TR201905159T4 - İntratümöral lokal enjeksiyonda ve taşıyıcı olarak hidrojel ile hidrojen peroksidin kontrollü salımı için kullanılacak radyasyon/kemoterapi sensitizörü. - Google Patents

Abstract

Aşağıda belirtilenlerin bir kombinasyonunu içeren bir sensitizör olup, hidrojen peroksit ve 4.5 ila 5.5'lik bir izoelektrik noktasına sahip bir asidik jelatinden hazırlanan, çapraz bağlı bir jelatin jel içeren bir hidrojel, bir tümör tedavisinde kullanılmaya yönelik olmaktadır ve burada sensitizör, bir tümör alanına lokal olarak uygulanmakta ve radyasyonun ya da bir anti-kanser ajanının tümörün üzerindeki terapötik etkisini artırmaktadır.

Description

TARIFNAME INTRATUMORAL LOKAL ENJEKSIYONDA VE TASIYICI OLARAK HIDROJEL iLE HIDROJEN PEROKSIDIN KONTROLLU SALIMI içiN KULLANILACAK RADYASYONIKEMOTERAPI SENSITIZORU Mevcut bulus, radyasyonun veya bir anti-kanser ajaninin bir tümör üzerindeki terapötik etkisini artirmaya yönelik bir sensitizör ile, özellikle de radyasyonun ya da bir anti-kanser ajaninin uygulanmasi üzerine bir tümör alanina enjekte edilen, sürekli salinan bir radyasyon sensitizörü veya bir anti-kanser kemoterapi sensitizörü ile ilgilidir.

Malign tümörlerin lokal olarak tedavi edilmesine yönelik bir metot olarak radyoterapi, cerrahi operasyonlara sekonder olmaktadir. Radyoterapi, yasli hastalara uygulanabildigi ve ayrica normal organlarin ve dokularin korunmasina imkan verdigi için, bu yöntem ile tedavi edilen hastalarin sayisi son zamanlarda hizla artmaktadir. Ancak, halihazirda radyoterapi için yaygin olarak kullanilan lineer-hizlandirici ile üretilen yüksek enerjili X-isinlari ve elektron isinlari, nispeten düsük bir biyolojik etki sergileyen düsük dogrusal enerji transferi (LET) tipi radyasyon olmaktadir. Buna göre lineer-hizlandirici tabanli radyoterapi; Örnegin malign melanoma, çesitli tiplerde sarkoma ve glioblastoma multiforme gibi tümörler üzerinde az etkiye sahiptir. Birkaç santimetre ya da üzerine büyüyen, lokal olarak ilerlemis kanserler pek çok hipoksik kanser hücresine sahip oldugundan veya büyük miktarlarda anti-oksidatif enzimler içerdiginden bu tip kanserler, sadece radyasyona karsi dirençli olmakla kalmayip, ayni zamanda siklikla anti- kanser amaçli kemoterapiye karsi da dirençli olmaktadir.

Mevcut bulus sahipleri, radyoterapi ya da anti-kanser kemoterapisi ile birlikte hidrojen peroksit kullanmanin, radyoterapiye veya anti-kanser kemoterapisine karsi dirençli olan bu tip tümörler için etkili oldugunu önceden dogrulamistir (bkz. örnegin patent harici literatür (NPL 1 ila NPL3)).

Dahasi mevcut bulus sahipleri, hidrojen peroksit ile birlikte hiyalüronik asit ya da bunun bir tuzunu kullanmanin, etkilenmis alan için yüksek ölçüde tahris edici oldugu ve tümörlerde ayrisma egilimi gösterdigi üzere, hidrojen peroksidin intratümöral olarak verilmesi için en etkili yöntemdir (bkz. örnegin patent literatürü (PLT) 1 ve NPL 4 ila NPL 7).

PTL 1: W02008/041514 PTL 2: JP2004-203829A PTL 3: JP2005-325075A NPL 1: Yasuhiro Ogawa ve ark., Mechanism of apoptotic resistance of human osteosarcoma cell line, HS-Os-1, against irradiation, International Journal of Molecular Medicine 12: 453-458, 2003 NPL 2: Yasuhiro Ogawa ve ark., Apoptotic-resistance of human osteosarcoma cell line HS-Os-1 to irradiation is converted to apoptotic-susceptibility by hydrogen peroxide: A potent role of hydrogen peroxide as a new radiosensitizer, International Journal of Molecular Medicine 12: 845-850, 2003 NPL 3: Yasuhiro Ogawa ve ark., Immunocytochemical characteristics of human osteosarcoma cell line HS-Os-1: Possible implication in apoptotic resistance against irradiation, International Journal of Molecular Medicine 14: 397-403, 2004 NPL 4: Yasuhiro Ogawa ve ark., Phase I study of a new radiosensitizer containing hydrogen peroxide and sodium hyaluronate for topical tumor injection: A new enzyme-targeting radiosensitization treatment, Kochi OxydoI-Radiation Therapy for Unresectable Carcinomas, Type II (KORTUC II), International Journal of Oncology 34: 609-618, 2009 NPL 5: Ryo Akama, Yasuhiro Ogawa ve ark., Experimental Study on Radiation Sensitizing Effect of Intratumorally Administering Hydrogen Peroxide to Mouse-transplanted Tumor, Usefulness of Adding Hyaluronic Acid, Clinical Radiation Cilt 54, No. 12, 2009 NPL 6: Shiho Tokuhiro, Yasuhiro Ogawa ve ark., Development of a novel enzyme-targeting radiosensitizer (KORTUC) containing hydrogen peroxide for intratumoral injection for patients with low Iinear energy transfer-radioresistant neoplasms, Oncology Letters 1: 1025-1028, 2010 NPL 7: Yasuhiro Ogawa ve ark., Safety and effectiveness of a new enzyme-targeting radiosensitization treatment (KORTUC II) for intratumoral injection for Iow-LET radioresistant tumors, International Journal of Oncology 39: 553-560, 201 Bu baglamda US 2010/0010417 A1 içerisinde, hidrojen peroksit ve hiyaluronik asidin bir kombinasyonunu içeren bir radyo-sensitizör veya anti-kanser kemoterapi sensitizörü tarif edilmektedir. Dahasi Tabata ve ark. (Tabata, Y. ve ark.; Tissue Engineering, 5(2); 1999; s. 127-138), bünyesinde bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF) barindiran bir hidrojel tasiyicinin biyo-yikimini tarif etmektedir. Diger taraftan WO 2009/116556 A1 içerisinde, bir baz sivisinda bir anti-kanser bilesen içeren jelatin parçaciklar ihtiva eden bir enjektabl farmasötik bilesim tarif edilmektedir.

Mevcut bulus sahipleri tarafindan önceden gelistirilmis olan, hidrojen peroksit ve hiyalüronik asit ya da bir tuzunu (buradan itibaren "KORTUC" olarak da anilacaktir) içeren radyasyon sensitizörü veya anti-kanser kemoterapi sensitizörü, radyoterapi ya da anti-kanser kemoterapisi esnasinda haftada iki kere olacak sekilde ultrasonografi kilavuzu esliginde hastadaki bir tümörün içerisine lokal olarak enjekte edilmelidir. Dolayisiyla sensitizör enjekte edildiginde tedavi edilecek olan hasta, örnegin agri gibi agir bir bedensel ve zihinsel yüke maruzdur ve sensitizörü enjekte eden doktorlar ve ayrica ultrasonografiden sorumlu olan doktorlar veya benzerleri de fiziksel olarak yük altinda bulunur ve zamana karsi sikisir.

KORTUC kullanildiginda dahi, tümörlerde oksijenin en yüksek kismi basinci ile radyasyona karsi en yüksek hassasiyetlestirici etki, sensitizör enjekte edildikten sonra 24 saat içerisinde elde edilir; dolayisiyla radyasyon ya da anti-kanser kemoterapisi uygulamasinin sensitizörün enjekte edilmesinden hemen sonra gerçeklestirilmesi gerekir.

Yukaridaki problemi çözmek üzere mevcut bulusun bir amaci, bir tümör üzerinde radyasyonun veya bir anti-kanser ajaninin terapötik etkisini artirmaya yönelik olan ve hidrojen peroksidin ayrismasini daha uzun bir süreligine engelleyebilen ve etkisini muhafaza edebilen bir sensitizör saglamaktir.

Mevcut bulus sahipleri, yukaridaki problemi çözmek üzere kapsamli arastirmalar gerçeklestirmislerdir. Bulus sahipleri, hidrojen peroksidin, çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojel ile birlikte kullanilmasi durumunda, vücuda verilen hidrojen peroksidin, antioksidanlarin fonksiyonu sebebiyle ayrismaya karsi anlamli sekilde inhibe edilebildigini ve hidrojen peroksit uygulama etkisini, KORTUC'dan daha uzun bir süreligine muhafaza edebilecegini bulmuslardir. Bulus sahipleri ayrica hidrojen peroksit uygulamasinin sikligi azaltilsa dahi, hidrojen peroksit ile birlikte çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojel kullanmanin, hidrojel içerisine gömülen hidrojen peroksidin uzun dönemli sürekli salimi sebebiyle, KORTUC kullanimina göre daha güçlü radyasyona karsi hassasiyetlestirici etki ve anti-kanser kemoterapisi hassasiyetlestirici etki saglayabildigini de bulmuslardir.

Mevcut bulus, asagidaki unsurlar ile ilgilidir: 1. Asagida belirtilenlerin bir kombinasyonunu içeren bir sensitizör olup (a) hidrojen peroksit ve (b) 4.5 ila 55'lik bir izoelektrik noktasina sahip bir asidik jelatinden hazirlanan, çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojel, bir tümör tedavisinde kullanilmaya yönelik olmaktadir ve burada sensitizör, bir tümör alanina lokal olarak uygulanmakta ve radyasyonun ya da bir anti-kanser ajaninin tümörün üzerindeki terapötik etkisini artirmaktadir. 2. 1. Maddede tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada bahsedilen tümör, radyasyon veya bir anti-kanser ajani kullanilan tedaviye karsi dirençli olmaktadir. 3. 1. Maddede veya 2. Maddede tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada sensitizörün birinci uygulamasi, radyasyonun bir birinci uygulamasinin ya da anti-kanser ajanin bir birinci uygulamasinin 3 gün öncesinden, radyasyon uygulamasinin veya anti- kanser ajani uygulanmasinin baslangicina kadar gerçeklestirilmektedir. 3. Maddede tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada sensitizörün bir ikinci uygulamasi, sensitizörün birinci uygulamasindan 5 ila 14 gün sonra gerçeklestirilmektedir. . 1 ila 4. Maddelerin herhangi birinde tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada çapraz bagli jelatin jel, %92 ila 99.7'Iik bir su içerigine sahip olmaktadir. 6. 1 ila 5. Maddelerin herhangi birinde tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada bahsedilen sensitizör, bir nihai formülasyon formunda, çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda ve beher 200 mm3 tümör hacmi esasinda 0.1 ila 10 mg miktarinda uygulanmaktadir. 7. 1 ila 6. Maddelerin herhangi birinde tanimlanan kullanima yönelik sensitizör olup, burada bahsedilen sensitizör, nihai formülasyon formunda, agirlikça %001 ile 3.5 miktarinda hidrojen peroksit içermektedir.

Mevcut bulusa göre, radyoterapinin ya da anti-kanser kemoterapisinin etkilerine karsi duyarlilik, radyasyon veya bir anti-kanser ajani sensitizörünün uygulanmasindan hemen sonra uygulanmadiginda dahi artirilabilmektedir. Dahasi mevcut bulus, beher doz radyasyon için tümör büyümesi inhibisyon etkilerini KORTUC ile karsilastirildiginda dahi daha uzun bir süre kadar uzatabilmekte ve KORTUC'dan daha güçlü tümör büyümesi inhibisyon etkileri saglayabilmektedir. Dahasi KORTUC'un etkilenmis bir alana etki saglamak üzere haftada iki kere enjekte edilmesi gerekirken bulus konusu sensitizör, en fazla haftada bir kere uygulanarak etkili olmakta ve böylece tedavi edilecek olan kisideki bedensel, zihinsel ve zamansal yükü azaltmaktadir.

Dahasi mevcut bulus, KORTUC ile karsilastirildiginda bile daha güçlü tümör büyümesi inhibisyon etkileri saglayabilmekte ve tümörün nüksetme riskini azaltabilmektedir.

Tarifname içerisinde tedavilere ya da tedavi yöntemlerine yapilan her atif, bir tedavi yönteminde kullanilmaya yönelik olarak, mevcut bulusun bilesimlerine veya formülasyonlarina isaret etmektedir.

Sekiller: Sekil 1, fareye radyasyon uygulandiginda her bir farenin sabitlendigi bir aleti ve bir bolusu gösterir.

Sekil 2, radyasyon uygulandiktan sonra her bir grubun sagkalim egrisini gösterir (0: kontrol grubu, i: KORTUC uygulanan grup, A: MedGeI uygulanan grup). Daha özel bir anlatimla, tümör hücreleri farelere implante edildikten sonra farelere PBS + hidrojen peroksit (kontrol), hiyalüronik asit + hidrojen peroksit (KORTUC), ya da MedGeI + hidrojen peroksit (MedGeI) uygulandi ve uygulamadan 72 saat sonra farelere radyasyon verildi.

Sekil 3, radyasyon uygulandiktan sonra her bir grubun tümör hacmi egrisini gösterir (0: kontrol grubu, i: KORTUC uygulanan grup, A: MedGel uygulanan grup). Daha özel bir anlatimla, tümör hücreleri farelere implante edildikten sonra farelere PBS + hidrojen peroksit (kontrol), hiyalüronik asit + hidrojen peroksit (KORTUC), ya da MedGeI + hidrojen peroksit (MedGeI) uygulandi ve uygulamadan 72 saat sonra farelere radyasyon verildi.

Sekil 4, Sekil 3 içerisinde gösterilen grafiklerde ölçümün baslangicindan itibaren 30. gündeki tümör hacmi karsilastirmasini gösterir (soldan saga olacak sekilde kontrol grubu, KORTUC uygulanan grup ve MedGeI uygulanan grup).

Sekil 5, 10 gün sonrasina kadarki sürede, oksidol içerisindeki MedGeI parçaciklarinin zamana bagimli degisimlerini gösterir.

Sekil 6, her bir sensitizörün bir tümöre verilmesinden 48 saat sonra gerçeklestirilen radyasyon uygulamasinin tümör hacmi üzerindeki etkilerini gösterir. Tümör hacmi, her bir sensitizöri'in uygulanmasindan sonraki 37. günde (radyasyon uygulamasindan sonraki 35. günde) ölçüldü.

Kontrol, sadece radyasyona tabi tutulan bir grubu ifade eder. KORTUC, KOURTUC uygulanan ve radyasyona maruz birakilan bir grubu ifade eder. PI5-100, Ornek 1 Formülasyonunda elde edilen sensitizörün 100 pl'sinin uygulandigi ve radyasyon isinlarina maruz birakilan bir grubu ifade eder. PI5-30, Ornek 1 Formülasyonunda elde edilen sensitizörun 30 ul'sinin uygulandigi ve radyasyon isinlarina maruz birakilan bir grubu ifade eder. Pl9-2, Ornek 2 Formülasyonunda elde edilen sensitizörün, Pl-9'un kuru agirligi esasinda 2 mg'lik bir miktarda uygulandigi ve radyasyona maruz birakilan bir grubu ifade eder. PI9-O.6, Ornek 2 Formülasyonunda elde edilen sensitizör'ün, PI-9'un kuru agirligi esasinda 0.6 mg'lik bir miktarda uygulandigi ve radyasyona maruz birakilan bir grubu ifade eder.

Sekil 7, her bir sensitizörün bir tümöre verilmesinden 72 saat sonra gerçeklestirilen radyasyon uygulamasinin tümör hacmi 'üzerindeki etkisini gösterir. Tümör hacmi, sensitizörün uygulanmasindan sonraki 37. günde (radyasyon uygulamasindan sonraki 34. günde) ölçüldü.

Kontrol, sadece radyasyona tabi tutulan bir grubu ifade eder. KORTUC, KORTUC uygulanan ve radyasyona maruz birakilan bir grubu ifade eder. PI5-30, Ornek 1 Formülasyonuna ait sensitizör'un 30 ul'sinin uygulandigi ve radyasyon isinlarina maruz birakilan bir grubu ifade eder. PI9-0.6, Ornek 2 Formülasyonuna ait sensitizörün, PI-9'un kuru agirligi esasinda 0.6 mg'lik bir miktarda uygulandigi ve radyasyona maruz birakilan bir grubu ifade eder. l. Radyasyon veya Anti-Kanser Ajaninin Tümör Uzerindeki Terapötik Etkisini Artirmaya Yönelik Sensitizör l-1. Sensitizörün Bilesimi Burada tarif edildigi üzere, radyasyonun ya da bir kanser karsiti ajanin bir tümör üzerindeki terapötik etkisini artirmaya yönelik sensitizörün (bu sartnamede bazen sadece "sensitizör" olarak da anilir) bir özelligi, (a) hidrojen peroksit ve (b) bir çapraz bagli jelatin jel içeren bir hidrojel ihtiva etmesidir.

Burada tarif edildigi üzere "radyasyonun veya bir anti-kanser ajaninin terapötik etkisini artirmaya yönelik sensitizör" ifadesi, radyoterapide radyasyon uygulamasindan (isin uygulamasi), ya da anti-kanser kemoterapisinde bir anti-kanser ajaninin uygulanmasindan (bir anti-kanser ajan uygulamasi) önce, es zamanli olarak ya da sonra bir tümör alanina lokal olarak uygulanabilen ve radyoterapinin veya anti-kanser kemoterapisinin tümör alani üzerindeki etkisini artiran bir farmasötik bilesimi ifade eder.

Burada tarif edildigi üzere "tümör" terimi, gerek benign, gerekse malign, ya da gerek epitelyal, gerekse epitelyal harici olsun, genel olarak tümörleri ifade eder. Malign tümörler tercih edilir.

Tümör, duyarlilik bakimindan radyasyon ve /veya bir anti-kanser ajani kullanilan terapi ile özel olarak sinirli olmamakla birlikte, radyasyon ya da bir anti-kanser ajani kullanilan terapiye dirençli olan tümörler tercih edilir.

Burada tarif edildigi üzere "tümör alani“, esasen tümör hücrelerinin mevcut oldugu bir tümör dokusunu ifade eder. Tümör dokusu, tümör hücrelerinin ve normal hücrelerin ve / veya normal dokunun birlikte bulundugu dokulari içerir. Tümör hücreleri ve normal hücreler ve / veya normal doku birlikte bulundugunda, tümör hücrelerinin normal hücrelere ve / veya normal dokuya göreli hacmi ya da sayisi özel bir tahdide tabi degildir.

Terapötik etkiler, örnegin tümör dokusunun küçülme yüzdesi, hasta sagkalim orani ve tedaviden sonra nüksetme orani gibi genel degerlendirme yöntemleri kullanilarak degerlendirilebilir.

Lineer hizlandirici tabanli radyoterapinin tümör hücreleri üzerindeki etkisi, örnegin hidroksil radikalleri gibi aktif oksijen türlerinin üretimine yaklasik olarak %70 oraninda baglidir. Çesitli kanser karsiti ajanlarin (karsinostatik ajanlar) mekanizmalari da bu ortak noktaya sahiptir.

Dolayisiyla radyoterapi etkilerine karsi duyarliligi artiran bir madde, ayni zamanda tümörler üzerindeki anti-kanser kemoterapisi etkilerine karsi duyarliligi da artirir.

Burada tarif edildigi üzere "hidrojen peroksit", aksi belirtilmedigi sürece hidrojen peroksit moleküllerini (H202; molekül agirligi 34) ifade eder. "8qu hidrojen peroksit çözeltisi", aksi belirtilmedigi sürece, Japon Farmakopesi ya da benzerlerine uygun olarak distile su içinde çözülmüs hidrojen peroksit anlamina gelir. Hidrojen peroksidin hidrojen peroksit çözeltisindeki konsantrasyonu, agirlikça %0.1 ile 30 ve tercih edildigi haliyle agirlikça %25 ila 30 olmaktadir.

Bu sartnamede kullanildigi haliyle "oksidol", Japon Farmakopesi ile uygun olarak oksidol anlamina gelir ve agirlikça %25 ila 3.5 oraninda hidrojen peroksit içeren bir sulu hidrojen peroksit çözeltisidir.

Bu sartnamede %a/ h ifadesi, aksi belirtilmedigi sürece agirlik/hacim konsantrasyon yüzdesini ifade eder.

Burada tarif edildigi üzere "çapraz bagli jelatin jel" için bir baslangiç materyali olan jelatin, örnegin inek, domuz ve balik gibi çesitli hayvan türlerine ait cilt, kemik, tendon, bag, yüzgeç ve kuyruk gibi çesitli vücut kisimlarindan, örnegin alkalin hidrolizi, asit hidrolizi ve / veya enzimatik ayristirma yoluyla elde edilebilen kolajenin denatüre edilmesi yoluyla elde edilebilir. Jelatin; tercih edildigi haliyle büyükbaslardan ya da domuzlardan türetilen bir jelatin ve özellikle tercih edildigi haliyle büyükbaslardan türetilen bir jelatin olmaktadir.

Jelatin, dogal olarak meydana gelen kolajen olabilir ya da asagidaki metoda göre genetik rekombinasyon teknolojisi ile üretilen kolajenin denatüre edilmesiyle elde edilebilen kolajen olabilir.

Jelatin elde etmeye yönelik yöntem, özel bir sinirlamaya tabi degildir. Jelatin, yukarida bahsedilen hayvanlarin kemiklerinden vs. izole edilebilir, ya da örnegin Nitta Gelatin Inc., Nippi Inc. ve Gunze Ltd. firmalarindan temin edilebilenler gibi piyasadan temin edilebilen ürünler kullanilabilir. Herhangi bir endotoksin içermeyen jelatin tercih edilir.

Mevcut bulusun kombinasyonunda bulunan jelatin, 4.5 ila 5.5'Iik ve tercih edildigi haliyle 4.8 ila 5.0'Iik bir izoelektrik noktasina sahip, alkali ile muamele edilmis bir jelatin (asidik jelatin) olmaktadir. 48 ila 5.0'Iik bir izoelektrik noktasina sahip asidik jelatin tercih edilir.

Asidik jelatin, kolajenin bilinen bir usule göre yaklasik 2 ila 3 ay kireç ya da benzerleri ile muamele edilmesiyle elde edilebilir. Alkali muamelesinden sonraki deamidasyon orani yaklasik %98 ila %100'dür.

Alkalin jelatin, kolajenin, mesela hidroklorik asit veya sülfürik asit gibi bir inorganik asit ile birkaç on saat ila birkaç gün muamele edilmesiyle elde edilebilir. Asit muamelesinden sonraki deamidasyon orani yaklasik %0 ila %2'dir.

Sadece bir çesit jelatin olmayip, ayrica örnegin çözünürlük, molekül agirligi ve izoelektrik nokta gibi farkli malzeme ve farkli özellikler gösteren jelatinler de uygun harmanlarda kullanilabilir.

Jelatinin 'Özellikleri, kullanilan malzemeye ve uygulama metoduna göre degisiklik göstermekle birlikte, burada tarif edilen çapraz bagli jelatin jel için, jelatin farmasötik olarak kabul edilemez bir bilesen içermedigi sürece bir baslangiç malzemesi olarak her özellige sahip jelatin kullanilabilmektedir.

Burada tarif edilen "çapraz bagli bir jelatin jel içeren hidrojel", bir ana bilesen olarak, bir kimyasal çapraz baglayici ajan ile, ya da isil islem, ultraviyole isinlari, ya da elektron isinlari ile jelatinin çapraz baglanmasiyla olusturulan bir jelatin jel içerir.

Bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojel, çapraz bagli bir jelatin jele ilave olarak boyalar, kolajen haricinde proteinler ve / veya tuzlar ve benzeri safsizliklari farmasötik olarak kabul edilebilir bir aralik dahilindeki miktarlarda içerebilir.

Bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojel, çapraz bagli jelatinli jeli, örnegin %95 ila 100 a / h, daha fazla tercih edildigi haliyle %98 ila 100 a / h ve en çok tercih edildigi haliyle %995 ila 100 a / h miktarinda ihtiva edebilir.

Burada tarif edilen bir çapraz bagli jelatin jelin hazirlanmasinda kullanilabilen jelatinin çapraz baglanmasina yönelik kimyasal çapraz baglayici ajan, canli bedenler için toksik olmadiklari sürece 'Özel bir tahdide tabi degildir. Örnegin glutaraldehid, suda çözünebilir karbodiimid bilesikleri, Örnek olarak 1-etiI-3-(3-dimetilaminopropil)karb0diimid hidroklorür ve 1-sikloheksil- 3-(2-m0rfolinoetil)karbodiimid-meto-p-tolüensülfonat, bisepoksi bilesikleri, formalin ve benzerleri tercih edilir. Glutaraldehid ve 1-etiI-S-(S-dimetilaminopropil)karb0diimid hidroklorür özellikle tercih edilir.

Bu çapraz baglama yaklasimlari birlikte kullanilabilir. Alternatif olarak bir çapraz bagli hidrojel; tuz köprüsü, elektrostatik etkilesim, hidrojen bagi, hidrofobik etkilesim ya da benzerleri kullanilarak fiziksel çapraz baglanma yoluyla hazirlanabilir. Bir kimyasal çapraz baglayici madde kullanmak, çapraz baglanmanin mukavemeti bakimindan tercih edilir.

Jelatin çapraz baglanma derecesi, çapraz bagli jelatin jelin canli bedendeki ayrisma hizina (gün sayisi) göre uygun olarak seçilebilir. Çapraz bagli jelatin jelin ayrisma hizi, örnegin asagidaki usul kullanilarak ölçülebilir. 60 pl PBS, kuru agirlik esasinda beher mg çapraz bagli jelatin jele damla dama eklenir ve 37°C sicaklikta 1 saat süresince ya da 4*C sicaklikta 12 saat ila 24 saat süresince beklemeye birakilir. PBS ile emprenye edilen çapraz bagli jelatin jelin toplam agirligi ölçüldükten sonra çapraz bagli jelatin jel, birkaç farenin sirtina subkütanöz olarak implante edilir. Farelerin bir kismi, implante edilen çapraz bagli jelatin jeIi çikarmak üzere her gün ya da her 2-3 günde bir kesilir ve çapraz bagli jelatin jelin yas agirligi ölçülür. Çikarilan çapraz bagli jelatin jel agirliginin, Implantasyondan önce blçüldügü üzere PBS ile emprenye edilen çapraz bagli jelatinin yas agirliginin yaklasik olarak yarisi haline geldigi zaman noktasi, çapraz bagli jelatin jelin yari 'ömrü olarak tanimlanir (birim: gün sayisi).

Burada tarif edilen çapraz bagli jelatin jel, 5 ila 25 gün, tercihen 8 ila 22 gün, daha fazla tercih edildigi haliyle 10 ila 20 gün ve daha da fazla tercih edildigi haliyle 14 ila 19 gün kadar bir yari ömre sahiptir. Çapraz bagli jelatinin çapraz baglanma derecesi, su içerigi olarak degerlendirilebilir. Su içerigi, örnegin Tabata, Y ve ark. tarafindan açiklanan metoda göre belirlenebilir (Tabata, Y ve ark., J. Controlled Release, 31: 189-199, 1994, Tabata, Y ve ark., Tissue Eng. 1999 (2): 127-138). Örnegin 1 mg'lik kuru çapraz bagli bir jelatin jel, 1 ila 3 ml PBS (pH 7.4) içerisine batirilir ve ara sira ajitasyon ile STC sicaklikta yaklasik 24 saat süresince inkübe edilir. PBS fazlasi uzaklastirildiktan sonra PBS emprenye edilen, sisen çapraz bagli jelatin jelin yas agirligi (çapraz bagli jelatin jelin sistikten sonraki islak agirligi) ölçülür.

Emilen suyun agirligi, kuru durumdaki çapraz bagli jelatin jelin agirliginin, sistikten sonraki çapraz bagli jelatin jel yas agirligindan çikarilmasi yoluyla hesaplanir. Daha özel bir anlatimla emilen suyun agirligi, asagidaki formül ile hesaplanir.

Emilen suyun agirligi = (sistikten sonra çapraz bagli jelatin jelin yas agirligi) - (kum durumdaki çapraz bagli jelatin jelin agirligi) Su içerigi, emilen suyun agirliginin, sistikten sonraki çapraz bagli jelatin jelin yas agirligina bölünmesi ve degerin 100 ile çarpilmasiyla hesaplanir. Daha özel bir anlatimla su içerigi, asagidaki formül ile hesaplanir.

Su içerigi (%) = (emilen suyun agirligi / sistikten sonra çapraz bagli jelatin jelin yas agirligi) x 100 Burada tarif edilen çapraz bagli jelatin jel, %92 ila 99.7, tercih edildigi haliyle %93 ile 98.5 ve daha fazla tercih edildigi haliyle %95 ila 98'lik bir su içerigine sahiptir. Çapraz bagli jelatin jelin su içerigi ne kadar düsük olur ise, çapraz bagli jelatinin biyolojik ayrisma hizi 0 kadar düsük olur. %98.8'Iik su içerigine sahip çapraz bagli jelatin jelin yari ömrü, yaklasik 6 ila 8 gündür. %97.6'Iik su içerigine sahip çapraz bagli jelatin jelin yari ömrü, yaklasik 10 ila 14 gündür. %96.9'Iuk su içerigine sahip çapraz bagli jelatin jelin yari ömrü, yaklasik 16 ila 20 gündür.

Yukarida bahsedilen su içerigine sahip bir çapraz bagli jelatin jel, örnegin jelatin ve çapraz baglayici ajanin çapraz bagli jelatin jelin üretildigi zamandaki konsantrasyonlari, asagidaki araliklara ayarlanarak elde edilebilir: agirlikça %1 ila 20'lik bir jelatin konsantrasyonu ve agirlikça %0.01 ila 1'Iik bir çapraz baglayici ajan konsantrasyonu. Dahasi, arzu edilen su içerigine sahip bir çapraz baglayici ajan, örnegin çapraz baglanma reaksiyonunun sartlari 0 ila 40°C'Iik bir sicakliga ve 1 ila 48 saatlik bir reaksiyon süresine uygun sekilde ayarlanarak elde edilebilir.

Bir çapraz baglayici ajan olarak örnegin glutaraldehid kullanildiginda, eger ki glutaraldehid agirlikça %3 ila 5'lik bir sulu jelatin çözeltisine agirlikça %08 ila 1.0'lik bir son konsantrasyonda eklenir ve 4°C sicaklikta yakla sik 12 saat bir çapraz baglayici ajan gerçeklestirilir ise, yaklasik olarak %94'Iük bir su içerigine sahip bir çapraz bagli jelatin jel elde edilebilir. Eger ki glutaraldehid agirlikça %3 ila 5'Iik bir sulu jelatin çözeltisine agirlikça %06 ila 0.7'Iik bir son konsantrasyonda eklenir ve yukaridaki ile ayni sartlar altinda bir çapraz baglanma reaksiyonu gerçeklestirilir ise, yaklasik olarak %97'Iik bir su içerigine sahip bir çapraz bagli jelatin jel elde edilebilir. Eger ki glutaraldehid agirlikça %3 ila 5'lik bir sulu jelatin çözeltisine agirlikça %01 ila 0.4'Iük bir son konsantrasyonda eklenir ve bir çapraz baglanma reaksiyonu gerçeklestirilir ise, yaklasik olarak %98'Iik bir su içerigine sahip bir çapraz bagli jelatin jel elde edilebilir.

Bir çapraz baglayici ajan olarak 1-etiI-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidroklorür (EDC) kullanildiginda, eger ki EDC agirlikça %1 ila 10'Iuk bir sulu jelatin çözeltisine agirlikça %0.01 ila 10`luk bir son konsantrasyonda eklenir ve reaksiyonun 4“C sicaklikta 24 saat ilerlemesine izin verilir ise, %92 ila 99.7'Iik bir su içerigine sahip bir çapraz bagli jelatin jel elde edilebilir.

Jelatin, çapraz bagli oldugunda suda çözünmez. "Suda çözünmez" terimi, su içeren bir çözelti ile emprenye edilebilir olma ve su içeren bir sulu çözeltide sisme, ancak çözülmeme özelligini ifade eder. Çapraz bagli jelatin jelin su içerisinde çözünürlügü, örnegin GO“C sicaklikta beher 100 9 su içerisine 1 9 kuru toz çapraz baglayici jelatin eklenmesiyle belirlenebilir ve bu sekilde 1 saat beklemeye birakildiktan sonra çözülen jelatin miktari 0.1 9 ya da üzerinde oldugunda jelatin jelin suda çözünür oldugu belirlenir ve 1 saat beklemeye birakildiktan sonra çözülen jelatin miktari 0.1 9 altinda oldugunda jelatin jelin suda çözünmez oldugu belirlenir.

Burada tarif edilen çapraz bagli jelatin jelin formu özel bir tahdide tabi degildir. Çapraz bagli jelatin jel, örnegin silindir, prizma, tabaka, disk, küre, parçacik, granül, toz, macun vs. formunda olabilir. Burada tarif edilen sensitizör, bir tümör alani içerisine implante edildiginde, çapraz bagli jelatin jelin bir silindir, prizma, tabaka, ya da disk formunda olmasi tercih edilir. Bir tabaka veya disk formundaki jel daha fazla tercih edilir. Burada tarif edilen sensitizör, bir tümör alanina direkt olarak enjekte edilen ya da bir tümör alanina intravasküler olarak enjekte edilen bir formülasyon formunda kullanildiginda, çapraz bagli jelatin jelin bir küre, parçacik, granül, toz veya macun formunda olmasi tercih edilir. Çapraz bagli jelatin jel, örnegin JP2005- 325075A içerisinde açiklanan yöntemlere göre olusturulabilir.

Daha özel bir anlatimla bir silindir, bir prizma, bir tabaka, ya da bir disk formundaki çapraz bagli jelatin jel, sulu bir jelatin çözeltisinin sulu bir çapraz baglayici ajan çözeltisi ile karistirilmasi yoluyla hazirlanabilir ve daha sonra karisim, istenen sekle sahip bir kalibin içerisine dökülür ve çapraz baglanma reaksiyonunun ilerlemesine imkan verilir. Olusturulan jelatin jel, oldugu gibi kullanilabilir, ya da bir çapraz baglayici ajanin bir sulu çözeltisi kurutmadan sonra ilave edilebilir. Çapraz baglanma reaksiyonunu baskilamak üzere reaksiyon ürünü, örnegin etanolamin ya da glisin gibi bir amino grubuna sahip, düsük molekül agirlikli bir madde ile temas ettirilir, ya da 2.5 veya daha az bir pH degerine sahip bir sulu çözelti eklenir. Elde edilen çapraz bagli jelatin jel; distile su, etanol, 2-pr0panol, aseton, ya da benzerleri ile yikanir ve bir formülasyon hazirlamak üzere kullanilir.

Bir macun formundaki çapraz bagli jelatin jel; bir silindir, prizma, tabaka, ya da disk formundaki bir çapraz bagli jelatin jel hazirlama metoduna benzer bir metot kullanilarak hazirlanabilir.

Bir küre, parçacik ya da granül formundaki çapraz bagli jelatin jel, örnegin asagidaki yöntem ile elde edilebilir. Bir sulu jelatin çözeltisi, bir karistirici motorun (örnegin Shinto Scientific Co., Ltd. tarafindan 'üretilen Three-One Motor, ya da EYELA mini D.C. Stirrer) ve teflondan mamul bir karistirici pervanenin, 'üç boyunlu yuvarlak bir balona takilmasi ve karistirici motor ve karistirici pervane takili balonun sabitlenmesi yoluyla olusturulan bir aletin içerisine konulur.

Ornegin zeytinyagi gibi bir yag eklendikten ve meydana gelen karisim, bir W/O emülsiyonu vermek 'üzere yaklasik olarak 200 ila 600 rpm hizinda karistirildiktan sonra sulu bir çapraz baglayici ajan çözeltisi eklenir. Alternatif olarak, zeytinyaginda önceden em'ülsifiye olan (örnegin Advantec TME-21 vorteks mikser veya PT10-35 homojenlestirici politron) bir sulu jelatin çözeltisi, ince partiküll'u bir W/O em'ulsiyonu vermek 'üzere zeytinyagina damla damla eklendikten sonra buraya sulu bir çapraz baglayici ajan çözeltisi eklenir. Bir çapraz baglayici reaksiyonun ilerlemesine izin verildikten sonra çapraz bagli jelatin jel, santrifüjleme yoluyla izole edilir, aseton, etil asetat vb. ile yikanir, ayrica IPA, etanol vs. ile yikanir ve kurutulur. Daha sonra 100 mM glisin, Tween 80 içeren bir sulu çözeltiye eklenir ve parçaciklar, çapraz baglanma reaksiyonunu baskilamak 'uzere çözeltide süspansiyon haline getirilir. Elde edilen çapraz bagli jelatin jel parçaciklari, sirasiyla IPA, Tween 80 içeren distile su, distile su vs. ile yikanir ve formülasyonu hazirlamak için kullanilir. Çapraz bagli jelatin jel parçaciklari pihtilastiginda, örnegin ultrasonikasyon (tercihen sogutma altinda yaklasik 1 dakika) ve benzerleri uygulanabilir.

Onceden emülsifiye etmek yoluyla, 20 pm ya da altinda ortalama parçacik boyutuna sahip ince parçaciklar formundaki çapraz bagli jelatin jel elde edilebilir.

Elde edilen çapraz bagli jelatin jel parçaciklarinin ortalama parçacik boyutu, 1 ila 1000 um arasinda bulunur. Gerekli boyuta sahip olan parçaciklar, objeye uygun sekilde elenir ve kullanilir. Lokal uygulama için, 10 ila 150 pm'lik ortalama parçacik boyutuna sahip parçaciklar tercih edilir. Burada kullanildigi haliyle ortalama parçacik boyutu, elekten geçtigi kabul edilen parçaciklarin ortalama çapini ifade eder. Elde edilen çapraz bagli jelatin jel parçaciklarinin su içerigi yaklasik %50 ila 99 a/a olur ve tercih edilen bir su içerigine sahip parçaciklar uygun sekilde hazirlanabilir.

Bu sekilde elde edilen çapraz bagli jelatin jel, vakumla kurutulabilir veya dondurularak kurutulabilir.

Dondurularak kurutma yapilmasi amaciyla, 'Örnegin çapraz bagli bir jelatin jel, distile su içerisine konulur, sivi azot içerisinde -80“C sicaklikta 30 dakika ya da daha fazla en az 1 saat süresince dondurulur ve daha sonra bir dondurucu kurutucuda 1 ila 3 gün süresince kurutulur.

Kuru çapraz bagli jelatin jel, MedGeI Corporation tarafindan üretilen MetJeI (tescilli ticari marka) gibi piyasadan temin edilebilir bir ürün olabilir.

Burada tarif edilen sensitizör, hidrojen peroksit (burada "bilesen (a)" olarak da anilir) ve bir çapraz bagli jelatin jel içeren bir hidrojel (burada "bilesen (b)" olarak da anilir) kombinasyonunu içeren bir bilesimdir.

Burada kullanildigi haliyle "bir kombinasyon içeren" ifadesi, burada tarif edilen sensitizör için asagida verilen durumlarin tamamini kapsamaktadir: (i) sensitizör, hem bilesen (a) hem de bilesen (b)'yi baslangiçtan itibaren içerir (bir kombinasyon ilaci), yani bilesen (b), bilesen (a) ile emprenye edilir, ya da (i)' bileseni (b), bilesen (a) ile emprenye edilir ve meydana gelen ürün, fizyolojik salin vs. içerisinde yüzdürülür veya süspansiyon haline getirilir; (ii) bilesen (a) içeren bir formülasyon ve bilesen (b) içeren bir formülasyon, ayri ayri ambalajlanir ve bir kombinasyon (bir kit) olarak satilir; ya da (iii) bilesen (a) içeren bir formülasyon ve bilesen (b) içeren bir formülasyon, ayri ayri ambalajlanir ve ayri piyasa dagitim kanallarinda bulunur ve kullanilirken birlestirilir. Yani, burada kullanildigi haliyle "bir kombinasyonunu Içeren sensitizör", nihayetinde kullanilacak olan sensitiz'orün (burada "son formülasyon" olarak da anilir), hem bilesen (a)'yi, hem de bilesen (b)'yi içerdigini ve satis da dahil olmak üzere dagitim asamasindaki formun, özel bir sinirlamaya tabi olmadigini ifade eder "Bilesen (a) ve bilesen (b)'nin bir kombinasyonunu içeren" ifadesi, kapsayici sekilde "bilesen (a) ve bilesen (b)'yi içeren," "büyük ölçüde bilesen (a) ve bilesen (b)`den olusan" ve "bilesen (b) ve bilesen (a)'dan olusan" anlamina gelir.

Burada tarif edilen sensitiz'orde bilesen (a) olarak dahil edilen hidrojen peroksit orani, sinirli degildir ve son formülasyonda bulunan hidrojen peroksit miktarinin, a I h %001 ila 3.5 araliginda olacagi bir araliktan uygun olarak seçilebilir. Miktar, tercihen %01 ila 3 a / h araliginda ve daha fazla tercih edildigi haliyle agirlikça %05 ila 2 a / h araliginda bulunur.

Bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin, hidrojen perokside orani, özel bir sinirlamaya tabi degildir ve beher 300 pg hidrojen peroksit (%3'lük a/ h sulu hidrojen peroksit çözeltisinden 10 pl) itibariyla bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojel miktarinin, 0.1 ila 100 mg (kuru agirlik), tercihen 0.5 ila 50 mg (kuru agirlik) ve daha fazla tercih edildigi haliyle 0.8 ile 10 mg (kuru agirlik) araliginda olacagi araliktan uygun olarak seçilebilir.

Burada tarif edilen sensitizör içerisinde çapraz bagli bir jelatin jel içeren hidrojelin (son formülasyon) orani, özel bir sinirlamaya tabi degildir ve %005 ila 20 a / h, tercihen %01 ila 10 a / h ve daha fazla tercih edildigi haliyle %05 ila 5 a / h araligindan uygun olarak seçilebilir.

Bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin agirligi (w), kuru agirlik esasinda ifade edilir.

Bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin bir sulu hidrojen peroksit çözeltisi ile emprenye edilmesine yönelik metot; silindir, prizma, tabaka, disk, küre, parçacik, granül ya da toz formundaki kuru, çapraz bagli bir jelatin jel içeren gerekli bir miktardaki hidrojelin tartilmasini ve sulu hidrojen peroksit çözeltisinin, bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojel içerisine, yukarida bahsedilen orana ulasilacagi bir miktarda damla damla eklenmesini, akabinde, örnek olarak 30 ila 37°C'Iik bir sicaklikta yakla sik 15 dakika ila yaklasik 2 saat, ya da 2 ila 8°C'Iik bir sicaklikta yaklasik 12 ila 24 saat ve tercih edildigi haliyle 37cC'lik bir sicaklikta yakla sik 1 saat, ya da 4“(3'Iik bir sicaklikta yakla sik 12 ila 18 saat inkübe edilmesini içerir.

Bir sensitizör olarak kaliteyi sabitlemek `üzere sulu hidrojen peroksit çözeltisi, tercihen sensitizörün damla damla eklenen sulu hidrojen peroksit çözeltisinin tamami ile emprenye olabilecegi bir hacimde damla damla eklenir.

Yukarida bahsedilen metoda göre, bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin, sulu hidrojen peroksit çözeltisi ile emprenye edilmesiyle elde edilen ürün, bu sekliyle bir sensitizör kullanilabilir, ya da farmasötik olarak kabul edilebilir fizyolojik salin veya fosfat tamponu (örnegin sodyum klorür, disodyum hidrojen fosfat ve sodyum dihidrojen fosfat) içerisinde ayrica yüzdürüldükten ya da süspansiyon haline getirildikten sonra bir sensitizör olarak kullanilabilir. Çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojel, bir sulu hidrojen peroksit çözeltisi ile emprenye edildiginde ve fizyolojik salin veya benzerleri içinde ayrica yüzdürüldügünde ya da süspansiyon haline getirildiginde dahi, hidrojen peroksit ve çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin son içerikleri, yukarida bahsedilen araliklara ayarlanabilir.

Burada tarif edilen sensitizörün sivi özellikleri, insan bedeni ile uyumlu oldugu sürece özel bir sinirlamaya tabi degildir. Sensitizör, tercihen 6 ila 85'lik bir pH'ye ve daha fazla tercih edildigi haliyle 6.5 ila 8.0'Iik bir pH'ye ayarlanir. l-2. Sensitizör Uygulama Metodu Burada tarif edilen sensitizör, bir sivi formunda (çözelti, emülsiyon ve süspansiyon da dahil), bir jel, ya da bir elastik kati formunda bulunur. Söz konusu sensitizör, bu tip bir formda oldugu sürece kullanim sekli özel bir sinirlamaya tabi degildir. Örnegin burada tarif edilen sensitizör, bir sivi veya jel harici formülasyon oldugunda sensitizör, tümör alanina örnegin asagidaki yöntemler ile lokal olarak uygulanabilir: radyoterapide radyasyon isinlama esnasinda ya da anti-kanser kemoterapisinde bir anti-kanser ajanin uygulanmasi esnasinda sensitizörün tümör alanina direkt olarak püskürtülmesi, uygulanmasi veya baglanmasina yönelik yöntemler ve steril pamuk ya da gazli bezin sensitizör ile emprenye edilmesi ve emprenye edilen steril pamuk veya gazli bezin, isinlama esnasinda radyasyon uygulanacak olan tümör alanina uygulanmasina yönelik yöntemler.

Burada tarif edilen sensitizör bir sivi ya da jel enjeksiyonu oldugunda enjeksiyon, radyasyon isinlamasi veya bir anti-kanser ajanin uygulanmasindan önce, es zamanli olarak ya da sonrasinda, tedavi edilecek olan tümör alanina, bir siringa veya benzerleri kullanilarak, tercihen intratümoral sekilde direkt olarak enjekte edilebilir, ya da tümör alanina bir anjiyografi kateteri yoluyla dolayli olarak enjekte edilebilir.

Daha özel bir anlatimla sensitizör, yaklasik 21 gauge boyundaki bir igneli siringa kullanilarak enjekte edilir ve bu esnada sensitizörün dokuya nüfuz etme durumu, ultrasonografi esliginde gözlenir. Bu durumda sensitizör, enjeksiyon ignesinin derinligi ve yönü degistirilerek ultrasonografi esliginde dokuya yaygin sekilde dagilabilir. Sensitizör, tümör alaninin içerisine, tümördeki vasa vasorum üzerinden enjekte edilebilir. Burada tarif edilen ve tümör alanina uygulanan sensitizörün dozu, tümörün boyutuna ve uygulama sekline bagli olarak degisiklik gösterir. Ornegin sensitizör, tümör alanina enjekte edildiginde doz (enjeksiyon miktari) tipik olarak yaklasik 1 ila 5 ml ve tercihen yaklasik 3 ml olabilir.

Burada tarif edilen sensitizör, elastik bir kati formunda oldugunda sensitizör, tümör alani ya da tümörün bir bisturi veya benzerleri kullanilarak rezekte edilmesinden sonraki alan kesilerek implante edilebilir.

Bir baska yapilanmaya göre burada tarif edilen sensitizörün dozu, tümör hacmine göre de ayarlanabilmektedir.Tümör hacmi (V), örnegin tümöre ait minör eksenin (W) ve majör eksenin (L) bir Vernier kaliper kullanilarak ölçülmesi ve elde edilen degerlerin asagidaki denkleme girilmesi yoluyla hesaplanabilir: V = (W2 x L)/2. Tümör hacmine uygun olarak farelere uygulanan sensitizör dozunun alt limiti, beher 200 mm3 tümör hacmi için, son formülasyonda bulunan çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 ya da 0.5 mg olur.

Sensitizör dozunun üst limiti, beher 200 mm3 tümör hacmi için, son formülasyonda bulunan çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda 10, 5, 3, 2 veya 1 mg olur. Ust limit ve alt Iimitlerin her kombinasyonu kullanilabilir. Alt limit tercihen 0.1 mg ve üst limit ise tercihen 1 mg olur.

Insanlara uygulanan doz, farelere verilen doza göre ayarlanabilir. Gerekmesi halinde sensitizör, insanlara, farelere verilen dozun 5 ila 10 kati miktarinda uygulanabilir. Tümör hacmine uygun olarak bir insana uygulanan sensitizör dozunun alt limiti, beher 200 mm3 tümör hacmi için, son formülasyonda bulunan çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda örnegin 0.5, 1, 1.5, 2 ya da 2.5 mg olabilir. Sensitizör dozunun üst limiti, beher 200 mm3 tümör hacmi için, son formülasyonda bulunan çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda örnegin 5, 8, , 15 veya 20 mg olabilir. Ust limit ve alt Iimitlerin her kombinasyonu kullanilabilir. Alt limit tercihen 0.5 mg ve üst limit ise tercihen 10 mg olur.

Burada tarif edilen sensitizör tercihen bir enjeksiyon formunda bulunur (radyoterapi amaçli sensitizör enjeksiyonu ya da anti-kanser kemoterapisi amaçli sensitizör enjeksiyonu). Söz konusu enjeksiyon; enjeksiyonluk su (enjeksiyonluk distile su, enjeksiyonluk steril su vs.), bir izotoniklestirici ajan, bir pH kontrol ajani, bir tampon çözeltisi ve benzeri kullanilarak bir sulu çözeltinin hazirlanmasi, meydana gelen sulu çözeltinin içerisine bilesen (a) ve bilesen (b)'nin, yukarida bahsedilen oranlara ulasilacak miktarlarda eklenmesi, meydana gelen karisimin bir kaba konulmasi ve kabin kapatilmasi, akabinde yüksek basinçli su buhari sterilizasyonu, sicak suya daldirma sterilizasyonu veya benzerleri ile sterillestirme yapilmasi yoluyla elde edilebilir.

Alternatif olarak enjeksiyon (kullanilmadan hemen önce hazirlanan bir preparat), bilesen (a) içeren bir formülasyonun ve bilesen (b) içeren bir formülasyonun kullanim esnasinda istege göre enjeksiyonluk su (enjeksiyonluk distile su, enjeksiyonluk steril su vs.) kullanilarak karistirilmasi yoluyla elde edilebilir.

Kullanilabilen izotoniklestirici ajanlarin örnekleri arasinda sodyum klorür, gliserin, glukoz, polietilen glikol, propilen glikol, D-mannitol, fruktoz, ksilitol, sodyum dihidrojen fosfat ve sodyum fosfat bulunur. Tercih edildigi haliyle sodyum klorür kullanilir. pH kontrol ajanlarinin örnekleri arasinda hidroklorik asit ve sodyum hidroksit bulunur. Yukarida tarif edildigi üzere enjeksiyon, 6 ila 8.5'Iik bir pH araligina ve tercih edildigi haliyle 6.8 ila 7.8'Iik bir pH araligina ayarlanir. pH seviyesini muhafaza etmek için kullanilabilen tamponlarin örnekleri arasinda fosfat tamponlari, Tris tamponlari ve asetattamponlari bulunur. Tercih edildigi haliyle bir fosfat tamponu kullanilir. l-3. Sensitizör ile Radyoterapi Yukarida tarif edildigi üzere, radyoterapi kapsaminda, burada tarif edilen sensitizör, isin uygulamasindan önce radyasyon isinlanacak olan bir tümör alanina uygulanir. Söz konusu sensitizör tercihen radyoterapiye dirençli olan tümörlerin radyoterapisinde kullanilabilir.

Radyasyona karsi dirençli olan tümörlerin örnekleri arasinda, pek çok hipoksik tümör hücresine sahip tümörler ve büyük miktarlarda anti-oksidatif enzimlere sahip tümörler bulunur.

Halihazirda yaygin olarak kullanilan lineer-hizlandirici tabanli kanser radyoterapisi ile ilgili en büyük problem, radyasyona karsi dirençli kanser hücrelerinin varligidir. Radyasyona karsi dirençli tümör dokulari çogunlukla hipoksik bölgelerdedir ve radyoterapiye karsi dirençlidir. Bu hücrelerin radyasyon direncinin, asagidaki unsurlara atfedilebilir oldugu kabul edilir: hipoksik durum, hücrelerin radyasyon kaynakli DNA hasarinin vs. oksijen ile düzeltilememesi; ayrica tümör hücrelerinde radyasyon ile üretilen reaktif oksijen türleri, anti-oksidatif enzimler tarafindan elimine edilerek apoptozis durumunun uyarilmasi güç hale gelir. Radyasyona karsi dirençli tümörlerin spesifik örnekleri arasinda malign melanomalar, malign glioblastomalar ve çesitli tipte sarkomlar, örnegin osteosarkomlar ve ayrica birkaç santimetre ya da üzerine büyümüs olan, lokal olarak ilerlemis kanser tiplerinin neredeyse tamami bulunur.

Burada tarif edilen sensitizörün kullanildigi radyoterapi, ilk olarak radyasyon isinlanacak olan tümör alanina sensitizörün uygulanmasi ve daha sonra, etkilenmis olan kismin tercihen bir lineer hizlandirici kullanilarak X isinlari veya elektron isinlari ile isinlanmasi yoluyla gerçeklestirilebilir. X isini isinlama sartlari, tümörün ne kadar ilerlemis olduguna, boyutuna ve benzeri faktörlere bagli olarak farklilik gösterir. Bir radyasyon dozu, tipik olarak 1.5 ila 3 Gy, tercihen yaklasik 2 Gy olabilir ve isinlama islemi haftada 2 ila 5 kere ve daha fazla tercih edildigi haliyle haftada yaklasik 4 ya da 5 kere, 1 ila 5 haftalik bir periyot boyunca ve 20 ila 70 Gy'lik bir toplam dozda, tercih edildigi haliyle yaklasik 40 ila 70 Gy ve daha fazla tercih edildigi haliyle yaklasik 50 ila 60 Gy'lik bir toplam dozda gerçeklestirilebilir. Elektron isini sartlari, tümörün ne kadar ilerlemis olduguna, boyutuna ve benzeri faktörlere bagli olarak farklilik gösterir. Bir radyasyon dozu, tipik olarak 2 ila 5 Gy, tercihen yaklasik 4 Gy olabilir ve isinlama islemi haftada 1 ila 5 kere ve daha fazla tercih edildigi haliyle haftada yaklasik 2 veya 3 kere, 1 ila 5 haftalik bir periyot boyunca ve 30 ila 70 Gy ve tercih edildigi haliyle yaklasik 40 ila 60 Gy'lik bir toplam dozda gerçeklestirilebilir.

Burada tarif edilen sensitizör, birinci radyasyon isinlamasi ile es zamanli olarak ya da öncesinde uygulanabilir. Daha özel bir anlatimla burada tarif edilen sensitizörün birinci uygulamasi, tercih edildigi haliyle radyasyon isinlamaya baslamanin 3 gün öncesinden radyasyon baslangicina kadar, daha fazla tercih edildigi haliyle radyasyon isinlamaya baslamanin 2 gün öncesinden radyasyon baslangicina kadar ve daha da fazla tercih edildigi haliyle radyasyon isinlamaya baslamanin 1 gün öncesinden radyasyon baslangicina kadar, ya da radyasyon isinlamaya baslamadan hemen önce gerçeklestirilir. Sensitizörün ikinci veya daha sonraki uygulamasi, sensitizörün önceki uygulamasindan 5 ila 14 gün sonra ve daha fazla tercih edildigi haliyle önceki uygulamadan 7 ila 10 gün sonra gerçeklestirilebilir.

Ornek olmasi bakimindan radyasyon isinlamasi 4 hafta süresince haftada 4 ila 5 kere gerçeklestirilecek oldugunda, eger ki isinlama Pazartesi günü baslayacak olur ise, burada tarif edilen sensitizör isinlamadan önce her Pazartesi uygulanabilir.

Burada tarif edilen sensitizörün uygulama sikligi, tümörler üzerindeki terapötik etkilere göre artirilabilir ya da azaltilabilir.

Radyoterapi önceden gerçeklestirildiginde ve radyasyon isinlamanin bir etkisi elde edilmediginde, burada tarif edilen sensitizörün kullanimina radyoterapi baslangicindan sonra baslatilabilir.

Radyoterapi bir cerrahi operasyondan sonra baslatildiginda radyoterapi önceden baslatilabilir ve burada tarif edilen sensitizörün kullanimi ise, radyasyon isinlamaya basladiktan örnegin 5 ila 14 gün ve daha fazla tercih edildigi haliyle 6 ila 8 gün sonra baslatilabilir.

Ornegin radyoterapi meme konzervatif cerrahisinden sonra gerçeklestirildiginde, tam meme 50 Gy (2 Gy x 5 kere/(hafta)) dozunda isinlanir. Tümör hücreleri cerrahi esnasinda cerrahi sinirda gözlendiginde, tümör hücreleri örnegin bir elektron isini ile, toplam 10 Gy'lik bir dozda (2 Gy x 5 kere) boost isinlarina tabi tutulabilir. Bir baska yapilanmaya göre, örnegin tam meme 44 Gy dozunda isinlanir (2.75 Gy x 16 kere) ve 9 Gy (3 Gy x 3 kere) dozunda boost isinlarina tabi tutulur. Burada tarif edilen sensitizör, örnegin isinlama isleminin baslangicindan 1 hafta sonra tümör alanina lokal olarak uygulanabilir. Sensitizör uygulamasinin sikligi, örnegin 1 ila 4 kere olabilir. l-4. Sensitizör ile Anti-kanser Kemoterapisi Burada tarif edilen sensitizör, tedavi edilecek olan tümör alaninda, bir anti-kanser ajani ile tedaviden önce kullanilabilir. Söz konusu sensitizör, tercih edildigi haliyle, bir anti-kanser ajani ile tedaviye karsi dirençli olan veya göreli olarak büyük olan tümörler üzerinde kullanilabilir.

Ornegin mide kanseri, küçük hücreli olmayan akciger kanseri, kolorektal ve rektal kanser, karaciger kanseri, pankreatik kanser, rahim kanseri ve özofagus kanseri gibi pek çok solit tümörler, anti-kanser ajanlarina karsi dirençlidir. Bu tip solit tümörlerde, lokal olarak ilerlemis solit tümörlerin neredeyse tamami, anti-kanser ajanlarina karsi dirençli olma egilimindedir.

Burada tarif edilen sensitizör, anti-kanser ajaninin birinci uygulamasi ile es zamanli olarak, ya da öncesinde uygulanabilir. Daha özel bir anlatimla burada tarif edilen sensitizörün birinci uygulamasi, tercih edildigi haliyle anti-kanser ajanini uygulamaya baslamanin 3 gün öncesinden uygulamanin baslangicina kadarki periyot esnasinda, daha fazla tercih edildigi haliyle anti-kanser ajanini uygulamaya baslamanin 2 gün öncesinden uygulamanin baslangicina kadarki periyot esnasinda ve daha da fazla tercih edildigi haliyle anti-kanser ajanini uygulamaya baslamanin 1 gün öncesinden uygulamanin baslangicina kadarki periyot esnasinda, ya da anti-kanser ajanini uygulamaya baslamadan hemen önce gerçeklestirilir.

Sensitizörün ikinci ya da daha sonraki uygulamasi, sensitizörün önceki uygulamasindan 5 ila 14 gün sonra ve daha fazla tercih edildigi haliyle önceki uygulamadan 7 ila 10 gün sonra gerçeklestirilebilir.

Ornegin anti-kanser ajani, 4 haftaligina haftada bir ila bes kere verilir ve eger ki anti-kanser ajaninin uygulanmasi Pazartesi günü baslatilir ise, burada tarif edilen sensitizör, her Pazartesi günü anti-kanser ajaninin verilmeye baslanmasindan önce uygulanabilir.

Burada tarif edilen sensitizörün uygulama sikligi, tümörler üzerindeki terapötik etkilere göre artirilabilir veya azaltilabilir.

Anti-kanser ajani önceden gerçeklestirildiginde ve anti-kanser ajaninin bir etkisi elde edilmediginde, burada tarif edilen sensitizörün kullanimina anti-kanser ajaninin baslangicindan sonra baslatilabilir.

Burada kullanilan anti-kanser ajanlarinin (karsinostatik ajanlar) örnekleri arasinda alkilleyici ajanlar, örnegin siklofosfamid, ifosfamid, busulfan, melfalan, bendamustin hidroklorür, nimustin hidroklorür, ranimustin, dakarbazin, prokarbazin hidroklorür ve temozolomid; antimetabolitler, örnek olarak metotreksat, pemetreksed sodyum, florourasil, doksifluridin, kapesitabin, tegafur, sitarabin, sitarabin okfosfat hidrat, enositabin, gemsitabin hidroklorür, merkaptopurin hidrat, fludarabin fosfat, nelarabin, pentostatin, kladribin, Ievofolinat kalsiyum, kalsiyum folinat, hidroksikarbamid, L- asparaginaz ve azasitidin; anti-tümör antibiyotikleri, örnegin doksorubisin hidroklorür, daunorubisin hidroklorür, pirarubisin, epirubisin hidroklorür, idarubisin hidroklorür, aslarubisin hidroklorür, amrubisin hidroklorür, mitoksantron hidroklorür, mitomisin C, aktinomisin D, bleomisin, peplomisin sülfat ve zinostatin stimalamer; mikrotübül inhibitörleri, mesela vinkristin sülfat, vinblastin sülfat, vindesin sülfat, vinorelbin tartrat, paklitaksel, dosetaksel hidrat ve eribulin mesilat; hormon ajanlari, örnegin anastrozol, eksemestan, Ietrozol, tamoksifen sitrat, toremifen sitrat, fulvestrant, flutamid, bikalutamid, medroksiprogesteron asetat, estramustin fosfat sodyum hidrat ve Iöprolid asetat; platin ilaçlari, mesela sisplatin, miriplatin hidrat, karboplatin, nedaplatin ve oksaliplatin; topoizomeraz I inhibitörleri, mesela irinotekan hidroklorür hidrat ve nogitecan hidroklorür; topoizomeraz II inhibitörleri, örnegin etoposid ve sobuzoksan; sitokinler, örnegin interferon y-Ia, teselökin ve selmolökin; antikor ilaçlari, örnek olarak trastuzumab, rituksimab, gemtuzumab ozogamisin, bevasizumab ve setuksimab; radyoimmunoterapötik ajanlar, örnek olarak ibritumomab tiuksetan; moleküler hedef ilaçlar, örnegin gefitinib, imatinib mesilat, bortezomib, erlotinib hidroklorür, sorafenib tosilat, sunitinib malat, talidomid, nilotinib hidroklorür hidrat, dasatinib hidrat, Iapatinib tosilat hidrat, everolimus, Ienalidomid hidrat, deksametazon, temsirolimus, vorinostat, tretinoin ve tamibaroten; spesifik olmayan immün uyaricilar, örnegin OK-432, kuru BCG, Coriolus versicolor polisakkarit formülasyonu, Ientinan ve ubenimeks; ve anti-kanser ajanlari, örnek olarak aseglaton, porfimer sodyum, talaporfin sodyum, etanol ve arsenik trioksit bulunur.

Daha fazla tercih edilen anti-kanser ajanlarinin örnekleri arasinda ise antrasiklin anti-kanser ajanlarini, örnegin doksorubisin hidroklorür, daunorubisin hidroklorür, pirarubisin, epirubisin hidroklorür, idarubisin hidroklorür, aslarubisin hidroklorür, amrubisin hidroklorür ve mitoksantron hidroklorür; platin tipi anti-kanser ajanlari, mesela sisplatin, miriplatin hidrat, karboplatin, nedaplatin ve oksaliplatin; ve pirimidin antimetabolit tabanli anti-kanser ajanlari, mesela florourasil, doksifluridin, kapesitabin, tegafur, sitarabin, sitarabin okfosfat hidrat, enositabin ve gemsitabin hidroklorür bulunur.

Bu anti-kanser ajanlari ya da karsinostatik ajanlar, tek baslarina veya iki ya da daha fazlasinin bir kombinasyonu halinde kullanilabilir.

Anti-kanser ajaninin uygulanmasina yönelik metot, temel olarak her bir anti-kanser ajanina uygun olarak bilinen uygulama metotlari arasindan seçilebilir. Anti-kanser ajani, her bir anti- kanser ajaninin kullanimina yönelik talimatlarda tarif edilen uygulama sekline, dozuna ve uygulama metoduna göre uygulanabilir. Anti-kanser ajaninin sensitizör ile kombine kullanimi, bir tümörün boyutunda azalmaya sebep olabildiginde, anti-kanser ajaninin dozaji ve sikligi azaltilabilir. ll. Tümör Tedavi Metodu Burada, (1) (a) hidrojen peroksit ve (b) bir çapraz bagli jelatin jel içeren bir hidrojel ihtiva eden bir sensitizörün bir tümör alanina lokal olarak verilmesini ve (2) tümör alaninin radyasyon ile isinlanmasini ya da bir anti-kanser ajanin, tümörden mustarip hastaya uygulanmasini kapsayan bir metot tarif edilmektedir.

Bir tümör tedavisine yönelik metotta kullanilan sensitizör'un bilesimi, sensitizörün uygulama metodu ve radyoterapi veya anti-kanser kemoterapisi gerçeklestirmeye yönelik metotlar, "I.

Radyasyon ya da Anti-Kanser Ajaninin Tümör Uzerindeki Terapötik Etkisini Artirmaya Yönelik Sensitizör" içerisinde tarif edilenlere uygun olmaktadir.

III. Radyasyon veya Anti-Kanser Ajani Kullanilan Tümör Tedavi Bilesimi Burada, bir tümörün, radyasyon ya da bir anti-kanser ajani kullanilarak tedavi edilmesine yönelik bir bilesim tarif edilmekte olup bu bilesim, (a) hidrojen peroksit ve (b) bir çapraz bagli jelatin jel içeren bir hidrojelin bir kombinasyonunu içermekte ve bilesim, tümör alanina lokal olarak uygulanmaktadir.

Bu bilesim, "I. Radyasyon veya Anti-Kanser Ajaninin Tümör Uzerindeki Terapötik Etkisini Artirmaya Yönelik Sensitizör" içerisinde tarif edilen sensitizör ile aynidir ve sensitizör üretmeye yönelik metot ile ayni metot kullanilarak üretilebilir. Bilesimi uygulamaya yönelik metot, sensitizör uygulamaya yönelik metot ile de aynidir.

IV. Radyasyon ve Anti-Kanser Ajaninin Tümör Uzerindeki Terapötik Etkisine Duyarliligi Artirmaya Yönelik Sensitizörün Üretiminde Kullanimi Burada, tümör alanina lokal olarak uygulanmaya yönelik bir bilesimin, radyasyonun ya da bir anti-kanser ajaninin bir tümör üzerindeki terapötik etkisini artirmaya yönelik bir sensitizörün üretimindeki kullanimi da tarif edilmekte olup bu bilesim, istemlerde tanimlanan bilesenlerin bir kombinasyonunu içermektedir.

Ornekler Mevcut bulus, Orneklere ve Formülasyon Orneklerine basvurularak asagida daha detayli olarak tarif edilmektedir. Ancak mevcut bulus, Ornekler vs. ile sinirli degildir. Bu sartnamede kullanilan % ifadesi, aksi belirtilmedigi sürece a / h %'si anlamina gelmektedir.

Asagidaki Ornekler içerisinde tarif edilen hayvan deneyleri, Kochi Universitesi, Kurumsal Hayvan Bakim ve Kullanim Komitesi onayi ile, Kochi Universitesi, Biyo-fonksiyonel Malzemeler Bölümünde, Laboratuvar Hayvanlari Arastirma Enstitüsünde gerçeklestirildi.

Sensitizör Formülasyon Örnegi 1 pl miktarindaki bir 5qu hidrojen peroksit çözeltisi (yaklasik %3 a / h), birim mg MedGel (tescilli marka) parçaciklarina (PI5-95MS: 4.8 ila 5.0'Iik bir izoelektrik noktasina sahip jelatinden hazirlanan bir çapraz bagli jelatin hidrojel) direkt olarak damla damla eklendi ve üzerine hafifçe dokunuldu. Karisim, MedGeI'i sulu hidrojen peroksit çözeltisi ile tam olarak emprenye etmek üzere 37°C sicaklikta 1 saat bekleme ye birakildi ve sulu hidrojen peroksit çözeltisi ile emprenye edilen MedGeI, 50 pl PBS üzerinde yüzdürüldü. Bu durumda hidrojen peroksidin son konsantrasyonu, agirlikça %0.5 a / h ve MedGeI'in son konsantrasyonu ise agirlikça %167 al h oldu.

Meydana gelen sensitizör, beher 100 pl sensitizör için, kuru agirlik esasinda, 2 mg miktarinda MedGeI (çapraz bagli jelatin hidrojel) içerdi.

Sensitiz'or Formülasvon Örnegi 2 (Karsilastirma Ornegi) pl miktarindaki bir sulu hidrojen peroksit çözeltisi (yaklasik %05 a / h), birim mg MedGeI (tescilli marka) (PM-SFO1: 8.0 ila 9.0'Iik bir izoelektrik noktasina sahip jelatinden hazirlanan bir çapraz bagli jelatin hidrojel) direkt olarak damla damla eklendi. Karisim daha sonra MedGeI'i sulu hidrojen peroksit çözeltisi (yaklasik olarak %05 a I h) ile emprenye etmek üzere 37°C sicaklikta 1 saat süresince beklemeye birakildi. Sulu hidrojen peroksit (yaklasik olarak %05 a / h), bir sulu hidrojen peroksit çözeltisi (yaklasik %3 a / h), PBS ile 6 misli seyreltilerek hazirlandi ve kullanildi. Bu durumda hidrojen peroksidin son konsantrasyonu, agirlikça %05 a/ h ve MedGeI'in son konsantrasyonu ise agirlikça %157 a / h oldu.

Karsilastirma Örnegi 1 Hidrojen peroksit, PBS ile, %05 a / h'Iik bir son konsantrasyona seyreltildi.

Karsilastirma Örnegi 2 Kullanimdan hemen önce, %1 a / h konsantrasyonunda sodyum hiyaluronat içeren bir hiyalüronik asit Formülasyonunda 25 mg içeren bir siringa içerisine (ticari adi ARTZ Dispo (tescilli marka), 'üreten Seikagaku Corporation; beher siringa içerisinde 25 mg sodyum hiyaluronat içerir ve ayrica 2.5 mg L-metionin, sodyum klori'ir, disodyum hidrojen fosfat, kristalin sodyum dihidrojenfosfat ve bir izotoniklestirici madde içerir; renksiz saydam viskoz sulu sivi, pH: 6.8 ila 7.8, ozmotik basinç orani: 1.0 ila 1.2 (fizyolojik saline göre oran), agirliga dayayi ortalama molekül agirligi: 600,000 ila 1,200,000), yaklasik %3 a / h'Iik bir sulu hidrojen peroksit çözeltisinden 0.5 ml eklendi ve meydana gelen karisim, mevcut bulusa göre bir radyasyon sensitizör'u veya anti-kanser kemoterapi sensitiz'ör'ü hazirlamak 'üzere gerektigi sekilde karistirildi. Bu sensitizbr içinde bulunan sodyum hiyaluronat konsantrasyonu ve hidrojen peroksit konsantrasyonu, bu siraya göre %083 (a / h) ve yaklasik %05 (a / h) degerindedir.

Ornek 1 Hidroiel Metodu ve Kullanimdaki KORTUC Metodu Arasinda Karsilastirma 1. Metot Deney hayvanlari olarak 7 haftalik CSH/He disi fareler kullanilarak, bir hayvan deney tesisinde bir deney gerçeklestirildi. Fareler, oda sicakliginda ve sabit nem sartlarinda muhafaza edilen ve gida ve suya serbest erisim saglanan bir tesiste tutuldu.

SCCVII tümör hücreleri (1.0 x 105 hücre/hayvan), farelerin sag alt uyluk bölgesine subkütanöz olarak implante edildi. Fareler, asagidaki gibi gruplandirildi: Grup 1: Kontrol grubu (Karsilastirma Örnegi 1 sensitizörü verilir) Grup 2: KORTUC grubu (Karsilastirma Örnegi 2 sensitizörü verilir) Grup 3: MedGel grubu (Formülasyon Örnegi 1 sensitizörü verilir) Yaklasik 1 cm'lik bir tümör çapi evresinde, Karsilastirma Örnegi 1, Karsilastirma Örnegi 2 ve Formülasyon Örnegi 1 kapsaminda elde edilen sensitizörler, tümör alanlarina enjekte edildi.

Enjeksiyon amaciyla bir insülin siringasi (26-gauge igneli) kullanildi ve her bir sensitizör, 200 ul miktarinda enjekte edildi. Sensitizör uygulamasindan 72 saat sonra, 6 MeV'Iik enerjideki elektron isinlari, bir lineer hizlandirici (EXL-20TP, üreten Mitsubishi Electric, Tokyo) kullanilarak 30 Gy seviyesinde isinlandi. Radyasyon uygulandiginda farelere anestezi uygulandi ve bir fare-sabitleme aygiti ile isinlandi. (Sekil 1) Bu alet, farelerde bir bacak kismini lokal olarak isinlamaya ve bir tümör bulunan bacak kismi haricindeki tüm vücudu, 4.5 mm kalinliga sahip bir bakir plagi kullanarak korumaya yöneliktir.

Gözlem periyodu 60 güne ayarlanmis olarak, tümör hacmindeki degisiklikler ve sag kalim oranlari daha sonra kontrol edildi. Tümör hacmi, bir Vernier kaliper kullanilarak gözlendi.

Tümör hacmi (V), tümöre ait minör eksenin (W) ve majör eksenin (L) bir Vernier kaliper kullanilarak ölçülmesi ve tümör hacminin asagidaki denkleme göre hesaplanmasi yoluyla elde edildi: V = (W2x L)/2. 2. Sonuçlar Sekil 2 içerisinde gösterildigi üzere MedGeI grubundaki fareler, en yüksek sagkalim oranini gösterdi ve bunlarin 60 gün sonraki sagkalim orani ise %80 oldu. Kontrol grubu, %60'lik bir sagkalim orani sergiledi. KORTUC grubu, %50'lik bir sagkalim orani sergiledi. Radyasyon uygulamasi esnasinda anesteziden ölen bir hayvan hariç tutulur ise, KORTUC grubunun sag kalim orani %60'tir ve bu oran kontrol grubunun sag kalim orani ile aynidir.

Bu deneydeki radyasyon isinlamasi, her bir ilacin tümör alanina lokal olarak enjekte edilmesinden 72 saat sonra yapildi. Konvansiyonel KORTUC, tümör dokusunda kismi oksijen basincini 24 saat süresince muhafaza edebilir. Dolayisiyla bu deneyde, tümör dokusundaki oksijen kismi basincinin, KORTUC grubunda radyasyona maruz birakilmadan önce halihazirda azalmis oldugu ve dolayisiyla yeterli terapötik etkiler elde edilmedigi düsünülmektedir.

Elde edilen sonuçlar, mevcut bulusa göre bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin, kismi oksijen basincini, sadece sensitizörlerin uygulanmasindan hemen sonra olmayip, ayrica uygulamadan 72 saat sonra bile tümör dokusunda muhafaza edebildigini önermektedir.

Tümör hacmindeki degisiklikler bakimindan tümör büyüme hizi, MedGeI grubunda çogunlukla büyük ölçüde inhibe edildi (Sekil 3). Olümün baslangicindan itibaren 30. günde yapilan ölçümde, MedGel grubundaki ortalama tümör hacmi, diger gruplardaki hacmin yarisina esit ya da yarisindan daha az oldu (Sekil 4). MedGel grubunda, tümörlerin ortadan kayboldugu belirlenen iki fare oldu. Farelerin birinde, ölçümün baslangicindan itibaren 9. günde tümör olmadigi belirlendi. Bir baskasi ise 20. günde tümörsüz olarak belirlendi. Ancak 20. günde tümörsüz oldugu belirlenen fare, aslinda eklemde kontraktür sergiledi ve tümör büyümesi yönünde herhangi bir egilim gözlenmedi; dolayisiyla farenin bir tümörü bulunmadigi, ancak eklemde bir kontraktürü oldugu belirlendi. Ancak daha sonra tümör büyümesine yönelik bir egilim gözlendiginden ölçüm, o zaman zaman noktasinda baslatildi. Kontrol grubunda da tümörün ortadan kayboldugu belirlenen bir fare oldu. Ancak tümör büyümesine yönelik bir egilim yeniden gözlendiginden bunun bir tümör oldugu belirlendi ve ölçüm, o zaman zaman noktasinda baslatildi.

Bu deneyin sonuçlari, mevcut bulusun çapraz bagli jelatin jelini içeren hidrojelin, KORTUC grubu ile kiyasli olarak tümör dokusunda kismi oksijen basincini muhafaza etmek bakimindan en etkili substrat oldugunu önerir. MedGeI grubu, en yüksek sag kalim oranina sahip oldu ve tümörlerin kaybolmasi, bazi farelerde görsel olarak gözlendi ve neredeyse tam yanitin terapötik etkisi gözlendi. Bu sonuçlar, bir sensitizör olarak çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojel ve hidrojen peroksit kombinasyonunun kullanilmasi, radyoterapiye karsi duyarliligi artirabildigi ve dolayisiyla tümör inhibitör etkileri artirabildigi için elde edildi.

Ornek 2: MedGeI Formunda Zamana Bagli Degisim MedGeI, Formülasyon Ornegi 1'e uygun olarak bir sulu hidrojen peroksit çözeltisi (oksidol) ile karistirildi ve MedGeI formunda zamana bagimli degisiklikler gözlendi (Sekil 5). gün sonra dahi MedGel parçaciklari çözülmedi ve MedGeI kendi formunu muhafaza etti.

Bu sonuç, MedGeI tarafindan hidrojen peroksit salinmasinin, radyoterapi esnasinda devam ettigini gösterir.

Ornek 3: Tümöre Sensitizör Uvqulandiktan 48 Saat Sonra Gerçeklestirilen Radyasyon Uyqulamasinin Tümör Hacmi Uzerindeki Etkisi 1. Metot SCCVII tümör hücreleri (1.0 x 105 hücre/hayvan), Ornek 1'in "1. Metot“ kismindaki ile ayni sekilde, farelerin sag alt uyluk bölgesine subkütanöz olarak implante edildi. Fareler, asagidaki gibi gruplandirildi: Grup 1: Kontrol grubu (sensitizör verilmez) Grup 2: KORTUC grubu (Karsilastirma Örnegi 2 kapsamindaki sensitizörden 100 ul verilir) Grup 3: P15-100 grubu (Formülasyon Örnegi 1 kapsamindaki sensitizör, MedGeI'in kuru agirligi esasinda 2 mg miktarinda verilir) Grup 4: PI5-30 grubu (Formülasyon Örnegi 1 kapsamindaki sensitizör, MedGeI'in kuru agirligi esasinda 0,6 mg miktarinda verilir) Grup 5: PI9-2 grubu (Formülasyon Örnegi 2 kapsamindaki sensitizör, MedGeI'in kuru agirligi esasinda 2 mg miktarinda verilir) Grup 6: Pl9-O grubu (Formülasyon Örnegi 2 kapsamindaki sensitizör, MedGeI'in kuru agirligi esasinda 0.6 mg miktarinda verilir) Yaklasik 200 ila 250 mg'lik bir tümör hacmi evresinde, Karsilastirma Örnegi 2 kapsamindaki sensitizörden 100 ul, Formülasyon Örnegi 1 kapsamindaki sensitizörden 100 ul (MedGeI'in kuru agirligi esasinda 2 mg miktarinda), ya da Formülasyon Örnegi 1 kapsamindaki sensitizörden 30 pl (MedGeI'in kuru agirligi esasinda 0.6 mg miktarinda) tümörler içerisine enjekte edildi. Formülasyon Örnegi 2 kapsamindaki sensitizör, elastik bir kati formunda oldugundan tümör alani kesilerek açildi ve sensitizör, beher yaklasik 200 ila 250 mg tümör hacmi için, MedGeI'in (çapraz bagli jelatin jel) kuru agirligi esasinda 2 veya 0.6 mg miktarinda implante edildi.

Sensitizör uygulamasindan kirk sekiz saat sonra tümör hücreleri, Ornek 1'in "1. Metot" kismindaki ile ayni sartlar altinda radyasyona tabi tutuldu ve sensitizörün uygulanmasi itibariyla 37. günde (radyasyon uygulanmasi itibariyla 35. günde) tümör hacmi ölçüldü. 2. Sonuçlar Sekil 6 içerisinde gösterildigi üzere, KORTUC grubu (KORTUC), Pl9-2 grubu (Pl9-2) ve kontrol grubu (kontrol) arasinda tümör hacminde önemli bir fark gözlenmedi. Buna karsi, KORTUC grubu ile kiyasli olarak, Pl5-1OO grubunda (PI5-100), PI5-30 grubunda (PI5-30) ve PI9-0.6 grubunda (PI9-O.6) tümör hacmindeki artis inhibe edildi. Ozellikle de PI5-30 grubunda ve PIQ- 0.6 grubunda bu inhibisyon etkisi büyük oldu. Bu sonuçlar, bir çapraz bagli jelatin jel içeren hidrojelin, tümör alanina, beher 200 mm3 tümör hacmi için, çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda yaklasik 0.1 ila 1 mg miktarinda lokal olarak uygulanmasini önerir. Bu veri miktari, 0.1 ila 5 mg ya da 0.5 ila 10 mg'lik bir insan dozuna karsilik gelir.

Ornek 4 Tümöre Sensitizör Uvqulandiktan 72 Saat Sonra Gerçeklestirilen Radyasyon Uvqulamasinin Tümör Hacmi Uzerindeki Etkisi 1 . Metot SCCVII tümör hücreleri (1.0 x 105 hücre/hayvan), Ornek 1'in "1. Metot" kismindaki ile ayni sekilde, farelerin sag alt uyluk bölgesine subkütanöz olarak implante edildi. Fareler, asagidaki gibi gruplandirildi: Grup 1: Kontrol grubu (sensitizör verilmez) Grup 2: KORTUC grubu (Karsilastirma Örnegi 2 kapsamindaki sensitizörden 100 pl verilir) Grup 3: PI5-30 grubu (Formülasyon Örnegi 1 kapsamindaki sensitizör, MedGel'in kuru agirligi esasinda 0.6 mg miktarinda verilir) Grup 4: PI9-0 grubu (Formülasyon Örnegi 2 kapsamindaki sensitizör, MedGel'in kuru agirligi esasinda 0.6 mg miktarinda verilir) 200 ila 250 mg'lik bir tümör hacminde, Karsilastirma Ornegi 2'de elde edilen sensitizörden 100 i.il, ya da Formülasyon Örnegi 1 kapsaminda elde edilen sensitizörden 30 pl, her bir tümörün içerisine enjekte edildi. Formülasyon Ornegi 2'de elde edilen sensitizör, elastik bir kati formunda oldugundan tümör alani kesilerek açildi ve sensitizör, beher yaklasik 200 ila 250 mg tümör hacmi için, MedGel'in (çapraz bagli jelatin jel) kuru agirligi esasinda 2 veya 0.6 mg miktarinda implante edildi.

Sensitizör uygulamasindan yetmis iki saat sonra tümör, Ornek 1'in "1. Metot" kismindaki ile ayni sartlar altinda radyasyona tabi tutuldu ve sensitizörün uygulanmasi itibariyla 37. günde (radyasyon uygulanmasi itibariyla 34. günde) tümör hacmi ölçüldü. 2. Sonuçlar Sekil 7 içerisinde gösterildigi üzere, KORTUC grubu (KORTUC), PI9-0.6 grubu (PI9-O.6) ve kontrol grubu (kontrol) arasinda tümör hacminde 'önemli bir fark gözlenmedi. Buna karsi tümör hacmindeki artis, diger gruplara kiyasla PI5-30 grubunda (Pis-30) inhibe edildi. Bu sonuçlar, 4.5 ila 5.5'Iik bir izoelektrik noktasina sahip bir jelatinden hazirlanan, çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojelin tercihen kullanildigini gösterir.

Claims (1)

1. ISTEMLER Asagida belirtilenlerin bir kombinasyonunu içeren bir sensitizör olup, (a) hidrojen peroksit ve (b) 4.5 ila 5.5'Iik bir izoelektrik noktasina sahip bir asidik jelatinden hazirlanan, çapraz bagli bir jelatin jel içeren bir hidrojel, bir tümör tedavisinde kullanilmaya yönelik olmaktadir ve burada sensitiz'or, bir tümör alanina lokal olarak uygulanmakta ve radyasyonun ya da bir anti-kanser ajaninin tümörün 'üzerindeki terapötik etkisini artirmaktadir. istem 1ie uygun olarak kullanilmak 'üzere sensitiz'or olup, burada bahsedilen tümör, radyasyon veya bir anti-kanser ajani kullanilan tedaviye karsi dirençli olmaktadir. istem 1te veya istem 23ye uygun olarak kullanilmak 'üzere sensitizör olup, burada sensitizörün birinci uygulamasi, radyasyonun bir birinci uygulamasinin veya anti-kanser ajanin bir birinci uygulamasinin 3 gün öncesinden, radyasyon uygulamasinin ya da anti- kanser ajani uygulanmasinin baslangicina kadarki bir periyot içerisinde gerçeklestirilmektedir. istem 3'e uygun olarak kullanilmak üzere sensitizör olup, burada sensitiz'or'un bir ikinci uygulamasi, sensitiz'orün birinci uygulamasindan Sila 14 gün sonra gerçeklestirilmektedir. istem 1 ila istem 4'e uygun olarak kullanilmak 'üzere sensitizör olup, burada çapraz bagli jelatin jel, %92 ila 99.7'Iik bir su içerigine sahip olmaktadir. istem 1 ila istem 5=e uygun olarak kullanilmak 'üzere sensitiz'or olup , burada bahsedilen sensitizör, bir nihai formülasyon formunda, çapraz bagli jelatin jelin kuru agirligi esasinda ve beher 200 mm3 tümör hacmi esasinda 0.1 ila 10 mg miktarinda uygulanmaktadir. istem 1 ila istem 6=ya uygun olarak kullanilmak üzere sensitizor olup , burada bahsedilen sensitiz'or, nihai formülasyon formunda, agirlikça %001 ila 35 miktarinda hidrojen peroksit içermektedir.