SU663404A1

SU663404A1 - Method of obtaining fibrin monomer

Info

Publication number: SU663404A1
Application number: SU762437992A
Authority: SU
Inventors: Людмила Анисимовна Ляпина; Александр Михайлович Ульянов; Евгения Семеновна Житникова
Priority date: 1976-12-30
Filing date: 1976-12-30
Publication date: 1979-05-25

Description

II

Изобретение относитс к области медицины а именно получению аналитических препаратов и может быть использовано в биохнмии, физиологии и фармакологии.This invention relates to the field of medicine, namely to the preparation of analytical preparations and can be used in biochemistry, physiology and pharmacology.

Известен способ получени фибрин-мономера путем добавлени к раствору фибриногена раствора тромбина, отделени образовавшегос сгустка и обработки его раствором мочевины .A known method for producing a fibrin monomer is by adding a thrombin solution to the fibrinogen solution, separating the clot formed and treating it with a urea solution.

Однако такой способ длителен (до 3 суток ), а выход целевого продукта невысокий1-10% .However, this method is long (up to 3 days), and the yield of the target product is low1-10%.

Целью изобретени вл етс повышение выхода целевого продукта и ускорение способа .The aim of the invention is to increase the yield of the target product and accelerate the method.

Это цель достигаетс тем, что перед добавлением раствора тромбина к раствору фибриногена добавл ют монойодацетамид или монойодуксусную кислоту, в концентрации 0,001-0,05 М на 1 л раствора и эпсилонаминокапроновую кислоту.This goal is achieved by adding monoiodoacetamide or monoiodoacetic acid to a solution of fibrinogen before the addition of the thrombin solution, in a concentration of 0.001-0.05 M per 1 liter of the solution and epsilonaminocaproic acid.

Способ осуществл ют следующим образом.The method is carried out as follows.

К 1000 мл 0,2%-ного раствора фибриногена добавл ют монойодуксусную кислоту или монойодацетамид в конечной концентрации 0,001-0,05 М и эпснлонаминокапроновую кнслоту в концентрации 0,3-0,6% с последующим добавлением к фибриногену 100-200 ед. активности тромбина в объеме 10 мл физиологического раствора. Образующийс сгусток собирают стекл нной папочкой, отжимают, промывают Б физиологическом растворе и перенос т в 100 мл 10-20%-ного раствора мочевины в ацетатном буфере (рН 5,2). Сгусток раствор ют , например, с помощью магнитной мешалки при комнатной температуре. После растворени сгустка раствор белка разбавл ют 800 мл физиологического раствора и добавл ют 200 мл буфера Палитча. Сгусток снова собирают , отжимают, промывают в физиологическом растворе и раствор ют в минимальном объеме раствора мочевины. Эту операцию повтор ют 3-4 раза. В результате получают 50-100 мл р,5-1%-ного раствора фибринмономера , который хран т при 4-5 С. Все операцин по выделению фибрин-мономера можно проводить при комнатной температуре .To 1000 ml of a 0.2% fibrinogen solution are added monoiodoacetic acid or monoiodoacetamide at a final concentration of 0.001-0.05 M and an esnlonaminocaproic acid concentration of 0.3-0.6% with subsequent addition of 100-200 units to fibrinogen. activity of thrombin in a volume of 10 ml of saline. The resulting clot is collected with a glass dad, wrung out, washed with B saline solution and transferred to 100 ml of 10-20% urea solution in acetate buffer (pH 5.2). The clot is dissolved, for example, using a magnetic stirrer at room temperature. After the clot has dissolved, the protein solution is diluted with 800 ml of physiological saline and 200 ml of Palitch buffer is added. The clot is collected again, drained, washed in saline and dissolved in a minimum volume of urea solution. This operation is repeated 3-4 times. The result is 50-100 ml of p, 5-1% solution of fibrin monomer, which is stored at 4-5 C. All operations for isolating fibrin monomer can be performed at room temperature.

iaiiSKu -bist jf riiaiiSKu -bist jf ri

Дл длительного (более 1,5 мес использовани полученного препарата последнюю операцию по растворению фибрин-мономера провод т не в 10-2да-ном растворе мочевины в ацетатном буфере, а в 0,025-0,002 М растворе уксусной кислоты, раствор белка замораживают и высушивают в вакууме.For a long time (more than 1.5 months of use of the obtained preparation, the last operation to dissolve the fibrin monomer is carried out not in 10-2 d-urea solution in acetate buffer, but in 0.025-0.002 M solution of acetic acid, the protein solution is frozen and dried in vacuum .

Предлагаемый способ позвол ет сократить процед)фу выделени с 3 суток до 4-6 час, увеличить выход фибрин-мономера в 5-7 раз, а также повысить степень чистоты более, чем на 2% по сравнению с известным способом. Способ осуществл ют без применени дорогосто щих ирепаратов и аппаратуры в услови х биохимических лабораторий.The proposed method allows reducing the extraction procedure from 3 days to 4-6 hours, increasing the yield of the fibrin monomer by 5-7 times, as well as increasing the degree of purity by more than 2% compared with the known method. The method is carried out without the use of expensive drugs and equipment in the conditions of biochemical laboratories.

Claims

The method of obtaining the fibrin monomer by adding thrombin solution to the fibrinoten solution, separating the clot formed and treating it with a urea solution, characterized in that, in order to increase the yield of the target product and accelerate the process, before adding the thrombin solution to the fibrinogen solution. monoiodoacetamide or ozosossous acid in a concentration of 0.001-0.05 M per I liter of solution and epsibonamino caproic acid.