TR201809898T4 - Alfa-1 protei̇naz i̇nhi̇bi̇törüne yöneli̇k bi̇leşi̇m, yöntem ve ki̇t. - Google Patents

Abstract

Mevcut buluş API ve en az bir amino asit ihtiva eden bileşimler, özellikle amino asitler ihtiva eden sıvı bir API formülasyonu ve buna ilişkin yöntemler ve kitler sunmaktadır. API formülasyonuna eklenmesi durumunda bu amino asitler, API formülasyonuna stabilite sağlamaktadır.

Description

Tarifname ALFA-1 PROTEINAZ INHIBITÖRÜNE YÖNELIK BILESIM, YÖNTEM VE KIT BULUSUN ILGILI OLDUGU ALAN Mevcut bulus API ihtiva eden bir bilesimin stabilizasyonuna yönelik en az bir amino asidin kullanimi ile ilgilidir, burada en az bir amino asit toplam amino asit miktarinda 0.01 M ila 3 M kadar mevcuttur ve burada API, bilesimin en az 6 ay boyunca bir sicakliga maruz birakilmasi durumunda bunun aktivitesinin en az %50'sini tutar ve burada sicaklik 5°C ila 40°C'dir.

BULUSUN ARKA PLANI API eksikligi, etkilenen kisileri karaciger hastaligi ve/veya pulmoner amfizeme yatkinlastiran oldukça yaygin bir genetik rahatsizliktir. Proteaz inhibitör türü Z (PIZ) olarak ifade edilen API eksikliginin en yaygin türü, bir otomozal resesif karakter olarak aktarilir ve en fazla Kuzey Avrupa ve Kuzey Amerika popülasyonlarinda yaklasik olarak 1700 canli dogumda 1'i etkiler. PiZ mutasyonu, tek bir amino asit sübstitüsyonu Insan APl'si, 52 kDa'lik toplam bir moleküler agirlik vererek 394 amino asit, bir sistein kalintisi ve üç karbohidrat yan zincire sahiptir. Tek bir reaktif merkez kivrimi [RCI] pozisyon 358-359'de bir Met-Ser dizisinde bulundurulur. APl'nin tersiyer yapisi 8 iyi tanimlanmis (Ji-sarmal (A-H] ve 3 genis ß-katman (A-C) içerir. Serpinlerin geri dönüstürülemeyen “intihar-substrati” mekanizmasi vasitasiyla islev gösterdigine inanilir.

Bir proteaz araciligiyla klevaj akabinde serpin, bir üç boyutlu yapi degisikliginden geçer, böylece RCL klevaj edilir ve A ß-katmaninin merkezine yerlestirilir ve proteazin, molekülün distal ucuna yeri degistirilir. Bu yapisal geçis serpinin stabilizasyonu ve bunun katalitik düzenegini etkisizlestiren proteazin tersiyer yapilarinin büyük ölçüde bozulmasi ile sonuçlanir. API'nin biyolojik aktivitesinin, spesifik olmayan proteinazlar tarafindan örnegin, molekül arasi- veya içi polimerizasyon, oksidasyon, kompleks olusumu ve/veya klevaj dahil kimyasal modifikasyonlar araciligiyla etkilenebilecegine inanilir.

API'nin major fizyolojik fonksiyonunun, nötrofil elastaz, katepsin G ve proteinaz 3'ün inhibisyonu olduguna inanilir. PiZ API eksikligine sahip kisilerde üretilen API, bunun Spesifik elastaz inhibitör kapasitesinde bir azalmanin olabilmesine ragmen fonksiyonel olarak aktiftir. API sentezinin baskin alani karacigerdir, ancak, ayrica makrofajlar, bagirsak epitelyal hücreleri ve bagirsak Paneth hücreleri dahil ekstrahepatik hücre türlerinde sentezlenir.

API eksikligindeki akciger hasari patojenezi mevcut API aktivitesinde belirgin azalmaya atfedilir. APl'nin, pulmoner alveolar lavaj sivisinda nötrofil elastaz inhibitör aktivesinin kiside görülen yikici akciger hastaliginin akcigerlerdeki elastaz ile API arasindaki net dengedeki bir pertübasyon nedeniyle oldugu görülür. Nötrofil elastaz, katepsin G ve proteinaz 3'ün inhibe edilmemis aktivitesi, dolayisiyla, akcigerlerin bag dokusu bütünlügünün yavas yikimi ile sonuçlanir. Bag dokusunun bu yikimi, asiri distansiyon ve azalmis ekspiratuar hava akisi ile sonuçlanan akcigerlerin retraktif kuvvetinde bir azalmaya yol açar. Sigara kullanimi, APl'nin mevcut oldugu oksidatif inaktivitasyona neden olunmasi araciligiyla sorunu siddetlendirir.

Halihazirda, API eksikligi ile iliskili patolojilere sahip kisilere yönelik tedavi seçenekleri sinirlidir. API eksikligi ile iliskili karaciger hastaligi, ortotopik karaciger nakli araciligiyla tedavi edilmistir. Eksik API genini degistirmek üzere somatik gen terapisi tartisilmistir, ancak henüz basarili bir sekilde kullanilmamistir.

Yayin numarasi IP51118819A'ya ile Japon Patent basvurusu nötr bir amino asit [örnegin glisin, alanin, valin), monosakkarit (örnegin glikoz, mannoz, fruktoz], disakkarit [örnegin sükroz, maltoz, laktoz) ve/veya seker alkolü (örnegin manitol, korbitol, ksilitol) kullanilarak isil isleme karsi alfa 1-antitripsinin termal olarak stabilize edilmesine yönelik bir prosesi açiklar. Isil islem akabinde, stabilizitör uzaklastirilir [örnegin, solüsyonun diyaliz edilmesi).

Dolayisiyla, stabil olan ve bir özneye uygulanmasi akabinde istenen API plazma biyoyararlanim seviyelerini saglayan API bilesimlerine yönelik bir ihtiyaç devam eder.

BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Burada asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: [a] bir alfa 1-proteinaz inhibitörü (API); ve (b) en az bir amino asit.

Burada ayrica bilesimin hazirlanmasina yönelik yöntemler açiklanir.

Burada ayrica saglanan bilesimi ihtiva eden kitler açiklanir.

Mevcut bulus API ihtiva eden bir bilesimin stabilizasyonuna yönelik en az bir amino asidin kullanimini saglar, burada en az bir amino asit t0plam amino asit miktarinda 0.01 ila 3 M mevcuttur ve burada API, bilesimin en az 6 ay boyunca bir sicakliga maruz birakilmasi durumunda bunun aktivitesinin en az %50'sini tutar ve burada sicaklik 5 °C ila 40 °C'dir.

Bir düzenlemede en az bir amino asit, nötr bir veya hidrofilik bir amino asittir. Daha çok tercih edildigi üzere, en az bir amino asit asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilir: alanin, treonin, serin, hidroksiprolin, glisin, prolin, lösin ve histidin. Daha çok tercih edildigi üzere amino asit, alanindir.

Diger bir düzenleme, bilesim ayrica bir veya daha fazla eksipiyan ihtiva eder, tercihen bir ve daha fazla eksipiyan asagidakilerden olusan gruptan seçilir: sükroz, manitol, gliserol, sorbitol, dekstran, trehaloz, hidroksietil nisastasi (HES) ve 1,2-pr0panediol.

Bilesimin ayrica farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ihtiva etmesi tasarlanir.

Bir düzenlemede bilesim, bir özneye intravenöz uygulamaya yönelik uygundur.

Diger bir düzenlemede toplam protein agregasyonu, bilesimin en az 6 aylik süre boyunca bir sicakliga maruz birakilmasi akabinde yaklasik %S'ten daha azda muhafaza edilir. Bu - sicaklik yaklasik 25°C'dir, daha çok tercih edildigi üzere sicaklik 5°C'dir. ikincisinde, tercihen, yaklasik 0.01 M ila yaklasik 3 M'lik toplam amino asit miktari toplam protein agregasyonunu yaklasik %2'den azda muhafaza etmeye yeterlidir. 0 bilesimin pH'i yaklasik 6.3 ila 7.4'tür. o bilesimin pH'I yaklasik 6.7 ila 7.1'dir.

Bir düzenlemede bilesim, liyofilize formdadir.

SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, Örnek 1'in Tablo 1'inde gösterilen sivi API formülasyonlarinin agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir.

Sekil 2, alanin, sükroz veya sükroz/alanin içeren AP] formülasyonlarinin agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir.

Sekil 3, alanin, manitol veya manitol/alanin içeren API formülasyonlarinin agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir.

Sekil 4, alanin, sükroz veya trehaloz içeren API formülasyonlarinin agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir.

Sekil 5, bir hafta boyunca 40°C'de inkübe edilmesi akabinde API formülasyonlarinin agregasyonu üzerinde amino asit konsantrasyon etkisini gösteren bir grafiktir.

Sekil 6, iki hafta boyunca 40°C'de inkübe edilmesi akabinde API formülasyonlarinin agregasyonu üzerinde amino asit konsantrasyon etkisini gösteren bir grafiktir.

Sekil 7, bir oksijen tutucunun farkli konsantrasyonlari ile veya olmadan alanin içeren API formülasyonlarinin agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir.

Sekil 8, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki potansi profilleri gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin ( gösterir; "Alemin” Formülasyon 2'yi (API (50mg/ml)/L-Alanin ( gösterir; gösterir.

Sekil 9, Örnek 6'da açiklanan AP] formülasyonlarinin 5°C'deki nefelometri (NTU) profillerini gösteren bir grafiktir. "Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl ( gösterir.

Sekil 10, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki Spesifik aktivitesini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/m1)/Glisin ( gösterir; "Alanin" Formülasyon 2'yi (API (50mg/ml)/L-Alanin ( gösterir; gösterir.

Sekil 11, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki deamidasyon profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/mlJ/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin [ gösterir; ve "NaCl” Formülasyon 4'ü (API (SOmg/mIJ/NaCl ( gösterir.

Sekil 12, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki agregasyon artisi profillerini gösteren bir grafiktir. "Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/mIJ/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl” Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl (250 mMD gösterir.

Sekil 13, Örnek 6'da açiklanan APl formülasyonlarinin 5°C'deki agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir. ”Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl ( gösterir.

Sekil 14, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki oligomer seviyesi profillerini gösteren bir grafiktir. "Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl ( gösterir.

Sekil 15, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 5°C'deki monomer seviyesi profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin (125 mMJ/Sükroz ( gösterir; ve "NaCl” Formülasyon 4'ü (API (50mg/rnl]/NaCl ( gösterir.

Sekil 16, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki potansi profillerini gösteren bir grafiktir. ”Glisin” Formülasyon 1'i (API (50mg/mIJ/Glisin (SOmg/mIJ/NaCl ( gösterir.

Sekil 17, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki NTU profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml)/Glisin ( gösterir; "Alanin" Formülasyon 2'yi (API (50mg/ml)/L-Alanin ( gösterir; gösterir.

Sekil 18, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki spesifik aktivite profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml)/NaCl ( gösterir.

Sekil 19, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki deamidasyon profillerini gösteren bir grafiktir. "Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl” Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl ( gösterir.

Sekil 20, Örnek 6'da açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki agregasyon artisi profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin" Formülasyon 1'i (API (50mg/ml]/Glisin (/L-Alanin (/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl (250 mMD gösterir.

Sekil 21, Örnek 6' açiklanan API formülasyonlarinin 25°C'deki agregasyon profillerini gösteren bir grafiktir. “Glisin” Formülasyon 1'i (API (50mg/mIJ/Glisin (/L-Alanin (250 mM]) gösterir; “Alanin/Sükroz” Formülasyon 3'ü (API (50mg/ml)/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/ml]/NaCl ( gösterir.

Sekil 22, API formülasyonlarinin 25°C'deki oligomer profilini gösteren bir grafiktir.

Formülasyon 2'yi (API (50mg/ml)/L-Alanin (] gösterir; “Alanin/Sükroz” Formülasyon 3'ü (API (SOmg/mIJ/L-Alanin ( gösterir; ve "NaCl" Formülasyon 4'ü (API (50mg/mI]/NaCl (250 mM]] gösterir.

Sekil 22, API formülasyonlarinin 25°C'deki monomer profilini gösteren bir grafiktir. “Glisin” Formülasyon 1'i (API (50mg/m]]/Glisin ( gösterir; Ä'Alanin" Formülasyon 2'yi (API (50mg/ml]/L-Alanin [] gösterir; gösterir.

Sekil 24, bir API solüsyonunda 40°C'deki 1 hafta, 2 hafta ve 3 hafta agregatina yönelik pH ve protein konsantrasyonuna yönelik bir 2D kontur grafigidir.

Sekil 25, 1 hafta, 2 hafta ve 3 hafta boyunca 40°C'de bir API solüsyonunun bir pH ve agregasyon etkilesimi grafigidir.

Sekil 26, 1 hafta, 2 hafta ve 3 hafta boyunca 40°C'de bir API solüsyonunda agregasyon üzerinde pH etkisini gösterir.

Sekil 27, 1 hafta, 2 hafta ve 3 hafta boyunca 40°C'de bir API solüsyonunda agregasyon profili üzerinde protein konsantrasyonu etkisini gösterir.

DETAYLI AÇIKLAMA Mevcut bulus nispeten stabil bir API içeren bilesimin ayrica bilesime bir veya daha fazla amino asit eklenmesi araciligiyla hazirlanabilecegi kesfine dayalidir. Mevcut tarifname terapötik veya profilaktik etkilere yönelik bir özneye uygulanmasina yönelik API saglanmasina yönelik uygun bir stabil API içeren farmasötik bilesimi kapsar. API (örnegin, normal plazma API seviyelerinden düsük] ile iliskili veya mevcut tarifnamenin özellikle faydali olabilecegi rahatsizliklar ve hastaliklarin sinirlandirici olmayan örnekleri, sinirlama olmadan, akciger hastaligi örnegin kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD) (örnegin, amfizem], karaciger hastaligi, vasküler hastalik (örnegin, intrakranyal anevrizmalar, arteryel fibromüsküler displazi, siddetli kanama rahatsizliklari ve hipertansiyon), panikülit, göz hastaligi [örnegin, anterior üveit], sistemik nekrotizan vaskülit ve Wegener granülomatozu içerir. 1. Bilesim Burada asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: (ii) en az bir amino asit.

Bilesim API ve en az bir amino asitten olusabilir veya baslica olusabilir.

Burada açiklanan bilesim nispeten saf bir formda saglanabilir. Örnegin, bilesim farmasötik bir derecede olarak karakterize edilebilir.

Bilesim, bir kati, bir sivi veya bir yari-kati formda olabilir. Örnegin, bilesim, bunlarla sinirlandirilmadan, bir aköz solüsyon, aköz süspansiyon, yagli süspansiyon, vb dahil bir sivi formülasyon olabilir. Alternatif olarak bilesim, liyofilize bir hazirlanis, kuru toz, kati partiküller, vb olabilir. Diger örnekler, sinirlandirma olmadan, kolloidaller, emülsiyonlar, jeller ve merhemleri içerir.

Bilesim bir sivi formülasyon, tercihen bir aköz solüsyon olabilir. Bilesim farmasötik kullanima yönelik uygun, örnegin farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya seyreltici ihtiva eden bir farmasötik bilesim olabilir.

Bilesim API, amino asit ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ihtiva eden bir farmasötik bilesim olabilir. Burada kullanildigi üzere “farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici" herhangi bir veya tüm solventleri, dispersiyon ortami, kaplamalar ve fizyolojik olarak uygun benzerini içerir. Tasiyicinin türü istenen uygulama yoluna bagli olarak seçilebilir. Bazi düzenlemelerde tasiyici, bunlarla sinirlandirilmadan, intravenöz, inhalasyon, parenteral, subkütanöz, intramüsküler, intravenöz, intraartiküler, intrabronsiyal, intraabdominal, intrakapsüler, intrakartilajinöz, intrakaviter, intraselial, intraselebellar, intraserebroventriküler, intrakolik, intraservikal, intragastrik, intrahepatik, intramiyokardiyal, intraosteal, intrapelvik, intraperikardiyak, intraperitoneal, intraplevral, intraprostatik, intrapulmoner, intrarektal, intrarenal, intraretinal, intraspinal, intrasinovyal, intratorasik, intrauterin, intravesikal, bolus, vajinal, rektal, bukal, sublingual, intranazal veya transdermal araçlar araciligiyla uygulanmaya yönelik uygundur. Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar enjekte edilebilir steril solüsyonlar veya dispersiyonun hazirlanisina yönelik steril aköz solüsyonlar veya dispersiyonlar ve steril tozlari içerir.

Bilesim bir veya daha fazla üretim ve saklama kosulu altinda steril ve stabil olabilir.

Bilesim bir solüsyon, mikroemülsiyon, lipozom veya diger düzenli yapi olarak formüle edilebilir. Örnegin, enjekte edilebilir steril solüsyonlar filtreli sterilizasyon araciligiyla hazirlanabilir. Dispersiyonlar APl'nin bir dispersiyon ortami içeren steril bir araç içine eklenmesi araciligiyla hazirlanabilir. Enjekte edilebilir steril solüsyonlarin hazirlanisina yönelik steril tozlar durumunda tercih edilen hazirlanis yöntemleri, tercihen bunun önceden steril olarak filtrelenmis bir solüsyonundan, bir API tozu ve amino asit ayrica istenen herhangi bir içerik maddesi ihtiva eden bir bilesim saglayan vakum ile kurutma ve dondurarak kurutmadir. Örnek niteligindeki seyrelticiler (örnegin, bilesimin dilüsyonuna, sulandirmasina, ve benzerine yönelik kullanima yönelik), bunlarla sinirlandirilmadan, steril su, enjeksiyona yönelik bakteriyostatik su (BWFI), bir pH tamponlu solüsyonu (örnegin fosfat-tamponlu tuzlu su), steril tuzlu su solüsyonu ve Ringer solüsyonu veya dekstroz solüsyonu içerebilir.

Seyrelticiler istege bagli olarak bir koruyucu içerir. Kullanilan koruyucu miktari, API ile uyumluluga yönelik farkli koruyucu konsantrasyonlari ve koruyucu etkinlik deneyinin degerlendirilmesi araciligiyla belirlenir. inhalasyon terapisi bir aerosol formdaki bir ilacin solunum yoluna uygulanmasini içerir.

Aerosol dagitimi akciger epitelyumunun %95'ine karsilik gelen derin akciger bölgelerine araciligiyla protein aktarimini büyük oranda arttirabilecegi konseptine baglidir. Sivi aerosoller API solüsyonlarinin nebülize edilmesi araciligiyla olusturulabilir. Alternatif olarak, kati partiküller doz ayarli bir inhalasyon cihazindan uygulanan bir itici içinde süspanse edilen bir toz veya bir kuru toz inhalasyon cihazindan uygulanan yalnizca bir toz formunda olabilir. Örnegin, kati partikül aerosolleri solüsyondan API'nin liyofilize edilmesi istenen partikül boyutu dagilimina frezelenmesi veya ögütülmesi araciligiyla hazirlanabilir. Diger bir teknik, bir sürekli sivi beslemesinin atomizasyonu araciligiyla olusturulan dagilmis damlaciklari buharlastirmak üzere bir sicak gaz akimindan Bu yöntemler kullanilarak, API ihtiva eden bilesim, tercihen su-degistirme ajanlari olarak islev gösterenler gibi uygun türlerde ve miktarlarda eksipiyanlar ile ince partiküllere kurutulabilir.

Basinçli doz ayarli inhalasyon cihazlari bu noktada teknikte iyi bilinir. Bir hastanin akcigerlerine veya burnuna ilaçlarin uygulanmasina yönelik uygun olan herhangi bir basinçli doz ayarli inhalasyon cihazi kullanilabilir. Aerosol formülasyonu ve ölçü valfi APl'nin terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili bir miktarini saglamak üzere seçilebilir.

Burada kullanildigi üzere, “API" ifadesinin, spesifik olarak aksi belirtilmedikçe kapsamli olmasi amaçlanir. Ifade, API'nin dogal olarak meydana gelen tüm polimorflarina refere eder. Ifade ayrica API'nin fonksiyonel fragmanlarini, API veya bunun fonksiyonel fragmanlarini ihtiva eden kimerik proteinleri, bir veya daha fazla API amino asitlerinin analog sübstitüsyonlari araciligiyla elde edilen homologlari ve türlerin homologlarini içerir. Ifade ayrica transgenik teknolojinin bir ürünü olan bir API dahil, rekombinant DNA teknolojisinin bir ürün olan tüm API polipeptidlerine refere eder. Örnegin, API'ye yönelik kodlama yapan gen örnegin, bir proteinli bilesigin bir üretilme yöntemini ögreten U.S.

Patent No. 5,322,775 içinde açiklandigi üzere DNA dizisinin meme bezinde ifade edilecegi bir sekilde bir inek peynir alti suyu proteinini kodlayan bir memeli gene yerlestirilebilir.

Ifade ayrica, örnegin, kati-faz peptid sentezi gibi teknikte bilinen yöntemler araciligiyla kimyasal olarak sentezlenen tüm API proteinlere refere eder. Ifade ayrica plazmadan hazirlanan API'ye refere eder. Ifade ayrica ticari olarak elde edilebilen APl'ye refere eder.

API ayrica bir insan veya bir insan-olmayan API'ye karsilik gelebilir.

API, plazmadan-derive API olabilir. API, Cohn Fraksiyonu IV-l macundan hazirlanabilir.

API, bir albumin-olmayan fraksiyon, bir Cohn V çökeltisi veya önceden-saflastirilmis bir API hazirlanisi fraksiyonundan hazirlanabilir. U.S. Patent No. 6,974,792 API hazirlanmasinin bir yöntemini açiklar.

API, rekombinant API olabilir. API'ye yönelik amino asit ve nükleoitid dizileri ve/veya rekombinant API'nin üretimi, örnegin, API dizilerini, rekombinant API ve/veya API'nin Bilesim %90'dan fazla bir safliga sahip bir API ihtiva eder olarak karakterize edilebilir. API API'nin en az yaklasik %50'si, açiklayici bir sekilde, yaklasik %50 ila yaklasik %100, yaklasik %60 ila yaklasik %90, yaklasik %70 ila yaklasik %80'i aktif API olabilir.

Bilesim API'nin terapötik olarak etkili bir miktarini ihtiva edebilir. Bir “terapötik olarak etkili miktar", örnegin, API'nin konjenital eksikligi ile iliskili amfizemin azalmasi veya inhibisyonu gibi istenen terapötik sonucu elde etmek üzere gerekli dozajlarda ve zaman dilimleri boyunca etkili bir miktara refere eder. API'nin terapötik olarak etkili bir miktari, ayri öznenin hastalik durumu, yasi, cinsiyeti ve agirligi ve API'nin öznede istenen bir yaniti ortaya çikarma yetenegi gibi faktörlere göre degisebilir. Terapötik olarak etkili bir miktar ayrica, terapötik olarak faydali etkilerin API'nin herhangi bir toksik veya zararli etkisine agir bastigi miktar olabilir.

Bilesim API'nin profilaktik olarak etkili bir miktarini ihtiva edebilir. Bir "profilaktik olarak etkili miktar”, örnegin, API'nin konjenital eksikligi ile iliskili amfizemin önlenmesi veya inhibe edilmesi gibi istenen profilaktik sonucu elde etmek üzere gerekli dozajlarda ve zaman dilimleri boyunca etkili bir miktara refere eder. Profilaktik olarak etkili bir miktar yukarida terapötik olarak etkili miktara yönelik açiklanan gibi belirlenebilir.

API'nin terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili bir miktarinin belirlenmesi durumunda göz önüne alinabilen bir faktör tedavi alan öznenin, örnegin, öznenin alt solunum yolu veya epitelyal astar sivisi [ELF) gibi bir biyolojik kisminda ifade edilen fonksiyonel olarak aktif API'nin konsantrasyonudur. API'nin terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili bir miktarinin belirlenmesi durumunda göz önüne alinabilen diger bir faktör, API'nin farmakolojisidir [örnegin, farmakokinetik).

API konsantrasyonlari öznenin kanindaki APl konsantrasyonu veya seviyelerine refere eder. Kandaki API seviyelerinin farmakokinetik parametreleri veya ölçüleri egri altindaki alani (AUC), Cmin[d1'ger bir deyisle, dip] ve Cmai(g'i içerir. AUC sabit bir dozlama dilimi Cmi'n (diger bir deyisle, dip seviyesi) sabit bir dozlama dilimi sirasinda APl'nin en düsük kan seviyesidir. Cmaks sabit bir dozlama dilimi boyunca öznenin kanindaki API tarafindan elde edilen en yüksek veya pik seviyedir.

Uygulanan terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili miktar, hedef bir esik seviyesinin üzerinde bir API kan (örnegin, plazma] dip seviyesi elde etmek veya muhafaza etmek üzere yeterli olabilir. Hedef esik seviyesi en az yaklasik 10 mg/dL, açiklayici bir sekilde, Terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili miktar, en az yaklasik 50 mg/dL'lik bir API kan dip seviyesi elde etmek veya muhafaza etmek üzere yeterli olabilir. APl'nin terapötik olarak veya profilaktik olarak etkili miktari, en az yaklasik 80 mg/dL'lik bir kan API dip seviyesini muhafaza etmek üzere yeterli olabilir.

Bilesimdeki API konsantrasyonu en az yaklasik 0.1 mg/ml, açiklayici bir sekilde, en az APl'nin spesifik aktivitesi mg toplam protein basina en az yaklasik 0.05 mg, açiklayici bir 0.6 mg, 0.7 mg veya daha fazla aktif API olabilir.

Bilesimde içerilen API konsantrasyonu, bir agirlik yüzdesi bazinda (w/v), en az yaklasik ila yaklasik %45, yaklasik 20 ila yaklasik %30 (w/v] olabilir.

B. Amino asit Spesifik olarak burada söylenen amino asitlerin yalnizca açiklayici amaçlara yönelik oldugu ve mevcut bulusa göre kullanilabilen amino asitlere sinirlandirici olmasinin amaçlanmadigi anlasilacaktir. Spesifik olarak burada söylenmeyen diger amino asitler gözlemlenen fiziksel ve kimyasal özelliklerine göre kolay bir sekilde kategorize edilebilir.

Ayrica, burada söylenen amino asitlerden bazilari genetik olarak kodlanmis amino asitler bakimindan örneklendirilmistir, ancak, amino asidin genetik olarak kodlanmis amino asitler ile sinirlandirilmasi gerekli degildir, ayrica genetik olarak kodlanmamis amino asitleri içerebilir. Örnegin, amino asit ayrica dogal olarak meydana gelen kodlanmamis amino asitleri ve sentetik amino asitleri (örnegin, ß-alanin, hidroksiprolin) içerebilir.

Serbest amino asit formlari ve/veya fizyolojik olarak kabul edilebilir tuz formlari ve/veya bunun karisimlarinin yanisira ayrica L-enantiomerik amino asitler (L-amino asitler) ve D- amino asitler tasarlanir.

Tablo 1 amino asitlerin sinirlandirici olmayan bazi örneklerini listeler.

Tablo 1. Amino Asitler.

Amino Asit Üç Harfli Kod Tek Harfli Kod glisin Gly G valin Val V lösin Leu L izolösin lle l metiyonin Met M fenilalanin Phe F triptofan Trp w prolin Pro P serin Ser s treonin Thr T sistein Cys C tirozin Tyr Y asparajin Asn N glutamin Gln Q lizin Lys K arjinin Arg R histidin His H aspartik asit Asp D glutamik asit Glu E Bilesim, her biri asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilen en az bir amino asit ihtiva edebilir: Ala (A), Thr (T), hidroksiprolin, Gly (G), Ser (S), Gln (Q), Phe (F), Trp (W), Met (M), asetil sistein, Leu (L), Ile (I), Val (V), Lys (K), Pro (P), Tyr (Y), His (H), Glu (E), Asn (N), Asp (D) ve Arg (R).

En az bir amino asidin her biri asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilebilir: Ala (A), Thr (T), hidroksiprolin, Gly [G] ve Ser (S).

En az bir amino asit Ala (A] veya Gly (G) olabilir.

Amino asit bir nötr amino asit veya bir hidrofilik amino asit olabilir. Bir hidrofilik amino asit, bir konsensüs hidrofobisite ölçegi göre sifirdan az bir hidrofobisite sergiler olarak karakterize edilen bir amino asit olabilir.

En az bir amino asit bilesimde, örnegin en az bir amino aside sahip olmayan bir API bilesimine göre belirlendigi üzere stabil bir API bilesimi saglamak üzere yeterli olan bir toplam amino asit miktarinda mevcut olabilir.

Toplam amino asit miktari, API'nin bir sicaklikta bir zaman dilimi boyunca bir API aktivitesinin en az yaklasik %5'ini, açiklayici bir sekilde, bir sicaklikta bir zaman dilimi boyunca bir API aktivitesinin en az yaklasik %5 ila yaklasik %100, yaklasik %10 ila ila yaklasik %70 ve yaklasik %50 ila yaklasik %60'ini tutacagi sekilde yeterli bir miktar olabilir. Zaman dilimi ve/veya sicaklik bir depolama süresi ve/veya sicakligi [örnegin, raf- ömrü) olarak karakterize edilebilir. Zaman dilimi en az yaklasik: 1 gün, 1 hafta, 2 hafta, 3 API aktivitesi, örnegin, Coan et al., Vox Sang., 48:333 (1985] tarafindan açiklandigi üzere domuz pankreatik elastazin inhibisyonu araciligiyla belirlenebilir. API aktivitesi bir hayvanda bir in vitro, in vivo, ve/veya ex vi'vo belirleme (örnegin terapötik indeks, LDso, EDso, vb.) araciligiyla potansi olarak veya toksisite olarak degerlendirilebilir. Örnegin, liyofilize veya vakum ile kurutulmus API içeren bilesimin bir yigin veya doymus çözeltisi veya sulandirmasindan seri dilüsyonlar akabinde, sulandirilmis veya aköz bilesimde mevcut olan API, biyolojik aktifAPl'niii bilesime eklenmesinden önce sahip oldugu potansi veya toksisitenin en az yaklasik %5 ila yaklasik %100'ünden daha fazlasina sahiptir (en az bir amino asit ve/veya toplam en az bir amino asit miktari varliginda).

AP] stabilitesi, bunlarla sinirlandirilmaksizin, oksidasyon, proteolitik ve/veya deamidasyon ürünlerinin olusumu, moleküler agirlik dagilimdaki degisiklikler, potansideki degisiklikler, fonksiyonellikteki degisiklikler, agregatlar gibi çözünmeyen maddedeki artmalar veya enzimatik olmayan glikasyon gibi eksipiyanlarin varligi nedeniyle ürün modifikasyonu dahil, örnegin API degredasyonunun belirlenmesi araciligiyla belirlenebilir. Ek olarak stabilite, örnegin, volatilizasyon, adsorpsiyon, kimyasal modifikasyon ve benzeri nedeniyle konsantrasyondaki bir degisiklik olarak belirlenebilir. Buna göre, bazi düzenlemelerde, stabil saklama APl konsantrasyonlari %5, saklama bilesimleri ayrica bu karakteristiklerin herhangi bir kombinasyonunu gösterebilir.

Bilesimin toplam amino asit miktari, en az bir amino asit içermeyen bir bilesime göre API'nin bir erime noktasini arttirmaya yeterli bir miktar olabilir. Teknikte uzman bir kisi, örnegin bir diferansiyel taramali kalorimetresi (DSC) kullanarak erime noktasini belirleyebilir. Bilesimin toplam amino asit miktari erime noktasini en az yaklasik: 0.01°C, Bir sicaklikta bir zaman diliminde bilesimin saklanmasi akabinde, bilesimin toplam amino asit miktari, bilesimdeki monomerik API yüzdesinin en az yaklasik %50, açiklayici bir fazla olabilir.

Bir sicaklikta bir zaman dilimi boyunca bilesimin saklanmasi akabinde, bilesimin toplam amino asit miktari, bilesimdeki protein agregatlarinin yüzdesinin yaklasik: %50, %40, olacagi sekilde yeterli bir miktarda olabilir. Zaman dilimi en az yaklasik: 1 gün, 1 hafta, 2 fazla olabilir.

Bir bilesimdeki protein agregasyon seviyeleri, örnegin boyut-dislama yüksek-performansli sivi kromatografisi (SE-HPLC) kullanilmasi araciligiyla teknikte uzman bir kisi tarafindan belirlenebilir.

Bilesimde mevcut olan toplam amino asit miktari en az yaklasik 0.01 M, açiklayici bir yaklasik 0.5 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M olabilir.

Bilesimde mevcut olan toplam amino asit miktari en az yaklasik 0.01 M, en az yaklasik 0.03 veya en az yaklasik 0.3 M olabilir.

Bilesim alanini, en az yaklasik 0.01 M alanin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.01 ila yaklasik 0.75 M alanin olan bir toplam alanin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit alanin olabilir, burada bilesim alanin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim treonini, en az yaklasik 0.01 M treonin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M treonin olan bir toplam treonin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit treonin olabilir, burada bilesim treonin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim hidroksiprolini, en az yaklasik 0.01 M hidroksiprolin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M hidroksiprolin olan bir toplam hidroksiprolin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit hidroksiprolin olabilir, burada bilesim hidroksiprolin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim glisini, en az yaklasik 0.01 M glisin açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M glisin olan bir toplam glisin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit glisin olabilir, burada bilesim glisin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim serini, en az yaklasik 0.01 M serin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M serin olan bir toplam serin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit serin olabilir, burada bilesim serin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim glutamini, en az yaklasik 0.01 M, glutamin açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M glutamin olan bir toplam glutamin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit glutamin olabilir, burada bilesim glutamin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim fenilalanini, en az yaklasik 0.01 M, fenilalanin açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M fenilalanin olan bir toplam fenilalanin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit fenilalanin olabilir, burada bilesim fenilalanin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim triptofani, en az yaklasik 0.01 M triptofan, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M triptofan olan bir toplam triptofan konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit triptofan olabilir, burada bilesim triptofan haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim metiyonini, en az yaklasik 0.01 M metiyonin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M metiyonin olan bir toplam metiyonin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit metiyonin olabilir, burada bilesim metiyonin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim asetil sisteini, en az yaklasik 0.01 M asetil sistein, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M asetil sistein olan bir toplam asetil sistein konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit asetil sistein olabilir, burada bilesim asetil sistein haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim lösini, en az yaklasik 0.01 M lösin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.03 ila yaklasik 0.15 M lösin olan bir toplam lösin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit lösin olabilir, burada bilesim lösin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim izolösini, en az yaklasik 0.01 M izolösin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M izolösin olan bir toplam izolösin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit izolösin olabilir, burada bilesim izolösin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim valini, en az yaklasik 0.01 M valin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M valin olan bir t0plam valin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit valin olabilir, burada bilesim valin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim lizini, en az yaklasik 0.01 M lizin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M lizin olan bir toplam liZin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit lizin olabilir, burada bilesim lizin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim prolini, en az yaklasik 0.01 M prolin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M prolin olan bir toplam prolin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit prolin olabilir, burada bilesim prolin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim tirozini, en az yaklasik 0.01 M tirozin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M tirozin olan bir toplam tirozin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit tirozin olabilir, burada bilesim tirozin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim histidini, en az yaklasik 0.01 M histidin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M histidin olan bir toplam histidin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit histidin olabilir, burada bilesim histidin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim glutamik asidi, en az yaklasik 0.01 M glutamik asit, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M glutamik asit olan bir toplam glutamik asit konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit glutamik asit olabilir, burada bilesim glutamik asit haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim asparajini, en az yaklasik 0.01 M asparajin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M asparajin olan bir toplam asparajin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit asparajin olabilir, burada bilesim asparajin haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim aspartik asidi, en az yaklasik 0.01 M aSpartik asit, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.1 ila yaklasik 0.3 M aSpartik asit olan bir toplam aspartik asit konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit aspartik asit olabilir, burada bilesim aspartik asit haricinde bir amino asit içermez.

Bilesim arjinini, en az yaklasik 0.01 M arjinin, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.17 ila yaklasik 0.3 M arjinin olan bir toplam arjinin konsantrasyonunda ihtiva edebilir. En az bir amino asit arjinin olabilir, burada bilesim arjinin haricinde bir amino asit içermez.

C. Eksipiyanlar Mevcut tarifname, asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim saglar: (ii) en az bir amino asit, burada bilesim ayrica bir veya daha fazla eksipiyan ihtiva eder. Eksipiyanlarin sinirlandirici olmayan örnekleri, polioller, sekerleri sürfaktanlar, antioksidanlar, tuzlari [Örnegin, inorganik tuzlar), metal selatörler, polimerler (örnegin, polietilen glikol (PEG), siklodekstrin, dekstran], üre, guanidyum klorid, polipeptidler [örnegin, antikorlar) ve bunlarin kombinasyonlarini içerir. Buna göre teknikte uzman bir kisi, burada kullanildigi üzere "eksipiyanlar" ifadesinin kapsamli olmasinin amaçlandigini ve protein içeren bilesimler hazirlamak üzere teknikte uzman bir kisi tarafindan yaygin olarak kullanilanlar gibi ajanlari içerebilecegini anlayacaktir.

Eksipiyan bir poliol veya bir seker olabilir. Örnegin poliol veya seker, bunlarla sinirlandirilmaksizin, sükroz, manitol, trehaloz, sorbitol, sorboz, melezitoz, gliserol, fruktoz, mannoz, maltoz, laktoz, arabinoz, ksiloz, riboz, ramnoz, galaktoz, glikoz, ksilitol, eritritol, treitol, rafinoz ve/ veya benzeri olabilir.

Bir veya daha fazla eksipiyanin her biri asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilebilir: sükroz, manitol, gliserol, sorbitol, dekstran, trehaloz, hidroksietil nisasta (HES), sakkarin sodyum, polietilen glikol (PEG) [örnegin, PEG ve 1,2- propanediol. Eksipiyan sükroz veya manitol olabilir.

Bilesimde mevcut olmasi halinde, toplam sükroz miktari, %20'den az (w/v], açiklayici bir sekilde, yaklasik %0 ila yaklasik %15 (w/v], yaklasik %25 ila yaklasik %75 ve yaklasik Her bir eksipiyanin toplam miktari ve/veya bilesimin toplam eksipiyan miktari, örnegin kullanilan eksipiyanlarin türü ve/veya miktari ve/veya API ihtiva eden bilesimde mevcut diger bilesenlerin türü ve/veya miktarina bagli olarak degisebilir.

Bilesim bir sekeri, en az yaklasik 0.01 M seker, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.125 ila yaklasik 0.75 M seker olan bir toplam seker konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Seker, sükroz olabilir. Seker, sükroz olabilir, burada bilesim sükroz haricinde bir seker içermez.

Bilesim bir poliolü, en az yaklasik 0.01 M poliol, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.25 ila yaklasik 0.75 M poliol olan bir toplam poliol konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Poliol, manitol olabilir. Poliol, manitol olabilir, burada bilesim manitol haricinde bir poliol içermez.

Bilesim bir poliolü, en az yaklasik %025 (w/v), açiklayici bir sekilde, yaklasik %025 ila yaklasik 5 [w/v] poliol olan bir toplam poliol konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Poliol, gliserol olabilir. Poliol, gliserol olabilir, burada bilesim gliserol haricinde bir poliol Içermez.

Bilesim bir poliolü, en az yaklasik 0.01 M poliol, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.27 ila yaklasik 0.55 M poliol olan bir toplam poliol konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Poliol, sorbitol olabilir. Poliol, sorbitol olabilir, burada bilesim sorbitol haricinde bir poliol içermez.

Bilesim bir polimeri, en az yaklasik %025 [w/v], açiklayici bir sekilde, yaklasik %025 ila yaklasik 5 (w/v] poliol olan bir toplam polimer konsantrasyonunda ihtiva edebilir.

Polimer, dekstran olabilir. Polimer, dekstran olabilir, burada bilesim dekstran haricinde bir polimer içermez.

Bilesim bir sekeri, en az yaklasik 0.01 M seker, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 1 M ve yaklasik 0.15 ila yaklasik 0.75 M seker olan bir toplam seker konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Seker, trehaloz olabilir. Seker trehaloz olabilir, burada bilesim trehaloz haricinde bir seker içermez.

Bilesim HES'i, en az yaklasik %025 (w/v) HES, açiklayici bir sekilde, yaklasik %025 ila yaklasik 5 (w/V) HES olan bir toplam HES konsantrasyonunda ihtiva edebilir.

Bilesim bir sakkarin sodyumu, en az yaklasik 0.01 M sakkarin sodyum, açiklayici bir olan bir toplam sakkarin sodyum konsantrasyonunda ihtiva edebilir.

Bilesim bir PEG'i, en az yaklasik %025 (w/v) PEG, açiklayici bir sekilde, yaklasik %025 ila yaklasik 10 [w/v) PEG ve yaklasik %1 ila yaklasik 5 [w/v) PEG olan bir toplam PEG konsantrasyonunda ihtiva edebilir. PEG, PEG PEG3350 olabilir, burada bilesim PEG 3350 haricinde bir PEG içermez.

Bilesim 1,2-propanediolü, en az yaklasik 0.01 M 1,2-propanediol, açiklayici bir sekilde, toplam 1,2-propanediol konsantrasyonunda ihtiva edebilir.

Sürfaktanlar, sinirlandirma olmadan, örnegin, polietilen ve polipropilen glikolün blok polimerleri [örnegin, Pluronic F68); veya polietilen glikol sorbitan monolauratlari benzerini içerebilir. Sürfaktan Pluronic F68 veya Tween 80 (diger bir deyisle, Polisorbat 80) olabilir.

Bilesim ayrica bir sürfaktani, en az yaklasik %0.0025 [v/v) sürfaktan, açiklayici bir sürfaktan konsantrasyonunda ihtiva edebilir. Sürfaktan Pluronic F68 veya Tween 80 olabilir.

Burada asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: ihtiva eder. Sinirlandirma olmadan inorganik tuzlarin örnekleri sodyum klorid veya sodyum fosfat içerir.

Inorganik tuz bilesimde en az 0.01 M, açiklayici bir sekilde, yaklasik 0.01 ila yaklasik 0.5 M, toplam inorganik tuz miktarinda mevcut olabilir. Inorganik tuz sodyum klorid, sodyum fosfat veya bunlarin bir kombinasyonu olabilir.

Burada kullanildigi üzere, “antioksidan" ifadesi oksidasyonu azaltan veya önleyen bir ajana refere eder. “Antioksidanlar", bunlarla sinirlandirilmaksizin, metiyonin, glutatyon, asetilsistein, askorbik asit, bütil hidroksil anizol (BI-1A), bütil hidroksil toluen [BHT) ve maleik asidi içerir.

Burada asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: (ii) en az bir amino asit, burada bilesim ayrica bir antioksidan ihtiva eder.

Antioksidan metiyonin olabilir. Antioksidan glutatyon olabilir. Antioksidan bilesimde en az yaklasik %001 (w/v], açiklayici bir sekilde, yaklasik %001 ila yaklasik 5 [w/V) ve yaklasik %005 ila yaklasik 0.7'lik (w/v] bir toplam antioksidan miktarinda mevcut olabilir.

Bir metal selatörün sinirlandirici olmayan örnekleri, etilendiamintetraasetik asit (EDTA), aminofenoksi]etan-N,N,N',N'-tetraasetik asit (BAPTA), hidroksietlen triamin diasetik asit olabilir. Metal selatör EDTA, EGTA, BAPTA, HEDTA veya bunlarin tuzlari olabilir. Bilesim metal selatörlerin bir kombinasyonunu ihtiva edebilir. Metal selatör bilesimde en az yaklasik %001 (w/v), açiklayici bir sekilde, yaklasik %001 ila yaklasik 1 (w/V], yaklasik olabilir.

Burada asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: (ii) en az bir amino asit, burada bilesim ayrica bir metal selatör ihtiva eder.

Buna göre, burada ayrica asagidaki unsurlari ihtiva eden bir bilesim açiklanir: (b) bir amino asit, burada bilesim ayrica bir veya daha fazla eksipiyan ihtiva eder veya ayrica istege bagli olarak ihtiva eder Birçok farkli API içeren bilesimler mevcut bulusa göre saglanir. Bu tür formülasyonlar içindeki aktif içerik maddesi insan veya insan olmayan rekombinant API olabilen APl'dir, ancak yukarida gösterildigi üzere, ayrica plazma kaynaklarindan özütlenen API içerebilir.

APl'nin tek aktif içerik maddesi olarak kendiliginden mevcut olabilmesine ragmen, API ayrica bir veya daha fazla ek aktifiçerik maddesi ile mevcut olabilir. 11. Bilesimin Hazirlanmasina yönelik Yöntem Burada ayrica API ve en az bir amino asit ihtiva eden bir bilesimin hazirlanmasina yönelik bir yöntem açiklanir.

Yöntem, bilesimde mevcut olmasi halinde bir tuzu uzaklastirmak üzere API ihtiva eden birinci bir bilesimin diyaliz edilmesini ihtiva edebilir. Örnegin, birinci bilesim bir tampon ile hazirlanan veya temas ettirilen bir API ihtiva eden bilesim olabilir, burada birinci bilesim tuz ihtiva eder. Bilesim, bunlarla sinirlandirilmaksizin, plazmadan (örnegin, insan plazmasi) API hazirlanmasina veya rekombinant API hazirlanislara yönelik bir yigin üretim prosesinden elde edilen bir bilesim olabilir.

Birinci bilesim bir fosfat tamponunda (örnegin, 20 mM sodyum fosfat, pH 7] API ihtiva edebilir, burada sodyum klorid tamponda, örnegin, yaklasik 100 mM NaCl'de mevcuttur.

Diyaliz etme ultrafiltrasyon/diafiltrasyon [UF/DF) kullanilarak gerçeklestirilebilir.

Yöntem ayrica diyaliz etme adimi akabinde bilesime en az bir amino asit saglanmasini ihtiva edebilir. Eksipiyanlar ve/veya diger reaktifler, vb., amino asit eklemesi akabinde veya amino asit eklemesi sonrasinda amino asit ile eklenebilir.

Yöntem en az bir amino asit ve/veya eksipiyan ve/veya herhangi bir diger reaktif ihtiva eden bir tampona (örnegin, bir fosfat tampon 20 mM, pH 7] karsi AP] ihtiva eden birinci bir bilesimin diyaliz edilmesini ihtiva edebilir.

Yöntem ayrica API içeren bilesimin pH'inin yaklasik 6.0 ila yaklasik 8.0, tercihen yaklasik 6.6 ila yaklasik 7.4'te muhafaza edilmesini ihtiva edebilir. Örnegin, bir tampon tuzu etkili pH araligi elde etmek üzere ilk olarak eklenebilir, akabinde amino asitler ve/veya eksipiyanlar ve/veya herhangi bir diger reaktif/içerik maddesi eklenir. Amino asitler ve/veya eksipiyanlar ve veya diger reaktifler API içeren bilesime eklenmeye yönelik kombine edilebilir.

Burada bir kit, örnegin, API ifadesi veya aktivitesi ile iliskili bir hastalik veya durumun tedavi edilmesine yönelik bir kit açiklanir. Kit mevcut bulusa göre bir bilesim, özellikle bir AP] ve bir amino asit ihtiva eden bir farmasötik bilesim; ve istege bagli olarak, API iliskili hastalik veya durumun, örnegin normalden düsük plazma API seviyeleri ile iliskili veya nedenli bir hastalik veya durumun tedavi edilmesi veya önlenmesine kullanima yönelik talimat ihtiva edebilir.

Kit araciligiyla ayri kaplar saglanabilir, burada en az bir kap API içeren bilesimi ve bir veya daha fazla kapta, farkli bir bilesim, özellikle API hariciden bir aktif içerik maddesi ihtiva eden bir bilesim ihtiva eder. Istege bagli olarak kit, aktif içerik maddeleri ile kombinasyon halinde ve/veya buradan ayri olarak ayri bir kapta diger farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar ve seyrelticileri içerebilir.

Mevcut bulus Örnekler araciligiyla daha detayli olarak açiklanacaktir, ancak bulusun Örnekler ile sinirlandirilmadigi belirtilecektir. ÖRNEKLER API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Hizlandirilmis bir stabilite çalismasi API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesini belirlemek amaciyla gerçeklestirilmistir.

Bir fraksiyon lV-1 üretim ve makro tezgah partisinden hazirlanan APl tuzu uzaklastirmak üzere fosfat tamponlara (20 nM, pH 7] karsi diyalize tabi tutulmustur ve akabinde 100 mg/ml'ye konsantre edilmistir. Diyaliz akabinde, diger içerik maddelerini içeren çesitli API formülasyonlari diger içerik maddelerini içeren 2-kat bir solüsyon eklenmesi araciligiyla elde edilmistir. Sonrasinda nihai API formülasyonu, akabinde ~ 3-4 hafta boyunca 40°C'de sicaklik-kontrollü bir haznede inkübe edilmis 10 ml'lik bir tüp viyal içine nihai formülasyonun yaklasik 2 ml'sinin eklenmesi araciligiyla API stabilitesine yönelik test edilmistir. Numuneler SEÇ-HPLC kullanilarak agregat seviyelerini belirlemek üzere her hafta toplanmistir.

Sonuç Sekil 1'de gösterilir ve Tablo 2'de özetlenir.

Tablo 2. API sivi formülasyonlarinin yüzde agregat seviyeleri Formülasyon [50 mg/ ml API] 40°C'de Agregasyon %'si Yalnizca API 0.1 1.6 3.9 5.7 API + 0.3 M Manitol 0.2 1 2.2 3.6 API + 0.3 M Treonin 0.3 1 2 3.6 Sekil 1 ve Tablo 2'de gösterildigi üzere, tek basina API içeren formülasyon ve 0.1 M NaCl içeren formülasyon en fazla agregasyon miktarini sergilemistir. Sükroz içeren API formülasyonu zamanla olusan en az agregat miktari ile en stabil olmustur.

Hizlandirilmis stabilite çalismasi ayrica 40°C'de API (50 mg/mL); API (50 mg/mL] ve alanin (/sükroz Sekil 2'de gösterildigi üzere, alanin tek basina zamanla yüzde agregat seviyeleri araciligiyla belirlendigi üzere bir API içeren bilesime bir stabilite derecesi vermistir. Ek olarak, sükrozun sinirli bir miktarinin alanin ile kombine edilmesi ayrica tek basina alaninden daha fazla olan bir stabilite derecesi saglamistir.

API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Örnek 1'de açiklanan hizlandirilmis stabilite çalismasi ayrica 40°C'de API (50 mg/mL]; API Sekil 3'te gösterildigi üzere, alanin tek basina zamanla yüzde agregat seviyeleri araciligiyla belirlendigi üzere bir API içeren bilesime bir stabilite derecesi vermistir. Ek olarak, manitolün sinirli bir miktarinin alanin ile kombine edilmesi ayrica tek basina alaninden daha fazla olan bir stabilite derecesi saglamistir.

API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Örnek 1'de açiklanan hizlandirilmis stabilite çalismasi ayrica 40°C'de sükroz, trehaloz ve alaninin farkli konsantrasyonlardaki stabilizasyon etkisini belirlemek üzere yürütülmüstür. Sükroz, trehaloz ve alaninin stabilizasyon etkilerini degerlendirmek amaciyla, sirasiyla 0.25 M, 0.5 M ve 0.75 M'de bu içerik maddelerini Içeren on formülasyon hazirlanmistir ve aseptik olarak 5 ml'lik tüp viyale doldurulmustur. Bu numunelerin 40°C'deki agregasyonu 4 hafta boyunca test edilmistir.

Sonuçlar Sekil 4'te gösterilir. Baslangiçtaki agregat seviye 0'dir. 4 hafta inkübasyon sirasinda, 0.75 M sükroz veya 0.75 M trehaloz formülasyonlarda herhangi bir API agregasyonu saptanmamistir. Ilk haftada 40°C'de herhangi bir agregasyon saptanmamistir. Birinci haftada birikmis çesitli içerik maddelerinin varligi ve agregat seviyesi olmadan API her bir zaman noktasinda en yüksek olmustur. Agregat seviyesi eklenen içerik maddelerinin konsantrasyonundaki artma ile azalmistir. Trehaloz agregasyona karsi en iyi stabilizasyon etkisi saglamistir, bunu sükroz ve alanin takip etmistir.

API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Örnek 1'de açiklanan hizlandirilmis stabilite çalismasi ayrica 40°C'de alanin veya glisin konsantrasyonunun API formülasyonlari üzerindeki etkisini belirlemek üzere formülasyonlarina eklenmistir ve agregat seviyeleri 40°C'de farkli zaman araliklarinda karsilastirilmistir. Formülasyonlarin tümü yaklasik %1.3-1.4 agregat seviyesi ile baslamistir.

Sekil 5 1 hafta boyunca 40°C'de inkübe edilme akabinde alanin ve glisinin farkli konsantrasyonlari ile formüle edilen API sivi solüsyonlarindaki agregat seviyelerini gösterir. Agregat seviyesi alanin ve glisin konsantrasyonundaki artma ile azaltilir. Sekil 6, 2'inci haftadaki agregat seviyelerini gösterir. Sonuçlar 1'inci hafta verileri ile bagdasir.

Agregat seviyesi alanin ve glisin konsantrasyonundaki artma ile azaltilir. 3 ve 4'üncü haftalardaki agregasyon ayrica agregasyonun eklenen daha fazla alanin veya glisin ile daha az oldugunu gösterir [veriler gösterilmemistir].

API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Örnek 1'de açiklanan hizlandirilmis stabilite çalismasi ayrica 40°C'de agregasyon üzerinde oksijen tutucunun etkisini belirlemek üzere yürütülmüstür. Dolayisiyla, API [SOmg/ml) ve alanin [0.25 M) içeren sivi formülasyonlar hazirlanmistir, ayrica %03, %05 ve %0.7 metiyonin içermistir.

Sekil 7 40°C'deki agregasyon profilini gösterir. Agregasyona karsi metiyonin etkisi minimumdur. Agregat seviyesinde herhangi bir kaydadeger azalma gözlemlenmez.

API ihtiva eden sivi formülasyonlarin stabilitesi Alfa-1 proteinaz inhibitörü (API) (insan plazmadan hazirlanmistir; 65 mg/ml potansi) ihtiva eden bir yigin solüsyon 100 mM sodyum klorid içeren 20 mM sodyum fosfat tamponunda elde edilmistir. Ultrafiltrasyon/diafiltrasyon (UF/DF] uç noktaya ulasmak üzere 240 L fosfat tampon kullanilarak yigin solüsyonu [30 L] fosfat tampona (20 mM, pH 7) diyaliz etmek üzere uygulanmistir. Amino asitler ve/veya diger içerik maddeleri daha sonra eklenmistir ve nihai protein konsantrasyonu 50 mg/ml'ye ayarlanmistir. Nihai formülasyon solüsyonu 0.22 um'lik bir filtre araciligiyla filtrelenmistir ve katmanli bir akis basligi altinda doldurulmustur. Doldurma hacmi 20.0 m] olmustur. Viyaller sizdirmaz hale getirilmistir ve etiketlenmistir.

Formülasyon 1 250 mM glisin içermistir; Formülasyon 2 250 mM L-alanin içermistir; sodyum klorid içermistir. Her bir formülasyona yönelik API, 50 mg/ml olmustur ve tampon 20 mM sodyum fosfat tampon olmustur (monobazik ve dibazik heptahidratlarin karisimi). Liyofilize bir ürüne yönelik, sulandirma akabinde çözünürlük süresi/görsel görünüs ve kek nemi dahil ek analizler gerçeklestirilmistir.

Numuneler 5°C ve 25°C'de stabiliteye yerlestirilmistir. Asagidaki testler formülasyon basina baslangiç [süre 0) numunesine yönelik yürütülmüstür: görünüs, telcikler, potansi, pH, SEÇ-HPLC, Azgo'de isik absorbansinin ölçümü, Nefelometri (NTU) ölçümü, kapiler bölge elektroforezi [CZE] araciligiyla protein bilesimi, deamidasyon ve dinamik isik saçilimi gerçeklestirilmistir; sükrozun belirlenmesi iyon kromatografisi araciligiyla gerçeklestirilmistir; nefelometri: türbidite belirlemeleri HACH Oran Türbidimetresi kullanilarak gerçeklestirilmistir; ve APl'nin nicel belirlemesi 96-gözlü bir plaka bazli potansi analizi kullanilarak gerçeklestirilmistir.

Tablo 3 baslangiç analitik testinden sonuçlari gösterir.

Tablo 3: Baslangiç analitik testlerinin sonuçlari.

Formülasyon Test 1 2 3 4 Liyofilize Görünüs (Yalnizca protein partikülleri) Yok Yok Yok Yok 1' Albumin 0 0 0 0 0 Klorid (mEq/L) n/a n/a n/a 96.0 88.0 Deamidasyon (alan %'SÜ 5.9 6.4 6.4 6.7 n/a 2 Çap (mm) 23 25 n/a 25.1 n/a Kütle %'si 0.1 0.1 0 0.1 n/a Kütle %'si 0 n/a 0 n/a n/a °C stabilite verisi: 5°C'de, birkaç telcik 3 ve 6'nci aylarda alanin/ Sükroz ile formüle edilen API'de (formülasyon 3) gözlemlenmistir. Herhangi bir zaman noktasi boyunca herhangi bir diger formülasyonda herhangi bir telcik belirtilmemistir. Potansi (Sekil 8), NTU (Sekil 9), pH, spesifik aktivite (Sekil 10), DLS ve deamidasyon ölçümünde (Sekil 11) herhangi bir kaydadeger degisiklik gözlemlenmemistir. Potansiye (BCS) yönelik nihai kap hassasiyeti Gözlemlenen farklilik analiz degiskenligi içindedir.

Boyut Dislama kromatografisi (SEÇ-HPLC) molekülün hidrodinamik hacme dayali numune proteinini ayirir. SEC-HPLC'de, büyük bir hidrodinamik hacme sahip moleküller kolonun bos hacminde (V0) kolon paketleme ve ayristirmasi ile [mevcut olmasi halinde) minimum etkilesime sahiptir. Daha küçük bir hidrodinamik hacme sahip moleküller bos hacim akabinde kolon paketleme ve kolon ayristirma ile daha fazla etkilesime girer.

Stabilite verisine göre, NaCl ile formüle edilen API (Formülasyon 4) SEÇ-HPLC tarafindan belirlendigi üzere diger formülasyonlar ile karsilastirildiginda nispeten daha yüksek agregat seviyesi sergilemistir. 6'nci ayda agregat seviyesi, sirasiyla NaCl (Formülasyon 4), glisin (Formülasyon 1), alanin (Formülasyon 2) ve alanin/sükroz (Formülasyon 3) oligomer piklerinin degismeden kaldigi görünmüstür (Sekil 14); monomer seviyesi °C stabilite verisi: 25°C'de, 6'nci ayda tüm formülasyonlarda herhangi bir telcik gözlemlenmemistir. Potansi (Sekil 16), pH ve DLS bakimindan az bir degisiklik gözlemlenmistir. NaCl'nin en yüksek deger .

Spesifik aktivite 6 ay boyunca tüm formülasyonlarda 02-03 kadar azalmistir (Sekil 18).

Bu azalma, 6 ay boyunca tüm formülasyonlarda 25 AU'dan yaklasik olarak 28 AU'ya artan A280 absorbansindaki artmaya atfedilebilir (Sekil 19).

Deamidasyon, baslangiç materyalinin yaklasik olarak %6'lik deamidasyon seviyesini açiklayabilen yigin üretim prosesinde meydana gelebilir. Deamidasyon 6 ayda %6'lik baslangiç ortalamasindan %20'ye artmistir. Formülasyon 4'ün diger formülasyonlara (yaklasik olarak %20) göre nispeten düsük deamidasyon seviyesi (%17) sergilemesine ragmen farklilik, %18.5'lik analiz degiskenligi içindedir.

Agregat seviyesi ve oligomer seviyesi artmistir [Sekiller 21-23). Monomer seviyeleri zamanla azalmistir (Sekil 23). Monomer seviyesindeki azalma agregat ve oligomer artmasinin toplami ile karsilastirilabilir. 6 ayda, agregat seviyesi sirasiyla Formülasyon 4, artmistir. 6 ay boyunca 5°C'de inkübasyon akabinde, potansi, pH, spesifik aktivite, DLS ve deamidasyon ölçümleri bakimindan herhangi bir belirgin degisiklik gözlemlenmemistir.

Agregat seviyesi ve monomer seviyesindeki karsilik gelen azalmalarda nispeten artmalar (

Claims (7)

1. ISTEMLER
2. API ihtiva eden bir bilesimin stabilizasyonuna yönelik olarak en az bir amino asidin kullanimi olup, burada en az bir amino asit 0.01 M ila 3 M toplam amino asit miktarinda mevcuttur, ve burada API, bilesimin en az 6 ay boyunca bir sicakliga maruz birakilmasi durumunda aktivitesinin en az %SO'sini muhafaza eder, burada söz konusu sicaklik 5 °C ila 40°C'dir.
3. Istem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi en az bir amino asidin, bir nötr veya hidrofilik amino asit olmasidir. lstem 1'e göre sunulan kullanim olup, Özelligi en az bir amino asidin asagidaki unsurlardan olusan gruptan seçilmesidir: alanin, treonin, serin, hidroksiprolin, glisin, prolin, lösin ve histidin. istem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi amino asidin alanin olmasidir. lstem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin ayrica bir veya daha fazla eksipiyan ihtiva etmesidir.
4. Istem S'e göre sunulan kullanim olup, özelligi bir ve daha fazla eksipiyanin asagidakilerden olusan gruptan seçilmesidir: sükroz, manitol, gliserol, sorbitol, dekstran, trehaloz, hidroksietil nisasta (HES) ve 1,2-pr0pandiol. lstem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin ayrica farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ihtiva etmesidir. lstem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin bir denege intravenöz uygulamaya yönelik uygun olmasidir. istem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi toplam protein agregasyonunun, bilesimin en az 6 aylik süre boyunca bir sicakliga maruz birakilmasinin akabinde lstem 9'a göre sunulan kullanim olup, Özelligi sicakligin 25°C olmasidir. istem 9'a göre sunulan kullanim olup, özelligi sicakligin 5°C olmasidir.
5. Istem 11'e göre kullanim olup, özelligi 0.01 M ila 3 M'lik toplam amino asit miktarinin toplam protein agregasyonunu %Z'den az olacak sekilde muhafaza etmeye yeterli olmasidir.
6. Istem 9'a göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin pH degerinin 6.3 ila 7.4 olmasidir. istem 9'a göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin pH degerinin 6.7 ila
7. 7.1 olmasidir. istem 1'e göre sunulan kullanim olup, özelligi bilesimin liyofilize formda olmasidir.