緩衝劑係以15 mM、16 mM、17 mM、18 mM、19 mM、20 mM、21 mM、22 mM、23 mM、24 mM或25 mM的濃度存在。在某些方面，此緩衝液係包括濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽緩衝劑。在某些方面，此緩衝液係包括濃度12.5 mM ± 1.25 mM的乙酸鹽緩衝劑。在某些情況下，此乙酸鹽緩衝劑係以10 mM、10.5 mM、11 mM、11.5 mM、12 mM、12.5 mM、13 mM、13.5 mM、14 mM、14.5 mM或15 mM的濃度存在。在某些方面，本揭示文之醫藥調配物係包括上述任何濃度的組胺酸和乙酸鹽緩衝液。在某些情況下，此調配物係含有濃度15 mM至25 mM的組胺酸緩衝劑和濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽緩衝劑。在某些情況下，此調配物係含有濃度20 mM ± 2 mM的組胺酸緩衝劑和濃度12.5 mM ± 1.25 mM的乙酸鹽緩衝劑。
本揭示文之醫藥調配物亦可包括一或多種碳水化合物，例如一或多種糖類。糖可為還原糖或非還原糖。「還原糖」係包括，例如，具有酮基或醛基的糖以及含有反應性半縮醛基團，其能讓糖用作為還原劑。還原糖的特定實例包括果糖、葡萄糖、甘油醛、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和麥芽糖。非還原糖可包括變旋碳(anomeric carbon)，其為一縮醛及實質上不與胺基酸或多肽反應而引發梅納反應(Maillard reaction)。非還原糖的特定實例包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、三氯蔗糖、松三糖和棉子糖。糖酸包括，例如糖酸、葡糖酸鹽和其他多羥基糖及其鹽類。在某些方面，此糖為蔗糖。在某些情況下，此糖(例如蔗糖)係用作為感興趣蛋白的熱穩定劑。
本揭示文之醫藥調配物中含有的糖量(例如，蔗糖)將依照特定情況和使用此調配物的預期目的而變。在特定方面，此調配物可含有約0.1%至約20%糖；約0.5%至約20%糖；約1%至約20%糖；約2%至約15%糖；約3%至約8%糖；或約4%至約6%糖。例如，本揭示文之醫藥調配物可包括約0.5%；約1.0%；約1.5%；約2.0%；約2.5%；約3.0%；約3.5%；約4.0%；約4.5%；約5.0 %；約5.5%；約6.0%；約6.5%；約7.0%；約7.5%；約8.0%；約8.5%；約9.0%；約9.5%；約10.0%；約15%；或約20%糖(例如蔗糖)。在某些方面，調配物中含有約5%糖(例如蔗糖)。在某些方面，調配物中含有約5%±0.5%糖(例如蔗糖)。上文所提的各百分比係相當於重量/體積百分比 (w/v)。
在特定方面，本揭示文之醫藥調配物係包括至少一種胺基酸。在某些方面，此胺基酸為精胺酸。在某些方面，精胺酸係以精胺酸鹽酸鹽的形式提供。在某些情況下，胺基酸(例如，精胺酸)係用作為感興趣蛋白之調配物的黏度調節劑。
包含在本揭示文之醫藥調配物中的胺基酸量可依照調配物所欲的特定性質以及調配物預期使用的特定環境和目的而變。在特定方面，此調配物可含有約1 mM至約200 mM的胺基酸；約5 mM至約150 mM的胺基酸；約10 mM至約100 mM的胺基酸；約20 mM至約80 mM胺基酸；約20 mM至約30 mM胺基酸；約45 mM至約55 mM胺基酸；或約70 mM至約80 mM胺基酸。例如，本揭示文之醫藥調配物可包括約5 mM；約10 mM；約15 mM；約20 mM；約25 mM；約30 mM；約35 mM；約40 mM；約45 mM；約50 mM；約55 mM；約 60 mM；約65 mM；約 70 mM；約75 mM；約80 mM；約85 mM；約90 mM；約95 mM；或約100 mM的胺基酸(例如，精胺酸)。在某些方面，此調配物係含有約25 mM的胺基酸(例如精胺酸)。在某些方面，此調配物係含有約50 mM的胺基酸(例如精胺酸)。在某些方面，此調配物係含有約75 mM的胺基酸(例如精胺酸)。
本揭示文之醫藥調配物亦可包括一或多種在初步處理或攪動，例如迴轉式震盪的條件下，使感興趣蛋白穩定之類型和量的有機共溶劑。在某些方面，此有機共溶劑為一界面活性劑。如文中所用，術語「界面活性劑」係指降低將流體溶解於其中的表面張力及/或降低油和水之間的界面張力之物質。界面活性劑可為離子型或非離子型的。可包括在本揭示文之調配物中的特定非離子界面活性劑係包括，例如聚山梨醇酯如PS20和PS80、泊洛沙姆如泊洛沙姆188，和聚乙二醇(PEG)如PEG3350。
包含在本揭示文之醫藥調配物中的界面活性劑的量可依照調配物所欲的特定性質以及此調配物預期使用的特定環境和目的而變。在特定方面，此調配物可含有至少約0.01%的界面活性劑。在特定方面，此調配物可含有低於0.2%的界面活性劑。在某些方面，此調配物可含有低於0.5%的界面活性劑。在特定方面，此調配物可含有約0.01%至約0.49%界面活性劑；約0.01%至約0.39%界面活性劑；約0.01%至約0.29%界面活性劑；約0.01%至約0.19%界面活性劑；約0.01%至約0.15%界面活性劑；約0.01%至約0.12%；約0.01%至約0.11%界面活性劑；約0.01%至約0.1%界面活性劑；或約0.01%至約0.09%界面活性劑。例如，本揭示文之醫藥調配物可包括約0.01%；約0.02%；約0.03%；約0.04%；約0.05%；約0.06%；約0.07%；約0.08%；約0.09%；約0.1%；約0.11%；約0.12%；約0.13%；約0.14%；約0.15%；約0.16%；約0.17%；約0.18%；約0.19%；約0.20%；約0.21%；約0.22%；約0.23%；約0.24%；約0.25%；約0.26%；約0.27%；約0.28%；約0.29%；約0.30%；約0.35%；約0.40%；約0.45%；或約0.50%的界面活性劑(例如、PS20、PS80、泊洛沙姆188或PEG3350)。在某些方面，此調配物係含有約0.01%至0.19%泊洛沙姆188。在某些方面，此調配物係含有約0.01%至約0.49%泊洛沙姆188。在某些方面，此調配物係含有約0.01%至0.19%的PEG3350。在某些方面，此調配物係含有約0.01%至0.49%的PEG3350。上文所提的各百分比係相當於重量/體積百分比(w/v)。 聚山梨醇酯
在某些方面，組成物中的界面活性劑可為聚山梨醇酯。如文中所用，「聚山梨醇酯」係指在調配物開發中用於保護抗體對抗各種物理應激，例如攪拌、凍融過程和空氣/水界面之常見的賦形劑(Emily Ha, Wei Wang & Y.  John Wang, Peroxide formation in polysorbate 80 and protein stability, 91 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 2252–2264 (2002)；Bruce A.  Kerwin, Polysorbates 20 and 80 Used in the Formulation of Protein Biotherapeutics: Structure and Degradation Pathways, 97 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 2924–2935 (2008)；Hanns-Christian Mahler et al., Adsorption Behavior of a Surfactant and a Monoclonal Antibody to Sterilizing-Grade Filters, 99 Journal of Pharmaceutical Sciences 2620–2627 (2010))並且可包括由聚氧乙烯-水山梨醇酐的脂肪酸酯所組成的非離子兩性界面活性劑。酯類可包括聚氧乙烯山梨醇酐頭基和飽和單月桂酸酯側鏈(聚山梨醇酯20；PS20)或不飽和單油酸酯側鏈(聚山梨醇酯80；PS80)。 在某些方面，聚山梨醇酯可以約0.001%至1%(重量/體積)的範圍存在於調配物中。 聚山梨醇酯亦可含有各種脂肪酸鏈的混合物；例如，聚山梨醇酯80係含有油酸、棕櫚酸、肉荳蔻酸和硬脂酸，其中單油酸酯部分大約佔多分散混合物的58%(Nitin Dixit et al., Residual Host Cell Protein Promotes Polysorbate 20 Degradation in a Sulfatase Drug Product Leading to Free Fatty Acid Particles, 105 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 1657–1666 (2016))。聚山梨醇酯之非限制性實例包括聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65和聚山梨醇酯-80。
聚山梨醇酯可能以pH和溫度依賴的方式而易於自動氧化，及另外地，暴露於紫外線亦會產生不穩定性(Ravuri S.k.  Kishore et al., Degradation of Polysorbates 20 and 80: Studies on Thermal Autoxidation and Hydrolysis, 100 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 721–731 (2011))，在溶液中產生游離脂肪酸以及山梨醇酐頭基。由聚山梨醇酯所產生的游離脂肪酸可包括具有六至二十個碳的任何脂肪族脂肪酸。游離脂肪酸的非限制實例包括油酸、棕櫚酸、硬脂酸、肉荳蔻酸、月桂酸或其組合。
在某些示例方面，聚山梨醇酯可形成游離脂肪酸顆粒。游離脂肪酸顆粒的大小可為至少約1 μm或至少約5 μm。再者，這些脂肪酸顆粒可根據其大小分為可見(約＞100 μm)、目視不可見(約＜100 μm，可細分為微米(1-100μm)和亞微米(100 nm-1000 nm))和奈米顆粒(約＜100 nm)(Linda Narhi, Jeremy Schmit & Deepak Sharma, Classification of protein aggregates, 101 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 493–498)。在某些示例方面，脂肪酸顆粒可為可見顆粒。可見顆粒可藉由目視檢測。在某些方面，脂肪酸顆粒可能為目視不可見顆粒。目視不可見顆粒可根據美國藥典(USP)藉由光阻法監測。脂肪酸顆粒增加可能造成產品不再具有可接受的品質，且因此脂肪酸顆粒的增加速率可用作產品保存期的量度。當游離脂肪酸釋放到調配物中並超過其可溶解的濃度時，可能形成脂肪酸顆粒，從而從溶液中沉澱出。因此，測量聚山梨醇酯的降解或釋放的游離脂肪酸之濃度可能為脂肪酸顆粒形成的指標，並且可延長預測的產品保存期。此外，防止聚山梨醇酯降解、游離脂肪酸釋放及/或脂肪酸顆粒形成對於延長產品保存期和提升產品品質可能為重要的。
在某些示例方面，調配物中聚山梨醇酯的濃度可為約0.001% w/v，約0.002% w/v，約0.003% w/v，約0.004% w/v，約0.005% w/v，約0.006% w/v，約0.007% w/v，約0.008% w/v，約0.009% w/v，約0.01% w/v，約0.015% w/v，約0.02% w/v, 0.025% w/v，約0.03% w/v，約0.035% w/v，約0.04% w/v，約0.045% w/v，約0.05% w/v，約0.06% w/v，約0.07% w/v，約0.08% w/v，約0.09% w/v，約0.1 % w/v，約0.2% w/v，約0.3% w/v，約0.4% w/v，約0.5% w/v，約0.6% w/v，約0.7% w/v，約0.8% w/v，約0.9% w/v，或約1% w/v。在一方面，調配物中聚山梨醇酯的濃度為約1% w/v。
在某些示例方面，調配物中游離脂肪酸的濃度可為約10 ng/mL，約20 ng/mL，約30 ng/mL，約40 ng/mL，約50 ng/mL，約60 ng/mL，約70 ng/mL，約80 ng/mL，約90 ng/mL，約100 ng/mL，約200 ng/mL，約300 ng/mL，約400 ng/mL，約500 ng/mL，約600 ng/mL，約700 ng/mL，約800 ng/mL，約900 ng/mL，約1 µg/mL，約2 µg/mL，約3 µg/mL，約4 µg/mL，約5 µg/mL，約6 µg/mL，約7 µg/mL，約8 µg/mL，約9 µg/mL，約10 µg/mL，約20 µg/mL，約30 µg/mL，或約40 µg/mL。
在某些示例方面，聚山梨醇酯可被組成物中存在的宿主細胞蛋白降解。在某些方面，宿主細胞蛋白可能為酯酶或脂酶。調配物中殘留的酯酶或脂酶活性可藉由測量聚山梨醇酯降解、游離脂肪酸釋放或可見或不可見脂肪酸顆粒之濃度間接評估。
術語「脂肪酸酯」係指含有經由酯鍵與頭基相連接的脂肪酸鏈之任何有機化合物。當羥基基團(例如，醇或羧酸)被烷氧基基團取代時則形成酯鍵。如文中所用，羥基可為羧酸的一部分，更特言之脂肪酸，及/或醇，例如甘油、山梨醇、山梨醇酐、異山梨醇或諸如此類。醇基團在文中一般係稱為頭基。
脂肪酸酯的實例一般係包括磷脂、脂質(例如，頭基為甘油，包括單甘油酯、雙甘油酯和三甘油酯)和界面活性劑及乳化劑，包括例如聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80，其為非離子清洗劑。界面活性劑和乳化劑可用作共溶劑和穩定劑。其係藉由與親水表面和親脂表面結合來發揮作用，保持成份，如蛋白的分散和結構穩定性。將界面活性劑加到蛋白調配物中主要係增強蛋白對機械應激，例如氣/液界面和固/液界面剪切力之穩定性。在無界面活性劑下，蛋白在某些情況下可能在溶液中會變得結構不安定，並形成最終變成目視不可見顆粒之多聚性聚集物。
術語「脂肪酸」或「脂肪酸鏈」係指具有脂肪族尾巴的羧酸。脂肪族尾巴僅為包括碳和氫之烴鏈，在某些情況下，亦包含氧、硫、氮及/或氯取代。脂肪族尾巴可為飽和的(如在飽和脂肪酸中)，其係指所有碳-碳鍵皆為單鍵(亦即，烷類)。脂肪族尾巴可為不飽和的(如在不飽和脂肪酸中)，其中一或多個碳-碳鍵為雙鍵(烯類)或三鍵(炔類)。
脂肪酸一般係指定為在其脂肪族尾部具有少於6個碳的短鏈脂肪酸，具有6至13個碳的中鏈脂肪酸，具有13至21個碳的長鏈脂肪酸，以及具有22個或更長的碳原子脂肪族尾巴之非常長鏈的脂肪酸。如上所提，脂肪酸亦根據與其硬度和熔點相關的飽和度分類。常見的脂肪酸包括辛酸(8個碳：0個雙鍵；8:0)、癸酸(10:0)、月桂酸(12:0)、肉荳蔻酸(14:0)、肉荳蔻腦酸(14:1)、棕櫚酸(16:0)、棕櫚油酸(16:1)、皂烯酸(16:1)、硬脂酸(18:0)、油酸 (18:1)、反式油酸(elaidic acid)(18:1)、異油酸(vaccenic acid)(18:1)、亞油酸(18:2)、反式亞油酸(linelaedic acid)(18:2)、α-亞麻油酸(18:3)、花生酸(20:0)、花生四烯酸(20:4)、二十碳五烯酸(20:5)、山萮酸(behenic acid)(22:0)、芥酸(erucic acid)(22:1)、二十二碳六烯酸(22:6)、木蠟酸(lignoceric acid)(24:0)和蠟酸(cerotic acid)(26:0)。
如上所提，聚山梨醇酯為可用作非離子界面活性劑和蛋白穩定劑的脂肪酸酯。 聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80係廣泛應用於醫藥、化妝品和食品工業作為穩定劑和乳化劑。 聚山梨醇酯20主要包括聚氧乙烯(20)山梨醇酐的單月桂酸酯。聚山梨醇酯40主要包括聚氧乙烯(20)山梨醇酐的單棕櫚酸酯。聚山梨醇酯60主要包括聚氧乙烯(20)山梨醇酐的單硬脂酸酯。聚山梨醇酯80主要包括聚氧乙烯(20)山梨醇酐的單油酸酯。
商用級的聚山梨醇酯之品質係隨供應商而異。因此，聚山梨醇酯通常為各種化學實體的混合物，主要由聚氧乙烯(20)山梨醇酐單酯(如上所述)所組成，在某些情況下含有異山梨醇酯污染物。頭基(在本案例中為聚氧乙烯(20)山梨醇酐)係包括在三個其醇基上經取代與三個聚氧乙烯基團形成醚鍵之山梨醇酐(無水山梨醇之混合物，包括1,4-無水山梨醇、1,5-無水山梨醇和1,4,3,6-二無水山梨醇)。第四個醇基團係經脂肪酸取代形成一脂肪酸酯。
在某些市售批件的聚山梨醇酯中，聚山梨醇酯係含有異山梨醇單酯。異山梨醇為一葡萄糖的雜環衍生物，同時係藉由將山梨糖醇脫水所製備。其為一種二醇，亦即具有二個可參與形成一或二個酯鍵的醇基。因此，例如，某些批件的聚山梨醇酯20可能含有大量的異山梨醇月桂酸酯單酯和二酯，而某些批件的聚山梨醇酯80可能含有大量的異山梨醇油酸酯單酯和二酯。
除了頭基變化之外，聚山梨醇酯的製備物係含有可變量的其他脂肪酸酯。例如，一聚山梨醇酯20的特定來源的分析顯示＜10%辛酸、＜10%癸酸、40-60%月桂酸、14-25%肉荳蔻酸、7-15%棕櫚酸、＜11%油酸、＜7%硬脂酸和 ＜3%亞麻油酸。一聚山梨醇酯80批件的分析顯示＜5%肉荳蔻酸、＜16%棕櫚酸、＞58%油酸、＜6%硬脂酸和＜18%亞麻油酸。另一聚山梨醇酯80來源的分析顯示約70%油酸，其餘的為其他脂肪酸酯和雜質。又另一聚山梨醇酯80來源的分析顯示約86-87%油酸。另一更新進開發的聚山梨醇酯80的分析顯示≥99%油酸。
在某些方面，聚山梨醇酯80中的油酸濃度可在介於約50%和約100%之間、介於約58%和約100%之間、介於約60%和100%之間、介於約80%和約100%之間、介於約90%和約100%之間，介於約100%、介於約95%與約100%之間、介於約98%與約100%之間、介於約99%與約100%之間、介於約98.0%與約99.9%之間、介於約98.5%和約99.5%之間、介於約99.0%和約99.9%之間，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91%，至少92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少98.5%，至少99%，至少99.5%，約58%，約60%，約65%，約70%，約75%，約80%，約81%，約82%，約83%，約84%，約85%，約86%，約87%，約88%，約89%，約90%，約91%，約92%，約93%，約94%，約95%，約96%，約97%，約98%，約98.5%，約99%，約99.1%，約99.2%，約99.3%，約99.4%，約99.5%，約99.6%，約99.7%，約99.8%，約99.9%，或約100%。
生物醫藥物通常係以非離子清洗劑如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80調配。這些清洗劑係幫助穩定大分子如抗體和其他蛋白，並幫助防止超分子三元復合物或其他聚集物形成。聚集物可變成10至100微米範圍或2至100微米範圍內的奈米顆粒或目視不可見顆粒，並干擾藥物產品穩定性和保存期。因此，蛋白調配物的穩定性在某些情況下係依非離子清洗劑添加劑的穩定性而定。然而，且如文中所進一步論述的，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80在某些情況下可能造成聚集物、奈米顆粒和目視不可見顆粒的形成。
詞語「目視不可見顆粒」係指不可見的顆粒，尤其是在液體中。換言之，含有目視不可見顆粒但不含可見顆粒的溶液或其他液體不會出現渾濁。目視不可見顆粒一般係包括該等直徑為100微米或更小的顆粒，但在某些情況下係包括小於150微米的顆粒(Narhi et al., “A critical review of analytical methods for subvisible and visible particles,” Curr Pharm Biotechnol 10(4):373-381 (2009))。目視不可見顆粒可能為外來污染物或蛋白聚集之結果。蛋白聚集物可為柔軟的和無一定形狀，且因此可能難以使用習知的光遮蔽和顯微鏡方法偵測(Singh和Toler，“Monitoring of subvisible particles in therapeutic proteins”，Methods Mol Biol. 2012；899:379-401)。目視不可見顆粒可包括，尤其是矽氧污染物(油性液滴)、游離脂肪酸(油性液滴)、聚集的蛋白(無定形顆粒)及/或蛋白/脂肪酸複合物(無定形顆粒)。
目視不可見顆粒可藉由各種方法中的任何一或多種來偵測。USP標準規範了光阻和光學顯微鏡方法。其他方法包括微流造影(MFI)分析、庫爾特計數(Coulter counting)和亞微米粒子追踪法。對於光阻(LO)，係以當顆粒通過流通池中的光束時投射在光偵測器上的陰影為基礎來計數粒子。陰影的大小、形狀和反向強度係依顆粒相對於溶液的大小、形狀和折射率的差異而定。使用LO的偵測下限大小範圍為約2微米。一種常用的LO裝置為HIAC儀器(Beckman Coulter, Brea, CA)。測量和表徵SVP的數種方法(例如光阻、流式顯微鏡、電傳感區法和流式細胞術)係論述於，例如Narhi et al.,“Subvisible (2-100 μm) Particle Analysis During Biotherapeutic Drug Product Development: Part 1, Considerations and Strategy,” J. Pharma. Sci. 104:1899-1908 (2015)中。
光阻法因低估蛋白聚集物和其他無定形結構而受到批評。流量造影分析，如微流造影(MFI)(Brightwell Technologies，Ottawa，Ontario)，為一種偵測不規則形狀、易碎和透明的蛋白目視不可見顆粒，並區分該等類型的顆粒與矽氧微滴、氣泡和其他外來污染物之更靈敏的方法(Sharma et al., “Micro-flow imaging: Flow microscopy applied to sub-visible particulate analysis in protein formulations,” AAPS J. 12(3): 455-464 (2010))。一般而言，因為藉由光阻分析的SVP測量和表徵不如MFI敏感，所以藉由MFI偵測到的顆粒數將高於藉由光阻分析所偵測到的顆粒數。簡言之，MFI為其中實時拍攝和分析連續之明視野影像的流式顯微鏡。將影像分析演算法應用於影像用以區分氣泡、矽油滴和蛋白聚集物。可分析低至約250微升至高達數十毫升的體積。依照所使用的系統，可偵測2至300微米或1至70微米範圍內的顆粒(Id)。
在某些方面，調配物中的可見或目視不可見顆粒可藉由拉曼光譜(Raman spectroscopy)偵測和分析。如文中所用，術語「拉曼光譜」係指以拉曼散射法為基礎的光譜法。拉曼光譜可提供一拉曼光譜，可鑑別指紋區域(2000至400 cm -1)中頻帶的存在和位置，藉由與拉曼光譜數據庫比較，能進行分析物質的化學鑑定(C. V. Raman and K. S. Krishnan, A new type of secondary radiation, 121 NATURE 501-502 (1928)；Zai-Qing Wen, Raman spectroscopy of protein pharmaceuticals, 96 JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 2861-287 (2007))。
FDA和其他政府監管機構已限制了非經腸調配物中的目視不可見顆粒之量。主要明確表達的擔憂是接受藥物之病患的潛在致免疫性和下游負面影響相關的不確定性(Singh et al., “An industry perspective on the monitoring of subvisible particles as a quality attribute for protein therapeutics,” J. Pharma. Sci. 99(8):3302-21 (2010))。對於小體積的非經腸藥物(例如100 mL或以下)，當藉由光阻分析測定時，藥典將大於或等於10微米的目視不可見顆粒(SVP)限制為每個容器不超過6,000個SVP，而大於或等於25微米的SVP每個容器不超過600個；以及當藉由膜顯微鏡檢測測定時，大於或等於10微米的SVP每個容器至不超過3,000個SVP，及大於或等於25微米的SVP每個容器至不超過300個SVP (United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 40-NF 28), ＜787＞Subvisible Particulate Matter in Therapeutic Protein Injections.)。對於眼科藥物，SVP限值為10微米或更大的為每毫升50個，25微米或更大的為每毫升5個，50微米或更大的為每毫升2個(Id. at ＜78922 Particulate Matter in Ophthalmic Solutions)。監管機構正日益考量製造商對2微米或更大之SVP建立規範(參見Singh et al., “An industry perspective on the monitoring of subvisible particles as a quality attribute for protein therapeutics,” J. Pharm. Sci. 99(8):3302-21 (2010))。
術語「酯酶」係指催化酯鍵水解產生酸和醇的酵素。酯酶為一種類繁雜的酵素，包括乙醯酯酶(例如，乙醯膽鹼酯酶)、磷酸酶、核酸酶、硫酯酶、脂酶和其他羧基酯水解酶。顧名思義，羧基酯水解酶(又名羧酯酶、羧酸酯水解酶和EC 3.1.1.1)係使用水將羧酸酯水解成醇和羧酸鹽。脂酶為一種催化脂質，包括三酸甘油酯、脂肪和油水解成脂肪酸和醇頭基之羧基酯水解酶。例如，三酸甘油酯係經如胰脂酶之脂酶水解，形成單醯基甘油和二條脂肪酸鏈。
磷脂酶為將磷脂水解成脂肪酸和其他產物的脂酶。磷脂酶係分為四大類：磷脂酶A(包括磷脂酶A1和磷脂酶A2)、磷脂酶B以及磷酸二酯酶磷酸二酯酶C和磷酸二酯酶D。除了典型的磷脂酶外，駐留在溶酶體腔中的類-磷脂酶B被認為涉及脂質催化。例如，基於序列同源性和細胞體內的位置，係假設類-磷脂酶B 2 (PLBL2)具有酯酶活性(Jensen et al., “Biochemical characterization and liposomal localization localization of the mannose-6-phosphate protein p76, ” Biochem. J. 402: 449-458 (2007))。
如文中所用，術語「脂肪酯水解百分比」係指已水解的脂肪酸酯的莫耳比例。因為脂肪酸酯的水解造成游離脂肪酸的釋放，因此可藉由測量樣本中的游離脂肪酸來測定脂肪酯水解百分比。因此，脂肪酯水解百分比可藉由計算游離脂肪酸的莫耳數除以脂肪酸的莫耳數加上脂肪酸酯的莫耳數總和來測定。在聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20的水解百分比的情況下，該數字可藉由計算游離脂肪酸的莫耳數並除以剩餘聚山梨醇酯的總莫耳數加上游離脂肪酸的莫耳數來測定。
術語「酯酶抑制劑」係指降低、抑制或阻斷酯酶活性的任何化學實體。申請人們設想在含有脂肪酸酯界面活性劑的蛋白調配物中納入酯酶抑制劑可能有助於維持蛋白穩定性和脂肪酸酯穩定性，並有助於降低SVP形成。本項技術中已知的常見酯酶抑制劑包括奧利司他(orlistat)(四氫脂司他汀(tetrahydrolipistatin)；一種羧酯酶2和脂蛋白脂酶的抑制劑)、二乙基繖形酮磷酸酯(diethylumbelliferyl phosphate)(一種膽固醇酯酶[脂酶A]抑制劑)、URB602([1-1'-聯苯]-3-tl-胺基甲酸環己酯；一種單醯基甘油脂酶抑制劑)和2-丁氧基苯基硼酸(一種激素敏感性脂酶之抑制劑)。在感興趣蛋白純化期間或在最終調配物中納入酯酶抑制劑有望防止或減緩非離子清洗劑如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80的水解，其轉而有望防止或降低目視不可見顆粒的形成。 示例的調配物
根據本揭示文之一方面，此醫藥調配物係包括：(i)特異性與hIL-4R結合的人類抗體(例如，包括下表1中所揭示之一或多個序列的抗體)；(ii)乙酸鹽；(iii)組胺酸；(iv)蔗糖；(v)精胺酸；和(v)包括聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)的人類抗體；(ii)濃度為10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸；(iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/ v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度15 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸；(iv)濃度2.5%w/v至7.5%w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度15 mg/mL至20 0mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸；(iv)濃度2.5%w/v至7.5%w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v的PEG3350或泊洛沙姆188，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括PEG3350或泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度15 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含PEG3350的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度15 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度100 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度100 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之PEG3350或泊洛沙姆188，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，PEG3350或泊洛沙姆188濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度100 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，此PEG3350濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度100 mg/mL至200 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，此泊洛沙姆188濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度150 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度150 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之PEG3350或泊洛沙姆188，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括PEG3350或泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度150 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含PEG3350的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度150 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之包含聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括聚乙二醇或泊洛沙姆的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度10 mM至15 mM的乙酸鹽；(iii)濃度15 mM至25 mM的組胺酸； (iv)濃度2.5% w/v至7.5% w/v的蔗糖；(v)濃度20 mM至80 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01% w/v至0.19% w/v之PEG3350或泊洛沙姆188，其中此調配物係具有5.7至6.1之pH。在另外方面，包括PEG3350或泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01% w/v至0.5% w/v，或約0.01% w/v至0.4%，或約0.01% w/v至0.3%，或約 0.01% w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含PEG3350的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為25 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含PEG3350的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為50 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為75 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含PEG3350的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含PEG3350的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在某些情況下，此穩定的液體醫藥調配物係包括：(i)濃度175 mg/mL±10 mg/mL的人類抗體，其中該抗體係特異性與人類IL-4Rα結合並包括一包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的重鏈可變區(HCVR)和一包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)；(ii)濃度12.5 mM±1.25 mM的乙酸鹽；(iii)濃度20 mM±2 mM的組胺酸；(iv)濃度5%w/v±0.5%w/v的蔗糖；(v)濃度為75 mM±2.5 mM的精胺酸；和(vi)濃度0.01%w/v至0.19%w/v之包含泊洛沙姆188的界面活性劑，其中該調配物係具有5.9±0.2之pH。在另外方面，包含泊洛沙姆188的界面活性劑濃度可為約0.01%w/v至0.5%w/v，或約0.01%w/v至0.4%，或約0.01%w/v至0.3%，或約0.01%w/v至0.2%。在另外方面，此調配物的pH可為約5.4至6.5，約5.5至6.2或約5.6至6.2。
在任何上文或文中所論述的醫藥調配物之各個方面中，人類IL-4R抗體可包括人類IgGl重鏈恆定區。
在任何上文或文中所論述的醫藥調配物之各個方面中，人類IL-4R抗體可包括人類IgG4重鏈恆定區。
在某些方面，人類IL-4R抗體可包括一包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的重鏈和一包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的輕鏈。
本揭示文所涵蓋的醫藥調配物之另外的非限定實例係論述於文中他處，包括下文所示之工作實例。 醫藥調配物之穩定性
本揭示文之醫藥調配物展現高程度的穩定性。術語「穩定的」，如文中所用就醫藥調配物而言係指醫藥調配物中感興趣蛋白在儲存一段定義的時間後保留一可接受程度的結構及/或功能及/或生物活性。調配物可能為穩定的，即使其中包含的蛋白在儲存一段定義的時間後無法維持100%的其結構及/或功能及/或生物活性。在某些情況下，在儲存一段定義的時間後，蛋白的結構及/或功能及/或生物活性維持約90%，約95%，約96%，約97%，約98%或約99%則可稱為「穩定的」。
穩定性尤其是可藉由在一定義溫度或在應激條件下(例如，攪拌)儲存一段定義時間後，測定調配物中形成聚集物的蛋白百分比來測量，其中穩定性係與所形成的聚集物百分比成反比。聚集蛋白的百分比尤其是可藉由粒徑排阻層析(例如粒徑排阻高效液相層析(SE-HPLC)或粒徑排阻超高效液相層析(SE-UPLC))來測定。「可接受的穩定性程度」，此詞語如文中所用，係指在一給定溫度或特定應激條件下儲存一段定義時間後，於調配物的聚集物中可檢測到最多約15%、10%、5%、4%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.5%、或0.1%的蛋白。測量穩定性的定義時間可為至少2週，至少28天，至少1個月，至少2個月，至少3個月，至少4個月，至少5個月，至少6個月，至少7個月，至少8個月，至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少30個月、至少36個月或更久。當評估穩定性時醫藥調配物可儲存的溫度可為從約-80ºC至約45ºC的任何溫度，例如，儲存在約-80ºC，約-30ºC，約-20ºC，約0ºC，約4ºC-8ºC，約5ºC，約25ºC，約35ºC，約37ºC或約45ºC。調配的感興趣蛋白可經受的「應激條件」可為攪拌應激(例如，渦旋)歷時10分鐘、20分鐘、30分鐘,40分鐘、50分鐘、60分鐘、70分鐘、80分鐘、90分鐘、100分鐘、110分鐘、120分鐘、150分鐘、180分鐘或更久的時間。例如，如果在5ºC儲存9個月後，偵測到低於約2%、1.75%、1.5%、1.25%、1%、0.75%、0.5%、0.25%或0.1%之聚集形式的抗體，則包括抗IL-4R抗體的醫藥調配物可視為穩定的。如果在45ºC儲存56天後，偵測到低於約12%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。如果在45ºC儲存42天後，偵測到低於約10%或低於約9%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在45ºC儲存28天後，偵測到低於約8%或低於約7.5%或低於約7%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在45ºC下儲存14天後，偵測到低於約6%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在-20ºC、-30ºC或-80ºC儲存3個月後，偵測到低於約2%、1.9%、1.8%、1.7%、1.6%、1.5%、1%、0.5%或0.1%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在室溫攪拌120分鐘後(例如，經由渦旋)，偵測到低於3%或低於2.5%之聚集形式的蛋白，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。
穩定性亦可，尤其是藉由在一定義溫度儲存一段定義時間後測定調配物內的顆粒調配物來測量。顆粒形成可例如藉由顯微鏡技術或藉由微流造影技術來測定。
在某些方面，本揭示文之調配物係包括可偵測量的脂酶(例如，PLBL2)。偵測和量化磷脂酶的存在和活性之方法已為本項技術所知。在某些方面，磷脂酶係藉由免疫分析(例如ELISA)來偵測。在某些方面，磷脂酶係藉由液相層析-質譜(LC-MS)來偵測。
因此，若在一定義溫度(例如，5°C)儲存一段時間後(例如，6、12、18、24或36個月或更久)，在一2.25 mL的體積內鑑定出不超過特定數量之大小≥10µm或≥25µm的脂肪酸顆粒(例如，3000個顆粒、1000個顆粒、500個顆粒、250個顆粒、100個顆粒或50個顆粒)，則此醫藥調配物可視為穩定的。例如，若在5°C儲存24個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過3000個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物可視為穩定的。另外方面，若在5°C儲存24個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過1000個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物可視為穩定的。若在5°C儲存24個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過500個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存24個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過250個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存24個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過150個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過1000個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過500個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過250個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過150個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過100個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。若在5°C儲存36個月後經由顯微鏡在2.25 mL的體積內鑑定出不超過50個脂肪酸顆粒，則此醫藥調配物亦可視為穩定的。
穩定性亦可藉由，尤其是在一給定溫度儲存一段定義的時間量後，測定調配物中剩餘的感興趣原形蛋白之百分比來測量。感興趣原形蛋白的百分比可藉由尤其是粒徑排阻層析(例如，粒徑排阻高效液相層析(SE-HPLC))來測定。如文中所用的詞語「可接受的穩定性程度」係指在一給定溫度儲存一段定義的時間量後，可在調配物中偵測到至少90%的原形蛋白形式。在特定方面，在一給定溫度儲存一段定義的時間量後，可在調配物中偵測到至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的原形蛋白形式。在其後測量穩定性之定義時間量可為至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少30個月、至少36個月或更久。當評估穩定性時醫藥調配物可儲存的溫度可為從約-80ºC至約45ºC的任何溫度，例如儲存在約-80ºC，約-30ºC，約-20ºC，約0ºC，約4ºC-8ºC，約5ºC，約25ºC，約35ºC，約37ºC，或約45ºC。
穩定性亦可，尤其是藉由測定在離子交換期間以比蛋白的主要部分(「主要電荷形式」)更酸性部分(「酸性形式」)遷移的感興趣蛋白之百分比來測量，其中穩定性係與酸性形式之蛋白部分成反比。在不希望受限於理論的同時，蛋白的脫醯胺可能造成蛋白變得帶更多負電荷且因此相對於未脫醯胺的蛋白而言酸性更強(參見，例如，Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16 , 2002, 99(8):5283-5288)。「酸化」蛋白之百分比可藉由離子交換層析(例如，陽離子交換高效液相層析(CEX-HPLC)或陽離子交換超高效液相層析(CEX-UPLC))來測定。如文中所用的詞語「可接受的穩定性程度」係指在一給定溫度儲存一段定義的時間量後，可在調配物中偵測到最多50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4 %、3%、2%、1%、0.5%或0.1%的酸性形式蛋白。在其後測量穩定性之定義時間量可為至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月，至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月、至少30個月、至少36個月或更久。當評估穩定性時，醫藥調配物可儲存的溫度可為從約-80ºC至約45ºC的任何溫度，例如儲存在約-80ºC，約-30ºC，約-20ºC，約0ºC，約4ºC-8ºC，約5ºC，約25ºC，或約45ºC。
測量感興趣抗體與其靶標的結合親和力亦可用來評估穩定性。例如，若在例如-80°C、-30°C、-20°C、5°C、25°C、37°C、45°C等儲存一段定義的時間量後(例如，14天至9個月)，調配物內包含的抗IL-4R抗體係以至少80%、85%、90%、95%或更高的該儲存前抗體之結合親和力與hIL-4Rα結合，則本揭示文之調配物可視為穩定的。結合親和力可藉由任何方法來測定，例如ELISA或電漿共振。生物學活性可藉由，例如在抗體的存在下測量IL-4R系統之下游活性，並將此活性與無抗體存在下之IL-4R系統活性相比較來測定。
提及在一段特定時間段「之後」醫藥調配物的穩定性希望係指穩定性參數(例如原形形式%、HMW種類%或酸性形式%)之測量係在或大約在該段特定時間結束時進行，並不希望係指醫藥調配物必須在此後對測量的參數保持相同程度的穩定性。例如，提及12個月後的特定穩定性係指穩定性的測量係在研究開始後12個月或大約12個月進行。 給藥容器和方法
本揭示文之醫藥調配物可包含在任何適合儲存藥物和其他治療組成物的容器內。例如，醫藥調配物可包含在密封且滅菌之具有一定義體積的塑膠或玻璃容器內，例如小瓶、安瓶、注射器、藥筒、瓶子或IV袋。不同類型的小瓶可用於容納本揭示文之醫藥調配物，包括例如透明和不透明(例如，琥珀色)玻璃或塑膠小瓶。同樣地，任何類型的注射器可用於容納及/或施予本揭示文之醫藥調配物。在某些方面，此醫藥調配物係包含在預充填的注射器(PFS)中。在某些方面，此醫藥調配物係包含在預充填的立針注射器中。
本揭示文之醫藥調配物可包含在「正常鎢」注射器或「低鎢」注射器中。如本項技術之一般技術者所理解的，製造玻璃注射器的方法一般係涉及使用用於刺穿玻璃藉此製造可從注射器中抽取和排出液體之孔洞的熱鎢棒。此過程造成微量鎢沉積在注射器的內表面上。隨後的清洗和其他處理步驟可用於降低注射器中的鎢含量。如文中所用，術語「正常鎢」係指注射器含有超過十億分之500(ppb)的鎢。術語「低鎢」係指注射器含有少於500 ppb的鎢。 例如，根據本揭示文，低鎢注射器可含有少於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100 、90、80、70、60、50、40、30、20、10 ppb或更少的鎢。
用於注射器的橡膠柱塞和用於封閉小瓶開口的橡膠塞可經塗覆用以防止注射器或小瓶之醫藥內容物受污染及/或保持其穩定性。因此，本揭示文之醫藥調配物，根據特定方面，可包含在包括塗層柱塞的注射器內，或以塗層橡膠塞密封的小瓶內。例如，柱塞或塞子可塗覆上碳氟化合物薄膜。適用於含有本揭示文醫藥調配物之小瓶和注射器的塗層塞子及/或柱塞的實例係於例如，美國專利號4,997,423；5,908,686；6,286,699；6,645,635；和7,226,554中提及，其內容係以全文引用的方式併入本文中。可用於本揭示文內容中的特定示例性塗層橡膠塞和柱塞可從市面上由West Pharmaceutical Services, Inc.(Lionville, PA)購得商品名「FluroTec®」。根據本揭示文之特定方面，此醫藥調配物可包含在包括碳氟化合物塗層柱塞的低鎢注射器內。在某些方面，此容器為注射器，例如Ompi EZ-Fill TM注射器或BD Neopak TM注射器。在某些情況下，此注射器為帶有1mL iWest活塞、27G薄壁針和FM30針護罩或BD260針護罩的1 mL長玻璃注射器。在某些情況下，此注射器為2.25 mL玻璃注射器(例如，Nuova Ompi)。在各種方面，此注射器為0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL、0.9 mL、1.0 mL、1.1 mL、1.2 mL、1.3 mL、1.4 mL、1.5 mL、1.6 mL、1.7 mL、1.8 mL、1.9 mL、2.0 mL、2.1 mL、2.2 mL、2.3 mL、2.4 mL、2.5 mL、2.6 mL、2.7 mL、2.8 mL、2.9 mL、3.0 mL、3.5 mL、4.0 mL、4.5 mL、5.0 mL、5.5 mL、6.0 mL、6.5 mL、7.0 mL、7.5 mL、8.0 mL、8.5 mL、9.0 mL、9.5 mL或10 mL注射器(例如，玻璃注射器)。
醫藥調配物可藉由非經腸路徑，例如注射(例如，皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內等)或經皮、黏膜、鼻、肺及/或口服給藥投予病患。許多可重複使用的筆及/或自動注射器遞送裝置可用於皮下遞送本揭示文之醫藥調配物。實例包括，但不限於AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETRONIC™筆(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25™筆、HUMALOG™筆、HUMALIN 70/30™ 筆(Eli Lilly and Co.，Indianapolis，IN)，NOVOPEN™ I、II 和 III(Novo Nordisk，哥本哈根，丹麥)，NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk，哥本哈根，丹麥)，BD™ 筆(Becton Dickinson， Franklin Lakes, NJ)、OPTIPEN™、OPTIPEN PRO™、OPTIPEN STARLET™ 和 OPTICLIK™(sanofi-aventis，德國法蘭克福)，僅舉幾例。具有應用於本揭示文之醫藥調配物的皮下遞送中的一次性筆及/或自動注射器遞送裝置的實例包括，但不限於SOLOSTAR™筆(sanofi-aventis)、FLEXPEN™ (Novo Nordisk)，和KWIKPEN™ (Eli Lilly)、SURECLICKTM Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLETTM (Haselmeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN (Dey, L.P.)和HUMIRATM Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL)，僅舉幾例。在某些情況下，醫藥調配物係包含在特別適合與自動注射器一起使用的注射器中。可使用20-30 號針頭或25-30號針頭給予皮下注射給藥。在某些情況下，可以使用25號針給予皮下注射。在某些情況下，可以使用27 號針給予皮下注射。在某些情況下，可使用29號針給予皮下注射。
另一種類型的遞送裝置可包括一安全系統。此等裝置可能相對便宜，且一旦注射完成可經操作以手動或自動延伸針頭上安全套筒。安全系統的示例可包括West Pharmaceutical的ERIS裝置或Becton Dickinson的UltraSafe裝置。此外，文中亦涵蓋使用大容量裝置(「LVD」)或大劑量注射器來遞送本揭示文之醫藥調配物。在某些情況下，LVD或大劑量注射器可經配置用來將藥物注射到病患內。例如，LVD或大劑量注射器可經配置用以遞送「大」體積的藥物(典型地約2 mL至約10 mL)。
本揭示文之醫藥調配物亦可包含在單位劑型中。術語「單位劑型」，如文中所用，係指適合作為待治療病患之單位劑量的物理上離散單位，各單位含有經計算產生所欲療效果之預定量的活性化合物，結合所需的醫藥載劑、稀釋劑或賦形劑。在各種方面，單位劑型係包含在如文中所論述的容器內。本揭示文之醫藥調配物中活性成份(例如，抗IL-4R抗體)的實際劑量可改變，用以獲得對特定病患有效達到所欲治療反應之活性成份的量、組成物和給藥方式，而對病患無不利效應。選擇的劑量將依各種藥物動力學因素而定，包括所用的本揭示文之特定組成物的活性、給藥路徑、給藥時間、所用特定化合物的排泄速率、治療的持續時間、其他藥物、與所用特定組成物組合使用的化合物及/或物質、年齡、性別、體重、狀況、一般健康狀況和所治療病患先前病史，以及醫療技術中已知的類似因素。術語「稀釋劑」如文中所用係指適合改變或進行文中所述的示例或適當濃度之溶液。
在各種方面，單位劑型係含有一定量的活性成份(例如，抗IL-4R抗體)供單次使用。在各種方面，單位劑型中活性成份的量為約0.1 mg至約5000 mg，約100 mg至約1000 mg，以及約100 mg至約500 mg，約100mg至約400 mg，約100 mg至約200 mg，約250 mg至約350 mg，約125 mg至約175 mg，約275 mg至約325 mg，或其範圍或區間。例如，希望包括使用任何上述值之組合(或包含在上述範圍內的值)作為上限及/或下限的數值範圍。在一特定方面，調配物通常係以單位劑量形式的液體來供應。在某些方面，此單位劑型係含有約100 mg的活性成份。在某些方面，此單位劑型係含有約150 mg。在某些方面，此單位劑型係含有約200 mg。在某些方面，此單位劑型係含有約300 mg。在某些方面，此單位劑型係含有約350 mg。在某些方面，此單位劑型係含有約600 mg。在某些方面，根據本揭示文之單位劑型係適用於皮下投予病患。
本揭示文亦包括製備單位劑型的方法。在一方面，用於製備醫藥單位劑型的方法係包括將任何前述方面之調配物組合於一適合的容器中(例如，該等文中所論述的容器)。 醫藥調配物之治療用途
包括一抗IL-4R抗體之本揭示文醫藥調配物尤其是可用於治療、預防及/或改善與IL-4R活性相關的任何疾病或病症。
本揭示文之治療方法係包括投予一對象任何包括如文中所揭示之抗hIL-4R抗體的調配物。投予醫藥調配物的對象可為，例如需要此類治療、預防及/或改善的任何人類或非人類動物，或能另外受益於抑制或減弱IL-4R及/或IL-4R媒介的活性者。本揭示文進一步係包括任何文中所揭示之醫藥調配物於製造醫藥品供治療、預防及/或改善與任何IL-4R活性相關的疾病或病症之用途。
在某些方面，與IL-4R活性相關的疾病或病症為發炎症狀、過敏病症、肺/呼吸病症、胃腸道病症或皮膚病症。在某些方面，此疾病或病症為第2型發炎病症。在某些方面，此疾病或病症為異位性疾病。與IL-4R活性相關的疾病和病症之非限制性實例包括過敏(例如，食物過敏、環境過敏、草過敏、花生過敏、乳品過敏)、過敏反應、過敏性支氣管肺曲黴病、過敏性真菌性鼻竇炎(AFRS)、過敏性鼻炎、斑禿、氣喘(包括輕度、中度或重度氣喘或持續性氣喘)、關節炎(包括化膿性關節炎)、異位性皮膚炎(包括中度或重度異位性皮膚炎)、手腳特異位性皮膚炎、異位性角結膜炎、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性淋巴增生症候群、自體免疫性葡萄膜炎、巴瑞氏(Barrett’s)食道、良性前列腺增生、支氣管擴張、大皰性類天皰瘡、查格-施特勞斯症候群(Churg-Strauss syndrome)、慢性特發性蕁麻疹、寒冷誘發性蕁麻疹、慢性誘發性蕁麻疹、慢性自發性蕁麻疹(CSU)、接觸性皮膚炎(例如，過敏性接觸性皮膚炎)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒細胞性食管炎、嗜酸性粒細胞性胃腸炎、葛瑞夫兹氏病(Grave's disease)、類皰疹、增生性瘢痕、發炎症性腸疾病、川崎病(Kawasaki disease)、鼻息肉病、腎病、內瑟頓氏症候群(Netherton's syndrome)、子癇前症、結節性癢疹、瘙癢症(例如不明原因的慢性瘙癢症)、鼻炎(例如過敏性鼻炎)、鼻竇炎(例如過敏性真菌性鼻鼻竇炎、有或無鼻息肉病之慢性鼻竇炎)、硬皮病、鐮狀細胞病、修格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、肺結核、潰瘍性結腸炎和惠普氏病(Whipple's Disease)。
在某些方面，本揭示文係提供包括如文中所論述之醫藥調配物的套組(例如，帶有此調配物或醫單位劑型之容器)和包裝或標籤(例如，包裝插頁)，其係帶有使用此醫藥調配物用於治療如上所論述之疾病或病症之說明書。在某些情況下，說明書係提供如文中所論述的單位劑型供治療疾病或病症的用途。
文中引用的序列和對應的SEQ ID NO之彙整係如下表1中所示。 表1.非正式序列表
SEQ ID NO 序列 說明
1 EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTVTVS 度普利尤單抗HCVR胺基酸序列
2 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIK 度普利尤單抗LCVR胺基酸序列
3 GFTFRDYA 度普利尤單抗HCDR1胺基酸序列
4 ISGSGGNT 度普利尤單抗HCDR2胺基酸序列
5 AKDRLSITIRPRYYGLDV 度普利尤單抗HCDR3胺基酸序列
6 QSLLYSIGYNY 度普利尤單抗LCDR1胺基酸序列
7 LGS 度普利尤單抗LCDR2胺基酸序列
8 MQALQTPYT 度普利尤單抗LCDR3胺基酸序列
9 EVQLVESGGGLEQPGGSLRLSCAGSGFTFRDYAMTWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRLSITIRPRYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 度普利尤單抗重鏈胺基酸序列
10 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSIGYNYLDWYLQKSGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCMQALQTPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 度普利尤單抗輕鏈胺基酸序列
11 MKVLQEPTCVSDYMSISTCEWKMNGPTNCSTELRLLYQLVFLLSEAHTCIPENNGGAGCVCHLLMDDVVSADNYTLDLWAGQQLLWKGSFKPSEHVKPRAPGNLTVHTNVSDTLLLTWSNPYPPDNYLYNHLTYAVNIWSENDPADFRIYNVTYLEPSLRIAASTLKSGISYRARVRAWAQCYNTTWSEWSPSTKWHNSYREPFEQH 人類IL-4Rα
12 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-39
13 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-40
14 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-41
15 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-42
16 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-43
17 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-44
18 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-45
19 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-46
20 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-47
21 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-48
22 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-49
23 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-50
24 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-51
25 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-52
26 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-53
27 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-54
28 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-55
29 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-56
30 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPWTFGQGTKVEIK SCB-VL-57
31 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK SCB-VL-58
32 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-59
33 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-60
34 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-61
35 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-62
36 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-63
37 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-64
38 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-65
39 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-66
40 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-67
41 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-68
42 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-69
43 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-70
44 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-71
45 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-72
46 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-73
47 EVQLVQSGGGLVHPGRSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-74
48 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLTCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-75
49 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMHWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-76
50 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGEGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-77
51 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDEAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-78
52 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAGDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-79
53 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFDDYAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-80
54 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-81
55 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-82
56 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-83
57 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-84
58 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-85
59 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-86
60 EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-87
61 EVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-88
62 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-89
63 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-90
64 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-91
65 EVQLVQSGGGLVHPGGSLRLSCAGSGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATNYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDMAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS SCB-VH-92
66 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFPWWGQGTLVTVSS SCB-VH-93
67 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLDYWGKGTLVTVSS MEDI-1-VH
68 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSLSANYVFGTGTKLTVL MEDI-1-VL
69 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-2-VH
70 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSQPPNPLFGTGTKLTVL MEDI-2-VL
71 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKLLKNPWGKGTLVTVSS MEDI-3-VH
72 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWFGTPASNYVFGTGTKLTVL MEDI-3-VL
73 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-4-VH
74 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-4-VL
75 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-5-VH
76 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-5-VL
77 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-6-VH
78 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-6-VL
79 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQYWGKGTLVTVSS MEDI-7-VH
80 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSSPPQPIFGTGTKLTVL MEDI-7-VL
81 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQYWGKGTLVTVSS MEDI-8-VH
82 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-8-VL
83 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-9-VH
84 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTMYPLFGTGTKLTVL MEDI-9-VL
85 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-10-VH
86 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVLTPIFGTGTKLTVL MEDI-10-VL
87 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWFYDWGKGTLVTVSS MEDI-11-VH
88 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPSMIPLFGTGTKLTVL MEDI-11-VL
89 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWFYDWGKGTLVTVSS MEDI-12-VH
90 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTMYPLFGTGTKLTVL MEDI-12-VL
91 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYDWGKGTLVTVSS MEDI-13-VH
92 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTLQPLFGTGTKLTVL MEDI-13-VL
93 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-14-VH
94 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPPTKPLFGTGTKLTVL MEDI-14-VL
95 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-15-VH
96 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTHRHPLFGTGTKLTVL MEDI-15-VL
97 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWLYNWGKGTLVTVSS MEDI-16-VH
98 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-16-VL
99 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-17-VH
100 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVDRPIFGTGTKLTVL MEDI-17-VL
101 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-18-VH
102 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTPMPVFGTGTKLTVL MEDI-18-VL
103 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKWWWQHWGKGTLVTVSS MEDI-19-VH
104 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTTYHPIFGTGTKLTVL MEDI-19-VL
105 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-20-VH
106 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-20-VL
107 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-21-VH
108 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEAVYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-21-VL
109 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-22-VH
110 QPVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-22-VL
111 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-23-VH
112 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-23-VL
113 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-24-VH
114 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-24-VL
115 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSASYAQKFQGRVSMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-25-VH
116 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTTATLAITGLQTGDEADYYCGTWVTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-25-VL
117 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-26-VH
118 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-26-VL
119 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTQVTVSS MEDI-27-VH
120 QSVLTQPPLVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-27-VL
121 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGNGTLVTVSS MEDI-28-VH
122 LPVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSSIGNSYVSWYQQLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGFRSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-28-VL
123 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTRVTVSS MEDI-29-VH
124 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-29-VL
125 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-30-VH
126 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-30-VL
127 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-31-VH
128 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWATSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-31-VL
129 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-32-VH
130 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTAWEWPFGTGTKLTVL MEDI-32-VL
131 QVQLVQSGAEEKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-33-VH
132 QSALTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-33-VL
133 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVSMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-34-VH
134 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-34-VL
135 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-35-VH
136 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-35-VL
137 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-36-VH
138 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-36-VL
139 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVAMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-37-VH
140 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGGSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-37-VL
141 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSASYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-38-VH
142 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYFCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-38-VL
143 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-39-VH
144 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTAWEWPFGTGTKLTVL MEDI-39-VL
145 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-40-VH
146 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDSSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-40-VL
147 QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRPEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSG MEDI-41-VH
148 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSTNIGNSYVSWYQRLPGTAPKLLIYDNNKRPPGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-41-VL
149 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWARQAPGQGLEWVGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSGDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-42-VH
150 QAVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGSSNIGNSYVSWYQRLPGAAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCGTWDTSTGWEWPFGTGTKLTVL MEDI-42-VL
151 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPRGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGKYWMYDWGKGTLVTVSS MEDI-37GL-VH
152 QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGGGSSIGNSYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDTSPVWEWPFGTGTKLTVL MEDI-37GL-VL
153 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLRRYFDYWGQGTLVTVSS AJOU-1-VH
154 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGSSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLHLQMNSLRAEDTAVYYCARGPQRSATAVFDYWGQGTLVTVSS AJOU-2-VH
155 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSWISPNSGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRPLSAAWSHSSYYNAMDVWGQGTLVTVSS AJOU-3-VH
156 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSLISHSGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-4-VH
157 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISHGSGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-5-VH
158 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSGISHGNGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTGRHFDYWGQGTLVTVSS AJOU-6-VH
159 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISPSGSSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-7-VH
160 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISPSGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAKRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-8-VH
161 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISPGSGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKFRRHFDYWGQGTLVTVSS AJOU-9-VH
162 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-10-VH
163 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGRSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-69-VH
164 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGANIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-70-VH
165 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITSSGGNIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-71-VH
166 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITAGGGSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-72-VH
167 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRHAMAWVRQAPGKGLEWVSAITSSGRSIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHRAFDYWGQGTLVTVSS AJOU-83-VH
168 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVNWYQQLPGTAPKLLIYDNSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDASLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-33-VL
169 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNNVSWYQQLPGTAPKLLIYANSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDDSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-34-VL
170 QSVLTQPPSAPGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNSVNWYQQLPGTAPKLLIYDDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCDAWDSSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-35-VL
171 QSVLTQPPSASGTPGQRVTLSCTGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYADSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDDSLSGYVFGGGTKLTVL AJOU-36-VL
172 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSSSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYSDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-37-VL
173 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNTVSWYQQLPGTAPKLLIYDNSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-38-VL
174 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGNNDVNWYQQLPGTAPKLLIYYDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDASLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-39-VL
175 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYYDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDDSLNGYVFGGGTKLTVL AJOU-40-VL
176 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVTWYQQLPGTAPKLLIYDDSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGSWDYSLSAYVFGGGTKLTVL AJOU-41-VL
177 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-42-VL
178 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-77-VL
179 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLRGYVLGGGTKLTVL AJOU-78-VL
180 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGYWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-79-VL
181 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVL AJOU-80-VL
182 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSANSRTDGFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-86-VL
183 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSAQFGSRDNFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-87-VL
184 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSTKQMHNYQFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-88-VL
185 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSLLRGENLQFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-89-VL
186 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSPLFPDSGSFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-90-VL
187 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSAALDLSPSFNWYQQLPGTAPKLLIYADSHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCGTWDYSLSGYVLGGGTKLTVLG AJOU-91-VL
188 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGKTNYAQKLQGRVTMTTDTSTTTAYMEMRSLRSDDTAVYYCARGSGYDLDYWGQGTLVSVSS REGN-VH-3
189 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPGRTMVRGGIRYYYGMDVWGQGTTVTVSS REGN-VH-19
190 EVKLAESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSHWMNWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQLNSLIAEDTAVYYCARDRGVRPPRGAFDIWGQGTMVTVSS REGN-VH-35
191 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNSYGISWVRQAPGQGLEWMGWIRTYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDEARIVVAGTTPYYYGMDVWGQGTTVTVSS REGN-VH-51
192 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTISDHYMSWIRQAPGKGLEWISYISSSGSKIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLFLQMNSLRAEDTAVYYCARTRQLVGDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-67
193 EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDNYAMHWVRQAPGKGLEWVSGIRWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKEGGYSGYRPGPFFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-83
194 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGHTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGSGYDFDSWGQGTLVTVSS REGN-VH-99
195 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVRRFFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-115
196 QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGWISVYNGNINYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAVYYCARGSGYDFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-147
197 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKDSAYTFNRYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYTGNTVYAQKLQGRVTMTTDNSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDKSIFGVVRGFDYWGQGTLVTVSS REGN-VH-163
198 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNALGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTFSSLQPEDFATYYCLQDFNYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-11
199 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTISCRASQGVSSWLAWYQQKPGNAPKLLISAASSIQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-27
200 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSFQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQANSFPLTFGGGTTVEIK REGN-VL-43
201 DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISIWLAWYQQSPGKAPKLLINVASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFVTYYCQQANSFPITFGQGTRLATK REGN-VL-59
202 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIFAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIR REGN-VL-75
203 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNYNLAWYQHKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-91
204 AIQMTQSSSSLSASVGDRVTITCRASQAIRNALGWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGIPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYDYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-107
205 DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCWASQGIISYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCHQLKSYPITFGQGTRLEIK REGN-VL-123
206 AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNALGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSASGTDFTLTISSLQPEDFAAYYCLQDYNYPYTFGQGTKLEIK REGN-VL-155
207 EIVMTQSPVTLSLSPGERATLPCRASQSVSSSLAWYQQKAGQSPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISNLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGGGTKVEIK REGN-VL-171
實例
提出下列實例以便於提供熟習本項技術之一般技術者如何製造和使用本發明之方法和組成物的完整揭示和說明，且不希望限制發明者們認為的其發明範圍。已努力確保有關所用數字(例如，數量、溫度等)的準確性，但仍應考量某些實驗誤差和偏差。除非另有說明，否則份數為重量份，分子量為平均分子量，溫度為攝氏度，壓力為大氣壓或接近大氣壓。 測定目視不可見顆粒
就目視不可見顆粒的測定，適合的方法包括「方法1」(光阻顆粒計數試驗)和「方法2」(顯微顆粒計數試驗)。使用光阻，FDA對於非經腸藥物產品中的目視不可見顆粒之要求為直徑≥10微米的顆粒每個容器≤6,000個顆粒，及直徑≥25微米的顆粒每個容器≤600個顆粒。使用顯微法，FDA對於非經腸藥物產品中的目視不可見顆粒的要求為直徑≥10微米的顆粒每個容器≤3,000個顆粒，及直徑≥25微米的顆粒每個容器≤300個顆粒。目前，就直徑小於10微米的顆粒並無規範，但FDA要求測量2至10微米的顆粒。
直徑大於1微米的顆粒係使用HIAC光阻和Brightwell微流造影(MFI)測量。HIAC係結合光阻與雷射光散射，而得以偵測和計數移動流體流中500 nm-350 μm範圍內的粒子。粒子的大小區分係以偵測器中產生的電壓反應為基礎，並以電壓反應為基準將其分類到預定的大小範圍內。
就HIAC分析，係將來自含有150 mg/mL單株抗體之生產線(GMP批件)樣本匯集成25 mL的總體積。就各匯集樣本，每個樣本5毫升產生3個讀數。亦藉由HIAC檢測相同150 mg/mL抗體調配物的實驗室樣本。將來自至少3小瓶(2.5 mL/小瓶)、7個1-mL注射器(1.14 mL/注射器)或5個2.25-mL注射器(2 mL/注射器)的樣本匯集，及產生每個讀數為1毫升的3個讀數。將分別使用HRLD400探針(可讀取至高每毫升18,000個累積計數)和MC05探針(可讀取至高每毫升10,000個累積計數)之HIAC9703和HIAC8000A儀器(Hach Company, Loveland, Colo.)，用於產生光阻讀數。
MFI法比HIAC光阻法使用較少的材料(亦即，1 mL調配物，或1個穩定性小瓶或注射器)，並產生比HIAC更高的顆粒數。因為MFI係以顯微鏡為基礎，因此該方法對於半透明蛋白顆粒更敏感，並且能區分矽油液滴/氣泡與預充填注射器樣本的蛋白顆粒。MFI係在含有150 mg/mL單株抗體的實驗室樣本上進行(如HIAC分析)。就MFI，每個讀數為1個1毫升讀數。 測定聚山梨醇酯降解
聚山梨醇酯的降解係使用數種方法中的一或多種來檢測。第一種方法係應用酵素比色分析來定量非酯化脂肪酸(NEFA)。使用NEFA-HR(2)套組(Wako Diagnostics, Richmond, VA)來偵測含有聚山梨醇酯之調配藥物中的脂肪酸。簡言之，在醯基-CoA合成酶 (ACS)的存在下，將樣本與ATP和輔酶A(CoA)組合。可用的(游離的)脂肪酸與輔酶A反應形成醯基-CoA。醯基-CoA產物與氧氣和醯基-CoA氧化酶反應生成反式-2,3-去氫醯基-CoA和過氧化氫。過氧化物酶催化過氧化氫與4-胺基安替比林(4-aminoantipyrine)和3-甲基-N-乙基-N-(β-羥乙基)-苯胺反應形成藍紫色素(最大吸光度在550 nm)。樣本中NEFA的量係與色素的量成正比。就NEFA比色分析的詳細說明，請參見Duncombe, “The Colorimetric Micro-Determination of Non-Esterified Fatty Acids in Plasma,” Clin Chim Acta. 9:122-5 (1964)；Itaya and Ui, “Colorimetric Determination of Free Fatty Acids in Biological Fluids,” J. Lipid Res. 6:16-20 (1965)；Novak, M., “Colorimetric Ultramicro Method for the Determination of Free Fatty Acids,” J. Lipid Res. 6:431-3 (1965)；和Elphick, M. C., “Modified Colorimetric Ultramicro Method for Estimating NEFA in Serum,” J. Clin. Pathol. 21(5):567-70 (1968)。
將含有感興趣蛋白(和推定的宿主細胞蛋白污染物)的試驗樣本施用於10 kDa分子量截留過濾器。在10 mM組胺酸(pH6.0)中以大於100 g/L的蛋白回收保留物，並注入聚山梨醇酯得到一100 g/L蛋白、0.8%(w/v)聚山梨醇酯、10 mM組胺酸、pH6.0(t 最初)的試驗樣本。將試驗樣本置於45°C中歷時44小時(t 最終)。於某些樣本注入油酸，用以評估樣本中NEFA的回收效率。聚山梨醇酯降解百分比係計算如下：
第二種測定聚山梨醇酯降解的方法係以質譜為基礎。使用LC/MS分析，此分析得以在不同時間點在45°C培養後測量和比較聚山梨醇酯中最初始的酯百分比和剩餘的酯百分比。根據方法6(無HIC但具有PS降解活性)所製造的MAb1和根據方法3(具有HIC步驟但無PS降解活性)所製造的mAb1(參見實例4和表9)分別作為陰性和陽性對照。
簡言之，將15 mg抗體樣本(大約5-10 mg/mL，或7 mg/mL±1.5 mg/mL)施用於超過濾器(Amicon Ultra 50K，Millipore，Billerica，Mass.)並以14,000×g離心15分鐘或直到剩餘體積略低於設備上的100 μL標記。將1 μL的10%聚山梨醇酯與濃縮蛋白加入旋轉過濾器中，然後渦旋。藉由以1000 g倒置離心5分鐘回收樣本，將全部體積回收至收集試管中。
測量回收的體積並計算聚山梨醇酯的濃度。將1 μL的各回收樣本於個別的試管中稀釋100倍，並使用 Nanodrop 1000(Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, Del.)測量蛋白濃度。然後將樣本以組胺酸緩衝液(10 mM，pH 6.0)和聚山梨醇酯儲液稀釋，以達到150 mg/mL蛋白濃度和0.2% (w/w)聚山梨醇酯濃度。
從各樣本保留時間零(T0)樣本(2 μL)並儲存在-80℃直至使用。將待測樣本在氬氣下密封並於45°C培養用以引發降解，並在規定的時間點移出進行試驗。在各時間點從各樣本中取出2 μL，並以水稀釋至100 μL。各稀釋時間點的樣本係儲存在-80°C。各時間點採集後，將樣本試管頂部空間填入氬氣，重新密封樣本容器，並將樣本放回培養箱繼續培養。
使用陰離子交換管柱(Oasis MAX管柱，30 μm，2.1 mm X 20 mm；Waters Corporation, Milford, MA)分析時間點樣本，接著在t =5分鐘時以逆相層析分析(ACQUITY UPLC® BEH 130 C4管柱，1.7 μm，2.1 mm×50 mm；Waters Corporation, Milford, MA)。逆相輸出係連接至一質譜儀(Thermo Q-Exactive 質譜儀；Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, Del.)。層析條件係如表2所述。
在第一次注射之前，將系統以99%移動相A(0.1%甲酸水溶液)以0.1 mL/分鐘的流速平衡40分鐘。使用水作為空白注射。質譜儀參數係如下：質量範圍150-2000 m/z；加熱器溫度250℃；電壓3.8 kv；鞘氣40；輔助氣10；毛細管溫度350℃；S-lens 50。當不需要以質譜為基準的鑑定時，電霧式偵測(CAD)係使用一分析流速和100°C的去溶劑化溫度(Lisa et al., “Quantitation of triacylglycerols from plant oils using charged aerosol detection with gradient compensation,” J Chromatogr A. 1176(1-2):135-42 (2007)；Plante et al., “The use of charged aerosol detection with HPLC for the measurement of lipids,” Methods Mol Biol. 579:469-82 (2009))。 表2.用於測定聚山梨醇酯降解之層析條件
UPLC系統 Waters ACQUITY UPLC I-Class/Dionex UltiMate 3000
移動相 A: 0.1%甲酸水溶液 B: 0.1%甲酸之乙腈溶液
管柱 Waters Oasis ® MAC 30 μm，2.1 × 20 mm， Part No. 186002052 ACQUITY UPLC ® BEH130 Waters之C4管柱，1.7 μm, 2.1 mm × 50 mm，零件編號186004496
管柱溫度 40° C ± 1 °C
自動取樣器溫度 5 °C ± 2 °C
注射體積 20.0 μL
時間(分鐘) % A % B 流速 (μL/分鐘) 曲線
梯度 起初 99.0 1.0 100 起初
1.0 99.0 1.0 100 線性
5.0 85.0 15.0 100 線性
40.0 1.0 99.0 100 線性
45.0 1.0 99.0 100 線性
45.1 99.0 1.0 100 線性
50.0 99.0 1.0 100 線性
就估計聚氧乙烯(POE)的總量，係使用300-800 m/z範圍提取質譜圖用以避免來自降解蛋白的干擾，並將來自約8-15分鐘之波峰簇積分。就CAD層析圖，係將來自約8-15分鐘的第一組POE波峰直接積分(同樣，滯留時間可能略有移動)。當有其他種類與POE共溶析時，調整基線用以將其對波峰面積的影響減至最小。
就估計POE酯的總量，係使用300-2000 m/z範圍提取質譜圖，並將來自約17-40分鐘的波峰簇積分。就CAD層析圖，係將來自約17-40分鐘之POE酯類波峰簇直接積分。
根據下列方程式計算POE酯類的百分比：
根據下列方程式計算剩餘的POE酯類之百分比：
其中 n=2、4或10天。 實例 1. 不符合的顆粒規範
如美國專利第10,342,876號所述(該專利係以引用的方式併入本文中)，在5°C儲存至少6個月後，經由HIAC光阻評估二個GMP批件之150 mg/mL抗體調配物的目視不可見顆粒。此調配物係包括來自供應商A的0.02%聚山梨醇酯20和150 mg/mL抗 IL-4R抗體。使用親和捕捉和離子交換層析之組合從CHO細胞培養中純化抗體。結果係如表3所示。 表3.儲存後，大小≥10 µm之顆粒數目
5°C儲存 25°C儲存
批件 0個月 6個月 9個月 12個月 6個月
1 125 6,299 13,361 29,505 32,744
2 18 353 8,027 10,797 18,602
實例 2. 脂肪酸酯的品質和純度影響 SVP 調配物
如美國專利第10,342,876號中所述(該專利係以引用的方式併入本文中)，藉由將一抗體以(i)來自供應商A的聚山梨醇酯20(PS20-A)，(ii)來自供應商B的聚山梨醇酯20(PS20-B)，或(iii)聚山梨醇酯80(PS80)調配，檢測非離子清洗劑(聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)的性質和品質對蛋白調配物中目視不可見顆粒形成的影響。表4顯示了來自下列配方之調配原料藥的HIAC SVP(≥10 μm SVP)數據：20 mM組胺酸(pH5.9)、12.5 mM乙酸鹽、0.02%非離子清洗劑(聚山梨醇酯)、5%蔗糖(w/v)、25 mM精胺酸和150 mg/mL抗體，以2.5 mL填充於帶有West S2-F451 4432/50GRY B2-40塞子的5 mL第1型硼矽酸鹽玻璃小瓶中儲存。
本處，含有聚山梨醇酯80的調配原料藥(「mAb1」)隨著時間的顯示出比該等含有聚山梨醇酯20的調配物明顯更少的SVP形成。再者，含有來自供應商B的聚山梨醇酯20(PS20-B)(為一種較高等級的聚山梨醇酯20)之調配物顯示比該等含有來自供應商A的聚山梨醇酯20(PS20-A；一種較低等級的聚山梨醇酯20)之調配物更少的SVP形成。一PS20-A和PS20-B的比較分析顯示，PS20-B比PS20-A具有多5-10%的總酯類，而PS20-A具有比PS20-B更多月桂酸異山梨醇酯，如圖1所示。 表4.帶有各種不同清洗劑在儲存後，大小≥10 µm之顆粒數目
5°C儲存 25°C儲存
批件 非離子清洗劑 0個月 6個月 9個月 12個月 6個月
1 PS20-A 125 6,299 13,361 29,505 32,744
2 PS20-A 18 353 8,027 10,797 18,602
1 PS20-B 25 175 NA 1,138 4,221
2 PS20-B 8 108 NA 1,198 5,682
1 PS80 19 26 NA 22 92
如圖2所示，將包括HP-PS20或SR-PS80的調配原料藥於儲存高達36個月後使用膜顯微鏡法或MFI進一步評估。如圖2B和圖2D所示，另外比較儲存在玻璃瓶中的調配物與儲存在預充填注射器中的調配物之間＞10 µm的顆粒數目。在所有情況下，顆粒數目隨時間實質地增加。
推測，調配物中聚山梨醇酯的脂肪酸酯降解可能提升蛋白不穩定性，並因此造成SVP形成。為了評估聚山梨醇酯降解，係在含有0.02%非離子清洗劑(聚山梨醇酯)之無HIC的150 mg/mL抗體(mAb1)調配物中比較聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80的穩定性(過程3，參見下文和表9))。剩餘酯類(單酯和二酯)的相對量係藉由質譜測定。樣本在5°C儲存6個月或在45°C下儲存2個月後，觀察到聚山梨醇酯20的酯組份顯著降解。在相同條件下，觀察到聚山梨醇酯80的降解程度較低(參見表5)。這些結果與SVP顆粒形成觀察相關。
在相同條件下使用質譜測定以150 mg/mL抗體(mAb1)調配的聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80之降解速率(如上表5所述)，用以測量游離脂肪酸和脂肪酸酯的相對量。使用以下公式測定酯降解百分比：
其中T0=時間零，T1=實驗條件下的時間(亦即，45°C下2個月；5°C下6個月)，而POE=聚氧乙烯。表6顯示了150 mg/mL抗體調配物中聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80的降解百分比。就mAb1，聚山梨醇酯80的降解率(但並非所有的受試抗體)自始至終係低於其他方面相同之抗體調配物中聚山梨醇酯20的降解率。 表5.儲存後剩餘酯類之百分比
清洗劑/化學實體 0個月 於5°C下6個月 於45°C下2個月
PS20 單酯 100% 60% 30%
二酯 100% 30% 10%
PS80 單酯 100% 80% 35%
二酯 100% 75% 25%
表6.儲存後酯類降解之百分比
聚氧乙烯酯 0個月 於5°C下6個月 於45°C下2個月
PS20 0% 22% 63%
PS80 0% 13% 47%
如圖3所示，使用CAD-UHPLC進一步比較儲存於玻璃小瓶或預充填注射器中於包含SR-PS80或HP-PS20之調配物中聚山梨醇酯的降解。在所有情況下，隨著時間，皆有明顯的聚山梨醇酯降解。如圖4所示，SVP的存在係與調配物中剩餘的聚山梨醇酯濃度相關。如圖5所示，使用包括另一種單株抗體mAb5的調配物發現相同的關係。使用拉曼光譜證實，含聚山梨醇酯之調配物中顆粒與脂肪酸的特徵相符。因此，為了解決SVP形成的問題，進一步研究聚山梨醇酯降解和游離脂肪酸顆粒形成的現象。 實例 3. 聚山梨醇酯降解活性
就測定造成聚山梨醇酯降解之成因物質，係如美國專利第10,342,876號(該專利係以引用的方式併入本文中)中所述，將緩衝的mAb1抗體(150 mg/mL)藉由10 kDa過濾分離成兩個部分：蛋白部分和緩衝液部分。於這二個部份以及完整的緩衝抗體中加入0.2%(w/v)的超精製聚山梨醇酯20(PS20-B)，並於45°C應激高達14天。如表7所示，此研究顯示，蛋白部分對於山梨糖醇酐月桂酸酯(亦即聚山梨醇酯20的主要成份)的降解具有影響，但緩衝液部分則無，以及如表8所示，聚山梨醇酯20的降解與抗體濃度相關聯。 表7.各mAb1部分中，山梨糖醇酐月桂酸酯之降解
部份 山梨糖醇酐月桂酸酯%剩餘酯(於45°C下14天)
原料藥 75%     
蛋白部分 75%
緩衝液部分 100%
表8.各mAb1部分中聚山梨醇酯降解與抗體濃度相關聯
部份 抗體濃度(mg/mL) 聚山梨醇酯20%剩餘酯(於45°C下12天)
原料藥 150 82%
蛋白部分 75 92%
緩衝液部分 25 98%
實例 4. 疏水相互作用層析
如美國專利第10,342,876號所述(該專利係以引用的方式併入本文中)，於CHO細胞宿主中製造抗體並使用二種方法之一進行純化(參見表9)。在一種情況下，係使用離子交換劑作為精製步驟(捕捉步驟、離子交換1、離子交換2；「過程3」)純化抗體。在另一種情況下，用於純化抗體的其中一種精製步驟係以疏水相互作用層析作為額外的精製步驟(捕捉步驟、離子交換、疏水相互作用；「過程6」)。將藉由過程3或過程6純化的抗體於20 mM組胺酸(pH5.9)、12.5mM乙酸鹽、5%蔗糖、25 mM精胺酸和0.02%聚山梨醇酯20中調配為150 mg/mL，並於45°C進行強制降解至高達14天。在第14天，約98%的山梨醇酐月桂酸酯(亦即完整的酯)保留在含有使用方法6純化之抗體的調配物中，而只有約28%的山梨醇酐月桂酸酯保留在含有使用方法3純化之抗體的調配物中。因此，疏水相互作用層析(HIC)步驟可能移除了造成聚山梨醇酯降解的活性。 表9.使用各種抗體純化方法之聚山梨醇酯回收率
過程編號 純化步驟 完整PS20%
1 蛋白A親和捕捉(PA) 54%
2 PA ＞陽離子交換(CEX) 25%
3 PA ＞ CEX ＞陰離子交換(AEX) 86%
4 PA ＞ CEX ＞疏水相互作用 (HIC) 90%
5 PA ＞ AEX 83%
6 PA ＞ AEX ＞ HIC 92%
評估批量處理步驟在移除推定的聚山梨醇酯降解因子(推定的酯酶活性)中的角色。將從CHO細胞所製造的抗體進行連續純化步驟，並在各步驟評估聚山梨醇酯20的穩定性。表9中列出了一組實驗的結果，該表提報了各步驟或步驟順序的完整聚山梨醇酯20的百分比。預測完整聚山梨醇酯20的百分比與污染物酯酶活性的量成反比。
將多種不同抗體進行相關聚山梨醇酯降解活性(酯酶)和HIC對該活性之影響的試驗。在各情況下，皆偵測到聚山梨醇酯20降解活性，且該活性實際上藉由併入HIC純化步驟而消除(表10)。 表10.有或無HIC純化之聚山梨醇酯降解
抗體 HIC或無HIC 第15天之PS20降解
mAb1 (IgG4) 無HIC 72%
mAb1 (IgG4) HIC 2.0%
mAb2 (IgG1) 無HIC 41%
mAb2 (IgG1) HIC 2.0%
mAb3 (IgG4) 無HIC 40%
mAb3 (IgG4) HIC 5.0%
mAb4 (IgG4) 無HIC ND
mAb4 (IgG4) HIC 1.0%
探索HIC在目視不可見粒子形成中的角色。不想受限於理論，假設蛋白(例如，抗體)調配物中非離子清洗劑的穩定性與目視不可見顆粒的形成直接相關。界面活性劑活性的喪失可能使蛋白聚集並形成目視不可見顆粒。另外地或另一種選擇，由降解山梨醇酐脂肪酸酯所釋放的脂肪酸亦可能造成目視不可見顆粒形成為不混溶的脂肪酸液滴。因此，於有HIC(例如過程 6)或無HIC(例如過程3)所製造的原料藥(20 mM組胺酸(pH 5.9)、12.5 mM乙酸鹽、5%蔗糖、25 mM精胺酸和0.02%聚山梨醇酯20中的150 mg/mL抗體)中，計數直徑≥10微米的目視不可見顆粒的量。結果(如表11和表12所示)顯示，即使在這些實驗中使用品質較低的PS20-A，但施用HIC步驟顯著地減少原料藥中SVP的形成(少大約十倍)。 表11.在有或無HIC純化下，大小≥10 µm之顆粒數目
5°C儲存 25°C儲存
製程 0個月 6個月 12個月 24個月 6個月
使用HIC 129 189 140 178 136
無HIC 35 769 1,342 14,346 1,951
表12.在有或無HIC純化下，大小≥25 µm之顆粒數目
5°C儲存 25°C儲存
製程 0個月 6個月 12個月 24個月 6個月
使用HIC 15 12 28 28 6
無HIC 3 59 30 429 70
包括PS20或PS80並以HIC製造的mAb1調配物隨時間進一步表徵顆粒的形成，如圖6所示。包括PS20或PS80的調配物，如藉由膜顯微鏡或MFI所測，並未顯示隨時間之顆粒形成增加。
將以HIC製造之mAb1調配物進一步評估隨時間的聚山梨醇酯降解，如圖7所示。與上述SVP結果一致，經過HIC製程的調配物即使在儲存超過36個月並未顯現出明顯的聚山梨醇酯降解。 實例 5. 假定的類磷脂酶 B-2 活性
如美國專利第10,342,876號中所述(該專利係以引用的方式併入本文中)，於CHO細胞培養中產生的示例抗體之HIC純化期間追踪聚山梨醇酯降解活性。將部分純化的CHO細胞萃取物施用於HIC(苯基瓊脂糖)。收集幾乎含有所有抗體的流出物並分析聚山梨醇酯降解活性。在此流出的溶離份中並未觀察到聚山梨醇酯降解活性。從HIC媒劑中剝離HIC結合部分及隨後進行100 kDa截留超濾/透析。未過濾的剝離部份含有9.9%的聚山梨醇酯降解活性，過濾滲透液含有1.3%的聚山梨醇酯降解活性和5%的抗體產率，過濾保留物含有7.4%的聚山梨醇酯降解活性和95%的抗體產率。 表13.脂酶抑制劑濃度降低聚山梨醇酯20降解之百分比
脂酶抑制劑 0 mM 0.001 mM 0.01 mM 0.1 mM
奧利司他(Orlistat) 0% 0% 27.8% 67%
磷酸二乙基繖形酮(Diethylumbelliferyl phosphate) 0% 48% 100% ＞ 95%
URB602 0% 0% 20% 0%
2-丁氧基苯基硼酸 0% 0% 28% 0%
藉由將脂酶抑制劑與摻入聚山梨醇酯20的聚山梨醇酯降解活性溶離份組合來試驗聚山梨醇酯降解活性是否為脂酶。表13係呈現顯示由於脂酶抑制劑所導致的聚山梨醇酯降解活性相對於對照物(具有相關的聚山梨醇酯降解活性之抗體加上不含脂酶抑制劑的聚山梨醇酯20)之下降數據。脂酶抑制劑降低或消除了與抗體相關的聚山梨醇酯降解活性。
將含有聚山梨醇酯降解活性之CHO-製造的重組抗體HIC剝離部份(非流出物)以結合/溶析模式進行額外的HIC，其中抗體係以淺梯度溶析。檢測溶析溶離份的PS20降解活性並將該等具進行有此活性的溶離份進行(i)完整的質譜分析，(ii)天然粒徑排阻層析UV分析(SEC-UV)，和(iii)胰蛋白酶消化接著LC-MS和蛋白體搜尋分析。逆相液相層析溶離份的完整質譜分析揭示了疏水溶離份L8(疏水性最強的溶離份)中的未知物質。含有聚山梨醇酯20及摻入L8(1:100)的調配抗體樣本在第8天顯示出20%的聚山梨醇酯降解。在疏水性較低的溶離份L3-L7以及L8中偵測到抗體單體和游離輕鏈。在溶離份L5-L8中偵測到抗體二聚物。
在天然條件下將HIC剝離溶離份L3-L9進行SEC-UV。溶離份L8分為三個首先出現的主要波峰和二個隨後出現的次波峰並代表較小的物類。離開管柱的第一個波峰含有抗體二聚物和其他寡聚物。第二個波峰含有抗體單體。第三個波峰含有具有聚山梨醇酯降解活性的物類。因此，降解活性與抗體為可分離的且比抗體單體具有更小的分子旋轉。
亦將HIC溶離份L8進行散彈式蛋白體學分析。簡言之，將L8溶離份依次(i)保留在10k Da過濾器上，(ii)於6M胍-HCl、100mMTris-HCl、pH7.5中重建，(iii)於50°C在10 mM三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)溶液中處理30分鐘)，接著在室溫於黑暗中以20 mM吲哚-3-乙酸(IAA)處理30分鐘，(iv)稀釋八倍，以1份胰蛋白酶對20份樣本加入胰蛋白酶，並於37°C培養4小時，及然後(v)進行LC-MS/MS分析。所生成的胜肽序列之蛋白體學搜尋揭示了與L8相關的5種蛋白：(i)推定的類磷脂酶B-2(占波峰分數的15%)，(ii)過氧化物氧還蛋白-1(peroxiredoxin-1)，(iii)熱休克27 kDa蛋白1，(iv)後期促進複合亞單元1，和(v)U3小核糖核蛋白MPP10。
聚山梨醇酯降解活性的量係與存在的類磷脂酶B-2蛋白(PLBL2)的豐度相關聯。在各種純化步驟中，PLBL2的量係經由nanoLC-MS或LC-MS測定，並測定聚山梨醇酯降解率(摻入PS20溶離份)。PLBL2的豐度係以脂酶和原料藥(亦即抗體)之胜肽強度比率為基礎所計算。結果係顯示於圖8和表14中。 表14.PLBL2和聚山梨醇酯降解之相關性
溶離份 PS20降解% 相對量PLBL2(ppm) 2
ProA匯集物 69.02% 991
CEX匯集物 55.24% 403
AEX匯集物 12.85% 84
HIC匯集物 8.67% 0
HIC匯集物2 10.96% 0
HIC剝離物 83.75% 1384
mAb1製程3(實例4) 4.60% 0
mAb1製程6(實例4) 1 29.12% 92
1以濃度調整的降解率 2以脂酶和原料藥(亦即抗體)之胜肽強度比率為基礎所計算的磷脂酶豐度 實例 6. 使用 AEX 降低脂酶活性
研究了陰離子交換(AEX)層析單元操作降低藥物調配物中脂酶量之能力。以流通模式進行AEX，其中帶負電荷的雜質被吸附到固定的帶正電配體(管柱)上，而產物則流過。將視為最可能影響脂酶活性的製程參數，使用逐步回歸產生傳遞函數。所生成的模型之可視化係如圖9所示。使用最佳化算法最大化製程的有利條件和穩健性，此模型可用於合理的設定點和範圍選擇。令人驚訝地發現，脂酶活性與AEX負載pH值呈負相關，其提供了一種藉由最佳化AEX層析條件來最小化脂酶活性的新方法。
以四個先導規模(pilot-scale)(500 L)確認批件來驗證最佳化的AEX製程之效能，如表15所示。藉由在摻入0.8%w/v聚山梨醇酯20後於45°C將濃縮樣本應激44小時並測量非酯化脂肪酸(NEFA)的變化來測量脂酶活性。將這些批件的陰離子交換過程效能與衍生自具有輸入參數之估計變化的設定點運行過程之蒙特卡洛模擬的小規模模型預測相比較，如圖10所示。確認批件反應係以橙色實線表示。對於使用本發明方法所製造的抗IL-4R抗體，所有反應皆在從按比例縮小的多變量模型所產生的預測範圍內，其說明了對放大規模的製程穩健性和小規模模型用於預測先導規模性效能之適當性。 表15.製程確認批件期間之離子交換步驟500 L規模效能的彙整
生物反應器 B1 B2 B3 B4 確認批件 ( 平均 ±SD, N=4) 縮小規模 ( 平均 ±SD)
AEX承載脂酶活性(%) 6.31 6.30 6.29 7.28 6.55 ± 0.49 N/A
AEX匯集物脂酶活性(%) 2.29 3.21 2.33 2.64 2.62 ± 0.42 4.3 ± 0.6
SD，標準差 實例 7. 最佳化脂肪酸組成用以降低顆粒形成
感興趣蛋白以其結構和物化特性為基準可能對脂酶移除帶來另外的挑戰。mAb5係依照典型的HCP移除技術所調配，但在儲存中隨著時間仍然顯現聚山梨醇酯降解，如圖11和圖12所示。同源模擬顯示，相較於mAb6和mAb7，mAb5的特徵為較大的疏水貼片(hydrophobic patch)，如圖13所示，其可能造成mAb5與疏水性脂酶的共溶析。因此，研究了降低聚山梨醇酯降解和SVP形成之進一步的方法。
脂肪酸組成和高熔點組份的百分比分佈對於預測顆粒形成為有用的考量。具有高熔點的游離脂肪酸可能形成不溶性顆粒，這些顆粒可在室溫和分析評估期間偵測到。表16中顯示了不同聚山梨醇酯的脂肪酸組成以及其各自的熔點。市售的聚山梨醇酯可能具有廣泛熔點範圍之脂肪酸組成，其中PS80特徵為較高濃度的低熔點脂肪酸，尤其是油酸。 表16.市售聚山梨醇酯之脂肪酸組成
脂肪酸 %( 來自 CoA) SR-PS20 Seppic PS80 Croda SR-PS80 NOF PS80 (ChP) Croda 高油酸 SR-PS80 (ChP) 熔點 (°C)
癸酸 ≤ 10 1.7 - - - - 31.6
月桂酸 40.0-60.0 55.6 - - - - 43.2
肉豆蔻酸 ≤ 5.0 22.8 0 0 NMT0.1 0 54.4
棕櫚酸 ≤ 16.0 10.8 12 1.4 0.2 0.1 62.9
硬脂酸 ≤ 6.0 0.3 2.8 2.3 NMT0.1 0 69.3
油酸 ≥58.0 (≥98.0 ChP) 6.9 70.6 87.8 99.3 99.5 13.4/16.3
如美國專利申請公開案號20190083618 A1中所述(該專利係以引用的方式併入本文中)，將在無HIC步驟下所製備的mAb1藥物產品(DP)之儲存穩定性於包括不同等級PS80之樣本中評估。各DP樣本具有2.13 6mL之體積，含有相同濃度的mAb1(150 mg/mL)，以及0.2%(w/v)數批PS80其中之一。各PS80批件係具有三種不同百分比含量之油酸酯(70%、87%和≥99%)中的一種。表17係彙整各FDS樣本中PS80之油酸酯的百分比含量。 表17.
樣本 PS80(批件)之油酸酯含量%
DP A 87%
DP B ≥ 99% (批件1)
DP C ≥ 99% (批件2)
DP D 70% (批件1)
DP E 70% (批件2)
DP F 70% (批件3)
將DP樣本置於玻璃預充填注射器中在2-8°C下儲存至高達24個月。藉由膜顯微鏡法和微流造影(MFI)，每6個月測量各DP樣本中的顆粒，共計24個月。
圖14係顯示如藉由膜顯微鏡所測，每個容器中具有≥10 μm之直徑的SVP數目。圖15係以圖表形式顯示如藉由MFI所測，每個容器中具有≥10 μm之直徑的SVP數目。如圖14和圖15所示，如藉由膜顯微鏡(圖14)和MFI(圖15)所測，DP B和DP C(含有油酸酯含量≥99%之PS80的二個DP樣本)在整個24個月期間展現最低的SVP數目。含有87%油酸酯含量的PS80之DP A在24個月期間展現次低數目的目視不可見顆粒(尤其是，到24個月時顯現800到1200個顆粒)。DP D、E和F在至少18個月時每個容器顯現超過3000個顆粒(如藉由二種方法所測)。
假設DP A、B和C中較低的顆粒數目，(相較於DP D、E和F中較多的顆粒數目)係使用具有較高的油酸(或長鏈脂肪酸)酯百分比含量之PS80的結果。油酸為一種較長鏈的脂肪酸，具有一個不飽和鍵(參見圖16)。因此，其具有約13°C之低於環境溫度的熔化溫度。目視不可見和可見的游離脂肪酸(FFA)顆粒形成之前驅物為個別FFA鏈聚集成聚集物，然後以顆粒形式沉澱。當調配物儲存在5°C期間，藉由例如聚山梨醇酯80中脂肪酸酯的酵素性水解，可能產生油酸。此油酸可能形成SVP，但由於其低熔點，此等顆粒更可能在進行分析的室溫(約22°C)下，以油狀液體形式存在於蛋白調配物，且因此在室溫下不會以目視不可見顆粒形式存在。相反地，調配物中較高量的非油酸酯含量將導致在水解後形成其對應的FFA，且由於其較高的熔化溫度，由此形成的目視不可見和可見無定形顆粒在分析期間中於環境溫度下會持續存在。
此外，由於油酸酯的較高疏水性，油酸酯為比短鏈脂肪酸之酯類更好的增溶劑/穩定劑，其使油酸酯能增溶游離脂肪酸和蛋白顆粒，從而保持產品穩定性。因此，相較於較低油酸酯含量的聚山梨醇酯80，具有較高的油酸酯含量(＞98%)之聚山梨醇酯80可提供蛋白調配物和藥物產品提升的穩定性。
在將樣本於5°C儲存18個月後，評估各樣本DP(DPA-F)中各種類型的游離脂肪酸濃度(以微克/mL計)。如上所述製備樣本DP A-F。在第18個月時藉由LC-MS測量游離脂肪酸濃度，如圖17所示。DP B和C(含有油酸酯含量≥99%之PS80二種DP樣本顯示出最高的油酸濃度，以及最低的其他FFA濃度。此項顯示DP B和C中FFA(亦即油酸)的均勻性。這項進一步顯示使用包括高油酸濃度的聚山梨醇酯可在環境溫度下降低游離脂肪酸顆粒的形成，即使在包括造成游離脂肪酸產生的脂酶調配物中亦是如此。 實例 8. 以 PEG3350 或泊洛沙姆 188 防止含 - 脂酶製調配物中的顆粒形成
酯酶或脂酶可藉由酯鍵之酵素性水解來水解聚山梨醇酯，如圖18A所示。替代的界面活性劑PEG3350和泊洛沙姆188不含有酯鍵且因此並非酯酶之目標，如圖18B所示。以PS20、PS80或泊洛沙姆188調配mAb5並比較界面活性劑的回收率，如圖19所示。不同於PS20和PS80調配物，泊洛沙姆調配物在所有試驗溫度下皆未經歷回收率損失。
為了研究使用替代的界面活性劑是否能降低調配的DP中SVP形成，係使用替代的界面活性劑製備IL-4R抗體調配物，並測量隨時間之顆粒形成，如美國臨時申請案第63/337532號中所述，該專利係以引用的方式併入本文中。以20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鈉、25 mM精胺酸-HCl、5%w/v蔗糖，以及各種不同濃度的PEG3350或泊洛沙姆188，pH 5.9調配濃度150 mg/mL之包括SEQ ID NO:1/2之HCVR/LCVR胺基酸序列對的抗IL-4R抗體。將調配物置於注射器中於5°C儲存至高達36個月，並定期測量存在調配物中的顆粒數目(≥10µm和≥25µm)，如藉由顯微鏡所測。如圖20所示，在36個月的觀察期內，在調配物中鑑別出極少≥10µm或≥25µm的顆粒。再者，在儲存期期間，在含不同的PEG3350或泊洛沙姆188的調配物中，未觀察到目視不可見顆粒數目的明顯差異或變化。
這些結果驗證了替代的界面活性劑如泊洛沙姆188在含有脂酶之調配物中對降解具阻抗性，且低濃度的PEG3350或泊洛沙姆188可防止在長期儲存期間DP調配物中的顆粒形成。
為了評估替代界面活性劑促進治療性蛋白穩定性之能力，係進一步將包括PEG3350或泊洛沙姆188的調配物進行攪拌應激穩定性和熱應激穩定性之評估。試驗含有不同濃度的界面活性劑PEG3350或泊洛沙姆188之IL-4R抗體調配物的攪拌應激穩定性。以20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鈉、25mM精胺酸-HCl、5%w/v蔗糖和不同濃度的PEG3350或泊洛沙姆188，於pH 5.9調配一濃度150 mg/mL、包括SEQ ID NO:1/2之HCVR/LCVR胺基酸序列對的抗IL-4R抗體。將調配物儲存在玻璃小瓶中並藉由渦旋(速度設置=4)攪拌30分鐘、60分鐘或120分鐘。然後藉由粒徑排阻超高效液相層析(SE-UPLC)測定高分子量(HMW)物類的百分比。
如圖21A所示，具有至少0.01%(w/v)PEG3350的抗體調配物防止了由於攪動所致之HMW物類(藉由SE-UHPLC定量)的可觀察增加。較低量的PEG3350(0.001%或0.005%)不足以防止HMW形成。類似地，如圖21B所示，含有至少0.01%(w/v)泊洛沙姆188的抗體調配物防止了可觀察的HMW物類增加，但含有較低量的泊洛沙姆188(0.001%或0.005%)則有觀察到HMW物類。
另外試驗了含有PEG3350或泊洛沙姆188之IL-4R抗體調配物的熱應激穩定性，並與各種含有聚山梨醇酯的IL-4R抗體調配物相比較。以20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鈉、25 mM精胺酸-HCl、5%w/v蔗糖和不同濃度的聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、PEG3350或泊洛沙姆188，pH 5.9調配一濃度150 mg/mL、包括SEQ ID NO:1/2之HCVR/LCVR胺基酸序列對的抗IL-4R抗體。將這些調配物進行熱應激(45°C)歷時至高56天，並藉由粒徑排阻超高效液相層析(SE-UPLC)於第7天、第14天、第28天、第42天和第56天測定高分子量(HMW)物類的百分比。
如圖22所示，包括濃度0.01%或0.02%之PEG3350或泊洛沙姆188的抗體調配物與含有較低量聚山梨醇酯(至高0.1%w/v)之抗體調配物顯現相似的熱穩定性。到28天時，含PEG3350或泊洛沙姆188的調配物比包括0.2%聚山梨醇酯20之對照調配物展現更低的HMW物類百分比。
比較含有0.2%聚山梨醇酯80(表18)、0.01%泊洛沙姆188(表19)、0.1%泊洛沙姆188(表20)、0.5%泊洛沙姆188(表21)、0.01%PEG3350(表22)、0.1%PEG3350(表23)或0.5%PEG3350(表24)之抗體調配物的熱穩定性，進行另外的研究。各調配物係包括150 mg/mL抗-IL4R抗體、25 mML-精胺酸-HCl、20 mML-組胺酸、12.5 mM乙酸鈉、5%(w/v)蔗糖和界面活性劑，pH值為5.9。相較於包括聚山梨醇酯80的調配物，包括泊洛沙姆188或PEG3350的調配物顯示出穩定性優勢。 表18.含0.2% PS80之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.02 0.16 0.33
pH 6.0 6.0 6.0 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 98 97 94
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 10.3 18.6 26.6
主要% 97.2 88.7 79.0 70.7
LMW% 0.7 1.0 2.4 2.7
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 27.7 53.7 77.9 86.9
主要% 62.5 41.0 20.9 9.5
鹼性% 9.9 5.3 1.3 3.6
MFI(顆粒數/mL) 2-10µm 125 1428 1785 377
≥ 10µm 23 29 209 19
≥ 25µm 4 2 23 4
表19.含0.01%伯洛沙姆188之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.02 0.18 0.28
pH 6.1 6.0 6.1 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 100 97 98
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.1 16.3 23.7
主要% 97.2 90.0 81.4 73.5
LMW% 0.7 0.9 2.3 2.7
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 28.4 51.7 75.5 86.6
主要% 62.1 43.1 21.0 8.9
鹼性% 9.5 5.3 3.6 4.5
MFI(顆粒數/mL) 2-10µm 79 142 648 396
≥ 10µm 17 17 23 8
≥ 25µm 0 6 2 0
表20.含0.1%伯洛沙姆188之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.01 0.14 0.21
pH 6.1 6.0 6.1 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 99 97 100
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.1 16.4 23.7
主要% 97.3 90.0 81.2 73.6
LMW% 0.6 0.9 2.4 2.8
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 28.1 51.9 74.9 84.0
主要% 62.1 46.2 21.0 8.7
鹼性% 9.8 1.9 4.1 7.4
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 69 540 993 811
≥ 10µm 0 17 38 25
≥ 25µm 0 0 2 0
表21.含0.5%伯洛沙姆188之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.02 0.06 0.22
pH 6.1 6.1 6.1 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 100 97 100
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.1 16.8 24.2
主要% 97.3 90.0 80.9 73.1
LMW% 0.6 0.9 2.4 2.7
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 29.5 50.8 77.1 86.6
主要% 61.5 44.5 21.5 9.0
鹼性% 9.1 4.8 1.4 4.4
MFI(顆粒數#/mL) 2-10 µm 179 805 4089 1887
≥ 10µm 10 8 671 307
≥ 25µm 0 2 94 61
表22.含0.01% PEG3350之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月數 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.03 0.14 0.23
pH 6.1 6.1 6.1 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 102 98 100
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.3 16.5 23.6
主要% 97.4 89.9 81.2 73.6
LMW% 0.6 0.9 2.4 2.7
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 29.4 51.6 77.3 86.4
主要% 62.2 46.1 21.5 11.9
鹼性% 8.5 2.4 1.1 1.8
MFI(顆粒數#/mL) 2-10 µm 42 494 1216 2085
≥ 10µm 6 15 44 206
≥ 25µm 0 6 6 40
表23.含0.1% PEG3350之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月數 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.03 0.15 0.23
pH 6.0 6.0 6.1 6.1
以RP-UPLC回收之抗體% 100 97 92 92
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.3 16.1 22.4
主要% 97.4 89.8 81.6 74.9
LMW% 0.6 0.9 2.4 2.8
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 32.1 51.0 77.6 85.7
主要% 60.6 45.6 21.5 10.9
鹼性% 7.4 3.4 0.9 3.5
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 94 313 1541 2058
≥ 10µm 2 15 90 159
≥ 25µm 0 4 0 21
表24.含0.5% PEG3350之調配物的熱穩定性
分析 t=0 於 45°C 儲存的時間 ( 月數 )
1 2 3
目視外觀 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) - 0.02 0.15 0.23
pH 6.1 6.1 6.1 6.0
以RP-UPLC回收之抗體% 100 100 97 98
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.1 9.2 16.7 23.9
主要% 97.3 89.8 81.0 73.4
LMW% 0.6 0.9 2.4 2.7
以CEX-UPLC所測之電荷變體分析 酸性% 29.7 52.0 75.6 83.6
主要% 62.0 45.7 21.3 10.5
鹼性% 8.4 2.3 3.1 6.0
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 121 1289 528 2654
≥ 10µm 0 44 42 279
≥ 25µm 0 25 15 31
CEX，陽離子交換；FCP，最終濃縮匯集物；HMW，高分子量；LMW，低分子量；MFI，微流造影；NR，不需要；OD，光學密度；RH，相對濕度；RP，逆相；SE，粒徑排阻；UPLC，超高效液相層析 實例 9. 使用攪拌應激和熱應激降低脂酶活性
為了進一步降低治療產品中酯酶和脂酶活性、游離脂肪酸顆粒形成及/或聚山梨醇酯降解，係研究降低調配原料藥中酯酶和脂酶活性的另外方法。令人驚訝地發現，讓原料藥經受應激條件，例如攪拌應激或熱應激，可用於降低酯酶和脂酶活性並增加原料藥和後續藥物產品中治療性分子和界面活性劑的長期穩定性。
將於無HIC步驟下所製造的mAb1原料藥進行攪拌應激。使用30 mL的200 mg/mL mAb1 DS。於二個125 mL聚碳酸酯瓶中各填入10 mL DS，並於迴轉式震盪器上以250 rpm攪拌0、24或48小時。將剩餘的10 mL DS轉置於15 mL Falcon試管中並用作無應激的對照。將2 mL的各DS進行應激前(對照)DS(攪拌0小時)或應激後DS(攪拌24或48小時)之分析。
將對照或應激DS用於製備150 mg/mL最終原料藥(FDS)，包括150 mg/mL mAb1、20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鹽、5%蔗糖、0.2%高純度PS20和25 mM精胺酸鹽酸鹽，pH 5.9。將FDS過濾殺菌及然後於45°C儲存0週、4週或8週。選擇45°C儲存係為了加速穩定性研究。使用目視檢查可見顆粒和聚集物、以SE-UPLC進行高和低分子量物類分析、以微流造影進行目視不可見顆粒(2-300 µm)分析，及以CAD-UPLC測定PS20量，來分析上面所收集的每個樣本之物理穩定性。
經過攪拌應激和過濾步驟的mAb1原料藥顯示隨著時間有較少的顆粒形成及較佳的聚山梨醇酯保留，如表25所示。 表25.經過攪拌應激之調配物的熱穩定性
以 250 rpm 攪拌的時間 ( 小時 ) 0 24 48
於 45°C 儲存的時間 ( 週 ) 0 4 8 0 4 8 0 4 8
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過 通過 通過 通過 通過
以CAD所測之聚山梨醇酯定量% 100 32 25 100 59 48 100 65 33
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 1.7 16.6 30.9
主要% 98.3 83.5 69.1
LMW% 0 0 0
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 1036 3260 503066 739 3955 7792 1269 13974 14415
≥10 µm 54 53 81146 15 53 39 73 140 125
≥25 µm 10 6 17563 3 3 0 7 14 3
MFI USP規格：大小≥10 µm，≤3000個顆粒/容器；大小≥25 µm，≤300個顆粒/容器 CAD，電霧式偵測器；CEX，陽離子交換；FCP，最終濃縮匯集物；HMW，高分子量；LMW，低分子量；MFI，微流造影；NR，不需要；OD，光學密度；RH，相對濕度；RP，逆相；SE，粒徑排阻；UPLC，超高效液相層析。
亦研究了其他形式的應激。將在無HIC步驟下所製造的mAb1原料藥進行熱應激。將DS於45°C儲存0、0.5或1個月用以引起脂酶降解、聚集及/或失活。使用對照和應激DS來製備150 mg/mL FDS，其係包括150 mg/mLmAb1、20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鹽、5%蔗糖、0.2%高純度聚山梨醇酯20和25 mM精胺酸HCl，pH5.9。將FDS過濾殺菌及然後於表26中所列的條件下儲存。 表26.來自熱應激DS之FDS的培養/儲存條件
應激條件 培養時間
無儲存 t=0
45°C 0.5、1、1.5、2個月
25°C 3、6個月
5°C 3、6、12、18、24、36個月&3個備份
使用目視檢查可見顆粒和聚集物、以SE-UPLC分析高和低分子量物質、以微流造影進行目視不可見顆粒(2-300 µm)分析，以及以CAD-UPLC測定PS20量，來分析上述經熱應激和對照無應激樣本的物理穩定性。結果係列於下表27-32中。在調配前將DS進行熱應激造成脂酶活性顯著降低，其提升了聚山梨醇酯的回收率並降低游離脂肪酸顆粒形成。無應激樣本顯示目視不可見顆粒隨著時間顯著增加，此項在經應激樣本中並未觀察到。將DS進行熱應激確實造成HMW量顯著增加，但該量在進一步培養期間仍保持穩定。 表27.來自經0個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 5°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 12 18 24 36
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
以CAD所測之聚山梨醇酯定量% 100 53
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.2 2.2 2.5 2.5 2.6 2.7 2.8
主要% 96.6 96.6 95 96.6 96.5 95.9 95.4
LMW% 1.2 1.2 2.5 0.9 0.9 1.5 1.8
MFI(顆粒數/mL) 2–10 µm 264 12265 81,203 141583 243895 273027 371554
≥ 10µm 20 2273 8446 16902 26739 3042 38956
≥ 25µm 3 9 47 530 1780 113 3602
表28.來自經0.5個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 5°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 12 18 24 36
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
以CAD所測之聚山梨醇酯定量% 100 89
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 10.9 10.7 11 12 12 11.6 11.7
主要% 86.3 86.6 85.7 85.8 85.7 85.7 84.9
LMW% 2.8 2.7 3.4 2.2 2.3 2.7 3.4
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 349 6691 5828 1794 3052 21842 258288
≥ 10µm 16 216 61 34 222 3641 3586
≥ 25µm 2 21 8 6 36 248 119
表29.來自經1個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 5°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 12 18 24 36
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
以CAD所測之聚山梨醇酯定量% 100 90
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 17.3 17.4 17.7 19 18.9 18.6 18.5
主要% 78.5 78.4 77.6 77.6 77.6 77.2 76.7
LMW% 4.2 4.2 4.7 3.5 3.5 4.2 4.8
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 160 3898 2081 35220 4806 824 5189
≥ 10µm 7 52 14 1017 119 39 109
≥ 25µm 2 6 1 30 5 2 8
表30.來自經0個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 25°C 儲存的時間 ( 月 ) 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 0.5 1 1.5 2
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
PS-20量(CAD-UPLC) 100 16 33
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.2 3 3.5 6.2 8.5 13.3 17.4
主要% 96.6 95.8 94.2 92.2 89.2 84.4 79.9
LMW% 1.2 1.2 2.3 1.6 2.3 2.3 2.7
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 264 19609 146335 25146 2532 8226 263410
≥ 10µm 20 492 23326 750 47 206 41033
≥ 25µm 3 19 3825 60 5 20 9790
表31.來自經0.5個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 25°C 儲存的時間 ( 月 ) 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 0.5 1 1.5 2
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
PS-20量(CAD-UPLC) 100 68 75
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 10.9 11 11.5 14.5 14.6 21.2 24.8
主要% 86.3 86.2 84.4 82.3 81 74.5 70.3
LMW% 2.8 2.8 4.2 3.2 4.4 4.4 4.9
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 349 6232 8660 4838 9249 18683 7797
≥ 10µm 16 52 169 60 172 426 272
≥ 25µm 2 4 3 8 0 29 6
表32.來自經1個月熱應激DS之調配物的穩定性
分析 t=0 於 25°C 儲存的時間 ( 月 ) 於 45°C 儲存的時間 ( 月 )
3 6 0.5 1 1.5 2
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) -
pH
PS-20量(CAD-UPLC) 100 77 84
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 17.3 17.5 17.6 20.8 19.4 27 30.2
主要% 78.5 78.4 77.2 74.6 74.4 67.4 63.6
LMW% 4.2 4.2 5.2 4.6 6.2 5.6 6.3
MFI(顆粒數/mL) 2-10 µm 160 5799 11893 3258 10647 18440 4921
≥ 10µm 7 84 236 38 359 453 70
≥ 25µm 2 3 19 10 18 28 4
由於相較於生物治療劑，例如治療抗體，穩定性降低，預計HCP會因應激而過度失活、降解和聚集。DS中受到攪拌應激或熱應激的HMW物質，無論是從HCP、藥物蛋白和組合物所形成的，皆可使用例如過濾或層析之進一步處理步驟移除。將經熱應激DS進行陽離子交換(CEX)層析移除在應激條件期間所形成的HMW物類。HMW物類從經應激的DS中有效耗竭，如表33所示。 表33.來自經應激原料藥之HMW物類的清除
分析 t=0 1 週的熱應激 2 週的熱應激
45°C 50°C 45°C 50°C
CEX純化前SE-UPLC所測之純度 HMW% 1.7 10.2 26.2 17.0 33.6
主要% 98.3 89.8 73.8 83.0 66.4
CEX純化後SE-UPLC所測之純度 HMW% 1.3 2.3 2.3 2.5 2.5
主要% 98.7 97.7 97.7 97.5 97.5
將HMW-耗盡的DS調配成包括150 mg/mL mAb1、20 mM組胺酸、12.5 mM乙酸鹽、5%蔗糖、0.2%PS80和25 mM精胺酸HCl，pH 5.9之FDS。將來自HMW-耗盡之熱應激DS的FDS的穩定性與來自HMW-耗盡之非應激DS的FDS相比較，如表34所示。僅一周後(0.25個月)，相較於HMW-耗盡的非應激DS，來自HMW-耗盡之應激DS的FDS顯示出PS80回收大大提高。在後面的時間點可測量到進一步的改善；預計在HMW-耗盡的非應激DS中PS80降解後，有來自積累游離脂肪酸之可測量的游離脂肪酸顆粒形成。應注意的是，由於層析步驟造成非應激DS中HCP脂肪酶耗盡，HMW-耗盡後應激和非應激DS之間脂酶活性的差異亦可能被掩蓋。這些結果驗證了，將原料藥進行攪拌應激或熱應激，視需要接著HMW耗盡之揭示方法產生脂酶活性降低、聚山梨醇酯降解降低和游離脂肪酸顆粒形成減少之改進的醫藥組成物。 表34.來自HMW-耗盡熱應激DS之調配物的熱穩定性
原料藥熱應激 對照組 於 45°C 下 1 週 於 50°C 下 1 週
於 45°C 儲存的時間 ( 月 ) 0 0.25 0 0.25 0 0.25
目視外觀 通過 通過 通過 通過 通過 通過
混濁度增加(OD 405 nm) 0.0 0.03 0.0 0.01 0.0 0.0
pH 6.2 6.2 6.2 6.2 6.1 6.0
PS-80量(CAD-UPLC) 100 68 100 97 100 101
以SE-UPLC所測之純度 HMW% 2.2 4.0 2.7 3.8 3.0 4.0
主要% 97.7 95.7 97.0 95.9 96.7 95.7
LMW% 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
以RP-UPLC回收的mAb1% 100 103 100 103 100 103
MFI(顆粒數/mL) 2–10 µm 876 438 323 646 469 947
≥ 10µm 48 31 6 27 29 148
≥ 25µm 2 4 0 2 8 48
本發明範圍不受限於文中所述之特定方面。實際上，除了該等文中所描述的外，從前面的描述，本發明之各種修改對於熟習本項技術者將變得顯而易見。此等修改希望係落在所附的申請專利範圍內。 編號實例
下文所列之下列編號實例係提供本揭示文之另外方面。 1. 一種用於製造具有降低的脂酶之醫藥組成物之方法，係包括： 將包含感興趣蛋白和脂酶的樣本進行陰離子交換層析，其中載入到層析管柱之樣本的pH係介於約7.8和約8.3之間。 2. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法，係包括： (a)    將包含感興趣蛋白和脂酶的樣本進行應激條件，用以形成具有失活的脂酶之樣本；及 (b)   以失活的脂酶調配該樣本，用以產生一具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。 3. 如實例2之方法，其中該感興趣蛋白為一抗體、抗體衍生的蛋白、抗體片段、單株抗體、雙特異性抗體、融合蛋白、抗體-藥物接合物或治療蛋白。 4. 如實例2或3之方法，其中該調配步驟係括將一脂肪酸酯加入該樣本中，其中該脂肪酸酯為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。 5. 如實例4之方法，其中該脂肪酸酯為聚山梨醇酯 80，且在該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。 6. 如實例5之方法，其中在該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。 7. 如實例2-6中任一例之方法，其中該應激條件係包括攪拌應激及/或熱應激。 8. 如實例7之方法，其中該攪拌應激係包括以50至500 rpm，200至300 rpm，約50 rpm，約75 rpm，約100 rpm，約125 rpm，約150 rpm，約200 rpm，約225 rpm，約250 rpm，約275 rpm，約300 rpm，約325 rpm，約350 rpm，約375 rpm，約400 rpm，約425 rpm，約450 rpm，約475 rpm，或約500 rpm震盪該樣本。 9. 如實例7之方法，其中該攪拌應激係包括震盪該樣本歷時1至96小時， 24至48小時，約1小時，約2小時，約3小時，約4小時，約5小時，約6小時，約12小時，約18小時，約24小時，約30小時，約36小時，約42小時，約48小時，約60小時，約72小時，約84小時，或約96小時。 10. 如實例7之方法，其中該熱應激係包括於約30°C至約60°C，約35°C至約55°C，約40°C至約50°C，約44°C至約46°C，約30°C，約35°C，約40°C，約45°C，約50°C，約55°C，或約60°C下儲存該樣本。 11. 如實例10之方法，其中該儲存為1天至6個月，3天至3個月，1週至2個月，0.5個月至1個月，，約1天，約2天，約3天，約1週，約2週，約0.5個月，約3週，約4週，約1個月，約5週，約6週，約7週，約8週，約2個月，約3個月，約3.5個月，約4個月，約4.5個月，約5個月，約5.5個月，或約6個月。 12. 如實例2-11中任一例之方法，其進一步係包括在步驟(b)之前將帶有失活的脂酶的該樣本進行過濾、富集或層析分離，用以移除高分子量(HMW)物類。 13. 如實例12之方法，其中該層析分離係包括陽離子交換層析。 14. 如實例12之方法，其中該層析分離係包括粒徑篩析層析。 15. 如實例2-14中任一例之方法，其中該調配步驟係包括將賦形劑加到該樣本中。 16. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法： (a) 將收取的抗體進行親和層析； (b) 將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體在約3至約4的pH下進行病毒失活及然後將pH調節到約5至約8； (c) 將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析； (d) 將匯集自步驟(c)溶析液的該抗體以流通模式進行疏水相互作用層析； (e) 將匯集自步驟(d)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾； (f)  將來自步驟(e)之包含感興趣抗體和脂酶的樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。 17. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法： (a) 將收取的抗體進行親和層析； (b) 將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體於約3至約4的pH進行病毒失活及然後將pH調整到約5至約8； (c) 將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析； (d) 將匯集自步驟(c)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾； (e)  將來自步驟(d)包括一感興趣抗體和脂酶之樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。 18. 如實例16或17之方法，進一步係包括將醫藥組成物進行過濾、富集或層析分離，用以移除HMW物類。 19. 如實例18之方法，其中該層析分離係包括離子交換層析、陽離子交換層析或粒徑篩析層析。 20. 如實例6-19中任一例之方法，其中載入AEX管柱之樣本的pH係介於約7.8至約8.3之間。 21. 一種用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的方法，係包括： 藉由將包含感興趣蛋白和脂酶之樣本進行陰離子交換(AEX)層析來降低組成物中的脂酶活性，其中載入AEX管柱中的樣本之pH係介於約7.8至約8.3之間。 22. 如實例21之方法，進一步係包括將AEX層析後所形成的樣本進行攪拌應激或熱應激，用以降低脂酶活性之步驟。 23. 如實例16-22中任一例之方法，進一步係包括加入泊洛沙姆188或PEG3350，用以產生一包含具有降低的脂酶活性和穩定性增加之醫藥組成物的調配物。 24. 如實例23之方法，其中該調配物實質上無聚山梨醇酯。 25. 如實例23或24之方法，其中該泊洛沙姆188的濃度為0.005%至5%，0.05%至2.5%，0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。 26. 如實例23或24之方法，其中該PEG3350的濃度為0.005%至5%，0.05%至2.5%，0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。 27. 一種用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的方法，係包括： (a) 將收取的重組蛋白以流通模式進行陰離子交換層析； (b) 將來自步驟(a)的流通溶離份以流過模式進行疏水相互作用層析；及 (c)  將分離自步驟(b)的重組蛋白以聚山梨醇酯80調配，其中該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。 28. 如實例27之方法，其中該油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。 29. 如實例1或16-28中任一例之方法，其中載入陰離子交換層析管柱中的樣本之pH為約7.8至約8.3，約7.9至約8.2，約7.8，約7.9，約8.0，約8.1，約8.2，或約8.3。
無
根據一方面，圖1係顯示一層析圖，其係顯示具有(A)較低品質聚山梨醇酯20(PS20-A)，(B)較高品質聚山梨醇酯20(PS20-B)，以及(C)聚山梨醇酯80(PS80)之不同分子種類的相對量。
根據一方面，圖2A係顯示，如藉由膜顯微鏡所測，包括SR-PS80之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖2B係顯示，如藉由膜顯微鏡所測，包括HP-PS20之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖2C係顯示，如藉由MFI所測，包括SR-PS80之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖2D係顯示，如藉由MFI所測，包括HP-PS20之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖3A係顯示，如藉由CAD-UHPLC所測，包括SR-PS80之mAb1調配物中聚山梨醇酯的回收率。
根據一方面，圖3B係顯示，如藉由CAD-UHPLC所測，包括HP-PS20之mAb1調配物中聚山梨醇酯的回收率。
根據一方面，圖4係顯示，mAb1調配物中顆粒形成和聚山梨醇酯回收率之間的相關性。
根據一方面，圖5係顯示，mAb5調配物中顆粒形成和聚山梨醇酯回收率之間的相關性。
根據一方面，圖6A係顯示，如藉由膜顯微鏡所測，包括SR-PS80及進行HIC純化之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖6B係顯示，如藉由膜顯微鏡所測，包括HP-PS20及進行HIC純化之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖6C係顯示，如藉由MFI所測，包括SR-PS80及進行HIC純化之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖6D係顯示，如藉由MFI所測，包括HP-PS20及進行HIC純化之mAb1調配物中的顆粒形成。
根據一方面，圖7A係顯示，如藉由CAD-UHPLC所測，包括SR-PS80及進行HIC純化之mAb1調配物中的聚山梨醇酯回收率。
根據一方面，圖7B係顯示，如藉由CAD-UHPLC所測，包括HP-PS20及進行HIC純化之mAb1調配物中的聚山梨醇酯回收率。
根據一方面，圖8係顯示，磷脂酶活性(以百萬分之一表示)與聚山梨醇酯20降解百分比之間的相關性。
根據一方面，圖9係顯示，AEX風險因子和反應之多變量研究所產生的模型可視化。
根據一方面，圖10係顯示，相較於來自蒙特卡羅模擬的小規模預測，在確認批次期間AEX儲池脂酶活性(%)表現之比較。
根據一方面，圖11係顯示，從包括mAb5、mAb6和mAb7之調配物中回收聚山梨醇酯。
根據一方面，圖12係顯示，來自不同濃度和培養時間的mAb5調配物之聚山梨醇酯回收率。
根據一方面，圖13係顯示，描繪mAb5、mAb6和mAb7表面疏水性之同源模型。
根據一方面，圖14係顯示，在包括各種類型之聚山梨醇酯80的蛋白藥物產品中，藉由膜顯微鏡方法所測量的許多目視不可見顆粒(≥10 µm)。
根據一方面，圖15係顯示，在包括各種聚山梨醇酯80的蛋白藥物產品中，藉由微流量造影分析(MFI)所測量的許多目視不可見顆粒(≥ 10 µm)。
根據一方面，圖16係顯示，聚山梨醇酯80中之主要的脂肪酸酯，聚氧乙烯(20)山梨醇酐單油酸酯的化學結構。
根據一方面，圖17係顯示，包括各種聚山梨醇酯80之蛋白藥物產品中游離脂肪酸的測量濃度。
根據一方面，圖18A係說明聚山梨醇酯結構和主要的降解路徑。
根據一方面，圖18B係說明泊洛沙姆188之結構。
根據一方面，圖19係顯示，包括PS20、PS80或泊洛沙姆188(P188)之mAb5調配物在各種溫度下的界面活性劑回收。
根據一方面，圖20係顯示，在含有脂酶和PEG3350或泊洛沙姆188(濃度為0.02%、0.04%或0.1% w/v)並在5°C儲存高達36個月之150 mg/mL抗-IL-4R抗體的調配物中，藉由膜顯微鏡鑑別出許多≥10 µm(上方圖)和≥25 µm(下方圖)的顆粒。
根據一方面，圖21A係顯示，於室溫對抗攪拌應激歷時30至120分鐘的期間，PEG3350濃度對150 mg/mL抗-IL-4R抗體調配物之穩定性的影響(為藉由SE-UPLC所測之HMW物類的百分比)。
根據一方面，圖21B係顯示於室溫對抗攪拌應激歷時30至120分鐘的期間，泊洛沙姆188濃度對150 mg/mL抗-IL-4R抗體調配物之穩定性的影響(為藉由SE-UPLC所測之HMW物類的百分比)。
根據一方面，圖22係顯示對抗熱應激歷時高達56天的期間，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、PEG3350和泊洛沙姆188(各種濃度)對150 mg/mL抗-IL-4R抗體調配物之穩定性的影響(為藉由SE-UPLC所測之HMW種類的百分比)。
無
TW202409060A_112116319_SEQL.xml

Claims (29)

  1. 一種用於製造具有降低的脂酶之醫藥組成物之方法，係包括： 將包含感興趣蛋白和脂酶的樣本進行陰離子交換層析，其中載入到層析管柱之樣本的pH係介於約7.8和約8.3之間。
  2. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法，係包括： (a)    將包含感興趣蛋白和脂酶的樣本進行應激條件，用以形成具有失活的脂酶之樣本；及 (b)   以失活的脂酶調配該樣本，用以產生一具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。
  3. 如請求項2之方法，其中該感興趣蛋白為一抗體、抗體衍生的蛋白、抗體片段、單株抗體、雙特異性抗體、融合蛋白、抗體-藥物接合物或治療蛋白。
  4. 如請求項2或3之方法，其中該調配步驟係括將一脂肪酸酯加入該樣本中，其中該脂肪酸酯為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。
  5. 如請求項4之方法，其中該脂肪酸酯為聚山梨醇酯 80，且在該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。
  6. 如請求項5之方法，其中在該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。
  7. 如請求項2-6中任一項之方法，其中該應激條件係包括攪拌應激及/或熱應激。
  8. 如請求項7之方法，其中該攪拌應激係包括以50至500 rpm，200至300 rpm，約50 rpm，約75 rpm，約100 rpm，約125 rpm，約150 rpm，約200 rpm，約225 rpm，約250 rpm，約275 rpm，約300 rpm，約325 rpm，約350 rpm，約375 rpm，約400 rpm，約425 rpm，約450 rpm，約475 rpm，或約500 rpm震盪該樣本。
  9. 如請求項7之方法，其中該攪拌應激係包括震盪該樣本歷時1至96小時， 24至48小時，約1小時，約2小時，約3小時，約4小時，約5小時，約6小時，約12小時，約18小時，約24小時，約30小時，約36小時，約42小時，約48小時，約60小時，約72小時，約84小時，或約96小時。
  10. 如請求項7之方法，其中該熱應激係包括於約30°C至約60°C，約35°C至約55°C，約40°C至約50°C，約44°C至約46°C，約30°C，約35°C，約40°C，約45°C，約50°C，約55°C，或約60°C下儲存該樣本。
  11. 如請求項10之方法，其中該儲存為1天至6個月，3天至3個月，1週至2個月，0.5個月至1個月，，約1天，約2天，約3天，約1週，約2週，約0.5個月，約3週，約4週，約1個月，約5週，約6週，約7週，約8週，約2個月，約3個月，約3.5個月，約4個月，約4.5個月，約5個月，約5.5個月，或約6個月。
  12. 如請求項2-11中任一項之方法，其進一步係包括在步驟(b)之前將帶有失活脂酶的該樣本進行過濾、富集或層析分離，用以移除高分子量(HMW)物類。
  13. 如請求項12之方法，其中該層析分離係包括陽離子交換層析。
  14. 如請求項12之方法，其中該層析分離係包括粒徑篩析層析。
  15. 如請求項2-14中任一項之方法，其中該調配步驟係包括將賦形劑加到該樣本中。
  16. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法： (a)  將收取的抗體進行親和層析； (b) 將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體在約3至約4的pH下進行病毒失活及然後將pH調節到約5至約8； (c)  將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析； (d) 將匯集自步驟(c)溶析液的該抗體以流通模式進行疏水相互作用層析； (e)  將匯集自步驟(d)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾； (f)  將來自步驟(e)之包含感興趣抗體和脂酶的樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。
  17. 一種用於製造具有降低的脂酶活性之醫藥組成物的方法： (a)  將收取的抗體進行親和層析； (b) 將匯集自步驟(a)溶析液的該抗體於約3至約4的pH進行病毒失活及然後將pH調整到約5至約8； (c)  將匯集自步驟(b)的該抗體以流通模式進行陰離子交換層析； (d) 將匯集自步驟(c)流通溶離份的該抗體進行病毒截留過濾； (e)  將來自步驟(d)包括一感興趣抗體和脂酶之樣本進行攪拌應激或熱應激，用以形成具有降低的脂酶活性之醫藥組成物。
  18. 如請求項16或17之方法，進一步係包括將醫藥組成物進行過濾、富集或層析分離，用以移除HMW物類。
  19. 如請求項18之方法，其中該層析分離係包括離子交換層析、陽離子交換層析或粒徑篩析層析。
  20. 如請求項6-19中任一項之方法，其中載入AEX管柱之樣本的pH係介於約7.8至約8.3之間。
  21. 一種用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的方法，係包括： 藉由將包含感興趣蛋白和脂酶之樣本進行陰離子交換(AEX)層析來降低組成物中的脂酶活性，其中載入AEX管柱中的樣本之pH係介於約7.8至約8.3之間。
  22. 如請求項21之方法，進一步係包括將AEX層析後所形成的樣本進行攪拌應激或熱應激，用以降低脂酶活性之步驟。
  23. 如請求項16-22中任一項之方法，進一步係包括加入泊洛沙姆188或PEG3350，用以產生一包含具有降低的脂酶活性和穩定性增加之醫藥組成物的調配物。
  24. 如請求項23之方法，其中該調配物實質上無聚山梨醇酯。
  25. 如請求項23或24之方法，其中該泊洛沙姆188的濃度為0.005%至5%，0.05%至2.5%，0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。
  26. 如請求項23或24之方法，其中該PEG3350的濃度為0.005%至5%，0.05%至2.5%，0.1%至1%，約0.05%，約0.01%，約0.02%，約0.03%，約0.04%，約0.05%，約0.06%，約0.07%，約0.08%，約0.09%，約0.1%，約0.15%，約0.2%，約0.25%，約0.3%，約0.4%，約0.5%，約1%，約1.5%，約2%，約2.5%，約3%，約3.5%，約4%，約4.5%，或約5%。
  27. 一種用於製造具有穩定性增加之醫藥組成物的方法，係包括： (a)  將收取的重組蛋白以流通模式進行陰離子交換層析； (b) 將來自步驟(a)的流通溶離份以流過模式進行疏水相互作用層析；及 (c)  將分離自步驟(b)的重組蛋白以聚山梨醇酯80調配，其中該聚山梨醇酯80中油酸酯的濃度為至少80%。
  28. 如請求項27之方法，其中該油酸酯的濃度為至少98%或至少99%。
  29. 如請求項1或16-28中任一項之方法，其中載入陰離子交換層析管柱中的樣本之pH為約7.8至約8.3，約7.9至約8.2，約7.8，約7.9，約8.0，約8.1，約8.2，或約8.3。
TW112116319A 2022-05-02 2023-05-02 用於降低脂酶活性之方法 TW202409060A (zh)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202263337532P 2022-05-02 2022-05-02
US63/337,532 2022-05-02
US202363436850P 2023-01-03 2023-01-03
US63/436,850 2023-01-03
US202363499441P 2023-05-01 2023-05-01
US63/499,441 2023-05-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202409060A true TW202409060A (zh) 2024-03-01

Family

ID=86710812

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112116319A TW202409060A (zh) 2022-05-02 2023-05-02 用於降低脂酶活性之方法

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20240199688A1 (zh)
EP (1) EP4518839A2 (zh)
JP (1) JP2025515041A (zh)
KR (1) KR20250004903A (zh)
CN (1) CN119497609A (zh)
AU (1) AU2023265659A1 (zh)
CL (1) CL2024003324A1 (zh)
CO (1) CO2024016122A2 (zh)
IL (1) IL316694A (zh)
MX (1) MX2024013478A (zh)
TW (1) TW202409060A (zh)
WO (1) WO2023215750A2 (zh)

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0747045B2 (ja) 1986-10-15 1995-05-24 株式会社大協精工 積層した注射器用滑栓
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
JP3100727B2 (ja) 1992-01-23 2000-10-23 株式会社大協精工 変性ポリシロキサン組成物及び該組成物を被覆した衛生ゴム製品
JP3172057B2 (ja) 1995-04-05 2001-06-04 株式会社大協精工 ラミネートゴム栓
JP3512349B2 (ja) 1999-01-29 2004-03-29 株式会社大協精工 柱状ゴム要素の成形型
ES2549767T3 (es) 2000-05-26 2015-11-02 Immunex Corporation Uso de anticuerpos de interleuquina-4 y composiciones de los mismos
JP2002209975A (ja) 2001-01-19 2002-07-30 Daikyo Seiko Ltd 医薬バイアル用ラミネートゴム栓
ES2342539T3 (es) 2003-10-24 2010-07-08 Amgen, Inc. Proceso para la purificacion de proteinas en una fraccion de flujo-directo de cromatografia de interaccion hidrofobica.
CA2543982C (en) 2003-11-07 2013-01-08 Immunex Corporation Antibodies that bind interleukin-4 receptor
MEP11109A (en) 2006-10-02 2011-12-20 High affinity human antibodies to human il-4 receptor
US8092804B2 (en) 2007-12-21 2012-01-10 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Rα)-173
AU2014318615B2 (en) * 2013-09-13 2020-03-12 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
TW201628649A (zh) * 2014-10-09 2016-08-16 再生元醫藥公司 減少醫藥調配物中微可見顆粒之方法
CN113372446A (zh) 2016-06-08 2021-09-10 苏州康乃德生物医药有限公司 用于结合白细胞介素4受体的抗体
IL272954B2 (en) 2017-09-19 2024-06-01 Regeneron Pharma Methods to reduce the generation of particles and preparations created by them
CN110540590B (zh) 2018-05-29 2023-08-18 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制物的开发和应用
US20220267369A1 (en) * 2018-07-25 2022-08-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods of separating host cell lipases from a production protein in chromatographic processes
BR112021002989A2 (pt) 2018-08-24 2021-05-11 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. anticorpo para ligação de il-4r de humano, fragmento para ligação de antígeno e uso médico do mesmo
EP3878868B1 (en) 2018-11-09 2024-10-09 Ajou University Industry-Academic Cooperation Foundation Human antibody having high affinity to human il-4 receptor alpha, and use thereof
CN111494626B (zh) 2018-12-25 2022-06-21 江苏荃信生物医药股份有限公司 用于治疗il-4和/或il-13介导的信号转导相关的疾病的药物组合物
MX2021007845A (es) 2018-12-27 2021-09-30 Akeso Biopharma Inc Anticuerpos contra il-4ra humano y uso de los mismos.
CN111592597B (zh) 2019-05-29 2022-04-26 山东博安生物技术股份有限公司 白介素4受体(il-4r)结合蛋白及其用途
CN115023276A (zh) * 2020-01-29 2022-09-06 默沙东有限公司 从抗-lag3抗体生产中分离宿主细胞脂肪酶的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023215750A2 (en) 2023-11-09
KR20250004903A (ko) 2025-01-08
US20240199688A1 (en) 2024-06-20
MX2024013478A (es) 2024-12-06
AU2023265659A1 (en) 2024-12-12
CO2024016122A2 (es) 2024-12-09
CL2024003324A1 (es) 2025-03-07
EP4518839A2 (en) 2025-03-12
WO2023215750A3 (en) 2024-02-15
CN119497609A (zh) 2025-02-21
IL316694A (en) 2024-12-01
JP2025515041A (ja) 2025-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12070502B2 (en) Process for reducing subvisible particles in a pharmaceutical formulation
JP7591620B2 (ja) 粒子の形成を低減する方法
HK1211840A1 (zh) 穩定的低粘度抗體配製品
JP2019525925A (ja) アフィニティークロマトグラフィー洗浄バッファー
WO2018091729A2 (en) Aqueous pharmaceutical formulations
US20240199688A1 (en) Methods for reducing lipase activity
JP2022525556A (ja) Ｔｎｆ－アルファ抗体の高濃度水性製剤
WO2025096932A1 (en) Methods for reducing lipase activity using stress
TW202003572A (zh) 厄瑞努單抗組成物及其用途
WO2025137347A1 (en) High concentration risankizumab formulations
BR122025000150A2 (pt) Métodos para reduzir a formação de partículas, produto farmacêutico e formulação
KR20250039516A (ko) 리산키주맙 조성물
HK40061789B (zh) 稳定的水性抗体配制品
HK40061789A (zh) 稳定的水性抗体配制品