SU1611929A1 - Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ - Google Patents
Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1611929A1 SU1611929A1 SU894638932A SU4638932A SU1611929A1 SU 1611929 A1 SU1611929 A1 SU 1611929A1 SU 894638932 A SU894638932 A SU 894638932A SU 4638932 A SU4638932 A SU 4638932A SU 1611929 A1 SU1611929 A1 SU 1611929A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- cells
- decontamination
- spev
- medium
- cell lines
- Prior art date
Links
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 6
- UPCOSYBELNEQAU-UHFFFAOYSA-L (2-decoxy-2-oxoethyl)-[2-[(2-decoxy-2-oxoethyl)-dimethylazaniumyl]ethyl]-dimethylazanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].CCCCCCCCCCOC(=O)C[N+](C)(C)CC[N+](C)(C)CC(=O)OCCCCCCCCCC UPCOSYBELNEQAU-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims 2
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims 1
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 25
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 abstract description 9
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229930187135 Olivomycin Natural products 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 1
- CZDBNBLGZNWKMC-MWQNXGTOSA-N olivomycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1)O[C@H]1O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@H](O)[C@H](OC)[C@H](C)O1 CZDBNBLGZNWKMC-MWQNXGTOSA-N 0.000 description 1
- 229950005848 olivomycin Drugs 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биологии, а именно к культивированию клеток животных IN VITRO дл вирусологических и биотехнологических исследований. Цель изобретени - повышение степени деконтаминации. Способ состоит в комбинированной обработке СПЭВ-ТК-клеток 5-бром-2-дезоксиуридином(150-250 мкг/мл), этонием (5-15 мкг/мл), канамицином (200-300 мкг/мл) на прот жении трех пассажей в ростовой среде. Способ отличаетс высокой эффективностью деконтаминации СПЭВ-ТК-клеток. На прот жении дес ти пассажей (срок наблюдени ) без дальнейшей обработки клетки свободны от микоплазм.
Description
Изобретение относитс к области биологии, а именно к культивированию клеток животньк in vitro дл вирусологических и биотехнологических исследований .
Целью изобретени вл етс повышение степени деконтаминации.
Пример 1. Клетки мутантног-о штамма СПЭВ-А4-ТК высевают в культура льные флаконы объемом 100 мл в - коцентрадии 0,5 х 10 к /мл в ростовую среду, содержащую 200 мкг/мл 5-БДУ 5-бром-2-дедоксиуридин (5-БДУ), мкг/мл: этоний 10 и кана- мицин 250. На 10-12 сут культивировани после формировани очагового моносло клетки пересевают и повтор ют цикл обработки.клеток препара- тами второй раз, а затем третий раз. После третьего цикла обработки клеток микоплазмы на элективных питательных средах не вы вл ютс и результаты по ДНК-флуорохромировангео клеток также отрицательны. При дальнейшем культивировании на прот жении 2 мес цев (10 пассажей) без препаратов и антибиотиков клетки свободны от микоплазм (срок наблюдени ).
Пример 2. Клетки мутантиого штамма СПЭВ-13-Д5-ТК- высевают в
а
х tc
со
ультуральные флаконы объемом 100 мл IB .концентрации 1,0 х 10 кл/мл в (ростовую среду, содержащум,мкг/мл: -ВДУ 200, этоний 10 и канамицин : 1250. На 10-12 сут Культивировани сле формировани очагового моно- 1сло клетки пересевают и повтор ют |цикл обработки клеток, препаратами второй раз. После третьего цикла об- 1работки клеток микоплазмы на элективный: питательных не вы вл ютс , и результаты ДНК-флуорохромиро- вани культур раствором Хехст-33258 |и оливомицином также отрицательны. |При дальнейшем культивировании на Прот жении 2 мес (Ю пассажей) -без litpenai зтов и антибиотиков клетки сво- |бЬдны от микоплазм (срок наблюдени ) I П р и м е р 3, После криогениза- |1щи в течение 1 мес.рекультивировали клетки штаммов СПЭВ-13-А4-ТК и СПЭВ-13-Д5-ТК , свободные от мико- плазм. На прот жении 5 пассажей (срок наблюдени ) клетки обоих штаммов культивировали в ростовой среде без антибиотшсрв. Результаты культивировани микоплазм:. на элективных питательных средах и ДИК-флуорохромнро- вани клеток раствором Хехст-33258 и оливомицином свидетельствуют о том, что клетки штаммов СПЭВ-АА-ТК и СПЭВ-13-Д5-ТК свободны от микоплаз
р и м е р 4. Клетки двух мутантных штаммов СПЭВ-АА-ТК- и СПЭВ-13-Д5-ТК контаьшнированных микоплазмами, и тех штаммов, свободных от микоплазм высевают в концентрации 2,0 х .X 10 кл/мл в ростовой среде во флаконы с покровными стеклами. Через
24 ч культивировани провод т сли
5
0
5
0
35
40
ние клеток в монослое с помощью 50%- . ного раствора ПЭГ. Эффективность гибридизации клеток оценившот на-цитологических препаратах, орошенных гема- токсилинэозином по количеству гомо- карионов. Процент слившихс клеток, свободных от микоплазм, почти в 2 раза дл штамма СПЭВ-13-А4-ТК и в 1,5 раза дп штамма СПЭВ 13-Д5-ТК превьш1ает процент слившихс контамй- нированных клеток.
Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных клеток позвол ет быстро достичь положительного результата. Целесообразно с помощью этого способа деконтаминировать клеточные линии с ТК фенотипом и осуществл ть криоконсервирование больших количеств образцов, которые затем при необходимости можно рекультивировать дп проведени двух-трех, мес чных экспериментов. Способ универсален дл деконтаминации от микоплазм ТК° -линий клеток.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ деконтаминации от мико- ; плазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК , включающий обработку клеток в ростовой среде канамицином, отличающийс тем, что, с целью повышени степени деконтаминации, клетки обрабатывают кaнa -fицинoм в конечной концентрации 200-300 мкг/мл среды в сочетании с 5-бром-2-дезоксиу- ридином с концентрацией 150- 250 мкг/мл среды и этонием в конечной концентрации 5-15 мкг/мл среды, при этом обработку провод т с интер- валом в 10-12 дней, культивировани ., Составитель А.Маныкин Редактор П.Бобкова Техред М.Ходанич Корректор Л,П даипенкоЗаказ 3812Тираж 4866НИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м nfи ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат Патент, г .Ужгоро.ч, ул. ГагаринаИ01Подписное
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894638932A SU1611929A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894638932A SU1611929A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1611929A1 true SU1611929A1 (ru) | 1990-12-07 |
Family
ID=21423504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894638932A SU1611929A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1611929A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105950719A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-09-21 | 上海源培生物科技股份有限公司 | 支原体检测和去除方法 |
-
1989
- 1989-01-18 SU SU894638932A patent/SU1611929A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Неустроева В.В.Контаминаци культур клеток микоплазмами, принципы и методы деконтаминации. Дис.канд.наук. М,, 1969, с.10-150; * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105950719A (zh) * | 2016-04-28 | 2016-09-21 | 上海源培生物科技股份有限公司 | 支原体检测和去除方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Delamater | A Staining and Dehydrating Procedure for the handling of Microörganisms | |
| KR102015933B1 (ko) | 백신 제조를 위한 바이러스의 세포 배양 증폭 시스템 및 방법 | |
| Lee et al. | Basic culturing techniques | |
| Umehara et al. | On-chip single-cell microcultivation assay for monitoring environmental effects on isolated cells | |
| Bagyaraj et al. | Agricultural microbiology | |
| CN102643751B (zh) | 一种快速分离纯化小球藻的方法 | |
| HUT45275A (en) | Improved process for transformation of protoplasts of plants | |
| SU1611929A1 (ru) | Способ деконтаминации от микоплазм тимидинкиназодефектных перевиваемых клеточных линий СПЭВ-ТК @ | |
| CN112322500B (zh) | 赤潮异弯藻的无菌处理方法 | |
| US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| CN101723481A (zh) | 应用于铜绿微囊藻高效灭活的电子束辐照处理方法 | |
| CN117821555A (zh) | 一种基于阶梯式浓度培养的抗酒精菌群定向筛选方法 | |
| Jyotirmayee et al. | Comparative analysis of rhizospheric bacteria associated with four medicinal plants | |
| Hopwood et al. | Observations on the chromatinic bodies of Streptomyces coelicolor | |
| CN104120095A (zh) | 一种白色链霉菌及其应用 | |
| Beike et al. | Axenic bryophyte in vitro cultivation. | |
| Dow et al. | Simplified vegetative cell cycle of Rhodomicrobium vannielii | |
| CN107779442A (zh) | 高纯度全氘代蛋白质的大规模生产方法 | |
| McCormack et al. | Callus cultures of Arabidopsis | |
| Breznovits et al. | In vitro problems related to propagation of different fern species | |
| WO2017126542A1 (ja) | 酸化還元酵素の活性測定方法 | |
| Cortelyou et al. | A phase contrast study of the chromatinic bodies of Escherichia coli subsequent to ultraviolet irradiation | |
| JP3049801B2 (ja) | 光合成生物を利用したｃ▲ｏ２▼固定装置 | |
| CN116463219A (zh) | 一种纯化沙漠小球藻的方法 | |
| CN209906808U (zh) | 一种简易非嵌合式细胞房 |