SU1604851A1 - Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней - Google Patents
Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней Download PDFInfo
- Publication number
- SU1604851A1 SU1604851A1 SU884621471A SU4621471A SU1604851A1 SU 1604851 A1 SU1604851 A1 SU 1604851A1 SU 884621471 A SU884621471 A SU 884621471A SU 4621471 A SU4621471 A SU 4621471A SU 1604851 A1 SU1604851 A1 SU 1604851A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- enterovirus
- virus
- pneumonia
- suis
- Prior art date
Links
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 title claims abstract description 19
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 title abstract description 6
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title description 9
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 abstract description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 22
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 208000012153 swine disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к ветеринарной вирусологии и представл ет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней. Целью изобретени вл етс получение штамма нового серотипа энтеровирусной пневмонии свиней, обладающего репродуктивной активностью в культуре перевиваемых клеток СПЭВ, безвредного и ареактогенного дл лабораторных животных. Штамм Ч-73 ENTEROVIRUS SUIS - 15 депонирован в коллекции ВГНКИ код N8, вызывает сероконверсию у кроликов, в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтрализующие антитела образуютс в титре 1:1024. Штамм не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравенозно и интрамускул рно инокулированных кроликов. 1 табл.
Description
Изобретение относитс к ветеринарной вирусологии и представл ет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней.
Цель изобретени - получение нового серотипа штамма энтеровируса свиней , обладаюдего репродуктивной активностью в культуре перевиваемых клеток линии СПЭВ, безвредного и аре- актогенного дл лабораторных животных .
Штамм депонирован в ко ллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпре пар тов; под № 8, назван авторами Ч-73 En.N-.rovirus siiis-15 и имеет следук цие признаки .
Морфологи . Сферическа форма, типична дл энтеровирусов свиней, имеет икосаэдральную симметрию, размер вириона 26-28 нм.
Антигенна структура. В реакции перекрестной нейтрализации штамм серологически отличаетс от референтных штаммов известных серотипов энтеровирусов свиней.
Биологические свойства. Итамм Ч-73 Enterovirus suis-15 обладает репродуктивной активностью на культуре перевиваемых клет.ок лшпш СПЭБ и
эс
:л
накапливаетс до TIUTg-fl/MA чение 48 ч при . Обладает бл шко- образуюп5ими свойствами на перевиваемых клетках линии СПЭВ. Образует однородные бл шки размером 1-1,5 мм.
Физико-химические свойства. Явл етс РНК-содержащим, репродукци вируса в культуре клеток не подавл еткоторое нейтрализует 100 ТЩ j-o виру са в 50% инокулированных вируссьшо- роточной смесью пробирках, f Результат считают положительным при нарастании титра антител в парных сыворотках в четьфе и более раз или при обнаружении титров антител 1:32 и выше в 50 и более процентах
. с присутствием в поддерживающей ере- сывороток крови переболевших живот20
25
де 100 мкг/мл 5-бром-2-дезоксиури- дина на 0,1-1,0 мкг/мл актиномици- на Д, устойчив к воздействию хлороформа , эфира и трипсина, а также сред со значением рН 2,0-11,0. Понижает титры на 2-3 Ig ТВД50//ИА после прогревани при 50°С в течение 30-60 мин. Термоустойчив к прогреванию при в течение 60 мин в присутствии 1 М MgCl,.
Нммуногенность. Вызывает серокон- версию у кроликов; в гипериммунных кроличьих сьгооротках вируснейтрали- зующие антитела образуютс в титре 1:1024г.
Безвредность. Не вызывает отклонений от физиологической нормы у ин- травенозно и интрамускул рно инокулированных кроликов.
Диагностику энтеровирусной пневмо- о НИИ свиней провод т путем вьщелени к идентификации вьщеленных изол - тов вирусов в реакции нейтрализации на культуре клеток СПЭВ, а также вы влением и идентификацией сывороточных антител у больных и переболевших животных.
П р и м е .р 1. Использование штамма Ч-73 энтеровируса свиней в качестве антигена дл обнаружени и идентификации антител в сьторот- ках крови больных и переболевших животных .
Обнаружение и идентификацию антител провод т в реакции нейтрализации (рН) на культуре клеток. Дп постановки рН готов т двукратные разведени сьгоороток в объеме 0,5 мл антигена с содержанием вируса а 0,1 мл 100 ТЦЦ-.. Вирус-сьшороточную смесь вьщерживают 1 ч в термостате при 37 С после чего смесь каждого разведени по 0,2 мл внос т в 2-4 пробирки с монослоем культуры клеток, в которых предварительно ростова среда.заменена на 0,8 мл поддерживающей. Учет результатов титровани антител провод т на 4-7 сут. Титром антител считают наибольшее разведение сыворотки.
ных.
Пример 2. Обнаружение антигена (вируса) в мазках-отпечатках на патологическом материале методом пр 5 мой иммунофлуоресценции .(11Ф) .
Дл исследовани методом иммунофлуоресценции на обезжиренных пред- .метных стеклах готов т мазки-отпечат ки из свежезамороженного материала. Препараты высушивают, фиксируют в ацетоне, нанос т на них флуоресцирующий иммуноглобулин, помещают во влажную камеру, затем промывают фос- фатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Приготовленные препараты исследзтот под люминесцент ным микроскопом. Положительным ре- зультатом исследовани считают специфическое рко-зеленое свечение ци топлазмы клеток на фоне ткани, кото ра светитс серовато-зеленоватым цветом.
Пример 3. Идентификаци вы деленного вируса в культуре клеток.
I
Типирование вируса провод т в реакции нейтрализации на культуре клеток с помощью иммунной сьшоротки к вирусу штамма Ч-73, вход щего в состав набора диагностикумов. Дп титровани 0,5 мл вируса с содержанием его в 0,1 мл 1000 ТЦЦ50 смешивают с 0,5 мл иммунной сьшоротки с дс содержанием в 0,1 мл ее 20 нейтрали зующих доз. После выдерживани ви- рус-сьшороточной смеси в течение 1,5 ч при по 0,2 мл ее внос т четыре пробирки с культурой клеток, ростова среда в которых предварительно заменена на 0,8 мл поддержив ющей и став т в термостат на инкуба цию при 37°С. Учет результатов пров д т на 4 и 7 сутки.
Результат типировани считают по ложительным, если в 50% инокулированных вируссьшороточной смесью про бирок сыворотка нейтрализовала виру ( 1ЩД не отмечено) .
40
50
55
которое нейтрализует 100 ТЩ j-o вируса в 50% инокулированных вируссьшо- роточной смесью пробирках, f Результат считают положительным при нарастании титра антител в парных сыворотках в четьфе и более раз или при обнаружении титров антител 1:32 и выше в 50 и более процентах
0
25
о
ных.
Пример 2. Обнаружение антигена (вируса) в мазках-отпечатках на патологическом материале методом пр - 5 мой иммунофлуоресценции .(11Ф) .
Дл исследовани методом иммунофлуоресценции на обезжиренных пред- .метных стеклах готов т мазки-отпечатки из свежезамороженного материала. Препараты высушивают, фиксируют в ацетоне, нанос т на них флуоресцирующий иммуноглобулин, помещают во влажную камеру, затем промывают фос- фатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Приготовленные препараты исследзтот под люминесцентным микроскопом. Положительным ре- i зультатом исследовани считают специфическое рко-зеленое свечение цитоплазмы клеток на фоне ткани, котора светитс серовато-зеленоватым цветом.
Пример 3. Идентификаци выделенного вируса в культуре клеток.
I
Типирование вируса провод т в реакции нейтрализации на культуре клеток с помощью иммунной сьшоротки к вирусу штамма Ч-73, вход щего в состав набора диагностикумов. Дп титровани 0,5 мл вируса с содержанием его в 0,1 мл 1000 ТЦЦ50 смешивают с 0,5 мл иммунной сьшоротки с дс содержанием в 0,1 мл ее 20 нейтрализующих доз. После выдерживани ви- рус-сьшороточной смеси в течение 1,5 ч при по 0,2 мл ее внос т в четыре пробирки с культурой клеток, ростова среда в которых предварительно заменена на 0,8 мл поддерживающей и став т в термостат на инкубацию при 37°С. Учет результатов провод т на 4 и 7 сутки.
Результат типировани считают положительным , если в 50% инокулированных вируссьшороточной смесью пробирок сыворотка нейтрализовала вирус (1ЩД не отмечено) .
40
50
55
1
Пример 4. Идентификаци вируса в культуре клеток методом имму- нофлуоресценции.
Выращенную на покровных стеклах культуру клеток заражают выделенным вирусом и инкубируют в термостате до по влени ЦПД. После наступлени .ЦПД стекла извлекают, промьшают фосфатно буферным раствором, подсушивают и фиксируют ацетоном. Затем на препараты нанос т флуоресцирующий иммуногло булин к штамму Ч-73, выдерживают 30 мин при 37 С, обильно промьшают фосфатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и подсушивают. Микроскопию провод т на люминесцентном микроск опе.
Положительным результатом считают специфическое рко-зеленое свечение цитоплазмы клеток в виде фокусов на 3-4 пораженных клеток. I Пример 5. Опыт по определению типовой принадлежности выделенного от свиней штамма энтеровируса Ч-73 в перекрестной реакции нейтрализации в культуре клеток СПЭВ с эталонными и выделенными (Г-95, ;Б-111) штаммами энтеровирусов свиней
Результаты типировани штамма приведены в таблице.
Данные типировани выделенного штамма энтерови руса свиней Ч-73 с эталонными и выделенными штаммами и изучени антигенного родства между ними доказывают принадлежность его к неизвестному серотипу.
Пример 6. Дл выделени вирусов от больных свиней отбирают на
10
485
t5
20
25
30
5
16
зальные смьшы, пробы легких, бронхиальных лимфатических узлов, а-дл вы влени антител - сьюоротки крови от больных и переболевших животных.
Дл вы влени и идентификации сывороточных антител в реакции нейтрализации на культуре клеток используют штаммы известных (Konratice-1; Т80, F59-2; F34-3; F78-4; F12-5; F7-6; У13-8| К-9-11; К-22-12; Л-90-13; М116-14) и нового (Ч-73-15) серотипов энтеровирусов свиней.
Дл типировани выделенных изол - тов вирусов используют гипер1-1ммун- ные кроличьи сыворотки к указанным выше штаммам.
Из 70 проб органов и назальных . смьшов, отобранных в очагах заболевани свиней энтеровирусной пневмонией , выдел ют 14 изол тов вирусов, из которых 2 идентичны штамму Ч-73 нового серотипа 15 энтеровирусов свиней.
Из 39 исследованных сывороток крови в 14 вы вл ют вируснейтрализую- щие антитела в диагностических титрах к штамму антеровируса свиней нового серотипа 15.
Полученные результаты дают возможность поставить диагноз заболевани свиней энтеровирусной пневмонией и разработать меропри ти ,по ее профилактике .
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм Enterovirus suis ВГНКИ № 8 дл диагностики энтеровирусной пневмо- НИ1-1 свиней.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884621471A SU1604851A1 (ru) | 1988-12-20 | 1988-12-20 | Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884621471A SU1604851A1 (ru) | 1988-12-20 | 1988-12-20 | Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1604851A1 true SU1604851A1 (ru) | 1990-11-07 |
Family
ID=21415699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU884621471A SU1604851A1 (ru) | 1988-12-20 | 1988-12-20 | Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1604851A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2686097A1 (fr) * | 1992-01-14 | 1993-07-16 | Rhone Merieux | Preparation d'antigenes et de vaccins de virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie. |
-
1988
- 1988-12-20 SU SU884621471A patent/SU1604851A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР № 1362007, кл. С ,12 N 7/00, 1987. Авторское свидетельство СССР N 1362008, кл. С 12 N 7/00, 1987. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2686097A1 (fr) * | 1992-01-14 | 1993-07-16 | Rhone Merieux | Preparation d'antigenes et de vaccins de virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie. |
| US5597721A (en) * | 1992-01-14 | 1997-01-28 | Rhone Merieux | Preparation of antigens of and of vaccines for the virus of mystery disease, antigens and vaccines obtained for the prevention of this disease |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Johnson et al. | The neutralizing characteristics of strains of infectious bronchitis virus as measured by the constant-virus variable-serum method in chicken tracheal cultures | |
| Šmíd et al. | Rabbit haemorrhagic disease: an investigation of some properties of the virus and evaluation of an inactivated vaccine | |
| Porter et al. | Isolation of Aleutian disease virus of mink in cell culture | |
| Stewart et al. | Bovine viral diarrhea infection in pigs | |
| McNulty et al. | Applications of immunofluorescence in veterinary viral diagnosis | |
| Kim et al. | Isolation and characterization of simian adenoviruses isolated in association with an outbreak of pneumoenteritis in vervet monkeys (Cercopithecus aethiops) | |
| Harrison et al. | Diagnosis of Legionella pneumophila infections by means of formolised yolk sac antigens. | |
| Lewis Jr et al. | The presence of antibodies in human serum to early (T) adenovirus antigens | |
| SU1604851A1 (ru) | Штамм ЕNтеRоVIRUSSUIS дл диагностики энтеровирусной пневмонии свиней | |
| KR20020020260A (ko) | 서코바이러스를 생장시키거나 생물학적 물질로부터제거하는 방법 | |
| Cunningham | Immunologic methods in avian research: neutralization test | |
| Mikami et al. | Pathogenic and sérologie studies of type 1 and type 2 plaque-producing agents derived from Cal-1 strain of Marek's disease virus. | |
| Duncan et al. | Preparation of typing antisera specific for O antigens of Pseudomonas aeruginosa | |
| Flewett et al. | The hunt for viruses in infections of the alimentary system: an immunoelectronmicroscopical approach | |
| Nicholas et al. | Detection of avian encephalomyelitis virus | |
| Wooley et al. | Correlation of cytopathic effect, fluorescent-antibody microneutralization, and plaque reduction test results for determining avian infectious bronchitis virus antibodies | |
| SU1328375A1 (ru) | Штамм ЕNтеRоVIRUS SUIS дл диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней | |
| Scholten et al. | Detection of Marek's disease virus antigen in chickens by a novel immunoassay | |
| SU1328374A1 (ru) | Штамм ЕNтеRоVIRUS SUIS дл диагностики энтеровирусного гастроэнерита свиней | |
| Lennette et al. | Rapid diagnosis of mumps virus infections by immunofluorescence methods | |
| Hare | Analysis of hamster tumor cell lines isolated from single colonies soon after induction by polyoma strains differing in transplant antigen production | |
| Wolf et al. | Salmonid viruses: double infection of RTG-2 cells with Egtved and infectious pancreatic necrosis viruses | |
| Wolff et al. | Researches on Leptospirosis ballum: The detection of urinary carriers in laboratory mice | |
| CN105866437A (zh) | 一种屎肠球菌间接血凝检测试剂盒及其应用 | |
| Girshick et al. | Preparation of an agar-gel-precipitating antigen for avian encephalomyelitis and its use in evaluating the antibody status of poultry |