TW202140788A

TW202140788A - 用於調節ｓｃｎ１ａ表現之化合物及方法

Info

Publication number: TW202140788A
Application number: TW110107122A
Authority: TW
Inventors: 奈賈佩門賈法; 蘇珊 M 弗瑞爾; 法蘭克里格
Original assignee: 美商Ionis製藥公司
Priority date: 2020-02-28
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2021-11-01
Also published as: EP4110919A4; JP2023515974A; WO2021174036A1; UY39104A; EP4110919A1; US20230043648A1

Abstract

提供了用於調節細胞或個體之SCN1A RNA及/或蛋白的化合物、方法及醫藥組成物。此類化合物、方法及醫藥組成物可用於改善發展性或癲癇性腦病諸如卓飛症候群之至少一個症狀。此類症狀包括癲癇發作、癲癇突發非預期死亡、癲癇重積狀態、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。

Description

用於調節SCN1A表現之化合物及方法

提供了用於調節細胞或個體之SCN1A RNA及/或蛋白的化合物、方法及醫藥組成物。此類化合物、方法及醫藥組成物可用於改善發展性或癲癇性腦病諸如像卓飛症候群(Dravet Syndrome)之至少一個症狀。此類症狀包括癲癇發作、癲癇突發非預期死亡(sudden unexpected death in epilepsy)、癲癇重積狀態(status epilepticus)、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。

人類基因SCN1A 編碼人類SCN1A蛋白，其為電壓閘控鈉離子通道NaV1.1之α-1次單元。SCN1A 之突變導致發展性與癲癇性腦病變(DEE)，包括卓飛症候群(先前稱為重度嬰兒肌抽躍性癲癇(Severe Myoclonic Epilepsy of Infancy；SMEI))，其為兒童時期最嚴重的癲癇形式之一；其他癲癇性病症，包括例如全面性癲癇伴熱性癲癇發作附加症(Genetic Epilepsy with Febrile Seizures Plus；GEFS+)及其他熱性癲癇發作、特發性/一般性全身性癲癇(Idiopathic/Generic Generalized Epilepsies；IGE/GGE)、顳葉癲癇、肌抽躍失姿態癲癇(Myoclonic Astatic Epilepsy；MAE)、雷葛氏症候群(Lennox-Gastaut Syndrome)及嬰兒移行性局部癲癇(Migrating Partial Epilepsy of Infancy；MMPSI)；以及伴或不伴癲癇之家族性偏癱偏頭痛(Harkin, L.A.等人, 2007, Brain130 , 843-852；Escayg, A.等人, 2010, Epilepsia51 , 1650-1658；Miller I.O等人, 2007年11月29日[2019年4月18日更新], Adam MP, Ardinger HH, Pagon RA,等人編 GeneReviews® [網際網路]. Seattle (WA): University of Washington, Seattle；1993-2020.可獲自：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1318/)。

DEE與SCN1A單倍劑量不足有關(Parihar, R.等人, 2013, J. Human Genetics,58 , 573-580)。與DEE (包括卓飛症候群)有關之症狀包括癲癇發作延長(常常持續長於10分鐘)、癲癇發作頻繁(例如，痙攣性、肌抽躍、失神、局部型、遲鈍狀態及陣攣型癲癇發作)、癲癇突發非預期死亡、癲癇重積狀態、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙(例如，運動失調、震顫、發音不良、錐體及錐體外徵象)、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。卓飛症候群患者經歷額外的神經發展遲緩，導致重度神經失能(Guzzetta, F., 2011, Epilepsia52: S2, 35-38；Anwar等人, 2019, Cureus11 , e5006)。

SCN1A之替代剪接導致多種SCN1A轉錄物變異體(Parihar, R.等人, 2013)。某些轉錄物變異體包括無意義密碼子媒介式分解誘導外顯子(nonsense-mediated decay-inducing exon；NIE) (Steward, C.A.等人, 2019, npj Genom. Med. 4, 31；Carvill等人, 2018, American J. Human Genetics,103 , 1022-1029)。一種此類NIE (NIE-1)(其長度為64個核鹼基且位於SCN1A內含子20中)導致SCN1A轉錄物之降解(Carvill等人, 2018)。

目前仍保留對治療卓飛症候群、GEFS+及其他DEE之療法的需要。因此，本文之目的為提供用於治療此類疾病的化合物、方法及醫藥組成物。

本文提供用於調節細胞或個體之SCN1A RNA及/或蛋白之剪接的化合物、方法及醫藥組成物。在某些實施例中，SCN1A RNA及/或SCN1A蛋白之量增加。在某些實施例中，全長SCN1A RNA及/或全長SCN1A蛋白之量增加。在某些實施例中，包括NIE之SCN1A RNA之量減少。在某些實施例中，不包括NIE之SCN1A RNA之量增加。在某些實施例中，NIE為NIE-1。在某些實施例中，個體患有發展性或癲癇性腦病變(DEE)。在某些實施例中，DEE由SCN1A單倍劑量不足引起。在某些實施例中，藉由用能夠自SCN1A RNA排除NIE的化合物增加個體或其細胞之全長SCN1A RNA及/或全長SCN1A蛋白之量來治療DEE。在某些實施例中，自SCN1A RNA排除NIE增加了全長SCN1A RNA及/或全長SCN1A蛋白，其中移除NIE防止SCN1A轉錄物經由NMD途徑降解。在某些實施例中，個體患有卓飛症候群。在某些實施例中，可用於調節SCN1A RNA之剪接的化合物為寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚化合物包含經修飾之寡核苷酸或由其組成。

亦提供可用於改善DEE之至少一個症狀的方法。在某些實施例中，DEE為卓飛症候群。在某些實施例中，症狀包括癲癇發作延長(常常持續長於10分鐘)、癲癇發作頻繁(例如，痙攣性、肌抽躍、失神、局部型、遲鈍狀態及陣攣型癲癇發作)、癲癇突發非預期死亡、癲癇重積狀態、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙(例如，運動失調、震顫、發音不良、錐體及錐體外徵象)、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。在某些實施例中，本文提供用於治療卓飛症候群的經修飾之寡核苷酸。

序列表

本申請案正連同電子格式之序列表一起申請。序列表呈2021年2月24日創建之標題為BIOL0381WOSEQ_ST25.txt的檔案提供，大小為624 KB。電子格式之序列表中之資訊以引用之方式整體併入本文中。

應理解，前述一般性描述及下文詳細描述僅具有示範性及說明性且不具有限制性。在本文中，除非另外明確陳述，否則單數之使用包括複數。如本文所用，除非另外陳述，否則「或」之使用意謂「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及其他形式(諸如「包括(includes)」及「包括(included)」)之使用不具有限制性。此外，除非另外明確陳述，否則諸如「元件」或「組件」之術語涵蓋包含一個單元之元件及組件與包含多於一個次單元之元件及組件兩者。

本文所用之章節標題僅出於組織目的且不應解釋為限制所述標的物。本申請案中引用之所有文獻或文獻之部分(包括但不限於專利、專利申請案、文章、書籍及論文以及GenBank及NCBI參考序列記錄)係針對本文所討論之文獻部分明確地以引用方式併入本文以及以全文引用方式併入本文。定義

除非提供特定定義，否則結合本文所述之分析化學、合成有機化學及醫療與醫藥化學使用之命名法以及該等領域之程序及技術為此項技術中所熟知及常用者。允許時，本揭露通篇提及之所有專利、申請案、公開申請案、及其他公開案以及其他資料均以引用之方式整體併入本文。

除非另外指示，否則以下術語具有以下含義：

如本文所用，「2’-去氧核糖核苷」意謂包含2’-H(H)去氧核糖基糖部分的核苷。在某些實施例中，2’-去氧核糖核苷為2’-β-D去氧核糖核苷且包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分，其具有如在天然存在之去氧核糖核酸(DNA)中所見之β-D組態。在某些實施例中，2’-去氧核糖核苷可包含經修飾之核鹼基或可包含RNA核鹼基(尿嘧啶)。

如本文所用，「2’-MOE」意謂2’-OCH₂ CH₂ OCH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-MOE糖部分」為2’-OCH₂ CH₂ OCH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-MOE糖部分為β-D組態。「MOE」意謂O-甲氧基乙基。

如本文所用，「2’-MOE核苷」意謂包含2’-MOE糖部分之核苷。

如本文所用，「2’-NMA」意謂-O-CH₂ -C(=O)-NH-CH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-NMA糖部分」為2’-O-CH₂ -C(=O)-NH-CH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-NMA糖部分為β-D組態。「NMA」意謂O-N-甲基乙醯胺。

如本文所用，「2’-NMA核苷」意謂包含2’-NMA糖部分之核苷。

如本文所用，「2’-OMe」意謂2’-OCH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-OMe糖部分」為2’-OCH₃ 基團代替核糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另外指示，否則2’-OMe糖部分為β-D組態。「OMe」意謂O-甲基。

如本文所用，「2’-OMe核苷」意謂包含2’-OMe糖部分之核苷。

如本文所用，「2’-取代之核苷」意謂包含2’-取代之糖部分之核苷。如本文所用，關於糖部分之「2’-取代之」意謂糖部分包含至少一個除H或OH之外的2’-取代基。

如本文所用，「5-甲基胞嘧啶」意謂用連接至5位的甲基修飾之胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為經修飾之核鹼基。

如本文所用，「投與」意謂向個體提供藥劑。

如本文所用，關於治療之「改善」意謂至少一個症狀相對於不存在治療之情況下相同症狀的改善。在某些實施例中，改善為症狀之嚴重性或頻率減小、或症狀之發作延遲、或症狀之嚴重性或頻率之進展減緩。在某些實施例中，症狀為癲癇發作延長(常常持續長於10分鐘)、癲癇發作頻繁(例如，痙攣性、肌抽躍、失神、局部型、遲鈍狀態及陣攣型癲癇發作)、癲癇突發非預期死亡、癲癇重積狀態、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙(例如，運動失調、震顫、發音不良、錐體及錐體外徵象)、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。

如本文所用，「反義活性」意謂可歸因於反義化合物與其靶核酸雜交的任何可偵測及/或可量測變化。

如本文所用，「反義化合物」意謂能夠達成至少一種反義活性的寡聚化合物或寡聚雙螺旋。

如本文所用，「雙環核苷」或「BNA」意謂包含雙環糖部分之核苷。

如本文所用，「雙環糖」或「雙環糖部分」意謂包含兩個環的經修飾之糖部分，其中第二環係經由橋連接第一環中之兩個原子而形成，從而形成雙環結構。在某些實施例中，雙環糖部分之第一環為呋喃糖基部分。在某些實施例中，呋喃糖基部分為核糖基部分。在某些實施例中，雙環糖部分不包含呋喃糖基部分。

如本文所用，「腦脊髓液」或「CSF」意謂填充腦及脊髓周圍空間的流體。「人工腦脊髓液」或「aCSF」意謂具有腦脊髓液之某些特性的經製備或製造之流體。

如本文所用，「cEt」意謂4’至2’橋代替核糖基糖部分之2’-OH基團，其中橋具有式4’-CH(CH₃ )-O-2’，且其中橋之甲基為S 組態。「cEt糖部分」意謂4’至2’橋代替核糖基糖部分之2’OH基團的雙環糖部分，其中橋具有式4’-CH(CH₃ )-O-2’，且其中橋之甲基為S 組態。「cEt」意謂限制性乙基。

如本文所用，「cEt核苷」意謂包含cEt糖部分之核苷。

如本文所用，「掌性富集群體」意謂複數個具有相同分子式之分子，其中群體內在特定掌性中心處含有特定立體化學組態的分子之數目或百分比大於當該特定掌性中心為無規立構時預期群體內在相同特定掌性中心處含有相同特定立體化學組態的分子之數目或百分比。在各分子內具有多個掌性中心的掌性富集分子群體可含有一或多個無規立構掌性中心。在某些實施例中，分子為經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，分子為包含經修飾之寡核苷酸之化合物。

如本文所用，關於寡核苷酸之「互補」意謂當將寡核苷酸之核鹼基序列與另一核酸沿相反方向比對時，寡核苷酸核鹼基之至少70%或其一或多個部分與另一核酸之核鹼基或其一或多個部分能夠彼此氫鍵結。互補核鹼基意謂能夠彼此形成氫鍵之核鹼基。互補核鹼基對包括腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)及5-甲基胞嘧啶(^m C)與鳥嘌呤(G)。互補寡核苷酸及/或靶核酸不必在各核苷處具有核鹼基互補性。而是，可以容忍一些錯配。如本文所用，關於寡核苷酸或其一部分的「完全互補」或「100%互補」意謂寡核苷酸或其部分與另一寡核苷酸或靶核酸在兩種寡核苷酸之較短者之各核鹼基處、或若寡核苷酸長度相同則在各核苷處互補。

如本文所用，在寡核苷酸之情境下，「連續」係指核苷、核鹼基、糖部分或核苷間鍵彼此緊鄰。例如，「連續核鹼基」意謂在序列中彼此緊鄰的核鹼基。

如本文所用，「雜交」意謂互補寡核苷酸及/或核酸之配對或退火。儘管不限於特定機制，但是最常見的雜交機制涉及互補核鹼基之間的氫鍵結，其可為瓦生-克立克(Watson-Crick)氫鍵結、胡思町(Hoogsteen)氫鍵結或反向胡思町氫鍵結。

如本文所用，「核苷間鍵聯」意謂寡核苷酸中連續核鹼基之間的共價鍵聯。如本文所用，「經修飾之核苷間鍵聯」意謂除磷酸二酯核苷間鍵聯之外的任何核苷間鍵聯。「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」為其中磷酸二酯核苷間鍵聯之非橋聯氧原子經硫原子置換的經修飾之核苷間鍵聯。

如本文所用，「錯配」或「非互補」意謂當將第一寡核苷酸與第二寡核苷酸比對時，第一寡核苷酸之核鹼基不與第二寡核苷酸或靶核酸之對應核鹼基互補。

如本文所用，「模體」意謂寡核苷酸中未經修飾及/或經修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯的模式。

如本文所用，「無意義密碼子媒介式分解誘導外顯子(NIE)」為當包涵在mRNA轉錄物中時可活化無意義密碼子媒介式分解(NMD)途徑的外顯子或偽外顯子。「NIE-1」為位於外顯子20中的64個核鹼基長的NIE (chr2:166863579-166864271, hg19；Carvill等人, 2018)，其引起SCN1A轉錄物之降解。在某些實施例中，人類NIE-1具有核鹼基序列SEQ ID NO: 13。在某些實施例中，小鼠NIE-1具有核鹼基序列SEQ ID NO: 14。

如本文所用，「非雙環經修飾之糖部分」意謂包含不在糖之兩個原子之間形成橋以形成第二環的修飾(諸如取代)的經修飾之糖部分。

如本文所用，「核鹼基」意謂未經修飾之核鹼基或經修飾之核鹼基。如本文所用，「未經修飾之核鹼基」為腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)或鳥嘌呤(G)。如本文所用，「經修飾之核鹼基」為能夠與至少一個未經修飾之核鹼基配對的、除經修飾之A、T、C、U或G之外的原子團。「5-甲基胞嘧啶」為經修飾之核鹼基。通用鹼基為可與五種未經修飾之核鹼基之任一者配對的未經修飾之核鹼基。如本文所用，「核鹼基序列」意謂核酸或寡核苷酸中獨立於任何糖或核苷間鍵聯修飾的連續核鹼基之次序。

如本文所用，「核苷」意謂包含核鹼基及糖部分之化合物。核鹼基及糖部分各自獨立地未經修飾或經修飾。如本文所用，「經修飾之核苷」意謂包含經修飾之核鹼基及/或經修飾之糖部分的核苷。「連接之核苷」為在連續序列中經連接的核苷(即，在連接的核苷之間不存在額外核苷)。

如本文所用，「寡聚化合物」意謂寡核苷酸及視情況一或多個額外特徵，諸如綴合基團或末端基團。寡聚化合物可與互補於第一寡聚化合物的第二寡聚化合物配對或可未配對。「單股寡聚化合物」為未配對寡聚化合物。術語「寡聚雙螺旋」意謂由具有互補核鹼基序列的兩種寡聚化合物形成的雙螺旋。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物可稱為「雙螺旋寡聚化合物」。

如本文所用，「寡核苷酸」意謂經由核苷間鍵聯連接的連接之核苷之股，其中各核苷及核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾。除非另外指示，否則寡核苷酸由8-50個連接之核苷組成。如本文所用，「經修飾之寡核苷酸」意謂至少一個核苷或核苷間鍵聯經修飾的寡核苷酸。如本文所用，「未經修飾之寡核苷酸」意謂不包含任何核苷修飾或核苷間修飾的寡核苷酸。

如本文所用，「醫藥組成物」意謂合適於向個體投與之物質之混合物。例如，醫藥組成物可包含寡聚化合物及無菌水溶液。

如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑」意謂適用於向個體投與之任何物質。某些此類載劑使醫藥組成物能夠調配成例如由個體經口攝取之錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿、漿液、懸液劑及口含錠。在某些實施例中，醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑為無菌水、無菌鹽水、無菌緩衝溶液或無菌人工腦脊髓液。

如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」意謂化合物之生理學上及醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽保留親體化合物之所要生物活性且不對其產生非所要毒理學作用。

如本文所用，除非另外指定，否則「RNA」意謂RNA轉錄物且包括前驅mRNA及成熟mRNA。

如本文所用，在具有相同分子式之分子群體之情境下，「無規立構掌性中心」意謂具有隨機立體化學組態之掌性中心。例如，在包含無規立構掌性中心之分子群體中，具有(S )組態無規立構掌性中心之分子之數目可與具有(R )組態無規立構掌性中心之分子之數目相同但不是必要的。當掌性中心之立體化學組態為未設計成控制立體化學組態的合成方法之結果時，其被視為隨機的。在某些實施例中，無規立構掌性中心為無規立構硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

如本文所用，「個體」意謂人類或非人類動物。

如本文所用，「糖部分」意謂未經修飾之糖部分或經修飾之糖部分。如本文所用，「未經修飾之糖部分」意謂如在RNA中所見之2’-OH(H) β-D核糖基部分(「未經修飾之RNA糖部分」)或如在DNA中所見之2’-H(H) β-D去氧核糖基部分(「未經修飾之DNA糖部分」)。未經修飾之糖部分在1’、3’及4’位中之各者處具有一個氫，在3’位處具有氧且在5’位處具有兩個氫。如本文所用，「經修飾之糖部分」或「經修飾之糖」意謂經修飾之呋喃糖基糖部分或糖替代物。

如本文所用，「糖替代物」意謂具有除呋喃糖基部分之外、可將核鹼基連接至另一基團(諸如寡核苷酸中之核苷間鍵聯、綴合基團或末端基團)的經修飾之糖部分。可將包含糖替代物之經修飾之核苷併入寡核苷酸內之一或多個位置中，且此類寡核苷酸能夠與互補寡聚化合物或靶核酸雜交。

如本文所用，「標準體外檢定」意謂實例1中所述之檢定及其合理的變化。

如本文所用，「標準體內檢定」意謂實例9中所述之檢定及其合理的變化。

如本文所用，「症狀」意謂指示疾病或病症之存在或程度的任何身體特徵或測試結果。在某些實施例中，症狀對於個體或檢查或測試個體之醫療專業人員為顯而易見的。

如本文所用，「靶核酸」意謂反義化合物經設計以影響的核酸。

如本文所用，「靶區域」意謂寡聚化合物經設計以雜交的靶核酸之部分。

如本文所用，「末端基團」意謂共價連接至寡核苷酸之末端的化學基團或原子團。

如本文所用，「治療有效量」意謂向個體提供治療益處的藥劑之量。例如，治療有效量改良疾病之症狀。某些實施例

本揭露提供以下非限制性經編號實施例：

實施例1. 一種包含經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物，該經修飾寡核苷酸由12至30個連接之核苷組成，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與SCN1A核酸之相等長度部分至少85%互補，且其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。

實施例2. 一種包含經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物，該經修飾之寡核苷酸由12至30個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO 41-889中任一者之至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或18個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。

實施例3. 如實施例1或實施例2之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與核鹼基序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2至少90%、95%或100%互補。

實施例4. 如實施例1-3中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或至少18個連續核鹼基之一部分，其中該部分與SEQ ID NO: 13互補。

實施例5. 如實施例1-4中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖部分。

實施例6. 如實施例5之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。

實施例7. 如實施例6之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH₂ -O-及-CH(CH₃ )-O-。

實施例8. 如實施例5-7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環經修飾之糖部分。

實施例9. 如實施例8之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分或2’-F糖部分中任一者。

實施例10. 如實施例5-9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個糖替代物。

實施例11. 如實施例10之寡聚化合物，其中該糖替代物為N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中任一者。

實施例12. 如實施例5之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷包含經修飾之糖部分。

實施例13. 如實施例12之寡聚化合物，其中各經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分。

實施例14. 如實施例12之寡聚化合物，其中各經修飾之糖部分為2’-NMA糖部分。

實施例15. 如實施例1-14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。

實施例16. 如實施例1-14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。

實施例17. 如實施例15或實施例16之寡聚化合物，其中至少一個經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

實施例18. 如實施例15或實施例17之寡聚化合物其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個核磷酸二酯核苷間鍵聯。

實施例19. 如實施例15、17或18中任一項之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

實施例20. 如實施例16之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

實施例21. 如實施例1-20中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。

實施例22. 如實施例21之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。

實施例23. 如實施例1-22中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由12-22個、12-20個、14-20個、15-25個、16-20個、18-22個或18-20個連接之核苷組成。

實施例24. 如實施例1-23中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16個、17個或18個連接之核苷組成。

實施例25. 一種包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物：A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 41)，其中， A =腺嘌呤核鹼基，^m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分，且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

實施例26. 一種包含根據以下化學記法中任一者之經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物(5’至3’)： i) A_es G_eo T_eo T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； ii) A_es G_eo T_es T_eo G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； iii) A_es G_eo T_es T_es G_es G_eo A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； iv) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_eo ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； v) A_es G_es T_es T_eo G_eo G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； vi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_eo ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41): vii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_eo A_eo G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； viii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_eo T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； ix) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_eo A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； x) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xi) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xii) A_es G_es T_eo T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xiii) A_es G_es T_es T_es G_eo G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xiv) A_es G_es T_es T_es G_es G_eo A_eo G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xv) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_eo G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xvi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_eo T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xvii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xviii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_eo G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xix) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_es T_eo T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xx) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_eo T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xxi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_eo T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xxii) A_eo A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_eo ^m C_e (SEQ ID NO: 890)； xxiii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_eo ^m C_e (SEQ ID NO: 891)； xxiv) A_eo A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 892)； xxv) G_ns G_ns T_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 881)； xxvi) A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_n (SEQ ID NO: 885)； xxvii) G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 888)； xxviii)^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_n (SEQ ID NO: 882)； xxix) A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 880)； xxx) A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 883): xxxi) G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 511)； xxxii) T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 750)； xxxiii) A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 736)； xxxiv) A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 642)； xxxv) T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 519)； xxxvi) A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 741)； xxxvii)^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_n (SEQ ID NO: 664)； xxxviii)^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 645)； xxxix)^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 550)； xl) A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_n (SEQ ID NO: 814)； xli) T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 692)； xlii)^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_n (SEQ ID NO: 587)； xliii)^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 523)； xliv) A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 778)； xlv) T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_n (SEQ ID NO: 510)； xlvi) T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 816)； xlvii) G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 696)；或 xlviii) G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 590)，其中， A =腺嘌呤核鹼基，^m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， n = 2’-NMA糖部分， o = 磷酸二酯核苷間鍵聯，且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

實施例27. 如實施例1-26中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物為單股寡聚化合物。

實施例28. 如實施例1-27中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。

實施例29. 如實施例1-28中任一項之寡聚化合物，其包含有包含綴合基團及綴合連接子之綴合部分。

實施例30. 如實施例29之寡聚化合物，其中該綴合基團包含有包含1-3個GalNAc配體之GalNAc叢集。

實施例31. 如實施例29或實施例30之寡聚化合物，其中該綴合連接子由單鍵組成。

實施例32. 如實施例29之寡聚化合物，其中該綴合連接子為可裂解的。

實施例33. 如實施例29之寡聚化合物，其中該綴合連接子包含1-3個連接子-核苷。

實施例34. 如實施例29-33中任一項之寡聚化合物，其中該綴合基團在該經修飾之寡核苷酸之5’端連接至該經修飾之寡核苷酸。

實施例35. 如實施例29-33中任一項之寡聚化合物，其中該綴合基團在該經修飾之寡核苷酸之3’端連接至該經修飾之寡核苷酸。

實施例36. 如實施例1-27或29-35中任一項之寡聚化合物，其包含末端基團。

實施例37. 如實施例1-32或34-35中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物不包含連接子-核苷。

實施例38. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：

(SEQ ID NO: 41)或其鹽。

實施例39. 如實施例38之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。

實施例40. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：

(SEQ ID NO: 41)。

實施例41. 一種如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。

實施例42. 如實施例41之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(S p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。

實施例43. 如實施例41之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(R p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。

實施例44. 如實施例41之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定經獨立選擇之立體化學組態的經修飾之寡核苷酸。

實施例45. 如實施例44之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸或富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態的經修飾之寡核苷酸。

實施例46. 如實施例44之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態且在各其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸。

實施例47. 如實施例44之掌性富集群體，其中該群體富集在5’至3’方向上具有S p、S p及R p組態之至少3個連續硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。

實施例48. 一種如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸之群體，其中該經修飾之寡核苷酸之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為無規立構。

實施例49. 一種醫藥組成物，其包含如實施例1-37中任一項之寡聚化合物、如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如實施例41-47中任一項之掌性富集群體或如實施例48之經修飾之寡核苷酸之群體及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。

實施例50. 如實施例49之醫藥組成物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑，且其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工CSF (aCSF)或PBS。

實施例51. 如實施例50之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及人工CSF (aCSF)組成。

實施例52. 如實施例50之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及PBS組成。

實施例53. 一種調節細胞之SCN1A RNA之剪接的方法，其包含將該細胞與如實施例1-37中任一項之寡聚化合物、如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如實施例41-47中任一項之掌性富集群體、如實施例48之經修飾之寡核苷酸之群體或如實施例49-52中任一項之醫藥組成物接觸。

實施例54. 如實施例53之方法，其中包括NIE之SCN1A RNA之量減少。

實施例55. 如實施例54之方法，其中包括NIE-1之SCN1A RNA之量減少。

實施例56. 如實施例53-55中任一項之方法，其中不包括NIE之SCN1A RNA之量增加。

實施例57. 如實施例53-56中任一項之方法，其中不包括NIE-1之SCN1A RNA之量增加。

實施例58. 一種增加細胞之全長SCN1A RNA之量的方法，其包含將該細胞與如實施例1-37中任一項之寡聚化合物、如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如實施例41-47中任一項之掌性富集群體、如實施例48之經修飾之寡核苷酸之群體或如實施例49-52中任一項之醫藥組成物接觸。

實施例59. 一種增加細胞、組織或器官之缺乏NIE-1之SCN1A RNA的方法，其包含將該細胞、組織或器官與如實施例1-37中任一項之寡聚化合物、如實施例38-40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如實施例41-47中任一項之掌性富集群體、如實施例48之經修飾之寡核苷酸之群體或如實施例49-52中任一項之醫藥組成物接觸。

實施例60. 如實施例53-59中任一項之方法，其中該細胞在體外。

實施例61. 如實施例53-59中任一項之方法，其中該細胞在動物體內。

實施例62. 一種改善與SCN1A有關之疾病的方法，其包含向患有與SCN1A有關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體投與治療有效量如實施例49-52中任一項之醫藥組成物，從而治療該與SCN1A有關之疾病。

實施例63. 如實施例62之方法，其包含鑑別出患有與SCN1A有關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體。

實施例64. 如實施例62或實施例63之方法，其中該與SCN1A有關之疾病為發展性或癲癇性腦病。

實施例65. 如實施例64之方法，其中該發展性或癲癇性腦病為卓飛症候群。

實施例66. 如實施例64之方法，其中該發展性或癲癇性腦病為以下中之任一者：全面性癲癇伴熱性癲癇發作附加症(GEFS+)、熱性癲癇發作、特發性/一般性全身性癲癇(IGE/GGE)、顳葉癲癇、肌抽躍失姿態癲癇(MAE)、雷葛氏症候群或嬰兒移行性局部癲癇(MMPSI)。

實施例67. 如實施例64-66中任一項之方法，其中該發展性或癲癇性腦病之至少一個症狀經改善。

實施例68. 如實施例67之方法，其中該症狀為以下中任一者：癲癇發作、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、動作及認知功能障礙、語言及言語遲緩、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙或自主神經機能障礙。

實施例69. 如實施例68之方法，其中該等癲癇發作為頻繁或延長的。

實施例70. 如實施例68或實施例69之方法，其中該癲癇發作為以下中任一者：痙攣性、肌抽躍、失神、局部型、遲鈍狀態及陣攣型。

實施例71. 如實施例62-70中任一項之方法，其中向中樞神經系統或全身投與該醫藥組成物。

實施例72. 如實施例71之方法，其中向中樞神經系統及全身投與該醫藥組成物。

實施例73. 如實施例62-71中任一項之方法，其中以鞘內、全身、皮下或肌內中任一方式投與該醫藥組成物。 I.某些寡核苷酸

在某些實施例中，本文提供包含寡核苷酸之寡聚化合物，該等寡核苷酸由連接之核苷組成。寡核苷酸可為未經修飾之寡核苷酸(RNA或DNA)或可為經修飾之寡核苷酸。經修飾之寡核苷酸包含相對於未經修飾之RNA或DNA的至少一個修飾。亦即，經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷(包含經修飾之糖部分及/或經修飾之核鹼基)及/或至少一個經修飾之核苷間鍵聯。A. 某些經修飾之核苷

經修飾之核苷包含經修飾之糖部分、或經修飾之核鹼基、或經修飾之糖部分及經修飾之核鹼基兩者。 1. 某些糖部分

在某些實施例中，經修飾之糖部分為非雙環經修飾之糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為雙環或三環糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。此類糖替代物可包含一或多個對應於其他類型經修飾之糖部分之取代的取代。

在某些實施例中，經修飾之糖部分為包含具有一或多個取代基之呋喃糖基環之非雙環經修飾之糖部分，該一或多個取代基均不橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成雙環結構。此類非橋聯取代基可位於呋喃糖基之任何位置，包括但不限於在2’、4’及/或5’位之取代基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分之一或多個非橋聯取代基為支化的。適用於非雙環經修飾之糖部分之2’-取代基之實例包括但不限於：2’-F、2’-OCH₃ (「OMe」或「O-甲基」)及2’-O(CH₂ )₂ OCH₃ (「MOE」或「O-甲氧基乙基」)及2’-O-N-烷基乙醯胺(例如2’-O-N-甲基乙醯胺(「NMA」)、2’-O-N-二甲基乙醯胺、2’-O-N-乙基乙醯胺或2’-O-N-丙基乙醯胺)。例如參見U.S. 6,147,200, Prakash等人, 2003,Org. Lett .,5 , 403-6。「2’-O-N-甲基乙醯胺核苷」或「2’-NMA核苷」展示如下：

在某些實施例中，2’-取代基選自以下：鹵基、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF₃ 、OCF₃ 、O-C₁ -C₁₀ 烷氧基、O-C₁ -C₁₀ 經取代之烷氧基、O-C₁ -C₁₀ 烷基、O-C₁ -C₁₀ 經取代之烷基、S-烷基、N(R_m )-烷基、O-烯基、S-烯基、N(R_m )-烯基、O-炔基、S-炔基、N(R_m )-炔基、O-伸烷基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH₂ )₂ SCH₃ 、O(CH₂ )₂ ON(R_m )(R_n )或OCH₂ C(=O)-N(R_m )(R_n )，其中各R_m 及R_n 獨立地為H、胺基保護基或經取代或未經取代之C₁ -C₁₀ 烷基以及以下中所述之2’-取代基：Cook等人, U.S. 6,531,584；Cook等人, U.S. 5,859,221；及Cook等人, U.S. 6,005,087。這些2’-取代基之某些實施例可進一步經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基(NO₂ )、硫醇、硫代烷氧基、硫烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。合適於非雙環經修飾之糖部分之4’-取代基之實例包括但不限於烷氧基(例如，甲氧基)、烷基及Manoharan等人, WO 2015/106128中所述者。合適於非雙環經修飾之糖部分之5’-取代基之實例包括但不限於：5’-甲基(R 或S )、5’-乙烯基及5’-甲氧基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分包含多於一個非橋聯糖取代基例如2’-F-5’-甲基糖部分以及Migawa等人, WO 2008/101157及Rajeev等人, US2013/0203836中所述之經修飾之糖部分及經修飾之核苷。

在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含有包含選自以下之非橋聯2’-取代基之糖部分：F、NH₂ 、N₃ 、OCF₃ 、OCH₃ 、O(CH₂ )₃ NH₂ 、CH₂ CH=CH₂ 、OCH₂ CH=CH₂ 、OCH₂ CH₂ OCH₃ 、O(CH₂ )₂ SCH₃ 、O(CH₂ )₂ ON(R_m )(R_n )、O(CH₂ )、ON(CH₃ )₂ 、O(CH₂ )₂ O(CH₂ )₂ N(CH₃ )₂ 及N-取代之乙醯胺(OCH₂ C(=O)-N(R_m )(R_n ))，其中各R_m 及R_n 獨立地為H、胺基保護基或者經取代或未經取代之C₁ -C₁₀ 烷基例如OCH₂ C(=O)-N(H)CH₃ (「NMA」)。

在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含有包含選自以下之非橋聯2’-取代基之糖部分：F、OCF₃ 、OCH₃ 、OCH₂ CH₂ OCH₃ 、O(CH₂ )₂ SCH₃ 、O(CH₂ )₂ ON(CH₃ )₂ 、O(CH₂ )₂ O(CH₂ )₂ N-(CH₃ )₂ 及OCH₂ C(=O)-N(H)CH₃ (「NMA」)。

在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含有包含選自以下之非橋聯2’-取代基之糖部分：F、OCH₃ 、OCH₂ CH₂ OCH₃ 及OCH2C(=O)-N(H)CH3。

某些經修飾之糖部分包含橋連呋喃糖基環之兩個原子以形成第二環的取代基，從而產生雙環糖部分。在某些此類實施例中，雙環糖部分包含在4’與2’呋喃糖環原子之間的橋。此類4’至2’橋聯糖取代基之實例包括但不限於：4’-CH₂ -2’、4’-(CH₂ )₂ -2’、4’-(CH₂ )₃ -2’、4’-CH₂ -O-2’ (「LNA」)、4’-CH₂ -S-2’、4’-(CH₂ )₂ -O-2’ (「ENA」)、4’-CH(CH₃ )-O-2’ (稱為「限制性乙基」或「cEt」)、4’-CH₂ -O-CH₂ -2’、4’-CH₂ -N(R)-2’、4’-C-H(CH₂ OCH₃ )-O-2’ (「限制性MOE」或「cMOE」)及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 7,399,845；Bhat等人, U.S. 7,569,686；Swayze等人, U.S. 7,741,457；以及Swayze等人, U.S. 8,022,193)、4’-C(CH₃ )(CH₃ )-O-2’及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,283)、4’-CH₂ -N(OCH₃ )-2’及其類似物(參見例如Prakash等人, U.S. 8,278,425)、4’-CH₂ -O-N(CH₃ )-2’ (參見例如Allerson等人, U.S. 7,696,345以及Allerson等人, U.S. 8,124,745)、4’-CH₂ -C-(H)(CH₃ )-2’ (參見例如Zhou等人,J. Org. Chem., 2009,74 , 118-134)、4’-CH₂ -C-(=CH₂ )-2’及其類似物(參見例如Seth等人, U.S. 8,278,426)、4’-C(R_a R_b )-N(R)-O-2’、4’-C(R_a R_b )-O-N(R)-2’、4’-CH₂ -O-N(R)-2’及4’-CH₂ -N(R)-O-2’，其中各R、R_a 及R_b 獨立地為H、保護基或C₁ -C₁₂ 烷基(參見例如Imanishi等人, U.S. 7,427,672)。

在某些實施例中，此類4’至2’橋獨立地包含1至4個獨立地選自以下之連接之基團：-[C(R_a )(R_b )]_n -、-[C(R_a )(R_b )]_n -O-、-C(R_a )=C(R_b )-、-C(R_a )=N-、-C(=NR_a )-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(R_a )₂ -、-S(=O)_x -及-N(R_a )-；其中： x為0、1或2； n為1、2、3或4；各R_a 及R_b 獨立地為H、保護基、羥基、C₁ -C₁₂ 烷基、經取代之C₁ -C₁₂ 烷基、C₂ -C₁₂ 烯基、經取代之C₂ -C₁₂ 烯基、C₂ -C₁₂ 炔基、經取代之C₂ -C₁₂ 炔基、C₅ -C₂₀ 芳基、經取代之C₅ -C₂₀ 芳基、雜環基、經取代之雜環基、雜芳基、經取代之雜芳基、C₅ -C₇ 脂環基、經取代之C₅ -C₇ 脂環基、鹵素、OJ₁ 、NJ₁ J₂ 、SJ₁ 、N₃ 、COOJ₁ 、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、CN、磺醯基(S(=O)₂ -J₁ )或亞磺醯基(S(=O)-J₁ )；且各J₁ 及J₂ 獨立地為H、C₁ -C₁₂ 烷基、經取代之C₁ -C₁₂ 烷基、C₂ -C₁₂ 烯基、經取代之C₂ -C₁₂ 烯基、C₂ -C₁₂ 炔基、經取代之C₂ -C₁₂ 炔基、C₅ -C₂₀ 芳基、經取代之C₅ -C₂₀ 芳基、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、雜環基、經取代之雜環基、C₁ -C₁₂ 胺基烷基、經取代之C₁ -C₁₂ 胺基烷基或保護基。

額外雙環糖部分為此項技術中已知的，參見例如：Freier等人,Nucleic Acids Research , 1997,25 (22 ), 4429-4443；Albaek等人,J. Org. Chem ., 2006,71 , 7731-7740；Singh等人,Chem. Commun. , 1998,4 , 455-456；Koshkin等人,Tetrahedron , 1998,54 , 3607-3630；Kumar等人,Bioorg. Med. Chem. Lett ., 1998,8 , 2219-2222；Singh等人,J. Org. Chem ., 1998,63 , 10035-10039；Srivastava等人,J. Am. Chem. Soc ., 2007,129, 8362-8379；Wengel等人, U.S. 7,053,207；Imanishi等人, U.S. 6,268,490；Imanishi等人, U.S. 6,770,748；Imanishi等人, U.S. RE44,779；Wengel等人, U.S. 6,794,499；Wengel等人, U.S. 6,670,461；Wengel等人, U.S. 7,034,133；Wengel等人, U.S. 8,080,644；Wengel等人, U.S. 8,034,909；Wengel等人, U.S. 8,153,365；Wengel等人, U.S. 7,572,582；及Ramasamy等人, U.S. 6,525,191；Torsten等人, WO 2004/106356；Wengel等人, WO 1999/014226；Seth等人, WO 2007/134181；Seth等人, U.S. 7,547,684；Seth等人, U.S. 7,666,854；Seth等人, U.S. 8,088,746；Seth等人, U.S. 7,750,131；Seth等人, U.S. 8,030,467；Seth等人, U.S. 8,268,980；Seth等人, U.S. 8,546,556；Seth等人, U.S. 8,530,640；Migawa等人, U.S. 9,012,421；Seth等人, U.S. 8,501,805；及Allerson等人, 美國專利公開案第US2008/0039618號及Migawa 等人, 美國專利公開案第US2015/0191727號。

在某些實施例中，雙環糖部分及併入此類雙環糖部分之核苷由異構組態進一步定義。例如，LNA核苷(本文所述)可為α-L組態或β-D組態。

α-L-亞甲氧基(4’-CH₂ -O-2’)或α-L-LNA雙環核苷已併入顯示反義活性的寡核苷酸中(Frieden等人,Nucleic Acids Research , 2003,21 , 6365-6372)。在本文中，雙環核苷之一般描述包括兩種異構組態。除非另外指定，否則當在本文所例示之實施例中鑑別特定雙環核苷(例如，LNA或cEt)之位置時，其為β-D組態。

在某些實施例中，經修飾之糖部分包含一或多個非橋聯糖取代基及一或多個橋聯糖取代基(例如，5’-取代及4’-2’橋聯之糖)。

在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。在某些此類實施例中，糖部分之氧原子經例如硫、碳或氮原子置換。在某些此類實施例中，此類經修飾之糖部分亦包含如本文所述之橋聯及/或非橋聯取代基。例如，某些糖替代物包含4’-硫原子及在2’位(參見例如，Bhat等人, U.S. 7,875,733及Bhat等人, U.S. 7,939,677)及/或5’位之取代。

在某些實施例中，糖替代物包含具有除5個原子之外的環。例如，在某些實施例中，糖替代物包含六員四氫哌喃(「THP」)。此類四氫哌喃可進一步經修飾或取代。包含此類經修飾之四氫哌喃之核苷包括但不限於己醣醇核酸(「HNA」)、anitol核酸(「ANA」)、甘露醇核酸(「MNA」) (參見例如，Leumann, CJ.Bioorg. & Med. Chem. 2002,10 , 841-854)、氟HNA：

(「F-HNA」，參見例如Swayze等人, U.S. 8,088,904；Swayze等人, U.S. 8,440,803；Swayze等人, U.S. 8,796,437；及Swayze等人, U.S. 9,005,906；F-HNA亦可稱為F-THP或3’-氟四氫哌喃)及包含額外具有下式之經修飾之THP化合物之核苷：

其中，對於該經修飾THP核苷之各者，獨立地： Bx為核鹼基部分； T₃ 及T₄ 各自獨立地為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基團，或T₃ 及T₄ 之一為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基團且T₃ 及T₄ 之另一者為H、羥基保護基、連接之綴合基團或5’或3’末端基團； q₁ 、q₂ 、q₃ 、q₄ 、q₅ 、q₆ 及q₇ 各自獨立地為H、C₁ -C₆ 烷基、經取代之C₁ -C₆ 烷基、C₂ -C₆ 烯基、經取代之C₂ -C₆ 烯基、C₂ -C₆ 炔基或經取代之C₂ -C₆ 炔基；且 R₁ 及R₂ 各自獨立地選自：氫、鹵素、經取代或未經取代之烷氧基、NJ₁ J₂ 、SJ₁ 、N₃ 、OC(=X)J₁ 、OC(=X)NJ₁ J₂ 、NJ₃ C(=X)NJ₁ J₂ 及CN，其中X為O、S或NJ₁ ，且各J₁ 、J₂ 及J₃ 獨立地為H或C₁ -C₆ 烷基。

在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中q₁ 、q₂ 、q₃ 、q₄ 、q₅ 、q₆ 及q₇ 各自為H。在某些實施例中，q₁ 、q₂ 、q₃ 、q₄ 、q₅ 、q₆ 及q₇ 中之至少一者不為H。在某些實施例中，q₁ 、q₂ 、q₃ 、q₄ 、q₅ 、q₆ 及q₇ 中之至少一者為甲基。在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中R₁ 及R₂ 之一為F。在某些實施例中，R₁ 為F且R₂ 為H，在某些實施例中，R₁ 為甲氧基且R₂ 為H，且在某些實施例中，R₁ 為甲氧基乙氧基且R₂ 為H。

在某些實施例中，糖替代物包含具有多於5個原子及多於一個雜原子之環。例如，已報導包含N-嗎啉基糖部分之核苷及其在寡核苷酸中之使用(參見例如，Braasch等人,Biochemistry , 2002,41 , 4503-4510及Summerton等人, U.S. 5,698,685；Summerton等人, U.S. 5,166,315；Summerton等人, U.S. 5,185,444；及Summerton等人, U.S. 5,034,506)。如本文所用，術語「N-嗎啉基」意謂具有以下結構之糖替代物：

。在某些實施例中，N-嗎啉基可例如藉由添加或改變來自上文N-嗎啉基結構之各種取代基來修飾。此類糖替代物在本文中稱為「經修飾之N-嗎啉基」。

在某些實施例中，糖替代物包含非環部分。包含此類非環糖替代物之核苷及寡核苷酸之實例包括但不限於：肽核酸(「PNA」)、非環丁基核酸(參見例如，Kumar等人,Org. Biomol. Chem. , 2013,11 , 5853-5865)以及Manoharan等人, WO2011/133876中所述之核苷及寡核苷酸。

許多其他雙環及三環糖及糖替代物環系為可用於經修飾之核苷之技術中已知的。2. 某些經修飾之核鹼基

在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含一或多個包含未修飾核鹼基之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個不包含核鹼基之核苷，稱為無鹼基核苷。

在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶、烷基或炔基取代之嘧啶、烷基取代之嘌呤以及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤。在某些實施例中，經修飾之核鹼基係選自：2-胺基丙基腺嘌呤；5-羥基甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤、；2-胺基腺嘌呤；6-N-甲基鳥嘌呤；6-N-甲基腺嘌呤；2-丙基腺嘌呤；2-硫尿嘧啶；2-硫胸腺嘧啶；及2-硫胞嘧啶；5-丙炔基(-C≡C-CH₃ )尿嘧啶；5-丙炔基胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶；6-偶氮胞嘧啶；6-偶氮胸腺嘧啶；5-核糖基尿嘧啶(偽尿嘧啶)；4-硫尿嘧啶；8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基、8-氮雜、及其他8-取代之嘌呤；5-鹵基特別是5-溴、5-三氟甲基、5-鹵基尿嘧啶及5-鹵基胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤；7-甲基腺嘌呤；2-F-腺嘌呤；2-胺基腺嘌呤；7-去氮鳥嘌呤；7-去氮腺嘌呤；3-去氮鳥嘌呤；3-去氮腺嘌呤；6-N-苯甲醯基腺嘌呤；2-N-異丁醯基鳥嘌呤；4-N-苯甲醯基胞嘧啶；4-N-苯甲醯基尿嘧啶；5-甲基4-N-苯甲醯基胞嘧啶；5-甲基4-N-苯甲醯基尿嘧啶；通用鹼基；疏水性鹼基；雜亂鹼基；大小擴大的鹼基；及氟化鹼基。其他經修飾之核鹼基包括三環嘧啶，諸如1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮、1,3-二氮雜啡噻嗪-2-酮及9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮雜啡噁嗪-2-酮(G形夾(G-clamp))。經修飾之核鹼基亦可包括其中嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換者，例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶及2-吡啶酮。另外的核鹼基包括以下中所揭示者：Merigan等人, U.S. 3,687,808；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering , Kroschwitz, J.I.編, John Wiley & Sons, 1990, 858-859；Englisch等人,Angewandte Chemie , 國際版, 1991,30 , 613；Sanghvi, Y.S., 第15章, Antisense Research and Applications , Crooke, S.T.及Lebleu, B.編, CRC Press, 1993, 273-288；以及第6章及第15章,Antisense Drug Technology , Crooke S.T.編, CRC Press, 2008, 163-166及442-443。

教導某些上述經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基之製備的公開案包括但不限於：Manoharan等人, US2003/0158403；Manoharan等人, US2003/0175906；Dinh等人, U.S. 4,845,205；Spielvogel等人, U.S. 5,130,302；Rogers等人, U.S. 5,134,066；Bischofberger等人, U.S. 5,175,273；Urdea等人, U.S. 5,367,066；Benner等人, U.S. 5,432,272；Matteucci等人, U.S. 5,434,257；Gmeiner等人, U.S. 5,457,187；Cook等人, U.S. 5,459,255；Froehler等人, U.S. 5,484,908；Matteucci等人, U.S. 5,502,177；Hawkins等人, U.S. 5,525,711；Haralambidis等人, U.S. 5,552,540；Cook等人, U.S. 5,587,469；Froehler等人, U.S. 5,594,121；Switzer等人, U.S. 5,596,091；Cook等人, U.S. 5,614,617；Froehler等人, U.S. 5,645,985；Cook等人, U.S. 5,681,941；Cook等人, U.S. 5,811,534；Cook等人, U.S. 5,750,692；Cook等人, U.S. 5,948,903；Cook等人, U.S. 5,587,470；Cook等人, U.S. 5,457,191；Matteucci等人, U.S. 5,763,588；Froehler等人, U.S. 5,830,653；Cook等人, U.S. 5,808,027；Cook等人, 6,166,199；及Matteucci等人, U.S. 6,005,096。3. 某些經修飾之核苷間鍵聯

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之核苷可使用任何核苷間鍵聯連接在一起。兩種主要類別的核苷間連接基係藉由存在或不存在磷原子來界定。代表性含磷核苷間鍵聯包括但不限於：磷酸二酯，其含有磷酸二酯鍵P(O₂ )=O (亦稱為未經修飾或天然存在之鍵聯)；磷酸三酯；甲基膦酸酯；甲氧基丙基膦酸酯(「MOP」)；胺基磷酸酯；甲磺醯基胺基磷酸酯；硫代磷酸酯(P(O₂ )=S)；及二硫代磷酸酯(HS-P=S)。代表性不含磷核苷間連接基團包括但不限於：亞甲基甲基亞胺基(-CH₂ -N(CH₃ )-O-CH₂ -)；硫二酯；硫羰胺基甲酸酯(-O-C(=O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-SiH₂ -O-)；及N,N’-二甲基肼(-CH₂ -N(CH₃ )-N(CH₃ )-)。與天然存在之磷酸酯鍵聯相比，經修飾之核苷間鍵聯可用於改變(通常增加)寡核苷酸之核酸酶抗性。在某些實施例中，具有掌性原子之核苷間鍵聯可製備為外消旋混合物或單獨鏡像異構物。製備含磷及不含磷核苷間鍵聯之方法為熟習此項技術者熟知的。

具有掌性中心之代表性核苷間鍵聯包括但不限於烷基磷酸酯及硫代磷酸酯。包含具有掌性中心之核苷間鍵之經修飾之寡核苷酸可製備為包含無規立構核苷間鍵之經修飾之寡核苷酸之群體、或者包含呈特定立體化學組態之硫代磷酸酯鍵聯之經修飾之寡核苷酸群。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體包含硫代磷酸酯核苷間鍵聯，其中所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯為無規立構。此類經修飾之寡核苷酸可使用導致任意選擇各硫代磷酸酯鍵聯之立體化學組態的合成方法生成。然而，如熟習此項技術者所理解，各個別寡核苷酸分子之各個別硫代磷酸酯具有定義之立體組態。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集包含一或多個呈特定經獨立選擇之立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之特定組態存在於群體中至少65%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之特定組態存在於群體中至少70%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之特定組態存在於群體中至少80%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之特定組態存在於群體中至少90%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之特定組態存在於群體中至少99%的分子中。經修飾之寡核苷酸之此類掌性富集群體可使用此項技術中已知的合成方法生成，例如以下中所述之方法：Oka等人,JACS , 2003,125 , 8307；Wan等人Nuc. Acid. Res ., 2014,42 , 13456；以及WO 2017/015555。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集具有至少一個呈(S p)組態之指示硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集具有至少一個呈(R p)組態之硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，包含(R p)及/或(S p)硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸分別包含下式中之一或多者，其中「B」指示核鹼基：

除非另外指示，否則本文所述之經修飾之寡核苷酸之掌性核苷間鍵聯可為無規立構或呈特定立體化學組態。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含核苷間模體(5’至3’) sooosssssssssssssss 在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特定立體化學組態為(5’至3’)S p-o-o-o-S p-S p-S p-R p-S p-S p-R p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p或S p-o-o-o-S p-S p-S p-R p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p-S p；其中各『S p』表示呈S 組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯；R p表示呈R 組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯；且『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。

中性核苷間鍵聯包括但不限於磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI (3’-CH₂ -N(CH₃ )-O-5’)、醯胺-3 (3’-CH₂ -C(=O)-N(H)-5’)、醯胺-4 (3’-CH₂ -N(H)-C(=O)-5’)、甲乙縮醛(formacetal) (3’-O-CH₂ -O-5’)、甲氧基丙基及硫代甲乙縮醛(3’-S-CH₂ -O-5’)。另外的中性核苷間鍵聯包括包含矽氧烷(二烷基矽氧烷)、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯及醯胺之非離子鍵聯(參見例如Carbohydrate Modifications in Antisense Research ; Y.S. Sanghvi及P.D. Cook編, ACS Symposium Series 580; 第3章及第4章, 40-65)。另外的中性核苷間鍵聯包括包含混合N、O、S及CH₂ 組分部分之非離子鍵聯。在某些實施例中，經修飾之核苷間鍵聯為WO 2021/030778中所述者，該案以引用之方式併入本文。B. 某些模體

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之糖部分之經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基之經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。在此類實施例中，經修飾之寡核苷酸之經修飾、未經修飾及經不同修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯定義模式或模體。在某些實施例中，糖部分、核鹼基及核苷間鍵聯之模式各自彼此獨立。因此，經修飾之寡核苷酸可藉由其糖模體、核鹼基模體及/或核苷間鍵聯模體進行描述(如本文所用，核鹼基模體描述獨立於核鹼基序列的對核鹼基進行之修飾)。1. 某些糖模體

在某些實施例中，寡核苷酸包含一或多種類型的以定義之模式或糖模體沿寡核苷酸或其部分排列的經修飾之糖及/或未經修飾之糖部分。在某些情況下，此類糖模體包括但不限於本文所討論之任何糖修飾。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有間隔體(gapmer)模體，其藉由兩個外部區域或「側翼」及中心或內部區域或「間隔」所定義。間隔體模體之三個區域(5’側翼、間隔及3’側翼)形成連續核苷序列，其中各側翼之核苷之至少一些糖部分與間隔之核苷之至少一些糖部分不同。特定言之，至少各側翼之最靠近間隔之核苷(5’側翼之最3’核苷及3’側翼之最5’核苷)的糖部分與相鄰間隔核苷之糖部分不同，因此定義側翼與間隔之間的邊界(即，側翼/間隔接點)。在某些實施例中，間隔內之糖部分彼此相同。在某些實施例中，間隔包括一或多個具有與間隔之一或多個其他核苷之糖部分不同的糖部分之核苷。在某些實施例中，兩個側翼之糖模體彼此相同(對稱間隔體)。在某些實施例中，5’側翼之糖模體與3’側翼之糖模體不同(不對稱間隔體)。

在某些實施例中，間隔體之側翼包含1-6個核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之各核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個核苷包含經修飾之糖部分。

在某些實施例中，間隔體之間隔包含7-12個核苷。在某些實施例中，間隔體之間隔之各核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隔體之間隔之至少一個核苷包含經修飾之糖部分，且各其餘核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。

在本文中，間隔體之三個區域之長度(核苷數)可使用記法[5’側翼中之核苷數]-[間隔中之核苷數]-[3’側翼中之核苷數]來提供。因此，5-10-5間隔體由各側翼中之5個連接之核苷及間隔中之10個連接之核苷組成。當此類命名法之後有特定修飾之情況下，該修飾為各側翼之各糖部分的修飾，且間隔核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。因此，5-10-5 MOE間隔體由5’側翼中之5個連接之2’-MOE核苷、間隔中之10個連接之2’-去氧核糖核苷及3’側翼中之5個連接之2’-MOE核苷組成。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷或其部分包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分、糖替代物或2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個包含經修飾之糖部分之核苷。在某些實施例中，經修飾之糖部分獨立地選自2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷包含經修飾之糖部分(「經完全修飾之寡核苷酸」)。在某些實施例中，經完全修飾之寡核苷酸之各核苷包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。在某些實施例中，經完全修飾之寡核苷酸之各核苷包含相同經修飾之糖部分(「經均勻修飾之糖模體」)。在某些實施例中，經均勻修飾之糖模體之長度為7至20個核苷。在某些實施例中，經均勻修飾之糖模體之各核苷包含2’-取代之糖部分、雙環糖部分或糖替代物。在某些實施例中，2’-取代之糖部分選自2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分及2’-F糖部分。在某些實施例中，雙環糖部分選自cEt糖部分及LNA糖部分。在某些實施例中，糖替代物選自N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、THP及F-HNA。在某些實施例中，具有至少一個經完全修飾之糖模體之經修飾之寡核苷酸亦可包含至少1個、至少2個、至少3個或至少4個2’-去氧核糖核苷。2. 某些核鹼基模體

在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義之模式或模體沿寡核苷酸或其部分排列的經修飾及/或未修飾之核鹼基。在某些實施例中，各核鹼基經修飾。在某些實施例中，沒有核鹼基經修飾。在某些實施例中，各嘌呤或各嘧啶經修飾。在某些實施例中，各腺嘌呤經修飾。在某些實施例中，各鳥嘌呤經修飾。在某些實施例中，各胸腺嘧啶經修飾。在某些實施例中，各尿嘧啶經修飾。在某些實施例中，各胞嘧啶經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸中之一些或全部胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。在某些實施例中，所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶，且經修飾之寡核苷酸之所有其他核鹼基為未經修飾之核鹼基。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基之嵌段。在某些此類實施例中，嵌段位於寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，嵌段在寡核苷酸之3’端之3個核苷內。在某些實施例中，嵌段位於寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，嵌段在寡核苷酸之5’端之3個核苷內。

在某些實施例中，具有間隔體模體之寡核苷酸包含有包含經修飾之核鹼基之核苷。在某些此類實施例中，一個包含經修飾之核鹼基之核苷在具有間隔體模體之寡核苷酸之中心間隔中。在某些此類實施例中，核苷之糖部分為2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-硫代嘧啶及5-丙炔嘧啶。3. 某些核苷間鍵聯模體

在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義之模式或模體沿寡核苷酸或其部分排列的經修飾及/或未經修飾之核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間連接基團為磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間連接基團為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各硫代磷酸酯核苷間鍵聯獨立地選自無規立構硫代磷酸酯、(S p)硫代磷酸酯及(R p)硫代磷酸酯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體，且間隔內所有核苷間鍵聯經修飾。在某些此類實施例中，側翼中之一些或所有核苷間鍵聯為未經修飾之磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，末端核苷間鍵聯經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體，且核苷間鍵聯模體在至少一個側翼中包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯，其中該至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯不為末端核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些此類實施例中，所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯為無規立構。在某些實施例中，側翼中之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯為(S p)硫代磷酸酯，且間隔包含至少一個S p,S p,R p模體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集包含此類核苷間鍵模體之經修飾之寡核苷酸。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個或至少19個磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個或至少19個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個或至少5個磷酸二酯核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。C. 某些長度

有可能在不消除活性之情況下增加或減少寡核苷酸之長度。例如，在Woolf等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992,89 , 7305-7309, 1992中，測試了長度為13-25個核鹼基的一系列寡核苷酸在卵母細胞注射模型中誘導靶核酸裂解的能力。長度為25個核苷鹼基且在寡核苷酸末端附近具有8或11個錯配鹼基的寡核苷酸能夠引導靶核酸之特異性裂解，但程度低於不含錯配之寡核苷酸。類似地，靶特異性裂解可使用13個核鹼基的寡核苷酸(包括具有1或3個錯配者)達成。

在某些實施例中，寡核苷酸(包括經修飾之寡核苷酸)可具有多種長度範圍中之任一種。在某些實施例中，寡核苷酸由X至Y個連接之核苷組成，其中X表示範圍中核苷之最少數目，且Y表示範圍中核苷之最多數目。在某些此類實施例中，X及Y各自獨立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、及50；限制條件為X≤Y。例如，在某些實施例中，寡核苷酸由12至13個、12至14個、12至15個、12至16個、12至17個、12至18個、12至19個、12至20個、12至21個、12至22個、12至23個、12至24個、12至25個、12至26個、12至27個、12至28個、12至29個、12至30個、13至14個、13至15個、13至16個、13至17個、13至18個、13至19個、13至20個、13至21個、13至22個、13至23個、13至24個、13至25個、13至26個、13至27個、13至28個、13至29個、13至30個、14至15個、14至16個、14至17個、14至18個、14至19個、14至20個、14至21個、14至22個、14至23個、14至24個、14至25個、14至26個、14至27個、14至28個、14至29個、14至30個、15至16個、15至17個、15至18個、15至19個、15至20個、15至21個、15至22個、15至23個、15至24個、15至25個、15至26個、15至27個、15至28個、15至29個、15至30個、16至17個、16至18個、16至19個、16至20個、16至21個、16至22個、16至23個、16至24個、16至25個、16至26個、16至27個、16至28個、16至29個、16至30個、17至18個、17至19個、17至20個、17至21個、17至22個、17至23個、17至24個、17至25個、17至26個、17至27個、17至28個、17至29個、17至30個、18至19個、18至20個、18至21個、18至22個、18至23個、18至24個、18至25個、18至26個、18至27個、18至28個、18至29個、18至30個、19至20個、19至21個、19至22個、19至23個、19至24個、19至25個、19至26個、19至29個、19至28個、19至29個、19至30個、20至21個、20至22個、20至23個、20至24個、20至25個、20至26個、20至27個、20至28個、20至29個、20至30個、21至22個、21至23個、21至24個、21至25個、21至26個、21至27個、21至28個、21至29個、21至30個、22至23個、22至24個、22至25個、22至26個、22至27個、22至28個、22至29個、22至30個、23至24個、23至25個、23至26個、23至27個、23至28個、23至29個、23至30個、24至25個、24至26個、24至27個、24至28個、24至29個、24至30個、25至26個、25至27個、25至28個、25至29個、25至30個、26至27個、26至28個、26至29個、26至30個、27至28個、27至29個、27至30個、28至29個、28至30個或29至30個連接之核苷組成。

在某些實施例中，寡核苷酸由16個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由17個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由18個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由19個連接之核苷組成。在某些實施例中，寡核苷酸由20個連接之核苷組成。D. 某些經修飾之寡核苷酸

在某些實施例中，將上文修飾(糖、核鹼基、核苷間鍵聯)併入至經修飾之寡核苷酸中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特徵在於其修飾模體及總體長度。在某些實施例中，此類參數各自彼此獨立。因此，除非另外指示，否則具有間隔體糖模體之寡核苷酸之各核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾，且可遵循或不遵循糖修飾之間隔體修飾模式。例如，糖間隔體之側翼區內的核苷間鍵聯可彼此相同或不同，且可與糖模體之間隔區之核苷間鍵聯相同或不同。同樣，此類糖間隔體寡核苷酸可包含一或多個獨立於糖修飾之間隔體模式的經修飾之核鹼基。除非另外指示，否則所有修飾均獨立於核鹼基序列。E. 某些經修飾之寡核苷酸之群體

群體之所有經修飾之寡核苷酸具有相同分子式的經修飾之寡核苷酸之群體可為無規立構群體或掌性富集群體。無規立構群體中所有經修飾之寡核苷酸之所有掌性中心均為無規立構。在掌性富集群體中，群體之經修飾之寡核苷酸中至少一個特定掌性中心不為無規立構。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分，且所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為無規立構。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分及至少一個呈特定立體化學組態的特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。F. 核鹼基序列

在某些實施例中，藉由核鹼基序列進一步描述寡核苷酸(未經修飾或經修飾之寡核苷酸)。在某些實施例中，寡核苷酸之核鹼基序列與第二寡核苷酸或鑑別之參考核酸(諸如靶核酸)互補。在某些此類實施例中，寡核苷酸之一部分之核鹼基序列與第二寡核苷酸或鑑別之參考核酸(諸如靶核酸)互補。在某些實施例中，寡核苷酸之一部分或整個長度之核鹼基序列與第二寡核苷酸或核酸(諸如靶核酸)至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補。II. 某些寡聚化合物

在某些實施例中，本文提供寡聚化合物，其由寡核苷酸(經修飾或未經修飾)及視情況一或多個綴合基團及/或末端基團組成。綴合基團由一或多個綴合部分及將綴合部分連接至寡核苷酸的綴合連接子組成。綴合基團可連接至寡核苷酸之任一端或兩端及/或在任何內部位置。在某些實施例中，綴合基團連接至經修飾之寡核苷酸之核苷之2’位。在某些實施例中，連接至寡核苷酸之任一端或兩端的綴合基團為末端基團。在某些此類實施例中，綴合基團或末端基團連接在寡核苷酸之3’端及/或5’端。在某些此類實施例中，綴合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，綴合基團連接在寡核苷酸之3’端附近。在某些實施例中，綴合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，綴合基團連接在寡核苷酸之5’端附近。

末端基團之實例包括但不限於綴合基團、加帽基團、磷酸酯部分、保護基、無鹼基核苷、經修飾或未修飾之核苷及二或更多個獨立地經修飾或未經修飾的核苷。A. 某些綴合基團

在某些實施例中，寡核苷酸共價連接至一或多個綴合基團。在某些實施例中，綴合基團修改所連接之寡核苷酸之一或多個特性，包括但不限於藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞吸收、電荷及清除率。在某些實施例中，綴合基團為所連接之寡核苷酸賦予新的特性，例如能夠偵測寡核苷酸的螢光團或信息基團。先前已描述了某些綴合基團及綴合部分，例如：膽固醇部分(Letsinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556)；膽酸(Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. , 1994,4 , 1053-1060)；硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人, Ann. N.Y. Acad. Sci. , 1992,660 , 306-309；Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. , 1993,3 , 2765-2770)；硫膽固醇(Oberhauser等人,Nucl. Acids Res. , 1992,20 , 533-538)；脂族鏈，例如十二烷二醇或十一基(Saison-Behmoaras等人,EMBO J. , 1991,10 , 1111-1118；Kabanov等人,FEBS Lett. , 1990,259 , 327-330；Svinarchuk等人, Biochimie, 1993, 75, 49-54)；磷脂，例如二-十六基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六基-外消旋-甘油-3-H-磷酸三乙銨(Manoharan等人,Tetrahedron Lett. , 1995,36 , 3651-3654；Shea等人,Nucl. Acids Res. , 1990,18 , 3777-3783)；多胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人,Nucleosides & Nucleotides , 1995,14 , 969-973)；或金剛烷乙酸，棕櫚基部分(Mishra等人,Biochim. Biophys. Acta , 1995,1264 , 229-237)；十八胺或己胺基-羰基-氧基膽固醇部分(Crooke等人,J. Pharmacol. Exp. Ther. , 1996,277 , 923-937)；生育酚基團(Nishina等人,Molecular Therapy Nucleic Acids , 2015,4 , e220；及Nishina等人,Molecular Therapy , 2008,16 , 734-740)；或GalNAc叢集(例如，WO2014/179620)。1. 綴合部分

綴合部分包括但不限於嵌入劑、報告分子、多胺、聚醯胺、肽、碳水化合物、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫代膽固醇、膽酸部分、葉酸、脂質、親脂性基團、磷脂、生物素、吩嗪、啡啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光素、羅丹明、香豆素、螢光團及染料。

在某些實施例中，綴合部分包含活性原料藥，例如阿司匹靈、華法林、丁二苯吡唑二酮、伊布洛芬、舒洛芬、芬布芬、可洛酚、(S)-(+)-普拉洛芬、卡普芬、丹醯基肌胺酸、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德、氟芳鈉蜜酸、亞葉酸、苯丙噻二嗪(benzothiadiazide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、二氮呯、吲哚美辛(indomethicin)、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺藥、抗糖尿病藥、抗菌劑或抗生素。2. 綴合連接子

綴合部分通過綴合連接子連接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中，綴合連接子為單化學鍵(亦即，綴合部分通過單鍵直接連接至寡核苷酸)。在某些寡聚化合物中，綴合部分經由另一包含一或多個綴合連接子部分的綴合連接子連接至寡核苷酸，該一或多個綴合連接子部分為構成綴合連接子的次單元。在某些實施例中，綴合連接子包含鏈結構，諸如烴基鏈；或重複單元之寡聚物，重複單元諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元。

在某些實施例中，綴合連接子包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基。在某些此類實施例中，綴合連接子包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基團。在某些實施例中，綴合連接子包含選自以下之基團：烷基及醯胺基團。在某些實施例中，綴合連接子包含選自以下之基團：烷基及醚基團。在某些實施例中，綴合連接子包含至少一個磷部分。在某些實施例中，綴合連接子包含至少一個磷酸酯基團。在某些實施例中，綴合連接子包括至少一個中性連接基團。

在某些實施例中，綴合連接子包括上文所述之綴合連接子，為雙官能連接部分，例如，此項技術中已知可用於將綴合基團連接至親體化合物(諸如本文所提供之寡核苷酸)的綴合連接子。一般而言，雙官能連接部分包含至少兩個官能基。官能基之一經選擇以結合至親體化合物之特定位點，且另一官能基經選擇以結合至綴合基團。雙官能連接部分中所用之官能基之實例包括但不限於用於與親核基團反應的親電子劑及用於與親電子基團反應的親核劑。在某些實施例中，雙官能連接部分包含一或多個選自以下之基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基。

綴合連接子之實例包括但不限於吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他綴合連接子包括但不限於經取代或未經取代之C₁ -C₁₀ 烷基、經取代或未經取代之C₂ -C₁₀ 烯基或經取代或未經取代之C₂ -C₁₀ 炔基，其中較佳取代基之非限制性清單包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基、硫醇、硫烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。

在某些實施例中，綴合連接子包含1-10個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含2-5個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子精確地包含3個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含TCA模體。在某些實施例中，此類連接子-核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，此類連接子-核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，連接基-核苷未經修飾。在某些實施例中，連接子-核苷包含視情況經保護之雜環鹼基，其選自嘌呤、經取代之嘌呤、嘧啶或經取代之嘧啶。在某些實施例中，可裂解部分為選自以下之核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基-胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常期望連接子-核苷在化合物到達靶組織之後從寡聚化合物裂解。據此，連接子-核苷通常連接彼此連接且通過可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此類可裂解鍵為磷酸二酯鍵。

在本文中，連接子-核苷不被視為寡核苷酸之一部分。據此，在寡聚化合物包含由指定數目或範圍的連接之核苷組成及/或與參考核酸具有指定互補性百分比的寡核苷酸且寡聚化合物亦包含連接子-核苷的實施例中，那些連接子-核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定參考核酸之寡核苷酸之互補性百分比。例如，寡聚化合物可包含(1)由8-30個核苷組成的經修飾之寡核苷酸及(2)包含1-10個與經修飾之寡核苷酸之核苷連續的連接子-核苷。此一寡聚化合物中連續的連接之核苷之總數多於30。替代地，寡聚化合物可包含由8-30個核苷組成且無綴合基團的經修飾之寡核苷酸。此一寡聚化合物中連續的連接之核苷之總數不多於30。除非另外指示，否則綴合連接子包含不多於10個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於5個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於3個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於2個連接子-核苷。在某些實施例中，綴合連接子包含不多於1個連接子-核苷。

在某些實施例中，期望綴合基團自寡核苷酸裂解。例如，在某些情形下，包含特定綴合部分之寡聚化合物較佳由特定細胞型吸收，但是一旦寡聚化合物經吸收，期望該綴合基團裂解以釋放未綴合或親體寡核苷酸。因此，某些綴合連接子可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中，可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中，可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或多於四個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分在細胞或亞細胞區室諸如溶酶體內選擇性裂解。在某些實施例中，可裂解部分由內源性酶諸如核酸酶選擇性裂解。

在某些實施例中，可裂解鍵選自：醯胺鍵、酯鍵、醚鍵、磷酸二酯之一或兩個酯鍵、磷酸酯鍵、胺甲酸酯鍵或二硫鍵。在某些實施例中，可裂解鍵為磷酸二酯之一或兩個酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中，可裂解部分為寡核苷酸與綴合部分或綴合基團之間的磷酸酯鍵聯。

在某些實施例中，可裂解部分包含一或多個連接子-核苷或由其組成。在某些此類實施例中，該一或多個連接子-核苷彼此連接及/或通過可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此類可裂解鍵為未經修飾之磷酸二酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分為藉由磷酸酯核苷間鍵聯連接至寡核苷酸之3’或5’末端核苷且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯共價連接至綴合連接子或綴合部分之其餘部分的2’-去氧核糖核苷。在某些此類實施例中，可裂解部分為2’-去氧腺苷。B. 某些末端基團

在某些實施例中，寡聚化合物包含一或多個末端基團。在某些此類實施例中，寡聚化合物包含穩定化之5’-磷酸酯。穩定化之5’-磷酸酯包括但不限於5’-膦酸酯，包括但不限於5’-乙烯基膦酸酯。在某些實施例中，末端基團包含一或多個無鹼基核苷及/或反向核苷。在某些實施例中，末端基團包含一或多個2’-連接之核苷。在某些此類實施例中，2’-連接之核苷為無鹼基核苷。C. 寡聚雙螺旋

在某些實施例中，本文所述之寡聚化合物包含核鹼基序列與靶核酸之核鹼基序列互補的寡核苷酸。在某些實施例中，寡聚化合物與第二寡聚化合物配對以形成寡聚雙螺旋。此類寡聚雙螺旋包含一部分與靶核酸互補的第一寡聚化合物及一部分與第一寡聚化合物互補的第二寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚雙螺旋之第一寡聚化合物包含以下或由以下組成：(1)經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況綴合基團及(2)第二經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況綴合基團。寡聚雙螺旋之任一或兩種寡聚化合物可包含綴合基團。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物之寡核苷酸可包括非互補突出(overhanging)核苷。D. 反義活性

在某些實施例中，寡聚化合物及寡聚雙螺旋能夠與靶核酸雜交，產生至少一種反義活性；此類寡聚化合物及寡聚雙螺旋為反義化合物。在某些實施例中，當反義化合物在標準細胞檢定中降低、調節或增加靶核酸之量或活性25%或更多時，其具有反義活性。在某些實施例中，反義化合物選擇性影響一或多種靶核酸。此類反義化合物包含核鹼基序列，該核鹼基序列與一或多種靶核酸雜交，產生一或多種所要反義活性，且不與一或多種非靶核酸雜交或不以產生顯著非所要反義活性的方式與一或多種非靶核酸雜交。

在某些反義活性中，反義化合物與靶核酸雜交引起裂解靶核酸之蛋白的募集。例如，某些反義化合物導致靶核酸之RNA酶H介導之裂解。RNA酶H為裂解RNA:DNA雙螺旋之RNA股的細胞內切酶。此一RNA:DNA雙螺旋中之DNA不一定為未經修飾之DNA。在某些實施例中，本文提供足夠「像DNA」以引發RNA酶H活性的反義化合物。在某些實施例中，間隔體之間隔中一或多個不像DNA的核苷為可容忍的。

在某些反義活性中，將反義化合物或反義化合物之一部分加載至RNA誘導之靜默複合物(RISC)中，最終導致靶核酸之裂解。例如，某些反義化合物導致靶核酸藉由Argonaute裂解。加載至RISC中的反義化合物為RNAi化合物。RNAi化合物可為雙股化合物(siRNA)或單股化合物(ssRNA)。

在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交不導致裂解靶核酸的蛋白之補充。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致靶核酸之剪接之改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致靶核酸與蛋白或另一核酸之間的結合相互作用之抑制。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致靶核酸之轉譯之改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致包括NIE之RNA之量或水準減少。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致外顯子包涵。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸雜交導致靶核酸之量或活性增加。在某些實施例中，與靶核酸互補的反義化合物之雜交導致剪接之改變，引起mRNA中外顯子之包括。

可直接或間接地觀察到反義活性。在某些實施例中，觀察或偵測反義活性涉及觀察或偵測靶核酸或由此類靶核酸編碼之蛋白之量的變化、核酸或蛋白之剪接變異體之比率的變化及/或細胞或個體中之表型變化。III. 某些靶核酸

在某些實施例中，寡聚化合物包含有包含與靶核酸互補之部分的寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中，靶核酸為內源性RNA分子。在某些實施例中，靶核酸編碼蛋白。在某些此類實施例中，靶核酸選自：成熟mRNA及前驅mRNA，包括內含子、外顯子及未轉譯區域。在某些實施例中，靶核酸為成熟mRNA。在某些實施例中，靶核酸為前驅mRNA。在某些實施例中，靶區域完全在內含子內。在某些實施例中，靶區域跨越內含子/外顯子接點。在某些實施例中，靶區域至少50%在內含子內。A. 與靶核酸之互補性 / 錯配

有可能引入錯配鹼基而不消除活性。例如，Gautschi等人(J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, 2001年3月)表明與bcl-2 mRNA具有100%互補性且與bcl-xL mRNA具有3個錯配之寡核苷酸在體外及體內減少bcl-2及bcl-xL兩者表現之能力。此外，此寡核苷酸展現在體內有效的抗腫瘤活性。Maher及Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)測試了一系列串聯之14個核鹼基的寡核苷酸以及分別由兩個或三個串聯寡核苷酸之序列組成的28及42個核鹼基的寡核苷酸在兔網織紅細胞測定中阻止人類DHFR轉譯之能力。3個14個核鹼基的寡核苷酸各自單獨能夠抑制轉譯，但水準相較於28個或42個核鹼基的寡核苷酸而言較適中。

在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸互補。在某些實施例中，寡核苷酸與靶核酸99%、95%、90%、85%或80%互補。在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸至少80%互補，且包含與靶核酸100%或完全互補的部分。在某些實施例中，具有完全互補性之部分之長度為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核鹼基。

在某些實施例中，寡核苷酸包含一或多個相對於靶序列錯配的核鹼基。在某些實施例中，錯配位於自寡核苷酸之5’端之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20位。B. SCN1A

在某些實施例中，寡聚化合物包含與編碼SCN1A之靶核酸或其部分互補的經修飾之寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中，SCN1A靶核酸具有SEQ ID NO: 1 (自核苷165982001至166152000截短的GENBANK登錄號NC_000002.12之補體)中所示之核鹼基序列。在某些實施例中，SCN1A靶核酸具有SEQ ID NO: 2 (GENBANK登錄號NM_001165963.2)中所示之核鹼基序列。

在某些實施例中，將細胞或個體與和SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物接觸調節細胞或個體之SCN1A RNA之剪接。在某些實施例中，將細胞或個體與和SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物接觸增加SCN1A RNA及/或蛋白之量。在某些實施例中，將細胞或個體與和SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物接觸減少包括NIE之SCN1A RNA之量。在某些實施例中，將細胞或個體與和SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物接觸增加不包括NIE之SCN1A RNA之量。在某些實施例中，NIE為NIE-1。在某些實施例中，寡聚化合物包含經修飾之寡核苷酸或由其組成。

在某些實施例中，將細胞或個體與和SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物接觸改善腦病之一或多個症狀。在某些實施例中，腦病為卓飛症候群。在某些實施例中，症狀為以下中任一者：癲癇發作延長或頻繁、癲癇突發非預期死亡、癲癇重積狀態、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、骨科疾患、動作及認知功能障礙、語言遲緩及言語問題、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙及自主神經機能障礙。C. 某些組織中之某些靶核酸

在某些實施例中，寡聚化合物包含有包含與靶核酸互補之部分的寡核苷酸或由其組成，其中靶核酸在藥理學上相關的組織中表現。在某些實施例中，藥理學上相關的組織為構成中樞神經系統(CNS)之細胞及組織。此類組織包括腦組織，諸如大腦皮質。IV. 某些醫藥組成物

在某些實施例中，本文描述包含一或多種寡聚化合物之醫藥組成物。在某些實施例中，該一或多種寡聚化合物各自由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，醫藥組成物包含醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。在某些實施例中，醫藥組成物包含無菌鹽水溶液及一或多種寡聚化合物或由其組成。在某些實施例中，無菌鹽水為醫藥級鹽水。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及無菌水或由其組成。在某些實施例中，無菌水為醫藥級水。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或由其組成。在某些實施例中，無菌PBS為醫藥級PBS。在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及人工腦脊髓液(「人工CSF」或「aCSF」)或由其組成。在某些實施例中，人造腦脊髓液為醫藥級。

在某些實施例中，醫藥組成物包含經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液。在某些實施例中，醫藥組成物由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，人造腦脊髓液為醫藥級。

在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種寡聚化合物及一或多種賦形劑。在某些實施例中，賦形劑選自：水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。

在某些實施例中，寡聚化合物可與醫藥學上可接受之活性及/或惰性物質混合以用於製備醫藥組成物或調配物。用於調配醫藥組成物之組成物及方法取決於許多標準，包括但不限於投與途徑、疾病程度或投與劑量。

在某些實施例中，包含寡聚化合物之醫藥組成物涵蓋寡聚化合物之任何醫藥學上可接受之鹽、寡聚化合物之酯或此類酯之鹽。在某些實施例中，包含有包含一或多種寡核苷酸之寡聚化合物的醫藥組成物在向包括人類之個體投與之後能夠(直接或間接)提供其生物學活性代謝物或殘餘物。據此，例如，本揭露亦關於寡聚化合物之醫藥學上可接受之鹽、前藥、此類前藥之醫藥學上可接受之鹽及其他生物等效物。合適之醫藥學上可接受之鹽包括但不限於鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸的綴合基團，其中綴合基團藉由體內的內源性核酸酶而裂解。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸的綴合基團，其中綴合基團藉由體內的內源性核酸酶而裂解。

脂質部分已用於多種方法中之核酸治療劑中。在某些此類方法中，將核酸諸如寡聚化合物引入至由陽離子脂質及中性脂質之混合物製成之預成型脂質體或脂質複合物(lipoplex)中。在某些方法中，在無中性脂質存在之情況下形成具有單陽離子脂質或多陽離子脂質之DNA複合物。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向特定細胞或組織之分佈。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向脂肪組織之分佈。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向肌肉組織之分佈。

在某些實施例中，醫藥組成物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體及乳液。某些遞送系統可用於製備某些醫藥組成物，包括包含疏水性化合物之醫藥組成物。在某些實施例中，使用某些有機溶劑，諸如二甲亞碸。

在某些實施例中，醫藥組成物包含一或多種經設計以將一或多種包含本文所提供之寡聚化合物之藥劑遞送至特定組織或細胞型的組織特異性遞送分子。例如，在某些實施例中，醫藥組成物包括用組織特異性抗體包被之脂質體。

在某些實施例中，醫藥組成物包含共溶劑系統。某些此類共溶劑系統包含例如苯甲醇、非極性界面活性劑、水可混溶性有機聚合物及水相。在某些實施例中，此類共溶劑系統用於疏水性化合物。此一共溶劑系統之非限制性實例為VPD共溶劑系統，其為包含3% w/v苯甲醇、8% w/v非極性界面活性劑聚山梨醇酯80™及65% w/v聚乙二醇300之絕對乙醇溶液。此類共溶劑系統之比例可在不實質性改變其溶解度及毒性特徵之情況下顯著變化。此外，共溶劑組分之身份可變化：例如，可使用其他界面活性劑替代聚山梨醇酯80™；聚乙二醇之分率大小可變化；其他生物相容性聚合物可替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯啶酮；及其他糖或多醣可取代右旋糖。

在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於經口投與。在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於經頰投與。在某些實施例中，醫藥組成物經製備用於藉由(例如靜脈內、皮下、肌肉內、鞘內(IT)、腦室內(ICV)等)注射投與。在某些此類實施例中，醫藥組成物包含載劑且於水溶液中調配，諸如水或生理學上相容之緩衝液，諸如漢克氏溶液(Hanks’s solution)、林格氏溶液(Ringer’s solution)或生理鹽水緩衝液。在某些實施例中，包括其他成分(例如有助於溶解或充當防腐劑之成分)。在某些實施例中，使用適當液體載劑、懸浮劑及其類似物製備可注射懸液劑。某些注射用醫藥組成物以單位劑型例如於安瓿或多劑量容器中呈現。某些注射用醫藥組成物為於油性或水性媒劑中之懸液劑、溶液或乳液，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。某些適用於注射用醫藥組成物中之溶劑包括但不限於親脂性溶劑及脂肪油諸如芝麻油、合成脂肪酸酯諸如油酸乙酯或三酸甘油酯及脂質體。

在某些條件下，本文所揭露之某些化合物用作酸。儘管此類化合物可以以質子化(遊離酸)形式或離子化且結合陽離子(鹽)形式來繪製或描述，但是此類化合物之水溶液以在此類形式之間平衡的狀態存在。例如，水溶液中之寡核苷酸之磷酸酯鍵聯以在遊離酸、陰離子及鹽形式之間平衡的狀態存在。除非另外指示，否則本文所述之化合物意欲包括所有該等形式。此外，某些寡核苷酸具有若干此類鍵聯，各鍵聯處於平衡狀態。因此，溶液中之寡核苷酸以在多個位置處之形式的整體形式存在，該多個位置處之形式均為平衡狀態。術語「寡核苷酸」意欲包括所有此類形式。所繪製之結構必定描繪單一形式。然而，除非另外指示，否則此類圖式同樣意欲包括對應形式。在本文中，描繪化合物之遊離酸(後接術語「或其鹽」)的結構明確包括可完全或部分質子化/去質子化/結合陽離子之所有此類形式。在某些情況下，鑑別出一或多種特定陽離子。

在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在具有鈉之水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在具有鉀之水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在PBS中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在水中。在某些此類實施例中，用NaOH及/或HCl調節溶液之pH以達成所要pH。

在本文中，描述了某些特定劑量。劑量可為劑量單位之形式。為清楚起見，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物之劑量(或劑量單位)(毫克)指示經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物之遊離酸形式之質量。如上文所述，在水溶液中，遊離酸與陰離子及鹽形式處於平衡狀態。然而，出於計算劑量之目的，假設經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物以不含溶劑、不含乙酸鈉、無水、遊離酸形式存在。例如，在經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在包含鈉之溶液(例如鹽水)中時，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物可部分或完全去質子化且與Na+離子締合。然而，質子之質量仍然計入劑量之重量計數，且Na+離子之質量不計入劑量之重量。因此，例如，10 mg化合物編號1429226之劑量或劑量單位等於重10 mg的完全質子化分子之數目。此等於10.5 mg不含溶劑、不含乙酸鈉、無水含鈉(sodiated)之化合物編號1429226。當寡聚化合物包含綴合基團時，在計算此類寡聚化合物之劑量時包括綴合基團之質量。若綴合基團亦具有酸，則出於計算劑量之目的，同樣假定綴合基團經完全質子化。V. 某些組成物 1. 化合物編號：1429226

在某些實施例中，化合物編號1429226經表徵為具有序列(5’至3’) AGTTGGAGCAAGATTATC (SEQ ID NO: 41)之經修飾之寡核苷酸，其中各核苷包含2’-NMA糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。

在某些實施例中，化合物編號1429226由以下化學記法表示(5’至3’)：A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 41)；其中， A =腺嘌呤核鹼基，^m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分，且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

在某些實施例中，化合物編號1429226由以下化學結構表示：

(SEQ ID NO: 41)。結構 1. 化合物編號 1429226

在某些實施例中，化合物編號1429226之鈉鹽由以下化學結構表示：

(SEQ ID NO: 41)。結構 2. 化合物編號 1429226之鈉鹽非限制性揭露及以引用的方式併入

本文所列之各文獻及專利公開案均以引用之方式整體併入本文。儘管本文所述之某些化合物、組成物、及方法已根據某些實施例經特定描述，但以下實例僅用於說明本文所述之化合物且不意欲對其加以限制。本申請案中所引用之各參考文獻、GenBank登錄號及其類似物均以引用之方式整體併入本文。

儘管隨附於此申請之序列表根據需要將各序列鑑別為「RNA」或「DNA」，但實際上，該等序列可用任何化學修飾組合修飾。熟習此項技術者將易於瞭解諸如「RNA」或「DNA」之用以描述經修飾之寡核苷酸之名稱在某些情況下為隨意的。例如，包含有包含2’-OH糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷之寡核苷酸可描述為具有經修飾之糖部分(2’-OH代替DNA之一個2’-H)之DNA或具有經修飾之鹼基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)代替RNA之尿嘧啶)之RNA。據此，本文所提供之核酸序列(包括但不限於序列表中之核酸序列)意欲涵蓋含有天然或經修飾之RNA及/或DNA之任何組合之核酸，包括但不限於具有經修飾之核鹼基之此類核酸。進一步舉例且不加限制，具有核鹼基序列「ATCGATCG」之寡聚化合物涵蓋具有此一核鹼基序列(無論經修飾還是未經修飾)之任何寡聚化合物，包括但不限於包含RNA鹼基之此類化合物，諸如具有序列「AUCGAUCG」者及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基者(諸如「AUCGATCG」)及具有其他經修飾之鹼基之寡聚化合物，諸如「AT^m CGAUCG」，其中^m C指示在5位包含甲基之胞嘧啶鹼基。

本文所述之某些化合物(例如，經修飾之寡核苷酸)具有一或多個不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他可定義為(R )或(S ) (就絕對立體化學而言)、α或β (諸如就糖變旋異構物而言)或(D)或(L) (諸如就胺基酸而言)等等的立體異構組態。畫出或描述為具有某些立體異構組態的本文所提供之化合物僅包括所指示化合物。除非另外指定，否則畫出或描述為具有未定義之立體化學的本文所提供之化合物包括所有此類可能的異構物，包括其無規立構及視情況純形式。同樣，除非另外指示，否則本文化合物之所有順式及反式異構物及互變異構形式亦包括在內。本文所述之寡聚化合物包括掌性純或富集混合物以及外消旋混合物。例如，具有複數個硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物包括其中硫代磷酸酯核苷間鍵聯之掌性經控制或為隨機的此類化合物。除非另外指示，否則本文所述之化合物意欲包括對應的鹽形式。

本文所述之化合物包括以下變化，其中一或多個原子經所指示元素之非放射同位素或放射同位素置換。例如，包含氫原子之本文化合物涵蓋各¹ H氫原子之所有可能的氘取代。本文化合物所涵蓋之同位素取代包括但不限於：² H或³ H代替¹ H；¹³ C或¹⁴ C代替¹² C；¹⁵ N代替¹⁴ N；¹⁷ O或¹⁸ O代替¹⁶ O；及³³ S、³⁴ S、³⁵ S或³⁶ S代替³² S。在某些實施例中，非放射同位素取代可對寡聚化合物賦予新的有利於用作治療或研究工具的性質。在某些實施例中，放射同位素取代可使化合物合適於研究或診斷目的諸如成像。實例

以下實例說明本揭露之某些實施例但不具有限制性。此外，在提供特定實施例之情況下，發明人已考慮到該等特定實施例之一般應用。實例 1 ：靶向人類 SCN1A 之經修飾之寡核苷酸在 HepG2 細胞中之活性，單劑量，在體外

合成了與人類SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸且測試其在體外對SCN1A RNA水準的影響。在使用相同培養條件的一系列實驗中測試了經修飾之寡核苷酸。

下表中經修飾之寡核苷酸之長度為18個核苷。各核苷包含2’-MOE糖部分。在整個各經修飾之寡核苷酸中之核苷間鍵聯皆為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在整個各經修飾之寡核苷酸中之所有胞嘧啶殘基皆為5-甲基胞嘧啶。

下表中所列之各經修飾之寡核苷酸與以下100%互補：人類SCN1A基因體序列，本文中命名為SEQ ID NO: 1 (自核苷165982001至166152000截短的GENBANK登錄號NC_000002.12之補體)；或人類SCN1A mRNA，本文中命名為SEQ ID NO: 2 (GENBANK登錄號NM_001165963.2)；或兩者。『N/A』指示經修飾之寡核苷酸不以100%互補性與該特定靶序列互補。「起始位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。

使用電穿孔，用4000 nM經修飾之寡核苷酸轉染以每孔20,000個細胞之密度的經培養之HepG2細胞。在約24小時之處理期之後，自細胞分離出RNA且藉由定量即時RTPCR量測SCN1A RNA水準。使用人類引子探針組RTS40976 (正向序列CCAAGAAGGCTGGAATATCTTTG，在本文中命名為SEQ ID NO: 15；反向序列GCCAACTTGAAAACTCGCA，在本文中命名為SEQ ID NO: 16；探針序列ACCAGGCTAAGCGTCACAATAAAACCG，在本文中命名為SEQ ID NO: 17)量測SCN1A RNA水準。如藉由RIBOGREEN®所量測，將SCN1A RNA水準正規化至總RNA含量。SCN1A RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)。如下表中所示，與未經處理之對照相比，某些與SCN1A RNA互補的經修飾之寡核苷酸使人類SCN1A RNA之量增加。表1-6中之各者表示不同的實驗。表 1 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262739	2869	2886	N/A	N/A	AACAGTTCCATGAGTTTC	57	42
1262745	2875	2892	N/A	N/A	TGGAGGAACAGTTCCATG	90	43
1262751	2881	2898	N/A	N/A	TTAATCTGGAGGAACAGT	130	44
1262757	2887	2904	N/A	N/A	GAAGTGTTAATCTGGAGG	129	45
1262763	2893	2910	N/A	N/A	ACCCCTGAAGTGTTAATC	93	46
1262769	2899	2916	N/A	N/A	TCCATAACCCCTGAAGTG	89	47
1262775	2905	2922	N/A	N/A	CCAGCTTCCATAACCCCT	87	48
1262781	2912	2929	N/A	N/A	GCTTCCTCCAGCTTCCAT	54	49
1262787	2925	2942	N/A	N/A	TAGTAAAAGCTCAGCTTC	75	50
1262793	2931	2948	N/A	N/A	AAGATGTAGTAAAAGCTC	108	51
1262799	78339	78356	457	474	TACCATTTATTCTGCATA	79	52
1262805	78359	78376	477	494	GTCATCCTGCACATTTTA	84	53
1262811	160818	160835	6589	6606	AGGAGTCCTGTTGATAAA	102	54
1262817	160825	160842	6596	6613	CTCCTAAAGGAGTCCTGT	66	55
1262823	160839	160856	6610	6627	AGTTTGGCATTGACCTCC	54	56
1262829	160874	160891	6645	6662	GCACTGACCTTAAGGAGA	126	57
1262835	160884	160901	6655	6672	CTTATTGTAGGCACTGAC	69	58
1262841	160927	160944	6698	6715	CCCCTTTACACAGAGTCA	61	59
1262847	160954	160971	6725	6742	AACAGTAACCTCCTGTCA	85	60
1262853	160966	160983	6737	6754	GCTGGTAGTGAGAACAGT	93	61
1262859	160974	160991	6745	6762	CAGTGTCAGCTGGTAGTG	84	62
1262865	161002	161019	6773	6790	GACTAGCCATTGTGCATC	113	63
1262871	161008	161025	6779	6796	CAGTCTGACTAGCCATTG	74	64
1262877	161014	161031	6785	6802	TCCCTACAGTCTGACTAG	72	65
1262883	161020	161037	6791	6808	AACTGGTCCCTACAGTCT	73	66
1262889	161031	161048	6802	6819	GCACCCCTTGAAACTGGT	114	67
1262895	161037	161054	6808	6825	AGGTTTGCACCCCTTGAA	85	68
1262901	161087	161104	6858	6875	GATACAATTACTACACTA	81	69
1262907	161150	161167	6921	6938	GATGAATCCACTAACAGA	32	70
1262913	161231	161248	7002	7019	TAGAGGTCCTTAGCCTAT	75	71
1262919	161241	161258	7012	7029	ATACCTGTTATAGAGGTC	74	72
1262925	161247	161264	7018	7035	GGTGGCATACCTGTTATA	62	73
1262931	161258	161275	7029	7046	CATACCCCCCAGGTGGCA	70	74
1262937	161264	161281	7035	7052	GGTTGCCATACCCCCCAG	40	75
1262943	161270	161287	7041	7058	CCATGTGGTTGCCATACC	72	76
1262949	161293	161310	7064	7081	ACGACTTTGTGTAGCTGG	90	77
1262955	161299	161316	7070	7087	CAAACCACGACTTTGTGT	57	78
1262961	161305	161322	7076	7093	CTCATGCAAACCACGACT	61	79
1262967	161313	161330	7084	7101	AGCATGCCCTCATGCAAA	53	80
1262973	161319	161336	7090	7107	AAGTGCAGCATGCCCTCA	135	81
1262979	161326	161343	7097	7114	GATCTCTAAGTGCAGCAT	76	82
1262985	161400	161417	7171	7188	ATCACCCAATTACCCCTC	56	83
1262991	161406	161423	7177	7194	CCACTTATCACCCAATTA	27	84
1262997	161412	161429	7183	7200	GCACCTCCACTTATCACC	83	85
1263003	161439	161456	7210	7227	TGGATTTCGCAAAACAAG	57	86
1263009	161461	161478	7232	7249	ATAATCTACTTGGTCTAG	81	87
1263015	161477	161494	7248	7265	ACTGGCCTACCCACAAAT	67	88
1263021	161483	161500	7254	7271	AGATTTACTGGCCTACCC	104	89
1263027	161495	161512	7266	7283	TTGCACCTGCTAAGATTT	101	90
1263033	161501	161518	7272	7289	TGAAGTTTGCACCTGCTA	115	91
1263039	161601	161618	7372	7389	GTCTTCTGGCGGTGGAGG	83	92
1263045	161607	161624	7378	7395	AATTCAGTCTTCTGGCGG	65	93
1263051	161667	161684	7438	7455	CCGAAGATGGCTAAACAA	51	94
1263057	161673	161690	7444	7461	TGAGAGCCGAAGATGGCT	64	95
1263063	161680	161697	7451	7468	ACCTTGCTGAGAGCCGAA	66	96
1263069	161690	161707	7461	7478	TACAGTGTCAACCTTGCT	113	97
1263075	161743	161760	7514	7531	GCACCACAGGGTAAAATG	58	98
1263081	161779	161796	7550	7567	TACTGTGCTTAGGTCATT	83	99
1263087	161828	161845	7599	7616	GTAAAGCTTGCACTCTAC	87	100
1263093	161836	161853	7607	7624	TTACCTGTGTAAAGCTTG	40	101
1263099	161879	161896	7650	7667	GATAGCATCCAAACTATC	89	102
1263105	161887	161904	7658	7675	CATGCATTGATAGCATCC	87	103
1263111	161965	161982	7736	7753	TACCACTGACATATGGTT	71	104
1263117	162030	162047	7801	7818	AAGTGCTGCAAACTATTG	97	105
1263123	162092	162109	7863	7880	ACAGTCTGGCTATATACC	109	106
1263129	162098	162115	7869	7886	GTCTGTACAGTCTGGCTA	75	107
1263135	162129	162146	7900	7917	AATAGGTTAAGCAGTGTG	66	108
1263141	162249	162266	8020	8037	ATTGTGATATCAACCTGA	65	109
1263147	162337	162354	8108	8125	AATCTACAACTACCCAGT	82	110
1263153	162482	162499	8253	8270	TAGTGCAGGTACTACCAG	75	111
1263159	162488	162505	8259	8276	TTCAGTTAGTGCAGGTAC	84	112
1263165	162501	162518	8272	8289	GCACTACCTTCAATTCAG	88	113
1263171	162578	162595	8349	8366	AACAATCTAGAGCAGCAT	105	114
1263177	162638	162655	8409	8426	TATAAGTTGACTACTCTG	71	115
1263183	162656	162673	8427	8444	TCCTGATGTAATTGACTA	54	116
1263189	162696	162713	8467	8484	AGAGGAGCCTATGGTTTG	76	117
1263195	162735	162752	8506	8523	AGTTCACGAATACAGTTT	51	118
1263201	162741	162758	8512	8529	GCATGCAGTTCACGAATA	87	119

表 2 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262740	2870	2887	N/A	N/A	GAACAGTTCCATGAGTTT	62	120
1262746	2876	2893	N/A	N/A	CTGGAGGAACAGTTCCAT	82	121
1262752	2882	2899	N/A	N/A	GTTAATCTGGAGGAACAG	92	122
1262758	2888	2905	N/A	N/A	TGAAGTGTTAATCTGGAG	71	123
1262764	2894	2911	N/A	N/A	AACCCCTGAAGTGTTAAT	83	124
1262770	2900	2917	N/A	N/A	TTCCATAACCCCTGAAGT	112	125
1262776	2906	2923	N/A	N/A	TCCAGCTTCCATAACCCC	82	126
1262782	2919	2936	N/A	N/A	AAGCTCAGCTTCCTCCAG	70	127
1262788	2926	2943	N/A	N/A	GTAGTAAAAGCTCAGCTT	82	128
1262794	2932	2949	N/A	N/A	AAAGATGTAGTAAAAGCT	75	129
1262800	78342	78359	460	477	AATTACCATTTATTCTGC	37	130
1262806	78360	78377	478	495	TGTCATCCTGCACATTTT	124	131
1262812	160819	160836	6590	6607	AAGGAGTCCTGTTGATAA	58	132
1262818	160828	160845	6599	6616	GACCTCCTAAAGGAGTCC	66	133
1262824	160840	160857	6611	6628	CAGTTTGGCATTGACCTC	54	134
1262830	160879	160896	6650	6667	TGTAGGCACTGACCTTAA	72	135
1262836	160885	160902	6656	6673	TCTTATTGTAGGCACTGA	63	136
1262842	160949	160966	6720	6737	TAACCTCCTGTCAAGGTC	88	137
1262848	160955	160972	6726	6743	GAACAGTAACCTCCTGTC	55	138
1262854	160969	160986	6740	6757	TCAGCTGGTAGTGAGAAC	113	139
1262860	160991	161008	6762	6779	GTGCATCTTATCTTCAGC	109	140
1262866	161003	161020	6774	6791	TGACTAGCCATTGTGCAT	54	141
1262872	161009	161026	6780	6797	ACAGTCTGACTAGCCATT	92	142
1262878	161015	161032	6786	6803	GTCCCTACAGTCTGACTA	129	143
1262884	161021	161038	6792	6809	AAACTGGTCCCTACAGTC	87	144
1262890	161032	161049	6803	6820	TGCACCCCTTGAAACTGG	92	145
1262896	161038	161055	6809	6826	CAGGTTTGCACCCCTTGA	65	146
1262902	161088	161105	6859	6876	GGATACAATTACTACACT	79	147
1262908	161151	161168	6922	6939	AGATGAATCCACTAACAG	44	148
1262914	161232	161249	7003	7020	ATAGAGGTCCTTAGCCTA	54	149
1262920	161242	161259	7013	7030	CATACCTGTTATAGAGGT	106	150
1262926	161248	161265	7019	7036	AGGTGGCATACCTGTTAT	78	151
1262932	161259	161276	7030	7047	CCATACCCCCCAGGTGGC	88	152
1262938	161265	161282	7036	7053	TGGTTGCCATACCCCCCA	41	153
1262944	161271	161288	7042	7059	GCCATGTGGTTGCCATAC	73	154
1262950	161294	161311	7065	7082	CACGACTTTGTGTAGCTG	63	155
1262956	161300	161317	7071	7088	GCAAACCACGACTTTGTG	48	156
1262962	161306	161323	7077	7094	CCTCATGCAAACCACGAC	68	157
1262968	161314	161331	7085	7102	CAGCATGCCCTCATGCAA	77	158
1262974	161320	161337	7091	7108	TAAGTGCAGCATGCCCTC	80	159
1262980	161328	161345	7099	7116	ATGATCTCTAAGTGCAGC	114	160
1262986	161401	161418	7172	7189	TATCACCCAATTACCCCT	59	161
1262992	161407	161424	7178	7195	TCCACTTATCACCCAATT	65	162
1262998	161413	161430	7184	7201	AGCACCTCCACTTATCAC	139	163
1263004	161441	161458	7212	7229	GCTGGATTTCGCAAAACA	84	164
1263010	161462	161479	7233	7250	AATAATCTACTTGGTCTA	83	165
1263016	161478	161495	7249	7266	TACTGGCCTACCCACAAA	47	166
1263022	161484	161501	7255	7272	AAGATTTACTGGCCTACC	63	167
1263028	161496	161513	7267	7284	TTTGCACCTGCTAAGATT	68	168
1263034	161502	161519	7273	7290	ATGAAGTTTGCACCTGCT	75	169
1263040	161602	161619	7373	7390	AGTCTTCTGGCGGTGGAG	61	170
1263046	161608	161625	7379	7396	CAATTCAGTCTTCTGGCG	73	171
1263052	161668	161685	7439	7456	GCCGAAGATGGCTAAACA	102	172
1263058	161674	161691	7445	7462	CTGAGAGCCGAAGATGGC	83	173
1263064	161681	161698	7452	7469	AACCTTGCTGAGAGCCGA	109	174
1263070	161691	161708	7462	7479	ATACAGTGTCAACCTTGC	93	175
1263076	161744	161761	7515	7532	TGCACCACAGGGTAAAAT	53	176
1263082	161780	161797	7551	7568	ATACTGTGCTTAGGTCAT	52	177
1263088	161829	161846	7600	7617	TGTAAAGCTTGCACTCTA	48	178
1263094	161867	161884	7638	7655	ACTATCTATAAATGGTAC	135	179
1263100	161880	161897	7651	7668	TGATAGCATCCAAACTAT	56	180
1263106	161888	161905	7659	7676	ACATGCATTGATAGCATC	29	181
1263112	161966	161983	7737	7754	TTACCACTGACATATGGT	42	182
1263118	162039	162056	7810	7827	AAGCTGTTAAAGTGCTGC	53	183
1263124	162093	162110	7864	7881	TACAGTCTGGCTATATAC	118	184
1263130	162099	162116	7870	7887	TGTCTGTACAGTCTGGCT	34	185
1263136	162130	162147	7901	7918	TAATAGGTTAAGCAGTGT	129	186
1263142	162250	162267	8021	8038	GATTGTGATATCAACCTG	53	187
1263148	162405	162422	8176	8193	GTGAACCTATTTTGCTCC	57	188
1263154	162483	162500	8254	8271	TTAGTGCAGGTACTACCA	72	189
1263160	162489	162506	8260	8277	ATTCAGTTAGTGCAGGTA	130	190
1263166	162510	162527	8281	8298	ATAACATAAGCACTACCT	75	191
1263172	162579	162596	8350	8367	GAACAATCTAGAGCAGCA	76	192
1263178	162641	162658	8412	8429	CTATATAAGTTGACTACT	81	193
1263184	162657	162674	8428	8445	GTCCTGATGTAATTGACT	78	194
1263190	162729	162746	8500	8517	CGAATACAGTTTATCTAA	122	195
1263196	162736	162753	8507	8524	CAGTTCACGAATACAGTT	103	196
1263202	162742	162759	8513	8530	AGCATGCAGTTCACGAAT	98	197

表 3 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262741	2871	2888	N/A	N/A	GGAACAGTTCCATGAGTT	99	198
1262747	2877	2894	N/A	N/A	TCTGGAGGAACAGTTCCA	28	199
1262753	2883	2900	N/A	N/A	TGTTAATCTGGAGGAACA	60	200
1262759	2889	2906	N/A	N/A	CTGAAGTGTTAATCTGGA	78	201
1262765	2895	2912	N/A	N/A	TAACCCCTGAAGTGTTAA	119	202
1262771	2901	2918	N/A	N/A	CTTCCATAACCCCTGAAG	61	203
1262777	2907	2924	N/A	N/A	CTCCAGCTTCCATAACCC	147	204
1262783	2920	2937	N/A	N/A	AAAGCTCAGCTTCCTCCA	56	205
1262789	2927	2944	N/A	N/A	TGTAGTAAAAGCTCAGCT	125	206
1262795	2936	2953	N/A	N/A	CCCAAAAGATGTAGTAAA	56	207
1262801	78351	78368	469	486	GCACATTTTAATTACCAT	83	208
1262807	78361	78378	479	496	TTGTCATCCTGCACATTT	92	209
1262813	160820	160837	6591	6608	AAAGGAGTCCTGTTGATA	76	210
1262819	160829	160846	6600	6617	TGACCTCCTAAAGGAGTC	115	211
1262825	160841	160858	6612	6629	TCAGTTTGGCATTGACCT	60	212
1262831	160880	160897	6651	6668	TTGTAGGCACTGACCTTA	45	213
1262837	160886	160903	6657	6674	GTCTTATTGTAGGCACTG	62	214
1262843	160950	160967	6721	6738	GTAACCTCCTGTCAAGGT	60	215
1262849	160957	160974	6728	6745	GAGAACAGTAACCTCCTG	61	216
1262855	160970	160987	6741	6758	GTCAGCTGGTAGTGAGAA	104	217
1262861	160996	161013	6767	6784	CCATTGTGCATCTTATCT	66	218
1262867	161004	161021	6775	6792	CTGACTAGCCATTGTGCA	48	219
1262873	161010	161027	6781	6798	TACAGTCTGACTAGCCAT	57	220
1262879	161016	161033	6787	6804	GGTCCCTACAGTCTGACT	92	221
1262885	161022	161039	6793	6810	GAAACTGGTCCCTACAGT	64	222
1262891	161033	161050	6804	6821	TTGCACCCCTTGAAACTG	108	223
1262897	161039	161056	6810	6827	ACAGGTTTGCACCCCTTG	74	224
1262903	161089	161106	6860	6877	TGGATACAATTACTACAC	58	225
1262909	161227	161244	6998	7015	GGTCCTTAGCCTATTTCT	59	226
1262915	161233	161250	7004	7021	TATAGAGGTCCTTAGCCT	32	227
1262921	161243	161260	7014	7031	GCATACCTGTTATAGAGG	107	228
1262927	161254	161271	7025	7042	CCCCCCAGGTGGCATACC	46	229
1262933	161260	161277	7031	7048	GCCATACCCCCCAGGTGG	66	230
1262939	161266	161283	7037	7054	GTGGTTGCCATACCCCCC	65	231
1262945	161272	161289	7043	7060	GGCCATGTGGTTGCCATA	53	232
1262951	161295	161312	7066	7083	CCACGACTTTGTGTAGCT	88	233
1262957	161301	161318	7072	7089	TGCAAACCACGACTTTGT	57	234
1262963	161307	161324	7078	7095	CCCTCATGCAAACCACGA	61	235
1262969	161315	161332	7086	7103	GCAGCATGCCCTCATGCA	80	236
1262975	161321	161338	7092	7109	CTAAGTGCAGCATGCCCT	54	237
1262981	161333	161350	7104	7121	CATGCATGATCTCTAAGT	45	238
1262987	161402	161419	7173	7190	TTATCACCCAATTACCCC	75	239
1262993	161408	161425	7179	7196	CTCCACTTATCACCCAAT	107	240
1262999	161415	161432	7186	7203	AAAGCACCTCCACTTATC	113	241
1263005	161442	161459	7213	7230	GGCTGGATTTCGCAAAAC	96	242
1263011	161473	161490	7244	7261	GCCTACCCACAAATAATC	114	243
1263017	161479	161496	7250	7267	TTACTGGCCTACCCACAA	72	244
1263023	161485	161502	7256	7273	TAAGATTTACTGGCCTAC	53	245
1263029	161497	161514	7268	7285	GTTTGCACCTGCTAAGAT	46	246
1263035	161503	161520	7274	7291	AATGAAGTTTGCACCTGC	55	247
1263041	161603	161620	7374	7391	CAGTCTTCTGGCGGTGGA	58	248
1263047	161611	161628	7382	7399	GGTCAATTCAGTCTTCTG	76	249
1263053	161669	161686	7440	7457	AGCCGAAGATGGCTAAAC	35	250
1263059	161675	161692	7446	7463	GCTGAGAGCCGAAGATGG	56	251
1263065	161682	161699	7453	7470	CAACCTTGCTGAGAGCCG	36	252
1263071	161692	161709	7463	7480	TATACAGTGTCAACCTTG	44	253
1263077	161745	161762	7516	7533	GTGCACCACAGGGTAAAA	69	254
1263083	161781	161798	7552	7569	AATACTGTGCTTAGGTCA	79	255
1263089	161830	161847	7601	7618	GTGTAAAGCTTGCACTCT	63	256
1263095	161875	161892	7646	7663	GCATCCAAACTATCTATA	84	257
1263101	161881	161898	7652	7669	TTGATAGCATCCAAACTA	51	258
1263107	161891	161908	7662	7679	TAAACATGCATTGATAGC	68	259
1263113	161968	161985	7739	7756	CTTTACCACTGACATATG	162	260
1263119	162079	162096	7850	7867	ATACCATATGTTATCCAC	93	261
1263125	162094	162111	7865	7882	GTACAGTCTGGCTATATA	74	262
1263131	162101	162118	7872	7889	CATGTCTGTACAGTCTGG	76	263
1263137	162131	162148	7902	7919	TTAATAGGTTAAGCAGTG	115	264
1263143	162251	162268	8022	8039	TGATTGTGATATCAACCT	54	265
1263149	162406	162423	8177	8194	CGTGAACCTATTTTGCTC	62	266
1263155	162484	162501	8255	8272	GTTAGTGCAGGTACTACC	48	267
1263161	162490	162507	8261	8278	AATTCAGTTAGTGCAGGT	51	268
1263167	162541	162558	8312	8329	CATAAACCGAAGTCAGAA	63	269
1263173	162583	162600	8354	8371	TTTAGAACAATCTAGAGC	76	270
1263179	162642	162659	8413	8430	ACTATATAAGTTGACTAC	47	271
1263185	162692	162709	8463	8480	GAGCCTATGGTTTGCTTC	83	272
1263191	162730	162747	8501	8518	ACGAATACAGTTTATCTA	124	273
1263197	162737	162754	8508	8525	GCAGTTCACGAATACAGT	83	274
1263203	162743	162760	8514	8531	CAGCATGCAGTTCACGAA	79	275

表 4 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262742	2872	2889	N/A	N/A	AGGAACAGTTCCATGAGT	38	276
1262748	2878	2895	N/A	N/A	ATCTGGAGGAACAGTTCC	48	277
1262754	2884	2901	N/A	N/A	GTGTTAATCTGGAGGAAC	69	278
1262760	2890	2907	N/A	N/A	CCTGAAGTGTTAATCTGG	37	279
1262766	2896	2913	N/A	N/A	ATAACCCCTGAAGTGTTA	63	280
1262772	2902	2919	N/A	N/A	GCTTCCATAACCCCTGAA	58	281
1262778	2908	2925	N/A	N/A	CCTCCAGCTTCCATAACC	68	282
1262784	2921	2938	N/A	N/A	AAAAGCTCAGCTTCCTCC	55	283
1262790	2928	2945	N/A	N/A	ATGTAGTAAAAGCTCAGC	75	284
1262796	2937	2954	N/A	N/A	CCCCAAAAGATGTAGTAA	76	285
1262802	78353	78370	471	488	CTGCACATTTTAATTACC	80	286
1262808	78362	78379	480	497	CTTGTCATCCTGCACATT	48	287
1262814	160821	160838	6592	6609	TAAAGGAGTCCTGTTGAT	56	288
1262820	160836	160853	6607	6624	TTGGCATTGACCTCCTAA	79	289
1262826	160842	160859	6613	6630	GTCAGTTTGGCATTGACC	54	290
1262832	160881	160898	6652	6669	ATTGTAGGCACTGACCTT	43	291
1262838	160887	160904	6658	6675	TGTCTTATTGTAGGCACT	69	292
1262844	160951	160968	6722	6739	AGTAACCTCCTGTCAAGG	70	293
1262850	160959	160976	6730	6747	GTGAGAACAGTAACCTCC	72	294
1262856	160971	160988	6742	6759	TGTCAGCTGGTAGTGAGA	71	295
1262862	160997	161014	6768	6785	GCCATTGTGCATCTTATC	40	296
1262868	161005	161022	6776	6793	TCTGACTAGCCATTGTGC	54	297
1262874	161011	161028	6782	6799	CTACAGTCTGACTAGCCA	72	298
1262880	161017	161034	6788	6805	TGGTCCCTACAGTCTGAC	66	299
1262886	161028	161045	6799	6816	CCCCTTGAAACTGGTCCC	52	300
1262892	161034	161051	6805	6822	TTTGCACCCCTTGAAACT	75	301
1262898	161040	161057	6811	6828	CACAGGTTTGCACCCCTT	57	302
1262904	161090	161107	6861	6878	GTGGATACAATTACTACA	42	303
1262910	161228	161245	6999	7016	AGGTCCTTAGCCTATTTC	44	304
1262916	161238	161255	7009	7026	CCTGTTATAGAGGTCCTT	41	305
1262922	161244	161261	7015	7032	GGCATACCTGTTATAGAG	86	306
1262928	161255	161272	7026	7043	ACCCCCCAGGTGGCATAC	56	307
1262934	161261	161278	7032	7049	TGCCATACCCCCCAGGTG	45	308
1262940	161267	161284	7038	7055	TGTGGTTGCCATACCCCC	66	309
1262946	161275	161292	7046	7063	GAGGGCCATGTGGTTGCC	55	310
1262952	161296	161313	7067	7084	ACCACGACTTTGTGTAGC	40	311
1262958	161302	161319	7073	7090	ATGCAAACCACGACTTTG	67	312
1262964	161308	161325	7079	7096	GCCCTCATGCAAACCACG	63	313
1262970	161316	161333	7087	7104	TGCAGCATGCCCTCATGC	46	314
1262976	161322	161339	7093	7110	TCTAAGTGCAGCATGCCC	83	315
1262982	161334	161351	7105	7122	TCATGCATGATCTCTAAG	63	316
1262988	161403	161420	7174	7191	CTTATCACCCAATTACCC	61	317
1262994	161409	161426	7180	7197	CCTCCACTTATCACCCAA	57	318
1263000	161435	161452	7206	7223	TTTCGCAAAACAAGATCA	48	319
1263006	161443	161460	7214	7231	GGGCTGGATTTCGCAAAA	87	320
1263012	161474	161491	7245	7262	GGCCTACCCACAAATAAT	66	321
1263018	161480	161497	7251	7268	TTTACTGGCCTACCCACA	44	322
1263024	161488	161505	7259	7276	TGCTAAGATTTACTGGCC	67	323
1263030	161498	161515	7269	7286	AGTTTGCACCTGCTAAGA	55	324
1263036	161504	161521	7275	7292	GAATGAAGTTTGCACCTG	77	325
1263042	161604	161621	7375	7392	TCAGTCTTCTGGCGGTGG	81	326
1263048	161659	161676	7430	7447	GGCTAAACAAAGTGCAGG	57	327
1263054	161670	161687	7441	7458	GAGCCGAAGATGGCTAAA	56	328
1263060	161677	161694	7448	7465	TTGCTGAGAGCCGAAGAT	66	329
1263066	161684	161701	7455	7472	GTCAACCTTGCTGAGAGC	59	330
1263072	161693	161710	7464	7481	ATATACAGTGTCAACCTT	77	331
1263078	161746	161763	7517	7534	CGTGCACCACAGGGTAAA	89	332
1263084	161782	161799	7553	7570	AAATACTGTGCTTAGGTC	50	333
1263090	161833	161850	7604	7621	CCTGTGTAAAGCTTGCAC	60	334
1263096	161876	161893	7647	7664	AGCATCCAAACTATCTAT	78	335
1263102	161883	161900	7654	7671	CATTGATAGCATCCAAAC	38	336
1263108	161907	161924	7678	7695	CAGCAGCATGGTAATATA	59	337
1263114	162026	162043	7797	7814	GCTGCAAACTATTGCTTA	49	338
1263120	162089	162106	7860	7877	GTCTGGCTATATACCATA	71	339
1263126	162095	162112	7866	7883	TGTACAGTCTGGCTATAT	64	340
1263132	162102	162119	7873	7890	ACATGTCTGTACAGTCTG	98	341
1263138	162244	162261	8015	8032	GATATCAACCTGAAGATA	52	342
1263144	162252	162269	8023	8040	GTGATTGTGATATCAACC	87	343
1263150	162478	162495	8249	8266	GCAGGTACTACCAGAAAT	91	344
1263156	162485	162502	8256	8273	AGTTAGTGCAGGTACTAC	47	345
1263162	162491	162508	8262	8279	CAATTCAGTTAGTGCAGG	43	346
1263168	162542	162559	8313	8330	ACATAAACCGAAGTCAGA	65	347
1263174	162596	162613	8367	8384	AGCCCACATTCTATTTAG	53	348
1263180	162643	162660	8414	8431	GACTATATAAGTTGACTA	35	349
1263186	162693	162710	8464	8481	GGAGCCTATGGTTTGCTT	67	350
1263192	162731	162748	8502	8519	CACGAATACAGTTTATCT	56	351
1263198	162738	162755	8509	8526	TGCAGTTCACGAATACAG	45	352
1263204	162744	162761	8515	8532	CCAGCATGCAGTTCACGA	61	353

表 5 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262743	2873	2890	N/A	N/A	GAGGAACAGTTCCATGAG	65	354
1262749	2879	2896	N/A	N/A	AATCTGGAGGAACAGTTC	58	355
1262755	2885	2902	N/A	N/A	AGTGTTAATCTGGAGGAA	47	356
1262761	2891	2908	N/A	N/A	CCCTGAAGTGTTAATCTG	68	357
1262767	2897	2914	N/A	N/A	CATAACCCCTGAAGTGTT	88	358
1262773	2903	2920	N/A	N/A	AGCTTCCATAACCCCTGA	36	359
1262779	2909	2926	N/A	N/A	TCCTCCAGCTTCCATAAC	52	360
1262785	2923	2940	N/A	N/A	GTAAAAGCTCAGCTTCCT	117	361
1262791	2929	2946	N/A	N/A	GATGTAGTAAAAGCTCAG	84	362
1262797	78337	78354	455	472	CCATTTATTCTGCATATG	111	363
1262803	78354	78371	472	489	CCTGCACATTTTAATTAC	84	364
1262809	160783	160800	6554	6571	GGCTGTAAACAATTTGTC	106	365
1262815	160822	160839	6593	6610	CTAAAGGAGTCCTGTTGA	122	366
1262821	160837	160854	6608	6625	TTTGGCATTGACCTCCTA	85	367
1262827	160843	160860	6614	6631	AGTCAGTTTGGCATTGAC	88	368
1262833	160882	160899	6653	6670	TATTGTAGGCACTGACCT	67	369
1262839	160888	160905	6659	6676	CTGTCTTATTGTAGGCAC	45	370
1262845	160952	160969	6723	6740	CAGTAACCTCCTGTCAAG	80	371
1262851	160960	160977	6731	6748	AGTGAGAACAGTAACCTC	47	372
1262857	160972	160989	6743	6760	GTGTCAGCTGGTAGTGAG	69	373
1262863	160998	161015	6769	6786	AGCCATTGTGCATCTTAT	127	374
1262869	161006	161023	6777	6794	GTCTGACTAGCCATTGTG	63	375
1262875	161012	161029	6783	6800	CCTACAGTCTGACTAGCC	104	376
1262881	161018	161035	6789	6806	CTGGTCCCTACAGTCTGA	97	377
1262887	161029	161046	6800	6817	ACCCCTTGAAACTGGTCC	72	378
1262893	161035	161052	6806	6823	GTTTGCACCCCTTGAAAC	63	379
1262899	161041	161058	6812	6829	TCACAGGTTTGCACCCCT	56	380
1262905	161091	161108	6862	6879	AGTGGATACAATTACTAC	67	381
1262911	161229	161246	7000	7017	GAGGTCCTTAGCCTATTT	78	382
1262917	161239	161256	7010	7027	ACCTGTTATAGAGGTCCT	69	383
1262923	161245	161262	7016	7033	TGGCATACCTGTTATAGA	75	384
1262929	161256	161273	7027	7044	TACCCCCCAGGTGGCATA	94	385
1262935	161262	161279	7033	7050	TTGCCATACCCCCCAGGT	105	386
1262941	161268	161285	7039	7056	ATGTGGTTGCCATACCCC	64	387
1262947	161289	161306	7060	7077	CTTTGTGTAGCTGGGAGG	61	388
1262953	161297	161314	7068	7085	AACCACGACTTTGTGTAG	79	389
1262959	161303	161320	7074	7091	CATGCAAACCACGACTTT	99	390
1262965	161310	161327	7081	7098	ATGCCCTCATGCAAACCA	61	391
1262971	161317	161334	7088	7105	GTGCAGCATGCCCTCATG	63	392
1262977	161323	161340	7094	7111	CTCTAAGTGCAGCATGCC	69	393
1262983	161335	161352	7106	7123	CTCATGCATGATCTCTAA	70	394
1262989	161404	161421	7175	7192	ACTTATCACCCAATTACC	70	395
1262995	161410	161427	7181	7198	ACCTCCACTTATCACCCA	63	396
1263001	161437	161454	7208	7225	GATTTCGCAAAACAAGAT	63	397
1263007	161459	161476	7230	7247	AATCTACTTGGTCTAGGG	87	398
1263013	161475	161492	7246	7263	TGGCCTACCCACAAATAA	58	399
1263019	161481	161498	7252	7269	ATTTACTGGCCTACCCAC	139	400
1263025	161493	161510	7264	7281	GCACCTGCTAAGATTTAC	84	401
1263031	161499	161516	7270	7287	AAGTTTGCACCTGCTAAG	82	402
1263037	161530	161547	7301	7318	CATAACATTTATGACTCC	78	403
1263043	161605	161622	7376	7393	TTCAGTCTTCTGGCGGTG	58	404
1263049	161662	161679	7433	7450	GATGGCTAAACAAAGTGC	67	405
1263055	161671	161688	7442	7459	AGAGCCGAAGATGGCTAA	68	406
1263061	161678	161695	7449	7466	CTTGCTGAGAGCCGAAGA	87	407
1263067	161687	161704	7458	7475	AGTGTCAACCTTGCTGAG	58	408
1263073	161694	161711	7465	7482	CATATACAGTGTCAACCT	73	409
1263079	161777	161794	7548	7565	CTGTGCTTAGGTCATTAT	76	410
1263085	161825	161842	7596	7613	AAGCTTGCACTCTACATT	78	411
1263091	161834	161851	7605	7622	ACCTGTGTAAAGCTTGCA	97	412
1263097	161877	161894	7648	7665	TAGCATCCAAACTATCTA	72	413
1263103	161884	161901	7655	7672	GCATTGATAGCATCCAAA	50	414
1263109	161911	161928	7682	7699	GATACAGCAGCATGGTAA	64	415
1263115	162028	162045	7799	7816	GTGCTGCAAACTATTGCT	68	416
1263121	162090	162107	7861	7878	AGTCTGGCTATATACCAT	100	417
1263127	162096	162113	7867	7884	CTGTACAGTCTGGCTATA	67	418
1263133	162103	162120	7874	7891	AACATGTCTGTACAGTCT	98	419
1263139	162246	162263	8017	8034	GTGATATCAACCTGAAGA	107	420
1263145	162253	162270	8024	8041	AGTGATTGTGATATCAAC	92	421
1263151	162480	162497	8251	8268	GTGCAGGTACTACCAGAA	67	422
1263157	162486	162503	8257	8274	CAGTTAGTGCAGGTACTA	88	423
1263163	162492	162509	8263	8280	TCAATTCAGTTAGTGCAG	42	424
1263169	162543	162560	8314	8331	AACATAAACCGAAGTCAG	60	425
1263175	162636	162653	8407	8424	TAAGTTGACTACTCTGTT	66	426
1263181	162645	162662	8416	8433	TTGACTATATAAGTTGAC	102	427
1263187	162694	162711	8465	8482	AGGAGCCTATGGTTTGCT	102	428
1263193	162732	162749	8503	8520	TCACGAATACAGTTTATC	74	429
1263199	162739	162756	8510	8527	ATGCAGTTCACGAATACA	44	430
1263205	162745	162762	8516	8533	TCCAGCATGCAGTTCACG	61	431

表 6 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1262744	2874	2891	N/A	N/A	GGAGGAACAGTTCCATGA	33	432
1262750	2880	2897	N/A	N/A	TAATCTGGAGGAACAGTT	56	433
1262756	2886	2903	N/A	N/A	AAGTGTTAATCTGGAGGA	57	434
1262762	2892	2909	N/A	N/A	CCCCTGAAGTGTTAATCT	34	435
1262768	2898	2915	N/A	N/A	CCATAACCCCTGAAGTGT	57	436
1262774	2904	2921	N/A	N/A	CAGCTTCCATAACCCCTG	52	437
1262780	2910	2927	N/A	N/A	TTCCTCCAGCTTCCATAA	109	438
1262786	2924	2941	N/A	N/A	AGTAAAAGCTCAGCTTCC	53	439
1262792	2930	2947	N/A	N/A	AGATGTAGTAAAAGCTCA	57	440
1262798	78338	78355	456	473	ACCATTTATTCTGCATAT	43	441
1262804	78358	78375	476	493	TCATCCTGCACATTTTAA	77	442
1262810	160817	160834	6588	6605	GGAGTCCTGTTGATAAAA	111	443
1262816	160823	160840	6594	6611	CCTAAAGGAGTCCTGTTG	30	444
1262822	160838	160855	6609	6626	GTTTGGCATTGACCTCCT	62	445
1262828	160869	160886	6640	6657	GACCTTAAGGAGATTTGT	66	446
1262834	160883	160900	6654	6671	TTATTGTAGGCACTGACC	52	447
1262840	160889	160906	6660	6677	ACTGTCTTATTGTAGGCA	51	448
1262846	160953	160970	6724	6741	ACAGTAACCTCCTGTCAA	49	449
1262852	160961	160978	6732	6749	TAGTGAGAACAGTAACCT	97	450
1262858	160973	160990	6744	6761	AGTGTCAGCTGGTAGTGA	102	451
1262864	160999	161016	6770	6787	TAGCCATTGTGCATCTTA	79	452
1262870	161007	161024	6778	6795	AGTCTGACTAGCCATTGT	41	453
1262876	161013	161030	6784	6801	CCCTACAGTCTGACTAGC	170	454
1262882	161019	161036	6790	6807	ACTGGTCCCTACAGTCTG	40	455
1262888	161030	161047	6801	6818	CACCCCTTGAAACTGGTC	66	456
1262894	161036	161053	6807	6824	GGTTTGCACCCCTTGAAA	115	457
1262900	161043	161060	6814	6831	AATCACAGGTTTGCACCC	70	458
1262906	161146	161163	6917	6934	AATCCACTAACAGATTCC	123	459
1262912	161230	161247	7001	7018	AGAGGTCCTTAGCCTATT	44	460
1262918	161240	161257	7011	7028	TACCTGTTATAGAGGTCC	56	461
1262924	161246	161263	7017	7034	GTGGCATACCTGTTATAG	88	462
1262930	161257	161274	7028	7045	ATACCCCCCAGGTGGCAT	98	463
1262936	161263	161280	7034	7051	GTTGCCATACCCCCCAGG	54	464
1262942	161269	161286	7040	7057	CATGTGGTTGCCATACCC	45	465
1262948	161292	161309	7063	7080	CGACTTTGTGTAGCTGGG	35	466
1262954	161298	161315	7069	7086	AAACCACGACTTTGTGTA	93	467
1262960	161304	161321	7075	7092	TCATGCAAACCACGACTT	73	468
1262966	161312	161329	7083	7100	GCATGCCCTCATGCAAAC	43	469
1262972	161318	161335	7089	7106	AGTGCAGCATGCCCTCAT	76	470
1262978	161324	161341	7095	7112	TCTCTAAGTGCAGCATGC	110	471
1262984	161399	161416	7170	7187	TCACCCAATTACCCCTCC	66	472
1262990	161405	161422	7176	7193	CACTTATCACCCAATTAC	59	473
1262996	161411	161428	7182	7199	CACCTCCACTTATCACCC	69	474
1263002	161438	161455	7209	7226	GGATTTCGCAAAACAAGA	58	475
1263008	161460	161477	7231	7248	TAATCTACTTGGTCTAGG	42	476
1263014	161476	161493	7247	7264	CTGGCCTACCCACAAATA	104	477
1263020	161482	161499	7253	7270	GATTTACTGGCCTACCCA	35	478
1263026	161494	161511	7265	7282	TGCACCTGCTAAGATTTA	30	479
1263032	161500	161517	7271	7288	GAAGTTTGCACCTGCTAA	18	480
1263038	161599	161616	7370	7387	CTTCTGGCGGTGGAGGGT	97	481
1263044	161606	161623	7377	7394	ATTCAGTCTTCTGGCGGT	82	482
1263050	161666	161683	7437	7454	CGAAGATGGCTAAACAAA	66	483
1263056	161672	161689	7443	7460	GAGAGCCGAAGATGGCTA	58	484
1263062	161679	161696	7450	7467	CCTTGCTGAGAGCCGAAG	101	485
1263068	161689	161706	7460	7477	ACAGTGTCAACCTTGCTG	67	486
1263074	161695	161712	7466	7483	ACATATACAGTGTCAACC	76	487
1263080	161778	161795	7549	7566	ACTGTGCTTAGGTCATTA	75	488
1263086	161827	161844	7598	7615	TAAAGCTTGCACTCTACA	39	489
1263092	161835	161852	7606	7623	TACCTGTGTAAAGCTTGC	136	490
1263098	161878	161895	7649	7666	ATAGCATCCAAACTATCT	125	491
1263104	161885	161902	7656	7673	TGCATTGATAGCATCCAA	42	492
1263110	161912	161929	7683	7700	AGATACAGCAGCATGGTA	32	493
1263116	162029	162046	7800	7817	AGTGCTGCAAACTATTGC	67	494
1263122	162091	162108	7862	7879	CAGTCTGGCTATATACCA	55	495
1263128	162097	162114	7868	7885	TCTGTACAGTCTGGCTAT	128	496
1263134	162128	162145	7899	7916	ATAGGTTAAGCAGTGTGT	44	497
1263140	162247	162264	8018	8035	TGTGATATCAACCTGAAG	74	498
1263146	162336	162353	8107	8124	ATCTACAACTACCCAGTC	64	499
1263152	162481	162498	8252	8269	AGTGCAGGTACTACCAGA	76	500
1263158	162487	162504	8258	8275	TCAGTTAGTGCAGGTACT	60	501
1263164	162497	162514	8268	8285	TACCTTCAATTCAGTTAG	48	502
1263170	162572	162589	8343	8360	CTAGAGCAGCATTACTCC	42	503
1263176	162637	162654	8408	8425	ATAAGTTGACTACTCTGT	69	504
1263182	162655	162672	8426	8443	CCTGATGTAATTGACTAT	55	505
1263188	162695	162712	8466	8483	GAGGAGCCTATGGTTTGC	84	506
1263194	162734	162751	8505	8522	GTTCACGAATACAGTTTA	51	507
1263200	162740	162757	8511	8528	CATGCAGTTCACGAATAC	78	508
1263206	162767	162784	8538	8555	ATTTAGCATAATAGTAGC	78	509

實例 2 ：靶向人類 SCN1A 之經修飾之寡核苷酸在 HepG2 細胞中之活性，單劑量，在體外

合成了與SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸且測試其在體外對SCN1A RNA水準的影響。在使用相同培養條件的一系列實驗中測試了經修飾之寡核苷酸。

「起始位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。如下表中所示，經修飾之寡核苷酸與以下互補：人類SCN1A基因組序列，在本文中命名為SEQ ID NO: 1 (上文所述)；或人類SCN1A mRNA，在本文中命名為SEQ ID NO: 2 (上文所述)；或兩者。『N/A』指示經修飾之寡核苷酸不以100%互補性與該特定靶序列互補。

使用電穿孔，用15,000 nM經修飾之寡核苷酸轉染以每孔20,000個細胞之密度的經培養之HepG2細胞。在約24小時之處理期之後，自細胞分離出RNA且藉由定量即時RTPCR量測SCN1A RNA水準。使用人類引子探針組RTS48189 (正向序CTATACCTCGACCAGGAAACAAA，在本文中命名為SEQ ID NO: 18；反向序列TGACCATGTTAAGACAGATGAGAA，在本文中命名為SEQ ID NO: 19；探針序列TGTCTGGTTACGAAGTCAAAGACCATTCC，在本文中命名為SEQ ID NO: 20)量測全長SCN1A RNA水準。如藉由RIBOGREEN®所量測，將SCN1A RNA水準正規化至總RNA含量。SCN1A RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)。如下表中所示，與未經處理之對照相比，某些與SCN1A RNA互補的經修飾之寡核苷酸使人類SCN1A RNA之量增加。表7-11中之各者表示不同的實驗。表 7 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1342105	144706	144723	N/A	N/A	TTGGAGCAAGATTATCCT	111	510
1342107	144766	144783	N/A	N/A	GTAATACAGTACCCATAA	61	511
1342109	144753	144770	N/A	N/A	CATAATAAAGGGCTCAGG	112	512
1342118	144686	144703	N/A	N/A	ACAAAATAGAAATATATA	173	513
1366952	95466	95483	N/A	N/A	AACACACAAAAGAAAATC	136	514
1366958	144722	144739	N/A	N/A	CTCCACCCCATCCAAGTT	114	515
1366964	152881	152898	N/A	N/A	GAGCCTGAAAGAGGCTGA	59	516
1366966	91106	91123	N/A	N/A	GAAAAAGAAATATTAGGG	89	517
1366970	91360	91377	N/A	N/A	AAAGTGGGCACATCACCT	57	518
1366971	144762	144779	N/A	N/A	TACAGTACCCATAATAAA	91	519
1366976	152950	152967	N/A	N/A	AAAATACTACATCTTACA	57	520
1366978	91136	91153	N/A	N/A	TGATGAGAGCAAAACTCC	76	521
1366981	110791	110808	N/A	N/A	TTTGAAGACTAAACACAT	82	522
1366982	144710	144727	N/A	N/A	CAAGTTGGAGCAAGATTA	138	523
1366983	110807	110824	N/A	N/A	TTTTTCAAGCAGAAAATT	66	524
1366988	152876	152893	N/A	N/A	TGAAAGAGGCTGAAATCA	73	525
1366991	152924	152941	N/A	N/A	AAGAGCAAAGTTGGAATG	118	526
1367000	110787	110804	N/A	N/A	AAGACTAAACACATTTAC	83	527
1367003	95470	95487	N/A	N/A	AAGGAACACACAAAAGAA	54	528
1367004	144682	144699	N/A	N/A	AATAGAAATATATAGTTT	85	529
1367005	95434	95451	N/A	N/A	ATATTACAAAAAGCTAAC	55	530
1367011	110827	110844	N/A	N/A	ACACAATTAAATGTAAAC	167	531
1367016	110823	110840	N/A	N/A	AATTAAATGTAAACAGTT	85	532
1367021	95450	95467	N/A	N/A	TCAAAATCCAAGTGTTAT	67	533
1367022	152955	152972	N/A	N/A	GATAGAAAATACTACATC	83	534
1367024	152941	152958	N/A	N/A	CATCTTACAAAGTTTTGA	53	535
1367035	152937	152954	N/A	N/A	TTACAAAGTTTTGAAGAG	66	536
1367038	152911	152928	N/A	N/A	GAATGAGCATGAATTTCA	68	537
1367045	95458	95475	N/A	N/A	AAAGAAAATCAAAATCCA	108	538
1367047	144758	144775	N/A	N/A	GTACCCATAATAAAGGGC	61	539
1367048	152885	152902	N/A	N/A	CTTGGAGCCTGAAAGAGG	74	540
1367049	110799	110816	N/A	N/A	GCAGAAAATTTGAAGACT	83	541
1367053	110819	110836	N/A	N/A	AAATGTAAACAGTTTTTC	89	542
1367066	152907	152924	N/A	N/A	GAGCATGAATTTCAGTTT	78	543
1367068	152959	152976	N/A	N/A	GGTTGATAGAAAATACTA	88	544
1367073	95454	95471	N/A	N/A	AAAATCAAAATCCAAGTG	113	545
1367084	144698	144715	N/A	N/A	AGATTATCCTATACAAAA	71	546
1367088	95446	95463	N/A	N/A	AATCCAAGTGTTATATTA	80	547
1367090	95462	95479	N/A	N/A	CACAAAAGAAAATCAAAA	69	548
1367097	95422	95439	N/A	N/A	GCTAACATTGAAAAGCCC	55	549
1367098	144714	144731	N/A	N/A	CATCCAAGTTGGAGCAAG	147	550
1367102	152895	152912	N/A	N/A	CAGTTTAGGTCTTGGAGC	76	551
1367103	110795	110812	N/A	N/A	AAAATTTGAAGACTAAAC	44	552
1367108	152903	152920	N/A	N/A	ATGAATTTCAGTTTAGGT	77	553
1367109	152899	152916	N/A	N/A	ATTTCAGTTTAGGTCTTG	69	554
1367113	152946	152963	N/A	N/A	TACTACATCTTACAAAGT	106	555
1367116	95438	95455	N/A	N/A	TGTTATATTACAAAAAGC	77	556
1367123	110803	110820	N/A	N/A	TCAAGCAGAAAATTTGAA	95	557
1367124	152928	152945	N/A	N/A	TTTGAAGAGCAAAGTTGG	75	558
1367127	91140	91157	N/A	N/A	TGGGTGATGAGAGCAAAA	111	559
1367140	110771	110788	N/A	N/A	ACCTTCCAATATGCTTAC	77	560
1367141	144690	144707	N/A	N/A	CTATACAAAATAGAAATA	94	561
1367145	91144	91161	N/A	N/A	AGCCTGGGTGATGAGAGC	69	562
1367146	152932	152949	N/A	N/A	AAGTTTTGAAGAGCAAAG	75	563
1367147	95478	95495	N/A	N/A	TTATTGTTAAGGAACACA	121	564
1367150	144694	144711	N/A	N/A	TATCCTATACAAAATAGA	57	565
1367151	110775	110792	N/A	N/A	ATTTACCTTCCAATATGC	77	566
1367153	152867	152884	N/A	N/A	CTGAAATCAAATAAAATA	104	567
1367162	95426	95443	N/A	N/A	AAAAGCTAACATTGAAAA	63	568
1367163	144702	144719	N/A	N/A	AGCAAGATTATCCTATAC	139	569
1367165	110783	110800	N/A	N/A	CTAAACACATTTACCTTC	117	570
1367166	110811	110828	N/A	N/A	ACAGTTTTTCAAGCAGAA	118	571
1367171	91216	91233	N/A	N/A	AGGAGAACAGGAGAATCG	83	572
1367185	95442	95459	N/A	N/A	CAAGTGTTATATTACAAA	85	573
1367187	95474	95491	N/A	N/A	TGTTAAGGAACACACAAA	50	574
1367189	144718	144735	N/A	N/A	ACCCCATCCAAGTTGGAG	82	575
1367192	152872	152889	N/A	N/A	AGAGGCTGAAATCAAATA	90	576
1367193	152919	152936	N/A	N/A	CAAAGTTGGAATGAGCAT	84	577
1367195	91220	91237	N/A	N/A	AGGCAGGAGAACAGGAGA	83	578
1367196	152890	152907	N/A	N/A	TAGGTCTTGGAGCCTGAA	69	579
1367200	152915	152932	N/A	N/A	GTTGGAATGAGCATGAAT	88	580
1367203	110815	110832	N/A	N/A	GTAAACAGTTTTTCAAGC	63	581
1367205	144678	144695	N/A	N/A	GAAATATATAGTTTGTTA	63	582
1367215	152856	152873	N/A	N/A	TAAAATAGGTTTATATTT	71	583
1367229	110779	110796	N/A	N/A	ACACATTTACCTTCCAAT	72	584
1367231	95430	95447	N/A	N/A	TACAAAAAGCTAACATTG	121	585
1367240	152861	152878	N/A	N/A	TCAAATAAAATAGGTTTA	123	586

表 8 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1342110	144711	144728	N/A	N/A	CCAAGTTGGAGCAAGATT	67	587
1342115	144691	144708	N/A	N/A	CCTATACAAAATAGAAAT	25	588
1366953	95479	95496	N/A	N/A	GTTATTGTTAAGGAACAC	40	589
1366954	144703	144720	N/A	N/A	GAGCAAGATTATCCTATA	72	590
1366957	95447	95464	N/A	N/A	AAATCCAAGTGTTATATT	117	591
1366959	144699	144716	N/A	N/A	AAGATTATCCTATACAAA	54	592
1366967	91137	91154	N/A	N/A	GTGATGAGAGCAAAACTC	50	593
1366973	95455	95472	N/A	N/A	GAAAATCAAAATCCAAGT	43	594
1366974	152929	152946	N/A	N/A	TTTTGAAGAGCAAAGTTG	81	595
1366977	110828	110845	N/A	N/A	TACACAATTAAATGTAAA	213	596
1366980	152908	152925	N/A	N/A	TGAGCATGAATTTCAGTT	152	597
1366984	152904	152921	N/A	N/A	CATGAATTTCAGTTTAGG	124	598
1366990	95435	95452	N/A	N/A	TATATTACAAAAAGCTAA	62	599
1366992	110788	110805	N/A	N/A	GAAGACTAAACACATTTA	57	600
1366995	152878	152895	N/A	N/A	CCTGAAAGAGGCTGAAAT	66	601
1366999	91213	91230	N/A	N/A	AGAACAGGAGAATCGCTT	60	602
1367002	91217	91234	N/A	N/A	CAGGAGAACAGGAGAATC	44	603
1367014	152938	152955	N/A	N/A	CTTACAAAGTTTTGAAGA	155	604
1367015	152868	152885	N/A	N/A	GCTGAAATCAAATAAAAT	51	605
1367017	95443	95460	N/A	N/A	CCAAGTGTTATATTACAA	25	606
1367020	152896	152913	N/A	N/A	TCAGTTTAGGTCTTGGAG	109	607
1367023	110804	110821	N/A	N/A	TTCAAGCAGAAAATTTGA	62	608
1367031	152934	152951	N/A	N/A	CAAAGTTTTGAAGAGCAA	25	609
1367034	95451	95468	N/A	N/A	ATCAAAATCCAAGTGTTA	52	610
1367036	152947	152964	N/A	N/A	ATACTACATCTTACAAAG	85	611
1367050	95475	95492	N/A	N/A	TTGTTAAGGAACACACAA	24	612
1367054	91361	91378	N/A	N/A	CAAAGTGGGCACATCACC	69	613
1367056	152956	152973	N/A	N/A	TGATAGAAAATACTACAT	69	614
1367057	95463	95480	N/A	N/A	ACACAAAAGAAAATCAAA	63	615
1367058	152951	152968	N/A	N/A	GAAAATACTACATCTTAC	73	616
1367059	152920	152937	N/A	N/A	GCAAAGTTGGAATGAGCA	107	617
1367060	95459	95476	N/A	N/A	AAAAGAAAATCAAAATCC	44	618
1367061	144679	144696	N/A	N/A	AGAAATATATAGTTTGTT	56	619
1367069	152891	152908	N/A	N/A	TTAGGTCTTGGAGCCTGA	61	620
1367075	152882	152899	N/A	N/A	GGAGCCTGAAAGAGGCTG	62	621
1367078	144687	144704	N/A	N/A	TACAAAATAGAAATATAT	34	622
1367081	95471	95488	N/A	N/A	TAAGGAACACACAAAAGA	54	623
1367099	152887	152904	N/A	N/A	GTCTTGGAGCCTGAAAGA	96	624
1367107	144695	144712	N/A	N/A	TTATCCTATACAAAATAG	101	625
1367114	110792	110809	N/A	N/A	ATTTGAAGACTAAACACA	28	626
1367117	110780	110797	N/A	N/A	AACACATTTACCTTCCAA	45	627
1367121	144719	144736	N/A	N/A	CACCCCATCCAAGTTGGA	188	628
1367122	152925	152942	N/A	N/A	GAAGAGCAAAGTTGGAAT	56	629
1367125	91107	91124	N/A	N/A	AGAAAAAGAAATATTAGG	78	630
1367128	95427	95444	N/A	N/A	AAAAAGCTAACATTGAAA	65	631
1367129	110820	110837	N/A	N/A	TAAATGTAAACAGTTTTT	55	632
1367133	152858	152875	N/A	N/A	AATAAAATAGGTTTATAT	42	633
1367135	144759	144776	N/A	N/A	AGTACCCATAATAAAGGG	102	634
1367137	110816	110833	N/A	N/A	TGTAAACAGTTTTTCAAG	22	635
1367152	95423	95440	N/A	N/A	AGCTAACATTGAAAAGCC	46	636
1367155	144723	144740	N/A	N/A	GCTCCACCCCATCCAAGT	161	637
1367157	110784	110801	N/A	N/A	ACTAAACACATTTACCTT	82	638
1367161	152916	152933	N/A	N/A	AGTTGGAATGAGCATGAA	59	639
1367164	152900	152917	N/A	N/A	AATTTCAGTTTAGGTCTT	76	640
1367172	152912	152929	N/A	N/A	GGAATGAGCATGAATTTC	73	641
1367174	144763	144780	N/A	N/A	ATACAGTACCCATAATAA	48	642
1367177	110776	110793	N/A	N/A	CATTTACCTTCCAATATG	28	643
1367179	95431	95448	N/A	N/A	TTACAAAAAGCTAACATT	69	644
1367182	144715	144732	N/A	N/A	CCATCCAAGTTGGAGCAA	129	645
1367184	144767	144784	N/A	N/A	GGTAATACAGTACCCATA	125	646
1367188	95439	95456	N/A	N/A	GTGTTATATTACAAAAAG	82	647
1367191	110772	110789	N/A	N/A	TACCTTCCAATATGCTTA	9	648
1367197	110796	110813	N/A	N/A	GAAAATTTGAAGACTAAA	38	649
1367208	152960	152977	N/A	N/A	AGGTTGATAGAAAATACT	36	650
1367210	144754	144771	N/A	N/A	CCATAATAAAGGGCTCAG	31	651
1367212	152873	152890	N/A	N/A	AAGAGGCTGAAATCAAAT	66	652
1367214	110824	110841	N/A	N/A	CAATTAAATGTAAACAGT	165	653
1367216	91141	91158	N/A	N/A	CTGGGTGATGAGAGCAAA	100	654
1367218	144707	144724	N/A	N/A	GTTGGAGCAAGATTATCC	112	655
1367221	144683	144700	N/A	N/A	AAATAGAAATATATAGTT	76	656
1367222	91221	91238	N/A	N/A	GAGGCAGGAGAACAGGAG	51	657
1367223	152862	152879	N/A	N/A	ATCAAATAAAATAGGTTT	70	658
1367228	110812	110829	N/A	N/A	AACAGTTTTTCAAGCAGA	72	659
1367232	95467	95484	N/A	N/A	GAACACACAAAAGAAAAT	141	660
1367233	110800	110817	N/A	N/A	AGCAGAAAATTTGAAGAC	52	661
1367236	110808	110825	N/A	N/A	GTTTTTCAAGCAGAAAAT	239	662
1367243	152942	152959	N/A	N/A	ACATCTTACAAAGTTTTG	41	663

表 9 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1342108	144716	144733	N/A	N/A	CCCATCCAAGTTGGAGCA	97	664
1342111	144768	144785	N/A	N/A	GGGTAATACAGTACCCAT	50	665
1342122	144696	144713	N/A	N/A	ATTATCCTATACAAAATA	60	666
1366955	95456	95473	N/A	N/A	AGAAAATCAAAATCCAAG	41	667
1366961	152888	152905	N/A	N/A	GGTCTTGGAGCCTGAAAG	136	668
1366962	95468	95485	N/A	N/A	GGAACACACAAAAGAAAA	117	669
1366963	152952	152969	N/A	N/A	AGAAAATACTACATCTTA	55	670
1366965	152926	152943	N/A	N/A	TGAAGAGCAAAGTTGGAA	79	671
1366968	152865	152882	N/A	N/A	GAAATCAAATAAAATAGG	54	672
1366969	95452	95469	N/A	N/A	AATCAAAATCCAAGTGTT	54	673
1366972	95460	95477	N/A	N/A	CAAAAGAAAATCAAAATC	66	674
1366975	110829	110846	N/A	N/A	ATACACAATTAAATGTAA	60	675
1366985	95440	95457	N/A	N/A	AGTGTTATATTACAAAAA	52	676
1366996	152909	152926	N/A	N/A	ATGAGCATGAATTTCAGT	67	677
1366997	152917	152934	N/A	N/A	AAGTTGGAATGAGCATGA	71	678
1367001	95424	95441	N/A	N/A	AAGCTAACATTGAAAAGC	93	679
1367007	152905	152922	N/A	N/A	GCATGAATTTCAGTTTAG	68	680
1367008	152944	152961	N/A	N/A	CTACATCTTACAAAGTTT	104	681
1367018	152897	152914	N/A	N/A	TTCAGTTTAGGTCTTGGA	87	682
1367025	91218	91235	N/A	N/A	GCAGGAGAACAGGAGAAT	59	683
1367026	152874	152891	N/A	N/A	AAAGAGGCTGAAATCAAA	68	684
1367029	95420	95437	N/A	N/A	TAACATTGAAAAGCCCAA	78	685
1367032	91142	91159	N/A	N/A	CCTGGGTGATGAGAGCAA	98	686
1367033	144688	144705	N/A	N/A	ATACAAAATAGAAATATA	77	687
1367037	152901	152918	N/A	N/A	GAATTTCAGTTTAGGTCT	95	688
1367039	144755	144772	N/A	N/A	CCCATAATAAAGGGCTCA	66	689
1367040	152961	152978	N/A	N/A	AAGGTTGATAGAAAATAC	133	690
1367042	91222	91239	N/A	N/A	TGAGGCAGGAGAACAGGA	57	691
1367043	144712	144729	N/A	N/A	TCCAAGTTGGAGCAAGAT	67	692
1367044	144700	144717	N/A	N/A	CAAGATTATCCTATACAA	57	693
1367071	144760	144777	N/A	N/A	CAGTACCCATAATAAAGG	49	694
1367072	152869	152886	N/A	N/A	GGCTGAAATCAAATAAAA	84	695
1367076	144704	144721	N/A	N/A	GGAGCAAGATTATCCTAT	113	696
1367079	95428	95445	N/A	N/A	CAAAAAGCTAACATTGAA	38	697
1367080	110789	110806	N/A	N/A	TGAAGACTAAACACATTT	29	698
1367082	152957	152974	N/A	N/A	TTGATAGAAAATACTACA	89	699
1367083	152883	152900	N/A	N/A	TGGAGCCTGAAAGAGGCT	81	700
1367085	110793	110810	N/A	N/A	AATTTGAAGACTAAACAC	46	701
1367087	152930	152947	N/A	N/A	GTTTTGAAGAGCAAAGTT	85	702
1367089	144684	144701	N/A	N/A	AAAATAGAAATATATAGT	70	703
1367091	152892	152909	N/A	N/A	TTTAGGTCTTGGAGCCTG	34	704
1367093	95432	95449	N/A	N/A	ATTACAAAAAGCTAACAT	57	705
1367096	110813	110830	N/A	N/A	AAACAGTTTTTCAAGCAG	59	706
1367100	110773	110790	N/A	N/A	TTACCTTCCAATATGCTT	24	707
1367101	110801	110818	N/A	N/A	AAGCAGAAAATTTGAAGA	102	708
1367104	110825	110842	N/A	N/A	ACAATTAAATGTAAACAG	58	709
1367105	110805	110822	N/A	N/A	TTTCAAGCAGAAAATTTG	78	710
1367110	95480	95497	N/A	N/A	GGTTATTGTTAAGGAACA	61	711
1367115	95444	95461	N/A	N/A	TCCAAGTGTTATATTACA	72	712
1367119	95436	95453	N/A	N/A	TTATATTACAAAAAGCTA	99	713
1367120	110777	110794	N/A	N/A	ACATTTACCTTCCAATAT	79	714
1367126	95472	95489	N/A	N/A	TTAAGGAACACACAAAAG	39	715
1367131	144724	144741	N/A	N/A	CGCTCCACCCCATCCAAG	167	716
1367132	95464	95481	N/A	N/A	CACACAAAAGAAAATCAA	155	717
1367136	152913	152930	N/A	N/A	TGGAATGAGCATGAATTT	55	718
1367138	152939	152956	N/A	N/A	TCTTACAAAGTTTTGAAG	36	719
1367139	152948	152965	N/A	N/A	AATACTACATCTTACAAA	66	720
1367143	152921	152938	N/A	N/A	AGCAAAGTTGGAATGAGC	97	721
1367144	144720	144737	N/A	N/A	CCACCCCATCCAAGTTGG	45	722
1367167	110781	110798	N/A	N/A	AAACACATTTACCTTCCA	46	723
1367169	110821	110838	N/A	N/A	TTAAATGTAAACAGTTTT	61	724
1367173	91138	91155	N/A	N/A	GGTGATGAGAGCAAAACT	64	725
1367175	91108	91125	N/A	N/A	AAGAAAAAGAAATATTAG	32	726
1367176	110797	110814	N/A	N/A	AGAAAATTTGAAGACTAA	36	727
1367180	95476	95493	N/A	N/A	ATTGTTAAGGAACACACA	101	728
1367194	152879	152896	N/A	N/A	GCCTGAAAGAGGCTGAAA	58	729
1367198	91214	91231	N/A	N/A	GAGAACAGGAGAATCGCT	45	730
1367204	144692	144709	N/A	N/A	TCCTATACAAAATAGAAA	72	731
1367206	110817	110834	N/A	N/A	ATGTAAACAGTTTTTCAA	18	732
1367207	95448	95465	N/A	N/A	AAAATCCAAGTGTTATAT	107	733
1367209	110785	110802	N/A	N/A	GACTAAACACATTTACCT	97	734
1367211	144680	144697	N/A	N/A	TAGAAATATATAGTTTGT	157	735
1367219	144764	144781	N/A	N/A	AATACAGTACCCATAATA	49	736
1367220	110809	110826	N/A	N/A	AGTTTTTCAAGCAGAAAA	108	737
1367225	152935	152952	N/A	N/A	ACAAAGTTTTGAAGAGCA	82	738
1367227	152859	152876	N/A	N/A	AAATAAAATAGGTTTATA	92	739

表 10 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1342103	144725	144742	N/A	N/A	GCGCTCCACCCCATCCAA	101	740
1342104	144761	144778	N/A	N/A	ACAGTACCCATAATAAAG	72	741
1342106	144721	144738	N/A	N/A	TCCACCCCATCCAAGTTG	73	742
1342112	144756	144773	N/A	N/A	ACCCATAATAAAGGGCTC	97	743
1342120	144681	144698	N/A	N/A	ATAGAAATATATAGTTTG	94	744
1342121	144701	144718	N/A	N/A	GCAAGATTATCCTATACA	77	745
1366951	152906	152923	N/A	N/A	AGCATGAATTTCAGTTTA	78	746
1366956	95421	95438	N/A	N/A	CTAACATTGAAAAGCCCA	218	747
1366960	95461	95478	N/A	N/A	ACAAAAGAAAATCAAAAT	187	748
1366979	110774	110791	N/A	N/A	TTTACCTTCCAATATGCT	33	749
1366986	144765	144782	N/A	N/A	TAATACAGTACCCATAAT	50	750
1366987	95449	95466	N/A	N/A	CAAAATCCAAGTGTTATA	73	751
1366989	110814	110831	N/A	N/A	TAAACAGTTTTTCAAGCA	71	752
1366993	152918	152935	N/A	N/A	AAAGTTGGAATGAGCATG	109	753
1366994	95441	95458	N/A	N/A	AAGTGTTATATTACAAAA	81	754
1366998	152927	152944	N/A	N/A	TTGAAGAGCAAAGTTGGA	61	755
1367006	95453	95470	N/A	N/A	AAATCAAAATCCAAGTGT	54	756
1367009	152949	152966	N/A	N/A	AAATACTACATCTTACAA	23	757
1367012	110802	110819	N/A	N/A	CAAGCAGAAAATTTGAAG	80	758
1367013	110786	110803	N/A	N/A	AGACTAAACACATTTACC	61	759
1367019	144757	144774	N/A	N/A	TACCCATAATAAAGGGCT	70	760
1367027	152910	152927	N/A	N/A	AATGAGCATGAATTTCAG	74	761
1367028	91250	91267	N/A	N/A	TCCCTGTAATCCCAGTTG	61	762
1367030	95457	95474	N/A	N/A	AAGAAAATCAAAATCCAA	76	763
1367041	110778	110795	N/A	N/A	CACATTTACCTTCCAATA	50	764
1367046	152889	152906	N/A	N/A	AGGTCTTGGAGCCTGAAA	55	765
1367051	110830	110847	N/A	N/A	TATACACAATTAAATGTA	74	766
1367052	144685	144702	N/A	N/A	CAAAATAGAAATATATAG	126	767
1367055	91219	91236	N/A	N/A	GGCAGGAGAACAGGAGAA	89	768
1367062	152940	152957	N/A	N/A	ATCTTACAAAGTTTTGAA	67	769
1367063	144689	144706	N/A	N/A	TATACAAAATAGAAATAT	78	770
1367064	110806	110823	N/A	N/A	TTTTCAAGCAGAAAATTT	65	771
1367065	95433	95450	N/A	N/A	TATTACAAAAAGCTAACA	56	772
1367067	110826	110843	N/A	N/A	CACAATTAAATGTAAACA	68	773
1367070	152914	152931	N/A	N/A	TTGGAATGAGCATGAATT	71	774
1367074	152870	152887	N/A	N/A	AGGCTGAAATCAAATAAA	70	775
1367077	152880	152897	N/A	N/A	AGCCTGAAAGAGGCTGAA	58	776
1367086	110782	110799	N/A	N/A	TAAACACATTTACCTTCC	129	777
1367092	144709	144726	N/A	N/A	AAGTTGGAGCAAGATTAT	229	778
1367094	110794	110811	N/A	N/A	AAATTTGAAGACTAAACA	54	779
1367095	152884	152901	N/A	N/A	TTGGAGCCTGAAAGAGGC	126	780
1367106	152958	152975	N/A	N/A	GTTGATAGAAAATACTAC	63	781
1367111	95477	95494	N/A	N/A	TATTGTTAAGGAACACAC	80	782
1367112	91143	91160	N/A	N/A	GCCTGGGTGATGAGAGCA	45	783
1367118	152894	152911	N/A	N/A	AGTTTAGGTCTTGGAGCC	146	784
1367130	91215	91232	N/A	N/A	GGAGAACAGGAGAATCGC	53	785
1367134	95429	95446	N/A	N/A	ACAAAAAGCTAACATTGA	357	786
1367142	95445	95462	N/A	N/A	ATCCAAGTGTTATATTAC	87	787
1367148	152962	152979	N/A	N/A	GAAGGTTGATAGAAAATA	172	788
1367149	95473	95490	N/A	N/A	GTTAAGGAACACACAAAA	48	789
1367154	152936	152953	N/A	N/A	TACAAAGTTTTGAAGAGC	37	790
1367156	152953	152970	N/A	N/A	TAGAAAATACTACATCTT	33	791
1367158	110822	110839	N/A	N/A	ATTAAATGTAAACAGTTT	54	792
1367159	95469	95486	N/A	N/A	AGGAACACACAAAAGAAA	48	793
1367160	152931	152948	N/A	N/A	AGTTTTGAAGAGCAAAGT	86	794
1367168	144693	144710	N/A	N/A	ATCCTATACAAAATAGAA	67	795
1367170	91139	91156	N/A	N/A	GGGTGATGAGAGCAAAAC	37	796
1367178	95465	95482	N/A	N/A	ACACACAAAAGAAAATCA	39	797
1367181	110810	110827	N/A	N/A	CAGTTTTTCAAGCAGAAA	72	798
1367183	152875	152892	N/A	N/A	GAAAGAGGCTGAAATCAA	49	799
1367186	144697	144714	N/A	N/A	GATTATCCTATACAAAAT	77	800
1367190	152866	152883	N/A	N/A	TGAAATCAAATAAAATAG	38	801
1367199	110818	110835	N/A	N/A	AATGTAAACAGTTTTTCA	118	802
1367201	152898	152915	N/A	N/A	TTTCAGTTTAGGTCTTGG	65	803
1367202	91135	91152	N/A	N/A	GATGAGAGCAAAACTCCA	104	804
1367213	110798	110815	N/A	N/A	CAGAAAATTTGAAGACTA	65	805
1367217	152902	152919	N/A	N/A	TGAATTTCAGTTTAGGTC	53	806
1367224	110790	110807	N/A	N/A	TTGAAGACTAAACACATT	50	807
1367226	95481	95498	N/A	N/A	AGGTTATTGTTAAGGAAC	123	808
1367230	152922	152939	N/A	N/A	GAGCAAAGTTGGAATGAG	72	809
1367234	95437	95454	N/A	N/A	GTTATATTACAAAAAGCT	80	810
1367235	95425	95442	N/A	N/A	AAAGCTAACATTGAAAAG	79	811
1367237	152945	152962	N/A	N/A	ACTACATCTTACAAAGTT	92	812
1367238	152860	152877	N/A	N/A	CAAATAAAATAGGTTTAT	105	813
1367239	144713	144730	N/A	N/A	ATCCAAGTTGGAGCAAGA	112	814
1367241	144717	144734	N/A	N/A	CCCCATCCAAGTTGGAGC	212	815
1367242	144705	144722	N/A	N/A	TGGAGCAAGATTATCCTA	147	816

表 11 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點	SEQ ID NO: 1 終止位點	SEQ ID NO: 2 起始位點	SEQ ID NO: 2 終止位點	序列(5’ 至3’)	SCN1A (%UTC)	SEQ ID No.
1342083	144866	144883	N/A	N/A	GTATTTTCCCTACTGTGG	43	817
1342084	144871	144888	N/A	N/A	ATAATGTATTTTCCCTAC	261	818
1342085	144886	144903	N/A	N/A	GGGATTAGGATGTAAATA	105	819
1342086	144920	144937	N/A	N/A	TTTTTCAAATGAAATTTA	100	820
1342087	144861	144878	N/A	N/A	TTCCCTACTGTGGTGCAA	44	821
1342088	144876	144893	N/A	N/A	TGTAAATAATGTATTTTC	71	822
1342089	144911	144928	N/A	N/A	TGAAATTTAAGACAATTG	51	823
1342090	144881	144898	N/A	N/A	TAGGATGTAAATAATGTA	96	824
1342091	144902	144919	N/A	N/A	AGACAATTGAAAAGAGGG	91	825
1342092	144916	144933	N/A	N/A	TCAAATGAAATTTAAGAC	68	826
1342093	144906	144923	N/A	N/A	TTTAAGACAATTGAAAAG	94	827
1342094	144821	144838	N/A	N/A	TCCCTCACCCCACTACAC	80	828
1342095	144791	144808	N/A	N/A	GCAAGGATTAAAGGTAGC	83	829
1342096	144816	144833	N/A	N/A	CACCCCACTACACATAAG	58	830
1342097	144784	144801	N/A	N/A	TTAAAGGTAGCAAAAGGG	101	831
1342098	144796	144813	N/A	N/A	ACAGTGCAAGGATTAAAG	120	832
1342099	144801	144818	N/A	N/A	AAGTCACAGTGCAAGGAT	8	833
1342100	144806	144823	N/A	N/A	CACATAAGTCACAGTGCA	49	834
1342101	144786	144803	N/A	N/A	GATTAAAGGTAGCAAAAG	88	835
1342102	144811	144828	N/A	N/A	CACTACACATAAGTCACA	82	836
1342103	144725	144742	N/A	N/A	GCGCTCCACCCCATCCAA	107	740
1342104	144761	144778	N/A	N/A	ACAGTACCCATAATAAAG	55	741
1342105	144706	144723	N/A	N/A	TTGGAGCAAGATTATCCT	88	510
1342106	144721	144738	N/A	N/A	TCCACCCCATCCAAGTTG	71	742
1342107	144766	144783	N/A	N/A	GTAATACAGTACCCATAA	102	511
1342108	144716	144733	N/A	N/A	CCCATCCAAGTTGGAGCA	70	664
1342109	144753	144770	N/A	N/A	CATAATAAAGGGCTCAGG	89	512
1342110	144711	144728	N/A	N/A	CCAAGTTGGAGCAAGATT	97	587
1342111	144768	144785	N/A	N/A	GGGTAATACAGTACCCAT	51	665
1342112	144756	144773	N/A	N/A	ACCCATAATAAAGGGCTC	84	743
1342113	144666	144683	N/A	N/A	TTGTTATTAGTTAGAAAT	106	837
1342114	144661	144678	N/A	N/A	ATTAGTTAGAAATCTGAT	88	838
1342115	144691	144708	N/A	N/A	CCTATACAAAATAGAAAT	97	588
1342116	144676	144693	N/A	N/A	AATATATAGTTTGTTATT	68	839
1342117	144671	144688	N/A	N/A	ATAGTTTGTTATTAGTTA	94	840
1342118	144686	144703	N/A	N/A	ACAAAATAGAAATATATA	117	513
1342119	144656	144673	N/A	N/A	TTAGAAATCTGATATGAC	97	841
1342120	144681	144698	N/A	N/A	ATAGAAATATATAGTTTG	100	744
1342121	144701	144718	N/A	N/A	GCAAGATTATCCTATACA	51	745
1342122	144696	144713	N/A	N/A	ATTATCCTATACAAAATA	70	666
1342123	144646	144663	N/A	N/A	GATATGACAGAACATTTG	74	842
1342124	144615	144632	N/A	N/A	TTCATGATGCTCTCCGTC	67	843
1342125	144613	144630	N/A	N/A	CATGATGCTCTCCGTCTG	50	844
1342126	144617	144634	N/A	N/A	TGTTCATGATGCTCTCCG	68	845
1342127	144619	144636	N/A	N/A	TTTGTTCATGATGCTCTC	65	846
1342128	144633	144650	N/A	N/A	ATTTGGTGTTACTTTTTG	67	847
1342129	144621	144638	N/A	N/A	TTTTTGTTCATGATGCTC	34	848
1342130	144636	144653	N/A	N/A	AACATTTGGTGTTACTTT	82	849
1342131	144641	144658	N/A	N/A	GACAGAACATTTGGTGTT	57	850
1342132	144651	144668	N/A	N/A	AATCTGATATGACAGAAC	58	851
1342133	144609	144626	N/A	N/A	ATGCTCTCCGTCTGTTTC	70	852
1342134	144571	144588	N/A	N/A	TTCTTTTGAAAAAGAAGG	107	853
1342135	144591	144608	N/A	N/A	CCTATCCATTAAGACTTG	56	854
1342136	144606	144623	N/A	N/A	CTCTCCGTCTGTTTCCCT	103	855
1342137	144581	144598	N/A	N/A	AAGACTTGAGTTCTTTTG	51	856
1342138	144601	144618	N/A	N/A	CGTCTGTTTCCCTATCCA	101	857
1342139	144586	144603	N/A	N/A	CCATTAAGACTTGAGTTC	40	858
1342140	144596	144613	N/A	N/A	GTTTCCCTATCCATTAAG	68	859
1342141	144576	144593	N/A	N/A	TTGAGTTCTTTTGAAAAA	98	860
1342142	144611	144628	N/A	N/A	TGATGCTCTCCGTCTGTT	35	861
1342143	144856	144873	N/A	N/A	TACTGTGGTGCAATAATA	69	862
1342144	144536	144553	N/A	N/A	GTTAGGAAATTAAAAATA	94	863
1342145	144556	144573	N/A	N/A	AGGTATTTAAGATTTCCT	56	864
1342146	144848	144865	N/A	N/A	TGCAATAATAGTACCCTT	72	865
1342147	144546	144563	N/A	N/A	GATTTCCTAGGTTAGGAA	62	866
1342148	144561	144578	N/A	N/A	AAAGAAGGTATTTAAGAT	79	867
1342149	144851	144868	N/A	N/A	TGGTGCAATAATAGTACC	80	868
1342150	144541	144558	N/A	N/A	CCTAGGTTAGGAAATTAA	79	869
1342151	144551	144568	N/A	N/A	TTTAAGATTTCCTAGGTT	56	870
1342152	144566	144583	N/A	N/A	TTGAAAAAGAAGGTATTT	60	871
1342153	144836	144853	N/A	N/A	ACCCTTCCCAATCCCTCC	63	872
1342154	144840	144857	N/A	N/A	TAGTACCCTTCCCAATCC	75	873
1342155	144844	144861	N/A	N/A	ATAATAGTACCCTTCCCA	34	874
1342156	144846	144863	N/A	N/A	CAATAATAGTACCCTTCC	45	875
1342157	144831	144848	N/A	N/A	TCCCAATCCCTCCCTCAC	65	876
1342158	144826	144843	N/A	N/A	ATCCCTCCCTCACCCCAC	63	877
1342159	144838	144855	N/A	N/A	GTACCCTTCCCAATCCCT	43	878
1342160	144842	144859	N/A	N/A	AATAGTACCCTTCCCAAT	139	879

實例 3 ：在初代小鼠大腦神經元細胞中人類 - 小鼠交叉反應性經修飾之寡核苷酸對於小鼠 SCN1A 之活性，單劑量，在體外

測試了上文所述之某些經修飾之寡核苷酸在體外對小鼠SCN1A RNA水準的影響。

「起始位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示靶序列之與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。如下表中所示，經修飾之寡核苷酸與以下互補：人類SCN1A基因體序列，在本文中命名為SEQ ID NO: 1 (自核苷165982001至166152000截短的GENBANK登錄號NC_000002.12之補體)；及小鼠SCN1A基因體序列，在本文中命名為SEQ ID NO: 3 (自核苷66268001至66444000截短的GENBANK登錄號NC_000068.7之補體)。

藉由自由吸收，用8000 nM經修飾之寡核苷酸處理以每孔60,000個細胞之密度的經培養之初代小鼠大腦神經元細胞。在約3天處理期之後，自細胞分離出RNA，且藉由定量即時RTPCR量測不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A RNA之量及包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A RNA之量。使用小鼠引子探針組RTS48951 (正向序CCCTAAGAGCCTTATCACGATTT，在本文中命名為SEQ ID NO: 24；反向序列GGCAAACCAGAAGCACATTC，在本文中命名為SEQ ID NO: 25；探針序列AGGGTGGTTGTGAATGCCCTGTTA，在本文中命名為SEQ ID NO: 26)量測不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A轉錄物之量。使用小鼠引子探針組RTS48949 (正向序AGCCCTTTATTATGGGTGGTT，在本文中命名為SEQ ID NO: 21；反向序列CCAGAATATAAGGCAAACCAGAAG，在本文中命名為SEQ ID NO: 22；探針序列TGGATGGAATTGCTCCTAACAGGGC，在本文中命名為SEQ ID NO: 23)量測包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A轉錄物之量。如藉由RIBOGREEN®所量測，將SCN1A RNA水準正規化至總RNA含量。SCN1A NIE-1^- RNA及NIE-1⁺ RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)。用「ǂ」標記之值得自與引物探針組之擴增子區域互補的寡核苷酸。可使用額外檢定以量測與擴增子區域互補的經修飾之寡核苷酸之效力及功效。

如下表中所示，與未經處理之對照相比，某些與SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸使不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A RNA之量增加且使包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A RNA之量減少。表 12 在初代小鼠大腦神經元細胞中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A RNA之量及包括NIE-1 (NIE-1⁺ )的小鼠SCN1A RNA之量的影響

化合物編號	SEQ ID NO: 1 起始位點人類	SEQ ID NO: 1 終止位點人類	SEQ ID NO: 3 起始位點小鼠	SEQ ID NO: 3 終止位點小鼠	序列 (5’ 至 3’)	SCN1A (%UTC) RTS48949 NIE-1⁺	SCN1A (%UTC) RTS48951 NIE-1^-	SEQ ID No.
1342097	144784	144801	150182	150199	TTAAAGGTAGCAAAAGGG	96	69	831
1342104	144761	144778	150159	150176	ACAGTACCCATAATAAAG	68ǂ	248	741
1342105	144706	144723	150104	150121	TTGGAGCAAGATTATCCT	30	549	510
1342106	144721	144738	150119	150136	TCCACCCCATCCAAGTTG	111	155	742
1342107	144766	144783	150164	150181	GTAATACAGTACCCATAA	55ǂ	346	511
1342108	144716	144733	150114	150131	CCCATCCAAGTTGGAGCA	46	349	664
1342110	144711	144728	150109	150126	CCAAGTTGGAGCAAGATT	15	647	587
1342111	144768	144785	150166	150183	GGGTAATACAGTACCCAT	104ǂ	107	665
1366954	144703	144720	150101	150118	GAGCAAGATTATCCTATA	16	644	590
1366958	144722	144739	150120	150137	CTCCACCCCATCCAAGTT	113	122	515
1366971	144762	144779	150160	150177	TACAGTACCCATAATAAA	72ǂ	465	519
1366982	144710	144727	150108	150125	CAAGTTGGAGCAAGATTA	9	696	523
1366986	144765	144782	150163	150180	TAATACAGTACCCATAAT	52ǂ	333	750
1367004	144682	144699	150080	150097	AATAGAAATATATAGTTT	60	264	529
1367019	144757	144774	150155	150172	TACCCATAATAAAGGGCT	54ǂ	125	760
1367043	144712	144729	150110	150127	TCCAAGTTGGAGCAAGAT	54	450	692
1367047	144758	144775	150156	150173	GTACCCATAATAAAGGGC	86ǂ	146	539
1367071	144760	144777	150158	150175	CAGTACCCATAATAAAGG	67ǂ	224	694
1367076	144704	144721	150102	150119	GGAGCAAGATTATCCTAT	29	510	696
1367089	144684	144701	150082	150099	AAAATAGAAATATATAGT	83	180	703
1367092	144709	144726	150107	150124	AAGTTGGAGCAAGATTAT	14	642	778
1367098	144714	144731	150112	150129	CATCCAAGTTGGAGCAAG	41	421	550
1367121	144719	144736	150117	150134	CACCCCATCCAAGTTGGA	110	215	628
1367131	144724	144741	150122	150139	CGCTCCACCCCATCCAAG	82	86	716
1367135	144759	144776	150157	150174	AGTACCCATAATAAAGGG	67ǂ	214	634
1367144	144720	144737	150118	150135	CCACCCCATCCAAGTTGG	81	182	722
1367155	144723	144740	150121	150138	GCTCCACCCCATCCAAGT	128	102	637
1367174	144763	144780	150161	150178	ATACAGTACCCATAATAA	57ǂ	395	642
1367182	144715	144732	150113	150130	CCATCCAAGTTGGAGCAA	44	431	645
1367184	144767	144784	150165	150182	GGTAATACAGTACCCATA	85ǂ	210	646
1367189	144718	144735	150116	150133	ACCCCATCCAAGTTGGAG	117	185	575
1367218	144707	144724	150105	150122	GTTGGAGCAAGATTATCC	9	727ǂ	655
1367219	144764	144781	150162	150179	AATACAGTACCCATAATA	97ǂ	511	736
1367221	144683	144700	150081	150098	AAATAGAAATATATAGTT	74	294	656
1367239	144713	144730	150111	150128	ATCCAAGTTGGAGCAAGA	37	514	814
1367241	144717	144734	150115	150132	CCCCATCCAAGTTGGAGC	99	184	815
1367242	144705	144722	150103	150120	TGGAGCAAGATTATCCTA	72	430	816
1369834	144772	144789	150170	150187	AAAGGGGTAATACAGTAC	47	324	880
1369835	144779	144796	150177	150194	GGTAGCAAAAGGGGTAAT	24	463	881
1369836	144774	144791	150172	150189	CAAAAGGGGTAATACAGT	44	448	882
1369838	144771	144788	150169	150186	AAGGGGTAATACAGTACC	69ǂ	283	883
1369840	144781	144798	150179	150196	AAGGTAGCAAAAGGGGTA	102	64	884
1369841	144776	144793	150174	150191	AGCAAAAGGGGTAATACA	19	579	885
1369851	144770	144787	150168	150185	AGGGGTAATACAGTACCC	90ǂ	148	886
1369854	144769	144786	150167	150184	GGGGTAATACAGTACCCA	97ǂ	137	887
1369856	144775	144792	150173	150190	GCAAAAGGGGTAATACAG	48	317	888
1369870	144782	144799	150180	150197	AAAGGTAGCAAAAGGGGT	63	53	889

實例 4 ：靶向人類 SCN1A 之經修飾之寡核苷酸在 HepG2 細胞中之活性，多劑量，在體外

選擇了上文研究中所述之某些經修飾之寡核苷酸並在HepG2細胞中以各種劑量進行測試。

在使用相同培養條件的一系列實驗中測試了經修飾之寡核苷酸。各實驗之結果呈現於下文所示之單獨的表中。使用電穿孔，用稀釋至如下表中所指定之不同濃度的經修飾之寡核苷酸轉染以每孔20,000個細胞之密度的經培養之HepG2細胞。在約24小時處理期之後，如先前使用人類RTS48189引子-探針組所述，量測全長SCN1A RNA水準。如藉由RIBOGREEN®所量測，將全長SCN1A RNA水準正規化至總RNA。全長SCN1A RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)。亦提供了在20 µM劑量下全長SCN1A RNA相較於未經處理之對照的倍數增加(相較於UTC之倍數增加)。如下表中所示，與未經處理之對照相比，某些與SCN1A RNA互補的經修飾之寡核苷酸使人類全長SCN1A RNA之量增加。表 13 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類全長SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	%UTC	在20 µM 下相較於UTC 之倍數增加
312.5 nM	1250 nM	5000 nM	20000 nM
1342118	78	88	96	73	0.7
1367236	148	91	105	147	1.5
1367011	100	85	85	89	0.9
1366977	81	64	19	41	0.4
1367098	138	80	96	117	1.2
1367121	66	79	95	64	0.6
1367163	81	138	61	115	1.2
1367214	104	81	69	48	0.5
1366982	116	128	142	137	1.4
1367155	89	67	144	126	1.3
1367182	114	80	64	38	0.4
1366952	86	88	66	114	1.1
1367014	80	63	85	49	0.5
1367184	104	71	67	45	0.4
1367240	86	90	95	124	1.2
1366980	78	55	79	73	0.7
1367134	124	58	78	73	0.7
1367147	140	110	123	207	2.1
1367232	121	84	116	72	0.7

表 14 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類全長SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	%UTC	在20 µM 下相較於UTC 之倍數增加
312.5 nM	1250 nM	5000 nM	20000 nM
1367020	63	108	64	92	0.9
1366961	98	76	64	62	0.6
1367059	73	138	110	169	1.7
1367040	56	41	53	76	0.8
1367135	110	130	120	136	1.4
1366962	65	99	79	147	1.5
1367107	93	103	93	153	1.5
1367119	101	99	89	86	0.9
1367131	84	167	106	178	1.8
1367032	56	55	103	67	0.7
1366960	89	105	74	38	0.4
1367211	100	113	118	131	1.3
1367092	87	83	179	95	0.9
1367148	86	116	81	44	0.4
1367132	107	117	75	142	1.4
1366956	80	87	58	63	0.6
1367134	89	106	89	83	0.8
1367241	104	110	73	86	0.9

表 15 在HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸對人類全長SCN1A RNA表現之量的影響，多劑量

化合物編號	%UTC	在20 µM 下相較於UTC 之倍數增加
312.5 nM	1250 nM	5000 nM	20000 nM
1367242	197	189	403	388	3.9
1366993	59	78	77	63	0.6
1367118	63	79	65	80	0.8
1367238	77	81	84	65	0.7
1367086	95	65	69	111	1.1
1366994	100	65	69	52	0.5
1367095	113	155	153	170	1.7
1342084	133	100	132	207	2.1
1367052	108	113	118	114	1.1
1342160	103	119	112	66	0.7
1342120	85	79	78	103	1.0
1367226	70	82	125	66	0.7
1342098	92	63	95	78	0.8
1342141	46	76	61	49	0.5
1367199	81	109	133	136	1.4
1342118	120	99	93	95	0.9
1367134	70	61	62	124	1.2
1367239	122	109	105	180	1.8
1342103	115	110	94	90	0.9

實例 5 ：在初代小鼠大腦神經元細胞中人類 - 小鼠交叉反應性經修飾之寡核苷酸對於小鼠 SCN1A 之活性，多劑量，在體外

在初代小鼠大腦神經元細胞中以各種劑量測試了上文研究中所述之某些經修飾之寡核苷酸。在使用相同培養條件的一系列實驗中測試了經修飾之寡核苷酸。

藉由自由吸收，用稀釋至如下表中所指定之不同濃度的經修飾之寡核苷酸處理以每孔60,000個細胞之密度的經培養之初代小鼠大腦神經元細胞。在約3天處理期之後，使用小鼠引子探針組RTS48951 (上文所述)量測不包括NIE-1 (NIE-1^- )之小鼠SCN1A RNA之量，且使用小鼠引子探針組RTS48949 (上文所述)量測包括NIE-1 (NIE-1⁺ )之小鼠SCN1A RNA之量。如藉由RIBOGREEN®所量測，將SCN1A RNA水準正規化至總RNA含量。SCN1A RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)。用「ǂ」標記之值得自與引物探針組之擴增子區域互補的寡核苷酸。可使用額外檢定以量測與擴增子區域互補的經修飾之寡核苷酸之效力及功效。亦提供了在8 µM劑量下(NIE-1^- )SCN1A RNA相較於未經處理之對照的倍數增加(相較於UTC之倍數增加)。在Excel中之資料之對數/線性曲線上使用線性迴歸計算半數最大抑制濃度(IC₅₀ )；下表中IC₅₀ ＞8 µM指示該值不可計算。

如下表中所示，與未經處理之對照相比，某些與SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸使不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A RNA之量增加且使包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A RNA之量減少。表 16 在初代小鼠大腦神經元細胞中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A RNA之量及包括(NIE-1⁺ )的SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	NIE-1⁺	NIE-1^-
%UTC	IC₅₀	%UTC	相較於UTC 之倍數增加
64 nM	320 nM	1600 nM	8000 nM	µM	64 nM	320 nM	1600 nM	8000 nM	8 µM
1369834	149	143	126	80	＞ 8.0	137	162	292	817	8.2
1367174	111ǂ	102ǂ	87ǂ	62ǂ	＞ 8.0	145	208	344	1059	10.6
1369856	133	142	100	55	＞ 8.0	149	171	322	968	9.7
1366971	100ǂ	102ǂ	92ǂ	76ǂ	＞ 8.0	124	170	305	849	8.5
1366986	89ǂ	77ǂ	75ǂ	56ǂ	＞ 8.0	98	121	250	584	5.8
1342107	79ǂ	76ǂ	74ǂ	44ǂ	＞ 8.0	122	152	295	805	8.0
1367242	97	80	70	39	4.7	119	169	397	885	8.8
1367219	79ǂ	73ǂ	71ǂ	51ǂ	＞ 8.0	139	178	353	692	6.9
1367004	81	86	81	75	＞ 8.0	94	107	181	487	4.9
1369838	149ǂ	130ǂ	130ǂ	80ǂ	＞ 8.0	127	153	254	409	4.1
1367221	96	103	111	74	＞ 8.0	94	113	168	444	4.4
1342104	103ǂ	98ǂ	97ǂ	76ǂ	＞ 8.0	125	126	172	378	3.8
1367071	123ǂ	126ǂ	120ǂ	81ǂ	＞ 8.0	125	119	174	340	3.4
1367135	140ǂ	115ǂ	88ǂ	93ǂ	＞ 8.0	94	117	160	321	3.2

表 17 在初代小鼠大腦神經元細胞中經修飾之寡核苷酸對包括(NIE-1⁺ )或不包括NIE-1 (NIE-1^- )之小鼠SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	NIE-1⁺	NIE-1^-
%UTC	IC₅₀	%UTC	相較於UTC 之倍數增加
64 nM	320 nM	1600 nM	8000 nM	µM	64 nM	320 nM	1600 nM	8000 nM	8 µM
1367218	56	39	22	3	0.1	252	346	634	1084	10.8
1366982	59	41	14	3	0.1	241	336	737	1089	10.9
1367092	60	46	20	2	0.2	225	280	619	1044	10.4
1342110	62	42	16	6	0.2	151	246	366	797	8.0
1366954	51	36	14	4	0.1	170	248	517	770	7.7
1369841	145	110	56	10	2.1	180	233	622	801	8.0
1369835	129	62	43	15	1.2	164	197	447	578	5.8
1342105	81	62	46	13	0.8	143	187	346	683	6.8
1367076	88	72	65	15	1.5	138	184	419	721	7.2
1367239	86	84	63	18	1.8	100	185	427	565	5.7
1367098	92	109	69	31	4.3	80	111	239	477	4.8
1369836	120	97	65	14	2.2	101	95	223	426	4.3
1367182	132	103	81	38	5.4	103	130	254	415	4.1
1367043	108	83	93	39	＞ 8.0	129	187	352	559	5.6
1342108	136	88	85	45	6.9	99	95	188	351	3.5

實例 6 ：在野生型小鼠中靶向 SCN1A 之經修飾之寡核苷酸之活性

將野生型C57BL/6小鼠分成各有4隻小鼠的組。各小鼠接受下表中所指示之劑量的化合物編號1429226或比較化合物1367010之單ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。

上文所述之化合物編號1429226為具有核鹼基序列(5’至3’) AGTTGGAGCAAGATTATC (SEQ ID NO: 41)之經修飾之寡核苷酸，其中各核苷包含2’-NMA糖部分，各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。先前在WO 2019/040923 (其以引用之方式併入本文)中作為化合物Ex 20X+1描述之比較化合物1367010具有核鹼基序列(5’至3’) AGTTGGAGCAAGATTATC (SEQ ID NO: 41)，其中各核苷包含2’-MOE糖部分，且各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。SEQ ID NO:41自起始位點144708至終止位點144725與SEQ ID NO: 1 100%互補，且自起始位點150106至終止位點150123與SEQ ID NO: 3 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。

處理之後三週殺死小鼠，且自皮質腦組織及脊髓提取出RNA，以用於SCN1A RNA之即時qPCR分析，其使用引子探針組RTS48951 (上文所述)量測不包括小鼠形式NIE-1(NIE-1^- )之SCN1A RNA之量，且使用引子探針組RTS48949 (上文所述)量測包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A RNA之量。SCN1A RNA呈現為未經處理之對照之平均值之% (%UTC)，將其正規化至小鼠GAPDH。使用引子探針組mGapdh_LTS00102 (正向序列GGCAAATTCAACGGCACAGT，本文中命名為SEQ ID NO: 36；反向序列GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT，本文中命名為SEQ ID NO: 37；探針序列AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC，本文中命名為SEQ ID NO: 38)擴增小鼠GAPDH。表18及19中之各者表示不同的實驗。

如下表中所示，在此檢定中，化合物編號1429226比比較化合物1367010有效。表 18 在野生型小鼠中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A之量及包括(NIE-1⁺ )的小鼠SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	劑量(μg)	脊髓	皮質
NIE-1^-	NIE-1⁺	NIE-1^-	NIE-1⁺
%UTC	%UTC	ED₅₀ (µg)	%UTC	%UTC	ED₅₀ (µg)
1367010	1	82	88	50	111	94	78
3	93	91	109	96
10	98	76	103	95
30	90	64	119	84
100	103	33	149	38
300	104	23	176	13
700	108	18	173	3

表 19 在野生型小鼠中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A之量及包括(NIE-1⁺ )的小鼠SCN1A RNA之量的影響，多劑量

化合物編號	劑量(μg)	脊髓	皮質
NIE-1^-	NIE-1⁺	NIE-1^-	NIE-1⁺
%UTC	%UTC	ED₅₀ (µg)	%UTC	%UTC	ED₅₀ (µg)
1429226	1	100	106	14	100	96	21
3	109	106	123	75
10	95	38	109	69
30	106	38	162	43
100	105	17	164	11
300	104	7	162	2
700	117	7	172	1

實例 7 ：在野生型小鼠中與 SCN1A 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性

在野生型雌性C57/Bl6小鼠中對上文所述之化合物編號1429226及比較化合物1367010進行測試，以評估寡核苷酸之耐受性。野生型雌性C57/Bl6小鼠各自接受如下表中之劑量(µg)所指示之500 µg或700 µg經修飾之寡核苷酸之單ICV劑量。各處理組由4只小鼠組成。對於各實驗，一組4只小鼠接受PBS作為陰性對照(下文單獨的表中所鑑別)。注射後3小時，根據7個不同標準評估小鼠。標準為(1)小鼠機靈、警覺、反應迅速；(2)在無刺激之情況下小鼠站立或弓背；(3)在無刺激之情況下小鼠顯示任何運動；(4)將小鼠提起後小鼠顯示向前運動；(5)將小鼠提起後小鼠顯示任何運動；(6)小鼠對捏尾巴有反應；(7)規律呼吸。對於7個標準中之各者，若滿足標準，則給予小鼠子得分0，若不滿足標準，則給予小鼠子得分1 (功能觀察組合試驗(functional observational battery)得分或FOB)。在評估所有7個標準之後，將各小鼠之得分相加並在各處理組內取平均值。表20-22中之各者表示不同的實驗。

如下表中所示，在此檢定中，化合物編號1429226比比較化合物1367010耐受。表 20 小鼠中之耐受性

化合物編號	劑量 (µg)	FOB 3 h
PBS	N/A	0
1367010	500	5.75

表 21 小鼠中之耐受性

化合物編號	劑量 (µg)	FOB 3 h
PBS	N/A	0
1367010	700	7

表 22 小鼠中之耐受性

化合物編號	劑量 (µg)	FOB 3 h
PBS	N/A	0
1429226	500	4
1429226	700	4

實例 8 ：與人類 SCN1A 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計

如以下表23中所指示設計並合成了與人類SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸。

表23中之經修飾之寡核苷酸之長度為18、19或20個核苷，如所指定。經修飾之寡核苷酸包含2’-MOE糖模體，如所指定。各經修飾之寡核苷酸之糖模體提供於糖模體欄中，其中各『e』表示2’-MOE糖部分。各經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯提供於核苷間鍵聯模體欄中，其中各『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且各『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。

除非另外明確說明，否則表23中所列之各經修飾之寡核苷酸與以下100%互補：SEQ ID NO: 1 (自核苷165982001至166152000截短的GENBANK登錄號NC_000002.12之補體)；及SEQ ID NO: 3 (自核苷66268001至66444000截短的GENBANK登錄號NC_000068.7之補體)。自起始位點150105至終止位點150124，SEQ ID NO:890與SEQ ID NO: 3 100%互補。自起始位點150105至終止位點150123，SEQ ID NO:891與SEQ ID NO: 3 100%互補。自起始位點150106至終止位點150124，SEQ ID NO:892與SEQ ID NO: 3 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。表 23 具有混合PS/PO核苷間鍵聯之2’-MOE修飾之寡核苷酸

化合物編號	核鹼基序列(5’ 至3’)	糖模體(5’ 至3’)	核苷間鍵聯模體(5’ 至3’)	SEQ ID No: 1 起始位點	SEQ ID No: 1 終止位點	SEQ ID No.
1472459	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	soossssssssssssss	144708	144725	41
1472453	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sososssssssssssss	144708	144725	41
1472454	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sosssosssssssssss	144708	144725	41
1472455	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sosssssosssssssss	144708	144725	41
1472460	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssoossssssssssss	144708	144725	41
1472462	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssssoossssssss	144708	144725	41
1472463	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssssssoossssss	144708	144725	41
1472464	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssssssssoossss	144708	144725	41
1472456	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sosssssssosssssss	144708	144725	41
1472457	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sosssssssssosssss	144708	144725	41
1472458	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sossssssssssssoss	144708	144725	41
1472466	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssosssssssssssoss	144708	144725	41
1472467	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssosssssssssoss	144708	144725	41
1472461	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssoossssssssss	144708	144725	41
1472468	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssosssssssoss	144708	144725	41
1472472	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssssossssosss	144708	144725	41
1472469	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssssosssssoss	144708	144725	41
1472470	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssssssosssoss	144708	144725	41
1472473	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssssssssososss	144708	144725	41
1472471	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssssssssososs	144708	144725	41
1472465	AGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeee	sssssssssssssooss	144708	144725	41
1472452	AAGTTGGAGCAAGATTATCC	eeeeeeeeeeeeeeeeeeee	ossssssssssssssssso	144707	144726	890
1472451	AGTTGGAGCAAGATTATCC	eeeeeeeeeeeeeeeeeee	ssssssssssssssssso	144707	144725	891
1472450	AAGTTGGAGCAAGATTATC	eeeeeeeeeeeeeeeeeee	osssssssssssssssss	144708	144726	892

實例 9 ：在野生型小鼠中與人類 SCN1A 互補的經修飾之寡核苷酸之活性及耐受性 處理

在野生型雌性C57/Bl6小鼠中對表23中所述之經修飾之寡核苷酸進行測試，以評估寡核苷酸之耐受性及活性。野生型雌性C57/Bl6小鼠各自接受如下表中所列之700 μg經修飾之寡核苷酸之單ICV劑量。各處理組由3只小鼠組成。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。活性

處理之後八週殺死小鼠，且自皮質腦組織提取出RNA，以用於SCN1A RNA之定量即時RTPCR分析，其使用引子探針組RTS48951 (上文所述)量測不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A RNA之量，且使用引子探針組RTS48949 (上文所述)量測包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1⁺ )之SCN1A RNA之量。SCN1A RNA呈現為PBS對照之平均值之% (%對照)，將其正規化至小鼠GAPDH。使用引子探針組mGapdh_LTS00102 (上文所述)擴增小鼠GAPDH。如以下表24中所示，化合物在此檢定中展示出活性。表 24 在野生型小鼠中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A之量及包括(NIE-1⁺ )的小鼠SCN1A RNA之量的影響，單劑量

化合物編號	皮質
NIE-1^-	NIE-1⁺
對照%	對照%
PBS	100	100
1472450	154	8
1472451	169	3
1472452	171	9
1472453	158	2
1472454	139	8
1472455	156	4
1472456	170	4
1472457	178	2
1472458	197	4
1472459	199	12
1472460	178	2
1472461	185	5
1472462	192	6
1472463	197	4
1472464	198	2
1472465	175	4
1472466	162	1
1472467	169	4
1472468	169	2
1472469	148	4
1472470	145	4
1472471	150	3
1472472	150	4
1472473	152	1

耐受性

注射後3小時，根據7個不同標準評估小鼠。標準為(1)小鼠機靈、警覺、反應迅速；(2)在無刺激之情況下小鼠站立或弓背；(3)在無刺激之情況下小鼠顯示任何運動；(4)將小鼠提起後小鼠顯示向前運動；(5)將小鼠提起後小鼠顯示任何運動；(6)小鼠對捏尾巴有反應；(7)規律呼吸。對於7個標準中之各者，若滿足標準，則給予小鼠子得分0，若不滿足標準，則給予小鼠子得分1 (功能觀察組合試驗(functional observational battery)得分或FOB)。在評估所有7個標準之後，將各小鼠之得分相加並在各處理組內取平均值。如上文表21中所提供之資料以及下文表25中所示，在此檢定中，表23中所述之化合物比比較化合物1367010耐受。表 25 小鼠中之耐受性

化合物編號	FOB 3 h
PBS	0
1472450	3.33
1472451	3.00
1472452	2.33
1472453	1.00
1472454	2.33
1472455	1.33
1472456	1.00
1472457	2.67
1472458	1.33
1472459	1.67
1472460	1.67
1472461	2.00
1472462	2.67
1472463	2.67
1472464	2.00
1472465	3.67
1472466	2.67
1472467	3.67
1472468	3.33
1472469	2.67
1472470	2.67
1472471	3.00
1472472	2.67
1472473	3.33

實例 10 ：在大鼠中與人類 SCN1A 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性， 3 小時研究

在大鼠中對上文表23中所述之經修飾之寡核苷酸及比較化合物1367010進行測試，以評估寡核苷酸之耐受性。史-道二氏大鼠各自接受下表中所列之3 mg寡核苷酸之單鞘內(IT)劑量。各處理組由4只大鼠組成。一組4隻大鼠接受PBS作為陰性對照。注射之後3小時，評估各大鼠之7個不同身體部分的運動。7個身體部分為(1)大鼠尾巴；(2)大鼠後部姿勢；(3)大鼠後肢；(4)大鼠後爪；(5)大鼠前爪；(6)大鼠前部姿勢；(7)大鼠頭部。對於7個不同身體部分中之各者，若身體部分運動，則給予各大鼠子得分0，若身體部分麻痹，則給予大鼠子得分1 (功能觀察組合試驗得分或FOB)。在評估7個身體部分中之各者之後，將各大鼠之子得分求和，然後對各組取平均。例如，若在3 mg IT劑量之後3小時大鼠尾巴、頭部及所有其他評估的身體部分運動，則其總分為0。若另一大鼠在3 mg IT劑量之後3小時尾巴不運動，但所有其他評估的身體部分運動，則其得分為1。結果呈現為各處理組之平均得分。表 26 在 3 mg 劑量下大鼠 (n=4) 中之耐受性得分

化合物編號	3 h FOB
PBS	0.00
1367010	6.00

表 27 在 3 mg 劑量下大鼠 (n=4) 中之耐受性得分

化合物編號	3 h FOB
PBS	0.00
1472450	1.00
1472451	2.00
1472452	2.75
1472453	2.25
1472454	3.00
1472455	1.50
1472456	2.25
1472457	2.25
1472458	3.00
1472459	2.25
1472460	2.75
1472461	2.25
1472462	2.25
1472463	1.50
1472464	1.25
1472465	2.25
1472466	3.00
1472467	2.25
1472468	4.00
1472469	1.75
1472470	3.00
1472471	2.25
1472472	2.25
1472473	0.00

實例 11 ：在大鼠中與人類 SCN1A 互補的經修飾之寡核苷酸之耐受性，長期評估

在相同條件下進行的單獨研究中，在史-道二氏大鼠中對表23中所述之經修飾之寡核苷酸及比較化合物1367010進行測試，以評估長期耐受性。史-道二氏大鼠各自接受3 mg寡核苷酸或PBS之單鞘內(IT)遞送劑量。從處理後1週開始，將各動物稱重，並藉由訓練之觀察人員每週評估不良事件。不良事件定義為PBS處理之對照動物中不典型的神經功能障礙，包括但不限於：肢體張開異常、步態異常、震顫、呼吸異常、麻痹及痙攣。不良事件之發作定義為給藥後首次記錄功能障礙的那週。若未發生不良事件，則無發作(-)。若動物在1週前由於急性毒性而死亡，則無法驗證長期不良影響，且此類情況用『Ø』符號標記。類似的耐受性評估描述於Ostergaard等人,Nucleic Acids Res., 2013年11月,41 (21), 9634-9650以及Southwell等人,Mol Ther ., 2014年12月,22 (12), 2093-2106。

在研究結束時，殺死大鼠並收集組織。使用鈣結合蛋白(calbindin)染色在小腦切片上進行組織病理學檢查。評估鈣結合蛋白染色之小腦切片之普金斯細胞損失。如下表中所指示，在鈣結合蛋白染色之小腦切片中觀察到普金斯細胞損失。亦使用對經修飾之寡核苷酸具有特異性的抗體對小腦及脊髓進行評估。將顯示無寡核苷酸攝取的動物從組織病理學分析中排除。對於因不良事件而提前殺死的動物，組織學未完成。若在處理後少於一週內由於小鼠死亡而無法評估普金斯細胞損失，則將值指示為『N/A』。此外，使用RT-PCR量測了星形細胞膠質化之標誌物皮質GFAP (Abdelhak等人,Scientific Reports , 2018,8 , 14798)並在下文說明＞2倍的平均升高。若在處理後少於一週內由於小鼠死亡而無法評估GFAP水準，則將值指示為『N/A』。表 28 在 3 mg 劑量下大鼠中之長期耐受性

化合物編號	不良事件發作，處理後週數，個別動物	普金斯細胞損失(有損失的動物數/測試之動物數)	皮質GFAP mRNA ＞ 2倍PBS對照
PBS	-,-,-,-	0/4	100
1367010	Ø, Ø, Ø, Ø	N/A	N/A
1472450	-,-,-,-	0/4	151
1472451	-,7,-,-	2/4	128
1472452	-,-,7,-	0/4	112
1472453	-,-,-,-	1/4	100
1472454	-,-,-,-	0/4	136
1472455	-,-,-,-	0/4	116
1472456	-,-,-,7	0/4	140
1472457	-,-,-,-	0/4	135
1472458	-,-,-,3	0/4	118
1472459	-,-,-,-	0/4	129
1472460	-,-,-,-	1/4	130
1472461	-,-,-,-	0/4	130
1472462	-,-,-,-	0/4	130
1472463	-,-,-,-	0/4	118
1472464	-,-,-,-	0/4	111
1472465	-,-,-,-	0/4	119
1472466	7,-,7,7	1/4	159
1472467	-,-,-,-	0/4	120
1472468	-,-,-	0/3	148
1472469	-,-,-,-	0/4	123
1472470	-,-,-,-	0/4	150
1472471	-,-,-,-	0/4	142
1472472	-,-,-,-	0/4	125
1472473	-,-,-,-	0/4	115

實例 12 ：與人類 SCN1A 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計

如以下表29中所指示設計並合成了與人類SCN1A核酸互補的經修飾之寡核苷酸。

表29中經修飾之寡核苷酸之長度為18個核苷。各核苷包含2’-NMA糖部分。在整個各經修飾之寡核苷酸中之核苷間鍵聯皆為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在整個各經修飾之寡核苷酸中之所有胞嘧啶殘基皆為5-甲基胞嘧啶。

表29中所列之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (自核苷165982001至166152000截短的GENBANK登錄號NC_000002.12之補體) 100%互補。「起始位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最5’核苷。「終止位點」指示在靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補的最3’核苷。表 29 具有均勻硫代磷酸酯核苷間鍵聯之2’-NMA修飾之寡核苷酸

化合物編號	核鹼基序列(5’ 至3’)	SEQ ID No: 1 起始位點	SEQ ID No: 1 終止位點	SEQ ID No.
1521407	GGTAGCAAAAGGGGTAAT	144779	144796	881
1521408	AGCAAAAGGGGTAATACA	144776	144793	885
1521409	GCAAAAGGGGTAATACAG	144775	144792	888
1521410	CAAAAGGGGTAATACAGT	144774	144791	882
1521411	AAAGGGGTAATACAGTAC	144772	144789	880
1521412	AAGGGGTAATACAGTACC	144771	144788	883
1521413	GTAATACAGTACCCATAA	144766	144783	511
1521414	TAATACAGTACCCATAAT	144765	144782	750
1521415	AATACAGTACCCATAATA	144764	144781	736
1521416	ATACAGTACCCATAATAA	144763	144780	642
1521417	TACAGTACCCATAATAAA	144762	144779	519
1521418	ACAGTACCCATAATAAAG	144761	144778	741
1521419	CCCATCCAAGTTGGAGCA	144716	144733	664
1521420	CCATCCAAGTTGGAGCAA	144715	144732	645
1521421	CATCCAAGTTGGAGCAAG	144714	144731	550
1521422	ATCCAAGTTGGAGCAAGA	144713	144730	814
1521423	TCCAAGTTGGAGCAAGAT	144712	144729	692
1521424	CCAAGTTGGAGCAAGATT	144711	144728	587
1521425	CAAGTTGGAGCAAGATTA	144710	144727	523
1521426	AAGTTGGAGCAAGATTAT	144709	144726	778
1521428	TTGGAGCAAGATTATCCT	144706	144723	510
1521429	TGGAGCAAGATTATCCTA	144705	144722	816
1521430	GGAGCAAGATTATCCTAT	144704	144721	696
1521431	GAGCAAGATTATCCTATA	144703	144720	590

實例 13 ：在野生型小鼠中靶向 SCN1A 之經修飾之寡核苷酸之活性

將野生型C57BL/6小鼠分成各有3隻小鼠的組。各小鼠接受50 μg經修飾之寡核苷酸之單ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。

加入先前在WO 2019/040923及本文在上文描述之化合物編號1367010作為比較化合物。

處理後兩週殺死小鼠，且自皮質腦組織提取出RNA，以用於SCN1A RNA之即時qPCR分析，其使用引子探針組RTS48951 (上文所述)量測不包括小鼠形式NIE-1 (NIE-1^- )之SCN1A RNA之量，且使用引子探針組RTS48869 (正向序列GCTCAAGCTCATCTCGCT，本文中命名為SEQ ID NO: 27；反向序列AGCTCCGCAAGAAACATCC，本文中命名為SEQ ID NO: 28；探針序列TTCGATTTTGTGGTGGTCATCCTCTCC，本文中命名為SEQ ID NO: 29)量測SCN1A mRNA轉錄物之總量。SCN1A RNA呈現為PBS對照之平均值之% (%對照)，將其正規化至小鼠GAPDH。使用引子探針組mGapdh_LTS00102 (上文所述)擴增小鼠GAPDH。表 30 在野生型小鼠中經修飾之寡核苷酸對不包括NIE-1 (NIE-1^- )的小鼠SCN1A之量及小鼠SCN1A mRNA總量的影響，單劑量

化合物編號	皮質
NIE-1^-	總SCN1A mRNA
PBS	100	100
1367010	120	126
1429226	142	142
1521407	129	130
1521408	131	121
1521409	126	112
1521410	135	118
1521411	125	111
1521412	123	117
1521413	117	116
1521414	103	114
1521415	143	132
1521416	113	111
1521417	106	104
1521418	110	105
1521419	125	128
1521420	114	119
1521421	134	127
1521422	116	112
1521423	132	122
1521424	120	117
1521425	128	136
1521426	119	126
1521428	119	121
1521429	129	120
1521430	117	116
1521431	111	116

Claims

一種包含經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物，該經修飾寡核苷酸由12至30個連接之核苷組成，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與SCN1A核酸之相等長度部分至少85%互補，且其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
一種包含經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物，該經修飾之寡核苷酸由12至30個連接之核苷組成且核鹼基序列包含核鹼基序列SEQ ID NO 41-889中任一者之至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或18個連續核鹼基，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
如請求項1或請求項2之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與核鹼基序列SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2至少90%、95%或100%互補。
如請求項1至3中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個或至少18個連續核鹼基之一部分，其中該部分與SEQ ID NO: 13互補。
如請求項1至4中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之糖部分。
如請求項5之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。
如請求項6之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH₂ -O-及-CH(CH₃ )-O-。
如請求項5至7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環經修飾之糖部分。
如請求項8之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分、2’-NMA糖部分、2’-OMe糖部分或2’-F糖部分中任一者。
如請求項5至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個糖替代物。
如請求項10之寡聚化合物，其中該糖替代物為N-嗎啉基、經修飾之N-嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中任一者。
如請求項5之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷包含經修飾之糖部分。
如請求項12之寡聚化合物，其中各經修飾之糖部分為2’-MOE糖部分。
如請求項12之寡聚化合物，其中各經修飾之糖部分為2’-NMA糖部分。
如請求項1至14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
如請求項1至14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
如請求項15或請求項16之寡聚化合物，其中至少一個經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如請求項15或請求項17之寡聚化合物其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
如請求項15、17或18中任一項之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如請求項16之寡聚化合物，其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如請求項1至20中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。
如請求項21之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
如請求項1至22中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由12-22個、12-20個、14-20個、15-25個、16-20個、18-22個或18-20個連接之核苷組成。
如請求項1至23中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16個、17個或18個連接之核苷組成。
一種包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物：A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 41)，其中， A =腺嘌呤核鹼基，^m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， n = 2’-NMA糖部分，且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
一種包含根據以下化學記法中任一者之經修飾之寡核苷酸之寡聚化合物(5’至3’)： i) A_es G_eo T_eo T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； ii) A_es G_eo T_es T_eo G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； iii) A_es G_eo T_es T_es G_es G_eo A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； iv) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_eo ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； v) A_es G_es T_es T_eo G_eo G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； vi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_eo ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41): vii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_eo A_eo G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； viii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_eo T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； ix) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_eo A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； x) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xi) A_es G_eo T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xii) A_es G_es T_eo T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xiii) A_es G_es T_es T_es G_eo G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xiv) A_es G_es T_es T_es G_es G_eo A_eo G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xv) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_eo G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xvi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_eo T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xvii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_eo A_es A_es G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xviii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_eo G_es A_es T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xix) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_eo A_es T_eo T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xx) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_eo T_es T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xxi) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_eo T_eo A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 41)； xxii) A_eo A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_eo ^m C_e (SEQ ID NO: 890)； xxiii) A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_eo ^m C_e (SEQ ID NO: 891)； xxiv) A_eo A_es G_es T_es T_es G_es G_es A_es G_es ^m C_es A_es A_es G_es A_es T_es T_es A_es T_es ^m C_e (SEQ ID NO: 892)； xxv) G_ns G_ns T_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 881)； xxvi) A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_n (SEQ ID NO: 885)； xxvii) G_ns ^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 888)； xxviii)^m C_ns A_ns A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_n (SEQ ID NO: 882)； xxix) A_ns A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 880)； xxx) A_ns A_ns G_ns G_ns G_ns G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_n (SEQ ID NO: 883): xxxi) G_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 511)； xxxii) T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 750)； xxxiii) A_ns A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 736)； xxxiv) A_ns T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 642)； xxxv) T_ns A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 519)； xxxvi) A_ns ^m C_ns A_ns G_ns T_ns A_ns ^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns A_ns A_ns T_ns A_ns A_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 741)； xxxvii)^m C_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_n (SEQ ID NO: 664)； xxxviii)^m C_ns ^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_n (SEQ ID NO: 645)； xxxix)^m C_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_n (SEQ ID NO: 550)； xl) A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_n (SEQ ID NO: 814)； xli) T_ns ^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 692)； xlii)^m C_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_n (SEQ ID NO: 587)； xliii)^m C_ns A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 523)； xliv) A_ns A_ns G_ns T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 778)； xlv) T_ns T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_n (SEQ ID NO: 510)； xlvi) T_ns G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 816)； xlvii) G_ns G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_ns T_n (SEQ ID NO: 696)；或 xlviii) G_ns A_ns G_ns ^m C_ns A_ns A_ns G_ns A_ns T_ns T_ns A_ns T_ns ^m C_ns ^m C_ns T_ns A_ns T_ns A_n (SEQ ID NO: 590)，其中， A =腺嘌呤核鹼基，^m C = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-MOE糖部分， n = 2’-NMA糖部分， o = 磷酸二酯核苷間鍵聯，且 s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如請求項1至26中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物為單股寡聚化合物。
如請求項1至27中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
如請求項1至28中任一項之寡聚化合物，其包含有包含綴合部分及綴合連接子之綴合基團。
如請求項29之寡聚化合物，其中該綴合基團包含有包含1-3個GalNAc配體之GalNAc叢集。
如請求項29或請求項30之寡聚化合物，其中該綴合連接子由單鍵組成。
如請求項29之寡聚化合物，其中該綴合連接子為可裂解的。
如請求項29之寡聚化合物，其中該綴合連接子包含1-3個連接子-核苷。
如請求項29至33中任一項之寡聚化合物，其中該綴合基團在該經修飾之寡核苷酸之5’端連接至該經修飾之寡核苷酸。
如請求項29至33中任一項之寡聚化合物，其中該綴合基團在該經修飾之寡核苷酸之3’端連接至該經修飾之寡核苷酸。
如請求項1至27或29至35中任一項之寡聚化合物，其包含末端基團。
如請求項1至32或34至35中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物不包含連接子-核苷。
一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
(SEQ ID NO: 41)或其鹽。
如請求項38之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸，
(SEQ ID NO: 41)。
一種如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
如請求項41之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(S p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
如請求項41之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有(R p)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
如請求項41之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定經獨立選擇之立體化學組態的經修飾之寡核苷酸。
如請求項44之掌性富集群體，其中該群體富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸或富集在各硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態的經修飾之寡核苷酸。
如請求項44之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(R p)組態且在各其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(S p)組態的經修飾之寡核苷酸。
如請求項44之掌性富集群體，其中該群體富集在5’至3’方向上具有S p、S p及R p組態之至少3個連續硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
一種如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸之群體，其中該經修飾之寡核苷酸之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為無規立構。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至37中任一項之寡聚化合物、如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如請求項41至47中任一項之掌性富集群體或如請求項48之經修飾之寡核苷酸之群體，及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。
如請求項49之醫藥組成物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑，且其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工CSF (aCSF)或PBS。
如請求項50之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及人工CSF (aCSF)組成。
如請求項50之醫藥組成物，其中該醫藥組成物基本上由經修飾之寡核苷酸及PBS組成。
一種調節細胞之SCN1A RNA之剪接的方法，其包含將該細胞與如請求項1至37中任一項之寡聚化合物、如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如請求項41至47中任一項之掌性富集群體、如請求項48之經修飾之寡核苷酸之群體或、如請求項49至52中任一項之醫藥組成物接觸。
如請求項53之方法，其中包括NIE之SCN1A RNA之量減少。
如請求項54之方法，其中包括NIE-1之SCN1A RNA之量減少。
如請求項53至55中任一項之方法，其中不包括NIE之SCN1A RNA之量增加。
如請求項53至56中任一項之方法，其中不包括NIE-1之SCN1A RNA之量增加。
一種增加細胞之全長SCN1A RNA之量的方法，其包含將該細胞與如請求項1至37中任一項之寡聚化合物、如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如請求項41至47中任一項之掌性富集群體、如請求項48之經修飾之寡核苷酸之群體、或如請求項49至52中任一項之醫藥組成物接觸。
一種增加細胞、組織或器官中缺乏NIE-1之SCN1A RNA的方法，其包含將該細胞、組織或器官與如請求項1至37中任一項之寡聚化合物、如請求項38至40中任一項之經修飾之寡核苷酸、如請求項41至47中任一項之掌性富集群體、如請求項48之經修飾之寡核苷酸之群體、或如請求項49至52中任一項之醫藥組成物接觸。
如請求項53至59中任一項之方法，其中該細胞在體外。
如請求項53至59中任一項之方法，其中該細胞在動物體內。
一種改善與SCN1A有關之疾病的方法，其包含向患有與SCN1A有關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體投與治療有效量如請求項49至52中任一項之醫藥組成物，從而治療該與SCN1A有關之疾病。
如請求項62之方法，其包含鑑別出患有與SCN1A有關之疾病或處於發展該疾病之風險中的個體。
如請求項62或請求項63之方法，其中該與SCN1A有關之疾病為發展性或癲癇性腦病。
如請求項64之方法，其中該發展性或癲癇性腦病為卓飛症候群(Dravet Syndrome)。
如請求項64之方法，其中該發展性或癲癇性腦病為以下中之任一者：全面性癲癇伴熱性癲癇發作附加症(Genetic Epilepsy with Febrile Seizures Plus；GEFS+)、熱性癲癇發作、特發性/一般性全身性癲癇(Idiopathic/Generic Generalized Epilepsies；IGE/GGE)、顳葉癲癇(Temporal Lobe Epilepsy)、肌抽躍失姿態癲癇(Myoclonic Astatic Epilepsy；MAE)、雷葛氏症候群(Lennox-Gastaut Syndrome)或嬰兒移行性局部癲癇(Migrating Partial Epilepsy of Infancy；MMPSI)。
如請求項64至66中任一項之方法，其中該發展性或癲癇性腦病之至少一個症狀已經改善。
如請求項67之方法，其中該症狀為以下中任一者：癲癇發作、行為及發展遲緩、運動及平衡功能障礙、動作及認知功能障礙、語言及言語遲緩、視覺動作統合功能障礙、視覺感受功能障礙、執行功能障礙、生長及營養問題、睡眠困難、長期感染、感覺統合障礙或自主神經機能障礙。
如請求項68之方法，其中該等癲癇發作為頻繁或延長的。
如請求項68或請求項69之方法，其中該癲癇發作為以下中任一者：痙攣性、肌抽躍、失神、局部型、遲鈍狀態及陣攣型。
如請求項62至70中任一項之方法，其中向中樞神經系統或全身投與該醫藥組成物。
如請求項71之方法，其中向中樞神經系統及全身投與該醫藥組成物。
如請求項62至71中任一項之方法，其中以鞘內、全身、皮下或肌內中任一方式投與該醫藥組成物。