TW202338344A - 製備生物晶片的方法及所製備出的生物晶片 - Google Patents
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Abstract
本揭示內容提供一種製備生物晶片的方法及製備出的晶片。該製備方法包括下列步驟：以含有生物素的一第一溶液、含有抗生物素蛋白的一第二溶液以及含有生物素化探針的一第三溶液來塗佈晶片。
Description
本揭示內容關於一種製備生物晶片的方法，特別是製備具有改善的靈敏度之生物晶片的方法以及由其所製備出的生物晶片。
晶片是由積體電路(integrated circuit, IC)形成，積體電路是由在半導體材料的小型平坦片體上之電晶體、電容器及其他電子元件組成，並且晶片被用於處理針對各種測量結果的電子訊號。
在晶片中使用的通用電晶體之一為金屬氧化物半導體場效電晶體(metal oxide semiconductor field-effect transistor, MOSFET)，金屬氧化物半導體場效電晶體控制通過電場的電流。MOSFET具有諸如高靈敏度、高特異性與即時偵測的優點。
生物晶片包括生物元件與晶片元件。生物晶片的表面需要被修飾以容納針對各種偵測目標的特異性探針。
(3-胺丙基)三乙氧基矽烷 ((3-aminopropyl) triethoxy silane, APTES)和戊二醛 (glutaraldehyde, GA)為針對晶片的表面官能化之最普遍的修飾劑與活化劑。APTES為胺基官能化之有機矽烷。GA為含有兩個醛官能基的二醛類。來自APTES的胺基能夠容易地與來自GA的醛基反應。GA的醛基之一能夠與APTES反應，並且其他的醛基能夠與探針的抗體反應(Udomsom et al., Coatings (2021), 11, 595)。
諸如CPTES、VTES的其他修飾劑和諸如明膠、EDC和NHS的活化劑能夠被應用於晶片表面修飾製程(Kujawa et al., Science of the Total Environment 801 (2021) 149647)。三乙氧基矽基十一醛(Triethoxysilylundecanal, TESUD)為替代的修飾劑，其能夠取代APTES-GA的兩步法(Lee et al., Sensors and Actuators B 175 (2012) 201-207)。
由於生物晶片其表面的官能化，因此抗體探針能結合到附接官能基的晶片表面，接著加入分析物以用於偵測(Sadighbayan et al., Trends in Analytical Chemistry (2020))。
然而，個別抗體探針所攜帶的官能基數量並不相同，這可能導致不一致的結合效率。此外，抗體探針結合到APTES或GA的位向是隨機的，這將減少與抗原交互作用的Fab（片段，抗原結合）區域的數量，並且降低抗體探針的密度(Trilling et al., Analyst (2013))。生物素/抗生物素蛋白親合系統通常被用於改善此議題。雖然此方法能夠增加探針的結合效率，但靈敏度仍然低下。
由此，需要製備出具有改善靈敏度之生物素/抗生物素/生物素化探針的生物晶片。
本發明的目的為提供一種具有顯著改善靈敏度的生物晶片。
為達上述目的，本發明提供一種製備生物晶片的方法，其包括下列步驟：以含生物素的第一溶液塗佈晶片以形成生物素塗佈晶片，其中該第一溶液中的生物素具有第一濃度，該第一濃度的範圍為0.1至1 μg/ml；提供生物素塗佈晶片以及含抗生物素蛋白的第二溶液以形成抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片，其中該第二溶液中的抗生物素蛋白具有第二濃度，該第二濃度的範圍為0.1至100 μg/ml；以及提供抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片以及含生物素化探針的第三溶液以形成生物晶片，其中該第三溶液中的該生物素化探針具有第三濃度，該第三濃度的範圍為1至3 μg/ml。
在一個實施例中，該晶片為延伸閘極場效電晶體(extended gate field-effect transistor, EGFET)。
在一個實施例中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為0.1 μg/ml。
在一個實施例中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為30 μg/ml。
在一個實施例中，該第三溶液中該生物素化探針的第三濃度為1 μg/ml。
在一個實施例中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為1 μg/ml。
在一個實施例中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為100 μg/ml。
在一個實施例中，該第一濃度、該第二濃度與該第三濃度的比例為1：300：10。
在一個實施例中，該生物素化探針選自於由生物素化抗豬生殖與呼吸道症候群病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)抗體、生物素化抗Tau抗體與生物素化SARS-CoV-2探針所組成之群組。
為了協助瞭解本揭示內容之目的、特徵及功效，提供針對本揭示內容的詳細說明之實施例以及附圖。
本揭示內容中的晶片為用於感測分析物（例如生物性分析物）之延伸閘極場效電晶體(extended gate field-effect transistor, EGFET)。生物感測系統能夠利用基材（例如傳導性基材或感測表面區域）上的生物偵測層，其能夠耦接到場效電晶體(FET)。該場效電晶體的閘極能夠連接到其上具有生物偵測層的基材。官能化的基材能夠包括被良好定義的區域（例如井、基質或平坦區域），前述被良好定義的區域能夠在其上保持特定預定體積的流體（例如液體、膠體）。外部電極能夠浸在流體中並能夠連接到供應電壓的電源，該電源能夠是閘極電壓或是電源。由於生物偵測層目標分子的存在而造成的從外部電極到FET的閘電極之電荷轉換變化會將FET的源極特性調節為汲極特性。此調節隨後能夠與目標分析物（例如基於由於先前校正結果或類似結果而得的已知關聯性）的濃度相關聯，前述目標分析物存在於偵測層。這種生物感測系統使感測電子元件與用於感測的流體其可能造成損害的環境隔絕（即FET元件與含有分析物的流體隔絕）。此系統能夠包括外部官能化基材，該基材連接到FET的閘極。FET也包括源極和汲極，伴隨著絕緣體和閘極的閘電極。外部電極能夠接觸電解質，閘極電壓被施加於外部電極上。存在於電解質中的離子與存在於延伸閘極基材上的官能基之間的交互作用導致表面電位改變。此電位改變導致到FET的閘極之電流的改變。反過來說，閘極電流調節FET中的汲極-源極電流。由於延伸閘極的表面上之生物分子的存在而造成的汲極電流調節使FET成為生物感測器。
經由共軛焦顯微鏡確定生物素的塗佈濃度
EGFET分別在磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate-buffered saline, PBS)中以下列生物素處理16小時以形成生物素塗佈晶片：與濃度為0.1 μg/ml的異硫氰酸螢光素(Fluorescein isothiocyanate, FITC) (Thermo Scientific, #22030)耦合的生物素、與濃度為0.5 μg/ml的FITC耦合的生物素、與濃度為1 μg/ml的FITC耦合的生物素及與濃度為10 μg/ml的FITC耦合的生物素。接著，使用共軛焦顯微鏡(TCS SP8 STED, Leica)觀察螢光密度，影像在圖1A中示出。然而，生物晶片的表面並不平坦，導致難以聚焦。因此，再次擷取以1 μg/ml的生物素-FITC處理的生物素塗佈晶片之共軛焦影像。結果示出圖1B中，其指出在0.1 μg/ml和1 μg/ml的濃度有強烈的螢光密度。考慮到材料成本，選擇塗佈在晶片上之生物素的濃度為0.1 μg/ml。
確定抗生物素蛋白的適合濃度範圍
EGFET分別在磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)中以下列抗生物素蛋白Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific, #A21370)處理10分鐘以形成抗生物素蛋白塗佈晶片：濃度為0.1 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為1 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為10 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為30 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488及濃度為50 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488。接著，使用共軛焦顯微鏡觀察抗生物素蛋白塗佈晶片的螢光密度，影像在圖2中示出。結果示出圖2中，其指出在0.1 μg/ml和30 μg/ml的濃度有強烈的螢光密度。
而後，EGFET以濃度為0.1 μg/ml的生物素-NHS (Thermo Scientific, #20217)處理，以形成生物素塗佈晶片，接著，生物素塗佈晶片分別以下列抗生物素蛋白Alexa Fluor 488處理10分鐘以形成抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片：濃度為1 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為30 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488及濃度為100 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488。接著，使用共軛焦顯微鏡觀察抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片的螢光密度，影像在圖3A中示出。30 μg/ml的抗生物素蛋白等於2.7x10^14個抗生物素蛋白分子，並且0.1 μg/ml的生物素等於2.4x10^14個生物素分子，亦即，抗生物素蛋白分子與生物素分子的比為1：1。結果示出圖3A中，其指出在生物素塗佈晶片（以0.1 μg/ml的生物素處理）分別以下列抗生物素蛋白Alexa Fluor 488處理以形成抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片之後，抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片在抗生物素蛋白濃度為30 μg/ml時具有較佳螢光密度：濃度為1 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為30 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488及濃度為100 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488。相反地，在生物素塗佈晶片（以1 μg/ml的生物素處理）分別以下列抗生物素蛋白Alexa Fluor 488處理以形成抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片之後，抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片在抗生物素蛋白濃度為100 μg/ml時具有較佳螢光密度：濃度為1 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488、濃度為30 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488及濃度為100 μg/ml的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488，如圖3B所示。100 μg/ml的抗生物素蛋白等於9x10^14個抗生物素蛋白分子，並且1 μg/ml的生物素等於2.4x10^15個生物素分子，亦即，抗生物素蛋白分子與生物素分子的比為1：2.66。30 μg/ml的抗生物素蛋白等於2.7x10^14個抗生物素蛋白分子，並且1 μg/ml的生物素等於2.4x10^15個生物素分子，亦即，抗生物素蛋白分子與生物素分子的比為1:8.8。在圖3B中，來自於1 μg/ml的生物素和100 μg/ml的抗生物素蛋白的螢光密度優於來自於1 μg/ml的生物素和30 μg/ml的抗生物素蛋白的螢光密度。
確定生物素化探針的適合濃度範圍
鑒於上述實驗，0.1 μg/ml的生物素和30 μg/ml的抗生物素蛋白之組合與1 μg/ml的生物素和100 μg/ml的抗生物素蛋白之組合分別被用於後續實驗以確定生物素化探針的較佳濃度。
核酸探針被修飾以在5’端具有生物素並且在3’端具有fluorescein amidites(FAM)。觀察到先塗佈0.1 μg/ml的生物素、30 μg/ml的抗生物素蛋白而後塗佈1 μg/ml的PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus)探針(SEQ ID NO: 1)的晶片具有較佳螢光強度，如圖4中所示。
證明晶片上生物素化抗體的濃度範圍
上述所獲得之濃度條件基於電訊號的改變來證明。塗佈有0.1 μg/ml的生物素和30 μg/ml的抗生物素蛋白之晶片的電訊號變化在不同濃度的生物素化抗PRRSV抗體（0.1 μg/ml、1 μg/ml和3 μg/ml）下測量，生物素化抗PRRSV抗體包括PRRSV-142 VL (SEQ ID NO: 2)和PRRSV-142 HL (SEQ ID NO: 3)。在恆定的汲極電流處獲得每個濃度的ID-VG曲線的閾值電壓(V
th)。透過計算基線和每個濃度的閾值電壓之間的差值獲得閾值電壓差(ΔV
th)。當抗生物素蛋白濃度增加到30 μg/ml時，ΔV
th增加，如圖5所示。當抗生物素蛋白濃度增加到30 μg/ml時，ΔV
th增加到6.19。1 μg/ml的生物素化PRRSV探針產出最大ΔV
th值0.49。然而，當生物素化PRRSV探針的濃度增加到3 μg/ml時，ΔV
th不會減少但會變得不穩定。
證明晶片上目標胜肽的濃度範圍
生物素化抗Tau抗體最初被用於測量目標胜肽的可偵測範圍，以確定此生物系統中病原體的靈敏度及可偵測範圍。晶片塗佈有0.1 μg/ml的生物素、30 μg/ml的抗生物素蛋白以及1 μg/ml 的生物素化抗Tau抗體，該生物素化抗Tau抗體包括Tau-217-123 VL (SEQ ID NO: 4)和Tau-217-123 VH (SEQ ID NO: 5)，而後，分別加入各種濃度的目標胜肽（即Tau胜肽(SEQ ID NO:6)）。結果指出，Tau胜肽最低的可偵測濃度為1 ag/ml，晶片上Tau胜肽最高的可偵測濃度為50 pg/ml，如圖6所示。
證明晶片上目標核酸的濃度範圍
使用生物素化SARS-CoV-2探針測試此生物系統所中偵測到的病原體靈敏度，該生物素化SARS-CoV-2探針包括probe-F (SEQ ID NO:7)、probe-P1 (SEQ ID NO:8)和probe-R (SEQ ID NO:9)，其比例為1：1：1。晶片塗佈有0.1 μg/ml的生物素、30 μg/ml的抗生物素蛋白，並且而後塗佈1 μg/ml 的生物素化SARS-CoV-2探針。SARS-CoV-2總RNA的最初濃度為2.68x10
6TCID50。接著加入不同濃度的SARS-CoV-2總RNA， 2.68x10
-6、2.68x10
-4、2.68x10
-2、2.68、2.68x10
2和2.68x10
3TCID50的SARS-CoV-2總RNA。結果指出，晶片用於偵測SARS-CoV-2總RNA的靈敏度達到10
-6TCID50 (Ct:48)，並且存在10
-6TCID50至10
3TCID50的線性範圍，如圖7所示。
在本揭示內容中，用於塗佈晶片之生物素、抗生物素蛋白和生物素化抗PRRSV抗體的較佳濃度分別為0.1 μg/ml、30 μg/ml和1 μg/ml。同時，生物素、抗生物素蛋白和生物素化抗PRRSV抗體的較佳濃度比例為1：300：10。另外，此比例也在晶片上被證明，並且能夠產生最大的電壓訊號值。此比例能夠應用於偵測p-Tau 217和SARS-CoV-2。
在腦脊髓液(cerebrospinal fluid, CSF)中的磷酸化Tau蛋白為阿茲海默症(Alzheimer’s disease, AD)的重要生物標記(García-Chamé et al., Biosensors and Bioelectronics 159 (2020))。P-Tau 181、p-Tau 217和p-Tau 231為針對AD病理機制的主要生物標記 (Leuzy et al., EMBO Mol Med (2022) 14: e14408)。針對在血漿中的AD早期偵測，P-Tau217比P-Tau 181具有更好的表現 (Janelidze et al., Nature Communications (2020) 11:1683)。酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)為在生物標記研究中最廣泛使用的免疫分析方法。然而，相對較低的靈敏度導致遺漏偵測。諸如電化學發光(electrochemi- luminescence, ECL) 免疫感測器、單分子分析(single-molecule array, SIMOA)、免疫磁減量分析(immunomagnetic reduction assay, IMR)和質譜(mass spectrometry, MS)為基礎技術的替代分析方法適用於血漿Tau蛋白偵測(Park et al., Clin Neurol (2022) 18(4):401-409)。SIMOA為當前較靈敏的偵測方法。透過SIMOA分析得到的在血漿中p-Tau217的定量下限(LLOQ)為1.8 pg/ml。透過ECL為基礎的免疫感測器得到的在血漿中p-Tau217的LLOQ為34 pg/ml，並且偵測範圍為0.1至100 ng/ml (Jalili et al., Molecules (2022) 27, 431)。p-Tau217的ELISA套組的靈敏度為1 pg/ml至80 pg/ml (OmnimAbs. OM641673)。
在比較先前段落中提到的所有技術時，本揭示內容的生物素/抗生物素蛋白晶片系統的靈敏度相較於SIMOA系統高出180倍，並且相較於ECL為基礎的系統高出340倍。該生物素/抗生物素蛋白晶片系統的偵測極限(limit of detection, LOD)為1 ag/ml（等於0.001 fg/ml）並且呈現從10 fg/ml到50000 fg/ml的線性範圍。p-Tau217在正常控制血漿中的平均濃度為0.13 pg/ml（等於130 fg/ml）(Barthélemy et al., J. Exp. Med. (2020) Vol. 217 No. 11) ，前述濃度完全位於當前生物素/抗生物素蛋白晶片系統的偵測線性範圍。另外，此系統僅需要小量的血漿用於偵測，並且操作程序相對容易。由此，本揭示內容提供針對AD診斷在早期階段於血漿中偵測p-Tau217的有用方法和工具。
針對SARS-CoV-2的偵測，即時PCR為用於針對病毒核酸的定性及定量偵測之黃金標準方法。然而，此方法需要在經認可的實驗室中操作，且需要精熟的技術專家以及在分析數據之前較長的期間。由於COVID-19爆發的大流行，已經發展出許多新的檢測方法，諸如石墨烯-FET生物感測器和矽奈米線為基礎的病毒棘蛋白偵測。
石墨烯-FET生物感測器裝置在培養基中能夠偵測到16 pfu/ml，並且在臨床樣本中能夠偵測到2.42 ×10
2copies/ml(Sadighbayan et al., Trends in Analytical Chemistry (2020))。能夠被估計出的0.7 pfu的力價理論上等於1 TCID50 (Pourianfar et al., Indian J Virol. (2012))。因此，16 pfu/ml等於22.8 TCID50。當前生物素/抗生物素蛋白晶片系統的偵測下限為10
-6TCID50 (Ct:48)。的靈敏度優於石墨烯-FET生物感測器本揭示內容之生物素/抗生物素蛋白晶片系統。本揭示內容之生物素/抗生物素蛋白晶片系統使用核酸作為用於核酸偵測的探針而不需要擴增，這能夠縮短偵測時間並且不需要精熟的技術專家。當病毒量非常低且仍然在潛伏期時，本揭示內容之生物素/抗生物素蛋白晶片系統能夠快速且精準地偵測SARS-CoV-2，使得SARS-CoV-2能夠被早期監控且為即時監控。
雖然已經透過特定實施例描述本揭示內容，但是對於本領域技術人員來說，在不脫離如所附申請專利範圍中所闡明的本揭示內容的範圍和精神的情況下，可以進行各種修改和變化。
無
圖1A為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出塗佈在晶片上的生物素-FITC的螢光密度。
圖1B為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出塗佈在晶片上的生物素-FITC的螢光密度。
圖2為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出塗佈在晶片上的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488的螢光密度。
圖3A為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出在晶片上的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488的螢光密度，該晶片以100 ng/ml的生物素-NHS處理。
圖3B為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出在晶片上的抗生物素蛋白Alexa Fluor 488的螢光密度，該晶片以1 μg/ml的生物素-NHS處理。
圖4A為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出在晶片上的PRRSV探針-FAM的螢光密度，該晶片先以100 ng/ml的生物素而後以30 μg/ml的抗生物素蛋白處理。
圖4B為經由共軛焦顯微鏡擷取的影像，其示出在晶片上的PRRSV探針-FAM的螢光密度，該晶片先以1 μg/ml的生物素而後以100 μg/ml的抗生物素蛋白處理。
圖5A為分別示出在晶片上的1 ng/ml、1 μg/ml和30 μg/ml的抗生物素蛋白之電訊號的圖表，該晶片以0.1 μg/ml的生物素處理。
圖5B為分別示出在晶片上的0.1 μg/ml, 1 μg/ml, and 3 μg/ml的生物素化抗體之電訊號的圖表，該晶片以生物素和抗生物素蛋白處理。
圖6為示出該晶片上的Tau胜肽的濃度範圍之證明結果的圖表。
圖7為示出該晶片上的SARS-CoV-2 RNA的濃度範圍之證明結果的圖表。
無
Claims (20)
- 一種製備一生物晶片的方法，包含： 以含有生物素的一第一溶液塗佈一晶片以形成一生物素塗佈晶片，其中該第一溶液中的生物素具有一第一濃度，該第一濃度的範圍為0.1至1 μg/ml； 提供含有抗生物素蛋白的一第二溶液於該生物素塗佈晶片以形成一抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片，其中該第二溶液中的抗生物素蛋白具有一第二濃度，該第二濃度的範圍為0.1至100 μg/ml；以及 提供含有一生物素化探針的一第三溶液於該抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片以形成該生物晶片，其中該第三溶液中的生物素化探針具有一第三濃度，該第三濃度的範圍為1至3 μg/ml。
- 如請求項1所述的方法，其中，該晶片為延伸閘極場效電晶體(extended gate field-effect transistor，EGFET)。
- 如請求項1所述的方法，其中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為0.1 μg/ml。
- 如請求項3所述的方法，其中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為30 μg/ml。
- 如請求項4所述的方法，其中，該第三溶液中該生物素化探針的第三濃度為1 μg/ml。
- 如請求項1所述的方法，其中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為1 μg/ml。
- 如請求項6所述的方法，其中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為100 μg/ml。
- 如請求項7所述的方法，其中，該第三溶液中該生物素化探針的第三濃度為1 μg/ml。
- 如請求項1所述的方法，其中，該第一濃度、該第二濃度與該第三濃度的比例為1：300：10。
- 如請求項1所述的方法，其中，該生物素化探針選自於由生物素化抗豬生殖與呼吸道症候群病毒抗體、生物素化抗Tau抗體與生物素化SARS-CoV-2探針所組成之群組。
- 一種生物晶片，由一方法製備而成，該方法包含： 以含有生物素的一第一溶液塗佈一晶片以形成一生物素塗佈晶片，其中該第一溶液中的生物素具有一第一濃度，該第一濃度的範圍為0.1至1 μg/ml； 提供含有抗生物素蛋白的一第二溶液於該生物素塗佈晶片以形成一抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片，其中該第二溶液中的抗生物素蛋白具有一第二濃度，該第二濃度的範圍為0.1至100 μg/ml；以及 提供含有一生物素化探針的一第三溶液於該抗生物素蛋白/生物素塗佈晶片以形成該生物晶片，其中該第三溶液中的該生物素化探針具有一第三濃度，該第三濃度的範圍為1至3 μg/ml。
- 如請求項11所述的生物晶片，其中，該晶片為延伸閘極場效電晶體(extended gate field-effect transistor，EGFET)。
- 如請求項11所述的生物晶片，其中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為0.1 μg/ml。
- 如請求項13所述的生物晶片，其中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為30 μg/ml。
- 如請求項14所述的生物晶片，其中，該第三溶液中該生物素化探針的第三濃度為1 μg/ml。
- 如請求項11所述的生物晶片，其中，該第一溶液中該生物素的第一濃度為1 μg/ml。
- 如請求項16所述的生物晶片，其中，該第二溶液中該抗生物素蛋白的第二濃度為100 μg/ml。
- 如請求項17所述的生物晶片，其中，該第三溶液中該生物素化探針的第三濃度為1 μg/ml。
- 如請求項11所述的生物晶片，其中，該第一濃度、該第二濃度與該第三濃度的比例為1：300：10。
- 如請求項11所述的生物晶片，其中，該生物素化探針選自於由生物素化抗豬生殖與呼吸道症候群病毒抗體、生物素化抗Tau抗體與生物素化SARS-CoV-2探針所組成之群組。
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