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TW201735936A - 經熱處理之乳桿菌的用途，及用以抑制口腔病原菌黏附的組合物 - Google Patents

經熱處理之乳桿菌的用途，及用以抑制口腔病原菌黏附的組合物 Download PDF

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TW201735936A TW105110614A TW105110614A TW201735936A TW 201735936 A TW201735936 A TW 201735936A TW 105110614 A TW105110614 A TW 105110614A TW 105110614 A TW105110614 A TW 105110614A TW 201735936 A TW201735936 A TW 201735936A
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Abstract

一種經熱處理之乳桿菌的用途，係用以製備抑制口腔病原菌黏附之藥物，該乳桿菌係為一副乾酪乳桿菌GMNL-143、一瑞士乳桿菌GMNL-164或一鼠李糖乳桿菌GMNL-464，本發明另關於一種用以抑制口腔病原菌黏附的組合物。

Description

經熱處理之乳桿菌的用途，及用以抑制口腔病原菌黏附的組合物
本發明係關於一種乳桿菌菌株的用途，特別關於一種乳桿菌菌株用以製備抑制口腔病原菌黏附之藥物的用途，本發明另關於用以抑制口腔病原菌黏附的組合物。
口腔中存在大量且複雜的微生物叢(microbiol flora)，其多以生物膜之形式黏附於口腔之硬組織或軟組織上，該微生物叢可能與個體成長、牙齒生長等口腔環境之變化而發生改變，亦可能會受到個體或家庭之飲食生活習慣而有所不同。
口中菌相(oral flora)在口腔疾病中扮演重要的角色：舉例而言，變異鏈球菌(Streptococcus mutans)可以代謝多種糖類以產生酸性物質，因而酸蝕牙齒表面的牙釉質(enamel)而造成齲齒(dental caries)；牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)、中間普氏菌(Prevotella intermedia)等厭氧菌於牙齦周圍所形成之生物膜則可能會導致牙齦發炎，並造成牙周病(periodontal disease)之衍生；而口臭則是由於牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、以及具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)等細菌於代謝過程中產生之揮發性硫化物的惡臭所造成，因此若是能夠藉由益生菌調整口中菌相分佈，當可以有效降低口腔疾病發生的可能性。
本發明係提供一種經熱處理之乳桿菌的用途，係用以製備抑制口腔病原菌黏附之藥物者。
本發明另提供一種用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，係藉由經熱處理之乳桿菌抑制口腔病原菌的黏附者。
本發明之經熱處理之乳桿菌的用途，係用以製備抑制口腔病原菌黏附之藥物，該乳桿菌係為一副乾酪乳桿菌GMNL-143、一瑞士乳桿菌GMNL-164或一鼠李糖乳桿菌GMNL-464，該副乾酪乳桿菌GMNL-143係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910626，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2014301，該瑞士乳桿菌GMNL-164係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910695，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015609，該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910696，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015610，且該乳桿菌係經90~121℃熱處理15~30分鐘，該經熱處理之乳桿菌係可以防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
本發明之經熱處理之乳桿菌的用途，該乳桿菌係以每次3×108~1×1010顆細胞之劑量經口投予一所需個體，藉由該劑量有效防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
本發明之用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，係包含：經熱處理之一乳桿菌，該乳桿菌係選自由一副乾酪乳桿菌GMNL-143、一瑞士乳桿菌GMNL-164及一鼠李糖乳桿菌GMNL-464所組成之群組，該副乾酪乳桿菌GMNL-143係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910626，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2014301，該瑞士乳桿菌GMNL-164係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910695，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015609，該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910696，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015610，且該乳桿菌係經90~121℃熱處理15~30分鐘；及一醫藥學上可接受之賦型劑，以藉由該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164、該鼠李糖乳桿菌GMNL-464有效防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
本發明之用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，其中，該組合物係包含該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164及該鼠李糖乳桿菌GMNL-464，且該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164及該鼠李糖乳桿菌GMNL-464之菌量比為1：1：1，藉由該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164、該鼠李糖乳桿菌GMNL-464之協同作用，有效防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
本發明之經熱處理之乳桿菌的用途，該經熱處理之乳桿菌係可以防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
本發明之用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，係藉由該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164、該鼠李糖乳桿菌GMNL-464有效防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
第1a圖：係試驗(A)第A0組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第1b圖：係試驗(A)第A1組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第1c圖：係試驗(A)第A2組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第2a圖：係試驗(B)第B0組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第2b圖：係試驗(B)第B1組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第2c圖：係試驗(B)第B2組之抑制變異鏈球菌黏附能力的結果。
第3圖：係試驗(C)各組之抑制牙齦卟啉單胞菌黏附能力的結果。
第4圖：係試驗(D)各組之抑制中間普氏菌黏附能力的結果。
第5圖：係試驗(E)各組之抑制具核梭桿菌黏附能力的結果。
第6a圖：係試驗(F)以第F0組漱口水漱口前後口腔中變異鏈球菌含量變化。
第6b圖：係試驗(F)以第F0組漱口水漱口前後口腔中牙齦卟啉單胞菌含量變化。
第6c圖：係試驗(F)以第F0組漱口水漱口前後口腔中具核梭桿菌含量變化。
第6d圖：係試驗(F)以第F0組漱口水漱口前後口腔中總菌量變化。
第7a圖：係試驗(F)以第F1組漱口水漱口前後口腔中變異鏈球菌含量變化。
第7b圖：係試驗(F)以第F1組漱口水漱口前後口腔中牙齦卟啉單胞菌含量變化。
第7c圖：係試驗(F)以第F1組漱口水漱口前後口腔中具核梭桿菌含量變化。
第7d圖：係試驗(F)以第F1組漱口水漱口前後口腔中總菌量變化。
第8a圖：係試驗(F)以第F2組漱口水漱口前後口腔中變異鏈球菌含量變化。
第8b圖：係試驗(F)以第F2組漱口水漱口前後口腔中牙齦卟啉單胞菌含量變化。
第8c圖：係試驗(F)以第F2組漱口水漱口前後口腔中具核梭桿菌含量變化。
第8d圖：係試驗(F)以第F2組漱口水漱口前後口腔中總菌量變化。
第9a圖：係試驗(F)以第F3組漱口水漱口前後口腔中變異鏈球菌含量變化。
第9b圖：係試驗(F)以第F3組漱口水漱口前後口腔中牙齦卟啉單胞菌含量變化。
第9c圖：係試驗(F)以第F3組漱口水漱口前後口腔中具核梭桿菌含量變化。
第9d圖：係試驗(F)以第F3組漱口水漱口前後口腔中總菌量變化。
為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：本發明所述之乳桿菌係選自由一副乾酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)GMNL-143、一瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)GMNL-164及一鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)GMNL-464所組成之群組。
詳而言之，該副乾酪乳桿菌GMNL-143係分離自人類腸道，其於37℃之溫度下培養48小時後之菌落的形態為圓形、緊縮、完整邊緣、1.0mm×1.0mm、乳白色、平滑表面、中間突起、革蘭氏染色之結果為革蘭氏陽性菌、形態為桿菌、不形成孢子、不具移動性，生理特性如下：存活溫度為25~45℃、存活pH值為pH 4.0~10.0，屬於兼性厭氧(facultative anaerobic)之乳桿菌。
另進行16S rDNA之分子鑑定，其16S rDNA部分序列係如SEQ ID NO：1所示，經與NCBI資料庫進行比對，確認為副乾酪乳桿菌；且其糖可利用性結果如第1表所示。
又，該瑞士乳桿菌GMNL-164係分離自人類腸道，其於37℃之溫度下培養48小時後之菌落的形態為圓形、波浪邊緣、1.2mm×1.2mm、灰白色、緩和表面、平坦突起、革蘭氏染色之結果為革蘭氏陽性菌、形態為桿菌、不形成孢子、不具移動性，生理特性如下：存活溫度為25~45℃、存活pH值為pH 4.0~10.0，屬於兼性厭氧之乳桿菌。
另進行16S rDNA之分子鑑定，其16S rDNA部分序列係如SEQ ID NO：2所示，經與NCBI資料庫進行比對，確認為瑞士乳桿菌；且其糖可利用性結果如第2表所示。
該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係分離自人類腸道，其於37℃之溫度下培養48小時後之菌落的形態為圓形、反光、完整邊緣、1.5mm×1.5mm、乳白色、平滑表面、中間突起、革蘭氏染色之結果為革蘭氏陽性菌、形態為桿菌、不形成孢子、不具移動性，生理特性如下：存活溫度為25~45℃、存活pH值為pH 4.0~10.0，屬於兼性厭氧之乳桿菌。
另進行16S rDNA之分子鑑定，其16S rDNA部分序列係如SEQ ID NO：3所示，經與NCBI資料庫進行比對，確認為鼠李糖乳桿菌； 且其糖可利用性結果如第3表所示。
該副乾酪乳桿菌GMNL-143係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910626，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2014301，該瑞士乳桿菌GMNL-164係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910695，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015609，該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910696，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015610。
此外，該乳桿菌係可以先經過熱處理程序，使其失去生理活性後，續應用於抑制口腔病原菌之黏附；舉例而言，於本實施例中，該熱處理程序係於90~121℃之溫度下進行15~30分鐘。
又，該乳桿菌係可以分別混合一醫藥學上可接受之賦型劑，以共同形成可以應用於抑制口腔病原菌黏附的組合物，或者以1：1：1之比例(菌量比)優先混合該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164及該鼠李糖乳桿菌GMNL-464，以形成一複合乳桿菌，續使該複合乳桿菌與該醫藥學上可接受之賦型劑共同形成該應用於抑制口腔病原菌黏附的組合物。值得注意的是，該乳桿菌亦可以添加於漱口水、牙膏、口含錠、口香糖、牙粉等基質中，以提升該漱口水、該牙膏、該口含錠、該口香糖、該牙粉之抑制口腔病原菌黏附的能力；詳而言之，添加於該漱口水之中時，該乳桿菌之每次用量為1×109顆細胞，每次使用時間為30秒；添加於該牙膏之中時，該乳桿菌之每次用量為7×108~1×109顆細胞，每次 使用時間為1分鐘；添加於該口含錠之中時，該乳桿菌之每次用量為3×108顆細胞，每次使用時間為10~20分鐘；添加於該口香糖之中時，該乳桿菌之每次用量為2×109顆細胞，每次使用時間為10~30分鐘；添加於該牙粉之中時，該乳桿菌之每次用量為1×1010顆細胞，每次使用時間為1分鐘；惟上述用量及使用時間應為本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以依據需求自行調整者，於此不加以限制。
為證實本發明之乳桿菌確實可以抑制口腔病原菌之黏附，遂使該乳桿菌經90~121℃熱處理15~30分鐘後，冷卻至室溫後進行以下試驗：
(A)副乾酪乳桿菌GMNL-143抑制變異鏈球菌(ATCC 25175)之黏附
請參照第4表所示，本試驗係以變異鏈球菌(ATCC 25175)進行測試，係混合0.5mL之副乾酪乳桿菌GMNL-143及0.5mL之變異鏈球菌(ATCC 25175)，於靜置5分鐘後，取500μL之上層溶液，添加至已置入無菌載玻片之24孔盤中，於37℃之溫度下培養2小時，續移除該上層溶液，以磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)清洗後，加入0.5mL甲醇作用，最後以吉姆薩染液染色(Giemsa stain)，觀察黏附於載玻片上之變異鏈球菌的數量。
請參照第1a圖所示，僅以PBS處理之狀況下，變異鏈球菌(ATCC 25175)係可以黏附於載玻片上，另請參照第1b、1c圖所示，副 乾酪乳桿菌GMNL-33、GMNL-143之處理可以減少黏附於載玻片上之變異鏈球菌(ATCC 25175)的數量，其中又以本發明之副乾酪乳桿菌GMNL-143效果為佳。
(B)副乾酪乳桿菌GMNL-143抑制變異鏈球菌(BCRC 16002)之黏附
續請參照第5表所示，另以變異鏈球菌(BCRC 16002)進行相同測試，其結果大致相同，副乾酪乳桿菌GMNL-33、GMNL-143之處理均可以減少黏附於載玻片上之變異鏈球菌(BCRC 16002)的數量，惟又以本發明之副乾酪乳桿菌GMNL-143效果為佳(第2a~2c圖)。
(C)瑞士乳桿菌GMNL-164抑制牙齦卟啉單胞菌(ATCC 33277)之黏附
本試驗係以人類正常口腔齒齦細胞株(Smulow-Clickman gingival cells，簡稱SG細胞)進行測試，請參照第6表所示，係混合等量之瑞士乳桿菌GMNL-164及牙齦卟啉單胞菌(ATCC 33277)，取100μL之上層溶液，添加至貼附有SG細胞(3×105顆細胞/孔)之24孔盤中，於37℃之溫度下培養2小時，續移除該上層溶液，收集各孔中之SG細胞，並抽取黏附於SG細胞上之細菌DNA，最終以具有如SEQ ID NOS：4及5之引子對進行即時聚合酶鏈式反應，計算各組之2-△CT，結果如第3圖所示。
請參照第3圖所示，副乾酪乳桿菌GMNL-33及瑞士乳桿菌GMNL-164均具有抑制牙齦卟啉單胞菌黏附於SG細胞之能力，其中尤以本發明之瑞士乳桿菌GMNL-164為佳。
(D)瑞士乳桿菌GMNL-164抑制中間普氏菌(ATCC 25611)之黏附
本試驗同以前述SG細胞進行測試，請參照第7表所示，係混合等量之瑞士乳桿菌GMNL-164及中間普氏菌(ATCC 25611)，取100μL之上層溶液，添加至貼附有SG細胞(3×105顆細胞/孔)之24孔盤中，於37℃之溫度下培養2小時，續移除該上層溶液，收集各孔中之SG細胞，並抽取黏附於SG細胞上之細菌DNA，最終以具有如SEQ ID NOS：6及7之引子對進行即時聚合酶鏈式反應，計算各組之2-△CT，結果如第4圖所示。
請參照第4圖所示，副乾酪乳桿菌GMNL-33及瑞士乳桿菌GMNL-164均具有抑制中間普氏菌黏附於SG細胞之能力，其中尤以本發明之瑞士乳桿菌GMNL-164為佳。
(E)鼠李糖乳桿菌GMNL-464抑制具核梭桿菌(ATCC 25586)之黏附
本試驗仍以前述SG細胞進行測試，請參照第8表所示，係混合等量之鼠李糖乳桿菌GMNL-464及具核梭桿菌(ATCC 25586)，取100μL之上層溶液，添加至貼附有SG細胞(3×105顆細胞/孔)之24孔盤中，於37℃之溫度下培養2小時，續移除該上層溶液，收集各孔中之SG細胞，並抽取黏附於SG細胞上之細菌DNA，最終以具有如SEQ ID NOS：8及9之引子對進行即時聚合酶鏈式反應，計算各組之2-△CT，結果如第5圖所示。
請參照第5圖所示，副乾酪乳桿菌GMNL-33及鼠李糖乳桿菌GMNL-464均具有抑制具核梭桿菌黏附於SG細胞之能力，其中尤以本發明之鼠李糖乳桿菌GMNL-464為佳。
(F)副乾酪乳桿菌GMNL-143、瑞士乳桿菌GMNL-164、鼠李糖乳桿菌GMNL-464之協同作用
本試驗係混合等菌量之副乾酪乳桿菌GMNL-143、瑞士乳桿菌GMNL-164、鼠李糖乳桿菌GMNL-464，以形成該複合乳桿菌，並以無菌水配製為含有低劑量之複合乳桿菌的漱口水(含濃度為5×107cells/mL之複合乳桿菌，第F1組)、中劑量之複合乳桿菌的漱口水(含濃度為5×108cells/mL之複合乳桿菌，第F2組)、高劑量之複合乳桿菌的漱口水(含濃度為5×109cells/mL之複合乳桿菌，第F3組)、備用，另以未添加該複合乳桿菌之無菌水作為漱口水的對照組(第F0組)。
詳而言之，本試驗係於以前述第F0~F3組之漱口水漱口前(T0)、及漱口後1小時(T1)、漱口後2.5小時(T2)之時間點，分別以 無菌棉花棒採取口中菌相，將棉花棒置入0.5mL之無菌水中震盪3~5秒，於室溫下靜置1小時，續以13,000rpm離心10分鐘，取出棉花棒後再以13,000rpm離心10分鐘，移除上清液後，萃取細胞團塊(pellet)之DNA，最終進行即時聚合酶鏈式反應，以具有如SEQ ID NOS：10及11所示之序列之引子對定量變異鏈球菌的含量，以具有如SEQ ID NOS：4及5所示之序列的引子對定量牙齦卟啉單胞菌的含量，及以具有如SEQ ID NOS：8及9所示之序列的引子對定量具核梭桿菌的含量，同時以即時聚合酶鏈式反應定量口腔中之總菌量作為口中菌相消長之指標
第6a~6c圖分別為以第F0組之漱口水漱口前後之變異鏈球菌、牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌的相對菌量，第6d圖則為以第F0組之漱口水漱口前後之口腔中總菌量(以具有如SEQ ID NOS：12及13所示之序列之引子對定量口腔內總菌量)，第7a~7d、8a~8d、9a~9d則分別為以第F1、F2、F3組之漱口水漱口前後之試驗結果。其結果顯示，該複合乳桿菌之添加劑量與抑制變異鏈球菌、牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌之能力呈正相關，且第F3組之漱口水具有明顯的抑菌效果。
綜合上述，本發明之經熱處理之乳桿菌的用途，該經熱處理之乳桿菌係可以防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
再者，本發明之用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，係藉由該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164、該鼠李糖乳桿菌GMNL-464有效防止口腔病原菌黏附於口腔之中，以調整口中菌相分佈，進而達到維護口腔健康之功效。
雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之 保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
【生物材料寄存】 國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】
副乾酪乳桿菌GMNL-143：中華民國食品工業發展研究所、2014年04月22日、BCRC 910626
瑞士乳桿菌GMNL-164：中華民國食品工業發展研究所、2015年08月21日、BCRC 910695
鼠李糖乳桿菌GMNL-464：中華民國食品工業發展研究所、2015年08月21日、BCRC 910696
國外寄存資訊【請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】
副乾酪乳桿菌GMNL-143：中國、中國典型培養物保藏中心、2014年06月29日、CCTCC No.：M2014301
副乾酪乳桿菌GMNL-164：中國、中國典型培養物保藏中心、2016年03月06日、CCTCC No.：M2015609
副乾酪乳桿菌GMNL-464：中國、中國典型培養物保藏中心、2016年03月06日、CCTCC No.：M2015610
<110> 景岳生物科技股份有限公司
<120> 經熱處理之乳桿菌的用途，及用以抑制口腔病原菌黏附的組合物
<130> PK14240
<160> 13
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 525
<212> DNA
<213> Lactobacillus paracasei
<400> 1
<210> 2
<211> 520
<212> DNA
<213> Lactobacillus helveticus
<400> 2
<210> 3
<211> 528
<212> DNA
<213> Lactobacillus rhamnosus
<400> 3
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量牙齦卟啉單胞菌之引子對之一
<400> 4
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量牙齦卟啉單胞菌之引子對之二
<400> 5
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量中間普氏菌之引子對之一
<400> 6
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量中間普氏菌之引子對之二
<400> 7
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量具核梭桿菌之引子對之一
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<211> 23
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<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量具核梭桿菌之引子對之二
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量變異鏈球菌之引子對之一
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<223> 用以定量變異鏈球菌之引子對之二
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<220>
<223> 用以定量口腔內總菌量之引子對之一
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用以定量口腔內總菌量之引子對之二
<400> 13

Claims (4)

  1. 一種經熱處理之乳桿菌的用途，係用以製備抑制口腔病原菌黏附之藥物，該乳桿菌係為一副乾酪乳桿菌GMNL-143、一瑞士乳桿菌GMNL-164或一鼠李糖乳桿菌GMNL-464，該副乾酪乳桿菌GMNL-143係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910626，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2014301，該瑞士乳桿菌GMNL-164係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910695，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015609，該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910696，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015610，且該乳桿菌係經90~121℃熱處理15~30分鐘。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之經熱處理之乳桿菌的用途，其中，該乳桿菌係以每次3×108~1×1010顆細胞之劑量經口投予一所需個體。
  3. 一種用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，係包含：經熱處理之一乳桿菌，該乳桿菌係選自由一副乾酪乳桿菌GMNL-143、一瑞士乳桿菌GMNL-164及一鼠李糖乳桿菌GMNL-464所組成之群組，該副乾酪乳桿菌GMNL-143係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910626，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2014301，該瑞士乳桿菌GMNL-164係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910695，及寄存於中國典型培養物保藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015609，該鼠李糖乳桿菌GMNL-464係寄存於中華民國食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC 910696，及寄存於中國典型培養物保 藏中心，其寄存編號為CCTCC No.：M2015610，且該乳桿菌係經90~121℃熱處理15~30分鐘；及一醫藥學上可接受之賦型劑。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之用以抑制口腔病原菌黏附的組合物，其中，該組合物係包含該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164及該鼠李糖乳桿菌GMNL-464，且該副乾酪乳桿菌GMNL-143、該瑞士乳桿菌GMNL-164及該鼠李糖乳桿菌GMNL-464之菌量比為1：1：1。
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GB1610052.1A GB2548930B (en) 2016-04-01 2016-06-09 Heat-inactivated Lactobacillus rhamnosis GMNL-464 for use in the prevention of halitosis
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109172613B (zh) 2018-08-14 2022-04-22 景岳生物科技(中国)有限公司 含乳杆菌死菌培养物的皮肤外用组合物及其于促进伤口愈合及降低疤痕产生的用途
CN110772474A (zh) * 2019-12-10 2020-02-11 广州瑞誉化工科技有限公司 一种益生菌口腔喷雾
CN115671143A (zh) * 2021-07-26 2023-02-03 锦乔生物科技有限公司 使用乳酸菌菌株的培养物来抑制口腔病原菌生长和预防和/或治疗与口腔病原菌有关的疾病
CN114586850B (zh) * 2022-03-16 2023-09-12 黑龙江飞鹤乳业有限公司 一种含干酪的含乳固态成型制品及其制备方法
CN114606164B (zh) * 2022-04-08 2024-03-15 云南白药集团股份有限公司 一株副干酪乳杆菌Probio-01及其制备益生菌口腔制剂的用途
CN118146972B (zh) * 2023-07-10 2024-08-23 广东益可维生物技术有限公司 一种改善口腔健康的瑞士乳杆菌及益生菌组合物

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040101495A1 (en) * 2002-11-27 2004-05-27 Leena Nase Method for improving dental health
TW200808191A (en) 2006-08-09 2008-02-16 Genmont Biotech Inc Product containing Lactobacillus paracasei
US20120128645A1 (en) 2009-07-16 2012-05-24 Hiroshima University Prophylactic, ameliorating or therapeutic agent for oral diseases
WO2011057872A1 (de) 2009-11-10 2011-05-19 Basf Se Gesundheitsförderliche zubereitung und herstellverfahren
EP2449891A1 (en) 2010-11-05 2012-05-09 Nestec S.A. Drinking yoghurt preparations containing non-replicating probiotic micro-organisms
WO2012062868A1 (en) 2010-11-11 2012-05-18 Nestec S.A. Spoonable yogurt preparations containing non-replicating probiotic micro-organisms
JP2014508136A (ja) 2011-01-24 2014-04-03 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 口腔衛生を向上させる組成物
EP2710115B1 (de) * 2011-05-16 2017-12-27 Belano Medical AG Neue milchsäurebakterien und diese enthaltende zusammensetzungen gegen bakterielle erkältungen
KR102706649B1 (ko) 2013-07-05 2024-09-12 인테그라 메디컬 인코포레이티드 구강 조성물
CN104382949A (zh) * 2014-11-07 2015-03-04 南昌大学 一种益生菌口香糖的制备方法

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