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TW202120550A - 雙特異性蛋白質 - Google Patents

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TW202120550A
TW202120550A TW109126896A TW109126896A TW202120550A TW 202120550 A TW202120550 A TW 202120550A TW 109126896 A TW109126896 A TW 109126896A TW 109126896 A TW109126896 A TW 109126896A TW 202120550 A TW202120550 A TW 202120550A
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bispecific
cell
lymphoma
bispecific antibody
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TW109126896A
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柴山史朗
手智也
Original Assignee
日商小野藥品工業股份有限公司
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Abstract

本發明之課題為提供用以預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療自體免疫疾病或血癌等之新穎藥劑。
本發明之發明人等深入研究之結果，著眼於PD-1/CD4雙特異性蛋白質作為可解決相關課題之物質，進而完成本發明。本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質係減低投予時細胞激素之產生或釋放之誘導，因此，可期待抑制投予後之輸注反應或細胞激素釋放症候群之表現。

Description

雙特異性蛋白質
本揭示係有關可分別與PD-1及CD4特異性結合之雙特異性蛋白質(以下，簡稱為「PD-1/CD4雙特異性蛋白質)及其醫藥治療用途。
PD-1為屬於免疫球蛋白家族之免疫抑制受體，為具有抑制藉由來自抗原受體之刺激被活化之T細胞之免疫活化信號之功能之分子。從PD-1剔除(knockout)小鼠之分析等可知PD-1信號係在自體免疫性擴張型心肌症、類狼瘡症候群、自體免疫性腦脊髓炎、全身性紅斑狼瘡、移植物對抗宿主疾病、I型糖尿病及風濕性關節炎等自體免疫疾病的抑制中扮演重要角色。因此，提出增強PD-1信號之物質可成為自體免疫疾病等之預防或治療劑。
T細胞之所有亞型係在其表面表現CD3抗原。另一方面，此等以外之抗原，根據亞型而有不同表現模式。例如除了CD3之外，殺手T細胞表現CD8，輔助T細胞表現CD4，調節性T細胞表現CD4、CD25、FoxP3、CD127等。
至今，增強PD-1信號之物質已知有識別PD-1之雙特異性抗體(專利文獻1至3)。此等雙特異性抗體係將識別屬於T細胞受體複合體成員之CD3的抗體之抗原識別部位與識別PD-1之抗體之抗原識別部位以基因工學連結而成 者，藉由提昇PD-1位於T細胞受體複合體附近之頻率，而具有增強PD-1對T細胞受體複合體之抑制信號之作用。再者，於此等專利文獻亦記載PD-1雙特異性抗體可用於自體免疫疾病之預防或治療。
另一方面，至今仍完全無報告本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1] 國際公開第2003/011911號說明書
[專利文獻2] 國際公開第2004/072286號說明書
[專利文獻3] 國際公開第2013/022091號說明書
本發明之目的為提供用以預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療自體免疫疾病或血癌等之新穎藥劑。
本發明之發明人等深入研究之結果著眼於PD-1/CD4雙特異性蛋白質作為可解決相關課題之物質，進而完成本發明。
亦即，本發明為如下所述。
[1]一種雙特異性蛋白質，係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂(於本說明書，與「可分別與PD-1及CD4特異性結合之雙特異 性蛋白質」同義，對此等亦簡稱為「PD-1/CD4雙特異性蛋白質」)。
[2]一種雙特異性抗體(以下，亦簡稱為「PD-1/CD4雙特異性抗體」)或其抗體片段(以下，將此等合稱為「PD-1/CD4雙特異性抗體等」)，係具有與PD-1特異性結合之第一臂(以下，亦簡稱為「第一臂」)及與CD4特異性結合之第二臂(以下，亦簡稱為「第二臂」)。
[3]如前項[2]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第一臂以包含與PD-1特異性結合之抗體(以下，稱為「抗PD-1抗體」)之重鏈可變區域(以下，簡稱為「VH」)及輕鏈可變區域(以下，簡稱為「VL」)為特徵。
[4]如前項[2]或[3]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第二臂以含有與CD4特異性結合之抗體(以下，稱為「抗CD4抗體」)之VH及VL為特徵。
[5]如前項[4]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有從N末端，以抗PD-1抗體之VL、抗CD4抗體之VH、抗CD4抗體之VL及抗PD-1抗體之VH之順序，分別隔著肽連結基或直接連結而成之結構。
[6]如前項[4]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有從N末端，以抗PD-1抗體之VL、抗PD-1抗體之VH、抗CD4抗體之VH及抗CD4抗體之VL之順序，分別隔著肽連結基或直接連結而成之結構。
[7]如前項[4]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有從N末端，以抗CD4抗體之VL、抗PD-1抗體之VH、抗PD-1抗體之VL及抗CD4抗體之VH之順序，分別隔著肽連結基或直接連結而成之結構。
[8]如前項[5]至[7]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有下列結構：於前項[5]所述之抗PD-1抗體之VH、前項[6]所述之抗CD4 抗體之VL或前項[7]所述之抗CD4抗體之VH之C末端，與具有鉸鏈部位至CH3區域之人類IgG恆定區域(以下，亦簡稱為「IgG恆定區域(鉸鏈/CH3)」)之多肽之N末端進一步隔著肽連結基或直接連結而成者。
[9]如前項[4]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有從N末端，以抗CD4抗體之VL、抗CD4抗體之VH、IgG恆定區域(鉸鏈/CH3)、抗PD-1抗體之VH及抗PD-1抗體之VL之順序，分別隔著肽連結基或直接連結而成之結構。
[10]如前項[8]或[9]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係更具有包含具有IgG恆定區域(鉸鏈/CH3)之多肽之結構。
[11]如前項[5]至[10]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，肽連結基為Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列編號1；此處，「Gly」表示甘胺酸，「Ser」表示絲胺酸，以下，亦簡述為「(Gly)×4-Ser」)或Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(序列編號2；以下，亦簡述為「((Gly)×4-Ser)×3」)(惟，存在複數個肽連結基時，各個可相同亦可不同，亦可其中至少一個為該肽連結基)。
[12]如前項[2]至[4]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係雙價抗體(diabody)、雙特異性sc(Fv)2、雙特異性微抗體(bispecific minibody)、雙特異性F(ab')2、雙特異性雜交抗體、共價型雙價抗體(雙特異性DART)、雙特異性(FvCys)2、雙特異性F(ab'-zipper)2、雙特異性(Fv-zipper)2、雙特異性三鏈抗體或雙特異性mAb2之形態。
[13]如前項[2]至[4]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係雙特異性雜交抗體之形態。
[14]如前項[2]至[4]及[13]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係IgG抗體。
[15]如前項[14]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，IgG抗體為IgG1抗體或IgG4抗體。
[16]如前項[15]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該IgG1抗體對Fc受體之結合係經消失或減弱。
[17]如前項[15]或[16]所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該IgG1抗體之ADCC及/或CDC作用係經消失或減弱。
[18]如前項[8]至[10]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，IgG恆定區域(鉸鏈/CH3)之同型(isotype)為IgG1。
[19]如前項[1]至[18]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，PD-1及CD4分別為人類PD-1及人類CD4。
[20]如前項[2]至[19]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，為單株抗體。
[21]如前項[2]至[20]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係人類化或完全人類型抗體。
[22]如前項[2]至[21]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係分離抗體。
[23]如前項[1]所述之雙特異性蛋白質，其中，該雙特異性蛋白質為支架(Scaffold)分子或修飾型肽。
[24]如前項[23]所述之雙特異性蛋白質，其中，該Scaffold分子為模擬抗體蛋 白(Adnectin)、Affibody(註冊商標)、Anticalin(註冊商標)、高親和性多聚體(Avimer)、DARPin、LRRP、Affilin(註冊商標)、擬抗體(Affitin)或Fynomer之形態，該修飾型肽為特殊環狀肽、Addbody(註冊商標)或Mirabody(註冊商標)之形態。
[25]如前項[1]至[24]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係傳達PD-1之抑制性信號(或使用於傳達PD-1之抑制性信號)。
[26]如前項[1]至[25]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等之兩相互作用(以下，亦簡述為「容許PD-1及PD-L之相互作用」)。
[27]如前項[1]至[26]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放。
[28]如前項[1]至[25]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用，並且，充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放。
[29]如前項[27]或[28]所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，細胞激素至少為IL-2、IFN-γ或TNF-α。
[30]如前項[1]至[29]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其係與表現於淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之PD-1及CD4分別特異性結合。
[31]如前項[1]至[29]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係與表現於屬於標的細胞之血癌細胞上之PD-1、及表限於屬於效應細胞(effector cell)之淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之CD4分別特異性結合。
[32]如前項[1]至[29]中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係與表現於屬於標的細胞之源自T細胞之癌細胞上之PD-1及CD4分別特異性結合。
[33]一種單離PD-1/CD4雙特異性抗體，其係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂，其中，
(a)該第一臂含有抗PD-1抗體之VH及VL，該第二臂含有抗CD4抗體之VH及VL，
(b)與表現於淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之PD-1及CD4分別特異黃性結合，及
(c)(i)傳達PD-1之抑制性信號、(ii)該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用、及/或(iii)充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放。
[34]一種人類化或完全人類型單離PD-1/CD4雙特異性抗體，其係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂，其中，
(a)該第一臂含有抗人類PD-1抗體之VH及VL，第二臂含有抗人類CD4抗體之VH及VL，
(b)與表現於淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之PD-1及CD4分別特異性結合，
(c)(i)傳達PD-1之抑制性信號、(ii)該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用、及/或(iii)充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放，及
(d)(i)為雙特異性雜交抗體之形態及/或(ii)為IgG1抗體或IgG4抗體。
[35]一種單離PD-1/CD4雙特異性抗體，其係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂，其中，
(a)該第一臂含有抗PD-1抗體之VH及VL，該第二臂含有抗CD4抗體之VH及VL，
(b)(i)與表現於屬於標的細胞之血癌之癌細胞上之PD-1、及表限於屬於效應細胞之淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之CD4分別特異性結合、或(ii)與表現於屬於標的細胞之源自T細胞之癌細胞上之PD-1及CD4分別特異性結合，及
(c)充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放。
[36]一種人類化或完全人類型單離PD-1/CD4雙特異性抗體，其係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂，其中，
(a)該第一臂含有抗人類PD-1抗體之VH及VL，該第二臂含有抗人類CD4抗體之VH及VL，
(b)(i)與表現於屬於標的細胞之血癌之癌細胞上之PD-1、及表限於屬於效應細胞之淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)上之CD4分別特異性結合、或(ii)與表現於屬於標的細胞之源自T細胞之癌細胞表現之PD-1及CD4分別特異性結合，
(c)充分地減低投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生或釋放，及
(d)(i)為雙特異性雜交抗體之形態及/或(ii)為IgG1抗體或IgG4抗體。
[1-1]一種醫藥組成物，係含有選自前項[1]至[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[1-2]如前項[1-1]所述之醫藥組成物，係更含有藥學上容許之載體。
[2-1]一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[2-2]如前項[2-1]所述之劑，其中，自體免疫疾病為貝賽特氏症(Behçet's disease)、全身性紅斑性狼瘡、慢性圓板狀紅斑性狼瘡、多發性硬化症、系統性硬皮症、進行性系統性硬化症、硬皮症、多發性肌炎、皮膚肌炎、結節性動脈周圍炎(結節性多發動脈炎、顯微鏡性多發血管炎)、大動脈炎症候群(高安動脈炎(Takayasu arteritis))、惡性類風濕性關節炎、類風濕性關節炎、幼年特發性關節炎、脊椎關節炎、混合性結締組織病、卡斯爾曼症(Castleman disease)、修格蘭氏症候群(Sjögren's syndrome)、成人史迪爾氏病(Adult Still's disease)、血管炎、過敏性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、類風濕性血管炎、大型血管炎、抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA，antineutrophil cytoplasmic antibody)相關血管炎(例如肉芽腫性多血管炎及嗜酸性球性肉芽腫性多血管炎(Eosinophilic granulomatosis with polyangitis))、柯根症候群(Cogan's syndrome)、RS3PE症候群(Remitting Seronegative Symmetrical Synovitis with Pitting oedema)、顳動脈炎、風濕性多發肌痛症、纖維肌痛症、抗磷脂質抗體症候群、嗜酸性球性肌膜炎、IgG4關連疾病(例如原發性硬化性膽道炎及自體免疫性胰臟炎等)、格林-巴利症候群(Guillain-Barré syndrome)、重症肌無力症、慢性萎縮性胃炎、自體免 疫性肝炎、非酒精性脂肪肝炎、原發性膽汁性肝硬變、古德巴斯捷氏症候群(Goodpasture's syndrome)、快速進行性腎絲球腎炎(Rapid Progressive Glomeluronephritis)、狼瘡腎炎、巨紅血球貧血、自體免疫性溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性嗜中性球減少症、特發性血小板減少性紫斑病(Idiopathic thrombocytopenic purpura)、巴塞多氏病(Basedow’s disease)(葛瑞夫茲病(Graves disease)(甲狀腺功能亢進症))、橋本氏病、自體免疫性腎上腺機能不全、原發性甲狀腺機能低下症、愛迪生氏病(Addison's disease)(慢性腎上腺機能減退症)、特發性愛迪生氏病、I型糖尿病、緩進行性I型糖尿病(成人潛在性自體免疫性糖尿病)、局部性硬皮症、乾癬、乾癬性關節炎、水疱性類天疱瘡(Bullous pemphigoid)、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線狀IgA水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症(epidermolysis bullosa acquisita)、圓形禿、白斑、尋常性白斑、視神經脊髓炎、慢性炎症性脫髓性多發神經炎、多灶性運動神經病、類肉瘤病、巨細胞性動脈炎、肌萎縮性側索硬化症、原田氏症、自體免疫性視神經症、特發性無精子症、習慣性流產、炎症性腸疾病(例如潰瘍性大腸炎、克隆氏症(Crohn's disease))、乳糜瀉病(coeliac disease)、僵直性脊椎炎、重症氣喘、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、嗜酸性球性副鼻腔炎、擴張型心肌症、全身性肥大細胞增生症或包涵體肌炎。
[2-3]一種自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[2-4]一種I型糖尿病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係含有 選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分，並且，與選自下列任一種以上之藥劑一起投予：胰島素製劑(例如人類胰島素、甘精胰島素(Insulin Glargine)、賴脯胰島素(insulin lispro)、地特胰島素(Insulin Detemir)、門冬胰島素(Insulin Aspart)等)、磺醯基尿素劑(例如格列苯脲(Glibenclamide)、格列齊特(Gliclazide)及格列美脲(Glimepiride)等)、速效型胰島素分泌促進藥(例如那格列奈(Nateglinide)等)、雙胍類製劑(例如二甲雙胍(Metformin)等)、胰島素抵抗性改善藥(例如吡格列酮(Pioglitazone)等)、α-葡萄糖苷酶抑制藥(例如阿卡波糖(Acarbose)及伏格列波糖(Voglibose)等)、糖尿病性神經症治療藥(例如依帕司他(Epalrestat)、脈息禮延(Mexiletine)及咪達普利(Imidapril)等)、GLP-1類似物製劑(例如利拉魯肽(Liraglutide)、艾塞那肽(Eexenatide)及利西拉來(Lixisenatide)等)及DPP-4抑制劑(例如西格列汀(Sitagliptin)、維格列汀(Vildagliptin)、阿格列汀(Alogliptin)等)。
[2-5]一種多發性硬化症之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分，並且，特徵與選自下列任一種以上之藥劑一起投予：類固醇藥(例如可體松(Cortisone)、乙酸可體松、氫化可體松、氫化可體松磷酸鈉、氫化可體松琥珀酸鈉、氟氫可體松乙酸酯、去氫皮質醇(prednisolone)、去氫皮質醇乙酸酯、去氫皮質醇琥珀酸鈉、丁基乙酸去氫皮質醇、去氫皮質醇磷酸鈉、鹵潑尼松乙酸酯、甲基去氫皮質醇、甲基去氫皮質醇乙酸酯、甲基去氫皮質醇琥珀酸鈉、去炎松(Triamcinolone)、乙酸去炎松、去炎松縮酮、地塞米松(dexamethasone)、地塞米松乙酸酯、地塞米松 戊酸酯、地塞米松培酸酯、地塞米松棕櫚酸酯、地塞米松丙酸酯、地塞米松磷酸鈉、地塞米松間磺基苯甲酸酯鈉、對氟米松(Paramethasone)、對氟米松乙酸酯、倍他米松(Betamethasone)、倍他米松二丙酸酯、倍他米松戊酸酯、倍他米松乙酸酯、倍他米松丁酸酯丙酸酯及倍他米松磷酸鈉等)、干擾素β-1a、干擾素β-1b、乙酸格拉替雷(Glatiramer Acetate)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、環孢素(ciclospolin)、胺甲蝶呤(Methotrexate)、克拉屈濱(Cladribine)、促腎上腺皮質素(ACTH)、促皮質素(corticotropin)、咪唑立賓(Mizoribine)、他克莫司(Tacrolimus)、芬戈莫德(Fingolimod)及阿侖單抗(Alemtuzumab)。
[2-6]一種全身性紅斑性狼瘡之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分，並且，與選自下列任一種藥劑一起投予：類固醇藥(例如前項[2-5]所述之類固醇藥)、免疫抑制劑(例如環孢素、他克莫司及芬戈莫德等)及貝利木單抗(Belimumab)。
[2-7]一種類風濕性關節炎之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效與一種以上選自下列任一種以上之藥劑一起投予：類固醇藥(例如前項[2-5]所述之類固醇藥)、抗風濕藥(例如胺甲蝶呤、柳胺磺胺吡啶、布西拉明(Bucillamine)、來氟米特(Leflunomide)、咪唑立賓及他克莫司等)、抗細胞激素藥(例如英利昔單抗(Infliximab)、阿達木單抗(Adalimumab)、特昔利單抗(Tocilizumab)、依那西普(Etanercept)、戈利木單抗(Golimumab)及賽妥珠單抗(Certolizumab))及阿巴西普(Abatacept)。
[2-8]一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係與前項[2-4]至[2-7]列舉之任一種以上的藥劑一起投予，並且，含有選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質、PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[2-9]如前項[2-4]至[2-8]所述之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係對患者投予前項[2-4]至[2-7]列舉之任一種以上的藥劑。
[2-10]如前項[2-4]至[2-8]所述之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係於前項[2-4]至[2-7]列舉之任一種以上的藥劑投予後進行投予。
[2-11]如前項[2-4]至[2-8]所述之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係於前項[2-4]至[2-7]列舉之任一種以上的藥劑投予前進行投予。
[3-1]一種血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係含有選自前項[1]至[29]、[31]、[32]、[35]及[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[3-2]如前項[3-1]所述之劑，其中，該血癌為選自下列之1種以上之癌：多發性骨髓瘤、惡性淋巴瘤、白血病、中樞神經系原發惡性淋巴瘤及增骨髓增生性症候群。
[3-3]如前項[3-2]所述之劑，其中，該血癌為惡性淋巴瘤，惡性淋巴瘤為非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma)或何杰金氏淋巴瘤。
[3-4]如前項[3-3]所述之劑，其中，惡性淋巴瘤為非何杰金氏淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤或T/NK細胞性非何杰金氏淋巴瘤。
[3-5]如前項[3-4]所述之劑，其中，非何杰金氏淋巴瘤為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤，B細胞性非何杰金氏淋巴瘤為前體B細胞淋巴母細胞淋巴瘤、前體B 細胞急性淋巴母細胞白血病、慢性B淋巴性白血病、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、淋巴結邊緣區B細胞性淋巴瘤、節外緣帶B細胞性淋巴瘤、脾原發邊緣區B細胞性淋巴瘤、髮樣細胞白血病(hairy cell leukemia)、髮樣細胞白血病/變異型、濾胞性淋巴瘤、幼兒型濾胞性淋巴瘤、瀰漫性大細胞型B細胞性淋巴瘤、瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/非特定型、脾瀰漫性紅脾髓小型B細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、原發性縱隔大細胞型B細胞性淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、布凱特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(Mantle cell lymphoma)、單株性B細胞淋巴球增加症(monoclonal B-cell lympocytosis)、脾B細胞淋巴瘤/白血病/不能分類型、意義不明之單株性γ球蛋白血症/IgM型、μ重鏈病、λ重鏈病、α重鏈病、漿細胞骨髓瘤、孤立性骨浆细胞瘤、髓外漿細胞瘤、單株性免疫球蛋白沉積性疾病、伴隨IRF4再構成之大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性皮膚濾胞中心淋巴瘤、T細胞/組織球豐富型大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性皮膚瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/下肢型、EBV陽性瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/非特定型、EBV陽性黏膜皮膚潰瘍、慢性炎症關連瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫症、血管內大細胞型B細胞淋巴瘤、ALK陽性大細胞型B細胞淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、原發性體腔液淋巴瘤、HHV8陽性瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/特異型、伴隨11q異常之類布凱特氏淋巴瘤、伴隨MYC及BCL2及BCL6雙方或一方再構成之重度B細胞淋巴瘤、重度B細胞淋巴瘤/非特異型或瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤及伴隨古典型何杰金氏淋巴瘤中間之特徵之B細胞淋巴瘤/不能分類型。
[3-6]如前項[3-4]所述之劑，其中，非何杰金氏淋巴瘤為T/NK細胞性非何杰 金氏淋巴瘤，T/NK細胞性非何杰金氏淋巴瘤為前體T細胞淋巴母細胞淋巴瘤、慢性T淋巴球性白血病、T細胞急性淋巴性白血病(T細胞淋巴母細胞白血病)、T細胞型大顆粒淋巴球性白血病、大顆粒NK細胞性白血病、急速進行性NK細胞白血病、末梢性T細胞淋巴瘤、末梢性T細胞淋巴瘤/非特定型、不能分類末梢性T細胞淋巴瘤、血管免疫芽球性T細胞性淋巴瘤、未分化大細胞(CD30陽性)淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、腸管T細胞性淋巴瘤、腸症型T細胞淋巴瘤、肝脾型γ-δT細胞淋巴瘤、皮下脂肪組織炎樣T細胞淋巴瘤、菌狀息肉症、塞扎萊症候群(sezary syndrome)、何杰金氏樣/何杰金氏關連未分化大細胞淋巴瘤、節外性NK/T細胞淋巴瘤、成人T細胞性淋巴瘤、T細胞前淋巴球性白血病、慢性NK細胞淋巴增殖異常症、幼兒全身性EBV陽性T細胞淋巴瘤、種痘樣水疱症樣淋巴增殖異常症、節外性NK/T細胞淋巴瘤/鼻型、腸症關連T細胞淋巴瘤、單形性上皮向性腸管T細胞淋巴瘤、胃腸管緩徐進行性T細胞淋巴增殖異常症、肝脾T細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD30陽性T細胞淋巴增殖異常症、淋巴瘤樣丘疹症、原發性皮膚未分化大細胞型淋巴瘤、原發性皮膚γδT細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD8陽性急速進行性表皮向性細胞傷害性T細胞淋巴瘤、原發性皮膚先端型CD8陽性T細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD4陽性小型/中型T細胞淋巴增殖性症、濾胞T細胞淋巴瘤、伴隨濾胞輔助T細胞漿之節性末梢性T細胞淋巴瘤、未分化大細胞淋巴瘤/ALK陽性型、未分化大細胞淋巴瘤/ALK陰性型或人工乳房關連未分化大細胞淋巴瘤。
[3-7]如前項[3-3]所述之劑，其中，惡性淋巴瘤為何杰金氏淋巴瘤，何杰金氏淋巴瘤為古典型何杰金氏淋巴瘤(例如結節硬化型、混合細胞型、淋巴球豐富型及淋巴球減少型)或結節性淋巴球優位型何杰金氏淋巴瘤。
[3-8]如前項[3-2]所述之劑，其中，該血癌為白血病，白血病為急性骨髓性白血病、急性前骨髓球性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴性白血病、骨髓異形成症候群或慢性骨髓性白血病。
[3-9]如前項[3-1]至[3-8]中任一項所述之劑，其中，血癌為幼兒的血癌。
[3-10]如前項[3-1]至[3-9]中任一項所述之劑，其中，該血癌為藉由其他抗癌藥之治療效果不充完或非充分之血癌。
[3-11]如前項[3-1]至[3-10]中任一項所述之劑，其中，該血癌為藉由其他抗癌藥治療後惡化之血癌。
[3-12]如前項[3-1]至[3-9]中任一項所述之劑，其中，血癌病患係沒有藉由其他抗癌藥治療之歷史。
[3-13]如前項[3-1]至[3-12]中任一項所述之劑，其中，血癌為復發性及/或難治性。
[3-14]如前項[3-1]至[3-13]中任一項所述之劑，係進一步與其他抗癌藥併用。
[3-15]如前項[3-10]、[3-11]或[3-14]所述之劑，其中，其他抗癌藥為選自下列一種以上之藥劑：烷基化劑、鉑製劑、代謝拮抗劑(例如葉酸代謝拮抗藥、吡啶代謝抑制藥、嘌呤代謝抑制藥)、核糖核苷酸還原酶抑制藥、核苷酸類似物、拓撲異構酶抑制藥、微小管聚合抑制藥、微小管脫聚合抑制藥、抗腫瘍性抗生物質、細胞激素製劑、分子標的藥及癌免疫治療藥。
[3-16]如前項[3-14]或[3-15]所述之劑，係對投予該其他抗癌藥之任一種以上藥劑的病患進行投予。
[3-17]如前項[3-14]或[3-15]所述之劑，係於該其他抗癌藥之任一種以上藥劑投予後進行投予。
[3-18]如前項[3-14]或[3-15]所述之劑，係於該其他抗癌藥之任一種以上藥劑投予前進行投予。
[3-19]如前項[3-1]至[3-18]中任一項所述之劑，係與類固醇藥一起投予。
[3-20]如前項[3-1]至[3-18]中任一項所述之劑，係於類固醇藥投予後進行投予。
[4-1]一種血癌細胞增殖抑制劑，係含有選自前項[1]至[29]、[31]、[32]、[35]及[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
[5-1]一種靜脈內注射用製劑，係含有選自前項[1]至[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段及藥學上容許之載體。
[5-2]如前項[5-1]所述之靜脈內注射用製劑，係用於自體免疫疾病、移植物對抗宿主疾病(GVHD)或血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療。
[5-3]如前項[5-1]或[5-2]所述之靜脈內注射用製劑，係點滴用。
[6-1]一種自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療方法，係包含對病患投予有效量之選自前項[1]至[30]、 [33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段。
[6-2]一種血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療方法，係包含對病患投予有效量之選自前項[1]至[29]、[31]、[32]、[35]及[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段。
[6-3]如選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質 或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係使用於於自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療中。
[6-4]如選自前項[1]至[29]、[31]、[32]、[35]及[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係使用於於血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療中。
[6-5]一種選自前項[1]至[30]、[33]及[34]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段之用途，係用於用以製造自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療之醫藥。
[6-6]一種選自前項[1]至[29]、[31]、[32]、[35]及[36]中任一項之PD-1/CD4雙特異性蛋白質或PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段之用途，係用於用以製造血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療之醫藥。
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質可使用於對於自體免疫疾病或血癌等之預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療。
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質可減低投予時細胞激素之產生或釋放之誘導，因此，可期待抑制投予後之輸注反應或細胞激素釋放症候群之表現。
圖1係表示實施例1記載之PD-1/CD4雙特異性抗體(以下，亦簡稱為 「PD-1/CD4 scDb」)之結構。圖中，「VH CD4」及「VL CD4」分別表示抗CD4抗體之VH及VL，「VH PD-1」及「VL PD-1」分別表示抗PD-1抗體之VH及VL。「L1」、「L2」及「L3」表示連結各VH及VL之肽連結基，L1及L3具有以(Gly)×4-Ser表示之結構，L2具有以((Gly)×4-Ser)×3表示之結構。
圖2係表示實施例2記載之PD-1/CD4雙特異性抗體(以下，亦簡稱為「PD-1/CD4 scDb-Fc」)之結構。圖中，「IgG1(鉸鏈(Hinge)-CH3)」表示具有從鉸鏈部至CH3區域之人類IgG1恆定區域。「L4」表示具有以(Gly)×4-Ser或((Gly)×4-Ser)×3表示之結構之肽。其他符號與圖1表示者同意義。
圖3係表示PD-1/CD4 scDb對小鼠PD-1顯示特異結合性之流式細胞術。圖中，Clone-1及Clone-A至-H分別表示於實施例1製作之PD-1/CD4 scDb。
圖4係表示PD-1/CD4 scDb-Fc對小鼠PD-1顯示特異結合性之流式細胞術。圖中，Clone-2及Clone-I至-P分別表示分別於實施例2製作之PD-1/CD4 scDb-Fc。
圖5係表示PD-1/CD4 scDb對小鼠CD4顯示特異結合性之流式細胞術。
圖6係表示PD-1/CD4 scDbFc對小鼠CD4顯示特異結合性之流式細胞術。
圖7係表示於實驗性過敏性腦脊髓炎小鼠模型(EAE模型)中之兩PD-1/CD4雙特異性蛋白質(Clone-1及Clone-2)之作用。
圖8係表示於投予了PD-1/CD4雙特異性蛋白質之小鼠之血漿中細胞激素濃度。圖中，「＊」及「＊＊」表示藉由與載體(Vehicle)之t檢定，分別在p<0.05及p<0.01為顯著。
PD-1(程序性細胞死亡1(Programmed Cell Death-1)於一實施形態中，係由GenBank登錄編號NP_005009表示之胺基酸序列構成之膜型蛋白質。於本說明書中以「PD-1」記載時在無特別限定下，亦有使用為包含其所有同型體及保存本發明之「與PD-1特異性結合之第一臂」之抗原決定位之此等改變體之情況。於本發明，PD-1較佳為人類PD-1。
CD4於一實施形態具有以Genbank登錄編號NP_000607表示之胺基酸序列。於本說明書以「CD4」記載時在無特別限定下，亦有使用為包含其所有同型體及保存本發明之「與CD4特異性結合之第二臂」之抗原決定位之此等改變體之情況。於本發明，CD4較佳為人類CD4。
於本說明書中，「單離」係指從由宿主細胞萃取之含有複數或無數成分之夾雜物中藉由鑑定、分離及/或精製，成為實質上為單一之純粹成分。
於本說明書，「雙特異性蛋白質」係指於一分子中具備對於二種不同抗原分子或抗原決定位之結合特異性之蛋白質，惟只要具有該結合特異性，可為任一種形態，可列舉例如雙特異性抗體及其抗體片段、Scaffold分子(參照Current Opinion in Biotechnology(2006),Vol.17,No.6,p.653-658、Current Opinion in Biotechnology(2007),Vol.18,p.1-10、Current Opinion in Structural Biology(1997),Vol.7,p.463-469或Protein Science(2006),Vol.15,p.14-27)及修飾型肽(例如特殊環狀肽(J.Synth.Org.Chem.,Jpn.(2017),Vol.75,No.11,p.1171-1178)、Addbody(註冊商標)及Mirabody(註冊商標)等)等，惟不限定於此等。再者，此等Scaffold分子之例可列舉例如模擬抗體蛋白(Adnectin)(參照WO2001/64942)、Affibody(註冊商標)(參照WO95/19374及WO2000/63243)、 Anticalin(註冊商標)(參照WO99/16873)、高親和性多聚體(Avimer)(參照Nature Biotechnology(2005),Vol.23,p.1556-1561)、DARPin(參照Nature Biotechnology(2004),Vol.22,p.575-582)、LRRP(參照Nature(2004),Vol.430,No.6996,p.174-180)、Affilin(註冊商標)(參照WO2001/04144及WO2004/106368)、擬抗體(Affitin)(參照Journal of molecular biology(2008),Vol.383,No.5,p.1058-1068)及Fynomer(WO2011/023685)等，惟不限定於此等。
於本說明書中，「單株抗體」係指從對於同一特定之抗原結合之實質上為均勻之抗體集團獲得之抗體。
於本說明書，「雙特異性抗體」係指於一分子中具備對於二種不同抗原分子或抗原決定位之結合特異性之抗體，進一步，係指從實質上為均勻之抗體集團獲得之雙特異性抗體。
雙特異性抗體之形態有例如：雙價抗體、雙特異性sc(Fv)2、雙特異性微抗體、雙特異性F(ab')2、雙特異性雜交抗體、共價型雙價抗體(雙特異性DART)、雙特異性(FvCys)2、雙特異性F(ab'-zipper)2、雙特異性(Fv-zipper)2、雙特異性三鏈抗體及雙特異性mAb2)等。
雙價抗體為識別不同抗原之VH、VL之間以肽連結基連結而成之單鏈肽之二聚體(參照Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993),Vol.90,No.14：p.6444-6448)。
雙特異性sc(Fv)2為識別不同抗原之2種抗體的2組VH/VL以隔著肽連結基產生連續之單鏈形態之方式，而經改變之低分子化抗體(參照J.Biological Chemistry(1994),Vol.269：p.199-206)。
雙特異性F(ab')2為識別不同2種抗原之抗體之Fab'片段藉由二硫鍵等而經共價之低分子化抗體。
雙特異性微抗體為將低分子抗體片段藉由其CH3結構域上之二硫鍵等而經共價鍵結之低分子化抗體，該低分子抗體片段係以使識別各個不同抗原之scFv與恆定區域CH3結構域連結之方式而經改變者(參照Biochemistry(1992),Vo.31,No.6,p.1579-1584)。
雙特異性雜交抗體為識別不同之二種抗原之抗體之重鏈/輕鏈複合體藉由二硫鍵等而經共價鍵結之完整之抗體。
於本發明，較佳之雙特異性抗體之形態以二個可變區域間之可動區域廣之形態者為較佳，例如為雙特異性雜交抗體。
雙特異性雜交抗體可從例如以雜交雜交瘤法(參照US4474893)製作之雜交瘤產生。又，雙特異性雜交抗體係可使分別編碼識別不同抗原之抗體之重鏈及輕鏈的合計4種類之cDNA於哺乳動物細胞共表現且分泌而製造。
於本發明使用之單株抗體可以雜交瘤法(參照例如Kohler及Milstein人等，Natur(1975)，Vol.256,p.495-97、Hongo人等之Hybridoma(1995),Vol.14,No.3,p.253-260、Harlow人等之Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press(1988),Vol.2)及Hammerling人等之Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas,p.563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重組DNA法(參照例如US4816567)、噬菌體展示方法(參照例如Ladner人等之US5223409、US5403484及US5571698，Dower人等之US5427908及US5580717、McCafferty人等之US5969108及US6172197及Griffiths人等之 US5885793、US6521404、US6544731、US6555313、US6582915及US6593081)製作。
對人類投予抗體或單株抗體時，為了使其抗原性減低或消失，可以嵌合體抗體、人類化抗體或完全人類型抗體之形態製作。
「嵌合體抗體」係指可變區域序列及恆定區域序列源自各別哺乳動物之抗體，例如可變區域序列源自小鼠抗體，恆定區域序列源自人類抗體。嵌合體抗體係可從以上述之雜交瘤法、重組DNA法或噬菌體展示方法單離之抗體產生雜交瘤藉由公知之手法單離出編碼抗體可變區域之基因，將該使用公知之方法與編碼源自人類之抗體恆定區域之基因連結而製作(參照例如Cabilly人等之US4816567)。
「人類化抗體」係指將源自如小鼠之其他哺乳動物之生殖細胞型之相補性決定區域(CDR)序列移植到人類架構(Framework)序列上之抗體。於人類化抗體時，亦可從以上述方法單離之抗體產生雜交瘤藉由公知之手法單離出編碼抗體CDR區域之基因，將該基因使用公知之方法，與編碼源自人類之抗體架構區域之基因連結而製作(參照例如Winter之US5225539及US5530101、Queen人等之US5585089號及US6180370)。
「人類抗體」或「完全人類型抗體」係指由架構區域及CDR區域構成之可變區域及恆定區域兩者皆為源自人類生殖細胞型免疫球蛋白序列之抗體。於本發明中使用之人類抗體係可以使用如產生人類抗體之經轉形(Transformation)之小鼠，例如使用Humab小鼠(參照例如Lonberg及Kay人等之US5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299及US5770429)、KM小鼠(參 照例如Ishida人等之WO2002/43478)、Xeno小鼠(參照例如US5939598、US6075181、US6114598、US6150584及US6162963)或Tc小鼠(參照例如Tomizuka人等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000),p.722-727)之方法製作。又，亦可使用如藉由免疫引起人類抗體應答之方式將人類免疫細胞再構築之SCID小鼠(參照例如Wilson中等之US5476996及US5698767)調製。再者，於本發明中使用之人類抗體亦可以上述之噬菌體展示方法製作。
於本說明書，PD-1/CD4雙特異性抗體之「抗體片段」為全長抗體之一部分，為具有對於PD-1之抗原結合部分及對於CD4之抗原結合部分之抗體，可列舉例如F(ab')2等。此處，抗原結合部分係指抗體可與其抗原結合之最少單位，例如，以藉由在VH及VL具有分別各3個CDR及此等CDR之組合而可識別目標抗原之方式，由配置CDR配置之架構區域構成。
於本說明書，「同型」係使用為稱為藉由重鏈恆定區域基因而被編碼之抗體種類(class)(例如IgM或IgG)者。本發明之雙特異性抗體較佳之同型為IgG，更佳為IgG1或IgG4。於一實施形態，IgG1為對Fc受體(具體而言為Fcγ受體)之結合經消失或減弱者，或為ADCC及/或CDC作用經消失或減弱者。具體而言，藉由置換、缺失或插入其重鏈恆定區域之任意胺基酸，可獲得於Fc受體之結合經消失或減弱之IgG1抗體。可列舉例如：於分別二個重鏈恆定區域或鉸鏈區域，EU編號系統第234號之白胺酸置換為丙胺酸及/或第235號之白胺酸置換為丙胺酸之抗體。又，可為於雙特異性抗體之分別二個重鏈恆定區域或鉸鏈區域，EU編號系統第235號之白胺酸置換為甘胺酸及/或第236號之甘胺酸置換為精胺酸之抗體。又，為了減低抗體之不均勻性，較佳為缺失C末端之胺基酸，例如EU編號系統第447號之離胺酸之抗體。
本發明之雙特異性抗體的Fc區域係可以使二種不同重鏈容易會合之方式，其區域之任意胺基酸置換。可列舉例如：具有與PD-1特異性結合之第一臂中之VH之重鏈上之恆定區域中EU編號系統第351號之白胺酸置換為離胺酸且第366號之蘇胺酸置換為離胺酸，具有與CD4特異性結合之第二臂中之VH之重鏈上之恆定區域中第351號之白胺酸置換為天冬胺酸且第368號之白胺酸置換為麩胺酸之PD-1/CD4雙特異性抗體。又，亦可列舉：具有與PD-1特異性結合之第一臂中之VH之重鏈上之恆定區域中EU編號系統第351號之白胺酸置換為天冬胺酸且第368號之白胺酸置換為麩胺酸，具有與CD4特異性結合之第二臂中之VH之重鏈上之恆定區域中第351號之白胺酸置換為離胺酸且第366號之蘇胺酸置換為離胺酸之PD-1/CD4雙特異性抗體。
再者，本發明之雙特異性抗體為IgG4時，更佳為以抑制抗體分子內中調換(swapping)之方式，其重鏈恆定區域之任意胺基酸經置換、缺失或插入之改變體。較佳為例如將位於鉸鏈區域，EU編號系統第228號之絲胺酸置換為脯胺酸之抗體。此外，於本說明書，抗體之可變區域之CDR及架構被分配之胺基酸位置可依照Kabat而規定(參照Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health,Bethesda,Md.,(1987)及(1991))。又，恆定區域之胺基酸係根據以Kabat之胺基酸位置為基準之EU編號系統(參照Sequences of proteins of immunological interest,NIH Publication No.91-3242)表示。
本說明書之「肽連結基」只要是將構成本發明之雙特異性抗體或其抗體片段之二組VH及VL彼此連結及此等與IgG1恆定區域(鉸鏈/CH3)連結，且不會阻礙該雙特異性抗體或其抗體片段之功能性表現及形成者，則無特別限定，可列舉例如Ser、(Gly)n-Ser、Ser-(Gly)n、((Gly)4-Ser)n、(Ser-(Gly)4)n[n 表示1至6之整數，其他符號與前述表示相同意義]等，再者，較佳為(Gly)×4-Ser及((Gly)×4-Ser)×3等。本發明之雙特異性抗體或其抗體片段具有複數肽連結基時，分別可為由相同之前述胺基酸序列構成者或不同之前述胺基酸序列構成者，又，亦可為此等中至少一個為由前述胺基酸列序構成之肽連結基。
與PD-1特異性結合之第一臂
於本說明書，「與PD-1特異性結合之第一臂」(以下，亦簡稱為「第一臂」)係指本發明之雙特異性蛋白質不論是以一部分或是其本體單體之方式存在，皆為與PD-1特異性結合之蛋白質，該雙特異性蛋白質為雙特異性抗體時，該第一臂不論是包含於抗體或抗體片段之一部，或者不是一部分而是以其本體單體之方式存在，皆意指至少含有與PD-1特異性結合之抗體(以下，亦簡稱為抗PD-1抗體)之VH及VL，且可與PD-1特異性結合之抗體部分。例如，此等第一臂中亦包含由構成抗PD-1抗體之抗原結合部位之VH及VL所構成之抗體的Fv部、含有該VH及VL之抗體的Fab'部及Fab部。此處，「與PD-1特異性結合」係指可以至少具有高於1x10-5M，較佳為1x10-7M，更佳為1x10-9M之親和性(解離常數(Kd值))之結合活性，與PD-1直接結合，且至少不與CD28、CTLA-4及ICOS等屬於所謂CD28家族受體之外之受體成員實質上結合之特徵使用。「與PD-1特異性結合之抗體」或「抗PD-1抗體」中之「抗體」係指由全長抗體，亦即，由以二硫鍵連結之2個重鏈及2個輕鏈構成之完全長之抗體，較佳為其單株抗體。
本發明之「與PD-1特異性結合之第一臂」之一實施態樣為容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用。此 處，「容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用」係指即使本發明之PD-1/CD4雙特異性抗體存在於可溶型PD-L1或PD-L2的濃度為20倍過剩之狀況下，相較於本發明之PD-1/CD4雙特異性抗體不存在時之該相互作用，此等相互作用維持在50%以上，較佳維持在70%以上，更佳維持在80%以上。該第一臂是否容許此等相互作用係可以公知之方法，例如將該第一臂對於可溶型PD-1蛋白質對固定化PD-L1蛋白質或PD-L1表現細胞結合之影響，藉由使用例如Biacore分析、ELISA分析、流式細胞術、酵素結合免疫吸附檢定法(ELISA)、螢光能量轉移測定法(FRET)或螢光微量測定技術(FMAT(註冊商標))測定而判斷。又，「容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用」之定義係有以與實質上不阻礙此等相互作用相同意義使用之情形。
本發明之「與PD-1特異性結合之第一臂」在其他實施態樣中，亦有包含阻礙PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用者之情況。
又，作為其他「與PD-1特異性結合之第一臂」可列舉例如公知之抗PD-1抗體之VH及VL之組合，此等公知之抗PD-1抗體可列舉例如：納武單抗(Nivolumab)、西米單抗(Cemiplimab)、帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、斯巴達珠單抗(Spartalizumab)、替雷利珠單抗(Tislelizumab)、德斯達利單抗(Dostarlimab)、特瑞普利單抗(Toripalimab)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)、杰諾單抗(Genolimzumab)、信迪利單抗(Sintilimab)、洛達普利單抗(Lodapolimab)、瑞迪弗利單抗(Retifanlimab)、巴斯替利單(Balstilimab)、塞普利單抗(Serplulimab)、布迪格利單抗(Budigalimab)、普格利單抗(Prolgolimab)、薩 善利單抗(Sasanlimab)、席特利單抗(Cetrelimab)、賽帕利單抗(Zimberelimab)、偏普利單抗(Penpulimab)、AMP-514(MEDI0680)、STI-A1110、ENUM 388D4、ENUM 244C8、GLS010、CS1003、BAT-1306、AK103、BI 754091、LZM009、CMAB819、Sym021、SSI-361、JY034、HX008、ISU106及CX-188等，再者，與PD-1特異性結合之第一臂之例亦可列舉根據以下公開專利申請：US20180222982、US20180312564、WO2004/056875、WO2006/121168、WO2008/156712、WO2010/029434、WO2010/029435、WO2010/036959、WO2011/110604、WO2011/110621、WO2014/179664、WO2014/194302、WO2014/206107、WO2015/035606、WO2015/036394、WO2015/085847、WO2015/112800、WO2016/014688、WO2016/015685、WO2016/068801、WO2016/077397、WO2016/092419、WO2016/106159、WO2016/127179、WO2016/197497、WO2016/210129、WO2017/011580、WO2017/016497、WO2017/019846、WO2017/024465、WO2017/024515、WO2017/025016、WO2017/025051、WO2017/040790、WO2017/055443、WO2017/055547、WO2017/058115、WO2017/058859、WO2017/079112、WO2017/079116、WO2017/087599、WO2017/096026、WO2017/106656、WO2017/107885、WO2017/124050、WO2017/125815、WO2017/132827、WO2017/133540、WO2017/166804、WO2017/198741、WO2017/201766、WO2017/214182、WO2018/020476、WO2018/026248、WO2018/034226、WO2018/036472、WO2018/052818、WO2018/053106、WO2018/068336、WO2018/085358、WO2018/085468、WO2018/087143、WO2018/091661、WO2018/113258、WO2018/119474、WO2018/162944、WO2018/192089、WO2018/210230、 WO2018/217227、WO2018/226580、WO2019/005635或WO2019/051164特定之專利公開說明書中分別記載之抗PD-1抗體之VH及VL組合。又，將上述抗PD-1抗體之VH及共同輕鏈組合亦可作為與PD-1特異性結合之第一臂之例列舉。
與CD4特異性結合之第二臂
於本說明書，「與CD4特異性結合之第二臂」(以下，亦簡稱為「第二臂」)係指本發明之雙特異性蛋白質不論是以一部分或是其本體單體之方式存在存在，皆為與CD4特異性結合之蛋白質，該雙特異性蛋白質為雙特異性抗體時，該第二臂不論是包含於抗體或抗體片段之一部，或者不是一部分，而是以其本體單體之方式存在，至少含有與CD4特異性結合之抗體(以下，亦簡稱為抗CD4抗體)之VH及VL，且可與CD4特異性結合之抗體部分。例如，如此之第二臂中亦包含由構成抗CD4抗體之抗原結合部位之VH及VL所構成之抗體之Fv部、含有該VH及VL之抗體之Fab'部及Fab部。此處，「與CD4特異性結合」係可以至少具有高於1x10-5M，較佳為1x10-7M，更佳為1x10-9M之親和性(解離常數(Kd值))之結合活性，與CD4直接結合，且不與其他蛋白質實質上結合之特徵使用。「與CD4特異性結合之抗體」或「抗CD4抗體」中之「抗體」係指由全長抗體，亦即，由以二硫鍵連結之2個重鏈及2個輕鏈構成之完全長之抗體，較佳為其單株抗體。
又，其他之「與CD4特異性結合之第二臂」可列舉例如公知之抗CD4抗體之VH及VL之組合，此等抗CD4抗體可列舉例如：MTRX-1011A、TRX-1、依帕利珠單抗(Ibalizumab)、BT-061、huB-F5、札諾利姆單抗 (Zanolimumab)、4162W94、協諾利昔單抗(Clenoliximab)、克立昔單抗(Keliximab)、AD-519、PRO-542、希利珠單抗(Cedelizumab)及IT1208等。
本發明之PD-1/CD4雙特異性抗體較佳之同型為IgG抗體，再佳為IgG1或IgG4抗體。
本發明之雙特異性抗體中同抗體為IgG1抗體時，可採取導入了對Fc受體之結合實質上消失之突變的形態，可列舉例如：於分別二個重鏈恆定區域或鉸鏈區域上，EU編號系統第234號之白胺酸置換為丙胺酸及/或第235號之白胺酸置換為丙胺酸之IgG1抗體。又，於分別二個重鏈恆定區域或鉸鏈區域上，EU編號系統第235號之白胺酸置換為甘胺酸及/或第236號之甘胺酸置換為精胺酸之IgG1抗體。再者，更佳為缺失此等雙特異性抗體之重鏈C末端之胺基酸，例如EU編號系統第447號之離胺酸之抗體。
再者，此等PD-1/CD4雙特異性抗體為IgG1抗體時之較佳態樣可列舉：於具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH之重鏈之恆定區域中，EU編號系統第351號之白胺酸置換為離胺酸且第366號之蘇胺酸置換為離胺酸，於具有與CD4特異性結合之第二臂之VH之重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸置換為天冬胺酸且第368號之白胺酸置換為麩胺酸之IgG1抗體。再者，亦同樣較佳為：於具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH之重鏈之恆定區域中，EU編號系統第351號之白胺酸置換為天冬胺酸且第368號之白胺酸置換為麩胺酸，於具有與CD4特異性結合之第二臂之VH之重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸置換為離胺酸且第366號之蘇胺酸置換為離胺酸之IgG1抗體。
另一方面，PD-1/CD4雙特異性抗體為IgG4抗體時，較佳為位於其鉸鏈區域之EU編號系統第228號之絲胺酸置換為脯胺酸之抗體。
於一實施態樣，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)係具有傳達PD-1抑制性信號之特徵。
於一實施態樣，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)係具有容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用之特徵。
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)，係具有於投予中或從投予後24小時以內細胞激素產生或釋放經充分減低之特徵。此處，「投予中或投予後24小時以內細胞激素產生或釋放經充分減低」，係指例如於將本發明之PD-1/CD4雙特異性抗體藉由點滴等靜脈內投予中或從投予起24小時以內，例如，血中或組織中含有IL-2、IFN-γ及/或TNF-α之細胞激素之濃度未增加，或者即使增加亦為可藉由投予類固醇而抑制之程度。
於一實施態樣，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)係有分別與淋巴球(較佳為T細胞淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)等)上表現之PD-1及CD4特異性結合之情況，此時，有與PD-1及CD4同時結合，或者是，與表現在同一淋巴球之PD-1及CD4結合之情況。
於一實施態樣，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)，係有與表現在屬於標的細胞之血癌之癌細胞上之PD-1、及與表現在屬於效應細胞之淋巴球(較佳為T細胞淋巴球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)等)之CD4分別特異性結合之情況，此時，有與PD-1及CD4同時結合之情況。此處，「標的細胞」係指承受屬於效應細胞之淋巴球受到細胞傷害作用之細胞，「效應細胞」係指對標的細胞造成細胞傷害作用之細胞。
於一實施態樣，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)，係有與表現在源自T細胞之癌細胞之PD-1及CD4分別特異性結合之情況，此時，有與PD-1及CD4同時結合之情況。
於本發明，PD-1/CD4雙特異性蛋白質較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體及其抗體片段，再者，PD-1/CD4雙特異性抗體較佳為PD-1/CD4雙特異性單株抗體，更佳為單離PD-1/CD4雙特異性單株抗體，再佳為單離人類PD-1/人類CD4雙特異性單株抗體。此處，「單離人類PD-1/人類CD4雙特異性單株抗體」係指針對人類PD-1及人類CD4且經單離之雙特異性單株抗體。
PD-1/CD4雙特異性抗體之製造及精製方法
本發明之PD-1/CD4雙特異性抗體及其抗體片段亦可以WO2014/051433、WO2013/157953或WO2013/157954中揭示之方法製造。
例如，將分別插入了(1)編碼具有抗PD-1抗體之VH之重鏈之多核苷酸、(2)編碼具有抗CD4抗體之VH之重鏈之多核苷酸、(3)編碼具有抗PD-1抗體之VL之輕鏈之多核苷酸及(4)編碼具有抗CD4抗體之VL之輕鏈之多核苷酸的表現載體，基因導入至哺乳動物細胞並使其轉形，使兩重鏈及輕鏈一起表現及分泌而製造。
此處，表現本發明之雙特異性抗體之宿主細胞可為可將表現載體基因導入，並可將經導入之表現載體表現之任意宿主細胞。較佳為如SF-9及SF-21細胞之昆蟲細胞，更佳為含有CHO細胞、BHK細胞、SP2/0細胞及NS-0骨髓瘤細胞之小鼠細胞、如COS及Vero細胞之靈長類細胞、MDCK細胞、BRL 3A細胞、雜交瘤、腫瘤細胞、不杇化之初代細胞、如W138、HepG2、HeLa、 HEK293、HT1080或PER.C6之胚性視網膜細胞等哺乳類細胞。此外，表現系統之選擇中，有以使抗體適當地糖基化之方式，使用哺乳類細胞之表現載體及宿主的情形。人類細胞株較佳之PER.C6，係為了獲得與人類中之糖基化模式一致之抗體，而可有利地使用。
藉由表現載體之基因導入而經轉形之宿主細胞中的蛋白質產生，係可參考例如Current Protocols in Protein Science(1995),Coligan JE,Dunn BM,Ploegh HL,Speicher DW,Wingfield PT,ISBN 0-471-11184-8，Bendig,1988而實施，再者，為了使宿主細胞培養之生產性最大化之通常之指南、步驟及實用方法，係可參考Mammalian Cell Biotechnology：a Practical Approach(M.Butler,ed.,IRL Press,1991)而實施。於宿主細胞中之抗體表現係記述於例如EP0120694、EP0314161、EP0481790、EP0523949、US4816567及WO2000/63403等公開公報。
此處，宿主細胞之培養條件可藉由公知之方法最佳化，可將蛋白質之生產量最佳化。培養係可例如於培養皿、滾瓶或於反應槽中，藉由批式培養、饋料批式培養(fed-betch culture)、連續培養、利用中空纖維之培養實施。為了藉由細胞培養，大規模(連續地)進行重組蛋白質之生產，較佳為將細胞於懸濁液中增殖。又，較佳為使細胞的培養在沒有源自動物或人類之血清或者是源自動物或人類之血清之構成要素之條件下進行培養。
於宿主細胞表現，從其細胞或細胞培養基藉由公知之方法回收之抗體，係可使用公知之方法精製。精製方法包含免疫沈降法、離心分離法、過濾、尺寸排除層析法、親和性層析法、陽離子及/或陰離子交換層析法、疏水 性相互作用層析法等。再者，適合使用的是蛋白質A或蛋白質G親和層析法(參照例如US4801687及US5151504)。
[醫藥用途]
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質於自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)或血癌等之預防、症狀進展抑制及/或治療中有用。
於本發明，自體免疫疾病可列舉例如：貝賽特氏症、全身性紅斑性狼瘡、慢性圓板狀紅斑性狼瘡、多發性硬化症、系統性硬皮症、進行性系統性硬化症、硬皮症、多發性肌炎、皮膚肌炎、結節性動脈周圍炎(結節性多發動脈炎、顯微性多發血管炎)、大動脈炎症候群(高安動脈炎)、惡性類風濕性關節炎、類風濕性關節炎、幼年特發性關節炎、脊椎關節炎、混合性結締組織病、卡斯爾曼症、修格蘭氏症候群、成人史迪爾氏病、血管炎、過敏性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、類風濕性血管炎、大型血管炎、ANCA關連血管炎(例如肉芽腫性多血管炎及嗜酸性球性肉芽腫性多血管炎)、柯根症候群、RS3PE症候群、顳動脈炎、巨細胞性動脈炎、風濕性多發肌痛症、纖維肌痛症、抗磷脂質抗體症候群、嗜酸性球性肌膜炎、IgG4關連疾病(例如原發性硬化性膽道炎及自體免疫性胰臟炎等)、格林-巴利症候群、重症肌無力症、慢性萎縮性胃炎、自體免疫性肝炎、非酒精性脂肪肝炎、原發性膽汁性肝硬變、大動脈炎症候群、古德巴斯捷氏症候群、快速進行性腎絲球腎炎、狼瘡腎炎、抗腎絲球基底膜腎炎、巨紅血球貧血、自體免疫性溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性嗜中球減少症、特發性血小板減少性紫斑病、甲狀腺功能亢進症(葛瑞夫茲病(Graves' disease)(巴塞多氏病(Basedow's disease))、橋本病、自體免疫性腎上 腺機能不全、原發性甲狀腺機能低下症、愛迪生氏病、特發性愛迪生氏病(慢性腎上腺機能減退症)、I型糖尿病、緩進行性I型糖尿病、限局性硬皮症、乾癬、乾癬性關節炎、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線狀I g A水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、圓形禿、白斑、尋常性白斑、原田氏症、自體免疫性視神經症、特發性無精子症、習慣性流產、炎症性腸疾病(例如潰瘍性大腸炎、Clone氏症)、乳糜瀉病、異位性皮膚炎、視神經脊髓炎、慢性炎症性脫髓性多發神經炎、多灶性運動神經病、肺泡蛋白沉著症、自體免疫性出血病XIII、復發性多發軟骨炎、類肉瘤病、僵直性脊椎炎、重症氣喘、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、嗜酸性球性副鼻腔炎、擴張型心肌症、食物過敏、全身性肥大細胞增生症、肌萎縮性側索硬化症及包涵體肌炎等。
使用於治療自體免疫疾病之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)，係至少其一部分分別與表現在淋巴球(較佳為T細胞淋巴球(例如輔助T細胞及調節性T細胞))上之PD-1及CD4特異性結合，傳達PD-1之抑制信號，藉此發揮治療效果。此時，容許PD-1及PD-L1間相互作用之特徵係可期待賦予增強或持續其預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療效果。
於本發明，血癌可列舉例如：多發性骨髓瘤、惡性淋巴瘤(例如非何杰金氏淋巴瘤(例如B細胞性非何杰金氏淋巴瘤(例如前驅B細胞淋巴母細胞淋巴瘤、前驅B細胞急性淋巴母細胞白血病、慢性B淋巴性白血病(小淋巴球性淋巴瘤或前驅細胞性白血病)、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、淋巴結邊緣區B細胞性淋巴瘤、節外緣帶B細胞性淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、脾原發邊緣區B細胞性淋巴瘤、髮樣細胞白血病、髮樣細胞白血病/變異型、濾 胞性淋巴瘤、幼兒型濾胞性淋巴瘤、瀰漫性大細胞型B細胞性淋巴瘤、瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/非特定型、脾瀰漫性紅脾髓小型B細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、原發性縱隔大細胞型B細胞性淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、布凱特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、被套細胞淋巴瘤(Mantle cell lymphoma)、單株性B細胞淋巴球增加症(monoclonal B-cell lympocytosis)、脾B細胞淋巴瘤/白血病/不能分類型、意義不明之單株性γ球蛋白血症/IgM型、μ重鏈病、λ重鏈病、α重鏈病、漿細胞骨髓瘤、孤立性骨浆细胞瘤、髓外漿細胞瘤(extramedullary plasmacytoma)、單株性免疫球蛋白沉積性疾病、伴隨IRF4再構成之大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性皮膚濾胞中心淋巴瘤、T細胞/組織球豐富型大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤、原發性皮膚瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/下肢型、EBV陽性瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/非特定型、EBV陽性黏膜皮膚潰瘍、慢性炎症關連瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫症、血管內大細胞型B細胞淋巴瘤、ALK陽性大細胞型B細胞淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、原發性體腔液淋巴瘤、HHV8陽性瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤/特異型、伴隨11q異常之類布凱特氏淋巴瘤、伴隨MYC及BCL2及BCL6兩者或一者再構成之重度B細胞淋巴瘤、重度B細胞淋巴瘤/非特異型或瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤及伴隨古典型何杰金氏淋巴瘤中間之特徵之B細胞淋巴瘤/不能分類型)、T/NK細胞性非何杰金氏淋巴瘤(例如前驅T細胞淋巴母細胞淋巴瘤、慢性T淋巴球性白血病、T細胞急性淋巴性白血病(T細胞淋巴母細胞白血病)、T細胞型大顆粒淋巴球性白血病、大顆粒NK細胞性白血病、急速進行性NK細胞白血病、末梢性T細胞淋巴瘤、末梢性T細胞淋巴瘤/非特定型、不能分類末梢性T細胞淋巴瘤、血管免疫芽球性T細胞性淋巴瘤、未 分化大細胞(CD30陽性)淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、腸管T細胞性淋巴瘤、腸症型T細胞淋巴瘤、肝脾型γ-δT細胞淋巴瘤、皮下脂肪組織炎樣T細胞淋巴瘤、菌狀息肉症、塞扎萊症候群(sezary syndrome)、何杰金氏樣/何杰金氏關連未分化大細胞淋巴瘤、節外性NK/T細胞淋巴瘤、成人T細胞性淋巴瘤、T細胞前淋巴球性白血病、慢性NK細胞淋巴增殖異常症、幼兒系統性EBV陽性T細胞淋巴瘤、種痘樣水疱症樣淋巴增殖異常症、節外性NK/T細胞淋巴瘤/鼻型、腸症關連T細胞淋巴瘤、單形性上皮向性腸管T細胞淋巴瘤、胃腸管緩徐進行性T細胞淋巴增殖異常症、肝脾T細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD30陽性T細胞淋巴增殖異常症、淋巴瘤樣丘疹症、原發性皮膚未分化大細胞型淋巴瘤、原發性皮膚γδT細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD8陽性急速進行性表皮向性細胞傷害性T細胞淋巴瘤、原發性皮膚先端型CD8陽性T細胞淋巴瘤、原發性皮膚CD4陽性小型/中型T細胞淋巴增殖性症、濾胞T細胞淋巴瘤、伴隨濾胞輔助T細胞漿之節性末梢性T細胞淋巴瘤、未分化大細胞淋巴瘤/ALK陽性型、未分化大細胞淋巴瘤/ALK陰性型或人工乳房關連未分化大細胞淋巴瘤)及何杰金氏淋巴瘤(例如古典型何杰金氏淋巴瘤(例如結節硬化型、混合細胞型、淋巴球豐富型及淋巴球減少型)或結節性淋巴球優位型何杰金氏淋巴瘤))、白血病(例如急性骨髓性白血病、急性前骨髓球性白血病、急性淋巴母細胞白血病(淋巴母細胞淋巴瘤)、慢性淋巴性白血病(小淋巴球性淋巴瘤)、骨髓異形成症候群及慢性骨髓性白血病)、中樞神經系原發惡性淋巴瘤及增骨髓增生性症候群等。
於本發明，於血癌治療等中使用之PD-1/CD4雙特異性蛋白質(較佳為PD-1/CD4雙特異性抗體等)，係藉由至少其一部分與表現在屬於標的細胞之血癌的癌細胞上之PD-1及與表現在屬於效應細胞之淋巴球(較佳為T細胞淋巴 球(例如輔助T細胞或調節性T細胞等)等)之CD4分別特異性結合，而發揮治療效果。又，也有藉由至少其一部與表現在源自T細胞之癌細胞之PD-1及CD4分別特異性結合而傳達PD-1之抑制信號，進而發揮治療效果之情況。
於本發明之「治療」係指例如治癒或改善某疾病或其症狀，「預防」係指防範某疾病或症狀之表現於未然或延遲一定期間，「症狀進展抑制」係指抑制症狀之進展或惡化，進而阻止病態之進行。此外，「預防」亦包含復發抑制。「復發抑制」係指防止某疾病或症狀之復發或減低復發之可能性。
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質通常以全身或局部性，非經口之形態投予。投予方法具體而言可列舉：注射投予、經鼻投予及經肺投予等。注射投予可列舉例如：靜脈內注射、肌肉內注射及腹腔內注射等，於靜脈內注射時，較佳為藉由點滴投予。其投予量依年齡、體重、症狀、治療效果、投予方法、處理時間等而異，通常成人每人每次於0.1μg/kg至300mg/kg之範圍，特佳於0.1mg/kg至10mg/kg之範圍，一日一次至數次非經口投予，或者是，每日於30分鐘至24小時之範圍靜脈內持續投予。當然，如前述，投予量係依各種條件而變動，因此有以少於上述投予量之量即足夠之情況，亦有需投予超過此範圍投予之情況。
[製劑]
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質等製劑化成注射劑或用於點滴之輸液使用之情況，該注射劑或輸液可為水溶液、懸濁液或乳濁液中之任一形態，又，藉由於使用時添加溶劑而溶解、懸濁或乳濁使用之方式，可與藥學上容許 之載體一起製劑化成固形劑。使用於注射劑或用於點滴之輸液中之溶劑可使用例如：注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖溶液及等張液(例如氯化鈉、氯化鉀、甘油、甘露醇、山梨糖醇、硼酸、硼砂及丙二醇等溶液)等。
此處，藥學上容許之載體可列舉例如穩定劑、溶解補助劑、懸濁化劑、乳化劑、無痛化劑、緩衝劑、保存劑、防腐劑、pH調整劑及抗氧化劑等。穩定劑可使用例如各種：胺基酸、白蛋白、球蛋白、明膠、甘露醇、葡萄糖、葡聚糖、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、檸檬酸鈉或二丁基羥基甲苯等。溶解補助劑可使用例如：醇(例如乙醇等)、多元醇(例如丙二醇及聚乙二醇等)、非離子性界面活性劑(例如聚山梨醇酯20(註冊商標)、聚山梨醇酯80(註冊商標)及HCO-50等)等。懸濁化劑可使用例如：單硬脂酸甘油酯、單硬脂酸鋁、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素或十二烷基硫酸鈉等。乳化劑可使用例如：阿拉伯膠、海藻酸鈉或黃蓍膠等。無痛化劑可使用例如：苯甲醇、氯丁醇或山梨糖醇等。緩衝劑可使用例如：磷酸緩衝液、乙酸緩衝液、硼酸緩衝液、碳酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、Tris緩衝液、麩胺酸緩衝液或ε-氨基己酸緩衝液等。保存劑可使用例如：對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、氯丁醇、苯甲醇、氯化烷基二甲基苯甲基銨、脫氫乙酸鈉、乙二胺四乙酸鈉、硼酸或硼砂等。防腐劑可使用例如：氯化烷基二甲基苯甲基銨、對羥基苯甲酸或氯丁醇等。pH調整劑可使用例如：鹽酸、氫氧化鈉、磷酸或乙酸等。抗氧化劑可使用例如：(1)如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉及亞硫酸鈉等水溶性抗氧化劑；(2)如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴 香醚、丁基羥基甲苯、卵磷脂、五倍子酸丙酯及α-生育醇等油溶性抗氧化劑；及(3)如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸及磷酸等金屬螯合劑等。
注射劑或點滴用之輸液可於其最終步驟中藉由滅菌或以無菌操作法，例如以過濾器等過濾滅菌，接著填充於無菌之容器而製造。又，注射劑或點滴用之輸液亦可將經真空乾燥及凍結乾燥之無菌粉末(可含有藥學上容許之載體之粉末)於使用時溶解於適當之溶劑而使用。
[併用或調配劑]
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質亦可與自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)或血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療中使用之其他藥劑一起組合使用。於本發明，與其他藥劑組合使用時(併用)之投予形態，可為於1個製劑中調配兩成分而成之調配劑之形態，亦可為各別作為製劑之投予形態。藉由其併用，係可補齊其他藥劑之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療效果，或可維持或減低投予量或投予次數。本發明之雙特異性抗體與其他藥劑各別投予時可於一定期間同時投予，之後只投予雙特異性抗體或只投予其他藥劑。又，可為先投予本發明之雙特異性抗體，於其投予完成後再投予其他藥劑，也可為先投予其他藥劑，於其投予完成後再投予本發明之雙特異性抗體，各個投予方法可相同亦可不同。亦可提供含有本發明之雙特異性抗體之製劑與含有其他藥劑之製劑之套組。此處，其他藥劑之投予量可以臨床上使用之用量為基準適當地選擇。又，其他藥劑可將任意2種以上以適當比率組合投予。又，前述其他藥劑不僅包含現在為止發現者，亦包含今後所發現者。
例如，將本發明之雙特異性蛋白質適用於I型糖尿病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與下列藥劑組合使用：胰島素製劑(例如人類胰島素、胰島素甘精胰島素、賴脯胰島素、賴脯胰島素、門冬胰島素等)、磺醯基尿素劑(例如格列苯脲(Glibenclamide)、格列齊特(Gliclazide)及格列美脲(Glimepiride)等)、速效型胰島素分泌促進藥(例如那格列奈(Nateglinide)等)、雙胍類製劑(例如二甲雙胍(Metformin)等)、胰島素抵抗性改善藥(例如吡格列酮(Pioglitazone)等)、α-葡萄糖苷酶抑制藥(例如阿卡波糖(Acarbose)及伏格列波糖(Voglibose)等)、糖尿病性神經症治療藥(例如依帕司他(Epalrestat)、脈息禮延(Mexiletine)及咪達普利(Imidapri)等)、GLP-1類似物製劑(例如利拉魯肽(Liraglutide)、艾塞那肽(Exenatide)及利西拉來(Lixisenatide)等)、DPP-4抑制劑(例如西格列汀(Sitagliptin)、維格列汀(Vildagliptin)及阿格列汀(Alogliptin)等)等。
又，例如將本發明之雙特異性蛋白質適用於多發性硬化症之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與下列者組合使用：類固醇藥(例如可體松、乙酸可體松、氫化可體松、氫化可體松磷酸鈉、氫化可體松琥珀酸鈉、氟氫可體松乙酸酯、去氫皮質醇、去氫皮質醇乙酸酯、去氫皮質醇琥珀酸鈉、丁基乙酸去氫皮質醇、去氫皮質醇磷酸鈉、鹵潑尼松乙酸酯、甲基去氫皮質醇、甲基去氫皮質醇乙酸酯、甲基去氫皮質醇琥珀酸鈉、去炎松、乙酸去炎松、去炎松縮酮、地塞米松、地塞米松乙酸酯、地塞米松戊酸酯、地塞米松培酸酯、地塞米松棕櫚酸酯、地塞米松丙酸酯、地塞米松磷酸鈉、地塞米松間磺基苯甲酸酯鈉、對氟米松、對氟米松乙酸酯、倍他米松、倍他米松二丙酸酯、倍他米松戊酸酯、倍他米松乙酸酯、倍他米松丁酸酯丙酸酯及倍他米松磷 酸鈉等)、干擾素β-1a、干擾素β-1b、乙酸格拉替雷(Glatiramer acetate)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、硫唑嘌呤(Azathioprine)、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、環孢素(Ciclospolin)、胺甲蝶呤(Methotrexate)、克拉屈濱(Cladribine)、促腎上腺皮質素(ACTH)、促皮質素(Corticotropin)、咪唑立賓(Mizoribine)、他克莫司(Tacrolimus)、芬戈莫德(Fingolimod)及阿侖單抗(Alemtuzumab)等。
又，例如將本發明之雙特異性蛋白質適用於全身紅斑性狼瘡之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與類固醇藥(例如上述記載之類固醇藥)或免疫抑制劑(例如環孢素、他克莫司及芬戈莫德等)組合使用。
例如，將本發明之雙特異性蛋白質適用於類風濕性關節炎之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與下列者組合使用：類固醇藥(例如上述記載之類固醇藥)、抗風濕藥(例如胺甲蝶呤、柳胺磺胺吡啶、布西拉明、來氟米特、咪唑立賓及他克莫司等)或抗細胞激素藥(例如英利昔單抗、阿達木單抗、特昔利單抗、依那西普、阿巴西普、戈利木單株及賽妥珠單抗等)等。
適用於其他自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可將本發明之雙特異性蛋白質與上述記載之其他藥劑之任一種以上組合使用。
另一方面，將本發明之雙特異性蛋白質適用於血癌之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與例如選自下列者之任一種以上組合使用：烷基化藥(例如達卡巴嗪(Dacarbazine)、尼莫司汀(Nimustine)、替莫唑胺(Temozolomide)、福特司汀(Fotemustine)、苯達莫司汀(Bendamustine)、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、異環磷醯胺(Ifosfamide)、卡莫司汀(Carmustine)、苯丁 酸氮芥(Chlorambucil)及丙卡巴嗪(Procarbazine)等)、白金製劑(例如順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)、奈達鉑(Nedaplatin)及奧沙利鉑(Oxaliplatin)等)、代謝拮抗劑(例如葉酸代謝拮抗藥(例如培美曲塞(Pemetrexed)、瘤克扶林(Leucovorin)及胺甲蝶呤(Methotrexate)等)、吡啶代謝抑制藥(例如TS-1(註冊商標)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、UFT、卡莫氟(Carmofur)、去氧氟尿苷(Doxifluridine)、5-氟去氧核糖尿苷(FdUrd)、阿糖胞苷(Cytarabine)及卡培他濱(Capecitabine)等)、嘌呤代謝抑制藥(例如氟達拉濱(Fludarabine)、克拉屈濱(Cladribine)及奈拉濱(Nelarabine)等)、核糖核苷酸還原酶抑制藥、核苷酸類似物(例如吉西他濱(Gemcitabine)等))、拓撲異構酶抑制藥(例如愛萊諾迪肯(Irinotecan)、諾吉迪肯(Nogitecan)及依託泊苷(Etoposide)等)、微小管聚合抑制藥(例如長春花鹼(Vinblastine)、長春新鹼(Vincristine)、長春地辛(Vindesine)、溫諾平(Vinorelbine)及艾利布林(Eribulin)等)、微小管脫聚合抑制藥(例如歐洲紫杉醇(Docetaxel)及紫杉醇(Paclitaxel)等)、抗腫瘤性抗生物質(例如博來黴素(Bleomycin)、絲裂黴素C(Mitomycin C)、多柔比星(Doxorubicin)、道諾比星(Daunorubicin)、依達比星(Idarubicin)、依託泊苷、米托蒽醌、長春花鹼、長春新鹼、培洛黴素(Peplomycin)、氨柔比星(Amrubicin)、阿克拉比星(Aclarubicin)及艾彼比星(Epirubicin)等)、細胞激素製劑(例如IFN-α2a、IFN-α2b、Peg-IFN-α2b、天然型IFN-β及介白素(Interleukin)-2等)、分子標的藥、癌免疫治療藥及其他之抗體醫藥等之藥劑。
此處，作為分子標的藥可列舉例如：ALK抑制劑(例如克唑替尼(Crizotinib)、色瑞替尼(Ceritinib)、恩沙替尼(Ensartinib)、艾樂替尼(Alectinib)及勞拉替尼(Lorlatinib)等)、BCR-ABL抑制劑(例如伊馬替尼(Imatinib)及達沙替尼 (Dasatinib)等)、Axl抑制劑(例如ONO-7475及BGB324等)、CDK抑制劑(例如迪那西利(Dinaciclib)、阿貝瑪西林(Abemaciclib)、帕博西林(Palbociclib)及提拉西林(Trilaciclib)等)、Btk抑制劑(例如依魯替尼(Ibrutinib)及阿卡替尼(Acalabrutinib)等)、PI3K-δ/γ抑制劑(例如安巴利昔(Umbralisib)、帕薩利昔(Parsaclisib)及IPI-549等)、JAK-1/2抑制劑(例如依他替尼(Itacitinib)及魯索替尼(Ruxolitinib)等)、FAK抑制劑(例如迪法替尼(Defactinib)等)、Syk/FLT3 dual抑制劑(例如米法替尼(Mivavotinib)等)、ATR抑制劑(例如席拉塞替(Ceralasertib)等)、Weel激酶抑制劑(例如阿達弗昔替(Adavosertib)等)、mTOR抑制劑(例如替西羅莫司(Temsirolimus)、依維莫司(Everolimus)、維斯圖昔替(Vistusertib)及愛萊諾迪肯等)、HDAC抑制劑(例如伏立諾他(Vorinostat)、羅醚酯肽(Romidepsin)、恩替諾他(Entinostat)、西達本胺(Chidamide)、莫西替諾他(Mocetinostat)、昔他利諾他(Citarinostat)、帕諾比諾他(Panobinostat)及偉伯特(Valproate)等)、EZH2抑制劑(例如泰澤司他(Tazemetostat)等)、STAT3抑制劑(例如那帕普星(Napabucasin)等)、DNMT抑制劑(例如阿扎胞苷(Azacitidine)等)、BCL-2抑制劑(例如那維托克(Navitoclax)及維奈托克(Venetoclax)等)、SMO抑制劑(例如維莫德吉(Vismodegib)等)、抗CD20抗體(例如利妥昔單抗(Rituximab)、布吐維單抗(Blontuvetmab)、依匹莫單抗(Epitumomab)、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、奧卡妥珠單抗(Ocaratuzumab)、奧可利珠單抗(Ocrelizumab)、鎝[99mTc]巰諾莫單抗(Technetium(99mTc)nofetumomab merpentan)、托西莫單抗(Tositumomab)、維吐珠單抗(Veltuzumab)、奧法木單抗(Ofatumumab)、烏布利妥昔單抗(Ublituximab)、歐必珠單抗(Obinutuzumab)及諾法木單抗(Nofetumomab)等)、抗CD30抗體(例如維布妥昔單抗維多汀(Brentuximab Vedotin)及伊妥木單抗(Iratumumab)等)、抗CD38抗體(例如達雷木單抗(Daratumumab)、伊沙妥昔單抗(Isatuximab)、美澤奇單抗(Mezagitamab)、AT13/5及MOR202等)、抗DR5抗體(例如DS-8273a等)、抗TNFRSF10B抗體(例如貝奴妥單抗(Benufutamab)、可那木單抗(Conatumumab)、卓齊妥單抗(Drozitumab)、來沙木單抗(Lexatumumab)、替加珠單抗(Tigatuzumab)、Eftozanermin alfa及DS-8273a等)、抗CD40抗體(例如比勒斯單抗(Bleselumab)、達西珠單抗(Dacetuzumab)、依司卡單抗(Iscalimab)、魯卡木單抗(Lucatumumab)、米拉圖珠單抗(Mitazalimab)、雷划卡單抗(Ravagalimab)、協利魯單抗(Selicrelumab)、替尼利單抗(Teneliximab)、ABBV-428及APX005M等)、抗CD70抗體(例如庫薩珠單抗(Cusatuzumab)、伏司妥珠單抗(Vorsetuzumab)、伏司妥珠馬佛多汀(Vorsetuzumab mafodotin)及ARGX-110等)、抗TNFRSF10A抗體(例如馬帕木單抗(Mapatumumab)等)、抗CD79b抗體(例如依拉達珠單抗(Iladatuzumab)、依拉達珠單抗維多汀(Iladatuzumab vedotin)及普拉珠單抗維多汀(Polatuzumab vedotin)等)、TNFSF11抗體(例如迪諾單抗(Denosumab)等)、抗NCAM1抗體(例如勞沃妥珠單抗硫丹(Lorvotuzumab mertansine)等)、抗CD37抗體(例如利羅妥單抗(Lilotomab)、Lutetium(177lu)lilotomab satetraxetan、那拉昔單抗(Naratuximab)、那拉昔單抗美坦辛(Naratuximab emtansine)及歐雷妥珠單抗(Otlertuzumab)等)、抗CD200抗體(例如Samalizumab等)、抗CD30-CD16A雙特異性抗體(例如AFM13等)、抗IL3RA-CD3雙特異性抗體(氟特妥珠單抗(Flotetuzumab)及維貝可單抗(Vibecotamab)等)、抗GPRC5D-CD3雙特異性抗體(例如塔奎單抗(Talquetamab))、抗CD3-CD19雙特異性抗體(例如度佛妥珠單抗(Duvortuxizumab)及博納吐單抗(Blinatumomab)等)、抗TNFRSF17-CD3雙特異性 抗體(例如替克利單抗(Teclistamab))、抗CLEC12A-CD3雙特異性抗體(例如替普迪單抗(Tepoditamab))及抗CD20-CD3雙特異性抗體(例如普拉莫單抗(Plamotamab)、奧卓尼單抗(Odronextamab)、莫蘇妥珠單抗(Mosunetuzumab)、格羅非單抗(Glofitamab)、依可利單抗(Epcoritamab)及REGN1979等)等。
又，癌免疫治療藥可列舉例如：抗PD-1抗體(例如納武單抗(Nivolumab)、西米單抗(Cemiplimab)、帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、斯巴達珠單抗(Spartalizumab)、替雷利珠單抗(Tislelizumab)、德斯達利單抗(Dostarlimab)、特瑞普利單抗(Toripalimab)、卡瑞利珠單抗(Camrelizumab)、杰諾單抗(Genolimzumab)、信迪利單抗(Sintilimab)、洛達普利單抗(Lodapolimab)、瑞迪弗利單抗(Retifanlimab)、巴斯替利單抗(Balstilimab)、塞普利單抗(Serplulimab)、布迪格利單抗(Budigalimab)、普格利單抗(Prolgolimab)、薩善利單抗(Sasanlimab)、席特利單抗(Cetrelimab)、賽帕利單抗(Zimberelimab)、偏普利單抗(Penpulimab)、AMP-514、STI-A1110、ENUM 388D4、ENUM 244C8、GLS010、CS1003、BAT-1306、AK103、BI 754091、LZM009、CMAB819、Sym021、SSI-361、JY034、ISU106、HX008及CX-188等)、抗PD-L1抗體(例如阿特珠單抗(Atezolizumab)、阿維鲁單抗(Avelumab)、德鲁單抗(Durvalumab)、瑪奈利單抗(Manelimab)、帕克米利單抗(Pacmilimab)、恩弗利單抗(Envafolimab)、柯希利單抗(Cosibelimab)、BMS-936559、STI-1010、STI-1011、STI-1014、SHR-1316、CS1001、MSB2311、BGB-A333、KL-A167、AK106、AK104、ZKAB001、FAZ053、CBT-502及JS003等)、PD-1拮抗劑(例如AUNP-12、BMS-M1至BMS-M10之各化合物、BMS-1、BMS-2、BMS-3、BMS-8、BMS-37、BMS-200、BMS-202、BMS-230、BMS-242、 BMS-1001、BMS-1166、Incyte-1至Incyte-6之各化合物、CAMC-1至CAMC-4之各化合物、RG_1及DPPA-1等)、PD-L1/VISTA拮抗劑(例如CA-170等)、PD-L1/TIM3拮抗劑(例如CA-327等)、抗PD-L2抗體、PD-L1融合蛋白質、PD-L2融合蛋白質(例如AMP-224等)、抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗(Ipilimumab)、札利費單抗(Zalifrelimab)、諾瑞利單抗(Nurulimab)及曲美利木單抗(Tremelimumab)等)、抗LAG-3抗體(例如雷拉替單抗(Relatlimab)、伊接米單抗(Ieramilimab)、弗安利單抗(Fianlimab)、安沙利單抗(Encelimab)及瑪維澤利單抗(Mavezelimab)等)、抗TIM3抗體(例如MBG453及柯柏利單抗(Cobolimab等)、抗KIR抗體(例如利鲁單抗(Lirilumab)、IPH2101、LY3321367及MK-4280等)、抗BTLA抗體、抗TIGIT抗體(例如替拉克單抗(Tiragolumab)、伊替吉單抗(Etigilimab)、維博利單抗(Vibostolimab)及BMS-986207等)、抗VISTA抗體(例如奧弗替利單抗(Onvatilimab)等)、抗CD137抗體(例如烏鲁單抗(Urelumab)及烏吐米單抗(Utomilumab)等)、抗CSF-1R抗體/CSF-1R抑制劑(例如卡比拉單抗(Cabiralizumab)、瑪妥珠單抗(Emactuzumab)、LY3022855、艾克利單抗(Axatilimab)、MCS-110、IMC-CS4、AMG820、匹昔替尼(Pexidartinib)、BLZ945及ARRY-382等)、抗OX40抗體(例如MEDI6469、艾沃利單抗(Ivuxolimab)、MEDI0562、MEDI6383、Efizonerimod、GSK3174998、BMS-986178及MOXR0916等)、抗HVEM抗體、抗CD27抗體(例如瓦利單抗(Varlilumab)等)、抗GITR抗體‧GITR融合蛋白質(例如Efaprinermin alfa、Efgivanermin alfa、MK-4166、INCAGN01876、GWN323及TRX-518等)、抗CD28抗體、抗CCR4抗體(例如莫加珠單抗(Mogamulizumab)等)、抗B7-H3抗體(例如伊諾利珠單抗(Enoblituzumab)、米佐妥單抗(Mirzotamab)、克米佐妥單抗 (Mirzotamab clezutoclax)及歐布妥單抗(Omburtamab)等)、抗ICOS激動劑抗體(例如沃普利單抗(Vopratelimab)及GSK3359609等)、抗CD4抗體(例如札諾利姆單抗(Zanolimumab)及IT1208等)、抗DEC-205抗體/NY-ESO-1融合蛋白質(例如CDX-1401等)、抗SLAMF7抗體(例如阿吉妥單抗(Azintuxizumab)、阿吉妥單抗維多汀(Azintuxizumab vedotin)及埃洛妥珠單抗(Elotuzumab)等)、抗CD73抗體(例如Oleclumab及BMS-986179等)、PEG化IL-2(例如Bempegaldesleukin)、抗CD40激動劑抗體(例如ABBV-428、APX005M及RO7009789等)、IDO抑制劑(例如艾卡哚司他(Epacadostat)、吲哚昔莫(Indoximod)及林洛哚司他(Linrodostat)等)、TLR激動劑(例如莫妥林莫(Motolimod)、CMP-001、G100、替索妥林莫(Tilsotolimod)、SD-101及MEDI9197等)、腺苷(Adenosine)A2A受體拮抗劑(例如培雷迪南(Preladenant)、AZD4635、達米納迪南(Taminadenant)及昔弗拉迪南(Ciforadenant)等)、抗NKG2A抗體(例如莫納珠單抗(Monalizumab)等)、抗CSF-1抗體(例如PD0360324等)、免疫增強劑(例如PV-10等)、IL-15超級激動劑(例如ALT-803)、可溶性LAG3(例如IMP321等)、抗CD47抗體‧CD47拮抗劑(例如ALX148等)及IL-12拮抗劑(例如M9241等)等。
再者，其他抗體醫藥可列舉例如：抗IL-1β抗體(例如卡納單抗(Canakinumab)等)及抗CCR2抗體(例如帕洛利珠單抗(Plozalizumab)等)等。
將本發明藉由下述實施例作更詳細地說明，惟，本發明之範圍不限定於此等。所屬技術領域具有通常知識者可以本發明之記載為基礎進行各種變更、修飾，此等變更、修飾亦包含於本發明。
[實施例]
實施例1：調製PD-1/CD4雙特異性蛋白質(PD-1/CD4 scDb)
本實施例之PD-1/CD4雙特異性蛋白質PD-1/CD4 scDb為由抗小鼠CD4抗體之VH及VL及抗小鼠PD-1抗體之VH及VL構成之單鏈雙價抗體(single-chain Diabody)(以下，簡稱為「scDb」)。圖1表示其結構之概略。該scDb係將編碼各抗體之可變區域及肽連結基之DNA以預定之順序連結而製作出DNA，再將該DNA插入至表現載體中，使此於動物細胞(Free Style 293F細胞)中表現。於培養上清液中產生之scDb係在回收後，以Ni-NTA親和性層析及尺寸排除層析精製。於本實施例調製之PD-1/CD4 scDb有9種，將其中之一種作為「Clone-1」。此外，cDNA係依照以公知之基因選殖為基準之方法取得，該cDNA係分別編碼各個構成本實施例之scDb的抗小鼠CD4抗體及抗小鼠PD-1抗體之各可變區域(VH及VL)。於本實施例之一例，使用J43作為抗小鼠PD-1抗體，使用YTA3.1.2、YTS191或GK1.5作為抗小鼠CD4抗體。
實施例2：調製PD-1×CD4雙特異性蛋白質(PD-1/CD4 scDb-Fc)
本實施例之PD-1/CD4 scDb-Fc係於由抗小鼠CD4抗體之VH及VL及抗小鼠PD-1抗體之VH及VL構成之雙特異性scDb，藉由與從鉸鏈部位至CH3區域之人類IgG1恆定區域(IgG1恆定區域(鉸鏈/CH3))融合成之多肽(以下，簡稱為多肽A)、以及只由IgG1恆定區域(鉸鏈/CH3)構成之多肽(以下，簡稱為多肽B)兩種蛋白質會合構成之異二聚體。該異二聚體具有Fcγ受體結合性已消失之突變。圖2表示其結構之概略。
編碼多肽A之DNA，係除了製作PD-1/CD4 scDb之外，將於實施例1取得之分別編碼抗小鼠CD4抗體及抗小鼠PD-1抗體之各VH及VL之DNA， 與編碼肽連結基之DNA一起以預定之順序連結製作。此外，構成多肽A及B一部分之編碼IgG1恆定區域(鉸鏈/CH3)之DNA，係以公知之基因情報為基礎，利用PCR法取得其cDNA。將插入了分別編碼多肽A及B之各DNA序列之表現載體，基因導入至於Free Style 293F細胞並使其表現，於培養上清液中產生。將其培養上清液回收後，藉由以Protein A親和性層析及尺寸排除層析進行精製而調製。於本實施例調製之PD-1/CD4 scDb-Fc有9種，將其中一種作為「Clone-2」。
實施例3：評估PD-1/CD4雙特異性蛋白質之結合性
利用使用小鼠PD-1表現CHO-S細胞之流式細胞術，評估PD-1/CD4雙特異性蛋白質對小鼠PD-1之結合性。於PD-1/CD4 scDb之C末端附加6×His標記，於與同細胞結合之各重組蛋白之檢出中使用Alexa Fluor 488標記抗His標記抗體(MBL、型號D291-A48)。結果示於圖3。另一方面，由於PD-1/CD4 scDb-Fc含有人類IgG1恆定區域，於小鼠PD-1之結合檢出中使用PE標記抗人類IgG-Fc抗體(Thermo Fisher Scientific、型號H10104)。結果示於圖4。
任一種PD-1/CD4雙特異性蛋白質皆確認到與小鼠PD-1表現CHO-S細胞結合。另一方面，由於未觀察到作為對照使用之CHO-S細胞之結合，因而確認該結合係特異性於表現之PD-1。接著，藉由相同之方法，使用小鼠CD4表現CHO-K1細胞，確認到PD-1/CD4雙特異性蛋白質與小鼠CD4特異性結合。結果示於圖5及6。
實施例4：PD-1/CD4雙特異性蛋白質於實驗性過敏性腦脊髓炎小鼠模型(EAE模型)之生體內(in vivo)作用
於使用C57BL/6小鼠之EAE模型評估PD-1/CD4雙特異性蛋白質之生體內作用。將結核死菌H37Ra(BD Biosciences、型號231141)與不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund's adjuvant)(BD Biosciences、型號263910)混合，調製出含有4mg/mL結核死菌H37Ra之完全弗氏佐劑(CFA)。將1mg/mL之MOG肽(ANASPEC、型號AS-60130)與等量之CFA混合而調製成乳膠，作為EAE模型之誘導劑。於該C57BL/6小鼠尾根部皮下投予該誘導劑200μL，於其免疫處置當日及第2日，分別將200μL之1μg/mL百日咳毒素(SIGMA-ALDRICH、型號P7208)進行尾靜脈內投予。接著，從免疫後6日至10日為止之5日間，對該C57BL/6小鼠進行1日1次腹腔內投予Clone-1或Clone-2。免疫處置日以後，以大貫人等之方法為基準評估神經症狀(Onuki M，et al.,Microsc Res Tech 2001；52：731-9.)。將神經症狀之程度點數化(正常：點數0；尾弛緩：點數1；後肢部分麻痺：點數2；後肢麻痺：點數3；前肢麻痺：點數4及瀕死或死亡：點數5)，觀察到複數神經症狀時，採用高值作為評估日之神經症狀點數。集合計算從免疫處置日起至免疫後30日為止之觀察期間之累積神經症狀點數。圖7表示其評估結果。
Clone-1及Clone-2係於EAE模型抑制神經症狀。
實施例5：PD-1/CD4雙特異性蛋白質對於生體內小鼠血中細胞激素濃度之影響
對小鼠投予本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質，評估生體內血漿中細胞激素濃度之變化。對C57BL/6小鼠，分別投予作為PD-1/CD4雙特異性蛋白質之0.5mg/kg之Clone-1及1.0mg/kg之Clone-2、Clone-J、Clone-L及Clone-O。又，以0.5mg/kg之投予量腹腔內投予專利文獻1揭示之PD-1/CD3雙特異性scDb(J43×2C11_scDb)。針對各個小鼠，於投予起3小時後從小鼠的尾靜脈進行採血，將血漿分離。使用BD細胞術微珠陣列(Cytometric Bead Array)之小鼠可溶性蛋白質Flex Set(BD Biosciences、型號558296、558299及558297)，以流式細胞術(BD Biosciences、BD FACSCantoII)測定血漿中干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及介白素-2(IL-2)濃度。其結果示於圖8。又，圖中之血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度(pg/mL)以平均值±標準誤差(N=5)表示。
J43×2C11_scDb增加小鼠之血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度。另一方面，本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質未增加血漿中IFN-γ、TNF-α、IL-2濃度。標的分子為CD4時，改善了投予時的細胞激素產生或釋放之誘導。
實施例6：PD-1/CD4雙特異性蛋白質對於B細胞淋巴瘤細胞株細胞增殖抑制作用
使用源自健康人末梢血液之pan-T細胞(STEMCELL，型號ST-70024)(人類T細胞)，評估對於B細胞淋巴瘤細胞株細胞增殖之抑制作用。於U底96孔盤播種人類T細胞、及以Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher，型號V22887)標記之B細胞淋巴瘤細胞株EB-1或人類PD-1強制表現SU-DHL-4，添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質後共培養48小時。將細胞從各孔回收，以細胞活力溶液(Cell Viability Solution)染色，以流式細胞術計算DiD陽性 生細胞數。將未添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞數作為100%，算出添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞減少率作為細胞增殖抑制率。
實施例7：PD-1/CD4雙特異性蛋白質對於多發性骨髓瘤細胞株細胞增殖抑制作用
使用源自健康人末梢血液之pan-T細胞(STEMCELL，型號ST-70024)(人類T細胞)，評估對於多發性骨髓瘤細胞株細胞增殖抑制作用。於U底96孔盤中播種人類T細胞、以及以Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher，型號V22887)標記之多發性骨髓瘤細胞株RPMI8226，添加PD-1/CD4雙特異性重組蛋白後共培養48小時。將細胞從各孔回收，以細胞活力溶液染色，以流式細胞術計算DiD陽性生細胞數。將未添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞數作為100%，算出添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞減少率作為細胞增殖抑制率。
實施例8：PD-1/CD4雙特異性蛋白質對於成人T細胞性淋巴瘤細胞株細胞增殖抑制作用
使用源自健康人末梢血液之pan-T細胞(STEMCELL，型號ST-70024)(人類T細胞)，評估對於成人T細胞性淋巴瘤細胞株細胞增殖抑制作用。於U底96孔盤中播種人類T細胞、以及以Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher，型號V22887)標記之成人T細胞性淋巴瘤細胞株ILT-Mat，添加PD-1/CD4雙特異性重組蛋白後共培養48小時。將細胞從各孔回收， 以細胞活力溶液染色，以流式細胞術計算DiD陽性生細胞數。將未添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞數作為100%，算出添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞減少率作為細胞增殖抑制率。
實施例9：PD-1/CD4雙特異性蛋白質對於急性T細胞性白血病細胞株細胞增殖抑制作用
使用源自健康人末梢血液之pan-T細胞(STEMCELL，型號ST-70024)(人類T細胞)，評估對於成人T細胞性淋巴瘤細胞株細胞增殖抑制作用。於U底96孔盤中播種人類T細胞、以及以Vybrant DiD Cell-Labeling Solution(Thermo Fisher，型號V22887)標記之人類PD-1強制表現Jurkat(急性T細胞性白血病細胞株)，添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質後共培養48小時。將細胞從各孔回收，以細胞活力溶液染色，以流式細胞術計算DiD陽性生細胞數。將未添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞數作為100%，算出添加PD-1/CD4雙特異性蛋白質的試樣之DiD陽性生細胞減少率作為細胞增殖抑制率。
[產業上之可利用性]
本發明之PD-1/CD4雙特異性蛋白質係對自體免疫疾病、移植物對抗宿主疾病(GVHD)或血癌等之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療有用。
【序列表】
P20-140WO_PCT_雙特異性蛋白質_20200730_113201_0.txt
<110> 小野藥品工業股份有限公司(ONO PHARMACEUTICAL CO.,LTD.)
<120> 雙特異性蛋白質(Bispecific Antibody)
<130> P20-140WO
<150> JP 2019-146227
<151> 2019-08-08
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Figure 109126896-A0202-12-0056-10
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Figure 109126896-A0202-12-0056-1

Claims (15)

  1. 一種PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂。
  2. 如請求項1所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第一臂含有抗PD-1抗體之VH及VL。
  3. 如請求項1或2所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第二臂含有抗CD4抗體之VH及VL。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係IgG抗體。
  5. 如請求項4所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，IgG抗體為IgG1抗體或IgG4抗體。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係傳達PD-1之抑制性信號。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，其中，該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等兩相互作用。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係充分地減低於投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係分別與於T細胞淋巴球發現之PD-1及CD4特異性結合。
  10. 一種單離PD-1/CD4雙特異性抗體抗體，係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD4特異性結合之第二臂，其中，
    (a)該第一臂含有抗PD-1抗體之VH及VL，該第二臂含有CD4抗體之VH及VL，
    (b)該單離PD-1/CD4雙特異性抗體抗體分別與於T細胞淋巴球上表現之PD-1及CD4特異性結合，及
    (c)(i)該單離PD-1/CD4雙特異性抗體抗體傳達PD-1之抑制性信號、(ii)該第一臂容許PD-1及PD-L1之相互作用、PD-1及PD-L2之相互作用或此等之兩相互作用、及/或(iii)充分地減低於投予中或投予後24小時以內之細胞激素產生。
  11. 一種醫藥組成物，係含有選自請求項1至10中任一項之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段及藥學上容許之載體。
  12. 一種自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制抑制及/或治療劑，係含有選自請求項1至10中任一項之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段作為有效成分。
  13. 一種自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制抑制及/或治療方法，係包含對病患投予有效量之選自請求項1至10中任一項之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段。
  14. 如請求項1至10中任一項所述之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段，係使用於自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制抑制及/或治療。
  15. 一種請求項1至10中任一項之PD-1/CD4雙特異性抗體或其抗體片段之用途，係用以製造自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制抑制及/或治療之醫藥。
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