SU707320A1 - Способ получени низина - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, а именно производству низина, используемого в пищевой прЬмышленности.

Известен способ пол иени  Низина путем выращивани  продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием , высаливанием, фильтрацией и высушиванием 1.

Однако препарат, полученный известным способом, нестабилен при хранении .

Цель изобретени  - стабилизаци  активности низина в процессе хране-г ни .

Это достигаетс  тем, что продуцен выращивают на среде, содержащей молочную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сорбиталем С .20, фильтрацию осуществл ют через фильтр-перлит, полученную пасту ни- . зин-перлит раствор ют в 0,02 н.растворе НСЙ , затемпровод т повторную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натри  напылением на казеинат натри  при их соотношении 1-2: 2,3-1,3.

Кроме того, выращивание ведут при рН 6,8-7,0...

А с целью утилизации отходов фер- ментации, осадок после отделени  культуральной жидкости подвергают гидролизу пектофоэтидином П10Х или амилоркзином и ввод т- в состав пита0 тельной среды в качестве источника азота при повторной ферментации.

Способ осуществл ют следующим образом .

Приготавливают экстракт кормовых

5 дрожжей. Дл  этого 250 г сухих кормовых дрожжей заливают 2,5 л теплой водопроводной воды, настаивают 2 ч, кип т т на с.лабом огне в течение 15 мин, фильтруют и стерилизуют в автоклаве

0 при О-,7 атм 20 мин. Добавл ют в среду 18-20% экстракта, до содержани  в среде 60-70 мг/% аминного азота.

Гидролизат отходов готов т следую:щим образом.

5

Отходы (биомасса, молочные белки , с перлитом) получают фильтрацией через перлит культуральной жидкости предыдущей .ферментации, выход с 20 л составл ет 500-600 г. Отходы разбав0 л ют водопроводной водой в соотношеНИИ 1:5, тщательно перемешивают до однородной массы и подогре;в1айтдо , получаемый рН 2,5-3,0 ср этветствует оптимуму действи  пектофоэтиДина П10Х; в случав амилориэина оптимум рН 4,5-7,0. Ферментдобавл ют . в количестве 0,20-0,25% к гидролизуемому объёму (фёрмён:гы 1 ёй§1рительно раствор ют в небольшом объёме воды). Гидролизпровод т в течение 24-30 ч при с антисептиком хлороформом - «л 5 мл/л. По окончании гидролиза смесь кип т т 20-30 мин до исчезновени  запаха хлороформа; твердую фазу удал ют фильтрацией или центрифугированием; гидролизат стерёлиЗуют при 0,7 атм 20 мин. Добавл ют в среду 10-12% 1$ гидролизата до содержани  Ь среде ЬО-70 мг/% аминного азота.

П р и мёр 1. К 18 л мЬЛочной сыроворотки добавл ют 4л (20%) ёкстракта кормовьк дрожжей, полученного 20

описанным способом. Среду стерилизуют при 20 мин, охлаждают до 28-30 С, довод т рН до 6,8-7,0, за севают 3-Ь% инокул та 18-20 часового возрас.та низинообразующего штамма 55 StrvBactis. Культивируют при 28-30С с посто нно автоматически регулируе , мой кислотностью среды IB пределах рН tj,8-7,0 введением 40% щелочи (NapH i или КОН). Ферментации закайчйвают в момент замедлени  сдвига кислотности, автоматически регйстрируемого прибо-; -

ром. Длительность ферментации 12-1бч.. Активность культуральной жидкости, достигает 4-6 тыс ч ед/мл, или 100-150 МКС/мл.35

Начина  до второй ферментации пи:татёльнрй с рёд6йслужив молоч воротка с 10-12% гидролизата отходов (от 1-й и кажйой последующей ферментации ) , полученного указанным спосо- 40 бом. Культуральную жидкость 1/2 и всех последующих ферментации подвергают переработке по операци м. Так Культуральную жидкость, содержащую 100 мкг/мл низина (обща  активность .. 2.10 мкг) закисл ют 18% НСР до рН 2,2-2,5 и прогревают в течение 3-5 мин до 95-100 0, охлаждают до . и фильтруют через перлит. ТверЙ фазу (отходы) направл ют на гид «. ролиз. Объем фильтрата 20 л, актив- . ность 97 мкг/мл, (обща  активность . ,. J 1,94-10 мкг) , вь1ход 97%. Полученный фильтрат с активностью 97 мкг/мл подвергают ,вспениванию при рН 4,0-4,5 с сорбиталем С-20 0,03%. Объем пен-

ного продукта 2л, активность 920,1 мкг/мл, обща  айтив1нрсфь 1,84-10 мкг выходактивности в пену от фильтрата пенного п родукта низйй йШали- 0 вают сухой Nace (25%), рН 2,2-2,5.Высоденный антибиотик подвергают вакуум-фильтрации через перлит, ОтдеrtiesHiftyio пасту низ ий-1 ё рййг1 гШ18

р ют в 0,02 н.. растворе ЙСв, и снова jj

l i ii 707320

подвергают вакуум-фильтрации и промывке . Объём полученного жидкого концентрата 400 мл, активность 4425 мкг/мл, обща  активность 1,77 .«10 мкг, выход от пены 96% или.90,7% от фильтрата, содержание сухих веществ 3%. : .

П р и м ер 2. к 18 д молочной дЫйорЬтки добавл ют. 2,1 л ферментивного гидролизата отходов, полученных указанным способом, среду стерилизую охлаждают до 28-30с, рН довод т до 6,8-7,0 и засевают 3-5% инокул та 18-20 часового возраста Str. gactis.

Культивируют при постр нной авхонатически регулируемой кислотности среды в пределах 6, 8-.7,0 путем введени  40% щелочи (NaOH или КОН). Ферментацию заканчивают в момент замедлени  сдвига кислотности, автоматически ;шме 1аемрго прибором. ДлиТельноЬть ферментации 12-16 ч. Активность к. ж. 150 мкг , обща  активность 3 10°. мкг. После фильтрации через фильтро-перлит и промывки осад1 :а вЬдой с рН 2,3 объем фильтрата равен 20 л с активностью 145 мкг. . обща  активность фильтрата 2,9 , выход активности от культурной жидкости 97%. Одноступенчатым .вспениванием получают 2 л пенного продукта с l40 мкг -J/wn активностью; обща  акЖвнбсть Пены 2,8010 мкг  : После высаливани  сухим NaCf провод т фильтрацию через перлит; раство . р ют и фильтруют срезанную пасТу низина с перлитом, получаютгобъем концентрата Кл в количестве 400 мл с активностью 2,78-10 мкг, , что составл ет 96% от фильтрата. Содержание суХих.веществ 2,5%. Учитываем потери привысушивании- (8-10%), т.е, 2,78-10 - р,28-.10 2,.

Дл  получени  количества порошка 2,5010 :20 (стандартна  активность по ТУ) 125 г должны получить, из них 10 г падает на сухой вес (2,5%) 125 г - ГО t- 115 г. Общего, наполнител  до/1жнр быть задано 115 г, т.е 57,2 г NaCe и столькоже казеината натри  (115:2 57,2), NaC добавл ютв 400 мл концентрата низина - К и напыл ют на 57,2 г,белкового в псевдоожиженйрм слое. Сухого препарата получают 125г с активнЪстью 20 мкг, ЗГ в мг dyxorp вещества, что составл ет 86% от активности фильтрата,

В таблице представлена активность препарата низина при хранении в услови х холодильника (4 - ) в течение года, .(Опре едена методом диффузии в агар с тест-культурой BacvcoaguPans I 15,. Погрешность метода 10-12%) ,

.Предлаг емьай способ прзвол ет испрдьзовать недорсз х ие и недефицитные ферменты, используема , среда дешевле известной в 5-6 раз, получаемый препарат обладает стандартной активностью в 20 мкг/мл сухого вещества и

Активность, ед/мг сухого препарата

Сроки хранени  в мес цах О-J 3 J 6 Г 9 Г 12

1804+80 800+64 792+52 784+56 800+76

2820+52 804+56 792+84 820+72 820+68

31040 76 976+76 936+96 984+88 984+84

Claims (3)

1. Способ получени  низина путем выращивани  продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки, с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концеНтрированием ,высаливанием, фильтрацией и высушиванием , о т л и ч а ю щ и и с   тем, что, с целью стабилизации активности низина в процессе хранени , продуцент выращивают на среде, седёржащей молочную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную куЛЬтуральную ЖИДКОСТЬ концентрируют -с сорбиталем С-20, фильтрацию осуществл ют через фильтр-перлит, полученную пасту низин-перлит раствор ют в 0,02 и. растворе HCf,затем провод т повтор:т;абилен при хранении в течение 2 пет.

. -,ii-A-S,-.,Slf

ную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натри  напылением на каэёйнат натри  при их соотношении 1-25 2,3-1,3.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что выргицивание ведут при рН.6,8-7,.0.

3.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что, с целью утилизации отходов ферментации, осадок после отделе№й- Я -1 : зге ур ай 6й жидкости подвергают гидролизу пектофоэтидйном П10Х или амилоризином и ввод т в состав питательной среды в качестве источника азота при пО:Йторной ферментации .

Источники информации, прин тые во внимание при эк ;пертизе

1.Патент СССР № 42751Ь кл. С 12 D 9/12. 1976.