SU1693061A1 - Способ внутривидовой идентификации менингококков - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологии , в частности к выделению, идентификации микроорганизмов Цель изобретени  - повышение точности способа внутривидовой идентификации менингококков. Способ включает выращивание культуры на твердой среде, суспендирование клеток в физиологическом растворе, центрифугирование суспензии и фракционирование полученного супернатанта электрофорезом в по- лиакриламидном геле Идентификацию микроорганизмов провод т путем сравнени  белковых спектров исследуемой и эталонных культур

Description

(Л

с

Изобретение относитс  к микробиологии , в частности к выделению, идентификации микроорганизмов позвонит идентифицировать культуры менингококков по соответствующим серогруппам, прин тым при серотипировании по капсульному антигену, что имеет теоретическое значение при физиолого-биохимическом и иммунологическом изучении основ жизнеде тельности микроорганизмов, и может использоватьс  в микробиологии эпидемиологии , при стандартизации лечебно-профилактических , диагностических и биологических препаратов

Наиболее распространенными методами определени  различных капсульных полисахаридов или различных серогрупп N. meningitidis  вл ютс  реакци  агглютинации на стекле и по Ноблю Хот  приемы серогруппировани  различны все они основаны на обнаружении с помощью соответствующего антитела общего специфического антигена - капсульного полисахарида При постановке всех этих реакций необходимы наборы диагностических сывороток. При постановке серологических реакций большое значение имеет качество используемых им- муных сывороток, т е. их специфичность, уровень активности (по IgM и IgG антителам ), диапазон охвата. Недостатками методов серогруппировани   вл ютс  трудности при производстве биологических препаратов в четкости соблюдений соотношений IgM, IgG антител, снижение специфичности при значительном повышении активности, использование сывороток разных производств , разного времени выпуска, что обусловливает расхождени  в результатах группировани  быстра  потер  специфического капсульного антигена у произведето ю со о о

венных и контрольных штаммов, необходимость применени  дл  его восстановлени  длительных трудоемких методик.

Дл  серогруппировани  менингококков наиболее широко примен етс  реакци  агглютинации на стекле, котора  ставитс  следующим образом. Пастеровской пипеткой нанос т на обезжиренное спиртом предметное стекло каплю сыворотки в нужных разведени х. В каждую каплю сыворотки внос т петлю 20-часовой агаровой культуры и тщательно перемешивают. Постановка реакции требует одномоментного использовани  основного набора диагностических сывороток (А, В, С, X, Y, Z, 135w, 29E) и должна сопровождатьс  дополнительным контролем физиологического состо ни  культуры менингококка. Учет реакции провод т в течение 1-5 мин.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности способа.

Менингококки, выделенные от больного носител  или хран щиес  в ампулах в лио- филизированном состо нии (после растворени  физиологическим раствором), высевают на питательную среду с добавлением крови или сыворотки. Затем 0,1 мл полученной микробной массы перенос т на покрытый целлофановым диском агар Хот- тингера, содержащий 20% лошадиной инак- тивированной сыворотки, разлитой в чашки Петри,

После 5-часового культивировани  при 37°С культуру смывают 1 мл физиологического раствора (рН 7,4) с мертиолатом в концентрации 1:10000, центрифугируют при 6000 g 30 мин. Супернатант, содержащий внеклеточные белки, хран т при - 20°С проведени  электрофореза.

Диск-электрофорез провод т общеприн тым методом, использу  в качестве образца 0,1 мл надосадочной жидкости. Полученные электрофореграммы сравнивают .

Было изучено 40 штаммов N. meningitidis восьми серологических групп. Два - три штамма представл ли каждую серологическую группу. В работу были вз ты культуры,  вл ющиес  международными эталонными, и хран щиес  во Всесоюзном музее патогенных культур ГИСК им. Л.А.

Тарасевича МЗ СССР. Обнаружено, что штаммы одной серогруппы имели одинаковый рисунок расположени  белковых фракций на протеинограмме и отличались от

протеинограмм культур других серогрупп, т.е. штаммы каждой из 8 серологических групп имели характерный только дл  них белковый спектр и отличались друг от друга по электрофореграммам. Этот признак не

зависит от состо ни  попул ции (S, OS-форма ), уровн  содержани  или отсутстви  кап- сульного антигена, культивировани  на различных питательных средах, времени и способа хранени  культур.

Предлагаемый способ позвол ет идентифицировать культуры менингококка на внутривидовом уровне по серогруппам исключив трудоемкий этап изготовлени  высокоспецифических диагностических

сывороток и подготовку с помощью селекции культур менингококков, содержащих капсульный антиген. С помощью данного способа повышаетс  точность анализа, так как можно получить белковый спектр каждои культуры. Набор белков, выдел емый культурой в среду,  вл етс  стойкой характеристикой .

Изобретение может быть использовано при диагностике менингококковых инфекций , при эпидрасследовани х, при массовом обследовании населени . Способ может использоватьс  даже при выделении от больных и носителей спонтанно полиаг- глютинабельных и инагглютинабельных

штаммов в случа х, когда применение серологических методов неэффективно.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ внутривидовой идентификации

   менингококков путем выращивани  исследуемой культуры на плотной питательной среде, отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности, культуру, выращенную на плотной среде, суспендируют в физиологическом растворе, центрифугируют, фракционируют полученный супернатант электрофорезом в полиакриламидном геле, получают спектры внеклеточных белков, а идентификацию провод т путем сравнени 

   белковых спектров исследуемой и эталонных культур.