SU1271379A3 - Способ определени активности антитромбина-ВМ - Google Patents
Способ определени активности антитромбина-ВМ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1271379A3 SU1271379A3 SU823450446A SU3450446A SU1271379A3 SU 1271379 A3 SU1271379 A3 SU 1271379A3 SU 823450446 A SU823450446 A SU 823450446A SU 3450446 A SU3450446 A SU 3450446A SU 1271379 A3 SU1271379 A3 SU 1271379A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- thrombin
- solution
- concentration
- heparin
- test
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims abstract description 25
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 13
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 claims description 4
- YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]piperidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N 0.000 claims description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010039286 S 2238 Proteins 0.000 claims 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 abstract description 11
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 abstract description 11
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 abstract description 2
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 abstract description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 abstract description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 abstract description 2
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 abstract 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 abstract 1
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 abstract 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 abstract 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 3
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 3
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000006506 Brasenia schreberi Nutrition 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-L disulfate(2-) Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OS([O-])(=O)=O VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002628 heparin derivative Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
- G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- G01N2333/8121—Serpins
- G01N2333/8128—Antithrombin III
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине , а именно к способу опр еделени активности антитромбина-ВМ. Цитрат- ную плазму разбавл ют 0,9%-ным раст вором NaCl. Готов т антитромбинную (AT) реакционную смесь. В пластмассовые кюветы внос тс растворы АТ-реакционной смеси и 0,9%-ного NaCl в одном случае и разбавленна плазма и AT-реакционна смесь в другом случае. Эти смеси инкубируют в течение 5 мин и смешивают с 1,9 ммоль хромозима ТН. В течение 30 с определ ют начальную экстинкцию. Через 30, 60 и 90 с повтор ют измерение. Из разницы между коэффициентами экстинкции определ ют среднее значение. Таким образом, получают общую антитромбинную активность . При повторении измерени с пониженной концентрацией гепарина получают AT-III о Из разницы между СО общей антитромбинной активностью и с AT-III получают количество антитромбина-ВМ , 5 табл. 1 ил. ю со со
Description
см
Изобретение относитс к способу определени активности нового ингибитора тромбина которьй называетс антитромбином ВМ ().
Определение АТ-ВМ основано на использовании различи в специфич ности по отношению к AT-III в случае различных кофакторов. К испытуемому раствору добавл ют кофактор антитромбина ВМ, тромбин М опре .дел емый субстрат тромбина и по ко лйчеству продуктов расщеплени субстрата тромбина суд т об активности антитромбина-ВМ,
Пример , 9ч. свежеотоб ранной крови смешивают с 1 ч,. 0,11 моль/л цитрата натри и центрифугируют при 3000 об./мин. полученной цитратной плазмы разбавл ют 1,0 мл Q, раствора Ns-Cl,
5 МП раствора, содержащего 0,1 М трис/HCl, рН 8,1; 0,15 М NaCl, 0,ОГМ ЭДТА 1% полиэтиленгликол , 6,5 IU апротинин/мл и I,75 USP гепарина/мл, смешивают с 0,25 мл раствора тромбина с О .,5 ед/мл и оставл ют сто ть в течение 30 мин (AT - реакционна смесь).
Провод т определение по следующей схеме при 25°С в кювете с толщиной сло 1 см и при длине волны Hg405HM
Измер етс прирост экстинкции по сравнению с воздухом. В одну пластмассовую кювету внос т пипеткой 0,10 МП 0,9%-ного NaCl и 2 № АТ-ре акционной смеси, а в другую - 0,10мл разбавленной плазмы и 2 мл АТ-реакционной смеси5 смешивают и инкубирую В течение 5,мин при Затем содержимое каждой кюветы смешивает с 1,9 ммоль хромозима ТН - тоз-гли-проarg-pM .(0,20 мл), в течение 30 с определ ют начальную экстинкцию.и одновременно включают секундомер. Через 30, 60 и 90 с повтор ют определение Из разницы между коэффициентами тинкции (АЕ/ЗОс) определ ют среднее значение.
Таким образом, получают общую аи- титромбиннзпо активность.
Путем повторени измерени с пониженной до 0,2 US Р/мл концентрации ей гепарина получают концентраи ю AT-III. Из разнигды между общей анти- тромбинной активностью и AT-IIT по- лучают количество АТ-ВМ.
Пример 2, Используют следу к цие растворы реагентов
1. Буфер: трис/НС1 100 ммоль/л, рН 8,1; декстрансульфат (м.в, 500 000) 1 мл/100 мл; апротинин 6,5 IU/мл (единица ингибитора; трипсин, хромозин ТН, 25°С; NaCl 150 ммоль/л.
2о Тромбин 0,5 ед/мл.
3.Хромозим ТН (тоз-гли-про-argpNA ) 1,9 ммоль/л,
4,Смесь реагентов: трис/НС
90 ммоль/л, ,1; декстрансульфат 0,9 мг/100 I-OT; апротинин 5,9 IU/мл; NaCl 136 1 1моль/л; тромбин 0,045 ед/мл.
Приготовление смеси реагентов.
Смешивают в пластмассовой емкости и оставл ют сто ть примерно в течени 30 минут при 25°С 10 мл буфера (раствор 1 ) и 1 МП тромбина (раствор 2).
Подготовка, пробы.
Дл определени 1 ч, цитратной плазмы разбавл ют 200 ч 0,9%-ного NaCl (например,30 мл плазмы и 10 мл 0,9%-ного раствора NaCl).
Услови определени : длина волны Hg 405 нм; пластмассова кювета, толщина сло 1 см; температура измерени 25°С.
Измерение по сравнению с воздухом (прирост экстинкции)
Дл каждой серии измерений требуетс по меньшей мере одно холостое значение с тромбином (ть), В одну плмассовую кювету внос т пипеткой 0,05 мл 0,9%-ного NaCl и J мл раствора 4, в другую - 0,05 мл разбавленной плазмы и 1 мл раствора 4, сме шивают, инклгбируют в течение 5 мин при 25°С. Затем содержимое каждой кюветы смешивают с раствором 3 (TL 0,1 мл проба 0,1 ми) и рассчитывают АЕ/30 с; АЕц /30 с - ДЕрроБЫ/ЗО с с. 1ид..5,/мл AEft / /30 с X 95,
Дл определени готов т растворы AT-III (концентраци 12,5 IU/мл при 25°с) и АТ-ВМ (концентраци 12,1 IU/мл при 25°С).
Эта концентраци соответствует нормальному содержгшйю AT-III в человеческой гшазме.
Дл того, чтобы показать специфичность определени в присутствии AT- AT-III, определение провод т как с раствором AT-ВМ, так и со смесью обоих растворов.
Измерение AT-ВМ„
1 ч. раствора АТ-ВМ разбавл ют 100 ч„ физиологического раствора NaCl (0,05 МЛ пробы + 5,0 м.ч раствора NaCl), Из этого раствора готов т даль™ нейгаие разбавлени с физиологическим раствором поваренной соли (9 ч. ра 5 створа АТ-ВМ + I ч. раствора NaCl; 8+2; 7+Злт.д. вплоть до конечного разбавлени 1:1000). Посто нные объемы (0,05 мл) приготовленных разбавлений затем используют в тесте, согласно которому измер ют внутри выбранных пределов пропорциональные величины подавлени (см. чертеж). Измерение АТ-ВМ в присутствии 5 AT-III. 0,05 мл раствора AT-БМ разбавл ют 0,05 МП раствора AT-III и 4,95 мп физиологичесдсого раствора поваренной соли (соответственно 1:100 разбавле- 20 ние обоих компонентов). Из полученного раствора готов т серию разбавлений аналогично описан ному вьппе. Посто нные объемы (0,05 мп) при- 25 готовленных разбавлений затем используют в тесте (см. чертеж). Как видно из данных, приведенных на чертеже, наличие AT-III не вли ет на результат измерений, измер етс 30 только АТ-ВМ. J Аналогичные результаты получаютпри использовании декстрансульфата, сложных эфнров мукополисахар1еда с полисерной кислотой, пентоззнполи- 35 сульфатов или короткоцепочечнмх про зводных гепарина. Пример 3. Вли ние концентрации тромбина на определение AT-III. В качестве пробы приг ен ли водный 40 раствор AT-III о Примен ли реактив по примеру 1: трис-буфер, рН 8,1; гепарин , 1,75 US Р/мл; субстрат 0,19 ммоль/л. Результаты определени приведены 45 в табл. 1.. Т а б л и ц а 1
17,0 17,2 17,3
11,9 12,04 12,11 137 р с р р р р в Хр S ра с ра ре рН су в
Пример 6. Вли ние концентрации декстрансульфата на определе ние аититромбина-ВМ.
В качестве пробы примен ли водньйГ раствор AT-ВМ. Примен ли реактив по примеру 2: трис-буфер, рН 8,1; тром бин, 0,05 ед./млI субстрат
0,J9 ммоль/л.
Результаты определени приведены
в табл. 4. 4 Пример А. Вли ние концентции тромбина на определение АТ-ВМ с гепарином. В качестве пробы прин ли водный створ антитромбина-ВМ. Примен ли актив по примеру 1: трис-буфер, 8,1; гепарин 1,75 US Р/мл; субст т 0,19 ммоль/л.. Результаты определени приведены табл. 2. Таблица 2 Субстрат Определение АТ-ВМ с гепарином, IU/мл, в присутствии троъ бина , ед./мл мозим ТН 16,5 21,30 22,35 238 11,58 14,90 15,60 Пример 5. Вли ние концентии тромбина на определение АТ-ВМ екстрансульфатом. В качестве пробы примен ли водный твор антитромбина-ВМ, Примен ли ктив по примеру 1: трис-буфер, 8,1; декстраисульфат, 10 мкг/мл; страт, 0,10 ммоль/л. Результаты определени приведены абл. 3. ТаблицаЗ Определение AT-ВМ Субстрат с декстрансульфатом , .IU/мл, в при- сутствии тромбина, ед/мл
12713796
Субстрат
Таблица 4
Определение , IU/мл, в присутствии декстрансульфата, Mfcr/мл
Хромозим ТН 36,14 44,70 43,76 S 2238 25,29 31,29 31,43
Пример 7, Зависимость активности тромбина от концентрации Концентраци хромозима ТН, ммоль/л 0,019 0,038 Активность тромбина, дЕ/мин 0,079 0,123 Работу осуществл ли с реактивом по примеру 1 (определение исходного значени тромбина в соответствии с указанным примером). Концентраци тромбина в тесте составл ла .тромбина в тесте составл ла 0,015 ед/мл. Как показали экспериментальные данные, тест можно осуществл ть при концентраци х субстрата 0,019 - 0,285 ммоль/л. Поскольку субстрат S 2238 имеет почти идентичное К, значение 9 х X 10 моль/л, дл этого субстрата действительна така же гранична об ласть. Расчет концентраций тромбина, ге парина или декстрансульфата в тесте Определение концентрации тромбин ( ед/кп) производили, исход от изме ренного в тесте сигнала ЛлЕ/ЗО с), следующим образом: . V X 2 &х V где V - примененный в тесте объем (2,30 мл); .
; субсрата-хромозима ТН(тоэ-глипро-агп рНА м-эначение 2x10 моль/л.
Таблица 5 0,076 0,114 0,152 0,190 0,285 0,144 0,156 0,158 0,157 0,155 - коэффициент экстинкции дл п Нитроанилина(9,70 см мкмоль .V - объем пробы тромбина (AT-peакционна смесь 2,00 мл); 2 - фактор необходимый дл того, что бы получить ЛЕ/МИН. Если, например, получали сигнал тромбина А Е/0,500/30 с, то в АТ-ре- акционной смеси концентраци тромби на составл ла 0,12 ед/мл. При даль нейшем разбавлении примененной в тесте смесью (2,30 мл), концентраци тромбина в тесте становитс равной 0,10 ёд/мл. Препарат гепарина характеризуетс количеством USP- диниц в 1 мл. Например , концентраци гепарина 1,00 USP/мл в буферном растворе дает кон центрацию 0,95 USP/мл в АТ-реакциойной смеси (а именно, 5,0 мл буферного раствора смешивают с 0,25 мл раствора тромбина). Тогда в тесте оказываетс концентраци гепарина 0,83 USP/мл, так как в тесте АТ- зеакционаую смесь разбавл ют от 2 до 2,30 мл)
Claims (1)
- Формула изобретения Способ определения активности антитромбина— ВМ, заключающийся в том, что к исследуемой цитратной плазме или сыворотке крови добавляют 0,01-0,1 ед/мл тромбина; 0,076-0,285 ммоль/л его субстрата (тоз—гли—про—arg-pNA или Н—D-phe-pip -arg-pNA) в буфере с pH 8,1 и 1 25 мг/мл декстрансульфата или короткоцепочечных производных гепарина и по количеству образующихся продуктов расщепления субстрата тромбина судят о величине активности антитромбинаЗаказ 6258/60Тираж 778 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж—35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19803038163 DE3038163A1 (de) | 1980-10-09 | 1980-10-09 | Thrombininhibitor, seine herstellung und verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1271379A3 true SU1271379A3 (ru) | 1986-11-15 |
Family
ID=6114000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU823450446A SU1271379A3 (ru) | 1980-10-09 | 1982-06-08 | Способ определени активности антитромбина-ВМ |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4379142A (ru) |
| EP (1) | EP0049861B1 (ru) |
| JP (1) | JPS5932443B2 (ru) |
| AT (1) | ATE13489T1 (ru) |
| DD (1) | DD201975A5 (ru) |
| DE (2) | DE3038163A1 (ru) |
| ES (1) | ES505829A0 (ru) |
| SU (1) | SU1271379A3 (ru) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4689323A (en) * | 1983-09-26 | 1987-08-25 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently bound heparin--antithrombin-III complex |
| FR2553518B1 (fr) * | 1983-10-13 | 1986-04-18 | Choay Sa | Nouveaux conjugues elabores par fixation d'un ligand sur un support insoluble, leur preparation et leurs applications biologiques |
| JPS60199819A (ja) * | 1984-03-23 | 1985-10-09 | Kowa Co | トロンビン結合性物質およびその製法 |
| NO164991C (no) * | 1984-09-21 | 1990-12-05 | Boehringer Ingelheim Int | Fremgangsmaate for fremstilling av blodkoaguleringshemmende proteiner. |
| FR2646775A1 (fr) * | 1989-05-11 | 1990-11-16 | Centre Nat Rech Scient | Utilisation du caseinoglycopeptide k, notamment de lait de vache, pour la fabrication d'une composition, notamment d'un medicament, pour la prevention et le traitement des thromboses |
| US5849703A (en) * | 1990-08-27 | 1998-12-15 | G. D. Searle & Co. | Pre-formed anticoagulant heparin/TFPI complexes |
| US6291427B1 (en) | 1990-08-27 | 2001-09-18 | G.D. Searle & Co. | Anticoagulant combination of LACI and sulfated polysaccharides |
| DE4203980A1 (de) * | 1992-02-11 | 1993-08-12 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur bestimmung von hirudin und synthetischen thrombininhibitoren |
| WO1993025220A1 (en) * | 1992-06-05 | 1993-12-23 | Reid Thomas J Iii | Test for quantitative thrombin time |
| US5476771A (en) * | 1993-02-22 | 1995-12-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Test for quantitative thrombin time |
| WO1998038214A1 (en) * | 1997-02-28 | 1998-09-03 | The Texas A & M University System | Heparan sulfate/heparin interacting protein compositions and methods of use |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE392038B (sv) * | 1971-09-08 | 1977-03-14 | Kabi Ab | Forfarande for isolering av antitrombin ur blod eller blodprodukter |
| US4087415A (en) * | 1976-06-09 | 1978-05-02 | William L. Wilson | Antithrombin III |
| JPS597693B2 (ja) * | 1978-01-07 | 1984-02-20 | 株式会社ミドリ十字 | 抗トロンビン製剤及びその製法 |
-
1980
- 1980-10-09 DE DE19803038163 patent/DE3038163A1/de not_active Withdrawn
-
1981
- 1981-09-28 ES ES505829A patent/ES505829A0/es active Granted
- 1981-10-06 DD DD81233916A patent/DD201975A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-10-06 DE DE8181108018T patent/DE3170739D1/de not_active Expired
- 1981-10-06 EP EP81108018A patent/EP0049861B1/de not_active Expired
- 1981-10-06 AT AT81108018T patent/ATE13489T1/de active
- 1981-10-08 US US06/309,665 patent/US4379142A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-10-09 JP JP56160368A patent/JPS5932443B2/ja not_active Expired
-
1982
- 1982-06-08 SU SU823450446A patent/SU1271379A3/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент DE 30 38 163, кл. С 07 G 7/00, опублик. 06.05.82. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4379142A (en) | 1983-04-05 |
| DE3038163A1 (de) | 1982-05-06 |
| ATE13489T1 (de) | 1985-06-15 |
| EP0049861A3 (en) | 1983-07-27 |
| DE3170739D1 (en) | 1985-07-04 |
| EP0049861A2 (de) | 1982-04-21 |
| ES8205813A1 (es) | 1982-08-16 |
| JPS5932443B2 (ja) | 1984-08-09 |
| DD201975A5 (de) | 1983-08-24 |
| JPS5793915A (en) | 1982-06-11 |
| EP0049861B1 (de) | 1985-05-29 |
| ES505829A0 (es) | 1982-08-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1271379A3 (ru) | Способ определени активности антитромбина-ВМ | |
| Van der Graaf et al. | Inactivation of kallikrein in human plasma. | |
| Teien et al. | Heparin assay in plasma: A comparison of five clotting methods | |
| US4496653A (en) | Process for the determination of antithrombin-BM | |
| CN108982865B (zh) | 一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法 | |
| Scully et al. | Methods for semi micro or automated determination of thrombin, antithrombin, and heparin cofactor using the substrate, Hd-Phe-Pip-Arg-p-nitroanilide· 2HC1 | |
| Abildgaard et al. | A simple amidolytic method for the determination of functionally active antithrombin III | |
| US5985582A (en) | Thrombin-based assay for antithrombin III | |
| Ragni et al. | Bleeding and coagulation abnormalities in alcoholic cirrhotic liver disease | |
| Bertina et al. | Spectrophotometric assays of prothrombin in plasma of patients using oral anticoagulants | |
| Handeland et al. | Simplified assay for antithrombin III activity using chromogenic peptide substrate: Manual and automated method | |
| Bounameaux et al. | Monitoring of Heparin Treatment. Comparison between Thrombin Time, Activated Partial Thromboplastin Time, and Plasma Heparin Concentration, and Analysis of the Behavior of Antithrombin III. | |
| JPH0365958B2 (ru) | ||
| US20050175983A1 (en) | Reagent kit for detecting lupus anticoagulunt | |
| US5320945A (en) | Method and reagent for the determination of antithrombin III | |
| Bartl et al. | Determination of the biological activity of heparin by use of a chromogenic substrate | |
| Inada et al. | Faster determination of clottable fibrinogen in human plasma: an improved method and kinetic study. | |
| Goodnight JR et al. | Measurement of antithrombin III in normal and pathologic states using chromogenic substrate S-2238: comparison with immunoelectrophoretic and factor Xa inhibition assays | |
| Siudut et al. | Impaired plasminogen binding in patients with venous thromboembolism: association with protein carbonylation | |
| Chuansumrit et al. | Heparin cofactor II in adults and infants with thrombosis and DIC | |
| ES2475492A1 (es) | Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro. | |
| Andreasen | Automated two-stage assay for determination of antithrombin III with a centrifugal analyzer | |
| Scully | The use of an automated analyzer in the evaluation of antithrombin III and heparin | |
| Prellwitz et al. | Two automated methods for plasma antithrombin III compared, and the clinical significance of the results. | |
| Cooper et al. | Euglobulin clot lysis time |