TW202305012A

TW202305012A - c-Met 蛋白質結合肽複合物

Info

Publication number: TW202305012A
Application number: TW111110401A
Authority: TW
Inventors: 鈴木芳典; 江原武; 多久和正訓
Original assignee: 日商肽夢想股份有限公司
Priority date: 2021-03-22
Filing date: 2022-03-21
Publication date: 2023-02-01
Also published as: EP4317190A4; KR20230159872A; JPWO2022202761A1; IL305967A; CA3213849A1; EP4317190A1; AU2022243260A1; CN117083304A; WO2022202761A1

Abstract

[課題]本發明提供一種與c－Met蛋白質結合之肽複合物。[解決手段]一種包含肽A之肽複合物，其中，肽A係由X ¹－X ²－X ³－V－S－X ⁴－D－X ⁵－D－X ⁶－P－R－W－X ⁷－MeC（序列識別號1）所記載之胺基酸序列所構成之肽，或由序列識別號1所記載之胺基酸序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之胺基酸序列所構成。X ¹為A、MeA、F或MeF。X ²為V、T、E、Q或W。X ³為A、R、Y或D。X ⁴為F、MeF、L或MeF。X ⁵為D、E、S、P或V。X ⁶為（S）－2－胺基庚酸（Ahp）、R、L－正白胺酸（Nle）、（S）－2,7－二胺基庚酸（Hty）或S。X ⁷為S、A、L－α－胺基丁酸（Abu）、D、Q或V。

Description

c－Met蛋白質結合肽複合物

本發明關於一種包含與c－Met蛋白質結合之肽之複合物等。

近年來，以使因生病、外傷等而受損的身體組織進行再生為目標之再生醫療正受到矚目。再生醫療因使用自身的細胞而將組織進行再生，故相較於從他人移植器官等的以往方法，具有不易引起免疫問題的優點。該等再生醫療中，需要培養幹細胞等來自人體的細胞，並使其分化成目標組織。又，為了創造出再生醫療的進一步改良技術，而正持續進行使用所培養之哺乳類細胞，尤其來自人體的細胞之基礎研究。在此等再生醫療、研究等中，有效率地培養成為目標之細胞並使其繁殖之步驟變得重要。在以幹細胞為首之人體細胞的培養中，培養基成分扮演著重要的角色，尤其，其中成長因子（有時亦稱為GF）為最重要的要素之一。但是，成長因子一般非常昂貴，且例如在使用幹細胞之研究中，為了維持未分化狀態的細胞等，需要大量的成長因子。又，成長因子之一的肝細胞成長因子（HGF：hepatocyte growth factor receptor）及其受體亦即c－Met（有時亦稱為c－Met或Met）亦作為醫藥品的標靶而正在進行研究。若c－Met為單次跨膜受體（single-transmembrane receptor）型酪胺酸激酶且配位基亦即HGF與c－MET結合，則c－MET二聚化而活化。已知c－Met的活化係胚胎發育、器官形成、創傷修復所需，例如，已知HGF與受體c－Met的結合係使相關的訊息傳遞路徑活化，促進／維持特異性內皮細胞的增殖及功能，促進血管新生，再進一步從血管新生形成側枝循環（collateral circulation）。因此，正尋求具有c－Met的活化作用之化合物，並正在進行研究。在這樣的背景下，專利文獻1中報告了一種具有c－Met促效活性之抗體。又，非專利文獻1中報告了迄今正在進行開發之HGF的代替物。又，近年來，作為代替低分子、抗體等高分子之中分子化合物，作為肽，尤其是環狀肽的醫藥組合物等之應用正受到矚目。例如，專利文獻2及非專利文獻2中記載了能利用作為c－Met蛋白質促效劑之肽複合物。該能利用作為c－Met蛋白質促效劑之肽複合物已知會促進細胞的增殖、遷移等，正期待使用此細胞增殖作用而應用於醫藥品、細胞培養時的培養基組成物等各種用途。可列舉例如作為以下的有用性：在培養用於再生醫療之細胞、組織等時所添加之成長因子代替物、器官移植時的器官保護劑、再生促進劑及用於治療導致肝細胞成長因子的表達降低之疾病的治療藥。 [習知技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特表2021－50793 [專利文獻2]日本專利第6426103號公報 [非專利文獻] [非專利文獻1]THE CHEMICAL TIMES（關東化學股份有限公司）2020 No.2 p.6－11 特輯再生醫療關連技術能化學合成之成長因子代替化合物的開發植木亮介及山東信介 [非專利文獻2] Ito,K. et. al., Nature communications, 6, Article number： 6373（2015）

[發明所欲解決的課題] 如同前述，在以幹細胞為首之細胞的培養中，需要添加高價的成長因子，其使幹細胞等的醫療應用變得困難。又，成長因子因也很有可能作為醫藥品，故期望開發低價且能穩定提供之成長因子的代替物。在此種狀況中，如同上述的公報所記載，已發現能利用作為c－Met蛋白質促效劑之肽複合物，所述c－Met蛋白質促效劑包含與c－Met蛋白質結合之肽。然而，上述公報所記載之肽複合物中因存在表現比人類HGF更低活性的成分，因此期望開發該肽複合物以外的與c－Met蛋白質結合之複合物。

此說明書所記載之發明之目的在於解決上述課題的任一個或兩個以上。

[解決課題的技術手段] 本發明基本上係基於由實施例而得之下述見解：序列識別號1所示之肽會與c－Met蛋白質結合。

又，本發明基本上係基於由實施例而得之下述見解：以利用連接子（linker）使上述的肽結合而取得二聚物結構之方式所設計之肽複合物會發揮作為c－Met蛋白質促效劑的功能。

第一發明係關於一種肽複合物，其包含與c－Met蛋白質結合之肽A。肽A係由X ¹－X ²－X ³－V－S－X ⁴－D－X ⁵－D－X ⁶－P－R－W－X ⁷－MeC（序列識別號1）所記載之胺基酸序列所構成之肽、或由序列識別號1所記載之胺基酸序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之胺基酸序列所構成之與c－Met蛋白質結合之肽。 X ¹為可經N－烷基化之胺基酸。 X ²為任意胺基酸。 X ³為任意胺基酸。 X ⁴為可經N－烷基化之疏水性胺基酸。 X ⁵為任意胺基酸。 X ⁶為在側鏈具有可有取代的烷基鏈之胺基酸或S。 X ⁷為任意胺基酸。

[發明功效] 根據本發明，可提供一種複合物，其包含與c－Met蛋白質結合之新穎的肽。

又，根據本發明，可提供一種新穎的肽複合物，其具有c－Met促效活性。

再者，根據本發明，可提供一種作為在培養用於再生醫療之細胞、組織等時所添加之成長因子的代替物之細胞或組織培養用的培養基組成物，其包含具有c－Met促效活性之新穎的肽複合物。此例如亦能利用作為器官移植時的器官保護劑、再生促進劑。

又，根據本發明，可提供一種新穎的c－Met蛋白質促效劑、包含此種c－Met蛋白質促效劑之醫藥組合物。此例如有用於作為用於導致肝細胞成長因子（HGF）的表達降低之疾病的治療藥。

再者，根據本發明，可提供一種醫藥組合物，其包含促進細胞增殖之新穎的c－Met蛋白質促效劑。

以下，針對用於實施本發明之方式進行說明。本發明並不受限於以下所說明之方式，亦包含本發明所屬技術領域中具有通常知識者在已知範圍內由以下方式進行適當修正者。

第一發明係關於一種肽複合物，其包含與c－Met蛋白質結合之肽A。

c－Met蛋白質 c－Met蛋白質為肝細胞成長因子（HGF）受體，且具有酪胺酸激酶活性。c－Met蛋白質係由以雙硫鍵進行結合而成之α次單元及β次單元所構成之跨膜受體。c－Met蛋白質在活體內藉由HGF結合而二聚化，接著發生自磷酸化，而使各種信號傳遞活化。其結果，藉由使MAPK路徑、Akt路徑等的信號傳遞活化而促進細胞增殖，另一方面，阻礙細胞的凋亡誘導。若可使此功能亢進而促進細胞的增殖、遷移等，則有可能促進用於再生醫療之細胞製劑等的製造、肝硬化等難治性器官疾病的治癒等。 c－Met蛋白質亦被稱為c－Met、MET或HGFR。人類的c－Met蛋白質的GenBank登錄編號為NP＿000236，小鼠的c－Met蛋白質的GenBank登錄編號為NP＿032617。

肝細胞成長因子（HGF）肝細胞成長因子（HGF）係多功能細胞因子，並係作為對於大範圍的組織及細胞種類之成長因子而發揮功能之因子，其具有分子量約6萬的重鏈與約3.5萬的輕鏈進行雙硫鍵結而成之異二聚體結構。HGF已知會促進上皮細胞、內皮細胞、間質細胞等的增殖，此外還具有形態形成誘導、細胞運動性亢進、抗細胞凋亡、血管新生作用等的功能。人類的HGF的GenBank登錄編號為NP＿000592，小鼠的HGF的GenBank登錄編號為NP＿001276387。較佳為人類HGF，在本說明書中，若無特別記載，則HGF表示人類HGF。

與c－Met蛋白質結合所謂與c－Met蛋白質結合，意指肽或肽複合物與c－Met蛋白質結合。是否與c－Met蛋白質結合，可藉由習知的測量分子間結合之方法而測量，例如能由本身為習知的任意適當方式而決定，包含表面電漿共振（SPR）分析法、斯卡查德分析（Scatchard analysis）及／或放射免疫分析法（RIA）、酵素免疫分析法（EIA）及三明治競爭分析法（Sandwich competitive assay）等競爭結合分析法以及在該技術領域中本身為習知之其不同變體。較佳為，例如由日本專利第6426103號公報（專利文獻2）所記載之表面電漿共振（SPR）光譜所進行之評價。又，具有c－Met促效活性之化合物因藉由與c－Met蛋白質結合而表現c－Met促效活性，故能藉由評價c－Met促效活性，亦即有無c－Met促效活性，而間接地評價該肽或複合物是否與c－Met蛋白質結合。此外，在複合物中，只要該複合物的一部分或全部能與c－Met蛋白質結合，則可謂該複合物與c－Met蛋白質結合。例如，在該複合物包含肽A之情形中，該複合物中之肽A的部分可為與c－Met蛋白結合之部位，該複合物所含之其他部分亦可與c－Met蛋白質結合。

c－Met促效活性所謂c－Met促效活性，係指與c－Met蛋白質結合而表現與HGF所具有之活性類似的影響之活性。肽或肽複合物是否具有c－Met促效活性，可藉由習知的方法而測量，例如，如實施例所示，可使用磷酸－c－Met AlphaLISA分析法、HUVEC細胞增殖試驗等而評價c－Met促效活性。又，亦可使用日本專利第6426103號公報（專利文獻2）所記載之ELISA法而評價c－Met的磷酸化能力。

具有c－Met促效活性之肽複合物可治癒的疾病具有c－Met促效活性之肽複合物可治癒的疾病之例子為缺血性心臟病、急性肝炎、猛爆性肝炎、肝硬化、膽道閉鎖症、脂肪肝、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、糖尿病性腎病、急性肺炎、肺纖維化、血管病變、心肌梗塞、擴張性心肌病變、皮膚潰瘍、腦梗塞、閉塞性動脈硬化、胃潰瘍及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症等，可使用於治療該等疾病。

肽複合物肽複合物係包含與c－Met蛋白質結合之肽A之肽複合物。此肽複合物包含1個或2個以上的肽A。肽複合物較佳為包含2個肽A。又，包含1個肽A之肽複合物的例子並未受限，例如為包含肽A與欲傳遞至c－Met蛋白質之物質（有效負載）例如習知的醫藥組合物等之肽複合物、包含肽A與螢光蛋白質等成為標記之組合物之肽複合物。習知的醫藥組合物與肽A的複合物之情形，能利用肽A對於c－Met蛋白質的結合能力而將欲傳遞至c－Met之醫藥組合物傳遞至c－Met蛋白質。作為欲傳遞至c－Met蛋白質之物質，並無特別限定，可為本發明所屬技術領域中具有通常知識者所希望的任何物質。作為該物質的例子並未受限，但可列舉如下：化合物：不僅低分子化合物、中分子化合物，只要是能以細胞的攝食過程（cytosis）機制導入的化合物則皆可。可列舉例如習知的低分子藥劑。肽：可為與體內的標靶結合而表現某種效果之肽，例如可為環狀肽。 RI：只要為由放射性同位素所標記之低分子、中分子化合物、抗體等、可由放射性同位素標記之化合物則皆可。可列舉例如正子斷層掃描（PET）檢查用的化合物。蛋白質：只要為抗體、酵素等在體內表現有用功能之蛋白質則皆可。可列舉例如用於酵素補充療法之酵素。核酸：只要為DNA、RNA等包含核苷酸序列者則皆可。可列舉例如核酸醫藥品。 DDS：可為脂質體、微胞等DDS分子。在該DDS分子中，亦可進一步於內部包含醫藥品等化合物。以及，可為上述所列舉之該等物質的複合物。

肽複合物的例子係包含（1）第一肽、（2）第二肽及（3）連接第一肽及第二肽之連接子之肽複合物。此肽複合物亦可為僅由（1）第一肽、（2）第二肽及（3）連接第一肽及第二肽之連接子所構成之肽複合物。此肽複合物中，第一肽及第二肽中的至少一者為肽A。第一肽及第二肽可為相同亦可為不同，但較佳為肽A。亦即，肽複合物可為異二聚體亦可為同源二聚體。異二聚體係第一肽及第二肽為不同的肽（例如胺基酸序列不同的肽A）。同源二聚體係第一肽及第二肽同為肽A。較佳的肽複合物為同源二聚體。

第一肽及第二肽較佳為相同的肽A，且為第一肽及第二肽的C端與連接子結合而成之肽複合物。特佳為第一肽及第二肽為環狀肽。

肽A 本說明書中，不僅記載包含肽A之複合物，亦記載肽A。肽A為由X ¹－X ²－X ³－V－S－X ⁴－D－X ⁵－D－X ⁶－P－R－W－X ⁷－MeC（序列識別號1）所記載之胺基酸序列所構成之與c－Met蛋白質結合之肽；或由序列識別號1所記載之胺基酸序列中1～3個（1個、2個或3個）胺基酸經取代、缺失、加成或插入而成之胺基酸序列所構成之與c－Met蛋白質結合之肽。在此（2）的肽中，亦較佳為維持序列識別號1中之第4位的V、第5位的S、第7位的D、第9位的D、第11位的P、第12位的R、第13位的W及第15位的MeC。

X ¹為可經N－烷基化之胺基酸，較佳為可經N－甲基化之A或可經N－甲基化之F。再佳的X ¹為MeF（經N－甲基化之F）。 X ²為任意胺基酸，較佳為親水性胺基酸、脂肪族／分支鏈胺基酸或芳香族胺基酸，再佳為V、T、E、Q或W。最佳的X ²為T。 X ³為任意胺基酸，其為親水性胺基酸、脂肪族胺基酸或芳香族胺基酸，再佳為A、R、Y或D。最佳的X ³為A。 X ⁴為可經N－烷基化之疏水性胺基酸，較佳為可經N－甲基化之疏水性胺基酸，再佳為可經N－甲基化之F或可經N－甲基化之L。最佳的X ⁴為MeF（經N－甲基化之F）。 X ⁵為任意胺基酸，較佳為親水性胺基酸、脂肪族／分支鏈胺基酸或P，再佳為D、E、S、P或V。最佳的X ⁵為E。 X ⁶為在側鏈具有可有取代的烷基鏈之胺基酸或S，較佳為（S）－2－胺基庚酸（Ahp）、R、L－正白胺酸（Nle）、（S）－2,7－二胺基庚酸（Hty）或S。再佳的X ⁶為Ahp。 X ⁷為任意胺基酸，較佳為親水性胺基酸或脂肪族胺基酸，再佳為S、A、L－α－胺基丁酸（Abu）、D、Q或V。最佳的X ⁷為S。

所謂「可經N－烷基化之胺基酸」，表示在形成肽鍵之氮上具有烷基之胺基酸亦即N－烷基胺基酸或不具有烷基之胺基酸。作為N－烷基胺基酸，可列舉例如N－丁基胺基酸、N－乙基胺基酸、N－甲基胺基酸等。又，所謂「可經N－甲基化」，表示包含N－甲基化胺基酸。例如，所謂可經N－甲基化之A，表示丙胺酸（A）或N－甲基丙胺酸（MeA）。

所謂「在側鏈具有可有取代的烷基鏈之胺基酸」，係指在側鏈具有烷基鏈之胺基酸，例如屬於脂肪族胺基酸群組之胺基酸、在該等胺基酸的側鏈烷基的末端的官能基經取代之胺基酸，較佳為該烷基所含之C為5以上之胺基酸。例如，包含Ahp、Nle、Hty等。

肽A的較佳例為甲、由MeF－T－A－V－S－MeF－D－E－D－Ahp－P－R－W－S－MeC（序列識別號34）所記載之胺基酸序列所構成之肽；或乙、由序列識別號34所記載之胺基酸序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之胺基酸序列所構成之與c－Met蛋白質結合之肽。

保存性胺基酸取代從特定的序列將1個、2個或3個胺基酸殘基進行取代、缺失、加成或插入之情形，較佳為進行保存性胺基酸取代。所謂「保存性胺基酸取代（conservative amino acid substitution）」，意指與功能性等價或類似的胺基酸的取代。肽中之保存性胺基酸取代會對該肽的胺基酸序列帶來靜態變化。例如，具有同樣的極性之一個或兩個以上的胺基酸係功能性等價地發揮作用，而對所述肽的胺基酸序列帶來靜態變化。一般而言，某個群組內的取代可認為對結構及功能而言為保存性。然而，如本發明所屬技術領域中具有通常知識者所知，特定的胺基酸殘基所發揮的作用，可由包含該胺基酸之分子在三維結構中之意義所決定。例如，半胱胺酸殘基可採取氧化型的（二硫化物）形式，其極性低於還原型的（硫醇）形式。精胺酸側鏈長的脂肪族的部分能構成結構上及功能上重要的特徵。又，包含芳香環之側鏈（色胺酸、酪胺酸、苯丙胺酸）有助於離子－芳香族相互作用或陽離子－π相互作用（cation-π interaction）。在此情形中，即使將具有該等側鏈之胺基酸取代成屬於酸性或非極性群組之胺基酸，結構上及功能上仍能為保存性。脯胺酸、甘胺酸、半胱胺酸（二硫化物形式）等的殘基可能對主鏈的立體結構帶來直接效果，而無法屢次無結構變形地進行取代。如同下述，保存性胺基酸取代包含根據側鏈的類似性之特異性取代（Lehninger，生化學，修訂第2版，1975年刊登，73至75頁：L. Lehninger, Biochemistry, 2nd edition, pp73～75, Worth Publisher, New York (1975)）及典型性取代。

又，保存性胺基酸取代，例如，較佳為取代成如下所述般在將天然胺基酸根據其共通之側鏈性質所劃分之群組中屬於與某個胺基酸所屬之群組相同之群組的胺基酸。疏水性（亦稱為非極性）胺基酸：為呈疏水性（非極性）之胺基酸，包含丙胺酸（亦記載為「Ala」或僅記載為「A」）、甘胺酸（亦記載為「Gly」或僅記載為「G」）、纈胺酸（亦記載為「Val」或僅記載為「V」）、白胺酸（亦記載為「Leu」或僅記載為「L」）、異白胺酸（亦記載為「Ile」或僅記載為「I」）、脯胺酸（亦記載為「Pro」或僅記載為「P」）、苯丙胺酸（亦記載為「Phe」或僅記載為「F」）、色胺酸（亦記載為「Trp」或僅記載為「W」）、酪胺酸（亦記載為「Tyr」或僅記載為「Y」）、甲硫胺酸（亦記載為「Met」或僅記載為「M」）。此外，疏水性胺基酸亦可進一步分成以下群組。脂肪族胺基酸：為在側鏈具有脂肪酸或氫之胺基酸，包含Ala、Gly、Val、Ile、Leu。脂肪族／分支鏈胺基酸：為在側鏈具有分支型脂肪酸之胺基酸，包含Val、Ile、Leu。芳香族胺基酸：為在側鏈具有芳香環之胺基酸，包含Trp、Tyr、Phe。親水性（亦稱為極性）胺基酸：為呈親水性（極性）之胺基酸，包含：絲胺酸（亦記載為「Ser」或僅記載為「S」）、蘇胺酸（亦記載為「Thr」或僅記載為「T」）、半胱胺酸（亦記載為「Cys」或僅記載為「C」）、天冬醯胺酸（亦記載為「Asn」或僅記載為「N」）、麩醯胺酸（亦記載為「Gln」或僅記載為「Q」）、天冬胺酸（亦記載為「Asp」或僅記載為「D」）、麩胺酸（亦記載為「Glu」或僅記載為「E」）、離胺酸（亦記載為lysine；亦記載為「Lys」或僅記載為「K」）、精胺酸（亦記載為「Arg」或僅記載為「R」）、組胺酸（亦記載為「His」或僅記載為「H」）。此外，親水性胺基酸亦可進一步分成以下群組。酸性胺基酸：為側鏈呈酸性之胺基酸，包含Asp、Glu，鹼性胺基酸：為側鏈呈鹼性之胺基酸，包含Lys、Arg、His。中性胺基酸：為側鏈呈中性之胺基酸，包含Ser、Thr、Asn、Gln、Cys。又，關於Gly及Pro，亦可劃分成「對主鏈的方向造成影響之胺基酸」，在側鏈包含硫分子之胺基酸、Cys及Met亦可劃分成「含硫胺基酸」。

在本說明書中，「胺基酸」不僅包含天然胺基酸，亦包含非天然胺基酸。非天然胺基酸例如包含上述所記載之天然胺基酸經N－烷基化之N－烷基胺基酸、經形成肽鍵之氮經分支或未分支之低級（例如C1－C5，較佳為C1－C3，更佳為C1）的烷基修飾而成者。N－烷基胺基酸中，較佳為N－乙基胺基酸、N－丁基胺基酸或N－甲基胺基酸，再佳為N－甲基胺基酸。又，非天然胺基酸包含D型胺基酸（亦記載為D－胺基酸）、β－胺基酸、γ－胺基酸、胺基酸變異體、胺基酸衍生物等經化學修飾之胺基酸、正白胺酸、鳥胺酸等在活體內無法成為蛋白質的構成材料之胺基酸等。再者，包含對天然胺基酸的側鏈進一步加成官能基或取代成另一官能基之胺基酸（例如，側鏈的伸芳基、伸烷基等的部分具有取代或加成之胺基酸、側鏈的伸芳基、伸烷基或烷基的C數經增加之胺基酸、在側鏈的芳香環具有取代之胺基酸、經雜環化或稠環化之胺基酸等）。此外，藉由對天然胺基酸的側鏈加成或取代官能基等結構等，而可賦予與天然胺基酸不同的性質。例如，A4p係在側鏈加成哌啶基而成之丙胺酸，但藉由加成該哌啶基，而與屬於非極性胺基酸群組之丙胺酸不同，呈鹼性之極性。亦即，將天然胺基酸根據其共通之側鏈性質所劃分之前述的群組中，可包含具有同樣的側鏈性質之非天然胺基酸。例如，屬於鹼性胺基酸之精胺酸的N－甲基化胺基酸亦即N－甲基精胺酸（MeR）為非天然胺基酸，但由於呈鹼性而可分類為鹼性胺基酸。如此，亦可將表現與某種胺基酸同樣的側鏈性質之非天然胺基酸包含作為保存性胺基酸取代的對象。無限定地，非天然胺基酸中包含N－甲基胺基酸、Ahp、Nle、Hty、Abu等。例如，Ahp、Nle、Abu、Hty可劃分為疏水性胺基酸，再者，Ahp、Nle、Abu亦可劃分為脂肪族胺基酸，Hty亦可劃分為芳香族胺基酸。此外，針對N－甲基胺基酸，亦可分類為N－烷基胺基酸，亦可根據未經N－甲基化之原本的胺基酸的側鏈的性質而進行分類。

具體而言，肽A較佳為由序列識別號2～序列識別號34中任一項所記載之胺基酸序列所構成之肽。此等之中，較佳為由序列識別號34所記載之胺基酸序列所構成之肽。

肽A較佳為環狀肽。所謂肽，係指多個胺基酸連續而成之結構，其含義中亦包含多肽、蛋白質。此外，本申請案中，所謂胺基酸，不僅包含天然存在之胺基酸（天然胺基酸），亦包含非天然存在之胺基酸（非天然胺基酸）。又，本申請案中，本發明的肽亦包含：藉由合成後環化而形成環狀部之肽、將該肽進一步進行化學修飾而得之肽、肽與結合至肽之物質的複合物。

在本說明書中，為了肽的環化，有改變胺基酸的一部分之情形。肽亦包含此種含一部分經改變之胺基酸之肽。作為用於環化的改變的例子，有下述情形：將氯乙醯基加成至位於N端之胺基酸且與肽中的半胱胺酸殘基結合而環化。包含加成氯乙醯基而成之各種（天然／非天然）胺基酸的肽，亦包含於本申請案的肽。

所謂環狀肽，係指肽中的2個胺基酸結合而其全部或一部分成為環狀者。此外，在本申請案中亦包含肽中的胺基酸形成交聯結構者、藉由內醯胺成環或大環化反應（macrocyclization reaction）而形成環狀結構者、具有套索肽（lasso peptide）狀結構者等。亦即，本申請案中，環狀肽只要為其一部分形成環狀結構者即可，亦可具有直鏈部。

一般而言，肽在活體內的代謝穩定性差，且因尺寸大故有難以穿透細胞膜的問題。對於此類課題，已有採取使肽進行環化的方法。若將肽進行環化，則蛋白酶耐性提升，代謝穩定性提升，且構形改變亦受到限制，因此暗示剛性增加且膜穿透性及與靶蛋白的親和性提升。

關於肽的環化，可依照習知的方法進行。雖不受限於此，但例如可藉由設計成在肽中包含2個以上的半胱胺酸殘基，而在轉譯後藉由雙硫鍵而形成環狀結構。又，依照Goto等人的方法（Y. Goto, et al. ACS Chem. Biol. 3 120－129（2008）），藉由遺傳密碼的重編程（reprogramming）技術，而合成在N端具有氯乙醯基之肽，並亦可藉由預先在肽中配置半胱胺酸殘基而環化。藉此，在轉譯後巰基會自動地對氯乙醯基進行親核攻擊（nucleophilic attack），肽藉由硫醚鍵而環化。亦可藉由遺傳密碼的重編程技術，將進行結合而形成環狀之其他胺基酸的組合配置於肽內而環化。或者，亦可藉由合成在N端具有環醯胺之肽，在肽中配置L－2－胺基己二酸殘基，並在該等之間進行結合而環化。如此，只要為習知的環化方法則可無特別限制地使用。

肽A的肽長度肽A的肽長度（醯胺鍵的數量）並未被特別限定，但總胺基酸殘基（結合至肽之物質或將該物質與肽結合之連接子包含胺基酸之情形，不含該等胺基酸）較佳為20殘基以內。較佳為胺基酸為6以上、7以上、8以上、9以上、10以上、11以上，較佳為胺基酸為19以下、18以下、17以下、16以下、15以下。

編碼肽A之核酸本說明書亦記載編碼肽A（c－Met蛋白質結合肽）之核酸。在本說明書中，「核酸」可為天然亦可為非天然，包含DNA、RNA及此等的嵌合體，但並不受限於此等。

連接子用於肽複合物之連接子只要肽複合物可與c－Met蛋白質結合，則其種類、長度等並未被特別限定。連接子的例子有胺基酸連接子（肽連接子）、化學連接子、脂肪酸連接子、核酸連接子、糖鏈連接子等，例如亦可為化學連接子與肽連接子等的複合物。作為化學連接子，可列舉例如PEG（Polyethyleneglycol，聚乙二醇）連接子。又，連接子可為由脂肪酸所誘導之包含二價化學部分之脂肪酸連接子。胺基酸（肽）連接子係包含至少1個任意胺基酸之連接子，例如可使用如美國專利第7,271,149號所記載之具有序列[Gly－Gly－Gly－Gly－Ser]n（式中，n為1、2、3、4、5或6）之肽等富含甘胺酸之肽、美國專利第5,525,491號所記載之富含絲胺酸之肽連接子。該等連接子可利用習知的方法或依據其之方法而與c－Met蛋白質結合肽結合。例如，藉由使連接子與c－Met蛋白質結合肽的末端Cys殘基結合，可使連接子與c－Met蛋白質結合肽結合。又，亦可使連接子與c－Met蛋白質結合肽的C端以外所含之胺基酸結合。

連接子的較佳例為PEG連接子。PEG連接子係包含聚乙二醇（PEG）或聚乙二醇（PEG）衍生物之連接子。PEG連接子可包含胺基酸者。PEG連接子較佳為包含8個以上的PEG分子單元者。連接子的具體例為（1）具有序列識別號35～41中任一項所記載之序列之連接子、或（2）由序列識別號35～41中任一項所記載之序列中1～3個胺基酸（胺基酸只要為能使用作為連接子之胺基酸，則未被特別限定，但例如為S、G及K以及該等胺基酸中的任一者或兩者以上）經取代、缺失、加成或插入而成之序列所構成之連接子。

肽A、連接子及肽複合物可藉由習知的方法（例如日本專利第6426103號公報（專利文獻2））或適當修正習知的方法而製成。

c－Met蛋白質促效劑上述之肽複合物係藉由c－Met蛋白質的多聚體化而促進自磷酸化，並藉此具有類似HGF的功能。因此，上述之肽複合物係有用於作為c－Met促效劑（致效劑，agonist）、包含c－Met蛋白質促效劑之醫藥組合物等。

醫藥組合物本說明書亦提供一種醫藥組合物，其包含上述之肽複合物與藥學上可容許之載體。上述之肽複合物之中，包含c－Met蛋白質促效劑之醫藥組合物係用於治療或預防選自由缺血性心臟病、急性肝炎、猛爆性肝炎、肝硬化、膽道閉鎖症、脂肪肝、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、糖尿病性腎病、急性肺炎、肺纖維化、血管病變、心肌梗塞、擴張性心肌病變、皮膚潰瘍、腦梗塞、閉塞性動脈硬化、胃潰瘍及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症所組成之群組的疾病。

本發明之醫藥組合物包含本發明之肽複合物作為有效成分。由於具有類似HGF的功能，故對於促進細胞增殖、促進細胞遷移、抑制細胞凋亡、誘導形態形成、血管新生、組織或器官的再生或保護十分有用，可被使用作為此等相關之疾病的治療或預防劑。作為所述疾病，可列舉例如急性肝炎、猛爆性肝炎、肝硬化、膽道閉鎖症、脂肪肝、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、糖尿病性腎病、急性肺炎、肺纖維化、血管病變、心肌梗塞、擴張性心肌病變、皮膚潰瘍、腦梗塞、閉塞性動脈硬化、胃潰瘍及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症，但並不受限於此等。

上述醫藥組合物的投予形態並未被特別限定，可為經口投予亦可為非經口投予。作為非經口投予，可列舉例如肌肉內注射、靜脈內注射、皮下注射等注射投予、經皮投予、經黏膜投予（經鼻、經口腔、經眼、經肺、經陰道、經直腸）投予等。醫藥組合物中的肽，鑒於容易被代謝及排泄的性質，而可進行各種修飾。例如，可在多肽加成聚乙二醇（PEG）或糖鏈（sugar chain）而延長血中滯留時間並使抗原性降低。又，亦可將聚乳酸－甘醇酸（PLGA）等活體內分解性的高分子化合、多孔性羥磷石灰、脂質體、表面修飾脂質體、以不飽和脂肪酸所製備之乳化液、奈米粒子、奈米球等使用作為持續釋放型（sustained-release）基劑，並使多肽包含於其中。經皮投予之情形，亦可使弱電流流過皮膚表面並使其穿透角質層（離子電滲法）。

醫藥組合物可直接使用有效成分，亦可加入藥學上可容許的載體、賦形劑、添加劑等而進行製劑化。作為劑形，可列舉例如液劑（例如注射劑）、分散劑、懸浮劑、錠劑、丸劑、粉劑、坐劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿、錠劑、吸入劑、軟膏劑、點眼劑、點鼻劑、點耳劑、泥罨劑等。製劑化可適當使用例如賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、溶解劑、溶解輔助劑、著色劑、矯味矯臭劑、穩定劑、乳化劑、吸收促進劑、界面活性劑、pH調整劑、防腐劑、抗氧化劑等並藉由常法而進行。

作為用於製劑化之成分的例子，可列舉蒸餾水、食鹽水、磷酸緩衝液、葡萄糖、甘油、乙醇等藥學上可容許的有機溶劑、動植物油、乳糖、甘露醇、葡萄糖、山梨糖醇、結晶纖維素、羥丙纖維素、澱粉、玉米澱粉、無水矽酸、矽酸鋁鎂、膠原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、羧乙烯聚合物、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鈉、海藻酸鈉、水溶性葡聚糖、羧甲基澱粉鈉、果膠、甲基纖維素、乙基纖維素、黃原膠、阿拉伯膠、黃蓍樹膠、酪蛋白（casein）、瓊脂、聚乙二醇、二甘油、甘油、丙二醇、石油脂、石蠟、肉豆蔻酸辛基十二酯、肉豆蔻酸異丙酯、高級醇、硬脂醇、硬脂酸、人類血清白蛋白等，但並不受限於此等。

作為改善難吸收性藥物的吸收之吸收促進劑，可使用聚氧乙烯月桂醚類、月桂基硫酸鈉、皂素等界面活性劑；甘膽酸、去氧膽酸、牛膽酸等膽鹽；EDTA、柳酸類等螯合劑；己酸、癸酸、月桂酸、油酸、亞油酸、混合微胞（mixed micelle）等脂肪酸類；烯胺衍生物、N－醯基膠原蛋白肽、N－醯基胺基酸、環糊精類、幾丁聚糖類、一氧化氮施予體等。

丸劑或錠劑亦能以糖衣、胃溶性、腸溶性物質被覆。注射劑可包含注射用蒸餾水、生理食鹽水、丙二醇、聚乙二醇、植物油、醇類等。再者，可加入濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩定劑、溶解劑、溶解輔助劑、防腐劑等。

本發明的醫藥組合物亦可與對上述疾病有用的其他藥物或治療法併用投予。

將本發明的醫藥組合物投予至哺乳類（例如，人類、小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、狗、馬、猴、豬、羊等）特別為人類之情形的投予量，係依據症狀、患者的年齡、性別、體重、感受性差異、投予方法、投予間隔、有效成分的種類、製劑的種類而異，並未被特別限定，但例如可單次或分多次投予30μg～1000mg、100μg～500mg、100μg～100mg。注射投予之情形，依據患者的體重，可單次或分多次投予1μg／kg～3000μg／kg、3μg／kg～1000μg／kg。

治療方法本說明書亦提供上述之各種疾病的治療方法，其包含對於對象（例如哺乳類、患者等）投予有效量的肽複合物或有效量的醫藥組合物之步驟。又，本說明書亦記載在上述之醫藥組合物的製造中使用肽A或上述之肽複合物、使用肽A或上述之肽複合物之上述醫藥組合物的製造方法。

培養用培養基添加物、培養基本說明書亦提供包含上述之肽複合物之培養用培養基添加物、包含肽複合物之培養用培養基。此培養用培養基添加物係用於培養來自哺乳類的細胞或組織。作為進行培養之細胞的例子，並不受限於此，但可列舉體細胞、生殖細胞、具有能分化成構成活體之全部組織或細胞之能力的細胞亦即多潛能幹細胞。作為多潛能幹細胞，可列舉例如來自胚胎幹細胞（Embryonic stem cell，ES細胞）、精子幹細胞、多潛能生殖幹細胞、胚胎生殖细胞、誘導性多功能幹細胞（Induced pluripotent stem cell，iPS細胞）、培養纖維母細胞或骨髓幹細胞的細胞。又，可為該等幹細胞與體細胞的融合細胞，亦可為藉由壓力或細胞刺激所誘導／篩選之多潛能幹細胞、藉由培養將體細胞的核進行核移植所製成之初期胚胎（early embryo）而建立之多潛能幹細胞。又，作為進行培養之組織的例子，可列舉從細胞所分化之組織、從身體所取出之組織。例如，此培養用培養基添加物能使用於保護已再生之組織或用於器官移植之器官。細胞或組織較佳為來自人類、猴、黑猩猩等靈長類的細胞或組織，更佳為來自人類。

培養基只要是用於培養細胞或組織的培養基則未被特別限定，但較佳為添加人類HGF而使用之培養基。可為血清培養基，較佳為無血清培養基或低血清培養基。培養用培養基添加物可為溶液的形態，亦可為經乾燥之固體（例如，固狀、粉末狀等）的形態。在為溶液的形態之情形中，可直接使用作為培養用的培養基，亦可將以溶劑稀釋並視需求添加上述添加劑而成者使用作為培養用的培養基。作為進行稀釋時所使用之溶劑，可列舉例如水、緩衝液、生理食鹽水、用於各種細胞或組織培養之培養基等，此等可單獨使用，亦可組合2種以上使用。在培養用培養基添加物為經乾燥之固體的形態之情形中，例如，亦可將溶解於水、緩衝液、生理食鹽水、使用於各種細胞或組織培養之培養基等溶劑並視需求加入上述添加劑而成者使用作為培養用的培養基。用於培養細胞或組織之培養基中或由此所得之細胞用的培養基中，本發明的肽複合物的含量可依據進行培養之細胞或組織而由本發明所屬技術領域中具有通常知識者進行任意設定，例如，相對於組合物總量或培養基總量，作為最終濃度，能為約0.01～約10000nmol／L，較佳為約0.1～約1000nmol／L，更佳為約0.5～約1000nmol／L，再佳為約1～約100nmol／L。

DDS載體上述之肽A具有與c－Met蛋白質結合之性質。因此，肽A或包含肽A之肽複合物係藉由與習知的傳遞至c－Met蛋白質之物質例如藥劑結合，而發揮作為DDS載體（藥物傳遞用載體）、藥物傳遞用複合物的功能。本說明書亦揭示該種DDS載體、藥物傳遞用複合物。可使用習知的方法使肽A或肽複合物與藥劑結合。

[實施例] 簡稱（一般）埃（單位）為Å；牛血清白蛋白為BSA；二甲基亞碸為DMSO；二甲基甲醯胺為DMF； N,N－二異丙基乙基胺為DIPEA或DIEA； 3,6－二氧雜－1,8－辛烷－二硫醇為DODT；達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）為DMEM； 50%效果濃度為EC50；表皮生長因子（Epidermal Growth Factor）為EGF； 9－芴甲氧羰基（9-fluorenylmethyloxycarbonyl）為Fmoc；胎牛血清為FBS； N ²,N ⁶－雙（（（9H－芴－9－基）甲氧基）羰基）－L－離胺酸為Fmoc－Lys（Fmoc）－OH；克（單位）為g； O－（7－氮雜苯并三唑－1－基）－N,N,N’,N’－四甲基脲六氟磷酸鹽為HATU； HGF受體為HGFR；液相層析質譜儀為LC－MS或LC／MS；毫升（單位）為mL；莫耳濃度（molar）（單位）為M；微升（單位）為μL；毫莫耳濃度（millimolar）（單位）為mM；毫克（單位）為mg；乙腈為MeCN；分鐘（單位）為min；毫米（單位）為mm；奈米（單位）為nm；腎上皮細胞用基礎培養基（Renal Epithelial Cell Basal Medium）為REBM；每分鐘旋轉數（單位）為rpm；三氟乙酸為TFA；三異丙基矽烷為TIS。

簡稱（非天然胺基酸） MeF N－甲基－L－苯丙胺酸 MeA N－甲基－L－丙胺酸 Ahp （S）－2－胺基庚酸 Nle L－正白胺酸 Hty （S）－2－胺基－4－（4－羥基苯基）丁酸 Abu （S）－2胺基丁酸 MeC N－甲基－L－半胱胺酸 PEG4c 1－胺基－3,6,9,12－四氧雜螺－15－十五酸 PEG8c 1－胺基－3,6,9,12－四氧雜螺十五烷－15－酸（1-amino-3,6,9,12-tetraoxapentadecane-15-oic acid） PEG12c 1－胺基－3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36－十二氧雜三十九烷－39－酸（1-amino-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanononatriacontane -39-oic acid） cPEG1c 3,3’－氧基二丙酸（3,3’－Oxy dipropionic acid） cPEG9c 4,7,10,13,16,19,22,25,28－九氧雜三十一烷二酸（4,7,10,13,16,19,22,25,28-nonaoxahentriacontanedioic acid） cPEG17c 4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52－十七氧雜五十五烷二酸（4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52- heptadecaoxapentapentacontanedioic acid） OCOPEG13OCO 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33－十一氧雜三十五烷－1,35－二基雙（碳酸氫鹽）（3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-undecaoxapentriacontane-1,35－diyl bis(bicarbonate)）

[實施例1] 化學合成在以下的實施例中之化學合成中所使用之全部原料、結構單元、試劑、酸、鹼、固相樹脂、溶劑，可直接使用市售品或由本發明所屬技術領域中具有通常知識者使用有機化學的方法而合成。此外，包含保護基之胺基酸，只要無特別記載，則可直接使用市售品。固相樹脂中之肽鏈的延伸，係將各實施例所記載之樹脂作為初始原料，並使用通常使用之肽偶合反應條件與Fmoc去除反應條件而進行。反應係使用肽自動合成機亦即Biotage公司的Siro I並依照製造廠商的說明書而進行。所使用之一般的胺基酸係列舉如下，側鏈保護基顯示於括號內。 Fmoc－Trp（Boc）－OH；Fmoc－Thr（tBu）－OH；Fmoc－N－Me－Gly－OH；Fmoc－Asp（OtBu）－OH；Fmoc－N－Me－Phe－OH；Fmoc－Ala－OH；Fmoc－N－Me－Ala－OH；Fmoc－His（Trt）－OH；Fmoc－Tyr（tBu）－OH；Fmoc－Val－OH；Fmoc－HydPro（tBu）－OH；Fmoc－Cys（Trt）－OH；Fmoc－Lys（Mtt）－OH；Fmoc－Ser（tBu）－OH；Fmoc－N－Me－Ser（tBu）－OH。作為所得之粗精製肽的精製方法，係利用Waters公司自動純化系統（AutoPurification System）－SQD2單段式四極桿質譜儀（single quadruple mass spectrometer）並使用反相分離HPLC，一邊監測來自目標物質的m／z離子一邊進行溶析。確認由ESI－positive的掃描模式所得之質譜與包含從目標物質的分子式所計算之多價離子之質譜在所使用之質量分析器的誤差範圍內一致。此外，包含所使用之管柱之精製條件係顯示於各實施例。經化學合成之肽的結構決定係已藉由質譜分析法中之ESI－MS（＋）確認分子量，所述分子量係考量依照目標序列所使用之胺基酸與視需求所使用之結構單元並計算而得。此外，所謂「ESI－MS（＋）」，係表示在正離子模式下實施之電灑游離質譜分析法。所檢測之質量係以「m／z」單位標示進行報告。此外，分子量約大於1000之化合物，已作為2價離子或3價離子而以高頻率檢測出。

[實施例2] 具有c－Met促效活性之肽的識別 c－Met促效劑肽係將Recombinant Human HGF R／c－MET Fc Chimera His－tag Protein（R&D systems公司）作為標靶，並利用國際公開WO2014／119600號、國際公開 WO2012／033154號或國際公開 WO2007／066627號所記載之節選方法進行識別。以確認該肽實際上是否具有c－Met促效活性為目的，化學合成該等肽。此外，以由連接子結合兩個肽而成之同源二聚體的形式（肽複合物）進行合成。所合成之肽複合物所含之肽部分的胺基酸序列係顯示於表1，連接子序列顯示於表2。又，關於所合成之肽複合物（肽與連接子的組合）則顯示於表3及4。

表1：肽部分的胺基酸序列 [表1－1]

[表1－2]

表2：連接子序列 [表2]

表3：肽複合物 [表3]

表4：肽複合物 [表4]

[實施例3] 具有c－Met促效活性之肽的化學合成 [實施例3－1] 關於表3所記載之肽複合物，只要無其他合成實施例，則與以下所記載之肽複合物同樣地合成。此外，表3中之ESI－MS（m／z）表示ESI－MS（＋）觀測值，[M＋XH]X＋表示將此情形中之質子加成數表示作為（M＋XH）X＋顯示時的X的值。 GFs＿c－Met＿0012＿7複合物（GFs＿c－Met＿0012＿7－PEG12c－K二聚物：表3中之肽複合物No.8）的合成

[化學式1]

使用NovaPEG Rink Amide resin（默克，0.53 mmol／g，0.005g），以前述的一般方法從去除Fmoc基開始，合成目標的肽。此時，使用Biotage公司的Siro I作為固相合成機，依照製造廠商的說明書而進行合成。將Fmoc－Lys（Fmoc）－OH導入固相樹脂後，去除兩個Fmoc基，並從Lys上的2個胺基同時延伸，藉此進行合成。各殘基的導入係相對於樹脂1當量，使用Fmoc－AA／HATU／DIPEA（8.4當量／7.8當量／16.8當量）而進行反應。又，Fmoc去除係與20%哌啶的DMF溶液在25℃下反應5分鐘後，去除溶液後，再次加入20%哌啶的DMF溶液使其反應15分鐘。氯乙醯基的導入係藉由下述方式進行：對於由前步驟所得之保持有經Fmoc保護的肽之固相樹脂，以前述方法去除α－胺基的Fmoc基之後，將0.3M氯乙酸的DMF溶液（8.4當量）、0.28M HATU的DMF溶液（7.8當量）、1.05M DIPEA的DMF溶液（16.8當量）加入固相樹脂，並在25℃下重複2次振盪30分鐘。側鏈的去保護及從固相樹脂的切除係利用以下的方法實施。首先，將氯乙醯基導入步驟後所得之樹脂以DMF清洗5次與以二氯甲烷清洗3次後，在減壓下進行乾燥。接著，在裝有固相樹脂之反應容器中加入反應劑混合物－A（TFA／H2O／TIS／DODT的體積比92.5：2.5：2.5：2.5的混合物），在25℃振盪60分鐘。將反應液從玻料（frit）過濾回收。將殘留於反應容器之固相樹脂與切除用混合物再次振盪，從玻料回收溶液成分，並與前述的濾液混合。若將此濾液加入已冷卻至0℃之過剩的二乙醚／己烷（1／1）的混合溶劑，則產生混濁沉澱。將此混合物進行離心分離（8500 rpm，0℃，30秒鐘），使溶液傾析。再次以已冷卻至0℃之少量的二乙醚／己烷清洗所得之固體後，在減壓下使其乾燥。將所得之固體使用於後續的環化反應。肽的環化反應係以肽的最終濃度以固相樹脂的莫耳數為基準成為2.5Mm之方式溶解於DMSO後，加入10當量的三乙胺，在25℃振盪16小時。使用EZ－2 Elite將所得之反應溶液進行減壓濃縮。使用Gilson公司的ASPEC（註冊商標）C18濾筒，將所得之混合物進行固相萃取。使用EZ－2 Elite，將所得之萃取液進行減壓濃縮。以LC－MS進行分析，目標物的質譜會在主要波峰之一觀測到。分析條件：保持時間=1.73分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 1.7 μm 2.1 x 50mm, 100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（% B conc）：花費2.10分鐘5－95%，之後花費0.75分鐘95－95%；流量：0.6mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1725.0（M＋3H） ³ ^＋理論值m／z=5170.91

[實施例3－2] 關於表4所記載之肽複合物，只要無其他合成實施例，則與以下所記載之肽複合物同樣地合成。此外，表4中之ESI－MS（m／z）表示ESI－MS（＋）觀測值，[M＋XH]X＋表示將此情形中之質子加成數表示作為（M＋XH）X＋顯示時的X的值。 GFs＿c－Met－0012複合物（GFs＿c－Met－0012－PEG12二聚物；表4中之肽複合物No.17）的合成

[化學式2]

使用Sieber amide resin（渡邊化學，0.47 mmol／g，0.11g），以前述的一般方法從去除Fmoc基開始，合成目標的肽。此時，使用Biotage公司的Siro I作為固相合成機，依照製造廠商的說明書而進行合成。將Fmoc－Lys（Fmoc）－OH導入固相樹脂後，去除兩個Fmoc基，並從Lys的2個胺基同時延伸，藉此進行合成。各殘基的導入係相對於樹脂1當量，使用Fmoc－AA／HATU／DIPEA（8.4當量／8當量／16當量）進行反應。又，Fmoc去除係與含有0.1M HOBt之5%哌啶的DMF溶液在25℃下反應5分鐘後，去除溶液後，再次與含有0.1M HOBt之5%哌啶的DMF溶液再次反應15分鐘。氯乙醯基的導入係藉由下述方式進行：對於由前步驟所得之保持有經Fmoc保護的肽之固相樹脂，以前述方法去除α－胺基的Fmoc基之後，將0.5M 氯乙酸的DMF溶液（10當量）、0.49M HATU的DMF溶液（9.8當量）、0.5M DIPEA的DMF溶液（10當量）加入固相樹脂，在室溫下振盪30分鐘。側鏈的去保護及從固相樹脂的切除係利用以下的方法實施。首先，將氯乙醯基導入步驟後所得之樹脂以DMF清洗5次與以二氯甲烷清洗3次後，在減壓下進行乾燥。接著，在裝有固相樹脂之反應容器中加入反應劑混合物－A（TFA／H2O／TIS／DODT的體積比92.5：2.5：2.5：2.5的混合物），在25℃振盪60分鐘。將反應液從玻料過濾回收。將殘留於反應容器之固相樹脂與切除用混合物再次振盪，從玻料回收溶液成分，並與前述的濾液混合。若將此濾液加入已冷卻至0℃之過剩的二乙醚／己烷（1／1）的混合溶劑，則產生混濁沉澱。將此混合物進行離心分離（9000 rpm，2 分鐘），使溶液傾析。再次以已冷卻至0℃之少量的二乙醚／己烷清洗所得之固體後，在減壓下進行乾燥。將所得之固體使用於後續的環化反應。肽的環化反應係以肽的最終濃度以固相樹脂的莫耳數為基準成為1Mm之方式溶解於DMSO／乙腈／水（18／1／1）後，加入20當量的三乙胺，在25℃振盪15小時。使用EZ－2 Elite將所得之反應溶液進行減壓濃縮。所得之混合物係使用以下條件進行精製（管柱：Waters XSelect（註冊商標）C18 19 x 150mm；移動相：A=0.1% TFA in H ₂O，B=0.1% TFA in MeCN；溫度：40 ℃；梯度（%B conc）：花費3分鐘13－38%，之後花費8分鐘38－43%，之後花費1分鐘43－60%；流量：17mL／min。目標物的純度係從以下的分析條件的LC／MS（UV波長225nm）色譜的面積比而算出，為59.97%。

分析條件：保持時間=5.75分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 2.6 μm 2.1 x 150mm，100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（% B conc）：花費7.15分鐘20－60%，之後花費0.30分鐘60－95%，之後花費1.55分鐘95－95%；流量：0.5mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1300.6（M＋4H） ⁴ ^＋理論值m／z=5196.56

[實施例4] 由磷酸－c－Met AlphaLISA分析法所進行之本發明的肽複合物的c－Met促效活性測量為了評價本發明的肽複合物的c－Met的活化能力（c－Met促效活性）而驗證c－Met的磷酸化。以包含10% FBS（Gibco公司）之DMEM，high glucose，GlutaMAX（註冊商標）Supplement，pyruvate（賽默飛世爾科技公司）培養為人類細胞之A431細胞。使用Accutase（Innovative cell technologies公司）將細胞剝離後，以每1孔成為10000細胞之方式，播種於96孔板，並培養一晩。次日，為了使其飢餓（starvation）而更換成包含0.1% BSA（西格瑪奧瑞奇公司）之DMEM，high glucose，GlutaMAX（註冊商標）Supplement，pyruvate（賽默飛世爾科技公司），再培養一晩。之後，加入實施例3所合成之肽複合物或作為對照之Recombinant Human HGF Protein（R&D systems公司），刺激15分鐘後，以AlphaLISA（註冊商標）SureFire（註冊商標）Ultra ^TMPhospho-c-Met（Tyr1234／1235）套組（珀金埃爾默公司）所附屬之裂解緩衝液（Lysis Buffer）溶解細胞。分析係按照套組的規程而實施，信號的檢測係使用SpectraMax（註冊商標）Paradigm（註冊商標）多功能微量盤式分析儀（multimode microplate reader）（Molecular Devices, LLC.）。以GraphPad Prism（MDF Co., Ltd.）分析所得之信號，將由HGF所誘導之信號的最大值設為100%，並將表現50%以上的活化者記載為2，將表現50%以下的活化者記載為1。其結果顯示於表3。此外，雖同樣地使用單體的肽進行活性測量，但未表現c－Met促效活性。又，同樣地進行，以GraphPad Prism算出C50的值以作為表現由HGF所誘導之信號的50%活性的肽的濃度。其結果顯示於表4。此外，本分析法中，為對照之HGF的EC50值為0.66nM。再者，關於肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之複合物No.49），將c－Met促效活性的圖表顯示於圖1。該肽複合物的EC50為0.72 nM，表現與HGF幾乎相同的c－Met促效活性。由此等結果，顯示本發明的肽複合物確實具有c－Met促效活性。

[實施例5] HUVEC細胞增殖評價為了評價本發明的肽複合物的生物活性而驗證細胞增殖誘導活性。使用HuMedia－EG2（倉敷紡織公司）培養正常人類臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）。使用Accutase（Innovative cell technologies公司）將細胞剝離後，再懸浮於包含5% FBS（MBL公司）之Medium without serum or growth factors（Cell systems公司），以成為每1孔10000細胞之方式，播種於96孔板，並培養一晩。次日，加入由實施例2所合成之肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之肽複合物No.49）或作為對照之Recombinant Human HGF Protein（R&D systems公司），再培養2天。之後，去除培養基，使用CellTiter－Glo（註冊商標）Luminescent Cell Viability Assay試劑（Promega公司），按照附屬之規程將細胞數進行定量。檢測係使用SpectraMax（註冊商標）Paradigm（註冊商標）功能微量盤式分析儀（Molecular Devices公司）。以GraphPad Prism分析所得之信號值並算出EC50。所得之活性的圖表顯示於圖2。結果，HGF的EC50為0.37 nM，該肽複合物的EC50為0.55 nM，本發明的肽複合物表現與HGF幾乎相同的c－Met促效活性。由此結果，顯示本發明的肽複合物具有誘導人類細胞的增殖之活性。

[實施例6] 合成以下的肽複合物。 [實施例6－1] 具有表1中之序列識別號34所記載之胺基酸序列之環狀肽的合成

[化學式3]

使用Sieber amide resin（渡邊化學，0.65 mmol／g，0.31 g），以前述的一般方法從去除Fmoc基開始，合成目標的肽。此時，使用Biotage公司的Siro I作為固相合成機，依照製造廠商的說明書而進行合成。各殘基的導入係相對於樹脂1當量，使用Fmoc－AA／HATU／DIPEA（3.2當量／3當量／6.3當量）進行反應。又，Fmoc去除係與20%哌啶的DMF溶液在25℃下反應5分鐘後，去除溶液後，使其再次與20%哌啶的DMF溶液反應15分鐘。氯乙醯基的導入係藉由下述方式進行：對於由前步驟所得之保持有經Fmoc保護的肽之固相樹脂，以前述之方法去除α－胺基的Fmoc基之後，將0.5M 氯乙酸的DMF溶液（5當量）、0.49M HATU的DMF溶液（4.9當量）、0.5M DIPEA的DMF溶液（5當量）加入固相樹脂，在室溫下振盪30分鐘。側鏈的去保護及從固相樹脂的切除係利用以下的方法實施。首先，將氯乙醯基導入步驟後所得之樹脂以DMF清洗5次與以二氯甲烷清洗3次後，在減壓下進行乾燥。接著，在裝有固相樹脂的反應容器中加入反應劑混合物－A（TFA／H2O／TIS／DODT的體積比92.5：2.5：2.5：2.5的混合物），在25℃振盪60分鐘。將反應液從玻料過濾回收。將殘留於反應容器之固相樹脂與切除用混合物再次振盪，從玻料回收溶液成分，並與前述的濾液混合。若將此濾液加入已冷卻至0℃之過剩的二乙醚／己烷（1／1）混合溶劑，則產生混濁沉澱，將此混合物進行離心分離（9000rpm，2分鐘），使溶液傾析。再次以已冷卻至0℃之少量的二乙醚／己烷清洗所得之固體後，在減壓下進行乾燥。將所得之固體用於後續的環化反應。肽的環化反應係以肽的最終濃度以固相樹脂的莫耳數為基準成為2.5mM之方式溶解於DMSO／乙腈／水（18／1／1）後，加入10當量的三乙胺，在25℃振盪4小時。使用EZ－2 Elite將所得之反應溶液進行減壓濃縮。所得之粗生成物係使用以下的條件進行精製（管柱：Waters Xbridge（註冊商標）C18 5μm 50 x 150mm；移動相：A=0.1% TFA in H ₂O，B=0.1% TFA in MeCN；溫度：40 ℃；梯度（%B conc）：花費3分鐘5－30%，之後花費8分鐘30－35%，之後花費1分鐘35－60%；流量：120mL／min。目標物的純度係從以下的分析條件的LC／MS（UV波長225nm）色譜的面積比而算出，為96.90%。分析條件：保持時間=3.84分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 2.6μm 2.1 x 150mm，100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（%B conc）：花費7.15分鐘20－60%，之後花費0.30分鐘60－95%，之後花費1.55分鐘95－95%；流量：0.5mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1027.7（M＋2H） ² ^＋將所得之環狀肽使用於合成肽複合物。

[實施例6－2] GFs＿c－Met－00014336（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之肽複合物No.49）的合成

[化學式4]

將GFs＿c－Met－00014234（8.0mg，3.51μmol）溶解於DMF（0.2mL），加入DIPEA（2.3μL，13μmol）的DMF溶液（23μL）及雙（2,5－二氧代吡咯烷－1－基）（3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33－十一氧雜三十五烷－1,35－二基）雙碳酸酯（1.38mg，1.67μmol）的DMF溶液（14μL），並在25℃攪拌16小時。所得之混合物係使用以下的條件進行精製（管柱：Waters XSelect（註冊商標）C18 19 x 150mm；移動相：A=0.1% TFA in H ₂O，B=0.1% TFA in MeCN；溫度：40 ℃；梯度（%B conc）：花費3分鐘13－38%，之後花費8分鐘38－43%，之後花費1分鐘43－60%；流量：17mL／min。目標物的純度係從以下的分析條件的LC／MS（UV波長225 nm）色譜的面積比而算出，為96.42%。分析條件：保持時間=5.07分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 2.6 μm 2.1 x 150mm，100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（%B conc）：花費7.15分鐘20－60%，之後花費0.30分鐘60－95%，之後花費1.55分鐘95－95%；流量：0.5mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1177.2（M＋4H） ⁴ ^＋理論值m／z=4703.25

[實施例6－3] GFs＿c－Met－00014305（GFs＿c－Met－00014305－PEG17二聚物；表4中之肽複合物No.50）的合成

[化學式5]

將實施例6－1所合成之環狀肽（GFs＿c－Met－00014234）（8.0mg，3.51μmol）溶解於DMF（0.25mL），加入三乙胺（2.0μL，14mmol）的DMF溶液（20μL）及雙（2,5－二氧代吡咯烷－1－基）4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52－十七氧雜五十五烷二酸甲酯（1.75mg，1.65μmol）的DMF溶液（18μL），並在25℃攪拌16小時。所得之混合物係使用以下的條件進行精製（管柱：Waters XSelect（註冊商標）C18 5 μm 19 x 150mm；移動相：A=0.1% TFA in H ₂O，B=0.1% TFA in MeCN；溫度：40 ℃；梯度（%B conc）：花費3分鐘12－37%，之後花費8分鐘37－42%，之後花費1分鐘42－60%；流量：17mL／min。目標物的純度係從以下的分析條件的LC／MS（UV波長225 nm）色譜的面積比而算出，為94.19%。分析條件：保持時間=5.92分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 2.6 μm 2.1 x 150mm，100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（%B conc）：花費7.15分鐘20－60%，之後花費0.30分鐘60－95%，之後花費1.55分鐘95－95%；流量：0.5mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1235.3（M＋4H） ⁴ ^＋理論值m／z=4935.41

[實施例6－4] GFs＿c－Met－00014318（GFs＿c－Met－00014318－PEG9二聚物；表4中之肽複合物No.51）的合成

[化學式6]

將GFs＿c－Met－00014234（8.0mg，3.51μmol）溶解於DMF（0.25mL），加入三乙胺（2.0μL，14μmol）的DMF溶液（20μL）及雙（2,5－二氧代吡咯烷－1－基）4,7,10,13,16,19,22,25,28－九氧雜三十一烷二酸甲酯（1.17mg，1.65μmol）的DMF溶液（12μL），並在25℃攪拌16小時。所得之混合物係使用以下的條件進行精製（管柱：Waters XSelect（註冊商標）C18 19 x 150mm；移動相：A=0.1% TFA H ₂O，B=0.1% TFA in MeCN；溫度：40 ℃；梯度（%B conc）：花費3分鐘11－36%，之後花費8分鐘36－41%，之後花費1分鐘41－60%；流量：17mL／min。目標物的純度係從以下的分析條件的LC／MS（UV波長225 nm）色譜的面積比而算出，為94.56%。分析條件：保持時間=5.03分鐘；管柱：Kinetex（註冊商標）EVO C18 2.6 μm 2.1 x 150mm，100Å；移動相：A=0.025% TFA in H ₂O，B=0.025% TFA in MeCN；溫度：60 ℃；梯度（%B conc）：花費7.15分鐘20－60%，之後花費0.30分鐘60－95%，之後花費1.55分鐘95－95%；流量：0.5mL／min ESI－MS（＋）觀測值m／z=1147.1（M＋4H） ⁴ ^＋理論值m／z=4582.2

[實施例7] Tube formation評價以增殖培養基（Renal Epithelial Cell Basal Medium（REBM）＋0.5% FBS＋2.4 mM L－Alanyl－L－Glutamine＋10 nM Triiodothyronine＋10 ng／mL rh EGF＋100 ng／mL Hydrocortisone Hemisuccinate＋5 μg／mL rh Insulin＋1 μm Epinephrine＋5 ug／mL Transferrin）（ATCC）培養人類腎臟近曲小管上皮細胞（RPTEC）。使用Trypsin－EDTA將細胞剝離，再懸浮於分析培養基（REBM＋0.5% FBS＋2.4 mM L－Alanyl－L－Glutamine＋10 nM Triiodothyronine＋100 ng／mL Hydrocortisone Hemisuccinate＋1 μm Epinephrine＋5 μg／mL Transferrin＋1.8 mM CaCl2）。將RPTEC再懸浮於置於冰上之依照說明書將Cellmatrix（註冊商標）Type I－A（新田明膠公司）、濃縮培養液（新田明膠公司）及再構成用緩衝液（新田明膠公司）進行混合而成者，以成為每1孔200000細胞之方式，在48孔板中逐一注入300 uL。藉由在CO ₂培養箱（incubator）內（37℃，5% CO ₂）靜置60分鐘而使上述懸浮液凝膠化。將2nM的HGF、1.6nM的EGF或使實施例2所合成之肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中的肽複合物No.49）成為0.08、0.4、2、10nM之方式加入分析培養基中，並在添加有如同前述的凝膠化後之懸浮液的48孔板的各孔中逐一添加400 μL。在CO ₂培養箱中（37℃，5% CO ₂）靜置，每3天更換培養基，並在開始培養3天後及8天後，使用相位差顯微鏡觀察有無管腔形成並進行評價。其結果顯示於圖3及圖4。此外，圖3為3天後的結果，a為MOCK（無添加）、b為添加有1.6nM EGF、c為添加有2nM HGF、d為添加有2nM的肽複合物（表4中之肽複合物No.49）之孔的觀察結果。又，圖4為8天後的結果，a為MOCK（無添加）、b為添加有2nM HGF、c為以0.08nM、d為以0.4nM、e為以2nM、f為以10nM的濃度添加有實施例2所合成之肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之肽複合物No.49）之孔的觀察結果。由此結果，顯示本發明的肽複合物與HGF相同地促進管腔形成。又，由圖4f，顯示不僅促進管腔形成，亦促進分支形成。由於管腔形成需要細胞的增殖、遷移及膠原蛋白分解等多功能作用，故顯示本發明的肽複合物具有與HGF同樣的生理活性。

[實施例8] 人類Phospho－RTK陣列分析法以包含10% FBS（Gibco公司）之DMEM，high glucose，GlutaMAX（註冊商標）Supplement，pyruvate（賽默飛世爾科技公司）培養A431細胞。使用Accutase（註冊商標）（Innovative cell technologies公司）將細胞剝離後，以成為每1孔1000000細胞之方式，播種於6孔板，並培養一晩。次日，為了使其飢餓而更換成包含分析培養基（0.1% BSA（Sigma公司）之DMEM，high glucose，GlutaMAX（註冊商標）Supplement，pyruvate（賽默飛世爾科技公司）），再培養一晩。之後加入7.8nM的Recombinant Human HGF Protein（R&D systems公司）或2nM的實施例2所合成之肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號36）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG9二聚物；表4中之肽複合物No.51），刺激10分鐘後，以Proteome Profiler Human Phospho－RTK Array Kit（R&D systems）所附屬之裂解緩衝液溶解細胞。之後按照該套組的規程而實施，並使用C－DiGit（註冊商標）（Scrum公司）檢測WesternSure（註冊商標）PREMIUM化學發光基質套組（LI－COR）化學發光信號。將其結果顯示於圖5。此外，圖5（2）的a為無添加的結果，b為添加HGF的結果，以及c為添加肽複合物的結果，在添加肽複合物時及添加HGF時，僅HGF R被特異性磷酸化。因此，顯示本發明的肽複合物具有與HGF同樣的特異性磷酸化模式。

[產業利用性] 本發明能利用於醫藥產業、生物技術產業等。

無 [序列表] 21－068P_ST25.txt

圖1係顯示使用本發明的肽複合物及人類HGF之由磷酸－c－Met AlphaLISA分析法所進行之c－Met促效活性測量的結果。圖中，黑色方塊表示c－Met促效活性肽複合物（肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之複合物No.49），X表示人類HGF。橫軸表示肽複合物或人類HGF的濃度（nM），縱軸表示將由人類HGF所誘導之活化信號的最大值設為100時的活化信號的相對值。圖2係顯示使用本發明的肽複合物及人類HGF之由HUVEC細胞增殖評價所進行之c－Met促效活性測量的結果。圖中，黑色方塊表示c－Met促效活性肽複合物（肽（序列識別號34）與連接子（序列識別號37）的複合物（GFs＿c－Met－00014336－PEG13二聚物；表4中之複合物No.49），X表示人類HGF。橫軸表示肽複合物或人類HGF的濃度（nM），縱軸表示將由人類HGF所誘導之活化信號的最大值設為100時的活化信號的相對值。圖3係顯示使用本發明的肽複合物、人類HGF及人類表皮生長因子（EGF）之人類腎臟近曲小管上皮細胞的管腔形成評價試驗中之3天後的結果。圖4係顯示使用本發明之肽複合物、人類HGF及人類表皮生長因子（EGF）的人類腎臟近曲小管上皮細胞的管腔形成評價試驗中之8天後的結果。圖中，黑色箭頭表示具有分支之管腔形成。圖5係顯示使用本發明的肽複合物及人類HGF之人類磷酸－受體酪胺酸激酶陣列（Human Phospho-RTK Array）分析法評價的結果。圖5（1）表示陣列圖，圖5（2）表示評價結果。圖中，黑色方框表示已固定有對於HGFR之抗體之孔（well）。

                         序列表
          <![CDATA[<110>  日商肽夢想股份有限公司(PeptiDream INC.)]]>
          <![CDATA[<120>  c－Met蛋白質結合肽複合物]]>
          <![CDATA[<130>  21-068P]]>
          <![CDATA[<160>  40    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可為任何天然存在的胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可為任何天然存在的胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可為任何天然存在的胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可為任何天然存在的胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (14)..(14)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 可為任何天然存在的胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Xaa Xaa Xaa Val Ser Xaa Asp Xaa Asp Xaa Pro Arg Trp Xaa Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為Ahp]]>
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          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Phe Gln Ala Val Ser Phe Asp Pro Asp Xaa Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
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          <![CDATA[<400>  28]]>
          Phe Thr Arg Val Ser Phe Asp Ser Asp Xaa Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
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          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
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          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Leu Asp Ser Asp Xaa Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Phe Asp Ser Asp Arg Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為Ahp]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Phe Asp Ser Asp Xaa Pro Arg Trp Ala Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為Ahp]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Phe Asp Pro Asp Xaa Pro Arg Trp Ala Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
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          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Phe Asp Pro Asp Xaa Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
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          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為Ahp]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (15)..(15)]]>
          <![CDATA[<223>  甲基化]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Phe Thr Ala Val Ser Phe Asp Glu Asp Xaa Pro Arg Trp Ser Cys 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  35]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG12c]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG12c]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Xaa Lys Xaa 
          1           
          <![CDATA[<210>  36]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為cPEG9c]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Gly Lys Xaa Lys Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
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          <![CDATA[<400>  37]]>
          Gly Lys Xaa Lys Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為cPEG17c]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Gly Lys Xaa Lys Gly 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG4c]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG4c]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Xaa Lys Xaa 
          1           
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG8c]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為PEG8c]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Xaa Lys Xaa 
          1           
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa為cPEG1c]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Gly Lys Xaa Lys Gly 
          1

Claims

一種肽複合物，其包含與c－Met蛋白質結合之肽A，其中，該肽A係由X ¹－X ²－X ³－V－S－X ⁴－D－X ⁵－D－X ⁶－P－R－W－X ⁷－MeC（序列識別號1）所記載之胺基酸序列所構成之肽，或由序列識別號1所記載之胺基酸序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之胺基酸序列所構成， X ¹為可經N－烷基化之胺基酸， X ²為任意胺基酸， X ³為任意胺基酸， X ⁴為可經N－烷基化之疏水性胺基酸， X ⁵為任意胺基酸， X ⁶為在側鏈具有可有取代的烷基鏈之胺基酸或S， X ⁷為任意胺基酸。
如請求項1之肽複合物，其中， X ¹為可經N－甲基化之A或可經N－甲基化之F， X ²為親水性胺基酸、脂肪族／分支鏈胺基酸或芳香族胺基酸， X ³為親水性胺基酸、脂肪族胺基酸或芳香族胺基酸， X ⁴為可經N－甲基化之疏水性胺基酸， X ⁵為親水性胺基酸、脂肪族／分支鏈胺基酸或P， X ⁷為親水性胺基酸或脂肪族胺基酸。
如請求項1之肽複合物，其中， X ¹為可經N－甲基化之A或可經N－甲基化之F， X ²為V、T、E、Q或W， X ³為A、R、Y或D， X ⁴為可經甲基化之F或可經甲基化之L， X ⁵為D、E、S、P或V， X ⁶為（S）－2－胺基庚酸（Ahp）、R、L－正白胺酸（Nle）、（S）－2,7－二胺基庚酸（Hty）或S， X ⁷為S、A、L－α－胺基丁酸（Abu）、D、Q或V。
如請求項1之肽複合物，其中，該肽複合物係由第一肽、第二肽以及連接第一肽及第二肽之連接子所構成，第一肽及第二肽中的至少一者為該肽A。
如請求項4之肽複合物，其中，第一肽及第二肽可為相同亦可為不同，且為該肽A。
如請求項5之肽複合物，其中，該肽A係由MeF－T－A－V－S－MeF－D－E－D－Ahp－P－R－W－S－MeC（序列識別號34）所記載之胺基酸序列所構成之肽，或由序列識別號34所記載之胺基酸序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之胺基酸序列所構成，且為與c－Met蛋白質結合之肽。
如請求項6之肽複合物，其中，該肽A為環狀肽。
如請求項7之肽複合物，其中，第一肽及第二肽為相同的肽A，第一肽及第二肽的C端已與該連接子結合。
如請求項8之肽複合物，其中，該肽A係由序列識別號2～序列識別號34中任一項所記載之胺基酸序列所構成之肽。
如請求項9之肽複合物，其中，該連接子為PEG連接子。
如請求項9之肽複合物，其中，該連接子具有序列識別號35～41中任一項所記載之序列，或係由序列識別號35～41中任一項所記載之序列中1～3個胺基酸經取代、缺失、加成或插入之序列所構成之連接子。
一種c－Met蛋白質促效劑，其包含如請求項11之肽複合物。
一種醫藥組合物，其包含如請求項5至12中任一項之肽複合物與藥學上可容許的載體。
如請求項13之醫藥組合物，其用於治療或預防選自由缺血性心臟病、急性肝炎、猛爆性肝炎、肝硬化、膽道閉鎖症、脂肪肝、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、糖尿病性腎病、急性肺炎、肺纖維化、血管病變、心肌梗塞、擴張性心肌病變、皮膚潰瘍、腦梗塞、閉塞性動脈硬化、胃潰瘍及肌肉萎縮性脊髓側索硬化症所組成之群組的疾病。
一種培養用培養基添加物，其包含如請求項1至11中任一項之肽複合物。
如請求項15之培養用培養基添加物，其用於培養來自人體的細胞或組織。