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TW202015725A - Tlr7 肽結合物 - Google Patents

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TW202015725A
TW202015725A TW108119117A TW108119117A TW202015725A TW 202015725 A TW202015725 A TW 202015725A TW 108119117 A TW108119117 A TW 108119117A TW 108119117 A TW108119117 A TW 108119117A TW 202015725 A TW202015725 A TW 202015725A
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耀祥 吳
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美商亞博創新醫藥有限公司
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Abstract

本發明係關於一類具有增強免疫調節性質之嘧啶衍生物肽結合物。更特定地，該肽結合物含有TLR7激動劑且增強其所偶聯之肽之生物效應，增加免疫原性，及/或降低該肽之有效劑量。在一些實施例中，該肽係抗原、疫苗、基於肽之新抗原疫苗，或抗原決定基。

Description

TLR7　肽結合物
本發明係關於一類具有增強之免疫調節性質之嘧啶衍生物肽結合物。
不同疫苗平臺可以不同程度之功效靶向免疫系統之不同臂。舉例而言，病毒/核酸疫苗(載體)在驅動CD8+ (殺手) T細胞反應方面高度有效，而亞單位疫苗係殺手T細胞之弱誘導物，但係抗體及CD4+ (輔助) T細胞反應之強誘導物(D’Argenio及Wilson. Immunity. 2010. 33:437-40)。肽疫苗係一種常規用於提供界定之抗原決定基用於藉由抗原呈遞細胞(APC)之主要組織相容性(MHC)分子呈遞至輔助及/或殺手T細胞的平臺。肽疫苗亦可用於誘導針對B細胞識別之線性抗原決定基之抗體反應(Winblad等人 The Lancet. 2012. 11:597-604)。
與活的減毒微生物、核酸載體及重組蛋白亞單元相比，肽疫苗具有界定之化學結構及快速製造之優點。然而，由於注射後半衰期短，肽疫苗通常免疫原性差，且因此需要佐劑來達到最佳疫苗功效。因此，大部分疫苗由抗原及佐劑構成，其中抗原提供T及/或B細胞受體之特異性靶標，且佐劑組分用作抗原特異性反應之一般免疫增強劑(O’Hagan及Valiante Nat Rev Drug Discov. 2003. 9:727-35)。
在用於病毒感染及癌症之預防及治療方面，肽疫苗已經被最廣泛地研究，其中殺手及輔助T細胞反應對宿主防禦該等疾病係至關重要的。最近，已鑑別可容易地用肽疫苗靶向之一類重要的T細胞抗原(腫瘤新抗原)。下一代測序(NGS)及生物資訊學用於鑑別具有被識別為新抗原之潛力的腫瘤突變。由於新抗原之患者特異性性質，個人化癌症苗之發展需要抗原決定基之快速合成。因此，基於肽之新抗原疫苗作為新癌症療法之基礎受到了廣泛之關注。科學論文已闡述用於患有黑色素瘤之患者之個人化新抗原疫苗，且顯示該疫苗在人類中具有免疫原性(Wu等人Nature, 2017, 547, 217-221)。在該疫苗中，藉由與合成肽抗原混合，使用聚-IC (TLR3激動劑)作為佐劑。
然而，共投與非共價連接之肽抗原及佐劑可導致注射後分離。肽抗原及佐劑可集中在不同組織中，且佐劑之免疫原性增強益處減小。此導致肽抗原之效能降低。需要增強疫苗之抗原特異性反應並改良共投與之佐劑之益處的化合物及方法。
在一態樣中，本揭示闡述共價結合至合成TLR7激動劑之肽抗原。在另一態樣中，使用習用固相肽合成合成肽，且在樹脂裂解前之最後步驟與TLR7激動劑偶聯。該過程向當前肽合成增加最小複雜性並提供在N末端經TLR7激動劑修飾之序列。本文所述之肽結合物增加肽抗原之免疫原性及/或降低有效劑量。在包含多種肽抗原之疫苗中，免疫原性增強及/或劑量節省佐劑技術可極大地提高疫苗之整體效能、便利性及成本有效性。通常，藉由在TLR激動劑與肽(例如抗原、疫苗、基於肽之新抗原疫苗或抗原決定基)之間形成共價鍵來製備肽結合物。
在一態樣中，本揭示內容提供具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image003
其中 肽係肽，其中(C=O)連接至(i) 肽之N末端，或(ii) 肽之側鏈，其中C=O所連接之側鏈之官能基係NH2 ； R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image005
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image007
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image009
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image011
、
Figure 02_image013
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image015
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image017
、
Figure 02_image019
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
在一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係藉由固相合成製備。
在另一態樣中，本揭示內容提供包含如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組合物。
在另一態樣中，本揭示內容提供製備如本文所述之結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式(3a)之化合物結合的步驟
Figure 02_image021
其中 R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OZ、-NHZ、-NHAc、-COOZ、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image023
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OZ及-C(CH3 )2 OZ； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image025
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image027
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image029
、
Figure 02_image031
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image033
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image035
、
Figure 02_image037
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； 每一Z獨立地係H或保護基團； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之醫藥組合物，其用於療法中。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造藥劑。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張於2018年6月4日提出申請之美國臨時申請案第62/680,332號之權益，該案之內容以全文以引用方式併入本文中。
儘管本文詳細闡釋及闡述本發明之具體實施例，但本發明並不限於此。詳細說明作為本發明之實例提供，且不應解釋為構成對本發明之任何限制。對於熟習此項技術者，修改係顯而易見的，且不脫離本發明之精神之所有修改皆意欲包括在所附申請專利範圍之範疇內。術語
以下定義意欲闡明而非限制所定義之術語。若本文所用之特定術語未明確地加以定義，則該術語不應視為係不確定的。相反，術語在其接受之含義內使用。
如本文所用之術語「烷基」係指直鏈或具支鏈飽和烴。舉例而言，烷基可具有1至8個碳原子(即，(C1 -C8 )烷基)或1至6個碳原子(即，(C1 -C6 )烷基)或1至4個碳原子(即，(C1 -C4 )烷基)。
如本文所用術語「伸烷基」係指具有藉由自母體烷烴之相同或兩個不同碳原子去除兩個氫原子產生之兩個單價基團中心的直鏈或具支鏈飽和烴基團。舉例而言，伸烷基可具有1至8個碳原子、1至6個碳原子或1至4個碳原子。
如本文所用術語「烷氧基」係指經由氧原子連接至母體分子部分之烷基。
如本文所用術語「肽」係指由兩個或更多個由肽鍵共價連接之胺基酸單元構成的化合物。二肽具有兩個胺基酸殘基，三肽具有三個胺基酸殘基，四肽具有四個胺基酸殘基，等等。肽可包括寡肽、多肽及蛋白質。
如本文所用術語「胺基酸」係指天然及合成胺基酸，及D及L胺基酸。「天然胺基酸」意指20種一級天然胺基酸中之任一者，其通常形成肽、多肽及蛋白質。「合成胺基酸」意指任何其他胺基酸，無論其是自天然來源合成製備或源自天然來源。如本文所用之「合成胺基酸」亦涵蓋化學修飾之胺基酸，包括(但不限於)鹽、衍生物(例如醯胺)及取代。包含於本發明之肽中之胺基酸且特定而言在羧基或胺基末端，可藉由甲基化、醯胺化、乙醯化或用其他化學基團取代來修飾。另外，在本揭示內容之肽中可存在或不存在二硫鍵。
如本文所用術語「胺基酸殘基」係指肽中之胺基酸單元。
本文所用之術語「殘基」係指當胺基酸在接合肽鏈時形成肽鏈接時H2 O釋放後留下之基團。
本文所用之術語「寡肽」係指超過12個且小於約20個胺基酸殘基之肽鏈。
本文所用之術語「多肽」係指超過約20個胺基酸殘基之肽鏈。
本文所用之術語「蛋白質」係指由一或多條多肽鏈組成之分子。
如本文所用術語「醫藥上可接受之」係指載劑、稀釋劑、賦形劑或鹽形式與調配物之其他成分相容且對醫藥組合物之接受者無害。
如本文所用術語「醫藥組合物」係指視情況與一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑混合之本發明化合物。醫藥組合物較佳對環境條件展現一定程度之穩定性，以便使其適於製造及商業化目的。
如本文所用術語「有效量」、「治療量」或「有效劑量」係指足以引發期望藥理學或治療效應從而導致病症之有效預防或治療的活性成分之量。病症之預防可藉由延遲或預防病症之進展、以及延遲或預防與病症相關之症狀之發作來表現。病症之治療可藉由症狀之減少或消除、病症之進展之抑制或逆轉以及對患者之健康之健康狀態之任何其他貢獻來表現。
有效劑量可根據諸如患者之病況、病症之症狀之嚴重程度及醫藥組合物之投與方式等因素而變。通常，需要欲以有效劑量投與之化合物以小於30 mg之量投與。通常，化合物可以小於約1 mg至小於約100 μg且偶爾介於約10 μg至小於100 μg之量投與。上述有效劑量通常表示作為單一劑量或作為一或多個劑量投與之量在24小時時段內投與。對於人類患者而言，化合物之有效劑量可需要投與至少約1μg/24 hr/患者、但不超過約2400 μg/24 hr/患者且通常不超過約500 μg/ 24 hr/患者之量的化合物。肽結合物
在一態樣中，本揭示內容提供具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image039
其中 肽係肽，其中(C=O)連接至(i) 肽之N末端，或(ii) 肽之側鏈，其中C=O所連接之側鏈之官能基係NH2 ； R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image041
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image043
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image045
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image047
、
Figure 02_image049
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image051
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image053
、
Figure 02_image055
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
在一些實施例中，本發明提供具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中式I具有式(1a)或(2a)之結構，
Figure 02_image057
Figure 02_image059
其中 每一AA獨立地係胺基酸，其中(AA)q 係肽，其中(C=O)連接至肽之N末端； q為8至40之整數； D係H或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽； E係OH或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽；且 R1a 、X、Y、p及o係如針對式I所定義。
在一些實施例中，本發明提供式1a之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中式1a具有式1b之結構
Figure 02_image061
其中AA及q係如針對式1a及2a所定義；且 R1a 、X、Y、p及o係如針對式I所定義。
在一些實施例中，本發明提供式2a之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中式2a具有式2b之結構
Figure 02_image063
其中D及E係如針對式1a及2a所定義；且 R1a 、X、Y、p及o係如針對式I所定義。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中(C=O)連接至肽之N末端。在替代實施例中，(C=O)連接至肽之側鏈，其中C=O所連接之側鏈之官能基係NH2 。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中胺基酸係天然胺基酸。在一些實施例中，胺基酸係合成胺基酸。在一些實施例中，胺基酸係天然或合成胺基酸。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係H。在替代實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image065
及A1 。在一些實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經-SO2 CH3 取代。在一些實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基經-SO2 CH3 取代。在更具體實施例中，R1a 係
Figure 02_image067
。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係H。在替代實施例中，X係C1 -C4 烷基。在具體實施例中，X係甲基。在一些實施例中，X係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Y係-CH2 -。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中o為0。在一些實施例中，o為1。在一些實施例中，o為2。在一些實施例中，o為3。在一些實施例中，o為4。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中p為1。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，p為3。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image069
及A1 ； X係C1 -C4 烷基；且 Y係-CH2 -。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有以下特徵中之一者、兩者或三者或更多者： a) R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image071
及A1 ； b) X係C1 -C4 烷基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1； f) p為3；且 g) 肽係抗原或疫苗。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有以下特徵中之一者、兩者或三者或更多者： a) R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基經-SO2 CH3 取代； b) X係C1 -C4 烷基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1； f) p為3；且 g) 肽係抗原或疫苗。
在一些實施例中，本揭示內容提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有以下特徵中之一者、兩者或三者或更多者： a) R1a 係
Figure 02_image073
； b) X係甲基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1； f) p為3；且 g) 肽係抗原或疫苗。肽
本揭示內容提供具有式I、式1a、式2a、式1b或式2b之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中肽係肽。在一個實施例中，肽係寡肽。在另一實施例中，肽係多肽。在再一實施例中，肽係蛋白質。
本揭示內容提供具有式I、式1a、式2a、式1b或式2b之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中下文指示肽結合物之肽：
Figure 02_image075
在某些實施例中，當肽係關於肽結合物之肽時，對「肽」之提及係指上表中所示之肽結合物之部分。
在一些實施例中，肽由天然胺基酸構成。在一些實施例中，肽由合成胺基酸構成。在一些實施例中，肽由天然及合成胺基酸構成。在一些實施例中，肽由天然胺基酸組成。在一些實施例中，肽由合成胺基酸組成。在一些實施例中，肽由天然及合成胺基酸組成。
在一些實施例中，本揭示提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中肽係抗原。在一些實施例中，抗原係細菌或病毒抗原。在一些實施例中，抗原係抗原決定基。在一些實施例中，抗原係共同腫瘤抗原。在一些實施例中，抗原係個人化新抗原。在一些實施例中，肽係疫苗。
在一些實施例中，本揭示提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中肽由2至80個胺基酸、2至40個胺基酸、2至20個胺基酸或2至10個胺基酸構成。在一些實施例中，肽由10至80個胺基酸、10至40個胺基酸、10至30個胺基酸或10至25個胺基酸構成。在一些實施例中，肽由20至80個胺基酸、20至40個胺基酸、20至30個胺基酸或20至25個胺基酸構成。
在一些實施例中，本揭示提供式1a、式1b之肽結合物及其醫藥上可接受之鹽，其中q係整數2至80；2至40；2至20；或2至10。在一些實施例中，q係整數8至80；8至40；8至30；8至20；或8至10。
本揭示提供式2a、式2b之肽結合物及其醫藥上可接受之鹽，其中D係H且E係1至40個胺基酸。在一些實施例中，D係1至40個胺基酸且E係OH。在一些實施例中，D係1至20個胺基酸且E係1至20個胺基酸。在一些實施例中，D係1至30個胺基酸且E係1至10個胺基酸。在一些實施例中，D係1至10個胺基酸且E係1至30個胺基酸。肽結合物之製備
在一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係藉由固相合成製備。在一個實施例中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中當肽結合至固相時，在肽與TLR7激動劑之間形成共價鍵。在一些實施例中，當肽結合至固相且所得肽結合物自固相解離時，在肽與TLR7激動劑之間形成共價鍵。
在另一態樣中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式(3a)化合物結合之步驟
Figure 02_image077
其中 R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OZ、-NHZ、-NHAc、-COOZ、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image079
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OZ及-C(CH3 )2 OZ； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image081
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image083
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image087
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image089
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image091
、
Figure 02_image093
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； 每一Z獨立地係H或保護基團； m為0至4之整數；且 n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
在一些具體實施例中，3a之式具有式3b之結構，
Figure 02_image095
其中R1a 、X、Y、p及o係如針對式3a所定義。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合之步驟，其中R1a 係H。在替代實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image097
及A1 。在一些實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經-SO2 CH3 取代。在一些實施例中，R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基經-SO2 CH3 取代。在更具體實施例中，R1a 係
Figure 02_image099
。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中X係H。在替代實施例中，X係C1 -C4 烷基。在具體實施例中，X係甲基。在一些實施例中，X係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中Y係-CH2 -。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中o為1。在一些實施例中，o為0。在一些實施例中，o為2。在一些實施例中，o為3。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中p為1。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，p為3。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image101
及A1 ； X係C1 -C4 烷基；且 Y係-CH2 -。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中式3化合物具有以下特徵中之一者、二者或三者或更多者： a) R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image103
及A1 ； b) X係C1 -C4 烷基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1；且 f) p為3。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中式3化合物具有以下特徵中之一者、二者或三者或更多者： a) R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基經-SO2 CH3 取代； b) X係C1 -C4 烷基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1；且 f) p為3。
在一些實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式3或式3b之化合物結合的步驟，其中式3化合物具有以下特徵中之一者、二者或三者或更多者： a) R1a 係
Figure 02_image105
； b) X係甲基； c) Y係-CH2 -； d) C1-3 烷氧基係CH3 O-； e) o為1；且 f) p為3。
應充分理解，若需要，根據一般化學原理採用敏感性或反應性基團之保護基團。根據有機合成之標準方法操縱保護基團(T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis,」 第三版, Wiley, New York 1999)。在化合物合成之方便階段使用熟習此項技術者易於明瞭之方法去除該等基團。選擇方法、以及反應條件及其執行次序應與本文揭示之肽結合物及化合物的製備一致。
在一些實施例中，Z係胺基保護基團。胺基保護基團之非限制性實例包括胺基甲酸9-茀基甲基酯(Fmoc)、胺基甲酸第三丁基酯(BOC)、胺基甲酸苄基酯(Cbz)、乙醯胺(Ac)、三氟乙醯胺、酞醯胺、苄基胺(Bn)、三苯基甲胺(三苯甲基胺、Tr)、亞苄基胺、對甲苯磺醯胺(Ts、甲苯磺醯胺)。
在一個實施例中，本揭示內容提供製備如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其中肽結合至固相。在另一實施例中，該方法進一步包含自固相解離結合物之步驟。
結合步驟包含在肽與TLR7激動劑之間形成共價鍵。在一個實施例中，TLR7激動劑係低分子量分子且與聚合物質相反，另外稱作「小分子」。在一個實施例中，在肽之N末端與TLR7激動劑之-COOH基團之間形成共價鍵。在另一實施例中，在肽之側鏈與TLR7激動劑之COOH基團之間形成共價鍵。在更具體實施例中，側鏈係胺基。在另一實施例中，側鏈係離胺酸殘基。醫藥組合物
在另一態樣中，本揭示內容提供包含如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組合物。在一些實施例中，本文揭示之醫藥組合物係腫瘤疫苗。腫瘤疫苗可治療現存腫瘤或預防腫瘤發展。
式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽可自身使用，但通常將以醫藥組合物形式投與，其中式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽(活性成分)與醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑締合。選擇及製備適宜醫藥調配物之習用程序闡述於(例如) 「Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs」, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988中。
本發明提供包含本發明之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。在一個實施例中，醫藥上可接受之載劑係羧基甲基纖維素、鹽水、水或另一水溶液。在另一實施例中，醫藥上可接受之載劑係水中之0.1%-5%羧基甲基纖維素。
端視投與模式而定，醫藥組合物將包含約0.05 wt %至約99 wt % (重量百分比或w/w %)、更具體而言約0.05 wt %至約80 wt %、仍更具體而言約0.10 wt %至約70 wt %且甚至更具體而言約0.10 wt %至約50 wt %之活性成分，所有重量百分比皆係基於總組合物。
本發明亦提供包含如上文所定義之式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑締合的醫藥組合物。
本發明進一步提供製備本發明之醫藥組合物之方法，其包含混合如上文所定義之式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽與醫藥上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑。使用方法
可經由使用免疫製劑(稱作疫苗佐劑)增強對某些抗原之免疫反應。免疫佐劑之論述可參見「Current Status of Immunological Adjuvants」, Ann. Rev. Immunol., 1986, 4, 第369-388頁及「Recent Advances in Vaccine Adjuvants and Delivery Systems」，D. T. O'Hagan及N. M. Valiante, Nat. Rev. Drug Discovery, 2003, 2(9), 727-35。美國專利第4,806,352號、第5,026,543號及第5,026,546號之揭示內容闡述在專利文獻中出現之各種疫苗佐劑。該等參考文獻中之每一者以全文引用方式併入本文中。
本發明提供藉由投與單獨或與其他試劑組合之本文揭示之肽結合物來投與疫苗之方法。在另一實施例中，投與含有來自諸如合成肽、細菌或病毒抗原等來源之抗原性抗原決定基的本文揭示之肽結合物引起免疫反應。在其他實施例中，本發明提供免疫原組合物，其包含有效刺激細胞介導之對該一或多種抗原之反應的本文揭示之肽結合物。
在另一態樣中，使用本文揭示之肽結合物引起抗原劑量節省效應。在抗原劑量節省效應中，在較低抗原劑量下獲得抗原之相同或類似效能。其亦意味著抗原之有效劑量降低。此係抗原具有差的溶解性的因素。受差的溶解性限制之抗原可能需要抗原劑量高於抗原具有良好溶解性且生物利用度更大的抗原劑量。結合溶解性差的抗原以獲得如式I、式1a、式2a、式1b、或式2b中所揭示之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽可在較低劑量下引起相同或類似之抗原效能。彙集之新抗原疫苗(例如，包含20或更多種肽)之調配物受肽之差溶解性限制。式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽(其中肽部分包含彙集之新抗原疫苗)可達成以較高劑量投與之非結合之彙集新抗原疫苗的相同或類似效能。在一個實施例中，與未結合之抗原相比，本文揭示之肽結合物(其中肽係抗原)之使用降低抗原之有效劑量。在另一實施例中，與未結合之抗原相比，本文揭示之肽結合物(其中肽係抗原)之使用增加抗原之免疫原性。
本文進一步提供式I、式1a、式2a、式1b或式2b之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、或包含上述肽結合物中之任一者或其醫藥上可接受之鹽的醫藥組合物，其用於治療有需要之個體之病症的方法中。在本文提供之方法及用途之一些實施例中，病症係腫瘤。
在一態樣中，本揭示內容提供治療有需要之個體之腫瘤的方法，其包含向有需要之個體投與本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽。
在另一態樣中，本揭示內容提供為有需要之個體接種對抗腫瘤之疫苗的方法，其包含向有需要之個體投與本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽。
如本文所用之實體腫瘤係指通常不含囊腫或液體區域之異常組織塊。實體腫瘤可為良性的或惡性的。實體腫瘤可在若干地方、例如骨、肌肉及器官中出現。實體腫瘤之實例係肉瘤、癌及淋巴瘤。肉瘤係血管、骨、脂肪組織、韌帶、淋巴管、肌肉或腱中之腫瘤。肉瘤包括尤恩氏肉瘤(Ewing sarcoma)及骨肉瘤，二者皆係骨癌肉瘤。橫紋肌肉瘤係肌肉中發現之軟組織肉瘤。癌係在上皮細胞中形成之腫瘤。在皮膚、腺體及器官之內層中發現上皮細胞。彼等器官包括膀胱、輸尿管及腎之部分。一種常見癌係腎上腺皮質癌。常見小兒實體腫瘤癌包括腦瘤、神經胚細胞瘤、威爾姆氏瘤(Wilms tumor)、橫紋肌肉瘤、視網膜母細胞瘤、骨肉瘤及尤恩氏肉瘤。
在一些實施例中，腫瘤係實體腫瘤。在一些實施例中，實體腫瘤係選自由以下組成之群：腎上腺皮質腫瘤、腺泡狀軟組織肉瘤、癌、軟骨肉瘤、結腸直腸癌、硬纖維瘤腫瘤、促結締組織增生性小圓細胞瘤、內分泌腫瘤、內胚層竇瘤、上皮樣血管內皮瘤、尤恩氏肉瘤、生殖細胞瘤(實體腫瘤)、肝母細胞瘤、肝細胞癌、黑色素瘤、腎瘤、神經胚細胞瘤、非橫紋肌肉瘤軟組織肉瘤(NRSTS)、骨肉瘤、脊柱旁肉瘤、腎細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤及威爾姆氏瘤。
在一些實施例中，腫瘤並非實體腫瘤。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之醫藥組合物，其用於療法中。
在另一態樣中，本揭示內容提供如本文所述之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造藥劑。實例性實施例
實施例I-1.    一種具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image107
其中 肽係肽，其中(C=O)連接至(i) 肽之N末端，或(ii) 肽之側鏈，其中C=O所連接之側鏈之官能基係NH2 ； R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image109
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image111
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image113
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image115
、
Figure 02_image117
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image119
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image121
、
Figure 02_image123
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； m為0至4之整數；且 n、o及p獨立地為1至4之整數。
實施例I-2.    如實施例I-1之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1a)或(2a)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image125
其中 每一AA獨立地係胺基酸，其中(AA)q 係肽，其中(C=O)連接至肽之N末端； q為8至40之整數； D係H或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽；且 E係OH或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽。
實施例I-3.    如實施例I-2之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1b)或(2b)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image127
。
實施例I-4. 如實施例I-1至I-3中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image129
及A1 ； X係C1 -C4 烷基；且 Y係-CH2 -。
實施例I-5. 如實施例I-1至I-4中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係C1 -C4 烷基，且烷基經-SO2 CH3 取代。
實施例I-6. 如實施例I-1至I-5中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係
Figure 02_image131
。
實施例I-7.    如實施例I-1至I-6中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係甲基。
實施例I-8.    如實施例I-1至I-7中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中p為3。
實施例I-9.    如實施例I-1至I-8中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中o為1。
實施例I-10.  如實施例I-1至I-9中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Y係-CH2 -。
實施例I-11.  如實施例I-1至I-10中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係抗原。
實施例I-12.  如實施例I-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係細菌或病毒抗原。
實施例I-13.  如實施例I-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係抗原決定基。
實施例I-14.  如實施例I-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係共同腫瘤抗原。
實施例I-15.  如實施例I-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係個人化新抗原。
實施例I-16.  如實施例I-1至I-10中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係疫苗。
實施例I-17.  如實施例I-1至I-16中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係藉由固相合成製備。
實施例I-18.  一種醫藥組合物，其包含如實施例I-1至I-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽。
實施例I-19.  一種製備如實施例I-1至I-16中任一實施例之結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式(3a)化合物結合之步驟
Figure 02_image133
其中 R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OZ、-NHZ、-NHAc、-COOZ、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image135
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OZ及-C(CH3 )2 OZ； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image137
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image139
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image141
、
Figure 02_image143
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image089
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image146
、
Figure 02_image148
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； 每一Z獨立地係H或保護基團； m為0至4之整數；且 n、o及p獨立地為1至4之整數。
實施例I-20.  如實施例I-19之方法，其中該肽結合至固相。
實施例I-21.  如實施例I-20之方法，其進一步包含自該固相解離該結合物之步驟。
實施例I-22.  如實施例I-1至I-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
實施例I-23.  如實施例I-18之醫藥組合物，其用於療法中。
實施例I-24.  一種如實施例I-1至I-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造藥劑。
實施例II-1.   一種具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image150
其中 肽係肽，其中(C=O)連接至(i) 肽之N末端，或(ii) 肽之側鏈，其中C=O所連接之側鏈之官能基係NH2 ； R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image152
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image154
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image156
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image158
、
Figure 02_image160
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image162
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image164
、
Figure 02_image148
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
實施例II-2.   如實施例II-1之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1a)或(2a)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image167
其中 每一AA獨立地係胺基酸，其中(AA)q 係肽，其中(C=O)連接至肽之N末端； q為8至40之整數； D係H或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽；且 E係OH或胺基酸或包含2至40個胺基酸之肽。
實施例II-3.   如實施例II-2之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1b)或(2b)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
Figure 02_image169
。
實施例II-4.   如實施例II-1至II-3中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image171
及A1 ； X係C1 -C4 烷基；且 Y係-CH2 -。
實施例II-5.   如實施例II-1至II-4中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係C1 -C4 烷基，且烷基經-SO2 CH3 取代。
實施例II-6.   如實施例II-1至II-5中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係
Figure 02_image173
。
實施例II-7.   如實施例II-1至II-6中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係甲基。
實施例II-8.   如實施例II-1至II-7中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中p為3。
實施例II-9.   如實施例II-1至II-8中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中o為1。
實施例II-10. 如實施例II-1至II-9中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Y係-CH2 -。
實施例II-11. 如實施例II-1至II-10中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係抗原。
實施例II-12. 如實施例II-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係細菌或病毒抗原。
實施例II-13. 如實施例II-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係抗原決定基。
實施例II-14. 如實施例II-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係共同腫瘤抗原。
實施例II-15. 如實施例II-11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係個人化新抗原。
實施例II-16. 如實施例II-1至II-10中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係疫苗。
實施例II-17. 如實施例II-1至II-16中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係藉由固相合成製備。
實施例II-18. 一種醫藥組合物，其包含如實施例II-1至II-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽。
實施例II-19. 一種治療有需要個體之腫瘤之方法，其包含向有需要之該個體投與如實施例II-1至II-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、或如實施例II-18之醫藥組合物。
實施例II-20. 一種為有需要之個體接種對抗腫瘤之疫苗的方法，其包含向有需要之該個體投與如實施例II-1至II-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、或如實施例II-18之醫藥組合物。
實施例II-21.      如實施例II-19或20之方法，其中該腫瘤係實體腫瘤。
實施例II-22. 一種製備如實施例II-1至II-17中任一實施例之結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含以下步驟：使肽與 式(3a)化合物結合
Figure 02_image175
其中 R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OZ、-NHZ、-NHAc、-COOZ、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
Figure 02_image177
及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OZ及-C(CH3 )2 OZ； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
Figure 02_image179
-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image181
L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image183
、
Figure 02_image185
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
Figure 02_image187
L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
Figure 02_image189
、
Figure 02_image191
、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； 每一Z獨立地係H或保護基團； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；且 o為0至4之整數。
實施例II-23. 如實施例I-22之方法，其中該肽結合至固相。
實施例II-24. 如實施例I-23之方法，其進一步包含自該固相解離該結合物之步驟。
實施例II-25. 如實施例II-1至II-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
實施例II-26. 如實施例I-18之醫藥組合物，其用於療法中。
實施例II-27. 一種如實施例II-1至II-17中任一實施例之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造藥劑。實例
提供以下實例以闡釋本發明，且不應理解對其進行限制。在該等實例中，除非另外指明，否則所有份數及百分比皆以重量計。下文指明實例中之縮寫。縮寫
Figure 108119117-A0304-0001
 化學合成實例 合成實例 1 ：用於肽結合物中之 TLR7 激動劑化合物 1 之合成 實例 1a ： TLR7 激動劑化合物 1 之合成
此實例闡述化合物1 (S)-2-(3-((2-胺基-4-甲基-6-((1-(甲基磺醯基)庚-3-基)胺基)嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)乙酸之製備。一旦獲得，可將此TLR7激動劑結合至任何胺基酸之α-胺基或離胺酸之側鏈胺基上。
Figure 02_image193
步驟 1 ： 3- 羥基 -2- 亞甲基丁酸甲酯 C23 H34 N4 O5 S
將丙烯酸甲酯(1.0 eq)於1:1二噁烷/水(8.5M)、乙醛(3.0 eq)及DABCO (1.0 eq)中之混合物於r.t.下攪拌過夜。將混合物分配在DCM/水之間。將有機層經Na2 SO4 乾燥，濃縮且藉由二氧化矽上急速層析(溶析液PE/EA = 100:1~2:1)純化，以產生標題化合物。步驟 2 ： 2-(5-( 氰基甲基 )-2- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基丁酸甲酯
將2-(3-溴-4-甲氧基苯基)乙腈(1.0 eq)於MeCN (0.44M)、3-羥基-2-亞甲基丁酸甲酯(2.0 eq)、PdCl2 (P(o-tol)3 )2 (0.03 eq)、TEA (2.0 eq)中之混合物於70℃攪拌過夜。將混合物分配在EA/水之間。將有機層經Na2 SO4 乾燥，濃縮且藉由二氧化矽上急速層析(溶析液PE/EA = 100:1~2:1)純化，以產生標題化合物。步驟 3 ： 2-(3-((2- 胺基 -4- 羥基 -6- 甲基嘧啶 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲氧基苯基 ) 乙腈
將2-(5-(氰基甲基)-2-甲氧基苄基)-3-側氧基丁酸甲酯(1.0 eq)、碳酸胍(1.0 eq)於MeOH (0.46M)中之混合物於65℃攪拌過夜。冷卻至r.t.後，過濾反應混合物。在真空下乾燥濾餅，以產生標題化合物。步驟 4 ： 2-(3-((2- 胺基 -4- 氯 -6- 甲基嘧啶 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲氧基苯基 ) 乙腈
將2-(3-((2-胺基-4-羥基-6-甲基嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)乙腈(1.0 eq)於POCl3 (0.9M)中之溶液於100℃在N2 下攪拌16 h。將反應混合物冷卻至r.t.，且在減壓下蒸發POCl3 。將殘餘物用水稀釋。藉由添加固體NaHCO3 將pH值調節至8。然後將混合物於50℃攪拌1 h，冷卻至r.t.，且藉由過濾收集沈澱。將濾餅用水洗滌，在真空中乾燥，以產生白色固體狀標題化合物。步驟 5 ： (S )-2-(3-((2- 胺基 -4- 甲基 -6-((1-( 甲硫基 ) 庚 -3- 基 ) 胺基 ) 嘧啶 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲氧基苯基 ) 乙腈
將2-(3-((2-胺基-4-氯-6-甲基嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)乙腈(1.0 eq)於NMP (1.7M)及(S )-1-(甲硫基)庚-3-胺(1.5 eq)中之混合物於120℃在氮氣下攪拌16 h。將混合物用水稀釋並用EA萃取水相。將有機層用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮。藉由管柱層析(DCM/MeOH=50:1)純化粗產物，從而產生黃色固體狀標題化合物。步驟 6 ： (S )-2-(3-((2- 胺基 -4- 甲基 -6-((1-( 甲基磺醯基 ) 庚 -3- 基 ) 胺基 ) 嘧啶 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲氧基苯基 ) 乙腈
於r.t.下向(S )-2-(3-((2-胺基-4-甲基-6-((1-(甲硫基)庚-3-基)胺基)-嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)乙腈(1 eq)於1:1:1 THF/MeOH/ H2 O (0.2M)中之溶液中逐份添加過硫酸氫鉀複合鹽(1.2eq)。將反應物於r.t.下攪拌2 h，且然後用DCM稀釋。將有機層用水及鹽水洗滌，乾燥且濃縮，以產生淺黃色固體，其直接用於下一步驟。步驟 7 ： (S )-2-(3-((2- 胺基 -4- 甲基 -6-((1-( 甲基 磺醯基 ) 庚 -3- 基 ) 胺基 ) 嘧啶 -5- 基 ) 甲基 )-4- 甲氧基苯基 ) 乙酸
向(S )-2-(3-((2-胺基-4-甲基-6-((1-(甲基磺醯基)庚-3-基)胺基)嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)乙腈(1.0 eq)於1:1 MeOH/H2 O (0.1M)中之溶液中添加KOH (7.5 eq)。將反應物於120℃攪拌4 h。去除溶劑且添加HCl以達成pH 9。藉由prep-HPLC (0.1%NH3 .H2 O/CH3 CN)純化混合物，以產生淺黃色固體狀標題化合物1。 LCMS: [M+H]+ =479.31 H NMR (400 MHz, CD3 OD)δ 7.16 (dd,J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.98 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.91 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.30-4.22 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.77-3.68 (m, 2H), 3.32 (s, 2H), 2.91-2.70 (m, 5H), 2.32 (s, 3H), 2.08-1.95 (m, 1H), 1.81-1.69 (m, 1H), 1.56-1.05 (m, 6H), 0.83 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。實例 1b ：化合物中間體 (S)-1-( 甲硫基 ) 庚 -3- 胺之合成
以下方案闡述化合物中間體(S)-1-(甲硫基)庚-3-胺之合成，該化合物中間體用於製備上述TLR7激動劑(化合物1)。
Figure 02_image195
步驟 1 ： (E )- 庚 -2- 烯酸第三丁基酯
將戊醛(1.0 eq)及2-(三苯基-λ5 -膦亞基)乙酸第三丁基酯(1.05 eq)於THF (1M)中之混合物於50℃攪拌16 hr。在減壓下濃縮混合物，且添加PE。過濾出固體，且將濾液蒸發至乾燥。藉由急速管柱層析(溶析液：PE至PE/EA = 100:1)純化粗製殘餘物，以產生黃色油狀標題化合物。步驟 2 ： (S )-3-( 苄基 ((S )-1- 苯基乙基 ) 胺基 ) 庚酸第三丁基酯
於-78℃經20 min向(S )-N -苄基-1-苯基乙-1-胺(1.3 eq)於THF (0.9M)中之溶液中逐滴添加2.5M n-BuLi (1.2 eq)。將混合物於-78℃攪拌10 min，然後逐滴添加THF (0.7M)中之(E )-庚-2-烯酸第三丁基酯(1.0 eq)。將所得混合物於-78℃攪拌30 min，然後用aq.NH4 Cl淬滅並用EA萃取。將有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由急速管柱層析(溶析液：PE至PE/EA = 100:1)純化殘餘物，以產生黃色油狀標題化合物。步驟 3 ： (S )-3-( 苄基 ((S )-1- 苯基乙基 ) 胺基 ) 庚 -1- 醇
於0℃向(S )-3-(苄基((S )-1-苯基乙基)胺基)庚酸第三丁基酯(1.0 eq)於無水THF (0.4M)中之溶液中逐份添加LiAlH4 (1.6 eq)。在添加後，將混合物於r.t.下攪拌5 hr。將混合物用1.0 M NaOH溶液淬滅，過濾，且用EA萃取濾液。將有機層經Na2 SO4 乾燥，在減壓下濃縮。藉由急速管柱層析(溶析液：PE至PE/EA = 5:1)純化殘餘物，以產生黃色油狀標題化合物。步驟 4 ： (S )-3- 胺基庚 -1- 醇
將(S )-3-(苄基((S )-1-苯基乙基)胺基)庚-1-醇(1.0 eq)於MeOH (0.1M)中之溶液於50℃在H2 氣氛下在Pd/C (10% wt)存在下攪拌48 hr。過濾混合物，且在減壓下濃縮濾液，以產生褐色油狀標題化合物。步驟 5 ： (S )-(1- 羥基庚 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
於0℃向(S )-3-胺基庚-1-醇(1.0 eq)於1:1二噁烷/H2 O (0.5M)中之溶液中添加NaOH (1.2 eq)及Boc2 O (1.2 eq)且升溫至rt。反應完成後，將混合物分配在H2 O/EA之間。將有機層經Na2 SO4 乾燥，在減壓下濃縮。藉由急速管柱層析(溶析液：PE至PE/EA = 3:1)純化殘餘物，以產生白色固體狀標題化合物。步驟 6 ： (S)- 甲烷磺酸 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 庚 基酯
向(S )-(1-羥基庚-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.0 eq)及TEA (1.2 eq)於DCM (0.4M)中之混合物中逐滴添加甲磺醯氯(1.1 eq.)且於0℃攪拌1 hr。將所得混合物分配於EA與水之間。將有機層經Na2 SO4 乾燥，在減壓下濃縮，以產生褐色油狀標題化合物。步驟 7 ： (S )-(1-( 甲硫基 ) 庚 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將(S )-甲烷磺酸3-((第三丁氧基羰基)胺基)庚基酯(1.0 eq)於DMF (0.7M)及MeSNa (2.0 eq)中之混合物於70℃攪拌16 hr。將所得混合物分配於EA與水之間。將有機層經Na2 SO4 乾燥，在減壓下濃縮。藉由急速管柱層析(溶析液：PE至PE/EA = 10:1)純化殘餘物，以產生黃色油狀標題化合物。步驟 8 ： (S )-1-( 甲硫基 ) 庚 -3- 胺
向(S )-(1-(甲硫基)庚-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.0 eq)於DCM (0.5M)中之溶液中添加過量4M HCl/二噁烷(1/3體積當量)。將所得混合物於r.t.下攪拌16 hr，在減壓下濃縮。將殘餘物與Et2 O一起研磨且藉由過濾收集沈澱之固體，以產生白色固體狀標題化合物(HCl鹽)。 LC-MS: [M+H]+ = 1621 H NMR (400 MHz, CDCl3 )δ 8.43 (br s, 3H), 3.41-3.38 (m, 1H), 2.71 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.11-2.03 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 1H), 1.82-1.66 (m, 2H), 1.52-1.32 (m, 4H), 0.92 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。合成實例 2 ： TLR7 激動劑與胺基酸之結合
此實例展現使用HATU化學之TLR7激動劑化合物1 (合成實例1)與丙胺酸之α-胺基之結合。
Figure 02_image197
於室溫下向化合物1 (1.0 eq)於DMF (0.04M)中之溶液中添加L -丙胺酸乙酯鹽酸鹽(1.0 eq)、六氟磷酸偶氮苯并三唑四甲基脲鎓(HATU, 2.0 eq)及N,N-二異丙基乙胺(DIEA, 4.0 eq)。將反應物在氮氣下攪拌4 h。將反應物用乙酸乙酯稀釋，且將有機層用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。將粗製物溶解於2:1 MeOH/H2 O (0.04M)中且添加過量NaOH (30.0 eq)。將反應物於80℃攪拌2 h。藉由prep-HPLC (0.1%NH3 /CH3 CN/H2 O)純化反應混合物，以產生白色固體狀標題化合物。 LCMS: [M+1]+ = 5501 H NMR (400 MHz, MeOD)δ 7.18 (dd,J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 6.98 (d,J =8.4 Hz, 1H), 6.91 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 4.45-4.35 (m, 1H), 4.17-4.11 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.01-2.80 (m, 5H), 2.32 (s, 3H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.92-1.83 (m, 1H), 1.58-1.44 (m, 2H), 1.32-1.05 (m, 7H) , 0.83 (t,J = 6.8 Hz, 3H)。合成實例 3 ：TLR7 激動劑與胺基酸側鏈之結合
此實例展現使用NHS酯化學之TLR7激動劑化合物1 (合成實例1)與離胺酸之側鏈胺基之結合。
Figure 02_image199
於r.t.下向化合物1 (1.0 eq)於DMF (0.36M)及1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(2 eq)中之溶液中添加DCC (2.0 eq)。將反應物於r.t.下在氮氣下攪拌16 h。過濾出固體。將濾液用EA稀釋，且將有機層用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。藉由管柱層析(DCM:MeOH=10:1)純化粗產物，以產生NHS酯。於r.t.下使NHS酯與乙醯基-L -離胺酸(15 eq)在2:1 H2 O/THF中反應。反應快速進行且在5分鐘內完成。藉由prep-HPLC (移動相：NH3 /CH3 CN/H2 O)純化混合物，以產生白色固體狀標題化合物。 LCMS: [M+1]+ =6491 H NMR (400 MHz, CD3 OD)δ 7.18 (dd,J = 8.4 Hz 2.0 Hz, 1H), 6.97 (d,J =8.4 Hz, 1H), 6.74 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 4.46-4.40 (m, 1H), 4.23 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.20-2.80 (m, 7H), 2.29 (s, 3H), 2.15-201 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.95-1.69 (m, 3H), 1.62-1.05 (m, 10H), 0.83 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。合成實例 4 ：肽結合
此實例闡述基於小鼠抗原決定基及合成實例1中所述之TLR7激動劑(化合物1)之肽結合物的製備。 1.     肽序列
以下係肽結合物中所用之12個Balb/c H-2d 抗原決定基之列表。自IEDB (http://www.iedb.org )預測抗原決定基
Figure 108119117-A0304-0002
 1)     小鼠MHC複合物稱作H-2 2)     存在3種MHC I類基因座：H-2D、H-2K及H-2L 3)     存在2種MHC II類基因座：H-2IA及H-2IE 4)     由於基因係多形體，故等位基因用上標字母命名(例如Balb/c中之H-2Dd ) 5)     近親交配之小鼠對於所有基因座具有相同等位基因命名(例如對於Balb/c之H-2d ) 6)     並非所有品系皆具有所有基因座(例如C57 Black/6僅具有H-2Db 、H-2Kb 及H-2IEb )。其對於其他等位基因係無效的 7)     最小抗原決定基以粗體 突顯(II類抗原決定基通常比I類抗原決定基長) 2.     肽結合
所有肽合成皆遵循標準固相肽方法。對於所示之具體序列，使用Fmoc化學且偶合劑係HBTU。化合物1之結合係恰好在樹脂解離之前在N末端上進行。舉例而言，結合步驟中所用之條件係： •  1至2當量之合成實例1之化合物1 •  等當量之HBTU •  溶劑係DMF •  反應於r.t.下實施過夜 •  樹脂解離後之純度＞80%
藉由使用C18管柱之prep-HPLC純化肽結合物。移動相由A中之增加之B之適宜梯度(A=H2 O中之0.05%TFA；B=CH3 CN中之0.05%TFA)組成。下文顯示肽及結合之肽之表徵：
Figure 108119117-A0304-0003
 a (*)表示TLR7激動劑化合物1 (合成實例1)之肽結合物b 分析型HPLC由C18管柱及移動相梯度0.05%TFA/H2 O中之0-80% 0.05%TFA/MeCN構成c 質譜數據係利用Applied Biosystem Voyager 1099 (正極性)收集生物實例 生物實例 1 ： HEK TLR7 分析
此實例展現，TLR7激動劑化合物1即使在與胺基酸結合後亦維持TLR7激動劑活性(合成實例2及3中所述之結合物)。
HEK-BlueTM TLR7細胞係購自Invivogen (San Diego, California)。以下說明係取自產品資訊單。
「HEK-Blue™ hTLR7細胞經設計用於藉由監測NF-kB之活化研究人類TLR7 (hTLR7)之刺激。藉由hTLR7基因及最佳化分泌之胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因共轉染至HEK293細胞中獲得HEK-Blue™ hTLR7細胞。將SEAP報導基因置於融合至五個NF-kB及AP-1-結合位點之IFN-b最小啟動子的控制下。用TLR7配體刺激可活化NF-kB及AP-1，此誘導產生SEAP，其係藉由HEK-Blue™檢測細胞培養基檢測」。
典型分析方案涉及以下步驟： 1. 根據產品資訊單培養細胞。 2. 首先將10 mM DMSO中之化合物儲液稀釋至3 mM且然後使用DMSO連續3倍稀釋以得到10-pt稀釋液。 3. 將3 μl稀釋之DMSO添加至57 μl HEK-Blue™檢測培養基用於進一步20倍稀釋。 4. 將分析培養基中之10 μl稀釋之化合物添加至384孔板中之40 μl細胞培養物(於HEK-Blue™檢測培養基中)中。最終細胞濃度= 8,000個細胞/孔。 5. 將板於37℃在5% CO2中培育16 h。使用分光光度計於620-655 nm下測定SEAP。
下表概述HEK-TLR7活性之結果。
Figure 108119117-A0304-0004
HEK-TLR7數據展現，即使在α位置或側鏈(例如離胺酸)處與胺基酸共價結合後，亦維持化合物1之TLR7激動劑活性。生物實例 2 ：免疫原性研究
此預示實例闡述比較小鼠中之肽結合物(*AP)與肽及已知佐劑之混合物(AP-p)及與單獨肽(AP)的實驗。
Figure 02_image201
比較在Balb/c小鼠免疫後肽-TLR7結合物(*AP)與單獨未結合之肽(AP)或與聚I:C混合之未結合之肽(AP-p)的T細胞刺激能力。將12個不同抗原決定基(AP1-AP12)組合在兩種疫苗調配物(各種中6種肽)中且用於以指示劑量(在第0天及第14天時i.m.兩次)免疫6-8週齡之雌性Balb/c小鼠。用單獨疫苗緩衝劑免疫對照動物。在研究之第21天，處死動物且收穫脾並均質化以獲得脾細胞之單一細胞懸浮液。用單獨培養基、每一個別未結合之肽或所有12種未結合之肽之池離體重新刺激脾細胞。培養後，將細胞用針對CD3、CD4及CD8之螢光標記之抗體染色以鑑別T細胞亞組。接下來，使用對IFN-g及TNF-a具有特異性之螢光標記之抗體以藉由流式細胞術測定T細胞個別地對每一肽及總池反應的頻率。
下文概述小鼠之疫苗劑量：
Figure 108119117-A0304-0005
 生物實例 3 ：化合物 1- 肽結合物之 HEK TLR7 活性
此實例展現，結合至化合物1 TLR7激動劑之肽(20-30個胺基酸長)展現TLR7細胞活性。在不存在化合物1下，「裸」相應肽不顯示可量測之TLR7活性。
Figure 108119117-A0304-0006
 等效內容
儘管已結合上述具體實施例闡述本發明，但熟習此項技術者將明瞭其許多替代形式、修改形式及其他變化形式。所有該等替代形式、修改形式及變化形式皆意欲在本發明之精神及範圍內。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 108119117-A0101-11-0002-1

Claims (27)

  1. 一種具有式I之結構之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 03_image001
    (I) 其中 肽係肽，其中(C=O)連接至(i) 該肽之N端，或(ii) 該肽之側鏈，其中C=O所連接之該側鏈之官能基係NH2 ； R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
    Figure 03_image204
    及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OH及-C(CH3 )2 OH； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
    Figure 03_image206
    、-O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image208
    L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
    Figure 03_image210
    、
    Figure 03_image212
    、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image214
    L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
    Figure 03_image216
    、
    Figure 03_image218
    、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；及 o為0至4之整數。
  2. 如請求項1之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1a)或(2a)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 03_image220
    Figure 03_image222
    其中 各AA獨立地係胺基酸，其中(AA)q 係肽，其中(C=O)連接至該肽之N端； q為8至40之整數； D係H，或胺基酸，或包含2至40個胺基酸之肽；及 E係OH，或胺基酸，或包含2至40個胺基酸之肽。
  3. 如請求項2之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其具有式(1b)或(2b)之結構，或其醫藥上可接受之鹽，
    Figure 03_image224
    。
  4. 如請求項1至3中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1a 係C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OH、-NH2 、-NHAc、-COOH、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
    Figure 03_image226
    及A1 ； X係C1 -C4 烷基；及 Y係-CH2 -。
  5. 如請求項1至4中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係C1 -C4 烷基，且烷基經-SO2 CH3 取代。
  6. 如請求項1至5中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1a 係
    Figure 03_image228
    。
  7. 如請求項1至6中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中X係甲基。
  8. 如請求項1至7中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中p為3。
  9. 如請求項1至8中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中o為1。
  10. 如請求項1至9中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Y係-CH2 -。
  11. 如請求項1至10中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係抗原。
  12. 如請求項11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係細菌或病毒抗原。
  13. 如請求項11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係抗原決定基。
  14. 如請求項11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係共同腫瘤抗原。
  15. 如請求項11之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該抗原係個人化新抗原。
  16. 如請求項1至10中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係疫苗。
  17. 如請求項1至16中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其中該肽係藉由固相合成製備。
  18. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至17中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽。
  19. 一種治療有需要個體之腫瘤之方法，其包含向有需要之該個體投與如請求項1至17中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、或如請求項18之醫藥組合物。
  20. 一種為有需要之個體接種對抗腫瘤之疫苗的方法，其包含向有需要之該個體投與如請求項1至17中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽、或如請求項18之醫藥組合物。
  21. 如請求項19或20之方法，其中該腫瘤係實體腫瘤。
  22. 一種製備如請求項1至17中任一項之結合物或其醫藥上可接受之鹽的方法，其包含使肽與式(3a)化合物結合之步驟：
    Figure 03_image230
    其中 R1a 係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：-OZ、-NHZ、-NHAc、-COOZ、-SO2 CH3 、-SCH3 、-OCH3 、
    Figure 03_image232
    及A1 ； X係H或C1 -C4 烷基，其中該烷基視情況經1至3個選自由以下組成之群之取代基取代：A2 、-OZ及-C(CH3 )2 OZ； Y係選自由以下組成之群：鍵、-CH2 -、-CF2 -、
    Figure 03_image234
    -O-、-S-、-SO2 -、-NH-及-CH2 CH2 -； A1 係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image236
    L1 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
    Figure 03_image238
    、
    Figure 03_image240
    、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； A2 係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image242
    L2 係選自由以下組成之群：鍵、-(CH2 )n -、-C(O)NH(CH2 )n -、
    Figure 03_image244
    、
    Figure 03_image246
    、-[O(CH2 CH2 )]n -、-[O(C1 -C4 伸烷基)]-、-[O(CH2 CH2 )]n -OCH2 CH2 CF2 -、-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -及-C(O)NHCH2 CH2 -[O(CH2 CH2 )]m -OCH2 CH2 CF2 -； 各Z獨立地係H或保護基團； m為0至4之整數； n及p獨立地為1至4之整數；及 o為0至4之整數。
  23. 如請求項22之方法，其中該肽結合至固相。
  24. 如請求項23之方法，其進一步包含自該固相解離該結合物之步驟。
  25. 如請求項1至17中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法。
  26. 如請求項18之醫藥組合物，其用於療法。
  27. 一種如請求項1至17中任一項之肽結合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製造藥劑。
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