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TW202313025A - 治療腦或cns癌症轉移之egfr降解藥物 - Google Patents

治療腦或cns癌症轉移之egfr降解藥物 Download PDF

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TW202313025A
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克里斯多夫 Ｇ 納斯梵斯楚克
馬汀 杜普樂斯
在永 安
亞歷山大 Ｗ 赫德
雷恩 Ｅ 邁克爾
基爾 拉薩斯基
梁焱科
喬治 傑許柯
安東尼歐 瑞奇
安尼克 喬葛勒
丹尼爾 路荷
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美商Ｃ４醫藥公司
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Abstract

本發明提供了用一種化合物治療已轉移至腦或中樞神經系統之其他區域的突變型表皮生長因子受體(EGFR)介導之癌症，該化合物經由EGFR蛋白之泛蛋白化及隨後蛋白酶體降解來降解EGFR突變形式。本發明亦提供用於治療此類癌症的有利藥物組合，其包括本文中降解EGFR突變形式之化合物與第二抗癌劑之組合。

Description

治療腦或CNS癌症轉移之EGFR降解藥物
本發明提供了用一種化合物治療已轉移至腦或中樞神經系統之其他區域的突變型表皮生長因子受體(EGFR)介導之癌症，該化合物經由該EGFR蛋白之泛蛋白化及隨後蛋白酶體降解來降解EGFR突變形式。本發明亦提供用於治療此類癌症的有利藥物組合，其包括本文中降解EGFR突變形式之化合物與第二抗癌劑之組合。
HER家族受體酪胺酸激酶為細胞生長、分化及存活之介體。受體家族包括四個不同成員，亦即表皮成長因子受體(EGFR、ErbBl或HER1)、HER2 (ErbB2)、HER3 (ErbB3)及HER4 (ErbB4)。在配位體結合後，受體形成均二聚體及異二聚體，且內在酪胺酸激酶活性之後續活化引起受體自磷酸化及下游信號傳導分子之活化(Yarden, Y., Sliwkowski, MX. Untangling the ErbB signaling network. Nature Review Mol Cell Biol. 2001年2月;2(2): 127-37)。此等信號傳導分子促進細胞生長及增殖。EGFR因過度表現或突變所導致的失調已與許多類型之人類癌症有關，包括結腸直腸癌、胰臟癌、神經膠質瘤、頭頸癌及肺癌，特定言之非小細胞肺癌(NSCLC)。多年來已研發出若干種EGFR靶向劑(Ciardiello, F.及Tortora, G. (2008). EGFR antagonists in cancer treatment. The New England journal of medicine 358, 1160-1174)。埃羅替尼(Erlotinib)(Tarceva ®)吉非替尼(gefitinib)(Iressa ®)為第一代EGFR酪胺酸激酶可逆抑制劑，在許多國家批准用於治療復發性NSCLC。奧希替尼(Osimertinib)(Tagrisso TM)為EGFR酪胺酸激酶之不可逆抑制劑，在許多國家批准用於NSCLC的一線治療(Soina等人，(2018) The New England Journal of Medicine 378, 113-125)。
EGFR最常見之體細胞突變為外顯子19缺失及外顯子21胺基酸取代。最普遍的外顯子19缺失為delta 746-750，而普遍的外顯子21胺基酸取代為L858R(Sharma SV, Bell DW, Settleman J, Haber DA. Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer. Nat Rev Cancer. 2007年3月；7(3): 169-81)。
第一代EGFR抑制劑治療之後經常出現治療抗性，通常歸因於受體之ATP位點內之二級T790M突變。奧希替尼是一種突變體選擇性不可逆抑制劑，對T790M突變體具有高活性，但其功效可能因獲得性C797S突變而受損，C797S係與其形成關鍵共價鍵之半胱胺酸殘基(Thress, K. S.等人Acquired EGFR C797S mutation mediates resistance to AZD9291 in non-small cell lung cancer harboring EGFR T790M. Nat. Med. 21, 560-562 (2015))。Wang進一步報導C797S突變係靶向T790M之EGFR抑制劑之抗性的主要機制(Wang等人EGFR C797S mutation mediates resistance to third-generation inhibitors in T790M-positive non-small cell lung cancer, J Hematol Oncol. 2016; 9: 59)。Yang描述了引起對奧希替尼(Osimertinib)之抗性的額外突變，例如L718Q(Yang等人, Investigating Novel Resistance Mechanisms to Third-Generation EGFR Tyrosine Kinase Inhibitor Osimertinib in Non-Small Cell Lung Cancer Patients, Clinical Cancer Research, DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2310)。其他突變靶向策略亦為已知的，包括在NSCLC治療中靶向EGFR L858R-T790M及EGFR L858R-T790M-C797S抗性突變(Lu等人Targeting EGFR L858R-T790Mand EGFR L858R-T790M-C797Sresistance mutations in NSCLC: Current developments in medicinal chemistry, Med Res Rev 2018; 1-32)。
亦已描述EGFR抑制劑(特定言之含有T790M的EGFR突變體的選擇性抑制劑)之其他實例，包括以下中之彼等：WO2014081718、WO2014210354、WO2018/115218、WO2018220149、WO2020002487及ZHOU等人,「Novel mutant-selective EGFR kinase inhibitors against EGFR T790M」, NATURE, (20091224), 第462卷, 第7276期, doi:10.1038/nature08622, ISSN 0028-0836, 第1070 -1074頁。
所有批准之EGFR抑制劑都靶向激酶之ATP結合位點。由於導致對ATP競爭性EGFR抑制劑產生抗性之二次突變位於ATP結合位點，因此需要新穎治療劑以不同方式來克服對當前療法之抗性，例如經由高選擇性靶向抗藥性EGFR突變體。
近期研究表明，有目的地靶向異位位點可能導致突變體選擇性抑制劑(Jia等人Overcoming EGFR(T790M) and EGFR(C797S) resistance with mutant-selective allosteric inhibitors, 2016年6月, Nature 534, 129-132)。
已集中研究由小分子促進之靶向蛋白質降解之領域(Collins等人, Biochem J, 2017, 474(7), 1127-47)。蛋白質降解在各種細胞功能中起作用。舉例而言，身體使用蛋白質降解，經由降解成小肽來調整調節蛋白之濃度，從而維持細胞之健康及生產力。
塞勒布隆(Cereblon)為形成E3泛蛋白連接酶複合物之蛋白質，其泛蛋白化各種其他蛋白質。塞勒布隆已知為抗癌沙利度胺(thalidomide)類似物之主要目標。塞勒布隆之較高表現與沙利度胺類似物在癌症療法中之效率有關。
化合物已描述為靶向泛蛋白化之適用調節劑，例如描述於WO2013020557、WO2013063560、WO2013106643、WO/2013170147、WO2016011906及WO/2019183523中之化合物可用於靶向泛蛋白化。靶向泛蛋白化之額外調節劑包括由Ranok Therapeutics Hangzhou WO2020206608及WO2020207396描述之彼等；由Arvinas在WO2015160845、WO2016149668、WO2016197032、WO2017011590、WO2017030814、WO2018144649、WO2018226542及WO2019199816中描述之彼等；由Dana-Farber Cancer Institute在WO2016105518、WO2017007612、WO2017024317、WO2017024318、WO2017117473、WO2017117474、WO2018148443、WO2018148440及WO2019165229中描述之彼等；由Kymera在WO2019/060742、WO2019/140387及WO2020/01022中描述之彼等；及由C4 Therapeutics Inc.在WO2017197036、WO2017197046、WO2017197051、WO2017197055、WO2018237026、WO2019099868、WO2019191112、WO2019204353、WO2019236483、WO2020132561、WO2020181232及WO2020210630中描述之彼等。
亦已描述用於降解EGFR之一些特定分子，例如Dana-Farber癌症研究所(Dana-Farber Cancer Institute)在WO2017185036中描述EGFR降解藥物。F. Hoffman-La-Roche在WO2019121562及WO2019149922中描述了EGFR降解藥物。Arvinas已在WO2018119441中描述EGFR降解藥物。
儘管做出了此等努力，但由於表現出EGFR突變及/或過度表現之癌症危及生命，故仍然需要新穎EGFR調節劑來治療有需要之宿主，且尤其人類之由EGFR介導的病症。
提出治療已轉移至腦或中樞神經系統(例如，周邊神經系統、腦脊髓液、脊髓、軟腦膜、硬膜外腔及/或硬腦膜)之EGFR介導之癌症的方法，包括向有需要之患者投與有效量之式I、II、III或IV的化合物或其醫藥學上可接受之鹽。式I、II、III及IV之化合物包括與EGFR結合的靶向配位體、E3連接酶結合部分(通常經由塞勒布隆亞基)及將靶向配位體共價連接至E3連接酶結合部分之連接子。在某些實施例中，E3連接酶結合部分為A或A*之部分，連接子為L 1或L 2之部分，且分子之其餘部分為EGFR靶向配位體部分。
靶向EGFR之配位體可為異位抑制劑。降解前之異位結合導致使用本發明之化合物優於傳統EGFR抑制劑、共價調節劑及甚至非異位降解藥物的優點。使用本文所述之異位降解化合物之優點的非限制性實例包括增加之對突變型EGFR的選擇性、增加之催化活性、改善之功效、克服對ATP競爭性抑制劑之抗性的能力及/或更少之副作用。在某些實施例中，本發明之異位降解化合物有效地結合且降解具有賦予對奧希替尼(osimertinib)及/或埃羅替尼(erlotinib)抗性之突變的EGFR，例如用另一種胺基酸替換活性位點半胱胺酸之突變。由於此等優點，本文所述之化合物可用於治療已轉移至腦或CNS且對奧希替尼產生抗性之癌症(例如非小細胞肺癌的第2線療法)。在其他實施例中，本文所述之化合物可用於治療已轉移至腦或CNS之未經治療之癌症(例如，用於非小細胞肺癌的第1線療法)。在其他實施例中，本文所述之化合物可用於治療已轉移至腦或CNS且對多線療法產生抗性之癌症(例如非小細胞肺癌的第3線治療)。
在其他實施例中，靶向EGFR之配位體可為活性位點抑制劑。
在某些實施例中，所提供之方法選擇性地降解已轉移至腦或CNS且可能具有突變或突變組合之腫瘤中的EGFR，例如選自T790M、L858R及C797S之突變；選自T790M、L858R及C797S之兩個突變的組合；或選自T790M、L858R及C797S之三個突變的組合。在某些實施例中，該方法利用含有L858R-T790M、L858R-T790M-C797S、L858R或L858R-C797S之EGFR突變體的選擇性降解藥物。
在某些實施例中，提供一種治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症的方法，包含向有需要之患者投與有效量之化合物 1、化合物 2、化合物 3、化合物 4、化合物 5、化合物 6、化合物 7、化合物 8、化合物 9、化合物 10、化合物 11或化合物 12，或其醫藥學上可接受之鹽。此等化合物為異位位點結合EGFR降解藥物(異位EGFR降解藥物)。
Figure 02_image009
Figure 02_image011
Figure 02_image013
Figure 02_image015
本文所述之高濃度異位EGFR降解藥物穿過血腦屏障。本文所述之化合物，包括例如化合物 1亦為高度選擇性的且降解突變型EGFR-L858R蛋白而不明顯降解其他非EGFR蛋白。在激酶組篩選(參見實例60)中，本文所述之化合物對數千種蛋白質具有可忽略之降解活性。此外，在全局蛋白質體學中觀察到類似的高選擇性(參見實例61)。此外，本文所述之化合物對SALL4及GSPT1兩種蛋白質之降解活性非常低，這兩種蛋白質可藉由諸如來那度胺(lenalidomide)及CC-885之IMID化合物降解(參見圖7及圖8)。在NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)及NCI-H3255 (EGFR-L858R)人類肺癌系中，使用奈莫耳濃度之異位EGFR降解藥物在6小時內降解50%的突變型EGFR。此外，EGFR磷酸化經強力抑制(參見表10A)。相比之下，本文所述之化合物沒有降解，且在野生型EGFR細胞株A431中觀察到濃度高達10 μM之＜35%的磷酸化-EGFR抑制。本文所述之異位EGFR降解藥物亦抑制表現EGFR變異體之工程化BaF3細胞的增殖，該等變異體包括L858R、L858R-C797S、L858R-T790M或L858R-T790M-C797S EGFR突變體，其中與表現野生型EGFR之BaF3細胞中486 nM之GI50相比，GI50值在8至16 nM範圍內(參見表10B)。
化合物 1或化合物 2之經口給藥在小鼠中具有良好的耐受性。NCI-H1975小鼠異種移植模型中之治療導致劑量依賴性活性及高達90%腫瘤消退。此外，在單次經口劑量之化合物 1後，高達85%之突變型EGFR活體內降解，且磷酸化EGFR下降＞95%(參見圖2)。在奧希替尼抗性之工程化BaF3 EGFR-L858R-T790M-C797S同種異體移植小鼠模型中，經口給予化合物 1導致60%的腫瘤消退，而在奧希替尼治療中觀察到最低功效(參見圖3)。在表現NCI-H1975顱內腦轉移之螢光素酶模型中，經口給予化合物 1導致腫瘤消退(參見圖5A)
在某些實施例中，異位EGFR降解藥物作為第二線療法投與以治療EGFR介導之癌症，例如，異位EGFR降解藥物可以投與已停止使用奧希替尼的患者。在其他實施例中，異位EGFR降解藥物作為第一線療法投與以治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症。在其他實施例中，異位EGFR降解藥物作為第三線療法投與以治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，異位EGFR降解藥物結合至由「αC-out」構形中的調節性αC-螺旋置換產生之異位位點。在此實施例中，異位位點可在諸如外顯子21 L858R或L861Q之活化環突變體中擴大，但在野生型EGFR中被封閉。此種機制提供了對野生型的突變選擇性。在某些實施例中，本文所述之異位EGFR降解藥物降解突變型EGFR單體及二聚體。
在某些態樣中，本發明提供一種治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症的方法，其包含投與有效量之下式化合物：
Figure 02_image017
或其醫藥學上可接受之鹽、同位素、N-氧化物或立體異構體； 其中： A係選自環系統AF及AG；
Figure 02_image019
A 1係選自 i)          -NH-，以及 ii)         -O-； A 2係選自 i)          -N-，及 ii)         -CR 52-； A 3係選自 i)          -N-，及 ii)    -CR 53-； A 4係選自 i)          -N-，及 ii)         -CR 54-； A 5係選自 i)          -N-，及 ii)         -CR 55-； R 1係選自 i)          H， ii)         鹵素 iii)       C 1-6烷基； R 52係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       氰基， iv)        C 1-6烷氧基， v)         鹵基-C 1-6烷氧基， vi)        C 1-6烷基， vii)      鹵基-C 1-6烷基， viii)     C 3-8環烷基，及 ix)        鹵基-C 3-8環烷基； R 53、R 54及R 55獨立地選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       C 1-6烷基， iv)        鹵基-C 1-6烷基， v)         C 3-8環烷基，及 vi)        鹵基-C 3-8環烷基； R 2係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       C 1-6烷基， iv)        鹵基-C 1-6烷基， v)         C 3-8環烷基，及 vi)        鹵基-C 3-8環烷基； R 3係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       C 1-6烷基， iv)        鹵基-C 1-6烷基， v)         C 3-8環烷基，及 vi)        鹵基-C 3-8環烷基； R 4及R 5為H； 或R 4及R 5一起形成-(CH 2) q-； q為1或2； R 6係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       氰基， iv)        C 1-6烷氧基， v)         鹵基-C 1-6烷氧基， vi)        C 1-6烷基， vii)      鹵基-C 1-6烷基， viii)     C 3-8環烷基，及 ix)        鹵基-C 3-8環烷基； R 7係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       氰基， iv)        C 1-6烷基， v)         鹵基-C 1-6烷基， vi)        C 3-8環烷基，及 vii)      鹵基-C 3-8環烷基； R 70係選自 i)          H， ii)         鹵素， iii)       氰基， iv)        C 1-6烷基， v)        鹵基-C 1-6烷基， vi)        C 3-8環烷基，及 vii)      鹵基-C 3-8環烷基； R 8為H； R 9係選自 i)          H，及 ii)         C 1-6烷基； L 1係
Figure 02_image021
； C不存在或係選自環系統F、G及H；
Figure 02_image023
Y 1係選自 i)          -N-，及 ii)         -CH-； Y 2係選自 i)          -N-，及 ii)         -CR 16-； R 12、R 13、R 14及R 15獨立地選自 i)          -H-， ii)         鹵素，及 iii)       羥基-C 1-6烷基； R 16係選自 i)          -H-， ii)        羥基，及 iii)       氟； L 3不存在或係選自 i)          -(CH 2) m-C(O)-， ii)         -C(O)-(CH 2) p-， iii)       -C(O)-C(O)-， iv)        -NR 10-C(O)-， v)         -C(O)-NR 10-， vi)        -C(O)O-， vii)      -CH 2-CF 2-CH 2-， viii)     -CH 2-， ix)
Figure 02_image025
， x)
Figure 02_image027
，及 xi)
Figure 02_image029
； m為0、1或2； p為0、1、2或3； R 10選自 i)          H，及 ii)         C 1-6烷基； D係選自環系統I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W及X，所有環系統視情況經一至三個選自R 80、R 81及R 82之取代基取代；
Figure 02_image031
R 80、R 81及R 82獨立地選自 i)          鹵素， ii)         氰基， iii)       羥基， iv)        羥基-C 1-6烷基， v)         C 1-6烷氧基， vi)        鹵基-C 1-6烷氧基， vii)      C 1-6烷基， viii)     鹵基-C 1-6烷基， ix)        C 3-8環烷基，及 x)         鹵基-C 3-8環烷基； L 4不存在或係選自 i)          -NR 11-C(O)-， ii)         -CH 2-，及 iii)       -O-； E係選自環系統Y、Z、AA、AB及AC；
Figure 02_image033
L 5不存在或為
Figure 02_image035
； B係選自環系統AD及AE；
Figure 02_image037
。
在某些態樣中，本發明提供一種治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症的方法，其包含投與有效量之下式化合物：
Figure 02_image039
或其醫藥學上可接受之鹽、同位素、N-氧化物或立體異構體； 其中 A'係選自環系統AF、AG及AH；
Figure 02_image041
R 1'係選自 i)         H， ii)        鹵素， iii)      C 1-6烷基 iv)       氰基， v)        C 1-6烷氧基， vi)       鹵基-C 1-6烷氧基， vii)     C 1-6烷基， viii)    鹵基-C 1-6烷基， ix)       C 3-8環烷基，及 x)         鹵基-C 3-8環烷基； 且其餘變數如本文所定義。
在其他態樣中，本發明提供一種治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症的方法，其包含投與有效量之下式化合物：
Figure 02_image043
或其醫藥學上可接受之鹽、同位素、N-氧化物或立體異構體； 其中： A*係選自:
Figure 02_image045
Figure 02_image047
； B*為雜芳基或芳基，其視情況經1、2或3個R 31取代基取代；在某些實施例中，B*係選自
Figure 02_image049
； y為0、1、2或3； R 31在各次出現時獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基且可位於存在於雙環上之任一環上，例如
Figure 02_image051
包括
Figure 02_image053
Figure 02_image055
； R 32為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基或鹵基-C 3-8環烷基； R 33為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基或鹵基-C 3-8環烷基且可位於二氫吡咯或咪唑環上； R 34在各次出現時獨立地選自H、F、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； R 35在各次出現時選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基及C 3-8環烷基； 或R 34及R 35組合形成-(CH 2) q-； R 36及R 37獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基(例如，F、Cl或Br)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基(例如，F、Cl或Br)、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； 或R 36及R 37一起組合形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員或6員環； R 42在各次出現時獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； R 90為H、C 1-6烷基或C 3-6環烷基； 環G為視情況經1或2個R 42取代基取代之雜芳基，例如具有1、2或3個N雜原子之5員或6員雜芳基環； A 21為-NH-、-O-、-CH 2-或-NR 100-； R 100為烷基、環烷基、芳基或雜芳基；或在價數允許的情況下，R 100可與R 37組合以形成5-8員雜環或5員雜芳基； A 32、A 33、A 34及A 35獨立地選自-N-及-CR 42-； A 36為-N-或-CR 35-； L 2為二價鍵聯基團(連接子)，其連接A*及異吲哚啉酮或吲唑，例如但不限於式LI之二價鍵聯基團；且其中其餘變數如本文中所定義。
在某些實施例中，L 2具有下式：
Figure 02_image057
。 其中， X 1及X 2在各次出現時獨立地選自鍵、雜環、芳基、雜芳基、雙環、烷基、脂族、雜脂族、-NR 27-、-CR 40R 41-、-O-、-C(O)-、-C(NR 27)-、-C(S)-、-S(O)-、-S(O) 2-及-S-；雜環、芳基、雜芳基及雙環中之各者視情況經1、2、3或4個獨立地選自R 40之取代基取代； R 20、R 21、R 22、R 23及R 24在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：鍵、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO 2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR 27-、-NR 27C(O)-、-O-、-S-、-NR 27-、氧基伸烷基、-C(R 40R 40)-、-P(O)(OR 26)O-、-P(O)(OR 26)-、雙環、烯烴、炔烴、鹵烷基、烷氧基、芳基、雜環、脂族、雜脂族、雜芳基、乳酸、乙醇酸及碳環；其中之各者視情況經1、2、3或4個獨立地選自R 40之取代基取代； R 26在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烯烴、炔烴、芳基、雜芳基、雜環、脂族及雜脂族； R 27在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、脂族、雜脂族、雜環、芳基、雜芳基、-C(O)(脂族、芳基、雜脂族或雜芳基)、-C(O)O(脂族、芳基、雜脂族或雜芳基)、烯烴及炔烴； R 40在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、R 27、烷基、烯烴、炔烴、氟、溴、氯、羥基、烷氧基、疊氮基、胺基、氰基、-NH(脂族，包括烷基)、-N(脂族，包括烷基) 2、-NHSO 2(脂族，包括烷基)、-N(脂族，包括烷基)SO 2烷基、-NHSO 2(芳基、雜芳基或雜環)、-N(烷基)SO 2(芳基、雜芳基或雜環)、-NHSO 2烯基、-N(烷基)SO 2烯基、-NHSO 2炔基、-N(烷基)SO 2炔基、鹵烷基、脂族、雜脂族、芳基、雜芳基、雜環、側氧基及環烷基；另外，在價數允許之情況下，兩個鍵結至相同碳之R 40基團可接合在一起以形成3至8員螺環；及 R 41為脂族、芳基、雜芳基或氫。
變數、取代基、實施例及由此等組合產生之方法之每個組合都被認為是具體及單獨揭示的，因為這樣的描述只是為了空間的方便。
在某些實施例中，式I、II、III或IV化合物為EGFR之異位降解藥物。舉例而言，化合物可結合EGFR(例如經突變EGFR)上之異位位點，且隨後引導EGFR蛋白之降解。
在某些實施例中，式I、II、III或IV化合物穿過血腦屏障。藉由穿過血腦屏障，式I、II、III或IV化合物可用於治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症。EGFR介導之癌症的非限制性實例包括非小細胞肺癌；乳癌，包括HER-2陽性乳癌、ER+(雌激素陽性)乳癌、PR+(孕酮陽性)乳癌或三陰性乳癌；頭頸癌；神經膠母細胞瘤；胰臟癌；甲狀腺癌；星形細胞瘤；食道癌；子宮頸癌；滑膜肉瘤；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；及腎癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之肺癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之非小細胞肺癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之小細胞肺癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之腺癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之鱗狀細胞肺癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之大細胞未分化性癌。在某些實施例中，肺癌為已轉移至腦或CNS之神經內分泌癌。肺癌之額外實例包括肉瘤樣癌、腺鱗癌、燕麥細胞癌、組合小細胞癌、肺類癌腫瘤、中央類癌、周邊類癌、唾液腺型肺癌、間皮瘤及縱隔腫瘤。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之乳癌。在某些實施例中，乳癌為HER-2陽性乳癌。在某些實施例中，乳癌為ER+乳癌。在某些實施例中，乳癌為PR+乳癌。在某些實施例中，乳癌為三陰性乳癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之結腸直腸或直腸癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之頭頸癌或食道癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之胰臟癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之甲狀腺癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之卵巢癌、子宮癌或子宮頸癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之黑素瘤。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。在其他實施例中，該化合物用於治療腺癌、結腸直腸癌、乳癌、三陰性乳癌、腎細胞癌、初生腦瘤、星形細胞瘤、食道癌或滑膜肉瘤。
在某些實施例中，本文所述之化合物以足夠的濃度穿過血腦屏障以治療EGFR介導之病症，諸如腦或CNS中之癌症，且具有一或多個，甚至可以提供優於使用EGFR配位體之傳統治療的多個額外優勢。舉例而言，本文所述之EGFR降解化合物可a)克服在某些病例下之抗性；b)藉由破壞蛋白質而延長藥物作用之動力學，因此即使在化合物已代謝之後亦需要蛋白質之再合成；c)同時靶向蛋白質之所有功能而非特異性催化活性或結合事件；及/或d)由於小分子催化起作用之可能性而與抑制劑相比具有增加之效力。
在一個態樣中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症，其中該EGFR已自野生型突變。EGFR突變存在多種可能性。在某些非限制性實施例中，在外顯子18、外顯子19、外顯子20或外顯子21或其任何組合中發現突變。在某些非限制性實施例中，突變係在位置L858、E709、G719、C797、L861、T790或L718或其任何組合。在某些實施例中，突變為L858R、T790M、L718Q、L792H及/或C797S突變或其任何組合。
在某些態樣中，癌症在用可作為非共價抑制劑(包括(但不限於)吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼(lapatanib)或凡德他尼(vandetanib))或共價抑制劑(諸如阿法替尼(afatinib)、奧希替尼或達可替尼(dacomitinib))之至少一種EGFR抑制劑治療後發展出一或多種EGFR突變。在另一態樣中，癌症在用抗體，諸如西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼妥單抗(panitumab)或奈西妥單抗(necitumab)治療後出現一或多種EGFR突變。在又一態樣中，癌症具有一或多種EGFR突變或非EGFR突變，其使得癌症本質上對EGFR抑制劑治療具有抗性，例如體細胞外顯子20插入、體細胞PIK3CA突變、PTEN表現喪失、MET擴增或KRAS突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之癌症，該癌症對諸如埃羅替尼、吉非替尼及/或拉帕替尼的第一代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如阿法替尼及/或達可替尼之第二代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如奧希替尼之第三代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。
在一些實施例中，患病組織中之突變型EGFR蛋白具有L858突變，例如L858R。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的突變型EGFR介導之癌症，其中EGFR具有以下所列胺基酸位點中之至少一者或其組合的突變。突變可例如選自所列例示性突變中之一者，或可為不同突變。
胺基酸 例示性突變
C797 C797S
E709 E709A、E709G、E709K、E709V
G719 G719A、G719S、G719C、G719D
G724 G724S
G119 G119A
G796 G796S、G796C
L718 L718V、L718Q
L792 L792H；L792V
L858 L858R
L861 L861Q
S768 S768I
T790 T790M
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有兩種選自上表中之突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有三個選自上表中之突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有四個或更多個突變，其可視情況選自上表。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS的突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及一種可視情況選自上表之額外突變。在此等實施例中之一些中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及兩種可視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及三種可視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及一種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及兩種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及三種視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及一種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及兩種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及三種視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有S768I、L718V、L792H、L792V、G796S、G796C、G724S及/或G719A之突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有讀框轉移突變(例如短框內缺失)之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有外顯子19缺失。在某些實施例中，外顯子19缺失為包括胺基酸LREA (L747-A750)之缺失。在某些實施例中，外顯子19缺失為包括胺基酸ELREA (E746-A750)之缺失。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有外顯子21中之L858R突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物針對由經突變EGFR驅動之病症比野生型EGFR更具活性。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有一或多個外顯子18缺失。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有E709突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如E709A、E709G、E709K或E709V。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有L718突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如L718Q。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有G719突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如G719S、G719A、G719C或G719D。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中EGFR具有一或多個外顯子19插入及/或一或多個外顯子20插入。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的S7681突變型EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR L861Q突變型EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的C797S突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-T790M突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-L718Q突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-L792H突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-C797S突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-T790M-C797S突變型EGFR介導之癌症。 本申請案之其他特徵及優點將自以下實施方式顯而易見。
本發明因此包括至少以下特徵： (a)       一種用於治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症的方法，其包含向有需要之患者投與有效量之如本文所述之式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽； (b)       一種有效量之式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於治療患有EGFR介導之癌症的有需要之患者，典型地為人類，其中該癌症已轉移至腦或CNS； (c)       一種式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造供治療患有EGFR介導之癌症的有需要之患者，典型地為人類用的藥劑，其中該癌症已轉移至腦或CNS； (d)       一種用於治療已轉移至腦之突變型EGFR介導之癌症的方法，其包含向有需要之患者投與有效量之如本文所述之式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽； (e)       一種有效量之式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於治療患有突變型EGFR介導之癌症的有需要之患者，典型地為人類，其中該癌症已轉移至腦或CNS； (f)       一種式I、II、III或IV化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於製造供治療患有突變型EGFR介導之癌症的有需要之患者，典型地為人類用的藥劑，其中該癌症已轉移至腦或CNS。
相關申請之交叉引用
本申請案主張2021年5月26日申請之美國臨時申請案63/193,574及2021年10月21日申請之美國臨時申請案63/270,488的權益，各申請案之全部內容出於所有目的而以引用之方式併入。
提供使表皮生長因子受體蛋白(EGFR)介導之癌症降解的化合物及其用途及製造，該表皮生長因子受體蛋白已經由泛蛋白蛋白酶體路徑(UPP)轉移至腦或CNS。本發明提供式I、II、III或IV之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其包括結合至EGFR之靶向配位體、E3連接酶結合部分(通常經由塞勒布隆亞單位)及將靶向配位體共價連接至E3連接酶結合部分之連接子。在某些實施例中，E3連接酶結合部分為A或A*之部分，連接子為L 1或L 2之部分，且分子之其餘部分為EGFR靶向配位體部分。在某些實施例中，本發明之化合物降解具有突變或突變組合的EGFR，該突變或突變組合例如選自T790M、L858R及C797S之突變；兩種選自T790M、L858R及C797S之突變組合；或兩種選自T790M、L858R及C797S之突變組合。在某些實施例中，本文所述之化合物為含有L858R-T790M、L858R-T790M-C797S、L858R及/或L858R-C797S之EGFR突變體的選擇性降解藥物。
在某些實施例中，本文所述之化合物提供相對於至少一種已知EGFR抑制劑之改良功效及/或安全概況。舉例而言，本文所述之降解藥物具有抑制劑唯一蛋白質結合部分與塞勒布隆介導之蛋白酶體降解之催化降解活性組合的效率。此提供藉由可快速「恢復作用」且重複催化功能的活性部分抵抗過度表現目標之EGFR的快速活性。以此方式，EGFR如同利用共價自殺抑制劑(如奧希替尼)進行一樣快速破壞，但不會同時破壞活性藥物。
I. 定義本說明書中所使用之通用術語之以下定義無論該等術語單獨或與其他基團組合出現均適用。
除非另外陳述，否則以下用於本申請案，包括說明書及申請專利範圍之術語具有下文給定之定義。須注意，除非上下文明確另外規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個(種)參考物。
術語「C 1-6烷氧基」表示式-O-R'之基團，其中R'為C 1-6烷基，特定言之C 1-3烷基。C 1-6烷氧基之實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基及三級丁氧基。特定實例為甲氧基、乙氧基及異丙氧基。更特定實例為甲氧基。
單獨或與其他群組合之術語「C 1-6烷基」代表可為直鏈或分支鏈具有單個或多個分支之烴基，其中烷基通常包含1至6個碳原子，例如甲基(Me)、乙基(Et)、丙基、異丙基(isopropyl/i-propyl)、正丁基、異丁基(i-butyl/isobutyl)、2-丁基(二級丁基)、三級丁基(t-butyl/tert-butyl)、異戊基、2-乙基-丙基(2-甲基-丙基)、1,2-二甲基-丙基及類似者。特定基團為甲基。
術語「氰基」表示-C≡N基團。
術語「C 3-8環烷氧基」表示式-O-R'之基團，其中R'為C 3-8環烷基。環烷氧基之實例包括環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基、環庚氧基及環辛氧基。特定實例為環丙氧基。
術語「C 3-8環烷基」表示具有3至8個環碳原子之單價飽和單環或雙環烴基。雙環意謂由具有一個或兩個共用碳原子之兩個飽和碳環組成之環系統。單環C 3-8環烷基之實例為環丙基、環丁烷基、環戊基、環己基或環庚基。雙環C 3-8環烷基之實例為螺[3.3]庚烷基。特定單環C 3-8環烷基為環丙基、環丁烷基。更特定單環C 3-8環烷基包括環丙基。
術語「鹵基-C 1-6烷氧基」表示C 1-6烷氧基，其中C 1-6烷氧基之氫原子中之至少一者經相同或不同鹵素原子置換。術語「全鹵基-C 1-6烷氧基」表示其中C 1-6烷氧基之所有氫原子經相同或不同鹵素原子置換之C 1-6烷氧基。鹵基-C 1-6烷氧基之實例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、三氟乙氧基、三氟甲基乙氧基、三氟二甲基乙氧基及五氟乙氧基。特定鹵基-C 1-6烷氧基包括氟甲氧基、三氟乙氧基、二氟甲氧基、二氟乙氧基、三氟甲氧基、三氟甲基乙氧基及三氟二甲基乙氧基。更特定實例為氟甲氧基、二氟甲氧基及三氟甲氧基。
術語「鹵基-C 1-6-烷基」表示其中C 1-6-烷基之氫原子中的至少一者已經相同或不同鹵素原子置換之C 1-6-烷基。術語「全鹵基-C 1-6烷基-C 1-6烷基」表示其中烷基之所有氫原子經相同或不同鹵素原子置換的-C 1-6烷基-C 1-6烷基。鹵基-C 1-6烷基之實例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲基乙基及五氟乙基。特定鹵基-C 1-6烷基包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、三氟乙基及二氟乙基。更特定鹵基-C 1-6烷基包括氟甲基。
術語「鹵基-C 3-8環烷氧基」表示其中C 3-8環烷氧基之氫原子中之至少一者經相同或不同鹵素原子置換的C 3-8環烷氧基。術語「全鹵基-C 3-8環烷氧基」表示其中C 3-8環烷氧基之所有氫原子經相同或不同鹵素原子置換之C 3-8環烷氧基。鹵基-C 3-8環烷氧基之實例包括氟環丙氧基、氟環丁氧基、氟環戊氧基、氟環己氧基、氟環庚氧基、二氟環丙氧基、二氟環丁氧基、二氟環戊氧基、二氟環己氧基及二氟環庚氧基。
術語「鹵基-C 3-8環烷基」表示其中C 3-8環烷基之氫原子中之至少一者經相同或不同鹵素原子置換的C 3-8環烷基。術語「全鹵基-C 3-8環烷基」表示其中烷基之所有氫原子經相同或不同鹵素原子置換之C 3-8環烷基。鹵基-C 3-8環烷基之實例包括氟環丙基、氟環丁烷基、氟環戊基、氟環己基、氟環庚基、二氟環丙基、二氟環丁烷基、二氟環戊基、二氟環己基或二氟環庚基。
單獨或與其他基團組合之術語「鹵素」指示氯(Cl)、碘(I)、氟(F)及溴(Br)。特定基團為F及Cl。
術語「羥基」表示-OH基團。
術語「羥基-C 1-6烷基烷基」表示其中C 1-6烷基烷基之氫原子中之至少一者經羥基置換之C 1-6烷基烷基。羥基-C 1-6烷基之實例包括羥甲基、羥乙基及羥丙基。特定實例為羥甲基。
術語「醫藥學上可接受之」表示適用於製備醫藥組合物之材料的屬性，該醫藥組合物通常為安全的、無毒的且在生物學上或其他方面均不是不合需要的，且對於獸醫以及人類醫藥用途為可接受的。
術語「醫藥學上可接受之鹽」係指適用於與人類及動物之組織接觸之鹽。與無機酸及有機酸之合適鹽之實例為(但不限於)以下各物之鹽：乙酸、檸檬酸、甲酸、反丁烯二酸、鹽酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、甲烷磺酸、硝酸、磷酸、對甲苯磺酸、丁二酸、硫酸(sulfuric acid/sulphuric acid)、酒石酸、三氟乙酸及其類似者。特定酸係甲酸、三氟乙酸及鹽酸。特定酸為三氟乙酸。
術語「醫藥學上可接受之輔助物質」係指與調配物之其他成分相容之載劑及輔助物質，諸如稀釋劑或賦形劑。
術語「醫藥組合物」涵蓋包含預定量或比例之指定成分的產物以及由組合指定量之指定成分直接或間接得到之任何產物。特定言之，其涵蓋包含一或多種活性成分及視情況選用之包含惰性成分之載劑的產物，以及由任何兩種或超過兩種成分組合、複合或聚集，或由一或多種成分解離，或由一或多種成分之其他類型之反應或相互作用直接或間接產生的任何產物。
「治療有效量」意謂當向個體投與以治療疾病病況時足以實現對疾病病況之此類治療的化合物之量。「治療有效量」將視化合物、治療之疾病病況、所治療之疾病之嚴重程度、個體之年齡及相對健康狀況、投藥之途徑及形式、主治醫療或獸醫從業者之判斷及其他因素而變化。
當提及變數時，術語「如本文中所定義」及「如本文中所描述」以引用方式併入變數以及特定言之、更特定言之及最特定言之定義之廣泛定義(若存在)。
當提及化學反應時，術語「治療」、「接觸」及「反應」意謂在適當條件下添加或混合兩種或兩種以上反應劑以產生指定及/或所需產物。應理解，產生指定產物及/或所要產物之反應可不一定由最初添加之兩種反應劑之組合直接引起，亦即可存在產生於混合中之一或多種中間物，其最終導致指定產物及/或所需產物形成。
術語「醫藥學上可接收之賦形劑」表示不具有治療活性且無毒之任何成分，諸如用於調配醫藥產品之崩解劑、結合劑、填充劑、溶劑、緩衝液、張力劑、穩定劑、抗氧化劑、界面活性劑或潤滑劑。
術語「醫藥組合物」涵蓋包含預定量或比例之指定成分的產物以及由組合指定量之指定成分直接或間接得到之任何產物。特定言之，其涵蓋包含一或多種活性成分及視情況選用之包含惰性成分之載劑的產物，以及由任何兩種或超過兩種成分組合、複合或聚集，或由一或多種成分解離，或由一或多種成分之其他類型之反應或相互作用直接或間接產生的任何產物。
術語「抑制劑」表示競爭、減少或防止特定配位體與特定受體結合或減少或防止特定蛋白質之功能的化合物。
術語「半最大抑制濃度」(IC 50)表示獲得活體外生物過程50%抑制所需之特定化合物濃度。IC 50值可對數性地轉化成pIC 50值(-log IC 50)，其中愈高值表明按指數律愈大之效能。IC 50值不為絕對值，但視實驗條件(例如所用濃度)而定。可使用Cheng-Prusoff方程式(Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099)將IC 50值轉化成絕對抑制常數(K i)。
「治療有效量」意謂當向個體投與以治療疾病病況時足以實現對疾病病況之此類治療的化合物之量。「治療有效量」將視化合物、治療之疾病病況、所治療之疾病之嚴重程度、個體之年齡及相對健康狀況、投藥之途徑及形式、主治醫療或獸醫從業者之判斷及其他因素而變化。
術語「芳族」表示如文獻中，特定言之IUPAC - Compendium of Chemical Terminology，第2版, A. D. McNaught & A. Wilkinson (編). Blackwell Scientific Publications, Oxford (1997)中所定義之芳族性之習知概念。
只要對掌性碳存在於化學結構中，即意圖由結構涵蓋與該對掌性碳相關聯之所有立體異構體作為純立體異構體以及其混合物。
在某些實施例中，同位素併入至本發明之化合物中。此等同位素包括(但不限於)氫、碳、氮、氧、氟及氯之同位素，諸如分別為 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 18F、 35S及 36Cl。在一個非限制性實施例中，經同位素標記之化合物可用於代謝研究(使用例如 14C)；反應動力學研究(使用例如 2H或 3H)；偵測或成像技術，諸如正電子發射斷層攝影術(PET)或單光子發射電腦斷層攝影術(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈分析；或適用於患者之放射性治療。另外，存在於本發明之化合物中之任何氫原子可經 18F原子取代，該取代可能對PET或SPECT研究尤其需要。
在一個非限制性實施例中，氫原子對氘原子之取代可提供於本文所述之任何化合物中。舉例而言，當基團中之任一者經由取代而為或含有例如甲基、乙基或甲氧基時，烷基殘基可經氘化(在非限制性實施例中，CDH 2、CD 2H、CD 3、CH 2CD 3、CD 2CD 3、CHDCH 2D、CH 2CD 3、CHDCHD 2、OCDH 2、OCD 2H或OCD 3等)。在某些其他實施例中，當兩個取代基組合以形成環時，未經取代之碳可經氘化。在某些實施例中，至少一個氘置放於具有在活體內化合物之代謝期間斷裂之鍵的原子上，或為一個、兩個或三個遠離代謝鍵之原子(例如，其可稱作α、β或γ，或一級、二級或三級同位素效應)。
在某些實施例中，本文所述之化合物經同位素標記。在某些實施例中，獨立地選自以下之至少一個R基團在價數允許的情況下用1、2或更多個同位素進行同位素標記：R 1、R 2、R 3、R 4、R 6、R 7、R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14、R 15、R 16、R 17、R 20、R 21、R 22、R 23、R 24、R 26、R 27、R 31、R 32、R 33、R 34、R 35、R 36、R 37、R 40、R 41、R 42、R 52、R 53、R 54、R 55、R 70、R 80、R 81、R 82、R 90或R 100。在某些實施例中，同位素標籤為氘。在某些實施例中，至少一個氘置放於具有在活體內化合物之代謝期間斷裂之鍵的原子上，或為一個、兩個或三個遠離代謝鍵之原子(例如，其可稱作α、β或γ，或一級、二級或三級同位素效應)。在另一實施例中，同位素標籤為 13C。在其他實施例中，同位素標籤為 18F。
在某些實施例中，本文所述之化合物可與溶劑(包括水)形成溶劑合物。因此，在一個非限制性實施例中，本發明包括本文所描述的化合物之溶合形式。術語「溶劑合物」係指本文所述化合物(包括其鹽)與一或多個溶劑分子之分子複合物。溶劑之非限制性實例為水、乙醇、異丙醇、二甲亞碸、丙酮及其他常見有機溶劑。
在某些實施例中，「烯基」為具有一或多個可在沿著鏈之穩定點處出現之碳-碳雙鍵的直鏈或分支鏈脂族烴基。在一個非限制性實施例中，烯基含有2至約12個碳原子，更一般而言，2至約6個碳原子或2至約4個碳原子。在某些實施例中，烯基為C 2、C 2-C 3、C 2-C 4、C 2-C 5或C 2-C 6。在某些實施例中，烯基之實例包括(但不限於)乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基及4-甲基丁烯基。在某些實施例中，術語「烯基」亦體現「順式」及「反式」烯基幾何形狀，或替代地「E」及「Z」烯基幾何形狀。在某些實施例中，術語「烯基」亦涵蓋具有至少一個不飽和點之環烷基或碳環基。
在某些實施例中，「炔基」為具有一或多個可在沿著鏈之任何穩定點處出現之碳-碳參鍵的分支鏈或直鏈脂族烴基。在一個非限制性實施例中，炔基含有2至約12個碳原子，更一般而言，2至約6個碳原子或2至約4個碳原子。在某些實施例中，炔基為C 2、C 2-C 3、C 2-C 4、C 2-C 5或C 2-C 6。在某些實施例中，炔基之實例包括但不限於乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基及5-己炔基。在某些實施例中，術語「炔基」亦涵蓋具有至少一個參鍵不飽和點之環烷基或碳環基。
在某些實施例中，術語「CNS」係指中樞神經系統之組分，包括例如腦、腦幹、周邊神經系統、腦脊髓液、脊髓、軟腦膜、硬膜外腔、髓鞘、丘腦、下丘腦、腦垂腺、海馬區、小腦、大腦、中腦、腦橋、額葉、顳葉及/或硬腦膜。
II. 用式 I 、 II 、 III 及 IV 之化合物治療 EGFR 介導之病症的方法本發明提供使用式I、II、III及IV化合物之方法。 E1:     在某些實施例中，本發明為一種治療患有已轉移至腦、中樞神經系統、周邊神經系統、腦脊髓液、脊髓、軟腦膜、硬膜外腔及/或硬腦膜之EGFR介導之癌症之患者的方法，其包含向有需要之患者投與有效量之下式EGFR降解化合物：
Figure 02_image063
或其醫藥學上可接受之鹽、同位素、N-氧化物、立體異構體，其視情況作為醫藥組合物之一部分； 其中 A*係選自：
Figure 02_image065
Figure 02_image067
； B*為雜芳基或芳基，其中之各者視情況經1、2或3個R 31取代基取代； y為0、1、2或3； R 31在各次出現時獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基且可位於存在於雙環上之任一環上； R 32為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基或鹵基-C 3-8環烷基； R 33為氫、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基或鹵基-C 3-8環烷基且可位於二氫吡咯或咪唑環上； R 34在各次出現時獨立地選自H、F、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； R 35在各次出現時獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基及C 3-8環烷基； 或R 34及R 35組合形成-(CH 2) q-； q為1或2； R 36及R 37獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； 或R 36及R 37一起組合形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員或6員環； R 90為H、C 1-6烷基或C 3-6環烷基； 環G為視情況經1或2個R 42取代基取代之雜芳基； A 21為-NH-、-O-、-CH 2-或-NR 100-； R 100為烷基、環烷基、芳基或雜芳基；或在價數允許的情況下，R 100可與R 37組合以形成5-8員雜環或5員雜芳基； A 32、A 33、A 34及A 35獨立地選自-N-及-CR 42-； R 42在各次出現時獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)、氰基、C 1-6烷氧基、鹵基-C 1-6烷氧基、C 1-6烷基、鹵基-C 1-6烷基、C 3-8環烷基及鹵基-C 3-8環烷基； A 36為-N-或-CR 35-； L 2為連接A*及異吲哚啉酮或吲唑之二價鍵聯基團。 E2:     如實施例1之方法，其中該EGFR降解化合物係選自：
Figure 02_image069
或其醫藥學上可接受之鹽。 E3:     如實施例1之方法，其中該EGFR降解化合物係選自：
Figure 02_image071
或其醫藥學上可接受之鹽。 E4:     如實施例1至3中任一項之方法，其中R 33為H。 E5:     如實施例1至3中任一項之方法，其中R 33為F。 E6:     如實施例1至5中任一項之方法，其中y為1。 E7:     如實施例1至5中任一項之方法，其中y為2。 E8:     如實施例1至7中任一項之方法，其中至少一個R 31為鹵基。 E9:     如實施例1至7中任一項之方法，其中至少一個R 31為F。 E10:  如實施例1至3中任一項之方法，其中y為0。 E11:  如實施例1至9中任一項之方法，其中R 32為H。 E12:  如實施例1至9中任一項之方法，其中R 32為F。 E13:  如實施例1之方法，其中該EGFR降解化合物係選自：
Figure 02_image073
。 E14:  如實施例1之方法，其中該EGFR降解化合物係選自：
Figure 02_image075
Figure 02_image077
。 E15:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image079
。 E16:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image081
。 E17:  如實施例1至16中任一項之方法，其中A 34為CH。 E18:  如實施例1至16中任一項之方法，其中A 34為N。 E19:  如實施例1至16中任一項之方法，其中A 34為CR 42。 E20:  如實施例1至16中任一項之方法，其中A 34為CF。 E21:  如實施例1至20中任一項之方法，其中A 35為CH。 E22:  如實施例1至20中任一項之方法，其中A 35為N。 E23:  如實施例1至20中任一項之方法，其中A 35為CR 42。 E24:  如實施例1至20中任一項之方法，其中A 35為CF。 E25:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image083
。 E26:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image085
。 E27:  如實施例25或26中任一項之方法，其中A 21為NH。 E28:  如實施例25或26中任一項之方法，其中A 21為O。 E29:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image087
。 E30:  如實施例1至29中任一項之方法，其中A 32為CH。 E31:  如實施例1至29中任一項之方法，其中A 32為N。 E32:  如實施例1至29中任一項之方法，其中A 32為CR 42。 E33:  如實施例1至29中任一項之方法，其中A 32為CF。 E34:  如實施例1至33中任一項之方法，其中A 33為CH。 E35:  如實施例1至33中任一項之方法，其中A 33為N。 E36:  如實施例1至33中任一項之化合物，其中A 33為CR 42。 E37:  如實施例1至33中任一項之方法，其中A 33為CF。 E38:  如實施例1至14中任一項之方法，其中A*為：
Figure 02_image089
。 E39:  如實施例38之方法，其中A 21為NH。 E40:  如實施例38之方法，其中A 21為O。 E41:  如實施例1至40中任一項之方法，其中R 34為H。 E42:  如實施例1至40中任一項之方法，其中R 34為F。 E43:  如實施例1至40中任一項之方法，其中R 34為CH 3。 E44:  如實施例1至43中任一項之方法，其中R 35為H。 E45:  如實施例1至43中任一項之方法，其中R 35為F。 E46:  如實施例1至43中任一項之方法，其中R 35為CH 3。 E47:  如實施例1至40中任一項之方法，其中R 34及R 35組合以形成-CH 2-。 E48:  如實施例1至47中任一項之方法，其中R 31在各情況下獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)及C 1-6烷基。 E49:  如實施例1至47中任一項之方法，其中R 42在各情況下獨立地選自H、鹵素(F、Cl、Br或I)及C 1-6烷基。 E50:  如實施例1至49中任一項之方法，其中B*為
Figure 02_image091
。 E51:  如實施例1至49中任一項之方法，其中B*為
Figure 02_image093
。 E52:  如實施例1至49中任一項之方法，其中B*為
Figure 02_image095
。 E53:  如實施例1至49中任一項之方法，其中B*為
Figure 02_image097
。 E54:  如實施例1至53中任一項之方法，其中L 2具有下式：
Figure 02_image099
。 其中， X 1及X 2在各次出現時獨立地選自鍵、雜環、芳基、雜芳基、雙環、烷基、脂族、雜脂族、-NR 27-、-CR 40R 41-、-O-、-C(O)-、-C(NR 27)-、-C(S)-、-S(O)-、-S(O) 2-及-S-；雜環、芳基、雜芳基及雙環中之各者視情況經1、2、3或4個獨立地選自R 40之取代基取代； R 20、R 21、R 22、R 23及R 24在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：鍵、烷基、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-SO 2-、-S(O)-、-C(S)-、-C(O)NR 27-、-NR 27C(O)-、-O-、-S-、-NR 27-、氧基伸烷基、-C(R 40R 40)-、-P(O)(OR 26)O-、-P(O)(OR 26)-、雙環、烯烴、炔烴、鹵烷基、烷氧基、芳基、雜環、脂族、雜脂族、雜芳基、乳酸、乙醇酸及碳環；其中之各者視情況經1、2、3或4個獨立地選自R 40之取代基取代； R 26在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烯烴、炔烴、芳基、雜芳基、雜環、脂族及雜脂族； R 27在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、脂族、雜脂族、雜環、芳基、雜芳基、-C(O)(脂族、芳基、雜脂族或雜芳基)、-C(O)O(脂族、芳基、雜脂族或雜芳基)、烯烴及炔烴； R 40在各次出現時獨立地選自由以下組成之群：氫、R 27、烷基、烯烴、炔烴、氟、溴、氯、羥基、烷氧基、疊氮基、胺基、氰基、-NH(脂族)、-N(脂族) 2、-NHSO 2(脂族)、-N(脂族)SO 2烷基、-NHSO 2(芳基、雜芳基或雜環)、-N(烷基)SO 2(芳基、雜芳基或雜環)、-NHSO 2烯基、-N(烷基)SO 2烯基、-NHSO 2炔基、-N(烷基)SO 2炔基、鹵烷基、脂族、雜脂族、芳基、雜芳基、雜環、側氧基及環烷基；另外，在價數允許之情況下，兩個鍵結至相同碳之R 40基團可接合在一起以形成3至8員螺環；及 R 41為脂族、芳基、雜芳基或氫。 E55:  如實施例1至54中任一項之方法，其中L 2具有下式：
Figure 02_image101
。 E56:  如實施例54或55之方法，其中X 1為鍵。 E57:  如實施例54或55之方法，其中X 1為雜環。 E58:  如實施例54或55之方法，其中X 1為NR 2。 E59:  如實施例54或55之方法，其中X 1為C(O)。 E60:  如實施例54至59中任一項之方法，其中X 2為鍵。 E61:  如實施例54至59中任一項之方法，其中X 2為雜環。 E62:  如實施例54至59中任一項之方法，其中X 2為NR 2。 E63:  如實施例54至59中任一項之方法，其中X 2為C(O)。 E64:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為鍵。 E65:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為CH 2。 E66:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為雜環。 E67:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為芳基。 E68:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為苯基。 E69:  如實施例54至63中任一項之方法，其中R 20為雙環。 E70:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為鍵。 E71:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為CH 2。 E72:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為雜環。 E73:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為芳基。 E74:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為苯基。 E75:  如實施例54至69中任一項之方法，其中R 21為雙環。 E76:  如實施例54之方法，其中L為下式之連接子：
Figure 02_image103
。 E77:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為鍵。 E78:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為CH 2。 E79:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為雜環。 E80:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為芳基。 E81:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為苯基。 E82:  如實施例54至76中任一項之方法，其中R 22為雙環。 E83:  如實施例54至69中任一項之方法，其中L為下式之連接子：
Figure 02_image105
。 E84:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為鍵。 E85:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為CH 2。 E86:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為雜環。 E87:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為芳基。 E88:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為苯基。 E89:  如實施例54至83中任一項之方法，其中R 23為雙環。 E90:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為鍵。 E91:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為CH 2。 E92:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為雜環。 E93:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為芳基。 E94:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為苯基。 E95:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為雙環。 E96:  如實施例54至89中任一項之方法，其中R 24為C(O)。 E97:  如實施例1至96中任一項之方法，其中該患者為人類。 E98:  如實施例1至97中任一項之方法，其中該癌症為肺癌。 E99:  如實施例98之方法，其中該肺癌為非小細胞肺癌。 E100:        如實施例1至99中任一項之方法，其中該癌症具有含有至少一個突變之EGFR蛋白。 E101:        如實施例1至100中任一項之方法，其中該癌症具有含有L858R突變之EGFR蛋白。 E102:        如實施例1至101中任一項之方法，其中該癌症具有含有T790M突變之EGFR蛋白。 E103:        如實施例1至102中任一項之方法，其中該癌症具有含有C797S突變之EGFR蛋白。 E104:        如實施例1至103中任一項之方法，其中該癌症具有含有L792H突變之EGFR蛋白。 E105:        如實施例1至104中任一項之方法，其中該癌症具有含有L718Q突變之EGFR蛋白。 E106:        如實施例1至105中任一項之方法，其中該癌症具有含有L858R-T790M突變之EGFR蛋白。 E107:        如實施例1至106中任一項之方法，其中該癌症具有含有L858R-T790M-C797S突變之EGFR蛋白。 E108:        如實施例1至107中任一項之方法，其中該癌症具有含有L858R-C797S突變之EGFR蛋白。 E109:        如實施例1至108中任一項之方法，其中投與額外EGFR抑制劑。 E110:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為酪胺酸激酶抑制劑。 E111:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為奧希替尼。 E112:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為羅西替尼(rociletinib)。 E113:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為阿維替尼(avitinib)。 E114:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為拉澤替尼(lazertinib)。 E115:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為那紮替尼(nazartinib)。 E116:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為針對EGFR突變形式的抗體。 E117:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為西妥昔單抗。 E118:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為帕尼妥單抗。 E119:        如實施例109之方法，其中該額外EGFR抑制劑為奈西妥單抗。 E120:        如實施例1至119中任一項之方法，其中亦投與MET抑制劑。 E121:        如實施例1至120中任一項之方法，其中該患者接受額外化學治療劑。 E122:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image107
或其醫藥學上可接受之鹽。 E123:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image109
或其醫藥學上可接受之鹽。 E124:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image111
或其醫藥學上可接受之鹽。 E125:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image113
或其醫藥學上可接受之鹽。 E126:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image115
或其醫藥學上可接受之鹽。 E127:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image117
或其醫藥學上可接受之鹽。 E128:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image119
或其醫藥學上可接受之鹽。 E129:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image121
或其醫藥學上可接受之鹽。 E130:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image123
或其醫藥學上可接受之鹽。 E131:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image125
或其醫藥學上可接受之鹽。 E132:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image127
或其醫藥學上可接受之鹽。 E133:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物為：
Figure 02_image129
或其醫藥學上可接受之鹽。 E134:        如實施例1至121中任一項之方法，其中本文描述該EGFR降解化合物。 E135:        如實施例1至121中任一項之方法，其中該EGFR降解化合物描述於表8、表9A或表9B中。 1. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物係選自：
Figure 02_image131
Figure 02_image133
Figure 02_image135
Figure 02_image137
； 或其醫藥學上可接受之鹽。 2. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image139
或其醫藥學上可接受之鹽。 3. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image141
或其醫藥學上可接受之鹽。 4. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image143
或其醫藥學上可接受之鹽。 5. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image145
或其醫藥學上可接受之鹽。 6. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image147
或其醫藥學上可接受之鹽。 7. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image149
或其醫藥學上可接受之鹽。 8. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image151
或其醫藥學上可接受之鹽。 9. 在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image153
或其醫藥學上可接受之鹽。 10.      在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image155
或其醫藥學上可接受之鹽。 11.      在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image157
或其醫藥學上可接受之鹽。 12.      在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image159
或其醫藥學上可接受之鹽。 13.      在某些實施例中，提供一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療患者之已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
Figure 02_image161
或其醫藥學上可接受之鹽。 14.      如實施例1至13中任一項之用途，其中該患者為人類。 15.      如實施例1至14中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症係由突變型EGFR介導。 16.      如實施例15之用途，其中該突變型EGFR具有外顯子21突變。 17.      如實施例16之用途，其中該突變型EGFR具有L858R突變。 18.      如實施例16之用途，其中該突變型EGFR具有L861Q突變。 19.      如實施例15至18中任一項之用途，其中突變型EGFR具有T790M突變。 20.      如實施例15至19中任一項之用途，其中突變型EGFR具有C797S突變。 21.      如實施例15之用途，其中該突變型EGFR具有L858R及T790M突變。 22.      如實施例15之用途，其中該突變型EGFR具有L858R、T790M及C797S突變。 23.      如實施例1至22中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物作為醫藥組合物之一部分投與。 24.      如實施例1至23中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係經口投與。 25.      如實施例1至23中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係非經腸投與。 26.      如實施例1至23中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係藉由靜脈內投與。 27.      如實施例1至26中任一項之用途，其中亦向有需要之患者投與結合ATP位點的EGFR配位體。 28.      如實施例27之用途，其中結合ATP位點的EGFR配位體為奧希替尼或其醫藥學上可接受之鹽。 29.      如實施例27之用途，其中結合ATP位點的EGFR配位體為納闊替尼或其醫藥學上可接受之鹽。 30.      如實施例27之用途，其中結合ATP位點的EGFR配位體為瑪韋替尼(mavelertinib)或其醫藥學上可接受之鹽。 31.      如實施例27之用途，其中結合ATP位點的EGFR配位體為司培替尼(spebrutinib)或其醫藥學上可接受之鹽。 32.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肺癌。 33.      如實施例1至31中之任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之非小細胞肺癌。 34.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之小細胞肺癌。 35.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腺癌。 36.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之鱗狀細胞肺癌。 37.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之大細胞未分化性癌。 38.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之神經內分泌癌。 39.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肉瘤樣癌、腺鱗癌、燕麥細胞癌、組合小細胞癌、肺類癌腫瘤、中央類癌、周邊類癌、唾液腺型肺癌、間皮瘤或縱隔腫瘤。 40.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之乳癌。 41.      如實施例40之用途，其中該EGFR介導之癌症為HER-2陽性乳癌。 42.      如實施例40或41之用途，其中該EGFR介導之癌症為ER+乳癌。 43.      如實施例40至42中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為PR+乳癌。 44.      如實施例1至31中任一者之用途，其中該EGFR介導之癌症為三陰性乳癌。 45.      如實施例1至31中之任一項的用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之結腸直腸或直腸癌。 46.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之頭頸癌或食道癌。 47.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之胰臟癌。 48.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之甲狀腺癌。 49.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之卵巢癌、子宮癌或子宮頸癌。 50.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。 51.      如實施例1至31中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之黑素瘤。 52.      如實施例1至51中之任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至腦。 53.      如實施例1至51中之任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至CNS。 54.      如實施例1至53中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係投與EGFR介導之癌症未經治療的患者。 55.      如實施例1至53中任一者之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性的。 56.      如實施例1至53中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為難治性的。 57.      如實施例1至53中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性及難治性的。
本發明之額外實施例 對掌性實施例本文所述之化合物可具有多個立構中心(例如，對掌性碳原子)，包括例如E3連接酶結合部分中之一或多個立構中心(例如，
Figure 02_image163
)、連接子中之一或多個立構中心，及/或分子之EGFR結合配位體部分中之至少一個立構中心(例如
Figure 02_image165
)。在某些實施例中，提供本文所述之EGFR-降解化合物而不考慮立體化學。在其他實施例中，EGFR-降解化合物可具有一或多個以R及S立體化學之對映異構性增濃(亦即，超過約50%、60%、70%、80%或90%純)或甚至基本上純形式(超過約95%、98%或99%純)呈現之對掌性碳。在某些態樣中，EGFR-降解化合物具有兩個對映異構性增濃及/或基本上純的立構中心。在此情形之一個子態樣中，兩個對映異構性增濃及/或實質上純的立構中心位於化合物及連接子之接合酶-結合部分中；或者連接子中存在兩個。在另一子態樣中，存在三個對映異構性增濃及/或基本上純的立構中心，其中一個在化合物之接合酶-結合部分中且兩個在連接子中。在此情形之又一子態樣中，存在三個對映異構性增濃及/或基本上純的立構中心，其中一個在化合物之接合酶-結合部分中且兩個在連接子中。在另一態樣中，在此等實施例、態樣或子態樣中之任一者中，此外，EGFR結合配位體部分為對映異構性增濃或基本上純的形式。
已經觀察到，在一些實施例中，與醯胺相鄰之EGFR結合配位體部分中的對掌性碳在使用條件下可能容易地在立體異構體之間消旋，因此在某些實施例中，出於立體化學命名之目的不考慮該對掌性碳。
在某些實施例中，一個立構中心呈R組態且存在之任何其他為對映異構性增濃或實質上純的。在某些實施例中，一個立構中心呈S組態且存在之任何其他為對映異構性增濃或實質上純的。
在某些實施例中，一個立構中心呈R組態，並且存在之任何其他不考慮立體化學為對映異構性增濃或實質上純的。在某些實施例中，一個立構中心呈S組態，並且存在之任何其他不考慮立體化學為對映異構性增濃或實質上純的。
在某些實施例中，E3連接酶結合部分中存在一個立構中心(不考慮EGFR結合配位體部分中之立構中心)，且它在R-組態中為對映異構性增濃或實質上純的，如下所示。在某些實施例中，E3連接酶結合部分中存在一個立構中心(不考慮EGFR結合配位體部分中之立構中心)，且它在S-組態中為對映異構性增濃或實質上純的，如下所示。
在某些實施例中，
Figure 02_image167
為
Figure 02_image169
，其中R 34為氫。
在某些實施例中，
Figure 02_image171
為
Figure 02_image173
，其中R 34為氫。
在某些實施例中，
Figure 02_image175
為
Figure 02_image177
。
在某些實施例中，
Figure 02_image179
為
Figure 02_image181
。
在某些實施例中，
Figure 02_image183
為
Figure 02_image185
。
在某些實施例中，
Figure 02_image187
為
Figure 02_image189
。
在某些實施例中，在連接子部分中存在一個立構中心且其為R-及S-組態之混合物。在另一實施例中，在連接子部分中存在一個立構中心且其為對映異構性增濃或實質上純的R-組態。在另一實施例中，在連接子部分中存在一個立構中心且其為對映異構性增濃或實質上純的S-組態。
在某些實施例中，連接子含有一或多個具有對掌性中心之部分。非限制性實例包括具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之雜環，例如在氮之間或鄰位具有取代基或具有間或鄰-組態之鍵聯的哌啶；在間或鄰-組態具有取代基或鍵聯之哌𠯤；具有或不具有取代基之吡咯啶酮；及具有或不具有取代基之吡咯啶。
具有至少一個對掌性中心之連接子部分之額外非限制性實例包括具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之烷基；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之烯烴；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之炔烴；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之鹵代烷基；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之烷氧基；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之脂肪族基團；具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之雜脂族基團；及具有對映異構性增濃或實質上純的立構中心之環烷基。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image191
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image193
Figure 02_image195
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image197
Figure 02_image199
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image201
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image203
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image205
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image207
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image209
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image211
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image213
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image215
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image217
。
在某些實施例中，連接子包括
Figure 02_image219
。
在某些實施例中，EGFR配位體部分中存在至少一個立構中心，其為R及S之混合物。在另一個實施例中，在EGFR配位體部分中存在至少一個立構中心且其在R-組態中為對映異構性增濃或實質上純的。在另一個實施例中，在EGFR配位體部分中存在至少一個立構中心且其在S-組態中為對映異構性增濃或實質上純的。
在某些實施例中，
Figure 02_image221
為
Figure 02_image223
，其中R 33為氫。
在某些實施例中，
Figure 02_image225
為
Figure 02_image227
，其中R 33為氫。
在某些實施例中，
Figure 02_image229
為
Figure 02_image231
。
在某些實施例中，
Figure 02_image233
為
Figure 02_image235
。
在某些實施例中，
Figure 02_image237
為
Figure 02_image239
。
在某些實施例中，
Figure 02_image241
為
Figure 02_image243
。
在某些實施例中，
Figure 02_image245
為
Figure 02_image247
。
在某些實施例中，
Figure 02_image249
為
Figure 02_image251
。
烷基之實施例在某些實施例中，「烷基」為C 1-C 10烷基、C 1-C 9烷基、C 1-C 8烷基、C 1-C 7烷基、C 1-C 6烷基、C 1-C 5烷基、C 1-C 4烷基、C 1-C 3烷基或C 1-C 2烷基。
在某些實施例中，「烷基」具有一種碳。
在某些實施例中，「烷基」具有兩個碳。
在某些實施例中，「烷基」具有三個碳。
在某些實施例中，「烷基」具有四個碳。
在某些實施例中，「烷基」具有五個碳。
在某些實施例中，「烷基」具有六個碳。
「烷基」之非限制性實例包括：甲基、乙基、丙基、丁基、戊基及己基。
「烷基」之額外非限制性實例包括：異丙基、異丁基、異戊基及異己基。
「烷基」之額外非限制性實例包括：二級丁基、二級戊基及二級己基。
「烷基」之額外非限制性實例包括：三級丁基、三級戊基及三級己基。
「烷基」之額外非限制性實例包括：新戊基、3-戊基及活性戊基。
在替代實施例中，「烷基」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
環烷基之實施例在某些實施例中，「環烷基」為C 3-C 8環烷基、C 3-C 7環烷基、C 3-C 6環烷基、C 3-C 5環烷基、C 3-C 4環烷基、C 4-C 8環烷基、C 5-C 8環烷基或C 6-C 8環烷基。 在某些實施例中，「環烷基」具有三個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有四個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有五個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有六個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有七個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有八個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有九個碳。
在某些實施例中，「環烷基」具有十個碳。
「環烷基」之非限制性實例包括：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基及環癸基。
在替代實施例中，「環烷基」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
鹵烷基之實施例在某些實施例中，「鹵烷基」為C 1-C 10鹵烷基、C 1-C 9鹵烷基、C 1-C 8鹵烷基、C 1-C 7鹵烷基、C 1-C 6鹵烷基、C 1-C 5鹵烷基、C 1-C 4鹵烷基、C 1-C 3鹵烷基及C 1-C 2鹵烷基。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有一個碳。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有一個碳及一個鹵素。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有一個碳及兩個鹵素。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有一個碳及三個鹵素。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有兩個碳。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有三個碳。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有四個碳。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有五個碳。
在某些實施例中，「鹵烷基」具有六個碳。
「鹵烷基」之非限制性實例包括：
Figure 02_image253
。
「鹵烷基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image255
Figure 02_image257
。
「鹵烷基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image259
。
「鹵烷基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image261
。
雜環之實施例在某些實施例中，「雜環」係指具有一個氮及3、4、5、6、7或8個碳原子之環狀環。
在某些實施例中，「雜環」係指具有一個氮及一個氧以及3、4、5、6、7或8個碳原子之環狀環。
在某些實施例中，「雜環」係指具有兩個氮及3、4、5、6、7或8個碳原子之環狀環。
在某些實施例中，「雜環」係指具有一個氧及3、4、5、6、7或8個碳原子之環狀環。
在某些實施例中，「雜環」係指具有一個硫及3、4、5、6、7或8個碳原子之環狀環。
「雜環」之非限制性實例包括氮丙啶、環氧乙烷、環硫乙烷、氮雜環丁烷、1,3-二氮雜環丁烷、氧雜環丁烷及硫雜環丁烷。
「雜環」之額外非限制性實例包括吡咯啶、3-吡咯啉、2-吡咯啉、吡唑啶及咪唑啶。
「雜環」之額外非限制性實例包括四氫呋喃、1,3-二氧雜環戊烷、四氫噻吩、1,2-氧硫雜環戊烷及1,3-氧硫雜環戊烷。
「雜環」之額外非限制性實例包括哌啶、哌𠯤、四氫哌喃、1,4-二㗁烷、噻烷、1,3-二噻烷、1,4-二噻烷、𠰌啉及硫代𠰌啉。
「雜環」之額外非限制性實例包括吲哚啉、四氫喹啉、四氫異喹啉及二氫苯并呋喃，其中各基團之連接點位於雜環上。
「雜環」之非限制性實例亦包括：
Figure 02_image263
。
「雜環」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image265
。
「雜環」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image267
。
「雜環」之非限制性實例亦包括：
Figure 02_image269
。
「雜環」之非限制性實例亦包括：
Figure 02_image271
。
「雜環」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image273
。
「雜環」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image275
。
在替代實施例中，「雜環」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
雜芳基之實施例在某些實施例中，「雜芳基」為含有1、2、3或4個氮原子之5員芳族基。
5員「雜芳基」之非限制性實例包括吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、三唑、四唑、異㗁唑、㗁唑、㗁二唑、㗁三唑、異噻唑、噻唑、噻二唑及噻三唑。
5員「雜芳基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image277
Figure 02_image279
。
在某些實施例中，「雜芳基」為含有1、2或3個氮原子之6員芳族基(亦即，吡啶基、噠𠯤基、三𠯤基、嘧啶基及吡𠯤基)。
具有1或2個氮原子之6員「雜芳基」之非限制性實例包括：
Figure 02_image281
Figure 02_image283
。
在某些實施例中，「雜芳基」為含有1或2個選自氮、氧及硫之原子之9員雙環芳族基。
雙環「雜芳基」之非限制性實例包括吲哚、苯并呋喃、異吲哚、吲唑、苯并咪唑、氮雜吲哚、氮雜吲唑、嘌呤、異苯并呋喃、苯并噻吩、苯并異㗁唑、苯并異噻唑、苯并㗁唑及苯并噻唑。
雙環「雜芳基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image285
。
雙環「雜芳基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image287
。
雙環「雜芳基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image289
。
在某些實施例中，「雜芳基」為含有1或2個選自氮、氧及硫之原子之10員雙環芳族基。
雙環「雜芳基」之非限制性實例包括喹啉、異喹啉、喹喏啉、呔𠯤、喹唑啉、㖕啉及㖠啶。
雙環「雜芳基」之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image291
。
在一替代實施例中，「雜芳基」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
芳基之實施例在某些實施例中，芳基為苯基。
在某些實施例中，芳基為萘基。
在一替代實施例中，「芳基」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
雙環之實施例術語「雙環」係指其中兩個環共用至少一個共同原子之環系統。此等環可為螺環或稠合在一起且各環獨立地選自碳環、雜環、芳基及雜芳基。雙環基團之非限制性實例包括：
Figure 02_image293
Figure 02_image295
。
當術語「雙環」用於二價殘基，諸如連接子之上下文中時，連接點可位於單獨環上或相同環上。在某些實施例中，兩個連接點位於相同環上。在某些實施例中，兩個連接點位於不同環上。二價雙環基團之非限制性實例包括：
Figure 02_image297
Figure 02_image299
。
二價雙環之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image301
。
在一替代實施例中，「雙環」「視情況經1、2、3或4個R 31取代基取代」。
視情況選用之取代基之實施例在其中變數可視情況經取代之某些實施例中，其不經取代。
在其中變數可視情況經取代之某些實施例中，其經1個取代基取代。
在其中變數可視情況經取代之某些實施例中，其經2個取代基取代。
在其中變數可視情況經取代之某些實施例中，其經3個取代基取代。
在其中變數可視情況經取代之某些實施例中，其經4個取代基取代。
在一個替代實施例中，若指示形成穩定分子且滿足本發明之所需目的，則任何適合基團可存在於「經取代」或「視情況經取代之」位置上，且包括但不限於例如鹵素(其可以獨立地為F、Cl、Br或I)；氰基；羥基；硝基；疊氮基；烷醯基(諸如C 2-C 6烷醯基)；甲醯胺；烷基、環烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳氧基諸如苯氧基；硫烷基，包括具有一或多個硫醚鍵之彼等；烷基亞磺醯基；烷基磺醯基，包括具有一或多個磺醯基鍵之彼等；胺基烷基，包括具有多於一個N原子之基團；芳基(例如苯基、聯苯基、萘基或其類似基團，各環經取代或未經取代)；具有例如1至3個單獨或稠合環及6至約14或18個環碳原子之芳基烷基，其中苄基為例示性芳基烷基；芳基烷氧基，例如具有1至3個單獨或稠合的環，其中苄氧基為例示性芳基烷氧基；或具有1至3個具有一或多個N、O或S原子之獨立或稠合環的飽和或部分不飽和雜環，或具有1至3個具有一或多個N、O或S原子之獨立或稠合環的雜芳基，例如香豆素基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、吡啶基、吡𠯤基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、三𠯤基、㗁唑基、異㗁唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、哌啶基、嗎啉基、哌𠯤基及吡咯啶基。此類基團可進一步經取代，例如經羥基、烷基、烷氧基、鹵素及胺基取代。
脂族及雜脂族之實施例在某些實施例中，「脂族」係指飽和或不飽和、直鏈、分支鏈或環狀烴。在此等實施例中，脂族意欲包括(但不限於)烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基及環炔基部分，且因此併入有此等定義中之各者。在某些實施例中，「脂族」用於指示具有1至20個碳原子之彼等脂族基。脂族鏈可為例如單不飽和、雙不飽和、三不飽和或多不飽和的，或為炔基。不飽和脂族基可呈順式或反式組態。在某些實施例中，脂族基含有1至約12個碳原子，更一般而言1至約6個碳原子或1至約4個碳原子。在某些實施例中，脂族基含有1至約8個碳原子。在某些實施例中，脂族基為C 1-C 2、C 1-C 3、C 1-C 4、C 1-C 5或C 1-C 6。如本文中所使用之指定範圍指示具有描述為獨立種類之範圍之各成員的脂族基。舉例而言，如本文中所使用之術語C 1-C 6脂族指示具有1、2、3、4、5或6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基、烯基或炔基且意欲意謂此等中之各者描述為非依賴性物種。舉例而言，如本文中所使用之術語C 1-C 4脂族指示具有1、2、3或4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基、烯基或炔基，且意欲意謂此等中之各者描述為非依賴性物種。在某些實施例中，脂族基經一或多個引起穩定部分形成之官能基取代。
在某些實施例中，「雜脂族」係指在鏈中含有至少一個雜原子，例如胺、羰基、羧基、側氧基、硫基、磷酸、膦酸酯、氮、磷、矽或硼原子而非碳原子之脂族部分。在某些實施例中，唯一雜原子為氮。在某些實施例中，唯一雜原子為氧。在某些實施例中，唯一雜原子為硫。在某些實施例中，「雜脂族」在本文中意欲包括(但不限於)雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基及雜環炔基部分。在某些實施例中，「雜脂族」用於指示具有1至20個碳原子之雜脂族基(環狀、非環狀、經取代、未經取代、分支鏈或非分支鏈)。在某些實施例中，雜脂族基團視情況以引起穩定部分形成之方式進行取代。雜脂族部分之非限制性實例為聚乙二醇、聚伸烷二醇、醯胺、聚醯胺、聚丙交酯(polylactide)、聚乙交酯、硫醚、醚、烷基-雜環-烷基、-O-烷基-O-烷基、烷基-O-鹵烷基等。
A 及 A* 之實施例在某些實施例中，A*為
Figure 02_image303
。
在某些實施例中，A*為
Figure 02_image305
。
在某些實施例中，A*為
Figure 02_image307
。
在某些實施例中，A*為
Figure 02_image309
。
在某些實施例中，A*為
Figure 02_image311
。
在某些實施例中，A*為
Figure 02_image313
。
在某些實施例中，R 34及R 35組合以形成CH 2。
在某些實施例中，R 34為H。
在某些實施例中，R 35為H。
在某些實施例中，A 1為NH。
在某些實施例中，A 1為O。
在某些實施例中，A 21為NH。
在某些實施例中，A 21為O。
在某些實施例中，A 21為CH 2。
在某些實施例中，A 21為NR 100。
在某些實施例中，A 32、A 33、A 34及A 35各自選自CH、C-鹵素及CF。
在某些實施例中，A 32為CH。
在某些實施例中，A 32為CF。
在某些實施例中，A 32為CR 42。
在某些實施例中，A 32為N。
在某些實施例中，A 33為CH。
在某些實施例中，A 33為CF。
在某些實施例中，A 33為CR 42。
在某些實施例中，A 33為N。
在某些實施例中，A 34為CH。
在某些實施例中，A 34為CF。
在某些實施例中，A 34為CR 42。
在某些實施例中，A 34為N。
在某些實施例中，A 35為CH。
在某些實施例中，A 35為CF。
在某些實施例中，A 35為CR 42。
在某些實施例中，A 35為N。
在某些實施例中，A 36為N。
在某些實施例中，R 90為氫。
在某些實施例中，R 90為C 1-C 3烷基。
在某些實施例中，R 90為C 3-6環烷基。
在某些實施例中，R 90為甲基。
在某些實施例中，A或A*為
Figure 02_image315
。
在某些實施例中，A或A*為
Figure 02_image317
。
在某些實施例中，A或A*為
Figure 02_image319
。
在某些實施例中，A或A*係選自
Figure 02_image321
Figure 02_image323
Figure 02_image325
。
B 及 B* 之實施例在某些實施例中，B或B*為
Figure 02_image327
。
在某些實施例中，B或B*為
Figure 02_image329
。
在某些實施例中，B*為雜芳基。
在某些實施例中，B*為經一個R 31基團取代之雜芳基。
在某些實施例中，B*為芳基。
在某些實施例中，B*為經一個R 31基團取代之芳基。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image331
。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image333
。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image335
。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image337
。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image339
。
在某些實施例中，B*為
Figure 02_image341
。
y 之實施例在某些實施例中，y為0。
在某些實施例中，y為1。
在某些實施例中，y為2。
在某些實施例中，y為3。
R 31 之實施例在某些實施例中，至少一個R 31為鹵素。
在某些實施例中，至少一個R 31為F。
在某些實施例中，至少一個R 31為Cl。
在某些實施例中，至少一個R 31為C 1-6烷基。
在某些實施例中，至少一個R 31為鹵基-C 1-6烷基。
在某些實施例中，一個R 31為鹵素。
在某些實施例中，一個R 31為F。
在某些實施例中，一個R 31為Cl。
在某些實施例中，一個R 31為C 1-6烷基。
在某些實施例中，一個R 31為氰基。
在某些實施例中，一個R 31為C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，一個R 31為鹵基-C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，一個R 31為C 3-8環烷基。
在某些實施例中，一個R 31為鹵基-C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 31係選自鹵素、C 1-6烷氧基及C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 31係選自F、Cl、甲氧基及甲基。
R 36 及R 37 之實施例在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員環。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之6員環。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員環烷基。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之6員環烷基。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員雜芳基。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之6員雜芳基。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之5員雜環。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之6員雜環。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之嗎啉。
在某些實施例中，R 36及R 37一起組合以形成視情況經1、2或3個R 31取代基取代之苯基。
在某些實施例中，藉由將R 36及R 37組合而形成之環不經取代。
在某些實施例中，藉由將R 36及R 37組合而形成之環經1個R 31取代基取代。
在某些實施例中，藉由將R 36及R 37組合而形成之環經2個R 31取代基取代。
在某些實施例中，藉由將R 36及R 37組合而形成之環經3個R 31取代基取代。
在某些實施例中，R 36為氫。
在某些實施例中，R 36為鹵素。
在某些實施例中，R 36為F。
在某些實施例中，R 36為Cl。
在某些實施例中，R 36為C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 36為氰基。
在某些實施例中，R 36為C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 36為鹵基-C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 36為C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 36為鹵基-C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 36係選自氫、鹵素、C 1-6烷氧基及C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 36係選自氫、F、Cl、甲氧基及甲基。
在某些實施例中，R 37為氫。
在某些實施例中，R 37為鹵素。
在某些實施例中，R 37為F。
在某些實施例中，R 37為Cl。
在某些實施例中，R 37為C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 37為氰基。
在某些實施例中，R 37為C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 37為鹵基-C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 37為C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 37為鹵基-C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 37係選自氫、鹵素、C 1-6烷氧基及C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 37係選自氫、F、Cl、甲氧基及甲基。
R 42 之實施例在某些實施例中，至少一個R 42為鹵素。
在某些實施例中，至少一個R 42為F。
在某些實施例中，至少一個R 42為Cl。
在某些實施例中，至少一個R 42為C 1-6烷基。
在某些實施例中，至少一個R 42為鹵基-C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 42為氫。
在某些實施例中，R 42為鹵素。
在某些實施例中，R 42為F。
在某些實施例中，R 42為Cl。
在某些實施例中，R 42為C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 42為氰基。
在某些實施例中，R 42為C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 42為鹵基-C 1-6烷氧基。
在某些實施例中，R 42為C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 42為鹵基-C 3-8環烷基。
在某些實施例中，R 42係選自氫、鹵素、C 1-6烷氧基及C 1-6烷基。
在某些實施例中，R 42係選自氫、F、Cl、甲氧基及甲基。
環 G 之實施例在某些實施例中，環G為視情況經1或2個R 42取代基取代之5員雜芳基環。
在某些實施例中，環G為視情況經1或2個R 42取代基取代之6員雜芳基環。
在某些實施例中，環G係選自：
Figure 02_image343
。
EGFR 靶向配位體之實施例在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image345
Figure 02_image347
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image349
Figure 02_image351
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image353
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image355
Figure 02_image357
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image359
Figure 02_image361
Figure 02_image363
Figure 02_image365
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image367
Figure 02_image369
Figure 02_image371
Figure 02_image373
。
式 III 化合物在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image375
Figure 02_image377
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image379
Figure 02_image381
。
式 IV 化合物在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image383
Figure 02_image385
。
III. 用於本發明之額外化合物在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image387
Figure 02_image389
Figure 02_image391
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image393
Figure 02_image395
Figure 02_image397
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image399
Figure 02_image401
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image403
Figure 02_image405
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image407
Figure 02_image409
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image411
Figure 02_image413
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image415
Figure 02_image417
Figure 02_image419
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image421
Figure 02_image423
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image425
Figure 02_image427
Figure 02_image429
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image431
Figure 02_image433
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image435
Figure 02_image437
Figure 02_image439
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image441
Figure 02_image443
Figure 02_image445
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image447
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image449
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image451
Figure 02_image453
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image455
Figure 02_image457
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image459
Figure 02_image461
Figure 02_image463
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image465
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image467
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image469
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image471
Figure 02_image473
Figure 02_image475
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image477
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image479
Figure 02_image481
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image483
Figure 02_image485
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image487
Figure 02_image489
Figure 02_image491
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image493
Figure 02_image495
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image497
Figure 02_image499
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image501
Figure 02_image503
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image505
Figure 02_image507
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image509
Figure 02_image511
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image513
。
在某些實施例中，適用於本文所述之治療方法中之化合物係選自：
Figure 02_image515
Figure 02_image517
Figure 02_image519
Figure 02_image521
。
IV. 連接子連接子(L 1或L 2)或鍵包括於本文所述之化合物中。連接子為將E3連接酶結合部分連接至EGFR靶向配位體之化學穩定二價基團。根據本發明，可使用如本文所述之任何所需連接子，只要所得化合物作為醫藥學上可接受劑型之一部分具有穩定存放期，例如至少1個月、2個月、3個月、6個月或1年且自身為醫藥學上可接受的。
如本文所述之連接子可在任一方向上使用，亦即，左端連接至E3連接酶結合部分且右端連接至EGFR靶向配位體，抑或左端連接至EGFR靶向配位體且右端連接至E3連接酶結合部分。
在某些實施例中，連接子為鍵。
在某些實施例中，連接子具有2至14、15、16、17、18或20或更多個碳原子之鏈，其中一或多個碳可經雜原子，諸如O、N、S或P置換。
在某些實施例中，鏈在鏈中具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續原子。舉例而言，鏈可包括1或更多個可為連續、部分連續或非連續的乙二醇單元(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個乙二醇單元)。
在某些實施例中，鏈具有至少1、2、3、4、5、6、7或8個可具有分支之連續鏈，該等分支可獨立地為烷基、芳基、雜芳基、烯基或炔基、脂族、雜脂族、環烷基或雜環取代基。
在其他實施例中，連接子可包括以下中之一或多者或由以下中之一或多者構成：乙二醇、丙二醇、乳酸及/或乙醇酸。乳酸片段往往會具有比乙醇酸片段更長之半衰期。嵌段及無規則乳酸-共-乙醇酸部分以及乙二醇及丙二醇在此項技術中已知為醫藥學上可接受的且可經修飾或經配置以獲得所需半衰期及親水性。在某些態樣中，此等單元可視需要與其他部分，諸如脂族，包括烷基、雜脂族、芳基、雜芳基、雜環、環烷基等側接或穿插，以達成適當藥物特性。
在某些實施例中，L 2為選自以下之連接子：
Figure 02_image523
。
在一個態樣中，連接子(L 2)係選自由以下式LI部分、式LII部分、式LIII部分、式LIV部分、式LV部分、式LVI部分、式LVII部分、式LVIII部分、式IX部分及式LX部分組成之群：
Figure 02_image525
(LII)、
Figure 02_image527
(LIII)、
Figure 02_image529
(LIV)、
Figure 02_image531
(LV)、
Figure 02_image533
(LVI)、
Figure 02_image535
(LVII)、
Figure 02_image537
(LVIII)、
Figure 02_image539
(LIX)，及
Figure 02_image541
(LX)； 其中所有變數係如本文中所定義。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自：
Figure 02_image543
。
在一個態樣中，連接子(L 2)係選自由以下式LDI、式LDII、式LDIII、式LDIV、式LDV、式LDVI及式LDVII之部分組成之群：
Figure 02_image545
(LDI)、
Figure 02_image547
(LDII)、
Figure 02_image549
(LDIII)、
Figure 02_image551
(LDIV)、
Figure 02_image553
(LDV)、
Figure 02_image555
(LDVI)，及
Figure 02_image557
(LDVII)， 其中所有變數描述於本文中。
以下為可用於本發明中之連接子之非限制性實例。基於此詳細描述，熟習此項技術者將理解如何使用將實現本發明之目標之連接子的全部範圍。
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image559
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image561
Figure 02_image563
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image565
Figure 02_image567
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image569
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image571
Figure 02_image573
。
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image575
Figure 02_image577
Figure 02_image579
。
在某些實施例中，L 2係選自：
Figure 02_image581
Figure 02_image583
Figure 02_image585
。
R 20、R 21、R 22、R 23及R 24之部分之非限制性實例包括：
Figure 02_image587
。
R 20、R 21、R 22、R 23及R 24之部分之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image589
Figure 02_image591
Figure 02_image593
R 20、R 21、R 22、R 23及R 24之部分之額外非限制性實例包括：
Figure 02_image595
。
在額外實施例中，連接子(L 2)部分為具有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個乙二醇單元的視情況經取代之(聚)乙二醇，或穿插有視情況經取代之O、N、S、P或Si原子的視情況經取代之烷基。
在某些實施例中，連接子(L 2)側接、取代或穿插有芳基、苯基、苯甲基、烷基、伸烷基或雜環基。
在某些實施例中，連接子(L 2)可為不對稱的或對稱的。
在某些實施例中，連接子(L 2)可為非線性鏈，且可為或包括脂族或芳族或雜芳族環狀部分。
在本文所述之化合物的實施例中之任一者中，連接基團可為如本文所述之任何適合部分。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image597
Figure 02_image599
Figure 02_image601
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image603
Figure 02_image605
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image607
Figure 02_image609
Figure 02_image611
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image613
Figure 02_image615
Figure 02_image617
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image619
Figure 02_image621
Figure 02_image623
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image625
Figure 02_image627
。
在某些實施例中，連接子(L 2)係選自由以下組成之群：
Figure 02_image629
Figure 02_image631
Figure 02_image633
。
在某些實施例中，連接子(L 2)或其部分係選自：
Figure 02_image635
Figure 02_image637
V. 治療方法本文所述之化合物可以有效量用於治療有需要之患者或治療由EGFR介導之任何病症。
本發明之另一態樣提供如本文所述之化合物或其鏡像異構體、非鏡像異構體或立體異構體，或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物，或醫藥組合物，其用於製造供治療或預防有需要之患者的癌症用之藥劑；其中需要用於治療或預防癌症之EGFR抑制。
在一個態樣中，本文所述之化合物用於治療EGFR介導之癌症，其中EGFR已自野生型突變。EGFR突變存在多種可能性。在某些非限制性實施例中，在外顯子18、外顯子19、外顯子20或外顯子21或其任何組合中發現突變。在某些非限制性實施例中，突變係在位置L858、E709、G719、C797、L861、T790或L718或其任何組合。在某些實施例中，突變為L858R、T790M、L718Q、L792H及/或C797S突變或其任何組合。
在某些態樣中，癌症在用可作為非共價抑制劑(包括(但不限於)吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼或凡德他尼)或共價抑制劑(諸如阿法替尼、奧希替尼或達可替尼)之至少一種EGFR抑制劑治療後發展出一或多種EGFR突變。在另一態樣中，癌症在用抗體，諸如西妥昔單抗、帕尼妥單抗或奈西妥單抗治療後出現一或多種EGFR突變。在又一態樣中，癌症具有一或多種EGFR突變或非EGFR突變，其使得癌症本質上對EGFR抑制劑治療具有抗性，例如體細胞外顯子20插入、體細胞PIK3CA突變、PTEN表現喪失、MET擴增或KRAS突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物係用於治療對諸如埃羅替尼、吉非替尼及/或拉帕替尼之第一代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如阿法替尼及/或達可替尼之第二代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如奧希替尼之第三代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。
在一個態樣中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症，其中該EGFR已自野生型突變。EGFR突變存在多種可能性。在某些非限制性實施例中，在外顯子18、外顯子19、外顯子20或外顯子21或其任何組合中發現突變。在某些非限制性實施例中，突變係在位置L858、E709、G719、C797、L861、T790或L718或其任何組合。在某些實施例中，突變為L858R、T790M、L718Q、L792H及/或C797S突變或其任何組合。
在某些態樣中，癌症在用可作為非共價抑制劑(包括(但不限於)吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼或凡德他尼)或共價抑制劑(諸如阿法替尼、奧希替尼或達可替尼)之至少一種EGFR抑制劑治療後發展出一或多種EGFR突變。在另一態樣中，癌症在用抗體，諸如西妥昔單抗、帕尼妥單抗或奈西妥單抗治療後出現一或多種EGFR突變。在又一態樣中，癌症具有一或多種EGFR突變或非EGFR突變，其使得癌症本質上對EGFR抑制劑治療具有抗性，例如體細胞外顯子20插入、體細胞PIK3CA突變、PTEN表現喪失、MET擴增或KRAS突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS之癌症，該癌症對諸如埃羅替尼、吉非替尼及/或拉帕替尼的第一代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如阿法替尼及/或達可替尼之第二代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療對諸如奧希替尼之第三代EGFR抑制劑有抗性或已獲得抗性的癌症。
在一些實施例中，患病組織中之突變型EGFR蛋白具有L858突變，例如L858R。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療腦或CNS中之突變型EGFR介導之病症或已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症，其中EGFR具有以下所列胺基酸位點中的至少一者之突變或其組合。突變可例如選自所列例示性突變中之一者，或可為不同突變。
胺基酸 例示性突變
C797 C797S
E709 E709A、E709G、E709K、E709V
G719 G719A、G719S、G719C、G719D
G724 G724S
G119 G119A
G796 G796S、G796C
L718 L718V、L718Q
L792 L792H；L792V
L858 L858R
L861 L861Q
S768 S768I
T790 T790M
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有兩種選自上表中之突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有三個選自上表中之突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有四個或更多個突變，其可視情況選自上表。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS的突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及一種可視情況選自上表之額外突變。在此等實施例中之一些中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及兩種可視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L858R突變及三種可視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及一種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及兩種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有T790M突變及三種視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及一種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及兩種視情況選自上表之額外突變。在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有L718Q突變及三種視情況選自上表之額外突變。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症具有S768I、L718V、L792H、L792V、G796S、G796C、G724S及/或G719A之突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有讀框轉移突變(例如短框內缺失)之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有外顯子19缺失。在某些實施例中，外顯子19缺失為包括胺基酸LREA (L747-A750)之缺失。在某些實施例中，外顯子19缺失為包括胺基酸ELREA (E746-A750)之缺失。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有外顯子21中之L858R突變。
在某些實施例中，本文所述之化合物針對由經突變EGFR驅動之病症比野生型EGFR更具活性。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中該EGFR具有一或多個外顯子18缺失。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有E709突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如E709A、E709G、E709K或E709V。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有L718突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如L718Q。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療具有G719突變之已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，例如G719S、G719A、G719C或G719D。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症，其中EGFR具有一或多個外顯子19插入及/或一或多個外顯子20插入。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的S7681突變型EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的EGFR L861Q突變型EGFR介導之癌症。在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的C797S突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-T790M突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-L718Q突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-L792H突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，本文所述之化合物用於治療已轉移至腦或CNS的L858R-C797S突變型EGFR介導之癌症。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症為血液癌。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之EGFR介導之癌症為急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、淋巴母細胞T細胞白血病、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、毛細胞白血病、慢性嗜中性球白血病(CNL)、急性淋巴母細胞T細胞白血病、急性單核球性白血病、漿細胞瘤、免疫母細胞大細胞白血病、套細胞白血病、多發性骨髓瘤、巨核母細胞白血病、急性巨核細胞白血病、前髓細胞性白血病、混合系白血病(MLL)、紅白血病、惡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、淋巴母細胞T細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、濾泡性淋巴瘤、B細胞急性淋巴母細胞白血病、彌漫性大B細胞淋巴瘤、Myc及B細胞白血病(BCL) 2及/或BCL6重組/過度表現[雙擊及三擊淋巴瘤]、骨髓發育不良/骨髓增生性贅瘤、包括硼替佐米(bortezomib)耐藥性套細胞淋巴瘤之套細胞淋巴瘤。
可用本文所述之化合物治療之已轉移至腦或CNS之額外EGFR介導之癌症包括(但不限於)肺癌，包括小細胞肺癌(SCLC)及非小細胞肺癌(NSCLC)；乳癌，包括炎性乳癌、包括耐他莫昔芬(tamoxifen) ER陽性乳癌之ER陽性乳癌及三陰性乳癌；結腸癌；中線癌；肝癌；腎癌；前列腺癌，包括耐去勢前列腺癌(castrate resistant prostate cancer；CRPC)；腦癌，包括神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤及包括MYC擴增之神經管胚細胞瘤的神經管胚細胞瘤；結腸直腸癌；威姆氏腫瘤(Wilm's tumor)；尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)；橫紋肌肉瘤；室管膜瘤；頭頸癌；黑色素瘤；鱗狀細胞癌；卵巢癌；包括胰管腺癌(PDAC)及胰臟神經內分泌腫瘤(PanNET)之胰臟癌；骨肉瘤；骨之巨細胞腫瘤；甲狀腺癌；膀胱癌；尿道上皮癌；外陰癌；子宮頸癌；子宮內膜癌；間皮瘤；食管癌；唾液腺癌；胃癌；鼻咽癌；頰癌；口腔癌；胃腸道基質瘤(gastrointestinal stromal tumor；GIST)；NUT中線癌；睾丸癌；鱗狀細胞癌；肝細胞癌瘤(HCC)；MYCN驅動之實體腫瘤；及NUT中線癌(NMC)。
在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症為骨骼、肌肉、肌腱、軟骨、神經、脂肪或血管之肉瘤。
在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症為軟組織肉瘤、骨肉瘤(bone sarcoma)或骨肉瘤(osteosarcoma)。
在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症為血管肉瘤、纖維肉瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西氏肉瘤(Karposi's sarcoma)、骨肉瘤、胃腸道基質瘤、滑膜肉瘤、多形性肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、網狀細胞肉瘤、脊膜肉瘤、葡萄樣肉瘤、橫紋肌肉瘤或胚胎性橫紋肌肉瘤。
在某些實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症為骨骼、肌肉、肌腱、軟骨、神經、脂肪或血管肉瘤。
在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症為多發性骨髓瘤。
在某些實施例中，本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽在患有癌症、尤其非小細胞肺癌之如藉由下一代定序(NGS)所測定具有EGFR活化突變之患者的治療性及/或預防性治療中用作藥劑，該治療性及/或預防性治療包含測定該患者中之EGFR活化突變狀態且接著向該患者投與本文所述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在其他實施例中，已轉移至腦或CNS之癌症選自肺癌、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肝癌、胰臟癌、腦癌、腎癌、卵巢癌、胃癌、皮膚癌、骨癌、胃癌、乳癌、胰臟癌、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、肝細胞癌、乳頭狀腎癌、頭頸部鱗狀細胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、實體腫瘤、血液癌或實體癌。
術語「癌症」係指由惡性贅生性細胞增殖引起之任何癌症，諸如腫瘤、贅瘤、癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤及其類似者。舉例而言，癌症包括(但不限於)間皮瘤、白血病及淋巴瘤，諸如皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、非皮膚性周邊T細胞淋巴瘤、與人類T細胞淋巴病毒(HTLV)相關之淋巴瘤(諸如成年人T細胞白血病/淋巴瘤(ATLL))、B細胞淋巴瘤、急性非淋巴球性白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成年人T細胞白血病淋巴瘤、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)或肝細胞癌。其他實例包括骨髓增生異常症候群、兒童實體腫瘤(諸如腦瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、威爾姆斯氏腫瘤、骨骼腫瘤及軟組織肉瘤)、成年人之常見實體腫瘤(諸如頭頸癌，諸如口部、喉部、鼻咽部及食道)、泌尿生殖癌症(諸如前列腺、膀胱、腎、子宮、卵巢、睪丸)、肺癌(諸如小細胞及非小細胞)、乳癌、胰臟癌、黑素瘤及其他皮膚癌、胃癌、腦瘤、與戈林氏症候群(Gorlin's syndrome)有關之腫瘤(諸如神經管胚細胞瘤或腦膜瘤)以及肝癌。
癌症之額外例示性形式包括(但不限於)骨骼或平滑肌之癌症、胃癌、小腸癌、直腸癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、腎上腺癌、肛門癌、直腸癌、副甲狀腺癌及垂體癌。
本文所述之化合物可適用於預防、治療及研究之其他癌症為例如結腸癌、家族性腺瘤多發性息肉癌及遺傳性非多發性息肉結腸直腸癌或黑素瘤。此外，癌症包括(但不限於)唇癌、喉癌、喉咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲狀腺癌(髓質及乳頭狀甲狀腺癌)、腎癌、腎臟實質性癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、絨毛膜癌、睪丸癌、泌尿系統癌、黑素瘤、腦瘤(諸如神經膠母細胞瘤、星形細胞瘤、腦膜瘤、神經管胚細胞瘤及周邊神經外胚層腫瘤)、膽囊癌、支氣管癌、多發性骨髓瘤、基底癌、畸胎瘤、視網膜母細胞瘤、脈絡膜黑素瘤、精細胞癌、橫紋肌肉瘤、腦咽瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)及漿細胞瘤。在本申請案之一個態樣中，本申請案提供一種如本文所述之一或多種化合物的用途，其用於製造供治療癌症，包括(但不限於)本文中所揭示之各種類型之癌症用的藥劑。
在一些實施例中，本文所述之化合物適用於治療已轉移至腦或CNS之癌症，諸如結腸直腸癌、甲狀腺癌、乳癌及肺癌；及骨髓增生性病症，諸如真性紅細胞增多症、血小板增多症、伴有骨髓纖維化之骨髓化生、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓單核球性白血病、嗜伊紅白血球增多症候群、幼年型骨髓單核球性白血病及系統性肥大細胞疾病。在一些實施例中，如本文所述之化合物適用於治療造血功能障礙，特定言之急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性前髓細胞性白血病及急性淋巴球性白血病(ALL)。
在某些實施例中，本文所述之化合物或如本文所述之其相應醫藥學上可接受之鹽或同位素衍生物可以有效量用於治療患有已轉移至腦或CNS的癌症之宿主，例如人類，其中已轉移至腦或CNS之癌症係選自淋巴瘤或淋巴球性或者髓細胞性增殖病症或異常。舉例而言，可向患有霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤之宿主投與如本文所述之化合物。舉例而言，宿主可患有非霍奇金氏淋巴瘤，諸如(但不限於)：AIDS相關淋巴瘤；退行性大細胞淋巴瘤；血管免疫母細胞淋巴瘤；母細胞性NK細胞淋巴瘤；伯基特氏淋巴瘤；伯基特樣淋巴瘤(小無裂細胞淋巴瘤)；彌漫性小核裂細胞淋巴瘤(diffuse small-cleaved cell lymphoma；DSCCL)；慢性淋巴球性白血病/小淋巴球性淋巴瘤；皮膚T細胞淋巴瘤；彌漫性大B細胞淋巴瘤；腸病型T細胞淋巴瘤；濾泡性淋巴瘤；肝脾γ-δ T細胞淋巴瘤；淋巴母細胞淋巴瘤；套細胞淋巴瘤；邊緣區淋巴瘤；鼻T細胞淋巴瘤；小兒淋巴瘤；周邊T細胞淋巴瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；T細胞白血病；轉型淋巴瘤；治療相關T細胞淋巴瘤；蘭格漢氏細胞組織細胞增多症(Langerhans cell histiocytosis)；或瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia)。
在另一實施例中，本文所述之化合物或如本文所述之其相應醫藥學上可接受之鹽或同位素衍生物可以有效量用於治療患有已轉移至腦或CNS之選自霍奇金氏淋巴瘤之癌症的患者，諸如(但不限於)：結節性硬化經典霍奇金氏淋巴瘤(CHL)；混合細胞型CHL；淋巴球耗乏之CHL；富含淋巴球之CHL；淋巴球為主的霍奇金氏淋巴瘤；或結節性淋巴球為主的HL。
本申請案進一步包涵細胞增生性病症，諸如增生、發育不良及癌前病變之治療或預防。發育不良為在活組織檢查中由病理學家可識別之癌前病變之最早形式。可出於防止該等增生、發育不良或癌前病變繼續擴大或變成癌性之目的而投與化合物。癌前病變之實例可發生在皮膚、食道組織、乳房及子宮頸上皮內組織中。
對於EGFR蛋白之抑制劑，本申請案之化合物及組合物亦適用於生物樣品。本申請案之一個態樣為抑制生物樣品中之蛋白質活性，該方法包含使該生物樣品與如本文所述之化合物或組合物接觸。如本文中所用之術語「生物樣品」意謂活體外或離體樣品，包括(但不限於)細胞培養物或其萃取物；自哺乳動物獲得之活檢物質或其萃取物；及血液、唾液、尿液、糞便、精液、眼淚或其他身體流體或其萃取物。抑制生物樣品中之蛋白質活性適用於熟習此項技術者已知之各種目的。此類目的之實例包括(但不限於)血液輸注、器官移植及生物試樣儲存。
本申請案之另一態樣為研究生物及病理現象中之EGFR蛋白；研究由此類蛋白質介導之胞內信號轉導路徑；及比較評估新蛋白抑制劑。該等用途之實例包括(但不限於)生物分析，諸如酶分析及基於細胞之分析。
根據前述內容，本申請案進一步提供一種用於預防或治療需要此類治療之患者的上文所描述之疾病或病症中之任一者的方法，該方法包含向該患者投與治療有效量的如本文所述之化合物或其鏡像異構體、非鏡像異構體或立體異構體，或其醫藥學上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。對於上述用途中之任一者，所要劑量將視投藥模式、待治療之特定病狀及所需效果而變化。
VI. 組合療法
本文所述之本發明化合物可以有效量單獨使用或與另一本文所述之化合物或另一生物活性劑或第二治療劑組合使用，以治療患有已轉移至腦或CNS的EGFR介導之癌症的患者，諸如人類，包括但不限於本文所述的彼等癌症。
術語「生物活性劑」用於描述除根據本發明之所選化合物以外的藥劑，其可與本文所述之化合物組合或交替使用以達成所需之療法結果。在某些實施例中，本文所述之化合物及生物活性劑係以其在重疊時間段期間在活體內具有活性，例如具有時間段重疊之Cmax、Tmax、AUC或另一藥物動力學參數的方式投與。在另一實施例中，向有需要之患者投與本文所述之化合物及生物活性劑，其並不具有重疊之藥物動力學參數，然而，一者對另一者之治療功效具有治療性影響。
在此實施例之一個態樣中，生物活性劑為免疫調節劑，包括(但不限於)檢查點抑制劑，包括作為非限制性實例的PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、LAG-3抑制劑、TIM-3抑制劑、T細胞活化V域Ig抑制因子(VISTA)抑制劑、小分子、肽、核苷酸或其他抑制劑。在某些態樣中，免疫調節劑為抗體，諸如單株抗體。
藉由結合至PD-1受體而阻斷PD-1及PD-L1之相互作用且轉而抑制免疫抑止的PD-1抑制劑包括例如納武單抗(Opdivo)、帕博利珠單抗(Keytruda)、皮立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224 (AstraZeneca及MedImmune)、PF-06801591 (Pfizer)、MEDI0680 (AstraZeneca)、PDR001 (Novartis)、REGN2810 (Regeneron)、SHR-12-1 (Jiangsu Hengrui Medicine Company及Incyte Corporation)、TSR-042 (Tesaro)及PD-L1/VISTA抑制劑CA-170 (Curis Inc.)。藉由結合至PD-L1受體而阻斷PD-1及PD-L1之相互作用且轉而抑制免疫抑制的PD-L1抑制劑包括例如阿特珠單抗(atezolizumab) (Tecentriq)、德瓦魯單抗(durvalumab) (AstraZeneca及MedImmune)、KN035 (Alphamab)及BMS-936559 (Bristol-Myers Squibb)。結合至CTLA-4且抑制免疫抑止之CTLA-4檢查點抑制劑包括(但不限於)伊匹單抗(ipilimumab)、曲美單抗(tremelimumab) (AstraZeneca及MedImmune)、AGEN1884及AGEN2041 (Agenus)。LAG-3核查點抑制劑之實例包括(但不限於)BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)、GSK2831781(GlaxoSmithKline)、IMP321(Prima BioMed)、LAG525(Novartis)及雙PD-1及LAG-3抑制劑MGD013(MacroGenics)、TIM-3抑制劑之一個實例為TSR-022 (Tesaro)。
在某些實施例中，檢查點抑制劑係選自納武單抗/OPDIVO®；帕博利珠單抗/KEYTRUDA®；及皮立珠單抗/CT-011、MPDL3280A/RG7446；MEDI4736；MSB0010718C；BMS 936559、PDL2/lg融合蛋白(諸如AMP 224)或B7-H3之抑制劑(例如，MGA271)、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG 3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配位體或其組合。
在又一實施例中，本文所述之活性化合物中之一者可以有效量與有效量之雌激素抑制劑組合或交替投與以用於治療雌性生殖系統之異常組織，諸如乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌或子宮癌，該雌激素抑制劑包括(但不限於)選擇性雌激素受體調節劑(selective estrogen receptor modulator；SERM)、選擇性雌激素受體降解藥物(selective estrogen receptor degrader；SERD)、完全雌激素受體降解藥物或另一形式的部分或完全雌激素拮抗劑或促效劑。部分抗雌激素(如雷諾昔酚(raloxifene)及他莫昔芬)保留一些雌激素類作用(包括子宮生長之雌激素類刺激)，亦及在一些情況下，在乳癌進展期間實際上刺激腫瘤生長之雌激素類活性。相比之下，完全抗雌激素之氟維司群對子宮上不含雌激素類活性且有效於耐他莫昔芬腫瘤。
抗雌激素化合物之非限制性實例提供於轉讓給Astra Zeneca之WO 2014/19176、WO2013/090921、WO 2014/203129、WO 2014/203132及轉讓給Olema Pharmaceuticals之US2013/0178445及美國專利第9,078,871號、第8,853,423號及第8,703,810號以及US 2015/0005286、WO 2014/205136及WO 2014/205138中。
抗雌激素化合物之另外非限制性實例包括：SERMS，諸如諾定素(anordrin)、巴多昔芬(bazedoxifene)、溴帕雌三醇(broparestriol)、氯三芳乙烯、克樂米芬檸檬酸鹽(clomiphene citrate)、環芬妮(cyclofenil)、拉索昔芬(lasofoxifene)、奧美昔芬(ormeloxifene)、拉洛昔芬(raloxifene)、他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene)及氟維司群；芳香酶抑制劑，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、睾內酯(testolactone)、阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)、法屈唑、福美司坦及來曲唑(letrozole)；及抗促性腺激素(antigonadotropins)，諸如亮丙瑞林(leuprorelin)、西曲瑞克(cetrorelix)、烯丙雌醇(allylestrenol)、乙酸氯地孕酮(chloromadinone acetate)、乙酸環丙孕酮(cyproterone acetate)、乙酸地馬孕酮(delmadinone acetate)、地屈孕酮(dydrogesterone)、乙酸甲羥助孕酮(medroxyprogesterone acetate)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、乙酸諾美孕酮(nomegestrol acetate)、乙酸煥諾酮(norethisterone acetate)、孕酮及螺內酯。
可根據本發明使用之其他雌激素配位體描述於以下中：美國專利第4,418,068號；第5,478,847號；第5,393,763號；及第5,457,117號、WO2011/156518、美國專利第8,455,534號及第8,299,112號、美國專利第9,078,871號；第8,853,423號；第8,703,810號；US 2015/0005286；及WO 2014/205138、US2016/0175289、US2015/0258080、WO 2014/191726、WO 2012/084711；WO 2002/013802；WO 2002/004418；WO 2002/003992；WO 2002/003991；WO 2002/003990；WO 2002/003989；WO 2002/003988；WO 2002/003986；WO 2002/003977；WO 2002/003976；WO 2002/003975；WO 2006/078834；US 6821989；US 2002/0128276；US 6777424；US 2002/0016340；US 6326392；US 6756401；US 2002/0013327；US 6512002；US 6632834；US 2001/0056099；US 6583170；US 6479535；WO 1999/024027；US 6005102；EP 0802184；US 5998402；US 5780497、US 5880137、WO 2012/048058及WO 2007/087684。
在另一實施例中，本文所述之活性化合物可以有效量與有效量之雄激素(諸如睾固酮)抑制劑組合或交替投與以用於治療雄性生殖系統之異常組織(諸如前列腺癌或睾丸癌)，該雄激素抑制劑包括(但不限於)選擇性雄激素受體調節劑、選擇性雄激素受體降解藥物、完全雄激素受體降解藥物或另一形式之部分或完全雄激素拮抗劑。在某些實施例中，前列腺癌或睾丸癌為耐雄激素的。
抗雄激素化合物之非限制性實例提供於WO 2011/156518及美國專利第8,455,534號及第8,299,112號中。抗雄激素化合物之額外非限制性實例包括：恩雜魯胺(enzalutamide)、阿帕魯胺(apalutamide)、乙酸環丙孕酮、乙酸氯地孕酮(chlormadinone acetate)、螺內酯、坎利酮(canrenone)、屈螺酮(drospirenone)、酮康唑(ketoconazole)、托匹魯胺(topilutamide)、乙酸阿比特龍(abiraterone acetate)及西咪替丁(cimetidine)。
在某些實施例中，生物活性劑為ALK抑制劑。ALK抑制劑之實例包括(但不限於)克唑替尼(Crizotinib)、阿來替尼(Alectinib)、塞利替尼(ceritinib)、TAE684 (NVP-TAE684)、GSK1838705A、AZD3463、ASP3026、PF-06463922、恩曲替尼(entrectinib) (RXDX-101)及AP26113。
在某些實施例中，生物活性劑為HER-2抑制劑。HER-2抑制劑之實例包括曲妥珠單抗(trastuzumab)、拉帕替尼、恩美曲妥珠單抗(ado-trastuzumab emtansine)及帕妥珠單抗(pertuzumab)。
在某些實施例中，生物活性劑為CD20抑制劑。CD20抑制劑之實例包括奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab)、利妥昔單抗(rituximab)、法木單抗(fatumumab)、替伊莫單抗(ibritumomab)、托西莫單抗(tositumomab)及奧克珠單抗(ocrelizumab)。
在某些實施例中，生物活性劑為JAK3抑制劑。JAK3抑制劑之實例包括塔索替尼(tasocitinib)。
在某些實施例中，生物活性劑為BCL-2抑制劑。BCL-2抑制劑之實例包括維納妥拉(venetoclax)、ABT-199 (4-[4-[[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基環己-1-烯-1-基]甲基]哌𠯤-l-基]-N-[[3-硝基-4-[[(四氫-2H-哌喃-4-基)甲基]胺基]苯基]磺醯基]-2-[(lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基]苯甲醯胺)、ABT-737 (4-[4-[[2-(4-氯苯基)苯基]甲基]哌𠯤-1-基]-N-[4-[[(2R)-4-(二甲胺基)-1-苯基硫基丁-2-基]胺基]-3-硝基苯基]磺醯基苯甲醯胺) (納維克拉(navitoclax))、ABT-263 ((R)-4-(4-((4'-氯-4,4-二甲基-3,4,5,6-四氫-[l,l'-聯苯]-2-基)甲基)哌𠯤-1-基)-N-((4-((4-𠰌啉基-1-(苯硫基)丁-2-基)胺基)-3((三氟甲基)磺醯基)苯基)磺醯基)苯甲醯胺)、GX15-070 (甲磺酸奧巴克拉(obatoclax mesylate)，甲磺酸(2Z)-2-[(5Z)-5-[(3,5-二甲基-lH-吡咯-2-基)亞甲基]-4-甲氧基吡咯-2-亞基]吲哚)、2-甲氧基-抗黴素A3、YC137 (4-(4,9-二側氧基-4,9-二氫萘并[2,3-d]噻唑-2-基胺基)-苯酯)、棉籽酚(pogosin)、2-胺基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基乙基)-4H-𠳭唏-3-甲酸乙酯、尼羅替尼(Nilotinib)-d3、TW-37 (N-[4-[[2-(1,1-二甲基乙基)苯基]磺醯基]苯基]-2,3,4-三羥基-5-[[2-(1-甲基乙基)苯基]甲基]苯甲醯胺)、阿普棉酚酮(Apogossypolone) (ApoG2)、HA14-1、AT101、薩布妥克拉(sabutoclax)、藤黃酸(gambogic acid)或G3139 (奧利默森(oblimersen))。
在某些實施例中，生物活性劑為激酶抑制劑。在某些實施例中，激酶抑制劑係選自磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑、布魯頓酪胺酸激酶(BTK)抑制劑或脾臟酪胺酸激酶(Syk)抑制劑或其組合。
PI3激酶抑制劑之實例包括但不限於渥曼青黴素(Wortmannin)、去甲氧基綠膠黴素(demethoxyviridin)、哌立福新(perifosine)、艾代拉里斯(idelalisib)、皮克立西(Pictilisib)、Palomid 529、ZSTK474、PWT33597、CUDC-907及AEZS-136、德衛利昔(duvelisib)、GS-9820、BKM120、GDC-0032(他司利塞(Taselisib))(2-[4-[2-(2-異丙基-5-甲基-1,2,4-三唑-3-基)-5,6-二氫咪唑并[1,2-d][1,4]苯并氧氮呯-9-基]吡唑-1-基]-2-甲基丙醯胺)、MLN-1117((2R)-1-苯氧基-2-丁基氫(S)-甲基膦酸鹽；或甲基(側氧基){[(2R)-l-苯氧基-2-丁基]氧基}鏻))、BYL-719((2S)-N1-[4-甲基-5-[2-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-4-吡啶基]-2-噻唑基]-1,2-吡咯啶二甲醯胺)、GSK2126458(2,4-二氟-N-{2-(甲氧基)-5-[4-(4-噠𠯤基)-6-喹啉基]-3-吡啶基}苯磺醯胺)(奧米力絲(omipalisib))、TGX-221((±)-7-甲基-2-(嗎啉-4-基)-9-(l-苯基胺基乙基)-吡啶并[l,2-a]-嘧啶-4-酮)、GSK2636771(2-甲基-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苄基)-6-(N-嗎啉基)-lH-苯并[d]咪唑-4-甲酸二鹽酸鹽)、KIN-193((R)-2-((l-(7-甲基-2-N-嗎啉基-4-側氧基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-9-基)乙基)胺基)苯甲酸)、TGR-1202/RP5264、GS-9820((S)-l-(4-(2-(2-胺基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-羥基丙-1-酮)、GS-1101(5-氟-3-苯基-2-([S)]-1-[9H-嘌呤-6-基胺基]-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮)、AMG-319、GSK-2269557、SAR245409(N-(4-(N-(3-((3,5-二甲氧基苯基)胺基)喹㗁啉-2-基)胺磺醯基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲醯胺)、BAY80-6946(2-胺基-N-(7-甲氧基-8-(3-N-嗎啉基丙氧基)-2,3-二氫咪唑并[l,2-c]奎那)、AS 252424(5-[l-[5-(4-氟-2-羥基苯基)-呋喃-2-基]-甲基-(Z)-亞基]-噻唑啶-2,4-二酮)、CZ 24832(5-(2-胺基-8-氟-[l,2,4]三唑并[l,5-a]吡啶-6-基)-N-三級丁基吡啶-3-磺醯胺)、布帕利塞(Buparlisib)(5-[2,6-二(4-嗎啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺)、GDC-0941(2-(lH-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺醯基)-l-哌𠯤基]甲基]-4-(4-嗎啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶)、GDC-0980((S)-1-(4-((2-(2-胺基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-(N-嗎啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌𠯤-l-基)-2-羥基丙-l-酮(亦稱為RG7422))、SF1126((8S,14S,17S)-14-(羧甲基)-8-(3-胍丙基)-17-(羥甲基)-3,6,9,12,15-五側氧基-1-(4-(4-側氧基-8-苯基-4H-𠳭烯-2-基)-N-嗎啉基-4-鎓)-2-氧雜-7,10,13,16-四氮雜十八烷-18-酸酯)、PF-05212384(N-[4-[[4-(二甲胺基)-1-哌啶基]羰基]苯基]-N'-[4-(4,6-二-4-嗎啉基-l,3,5-三𠯤-2-基)苯基]脲(格達列昔布(gedatolisib))、LY3023414、BEZ235(2-甲基-2-{4-[3-甲基-2-側氧基-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-l-基]苯基}丙腈)(達托里昔布(dactolisib))、XL-765(N-(3-(N-(3-(3,5-二甲氧基苯基胺基)喹㗁啉-2-基)胺磺醯基)苯基)-3-甲氧基-4-甲基苯甲醯胺)，及GSK1059615(5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亞甲基]-2,4-亞噻唑二酮)、PX886(乙酸[(3aR,6E,9S,9aR,10R,11aS)-6-[[雙(丙-2-烯基)胺基]亞甲基]-5-羥基-9-(甲氧基甲基)-9a,11a-二甲基-l,4,7-三側氧基-2,3,3a,9,10,11-六氫茚并[4,5h]異𠳭烯-10-基]酯(亦稱為索諾昔布(sonolisib)))、LY294002、AZD8186、PF-4989216、皮拉力絲(pilaralisib)、GNE-317、PI-3065、PI-103、NU7441(KU-57788)、HS 173、VS-5584(SB2343)、CZC24832、TG100-115、A66、YM201636、CAY10505、PIK-75、PIK-93、AS-605240、BGT226(NVP-BGT226)、AZD6482、伏他利塞(voxtalisib)、阿吡利塞(alpelisib)、IC-87114、TGI100713、CH5132799、PKI-402、考班昔布(copanlisib)(BAY 80-6946)、XL 147、PIK-90、PIK-293、PIK-294、3-MA(3-甲基腺嘌呤)、AS-252424、AS-604850、阿托力絲(apitolisib)(GDC-0980；RG7422)。
BTK抑制劑之實例包括依魯替尼(ibrutinib)(亦稱為PCI-32765) (Imbruvica™) (1-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基-苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮)、基於二苯胺基嘧啶之抑制劑(諸如AVL-101及AVL-291/292 (N-(3-((5-氟-2-((4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)丙烯醯胺)) (Avila Therapeutics) (參見美國專利公開案第2011/0117073號，其全文併入本文中)、達沙替尼(Dasatinib) ([N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羥乙基)哌𠯤-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基胺基)噻唑-5-甲醯胺])、LFM-A13 (α-氰基-β-羥基-β-甲基-N-(2,5-二溴苯基)丙烯醯胺)、GDC-0834 ([R-N-(3-(6-(4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌𠯤-2-基)苯胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡𠯤-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺])、CGI-560 4-(三級丁基)-N-(3-(8-(苯胺基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-6-基)苯基)苯甲醯胺、CGI-1746 (4-(三級丁基)-N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-((4-(𠰌啉-4-羰基)苯基)胺基)-5-側氧基-4,5-二氫吡𠯤-2-基)苯基)苯甲醯胺)、CNX-774 (4-(4-((4-((3-丙烯醯胺基苯基)胺基)-5-氟嘧啶-2-基)胺基)苯氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺)、CTA056 (7-苯甲基-1-(3-(哌啶-1-基)丙基)-2-(4-(吡啶-4-基)苯基)-1H-咪唑并[4,5-g]喹喏啉-6(5H)-酮)、GDC-0834((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌𠯤-2-基)苯基)胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡𠯤-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺)、GDC-0837((R)-N-(3-(6-((4-(1,4-二甲基-3-側氧基哌𠯤-2-基)苯基)胺基)-4-甲基-5-側氧基-4,5-二氫吡𠯤-2-基)-2-甲基苯基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺)、HM-71224、ACP-196、ONO-4059 (Ono Pharmaceuticals)、PRT062607 (4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)胺基)-2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺鹽酸鹽)、QL-47 (1-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-9-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯并[h][1,6]㖠啶-2(1H)-酮)及RN486 (6-環丙基-8-氟-2-(2-羥甲基-3-{1-甲基-5-[5-(4-甲基-哌𠯤-1-基)-吡啶-2-基胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-苯基)-2H-異喹啉-1-酮)以及能夠抑制BTK活性之其他分子，例如揭示於Akinleye等人, Journal of Hematology & Oncology, 2013, 6:59 (其全部內容以引用的方式併入本文中)中之彼等BTK抑制劑。
Syk抑制劑包括但不限於賽度替尼(Cerdulatinib)(4-(環丙胺基)-2-((4-(4-(乙磺醯基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、恩妥替尼(entospletinib)(6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-(N-嗎啉基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-8-胺)、福他替尼(fostamatinib)([6-({5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)胺基]-4-嘧啶基}胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基-2,3-二氫-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]㗁 𠯤-4-基]甲基二氫磷酸鹽)、福他替尼二鈉鹽((6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]㗁 𠯤-4(3H)-基)甲基磷酸鈉)、BAY 61-3606(2-(7-(3,4-二甲氧苯基)-咪唑并[1,2-c]嘧啶-5-基胺基)-菸鹼醯胺HCl)、RO9021(6-[(1R,2S)-2-胺基-環己胺基]-4-(5,6-二甲基-吡啶-2-基胺基)-噠𠯤-3-甲酸醯胺)、伊馬替尼(imatinib)(格列衛(Gleevac)；4-[(4-甲基哌𠯤-1-基)甲基]-N-(4-甲基-3-{[4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-基]胺基}苯基)苯甲醯胺)、星形孢菌素(staurosporine)、GSK143(2-(((3R,4R)-3-胺基四氫-2H-哌喃-4-基)胺基)-4-(對甲苯胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、PP2(1-(三級丁基)-3-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺)、PRT-060318(2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)-4-(間甲苯胺基)嘧啶-5-甲醯胺)、PRT-062607(4-((3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)胺基)-2-(((1R,2S)-2-胺基環己基)胺基)嘧啶-5-甲醯胺鹽酸鹽)、R112(3,3'-((5-氟嘧啶-2,4-二基)雙(氮二基))二酚)、R348(3-乙基-4-甲基吡啶)、R406(6-((5-氟-2-((3,4,5-三甲氧基苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]㗁 𠯤-3(4H)-酮)、白皮杉醇(3-羥基白藜蘆醇)、YM193306(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase(SYK)Inhibitors,J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643)、7-氮雜吲哚、白皮杉醇、ER-27319 (參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、化合物D(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、PRT060318 (參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、木犀草素(luteolin)(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、芹菜素(apigenin) (參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、槲皮素(quercetin) (參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、黃櫨素(fisetin)(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、楊梅黃酮(myricetin)(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)、桑色素(morin)(參見Singh等人Discovery and Development of Spleen Tyrosine Kinase (SYK) Inhibitors, J. Med. Chem. 2012, 55, 3614-3643，以全文引用的方式併入本文)。
在某些實施例中，生物活性劑為MEK抑制劑。MEK抑制劑為熟知的，且包括例如曲美替尼(trametinib)/GSKl120212 (N-(3-{3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基-3,4,6,7-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H-基}苯基)乙醯胺)、司美替尼(selumetinib) (6-(4-溴-2-氯苯胺基)-7-氟-N-(2-羥基乙氧基)-3-甲基苯并咪唑-5-甲醯胺)、派嗎色替(pimasertib)/AS703026/MSC 1935369 ((S)-N-(2,3-二羥基丙基)-3-((2-氟-4-碘苯基)胺基)異菸鹼醯胺)、XL-518/GDC-0973 (1-({3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]苯基}羰基)-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮雜環丁-3-醇)、瑞法替尼(refametinib)/BAY869766/RDEAl 19 (N-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-6-甲氧苯基)-1-(2,3-二羥基丙基)環丙烷-1-磺醯胺)、PD-0325901(N-[(2R)-2,3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-苯甲醯胺)、TAK733 ((R)-3-(2,3-二羥基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯胺基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮)、MEK162/ARRY438162 (5-[(4-溴-2-氟苯基)胺基]-4-氟-N-(2-羥基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-羧醯胺)、R05126766 (3-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)-4-吡啶基]甲基]-4-甲基-7-嘧啶-2-基氧基𠳭烯-2-酮)、WX-554、R04987655/CH4987655 (3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-5-((3-側氧基-1,2-氧氮雜環己-2基)甲基)苯甲醯胺)或AZD8330 (2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-N-(2羥基乙氧基)-1,5-二甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醯胺)、U0126-EtOH、PD184352 (CI-1040)、GDC-0623、BI-847325、考比替尼(cobimetinib)、PD98059、BIX 02189、BIX 02188、貝美替尼(binimetinib)、SL-327、TAK-733、PD318088。
在某些實施例中，生物活性劑為Raf抑制劑。Raf抑制劑為熟知的且包括例如維姆拉非尼(Vemurafinib) (N-[3-[[5-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基]羰基]-2,4-二氟苯基]-1-丙磺醯胺)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib tosylate) (4-甲基苯磺酸4-[4-[[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]胺甲醯基胺基]苯氧基]-N-甲基吡啶-2-甲醯胺)、AZ628 (3-(2-氰基丙-2-基)-N-(4-甲基-3-(3-甲基-4-側氧基-3,4-二氫喹唑啉-6-基胺基)苯基)苯甲醯胺)、NVP-BHG712 (4-甲基-3-(1-甲基-6-(吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基胺基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯甲醯胺)、RAF-265 (1-甲基-5-[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]吡啶-4-基]氧基-N-[4-(三氟甲基)苯基]苯并咪唑-2-胺)、2-溴阿爾迪辛(Bromoaldisine) (2-溴-6,7-二氫-1H,5H-吡咯并[2,3-c]氮呯-4,8-二酮)、Raf激酶抑制劑IV (2-氯-5-(2-苯基-5-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-4-基)苯酚)、索拉非尼N-氧化物(Sorafenib N-Oxide) (4-[4-[[[[4-氯-3(三氟甲基)苯基]胺基]羰基]胺基]苯氧基]-N-甲基-2吡啶甲醯胺1-氧化物)、PLX-4720、達拉非尼(dabrafenib) (GSK2118436)、GDC-0879、RAF265、AZ 628、SB590885、ZM336372、GW5074、TAK-632、CEP-32496、LY3009120及GX818 (恩拉非尼(Encorafenib))。
在某些實施例中，生物活性劑為EGFR抑制劑，包括例如吉非替尼(易瑞沙(Iressa))、埃羅替尼(特羅凱(Tarceva))、拉帕替尼(泰克泊(Tykerb))、奧希替尼(泰瑞沙(Tagrisso))、奈拉替尼(neratinib) (樂寧克斯(Nerlynx))、凡德他尼(卡普瑞沙(Caprelsa))、達可替尼(維茲姆普(Vizimpro))、羅西替尼(希格瑞(Xegafri))、阿法替尼(格洛泰瑞(Glotriff)、吉泰瑞(Giotriff)、阿非尼(Afanix))、拉澤替尼或那紮替尼。
EGFR抑制劑之額外實例包括羅西替尼(CO-1686)、奧莫替尼(olmutinib) (奧利他(Olita))、納闊替尼(naquotinib) (ASP8273)、那紮替尼(EGF816)、PF-06747775、埃克替尼(icotinib) (BPI-2009)、奈拉替尼(HKI-272；PB272)；阿維替尼(AC0010)、EAI045、他索替尼(tarloxotinib) (TH-4000；PR-610)、PF-06459988 (Pfizer)、特伐替尼(tesevatinib) (XL647；EXEL-7647；KD-019)、崔斯替尼(transtinib)、WZ-3146、WZ8040、CNX-2006、達可替尼(PF-00299804；Pfizer)、布加替尼(brigatinib) (布吉他濱(Alunbrig))、勞拉替尼(lorlatinib)及PF-06747775 (PF7775)。
在某些實施例中，生物活性劑為第一代EGFR抑制劑，諸如埃羅替尼、吉非替尼或拉帕替尼。在某些實施例中，生物活性劑為第二代EGFR抑制劑，諸如阿法替尼及/或達可替尼。在某些實施例中，生物活性劑為第三代EGFR抑制劑，諸如奧希替尼。
在某些態樣中，化合物1與EGFR或突變型EGFR之ATP位點結合抑制劑組合投與。EGFR之ATP位點結合抑制劑之非限制性實例包括奧希替尼、納闊替尼、瑪韋替尼、司培替尼及AZ5104。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與奧希替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與納闊替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與瑪韋替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與司培替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與AZ5104組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與羅西替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與阿維替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與拉澤替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與那紮替尼組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與EGFR抗體(例如西妥昔單抗、帕尼妥單抗或奈西妥單抗)組合投與有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與西妥昔單抗組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與帕尼妥單抗組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，本文所述之化合物係與奈西妥單抗組合投與至有需要之患者。
在某些實施例中，生物活性劑為c-MET抑制劑，例如克唑替尼(賽克瑞(Xalkori)、克唑尼西(Crizonix))、特潑替尼(tepotinib) (XL880、EXEL-2880、GSK1363089、GSK089)或提瓦替尼(tivantinib) (ARQ197)。
在某些實施例中，生物活性劑為AKT抑制劑，包括(但不限於) MK-2206、GSK690693、哌立福新、(KRX-0401)、GDC-0068、曲西立濱(Triciribine)、AZD5363、和厚樸酚(Honokiol)、PF-04691502及米替福新(Miltefosine)；FLT-3抑制劑，包括(但不限於) P406、多韋替尼(Dovitinib)、奎紮替尼(Quizartinib) (AC220)、阿姆替尼(Amuvatinib) (MP-470)、坦度替尼(Tandutinib) (MLN518)、ENMD-2076及KW-2449，或其組合。
在某些實施例中，生物活性劑為mTOR抑制劑。mTOR抑制劑之實例包括(但不限於)雷帕黴素(rapamycin)及其類似物、依維莫司(everolimus) (飛尼妥(Afinitor))、坦羅莫司(temsirolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、西羅莫司(sirolimus)及德佛莫司(deforolimus)。
在某些實施例中，生物活性劑為RAS抑制劑。RAS抑制劑之實例包括(但不限於)瑞賴森(Reolysin)及siG12D LODER。
在某些實施例中，生物活性劑為HSP抑制劑。HSP抑制劑包括(但不限於)格爾德黴素(Geldanamycin)或17-N-烯丙基胺基-17-去甲氧基格爾德黴素(17AAG，17-N-Allylamino-17-demethoxygeldanamycin)及根赤殼菌素(Radicicol)。
額外生物活性化合物包括例如依維莫司、曲貝替定(trabectedin)、阿布拉生(abraxane)、TLK 286、AV-299、DN-101、帕佐泮尼(pazopanib)、GSK690693、RTA 744、ON 0910.Na、AZD 6244(ARRY-142886)、AMN-N107、TKI-258、GSK461364、AZD 1152、恩紮妥林(enzastaurin)、凡德他尼(vandetanib)、ARQ-197、MK-0457、MLN8054、PHA-739358、R-763、AT-9263、FLT-3抑制劑、VEGFR抑制劑、奧洛拉(aurora)激酶抑制劑、PIK-1調節劑、HDAC抑制劑、c-MET抑制劑、PARP抑制劑、Cdk抑制劑、IGFR-TK抑制劑、抗HGF抑制劑、局部黏著斑激酶抑制劑、Map激酶激酶(mek)抑制劑、VEGF捕獲抗體、培美曲塞(pemetrexed)、帕尼單抗(panitumumab)、胺柔比星(amrubicin)、奧戈伏單抗(oregovomab)、Lep-etu、諾拉曲特(nolatrexed)、azd2171、巴他布林(batabulin)、奧法木單抗(ofatumumab)、紮木單抗(zanolimumab)、艾特咔林(edotecarin)、漢防己鹼(tetrandrine)、盧比替康(rubitecan)、替米利芬(tesmilifene)、奧利默森(oblimersen)、替西單抗(ticilimumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、棉籽醇、Bio 111、131-I-TM601、ALT-110、BIO 140、CC 8490、西侖吉肽(cilengitide)、吉馬替康(gimatecan)、IL13-PE38QQR、INO 1001、IPdR 1KRX-0402、胺甲硫蒽酮(lucanthone)、LY317615、紐拉迪布(neuradiab)、維特斯潘(vitespan)、Rta 744、Sdx 102、他侖帕奈(talampanel)、阿曲生坦(atrasentan)、Xr 311、羅米地辛(romidepsin)、ADS-100380、舒尼替尼(sunitinib)、5-氟尿嘧啶、伏立諾他(vorinostat)、依託泊苷(etoposide)、吉西他濱(gemcitabine)、小紅莓、脂質體小紅莓、5'-去氧-5-氟尿苷、長春新鹼、替莫唑胺(temozolomide)、ZK-304709、塞利希布(seliciclib)；PD0325901、AZD-6244、卡培他濱(capecitabine)，L-麩胺酸，N-[4-[2-(2-胺基-4,7-二氫-4-側氧基-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲醯基]-，二鈉鹽，七水合物；喜樹鹼、經PEG標記之伊立替康(irinotecan)、他莫昔芬、托瑞米芬檸檬酸鹽、阿那曲唑(anastrazole)、依西美坦、來曲唑、DES(己烯雌酚)、雌二醇、雌激素、結合雌激素、貝伐單抗(bevacizumab)、IMC-1C11、CHIR258)；3-[5-(甲基磺醯基哌啶甲基)-吲哚基-喹啉酮，凡塔藍尼(vatalanib)、AG-013736、AVE-0005、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸亮丙立德(leuprolide acetate)、雙羥萘酸曲普瑞林(triptorelin pamoate)、乙酸甲羥孕酮、己酸羥孕酮、乙酸甲地孕酮、雷諾昔酚(raloxifene)、比卡魯胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、乙酸甲地孕酮、CP-724714；TAK-165、HKI-272、埃羅替尼、拉帕替尼、卡奈替尼(canertinib)、ABX-EGF抗體、艾必妥(erbitux)、EKB-569、PKI-166、GW-572016、愛納法尼(Ionafarnib)、BMS-214662、替吡法尼(tipifarnib)；阿米福汀(amifostine)、NVP-LAQ824、辛二醯基苯胺(analide)異羥肟酸、丙戊酸、曲古黴素(trichostatin)A、FK-228、SU11248、索拉非尼(sorafenib)、KRN951、胺麩精、安吖啶(arnsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、L-天冬醯胺酶、卡介苗( BacillusCalmette-Guerin ；BCG)疫苗、阿德力黴素(adriamycin)、博萊黴素(bleomycin)、布舍瑞林(buserelin)、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥、順鉑(cisplatin)、克拉屈濱(cladribine)、氯屈膦酸鹽、環丙孕酮、阿糖胞苷、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素、道諾黴素、己烯雌酚、表柔比星(epirubicin)、氟達拉賓(fludarabine)、氟可體松(fludrocortisone)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、格列維克(gleevec)、吉西他濱(gemcitabine)、羥基脲、艾達黴素(idarubicin)、異環磷醯胺、伊馬替尼(imatinib)、亮丙立德(leuprolide)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、甲氮芥(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、6-巰基嘌呤、美司鈉(mesna)、甲胺喋呤(methotrexate)、絲裂黴素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、尼魯胺(nilutamide)、奧曲肽(octreotide)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、帕米膦酸鹽(pamidronate)、噴司他丁(pentostatin)、普卡黴素(plicamycin)、卟吩姆(porfimer)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷替曲塞(raltitrexed)、利妥昔單抗(rituximab)、鏈脲菌素(streptozocin)、替尼泊甙(teniposide)、睪固酮、沙利度胺、硫鳥嘌呤(thioguanine)、噻替派(thiotepa)、維甲酸(tretinoin)、長春地辛(vindesine)、13-順式-視黃酸、苯丙胺酸氮芥(phenylalanine mustard)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、雌莫司汀(estramustine)、六甲蜜胺(altretamine)、氟尿苷(floxuridine)、5-去氧尿苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、6-巰基嘌呤、去氧助間型黴素(deoxycoformycin)、促鈣三醇(calcitriol)、伐柔比星(valrubicin)、光神黴素(mithramycin)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞賓(vinorelbine)、拓朴替康(topotecan)、拉佐欣(razoxin)、馬立馬司他(marimastat)、COL-3、新伐司他(neovastat)、BMS-275291、角鯊胺、內皮生長抑素、SU5416、SU6668、EMD121974、介白素-12、IM862、血管生長抑素、維他欣(vitaxin)、屈洛昔芬(droloxifene)、艾朵昔芬(idoxyfene)、螺內酯(spironolactone)、非那雄安(finasteride)、西米替丁(cimitidine)、曲妥珠單抗、地尼白介素(denileukin diftitox)、吉非替尼、硼替佐米、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、不含十六醇聚氧乙烯醚之太平洋紫杉醇、多西他賽(docetaxel)、埃博黴素B (epithilone B)、BMS-247550、BMS-310705、屈洛昔芬、4-羥基他莫昔芬、哌噴昔芬(pipendoxifene)、ERA-923、阿佐昔芬(arzoxifene)、氟維司群、阿考比芬(acolbifene)、拉索昔芬、艾多昔芬(idoxifene)、TSE-424、HMR-R3339、ZK186619、拓朴替康、PTK787/ZK 222584、VX-745、PD 184352、雷帕黴素、40-O-(2-羥乙基)-雷帕黴素、坦羅莫司、AP-23573、RAD001、ABT-578、BC-210、LY294002、LY292223、LY292696、LY293684、LY293646、渥曼青黴素、ZM336372、L-779,450、PEG-非格司亭、達貝泊汀(darbepoetin)、紅血球生成素、顆粒球群落刺激因子、卓骨祂(zolendronate)、普賴松、西妥昔單抗、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子、組胺瑞林(histrelin)、聚乙二醇化干擾素α-2a、干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b、干擾素α-2b、阿紮胞苷(azacitidine)、PEG-L-天冬醯胺酶、來那度胺、吉妥單抗、氫皮質酮、介白素-11、右雷佐生(dexrazoxane)、阿侖單抗、全反式視黃酸(all-transretinoic acid)、酮康唑、介白素-2、甲地孕酮、免疫球蛋白、氮芥、甲基潑尼松龍、泰澤坦替伊莫單抗(ibritgumomab tiuxetan)、雄激素、地西他濱、六甲蜜胺、貝沙羅汀(bexarotene)、托西莫單抗(tositumomab)、三氧化二砷、可的松(cortisone)、艾迪膦酸鹽(editronate)、米托坦(mitotane)、環孢靈(cyclosporine)、脂質體道諾黴素、埃德溫納(Edwina)-天冬醯胺酶、鍶89、卡索匹坦(casopitant)、奈妥吡坦(netupitant)、NK-1受體拮抗劑、帕洛諾司瓊(palonosetron)、阿匹坦(aprepitant)、苯海拉明(diphenhydramine)、安泰樂(hydroxyzine)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、勞拉西泮(lorazepam)、阿普唑侖(alprazolam)、氟哌啶醇(haloperidol)、氟哌利多(droperidol)、屈大麻酚(dronabinol)、地塞米松、甲基潑尼松龍、丙氯拉嗪(prochlorperazine)、格拉司瓊(granisetron)、昂丹司瓊(ondansetron)、多拉司瓊(dolasetron)、特比司瓊(tropisetron)、派非格司亭(pegfilgrastim)、紅血球生成素、阿法依泊汀(epoetin alfa)、阿法達貝泊汀(darbepoetin alfa)及其混合物。
在某些實施例中，化合物係與異環磷醯胺組合投與。
在某些實施例中，生物活性劑係選自但不限於甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)(Gleevac®)、達沙替尼(Dasatinib)(Sprycel®)、尼羅替尼(Nilotinib)(Tasigna®)、伯舒替尼(Bosutinib)(Bosulif®)、曲妥珠單抗(Herceptin®)、曲妥珠單抗-DM1、帕妥珠單抗(PerjetaTM)、拉帕替尼(Lapatinib)(Tykerb®)、吉非替尼(Gefitinib)(Iressa®)、埃羅替尼(Erlotinib)(Tarceva®)、西妥昔單抗(Erbitux®)、帕尼單抗(Panitumumab)(Vectibix®)、凡德他尼(Vandetanib)(Caprelsa®)、維羅非尼(Vemurafenib)(Zelboraf®)、伏立諾他(Vorinostat)(Zolinza®)、羅米地辛(Romidepsin) (Istodax®)、貝沙羅汀(Bexarotene)(Tagretin®)、阿利維A酸(Alitretinoin)(Panretin®)、維甲酸(Vesanoid®)、卡非利佐米(Carfilizomib) (KyprolisTM)、普拉曲沙(Pralatrexate)(Folotyn®)、貝伐單抗(Bevacizumab)(Avastin®)、塞維-阿柏西普(Ziv-aflibercept)(Zaltrap®)、索拉非尼(索拉非尼)(Nexavar®)、舒尼替尼(Sunitinib)(Sutent®)、帕佐泮尼(Pazopanib)(Votrient®)、瑞戈非尼(Regorafenib)(Stivarga®)及卡博替尼(Cabozantinib)(CometriqTM)。
在某些態樣中，生物活性劑為抗炎劑、化學治療劑、放射性治療、額外治療劑或免疫抑止劑。
適合之化學治療生物活性劑包括(但不限於)放射性分子、毒素(亦稱作細胞毒素或細胞毒性劑，其包括對細胞之存活率有害的任何藥劑)及脂質體或含有化學治療性化合物之其他囊泡。通用抗癌醫藥劑包括：長春新鹼(Oncovin®)或脂質長春新鹼(Marqibo®)、道諾黴素(柔紅黴素(daunomycin)或Cerubidine®)或小紅莓(doxorubicin)(Adriamycin®)、阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷、ara-C或Cytosar®)、L-天冬醯胺酶(Elspar®)或PEG-L-天冬醯胺酶(培門冬酶或Oncaspar®)、依託泊苷(VP-16)、替尼泊苷(Teniposide)(Vumon®)、6-巰基嘌呤(6-MP或Purinethol®)、甲胺喋呤、環磷醯胺(Cytoxan®)、普賴松(Prednisone)、地塞米松(地卡特隆)、伊馬替尼(Gleevec®)、達沙替尼(Sprycel®)、尼羅替尼(Tasigna®)、伯舒替尼(Bosulif®)及普納替尼(Iclusig™)。
額外適合化學治療劑之實例包括(但不限於)1-去氫睪固酮、5-氟尿嘧啶、達卡巴嗪、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、放線菌素D、阿德力黴素、阿地白介素(aldesleukin)、烷化劑、別嘌醇鈉(allopurinol sodium)、六甲蜜胺、胺磷汀、阿那曲唑、安麴黴素(anthramycin) (AMC)、抗有絲分裂劑、順式-二氯二胺鉑(II) (DDP) (順鉑)、二胺二氯鉑、蒽環黴素(anthracycline)、抗生素、抗代謝產物、天冬醯胺酶、注射用卡介苗(BCG live) (膀胱內)、倍他米松磷酸鈉(betamethasone sodium phosphate)及乙酸倍他米松、比卡魯胺、硫酸博萊黴素(bleomycin sulfate)、白消安、葉酸鈣(calcium leucouorin)、卡奇黴素(calicheamicin)、卡培他濱、卡鉑、洛莫司汀(CCNU)、卡莫司汀(BSNU)、苯丁酸氯芥、順鉑、克拉屈濱、秋水仙鹼(Colchicin)、結合雌激素、環磷醯胺、環硫磷醯胺(Cyclothosphamide)、阿糖胞苷、阿糖胞苷、細胞遲緩素B (cytochalasin B)、環磷氮介(Cytoxan)、達卡巴嗪、放線菌素d、放線菌素d (以前為放線菌素(actinomycin))、柔紅黴素HCL (daunirubicin HCL)、檸檬酸道諾黴素(daunorucbicin citrate)、地尼白介素、右雷佐生、二溴甘露醇、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、多西他賽、甲磺酸多拉司瓊、小紅莓HCL、屈大麻酚、大腸桿菌L-天冬醯胺酶(E. coli L-asparaginase)、吐根素(emetine)、依伯汀-α、歐文氏菌屬L-天冬醯胺酶(Erwinia L-asparaginase)、酯化雌激素、雌二醇、雌莫司汀磷酸鈉、溴化乙錠(ethidium bromide)、乙炔基雌二醇(ethinyl estradiol)、依替膦酸鹽(etidronate)、依託泊苷嗜橙菌因子(etoposide citrororum factor)、磷酸依託泊苷、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟他胺、醛葉酸、吉西他濱HCL、糖皮質激素、乙酸戈舍瑞林、短桿菌素D (gramicidin D)、格拉司瓊HCL、羥基脲、艾達黴素HCL、異環磷醯胺、干擾素α-2b、伊立替康HCL、來曲唑、甲醯四氫葉酸鈣(leucovorin calcium)、乙酸亮丙立德、左旋咪唑HCL、利多卡因(lidocaine)、洛莫司汀、類美登素(maytansinoid)、甲基二(氯乙基)胺HCL、乙酸甲羥孕酮、乙酸甲地孕酮、美法侖HCL、巰基嘌呤(mercaptipurine)、美司鈉、甲胺喋呤、甲基睪固酮(methyltestosterone)、光神黴素、絲裂黴素C (mitomycin C)、米托坦、米托蒽醌、尼魯米特、乙酸奧曲肽(octreotide acetate)、昂丹司瓊HCL、太平洋紫杉醇、帕米膦酸二鈉、噴司他丁、匹魯卡品HCL (pilocarpine HCL)、皮利黴素(plimycin)、具有卡莫司汀植入之聚苯丙生20 (polifeprosan 20 with carmustine implant)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、普魯卡因(procaine)、丙卡巴肼HCL、普萘洛爾(propranolol)、利妥昔單抗、沙格司亭(sargramostim)、鏈佐黴素(streptozotocin)、他莫昔芬、紫杉醇(taxol)、替尼泊甙、特諾波賽(tenoposide)、睪內酯、四卡因(tetracaine)、噻替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、硫鳥嘌呤、噻替派、拓朴替康HCL、檸檬酸托瑞米芬、曲妥珠單抗、維甲酸、戊柔比星(valrubicin)、硫酸長春鹼(vinblastine sulfate)、硫酸長春新鹼(vincristine sulfate)及酒石酸長春瑞賓(vinorelbine tartrate)。
在一些實施例中，本文所述之化合物與化學治療劑(例如細胞毒性劑或適用於治療癌症之其他化合物)組合投與。化學治療劑之實例包括烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物及相關抑制劑、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、表鬼臼毒素(epipodopyyllotoxins)、抗生素、L-天冬醯胺酶、拓樸異構酶抑制劑、干擾素、鉑配位複合物、經蒽二酮取代之尿素、甲基肼衍生物、腎上腺皮質抑制劑、腎上腺皮質類固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素及促性腺激素釋放激素類似物。亦包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲醯四氫葉酸(LV)、伊里諾坎(irenotecan)、奧沙利鉑、卡培他濱、紫杉醇及多西他賽(doxetaxel)。化學治療劑之非限制性實例包括烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺；磺酸烷基酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；伸乙亞胺及甲基三聚氰胺，其包括六甲蜜胺、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethiylenethiophosphoramide)及三羥甲基三聚氰胺；乙醯精寧(acetogenins)(尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(包括合成類似物拓朴替康)；苔蘚蟲素(bryostatin)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycins)(尤其念珠藻素1及念珠藻素8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素；氮芥(nitrogen mustard)，諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素，尤其卡奇黴素gammall以及卡奇黴素omegall(參見例如Agnew,Chem. Inti. Ed Engl. 33：183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿布拉黴素(aclacinomysins)、放射菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、ADRIAMYCIN®(小紅莓，包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基-N-嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓及去氧小紅莓)、表阿黴素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、諸如絲裂黴素C之絲裂黴素、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉賓、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡魯睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺類，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；乙醯葡醛酯；醛磷醯胺醣苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；乙環氧啶(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多醣(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫哌達醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙醯肼；丙卡巴肼；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofuran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；新月毒素(trichothecenes)(尤其T-2毒素、弗納庫林(verracurin) A、桿孢菌素(roridin) A及胺癸叮(anguidine)；尿烷；長春地辛；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇，例如TAXOL®(太平洋紫杉醇，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)、ABRAXANE®不含十六醇聚氧乙烯醚(cremophor)，太平洋紫杉醇之白蛋白-工程化奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，IL)及TAXOTERE®多西他賽(Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；GEMZAR®吉西他濱；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑配位錯合物，諸如順鉑、奧沙利鉑及卡鉑；長春鹼；鉑；依託泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼；NAVELBINE®長春瑞賓(vinorelbine)；米托蒽醌(novantrone)；替尼泊甙(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素；胺基喋呤(aminopterin)；截瘤達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；伊立替康(irinotecan) (例如CPT-11)；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；卡培他濱，及以上任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。兩種或更多種化學治療劑可用於與本文所述之化合物組合投與之混合液中。組合化學療法之適合給藥方案為此項技術中已知的。舉例而言，組合給藥方案描述於Saltz等人, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 18:233a (1999)及Douillard等人, Lancet 355(9209): 1041 -1047 (2000)中。
可與本文所揭示之化合物組合投與的額外治療劑可包括貝伐珠單抗、蘇替尼(sutinib)、索拉非尼、2-甲氧基雌二醇或2ME2、菲那舒那(finasunate)、凡塔藍尼、凡德他尼、阿柏西普(aflibercept)、沃洛昔單抗(volociximab)、埃達珠單抗(etaracizumab) (MEDI-522)、西侖吉肽、厄洛替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗、吉非替尼、曲妥珠單抗、多韋替尼、非吉單抗(figitumumab)、阿塞西普(atacicept)、利妥昔單抗、阿侖單抗、阿地白介素(aldesleukine)、阿利珠單抗(atlizumab)、托西利單抗(tocilizumab)、坦羅莫司、依維莫司、魯卡木單抗(lucatumumab)、達西珠單抗(dacetuzumab)、HLL1、huN901-DM1、阿替莫德(atiprimod)、那他珠單抗(natalizumab)、硼替佐米、卡非佐米、馬瑞佐米(marizomib)、坦螺旋黴素(tanespimycin)、甲磺酸沙喹那韋(saquinavir mesylate)、利托那韋(ritonavir)、甲磺酸奈非那韋(nelfinavir mesylate)、硫酸茚地那韋(indinavir sulfate)、貝利司他、帕比司他(panobinostat)、馬帕木單抗(mapatumumab)、來沙木單抗(lexatumumab)、杜拉樂明(dulanermin)、ABT-737、奧利默森、普替德新(plitidepsin)、他匹莫德(talmapimod)、P276-00、恩紮妥林(enzastaurin)、替吡法尼、哌立福新、伊馬替尼、達沙替尼、來那度胺、沙利度胺、辛伐他汀(simvastatin)、塞內昔布(celecoxib)、巴多昔芬、AZD4547、里樂木單抗(rilotumumab)、奧沙利鉑(樂沙定(Eloxatin))、PD0332991、瑞博昔布(ribociclib) (LEE011)、玻瑪西林(amebaciclib) (LY2835219)、HDM201、氟維司群(芙仕得(Faslodex))、依西美坦(阿諾新(Aromasin))、PIM447、魯索替尼(INC424)、BGJ398、奈妥木單抗(necitumumab)、培美曲塞(力比泰(Alimta))及雷莫蘆單抗(ramucirumab) (IMC-1121B)。
在某些實施例中，額外療法為單株抗體(MAb)。一些MAb刺激毀壞癌細胞之免疫反應。類似於由B細胞天然產生之抗體，此等MAb可「包覆」癌症細胞表面，從而由免疫系統觸發其毀壞。舉例而言，貝伐珠單抗靶向促進腫瘤血管發展之血管內皮生長因子(VEGF)，該血管內皮生長因子為由腫瘤細胞及腫瘤微環境中之其他細胞分泌的蛋白質。當結合至貝伐單抗時，VEGF無法與其細胞受體相互作用，從而阻止引起新血管生長之信號傳導。結合至細胞表面生長因子受體之MAb防止靶向受體發送其促進正常生長之信號。其亦可觸發細胞凋亡及活化免疫系統以破壞腫瘤細胞。
在本發明之一個態樣中，生物活性劑為免疫抑止劑。免疫抑止劑可為鈣調神經磷酸酶抑制劑，例如環孢素(cyclosporin)或子囊黴素(ascomycin)，例如環孢素A (NEORAL®)、FK506 (他克莫司(tacrolimus))、吡美莫司(pimecrolimus)；mTOR抑制劑，例如雷帕黴素或其衍生物(例如西羅莫司(RAPAMUNE®)、依維莫司(Certican®)、坦羅莫司、佐他莫司(zotarolimus)、百里莫司(biolimus)-7、百里莫司-9)、雷帕黴素類似物(rapalog) (例如地磷莫司、硫唑嘌呤、坎帕斯1H (campath 1H)；S1P受體調節劑，例如芬戈莫德(fingolimod)或其類似物、抗IL-8抗體、黴酚酸或其鹽(例如鈉鹽)或其前藥，例如黴酚酸脂(Mycophenolate Mofetil) (CELLCEPT®)、OKT3 (ORTHOCLONE OKT3®)、普賴松、ATGAM®、THYMOGLOBULIN®、布喹那鈉(Brequinar Sodium)、OKT4、T10B9.A-3A、33B3.1、15-脫氧斯匹胍素(deoxyspergualin)、曲培莫司(tresperimus)、來氟米特(Leflunomide) ARAVA®、CTLAI-Ig、抗CD25、抗IL2R、巴利昔單抗(Basiliximab) (SIMULECT®)、達利珠單抗(Daclizumab) (ZENAPAX®)、咪唑立賓(mizorbine)、甲胺喋呤、地塞米松、ISAtx-247、SDZ ASM 981 (吡美莫司，Elidel®)、CTLA4lg (阿巴西普(Abatacept))、貝拉西普(belatacept)、LFA3lg、依那西普(etanercept) (藉由Immunex以Enbrel®出售)、阿達木單抗(adalimumab) (Humira®)、英利昔單抗(infliximab) (Remicade®)、抗LFA-1抗體、那他珠單抗(natalizumab) (Antegren®)、恩莫單抗(Enlimomab)、加維莫單抗(gavilimomab)、抗胸腺細胞免疫球蛋白、西利珠單抗(siplizumab)、阿來西普(Alefacept)依法珠單抗(efalizumab)、潘他沙(pentasa)、美色拉嗪(mesalazine)、亞沙可(asacol)、磷酸可待因(codeine phosphate)、貝諾酯(benorylate)、芬布芬(fenbufen)、萘普生(naprosyn)、雙氯芬酸(diclofenac)、依託度酸(etodolac)及吲哚美辛(indomethacin)、阿司匹靈(aspirin)及布洛芬(ibuprofen)。
在一些實施例中，生物活性劑為作為生物製劑之治療劑，諸如用於癌症治療中之細胞介素(例如干擾素或介白素(例如IL-2))。在一些實施例中，生物製劑為抗血管生成劑，諸如抗VEGF劑，例如貝伐單抗(AVASTIN®)。在一些實施例中，生物製劑為促效目標以刺激抗癌反應或拮抗對於癌症而言重要之抗原的基於免疫球蛋白之生物製劑，例如單株抗體(例如人類化抗體、完全人類抗體、Fc融合蛋白或其功能片段)。此類藥劑包括RITUXAN® (利妥昔單抗)；ZENAPAX® (達利珠單抗)；SIMULECT® (巴利昔單抗)；SYNAGIS® (帕利珠單抗)；REMICADE® (英利昔單抗)；HERCEPTIN® (曲妥珠單抗)；MYLOTARG® (吉妥單抗奧佐米星)；CAMPATH® (阿侖單抗)；ZEVALIN® (替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan))；HUMIRA® (阿達木單抗)；XOLAIR® (奧馬珠單抗)；BEXXAR® (托西莫單抗-l-131)；RAPTIVA® (艾法珠單抗)；ERBITUX® (西妥昔單抗)；AVASTIN® (貝伐單抗)；TYSABRI® (那他珠單抗)；ACTEMRA® (托西利單抗)；VECTIBIX® (帕尼單抗)；LUCENTIS® (蘭比珠單抗)；SOURIS® (艾庫組單抗)；CIMZIA® (聚乙二醇化賽妥珠單抗)；SIMPONI® (戈利木單抗)；ILARIS® (卡那單抗)；STELARA® (烏司奴單抗(ustekinumab))；ARZERRA® (奧伐木單抗)；PROLIA® (德諾單抗)；NUMAX® (莫維珠單抗)；ABTHRAX® (蘭希班單抗(raxibacumab))；BENLYSTA® (貝利單抗)；YERVOY® (伊派利單抗)；ADCETRIS® (本妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin))；PERJETA® (帕妥珠單抗)；KADCYLA® (曲妥珠單抗-美坦新)；及GAZYVA® (阿托珠單抗)。亦包括抗體-藥物結合物。
組合療法可包括作為非藥物治療之治療劑。舉例而言，除了放射療法、冷凍療法、高溫處理及/或腫瘤組織之外科切除術以外，亦可投與化合物。
「組合」投與之化合物當該術語在本文中使用時可指同時投與或在治療週期中之不同時間或在不同天投與兩種化合物。
在某些實施例中，以任一次序同時或依序投與第一及第二治療劑。可緊接在第二治療劑之前或之後以下時間投與第一治療劑：至多1小時、至多2小時、至多3小時、至多4小時、至多5小時、至多6小時、至多7小時、至多8小時、至多9小時、至多10小時、至多11小時、至多12小時、至多13小時、14小時、至多16小時、至多17小時、至多18小時、至多19小時、至多20小時、至多21小時、至多22小時、至多23小時、至多24小時，或至多1至7、1至14、1至21或1至30天。
在某些實施例中，第二治療劑係按與本文所述之化合物不同之劑量方案投與。舉例而言，第二治療劑可具有每治療週期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天的治療假期。在另一實施例中，第一治療劑具有治療假期。舉例而言，第一治療劑可具有每治療週期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天之治療假期。在某些實施例中，第一及第二治療劑均具有治療假期。
VII. 醫藥組合物式I、II、III或IV之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用作治療上活性物質，例如呈醫藥製劑形式。醫藥製劑可例如以錠劑、包衣錠劑、糖衣丸劑、硬及軟明膠膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式經口投與。在其他實施例中，父系地投與化合物，例如藉由靜脈內投與。然而，亦可例如以栓劑形式經直腸，或例如以注射溶液形式非經腸實現投藥。
式I、II、III或IV之化合物及其醫藥學上可接受之鹽可經醫藥學上惰性之無機或有機載劑處理以用於生產醫藥製劑。舉例而言，乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽及其類似物可用作錠劑、包衣錠劑、糖衣丸劑及硬明膠膠囊之此類載劑。軟明膠膠囊之適合載劑為例如植物油、蠟、脂肪、半固體及液體多元醇及其類似物。然而，視活性物質之性質而定，在軟明膠膠囊之情況下通常不需要載劑。舉例而言，產生溶液及糖漿之適合載劑為水、多元醇、甘油、植物油及其類似物。栓劑之適合載劑為，舉例而言，天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇及其類似物。
另外，醫藥製劑可含有醫藥學上可接受之輔助物質，諸如防腐劑、增溶劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、改變滲透壓之鹽、緩衝劑、掩蔽劑或抗氧化劑。其亦可仍含有其他治療學上有價值之物質。
本發明亦提供含有式I、II、III或IV之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及治療上惰性之載劑的藥劑，及其生產之製程，該製程包含將一或多種式I、II、III或IV之化合物及/或其醫藥學上可接受之鹽及(若需要)一或多種其他治療上有價值之物質連同一或多種治療上惰性之載劑製成蓋倫投藥形式(galenical administration form)。
劑量可在寬限制內變化，且將當然必須在各特定情況下針對個別要求進行調節。在經口投藥之情況下，成人劑量可在每日約0.01 mg至約1000 mg通式I、II、III或IV之化合物或對應量之其醫藥學上可接受之鹽之間變化。可以單次劑量或以分次劑量形式投與每日劑量，且另外，當發現指明需超過上限時亦可超過上限。
以下實例說明而非限制本發明，其僅充當本發明之代表。醫藥製劑宜含有約1-500 mg、尤其1-100 mg式I、II、III或IV之化合物。根據本發明之組合物之實例係：
在某些實施例中，醫藥組合物的劑型在單位劑型中含有約0.1 mg至約2000 mg、約10 mg至約1000 mg、約100 mg至約800 mg或約200 mg至約600 mg活性化合物，及視情況存在之約0.1 mg至約2000 mg、約10 mg至約1000 mg、約100 mg至約800 mg或約200 mg至約600 mg額外活性劑。實例為具有至少0.1、1、5、10、25、50、100、200、250、300、400、500、600、700或750 mg活性化合物或其鹽之劑型。
在一些實施例中，一天一次(QD)、一天兩次(BID)或一天三次(TID)投與本文所揭示或如所描述來使用之化合物。在一些實施例中，一天至少一次投與本文所揭示或如所描述來使用之化合物維持至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少26天、至少27天、至少28天、至少29天、至少30天、至少31天、至少35天、至少45天、至少60天、至少75天、至少90天、至少120天、至少150天、至少180天或更久。
在某些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次或一天四次投與本文所述之化合物。
在某些實施例中，一天一次經口投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一天兩次經口投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一天三次經口投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一天四次經口投與本文所述之化合物。
在某些實施例中，一天一次靜脈內投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一週兩次靜脈內投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一天三次靜脈內投與本文所述之化合物。在某些實施例中，一天四次靜脈內投與本文所述之化合物。
在一些實施例中，在治療週期之間的治療假期之情況下投與本文所述之化合物。舉例而言，化合物可具有每治療週期1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天之治療假期。
在一些實施例中，投與負載劑量以開始治療。舉例而言，化合物可在治療之第一天投與相比於治療週期中治療之其餘天高約1.5×、約2×、約2.5×、約3×、約3.5×、約4×、約4.5×、約5×、約5.5×、約6×、約6.5×、約7×、約7.5×、約8×、約8.5×、約9×、約9.5×或約10×之劑量。額外例示性負載劑量包括在治療之前2、3、4、5、6、7、8、9或10天相比於治療週期中治療之其餘天高約1.5×、約2×、約2.5×、約3×、約3.5×、約4×、約4.5×、約5×、約5.5×、約6×、約6.5×、約7×、約7.5×、約8×、約8.5×、約9×、約9.5×或約10×之劑量。
醫藥組合物亦可包括一定莫耳比之活性化合物及額外活性劑。舉例而言，醫藥組合物可含有莫耳比為約0.5:1、約1:1、約2:1、約3:1或約1.5:1至約4:1之抗炎劑或免疫抑制劑。
此等組合物可含有實現所需結果之任何量之活性化合物，例如0.1重量%與99重量%之間(wt%)的化合物，且通常至少約5重量%之化合物。一些實施例含有約25 wt.%至約50 wt.%或約5 wt.%至約75 wt.%之化合物。
將向患者遞送醫藥學上或治療有效量之組合物。精確有效量將隨患者變化而變化且將取決於物種、年齡、個體之身材及健康狀況、所治療病狀之性質及程度、治療醫師之建議及選擇用於投藥之療法或療法組合。用於給定情形之有效量可由常規實驗測定。出於本發明之目的，在至少一次劑量中，治療量可例如在約0.01 mg/kg至約250 mg/kg體重，更典型地約0.1 mg/kg至約10 mg/kg之範圍內。個體可經投與所需用於降低及/或緩解所述病症之跡象、症狀或病因或產生生物系統之任何其他所需更改之劑量。在需要時，可用適於活性成分之持續或控制釋放投與的腸溶衣來製備調配物。
在某些實施例中，劑量在約0.01-100 mg/kg患者體重之範圍內，例如約0.01 mg/kg、約0.05 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg或約100 mg/kg。
醫藥製劑較佳地呈單位劑型。在此類形式中，製劑被細分為含有適當數量活性組分之單位劑量。單位劑型可為封裝製劑，該封裝含有離散數量之製劑，諸如小瓶或安瓿中之封裝錠劑、膠囊及散劑。單位劑型亦可為膠囊、錠劑、扁囊劑或口含劑本身，或其可為適當數目之包裝形式之此等單位劑型中之任一者。
在某些實施例中，化合物係以醫藥學上可接受之鹽形式投與。醫藥學上可接受之鹽之非限制性實例包括：乙酸鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、
Figure 111119753-A0304-1
酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽及戊酸鹽。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣及鎂以及無毒性銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺及乙胺。
因此，本發明之組合物可作為醫藥調配物，包括適用於經口(包括經頰及舌下)、經直腸、經鼻、局部、經皮、經肺、經陰道或非經腸(包括肌肉內、動脈內、鞘內、皮下及靜脈內)、注射、吸入或噴霧、主動脈內、顱內、皮下、腹膜內、皮下之醫藥調配物，或藉由含有習知醫藥學上可接受之載劑的其他投藥手段投與。典型投藥方式為使用可根據病痛程度調整之適宜日劑量方案經口、局部或靜脈內投藥。
視預期投藥模式而定，醫藥組合物可呈固體、半固體或液體劑型形式，諸如錠劑、栓劑、丸劑、膠囊、散劑、液體、糖漿、懸浮液、乳膏、軟膏、乳劑、糊劑、凝膠、噴霧、氣溶膠、發泡體或油、注射或輸注溶液、經皮貼片、皮下貼片、吸入調配物、醫療裝置中之栓劑、口頰或舌下調配物、非經腸調配物或眼用溶液或類似者，較佳地呈適用於精確劑量之單次投藥的單位劑型。
一些劑型(諸如錠劑及膠囊)細分成含有適當數量之活性組分(例如達成所需目的之有效量)的適當尺寸化單位劑量。組合物將包括有效量之所選藥物與醫藥學上可接受之載劑之組合且另外可包括其他醫藥劑、佐劑、稀釋劑、緩衝劑及其類似者。
載劑包括賦形劑及稀釋劑，且必須具有足夠高純度及足夠低毒性以使其適於向正在治療之患者投與。載劑可呈惰性或其本身可具有醫藥效益。結合化合物採用的載劑之量足以根據單位劑量之化合物投與提供實用量之物質。
載劑之類別包括但不限於佐劑、黏合劑、緩衝劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、賦形劑、乳化劑、調味劑、凝膠、滑動劑、潤滑劑、防腐劑、穩定劑、界面活性劑、增溶劑、製錠劑、濕潤劑或凝固材料。
一些載劑可列入超過一種類別中，例如植物油可在一些調配物中用作潤滑劑且可在其他調配物中用作稀釋劑。
例示性醫藥學上可接受之載劑包括糖、澱粉、纖維素、粉末狀黃蓍、麥芽、明膠、滑石、石油膏、羊毛脂、聚乙二醇、醇、經皮增強劑及植物油。視情況選用之活性劑可包括在醫藥組合物中，該等活性劑並未實質上干擾本文所述之化合物之活性。
一些賦形劑包括但不限於液體，諸如水、生理鹽水、甘油、聚乙二醇、玻尿酸、乙醇及其類似者。可視需要根據治療之目標例如以固體、液體、噴霧乾燥材料、微粒、奈米粒子、控制釋放系統等之形式提供化合物。用於非液體調配物之適合賦形劑亦為熟習此項技術者已知的。醫藥學上可接受之賦形劑及鹽之徹底論述可在Remington's Pharmaceutical Sciences第18版(Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)中獲得。
另外，諸如潤濕劑或乳化劑、生物緩衝物質、界面活性劑及其類似者之輔助物質可存在於此類媒劑中。生物緩衝液可為藥理學上可接受且提供具有所需pH，亦即生理學上可接受範圍中之pH之調配物的任何溶液。緩衝溶液之實例包括生理鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、Tris緩衝生理鹽水、漢克氏緩衝生理鹽水(Hank's buffered saline)及其類似者。
對於固體組合物，習知無毒性固體載劑包括(例如)醫藥級之甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂及其類似物。液體醫藥學上可投與之組合物可例如藉由將如本文所述之活性化合物及視情況選用之醫藥佐劑溶解、分散及類似者於諸如(例如)水、鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇及類似者之賦形劑中由此形成溶液或懸浮液來製備。若需要，則待投與之醫藥組合物亦可含有少量無毒輔助物質，諸如濕潤劑或乳化劑、pH緩衝劑及其類似物，例如乙酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺乙酸鈉、三乙醇胺油酸酯及類似者用於製備此類劑型之實際方法為熟習此項技術者已知或將顯而易見的；例如，參見上文提及之Remington's Pharmaceutical Sciences。
在又一實施例中，提供使用包括聚合物之滲透增強賦形劑，該等聚合物諸如：聚陽離子(聚葡萄胺糖及其四級銨衍生物、聚-L-精胺酸、胺化明膠)；聚陰離子( N-羧甲基聚葡萄胺糖、聚丙烯酸)；及硫醇化聚合物(羧甲基纖維素半胱胺酸、聚卡波非半胱胺酸(polycarbophil-cysteine)、聚葡萄胺糖硫代丁基脒、聚葡萄胺糖硫代乙醇酸、聚葡萄胺糖麩胱甘肽結合物)。
在某些實施例中，賦形劑係選自丁基化羥基甲苯(BHT)、碳酸鈣、磷酸鈣(二元)、硬脂酸鈣、交聯羧甲纖維素、交聯聚乙烯吡咯啶酮、檸檬酸、交聯聚維酮、半胱胺酸、乙基纖維素、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乳糖、硬脂酸鎂、麥芽糖醇、甘露糖醇、甲硫胺酸、甲基纖維素、對羥基苯甲酸甲酯、微晶纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚維酮、預膠凝化澱粉、對羥基苯甲酸丙酯、棕櫚酸視黃酯、蟲膠(shellac)、二氧化矽、羧甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、羥基乙酸澱粉鈉、山梨糖醇、澱粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化鈦、維生素A、維生素E、維生素C及木糖醇。
醫藥組合物/組合可經調配以用於經口投與。對於經口投藥，組合物將通常呈錠劑、膠囊、軟凝膠膠囊之形式或可為水溶液或非水溶液、懸浮液或糖漿。錠劑及膠囊為典型的經口投與形式。用於經口使用之錠劑及膠囊可包括一或多種常用載劑，諸如乳糖及玉米澱粉。亦典型地添加潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。通常，本發明之組合物可與經口、無毒、醫藥學上可接受之惰性載劑，諸如乳糖、澱粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、硫酸鈣、甘露醇、山梨醇及其類似者組合。此外，當需要或必要時，亦可將適合黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。適合之黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(諸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(諸如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟及類似者。用於此等劑型中之潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及其類似者。崩解劑包括但不限於澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。
當使用液體懸浮液時，活性劑可與任何經口、無毒、醫藥學上可接受之惰性載劑，諸如乙醇、甘油、水及其類似者組合且與乳化劑及懸浮劑組合。視需要，亦可添加調味劑、著色劑及/或甜味劑。用於併入於本文中之經口調配物中之其他視情況選用的組分包括(但不限於)防腐劑、懸浮劑、增稠劑及其類似物。
對於經眼遞送，化合物可視需要投與，例如經由玻璃體內、基質內、前房內、球筋膜囊下、視網膜下、眼球後(retro-bulbar)、眼球周、脈絡膜周隙、結膜、結膜下、鞏膜上、眼周、經鞏膜、眼球後(retrobulbar)、後近鞏膜、角膜周或淚管注射投與，或經由黏液、黏蛋白或黏膜屏障、以立即或控制釋放方式或經由眼部裝置投與。
非經腸調配物可以習知形式，以液體溶液或懸浮液形式，以適用於在注射之前在液體中形成溶液或懸浮液之固體形式或以乳液形式製備。通常，根據此項技術中已知之技術使用適合的載劑、分散劑或潤濕劑及懸浮劑來調配無菌可注射懸浮液。無菌可注射調配物亦可為可接受地無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液。可採用之可接受之媒劑及溶劑為水、林格氏溶液及等張氯化鈉溶液。另外，無菌、非揮發性油、脂肪酯或多元醇習知地用作溶劑或懸浮介質。另外，非經腸投藥可涉及使用緩慢釋放或持續釋放系統，使得維持恆定劑量水準。
非經腸投與包括關節內、靜脈內、肌肉內、皮內、腹膜內及皮下途徑及包括水性等張無菌注射溶液及非水性等張無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑及使調配物與既定受體之血液等張之溶質，及可包括懸浮藥劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑之水性溶液及非水性無菌懸浮液。經由某些非經腸途徑之投與可涉及經由藉由無菌注射器或諸如連續輸注系統之一些其他機械裝置推進的針頭或導管來將本發明之調配物引入至患者之身體中。由本發明提供之調配物可使用注射器、噴射器、泵或此項技術中所認可之用於非經腸投與的任何其他裝置來投與。
用於非經腸投藥之根據本發明的製劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液或乳液。非水溶劑或媒劑之實例為丙二醇、聚乙二醇、植物油(諸如橄欖油及玉米油)、明膠及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。此類劑型亦可含有佐劑，諸如保持劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。其可藉由(例如)經由細菌保持過濾器之過濾、藉由將滅菌藥劑併入至組合物中，藉由輻射組合物或藉由加熱組合物來滅菌。其亦可在即將使用之前使用無菌水或一些其他無菌可注射介質來製造。
無菌可注射溶液係藉由以所需量將本發明化合物中之一或多者與上文列舉之各種其他成分視需要併入於適當溶劑中，隨後過濾滅菌來製備。一般而言，藉由將各種滅菌活性成分併入含有鹼性分散介質及來自上文列舉之彼等成分之所需其他成分的無菌媒劑中來製備分散液。在無菌粉末用於製備無菌可注射溶液之情況下，典型製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥技術，其自先前無菌過濾溶液得到活性成分外加任何其他所需成分之粉末。因此，例如藉由將1.5重量%活性成分攪拌於按體積計10%丙二醇及水中來製備適用於藉由注射投與之非經腸組合物。溶液用氯化鈉進行等張且滅菌。
替代地，本發明之醫藥組合物可以供直腸投藥之栓劑形式投藥。此等可藉由將藥劑與適合之非刺激性賦形劑混合來製備，該賦形劑在室溫下為固體但在直腸溫度下為液體，且因此將在直腸中熔融以釋放藥物。此類材料包括可可脂、蜂蠟及聚乙二醇。
本揭示之醫藥組合物亦可藉由經鼻氣霧劑或吸入投與。此類組合物係根據醫藥調配物之此項技術中熟知的技術製備且可採用苄醇或其他合適防腐劑、提高生物可用性之吸收促進劑，諸如氟碳化物或氮之推進劑及/或其他習知溶解或分散劑來製備為鹽水溶液。
用於口腔投與之調配物包括錠劑、口含劑、凝膠及其類似物。可替代地，口腔投與可使用熟習此項技術者已知之經黏膜的遞送系統來實現。本揭示之化合物亦可使用習知經皮藥物遞送系統，亦即經皮「貼片」經由皮膚或皮膚組織遞送，其中該藥劑典型地包含於充當待貼附至身體表面之層壓結構內。在此結構中，藥物組合物典型地包含於上背層下之層或「儲層」中。層壓裝置可含有單個儲層，或可含有多個儲層。在某些實施例中，儲層包含在藥物遞送期間用以將系統貼附至皮膚之醫藥學上可接受之接觸黏著材料之聚合基質。合適皮膚接觸黏著材料之實例包括(但不限於)聚乙烯、聚矽氧烷、聚異丁烯、聚丙烯酸酯、聚胺脂及其類似物。
替代地，含藥物儲層及皮膚接觸黏著劑係以分離且不同層存在，黏著劑在儲層下方，在此情形下，該儲層可為如上文所描述之聚合基質或其可為液體或凝膠儲層或可呈一些其他形式。在此等層狀物中，用作裝置之上部表面之背層作為層狀壓結構之初級結構元件且提供裝置許多可撓性。選定用於背層之材料應大體上不可滲透至活性劑及存在之任何其他材料。
本揭示之組合物可經調配用於噴霧劑投與，尤其投與至呼吸道，且包括鼻內投與。化合物可例如通常具有較小粒度，例如約5微米或更小。此類粒度可藉由此項技術中已知的方式獲得，例如藉由微粉化。活性成分提供於具有適合推進劑之加壓包裝中，該推進劑諸如氯氟碳化物(chlorofluorocarbon，CFC) (例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其他適合氣體。噴霧劑亦可宜含有諸如卵磷脂之界面活性劑。藥物之劑量可藉由計量閥控制。
可替代地，活性成分可以乾粉形式提供，例如化合物於適合散劑基劑中之散劑混合物，該基劑諸如乳糖、澱粉、澱粉衍生物(諸如羥丙基甲基纖維素)及聚乙烯吡咯啶酮(polyvinylpyrrolidine，PVP)。粉末載劑將在鼻腔中形成凝膠。粉末組合物可以例如於例如明膠或泡殼包裝之膠囊或藥筒中的單位劑型呈遞，粉末可藉助於吸入器自其投與。
適用於直腸投與之調配物通常以單位劑量栓劑呈遞。此等物可藉由使活性化合物與一或多種習知固體載劑(例如可可脂)摻合，且隨後使所得混合物成形來製備。
在某些實施例中，醫藥組合物適用於使用投藥模式局部投與至皮膚且如上文所定義。
在某些實施例中，適用於經皮投藥之醫藥組合物可以離散貼片形式呈遞，該等貼片經調適以與接受者之表皮保持緊密接觸持續延長之時間段。適用於經皮投藥之調配物亦可藉由離子導入療法遞送(參見例如 Pharmaceutical Research 3 (6):318 (1986))及通常呈活性化合物之視情況存在之緩衝水溶液形式。
在某些實施例中，提供微針貼片或裝置以將藥物遞送跨越或進入生物組織，特定言之皮膚。微針貼片或裝置允許藥物以臨床上相關的速率遞送跨越皮膚或其他組織障壁或至皮膚或其他組織障壁中，而對組織的損傷、疼痛或刺激最小或無。
適用於投與肺的調配物可藉由廣泛範圍之被動式呼吸驅動及主動式電驅動單劑量/多劑量乾粉吸入器(DPI)來進行遞送。呼吸遞送最常用之裝置包括噴霧器、定劑量吸入器及乾粉吸入器。有若干類型的噴霧器可利用，包括噴射噴霧器、超音波噴霧器及振動式網狀噴霧器。選擇適合的肺遞送裝置視參數而定，諸如藥物及其調配物之性質、作用位點及肺病理生理學。
在某些實施例中，提供一種經口調配物。
實例 A以常見方式製造具有以下組成之錠劑：
成分 毫克/錠劑
5 25 100 500
式I、II、III或IV之化合物 5 25 100 500
無水乳糖DTG 125 105 30 150
Sta-Rx 1500 6 6 6 60
微晶纖維素 30 30 30 450
硬脂酸鎂 1 1 1 1
總計 167 167 167 831
表1：可能的錠劑組成 製備程序1.   將成分1、2、3及4混合且用純化水造粒。 2.   在50℃下乾燥顆粒。 3.   使顆粒通過適合的研磨設備。 4.   添加成分5且混合三分鐘；在適合壓機上壓縮。
實例 B-1製備具有以下組成之膠囊：
成分 毫克/膠囊
5 25 100 500
式I、II、III或IV之化合物 5 25 100 500
含水乳糖 159 123 148 -
玉米澱粉 25 35 40 70
滑石 10 15 10 25
硬脂酸鎂 1 2 2 5
總計 200 200 300 600
表2：可能的膠囊成分組成 製備程序1.   在適合混合器中混合成分1、2及3持續30分鐘。 2.   添加成分4及5且混合3分鐘。 3.   填充至適合的膠囊中。
首先在混合器中將式I、II、III或IV之化合物、乳糖及玉米澱粉混合且接著在粉碎機中將其混合。使混合物返回至混合器；向其中添加滑石且充分混合。藉由機器將混合物填充至適合膠囊(例如硬明膠膠囊)中。
實例 B-2製造以下組成之軟明膠膠囊： 表3：可能的軟明膠膠囊成分組成
成分 毫克/膠囊
式I、II、III或IV之化合物 5
黃色蠟 8
經氫化之豆油 8
部分氫化植物油 34
豆油 110
總計 165
表4：可能的軟明膠膠囊組成
成分 毫克/膠囊
明膠 75
甘油85 % 32
Karion 83 8 (乾物質)
二氧化鈦 0.4
黃色氧化鐵 1.1
總計 116.5
製備程序將式I、II、III或IV之化合物溶解於其他成分之溫熔融物中，且將混合物填充至適當大小之軟明膠膠囊中。根據常用方法處理經填充之軟明膠膠囊。
實例 C製造以下組成之栓劑： 表5：可能的栓劑組成
成分 毫克/栓劑
式I、II、III或IV之化合物 15
栓劑基質 1285
總計 1300
製備程序將栓劑基質於玻璃或鋼容器中熔融，充分混合且冷卻至45℃。隨即，將精細粉末狀式I、II、III或IV之化合物添加至其中且攪拌直至其完全分散。將混合物倒入合適尺寸之栓劑模具中，使其冷卻；接著將栓劑自模具移除且獨立封裝於蠟紙或金屬箔中。
實例 D製造具有以下組成組合物之注射溶液： 表6：可能的注射溶液組成
成分 毫克/注射溶液.
式I、II、III或IV之化合物 3
聚乙二醇400 150
乙酸 適量補足至pH 5.0
用於注射溶液的水 接近1.0 ml
製備程序將式I、II、III或IV之化合物溶解於聚乙二醇400與注射用水(部分)之混合物中。藉由乙酸將pH調節至5.0。藉由添加剩餘殘餘量之水將體積調整至1.0 ml。將溶液過濾，適當過量填充至小瓶中且滅菌。
實例 E製造以下組成之藥囊： 表7：可能之藥囊組成
成分 毫克/藥囊
式I、II、III或IV之化合物 50
乳糖，精細粉末 1015
微晶纖維素(AVICEL PH 102) 1400
羧甲基纖維素鈉 14
聚乙烯吡咯啶酮K 30 10
硬脂酸鎂 10
調味添加劑 1
總計 2500
製備程序將式I、II、III或IV之化合物與乳糖、微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉混合且用聚乙烯吡咯啶酮於水中之混合物造粒。將顆粒與硬脂酸鎂及調味添加劑混合且填充至藥囊中。
VIII. 藥理學測試式I、II、III或IV之化合物及其醫藥學上可接受之鹽擁有有價值之藥理學特性。根據下文給出之測試來研究化合物。
材料 NCI-H1975 (攜帶EGFR異型接合L858R-T790M突變)及NCI-H3255 (攜帶EGFR異型接合L858R突變)分別購自ATCC及NCI。NCI-H1975+CS (攜帶EGFR異型接合L858R-T790M-C797S突變)係使用CRISPR技術產生以藉由Horizon Discovery引入額外C797S突變。A431(攜帶EGFR野生型)係購自ATCC。無酚紅介質及胎牛血清(FBS)之RPMI 1640係購自Gibco (Grand Island, NY, USA)。細胞培養燒瓶及384孔微量培養盤係獲自VWR (Radnor, PA, USA)。磷酸化(pY1068)EGFR及總EGFR(分別使用EGFR突變細胞株及EGFR野生型細胞株之L858R特異性偵測抗體及泛EGFR抗體)HTRF分析套組係購自Cisbio(Bedford, MA, USA)。
EGFR 抑制及降解分析使用總EGFR(L858R特異性或泛EGFR偵測) HTRF分析套組，基於FRET信號之定量來測定含有L858R突變或野生型之EGFR蛋白質的降解。使用pY1068 EGFR HTRF分析套組基於FRET信號之定量來測定泛-EGFR抑制。在獨立分析盤中，將測試化合物自10 μM之最高濃度在11點半對數滴定下一式兩份地添加至384孔盤中。對於各分析，使用多通道滴管將懸浮於分析培養基(RPMI 1640無酚紅培養基+10% FBS)中之12.5 μL細胞以下表8中各細胞株所示的細胞密度分配至384孔含有重複濃度範圍之測試化合物及DMSO對照的低體積白色HTRF微孔盤。將盤在37℃及5% CO2下保持6小時，然後根據細胞株及待分析EGFR突變體與磷酸化EGFR或總EGFR HTRF偵測抗體一起培育。在不存在測試化合物之情況下治療之細胞為陰性對照。陽性對照由含有所有試劑但無細胞之孔設定。在EnVision™多標記讀取器(PerkinElmer, Santa Clara, CA, USA)上獲得FRET信號。
表 8.  EGFR突變型癌細胞株：EGFR突變、來源供應商、實驗接種密度。
接種密度 ( 細胞 / 孔 )
細胞株 突變 供應商 總EGFR pY1068 EGFR
A431 EGFR WT ATCC 2000 10000
NCI-H3255 EGFR L858R NCI 1000 5000
NCI-H1975 EGFR L858R-T790M ATCC 10000 10000
NCI-H1975+CS EGFR L858R-C797S Horizon (CRISPR-in) 20000 20000
表9A：DC 50值
化合物 H1975 EGFR DC50 [nM] H3255 EGFR DC50 [nM] H1975 C797S 純系 EGFR DC50 [nM]
1
Figure 02_image639
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
2
Figure 02_image641
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-((R)-4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
3
Figure 02_image643
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***
4
Figure 02_image645
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺，異構體1 		***
5
Figure 02_image647
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙醯胺 		***
6
Figure 02_image649
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
7
Figure 02_image651
2-(6-(4-(6-(2-(1-(2-氯-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺，異構體1 		***      
8
Figure 02_image653
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
9
Figure 02_image655
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
10
Figure 02_image657
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
11
Figure 02_image659
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
12
Figure 02_image661
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
13
Figure 02_image663
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**
14
Figure 02_image665
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-氰基-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
15
Figure 02_image667
2-[6-[4-[4-[2-[4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
16
Figure 02_image669
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**
17
Figure 02_image671
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
18
Figure 02_image673
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***
19
Figure 02_image675
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙醯胺 		** *** ***
20
Figure 02_image677
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙醯胺 		** *** ***
21
Figure 02_image679
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
22
Figure 02_image681
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***
23
Figure 02_image683
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((R)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***
24
Figure 02_image685
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** *** ***
25
Figure 02_image687
2-(6-(4-(1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
26
Figure 02_image689
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-4-哌啶基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***
27
Figure 02_image691
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
28
Figure 02_image693
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
29
Figure 02_image695
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]吡唑-1-基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
30
Figure 02_image697
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(1-(1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***
31
Figure 02_image699
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***
32
Figure 02_image701
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
33
Figure 02_image703
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
34
Figure 02_image705
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** *** ***
35
Figure 02_image707
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
36
Figure 02_image709
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***
37
Figure 02_image711
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
38
Figure 02_image713
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-1-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**
39
Figure 02_image715
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**
40
Figure 02_image717
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
41
Figure 02_image719
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]吡咯啶-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***
42
Figure 02_image721
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[(3S)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]吡咯啶-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***
43
Figure 02_image723
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-2-((R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
44
Figure 02_image725
2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
45
Figure 02_image727
2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
46
Figure 02_image729
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** **
47
Figure 02_image731
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
48
Figure 02_image733
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
49
Figure 02_image735
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***
51
Figure 02_image737
5-[2-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)oxy]苯基]哌𠯤-1-基]乙醯基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲醯胺 		***
52
Figure 02_image739
5-[2-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲醯胺 		*** ***
52
Figure 02_image741
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺，異構體2 		***
53
Figure 02_image743
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙醯胺 		** ***
54
Figure 02_image745
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙醯胺 		***
55
Figure 02_image747
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
56
Figure 02_image749
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
57
Figure 02_image751
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
58
Figure 02_image753
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
59
Figure 02_image755
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]哌𠯤-1-基]甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** *** ***
60
Figure 02_image757
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		** ***
61
Figure 02_image759
2-[4,7-二氯-6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
62
Figure 02_image761
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(4-(4-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-4-基)氧基)哌啶-1-基)-4-側氧基丁基)哌𠯤-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
63
Figure 02_image763
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**      
64
Figure 02_image765
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
65
Figure 02_image767
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
66
Figure 02_image769
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***   
67
Figure 02_image771
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** **   
68
Figure 02_image773
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
表 9B
化合物 H1975 EGFR DC50 [nM] H3255 EGFR DC50 [nM] H1975 C797S 純系 EGFR DC50 [nM]
69
Figure 02_image775
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***    ***
70
Figure 02_image777
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***    ***
71
Figure 02_image779
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
72
Figure 02_image781
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(4-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
73
Figure 02_image783
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
74
Figure 02_image785
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
75
Figure 02_image787
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
76
Figure 02_image789
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-((R)-4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
77
Figure 02_image791
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
78
Figure 02_image793
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
79
Figure 02_image795
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(7-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)苯基)-4-氟-2H-吲唑-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
80
Figure 02_image797
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1R,4R)-5-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** ***   
81
Figure 02_image799
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1-(2-(4'-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-[1,1'-聯苯]-4-基)乙醯基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**      
82
Figure 02_image801
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-((1R,4R)-5-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*      
83
Figure 02_image803
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
84
Figure 02_image805
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** **   
85
Figure 02_image807
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(1-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)哌啶-4-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		** ***   
86
Figure 02_image809
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)哌啶-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**      
87
Figure 02_image811
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***    ***
88
Figure 02_image813
5-((2-(1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基)-7-氟-3-側氧基異吲哚啉-5-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)吡啶甲醯胺 		***    ***
89
Figure 02_image815
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
90
Figure 02_image817
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟吡啶-2-基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
91
Figure 02_image819
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***    **
92
Figure 02_image821
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌𠯤-1-基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***    ***
93
Figure 02_image823
5-[2-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-[1-[2-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]乙醯基]-4-哌啶基]吡啶-2-甲醯胺 		***
94
Figure 02_image825
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-((S)-4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
95
Figure 02_image827
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
96
Figure 02_image829
5-((2-(1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基)-7-氟-3-側氧基異吲哚啉-5-基)乙炔基)-N-(1-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)哌啶-4-基)吡啶甲醯胺 		***    ***
97
Figure 02_image831
5-((2-(1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基)-7-氟-3-側氧基異吲哚啉-5-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)吡啶甲醯胺 		*** *** ***
98
Figure 02_image833
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(((R)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** *** ***
99
Figure 02_image835
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(吡啶-2-基)乙醯胺 		***    ***
100
Figure 02_image837
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
101
Figure 02_image839
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2,6-二氟苯基)哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		**      
102
Figure 02_image841
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
103
Figure 02_image843
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2,6-二氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
104
Figure 02_image845
2-(6-(4-(6-(2-(1-(2-(二氟甲基)-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
105
Figure 02_image847
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(1-(1-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
106
Figure 02_image849
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
107
Figure 02_image851
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(2-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
108
Figure 02_image853
N-(1-(2-(1-(4-(((R)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)哌啶-4-基)-5-((7-氟-2-(1-((R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基)-3-側氧基異吲哚啉-5-基)乙炔基)吡啶甲醯胺 		***      
109
Figure 02_image855
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
110
Figure 02_image857
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(1-(4-(((S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
111
Figure 02_image859
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(1-(4-(((R)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
112
Figure 02_image861
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
113
Figure 02_image863
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.4]辛-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
114
Figure 02_image865
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
115
Figure 02_image867
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.4]辛-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
116
Figure 02_image869
2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
117
Figure 02_image871
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
118
Figure 02_image873
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
119
Figure 02_image875
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2,6-二氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺，異構體1 		***      
123
Figure 02_image877
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]哌𠯤-1-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
125
Figure 02_image879
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體2 		***      
127
Figure 02_image881
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
128
Figure 02_image883
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
129
Figure 02_image885
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
130
Figure 02_image887
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-5-氟-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體2 		***      
131
Figure 02_image889
2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
132
Figure 02_image891
2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
133
Figure 02_image893
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3-氟-1-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
134
Figure 02_image895
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
135
Figure 02_image897
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2,5-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
136
Figure 02_image899
2-[4-氯-6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
137
Figure 02_image901
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		**      
138
Figure 02_image903
2-[6-[4-[7-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
139
Figure 02_image905
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[5-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-3-氟-2-吡啶基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
140
Figure 02_image907
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
141
Figure 02_image909
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
142
Figure 02_image911
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[1-[1-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]吡唑-4-基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
143
Figure 02_image913
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
144
Figure 02_image915
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(4S)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
145
Figure 02_image917
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-6-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		**      
146
Figure 02_image919
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-哌啶-4-羰基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
147
Figure 02_image921
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		      ***
148
Figure 02_image923
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		      ***
149
Figure 02_image925
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-4-羥基-1-哌啶基]苯基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		      ***
150
Figure 02_image927
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-4-羥基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		      ***
151
Figure 02_image929
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙基]-4-羥基-1-哌啶基]-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		      ***
152
Figure 02_image931
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]-2-甲基-苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
153
Figure 02_image933
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[7-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮雜螺[2.5]辛-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-(2-吡啶基)乙醯胺 		**      
154
Figure 02_image935
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[7-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-氮雜螺[2.5]辛-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***    ***
155
Figure 02_image937
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[6-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-羰基]-2-氮雜螺[3.3]庚-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
156
Figure 02_image939
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
157
Figure 02_image941
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(1-(4-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*      
159
Figure 02_image943
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,6-二側氧基-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
160
Figure 02_image945
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[7-[2-[1-[4-(2,6-二側氧基-3-哌啶基)-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
161
Figure 02_image947
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[(2s,6r)-1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-2,6-二甲基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
162
Figure 02_image949
2-[6-[4-[2-[2-[4-胺基-1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
163
Figure 02_image951
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
164
Figure 02_image953
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-氮雜環庚烷-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體A1 		**      
165
Figure 02_image955
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-氮雜環庚烷-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體A2 		***      
166
Figure 02_image957
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-氮雜環庚烷-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體B1 		**      
167
Figure 02_image959
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-氮雜環庚烷-4-基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體B2 		**      
168
Figure 02_image961
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		**      
169
Figure 02_image963
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2,6-二氯-4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
170
Figure 02_image965
2-[6-[4-[7-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
171
Figure 02_image967
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氰基-4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*      
172
Figure 02_image969
2-[6-[4-[2-[2-[1-[2-氯-4-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		***      
173
Figure 02_image971
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙醯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺，異構體1 		***      
174
Figure 02_image973
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(7-(2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		***      
175
Figure 02_image975
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***   
176
Figure 02_image977
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(4-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)-4-側氧基丁基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
177
Figure 02_image979
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)環己基)乙醯基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
178
Figure 02_image981
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)-2-側氧基乙基)哌𠯤-1-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺 		*** ***   
179
Figure 02_image983
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***   
180
Figure 02_image985
2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙醯基]哌𠯤-1-基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 		*** ***   
在上文表中，***為＜50 nM；**為50-150 nM；且*為＞150 nM
表 10A 人類癌細胞株之降解
化合物編號 細胞株 pEGFR (IC 50) nM tEGFR (DC 50) nM
1 A431 (野生型) ＞10000 ＞10000
H3255 (L858R) 5 5
H1975 (L858R-T790M) 9 8
H1975+CS (L858R-T790M-C797S) 13 14
2 A431 (野生型)    ＞10000
H3255 (L858R) 16 12
H1975 (L858R-T790M) 15 12
H1975+CS (L858R-T790M-C797S) 59 38
3 A431 (野生型)    ＞10000
H3255 (L858R) 8 8
H1975 (L858R-T790M) 11 10
H1975+CS (L858R-T790M-C797S) 19 33
4 A431 (野生型)      
H3255 (L858R) 16 17
H1975 (L858R-T790M) 15 15
H1975+CS (L858R-T790M-C797S) 22 33
5 A431 (野生型)    ＞10000
H3255 (L858R) 19 22
H1975 (L858R-T790M) 12 11
H1975+CS (L858R-T790M-C797S) 22 23
7 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 17 15
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
8 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 22 23
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
9 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 30 24
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
10 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 39 38
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
11 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 22 20
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
12 A431 (野生型)      
H3255 (L858R)      
H1975 (L858R-T790M) 20 15
H1975+CS (L858R-T790M-C797S)      
表 10B 表現 EGFR 變異體之 Ba/F3 細胞株的生長抑制
化合物 編號 細胞株 CTGlo (GI 50) nM
1 WT 486
L858R 16
L858R-T790M 16
L858R-C797S 7
L858R-T790M-C797S 8
L858R-L718Q 23
L858R-T790M-L718Q 36
L858R-L792H 8
L858R-T790M-L792H 17
2 WT 269
L858R 4
L858R-T790M 9
L858R-C797S 3
L858R-T790M-C797S 6
L858R-L718Q 4
L858R-T790M-L718Q 22
L858R-L792H 4
L858R-T790M-L792H 9
3 WT 248
L858R 3
L858R-T790M 9
L858R-C797S 2
L858R-T790M-C797S 3
L858R-L718Q   
L858R-T790M-L718Q   
L858R-L792H   
L858R-T790M-L792H   
7 WT   
L858R   
L858R-T790M   
L858R-C797S   
L858R-T790M-C797S 10
L858R-L718Q 17
L858R-T790M-L718Q 45
L858R-L792H 7
L858R-T790M-L792H 23
8 WT   
L858R   
L858R-T790M   
L858R-C797S   
L858R-T790M-C797S 13
L858R-L718Q 2016
L858R-T790M-L718Q 403
L858R-L792H 213
L858R-T790M-L792H 45
9 WT   
L858R   
L858R-T790M   
L858R-C797S   
L858R-T790M-C797S 16
L858R-L718Q 23
L858R-T790M-L718Q 82
L858R-L792H 10
L858R-T790M-L792H 33
11 WT   
L858R   
L858R-T790M   
L858R-C797S   
L858R-T790M-C797S 11
L858R-L718Q 22
L858R-T790M-L718Q 50
L858R-L792H 9
L858R-T790M-L792H 22
IX. 合成方法式I、II、III或IV之化合物可含有一或多個不對稱中心且因此可以外消旋體、外消旋混合物、單一鏡像異構體、非鏡像異構體混合物及個別非鏡像異構體形式存在。視分子上之各種取代基之性質而定，可存在額外不對稱中心。各個此類不對稱中心將獨立地產生兩種光學異構體，且意欲將呈混合物形式及呈純化合物或部分純化化合物形式之所有可能光學異構體及非鏡像異構體包括於本發明中。本發明意欲涵蓋此等化合物之所有此類異構形式。可如此項技術中已知藉由適當修改本文中所揭示之方法實現此等非鏡像異構體之獨立合成或其層析分離。其絕對立體化學可藉由(若必要)用含有已知絕對組態之不對稱中心之試劑衍生之結晶產物或結晶中間物的x射線結晶學加以判定。必要時，可分離化合物之外消旋混合物，以使得分離個別鏡像異構物。可藉由此項技術中熟知之方法進行分離，諸如使化合物之外消旋混合物與對映異構性純化合物偶合，形成非對映異構混合物，隨後藉由諸如分步結晶或層析之標準方法分離個別非鏡像異構體。
在提供光學純鏡像異構體之實施例中，光學純鏡像異構體意謂化合物含有＞ 90重量%之所要異構體，具體而言＞ 95重量%之所要異構體，或更具體而言＞99重量%之所要異構體，該重量%係基於化合物之異構體之總重量。可藉由對掌性選擇性合成或藉由分離鏡像異構體來製備對掌性純化合物或對掌性增濃化合物。可對最終產物或替代地對合適之中間物進行鏡像異構體之分離。
式I化合物之製備進一步更詳細地描述於下文流程中。
Figure 02_image987
一般而言，亦可在某些情況下修改用於合成式I化合物之步驟順序。
式II化合物之製備進一步更詳細地描述於下文流程中。
Figure 02_image989
Figure 02_image991
一般而言，亦可在某些情況下修改用於合成式I化合物之步驟順序。在某些情況下，可應用或修改針對式I或式II所展示之步驟順序以用於合成式III及式IV之化合物。
化合物之離析及純化若需要，則離析及純化本文所述之化合物及中間體可藉由任何合適之分離或純化程序來實現，諸如過濾、萃取、結晶、管柱層析法、薄層層析法、厚層層析法、製備型低或高壓液相層析法或此等程序之組合。合適之分離及離析程序之特定說明可參考本文中以下製備及實例來得到。然而，當然亦可使用其他等效分離或離析程序。可使用對掌性HPLC分離式I、II、III或IV之對掌性化合物之外消旋混合物。亦可使用對掌性HPLC分離對掌性合成中間物之外消旋混合物。
式 I 、 II 、 III 或 IV 之化合物之鹽在式I、II、III或IV之化合物為鹼性之情況下，其可轉化成對應酸加成鹽。轉化係藉由用至少化學計量之量的諸如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似物之適當酸及諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、柳酸及其類似物之有機酸進行處理來完成。特定鹽為反丁烯二酸鹽。通常，將游離鹼溶解於諸如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇及其類似物之惰性有機溶劑中，且將酸添加於相似溶劑中。溫度保持在0℃與50℃之間。所得鹽自發地沈澱，或可用極性較小之溶劑將其帶出溶液。
在其製備未描述於實例中之情況下，式I、II、III或IV之化合物以及所有中間物可根據類似方法或根據本文中所闡述之方法製備。起始物質可商購，在此項技術中已知或可藉由此項技術中已知之方法或與該等方法類似之方法製備。
應瞭解，本發明中之通式I、II、III或IV之化合物可在官能基處衍生以提供能夠活體內返回轉化成親本化合物之衍生物。
X. 實驗程序 縮寫
ABPR 自動背壓調節器
AcCl 乙醯氯
ACN 乙腈
AIBN 偶氮二異丁腈
AlCl 3 三氯化鋁
Ag 2CO 3 碳酸銀
Aq. 水性
AcOH 乙酸
BBr 3 三溴硼烷
B 2pin 2 雙(頻哪醇基)二硼
BINAP 2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘
BnBr 溴甲苯
Boc 2O 二碳酸二-三級丁酯
Br 2 溴氣體
ClCOOEt 氯甲酸乙酯
CAN 硝酸鈰銨
CDI 羰基二咪唑
CuI 碘化亞銅
CCl 4 四氯化碳
CoCl 2 氯化鈷(II)
CO 一氧化碳
CO 2 二氧化碳
COMU (1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)二甲胺基-(N-𠰌啉基)-碳正離子六氟磷酸鹽
Cu 銅
CH 3CN 乙腈
CHCl 3 氯仿；三氯甲烷
CH 2Cl 2、DCM 二氯甲烷(Methylene chloride)；二氯甲烷(dichloromethane)
Cs 2CO 3 碳酸銫
CsF 氟化銫
DAST 三氟化二乙基胺基硫
DBU 1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯
DCE 二氯乙烷；伸乙基氯
DIAD 偶氮二羧酸二異丙酯
DIEA、DIPEA N,N-二異丙基乙基胺
DMA；DMAc N,N-二甲基乙醯胺
DMAP 4-二甲基胺基吡啶
DMF N,N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲亞碸
DPPP 1,3-雙(二苯膦基)丙烷
EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺
Et 3SiH 三乙基矽烷
EtOAc；EA 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
FeBr 3 溴化鐵(III)
HATU 3-氧化物六氟磷酸1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓
HCl 鹽酸
HCOONH 4 甲酸銨
H 2 氫氣
H 2O 水
H 2O 2 過氧化氫
HCOOH 甲酸
H 3PO 2 次磷酸
H 2SO 4 硫酸
HOBt 羥基苯并三唑
InCl 3 氯化銦(III)
IPA 異丙醇
KHCO 3 碳酸氫鉀
KOAc 乙酸鉀
KOH 氫氧化鉀
KO tBu 三級丁醇鉀
K 2CO 3 碳酸鉀
KHSO 4 硫酸氫鉀
KI 碘化鉀
KOCN 氰酸鉀
KMnO 4 過錳酸鉀
K 3PO 4 磷酸三鉀
KSCN 硫氰酸鉀
Lac 乳酸
LCMS 液相層析質譜法
LiAlH 4 氫化鋰鋁
LiHMDS 雙(三甲矽)醯胺化鋰
LiOH 氫氧化鋰
LDA 二異丙胺鋰
Me 甲基
MeCN 乙腈
MeI 碘代甲烷
MeOH 甲醇
MnO 2 二氧化錳
MgCl 2 氯化鎂
MgSO 4 硫酸鎂
MsCl 甲烷磺醯氯
MTBE 甲基三級丁基醚
NH 4OAc 乙酸銨
N 2 氮氣
NaCN 氰化鈉
NH 4Cl 氯化銨
NH 4OH 氫氧化銨
NH 2OH 羥胺
NaBH(OAc) 3 三乙醯氧基硼氫化鈉
NaBH 4 硼氫化鈉
NaClO 2 亞氯酸鈉
Na 2SO 4 硫酸鈉
NaSMe 甲硫醇鈉
Na 2S 2O 3 硫代硫酸鈉
NaH 氫化鈉
NaOH 氫氧化鈉
NaHCO 3 碳酸氫鈉
Na 2CO 3 碳酸鈉
NaNO 2 亞硝酸鈉
NaO i Pr 異丙醇鈉
NaH 2PO 4 磷酸二氫鈉
NaIO 4 高碘酸鈉
NBS N-溴代丁二醯亞胺
NH 3 氨
N 2H 2 二氮烯
N 2H 4 肼
NaNO 2 亞硝酸鈉
NMP N-甲基-2-吡咯啶酮
OsO 4 四氧化鋨
Pd(OAc) 2 乙酸鈀(II)
Pd(PPh 3) 2Cl 2 雙(三苯膦)二氯化鈀(II)
Pd(PPh 3) 4 肆(三苯膦)鈀(0)
Pd(dppf)Cl 2 [1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)
Pd/C 鈀/碳
Pd 2(dba) 3 參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)
PhMe 甲苯
PhNTF 2 雙(三氟甲烷磺醯基)苯胺
PPh 3 三苯膦
P(pMeOPh) 3 參(4-甲氧基苯基)膦
PCy 3 三環己基膦
PET ether 石油醚(petroleum ether)
PMB 對甲氧基苯甲基
POBr 3 溴化磷；氧溴化磷
POCl 3 氯化磷；氧氯化磷
PivOH 特戊酸
PtBu 3 三級丁基膦
PtO 2 氧化鉑
PTSA 對甲苯磺酸
Py、py 吡啶
PyBOP 六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶鏻
RBF 圓底燒瓶
RP 逆相
rpm 轉/分鐘
RT、rt 室溫
RuPhos 2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯苯
SFC 超臨界流體層析
SOCl 2 亞硫醯氯
T3P 1-丙烷膦酸酐
TBAB 溴化四丁基銨
TEA 三乙胺
tBuBrettPhos 2-(二-三級丁基膦基)-2',4',6'-三異丙基-3,6-二甲氧基-1,1'-聯苯
tBuOH 三級丁醇
tBuONO 亞硝酸三級丁酯
tBuXPhos 2-二-三級丁基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯
tBuXPhos Pd G3 第3代 tBuXPhos鈀預催化劑
TBAI 碘化四丁銨
TBTU 四氟
Figure 111119753-A0304-1
酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基銨
Tf 2O 三氟甲磺酸酐
TFA 三氟乙酸
TFBen 三甲酸苯-1,3,5-三酯
TMSCN 氰化三甲基矽烷
THF 四氫呋喃
TLC 薄層層析
XantPhos XPhos 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基𠳭烯 2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯
Zn 鋅
合成實例提供以下實例以說明本發明。其不應視為認為其限制本發明之範疇，而其僅為本發明之代表。
中間物 流程 1 ：
Figure 02_image993
通用程序 -A向 1-1(1 mmol)及 1-2(2 mmol)於二㗁烷(3 mL)中之混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(2 mmol)。將所得溶液在密封管中在70-110℃下加熱24小時以產生 1-3。接著使反應混合物冷卻至室溫，用水稀釋且用乙酸乙酯萃取。將合併之乙酸乙酯萃取物用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(矽石，梯度：0-3%甲醇/二氯甲烷)來純化殘餘物以得到 1-3。
中間物 4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image995
遵循通用程序A (N,N-二異丙基乙基胺/二㗁烷)，由4-(4-胺基苯基)-1-哌啶甲酸三級丁酯(CAS號170011-57-1)合成4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯。 產率 -45%; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.75 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.16 Hz, 2H), 6.60 (d, J = 7.88 Hz, 2H), 5.64 (d, J = 6.96 Hz, 1H), 4.28-4.24 (m, 1H), 4.07-4.00 (m, 2H ), 2.79-2.64 (m, 4H), 2.53-2.48 (m, 2H), 2.11-2.05 (m, 1H), 1.89-1.81 (m, 1H), 1.71-1.64 (m, 2H0, 1.40-1.34 (m, 10H); LC MS: ES+ 386.3。
中間物 3-((3-( 哌啶 -4- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image997
遵循通用程序A，由4-[3-胺基苯基]-1-哌啶甲酸三級丁酯(CAS號387827-19-2)合成4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯。產率：25% LCMS (ESI+): 388.2 (M+H) 中間物 3-((6-( 哌啶 -4- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image999
遵循通用程序，由4-(5-胺基吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(CAS號885693-48-1)合成4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸三級丁酯：產率：14%，LCMS (ESI+)：389.2 (M+H)。
流程 2 ：
Figure 02_image1001
通用程序 B ：在室溫下向溶解於甲醇(0.1 M)中之 2-1中添加鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，5當量)且將反應混合物在40℃下加熱2小時。將揮發物在減壓下蒸發以得到 2-2。
中間物3-((4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1003
遵循通用程序(通用程序-B)，由4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯合成3-((4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽。 產率 -88%;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.84 (brs, 1H), 8.77 (brs, 1H), 6.95 (d, J = 8.44 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 8.48 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 11.4, 4.72 Hz, 1H), 3.35-3.29 (m, 2H), 2.99-2.91 (m, 2H), 2.71-2.53 (m, 3H), 2.10-2.05 (m, 1H), 1.89-1.71 (m, 5H); LC MS: ES+ 288.2。
中間物 3-((3-( 哌啶 -4- 基 ) 苯基 ) 胺基 ) 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1005
遵循通用程序B，由4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯合成3-((3-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽。產率：76% 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 9.00 (br.s, 1H), 8.85 (br. S, 1H), 1.02 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.57-6.55 (m, 2H), 6.47 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.32 (dd, J= 11.2 Hz, 4.6 Hz, 1H), 3.45-3.39 (m, 2H), 2.80-2.65 (m, 2H), 2.79-2.67 (m, 2H), 2.61-2.53 (M, 1H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.94-1.80 (m, 5H)。LCMS (ESI+): 288.2 (M+H)。
中間物 3-((6-( 哌啶 -4- 基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 ) 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1007
遵循通用程序B，由4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸三級丁酯合成3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽。產率：83%, LCMS (ESI+): 289.0 (M+H)。
藉由對掌性 SFC 分離來合成中間物 4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯及 4-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1009
藉由對掌性SFC分離4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(4 g，10.32 mmol)得到兩組溶離份。
以下製備型標度SFC方法用於分離鏡像異構體： 管柱：Chiralpak ID (250×21 mm) 5 μM 流動：35 g/min 流動相：45% CO 2+ 55%異丙醇 ABPR：100巴 溫度：35℃
將較早溶離之溶離份凍乾以得到4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.44 g，3.70 mmol，35.88%產率，99.66%鏡像異構體過量，對掌性SFC Rt = 4.31 min)。 1H NMR (400 MHz,DMSO-D6) δ 10.77 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.1 Hz, 2H), 6.60 (d, J=8.2 Hz, 2H), 5.68-5.66 (m, 1H), 4.29-4.23 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 2H), 2.78-2.54 (m, 5H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.89-1.83 (m, 1H), 1.69-1.66 (m, 2H), 1.40-1.36 (m 11H)。
將隨後溶離份凍乾以得到4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.56 g，3.95 mmol，38.24%產率，98.06%鏡像異構體過量，對掌性SFC Rt = 5.96 min)。 1H NMR (400 MHz,DMSO-D6) δ 10.77 (s, 1H), 6.94 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.60 (d, J=8.3 Hz, 2H), 5.68-5.66 (m, 1H), 4.29-4.23 (m, 1H), 4.05-4.02 (m, 2H), 2.78-2.58 (m, 5H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.87-1.83 (m, 1H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.40-1.35 (m 11H)。
合成 2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三氟乙酸鹽及 2-[4-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三氟乙酸鹽 2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1011
向3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(2.0 g，6.96 mmol)於DMF (20 mL)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(3.52 g，34.80 mmol，4.85 mL)，隨後添加2-溴乙酸三級丁酯(1.49 g，7.66 mmol，1.12 mL)且在室溫下攪拌反應混合物16 h。添加水(75 mL)且用乙酸乙酯(3×150 mL)萃取產物。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析使用30%乙酸乙酯-石油醚作為溶離劑來純化殘餘物以得到呈綠色固體狀之2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.40 g，3.36 mmol，48.33%產率)。
獲得 (S)-2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯及 (R)-2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯之 SFC 分離條件
Figure 02_image1013
使用對掌性SFC方法，使用Chiralcel OD-H管柱(250 mm × 30 mm；5微米)用40%異丙醇/CO2溶離(流速：3 ml/min；出口壓力：100巴)來解析外消旋中間物2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.40 g，3.36 mmol)。將第一組溶離之溶離份在減壓下蒸發以得到(S)-2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(500 mg，36%產率，Rt = 3.36 min，96.22%純度，＞99%鏡像異構體過量)。將第二組溶離份在減壓下蒸發以得到500 mg之(R)-2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(500 mg，36%產率，Rt = 4.84 min，純度96.22%，99.04%鏡像異構體過量)。第一次溶離之LCMS (m/z：402.4 [M+H])，第二次溶離之LCMS (m/z：402.2 [M+H])。
2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三氟乙酸鹽
Figure 02_image1015
將2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(500 mg，1.25 mmol)溶解於二氯甲烷(5 mL)中且在0℃下逐滴添加三氟乙酸(12.26 g，107.51 mmol，8 mL)，且將反應物在室溫下攪拌3 h。在反應完成之後，濃縮反應混合物。用甲醇:MTBE混合物(1:4)濕磨材料，收集固體且將揮發物在減壓下蒸發以得到呈灰白色固體狀之2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽(600 mg，1.24 mmol，99.6%產率)。LCMS (ESI+): 346.1 (M+H)
2-[4-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸 : 三氟乙酸鹽
Figure 02_image1017
以與 2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三氟乙酸鹽類似之方式處理2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(500.00 mg，1.25 mmol)以得到呈灰白色固體狀之2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽(600 mg，1.24 mmol，99.63%產率)。LCMS (ESI+): 346.1 (M+H)
合成中間物 3-(3- 氟 -4- 哌啶 -4- 基 - 苯胺基 )- 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1019
步驟 -1 ： 製備 4-(4- 胺基 -2- 氟 - 苯基 )-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1021
將碳酸鈉(6.14 g，57.89 mmol，2.43 mL)添加至4-溴-3-氟-苯胺(5.00 g，26.3 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(8.95 g，29.0 mmol)於水(12 mL)、THF (60 mL)及甲醇(24 mL)中之經攪拌溶液中且將燒瓶徹底用氬氣吹掃。添加PdCl 2(dppf).二氯甲烷(430 mg，526 µmol)且將反應混合物用氮氣脫氣且接著在80℃下加熱12 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機萃取物用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(15%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈淡黃色固體狀之4-(4-胺基-2-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(6.1 g，20.9 mmol，79%產率)。LCMS: ESI+ 293 (M+Hs)
步驟 -2 ： 製備 4-[4-(2,6- 雙苯甲氧基 - 吡啶 -3- 基胺基 )-2- 氟 - 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1023
將碳酸銫(19.73 g，60.54 mmol)添加至4-(4-胺基-2-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5.9 g，20.2 mmol)及2,6-二苯甲氧基-3-碘-吡啶(9.26 g，22.2 mmol)於t-BuOH (60 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加Pd 2(dba) 3(924 mg，1.01 mmol)、Ruphos (942 mg，2.02 mmol)。將所得混合物在100℃加熱18 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機萃取物用水及鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(15%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈淡黃色固體狀之4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-氟-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5.9 g，10.1 mmol，50%產率)。LCMS: ES+ 582 (M+H +)
步驟 -3 ： 製備 4-[4-(2,6- 二側氧基 - 哌啶 -3- 基胺基 )-2- 氟 - 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1025
將10% Pd-C (50%濕，4.6 g)添加至4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-氟-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(4.6 g，7.91 mmol)於乙酸乙酯(40 mL)中之經攪拌的經氮氣脫氣之溶液中。將所得混合物在環境溫度下在氫氣球壓力下攪拌20 h。將反應混合物經由小矽藻土墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之濾液在減壓下蒸發且藉由管柱層析(40%乙酸乙酯/己烷)來純化以得到呈藍色固體狀之4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.6 g，6.41 mmol，81%產率)。LCMS: ES+ 406 (M+H +)。
步驟 -4 ： 製備 3-(3- 氟 -4- 哌啶 -4- 基 - 苯胺基 )- 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1027
在10℃下，將二㗁烷-HCl (4 M，30 mL，130 mmol)添加至4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.3 g，3.21 mmol)中。將所得混合物升溫至環境溫度且攪拌16 h。將反應混合物在減壓下濃縮，用乙醚濕磨且凍乾以得到呈綠色固體狀之3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮(840 mg，2.73 mmol，85.25%產率)。LC MS: ES+ 306 (M+H +). 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.79 (s, 1H), 9.00 (br s, 1H), 8.85-8.83 (m, 1H), 6.96-6.91 (m, 1H), 6.50-6.45 (m, 2H), 4.34-4.30 (m, 1H), 3.32-3.29 (m, 2H), 2.98-2.93 (m, 3H), 2.77-2.69 (m, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.08-2.05 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 5H)。
中間物合成 3-(2- 氟 -4- 哌啶 -4- 基 - 苯胺基 )- 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1029
步驟 -1 ： 製備 4-(4- 胺基 -3- 氟 - 苯基 )-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1031
將碳酸鈉(6.14 g，57.89 mmol)添加至4-溴-2-氟-苯胺(5.00 g，26.3 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(8.95 g，29.0 mmol)於水(12 mL)、THF (60 mL)及甲醇(24 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加PdCl 2(dppf).二氯甲烷(430 mg，526 µmol)。將所得混合物在80℃下加熱12 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機萃取物用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(15%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈淡黃色固體狀之4-(4-胺基-3-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(6.1 g，20.9 mmol，79%產率)。LC MS: ES+ 293 (M+H +)。
步驟 -2 ： 製備 4-[4-(2,6- 雙苯甲氧基 - 吡啶 -3- 基胺基 )-3- 氟 - 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1033
將碳酸銫(19.73 g，60.54 mmol)添加至4-(4-胺基-3-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5.9 g，20.2 mmol)及2,6-二苯甲氧基-3-碘-吡啶(9.26 g，22.2 mmol)於t-BuOH (60 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加Pd 2(dba) 3(924 mg，1.01 mmol)及RuPhos (942 mg，2.02 mmol)。將所得混合物在100℃加熱18 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機萃取物用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(10%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈淡黃色固體狀之4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-3-氟-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5.9 g，10.1 mmol，50%產率)。LC MS: ES+ 582 (M+H +)。
步驟 -3 ： 製備 4-[4-(2,6- 二側氧基 - 哌啶 -3- 基胺基 )-3- 氟 - 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1035
將10% Pd-C (50%濕，4.6 g)添加至4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-3-氟-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(4.6 g，7.91 mmol)於乙酸乙酯(40 mL)中之經攪拌經脫氣溶液中。將所得混合物在環境溫度下在氫氣球壓力下攪拌20 h。將反應混合物經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之濾液在減壓下蒸發且藉由管柱層析(40%乙酸乙酯-己烷)來純化以得到呈藍色固體狀之4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.6 g，6.41 mmol，81%產率)。LC MS: ES+ 406 (M+H +)。
步驟 -4 ： 製備 3-(2- 氟 -4- 哌啶 -4- 基 - 苯胺基 ) 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1037
在10℃下，將二㗁烷HCl (4 M，10 mL，40 mmol)添加至4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.3 g，3.21 mmol)中。將所得混合物升溫至環境溫度且攪拌16 h。將反應混合物在減壓下濃縮，用乙醚濕磨且凍乾以得到呈綠色固體狀之3-[2-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(840 mg，2.73 mmol，85%產率)。LC MS: ES+ 306 (M+H +)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.82 (s, 1H), 8.85 (br s, 1H), 8.69-8.68 (m, 1H), 6.92-6.89 (m, 1H), 6.83-6.77 (m, 2H), 4.40-4.36 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 2H), 2.98-2.90 (m, 2H), 2.76-2.71 (m, 2H), 2.58-2.56 (m, 1H), 2.05-1.73 (m, 6H)。
合成 (S)-4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶鹽酸鹽及 (R)-4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶鹽酸鹽 步驟 1 ： 對掌性分離以得到 4-(4-(((3S)-2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯及 4-(4-(((3R)-2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1039
使用以下方法藉由對掌性SFC分離外消旋4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(5.96 g)。 管柱：ChiralCel OJ-H (250×21 mm)，5 μm矽石 流動：70 mL/min 流動相：65% CO2 + 35%異丙醇 ABPR：100巴 溫度：35℃
SFC分離得到兩組溶離份。將較早溶離之溶離份凍乾以得到4-(4-(((3S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.51 g，42%產率，＞99%鏡像異構體過量，對掌性SFC滯留時間= 0.91 min)。
將隨後溶離之溶離份凍乾以得到4-(4-(((3R)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.69 g，45%產率，99.6%鏡像異構體過量，對掌性SFC滯留時間= 1.26 min)。
使用以下條件藉由分析性對掌性SFC來測定兩種經分離之異構體的滯留時間及鏡像異構體過量： 管柱：ChiralCel OJ-H (100× 4.6 mm) 流速：4 mL/min 壓力：100巴 溫度：40℃
步驟 2 ： 合成 (S)-4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶鹽酸鹽
Figure 02_image1041
使用通用程序B自4-(4-(((3S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得(S)-4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 306.3 [M+H +]
步驟 3 ： 合成 (R)-4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶鹽酸鹽
Figure 02_image1043
使用通用程序B自4-(4-(((3S)-2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得(R)-4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 306.3 (M+H +)
中間物： 2 -[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ] 乙酸 步驟 -1 ： 製備 2-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1045
將3-溴哌啶-2,6-二酮(13.9 g，72.4 mmol)，隨後碳酸氫鈉(12.2 g，145 mmol)添加至密封管中之2-(4-胺基苯基)乙酸三級丁酯(10.0 g，48.3 mmol)於DMF (80 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物在70℃下加熱24 h。將反應混合物用水稀釋且用乙酸乙酯萃取。將合併之有機萃取物用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(35%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到2-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]乙酸三級丁酯(7.5 g，23.6 mmol，49%產率)。LC MS: ES+ 319 (M+H +)
步驟 -2 ：製備 2-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ] 乙酸
Figure 02_image1047
在0℃下，將TFA (8.47 mL，110 mmol)逐滴添加至向2-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]乙酸三級丁酯(3.5 g，10.99 mmol)於二氯甲烷(45 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物升溫至環境溫度且攪拌5 h。將反應混合物在減壓下濃縮，用MTBE濕磨且凍乾以得到呈灰色固體狀之2-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]乙酸(2.9 g，10.9 mmol，99%產率)。LC MS: ES+ 263 (M+H +)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.79 (s, 1H), 6.97 (d, J=8.36 Hz, 2H), 6.63 (d, J=8.36 Hz, 2H), 4.32-4.28 (m, 1H), 3.37 (s, 2H), 2.78-2.71 (m, 1H), 2.61-2.54 (m, 1H), 2.13-2.07 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 1H)
中間物：合成 1-(6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 ) 六氫嘧啶 -2,4- 二酮
Figure 02_image1049
步驟 1 ： 製備 6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 胺 :
Figure 02_image1051
在0℃下，將氫化鈉(60%於油中，2.38 g，59.4 mmol)分批添加至6-溴-1H-吲唑-3-胺(7 g，33.0 mmol，439 µL)於DMF (150 mL)中之經攪拌溶液中且將混合物攪拌40 min。在冷卻下逐滴添加碘甲烷(5.15 g，36.3 mmol，2.26 mL)且使所得混合物升溫至環境溫度且攪拌16 h。將反應混合物用飽和氯化銨溶液淬滅且用乙酸乙酯萃取。將合併之有機萃取物用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(50%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2 g，18.6 mmol，56%產率)。LC MS: ES+ 227 (M+H +)
步驟 -2 ： 製備 3-[(6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 ) 胺基 ] 丙酸乙酯 ：
Figure 02_image1053
在80℃下經5天將丙烯酸乙酯(14.0 g，139 mmol)以5個部分(各2.8 g)添加至6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺(4.2 g，18.6 mmol)、[DBU][Lac] (藉由在環境溫度攪拌在攪拌的情況下將DBU及乳酸之等莫耳混合物混合16 h而製備，2.09 g，14.9 mmol)之混合物中。在完成(LCMS)之後，將反應混合物用次氯酸鈉(30%水溶液，5 mL)淬滅且用乙酸乙酯稀釋。將合併之有機物用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(50%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)胺基]丙酸乙酯(2.9 g，8.89 mmol，48%產率)。LCMS (ESI+): 327 (M+H +)。
步驟 -3 ： 製備 3-[(6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 )- 氰基 - 胺基 ] 丙酸乙酯 ：
Figure 02_image1055
在環境溫度下，將無水乙酸鈉(1.46 g，17.8 mmol)，隨後溴化氰(1.41 g，13.3 mmol)添加至3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)胺基]丙酸乙酯(2.9 g，8.89 mmol)於乙醇(40 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物加熱至回流持續48 h。將反應混合物在減壓下濃縮且用乙酸乙酯稀釋。將合併之有機物用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(45%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-胺基]丙酸乙酯(1.65 g，4.70 mmol，53%產率)。LC MS: ES+ 352 (M+H +)。
步驟 -4 ： 製備 3-[(6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 )- 胺甲醯基 - 胺基 ] 丙酸乙酯 ：
Figure 02_image1057
在環境溫度下，將(1E)-乙醛肟(1.01 g，17.1 mmol)，隨後氯化銦(III) (126 mg，569 µmol)添加至3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-氰基-胺基]丙酸乙酯(2 g，5.69 mmol)於甲苯(60 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物加熱至回流持續1 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水及鹽水洗滌。有機物經無水硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由管柱層析(60%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-胺甲醯基-胺基]丙酸乙酯(1.4 g，3.79 mmol，67%產率)。LC MS: ES+ 370 (M+H +)。
步驟 -5 ： 製備 1-(6- 溴 -1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 ) 六氫嘧啶 -2,4- 二酮
Figure 02_image1059
在環境溫度下，將曲拉通(Triton)-B (40%於甲醇中，2.4 mL，5.69 mmol)逐滴添加至3-[(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-胺甲醯基-胺基]丙酸乙酯(1.40 g，3.79 mmol)於MeCN (70 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物在環境溫度下攪拌45分鐘。將反應混合物在真空下濃縮且用乙酸乙酯稀釋。將有機層用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(30%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈白色固體狀之1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氫嘧啶-2,4-二酮(910 mg，2.81 mmol，74%產率)。LC MS: ES+ 324 (M+H +)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.60 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.26-7.23 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.93 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.76 (t, J=6.6 Hz, 2H)。
製備 1-(1- 甲基 -6-( 哌啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -3- 基 ) 二氫嘧啶 -2,4-(1H,3H)- 二酮鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1061
將1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氫嘧啶-2,4-二酮(1.25 g，3.87 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(2.39 g，7.74 mmol)之溶液用N 2鼓泡10 min。接著，添加氟化銫(1.18 g，7.74 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(566 mg，774 µmol)且將混合物在85℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至環境溫度，用乙酸乙酯稀釋且經由矽藻土/矽膠過濾。在用乙酸乙酯洗滌之後，用水稀釋濾液且分離層，且將有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。藉由正相層析(5-100%乙酸乙酯/己烷)來純化殘餘物以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.04 g，2.44 mmol，63%產率)。LCMS (ESI+): 426.3 (M+H +)
步驟 2 ： 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1063
將鈀(10%於碳上，487型，乾燥，1.08 g，1.02 mmol)添加至4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.44 g，3.38 mmol)於甲醇(30 mL)中之溶液中，且將混合物在環境溫度下在氫氣球氛圍下攪拌。在24 h之後，將反應混合物經由矽藻土墊過濾，用二氯甲烷/甲醇(1:1)之混合物洗滌且在真空中濃縮以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.42 g，3.32 mmol，98%產率)。LCMS (ESI+): 372.3 (M - 三級丁基+ H +)。
步驟 3 ： 1-(1- 甲基 -6-( 哌啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -3- 基 ) 二氫嘧啶 -2,4(1H,3H)- 二酮 鹽酸鹽
Figure 02_image1065
使用三級丁氧基羰基保護基團去保護之通用方法B，自4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 328.1 (M+H +)。
合成 1-((4-( 哌啶 -4- 基 ) 苯基 ) 胺基 )-3- 氮雜雙環 [3.1.1] 庚烷 -2,4- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1067
步驟 -1 ： 製備 3- 氰基 -3-(4- 碘 - 苯胺基 )- 環丁烷甲酸甲酯
Figure 02_image1069
將4-碘苯胺(13.2 g，60.1 mmol)，隨後氰化三甲基矽烷(10.8 g，109 mmol，13.7 mL)添加至3-側氧基丁烷甲酸甲酯(7 g，54.6 mmol)於甲醇(270 mL)中之經攪拌溶液中。所得混合物在環境溫度下攪拌16小時。在減壓下濃縮反應混合物且藉由矽膠層析(5-10%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到呈灰白色固體狀之3-氰基-3-(4-碘苯胺基)環丁烷甲酸甲酯(15.2 g，42.7 mmol，78%產率)。LCMS ES+ 357 (M+H +)
步驟 -2 ： 製備 3- 胺甲醯基 -3-(4- 碘 - 苯胺基 )- 環丁烷甲酸甲酯 ：
Figure 02_image1071
在環境溫度下，將乙醛肟(4.98 g，84.2 mmol)，隨後氯化銦(62.1 mg，281 µmol)添加至3-氰基-3-(4-碘苯胺基)環丁烷甲酸甲酯(10 g，28.1 mmol)於甲苯(120 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物加熱至回流持續1 h。在完成之後，將反應混合物冷卻至環境溫度且將由此形成之沈澱物過濾，用甲苯:乙醚(1:1)洗滌且乾燥以得到3-胺甲醯基-3-(4-碘苯胺基)環丁烷甲酸甲酯(8.4 g，22.5 mmol，80%產率)。其未經進一步純化即用於下一步驟。LCMS (ESI+): 375 (M+H +)
步驟 -3 ： 製備 1-(4- 碘 - 苯胺基 )-3- 氮雜 - 雙環 [3.1.1] 庚烷 -2,4- 二酮：
Figure 02_image1073
在0℃下，將三級丁醇鉀(4.62 g，41.2mmol)添加至3-[2-胺基-1-(4-碘苯胺基)-2-側氧基-乙基]環丁烷甲酸甲酯(8 g，20.6 mmol)於THF (150 mL)中之經攪拌溶液中，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將反應混合物用1 M檸檬酸溶液中和且調節至pH約6且用乙酸乙酯萃取。將合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(40%乙酸乙酯/己烷)來純化殘留塊狀物以得到5-(4-碘苯胺基)-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷-2,4-二酮(2.9 g，8.48 mmol，41%產率)。LCMS (ESI+): 343 (M+H +)
步驟 -4 ： 製備 4-[4-(2,4- 二側氧基 -3- 氮雜 - 雙環 [3.1.1] 庚 -1- 基胺基 )- 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1075
將碳酸鈉(1.98 g，18.7 mmol)添加至5-(4-碘苯胺基)-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷-2,4-二酮(2.9 g，8.48 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5.24 g，17.0 mmol)於DMF (32 mL)及水(8 mL)中之經攪拌溶液中且將反應物用氬氣脫氣。在惰性氛圍下添加Pd(dppf)Cl 2(692 mg，848 µmol)。將所得混合物在80℃下加熱16 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋且經由短矽藻土墊過濾。濾液用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(5-10%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到4-[4-[(2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-5-基)胺基]苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.91 g，4.81 mmol，57%產率)。LCMS ES+ 398 (M+H +)
步驟 -5 ： 製備 4-[4-(2,4- 二側氧基 -3- 氮雜 - 雙環 [3.1.1] 庚 -1- 基胺基 )- 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1077
將10% Pd-C (50%濕，1 g)添加至4-[4-[(2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-5-基)胺基]苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.91 g，4.81 mmol)於乙醇(20 mL)中之經脫氣溶液中。將所得混合物在環境溫度下在氫氣球氛圍下攪拌3 h。在完成之後(藉由LCMS確認)，將反應混合物經由矽藻土短墊過濾，用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(60-70%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到4-[4-[(2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-5-基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.4 g，3.50 mmol，73%產率)。LCMS ES+ 400 (M+H +)
步驟 -6 ： 製備 5-(4- 哌啶 -4- 基 - 苯胺基 )-3- 氮雜 - 雙環 [3.1.1] 庚烷 -2,4- 二酮 鹽酸鹽
Figure 02_image1079
在10℃下，將二㗁烷HCl (4 M，15 mL，60 mmol)添加至4-[4-[(2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-5-基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.4 g，3.50 mmol)中。將所得混合物升溫至環境溫度且攪拌5 h。將反應混合物在減壓下濃縮，用乙醚濕磨且凍乾以得到呈灰白色固體狀之5-[4-(4-哌啶基)苯胺基]-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷-2,4-二酮鹽酸鹽(1.08 g，3.34 mmol，95%產率)。LCMS ES+ 300 (M+H +)， 1H-NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 10.72 (s, 1H), 8.95 (br s, 1H), 8.81-8.79 (m, 1H), 6.90 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.44 (d, J=8.16 Hz, 2H), 3.32-3.29 (m, 2H), 2.95-2.91 (m, 3H), 2.73-2.62 (m, 3H), 2.49 (br m, 2H), 1.85-1.72 (m, 4H)。
合成 3-[3-( 二氟甲基 )-4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1081
Figure 02_image1083
步驟 -1 ： 合成 1- 溴 -2- 二氟甲基 -4- 硝基 - 苯 ：
Figure 02_image1085
在0℃下，將DAST (24.13 mL，182.60 mmol)添加至2-溴-5-硝基-苯甲醛(7 g，30.4 mmol)於二氯甲烷(350 mL)中之經攪拌溶液中且將所得反應混合物在環境溫度下攪拌16 h。在完成之後，將反應混合物用10% NaHCO 3溶液鹼化且用二氯甲烷萃取。將合併之有機萃取物用水、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(10%乙酸乙酯/己烷)來純化殘餘物以得到1-溴-2-(二氟甲基)-4-硝基-苯(6 g，23.8 mmol，78%產率)。 步驟 -2 ： 合成 4- 溴 -3- 二氟甲基 - 苯胺：
Figure 02_image1087
在環境溫度下，將氯化銨(12.7 g，238 mmol)及鋅(15.6 g，238 mmol)添加至1-溴-2-(二氟甲基)-4-硝基-苯(6.0 g，23.8 mmol)於THF (70 mL)及乙醇(70 mL)中之經攪拌溶液中。所得混合物在環境溫度下攪拌4小時。在完成之後，將反應混合物經由矽藻土短墊過濾且用乙醇洗滌。在減壓下濃縮濾液且藉由管柱層析(40%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到4-溴-3-(二氟甲基)苯胺(3.95 g，17.8 mmol，75%產率)。LC MS: ES+ 221 (M+H +)。
步驟 -3 ： 合成 4-(4- 胺基 -2- 二氟甲基 - 苯基 )-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1089
將碳酸鈉(3.06 g，28.82 mmol)添加至4-溴-3-(二氟甲基)苯胺(3.2 g，14.4 mmol)及4-甲基-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3.08 g，15.9 mmol)於THF (20 mL)、甲醇(10 mL)及水(10 mL)中之經攪拌溶液中且將混合物徹底用氬氣吹掃。在惰性氛圍下添加PdCl 2(dppf).二氯甲烷(2.35 g，2.88 mmol)。所得混合物在80℃下加熱12小時。在完成之後，將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機物部分用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(20%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到4-[4-胺基-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(2.24 g，6.91 mmol，48%產率)。LC MS: ES+ 325 (M+H +)。
步驟 -4 ： 合成 4-[4-(2,6- 雙苯甲氧基 - 吡啶 -3- 基胺基 )-2- 二氟甲基 - 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1091
將碳酸銫(5.12 g，15.72 mmol)添加至4-[4-胺基-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.7 g，5.24 mmol)及2,6-二苯甲氧基-3-碘-吡啶(2.41 g，5.77 mmol)於三級丁醇(40 mL)中之經攪拌溶液中。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加Pd 2(dba) 3(96 mg，1.05 mmol)、Ruphos (978 mg，2.10 mmol)。將所得混合物在100℃加熱18 h。在完成之後，將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。濾液用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(25%乙酸乙酯-己烷)來純化殘餘物以得到4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.23 g，2.00 mmol，38%產率)。LC MS: ES+ 614 (M+H +)。
步驟 -5 ： 合成 4-[2- 二氟甲基 -4-(2,6- 二側氧基 - 哌啶 -3- 基胺基 )- 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1093
將10% Pd-C (50%濕，2 g)添加至4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-(二氟甲基)苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(2 g, 3.26 mmol)於乙酸乙酯(15 mL)中之經脫氣溶液中。將所得混合物在環境溫度下在氫氣球氛圍下攪拌16 h。在完成之後，將反應混合物經由矽藻土短墊過濾，用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(60%乙酸乙酯/己烷)來純化殘餘物以得到呈淺藍色固體狀之4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(880 mg，1.99 mmol，61%產率)。LC MS: ES+ 438 (M+H +)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.77 (s, 1H), 7.26-6.98 (m, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.77 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.03 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.34 (bs, 1H), 4.06-4.03 (m, 2H), 2.90-2.70 (m, 4H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.09-2.06 (m, 1H), 1.91-1.87 (m, 1H), 1.61-1.59 (m, 2H), 1.51-1.46 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 6 ： 合成 3-[3-( 二氟甲基 )-4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1095
將4-[2-(二氟甲基)-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(191 mg，436.59 μmol)溶解於甲醇(3 mL)中且添加鹽酸溶液(4.0 M於二㗁烷中，1.09 mL)。將反應混合物在40℃下加熱4 h，且反應完成。在減壓下蒸發揮發物。使材料承受高真空，冷凍至-78℃且解凍以得到呈緻密灰白色固體狀之3-[3-(二氟甲基)-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(145 mg，388 µmol，89%產率)。LCMS (ESI+): Rt = 0.954 min., MS (ESI+): 338.3 (M+H +)。
合成 5-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2-(4- 哌啶基 ) 苯甲腈鹽酸鹽
Figure 02_image1097
步驟 -1 ： 合成 4-(4- 胺基 -2- 氰基 - 苯基 )-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1099
向5-胺基-2-溴-苯甲腈(5 g，25.38 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(11.77 g，38.06 mmol)於DMF (60 mL)中之經攪拌溶液中添加氟化銫(7.71 g，50.75 mmol，1.87 mL)且將反應混合物用氬氣脫氣。在惰性氛圍下添加PdCl 2(dppf).二氯甲烷(4.14 g，5.08 mmol)。將所得混合物在90℃下加熱16 h。在完成之後，將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。將合併之有機物部分用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(20%乙酸乙酯-己烷)來純化粗塊狀物以得到4-(4-胺基-2-氰基-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(4.3 g，14.36 mmol，56.60%產率)。LC MS: ES+ 300 (M+H)。
步驟 -2 ： 合成 4-[4-(2,6- 雙苯甲氧基 - 吡啶 -3- 基胺基 )-2- 氰基 - 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1101
向4-(4-胺基-2-氰基-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，10.02 mmol)及2,6-二苯甲氧基-3-碘-吡啶(4.60 g，11.02 mmol)於t-BuOH (50 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(9.80 g，30.06 mmol)。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加Pd 2(dba) 3(458.83 mg，501.06 µmol)、RuPhos (467.62 mg，1.00 mmol)。將所得混合物在100℃加熱18 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。合併之有機部分用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(25%乙酸乙酯-己烷)來純化粗塊狀物以得到4-[2-氰基-4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，5.10 mmol，50.85%產率)LC MS：ES+ 589 (M+H)。
步驟 -3 ： 合成 4-[2- 氰基 -4-(2,6- 二側氧基 - 哌啶 -3- 基胺基 )- 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1103
向4-[2-氰基-4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，5.10 mmol)於乙酸乙酯(60 mL)中之經脫氣溶液中添加10% Pd-C (50%濕，3 g)。將所得混合物在環境溫度下在氫氣下於氣球壓力下攪拌16 h。將反應混合物經由矽藻土短墊過濾，用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(60%乙酸乙酯/己烷)來純化粗塊狀物以得到呈淺綠色固體狀之4-[2-氰基-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，2.65 mmol，52.07%產率)。LCMS: ES+ 413 (M+H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.81 (s, 1H), 7.20 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.96 (t, J=8.7 Hz, 2H), 6.26 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.43-4.37 (m, 1H), 4.09-4.06 (m, 2H), 2.87-2.69 (m, 4H), 2.60-2.55 (m, 1H), 2.10-2.06 (m, 1H), 1.92-1.87 (m, 1H), 1.70-1.67 (m, 2H), 1.57-1.46 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 -4 ： 合成 5-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2-(4- 哌啶基 ) 苯甲腈鹽酸鹽
Figure 02_image1105
將4-[2-氰基-4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(120 mg，290.92 μmol)溶解於甲醇混合物(3 mL)中且添加含4.0M鹽酸溶液之二㗁烷(4 M，727.31 μL)。在40℃下加熱反應混合物4小時，且反應完成。在減壓下蒸發揮發物。使材料承受高真空，冷凍至-78℃且解凍以得到呈緻密固體狀之5-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-(4-哌啶基)苯甲腈鹽酸鹽(107 mg，277.51 µmol，95%產率)。LCMS (ESI+): 313.2 (M+H)
合成 3-[3- 甲基 -4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1107
步驟 -1 ： 合成 4-(4- 胺基 -2- 甲基 - 苯基 )-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1109
向4-溴-3-甲基-苯胺(5 g，26.87 mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(9.14 g，29.56 mmol)於THF (60 mL)、水(12 mL)及甲醇(24 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸鈉(6.27 g，59.12 mmol)且用氬氣徹底吹掃。在惰性氛圍下添加PdCl 2(dppf).CH 2Cl 2(438.94 mg，537.49 µmol)。所得混合物在80℃下加熱12小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。合併之有機部分用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(15%乙酸乙酯-己烷)來純化粗塊狀物以得到呈緻密固體狀之4-(4-胺基-2-甲基-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，17.34 mmol，64.51%產率)。LC MS: ES+ 289 (M+H)。
步驟 -2 ： 合成 4-[4-(2,6- 雙苯甲氧基 - 吡啶 -3- 基胺基 )-2- 甲基 - 苯基 ]-3,6- 二氫 -2H- 吡啶 -1- 甲酸三級丁酯 ：
Figure 02_image1111
向4-(4-胺基-2-甲基-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(5 g，17.34 mmol)及2,6-二苯甲氧基-3-碘-吡啶(7.96 g，19.07 mmol)於t-BuOH (80 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(16.95 g，52.01 mmol)。將所得混合物用氬氣脫氣且在惰性氛圍下添加Pd 2(dba) 3(793.83 mg，866.90 µmol)、RuPhos (809.04 mg，1.73 mmol)。將所得混合物在100℃加熱18 h。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，經由矽藻土短墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。合併之有機部分用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(25%乙酸乙酯-己烷)來純化粗塊狀物以得到4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-甲基-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，5.19 mmol，29.95%產率) LCMS (ESI+)：578 (M+H+)。
步驟 -3 ： 合成 4-[4-(2,6- 二側氧基 - 哌啶 -3- 基胺基 )-2- 甲基 - 苯基 ]- 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1113
向4-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2-甲基-苯基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，5.19 mmol)於乙酸乙酯(60 mL)中之經脫氣溶液中添加10% Pd-C (50%濕，3 g)。將所得混合物在環境溫度下在氫氣氛圍下於氣球壓力下攪拌16 h。在完成之後，將反應混合物經由矽藻土短墊過濾，用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析(60%乙酸乙酯/己烷)來純化粗殘餘物以得到呈淺藍色固體狀之4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(1020 mg，2.53 mmol，48.78%產率)。LC MS: ES+ 402 (M+H)。
步驟 4 ： 合成 3-[3- 甲基 -4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1115
將4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-甲基-苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(180 mg，448.32 μmol)溶解於甲醇(3 mL)中且添加含4.0 M鹽酸溶液之二㗁烷(4 M，1.12 mL)。在40℃下加熱反應混合物4小時，且反應完成。在減壓下蒸發揮發物。使材料承受高真空，冷凍至-78℃且解凍以得到呈緻密固體狀之3-[3-甲基-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(145 mg，429.19 µmol，95.73%產率)。LCMS (ESI+): 302.3 (M+H)。
合成 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 鹽酸鹽 步驟 1 ： 合成 3,3- 二氟 -4-( 三氟甲基磺醯氧基 )-2,6- 二氫吡啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1117
在0℃下，將N,N-二乙基乙胺(3.23 g，31.9 mmol，4.44 mL)逐滴添加至3,3-二氟-4-側氧基-哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.5 g，10.6 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之經攪拌溶液中，隨後添加三氟甲基磺酸酐(4.50 g，15.9 mmol，2.68 mL)。將反應物在環境溫度下攪拌16 h。接著，將反應物用NaHCO 3水溶液淬滅且用二氯甲烷萃取，用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由矽膠層析(100%己烷至4:1己烷:乙酸乙酯)來純化殘餘物以得到3,3-二氟-4-(三氟甲基磺醯氧基)-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.2 g，2.29 mmol，21%產率)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 6.59 (s, 1H), 4.29 (q, J = 4.3 Hz, 2H), 4.04 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H)。
步驟 2 ： 1-[1- 甲基 -6-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼㖦 -2- 基 ) 吲唑 -3- 基 ] 六氫嘧啶 -2,4- 二酮
Figure 02_image1119
將乙酸鉀(911 mg，9.28 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(113 mg，155 µmol)添加至1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氫嘧啶-2,4-二酮(1.0 g，3.09 mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(1.18 g，4.64 mmol)於二㗁烷(15 mL)中之溶液中。將混合物在85℃下在氮氣氛圍下攪拌16 h。將混合物冷卻至環境溫度且經由矽膠墊過濾。將濾餅用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(100%己烷至100%乙酸乙酯)來純化殘餘物以得到1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮(1.1 g，2.97 mmol，96%產率)。LCMS (ESI+): 371 (M+H)。
步驟 3 ： 4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟 -3,6- 二氫吡啶 -1(2H)- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1121
將碳酸鈉(485 mg，4.57 mmol)添加至1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮(677 mg，1.83 mmol)及3,3-二氟-4-(三氟甲基磺醯氧基)-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(560 mg，1.52 mmol)於二㗁烷(10 mL)及水(2.5 mL)中之溶液中且將溶劑用N 2氣體鼓泡10 min。添加1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II) (111 mg，152 µmol)且將反應混合物在55℃下攪拌2 h。接著，將反應混合物冷卻且用水/乙酸乙酯稀釋。在萃取之後，將有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。藉由矽膠層析(100%己烷至100%乙酸乙酯)來純化殘餘物以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(480 mg，1.04 mmol，68%產率)。LCMS (ESI+): 462.2 (M+H)
步驟 4 ： 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1123
將鈀、10%於碳上(487型，乾燥，331 mg，311 μmol)添加至4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(478 mg，1.04 mmol)於甲醇(10.3 mL)中之溶液中且將混合物在環境溫度下在氫氣球氛圍下攪拌。在24 h之後，移除氫氣球且將混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋且將漿料再攪拌24 h。隨後，將混合物經由矽藻土墊過濾，使用二氯甲烷/甲醇(3:1)之溶液洗滌且濃縮以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯(450 mg，94%產率)。LCMS (ESI+): 408.2 (M - 三級丁基+ H)。
步驟 5 ： 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 鹽酸鹽
Figure 02_image1125
使用用於移除三級丁氧基羰基之通用方法B，自4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 354.2 (M+H)
合成 3,3- 二氟 -4-(4- 硝苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯，異構體 1 及 3,3- 二氟 -4-(4- 硝苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯，異構體 2 步驟 1 ： 合成 4-(4- 硝苯基 )-3- 側氧基 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1127
將3-羥基-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(19.5 g，60.5 mmol) (CAS號1232788-17-8)溶解於二氯甲烷(200 mL)中且冷卻至0℃。逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin Periodinane) (38.5 g，90.7 mmol)。在初始添加期間，內部溫度自0增加至2.2℃。將反應溶液在該溫度下攪拌2 h且繼續攪拌，同時溫度逐漸上升至環境溫度。在17 h之後，反應溶液由於一些溶劑蒸發而變成漿料。添加二氯甲烷(100 mL)，隨後在16℃下添加戴斯-馬丁高碘烷(8.3 g，19.6 mmol)且將反應物攪拌17 h。使反應物溶液冷卻降至4℃。小心地添加NaHCO 3飽和溶液(250 mL)，隨後添加溶解於175 mL水中之硫代硫酸鈉五水合物(13.8 g，48.4 mmol)。將混合物用二氯甲烷(150 mL)稀釋。將所得沈澱物藉由過濾移除且將濾餅用二氯甲烷(75 mL × 3)洗滌。將濾液分離成層且將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮以得到4-(4-硝苯基)-3-側氧基-哌啶-1-甲酸三級丁酯(19.4 g，60.5 mmol，定量產率)。LCMS (ESI+): 354.1 (M+Na) / 221.0 (M-Boc+H)。
步驟 2 ： 合成 3,3- 二氟 -4-(4- 硝苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1129
將4-(4-硝苯基)-3-側氧基-哌啶-1-甲酸三級丁酯(3.78 g，11.8 mmol)溶解於二氯甲烷(40 mL)中且將溶液冷卻至0℃。經由注射器緩慢添加DAST (3.80 g，23.6 mmol，3.12 mL)。將反應混合物緩慢升溫至室溫，同時將其攪拌隔夜。將反應溶液冷卻至-1.3℃且經由加料漏斗(放熱)小心地添加飽和NaHCO 3水溶液(100 mL)。在添加期間，內部溫度保持低於18℃。將反應混合物用乙酸乙酯(80 mL)稀釋且升溫至環境溫度。分離各層且將水層用乙酸乙酯(80 mL)洗滌。將合併之有機物用18% NaCl水溶液洗滌且濃縮。藉由矽膠層析(梯度：10-30%乙酸乙酯/己烷)來純化殘餘物以得到3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.50 g，62%產率) LCMS (ESI+)：280.2 (M-三級丁基+H) / 243.1 (M-Boc+H)。
步驟 3 ： 對掌性分離以獲得 3,3- 二氟 -4-(4- 硝苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ， 異構體 1 及 3,3- 二氟 -4-(4- 硝苯基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ， 異構體 2
Figure 02_image1131
在以下條件下對外消旋3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.49 g)進行對掌性SFC分離： 管柱：ChiralPak IC-H 21 × 250 mm 流動相：10% 2-丙醇/二氧化碳。 流速：70 mL/min 偵測：220 nm UV 壓力：100巴
在減壓下蒸發第一溶離組之溶離份以得到3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體1 (800 mg，32%產率，Rt = 1.74 min，＞99%鏡像異構體過量) LCMS：280.2 (M-tBu+H)/243.1 (M-Boc +H)。
在減壓下蒸發第二溶離組之溶離份以得到3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (800 mg，32%產率，Rt = 2.31 min，99.6%鏡像異構體過量)。LCMS 280.2 (M- tert-Butyl +H) / 243.1 (M- Boc +H)。
使用以下分析型SFC方法測定經純化鏡像異構體之鏡像異構體過量。 管柱：ChiralPak IC-H 4.6 × 100 mm 流動相：10%異丙醇/二氧化碳 流速：4 mL/min 壓力：100巴
合成 3-[4-[3,3- 二氟 -4- 哌啶基 ] 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮二鹽酸鹽 ， 異構體 1 步驟 1 ： 4-(4- 胺基苯基 )-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ， 異構體 1
Figure 02_image1133
將3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體1 (0.8 g，2.34 mmol)溶解於乙醇(12 mL)中且將溶液用氮氣脫氣。接著添加10%於碳上之鈀，E101 NE/W型(125 mg，1.17 mmol)。在用氮氣偶合再次脫氣之後，將反應混合物在氫氣球氛圍下攪拌16 h。將反應混合物經由矽藻土墊過濾，用乙酸乙酯(12 mL × 3)洗滌且濃縮濾液以得到4-(4-胺基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁基酯，異構體1 (722 mg，98%產率)。LCMS (ESI+): 257 (M-tBu+H)
步驟 2 ： (4S)-4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ， 異構體 1
Figure 02_image1135
將乙腈(3.5 mL)添加至小瓶中之4-(4-胺基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體1 (520 mg，1.66 mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(478 mg，2.49 mmol)及NaHCO 3(418 mg，4.98 mmol)中。將反應混合物加熱至70℃持續45 h。添加3-溴哌啶-2,6-二酮(92 mg，0.28當量)及NaHCO3 (110 mg，0.78當量)且再繼續加熱72 h，此時將反應物冷卻至環境溫度且緩慢添加水(18 mL)。將混合物攪拌4 h，隨後沈澱物藉由過濾來收集，用水(10 mL × 3)洗滌，隨後用9:1己烷:乙酸乙酯(5 mL × 3)。在真空下乾燥濾餅以得到呈綠色固體狀之4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體1 (577 mg，78%產率)。LCMS (ESI+): 446 (M+Na)
步驟 3 ： 3-[4-[3,3- 二氟 -4- 哌啶基 ] 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮二鹽酸鹽 ， 異構體 1
Figure 02_image1137
將4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體1 (300 mg，709 μmol)溶解於二氯甲烷(3.4 mL)中，且在攪拌下添加鹽酸(4M於1,4-二㗁烷中，850 μL，3.4 mmol)。在1小時之後，濃縮反應混合物，以定量產率得到3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二鹽酸鹽，異構體1。LCMS (ESI+): 324 (M+H)。
合成 3-[4-[3,3- 二氟 -4- 哌啶基 ] 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮二鹽酸鹽 ， 異構體 2 步驟 1 ： 合成 4-(4- 胺基苯基 )-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯 ， 異構體 2
Figure 02_image1139
將3,3-二氟-4-(4-硝苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (800 mg，2.34 mmol)溶解於乙醇(12 mL)中。將溶液抽空且用氮氣回填幾次。隨後添加10%於碳上之鈀，E101 NE/W型(124.35 mg，1.17 mmol)。在抽空且用氮氣回填更多次之後，在環境溫度下對反應混合物進行氫化(H2氣球)持續16小時。反應混合物經矽藻土墊過濾。將矽藻土濾餅用乙酸乙酯(12 mL × 3)洗滌。將濾液在真空中濃縮且進一步在真空下乾燥以在靜置後得到半固體(油性)；4-(4-胺基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (724 mg，94%產率)。LCMS (ESI+): 257.1 (M-tBu+H)
步驟 2 ： 合成 4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸酯， 異構體 2
Figure 02_image1141
向小瓶中添加4-(4-胺基苯基)-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (721.54 mg，2.31 mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(665.32 mg，3.47 mmol)及碳酸氫鈉(582.19 mg，6.93 mmol，269.53 μL)。添加乙腈(5 mL)。將反應混合物升溫至70℃ (阻斷溫度)隔夜。在48小時之後，添加額外量之3-溴哌啶-2,6-二酮(129 mg，0.28當量)、NaHCO3 (129 mg，0.66當量)。在另一72小時之後，冷卻至環境溫度。緩慢添加水(25 mL)。在環境溫度下攪拌幾小時。過濾反應混合物以收集固體。用水(12 mL × 3)、9:1己烷:乙酸乙酯(5 mL × 2)洗滌，且在真空下乾燥以得到呈綠色固體狀之4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (838 mg，81.4%產率)。LCMS (ESI+): 446.4 (M+Na)
步驟 3 ： 合成 3-[4-[3,3- 二氟 -4- 哌啶基 ] 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮二鹽酸鹽 ， 異構體 2
Figure 02_image1143
將4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯，異構體2 (300 mg，708.5 μmol)溶解於二氯甲烷(3.4 mL)中，且在攪拌下添加鹽酸(4M於1,4-二㗁烷中，850 μL，3.4 mmol)。在1小時之後，將反應混合物在減壓下蒸發至乾燥，以定量產率得到3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二鹽酸鹽，異構體2。LCMS (ESI+):  324.1 (M+H)
合成 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 步驟 1 ： 2-[4- 羥基 -1-[4- 硝基 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1145
在-78℃下，在10 min之時間段內，將二異丙胺基鋰(0.7 M於THF中，54 mL，37.82 mmol)逐滴添加至乙酸三級丁酯(1.76 g，15.1 mmol，2.04 mL)於無水THF(40 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應混合物1 h。緩慢添加溶解於THF (20 ml)中之1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-酮(4.36 g，15.1 mmol)。在-78℃下攪拌反應物1小時。在-78℃下將反應物用氯化銨水溶液淬滅，且將混合物升溫至環境溫度且用乙酸乙酯萃取。將有機層用鹽水洗滌且濃縮以得到殘餘物，該殘餘物未經進一步純化即使用。LCMS (ESI-): m/z 403.1 [M-H +]。
步驟 2 ： 2-[1-[4- 胺基 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1147
將2-[4-羥基-1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(2 g，4.95 mmol)於乙酸乙酯(40 mL)中之經攪拌溶液用氮氣吹掃5 min。將以乾基計10%之Pd/C(1.05 g，9.89 mmol)添加至反應混合物中。將反應混合物置放於氫氣氛圍(氣球)下。攪拌反應混合物4 h。藉由用二氯甲烷:乙酸乙酯混合物(1:1，500 mL)沖洗來將反應混合物經由矽藻土床過濾。在減壓下濃縮濾液以得到淺棕色固體，將其溶解於二氯甲烷(20 mL)中且在減壓下無水封裝於矽膠上。化合物藉由矽膠(230-400目)管柱層析使用乙酸乙酯:石油醚來純化。將純溶離份合併且在減壓下濃縮以得到純淡紅棕色固體2-[1-[4-胺基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.1 g，1.96 mmol，40%產率)。LCMS (m/z: 375.2(M+H +))。
步驟 3 ： 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1149
在室溫下，向2-[1-[4-胺基-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.1 g，2.94 mmol)及3-溴哌啶-2,6-二酮(846.21 mg，4.41 mmol)於DMF (10 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸氫鈉(740.45 mg，8.81 mmol)，在10 min之後，將反應物之溫度升高至60℃且繼續反應約12小時。將反應混合物用冰冷水(20 mL)稀釋且藉由乙酸乙酯(2*100mL)萃取，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。使用矽膠層析使用10%至100%乙酸乙酯/石油醚溶離劑梯度來純化粗產物。將純溶離份合併且在減壓下濃縮以得到呈淺棕綠色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(300 mg，468.45 μmol，16%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 486.2 (M+H +)。
步驟 4 ： 合成 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸
Figure 02_image1151
在0℃下於氮氣氛圍下，向2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(620 mg，1.28 mmol)於二氯甲烷(3 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，0.32 mL，6.39 mmol)，將其在室溫下攪拌6 h。將反應混合物在真空下蒸餾且用二乙醚濕磨，傾析出二乙醚，隨後乾燥以得到呈綠色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-(三氟甲基)苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸(345 mg，661 µmol，52%產率)。LCMS (m/z: 430.1(M+H))
用 2- 溴乙酸三級丁酯烷基化中間物之通用程序 C ： 合成 2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1153
將3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(1 g，3.09 mmol)溶解於N,N-二甲基乙醯胺(15 mL)中，且添加N,N-二異丙基乙基胺(1.60 g，12.4 mmol，2.15 mL)。將混合物冷卻至0℃，且添加2-溴乙酸三級丁酯(663 mg，3.40 mmol，498 μL)。在0℃下攪拌混合物4小時。將反應物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。將有機層濃縮且藉由矽膠層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)來純化以得到呈白色固體狀之2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(0.84 g，2.09 mmol，68%產率)。LCMS (ESI+): 402.2 (M+H +)
使用通用程序C合成以下化合物，此係因為其用於由3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽合成2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯。
起始材料 產物 LCMS (ESI+) m/z % 產率
Figure 02_image1155
3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1157
2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		347.2 [M-tBu+1] 73%
Figure 02_image1159
3-((3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1161
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		420.2 (M+1) 72%
Figure 02_image1163
3-((2-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1165
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		420.2 (M+1) 65%
Figure 02_image1167
5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-(哌啶-4-基)苯甲腈鹽酸鹽
Figure 02_image1169
2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		427 (M+H) 82%
Figure 02_image1171
3-((3-甲基-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1173
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		416.3 (M+H) 75%   
Figure 02_image1175
3-((3-(二氟甲基)-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1177
2-(4-(2-(二氟甲基)-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		452.2 (M+H) 68%
Figure 02_image1179
1-((4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷-2,4-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1181
2-(4-(4-((2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-1-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		414.51 [M+H] 57%
Figure 02_image1183
3-((3-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1185
2-(4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		402.1 [M+H] 24%
Figure 02_image1187
1-(1-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1189
2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		442.3(M+H) 75%
Figure 02_image1191
1-(6-(3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1193
 2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		478.5 (M+H) 47%
Figure 02_image1195
(S)-3-((3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1197
S)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		420.0 (M+H) 68%
Figure 02_image1199
(R)-3-((3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1201
(R)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯 		420.2 (M+H) 86.1%
Figure 02_image1203
3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二鹽酸鹽，異構體1
Figure 02_image1205
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯，異構體1 		438.2 (M+H) 84%
Figure 02_image1207
3-[4-[3,3-二氟-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮二鹽酸鹽，異構體2
Figure 02_image1209
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯，異構體2 		438.2 (M+H) 87%
用於中間物之三級丁酯斷裂的通用程序 D ：2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽
Figure 02_image1211
將2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯溶解於二氯甲烷(5 mL)中且添加TFA (1.61 mL，20.9 mmol)。將反應混合物在40℃下加熱4 h，且反應完成。在減壓下蒸發揮發物。將材料冷凍至-78℃，承受高真空且解凍以得到緻密固體。將固體再溶解於甲醇:二氯甲烷(1:4)中，逐滴添加MTBE直至形成沈澱物。對懸浮液進行超音波處理，且將固體在抽吸下過濾。藉由過濾收集綠色固體以得到2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(0.95 g，2.07 mmol，97%產率)。LCMS (ESI+): 346.4 (M+H +)
使用用於2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽合成之通用程序D，由適當之起始材料合成以下中間物。
起始材料 產物 產率 LCMS ESI+m/z
Figure 02_image1213
2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1215
2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸 		72% 347.2 (M+H)
Figure 02_image1217
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1219
2-(4-(5-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸 		＞98% 364.2 (M+H)
Figure 02_image1221
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1223
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸 		＞98% 364.5 (M+H)
Figure 02_image1225
2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1227
2-(4-(2-氰基-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸 		＞98% 371.2 (M+H)
Figure 02_image1229
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1231
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-甲基苯基)哌啶-1-基)乙酸 		86% 360.3 (M+H)
Figure 02_image1233
2-(4-(2-(二氟甲基)-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1235
2-(4-(2-(二氟甲基)-4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸 		94% 369.2 (M+H)
Figure 02_image1237
2-(4-(4-((2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-1-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1239
2-(4-(4-((2,4-二側氧基-3-氮雜雙環[3.1.1]庚-1-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸 		73% 358.1 (M+H)
Figure 02_image1241
2-(4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1243
2-(4-(3-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸 		91% 346.7 (M+H)
Figure 02_image1245
2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1247
2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酸 		82% 386.1 (M+H)
Figure 02_image1249
(S)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1251
(S)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸 		93% 364.1[M+1]
Figure 02_image1253
(R)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1255
(R)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸 		79% 364.1[M+1]
使用以下SFC方法，以＞99.9%鏡像異構體過量(Rt = 2.11 min)量測中間物(S)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸之鏡像異構體過量： 管柱：Lux A1 溶離劑：50%異丙醇與0.5%異丙胺/CO 2(等度) 壓力：100巴 溫度：35℃ 運作時間：7 min
使用以下SFC方法，以98%鏡像異構體過量(Rt = 3.93 min)量測中間物(R)-2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸之鏡像異構體過量： 管柱：Lux A1 溶離劑：50%異丙醇與0.5%異丙胺/CO 2(等度) 壓力：100巴 溫度：35℃ 運作時間：7 min
通用程序 E ： 合成 2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1257
將2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(228 mg，568 μmol)溶解於二氯甲烷(2 mL)中，且添加含4M鹽酸之1,4二㗁烷(8 mmol，2 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌4 h。將反應混合物在減壓下濃縮且將殘餘物用二乙醚濕磨且隨後過濾以得到呈灰色固體狀之2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(210 mg，428 µmol)。LCMS m/z: 345 (M+H +)。
使用上文用於2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽合成之通用程序E，由適當之起始材料合成以下中間物。
起始材料 中間物 產率 LCMS (ESI+) m/z
Figure 02_image1259
2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯
Figure 02_image1261
2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽 		90%   
Figure 02_image1263
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯，異構體1
Figure 02_image1265
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽 		＞98% 382.2 (M+H)
Figure 02_image1267
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯，異構體2
Figure 02_image1269
2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽 		＞98% 382.2 (M+H)
合成中間物 ： 2- 胺基 -2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯二鹽酸鹽
Figure 02_image1271
步驟 1 ： (S)-2-(3- 乙氧基 -3- 氧代丙醯基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯在氬氣氛圍下，將丙二酸乙酯鉀(85.8 g，504 mmol)添加至氯化鎂(31.0 g，325 mmol)於THF (1400 mL)中之經攪拌溶液中，且將反應混合物在50℃下加熱6 h。在單獨的燒瓶中，將(2S)-1-三級丁氧基羰基吡咯啶-2-甲酸(70.0 g，325 mmol)溶解於THF (1400 mL)中，在0℃下冷卻，且在20分鐘之時間段內逐份添加羰基二咪唑(81.7 g，504 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且再攪拌2 h。將加熱的反應混合物冷卻至室溫，且在20 min之時間段內逐滴添加經活化酯溶液，且將反應混合物攪拌20 h。在反應完成之後，在減壓下藉由蒸餾移除溶劑以獲得濃稠白色半固體。將此殘餘物溶解於半飽和硫酸氫鉀溶液中且用乙酸乙酯萃取兩次。將合併之有機層用飽和NaHCO 3溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗製淺棕色透明油狀物。藉由矽膠層析(10%乙酸乙酯:石油醚)來純化此油狀物，得到呈無色透明油狀物之(S)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(76 g，213 mmol，66%產率)。LCMS: (ESI-) (m/z: 284.0 [M-1])。
步驟 2 ： 3- 側氧基 -3-[(2S)- 吡咯啶 -2- 基 ] 丙酸乙酯鹽酸鹽將(2S)-2-(3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(67.4 g，236 mmol)溶解於含乙酸乙酯(70 mL)之2 L RBF中。添加鹽酸(4 M於二㗁烷中，207 mL)。將反應物在室溫下攪拌隔夜，隨後濃縮。將殘油用MTBE (200 mL)攪拌隔夜。傾析出MTBE上清液，將MTBE上清液捨棄且在減壓下濃縮殘餘物，得到呈棕色油狀物之3-側氧基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸乙酯鹽酸鹽(52.4 g，228 mmol，97%)。LCMS (m/z: 186.1 [M+H +])
步驟 3 ： 2-(3- 硫酮基 -2,5,6,7- 四氫吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯將硫氰酸鉀(23.3 g，240 mmol，12.3 mL)添加至3-側氧基-3-[(2S)-吡咯啶-2-基]丙酸乙酯鹽酸鹽(50.6 g，228.26 mmol)於乙醇(250 mL)中之溶液中。將非均勻混合物在80℃下攪拌2 h，隨後冷卻且濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(500 mL)及水(500 mL)中。將飽和NaHCO 3水溶液(500 mL)添加至混合物中且用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。將合併之有機層濃縮，隨後與500 mL MTBE混合且在室溫下攪拌隔夜。藉由過濾來收集所形成之沈澱物，得到呈黃色固體狀之2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(47.1 g，208 mmol，91%產率)。LCMS (m/z: 227.1 [M+H])
步驟 4 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 - 乙酸乙酯向3頸2 L RBF中裝入雷氏鎳®2800，漿料，於H2O中，活性催化劑(51.00 g，595.27 mmol)且用EtOH (100 mL)沖洗。丟棄乙醇層。添加2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(51 g，225.37 mmol)於EtOH (400 mL)中之漿料。使混合物在80℃下回流2 h。將反應混合物冷卻且過濾經由矽藻土墊過濾且用EtOH洗滌。濃縮濾液，得到呈棕色油狀物之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-乙酸乙酯(45.6 g，235 mmol，定量產率)。LCMS (ESI+): m/z: 194.9 [M+1]
步驟 5 ： (2Z)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 羥亞胺基 - 乙酸乙酯在0℃下，向2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(20 g，102.97 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液中逐滴添加乙醇鈉，21% w/w於乙醇中(21.02 g，308.91 mmol，24.22 mL)。攪拌反應混合物30分鐘。將反應混合物冷卻至0℃，接著在此溫度下逐滴添加亞硝酸異戊酯(41 mL，309 mmol)，且在3小時之後，將額外亞硝酸異戊酯(27 mL，206 mmol)添加至反應混合物中。使反應混合物緩慢達至室溫且在氮氣氛圍下攪拌。將反應混合物用乙醇(80 ml)稀釋。藉由在0℃下逐滴添加含4 M鹽酸之甲醇來將反應混合物中和，直至使用pH紙得到pH為6。混合物變為淡黃色懸浮液。將固體在抽吸下過濾，用乙醇洗滌(兩次)且在減壓下濃縮濾液。將粗物質用水稀釋且用二氯甲烷萃取兩次，且濃縮合併之有機層，得到呈棕色膠狀物之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羥亞胺基-乙酸乙酯(17.2 g，67.16 mmol，65.22%產率)，其未經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI+) m/z 224.0 (M+H)。
步驟 6 ： 2- 胺基 -2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯鹽酸鹽及 2- 胺基 -2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯二鹽酸鹽在氮氣下進行機械攪拌，使2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羥亞胺基-乙酸乙酯(30.40 g，136.18 mmol)溶解於2 L 3頸圓底燒瓶中之乙酸(300 mL)中。添加鋅(26.72 g，408.55 mmol，3.74 mL)。在50℃下加熱反應混合物隔夜。將反應混合物經由矽藻土過濾且用額外乙酸洗滌。在減壓下移除溶劑，得到棕色粗殘餘物。在單獨的反應容器中，在3頸500 mL圓底燒瓶中，將乙醇(125 mL)冷卻至0℃。逐滴添加乙醯氯(28.14 g，358.43 mmol，21.81 mL)，同時保持內部溫度低於10℃。將溶液攪拌15分鐘。向粗殘餘物中添加溶液。將反應物在室溫下攪拌16小時。隨後將混合物在50℃下加熱24小時。在減壓下濃縮反應混合物。將粗產物溶解於150 mL乙腈中且添加150 mL H 2O。形成白色沈澱物且過濾混合物。濾餅得到呈白色固體狀之2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯鹽酸鹽(2.77 g，11.3 mmol，8.3%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.54 (s, 3H), 7.65 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.57 - 4.10 (m, 2H), 4.01 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 2.75 (h, J= 8.4 Hz, 2H), 2.55 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 1.20 (t, J= 7.1 Hz, 3H).LCMS (ESI+): m/z 210.1 [M+H]。將母液濃縮且與IPA (3 ×)共沸，得到呈棕色固體狀之2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽形式之所需產物(32.7 g，116.4 mmol，86%產率)。LCMS (ESI+): m/z 210.1 [M+H]。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.93 (s, 4H), 8.56 (s, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.45 - 4.05 (m, 5H), 3.06 - 2.69 (m, 3H), 2.58 (q, J= 7.3 Hz, 2H), 1.23 (t, J= 7.1 Hz, 4H)。
合成中間物 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(4- 氟 -6- 碘 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1273
將2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽(4.02 g，12.62 mmol)溶解於DMF (36 mL)中。添加2-(溴甲基)-3-氟-5-碘-苯甲酸甲酯(3.81 g，10.22 mmol)，接著添加N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(6.52 g，50.47 mmol，8.79 mL)。在室溫下攪拌反應混合物16小時。在45℃下攪拌反應混合物。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥且濃縮，得到棕色油狀物，藉由矽膠急驟管柱層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)將其純化，得到呈黃色固體狀之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(2.03 g，4.33 mmol，34.29%產率)。LCMS (ESI+): 470.2 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.04 - 7.82 (m, 2H), 7.56 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.60 (d, J= 18.0 Hz, 1H), 4.31 - 4.06 (m, 3H), 3.98 (q, J= 6.9 Hz, 2H), 2.92 - 2.71 (m, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 3H), 1.18 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。
合成中間物 ： 2-(6- 溴 -4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1275
將2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽(6.2 g，21.97 mmol)溶解於DMF (55 mL)中。添加5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(5.73 g，17.58 mmol)，接著添加N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(11.36 g，87.89 mmol，15.31 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌(2 ×)。將有機層乾燥且濃縮，得到棕色油狀物，藉由矽膠急驟管柱層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)將其純化，得到呈黃色固體狀之2-(6-溴-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.2 g，7.58 mmol，34.49%產率)。LCMS (ESI+): 422.0 / 424.0 (M+H,  Br模式)
實例 1. 合成 5-[2-[7- 氟 -3- 側氧基 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 異吲哚啉 -5- 基 ] 乙炔基 ]-N-[1-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 ： 4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1277
將4-(4-胺基苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯(CAS 170011-57-1) (798 mg，2.89 mmol)溶解於10 ml乙腈中。添加碳酸氫鈉(485 mg，5.77 mmol，2當量)，接著添加3-溴哌啶-2,6-二酮(CAS 62595-74-8) (610 mg，3.18 mmol，1.1當量)。將反應混合物在90℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫，吸附於isolute®上且藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度溶離來純化。獲得呈灰白色固體狀之所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(850 mg，76%產率)，MS：m/e = 359.4 (([M-tBu+H]+)。
步驟 2 ： (3RS)-3-[4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1279
將4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(850 mg, 2.19 mmol)及鹽酸(4 M於二㗁烷中) (5.48 ml, 21.9 mmol, 10當量)與10 ml甲醇在0-5℃冰浴中合併。在室溫攪拌反應混合物18小時。將反應混合物濃縮至乾燥且不經進一步純化即使用。獲得呈灰白色固體狀之所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(818 mg，定量，純度= 87%)，MS：m/e = 286.1 ([M+H] +)。
步驟 3 ： 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1281
將(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(200 mg，0.618 mmol)、2-溴乙酸三級丁酯(CAS 5292-43-3) (157 mg，0.119 ml，0.803 mmol，1.3當量)及惠寧氏鹼(Hunig's base) (399 mg，0.539 ml，3.09 mmol，5當量)於4.0 ml N,N-二甲基甲醯胺中之混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯及水萃取。用乙酸乙酯反萃取水層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度溶離來純化粗產物。獲得呈白色固體狀之所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(164 mg，66%產率)，MS：m/e = 402.2 ([M+H]+)。
步驟 4 ： 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸三氟乙酸鹽
Figure 02_image1283
將2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(164 mg，0.408 mmol)與3.0 ml二氯甲烷合併。在0-5℃下添加三氟乙酸(1.48 g，1 ml，13 mmol，31.8當量)。將反應混合物在室溫下攪拌6小時。將反應混合物在真空中濃縮，在高真空下乾燥且未經進一步純化即使用。得到呈淺藍色泡沫狀之所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽(定量產率)，MS：m/e = 346.2 ([M+H] +)。
實例 1B. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 哌啶 -1- 基 )-2- 側氧基乙基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ， 化合物 10 步驟 1 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 - 乙酸乙酯
Figure 02_image1285
向溶解於200 ml之1,4-二㗁烷中之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯( CAS 869113-97-3) (20.0 g，102.97 mmol)的溶液中添加二氧化硒(22.85 g，205.94 mmol，2當量)。將反應混合物在80℃下攪拌5小時。在真空下濃縮反應混合物，以得到殘餘物。粗產物係藉由矽膠管柱急驟層析用石油醚:乙酸乙酯2:1至乙酸乙酯:乙醇10:1梯度溶離來純化，得到呈淺棕色油狀物之所需2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-乙酸乙酯(定量產率)，MS：m/e = 209.1 ([M+H] +)。
步驟 2 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 羥亞胺基 - 乙酸乙酯
Figure 02_image1287
在室溫下，向溶解於145 ml乙醇中之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-乙酸乙酯(17.5 g，84.05 mmol)之溶液中添加鹽酸羥胺(6.42 g，92.45 mmol，1.1當量)及乙酸鈉(13.79 g，168.1 mmol，2當量)。在80℃下攪拌反應混合物3.5小時。將反應混合物濃縮，且用水萃取且用乙醇/THF/乙酸乙酯1:1:8之混合物萃取五次。將有機層濃縮至乾燥。得到呈黃色固體狀之所需2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羥亞胺基-乙酸乙酯(15 g，80%產率)，MS：m/e = 224.1 ([M+H] +)且直接用於下一步驟中。
步驟 3 ： (2RS)-2- 胺基 -2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1289
在室溫下，向溶解於225 ml乙醇及120 ml THF中之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-羥亞胺基-乙酸乙酯(15.0 g，67.2 mmol)之溶液中添加Pd/C (30.0g，67.2 mmol，1當量，10%)。將混合物在45℃下用H 2氫化24小時。過濾反應混合物且在真空下濃縮濾液。得到呈棕色油狀物之所需(2RS)-2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(定量產率)，MS：m/e = 210.1 ([M+H] +)且直接用於下一步驟中。
步驟 4 ： (2RS)-2- 胺基 -2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯鹽酸鹽
Figure 02_image1291
將(2RS)-2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(15.0 g，82.79 mmol)於HCl/EtOH (300 ml，1200 mmol，14.5當量，2.5 mol/L)中之溶液在25℃下攪拌36小時。將反應混合物在低於25℃之真空下濃縮，得到呈棕色油狀物之殘餘物。將150 ml乙腈添加至殘餘物中，且所沈澱之黃色固體經收集且在低於25℃之真空下乾燥，得到呈黃色固體狀之所需(2RS)-2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯鹽酸鹽(定量產率)，MS：m/e = 210.1 ([M+H] +)。
步驟 5 ： 5- 溴 -2-( 溴甲基 )-3- 氟 - 苯甲酸甲酯
Figure 02_image1293
將5-溴-3-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(CAS 2090424-20-5) (5.91 g，23.9 mmol)溶解於100 ml三氟甲苯中，且在室溫下添加N-溴代丁二醯亞胺(4.26 g，23.9 mmol，1當量)及AIBN (393 mg，2.39 mmol，0.1當量)。在110℃下攪拌混合物3小時。將反應混合物冷卻，用水萃取且用乙酸乙酯萃取兩次。將有機層經硫酸鈉乾燥且濃縮至乾燥。粗產物係藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷0:100至50:50梯度溶離來純化，得到呈淡黃色液體狀之所需5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(7.29 g，94%產率)，MS：m/e = 326.8 ([M+H] +)。
步驟 6 ： (2RS)-2-(6- 溴 -4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1295
將(2RS)-2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯鹽酸鹽(4.15 g，16.9 mmol，1當量)溶解於35 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。在室溫下添加5-溴-2-(溴甲基)-3-氟-苯甲酸甲酯(5.0 g，15.3mmol)及三乙胺(10.7 ml，76.7 mmol，5當量)。在80℃下攪拌混合物16小時。反應混合物用水萃取且用乙酸乙酯萃取兩次。將有機層用鹽水萃取，經硫酸鈉乾燥且濃縮至乾燥。粗產物係藉由矽膠管柱急驟層析用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度溶離來純化，得到呈黃色固體狀之所需(2RS)-2-(6-溴-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.6 g，40%產率)，MS：m/e = 422.1/424.1 ([M+H] +)。
步驟 7 ： 4-[4-[7- 氟 -3- 側氧基 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ] 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1297
將(2RS)-2-(6-溴-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(56 mg，0.133 mmol)及(4-(4-(三級丁氧基羰基)哌𠯤-1-基)苯基)
Figure 111119753-A0304-1
酸(boronic acid)(CAS 457613-78-4) (41 mg，0.133 mmol，1.0當量)溶解於1.0 ml之1,2-二甲氧基乙烷及2M Na 2CO 3溶液(0.199 ml，0.398 mmol，3.0當量)中。添加肆(三苯基膦)鈀(0) (15 mg，0.0133 mmol，0.1當量)且將反應混合物在80℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫且隨後用乙酸乙酯及飽和NaHCO 3溶液萃取。用乙酸乙酯反萃取水層。用水及鹽水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。粗產物係藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷5:95至100:0梯度溶離來純化。得到呈淺棕色油狀物之所需4-[4-[7-氟-3-側氧基-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(48 mg，60%產率)，MS：m/e = 604.4 ([M+H]+)。
步驟 8 ： 4-[4-[7- 氟 -3- 側氧基 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1299
將4-[4-[7-氟-3-側氧基-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(48 mg，0.0795 mmol)與11 ml乙醇合併，得到淡黃色溶液。添加LiOH (1M於水中) (0.0954 ml，0.0954 mmol，1.2當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物溶解於乙醇中且在真空中濃縮，且隨後溶解於7.0 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。添加噻唑-2-胺(9.55 mg，0.0954 mmol，1.2當量)及休尼格氏鹼(0.0694 ml，0.398 mmol，5當量)，接著添加HATU (36.3 mg，0.0954 mmol，1.2當量)。在室溫攪拌混合物1小時。將反應混合物用乙酸乙酯及飽和NaHCO 3溶液萃取。用乙酸乙酯反萃取水層。用水及鹽水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。粗產物係藉由矽膠管柱急驟層析用二氯甲烷:甲醇100:0至90:10梯度溶離來純化，得到呈黃色油狀物之所需4-[4-[7-氟-3-側氧基-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(22 mg，42%產率)，MS：m/e = 658.3 ([M+H]+)。
步驟 9 ： (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1301
將4-[4-[7-氟-3-側氧基-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(26 mg，0.0395 mmol)溶解於0.5 ml二氯甲烷及0.25 ml甲醇中。在室溫下添加HCl (4 M於二㗁烷中) (0.099 ml，0.395 mmol，10當量)，且將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用飽和NaHCO 3溶液萃取且用二氯甲烷萃取兩次。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。得到呈淡黃色油狀物之所需(2RS)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺(22 mg，99.8%產率)，MS：m/e = 558.2 ([M+H] +)。
步驟 10 ： 2-[4-[4-[7- 氟 -3- 側氧基 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1303
使用與實例1，步驟3中所描述類似之化學方法，以(2RS)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺及2-溴乙酸三級丁酯(CAS 5292-43-3)為起始物質，得到呈黃色油狀物之標題化合物。
實例 2. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 1) 步驟 1 ： 1-(2- 氟 -4- 硝基 - 苯基 ) 哌啶 -4- 酮
Figure 02_image1305
向哌啶-4-酮(15.0 g，151.31 mmol)、1,2-二氟-4-硝基-苯(24.07 g，151.31 mmol，16.72 mL)於N,N-二甲基甲醯胺(30 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(78.22 g，605.26 mmol，105.42 mL)，且在110℃下加熱14 h。將反應混合物用乙酸乙酯(500 mL)稀釋且用冷水(150 mL)洗滌。有機層用鹽水溶液(150 mL)洗滌，經由硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(40%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈棕色固體狀之1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(21 g，77.93 mmol，51.50%產率)。LCMS, m/z: 238.9 [M+H] +
步驟 2 ： 合成 2-[1-(4- 胺基 -2- 氟 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1307
在-78℃下，將二異丙胺基鋰(2 M，12.59 mL)逐滴添加至乙酸三級丁酯(1.76 g，15.11 mmol，2.03 mL)於四氫呋喃(25 mL)中之攪拌溶液中。將反應混合物在-78℃下攪拌45分鐘。在-78℃下向其中添加溶解於四氫呋喃(15 mL)中之1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(3 g，12.59 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物2 h。將反應混合物用飽和氯化銨溶液淬滅且將混合物用乙酸乙酯萃取。有機層經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠(100-200目)管柱層析法(溶離劑：30%至40%乙酸乙酯/石油醚)純化，獲得呈淡黃色黏稠固體狀之2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(2.7 g，7.01 mmol，55.66%產率)。LCMS: 355.1 (M+H) +
步驟 3 ： 2-[1-(4- 胺基 -2- 氟 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1309
向2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.5 g，4.23 mmol)於乙醇(10 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加鐵粉(1.18 g，21.16 mmol，150.37 μL)及氯化銨(679.26 mg，12.70 mmol，443.96 μL)。將反應物在70℃下攪拌4 h。反應混合物經由矽藻土過濾且將濾餅用乙酸乙酯(60 mL)洗滌。濾液用水(20 mL)、碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到粗物質，其藉由矽膠管柱層析用70%乙酸乙酯/石油醚溶離來純化，得到呈棕色黏稠固體狀之2-[1-(4-胺基-2-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.2 g，3.44 mmol，81.28%產率)。LCMS m/z: 325.1 [M+H], 1HNMR (DMSO-d6) 8.02-7.89 (m, 2H), 7.23-7.05 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.55-3.43 (m, 2H), 3.22-3.19 (m, 2H), 2.36 (s, 2H), 1.88-1.64 (m, 3H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 4 ： 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1311
在氮氣氛圍下在25 ml密封管中向2-[1-(4-胺基-2-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1 g，3.08 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中之攪拌溶液中添加碳酸氫鈉(517.94 mg，6.17 mmol，239.79 μL)。將小瓶密封且在60℃下加熱隔夜。反應混合物經由矽藻土床過濾，用乙酸乙酯洗滌2次且在35℃下在減壓下濃縮濾液。經二氧化矽管柱(100-200目)，用65-70%乙酸乙酯/石油醚溶離化合物來純化粗殘餘物。在減壓下蒸發純溶離份，得到呈灰白色固體狀之所需化合物2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(760 mg，1.67 mmol，54.11%產率)。LCMS m/z: 436.0 [M+H], 1H-NMR (DMSO-d6): 10.79 (s, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 6.52 (dd, J= 13.6 Hz, 3.6 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 3.7 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.30-4.19 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 4H), 2.78-2.51 (m, 3H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.95-1.63 (m, 4H), 1.42 (s, 9H)。
步驟 5 ： 2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1313
藉由對掌性SFC解析外消旋混合物2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(2 g，4.59 mmol)。將2.0 g樣品溶解於22.0 mL乙腈中。
SFC 分離條件 ：管柱：LUX A1 [250 × 10 mm，5-微米粒度]；流動相：CO 2:異丙醇(45:55)；流速：12 g/min；循環時間：11.0 min；背壓：100 bar UV收集，波長：254 nm；體積：0.4 mL/注射
第一溶離組之溶離份在壓力下蒸發，得到呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(850 mg，1.84 mmol，40.04%產率)。LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.2 [M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.77 (s, 1H), 6.83 (t, J = 12.00 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.29-4.12 (m, 1H), 2.91-2.79 (m, 5H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.16-2.02 (m, 1H), 1.89-1.69 (m, 3H), 1.65 (d, J = 16.80 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H)，藉由對掌性SFC (Rt = 2.33 min) 99.18%鏡像異構體過量，特定旋光度：-46.2° [α] 20 D
第二溶離組之溶離份在壓力下蒸發，得到呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(530 mg，1.17 mmol，25.52%產率)。LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.0 [M+H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.78 (s, 1H), 6.84 (t, J = 13.20 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 2.92-2.77 (m, 5H), 2.73-2.63 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.18-2.03 (m, 1H), 1.87-1.73 (m, 3H), 1.64 (d, J = 18.00 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H), 藉由對掌性SFC (Rt = 4.92 min) 99.13%鏡像異構體過量，特定旋光度：+46.8° [α] 20 D
絕對組態化合物 1化合物 1之絕對組態係藉由對含有塞勒布隆蛋白質構築體之共晶體進行X射線繞射來建立中間物2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯的絕對組態而建立。藉由HPLC對掌性層析建立最終化合物1之立體化學完整性。未觀察到戊二醯亞胺對掌性中心之外消旋作用。
藉由 X 射線結晶學 測定 中間物 2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯之 絕對組態經由與塞勒布隆(CRBN)蛋白質構築體共結晶，然後對原位結合之蛋白質與小分子進行X射線繞射，以超高解析度定義2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯之絕對組態。結構解析度為1 Å。具有及不具有密度圖之所得結構展示於圖8及圖9中。
步驟 6 ： 2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1315
在0℃下，向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(600 mg，1.38 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加氯化氫(4 M溶液於1,4-二㗁烷中，1.72 mL，6.89 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌6 h。藉由旋轉蒸發移除揮發物。殘餘物用乙醚(2 × 10 mL)濕磨兩次。將固體殘餘物在旋轉式真空下乾燥，得到呈灰色固體狀之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(610 mg，1.09 mmol，78.96%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H]+, 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.03 (bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.70 (d, J = 15.20 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 11.40, 6.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.60, 4.40 Hz, 1H), 3.88-3.65 (m, 5H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 1H), 2.46 (s, 2H), 2.33 (bs, 2H), 2.10-2.08 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 2H)。
步驟 7 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1317
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(270 mg，394.92 µmol)及2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(197.07 mg，473.91 µmol)混合於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中在0℃下將 N,N-二異丙基乙基胺(357.29 mg，2.76 mmol，481.52 μL)添加至反應混合物中。在0℃下將丙基膦酸酐溶液(50 wt%於乙酸乙酯中，176 μL，188.49 mg，592.39 μmol)添加至反應混合物中。將反應混合物在環境溫度下攪拌2 h。粗混合物藉由逆相層析(C18管柱(100 g)；0%至50%於乙腈/水(0.1%乙酸銨)中，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)來純化。純溶離份經冷凍且凍乾，得到呈灰白色固體狀化合物之 化合物 1(143.5 mg，150.39 μmol，38.08%產率)。LCMS (ESI+): 931.3 [M+H], 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.60 - 12.33 (s, 1H), 10.79 (br s, 1H), 7.77 - 7.59 (m, 5H), 7.49 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.85 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 6.59 - 6.47 (m, 3H), 6.42 (br d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.78 (br d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.84 - 4.74 (m, 2H), 4.39 (s, 2H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 3.93 (m, 8H), 2.93 - 2.66 (m, 6H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.47 (br d, J= 5.6 Hz, 2H), 2.22 (s, 2H), 2.09 (td, J= 4.4, 8.0 Hz, 1H), 1.90 - 1.71 (m, 3H), 1.68 - 1.57 (m, 2H)。
實例 3. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 2)
Figure 02_image1319
Figure 02_image1321
步驟 1 ： 1-[6-[(4R)-3,3- 二氟 -4- 哌啶基 ]-1- 甲基 - 吲唑 -3- 基 ] 六氫嘧啶 -2,4- 二酮 鹽酸鹽將(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯(中間物Z1，325 mg，701.22 μmol)溶解於1,4-二㗁烷:甲醇混合物(1:1，3 mL)中且添加鹽酸溶液(4.0M於1,4-二㗁烷中，3.51 mL，14 mmol)。將反應混合物在40℃下加熱4 h。在減壓下蒸發揮發物。使固體殘餘物經受高真空以獲得1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮(280 mg，665.30 μmol，94.88%產率)。LCMS (ESI+): 364.1 (M+H)
步驟 2 ： 2-[(4R)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯將1-[6-[(4R)-3,3-二氟-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮鹽酸鹽(285 mg，784.34 μmol)及N,N-二異丙基乙基胺(304.11 mg，2.35 mmol，409.85 μL)混合於DMAc (0.5 mL)中。使反應混合物冷卻至0℃。向反應混合物中添加2-溴乙酸三級丁酯(168.29 mg，862.78 mmol，126.53 μL)，且使混合物升溫至23℃，同時攪拌4 h。將反應混合物分配於乙酸乙酯與碳酸氫鈉(飽和水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至10%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發純溶離份以獲得2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(330 mg，656.54 μmol，83.71%產率)。LCMS (ESI+) : 478.2 (M+H) / 422.2 (M- t-Bu+H)
步驟 3 ： 2-[(4R)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙酸 ， 三氟乙酸鹽將2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(330 mg，691.09 μmol)溶解於二氯甲烷(2 mL)中且添加三氟乙酸(1.42 g，12.44 mmol，958.39 μL)。將反應混合物在40℃下加熱4 h。將反應混合物冷卻，在0-5℃下在攪拌下添加至甲基三級丁基醚(20 mL)中。將所得懸浮液攪拌2分鐘。將懸浮液轉移至離心用小瓶中，且在2400 rpm下離心懸浮液5分鐘。將上清液溶劑傾析且丟棄。將甲基三級丁基醚(20 mL)添加至固體中且攪拌所得懸浮液2分鐘。將懸浮液轉移至離心用小瓶中，且在2400 rpm下離心懸浮液5分鐘。將上清液溶劑傾析且丟棄。在真空中蒸發揮發物，且使固體經受高真空1 h，獲得2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(150 mg，274.55 μmol，39.73%產率)。LCMS (ESI+): 422.2 (M+H)
步驟 4 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[(4R)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(240 mg，351.04 µmol)及2-[(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(147.93 mg，351.04 µmol)混合於 N,N-二甲基甲醯胺中，將反應混合物冷卻至0℃。將 N,N-二異丙基乙基胺(272.22 mg，2.11 mmol，366.87 μL)添加至反應混合物中，且添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(133.48 mg，351.04 µmol)，且在4℃下冷卻反應混合物16 h。將水(300 μL)添加至反應混合物中且攪拌2 h。將混合物注射於100 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水(+0.1%三氟乙酸)溶離梯度純化。純溶離份經合併且分配於20:80 iPrOH:氯仿與碳酸氫鈉(飽和水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發純溶離份。將固體溶解於70:30乙腈:水中，經音波處理以溶解，冷凍且凍乾，得到 化合物 2(150 mg，151.07 µmol，43.04%產率)。LCMS (ESI+): 973.2 (M+H), 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 10.50 (s, 1H), 7.67 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.55 - 7.45 (m, 3H), 7.40 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.06 (s, 1H), 4.75 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.14 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 7H), 3.92 (s, 4H), 3.85 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.16 (qd, J = 14.9, 14.3, 7.1 Hz, 5H), 2.92 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.69 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 2.65 - 2.45 (m, 2H), 2.41 - 2.30 (m, 1H), 2.28 - 2.11 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H)。
化合物 2 之絕對組態化合物 2之絕對組態係藉由對具有塞勒布隆蛋白質構築體之共晶體進行X射線繞射測定中間物(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯的絕對組態而建立。
藉由對掌性 SFC 分離製備 (4R)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯及 (4S)-4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1323
在以下條件下使用SFC分離解析外消旋4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸三級丁酯： 樣品重量：5.06 g 管柱：ChiralCel OD -H 21×250 mm 流動相：20%2-丙醇在CO2中 流速：70 mL/min 樣品：將每1 g樣品溶解於25 mL乙醇及25 mL二氯甲烷中 注射：1 mL 偵測：220 nm
將第一溶離組之溶離份收集且蒸發，以使用以下分析條件獲得(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.21 g，43%產率，100%鏡像異構體過量)。SFC滯留時間：3.18 min (25%異丙醇/超臨界CO 2，OD -H 4.6 × 100 mm，40℃ 4 mL/min，100 psi，5 μL (乙醇)注射)，LCMS: 464 (M+H)
經由與塞勒布隆(CRBN)蛋白質構築體共結晶，然後對原位結合之蛋白質與小分子進行X射線繞射，以超高解析度定義(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯的絕對組態。結構解析度為1 Å。圖10及圖11中展示了有及沒有密度圖疊加之結構。
收集且蒸發第二溶離組之溶離份，以使用以下分析條件獲得(4S)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.21 g，43%產率，100%鏡像異構體過量)。滯留時間：4.07 min (25%異丙醇/超臨界CO 2，OD -H 4.6 × 100 mm，40℃ 4 mL/min，100 psi，5 μL (乙醇)注射)，LCMS: 464 (M+H)。
實例 4. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 3)
Figure 02_image1325
在0℃下將N,N-二異丙基乙基胺(47.26 mg, 365.67 µmol, 63.69 µL)添加至2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-5-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(43.53 mg, 95.07 µmol)於DMF(0.8 mL)中之溶液中。在0℃下添加HATU (30.59 mg，80.45 µmol)且將混合物在環境溫度下攪拌10 min。隨後，添加溶解於DMF(0.4 mL)中之2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺三氟乙酸鹽(50 mg, 73.13 µmol)。攪拌反應混合物30分鐘。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份經合併且分配於乙酸乙酯與飽與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。將純溶離份蒸發，得到呈灰白色固體狀之 化合物 3(30.3 mg，29 µmol，41%產率)。LCMS (ESI+): 973.2 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.44 (s, 1H), 10.48 (s, 1H), 7.67 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 - 7.48 (m, 3H), 7.41 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.51 - 6.46 (m, 2H), 6.08 (s, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.15 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.06 - 3.94 (m, 6H), 3.96 - 3.88 (m, 5H), 3.85 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.19 - 3.07 (m, 4H), 2.92 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 3H), 2.65 - 2.55 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.43 - 2.33 (m, 3H), 2.20 (dd, J = 27.1, 14.4 Hz, 1H), 1.77 (m, 1H)。
實例 5. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺， 異構體1 ( 化合物 4)
Figure 02_image1327
將N,N-二異丙基乙基胺(56.71 mg, 438.81 µmol, 76.43 µL)添加至2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽異構體1 (47.67 mg, 114.09 µmol)於DMF(0.8 mL)中之溶液中。在0℃下添加HATU(36.71 mg，96.54 µmol)且在環境溫度下攪拌混合物10分鐘。添加溶解於DMF(0.4 ml)中之2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺三氟乙酸鹽(60 mg, 87.76 µmol)。攪拌反應混合物2小時。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份經合併且分配於乙酸乙酯與飽與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化。蒸發所需溶離份且將固體溶解於乙腈:水混合物(1:1，2 mL)中。將溶液冷凍且凍乾，得到 化合物 4(19.2 mg，20.37 µmol，23.2%)。LCMS (ESI+): 933.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.30 (ddd, J = 12.0, 7.5, 4.8 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 6H), 3.21 - 3.08 (m, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 2H), 2.88 - 2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.44 (m, 4H), 2.42 - 2.30 (m, 1H), 2.16 - 1.97 (m, 2H), 1.89 (tt, J = 12.1, 6.2 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 13.1 Hz, 1H)。
實例 6. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺 ( 化合物 5)
Figure 02_image1329
將N,N-二異丙基乙基胺(53.06 mg, 410.55 µmol, 71.51 µL)添加至DMF( 0.5 mL)中之(2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(45.11 mg, 98.53 µmol)  (55.64 mg, 82.11 µmol)。在0℃下添加HATU(34.34 mg，90.32 µmol)且在環境溫度下攪拌10 min。添加DMF(0.4 ml)中之2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙醯胺；三氟乙酸鹽。攪拌反應混合物2小時同時升溫至20℃。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份用碳酸氫鈉(水溶液、水溶液)中和，且水性混合物用1: 4異丙醇:氯仿混合物萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。殘餘物藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化，得到 化合物 5(47.3 mg，48.42 µmol，58.98%產率)。LCMS (ESI+): 967.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.96 (s, 1H), 10.61 (s, 1H), 8.38 (dd, J = 5.3, 1.9 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (ddd, J = 8.8, 7.3, 2.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 2H), 7.66 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.21 - 7.14 (m, 2H), 6.64 - 6.59 (m, 2H), 6.26 (s, 1H), 4.86 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.28 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.10 (d, J = 5.9 Hz, 4H), 4.08 - 4.02 (m, 4H), 3.98 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.33 - 3.21 (m, 4H), 3.06 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.91 - 2.79 (m, 3H), 2.78 - 2.68 (m, 1H), 2.64 - 2.46 (m, 2H), 2.41 - 2.27 (m, 1H), 1.91 (d, J = 12.5 Hz, 1H)。
2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 化合物 6
Figure 02_image1331
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺二鹽酸鹽(60 mg, 93.08 µmol, 022)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸(42.76 mg, 93.08 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(60.15 mg, 465.41 µmol, 81.06 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU (46.01 mg, 121.01 µmol)，且將反應混合物攪拌4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度進行純化。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。固體藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發所需溶離份。將殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加水(1 mL)及乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 6(10.5 mg，11.21 µmol，12.05%產率，96%純度)。LCMS (ESI+) : 899.4 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.53 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.98 - 7.70 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.37 (s, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.64 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.41 - 4.16 (m, 2H), 4.15 - 3.87 (m, 3H), 3.74 - 3.52 (m, 4H), 3.47 (s, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.88 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 2.84 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.48 - 2.19 (m, 4H), 2.22 - 1.94 (m, 3H), 1.95 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 2H), 1.63 - 1.42 (m, 1H)。
實例 7. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[4-[5-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 吡啶基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 11)
Figure 02_image1333
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(75 mg，126.24 µmol)及2-[4-[5-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸雙(三氟乙酸)鹽(79.77 mg，138.87 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(81.58 mg, 631.21 µmol, 109.94 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(62.40 mg, 164.11 µmol)，且將反應混合物攪拌 4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度來純化。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(60 mL)中和，用異丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，注射於用100%二氯甲烷沖洗之24g矽膠管柱上且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將於二氯甲烷中之粗殘餘物轉移至8 mL小瓶中，且在減壓下蒸發。使化合物懸浮於乙腈:水混合物中，且對混合物進行徹底超音波處理，渦旋且再次進行超音波處理。將懸浮液冷凍且凍乾，得到 化合物 11(35 mg，39.11 µmol，30.98%產率)。LCMS (ESI+): 886.6 (M+H). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.97 (t, J= 1.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.97 (d, J= 1.8 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.92 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.33 (ddd, J= 12.2, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 4.23 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.11 - 3.85 (m, 2H), 3.70 (d, J= 58.2 Hz, 4H), 3.21 (s, 4H), 2.93 (d, J= 10.7 Hz, 2H), 2.85 - 2.65 (m, 2H), 2.67 - 2.52 (m, 1H), 2.49 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.90 (qd, J= 12.3, 4.7 Hz, 1H), 1.84 - 1.48 (m, 4H)。
實例 8. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 12)
Figure 02_image1335
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(51.85 mg，87.28 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(50 mg，104.73 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(56.40 mg, 436.39 µmol, 76.01 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU (43.14 mg, 113.46 µmol)，且將反應混合物攪拌4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度來純化。將純溶離份用飽和碳酸氫鈉水溶液(60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，注射於24 g矽膠管柱上，用100%二氯甲烷沖洗，且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加1 mL水+ 1 mL乙腈，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。將懸浮液冷凍且凍乾，得到 化合物 12(20 mg，21.48 µmol，24.62%產率)。LCMS (ESI+): 903.7 (M+H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.51 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.93 - 7.63 (m, 4H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.25 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 6.98 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 6.58 - 6.32 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.99 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.30 (td, J= 7.5, 3.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 3.98 (m, 2H), 3.85 - 3.45 (m, 4H), 3.25 (d, J= 34.8 Hz, 6H), 2.93 (d, J= 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.65 (m, 2H), 2.64 - 2.51 (m, 2H), 2.47 (m, 1H), 2.18 - 1.97 (m, 3H), 1.95 - 1.76 (m, 1H), 1.66 (m, 4H)。
實例 9. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-3- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 13)
Figure 02_image1337
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(48.5 mg, 81.64 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(46.77 mg, 97.96 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(52.75 mg, 408.18 µmol, 71.10 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(40.35 mg, 106.13 µmol)，且將反應混合物攪拌4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈+0.1% TFA/水+0.1% TFA，歷經12分鐘)。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(60 mL)中和，用異丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，注射於24 g矽膠管柱上，用100%二氯甲烷沖洗，且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加溶解於水:乙腈混合物(1 mL:1 mL)中之化合物，且對混合物進行徹底超音波處理，渦旋且再次進行超音波處理。將懸浮液冷凍且凍乾，得到 化合物 13(15.5 mg，16.65 µmol，20.40%產率)。LCMS (ESI+) : 903.6 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.52 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.78 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.74 (dd, J= 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.26 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 6.94 (dd, J= 13.3, 1.9 Hz, 1H), 6.84 (dd, J= 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.75 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.38 (dd, J= 7.9, 2.4 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.35 (ddd, J= 12.6, 7.9, 5.2 Hz, 1H), 4.23 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.10 - 3.88 (m, 2H), 3.69 (d, J= 54.2 Hz, 4H), 3.26 (d, J= 31.5 Hz, 6H), 2.93 (d, J= 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.69 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.50 - 2.25 (m, 2H), 2.25 - 1.88 (m, 4H), 1.73 (d, J= 12.1 Hz, 2H), 1.58 (q, J= 12.1 Hz, 2H)。
用於使 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽與酸偶合之通用程序 A1
Figure 02_image1339
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(1當量)及適當之酸性中間物(1.2當量)混合於DMF (0.2 M)，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(5當量)添加至反應混合物中，且添加HATU (1.3當量)，且將反應混合物攪拌4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度進行純化。將純溶離份用NaHCO 3水溶液中和，用異丙醇:氯仿(1:4)混合物萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，且注射於24g矽膠管柱上，用100%二氯甲烷沖洗且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。使化合物懸浮於乙腈:水混合物中且對混合物進行徹底超音波處理且渦旋。將懸浮液冷凍且凍乾，得到標題化合物。
用於使 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽與酸偶合之通用程序 B1
Figure 02_image1341
在0 ℃下，向2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺(1當量)及適當之酸性中間物(1.2當量)於DMAc (0.2 M)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(34.77 mg，268.99 µmol，46.85 µL)及六氟磷酸(1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)二甲基胺基-N-𠰌啉基-金炭(57.60 mg，134.50 µmol)，將反應混合物攪拌3小時。在減壓下蒸發揮發物且粗物質係在以下條件下藉由製備型HPLC來純化：管柱：Agilent製備型C18 (50×21.2 mm，5 µm)。溶離劑混合物：10 mM乙酸銨水溶液:乙腈。將純溶離份凍乾，得到標題化合物。
用於使酸偶合至 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4-( 哌啶 -4- 基 ) 苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺之通用程序 ：
Figure 02_image1343
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-1-側氧基-6-(4-(哌啶-4-基)苯基)異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺(1當量)及適當之酸性中間物(1.2當量)混合於DMF中，且將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(5當量)添加至反應混合物中，且添加HATU (1.3當量)，且將反應混合物攪拌4小時，同時升溫至室溫。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿(1:1)混合物萃取。有機層在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，且注射於24g矽膠管柱上，用100%二氯甲烷沖洗，且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加水(1 mL)及乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。將懸浮液冷凍且凍乾，得到標題化合物。
實例 10. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 31) 步驟 1 ： 4-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯氧基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1345
在100 mL圓底燒瓶中，將2-(6-溴-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.1 g，7.34 mmol)及4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯氧基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(4.00 g，9.91 mmol)溶解於二㗁烷(44 mL)中，且添加Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2(299.77 mg，367.08 μmol)及tBuXPhos (463.44 mg，734.17 μmol)，接著添加溶解於水(11 mL)中之碳酸鈉(1.71 g，16.15 mmol)。將混合物用氮氣脫氣。將反應物以隔墊封端，裝配有氮氣入口且在80℃下在加熱組上加熱5 h。用乙酸乙酯稀釋混合物，且自水層以及固體沈澱分離有機層。藉由矽膠急驟管柱層析(0-10%甲醇/乙酸乙酯)純化粗殘餘物，得到呈淡橙色發泡體狀之4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(3.6 g，5.82 mmol，79.26%產率)。LCMS: 619.4 (M+H) 步驟 2 ： [2-[6-[4-[(1- 三級丁氧基羰基 -4- 哌啶基 ) 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙醯基 ]
Figure 02_image1347
將氫氧化鋰(1 M，5.82 mL)添加至4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(3.6 g，5.82 mmol)於乙醇(25 ml)中之溶液中。將反應混合物加熱至40℃持續16小時。將反應混合物在真空中濃縮，懸浮於苯中且蒸發。殘餘物經受高真空，得到[2-[6-[4-[(1-三級丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(3.47 g，定量產率)。LCMS (ESI+): 590.9 (M+H) 步驟 3 ： 4-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯氧基 ] 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1349
將[2-[6-[4-[(1-三級丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(3.47 g，5.82 mmol)及噻唑-2-胺(640.73 mg，6.40 mmol)混合於DMF中且將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(3.01 g，23.27 mmol，4.05 mL)添加至反應混合物中，且添加HATU (2.88 g，7.56 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌30 min。將飽和碳酸氫鈉水溶液添加至反應混合物。反應混合物用乙酸乙酯(2×)萃取。有機層用水、鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。藉由矽膠急驟層析(24 g，0-10%甲醇/二氯甲烷)純化粗材料，得到4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，4.46 mmol，77%產率)。LCMS (ESI+): 673.2 (M+H) 步驟 4 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-[4-(4- 哌啶基氧基 ) 苯基 ] 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1351
將4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(3 g，4.46 mmol)溶解於1,4-二㗁烷(10 mL)及甲醇(10 mL)中。添加鹽酸溶液(4.0 M於1,4-二㗁烷中，8 mL，32 mmol)。在40℃下加熱反應混合物4小時。在減壓下蒸發揮發物。材料經受高真空，冷凍至-78℃且解凍，得到呈緻密固體狀之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(3.2 g，5.25 mmol，定量產率)。
步驟 5 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1353
Figure 02_image1355
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(100 mg，164.17 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽(98.05 mg，213.43 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(106.09 mg，820.87 µmol，142.98 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU (81.15 mg，213.43 µmol)，且將反應混合物在冰浴中攪拌1 h。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度進行純化。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用異丙醇:氯仿混合物(1;4)萃取兩次。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，注射於用100%二氯甲烷沖洗之24g矽膠管柱上，且使用0%至20%甲醇/二氯甲烷梯度歷經20分鐘來純化。在減壓下蒸發純溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加水(1 mL)及乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到呈灰白色固體狀之 化合物 31(62 mg，68.20 µmol，41%產率)。LCMS (ESI+): 900.7 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.53 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.74 (m, 3H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.08 (m, 2H), 7.00 - 6.93 (m, 2H), 6.66 - 6.59 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.74 (dq, J = 8.1, 3.9 Hz, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 2H), 3.99 (dddd, J = 11.2, 8.2, 6.3, 3.1 Hz, 2H), 3.89 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 3.31 - 3.10 (m, 3H), 2.91 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.75 (ddt, J = 23.3, 11.9, 5.7 Hz, 2H), 2.63 - 2.44 (m, 4H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.16 - 2.00 (m, 4H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.86 (qd, J = 12.2, 4.8 Hz, 1H), 1.77 - 1.64 (m, 3H), 1.57 (q, J = 12.2 Hz, 3H)。
實例 11. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 32)
Figure 02_image1357
使用與2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺相同之程序，使用2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽而非2-[4-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽製備 化合物 32，47%產率。LCMS (ESI+): 900.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.77 - 4.68 (m, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 4.08 - 3.95 (s, 2H), 3.95 - 3.83 (m, 2H), 3.52 - 3.08 (m, 4H), 2.92 (m, 2H), 2.83 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.42 (m, 4H), 2.40 - 2.28 (m, 1H), 2.18 - 2.02 (m, 4H), 1.99 - 1.79 (m, 2H), 1.79 - 1.65 (m, 3H), 1.63-1.50 (m, 3H)。
實例 12. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 33)
Figure 02_image1359
使用與2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙醯基]-4-哌啶基]氧基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺相同之程序，使用2-[4-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽而非2-[4-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽製備 化合物 33，36%產率。(54 mg，59.40 µmol，36.18%產率)。LCMS (ESI+): 900.6 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 7.82 - 7.73 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.96 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 2H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.46 (m, 1H), 3.33 - 3.10 (m, 3H), 2.91 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 2.82 - 2.66 (m, 3H), 2.62 - 2.42 (m, 3H), 2.33 (dd, J = 3.8, 1.9 Hz, 1H), 2.17 - 2.01 (m, 4H), 1.88 (ddd, J = 20.1, 15.0, 9.8 Hz, 2H), 1.77 - 1.64 (m, 3H), 1.64 - 1.49 (m, 3H)。
用於將 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-[4-(4- 哌啶基氧基 ) 苯基 ] 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽醯胺偶合至酸中間物的通用方法 A使用合成實例10，步驟5中所使用之方法，由2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽合成化合物。
用於將 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-[4-(4- 哌啶基氧基 ) 苯基 ] 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽醯胺偶合至酸中間物的通用方法 B在環境溫度下，向2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(1當量)及酸中間物(1.1當量)於DMF (0.1 M)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(5當量)，接著添加HATU (1.3當量)。將反應物在環境溫度下進一步攪拌16 h。反應混合物用冰冷水淬滅且用10%甲醇/二氯甲烷(50 ml)萃取。在減壓下濃縮有機層，獲得粗物質。在逆相管柱上純化粗物質，從而將化合物溶離於40-50%乙腈/水(具有0.1%TFA相調節劑)中。凍乾純溶離份，得到固體，該固體係藉由製備型HPLC進一步純化。純化方法：管柱：Zorbax Extend C18 (50×4.6 mm) 5 μm，流動相A：10 mM乙酸銨/水，流動相B：乙腈。將純溶離份冷凍且凍乾，得到標題化合物。
實例 13. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-3- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 34)
Figure 02_image1361
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法A來合成，52%產率。
LCMS (ESI+) 918.7 (M+H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.82 - 7.70 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.49 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.00 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 3.7 Hz, 1H), 4.31 (td, J = 7.4, 3.8 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 3.30 - 3.08 (m, 3H), 2.92 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.66 (m, 2H), 2.62 - 2.41 (m, 3H), 2.15 - 2.02 (m, 5H), 1.88 - 1.79 (m, 1H), 1.87 (qd, J = 12.3, 4.6 Hz, 3H), 1.74 - 1.59 (m, 6H), 1.59 - 1.47 (m, 1H)。
實例 14. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 35)
Figure 02_image1363
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法A來合成，52%產率。
LCMS (ESI+) 918.7 (M+H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.82 - 7.70 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.49 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.00 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 3.7 Hz, 1H), 4.31 (td, J = 7.4, 3.8 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 3.30 - 3.08 (m, 3H), 2.92 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.66 (m, 2H), 2.62 - 2.41 (m, 3H), 2.15 - 2.02 (m, 5H), 1.88 - 1.79 (m, 1H), 1.87 (qd, J = 12.3, 4.6 Hz, 3H), 1.74 - 1.59 (m, 6H), 1.59 - 1.47 (m, 1H)。
實例 15. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-((1-(2-(4-(5-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 36)
Figure 02_image1365
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法A來合成，30%產率。
LCMS (ESI+) 901.5 (M+H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.98 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 4H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.98 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.78 - 4.69 (m, 1H), 4.34 (ddd, J = 12.2, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.06 - 3.84 (m, 4H), 3.45 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.31 - 3.07 (m, 2H),  2.91 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.83 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.42 (m, 6H), 2.17 - 2.01 (m, 4H), 2.00 - 1.83 (m, 2H), 1.82 - 1.60 (m, 5H), 1.60 - 1.47 (m, 1H)。
實例 16. 合成 2-(6-(4-((1-(2-(4-(2- 氰基 -4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 37)
Figure 02_image1367
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法A來合成，46%產率。
LCMS (ESI+) 925.5 (M+H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.82 - 7.71 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.15 - 7.09 (m, 2H), 6.97 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.25 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.78 - 4.70 (m, 1H), 4.40 (ddd, J = 12.3, 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.00 (ddt, J = 10.5, 7.5, 4.6 Hz, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 2H), 3.46 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 3.30 - 3.13 (m, 3H), 2.96 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 3H), 2.64 - 2.45 (m, 3H), 2.20 - 2.02 (m, 4H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.70 (s, 5H), 1.55 (d, J = 8.8 Hz, 1H)。
實例 17. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-((2,4- 二側氧基 -3- 氮雜雙環 [3.1.1] 庚 -1- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 38)
Figure 02_image1369
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法B來合成，4.47%產率。
LCMS (ESI+) 912.2 (M+H)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.53 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 1.2, 12.4 Hz, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 4.82 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.77-4.68 (m, 1H), 4.24 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.97-3.88 (m, 2H), 3.28-3.27 (m, 3H), 2.97-2.81 (m, 4H), 2.80-2.71 (m, 3H), 2.15-2.01 (m, 4H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.75-1.61 (m, 4H), 1.61-1.49 (m, 4H)。
實例 18. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-((1-(2-(4-(4-(((S)-2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 氧基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ( 化合物 39)
Figure 02_image1371
根據用於將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽與酸中間物醯胺偶合的通用方法B來合成，39%產率。
LCMS (ESI+) 919.0 (M+H)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.56 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.80-7.73 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.47-6.43 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.84-4.74 (m, 2H), 4.31-4.22 (m, 2H), 4.03-3.97 (m, 4H), 3.48-3.41 (m, 1H), 3.34-3.12 (m, 3H), 2.92-2.88 (m, 2H), 2.78-2.67 (m, 2H), 2.61-2.54 (m, 3H), 2.11-2.06 (m, 4H), 1.92-1.86 (m, 3H), 1.76-1.51 (m, 7H)。
實例 19. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 40) 步驟 1 ： 2-[4-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯氧基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙酸乙酯
Figure 02_image1373
向2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(58 mg，95.22 µmol)於二氯甲烷(1 mL)中之攪拌溶液中添加三乙胺(24.09 mg，238.05 µmol，33.18 µL)及2-氯-2-側氧基-乙酸乙酯(14.30 mg，104.74 µmol，11.72 µL)且將混合物在環境溫度下攪拌。完成後，反應混合物用氯仿/異丙醇(4:1)及NaHCO 3(水溶液)稀釋。分離之有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。混合物藉由矽膠管柱層析使用0%至20%甲醇/二氯甲烷溶離劑梯度進行純化，得到2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙酸乙酯(37 mg，55.00 µmol，58%產率)。LCMS (ESI+): 673.2 (M+H)。
步驟 2 ： 2-[4-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯氧基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙酸鋰鹽
Figure 02_image1375
向2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(2-噻吩基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙酸乙酯(37 mg，55.08 µmol)於乙醇(0.5 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(1 M水溶液，61 µmol，61 µL)且將混合物在環境溫度下攪拌2小時。將反應混合物在減壓下蒸發至乾，得到2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙酸鋰鹽(35.9 mg，55.08 µmol，定量產率)。LCMS (ESI+): 645.2 (M+H)。
步驟 3 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 氧基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1377
將2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-側氧基-乙酸鋰鹽(35.9 mg，55.08 µmol)及3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮；鹽酸鹽(21.40 mg，66.09 µmol)混合於DMF (0.5 mL)中且將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(35.59 mg, 275.39 µmol, 47.97 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(27.23 mg, 71.60 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用異丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取兩次。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發。殘餘物藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。所需溶離份在減壓下蒸發，隨後溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶中，且在減壓下蒸發。添加水(1 mL)及(1 mL)乙腈，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 40(25.7 mg，27.84 µmol，50%產率)。LCMS (ESI+): 914.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.57 (s, 1H), 10.82 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 3H), 7.67 (s, 1H), 7.55 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.68 (dd, J = 8.7, 2.9 Hz, 2H), 6.22 (s, 1H), 5.75 (dd, J = 7.5, 3.6 Hz, 1H), 4.94 - 4.79 (m, 2H), 4.48 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 2H), 4.13 - 3.99 (m, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 1H), 3.64 (t, J = 14.8 Hz, 2H), 3.57 - 3.34 (m, 3H), 3.28 (t, J = 13.3 Hz, 1H), 2.92 - 2.68 (m, 4H), 2.68 - 2.57 (m, 3H), 2.21 - 2.01 (m, 3H), 1.99 - 1.81 (m, 3H), 1.81 - 1.65 (m, 2H), 1.53 (dd, J = 15.6, 7.9 Hz, 2H)。
實例 20. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 吡咯啶 -3- 基 ]] 氧基苯基 ]]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 41) 步驟 1 ： 4-(4-(2-(1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基乙基 )-7- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -5- 基 ) 苯氧基 ) 哌啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1379
(3R)-3-(4-(2-(1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基乙基)-7-氟-3-側氧基異吲哚啉-5-基)苯氧基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯係使用 實例 10 ， 步驟 1中使用之程序由2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯及(R)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯氧基)吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(Cas#1383793-73-4)進行製備，產率為43%。LCMS (ESI+): 605.3 (M+H)
步驟 2 ： 2-[6-[4-[(3R)-1- 丁氧基羰基吡咯啶 -3- 基 ] 氧基苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸
Figure 02_image1381
在0℃下向(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(600 mg，992.28 μmol)於THF (3 mL)及甲醇(3 mL)及水(3 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(41.64 mg，992.28 μmol)。在室溫下攪拌反應混合物3 h，隨後濃縮反應混合物。將粗殘餘物溶解於5 ml水中且藉由使用KHSO 4鹽酸化(pH 1-2)。過濾溶液，得到固體化合物2-[6-[4-[(3R)-1-三級丁氧基羰基吡咯啶-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(450 mg，522 μmol，53%產率)。LCMS (ESI+): 577.0 (M+H)。
步驟 3 ： (3R)-3-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯氧基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸酯
Figure 02_image1383
在0℃下向2-[6-[4-[(3R)-1-三級丁氧基羰基吡咯啶-3-基]氧基苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(200 mg，346.85 μmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(224.14 mg，1.73 mmol，302.08 μL)及丙基膦酸酐，50%溶液於乙酸乙酯中(220.72 mg，693.70 μmol)。15 min之後，添加噻唑-2-胺(34.73 mg，346.85 µmol)且將混合物在50℃下攪拌16小時。將水添加至反應混合物，提供沈澱作用。藉由過濾收集沈澱物，接著將其溶解於二氯甲烷中且濃縮溶液。藉由急驟管柱層析純化粗產物，在3%甲醇/二氯甲烷中溶離產物。合併且濃縮適當溶離份，得到(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(110mg，111.9 μmol，32%產率)。LMCS (ESI+): 659.2 (M+H)。
步驟 4 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-[4-[(3R)- 吡咯啶 -3- 基 ] 氧基苯基 ] 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1385
在0℃下向(3R)-3-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯氧基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(150 mg，227.71 μmol)於二氯甲烷(1.5 mL)中之溶液中添加鹽酸溶液(4.0M於二㗁烷中，426 μL，1.71 mmol)。2 h之後，在減壓下濃縮反應混合物且用二乙醚洗滌固體殘餘物，得到2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-[(3R)-吡咯啶-3-基]氧基苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(140 mg，174.1 µmol，76.5%產率)。LCMS m/z 559.2 (M+H)
步驟 5 ： 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[(3R)-1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 吡咯啶 -3- 基 ] 氧基苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1387
在0℃下向2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(63.84 mg，138.97 µmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(119.45 mg，924.24 µmol，160.99 µL)及COMU (118.75 mg，277.27 µmol)。15 min之後，添加2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-[(3R)-吡咯啶-3-基]氧基苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(110 mg，184.85 µmol)。攪拌1小時之後，將5 ml水添加至反應混合物中且形成固體沈澱物。藉由過濾收集固體，隨後將其溶解於二氯甲烷中且濃縮溶液。粗物質藉由逆相C-18層析(0-100%之0.1%乙酸銨/水及乙腈)純化。凍乾溶離份，得到呈白色固體狀之 化合物 41。LCMS (ESI+): 887.0 (M+H), 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.53 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.80-7.77 (m, 4H), 7.64 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.11-7.02 (m, 2H), 6.97-6.95 (m, 1H), 6.91-6.87 (m, 1H), 6.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.72-5.65 (m, 1H), 5.23-5.13 (m, 1H), 4.82 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.44-4.24 (m, 2H), 4.04-3.92 (m, 2H), 3.90-3.61 (m, 3H), 3.61-3.45 (m, 2H), 3.61-3.45 (m, 4H), 3.11-2.88 (m, 2H), 2.90-2.85 (m, 1H), 2.71-2.67 (m, 2H), 2.65-2.58 (m, 2H), 2.12-2.42 (m, 4H), 1.85-1.78 (m, 1H), 1.72-1.64 (m, 2H)
實例 21. 合成 (2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 43)
Figure 02_image1389
步驟 1 ： (2S,4R)-2-(3- 乙氧基 -3- 氧代丙醯基 )-4- 氟吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯使用與用於 中間物2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽， 步驟 1之程序類似的程序，使用(2S,4R)-1-(三級丁氧基羰基)-4-氟吡咯啶-2-甲酸(CAS# 203866-14-2)而非(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙醯基)-吡咯啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙醯基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯。LCMS (ESI+): 304.1 (M+H)
步驟 2 ： 3-((2S,4R)-4- 氟吡咯啶 -2- 基 )-3- 側氧基丙酸乙酯 ， 三氟乙酸鹽將(2S,4R)-2-(3-乙氧基-3-側氧基丙醯基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(11公克，36 mmol)溶解於二氯甲烷(150 mL)中，且添加三氟乙酸(50 mL)。在22℃下攪拌反應混合物2小時，且蒸發揮發物，得到3-((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)-3-側氧基丙酸乙酯，三氟乙酸鹽(7.36 g，36 mmol，定量產率)。LCMS (ESI+): 204.1 (M+H)。
步驟 3 ： (R)-2-(6- 氟 -3- 硫酮基 -2,5,6,7- 四氫 -3H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯使用與用於 中間物2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽， 步驟 3類似的程序以88%產率自3-((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)-3-側氧基丙酸乙酯，三氟乙酸鹽獲得(R)-2-(6-氟-3-硫酮基-2,5,6,7-四氫-3H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯。LCMS (ESI+): 245.1 (M+H)
步驟 4 ： (R)-2-(6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸乙酯使用與用於合成中間物2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽，步驟4類似的程序以47%產率獲得(R)-2-(6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯。LCMS (ESI+) m/z= 213 [M+H +], 1H-NMR (400 MHz, CDCl 3: 7.51 (br. s, 1H), 5.79 (d, J = 51 Hz, 1H), 4.30-4.09 (m, 4H), 3.59 (br, s, 2H), 3.25-3.02 (m, 2H), 1.28 (t, J= 6.7 Hz, 3H)。
步驟 5 ： 2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2- 羥亞胺基 - 乙酸乙酯
Figure 02_image1391
使用與用於中間物2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽，步驟5類似的程序以77.5%產率自(R)-2-(6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯獲得2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-羥亞胺基-乙酸乙酯。LCMS (ESI+): 242.1 (M+H +)
步驟 6 ： 2- 胺基 -2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ] 乙酸乙酯
Figure 02_image1393
使用與用於中間物2-胺基-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯二鹽酸鹽，步驟6類似的程序以29%產率自2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-羥亞胺基-乙酸乙酯獲得2-胺基-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酸乙酯二鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 228.1 (M+H)。
步驟 7 ： 2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2-(4- 氟 -6- 碘 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ) 乙酸酯
Figure 02_image1395
將2-胺基-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙酸乙酯：二鹽酸鹽(3.9 g，4.02 mmol)溶解於DMF(10 mL)中。添加2-(溴甲基)-3-氟-5-碘苯甲酸甲酯(1.20 g，3.22 mmol)，隨後添加N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺(2.08 g，16.08 mmol，2.80 mL)。在室溫下攪拌反應混合物30 min。在80℃下加熱反應混合物4 h。將反應混合物分配於乙酸乙酯與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層經分離且用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(40 g管柱，0%至25%甲醇/乙酸乙酯)純化。蒸發純溶離份，得到2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(951 mg，1.95 mmol，48.55%產率)。LCMS: 1.253 min., MS (ESI+): 488 (M+H)
步驟 8 ： 4-[4-[2-[2- 乙氧基 -1-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1397
將2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(951 mg, 1.95 mmol)及4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(833.70 mg, 2.15 mmol)混合於水(2.5 mL)及1,4-二㗁烷(7.5 mL)中。添加Pd(dppf)Cl 2(99.97 mg，136.63 µmol)及碳酸鉀(269.75 mg，1.95 mmol，117.80 µL)，且在音波處理下用氮氣使反應混合物脫氣15分鐘。在80℃下加熱反應混合物4小時。將反應混合物分配於乙酸乙酯與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(40 g管柱，0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化。蒸發純溶離份，得到4-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(436 mg, 701.33 µmol, 35.93%產率)。LCMS (ESI+): 622.2 (M+H) / 522 (M-Boc+H)
步驟 9 ： [2-[6-[4-(4- 三級丁氧基羰基哌 𠯤 -1- 基 ) 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ] 乙醯基 ] 氧基鋰
Figure 02_image1399
將4-[4-[2-[2-乙氧基-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(435 mg, 699.73 µmol)溶解於乙醇(5 mL)中，冷卻至0℃且添加氫氧化鋰，1 M(1 M，699.73 µL)。攪拌反應混合物3小時。將粗殘餘物溶解於具有0.5 mL苯之二氯甲烷中且在減壓下蒸發，隨後承受高真空，得到[2-[6-[4-(4-三級丁氧基羰基哌𠯤-1-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙醯基]氧基鋰(410 mg, 683.84 µmol, 97.73%產率)。LCMS (ESI+) : 594.2 (M+H, 游離酸)。
步驟 10 ： 4-[4-[7- 氟 -2-[1-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1401
將[2-[6-[4-(4-三級丁氧基羰基哌𠯤-1-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]乙醯基]氧基鋰(410 mg, 683.84 µmol)及噻唑-2-胺(82.18 mg, 820.61 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(265.15 mg, 2.05 mmol, 357.34 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(312.02 mg, 820.61 µmol)，且將反應混合物攪拌4小時。將反應混合物分配於乙酸乙酯與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。蒸發純溶離份，得到4-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(315 mg, 419.54 µmol, 61.35%產率)。LCMS (ESI+): 676.2 (M+H)。 步驟 11 ： 2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺；鹽酸鹽 步驟 11 ： (2RS)-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1403
向4-[4-[7-氟-2-[(1RS)-1-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(25 mg, 37 µmol)於二氯甲烷(0.5 ml)中之溶液中添加於二㗁烷中之HCl 4M(46.2 µl, 185 µmol, 當量：5)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。將反應混合物濃縮至乾，得到呈灰白色固體狀之(2RS)-2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(22.6 mg, 36.9 µmol, 99.7 %)。MS: m/e= 576.4 ([M+H] +)。
步驟 12 ： 2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1405
在室溫下，向2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸三級丁酯(543 mg, 1.35 mmol, 當量：1)於乙酸乙酯(8 ml)中之溶液中添加於1,4-二㗁烷中之4 M鹽酸溶液(6.3 g, 6 ml, 24 mmol, 當量：17.7)，且持續攪拌過週末。藉由過濾收集產物，用乙酸乙酯洗滌且高真空乾燥，得到淺紅色固體狀之2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽(537 mg, 1.27 mmol, 93.6 %產率)。MS: m/e = 346.2 ([M+H] +)。
步驟 13 ： (2RS)-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1407
使用與實例1中所描述類似的化學方法獲得呈淡黃色固體狀之標題化合物， 化合物 43 ，m/e = 903.7 ([M+H] +)。
實例 22 . 合成 2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 44)
步驟 1 ： 2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1409
將4-[4-[7-氟-2-[1-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(315 mg, 466.15 µmol)溶解於甲醇(3 mL)中且添加於二㗁烷中之鹽酸溶液4.0 M(4 M, 5.6 mmol, 1.40 mL)。在40℃下加熱反應混合物4小時，且反應完成。在減壓下蒸發揮發物。使材料承受高真空，冷凍至-78℃且解凍，得到2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(237 mg, 387.20 µmol, 83.06%產率)。LCMS (ESI+): 576.2 (M+H)
步驟 2: 2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1411
將2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(63 mg, 102.93 µmol)及2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸、三氟乙酸(51.59 mg, 108.07 µmol)混合於DMAc DMAc 0.6 mL)中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(66.51 mg, 514.63 µmol, 89.64 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(50.88 mg，133.80 µmol)，且將反應混合物在升溫的同時攪拌4小時。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份經合併且分配於乙酸乙酯與飽與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化。蒸發純溶離份；將固體材料溶解於乙腈:水(1:1)中，冷凍且凍乾，得到 化合物 44(22 mg，23.41 µmol，22.74%產率)。LCMS (ESI+): 921.2 (M+H). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.56 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.89 - 7.72 (m, 2H), 7.68 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 7.49 (dd, J= 3.6, 2.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J= 3.6, 1.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.98 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 6.56 - 6.31 (m, 2H), 6.17 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.99 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.82 (d, J= 51.1 Hz, 1H), 4.82 (dd, J= 17.6, 6.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.16 (m, 4H), 4.08 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.26 - 3.18 (m, 2H), 3.19 - 3.09 (m, 3H), 3.01 - 2.83 (m, 2H), 2.82 - 2.52 (m, 2H), 2.26 - 2.01 (m, 4H), 1.85 (qd, J= 12.1, 4.6 Hz, 1H), 1.65 (m, 4H)。
實例 23. 合成 2-[6-[4-[4-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-[(6R)-6- 氟 -6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 45)
Figure 02_image1413
將2-[(6R)-6-氟-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基]-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(120 mg, 196.05 µmol)及2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-3a,7a-二氫吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(83.10 mg, 196.05 µmol)混合於DMF(1.2 mL)中。使反應混合物冷卻至0℃。向反應混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(170.74 µL，980.24 µmol)，且添加HATU(96.91 mg，254.86 µmol)。反應混合物在升溫的同時攪拌4 h。將混合物注射於50 g C18管柱上且使用0%至100%乙腈(+0.1%TFA)/水(+0.1%TFA)溶離梯度進行純化。所需溶離份經合併且分配於乙酸乙酯與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化。蒸發純溶離份，得到 化合物 45(49 mg，50.92 µmol，25.97%產率)。LCMS (ESI+): 943.3 (M+H +), LCMS (ESI-): 941.1 (M-H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.55 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 7.99 - 7.61 (m, 5H), 7.56 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.04 (dd, J= 8.6, 1.3 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.95 - 5.66 (m, 1H), 4.86 (d, J= 17.6 Hz, 1H), 4.47 - 4.07 (m, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.90 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 3.29 - 3.08 (m, 4H), 3.13 - 2.84 (m, 3H), 2.75 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.72 - 2.55 (m, 1H), 2.18 (t, J= 10.9 Hz, 2H), 1.97 - 1.55 (m, 4H)。
實例 24. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 47)
步驟 1:6-(4- 溴苯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1415
將1-溴-4-碘-苯(9.06 g，32.01 mmol)及2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯半草酸酯(6.49 g，13.34 mmol)懸浮於甲苯(48 mL)中，且將反應混合物用氮氣流脫氣。添加三級丁醇鈉(12.82 g，133.39 mmol)，且將反應混合物在氮氣氛圍下進行音波處理，直至固體大部分溶解且溶液為均勻的。添加1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)(1.95 g，2.67 mmol)，且將反應混合物在90℃下在氮氣下加熱16小時。溶液經由矽藻土過濾，用乙酸乙酯洗滌且在減壓下蒸發濾液。粗殘餘物藉由矽膠層析，使用0%至50%乙酸乙酯/己烷溶離劑梯度純化，得到6-(4-溴苯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(6.25 g，17.69 mmol，66.32%產率)。LCMS (ESI+): 353 / 355 (M+H,  Br模式), 1H-NMR (400 MHz, CDCl 3): 7.31 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.34 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.11 (s, 4H), 3.96 (s, 4H), 1.47 (s, 9H)。
步驟 2:  6-[4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼㖦 -2- 基 ) 苯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1417
向6-(4-溴苯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(6.2 g, 17.55 mmol), 4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1,3,2-二氧硼㖦(5.79 g, 22.82 mmol)及乙酸鉀(5.17 g, 52.65 mmol, 3.29 mL)於1,4-二㗁烷(48 mL)之溶液中添加1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵鈀(ii)二氯化物二氯甲烷(716.65 mg, 877.56 µmol)且將混合物在80℃攪拌16小時。混合物經冷卻且經由矽藻土墊過濾，隨後在減壓下濃縮濾液。粗殘餘物藉由矽膠層析(0%至50%乙酸乙酯/己烷)純化，得到6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(6.32 g, 15.79 mmol, 89.95%產率)。LCMS (ESI+) :  MS (ESI+) : 400.3 / 401.3 / 402.3 (M+H, 硼模式); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.03 (s, 4H), 3.96 (s, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.26 (s, 12H)。
步驟 3: 6-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1419
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(1.57 g, 3.35 mmol)及6-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(1.74 g, 4.35 mmol)溶解於二㗁烷(10 mL)中，且添加tBuXPhos(422.40 mg,669.1 µmol)，隨後添加溶解於水(2.5 mL)中之碳酸鈉(780.16 mg, 7.36 mmol)。混合物用氬氣脫氣且添加1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II) (293.69 mg，401.49 µmol)。將反應物密封且在加熱組上在80℃加熱4小時。濃縮混合物且藉由矽膠急驟管柱層析(0-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈黃色油狀物的6-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(1.8 g, 2.92 mmol, 87.38%產率)。LCMS (ESI+): 616.2 (M+H)
步驟 4: [2-[6-[4-(2- 三級丁氧基羰基 -2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ) 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙醯基 ] 氧基鋰
Figure 02_image1421
步驟 5: 6-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1423
將噻唑-2-胺(106.29 mg, 1.06 mmol)及[2-[6-[4-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(600 mg, 1.01 mmol)混合於DMAc(5 mL)中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(522.56 mg, 4.04 mmol, 704.26 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(499.65 mg, 1.31 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌30 min。使反應混合物升溫至20℃並攪拌2小時。反應混合物用NaHCO 3飽和水溶液稀釋且用乙酸乙酯萃取。將有機層用水及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗材料係藉由矽膠層析(0-20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到6-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(630 mg, 940.63 µmol, 93.06%產率)。LCMS (ESI+): 670.3 (M+H)。
步驟 6: 2-[6-[4-(2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺，三氟乙酸鹽
Figure 02_image1425
將6-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(86 mg, 128.40 µmol)溶解於二氯甲烷(2 mL)中，且添加三氟乙酸(585.64 mg, 5.14 mmol, 395.70 µL)。攪拌反應混合物2 h。在攪拌下將反應混合物逐滴添加至MTBE(10 mL)中。使沈澱物沈降，且傾析且丟棄上清液。所得固體經受高真空，得到2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(107 mg, 134.14 µmol, 定量產率)。LCMS (ESI+): 564.2 (M+H)
步驟 7: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1427
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(113 mg, 165.28 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸(91.12 mg, 198.34 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(106.81 mg, 826.42 µmol, 143.94 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(81.70 mg, 214.87 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。所需溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，且用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，且藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。所需溶離份在減壓下蒸發，隨後溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶中，且在減壓下蒸發。添加4 mL水+ 4 mL乙腈，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 47(56 mg，59.31 µmol，35.88%產率)。LCMS (ESI+): 897.4 (M+H), LCMS (ESI-): 895.3 (M-H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.44 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J= 10.7 Hz, 2H), 7.57 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.42 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 6.54 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.47 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.08 (s, 1H), 5.57 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.36 (s, 2H), 4.30 - 4.07 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.96 (s, 6H), 3.91 (m, 1H), 2.92 (s, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.76 - 2.58 (m, 2H), 2.56 - 2.46 (m, 1H), 2.01 (m, 3H), 1.80 (m, 1H), 1.55 (m, 4H)。
實例 25. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 48)
Figure 02_image1429
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺三氟乙酸(40 mg, 58.51 µmol)及2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(33.52 mg, 70.21 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(37.81 mg, 292.54 µmol, 50.95 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(28.92 mg, 76.06 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100% can (+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。將所需溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取兩次。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，且藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。所需溶離份在減壓下蒸發，隨後溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶中，且在減壓下蒸發。添加水(1 mL) + 乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 48(27.9 mg，30.19 µmol，51.59%產率)。LCMS (ESI+) : 915.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.51 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 7.74 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.70 (dd, J= 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.25 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.01 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 6.54 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.50 - 6.34 (m, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.99 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.79 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.43 (s, 2H), 4.30 (ddd, J= 12.1, 7.7, 4.8 Hz, 1H), 4.21 (d, J= 17.6 Hz, 1H), 4.08 (s, 2H), 4.02 (s, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 2H), 3.16 - 2.83 (m, 4H), 2.83 - 2.64 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 1H), 2.22 - 1.97 (m, 3H), 1.86 (qd, J= 12.0, 4.5 Hz, 1H), 1.65 (s, 4H)。
實例 26. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 49)
Figure 02_image1431
將2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(52.89 mg, 125.36 µmol)溶解於DMF(0.5 mL)中且冷卻至0℃。向反應混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(40.50 mg，313.40 µmol，54.59 µL)。添加HATU(35.75 mg，94.02 µmol)且在35℃攪拌反應混合物10分鐘。將溶液冷卻至0℃且添加2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺雙三氟乙酸鹽(50 mg, 62.68 µmol, 062)。使反應混合物升溫至室溫且攪拌2小時。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份經合併且分配於乙酸乙酯與飽與碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。粗殘餘物藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。蒸發所需溶離份，得到 化合物 49(35 mg，37.35 µmol，59.59%產率)。LCMS (ESI+): 937.2 (M+H), LCMS (ESI-): 935.2 (M-H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 10.46 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.19 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.08 (s, 1H), 4.72 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.15 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.97 - 3.91 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.84 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.03 - 2.79 (m, 4H), 2.68 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 2.60 - 2.45 (m, 1H), 2.38 - 2.25 (m, 1H), 2.19 - 2.02 (m, 2H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 1.73 (s, 5H)。
實例 27. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) 苯基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 苯基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺， 異構體 2, ( 化合物 52)
Figure 02_image1433
使用與2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(6-(4-(6-(2-(4-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)苯基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙醯基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基)-4-氟-1-側氧基異吲哚啉-2-基)-N-(噻唑-2-基)乙醯胺相同的程序，使用2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽，異構體2而非2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽異構體1以19.5%合成 化合物 52 。LCMS (ESI+): 933.4 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 10.7, 1.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.55 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.30 (ddd, J = 12.0, 7.6, 4.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 4.07 - 3.93 (m, 6H), 3.23 - 3.07 (m, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 2H), 2.88 - 2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.44 (m, 4H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.16 - 1.97 (m, 2H), 1.88 (qd, J = 12.2, 4.8 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 13.3 Hz, 1H)。
實例 28. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺 ( 化合物 53) 步驟 1: 6-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-(2- 吡啶基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1435
在環境溫度下向1-氧離子基吡啶-1-鎓-2-胺(43.67 mg, 396.58 µmol)及[2-[6-[4-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(214 mg, 360.53 µmol)於DMF (3 mL)之溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(186.38 mg, 1.44 mmol, 251.18 µL)及HATU (178.21 mg, 468.69 µmol)。15分鐘之後，添加四羥基二硼(96.96 mg，1.08 mmol)且攪拌30分鐘。反應混合物用水:鹽水混合物(1:1)稀釋，用乙酸乙酯萃取，用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥且濃縮。粗殘餘物藉由矽膠管柱層析(24公克，0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈黃色固體狀之6-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(2-吡啶基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(175 mg, 263.66 µmol, 73.13%產率)。LCMS (ESI+): 664.3 (M+H) / 608.3 (M-tBu+H)
步驟 2: 2-[6-[4-(2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺， 雙三氟乙酸鹽
Figure 02_image1437
將6-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(2-吡啶基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(120 mg, 180.79 µmol)溶解於二氯甲烷(2 mL)中。添加三氟乙酸(278 µL，3.61 mmol)，且在35℃下攪拌反應混合物4小時。在壓力下蒸發反應混合物，冷凍且使其承受高真空，得到2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙醯胺，雙三氟乙酸鹽(144 mg，181.89 µmol，定量產率)。LCMS (ESI+): 564.3 (M+H)
步驟 3: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺
Figure 02_image1439
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙醯胺雙三氟乙酸鹽(111 mg, 163.80 µmol)及2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸鹽(93.84 mg, 196.56 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(105.85 mg, 819.01 µmol, 142.65 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU (80.97 mg, 212.94 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上以使用5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)溶離劑梯度進行純化。所需溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，且用1:4異丙醇:氯仿萃取。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。將固體溶解於二氯甲烷中，且藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發所需溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加水(1 mL) + 乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 53(4 mg，4.18 µmol，2.55%產率，95%純度)。LCMS (ESI+): 909.4 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.81 (s, 1H), 10.71 (s, 2H), 8.37 - 8.09 (m, 1H), 8.00 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.31 (m, 7H), 7.05 (dd, J= 7.3, 4.8 Hz, 1H), 6.92 (q, J= 11.4, 10.2 Hz, 1H), 6.48 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.43 - 6.21 (m, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.94 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.23 (dt, J= 12.2, 6.8 Hz, 1H), 4.14 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.96 (s, 4H), 3.95 - 3.77 (m, 1H), 3.11 - 2.46 (m, 4H), 2.20 - 1.87 (m, 2H), 1.88 - 1.24 (m, 7H)。
實例 29. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺 ( 化合物 54)
Figure 02_image1441
將2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(28.61 mg, 67.87 µmol)混合於DMF中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(22.04 mg, 170.53 µmol, 29.70 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU (19.45 mg, 51.16 µmol)，且將反應混合物在35℃下攪拌10分鐘。使反應混合物冷卻至0℃。一次性添加2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙醯胺，雙三氟乙酸鹽(27 mg, 34.11 µmol)，且在升溫至20℃的同時將反應混合物攪拌2小時。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水+0.1%TFA水溶離梯度進行純化。所需溶離份用碳酸氫鈉(水溶液，水溶液)中和，且水性混合物用異丙醇:氯仿混合物(1:4)萃取兩次。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到 化合物 54(16 mg，16.33 µmol，47.87%產率)。LCMS (ESI+): 931.3 (M+H), LCMS (ESI-): 929.3 (M-H), 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.88 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 8.32 (ddd, J= 4.9, 1.9, 0.9 Hz, 1H), 8.07 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 - 7.75 (m, 1H), 7.74 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 10.6, 1.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.12 (ddd, J= 7.4, 4.9, 1.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J= 8.6, 1.3 Hz, 1H), 6.68 - 6.36 (m, 2H), 6.19 (s, 1H), 4.79 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.21 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 4.01 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.90 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.18 - 2.87 (m, 4H), 2.87 - 2.70 (m, 3H), 2.70 - 2.57 (m, 1H), 2.59 - 2.50 (m, 5H), 2.31 - 2.08 (m, 2H), 1.92 - 1.60 (m, 4H)。
實例 30. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 58)
Figure 02_image1443
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；二鹽酸鹽(48 mg, 74.47 µmol)及2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(42.66 mg, 89.36 µmol)混合於DMF(0.5 mL)中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(57.74 mg, 446.80 µmol, 77.82 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(36.81 mg, 96.81 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈(+0.1% TFA)/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。將純溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取兩次。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。固體藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發所需溶離份。將殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加1 mL水+ 1 mL乙腈，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 58(19.2 mg，20.73 µmol，27.84%產率)。LCMS (ESI+): 917.2 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.53 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.81 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.50 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.37 - 4.21 (m, 2H), 4.00 (td, J = 14.1, 11.6, 6.5 Hz, 2H), 3.58 (d, J = 13.2 Hz, 5H), 3.47 (s, 3H), 3.14 (s, 2H), 2.88 (d, J = 10.9 Hz, 3H), 2.83 - 2.41 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.16 - 1.99 (m, 4H), 1.87 (ddd, J = 25.0, 12.1, 4.1 Hz, 1H), 1.72 - 1.51 (m, 4H)。
實例 31. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 59)
步驟 1: 2-[4-[[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 甲基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1445
Figure 02_image1447
向2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(哌𠯤-1-基甲基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺二鹽酸鹽(109.5 mg, 160.78 µmol)於DMAc (1 mL)之經攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(72.73 mg, 562.73 µmol, 98.02 µL)及2-溴乙酸三級丁酯(34.50 mg, 176.86 µmol, 25.94 µL)。反應混合物在環境溫度下攪拌。完成後，反應混合物用氯仿/異丙醇(4:1)稀釋且添加碳酸氫鈉水溶液。分離有機層，用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。混合物藉由矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇)純化，得到2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]乙酸三級丁酯(64 mg, 93.32 µmol, 58%產率)。LCMS (ESI+): 686.3 (M+H)
步驟 3:  N2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[4-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1449
將2-[4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌𠯤-1-基]乙酸，三氟乙酸鹽(78.79 mg, 91.86 µmol)及(3S)-3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮；鹽酸鹽(37.68 mg, 110.23 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(83.10 mg, 643.00 µmol, 112.00 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(45.40 mg, 119.41 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。反應混合物用4-5滴TFA酸化，且直接注射於RP C18管柱(50g C18)上用於純化(5%至100%乙腈/水(+0.1% TFA)，歷經12分鐘)。將所需溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取兩次。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。固體藉由矽膠管柱層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發所需溶離份。將殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加1 mL水+ 1 mL乙腈，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 59(45 mg，48.58 µmol，52.89%產率)。LCMS (ESI+): 917.3 (M+H), 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 2H), 7.76 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.45 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 6.03 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.83 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 2H), 4.16 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 2H), 3.59 - 3.46 (m, 3H), 3.44 - 3.23 (m, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 2H), 2.88 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.82 - 2.36 (m, 10H), 2.14 - 2.03 (m, 2H), 1.93 - 1.81 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 4H), 1.42 (m, 1H)。
實例 32. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 60)
步驟 1: 4-[[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 甲基 ] 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1451
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)乙酸乙酯(400 mg，852.43 μmol)及4-[[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯基]甲基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(461.86 mg，1.15 mmol)溶解於二㗁烷(4.8 mL)中且添加tBuXPhos (53.81 mg，85.24 μmol)，接著添加溶解於水(1.2 mL)中之碳酸鈉(198.77 mg，1.88 mmol，78.56 μL)。混合物經氬氣脫氣且添加Pd(dppf)Cl 2(31.18 mg，42.62 µmol)。將反應物密封且在加熱組上在80℃加熱2 h。濃縮混合物且藉由矽膠層析(0-100%乙酸乙酯/己烷)純化。濃縮所需溶離份且藉由矽膠層析(0-20%甲醇/乙酸乙酯)再純化，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(380 mg, 616.16 µmol, 72.28%產率)。LCMS (ESI+): 617.3 (M+H)
步驟 2: [2-[6-[4-[(1- 三級丁氧基羰基 -4- 哌啶基 ) 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙醯基 ] 氧基鋰
Figure 02_image1453
向4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(380 mg，616.16 μmol)於乙醇(2.8 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(1 M水溶液，678 μmol，678 μL)且在環境溫度下攪拌。將反應混合物蒸發至乾燥，得到定量產率的呈黃色固體狀之[2-[6-[4-[(1-三級丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(366 mg，616 μmol)。LCMS (ESI+): 589.2 (M+H)
步驟 3: 4-[[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ] 甲基 ] 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1455
將[2-[6-[4-[(1-三級丁氧基羰基-4-哌啶基)甲基]苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(366.37 mg，616.16 μmol)及噻唑-2-胺(64.79 mg，646.97 μmol)混合於DMF中，使反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(318.53 mg, 2.46 mmol, 429.29 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(304.57 mg, 801.01 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌30 min。反應混合物用飽和NaHCO 3溶液淬滅且用乙酸乙酯萃取。將有機層用水及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(250 mg，372.69 μmol，60.49%產率) LCMS (ESI+): 671.2 (M+H)。
步驟 4: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -1- 側氧基 -6-[4-(4- 哌啶基甲基 ) 苯基 ] 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1457
將4-[[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]甲基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(250 mg，372.69 μmol)溶解於甲醇(3 mL)中，且添加鹽酸溶液(4.0 M於二㗁烷中，652.67 μL，2.62 mmol)。在40℃下加熱反應混合物4小時。在減壓下蒸發揮發物。使材料經受高真空，冷凍至-78℃且解凍，得到緻密固體。粗材料藉由ISCO管柱(二氯甲烷:甲醇=100:0 --＞ 50:50)純化，得到2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基甲基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(157 mg，258.59 µmol，69.38%產率)。LCMS (ESI+): 571.2 (M+H)
步驟 5: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[[1-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 甲基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1459
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-[4-(4-哌啶基甲基)苯基]異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺；鹽酸鹽(47 mg，77.41 µmol)及2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(44.35 mg，92.89 µmol)混合於DMF中且冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙基胺(50.02 mg, 387.06 µmol, 67.42 µL)添加至反應混合物中，且添加HATU(38.26 mg, 100.64 µmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將反應混合物用4至5滴TFA酸化且直接注射於C18管柱(50 g C18)上用於純化(5%至100%乙腈/水+0.1% TFA)。將所需溶離份用NaHCO 3水溶液(大約60 mL)中和，用1:4異丙醇:氯仿混合物萃取兩次。經Na 2SO 4乾燥有機層，過濾且在減壓下蒸發，得到固體。固體藉由矽膠層析(0%至20%甲醇/二氯甲烷)純化。在減壓下蒸發所需溶離份。將粗殘餘物溶解於二氯甲烷中，轉移至8 mL小瓶且在減壓下蒸發。添加水(1 mL) + 乙腈(1 mL)，且將混合物進行充分地音波處理，渦旋且再次進行音波處理。冷凍且凍乾懸浮液，得到 化合物 60(44.9 mg，48.52 µmol，62.68%產率)。LCMS (ESI+): 916.3 (M+H), 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.52 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.78 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.50 - 6.40 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 5.99 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.83 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.29 (m, 2H), 4.25 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 4.12 - 3.93 (m, 3H), 3.21 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.10 - 2.84 (m, 4H), 2.82 - 2.66 (m, 3H), 2.65 - 2.54 (m, 6H), 2.07 (d, J = 10.7 Hz, 3H), 1.94 - 1.78 (m, 2H), 1.75 - 1.54 (m, 6H), 1.30 - 1.13 (m, 2H), 1.02 (m, 1H)。
實例 33. 合成 (2RS)-2-[4,7- 二氯 -6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ] 吲唑 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 61)
步驟 1: 4- 溴 -3,6- 二氯 -2- 氟苯甲醛
Figure 02_image1461
在乾冰/丙酮浴中冷卻1-溴-2,5-二氯-3-氟苯 (CAS 202865-57-4)(9.414 g, 38.6 mmol)於四氫呋喃(70 mL)中之溶液。添加2 mol/l於THF中之LDA (21.2 ml，42.5 mmol，當量：1.1)且在-75℃下攪拌混合物20分鐘。逐滴添加N,N-二甲基甲醯胺(2.82 g，2.99 ml，38.6 mmol，當量：1)且攪拌1小時。添加乙酸於二乙醚(1: 1，10 ml)中之溶液。使混合物升溫至室溫。添加水且用乙酸乙酯萃取混合物。有機層用水洗滌，乾燥(MgSO 4)，過濾且在真空中濃縮，得到呈淺黃色固體狀之粗物質4-溴-3,6-二氯-2-氟苯甲醛(11.3 g，41.6 mmol，＞100%)。化合物不經進一步純化即用於下一步驟。
步驟 2: 6- 溴 -4,7- 二氯 - 1H- 吲唑
Figure 02_image1463
向4-溴-3,6-二氯-2-氟苯甲醛 ( 實例 33 ， 步驟 1)(10.5 g，38.6 mmol)於二㗁烷(50 ml)中之溶液中添加水合肼 (CAS 10217-52-4)(3.86 g，3.78 ml，77.2 mmol，當量：2.0)。在室溫下攪拌混合物3天。添加水合肼(3.86 g，3.78 ml，77.2 mmol，當量：2.0)且使混合物升溫至70℃持續7小時。在冷卻至室溫之後，添加水且藉由過濾收集所沈澱固體。向固體中添加少量乙腈且攪拌2小時。固體藉由過濾收集，用少量乙腈洗滌且乾燥，得到呈灰白色固體狀之6-溴-4,7-二氯-1H-吲唑(7.84 g，29.5 mmol，76.4%)。MS: m/e= 267.0 ([M+H] +)。
步驟 3:  2-(6- 溴 -4,7- 二氯 - 2H- 吲唑 - 2- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1465
將6-溴-4,7-二氯-1H-吲唑 ( 實例 33, 步驟 2)(7.84 g，29.5 mmol)及2-溴乙酸乙酯 (CAS 105-36-2)(9.85 g，6.53 ml，59 mmol，當量：2)於N,N-二甲基乙醯胺(11.5 ml)中之混合物加熱至100℃持續25小時。在冷卻至室溫之後，添加冰且所沈澱固體藉由過濾收集並且用水洗滌。將粗物質溶解於沸騰乙醇中。在冷卻之後，將固體過濾，用乙醇洗滌且乾燥，得到2-(6-溴-4,7-二氯-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯(7.511 g，21.3 mmol，70.9%) MS: m/e= 267.0 ([M+H] +)。
步驟 4: (2S)-2-[(2RS)-2-(6- 溴 -4,7- 氯 - 吲唑 -2- 基 )-3- 乙氧基 -3- 側氧基 - 丙醯基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁 酯
Figure 02_image1467
在冰浴中冷卻(三級丁氧基羰基)-L-脯胺酸 (CAS 15761-39-4)(4.93 g, 22.9 mmol, 當量：1.55)於四氫呋喃(25 ml)中之溶液。添加羰基二咪唑(3.71 g，22.9 mmol，當量：1.55)。移除冷卻浴且將混合物攪拌3 h，得到溶液A。將2-(6-溴-4,7-二氯-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯 ( 實例 33 ， 步驟 3 )(5.2 g，14.8 mmol，當量：1)於四氫呋喃(7.5 ml)中之溶液冷卻至-75℃。在5 min內逐滴添加2 mol/l於THF (11.4 ml，22.9 mmol，當量：1.55)中之LDA。在-75℃下攪拌混合物30分鐘。在5 min內逐滴添加溶液A。使混合物在冷浴中升溫至室溫隔夜。在添加飽和NH 4Cl水溶液之後，混合物用乙酸乙酯萃取兩次。有機層用水洗滌，合併，經硫酸鈉乾燥且濃縮至乾燥，得到(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-4,7-氯-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(10.06 g，＞100%)，其不經進一步純化即用於下一步驟。MS: m/e= 550.2 ([M+H] +)。
步驟 5: (2RS)-2-(6- 溴 -4,7- 二氯 - 吲唑 -2- 基 )-2-(3- 硫酮基 -2,5,6,7- 四氫吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1469
將(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-6,7-氯-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 4)(10 g，18.2 mmol)於4M於二㗁烷中之HCl (31.9 ml)中之溶液在室溫下攪拌1小時。使混合物濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於乙醇(87.5 ml)中，添加硫氰化鉀(2.35 g，24.2 mmol，當量：1.33)及0.5 M於乙醇中之HCl (36.4 ml，18.2 mmol，當量：1)且攪拌36小時。添加水且用乙酸乙酯萃取混合物。有機層用鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮且乾燥，得到(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(8.534 g，17.4 mmol，95.6%)，其不經進一步純化即用於下一步驟。MS: m/e= 491.1 ([M+H] +)。
步驟 6: (2RS)-2-(6- 溴 -4,7- 二氯 - 吲唑 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1471
在40℃下，(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯 ( 實例 33 ，步驟 5)(8.53 g，17.4mmol)於AcOH (32.2 ml)中之溶液。在冷卻至室溫之後，逐滴添加過氧化氫35% (6.76 g，6.09 ml，69.6 mmol，當量：4)。在室溫下攪拌反應混合物1小時。藉由添加飽和亞硫酸鈉溶液來破壞過量之過氧化氫。在添加一些水(僅足以溶解所有鹽)及乙酸乙酯之後，藉由謹慎添加固體碳酸鈉使混合物達至pH 9。用乙酸乙酯萃取混合物。有機層用水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由層析(SiO 2，0-100%乙酸乙酯/庚烷)純化粗產物，得到呈淺黃色固體狀之(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(3.21 g，6.67 mmol，40.3%)。MS: m/e= 457.1 ([M+H] +)。
步驟 7: 4-[4-[4,7- 二氯 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ] 吲唑 -6- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1473
將(2RS)-2-(6-溴-4,7-二氯-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸酯 ( 實例 33 ， 步驟 6)(200 mg，437 μmol)及(4-(4-(三級丁氧基羰基)哌𠯤-1-基)苯基)
Figure 111119753-A0304-1
酸(CAS 457613-78 -4) (401 mg，1.31 mmol，當量：3)與甲苯(5.3 ml)混合，藉由在超音波處理下使氬氣鼓泡穿過混合物來脫氣。添加[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (31.9 mg，43.7 µmol，當量：0.1)且將混合物在密封管中在115℃下攪拌40 min。將混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用半濃縮之碳酸鈉溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由急驟層析(SiO 2，0%至100%乙酸乙酯:甲醇3:2/乙酸乙酯)純化粗材料，得到呈淡棕色固體狀之4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]吲唑-6-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(191.5 mg，29.9 mmol，63.1%)。MS: m/e= 639.5 ([M+H] +)。
步驟 8: 4-[4-[4,7- 二氯 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 吲唑 -6- 基 ] 苯基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1475
將4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]吲唑-6-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 7)(190 mg，0.297 mmol)溶解於3 ml THF中。添加LiOH (1M於水中) (0.45 ml，0.446 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將反應混合物在真空中濃縮。將殘餘物溶解於3 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。添加噻唑-2-胺(36 mg，0.356 mmol，1.2當量)及休尼格氏鹼(Hunig's base)(0.156 ml，0.89 mmol，3當量)，接著添加HATU (136 mg，0.356 mmol，1.2當量)。將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯及水萃取。用乙酸乙酯反萃取水層。用水及鹽水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析，用乙酸乙酯:甲醇100:0至70:30梯度溶離來純化粗產物，得到呈淡棕色固體狀之所需產物(94 mg，44%產率)，MS: m/e = 691.5 ([M+H] +)。
步驟 9: (2RS)-2-[4,7- 二氯 -6-(4- 哌 𠯤 -1- 基苯基 ) 吲唑 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺鹽酸鹽
Figure 02_image1477
將4-[4-[4,7-二氯-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]吲唑-6-基]苯基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 9)(92 mg，0.133 mmol)及HCl (4 M於二㗁烷中) (1.7 ml，6.63 mmol，50當量)與3 ml二氯甲烷及1.8 ml甲醇組合。在室溫下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物濃縮至乾燥且不經進一步純化即使用。獲得呈淡黃色固體狀之所需產物(93 mg，定量)，MS: m/e = 591.4 ([M+H] +)。
步驟 10 ： 4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ] 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1479
將4-(4-胺基苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯 (CAS 170011-57-1)(798 mg，2.89 mmol)溶解於10 ml乙腈中。添加碳酸氫鈉(485 mg，5.77 mmol，2當量)，接著添加3-溴哌啶-2,6-二酮 (CAS 62595-74-8)(610 mg，3.18 mmol，1.1當量)。將反應混合物在90℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫，吸附於isolute®上且藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度溶離來純化。獲得呈灰白色固體狀之所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(850 mg，76%產率)，MS：m/e = 359.4 (([M-tBu+H] +)。
步驟 11: (3RS)-3-[4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1481
將4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 10)(850 mg，2.19 mmol)及HCl (4 M於二㗁烷中) (5.48 ml，21.9 mmol，10當量)在0-5℃冰浴中與10 ml甲醇組合。在室溫攪拌反應混合物18小時。將反應混合物濃縮至乾燥且不經進一步純化即使用。獲得呈灰白色固體狀之所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(818 mg，定量，純度= 87%)，MS：m/e = 286.1 ([M+H] +)。
步驟 12: 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1483
將(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽 ( 實例 33 ， 步驟 11)(200 mg，0.618 mmol)、2-溴乙酸三級丁酯 (CAS 5292-43-3)(157 mg，0.119 ml，0.803 mmol，1.3當量)及休尼格氏鹼(399 mg，0.539 ml，3.09 mmol，5當量)於4.0 ml之N,N-二甲基甲醯胺中之混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯及水萃取。將水層用乙酸乙酯反萃取。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度溶離來純化粗產物。獲得呈白色固體狀之所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(164 mg，66%產率)，MS：m/e = 402.2 ([M+H]+)。
步驟 13: 2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1485
在室溫下，向2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 12)(543 mg，1.35 mmol，當量：1)於乙酸乙酯(8 ml)中之溶液中添加含4 M鹽酸溶液之1,4-二㗁烷(6.3 g，6 ml，24 mmol，當量：17.7)，且經週末繼續攪拌。產物藉由過濾收集，用乙酸乙酯洗滌且在真空下乾燥。獲得呈淡紅色固體狀之所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸(537 mg，1.27 mmol，93.6%產率)。MS: m/e= 346.2 ([M+H] +)。
步驟 14: (2RS)-2-[4,7- 二氯 -6-[4-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ] 吲唑 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1487
將(2RS)-2-[4,7-二氯-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽 ( 實例 33 ， 步驟 9)(50 mg，0.08 mmol)及2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽 ( 實例 33 ， 步驟 13)(30 mg，0.08 mmol，1.0當量)溶解於0.5 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。添加休尼格氏鹼(0.07 ml，0.4 mmol，5當量)，接著添加HATU (45 mg，0.12 mmol，1.5當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用飽和NaHCO 3溶液萃取且用二氯甲烷:甲醇(9:1)之混合物萃取三次。用水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析用二氯甲烷:甲醇100:0至80:20梯度溶離來純化粗產物，得到呈灰白色固體狀之化合物61 (17 mg，23%產率)，MS：m/e = 920.5 ([M+H] +)。
實例 34. 合成 (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[7- 氟 -6-[6-[4-[4- 側氧基 -4-[4-[1- 側氧基 -2-[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 異吲哚啉 -4- 基 ] 氧基 -1- 哌啶基 ] 丁基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 62) 步驟 1 ： 2-(6- 溴 -7- 氟 -2H- 吲唑 -2- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1489
使用與實例1，步驟3中所描述類似之化學反應自6-溴-7-氟-1H-吲唑開始而獲得呈淡黃色固體狀之標題化合物，MS: m/e = 302.9 (M+H +)。
步驟 2: (2S)-2-[(2RS)-2-(6- 溴 -7- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-3- 乙氧基 -3- 側氧基 - 丙醯基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1491
使用與實例33，步驟4中所描述類似之化學反應自2-(6-溴-7-氟-2H-吲唑-2-基)乙酸乙酯 ( 實例 33 ， 步驟 1)開始而獲得呈淡黃色固體狀之標題化合物，MS: m/e = 498.2/500.2 ([M+H] +) Br同位素。
步驟 3: (2RS)-2-(6- 溴 -7- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-2-(3- 硫酮基 -2,5,6,7- 四氫吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1493
使用與實例33，步驟5中所描述類似之化學反應自(2S)-2-[(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 2)開始獲得呈淡黃色固體狀之標題化合物，MS: m/e = 439.2/441.2 ([M+H]+ 溴同位素)。
步驟 4: (2RS)-2-(6- 溴 -7- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1495
使用與實例 33，步驟6中所描述類似之化學反應，自(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸酯 ( 實例 33 ， 步驟 3)開始獲得呈淡棕色非晶形固體狀之標題化合物，MS: m/e = 407.2/409.2 ([M+H] +)溴同位素。
步驟 5: 4-[5-[7- 氟 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基 - 乙基 ] 吲唑 -6- 基 ]-2- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1497
自(2RS)-2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯 ( 實例 33 ， 步驟 4)開始，使用與實例33，步驟7中所描述類似之化學反應獲得呈淡棕色非晶形固體狀之標題化合物，MS: m/e = 590.5 ([M+H] +)。
步驟 6: 4-[5-[7- 氟 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 吲唑 -6- 基 ]-2- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1499
自4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 5)及噻唑-2-胺開始，使用與實例33，步驟8中所描述類似之化學反應獲得呈淡棕色固體狀之標題化合物，MS: m/e = 644.4 ([M+H] +)。
步驟 7:  (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[7- 氟 -6-(6- 哌 𠯤 -1- 基 -3- 吡啶基 ) 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1501
自4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 6)開始，使用與實例33，步驟9中所描述類似之化學反應獲得呈淡棕色固體狀之標題化合物，MS: m/e = 544.4 ([M+H]+)。
步驟 8:  4-[4-[5-[7- 氟 -2-[(1RS)-1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ] 吲唑 -6- 基 ]-2- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丁酸三級丁酯
Figure 02_image1503
將(2RS)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺 ( 實例 33 ， 步驟 7)(50 mg，0.092 mmol)及休尼格氏鹼(0.080 ml，0.046 mmol，5當量)溶解於1.0 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。添加4-溴丁酸三級丁酯 (CAS 110661-91-1)(33 mg，0.024 ml，0.147 mmol，1.6當量)，且將反應混合物在60℃下攪拌7小時。反應混合物用水萃取且用乙酸乙酯萃取兩次。用水及鹽水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析用二氯甲烷:甲醇100:0至95:5梯度溶離來純化粗產物，得到呈淡棕色油狀之所需產物(43 mg，68%產率)。
步驟 9: (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[7- 氟 -6-[6-[4-[4- 側氧基 -4-[4-[1- 側氧基 -2-[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 異吲哚啉 -4- 基 ] 氧基 -1- 哌啶基 ] 丁基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1505
將4-[4-[5-[7-氟-2-[(1RS)-1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-基]丁酸三級丁酯 ( 實例 33 ， 步驟 8)(43 mg，0.062 mmol)溶解於0.3 ml二氯甲烷中，且添加三氟乙酸(148 mg，0.10 ml，1.3 mmol，20當量)。將反應混合物在室溫下攪拌90分鐘。反應混合物濃縮至乾燥。將殘餘物及(3RS)-3-[1-側氧基-4-(4-哌啶基氧基)異吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽 (CAS 1061605-57-9)(25 mg，0.065 mmol，1當量)溶解於0.6 ml之N,N-二甲基甲醯胺中。添加休尼格氏鹼(0.11 ml，0.62 mmol，10當量)，接著添加TBTU (22 mg，0.069 mmol，1.1當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。反應混合物用水萃取且用二氯甲烷:甲醇(9:1)之混合物萃取三次。用水洗滌有機層。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。粗產物藉由在胺基-矽膠管柱上急驟層析，用100: 0至95: 5梯度二氯甲烷:甲醇溶離來純化，獲得呈灰白色泡沫狀之 化合物 62(30 mg，50%產率)，MS: m/e=955.6([M+H] +)。
實例 35. 合成 (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[7- 氟 -6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 步驟 1: 4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ] 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1507
將4-(4-胺基苯基)哌啶-1-甲酸三級丁酯 (CAS 170011-57-1)(798 mg，2.89 mmol)溶解於10 ml乙腈中。添加碳酸氫鈉(485 mg，5.77 mmol，2當量)，接著添加3-溴哌啶-2,6-二酮 (CAS 62595-74-8)(610 mg，3.18 mmol，1.1當量)。將反應混合物在90℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫，吸附於isolute®上且藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷30:70至100:0梯度溶離來純化。獲得呈灰白色固體狀之所需4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯(850 mg，76%產率)，MS：m/e = 359.4 (([M-tBu+H]+)。
步驟 2: (3RS)-3-[4-(4- 哌啶基 ) 苯胺基 ] 哌啶 -2,6- 二酮鹽酸鹽
Figure 02_image1509
將4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]哌啶-1-甲酸三級丁酯 ( 實例 35 ， 步驟 1)(850 mg，2.19 mmol)及HCl (4 M於二㗁烷中) (5.48 ml，21.9 mmol，10當量)在0-5℃冰浴中與10 ml甲醇組合。在室溫攪拌反應混合物18小時。將反應混合物濃縮至乾燥且不經進一步純化即使用。獲得呈灰白色固體狀之所需(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(818 mg，定量，純度= 87%)，MS：m/e = 286.1 ([M+H] +)。
步驟 3:  2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1511
將(3RS)-3-[4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽 ( 實例 35 ， 步驟 2)(200 mg，0.618 mmol)、2-溴乙酸三級丁酯 (CAS 5292-43-3)(157 mg，0.119 ml，0.803 mmol，1.3當量)及休尼格氏鹼(399 mg，0.539 ml，3.09 mmol，5當量)於4.0 ml之N,N-二甲基甲醯胺中之混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯及水萃取。將水層用乙酸乙酯反萃取。將有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠管柱急驟層析用乙酸乙酯:庚烷50:50至100:0梯度溶離來純化粗產物。獲得呈白色固體狀之所需2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(164 mg，66%產率)，MS：m/e = 402.2 ([M+H]+)。
步驟 4: 2-[4-[4-[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1513
在室溫下，向2-[4-[4-[[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三級丁酯 ( 實例 35 ， 步驟 3)(543 mg，1.35 mmol)於8.0 ml乙酸乙酯中之溶液中添加HCl (4 M於二㗁烷中) (6.3 g，6 ml，24 mmol，17.7當量)，且繼續攪拌72小時。產物藉由過濾收集，用乙酸乙酯洗滌且在高真空下乾燥。獲得呈淡紅色固體狀之所需2-[4-[4-[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(定量產率)，MS: m/e = 346.2 ([M+H] +)。
步驟 5: (2RS)-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[7- 氟 -6-[6-[4-[2-[4-[4-[[(3RS)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1515
使用與實例1，步驟14中所述類似的化學方法，自(2RS)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[7-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺(實例34，步驟7)及2-[4-[4-[(3RS)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(實例35，步驟4)開始，獲得淡灰色固體狀之標題化合物， 化合物 63 ，MS: m/e = 871.7 ([M+H] +)。
實例 36. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ， 化合物 64 步驟 1: 2-(6- 溴 -4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ) 乙酸乙酯
Figure 02_image1517
將含6-溴-4-氟-1H-吲唑(15.0 g，69.76 mmol)及2-溴乙酸乙酯(46.60 g，279.04 mmol，30.86 mL)之N,N-二甲基甲醯胺(170 mL)在100℃下攪拌35 h。將反應混合物冷卻至環境溫度且傾倒至碎冰上。用乙酸乙酯(300 mL×3)萃取混合物。合併之有機層用10%碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，在減壓下濃縮且殘餘物藉由矽膠層析(10-30%乙酸乙酯:石油醚)純化，得到呈灰白色固體狀之2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯(11 g，30.69 mmol，44%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 303.0 [M+H], 1H-NMR (DMSO-d6) δ 8.66 (s, 1H0, 7.77 (s, 1H), 7.08 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.18 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。
步驟 2: 2-[2-(6- 溴 -4- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-3- 乙氧基 -3- 側氧基 - 丙醯基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1519
將2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯(10 g，33.21 mmol)溶解於四氫呋喃(100 mL)中，且將溶液冷卻至-78℃。將二異丙胺基鋰(0.7 M於四氫呋喃中，142 mL，99.63 mmol)添加至反應混合物中，接著觀測到黃色沈澱物。在-78℃下攪拌反應混合物1小時。在另一容器中，將 N-(三級丁氧基羰基)-L-脯胺酸溶解於四氫呋喃(100 mL)中且在攪拌下添加1,1'-羰基二咪唑(8.08 g，49.82 mmol)。攪拌反應混合物1小時。將 N-(三級丁氧基羰基)-L-脯胺酸/1,1'-羰基二咪唑反應混合物緩慢添加至含有2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)乙酸乙酯及二異丙胺基鋰之250 mL圓底燒瓶中。將反應混合物在-78℃下攪拌1小時，升溫至室溫且在室溫下攪拌30 h。將飽和氯化銨溶液添加至反應混合物中且分離有機層。用乙酸乙酯(250 mL× 2)萃取水層兩次。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，在減壓下濃縮且殘餘物藉由矽膠層析(0至100%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到呈白色固體狀之2-[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(8 g，14.45 mmol，44%產率)。LCMS (ESI+): m/z 498.0 / 500.0 [M+H,  Br模式]
步驟 3:  2-(6- 溴 -4- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-3- 側氧基 -3- 吡咯啶 -2- 基 - 丙酸乙酯鹽酸鹽
Figure 02_image1521
將2-[2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-乙氧基-3-側氧基-丙醯基]吡咯啶-1-甲酸三級丁酯(16 g, 32.11 mmol)溶解於二氯甲烷(160 mL)中且將溶液冷卻至0℃。在0℃下逐滴添加HCl(4.0 M於二㗁烷中，32.1 mL，128.43 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌9小時。將反應混合物蒸發至乾燥，得到呈黃色固體狀之2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-側氧基-3-吡咯啶-2-基-丙酸乙酯鹽酸鹽(13.5 g，23.29 mmol，72.55%產率)。LCMS (ESI+): 398.0 / 400.1 (M+H, Br模式)。
步驟 4: 2-(6- 溴 -4- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-2-(3- 硫酮基 -2,5,6,7- 四氫吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1523
在氮氣氛圍下，將硫氰化鉀(2.47 g，25.43 mmol，1.31 mL)添加至2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-3-側氧基-3-[吡咯啶-2-基]丙酸乙酯(6.75 g，16.95 mmol)於水(75 mL)及三級丁醇(24.5 mL)中之攪拌溶液中。將反應混合物加熱至90℃持續8小時。將反應混合物冷卻至室溫且用10%甲醇/二氯甲烷溶液萃取。使有機層經無水硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由矽膠層析(0至100%乙酸乙酯/石油醚)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.9 g，6.40 mmol，38%產率)。LCMS (ESI+) M/z: 439.0 / 441.0 [M+H,  Br模式], 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.11 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.11 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.31-4.19 (m, 2H), 3.81-3.69 (m, 2H), 2.62-2.80 (m, 2H), 2.49-2.39 (m, 2H), 1.20 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。
步驟 5: 2-(6- 溴 -4- 氟 - 吲唑 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸 乙 酯
Figure 02_image1525
將2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(3-硫酮基-2,5,6,7-四氫吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(5.9 g，13.43 mmol)溶解於乙酸(56 mL)及水(19 mL)中。將溶液冷卻至-10℃。在氮氣氛圍下，逐滴添加過氧化氫(27% w/w水溶液，穩定，1.37 g，40.29 mmol，1.25 mL)。將反應物在-10℃下攪拌100分鐘。將飽和碳酸氫鈉溶液添加至反應混合物中。用乙酸乙酯萃取反應混合物。有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到呈棕色膠狀之2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(4.1 g，7.65 mmol，69%產率)。LCMS (ESI+) M/z: 407 [M+H])
步驟 6: 2-[6-[6-(4- 三級丁氧基羰基哌 𠯤 -1- 基 )-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸
Figure 02_image1527
在100 mL密封管中，將2-(6-溴-4-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(2.2 g，5.40 mmol)及4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(2.52 g，6.48 mmol)溶解於二㗁烷(32 mL)及水(8 mL)中。添加碳酸鈉(1.15 g，10.80 mmol，452.64 µL)且反應混合物用氮氣吹掃5 min。在氮氣氛圍下添加二氯雙(三苯基膦)鈀(II) (379.29 mg，540.23 µmol)且密封試管。將反應物在加熱組中在90℃下攪拌16 h。反應混合物經矽藻土過濾且用乙酸乙酯洗滌。分離有機層，用鹽水洗滌且濃縮。藉由矽膠層析(1%至5%甲醇/二氯甲烷)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之4-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，1.36 mmol，25.2%產率)。LCMS m/z: 590.0 [M+H]
步驟 7: 2-[6-[6-(4- 三級丁氧基羰基哌 𠯤 -1- 基 )-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸
Figure 02_image1529
將4-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(1.1 g，1.87 mmol)溶解於乙醇(8 mL)、四氫呋喃(8 mL)及水(8 mL)中。在環境溫度下添加單水合氫氧化鋰，98% (156.56 mg，3.73 mmol)且將反應混合物在環境溫度下另外攪拌5 h。反應混合物用硫酸氫鉀水溶液調整至pH 5至6且混合物用10%甲醇-二氯甲烷(100 ml×2)萃取。將有機層在減壓下濃縮。在醚中攪拌所得固體，傾析且丟棄醚層，且將固體殘餘物在真空下乾燥，得到呈淺黃色固體狀之化合物2-[6-[6-(4-三級丁氧基羰基哌𠯤-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(0.75 g，1.07 mmol，57%產率)。LCMS (ESI+): 561.9 (M+H)。
步驟 8: 4-[5-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-4- 氟 - 吲唑 -6- 基 ]-2- 吡啶基 ] 哌 𠯤 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1531
在室溫下向2-[6-[6-(4-三級丁氧基羰基哌𠯤-1-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸(0.2 g，356.12 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(7 mL)中之攪拌溶液中添加羰基二咪唑(115.49 mg，712.24 μmol)，且將混合物攪拌2 h。添加噻唑-2-胺(46.36 mg，462.96 µmol)且將反應混合物在環境溫度下攪拌16 h。將反應混合物在50℃下另外攪拌3 h。反應混合物用水淬滅且經10%甲醇/二氯甲烷萃取。在減壓下濃縮有機層且殘餘物藉由矽膠層析(3%至8%甲醇/二氯甲烷)純化，得到4-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(0.16 g，245 μmol，69%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 644.2 (M+H)。
步驟 9: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[4- 氟 -6-(6- 哌 𠯤 -1- 基 -3- 吡啶基 ) 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1533
在0℃下，將鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，0.5 mL，2.0 mmol)添加至4-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-4-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]哌𠯤-1-甲酸三級丁酯(0.15 g，233.02 μmol)於二氯甲烷(8 mL)中之攪拌溶液中。在添加之後，使反應混合物溫度緩慢升高至室溫且另外攪拌5 h。在減壓下濃縮反應混合物。將乙醚(15 mL)添加至固體殘餘物中且將混合物攪拌15 min。傾析且丟棄乙醚層。將固體在真空下乾燥，得到呈棕色固體狀之2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺(0.13 g，221.9 µmol，95.2%產率)。LCMS (ESI+): m/z 544.2 (M+H)。
步驟 10: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1535
在0℃下，將N,N-二異丙基乙基胺(189.17 µL，140.37 mg，1.09 mmol)添加至2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(90 mg，155.15 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(56.38 mg，141.00 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)中之攪拌溶液中。將混合物攪拌10 min。添加COMU (99.67 mg，232.73 µmol)，且將反應混合物再攪拌2 h。濃縮反應混合物且殘餘物藉由逆相矽膠層析(C18，0:100至100:0乙腈:0.1%乙酸銨/水)純化。彙集，冷凍且凍乾所需溶離份。藉由製備型HPLC來進一步純化殘餘物。(純化方法：管柱：X-Bridge C8 (50×4.6 mm)，3.5 μm；流動相A：含10 mM乙酸銨之超純水(milli-q water)；流動相B：乙腈)，得到呈灰白色固體狀之 化合物 64(26 mg，29.04 µmol，19%產率)。LCMS (m/z: 889.2, [M+H]), 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.01 - 12.66 (br. S, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.39 - 7.09 (m, 2H), 6.99 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.61 - 6.26 (m, 2H), 6.00 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.30 (dt, J = 11.8, 6.2 Hz, 1H), 4.14 - 3.90 (m, 2H), 3.68 (d, J = 30.0 Hz, 5H), 3.58 (s, 4H), 3.22 (s, 2H), 2.94 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 2.89 - 2.65 (m, 1H), 2.58 (m, 4H), 2.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.66 (s, 5H)。
實例 37. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ] 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 65)
Figure 02_image1537
在0℃下，將N,N-二異丙基乙基胺(151.51 mg，1.17 mmol，204.19 µL)添加至2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(0.085 g，146.53 µmol)及2-[4-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]苯基]-1-哌啶基]乙酸三氟乙酸(50.61 mg，110.16 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中之攪拌溶液中。攪拌混合物15分鐘。添加COMU(94.12 mg，219.80 µmol)且使溫度緩慢升高至室溫並且攪拌3 h。濃縮反應混合物且將殘餘物在逆相管柱(C18)上，用10至50%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度溶離來純化。凍乾所需溶離份，得到乾燥固體。添加10%碳酸氫鈉溶液，且水層用乙酸乙酯萃取(×2)。合併有機層，濃縮且凍乾，得到呈灰白色固體狀之 化合物 65(10 mg，9.84 µmol，6.7%產率)。LCMS m/z: 871.1 [M+H], 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.83 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 8.58 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J= 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 3.7 Hz, 2H), 7.52 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.20 (dd, J= 12.2, 1.1 Hz, 1H), 6.98 (dd, J= 11.7, 8.6 Hz, 3H), 6.71 (s, 1H), 6.61 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 5.67 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.27 (dt, J= 11.9, 6.7 Hz, 1H), 4.13 - 3.91 (m, 2H), 3.62 (q, J= 31.7, 26.3 Hz, 9H), 3.22 (s, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.85 - 2.69 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 2H), 2.52 (s, 4H), 2.20 - 2.01 (m, 2H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.78 - 1.47 (m, 3H)。
實例 38. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[4-[2-[4-[5-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 吡啶基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 66)
Figure 02_image1539
在0℃下，將N,N-二異丙基乙基胺(151.51 mg，1.17 mmol，204.19 µL)添加至2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(0.085 g，146.53 µmol)及2-[4-[5-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-吡啶基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(50.76 mg，110.24 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中之攪拌溶液中。攪拌反應混合物15 min。接著添加COMU(94.12 mg，219.80 µmol)且使溫度緩慢升高至室溫。將反應混合物攪拌3 h。在減壓下濃縮反應混合物。將粗殘餘物在逆相管柱(C18)上，用10至50%乙腈(0.1% TFA)/水(0.1% TFA)梯度溶離來純化。凍乾所需溶離份。殘餘物係藉由製備型HPLC (純化方法：管柱：XBRIDGE C8 (4.6×50 mm)，3.5μm；流動相A：含10 mM乙酸銨之水；流動相B：乙腈)進一步純化，得到呈灰白色固體狀之 化合物 66(15.5 mg，16.85 µmol，11.50%產率)。LCMS (ESI+): m/z 872.1 [M+H]; 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.85 (br. s, 1H),  10.80 (s, 1H), 8.57 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.08 - 7.84 (m, 2H), 7.69 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 7.50 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.08 (m, 2H), 7.05 - 6.79 (m, 3H), 6.69 (s, 1H), 5.93 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.33 (dt, J= 12.5, 6.0 Hz, 1H), 4.14 - 3.92 (m, 2H), 3.85 - 3.44 (m, 8H), 3.21 (s, 2H), 2.93 (d, J= 10.7 Hz, 2H), 2.87 - 2.52 (m, 2H), 2.50 - 2.40 (m, 4H), 2.17 - 2.00 (m, 3H), 2.00 - 1.38 (m, 5H)。
實例 39. 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[4-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ( 化合物 67)
Figure 02_image1541
在0℃下，將N,N-二異丙基乙基胺(133.68 mg，1.03 mmol，180.16 µL)添加至2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-6-(6-哌𠯤-1-基-3-吡啶基)吲唑-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(0.075 g，129.29 µmol)及2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(71.03 mg，142.22 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中之攪拌溶液中。攪拌反應混合物5分鐘。在0℃下添加COMU (83.06 mg，193.94 µmol)且將反應物另外攪拌2 h。濃縮反應混合物且殘餘物係藉由逆相矽膠層析(C18，1:1 0.1%乙酸銨/水:乙腈)純化。凍乾所需溶離份，得到呈灰白色固體狀之 化合物 67(38.4 mg，41.11 µmol，32%產率)。LCMS (ESI-): m/z 909.3 [M-H]. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.82 (s, 1H), 10.54 (s, 1H), 8.57 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J= 9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 3.8 Hz, 2H), 7.61 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.29 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.20 (dd, J= 12.2, 1.1 Hz, 1H), 7.13 - 7.02 (m, 1H), 6.99 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.09 - 3.98 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.91 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.71 (d, J= 29.0 Hz, 4H), 3.60 (s, 5H), 3.26 (s, 3H), 3.01 (d, J= 10.6 Hz, 2H), 2.89 - 2.71 (m, 3H), 2.67 - 2.53 (m, 2H), 2.27 - 2.12 (m, 2H), 1.89 - 1.68 (m, 4H)。
實例 40. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[4-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 69) 步驟 1: 合成 6-(5-(2-(1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 乙氧基 -2- 側氧基乙基 )-7- 氟 -2H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1543
在50 mL密封管中，向1,4-二㗁烷(8 mL)中之2-(6-溴-7-氟-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸乙酯(0.83 g，2.04 mmol)及[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]
Figure 111119753-A0304-1
酸(780.59 mg，2.45 mmol)中添加含碳酸鈉(540.05 mg，5.10 mmol，213.46 μL)之水(2 ml)。用氮氣使反應混合物脫氣10分鐘。在氮氣氛圍下添加[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)與二氯甲烷(166.43 mg，203.81 μmol)及2-二-三級丁基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(86.55 mg，203.81 μmol)之複合物，且混合物經氮氣進一步脫氣5分鐘。將試管密封且在加熱組中在80℃下攪拌5 h。反應混合物經矽藻土過濾且用乙酸乙酯洗滌。自水層分離有機層。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃縮。粗殘餘物係藉由矽膠急驟管柱層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈棕色固體狀之6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]-庚烷-2-甲酸三級丁酯(0.43 g，630.35 μmol，30.93%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 602.3 [M+H] +
步驟 2: 合成 2-(6-(6-(6-( 三級丁氧基羰基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7- 氟 -2H- 吲唑 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙酸鋰
Figure 02_image1545
在環境溫度下，向6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(0.42 g，698.06 μmol)於乙醇(3 mL)及四氫呋喃(3 mL)中之攪拌溶液中添加氫氧化鋰(1 M水溶液，0.9 mL，907.47μmol)，且將反應混合物攪拌3 h。在減壓下濃縮混合物，得到固體，其用乙醚進一步濕磨，傾析且乾燥，得到呈棕色固體狀之2-(6-(6-(6-(三級丁氧基羰基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)吡啶-3-基)-7-氟-2H-吲唑-2-基)-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙酸鋰(0.38 g，529.13μmol，93.9%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 574.3 [M+H] +
步驟 3: 6-(5-(2-(1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ) -7- 氟 -2H- 吲唑 -6- 基 ) 吡啶 -2- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1547
在0℃下，向[2-[6-[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(0.37 g，638.43 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(495.07 mg，3.83 mmol，667.21 μL)。在相同溫度下添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟-磷酸鹽(364.12 mg，957.64 μmol)。添加噻唑-2-胺(95.90 mg，957.64 μmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16 h。向反應混合物中添加冰冷水且將所得固體過濾，用水洗滌並且藉由空氣流乾燥。藉由急驟層析使用二氧化矽(0-8%甲醇/二氯甲烷)純化粗固體殘餘物，得到呈棕色固體狀之6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(0.23 g，323.74μmol，50.71%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 656.3 [M+H] +。
步驟 4: 合成 2-(6-(6-(2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7- 氟 -2H- 吲唑 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺 ， 三氟乙酸
Figure 02_image1549
在0℃下，向6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-吲唑-6-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(0.12 g，183.00 μmol)於二氯甲烷(10 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加溶解於二氯甲烷(2 mL)中之三氟乙酸(83.46 mg，731.99μmol，56.39 μL)。使反應混合物之溫度緩慢升高至環境溫度且攪拌4 h。將反應混合物在減壓下濃縮，在-40℃下用乙醚濕磨，傾析，得到呈棕色固體狀之2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽。LCMS (ESI+) m/z: 556.2 [M+H] +。
步驟 5: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(6-(6-(2-(4-(4-(((S)-2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2- 氟苯基 ) 哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-7- 氟 -2H- 吲唑 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺
Figure 02_image1551
在0℃下，向2-[4-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-1-哌啶基]乙酸；鹽酸鹽(48.84 mg，122.14 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(138.96 mg，1.08 mmol，187.28 μL)。在相同溫度下添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(76.65 mg，201.60 μmol)。添加2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(0.09 g，134.40 μmol)，且將反應混合物攪拌2 h同時升溫至室溫。將粗混合物直接注射於C18管柱(50 g)上用於純化溶離(0%至60%乙腈/水+0.1%乙酸銨，歷經15分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)。冷凍且凍乾純溶離份，得到呈灰白色固體狀之 化合物 69(60 mg，64.82 μmol，48.23%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 899.3 [M-H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 : δ12.81 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.33 (t, J=  Hz, 2H), 7.79 (d, J= 10.00 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 8.60, 6.80 Hz, 1H), 7.02 (t, J= 8.40 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.53 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 6.48 (m, 2H), 6.01 (d, J= 7.60 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.31-4.30 (m, 1H), 4.16-4.14 (m, 4H), 4.09 (s, 2H), 4.02 (m, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.92-2.89 (m, 2H), 2.68-2.84 (m, 2H), 2.52-2.60 (m, 4H), 2.07-2.10 (m, 3H), 1.88 (m, 1H), 1.69-1.65 (m, 4H)。
實例 41. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 70) 步驟 1: 3,3- 二氟 -4-( 三氟甲基磺醯基氧基 )-2,6- 二氫吡啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1553
在0℃下，將三乙胺(3.23 g，31.9 mmol，4.44 mL)添加至3,3-二氟-4-側氧基-哌啶-1-甲酸三級丁酯(2.5 g，10.6 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之攪拌溶液中。將三氟甲基磺酸酐(4.50 g，15.9 mmol，2.68 mL)逐滴添加至反應混合物中。將反應物在環境溫度下攪拌16 h。隨後，反應物用水性碳酸氫鈉淬滅且用二氯甲烷萃取，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(100%己烷至4:1己烷:乙酸乙酯)來純化殘餘物，得到3,3-二氟-4-(三氟甲基磺醯氧基)-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(1.2 g，2.29 mmol，21%產率)。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 6.59 (s, 1H), 4.29 (q, J = 4.3 Hz, 2H), 4.04 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H)。
步驟 2: 1-[1- 甲基 -6-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼㖦 -2- 基 ) 吲唑 -3- 基 ] 六氫嘧啶 -2,4- 二酮
Figure 02_image1555
將乙酸鉀(911 mg，9.28 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(113 mg，155 µmol)添加至1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氫嘧啶-2,4-二酮(1.0 g，3.09 mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(1.18 g，4.64 mmol)於1,4-二㗁烷(15 mL)中之溶液中。將混合物在85℃下在氮氣氛圍下攪拌16 h。將混合物冷卻至環境溫度且經由矽膠墊過濾。將濾餅用乙酸乙酯洗滌且在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(100%己烷至100%乙酸乙酯)來純化殘餘物，得到1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮(1.1 g，2.97 mmol，96%產率)。LCMS (ESI+): 371 (M+H)。
步驟 3: 4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟 -3,6- 二氫吡啶 -1(2H)- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1557
將碳酸鈉(485 mg，4.57 mmol)添加至1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮(677 mg，1.83 mmol)及3,3-二氟-4-(三氟甲基磺醯基氧基)-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(560 mg，1.52 mmol)於1,4-二㗁烷(10 mL)及水(2.5 mL)中之溶液中，且溶劑用N 2氣體鼓泡10分鐘。添加1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II) (111 mg，152 µmol)且將反應混合物在55℃下攪拌2 h。將反應混合物冷卻且用水/乙酸乙酯稀釋。在萃取之後，將有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由矽膠層析(100%己烷至100%乙酸乙酯)來純化殘餘物以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(480 mg，1.04 mmol，68%產率)。LCMS (ESI+): 462.2 (M+H)
步驟 4: 4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶 -1- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1559
將10%於碳上之鈀(487型，乾燥) (331 mg，311 μmol)添加至4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-2,6-二氫吡啶-1-甲酸三級丁酯(478 mg，1.04 mmol)於甲醇(10.3 mL)中之溶液中，且將混合物在環境溫度下在氫氣球氛圍下攪拌24 h。移除氫氣球，且將混合物用二氯甲烷(20 mL)稀釋且將漿料再攪拌24 h。隨後，將混合物經由矽藻土墊過濾，使用二氯甲烷/甲醇(3:1)之溶液洗滌且濃縮以得到4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯(450 mg，94%產率)。LCMS (ESI+): 408.2 (M - 三級丁基+ H)。
步驟 5:  4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 - 哌啶鹽酸鹽
Figure 02_image1561
使用用於移除三級丁氧基羰基之通用方法B，自4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯以定量產率獲得4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶鹽酸鹽。LCMS (ESI+): 354.2 (M+H)
步驟 6:  2-(4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1563
將1-(6-(3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮鹽酸鹽(1.75 g，4.38 mmol)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)中且添加N,N-二異丙基乙基胺(3.43 mL，2.55 g，19.7 mmol)。將混合物冷卻至0℃，且添加2-溴乙酸三級丁酯(770 μL，1.02 g，5.25 mmol)。在0℃下攪拌混合物4小時。將反應物用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。將有機層濃縮且藉由矽膠層析(0-10%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈白色固體狀之2-(4-(3-(2,4-二側氧基四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三級丁酯(1.90 g，3.97 mmol，90.6%)。LCMS (ESI+): 478.3 (M+H) +
步驟 7: 2-(4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙酸 ， 三氟乙酸鹽
Figure 02_image1565
在0℃下，向2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸三級丁酯(100 mg，209.42 μmol)於二氯甲烷(5 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸(1.48 g，1.0 mL，12.98 mmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌3 h。在減壓下濃縮反應混合物，得到呈灰白色固體狀之2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(90 mg，155.00 μmol，74.01%產率)。LCMS (ESI+): 422.2 (M+H) +
步驟 8: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]- 2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1567
在0℃下，向2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(48.45 mg，90.50 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(108.08 mg，836.26 μmol，145.66 μL)。在相同溫度下添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(39.75 mg，104.53 μmol)。添加2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(70 mg，104.53 μmol)，且將反應混合物攪拌2 h同時升溫至室溫。將粗混合物直接注射於C18管柱(50 g)上用於純化，同時溶離(0%至60%乙腈/水+0.1%乙酸銨，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)。冷凍且凍乾純溶離份，得到呈灰白色固體狀之 化合物 70(41 mg，42.08 μmol，40.25%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 959.3 [M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6 : δ12.85 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 8.34 (dd, J= 9.60, 2.80 Hz, 2H), 7.80 (d, J= 9.60 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.58 (d, J= 6.00 Hz, 2H), 7.52　7.51 (m, 1H), 7.29 (bs, 1H), 7.14　7.09 (m, 2H), 6.72 (bs, 1H), 6.55 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.16　4.12 (m, 6H), 4.04　4.02 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.93 (t, J= 6.80 Hz, 2H), 3.26　3.23 (m, 4H), 3.01　2.98 (m, 1H), 2.84　2.83 (m, 1H), 2.76 (t, J　　　　　　 Hz, 2H), 2.52　2.51 (m, 2H), 2.50　2.40 (m, 2H), 2.33　2.30 (m, 1H), 1.89　1.81 (m, 1H) (因水渾濁而可能未觀測到質子信號)。
實例 42. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-3- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 71) 步驟 1: 1-(3- 氟 -4- 硝基苯基 ) 哌啶 -4- 酮 。
Figure 02_image1569
向哌啶-4-酮(13 g，131.14 mmol)、2,4-二氟-1-硝基-苯(20.86 g，131.14 mmol，14.39 mL)於N,N-二甲基甲醯胺(80 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(67.80 g，524.56 mmol，91.37 mL)。將反應混合物在110℃下在加熱組中攪拌16 h。將反應混合物用乙酸乙酯(500 mL)稀釋，用冷水(150 mL)洗滌。有機層用鹽水溶液(150 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到粗物質。藉由用含40%乙酸乙酯之石油醚溶離的矽膠管柱層析來純化殘餘物，得到呈棕色固體狀之1-(3-氟-4-硝基苯基)哌啶-4-酮(9.0 g，36.65 mmol，27.95%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 239.1 [M+H] +。
步驟 2:  2-[1-(3- 氟 -4- 硝基苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1571
向圓底燒瓶中裝入含乙酸三級丁酯(4.39 g，37.78 mmol，5.09 mL)之四氫呋喃(150 mL)且將溶液冷卻至-78℃。歷經15分鐘逐滴添加二異丙胺基鋰(2M溶液於四氫呋喃中，75.56 mmol，38 mL)。將溶液在-78℃下攪拌1 h。在-78℃下，將含1-(3-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(9.00 g，37.78 mmol)之四氫呋喃(50 ml)添加至反應混合物中且在相同反應溫度下攪拌2 h。使反應混合物緩慢升溫至-40℃。反應混合物用氯化銨溶液淬滅且用乙酸乙酯(600 mL)萃取。有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到粗產物。使用矽膠管柱層析，用0-50%乙酸乙酯/石油醚溶離來純化粗殘餘物，得到呈棕色固體狀之2-[1-(3-氟-4-硝基苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(11.91 g，29.56 mmol，77.28%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 355.1 [M+H] +。
步驟 3:  2-[1-(4- 胺基 -3- 氟苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯。
Figure 02_image1573
向圓底燒瓶中裝入含2-[1-(3-氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(11.91 g，33.62 mmol)之水(4 mL)，向乙醇(20 mL)中添加Fe粉(9.39 g，168.11 mmol，1.19 mL)、氯化銨(5.40 g，100.87 mmol，3.53 mL)且在70℃下攪拌4 h。在反應完成之後，反應混合物經由矽藻土過濾且用乙酸乙酯(200 mL)洗滌。濾液用水(80 mL)、碳酸氫鈉溶液(60 mL)及鹽水(60 mL)洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到粗物質。藉由用70%乙酸乙酯/石油醚溶離之矽膠管柱層析來純化殘餘物，得到呈淺棕色固體狀之2-[1-(4-胺基-3-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(8.5 g，24.63 mmol，73.26%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 325.2 [M+H] +。
步驟 4:  2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-3- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1575
在密封管中，向2-[1-(4-胺基-3-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(4.50 g，13.87 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(50 mL)中之溶液中添加碳酸氫鈉(4.08 g，48.55 mmol，1.89 mL)及3-溴哌啶-2,6-二酮(6.66 g，34.68 mmol)。將反應管密封且在加熱組中在70℃下加熱16 h。將反應混合物冷卻至室溫，用冰冷水淬滅，使用乙酸乙酯(200 ml)萃取且用鹽水溶液(50 ml)洗滌。收集有機層且在減壓下濃縮，得到粗殘餘物。使用急驟矽膠層析用0至70%乙酸乙酯/石油醚溶離來純化粗產物，得到呈綠色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(5 g，10.22 mmol，73.66%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 436.3 [M+H] +
步驟 5: 2-(1-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 ) -3- 氟苯基 )-4 羥基哌啶 -4- 基 ) 乙酸 ； 鹽酸鹽
Figure 02_image1577
在0℃下在氮氣下，向2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(300 mg，688.88 μmol)於二氯甲烷(10 mL)中之攪拌溶液中添加鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，1.38 mL，201.15 mg，5.51 mmol)。在減壓下濃縮反應混合物，得到固體殘餘物。將固體殘餘物在乙醚中攪拌10分鐘，傾析且乾燥，得到2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-3-氟苯基)-4羥基哌啶-4-基)乙酸；鹽酸鹽(250.0 mg，581.95 μmol，84.48%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 380.1 [M+H] +
步驟 6: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-3- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1579
在0℃下，向2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-3-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(43.47 mg，104.53 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(108.08 mg，836.26 μmol，145.66 μL)。在相同溫度下添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟-磷酸鹽(59.62 mg，156.80 μmol)。添加2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(0.07 g，104.53 μmol)，且將反應混合物攪拌2 h同時升溫至室溫。將粗混合物直接注射於C18管柱(50 g)上用於純化，用0%至60%乙腈/水(+0.1%乙酸銨)溶離，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈。冷凍且凍乾純溶離份，得到呈灰白色固體狀之 化合物 71(45 mg，48.19 μmol，46.10%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 917.3 [M+H] +; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6: δ12.80 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.33　8.32 (m, 2H), 7.79 (d, J= 9.20 Hz, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 1.60,  Hz, 1H), 6.74-6.73 (m, 3H), 6.59 (d, J= 2.00 Hz, 1H), 6.54 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 6.00 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.31-4.26 (m, 1H), 4.15 (s, 4H), 4.09 (s, 2H), 4.04　4.02 (m, 2H), 3.18　3.15 (m, 2H), 2.95　2.93 (m, 2H), 2.84　2.76 (m, 2H), 2.52　2.51 (m, 2H), 2.22 (s, 2H),  2.09　2.08 (m, 1H), 1.98-1.97 (m, 1H), 1.75　1.73 (m, 2H), 1.64　1.61 (m, 2H) (水渾濁)。
實例 43. 步驟 1: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]- 2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-7- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1581
在0℃下，向2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-7-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(100 mg，149.33 μmol)及2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(56.65 mg，136.24 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之混合物中添加N,N-二異丙基乙基胺(57.90 mg，447.99 μmol，78.03 μL)。添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟-磷酸鹽(85.17 mg，224.00 μmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將反應混合物直接注射於C18管柱(50 g)上用於純化，同時用(0%至55%乙腈/水(+0.1%乙酸銨)，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)溶離。冷凍且凍乾純溶離份，得到呈灰色固體狀之 化合物 74(37.01 mg，37.12 μmol，24.86%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 915.3 [M-H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.81 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.33 (d, J= 4.80 Hz, 2H), 7.80 (d, J= 4.80 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.12 (d, J= 1.60 Hz, 1H), 6.52　6.41 (m, 3H), 5.78 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.40 (s, 2H), 4.29　4.20 (m, 1H), 4.09 (bs, 4H), 4.02 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 4.00 (bs, 2H), 2.90　2.56 (m, 12H), 2.33 (s, 2H), 2.12-2.01 (m, 1H), 1.90-1.71 (m, 3H), 1.69-1.56 (m, 1H) (水渾濁)。
實例 44. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[6-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 75) 步驟 1: 2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1583
藉由對掌性SFC解析外消旋混合物2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(2 g，4.59 mmol)。將2.0 g之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯溶解於22.0 ml乙腈中。SFC分離條件：管柱：LUX A1 [250×10 mm，5微米粒度]；流動相：CO 2:異丙醇(45:55)；流速：12 g/min；循環時間：11.0分鐘；背壓：100巴UV收集，波長：254 nm；體積：每注射0.4 ml
第一溶離組之溶離份在壓力下蒸發，得到呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(850 mg，1.84 mmol，40.04%產率)。LCMS m/z: 436.0 [M+H], LCMS (ESI+) m/z: 436.2 [M+H]+. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.77 (s, 1H), 6.83 (t, J = 12.00 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.29-4.12 (m, 1H), 2.91-2.79 (m, 5H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.16-2.02 (m, 1H), 1.89-1.69 (m, 3H), 1.65 (d, J = 16.80 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H)，藉由對掌性SFC (Rt = 2.33分鐘) 99.18%鏡像異構體過量，特定旋光度：-46.2° [α] 20 D
第二溶離組之溶離份在壓力下蒸發，得到呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(530 mg，1.17 mmol，25.52%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 436.0 [M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.78 (s, 1H), 6.84 (t, J = 13.20 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 20.00 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 4.44 (s, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 2.92-2.77 (m, 5H), 2.73-2.63 (m, 1H), 2.34 (s, 2H), 2.18-2.03 (m, 1H), 1.87-1.73 (m, 3H), 1.64 (d, J = 18.00 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H)，藉由對掌性SFC (Rt = 4.92分鐘) 99.13%鏡像異構體過量，特定旋光度：+46.8° [α] 20 D
步驟 2: 2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1585
在0℃下，向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(600 mg，1.38 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加氯化氫(4 M溶液於1,4-二㗁烷中，1.72 mL，6.89 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物6 h。藉由在減壓下旋轉蒸發移除揮發物。殘餘物用乙醚(2 × 10 ml)濕磨兩次。將固體殘餘物在真空下乾燥，得到呈灰色固體狀之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(610 mg，1.09 mmol，78.96%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.03 (bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.70 (d, J = 15.20 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 11.40, 6.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.60, 4.40 Hz, 1H), 3.88-3.65 (m, 5H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 1H), 2.46 (s, 2H), 2.33 (bs, 2H), 2.10-2.08 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 2H)。
步驟 3: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 -[3.3] 庚 -6- 基 ]-3- 吡啶基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1587
在0℃下，向2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(29.34 mg，70.56 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中之攪拌溶液中添加N,N-二異丙基乙基胺(69.48 mg，537.59 μmol，93.64 μL)。在相同溫度下添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟-磷酸鹽(38.33 mg，100.80 μmol)。添加2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(45 mg, 67.20 μmol)，且將反應混合物攪拌5 h同時升溫至室溫。將反應混合物直接注射於C18管柱(120g)上用於純化(0%至60%乙腈/水(+0.1%乙酸銨)，歷經45分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)。冷凍且凍乾純溶離份，得到呈灰白色固體狀之 化合物 75(38 mg, 40.98 μmol, 60.99%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 917.3 [M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ12.83 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.40 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.95 (dd, J= 8.80, 2.40 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 11.20 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.16 (d, J= 12.00 Hz, 1H), 6.85 (t, J= 9.60 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.50 (d, J= 9.20 Hz, 2H),  6.45 (d, J=  Hz, 1H), 5.79 (d, J= 7.60 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.29　4.21 (m, 1H), 4.14 (s, 4H), 4.12 (s, 2H), 4.09 (m, 2H), 2.85 (m, 7H), 2.51 (m, 2H), 2.22 (s, 2H), 2.09 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.62 (br d, J= 12.8 Hz, 2H)。
實例 45. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 - 吲唑 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 77)
Figure 02_image1589
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-吲唑-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(300 mg，448.66 μmol)及2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(223.88 mg，538.39 μmol)混合於N,N-二甲基甲醯胺(2.5 mL)中。使反應混合物冷卻至0℃且添加N,N-二異丙基乙基胺(347.91 mg，2.69 mmol，468.89 μL)。添加HATU(221.77 mg，583.25 μmol)且攪拌2 h，同時升溫至室溫。將反應混合物直接注射於C-18管柱(100g)上用於純化(0-45%之乙腈/水+0.1%乙酸銨，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)。將純溶離份合併且凍乾，得到呈灰白色固體狀之 化合物 77(102 mg，108.41 μmol，24.16%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 916.8 [M+H] +, 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.81 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.60 (d, J= 8.40 Hz, 3H), 7.49 (d, J= 2.80 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 7.11 (d, J= 12.40 Hz, 1H), 6.86 (t, J= 9.60 Hz, 1H), 6.68-6.62 (m, 1H), 6.55-6.48 (m, 3H), 6.43-6.41 (m, 1H), 5.78 (d, J= 7.60 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.41-4.37 (m, 2H), 4.27-4.24 (m, 1H), 4.09-4.01 (m, 8H), 2.92-2.83 (m, 5H), 2.80-2.70 (m, 1H), 2.61-2.52 (m, 4H), 2.34-2.33 (m, 2H), 2.12-2.08 (m, 1H), 1.90-1.84 (m, 1H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.63 (s, 2H)。
實例 46. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， 化合物 83 步驟 1: 1-(2- 氟 -4- 硝基 - 苯基 ) 哌啶 -4- 酮
Figure 02_image1591
向哌啶-4-酮(15.0 g，151.31 mmol)，1,2-二氟-4-硝基-苯(24.07 g，151.31 mmol，16.72 mL)於 N,N-二甲基甲醯胺(30 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙基胺(78.22 g，605.26 mmol，105.42 mL)且在110℃下加熱14 h。將反應混合物用乙酸乙酯(500 mL)稀釋且用冷水(150 mL)洗滌。有機層用鹽水溶液(150 mL)洗滌，經由硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析(40%乙酸乙酯/石油醚)純化，獲得呈棕色固體狀之1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(21 g，77.93 mmol，51.50%產率)。LCMS, m/z: 238.9 [M+H] +
步驟 2: 合成 2-[1-(4- 胺基 -2- 氟 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1593
在-78℃下向乙酸三級丁酯(1.76 g，15.11 mmol，2.03 mL)於四氫呋喃(25 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加二異丙胺基鋰(2 M於四氫呋喃中，12.59 mL)。將反應混合物在-78℃下攪拌45分鐘。在-78℃下添加溶解於四氫呋喃(15 mL)中之1-(2-氟-4-硝基-苯基)哌啶-4-酮(3 g，12.59 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物2 h。將反應混合物用飽和氯化銨溶液淬滅且將混合物用乙酸乙酯萃取。有機層經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物藉由矽膠(100-200目)管柱層析法(溶離劑：30%至40%乙酸乙酯/石油醚)純化，獲得呈淡黃色黏稠固體狀之2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(2.7 g，7.01 mmol，55.66%產率)。LCMS (355.1 (M+H)+)
步驟 3:  2-[1-(4- 胺基 -2- 氟 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1595
向2-[1-(2-氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.5 g，4.23 mmol)於乙醇(10 mL)及水(2 mL)中之溶液中添加鐵粉(1.18 g，21.16 mmol，150.37 μL)及氯化銨(679.26 mg，12.70 mmol，443.96 μL)。將反應物在70℃下攪拌4 h。反應混合物經由矽藻土過濾且將濾餅用乙酸乙酯(60 mL)洗滌。濾液用水(20 mL)、碳酸氫鈉水溶液(20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到殘餘物，其藉由矽膠管柱層析進行純化，用70%乙酸乙酯/石油醚溶離，獲得呈褐色黏稠固體狀之2-[1-(4-胺基-2-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.2 g，3.44 mmol，81.28%產率)。LCMS m/z: 325.1 [M+H], 1HNMR (DMSO-d6) 8.02-7.89 (m, 2H), 7.23-7.05 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.55-3.43 (m, 2H), 3.22-3.19 (m, 2H), 2.36 (s, 2H), 1.88-1.64 (m, 3H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 4: 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1597
在氮氣氛圍下在25 mL密封管中向2-[1-(4-胺基-2-氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1 g，3.08 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸氫鈉(517.94 mg，6.17 mmol，239.79 μL)。密封小瓶且在60℃加熱隔夜。反應混合物經由矽藻土床過濾，用乙酸乙酯洗滌2次且在35℃下在減壓下濃縮濾液。粗殘餘物經由矽膠管柱(100-200目)用65-70%乙酸乙酯:石油醚溶離來純化，獲得呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(760 mg，1.67 mmol，54.11%產率)。LCMS m/z: 436.0 [M+H]. 1H-NMR (DMSO-d6): 10.79 (s, 1H), 6.87-6.80 (m, 1H), 6.52 (dd, J= 13.6 Hz, 3.6 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 3.7 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.30-4.19 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 4H), 2.78-2.51 (m, 3H), 2.49-2.41 (m, 1H), 2.13-2.01 (m, 2H), 1.95-1.63 (m, 4H), 1.42 (s, 9H)。
步驟 5: 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽
Figure 02_image1599
在0℃下向2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1.0 g，2.30 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，400 mmol，10 mL)。將反應混合物在25℃下攪拌3 h。反應混合物在減壓下濃縮，得到呈灰白色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(900 mg，2.16 mmol，93.89%產率)。LCMS m/z 380.2 (M+H) +。
步驟 6: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1601
在0℃下向圓底燒瓶中的2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(115.49 mg，277.73 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加N,N-二異丙基乙基胺(195.79 mg，1.51 mmol，263.87 μL)。攪拌反應混合物5分鐘。添加六氟磷酸1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)-二甲胺基-N-𠰌啉基)]金尿(324.39 mg，757.45 µmol)，且將反應混合物攪拌5分鐘。添加2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-[4-氟-1-側氧基-6-(4-哌𠯤-1-基苯基)異吲哚啉-2-基]-N-噻唑-2-基-乙醯胺鹽酸鹽(150 mg，252.48 µmol)。在0℃下繼續反應約40分鐘。將冷水添加至反應混合物中，沈澱固體，藉由過濾收集，用水洗滌且在抽吸下乾燥。沈澱物藉由製備型HPLC來純化。純化條件：管柱：Agilent C18(50×21.2 mm)，5微米粒徑。流動相：10 mM乙酸銨/水:乙腈。收集之純溶離份經凍乾，得到呈淡黃色固體狀之 化合物 83(47 mg，51.00 µmol，20.20%產率)。LCMS (m/z:917.3 (M-1)) 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.53 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.79-7.69 (m, 4H), 7.62 (s, 1H), 7.49 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.80 Hz, 2H), 6.86 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 2.40, 14.80 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 6.00,  Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.78 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 4.83 (t, J = 17.60 Hz, 2H), 4.25-4.21 (m, 2H), 4.02-3.96 (m, 2H), 3.73-3.68 (m, 4H), 3.44-3.34 (m, 2H), 3.44-3.23 (m, 5H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.78-2.67 (m, 2H), 2.58-2.52 (m, 3H), 2.13-2.02 (m, 1H), 1.89-1.65 (m, 5H)。
實例 47. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[1-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ]-4- 哌啶基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 85)
Figure 02_image1603
在0℃下向2-[4-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-1-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(130 mg，199.65 µmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)中之溶液中添加 N,N-二異丙基乙基胺(129.01 mg，998.23 µmol，173.87 μL)及六氟磷酸1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)-二甲胺基-N-𠰌啉基)]金尿(171.01 mg，399.30 µmol)。攪拌反應混合物15分鐘。添加1-[1-甲基-6-(4-哌啶基)吲唑-3-基]六氫嘧啶-2,4-二酮鹽酸鹽(72.64 mg, 199.65 µmol)。攪拌反應混合物1 h。在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由逆相層析(C18管柱，0-100%之0.1%乙酸銨/水及乙腈)純化。將含有化合物之溶離份冷凍且凍乾。殘餘物藉由逆相製備型HPLC使用管柱：Zorbax Extend C18(50×4.6 mm) 5 μm，流動相A：10 mM乙酸銨/水，流動相B：乙腈來純化。純溶離份經凍乾，得到呈白色固體狀之 化合物 85(4.81 mg，5.07 µmol，2.54%產率)，將其用於進行分析。LCMS (ESI+): 924.3(M+H); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.50 (s, 1H), 10.55 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.83 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.61-4.53 (m, 1H), 4.27-4.22 (m, 2H), 4.01-3.91 (m, 7H), 3.34-3.17 (m, 3H), 3.00-2.97 (m, 5H), 2.78-2.75 (m, 4H), 2.33-2.17 (m, 3H), 1.91-1.70 (m, 9H)。
實例 48. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ]-1- 哌啶基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 86) 步驟 1: 2-(1-(4-(2-(1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 )-7- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -5- 基 ) 苯基 ) 哌啶 -4- 基 ) 乙酸 甲 酯
Figure 02_image1605
在環境溫度下，在氮氣氛圍下，向含有2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺(400 mg，764.35 µmol)及2-[1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(411.91 mg，1.15 mmol)於無水甲苯(5 mL)及水(1.5 mL)中之經充分攪拌溶液的100 mL密封管中添加乙酸鉀(225.04 mg，2.29 mmol，143.34 μL)。所得混合物用N 2脫氣10分鐘。添加雙(三-三級丁基膦)鈀(0) (78.12 mg，152.87 mmol)且在95℃下攪拌反應混合物64 h.將反應混合物用乙酸乙酯稀釋且經由矽藻土過濾。減壓蒸發濾液。粗殘餘物用二乙醚濕磨，得到2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(205 mg，295 µmol，42.7%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 629.2 [M+H] +。
步驟 2: 2-[1-[4-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 苯基 ]-4- 哌啶基 ] 乙酸
Figure 02_image1607
在0℃下向2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸甲酯(200 mg，318.11 µmol)於四氫呋喃(2 mL)及甲醇(2 mL)及水(2 mL)之溶液中添加氫氧化鋰(1M水溶液，318 μL，318.11 µmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時。濃縮反應混合物，得到粗產物，將其進一步溶解於5 mL水中且使用硫酸氫鈉水溶液(pH 5-6)酸化。沈澱出之固體經過濾，得到2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸(150 mg，244.03 µmol，39.9%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 615.2 [M+H] +。
步驟 3: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[4-[2-[4-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-1- 哌啶基 ]-2- 側氧基 - 乙基 ]-1- 哌啶基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1609
在0℃下向2-[1-[4-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]苯基]-4-哌啶基]乙酸(150 mg，244.03 µmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之溶液中添加 N,N二異丙基乙基胺(157.69 mg，1.22 mmol，212.52 μL)及六氟磷酸1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)-二甲胺基-N-𠰌啉基)]金尿(209.02 mg，488.05 µmol)。添加3-[3-氟-4-(4-哌啶基)苯胺基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(74.51 mg，218.00 µmol)且攪拌1 h。粗物質藉由逆相層析法(C18管柱，0 - 100%之0.1%甲酸於水及乙腈中)來純化。將經收集部分凍乾。殘餘物藉由逆相製備型HPLC使用管柱：Zorbax Extend C18(50×4.6 mm) 5 μm，(流動相A：10 mM乙酸銨/milli-q水，流動相B：乙腈)來純化。純溶離份經冷凍且凍乾，得到呈白色固體狀之化合物86 (4.57 mg，5.04 µmol，2.06%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 902.3 [M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.61 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.73 (d, J= 10.80 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.80 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.02 (d, J= 6.40 Hz, 2H), 6.97 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.44 (d, J= 4.00 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.04 (d, J= 8.00 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 17.20 Hz, 1H), 4.60 (d, J= 8.40 Hz, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.33 (d, J= 16.00 Hz, 1H), 4.20-3.99 (m, 3H), 3.81 (d, J= 12.00 Hz, 2H), 3.11 (t, J= 13.20 Hz, 1H), 2.87 (t, J= 10.40 Hz, 1H), 2.79-2.71 (m, 4H), 2.68-2.61 (m, 3H), 2.33 (d, J= 6.80 Hz, 2H), 2.09-2.07 (m, 1H), 1.92-1.90 (m, 2H), 1.88-1.71 (m, 5H), 1.68-1.32 (m, 2H), 1.31-1.24 (m, 3H)。
實例 49. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺， ( 化合物 87) 步驟 1:  6-(5- 溴 -2- 吡啶基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1611
向2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(1.69 g，8.52 mmol)於二甲亞碸(10 mL)中之經攪拌溶液中添加 N,N-二異丙基乙基胺(5.51 g，42.62 mmol，7.42 mL)及5-溴-2-氟-吡啶(1.5 g，8.52 mmol，877.19 μL)。將反應混合物在90℃下加熱4 h。將反應混合物冷卻至室溫且在碎冰中淬滅。沈澱固體且將其過濾且乾燥，獲得呈白色固體狀之6-(5-溴-2-吡啶基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(1.5 g，4.14 mmol，48.57%產率)。LCMS (m/z: 356.1 [M+1])。
步驟 2: [6-(2- 三級丁氧羰基 -2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 )-3- 吡啶基 ]
Figure 111119753-A0304-1
酸
Figure 02_image1613
在密封管中，向6-(5-溴-2-吡啶基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(650 mg，1.83 mmol)於1,4-二㗁烷(7 mL)中之經攪拌溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1,3,2-二氧雜硼戊烷(698.93 mg，2.75 mmol)，接著將乙酸鉀(360.16 mg，3.67 mmol，229.40 μL)添加至反應混合物中。反應混合物用氮氣脫氣20 min，接著將Pd(dppf) 2Cl 2.CH 2Cl 2(449.52mg，550.47 µmol)添加至反應混合物中且用氮氣脫氣10 min。反應混合物在90℃下在加熱組上加熱16。使反應混合物冷卻至環境溫度，混合物經由矽藻土墊過濾且用乙酸乙酯洗滌。在減壓下蒸發濾液，得到[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]
Figure 111119753-A0304-1
酸(810 mg，1.14 mmol，62.17%產率)，將其用於進行分析。LCMS資料(m/z: 320.2 [M+1])。
步驟 3: 6-[5-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ]-2- 吡啶基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸 三級丁 酯
Figure 02_image1615
將2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-(4-氟-6-碘-1-側氧基-異吲哚啉-2-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺(350 mg，668.80 μmol)及[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]
Figure 111119753-A0304-1
酸(298.84 mg，936.33 μmol)於1,4-二㗁烷(8 mL)及水(2 mL)中之溶液用氮氣脫氣15分鐘。將碳酸鈉(212.66 mg，2.01 mmol，84.06 μL)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)與二氯甲烷之複合物(87.02 mg，106.55 µmol)添加至反應混合物中且用氮氣吹掃5 min。將反應混合物在80℃下在氮氣下加熱16 h。將反應混合物傾入冰水中且將固體過濾並將固體用水洗滌且乾燥。粗物質藉由矽膠管柱層析(0-7%二氯甲烷及甲醇)來純化，得到呈棕色固體狀之6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(160 mg，224.60 μmol，34%產率)。LCMS m/z 671.3 (M+H) +。
步驟 4: [2-[6-[6-(2- 三級丁氧基羰基 -2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 )-3- 吡啶基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 ) 乙醯基 ] 氧基鋰
Figure 02_image1617
向6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-乙氧基-2-側氧基-乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(440 mg，713.50 μmol)於乙醇(3.2 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰水溶液(1 M，784.85 μL)且在22℃下攪拌1 h。在減壓下蒸發揮發物，得到[2-[6-[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(420 mg，698 μmol，98%產率)LCMS : 598.2 (M+H)
步驟 5: 合成 6-(6-(2-(1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 )-7- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -5- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚烷 -2- 甲酸三級丁酯
Figure 02_image1619
在0℃下，在氮氣氛圍下，向含有[2-[6-[6-(2-三級丁氧基羰基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-6-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)乙醯基]氧基鋰(400.00 mg，672.77 μmol)及2-噻唑胺(87.58 mg，874.59 μmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(2.5 mL)中之經充分攪拌溶液的50 mL單頸圓底燒瓶中添加 N,N-二異丙基乙基胺(542.95 mg，672.77 μmol，117.18 μL)。在0℃下添加丙基膦酸酐溶液(50重量%於乙酸乙酯中) (521 µL，874.59 µmol)且在室溫下攪拌所得反應混合物4 h。將反應混合物添加至冰冷的水中且將沈澱之固體過濾並在減壓下乾燥，得到呈灰白色固體狀之6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(290 mg，380.47 μmol，56.55%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 671.3 [M+H] +。
步驟 6: 合成 2-(6-(6-(2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺
Figure 02_image1621
在0℃下向含有6-[5-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]-2-吡啶基]-2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸三級丁酯(280.00 mg，417.44 μmol)於二氯甲烷(3.0 mL)中之經充分攪拌溶液的25 mL單頸圓底燒瓶中添加三氟乙酸(475.97 mg，4.17 mmol，321.60 μL)。將混合物在環境溫度下攪拌3 h。將反應混合物在減壓下濃縮以獲得粗物質，與二氯甲烷共蒸餾，用二乙醚濕磨且傾析，獲得呈灰白色固體之2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺(270 mg，345.06 µmol，82.66%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 571.2 [M+H] +。
步驟 7: 合成 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-(6-(6-(6-(2-(4-(3-(2,4- 二側氧基四氫嘧啶 -1(2H)- 基 )-1- 甲基 -1H- 吲唑 -6- 基 )-3,3- 二氟哌啶 -1- 基 ) 乙醯基 )-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-4- 氟 -1- 側氧基異吲哚啉 -2- 基 )-N-( 噻唑 -2- 基 ) 乙醯胺
Figure 02_image1623
在0℃下，向含有2-[6-[6-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-3-吡啶基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺；2,2,2-三氟乙酸(120 mg，175.27 µmol)及2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸；2,2,2-三氟乙酸(80.25mg，175.27 µmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中之經充分攪拌溶液的10 mL單頸圓底燒瓶中添加 N,N-二異丙基乙基胺(113.26 mg，876.34 µmol，152.64 μL)。在相同溫度下將丙基膦酸酐溶液(50重量%於乙酸乙酯中) (139.42 mg，438.17 mmol)添加至反應混合物且攪拌，同時升溫至室溫，保持1小時。將粗混合物直接注射於C18管柱(100 g)上用於純化同時溶離(0%-50%之乙腈/水+0.1%乙酸銨歷經30分鐘，接著急劇遞增至100%乙腈)。純溶離份經冷凍且凍乾，獲得呈灰白色固體狀之 化合物 87(48 mg，48.95 µmol，27.93%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 975.3[M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.53 (s, 1H), 10.58 (s, 1H), 8.54 (d, J= 2.40 Hz, 1H), 8.00 (dd, J= 8.60, 2.40 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.60 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.49 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 8.40 Hz, 1H), 6.52 (d, J= 8.40 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.81 (d, J= 18.00 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.25-4.15 (m, 6H), 4.12 (s, 2H), 4.02-4.00 (m, 5H), 3.93 (t, J= 6.80 Hz, 3H), 3.21 (d, J= 8.40 Hz, 4H), 3.01-2.98 (m, 1H), 2.78 (t, J= 6.40 Hz, 4H), 2.51-2.50 (m, 2H), 2.35-2.30 (m, 1H), 1.89-1.80 (m, 1H)。
實例 50. 5-[2-[2-[1-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2- 側氧基 -2-( 噻唑 -2- 基胺基 ) 乙基 ]-7- 氟 -3- 側氧基 - 異吲哚啉 -5- 基 ] 乙炔基 ]-N-[1-[2-[4-[3-(2,4- 二側氧基六氫嘧啶 -1- 基 )-1- 甲基 - 吲唑 -6- 基 ]-3,3- 二氟 -1- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-4- 哌啶基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺， ( 化合物 88)
Figure 02_image1625
將5-[2-[2-[1-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-2-側氧基-2-(噻唑-2-基胺基)乙基]-7-氟-3-側氧基-異吲哚啉-5-基]乙炔基]-N-(4-哌啶基)吡啶-2-甲醯胺鹽酸鹽(100 mg，151.25 µmol)及2-[4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-1-哌啶基]乙酸，三氟乙酸鹽(80.98 mg，151.25 µmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之攪拌溶液冷卻至0℃。在0℃下，將 N,N-二異丙基乙基胺(117.29 mg，907.51 µmol，158.07 μL)添加至反應混合物中，接著添加丙烷磷酸酐(50%於 N,N-二甲基甲醯胺中)(96.25 mg，302.50 µmol)。將反應混合物在環境溫度下攪拌1 h。將反應混合物直接注射於C18管柱(100 g)上用於純化(0-50%，水(0.1%乙酸銨)/乙腈，歷經30分鐘，接著急劇漸變至100%乙腈)。純溶離份經合併且凍乾，得到呈灰白色固體狀之 化合物 88(93 mg，89.01 µmol，58.85%產率)。LCMS m/z 1028.3 (M+H)+. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.58 (s, 1H), 8.84 (dd, J = 8.40, 30.00 Hz, 2H), 8.24-8.22 (m, 1H), 8.13-8.10 (m, 1H), 7.85-7.80 (m, 2H), 7.61-7.49 (m, 4H), 7.27 (d, J = 3.60 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 4.86 (d, J = 18.00 Hz, 1H), 4.40-4.38 (m, 1H), 4.28 (d, J = 18.40 Hz, 1H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.98-3.91 (m, 7H), 3.47 (d, J = 13.20 Hz, 2H), 3.28-3.12 (m, 3H), 3.02-2.99 (m, 1H), 2.78-2.73 (m, 4H), 2.68-2.65 (m, 2H), 2.51-2.50 (m, 2H), 2.36-2.18 (m, 1H), 1.92-1.45 (m, 6H)。
實例 51. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ]- 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 98) 步驟 1: 2-[1-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸
Figure 02_image1627
在0℃下向2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(530 mg，1.22 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加鹽酸(4M於1,4-二㗁烷中，1.52 mL，6.09 mmol)。在添加之後，將反應物在室溫下攪拌6 h。藉由旋轉蒸發移除揮發物。用乙醚(2×10 mL)濕磨所獲得之殘餘物兩次。將固體殘餘物在旋轉式真空下乾燥，得到呈淺藍色灰色固體狀之2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸(470 mg，928.08 μmol，76.26%產率)。LCMS (ESI+) m/z: 380.0 [M+H] +. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.01(bs, 1H), 10.86 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.70 (d, J= 15.60 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 4.43 (dd, J= 12.00, 4.40 Hz, 2H), 3.79-3.61 (m, 2H), 3.41-3.38 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.30-2.19 (m, 2H), 2.09-2.06 (m, 1H), 1.94-1.88 (m, 3H)。
步驟 2: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3R)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺
Figure 02_image1629
將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，2,2,2-三氟乙酸(220 mg，321.79 μmol)及2-[1-[4-[[(3R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸；鹽酸鹽(160.58 mg，386.15 μmol)混合於 N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中。在0℃下將 N,N-二異丙基乙胺(207.95 mg，1.61 mmol，280.25 μL)添加至反應混合物中。在0℃下將丙基磷酸酐溶液(50 wt%於乙酸乙酯中，204.77 mg，643.58 μmol)添加至反應混合物中。將反應混合物在環境溫度下攪拌2 h。將粗混合物直接注射於C18管柱(100 g)上用於純化，同時溶離(0%至50%之乙腈/水+0.1%乙酸銨，歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)。純溶離份經冷凍且凍乾，得到呈灰白色固體狀化合物之 化合物 98(88.39 mg，93.64 μmol，29.10%產率)。LCMS (ESI+): 931.3 [M+H]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.58 (s, 1H), 10.78 (s, 1H), 7.75-7.70 (m, 2H), 7.65 (d, J= 8.80 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 9.60 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 8.40 Hz, 2H), 6.50 (dd, J= 2.40, 14.80 Hz, 1H), 6.42 (dd, J= 2.40, 8.80 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.78 (d, J= 7.60 Hz, 1H), 4.82-4.76 (m, 2H), 4.39 (bs, 2H), 4.26-4.20 (m, 2H), 4.09 (bs, 2H), 4.05-3.96 (m, 6H), 2.90-2.82 (m, 4H), 2.77-2.68 (m, 3H), 2.23 (bs, 2H), 2.14-2.01 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 1H), 1.80-1.72 (m, 3H), 1.67-1.56 (m, 2H)。(因水渾濁而未觀測到質子信號)
實例 52. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N-(2- 吡啶基 ) 乙醯胺， ( 化合物 99)
Figure 02_image1631
將2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(110 mg，264.52 μmol)及2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-(2-吡啶基)乙醯胺，三氟乙酸鹽(179.25 mg，264.52 μmol)混合於 N,N-二甲基甲醯胺中，將反應混合物冷卻至0℃。將N,N-二異丙基乙胺(170.93 mg，1.32 mmol，230.37 μL)添加至反應混合物中，且添加1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(110.64 mg，290.98 µmol)，且將反應混合物攪拌4 h。將混合物注射於50 g C18管柱上，且使用0%至100%乙腈/水(+0.1%三氟乙酸)水溶離梯度進行純化。純溶離份經合併，分配於乙酸乙酯與碳酸氫鈉(飽和水溶液)之間。有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發。殘餘物藉由矽膠層析(24 g管柱，0%至20%甲醇/乙酸乙酯)純化。純溶離份在減壓下蒸發，得到 化合物 99(80 mg，83.89 μmol，31.71%產率)。LCMS (ESI+) : 925.3 (M+H) / 463.4 (M+2H). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.83 (s, 1H), 10.71 (s, 1H), 8.25 (ddd, J= 4.9, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 8.00 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J= 8.7, 7.4, 2.0 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.62 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.42 (m, 3H), 7.05 (ddd, J= 7.4, 4.9, 1.1 Hz, 1H), 6.78 (dd, J= 10.0, 8.7 Hz, 1H), 6.47 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.43 (dd, J= 15.1, 2.6 Hz, 1H), 6.34 (dd, J= 8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.70 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.23 - 4.09 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.99 - 3.84 (m, 6H), 2.96 - 2.57 (m, 4H), 2.57 - 2.45 (m, 2H), 2.15 (s, 2H), 2.08 - 1.91 (m, 1H), 1.92 - 1.64 (m, 3H), 1.55 (d, J= 12.4 Hz, 2H)。
實例 53. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 )- 胺基 ]-2,6- 二氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]- 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺， ( 化合物 103)
Figure 02_image1633
Figure 02_image1635
步驟 1:2-[1-(2,6- 二氟 -4- 硝基 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯向2-(4-羥基-4-哌啶基)乙酸三級丁酯(6.69 g，31.06 mmol)及1,2,3-三氟-5-硝基-苯(5 g，28.24 mmol)於DMSO (50 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(10.95 g，84.71 mmol，14.75 mL)。在80℃下攪拌混合物1 h。將混合物倒入水(200 mL)中，沈澱之固體藉由過濾收集且在高真空下乾燥，不經純化，得到呈黃色油狀之2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(10.5 g，24.81 mmol，87.88%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.95 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 4.66 (s, 1H), 3.47 - 3.39 (m, 2H), 3.25 ( d, J = 12.8 Hz, 2H), 2.37 (s, 2H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.41 - 1.40 (s, 9H)。
步驟 2:  2-(1-(4- 胺基 -2,6- 二氟苯基 )-4- 羥基哌啶 -4- 基 ) 乙酸三級丁酯在N2氛圍下向2-[1-(2,6-二氟-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(10 g，26.86 mmol)於乙酸乙酯(100 mL)中之溶液中添加10%鈀/炭(6.00 g，4.94 mmol)。使懸浮液脫氣且用H 2吹掃3次。將混合物在H 2(15 psi)下在25℃攪拌6 h。將反應混合物過濾，在真空中濃縮濾液，得到呈黃色油狀之2-(1-(4-胺基-2,6-二氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙酸三級丁酯(9.1 g，25.24 mmol，94.02%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.16 - 6.06 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.17 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.70 - 2.62 (m, 2H), 2.32 (s, 2H), 1.74 - 1.65 (m, 2H), 1.58 (br d, J = 12.4 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 3:  2-(1-(4-((2,6- 雙 ( 苯甲氧基 ) 吡啶 -3- 基 ) 胺基 )-2,6- 二氟苯基 )-4- 羥基哌啶 -4- 基 ) 乙酸三級丁酯2-[1-(4-胺基-2,6-二氟-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(8.7 g，25.41 mmol)、2,6-二苯甲氧基-3-溴-吡啶(12.47 g，33.68 mmol)及CS2CO3 (27.41 g，76.23 mmol)於1,4-二㗁烷(360 mL)中之經攪拌溶液，反應混合物用氮氣脫氣15分鐘。添加Xphos (1.34 g，2.54 mmol)及Pd 2(dba) 3(2.57 g，2.54 mmol)且將混合物用氮氣脫氣5分鐘。將反應混合物加熱至100℃持續16 h。濃縮反應混合物，用水稀釋。混合物用乙酸乙酯(200 mL×3)萃取。合併之有機相用鹽水(200 × 2 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)純化，得到呈黃色油狀之2-[1-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(12.75 g，19.17 mmol，75.5%產率)。LCMS (ESI): m/z 632.2 [M + H] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.61 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 - 7.27 (m, 10H), 6.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.28 - 6.21 (m, 2H), 5.38 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 3.23 (t, J = 10.4 Hz, 2H), 2.76 - 2.68 (m, 2H), 2.33 (s, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 2H), 1.64 - 1.57 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)。
步驟 4: 2-(1-(4-((2,6- 二側氧基哌啶 -3- 基 ) 胺基 )-2,6- 二氟苯基 )-4- 羥基哌啶 -4- 基 ) 乙酸 三級丁 酯在N 2氛圍下向2-[1-[4-[(2,6-二苯甲氧基-3-吡啶基)胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(12.75 g，20.18 mmol)於1,4-二㗁烷(850 mL)中之溶液中添加Pd/C (8.29 g，68.24 mmol)。使懸浮液脫氣且用H 2吹掃3次。在25℃下在H 2(15 psi)下攪拌混合物16 h。將反應混合物過濾，在真空中濃縮母溶液，得到2-(1-(4-((2,6-二側氧基哌啶-3-基)胺基)-2,6-二氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙酸三級丁酯(8.5 g，16.49 mmol，81.72%產率)。LCMS (ESI): m/z 454.1 [M + H] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.80 (s, 1H), 6.30 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 6.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.44 - 4.39 (m, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 3.26 - 3.19 (m, 2H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.71 - 2.65 (m, 1H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 2.33 (s, 2H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 2H), 1.41 (s, 9H)
步驟 5: 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2,6- 二氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸鹽酸鹽2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(200 mg，441.04 μmol)於二氯甲烷(2 mL)中之經攪拌溶液冷卻於0℃且將鹽酸(4 M於1,4-二㗁烷中，1.1 mL，4.41 mmol)逐滴添加至反應混合物中。添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌16 h。減壓蒸發反應混合物。所得固體藉由二乙醚(30 mL)洗滌，得到粗固體2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(182 mg，394.97 μmol，89.56%產率)。粗化合物不經純化即用於下一步驟。LCMS m/z: 398.1 [M+1]
步驟 6: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2,6- 二氟 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ]- 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺在0℃下向2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2,6-二氟-苯基]-4-哌啶基]乙酸鹽酸鹽(98.81 mg，227.76 μmol)於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(128.55 mg，994.63 μmol，173.25 μL)。在0℃下將六氟磷酸1-[(1-(氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺氧基)-二甲胺基-N-𠰌啉基)]金尿(159.74 mg，372.98 μmol)添加至反應混合物中。10分鐘之後，在相同溫度下將2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(170 mg，248.66 μmol)添加至反應混合物中。將反應混合物在環境溫度下攪拌2 h。將粗混合物直接注射於C18管柱(60 g)上，在溶離(0%至70%之乙腈/水(+0.1%乙酸銨)歷經30分鐘，隨後急劇漸變至100%乙腈)的同時進行純化。純溶離份經冷凍且凍乾，得到呈灰白色固體化合物之 化合物 103(25.05 mg, 25.48 μmol, 10.25%產率)。LCMS (ESI+): 949.3 [M+H]. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ12.53 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (d, J= 10.80 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.40 Hz, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 3.60 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 8.80 Hz, 2H), 6.32 (d, J= 12.40 Hz, 2H), 6.32 (d, J= 12.40 Hz, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.80 (d, J= 17.60 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 4.38-4.27 (m, 1H), 4.22 (d, J= 17.60 Hz, 1H),  4.09 (s, 2H), 4.03-3.96 (m, 7H), 3.30-3.21 (m, 3H), 2.78-2.67 (m, 5H), 2.22 (s, 2H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.89-1.79 (m, 1H), 1.71-1.69 (m, 2H), 1.59-1.56 (m, 2H)。
實例 54. 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ， 異構體 1 ， ( 化合物 173) 步驟 1: 1,2- 二氟 -4- 甲氧基 - 5- 硝基 - 苯
Figure 02_image1637
向4,5-二氟-2-硝基-苯酚(500 mg, 2.86 mmol)於 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.18 g，8.57 mmol，517.04 µL)及碘甲烷(1.22 g，8.57 mmol，533.33 µL)。在25℃下攪拌混合物3 h。將乙酸乙酯(20 mL)及水(20 mL)添加至反應混合物中且分離各層。有機相用水(3×20 mL)接著鹽水(3×20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之1,2-二氟-4-甲氧基-5-硝基-苯(550 mg，2.91 mmol)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 8.23 (dd, J= 8.4, 10.0 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 6.8, 12.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H)。
步驟 2:  2-[1-(2- 氟 -5- 甲氧基 -4- 硝基 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯
Figure 02_image1639
向1,2-二氟-4-甲氧基-5-硝基-苯(550 mg，2.91 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之溶液中添加2-(4-羥基-4-哌啶基)乙酸三級丁酯(626 mg，2.91 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(645.54 mg，4.99 mmol，0.87 mL)。在80℃下攪拌混合物12 h。在冷卻至25℃之後，將乙酸乙酯(20 mL)及水(20 mL)添加至反應混合物中且分離各層。有機相用水(3× 20 mL)接著鹽水(3×20 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之2-[1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1 g，2.47 mmol，85%產率)。LCMS (ESI): m/z 385.1 [M + H] +
步驟 3: 2-[1-(4- 胺基 -2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 )-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1641
在氮氣下向2-[1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1 g, 2.60 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液中添加鈀，10%/碳(100 mg)。在25℃下在氫氣(15 psi)下攪拌混合物12 h。反應混合物經由矽藻土墊過濾且濾餅用乙醇(50 mL)洗滌。在真空下濃縮濾液，得到呈棕色固體狀之2-[1-(4-胺基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(1 g，2.60 mmol，＞98%產率)。LCMS (ESI): m/z 355.1 [M + H] +
步驟 4: 2-[1-[4-[(2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ) 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 三級丁 酯
Figure 02_image1643
向2-[1-(4-胺基-2-氟-5-甲氧基-苯基)-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(200 mg，564.31 μmol)及3-溴哌啶-2,6-二酮(217 mg，1.13 mmol)於乙腈(2 mL)中之溶液中添加碳酸氫鈉(142 mg，1.69 mmol，65.74 μL)及碘化四丁銨(21 mg，56.85 μmol)。將混合物在80℃下攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，在減壓下濃縮反應混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析(石油醚/乙酸乙酯=5/1至1/4)純化，得到呈棕色固體狀之2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(200 mg，421.04 μmol，75%產率)。LCMS (ESI): m/z 466.2 [M + H] +
步驟 5:  2-[1-[4-[[2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯 ， 異構體 1 及 2-[1-[4-[[2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸三級丁酯 ， 異構體 2
Figure 02_image1645
外消旋2-[1-[4-[(2,6-二側氧基-3-哌啶基)胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯藉由對掌性SFC (異丙醇條件，管柱：Phenomenex-Cellulose-2 (250 mm×30 mm，10 μm)；B%：50%-50%；4.0 min，25 min)分離，得到兩組溶離份。蒸發第一組溶離份，得到呈棕色固體狀之2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯，異構體1(100 mg, 212.67 µmol, 50%產率) (LCMS (ESI): m/z 466.1 [M+H] +)。蒸發第二組溶離份，得到呈棕色固體狀之2-[1-[4-[[(3 R)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯(70 mg，148.87 μmol，35%產率)(LCMS (ESI): m/z 466.1 [M+H] +)。
步驟 6: 2-[1-[4-[[2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙酸 ， 異構體 1
Figure 02_image1647
向2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯異構體1 (100 mg，214.82 μmol)於二氯甲烷(1.5 mL)中之溶液中添加鹽酸(12 M，0.1 mL)。將混合物在25℃下攪拌0.5 h。將混合物在35℃下在減壓下濃縮，得到呈棕色油狀之2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸，鹽酸鹽(92 mg，196.02 µmol，91%產率，HCl鹽) LCMS (ESI): m/z 410.1 [M + H]+
步驟 7: 2-(6,7- 二氫 -5H- 吡咯并 [1,2-c] 咪唑 -1- 基 )-2-[6-[4-[2-[2-[1-[4-[[(3S)-2,6- 二側氧基 -3- 哌啶基 ] 胺基 ]-2- 氟 -5- 甲氧基 - 苯基 ]-4- 羥基 -4- 哌啶基 ] 乙醯基 ]-2,6- 二氮雜螺 [3.3] 庚 -6- 基 ] 苯基 ]-4- 氟 -1- 側氧基 - 異吲哚啉 -2- 基 ]-N- 噻唑 -2- 基 - 乙醯胺 ， 異構體 1
Figure 02_image1649
在0℃下向2-[1-[4-[[2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-5-甲氧基-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸，異構體1，鹽酸鹽(92 mg，206.34 µmol)於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中之溶液中添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(192.92 mg，1.49 mmol，260.00 µL)及丙基膦酸酐，50%於乙酸乙酯中(132 mg，207.43 µmol)。在0℃攪拌混合物20 min。隨後添加2-[6-[4-(2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)苯基]-4-氟-1-側氧基-異吲哚啉-2-基]-2-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1-基)-N-噻唑-2-基-乙醯胺，三氟乙酸鹽(113 mg, 165.28 µmol)，且在25℃下攪拌混合物12 h。過濾反應混合物。藉由逆相管柱(流動：40 mL/min；梯度：5-51%乙腈/水，歷經28 min；管柱：內徑31 mm×H 140 mm，Welch Ultimate Xb C18 20-40 μm；120Å)來純化且凍乾濾液，得到呈白色固體狀之 化合物 173(51.97 mg，53.54 µmol，26%產率)。LCMS (ESI): m/z 961.3 [M + H] +, 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ = 12.50 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.70 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.48 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.25 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.50 (m, 3H), 6.14 (s, 1H), 5.07 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.83 - 4.74 (m, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.28 - 4.18 (m, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.04 - 3.92 (m, 6H), 3.79 (s, 3H), 3.23 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 - 2.91 (m, 2H), 2.91 - 2.82 (m, 2H), 2.82 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.72 (m, 2H), 2.56 (s, 1H), 2.43 (s, 1H), 2.23 (s, 2H), 2.17 - 2.08 (m, 1H), 1.98 - 1.84 (m, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.63 (d, J= 12.4 Hz, 2H)。
實例 55 ： 化合物 1 在非小細胞肺癌中之功效化合物 1為EGFR L858R之強效及選擇性降解藥物，其在活體外及活體內具有活性。化合物 1作為單一藥劑在EGFR L858R驅動之NSCLC模型中具有活性，該等模型在EGFR中沒有引起抗性之二次突變，且在確實存在二次抗性突變(諸如T790M及C797S)的類似模型中具有活性。化合物1可能在一線環境中之EGFR L858R驅動之NSCLC中具有活性，且避免用EGFR抑制劑以及在對EGFR抑制劑具有抗性的情況下出現導致抗性之二次EGFR突變。
在三種不同濃度下評估化合物 1在非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株(NCI-H1975 EGFR-L858R-T790M)中之功效：20毫克/公斤/天、50毫克/公斤/天及100毫克/公斤/天。一天兩次(BID)經口(PO)投與化合物 1。比較化合物 1與奧希替尼(以25毫克/公斤/天投與)之功效。NCI-H1975中之結果顯示於圖1中。表11描述各劑量之實驗的統計顯著性。用全部20、50及100 mg/kg之化合物1治療引起腫瘤體積減小。
表11. 化合物1與媒劑相比之統計顯著性
治療 劑量(毫克/公斤/天) 與媒劑相比之統計顯著性 (p值)
NCI-H1975 細胞
媒劑 N/A N/A
化合物 1 20 ＜0.001
化合物 1 50 ＜0.001
化合物 1 100 ＜0.001
奧希替尼 25 ＜0.001
對於NCI-H1975細胞，在攜帶NCI-H1975 NSCLC腫瘤之雌性BALB/c裸鼠中進行異種移植研究。用0.1 mL PBS中之5x10 6個腫瘤細胞在雌性裸小鼠的右側腹皮下接種。每週兩次使用測徑器在兩個維度上量測腫瘤體積，且使用以下公式計算體積(mm 3)：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短直徑，以mm為單位。一旦腫瘤達到181 mm 3之平均腫瘤體積(植入後13天)，將動物隨機分成6組，分層以在各治療組中產生約相等平均腫瘤大小。第0天開始治療，其中已形成平均腫瘤體積(MTV)為181 mm 3的皮下NCI-H1975腫瘤。
在第0天將所有藥劑投與攜帶NCI-H1975腫瘤之小鼠，且每天(奧希替尼)或每天兩次(化合物 1)PO給藥，持續14天。以20、50或100毫克/公斤/天給予化合物1，且調配於ddH2O中之PEG400(20% v/v) + 80%v/v SBECD(25% w/v)中。奧希替尼以25毫克/公斤/天給予且調配於1% Tween 80中。以每週2次之時程量測體重及MTV。使用單向ANOVA進行統計分析。資料表示為MTV±SEM。
實例 56. 化合物 1 在非小肺癌活體內模型中顯示出有效之 EGFR-L858R 降解及磷酸化 -EGFR 抑制化合物 1以10、25或50 mg/kg之單次經口(PO)劑量給予患有NCI-H1975腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠。在4小時、6小時或24小時時採集腫瘤且藉由西方墨點法量測突變型EGFR-L858R及磷酸化EGFR之蛋白質表現。化合物 1在6、12及24小時展示強效EGFR降解及磷酸化EGFR抑制。
異種移植物研究在攜帶NCI-H1975 NSCLC腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中進行。用0.1 mL PBS中之5x10 6個腫瘤細胞在雌性裸小鼠的右側腹皮下接種。每週兩次使用測徑器在兩個維度上量測腫瘤體積，且使用以下公式計算體積(mm 3)：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短直徑，以mm為單位。一旦腫瘤達到363 mm 3之平均體積，將動物隨機分成3組進行單劑量研究。
在第0天，將所有藥劑以單次經口(PO)劑量投與攜帶NCI-H1975腫瘤之小鼠。化合物 1以10、25或50 mg/kg給予且調配於ddH2O中之PEG400(20% v/v)+80% v/v SBECD(25% w/v)中，其亦用作媒劑對照。奧希替尼以25 mg/kg給予且調配於1% Tween 80中。對於媒劑組，處死3隻小鼠，且單次劑量後6小時採集腫瘤。在單次劑量後6及24小時時對化合物1 10 mg/kg及25 mg/kg組且在單次劑量後4、6及12小時時對50 mg/kg組中之小鼠進行取樣。在單次劑量後4、6及24小時時對奧希替尼25 mg/kg組中之小鼠進行取樣。各取樣時間點收集3個腫瘤。接著將腫瘤機械均勻化，且使用RIPA緩衝液(Sigma Aldrich)萃取蛋白質。使用Pierce™ BCA蛋白質分析套組定量蛋白質濃度，減少樣品，且隨後將相同量蛋白質加載於西方墨點凝膠上進行分析。分析腫瘤之EGFR受體L858R突變特異性(CST, 3197)或磷酸化EGFR受體Tyr1068(CST, 2234)表現。使用Image Studio軟體量測個別頻帶之強度以用於資料分析。相對於參考蛋白質α-微管蛋白，定量蛋白質表現，以控制總蛋白質濃度。接著將資料標準化為經化合物1治療之樣品中與媒劑對照樣品相比之目標量。資料表示為媒劑對照中存在之目標百分比且針對總蛋白質進行標準化。誤差條表示±SEM值。
實例 57. 化合物 1 在三突變型 EGFR 模型中之功效在三種不同濃度下評估化合物1在工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S) BaF3腫瘤中之功效：20毫克/公斤/天、50毫克/公斤/天及100毫克/公斤/天。一天兩次(BID)經口(PO)投與化合物1。比較化合物1與奧希替尼(以25毫克/公斤/天經口投與)之功效。BaF3腫瘤中之結果展示於圖3中。表12描述各劑量之實驗的統計顯著性。用全部20、50及100 mg/kg之化合物1治療引起腫瘤體積減小。
表 12. 化合物 1 與媒劑相比之統計顯著性
治療 劑量(毫克/公斤/天) 與媒劑相比之統計顯著性 (p值)
BaF3 細胞
媒劑 N/A N/A
化合物 1 20 ＜0.0001
化合物 1 50 ＜0.0001
化合物 1 100 ＜0.0001
奧希替尼 25 ＞0.05
對於BaF3(EGFR-L858R-T790M-C797S)細胞，在攜帶BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中進行異種移植研究。用0.1 mL PBS中之10x10 6個腫瘤細胞在雌性裸小鼠的右側腹皮下接種。每週兩次使用測徑器在兩個維度上量測腫瘤體積，且使用以下公式計算體積(mm 3)：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短直徑，以mm為單位。一旦腫瘤達到108 mm 3之平均腫瘤體積(植入後6天)，將動物隨機分成6組，分層以在各治療組中產生約相等平均腫瘤大小。第0天開始治療，其中已形成平均腫瘤體積(MTV)為108 mm 3的皮下BaF3腫瘤。
在第0天將所有藥劑投與攜帶BaF3腫瘤之小鼠，且每天(奧希替尼)或每天兩次(化合物1)PO給藥，持續14天。以20、50或100毫克/公斤/天給予化合物1，且調配於ddH2O中之PEG400(20% v/v) + 80%v/v SBECD(25% w/v)中。奧希替尼以25毫克/公斤/天給予且調配於1% Tween 80中。以每週2次之時程量測體重及MTV。使用單因子變異數分析(ANOVA)隨後鄧尼特氏多重比較檢驗(Dunnett's multiple comparison test)來進行統計分析。資料表示為MTV±SEM。
實例 58. 化合物 1 展現顱內腫瘤模型中之快速腫瘤消退化合物1在表現NCI-H1975螢光素酶之顱內腫瘤模型中的功效係在兩種不同濃度下評估：50 mg/kg及75 mg/kg。一天兩次(BID)經口(PO)投與化合物 1。顱內腫瘤模型之結果展示於圖5A中。表13描述各劑量之實驗的統計顯著性。用50與75 mg/kg兩種劑量之化合物 1治療導致腫瘤體積減少。
表 13. 化合物 1 與媒劑相比之統計顯著性
治療 劑量(毫克/公斤/天) 與媒劑相比之統計顯著性
NCI-H1975-luc 細胞
媒劑 N/A N/A
化合物 1 50 0.001
化合物 1 75 0.001
將2x10 5個懸浮於2 μL RPMI-1640培養基中之表現螢光素酶之NCI-H1975-luc腫瘤細胞注入雌性BALB/c裸小鼠的右前腦。使用成像分析監測腫瘤生長。將小鼠腹膜內注射15 mg/mL之D-螢光素且吸入1-2%異氟醚進行麻醉。在螢光素注射後10分鐘，使用IVIS Lumina II (Perkin Elmer)使小鼠成像且在所關注區(ROI)中量測總生物發光信號(BLI，光子/s)。定量來自ROI之BLI且用作腫瘤負荷之指標。腫瘤細胞接種後7天，將小鼠隨機分為8組，平均BLI為27x10 6個光子/s。在第8天向攜帶NCI-H1975-luc腦瘤之小鼠投與所有藥劑。化合物 1以50 mg/Kg或75 mg/kg經口給藥(PO)且調配於ddH2O中之PEG400(20% v/v)+80% v/v SBECD(20% w/v)中，其亦用作媒劑對照。一天兩次(BID)投與化合物 1。以每週2次之時程量測體重及MTV。使用Mann-Whitney U檢驗計算統計分析。資料表示為生物發光信號(光子/s)。所得資料示於圖5A及圖5B中。
實例 59.Ba/F3 EGFR 細胞生存力分析 材料RPMI 1640培養基、細胞培養燒瓶及384孔微孔盤係購自VWR (Radnor，PA，USA)。胎牛血清(FBS)係購自Life Technologies(Carlsbad，CA，USA)且CellTiter-Glo®係購自Promega(Madison，WI，USA)。Ba/F3親本細胞株係購自CrownBio(Santa Clara, CA)。異位表現EGFR突變L858R、L858R-T790M、L858R-C797S及L858R-T790M-C797S之BaF3細胞株係購自CrownBio且異位表現EGFR突變L858R-L718Q、L858R-T790M-L718Q、L858R-L792H及L858R-T790M-L792H之BaF3細胞株係購自Signosis(Santa Clara,CA)。
方法使用CellTite-Glo®分析(Promega, Madison, WI, USA)基於ATP的定量評定細胞生存力。為了確定化合物對細胞生存力之影響，使用RPMI 1640+10%FBS將所有Ba/F3細胞株以2000個細胞/孔的細胞密度塗鋪於384孔盤中，且使用10點半對數稀釋系列用所關注之化合物一式兩份處理72小時，最高劑量設置為10 mM。然後添加CellTite-Glo®試劑，且使用EnVision™多模式盤讀取器(Perkin Elmer, Santa Clara, CA)量測發光信號。為了將資料標準化，在時間=72小時未經測試化合物處理之細胞係設定成100%(等效於72小時後的最大細胞生長)；在時間=0小時未經測試化合物處理的細胞係設定成0%(等效於細胞生長抑制)；僅培養基孔設定成100%(等效於完全細胞毒性)。藉由用相同微量滴定盤之陽性及DMSO治療之陰性對照校正信號來測定生存率%。細胞生長之半數最大抑制(GI50)自擬合曲線與50%的交叉處計算，而半數最大致死劑量(LD50)自擬合曲線與-50%的交叉處計算。
實例 60. 激酶組選擇率分析實驗對於大多數分析，激酶標記之T7噬菌體病毒株同時生長於衍生自BL21病毒株之大腸桿菌(E. coli)宿主中之24孔方塊中。大腸桿菌生長至對數期並自冷凍儲備液用T7相感染(感染倍率=0.4)並藉由在32℃下震盪培育直至裂解(90-150分鐘)。將裂解物離心(6,000×g)並過濾(0.2 μm)以移除細胞殘渣。在HEK-293細胞中產生剩餘激酶且隨後用DNA標記以供qPCR偵測。在室溫下用生物素化小分子配位體處理經鏈黴抗生物素蛋白塗佈之磁性珠粒持續30分鐘，以生成用於激酶分析之親和樹脂。用過量生物素阻斷經配位之珠粒，且用阻斷緩衝液(SeaBlock (Pierce)，1% BSA、0.05% Tween 20、1 mM DTT)洗滌以移除未結合之配位體及減少非特異性噬菌體結合。結合反應藉由在1×結合緩衝劑(20% SeaBlock、0.17×PBS、0.05% Tween 20、6 mM DTT)中組合激酶、經配位之親和珠粒及測試化合物來組裝。將測試化合物製備為含40×原料之100%DMSO並直接稀釋至分析。所有反應均在聚丙烯384孔培養盤中進行，最終體積0.02 mL。將分析盤在室溫下在震盪下培育1小時，且用洗滌緩衝液(1×PBS、0.05% Tween 20)洗滌親和珠粒。隨後將珠粒再懸浮於溶離緩衝液(1×PBS、0.05% Tween 20、0.5 μM非生物素化親和配位體)中，且在室溫下在震盪下培育30分鐘。溶離液中之激酶濃度藉由qPCR來量測。所得資料示於圖13A及圖13B中。
實例 61 A431 及 H1975 細胞株中化合物 1 之整體蛋白質體實驗。在培育箱中在37℃，5% CO 2下，用DMSO或化合物1(最終濃度300 nM)一式兩份地處理各細胞株6小時。培育6小時後，採集細胞，用PBS洗滌兩次且在液氮中快速冷凍。將樣品再懸浮於裂解緩衝液[8 M尿素、50 mM HEPS(pH 8.5)、50 mM NaCl、1x蛋白酶抑制劑混合液]中，且在4℃下以85%的幅度在脈衝設定下藉由超音波來裂解，開啟30秒，關閉30秒，總超音波時間為5分鐘。在4℃下以最大速度將裂解物離心10分鐘，收集上清液，在室溫下用5 mM TCEP還原1小時，然後用15 mM碘乙醯胺將半胱胺酸殘基烷基化(室溫，在黑暗中，30分鐘)。藉由甲烷-氯仿沈澱及後續冰冷丙酮洗滌來萃取蛋白質含量。將蛋白質集結粒再懸浮於8 M尿素、50 mM EPPS (pH 8.5)緩衝液中，且藉由BCA分析量測蛋白質濃度。隨後將樣品用50 mM HEPES(pH 8.5)稀釋至4 M尿素，且在37℃下以1/100酶/蛋白質比率用內切蛋白酶Lys-C消化1小時。隨後將混合物用50 mM HEPES(pH 8.5)稀釋至1 M尿素，且以1/100酶/蛋白質比率添加胰蛋白酶。在37℃下培育反應物隔夜且藉由用甲酸酸化停止至最終濃度為5%(v/v)。使用C18 SepPak固相萃取筒純化肽，且使用SpeedVac系統乾燥完成。
對於肽串聯質量標籤(TMT)標記，在200 mM HEPES (pH 8.5)、30%乙腈(ACN)及特異性TMT試劑中以1 μg/μl之濃度製備每個樣品100 μg的肽。在室溫下培育1小時之後，反應物用0.3%羥胺淬滅15分鐘且同等混合。使用C18 SepPak固相萃取筒使混合樣品脫鹽，且在SpeedVac中乾燥完成。將乾燥肽再懸浮於5% ACN、10 mM NH 4HCO 3pH 8中且使用配備有3.5 µm XBridge肽BEH C18管柱之HPLC在鹼性pH逆相層析中分級。收集96個溶離份，將其合併成12個樣品，使用SepPAK C18筒脫鹽，且隨後經由真空離心乾燥。隨後在16 µL 5%甲酸中在構造樣品用於LC-MS/MS/MS分析。
使用安裝於與Orbitrap Fusion Lumos Tribid質譜儀耦接的EASY-nLC 1200 LC泵中的EASY-Spray C18管柱(2 µm粒徑，500 mm長×75 µm ID)，藉由逆相層析分離6 µL各樣品。使用450 min梯度分離肽，分為3個部分(5至25%ACN 300分鐘，25-40%ACN 120分鐘，95%ACN 30分鐘)，流速為300 nL/min。以資料相依性方法收集肽，使用CID進行MS2碎片化，使用HCD進行基於同步前驅體選擇之MS3(SPS-MS3)碎片化以釋放TMT報告離子。從質譜儀獲得之所有資料文件均使用Harvard Medical School之Steve Gygi教授實驗室開發的基於SEQUEST之軟體進行處理。簡言之，針對人類非冗餘Uniprot蛋白質資料庫搜尋質譜，以由呈反向順序之所有蛋白質序列以及已知污染物構成的資料庫串接。在所有SEQUEST搜尋中，前驅體離子耐受性設定為25 ppm，包括甲硫胺酸氧化(+15.9949 Da)及半胱胺酸胺甲醯胺基甲基化(+57.0215 Da)作為可變修飾。離胺酸殘基及肽N端上之TMT標籤(+229.1629 Da)設定為靜態修飾。使用線性判別分析進行肽譜匹配(PSM)且將其調節至2%假發現率(FDR)。藉由提取各TMT報告離子之信號對雜訊比來定量TMT報告離子強度。然後使用4%FDR目標將肽摺疊成蛋白質組。所得資料概述如下：
表14蛋白質選擇性
細胞株 EGFR基因型 偵測蛋白質之數目 ＞50%蛋白質水準減少之蛋白質的數目*
A431 野生型 9190 0
H1975 L858R-T790M 8853 2 [EGFR, CCND1 +]
*  p值＜0.001 +可能歸因於EGFR抑制之生物作用；在奧希替尼治療時觀測到類似變化
實例 62 SALL4 降解進行特定研究以評定化合物 1降解Sal樣蛋白質4 (SALL4)之能力，該蛋白質涉及由包括來那度胺之IMiD ®s類IKZF1/IKZF3降解藥物誘導之致畸性(Matyskiela等人, Crystal structure of the SALL4-pomalidomide-cereblon-DDB1 complex, Nature Structural and Molecular Biology, (2020) 27, 319-322)。藉由使用CRISPR-Cas9向KELLY細胞株添加C端HiBiT標籤來測定SALL4在KELLY細胞中之內源性表現。簡言之，將測試化合物在10 μM之最高濃度下在11點，半對數滴定下一式兩份地添加至384孔盤中。在含有10% FBS及2 mM丙酮酸鹽之RPMI培養基中以每孔6000個細胞之細胞密度將表現加HiBiT標籤之SALL4的KELLY細胞接種至384孔盤中。在缺乏測試化合物的情況下治療之細胞為陰性對照且僅含有培養基之孔為陽性對照。在化合物治療之後，細胞在37℃下在5% CO 2下培育6小時。使用Nano-Glo™ HiBiT裂解分析系統(Promega，N3050)測定HiBiT信號且在EnVision™多標記讀取儀(PerkinElmer，Santa Clara，CA，USA)上獲得發光。藉由在相同微量滴定盤上用陽性及陰性對照標準化信號來測定剩餘SALL4%。圖7中之資料表示為平均值±SD。藉由4參數回歸分析進行曲線擬合及IC 50測定。
實例 63 GSPT1 降解一些塞勒布隆E3連接酶調節劑已展示可促進翻譯終止因子GSPT1之降解，可能產生表現型相關偏離目標效應。藉由使用CRISPR-Cas9向293T細胞株添加N端HiBiT標籤來測定GSPT1在293T細胞中之內源性表現。簡言之，將測試化合物在10 μM之最高濃度下在11點，半對數滴定下一式兩份地添加至384孔盤中。在含有10% FBS之DMEM培養基中以每孔6000個細胞之細胞密度將表現加HiBiT標籤之GSPT1的293T細胞接種至384孔盤中。在缺乏測試化合物的情況下治療之細胞為陰性對照且僅含有培養基之孔為陽性對照。在化合物治療之後，細胞在37℃下在5% CO 2下培育6小時。使用Nano-Glo™ HiBiT裂解分析系統(Promega，N3050)測定HiBiT信號且在EnVision™多標記讀取儀(PerkinElmer，Santa Clara，CA，USA)上獲得發光。藉由在相同微量滴定盤上用陽性及陰性對照標準化信號來測定剩餘GSPT1%。圖8中之資料表示為平均值±SD。藉由4參數回歸分析進行曲線擬合及IC50測定。
實例 64. 化合物 2 在 BaF3 細胞中之活性在三種不同濃度下評估化合物 2在工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S) BaF3腫瘤中之功效：20毫克/公斤/天、50毫克/公斤/天及100毫克/公斤/天。一天兩次(BID)經口(PO)投與化合物 2。比較化合物 2與奧希替尼(以25毫克/公斤/天投與)之功效。BaF3腫瘤中之結果展示於圖4A及圖4B中。用全部20、50及100 mg/kg之化合物 2治療引起腫瘤體積減小。
對於BaF3(EGFR-TMLRCS)細胞，在攜帶BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中進行異種移植研究。用0.1 mL PBS中之10x10 6個腫瘤細胞在雌性裸小鼠的右側腹皮下接種。每週兩次使用測徑器在兩個維度上量測腫瘤體積，且使用以下公式計算體積(mm 3)：V = 0.5 a × b 2，其中a及b分別為腫瘤之長及短直徑，以mm為單位。一旦腫瘤達到108 mm 3之平均腫瘤體積(植入後6天)，將動物隨機分成6組，分層以在各治療組中產生約相等平均腫瘤大小。第0天開始治療，其中已形成平均腫瘤體積(MTV)為108 mm 3的皮下BaF3腫瘤。
在第0天將所有藥劑投與攜帶BaF3腫瘤之小鼠，且每天(奧希替尼)或每天兩次(化合物 2)PO給藥，持續14天。以20、50或100毫克/公斤/天給予化合物 2，且調配於ddH2O中之PEG400(20% v/v) + 80% v/v SBECD(25% w/v)中。奧希替尼以25毫克/公斤/天給予且調配於1% Tween 80中。以每週2次之時程量測體重及MTV。使用ANOVA隨後鄧尼特氏多重比較檢驗來進行統計分析。資料表示為MTV±SEM。
實例 64 量測體重、生物發光信號及存活率藉由頸動脈內注射NCI-H1975-luc細胞(100μL PBS中1x10 5個)接種雌性BALB/c裸小鼠以進行腫瘤發育。使用成像分析監測腫瘤生長。稱重攜帶腫瘤之小鼠且以150 mg/kg之劑量腹膜內注射螢光素，用氧氣與異氟醚的混合氣體進行麻醉。在螢光素注射後10分鐘，使用IVIS Lumina III機器使小鼠成像且量測所關注區(ROI)中之總生物發光信號(BLI，光子/s)。定量來自ROI之BLI且用作腫瘤負荷之指標。腫瘤細胞接種後20天，將小鼠隨機分為6組，平均BLI為1.08x10 6個光子/秒。化合物 1以50 mg/kg一天兩次經口給藥(PO)，且調配於雙重蒸餾H 2Om中之20% PEG400 + 80% (25% SBECD，「磺基丁基醚-β-環糊精」)中，其亦用作媒劑對照。以每週2次之時程量測體重及MTV。亦量測存活資料且其表示為中值存活時間±SEM。
實例 65 蛋白質表現及純化突變的2xStrepII-TEV-EGFR(L858R/V948R)蛋白質殘基696-1022表現於Sf9昆蟲細胞中。表現兩天後，採集4.8 L Sf9細胞，然後將其再懸浮於溶解緩衝液(50 mM Tris-HCl pH 7.5，500 mM NaCl，10%甘油，1 mM TCEP，1 mM PMSF)中，混合1 mM MgCl 2、核酸酶及完整的蛋白酶抑制劑錠劑(Roche)。使裂解物均質化、溶解且在16,000 rpm下離心60分鐘，同時保持在4℃下。用Strep-Tactin®XT珠粒培育上清液，且用緩衝液A(50 mM Tris-HCl pH 7.5，500 mM NaCl，10%甘油，1 mM TCEP及1 mM PMSF)充分洗滌。2xStrepII-TEV-EGFR(L858R/V948R)蛋白質用緩衝液A加75 mM生物素溶離。將合併之溶離份與His-TEV蛋白酶一起培育隔夜，觀察到完全消化。藉由將混合物加載到HisTrap Excel(Cytiva)Ni瓊脂糖凝膠管柱上使其經受反向Ni親和力，以移除His-TEV蛋白酶。用緩衝液A洗滌管柱且收集流出物。將裂解之材料濃縮且加載到帶有SEC緩衝液(25 mM Tris-HCl pH 8.0、100 mM NaCl、10%甘油及1 mM TCEP)之HiLoad 16/600 Superdex 200pg尺寸排阻管柱上。自該層析圖中觀察到一個單峰。合併此峰的溶離份，所得純化蛋白濃縮至6.3 mg/mL，且在-80℃下快速冷凍。
實例 66 EGFR 蛋白之結晶將濃縮之EGFR(L858R/V948R) (6.3 mg/mL)與2倍過量之奧希替尼隨後1.5倍過量之異位靶向配位體彈頭在冰上培育60分鐘。藉由將100 nL蛋白質小分子溶液與50 nL的含有100 mM MES pH 6.5及25% PEG MME 2K之儲液組合，在20℃下使用沉滴式氣相擴散法生長晶體。8天後，用20%乙二醇作為低溫保護劑採集晶體且在液氮中快速冷凍。
自NSLSii FMX光束線17-ID-2之單晶中收集資料，且使用DIALS進行處理。參見Winter, G.; Waterman, D. G.; Parkhurst, J. M.; Brewster, A. S.; Gildea, R. J.; Gerstel, M.; Fuentes-Montero, L.; Vollmar, M.; Michels-Clark, T.; Young, I. D.; Sauter, N. K.; Evans, G. DIALS: Implementation and Evaluation of a New Integration Package. Acta Crystallogr Sect D Struct Biology2018, 74(2), 85-97。使用CCP4套件中的PhaserMR及分子置換搜尋模型PDB ID:7JXP求解蛋白質複合物結構。關於PhaserMR方法，參見McCoy, A. J.; Grosse-Kunstleve, R. W.; Adams, P. D.; Winn, M. D.; Storoni, L. C.; Read, R. J. Phaser Crystallographic Software. J Appl Crystallogr2007, 40(4), 658-674。在Coot中使用迭代輪次的模型構建來改進結構，隨後使用Refmac5進行改進。關於Coot方法中之模型構建，參見Emsley, P.; Cowtan, K. Coot: Model-Building Tools for Molecular Graphics. Acta Crystallogr Sect D Biological Crystallogr2004, 60(12), 2126-2132。關於Refmac5方法，參見Winn, M. D.; Ballard, C. C.; Cowtan, K. D.; Dodson, E. J.; Emsley, P.; Evans, P. R.; Keegan, R. M.; Krissinel, E. B.; Leslie, A. G. W.; McCoy, A.; McNicholas, S. J.; Murshudov, G. N.; Pannu, N. S.; Potterton, E. A.; Powell, H. R.; Read, R. J.; Vagin, A.; Wilson, K. S. Overview of the CCP4 Suite and Current Developments. Acta Crystallogr Sect D Biological Crystallogr2011, 67(4), 235-242。
實例 67 差示掃描螢光測定法 (DSF )使用差示掃描螢光測定法量測EGFR(L858R)之熱穩定性。將蛋白質以10 μM在緩衝液(100 mM HEPES pH 7.5及150 mM NaCl)中與DMSO一起培育，以確定單獨蛋白質之穩定性。此外，將蛋白質(10 µM)與各化合物(100 µM)單獨或組合地在冰上培育30分鐘。使用適用於熱熔體之ViiA7即時PCR系統(Thermo Fisher)在4x SYPRO™ Orange染料(Thermo Fisher)存在下量測蛋白質穩定性。使用Microamp Optical 384孔反應盤(Applied Biosystems)一式四份運作20 µL之反應。溫度自25℃至99℃以0.5℃之間隔增加，且量測螢光強度。使用內部曲線擬合分析軟體計算各反應中蛋白質之熱熔點(T M)。
   ΔT M(℃)
DMSO -
化合物 1 5.8
奧希替尼 10.6
奧希替尼+化合物 1 14.6
DSF表：計算與apo蛋白(+DMSO；T M= 45.4℃)相比之熱穩定性變化，且報告為ΔT M(℃)。單獨的降解藥物化合物 1及奧希替尼分別展示5.8℃及10.6℃之穩定作用。然而，其作用組合起來為累加的，產生ΔT M=14.6℃，表明其均可同時接合EGFR。
實例 68 用以在奧希替尼存在及不存在下評定 EGFR L858R: 化合物 1: CRBN-DDB1 三元複合物形成之 SPR 分析 蛋白質 & 試劑與DDB1(殘基4-1143)(CRBN-DDB1)及EGFR L858R(殘基696-1022)蛋白質複合之CRBN(殘基1-442，帶有N端Avi標籤)在High Five(Thermo Fisher Scientific)及Sf9昆蟲細胞中以重組方式表現，隨後進行純化。接著將CRBN-DDB1蛋白質複合物生物素化(Btn-CRBN-DDB1)。奧希替尼及化合物1之儲備溶液在DMSO中製備為10 mM。然後藉由用DMSO稀釋以1 μM、3.16 μM、10 μM、31.6 μM及100 μM製備100×化合物 1的工作儲備液。
SPR 實驗所有SPR實驗均使用帶有生物素-標籤捕獲(BTC)感測器晶片之Bruker Sierra SPR-32 Pro儀器進行，該儀器在25℃下在運作緩衝液(50 mM HEPES pH 7.4、200 mM NaCl、0.5 mM TCEP、0.05% Tween-20, 1% DMSO)平衡。除非另外規定，否則所有步驟之流速為30 μL/min。在運作緩衝液中將Btn-CRBN-DDB1蛋白質稀釋至150 μg/mL，且以7.5 μL/min之流速在經預調節BTC感測器的兩個感測器點上注射60秒，對於以阿撲形式(
Figure 02_image059
)或奧希替尼結合形式(
Figure 02_image061
)的化合物 1加EGFR L858R進行之實驗，分別獲得3240 RU及2455 RU的最終反應。然後用5次300秒之運作緩衝液注射平衡感測器表面。
分析物樣品用可變濃度之化合物1(或等量體積之DMSO用於參考)及如下詳述的固定濃度之
Figure 02_image059
或
Figure 02_image061
來製備。
根據製造商說明書，首先使用0.5 mL Zeba旋轉脫鹽管柱(Thermo Fischer Scientific)將
Figure 02_image059
蛋白質脫鹽至樣品負載緩衝液(50 mM HEPES pH 7.4、200 mM NaCl、0.5 mM TCEP、0.05% Tween-20)中。接著藉由在280 nm(ε 280=52370 M -1cm -1)處之吸光度來量測蛋白質濃度。
Figure 02_image059
+化合物 1分析物樣品的製備方法如下：首先用樣品負載緩衝液將脫鹽
Figure 02_image059
稀釋至1.52 μM工作儲備液，然後將其與上文列出之100×化合物 1工作儲備液之一(或與等量體積的DMSO)以1:99 (化合物 1:
Figure 02_image059
)體積比混合生成六個樣品，最終
Figure 02_image059
濃度為1.5 μM且化合物 1之最終濃度為0 nM、10 nM、31.6 nM、100 nM、316 nM或1000 nM。
為製備
Figure 02_image061
+化合物 1樣品，先將脫鹽
Figure 02_image059
及奧希替尼分別在樣品負載緩衝液中稀釋至5.05 μM及10.1 μM的濃度且在室溫培育15分鐘以產生
Figure 02_image061
然後將
Figure 02_image061
以1:99 (化合物 1:
Figure 02_image061
)之體積比與上文列出之100×化合物 1工作儲備液之一(或與等量體積的DMSO)混合生成六個樣品，最終
Figure 02_image061
濃度為5.0 μM且最終化合物 1濃度為0 nM、10 nM、31.6 nM、100 nM、316 nM或1000 nM。
分析物樣品以化合物 1濃度遞增的次序注射，各個注射循環由160秒注射期隨後320秒的解離期構成。考慮到由於添加奧希替尼導致
Figure 02_image061
+化合物 1樣品中存在過量DMSO引起的本體溶劑效應，通過注射含有0.9 %、1.0 %、1.1 %、1.2 %或1.3 % DMSO之樣品負載緩衝液進行了5次30秒溶劑校正注射。
資料分析所有SPR實驗均使用Sierra Analyzer 3.4.5處理及分析。分析物感測器圖譜雙重參考沒有固定Btn-CRBN-DDB1之BTC感應點以及含有0 nM化合物 1之參考注射液。
Figure 02_image061
+化合物1感測器圖譜亦使用軟體的溶劑校正特徵及上述五種DMSO溶劑校正注射液進行溶劑校正。然後，使用內置的1:1朗格繆爾結合模型全局擬合
Figure 02_image059
+化合物 1或
Figure 02_image061
+化合物 1滴定實驗中所有化合物 1濃度之SPR感測器圖譜。浮動局部參數( R min)以解釋注射期間之殘餘體積變化。歸因於基線漂移及隨後連續分析物注射時基線偏移之演變，僅解離期之初始40秒包括於資料擬合中。所得資料展示於圖18A及圖18B中。
實例 69 對化合物 1 與奧希替尼之組合之西方墨點法實驗製備H3255細胞株，然後在存在或不存在1,500 nM奧希替尼的情況下，與0、15、50、150、500或1,500 nM的化合物 1一起培育6小時。調配帶有化合物之溶液以獲得0.1%最終濃度之DMSO。如西方墨點法圖像(圖19)所示，化合物 1在存在及不存在奧希替尼的情況下有效降解EGFR L858R。
本說明書中所引用之所有公開案及專利申請案以引用的方式併入本文中，就如同各個別公開案或專利申請案特定地且個別地指示以引用的方式併入一般。
儘管已出於清楚理解之目的藉由說明及實例相當詳細地描述前述發明，但根據本發明之教示，一般熟習此項技術者將顯而易知，可在不背離如隨附申請專利範圍中所定義之本發明的精神或範疇的情況下對其進行某些改變及修改。另外，熟習此項技術者將認識到或最多能夠使用常規實驗便能夠確定本文所述之某些實施例及方法的許多等效物。該等等效物意欲由本申請案之範疇涵蓋。
圖1A為顯示化合物1及奧希替尼在治療攜帶NCI-H1975 L858R-T790M NSCLC異種移植腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中之活體內功效的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物1或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。化合物1每天兩次(BID)經口(PO)投與且奧希替尼每天一次(QD)經口(PO)投與。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以mm 3為單位量測之NCI-H1975腫瘤體積。實驗程序提供於實例55中。
圖1B為顯示化合物1及奧希替尼在治療攜帶NCI-H1975 NSCLC異種移植腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中對體重之影響的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物1或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。化合物1每天兩次(BID)經口(PO)投與且奧希替尼每天一次(QD)經口(PO)投與。給藥14天後，監測腫瘤之再生。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以%量測之體重變化。實驗程序提供於實例55中。
圖2A及圖2B為NCI-H1975腫瘤中(A)突變型EGFR-L858R-T790M及(B)磷酸化EGFR之相對蛋白質表現圖。BALB/c裸小鼠注射有NCI-H1975腫瘤細胞且以10、25或50 mg/kg以單次經口(PO)劑量投與化合物1，且以25 mg/kg經口(PO)投與奧希替尼。x軸為以小時為單位量測之時間且代表單次劑量投與後之時間，y軸為相對於媒劑對照標準化為α-微管蛋白之蛋白質百分比。實驗程序提供於實例56中。
圖3A為顯示化合物1及奧希替尼在治療攜帶工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S)BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中之活體內功效的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物1或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。對於化合物1每天兩次(BID)經口(PO)，且對於奧希替尼每天一次(QD)投與所有化合物。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以mm 3為單位量測之BaF3腫瘤體積。實驗程序提供於實例57中。
圖3B為顯示化合物1及奧希替尼在治療攜帶工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S)BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中對體重之影響的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物1或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。對於化合物1每天兩次(BID)經口(PO)，且對於奧希替尼每天一次(QD)投與所有化合物。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以%量測之體重變化。實驗程序提供於實例57中。
圖4A為展示化合物2及奧希替尼在治療攜帶工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S)BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中之活體內功效的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物2或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。對於化合物2每天兩次(BID)經口(PO)，且對於奧希替尼每天一次(QD)投與所有化合物。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以mm 3為單位量測之BaF3腫瘤體積。實驗程序提供於實例64中。
圖4B為展示在治療攜帶工程化三突變型EGFR(L858R-T790M-C797S)BaF3腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中由化合物2及奧希替尼所引起之體重變化的線圖。小鼠用媒劑對照、劑量反應(20、50及100毫克/公斤/天)之化合物2或25毫克/公斤/天之奧希替尼治療14天。對於化合物2每天兩次(BID)經口(PO)，且對於奧希替尼每天一次(QD)投與所有化合物。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為以百分比為單位之體重變化。實驗程序提供於實例64中。
圖5A為化合物1在治療攜帶表現顱內NCI-H1975螢光素酶之NSCLC腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中之活體內功效。小鼠用50 mg/kg之媒劑對照、化合物1治療14天。每天兩次(BID)投與化合物1。x軸為以天為單位量測之時間，且y軸為以光子/sx10 6為單位量測之NCI-H1975-luc BLI (總生物發光信號)。實驗程序提供於實例58中。
圖5B為顯示化合物1在治療攜帶表現顱內NCI-H1975螢光素酶之NSCLC腫瘤之雌性BALB/c裸小鼠中對體重之影響的線圖。小鼠用50 mg/kg之媒劑對照或化合物1治療。每天兩次(BID)經口(PO)投與化合物1。x軸為以天數為單位量測之時間且y軸為體重變化%。實驗程序提供於實例58中。
圖6為化合物1在50 mg/kg單次經口劑量後之平均血漿及腫瘤濃度時間概況的線圖。雌性BALB/c裸小鼠顱內注射有表現NCI-H1975(EGFR-L858R-T790M)螢光素酶之細胞且投與單次經口劑量之化合物1。在指定時間點採集血漿及腫瘤且注射至LC/MS/MS系統中用於定量分析。
圖7為描述化合物1與來那度胺相比對Sal樣蛋白4(SALL4)降解之影響的劑量反應曲線。x軸為化合物1或來那度胺以nM為單位之濃度，且y軸為在6小時之後剩餘的SALL4%。化合物1直至10 µM對SALL4蛋白質含量不具有作用。實驗程序提供於實例62中。
圖8為描述化合物1與CC-885相比對G1至S相變1(GSPT1)降解之影響的劑量反應曲線。x軸為以nM為單位之化合物1或CC-885 IMiD之濃度，且y軸為在6小時之後剩餘的GSPT1%。化合物1直至10 µM對GSPT1無顯著影響。實驗程序提供於實例63中。
圖9為藉由X射線繞射確立之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯的密度圖。此晶體結構確立了化合物1之對掌性，如下文化合物1之合成中所論述。
圖10為藉由X射線繞射確立之2-[1-[4-[[(3S)-2,6-二側氧基-3-哌啶基]胺基]-2-氟-苯基]-4-羥基-4-哌啶基]乙酸三級丁酯的密度圖。此晶體結構確立了化合物1之對掌性，如下文化合物1之合成中所論述。
圖11為藉由X射線繞射確立之(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯的密度圖。此晶體結構確立了化合物2之對掌性，如下文化合物2之合成中所論述。
圖12為藉由X射線繞射確立之(4R)-4-[3-(2,4-二側氧基六氫嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸三級丁酯的密度圖。此晶體結構確立了化合物2之對掌性，如下文化合物2之合成中所論述。
圖13A及圖13B為展示化合物1對來自多個蛋白質家族的各種蛋白質之選擇性的全局蛋白質體圖。
圖14為根據H1975-LUC(EGFR-L858R-T790M)腦瘤轉移模型(經由頸動脈內注射)說明y軸為雌性BALB/c裸小鼠中活體內功效，展示BLI(光子/秒)，及x軸為治療天數的圖形。
圖15為根據H1975-LUC(EGFR-L858R-T790M)腦瘤轉移模型(經由頸動脈內注射)說明y軸為雌性BALB/c裸小鼠中之活體內體重變化及x軸為治療天數的圖形。
圖16為根據H1975-LUC(EGFR-L858R-T790M)腦瘤轉移模型(經由頸動脈內注射)說明y軸為雌性BALB/c裸小鼠之存活概率及x軸為治療開始後之天數的圖形。
圖17為展示L858R突變型EGFR之不同結合袋中之化合物1與奧希替尼之同時結合的共晶體結構。化合物1與L858R突變緊密結合。
圖18A及圖18B為在固定之Btn-CRBN-DDB1上注射與1.5 μM
Figure 02_image059
(18A)或5 μM
Figure 02_image061
(18B)混合之化合物1的SPR感測器圖譜。對應於各感測器圖譜之化合物1之濃度係藉由關鍵字指示。細黑線表示擬合至1:1朗格繆爾(Langmuir)結合模型，各滴定實驗之最佳擬合參數列在各自的圖中。實驗程序提供於實例68中。
圖19為西方墨點法，展示奧希替尼對化合物1誘導之EGFR-L858R降解及在H3255(EGFR-L858R)細胞中之下游信號傳導的影響。實驗程序提供於實例69中。
Figure 111119753-A0101-11-0002-1
Figure 111119753-A0101-11-0003-2
Figure 111119753-A0101-11-0004-3
Figure 111119753-A0101-11-0005-4

Claims (129)

  1. 一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療人類之已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物係選自：
    Figure 03_image001
    Figure 03_image003
    Figure 03_image005
    Figure 03_image007
    ； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之用途，其中該突變型EGFR具有外顯子21突變。
  3. 如請求項1之用途，其中該突變型EGFR具有L858R突變。
  4. 如請求項1之用途，其中該突變型EGFR具有L861Q突變。
  5. 如請求項1之用途，其中突變型EGFR具有T790M突變。
  6. 如請求項1之用途，其中突變型EGFR具有C797S突變。
  7. 如請求項1之用途，其中該突變型EGFR具有L858R及T790M突變。
  8. 如請求項1之用途，其中該突變型EGFR具有L858R、T790M及C797S突變。
  9. 如請求項1之用途，其中該EGFR降解藥物作為醫藥組合物之一部分投與。
  10. 如請求項9之用途，其中該EGFR降解藥物係經口投與。
  11. 如請求項9之用途，其中該EGFR降解藥物係非經腸投與。
  12. 如請求項9之用途，其中該EGFR降解藥物係藉由靜脈內投與。
  13. 如請求項1之用途，其中亦向有需要之人類投與結合ATP位點的EGFR配位體。
  14. 如請求項13之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為奧希替尼(osimertinib)或其醫藥學上可接受之鹽。
  15. 如請求項13之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為納闊替尼(naquotinib)或其醫藥學上可接受之鹽。
  16. 如請求項13之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為瑪韋替尼(mavelertinib)或其醫藥學上可接受之鹽。
  17. 如請求項13之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為司培替尼(spebrutinib)或其醫藥學上可接受之鹽。
  18. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肺癌。
  19. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之非小細胞肺癌。
  20. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之小細胞肺癌。
  21. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腺癌。
  22. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之鱗狀細胞肺癌。
  23. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之大細胞未分化性癌。
  24. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之神經內分泌癌。
  25. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肉瘤樣癌、腺鱗癌、燕麥細胞癌、組合小細胞癌、肺類癌腫瘤、中央類癌、周邊類癌、唾液腺型肺癌、間皮瘤或縱隔腫瘤。
  26. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之乳癌。
  27. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之HER-2陽性乳癌。
  28. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之ER+乳癌。
  29. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之PR+乳癌。
  30. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之三陰性乳癌。
  31. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之結腸直腸或直腸癌。
  32. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之頭頸癌或食道癌。
  33. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之胰臟癌。
  34. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之甲狀腺癌。
  35. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之卵巢癌、子宮癌或子宮頸癌。
  36. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。
  37. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之黑素瘤。
  38. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至腦。
  39. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至CNS。
  40. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係投與EGFR介導之癌症未經治療的人類。
  41. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性的。
  42. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為難治性的。
  43. 如請求項1至17中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性及難治性的。
  44. 一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療人類之已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
    Figure 03_image1661
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  45. 如請求項44之用途，其中該突變型EGFR具有外顯子21突變。
  46. 如請求項44之用途，其中該突變型EGFR具有L858R突變。
  47. 如請求項44之用途，其中該突變型EGFR具有L861Q突變。
  48. 如請求項44之用途，其中突變型EGFR具有T790M突變。
  49. 如請求項44之用途，其中突變型EGFR具有C797S突變。
  50. 如請求項44之用途，其中該突變型EGFR具有L858R及T790M突變。
  51. 如請求項44之用途，其中該突變型EGFR具有L858R、T790M及C797S突變。
  52. 如請求項44之用途，其中該EGFR降解藥物作為醫藥組合物之一部分投與。
  53. 如請求項52之用途，其中該EGFR降解藥物係經口投與。
  54. 如請求項52之用途，其中該EGFR降解藥物係非經腸投與。
  55. 如請求項52之用途，其中該EGFR降解藥物係藉由靜脈內投與。
  56. 如請求項44之用途，其中亦向有需要之人類投與結合ATP位點的EGFR配位體。
  57. 如請求項56之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為奧希替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  58. 如請求項56之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為納闊替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  59. 如請求項56之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為瑪韋替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  60. 如請求項56之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為司培替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  61. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肺癌。
  62. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之非小細胞肺癌。
  63. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之小細胞肺癌。
  64. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腺癌。
  65. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之鱗狀細胞肺癌。
  66. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之大細胞未分化性癌。
  67. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之神經內分泌癌。
  68. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肉瘤樣癌、腺鱗癌、燕麥細胞癌、組合小細胞癌、肺類癌腫瘤、中央類癌、周邊類癌、唾液腺型肺癌、間皮瘤或縱隔腫瘤。
  69. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之乳癌。
  70. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之HER-2陽性乳癌。
  71. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之ER+乳癌。
  72. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之PR+乳癌。
  73. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之三陰性乳癌。
  74. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之結腸直腸或直腸癌。
  75. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之頭頸癌或食道癌。
  76. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之胰臟癌。
  77. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之甲狀腺癌。
  78. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之卵巢癌、子宮癌或子宮頸癌。
  79. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。
  80. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之黑素瘤。
  81. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至腦。
  82. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至CNS。
  83. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係投與EGFR介導之癌症未經治療的人類。
  84. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性的。
  85. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為難治性的。
  86. 如請求項44至60中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性及難治性的。
  87. 一種EGFR降解藥物之用途，其用於製造供治療人類之已轉移至腦或CNS之突變型EGFR介導之癌症用的藥劑，其中該EGFR降解藥物為：
    Figure 03_image1663
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  88. 如請求項87之用途，其中該突變型EGFR具有外顯子21突變。
  89. 如請求項87之用途，其中該突變型EGFR具有L858R突變。
  90. 如請求項87之用途，其中該突變型EGFR具有L861Q突變。
  91. 如請求項87之用途，其中突變型EGFR具有T790M突變。
  92. 如請求項87之用途，其中突變型EGFR具有C797S突變。
  93. 如請求項87之用途，其中該突變型EGFR具有L858R及T790M突變。
  94. 如請求項87之用途，其中該突變型EGFR具有L858R、T790M及C797S突變。
  95. 如請求項87之用途，其中該EGFR降解藥物作為醫藥組合物之一部分投與。
  96. 如請求項95之用途，其中該EGFR降解藥物係經口投與。
  97. 如請求項95之用途，其中該EGFR降解藥物係非經腸投與。
  98. 如請求項95之用途，其中該EGFR降解藥物係藉由靜脈內投與。
  99. 如請求項87之用途，其中亦向有需要之人類投與結合ATP位點的EGFR配位體。
  100. 如請求項99之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為奧希替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  101. 如請求項99之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為納闊替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  102. 如請求項99之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為瑪韋替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  103. 如請求項99之用途，其中該結合ATP位點的EGFR配位體為司培替尼或其醫藥學上可接受之鹽。
  104. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肺癌。
  105. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之非小細胞肺癌。
  106. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之小細胞肺癌。
  107. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腺癌。
  108. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之鱗狀細胞肺癌。
  109. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之大細胞未分化性癌。
  110. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之神經內分泌癌。
  111. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之肉瘤樣癌、腺鱗癌、燕麥細胞癌、組合小細胞癌、肺類癌腫瘤、中央類癌、周邊類癌、唾液腺型肺癌、間皮瘤或縱隔腫瘤。
  112. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之乳癌。
  113. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之HER-2陽性乳癌。
  114. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之ER+乳癌。
  115. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之PR+乳癌。
  116. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之三陰性乳癌。
  117. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之結腸直腸或直腸癌。
  118. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之頭頸癌或食道癌。
  119. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之胰臟癌。
  120. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之甲狀腺癌。
  121. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之卵巢癌、子宮癌或子宮頸癌。
  122. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之腎癌、肝癌或膀胱癌。
  123. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為已轉移至腦或CNS之黑素瘤。
  124. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至腦。
  125. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症已轉移至CNS。
  126. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR降解藥物係投與EGFR介導之癌症未經治療的人類。
  127. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性的。
  128. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為難治性的。
  129. 如請求項87至103中任一項之用途，其中該EGFR介導之癌症為復發性及難治性的。
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