SU510479A1 - Способ иммобилизации протеолитических ферментов - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к области производства ферментов и может быть использовано в пищевой, медицинской и микробиологической промышленности.

В насто щее врем  используютс  способы иммобилизации протеолитических ферментов на носител х органического и неорганического происхождени , таких, как производные целлюлозы, полиакриламида, декстраиов и других, а также бентонит, волластонит, силикагель , окиси алюмини  и никел , гидрокисапатит и пористые стек.ла, при этом неорганические носители более устойчивы к действию микроорганизмов, щелочей, кислот, температуры , не набухают и не измен ют своего объема в зависимости от рН среды и ионной силы растворов.

Известен способ иммобилизации протеолитических ферментов путем смещивани  при кислом значении рН фермента, активатора и кремнеземсодержащего носител , предварительно обработанного производным аминоалкилсилана , с последующим отделением и промывкой иммобилизованного фермента.

С целью улучшени  качества ферментов по предлагаемому способу в качестве кремнеземсодержащего носител  используют силохром, а смещивание ведут при рН 4,5-5,5 и порционном добавлении активатора.

Способ осуществл ют следующим образом.

Протеолитический фермент, например пепсин , ввод т в контакт с водорастворимым активатором карбоксильных групп фермента - карбодиимидом и предварительно обработанным производным аминоалкилсилана кремнеземсодержащим носителем - силохромом.

Смешивание ведут в дистиллированной воде при рН 4,5-5,5 и порционном добавлении активатора. После окончани  реакции водный раствор удал ют декантацией, а иммобилизованный фермент промывают последовательно растворами сол ной кислоты, хлористого натри  и ацетатного буфера при рП 5,0 дл  сн ти  с носител  адсорбированного

за счет полного обмена фермента.

Пример. 50 мг пепсина, 22 мг водорастворимого п-толуолсульфоната - 1 - циклогексил - 3 - (2 - морфоминоэтил)-карбодиимида и 0,5 г .предварительно обработанного производным аминоалкилсилана силохрома смешивают в дистиллированной воде в теченне одного часа при 20°С, поддержива  рН смеси 4,5-5,5.

Затем к смеси вторично добавл ют 22 мг

карбодиимида и продолжают перемешивание в течение двух часов при 20°С и рП 4,5-5,5.

Далее водный раствор удал ют декантацней , а иммобилизованный пепсин промывают последовательно растворамн 0,01 М НС1

1,0 М NaCl и 0,1 М ацетатного буфера при

3

рН 5,0 дл  сн ти  с носител  адсорбированного за счет нолного обмена фермента.

Количество ковалентно присоединенного к носителю фермента определ ют путем гидролиза иммобилизованного фермента в присутствии 5,7 М НС1 при 105°С в течение 24 ч в вакумме, при этом установлено, что к 1 г силохрома .ковалентно присоедин етс  40- 50 мг фермента. Активность иммобилизованного пепсина определ ют по высокомолекул рному субстрату гемоглобина.

Установлено, что активность препарата, полученного по предложенному способу, при хранении его во влажном состо нии при рН 5,0 не мен етс  в течение нескольких мес цев, а иммобилизованный фермент практически

полностью сохран ет активность

исходного нативного пепсина.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ иммобилизации протеолитических ферментов путем смешивани  при кислом значении рН фермента, активатора и кремнеземсодержащего носител , предварительно обработанного производным аминоалкилсилана, с последующим отделением и промывкой иммобилизованного фермента, отличающийс  тем, что, с целью улучшени  качества ферментов , в качестве кремнеземсодержащего носител  используют силохром, а смешивание ведут при рН 4,5-5,5 и порционном добавлении активатора.