SU1178761A1 - Способ идентификации ингибиторов протеиназ - Google Patents
Способ идентификации ингибиторов протеиназ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1178761A1 SU1178761A1 SU833653896A SU3653896A SU1178761A1 SU 1178761 A1 SU1178761 A1 SU 1178761A1 SU 833653896 A SU833653896 A SU 833653896A SU 3653896 A SU3653896 A SU 3653896A SU 1178761 A1 SU1178761 A1 SU 1178761A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- film
- proteinase
- gel
- filter paper
- inhibitors
- Prior art date
Links
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title claims abstract description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract 4
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 claims 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 3
- 108010073032 Grain Proteins Proteins 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 235000007264 Triticum durum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209143 Triticum turgidum subsp. durum Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003976 plant breeding Methods 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ путем фракционировани белка в гел х, отличающ и и с тем, что, с целью повышени чувСтвительно(:ти и упрощени способа, на раздел ющий гель после фракционировани накладывают лист фильтровальной бумаги, смоченной раствором протеиназы в буфере с рН, оптимальным дл используемой протеиназы , и с активностью протеиназы , соответствующей активности трипсина в концентрации 0,0250 ,05 мг/мл, через 10-30 мин бумагу удал ют, на гель накладывают фотопленку типов Фото или Аэропленка и инкубируют до визуального обнаружени на фотопленке полос неразрушенного желатина, снимают фотопленку с гел , накладьшают на нее лист влажной фильтровальной бумаги и идентифицируют ингибиторы по зо . нам неразрушенного желатина в виде i темных полос на прозрачном фоне фотопленки или светлых полос на (Л темном. фоне на фильтровальной бумаге .
Description
|
сх
Ч
05
Изобретение относитс к биохимии растений и может быть использовано также в области генетики, селекции и защиты растений, биохш-ши питани и кормлени .
Цель изобретени - повышение чувствительности и упрощение способ
Пример. Идентификаци ингибиторов трипсина среди белков зерна пшеницы.
Зерно пшеницы размалывают, навеску муки зДпивают 4-кратным объемом 2 М мочевины и выдерживают 18 ч при 4 С. Смесь центрифугируют, осадок отбрасывают.
Изофокусирование белков провод т ,в пластине полиакриламидного гел 125Х250 0,2 мм на приборе типа Мултифор фирмы LKB (Швеци ) или другом приборе дл изофокусировани . Состав гел : 6% акриламида, 0,28% метиленбисакриламида, 1% амфолитов типа Сервилат (Serva, ФРГ), можно также использова.ть амфолиты других фирм, например Амфолины (LKB ), с интервалом рН 2-11. Гель полимеризуют на свету после дегазации , добавив к 10 мл раствора гел 0,5 МП раствора рибофлавина (10 мг/100 мл) и 20 мкл ТЕМЕДа. Экстракт белков зерна нанос т на гель капл ми объемом 0,5-25 мкл на образец. Поскольку ингибиторы трипсина отличаютс у фазных сортов и видов пшениц по компонентному составу и активности, объем Ъкстракта нужно подбирать в каждом отдельном случае дл того, чтобы получить контрастный спектр ингибиторов. В описываемых услови х следует наносить 6-9 мкл экстракта из муки м гкой пшениЩ) сорта Безоста Т, твердой пшеницы 20-25 мкл, диплоидной однозерн нки 0,5-1,0 мкл. На одной пластине анализируют одновременно 24 образца (1 см на образец) или 48 образцов (по 0,5 см). На гель накладьшают электродные полоски, смоченные 1 М NaOH (-) и 1 М HjPO (+). Сверху накладывают крьш1ку с
платиновыми- электродами. ИзофокусироваНие ведут 2,5 ч при посто нной мощности тока 10 В. Конечное напр жение 1800 В. Электродные полоски удал ют вместе с тем участком гл , на котором они лежали. На гель накладьшают лист гладкой фильтровальной бумаги, смоченной раствором трипсина (0,03 мг/мл, фирма Spota, Чехословаки ) в 0,2 М фосфатном буфере рН 8,0. Оптимальный рН трипсина около 8,0-9,0. Гель накрывают полимерной пленкой дл предотвращени высыхани . Через 15 мин бумагу убирают и на гель накладывают фотопленку типа Фото-65, предварительно смочив гель фосфатным буфером. Сверху накладьюают жесткую полимерную пленку дл предотвращени подсыхани и деформации краев фотопленки и выдерживают в термостате 35 мин при . Под действием фермента , адсорбированного поверхностью гел , желатин разрушаетс , что можно контролировать по по влению мутной жидкости из-под краев фотопленки. Можно также просматривать гель с пленкой на свету, не наклон гель. Момент завершени инкубации определ етс по мере по лени различных полос - неразрушенными остаютс лишь участки сло желатина, соответствующие ингибиторам данной протеиназы. Фотопленку снимают с гел , накладывают на нее влажную фильтровальную бумагу, которую затем подсушивают листом сухой фильтровальной бумаги. Фотопленку отдел ют от бумаги. Зоны, соответствующие ингибиторам трипсина , обнаруживаютс на фотопленке в виде темных полос на прозрачно фоне. Фотопленку подсушивают на воздухе и фотографируют в проход щем свете. Ингибиторы можно также вы вить на фильтровальной бумаге, которую накладывали на фотопленку после инкубации.Ингибиторам соотв , ствуют светлые полосы на темном фоне
Claims (1)
- СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ путем фракционирования белка в гелях, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, на разделяющий гель после фракционирования накладывают лист фильтровальной бумаги, смоченной раствором протеиназы в буфере с pH, оптимальным для используемой протеиназы, и с активностью протеиназы, соответствующей активности трипсина в концентрации 0,0250,05 мг/мл, через 10-30 мин бумагу удаляют, на гель накладывают фотопленку типов Фото или Аэропленка и инкубируют до визуального обнаружения на фотопленке полос неразрушенного желатина, снимают фотопленку с геля, накладывают на нее лист влажной фильтровальной бумаги и идентифицируют ингибиторы по зонам неразрушенного желатина в виде темных полос на прозрачном фоне фотопленки или светлых полос на темном. фон'е на фильтровальной бумаге.SU ,,„1178761
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1178761A1 true SU1178761A1 (ru) | 1985-09-15 |
Family
ID=21085996
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1178761A1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997032035A1 (fr) * | 1996-02-29 | 1997-09-04 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Procede d'analyse de proteases et membrane fine utilisee dans ce procede |
| EP1085097A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-03-21 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for judging effectiveness of protease inhibitors |
| EP1292700A1 (en) * | 2000-06-21 | 2003-03-19 | Novapharm Research (Australia) Pty. Limited | Enzyme detection and measurement |
-
1983
- 1983-10-11 SU SU833653896A patent/SU1178761A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Hligaard J.-Anal. Biochem., 1981, V. 116, № 2, 444-449. * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997032035A1 (fr) * | 1996-02-29 | 1997-09-04 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Procede d'analyse de proteases et membrane fine utilisee dans ce procede |
| EP1295948A3 (en) * | 1996-02-29 | 2005-02-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method of measurement of protease and thin membranes used for said method |
| EP1085097A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-03-21 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for judging effectiveness of protease inhibitors |
| US6413734B1 (en) | 1999-08-18 | 2002-07-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd | Method for judging effectiveness of drug having protease inhibitory activity |
| EP1292700A1 (en) * | 2000-06-21 | 2003-03-19 | Novapharm Research (Australia) Pty. Limited | Enzyme detection and measurement |
| EP1292700A4 (en) * | 2000-06-21 | 2005-07-13 | Novapharm Res Australia | DETECTION AND MEASUREMENT OF ENZYMES |
| US7244554B2 (en) | 2000-06-21 | 2007-07-17 | Novapharm Research (Australia) Pty Ltd. | Enzyme detection and measurement |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shewry et al. | A comparison of methods for the extraction and separation of hordein fractions from 29 barley varieties | |
| Wilding | Use of gel filtration in the study of human amylase | |
| Brown et al. | Control of endosperm proteins in Triticum aestivum (var. Chinese Spring) and Aegilops umbellulata by homoeologous group 1 chromosomes | |
| Yan et al. | Identification of oxidized proteins based on sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis, immunochemical detection, isoelectric focusing, and microsequencing | |
| US4030995A (en) | Alkaline phosphatase isoenzyme determination | |
| Spiker et al. | Identification and fractionation of plant histones | |
| Cowie | Identification of fish species by thin‐slab polyacrylamide gel electrophoresis of the muscle myogens | |
| Catsimpoolas | Isolation of soybean lipoxidase by isoelectric focusing | |
| SU1178761A1 (ru) | Способ идентификации ингибиторов протеиназ | |
| Stommel et al. | Specific localization of scallop gill epithelial calmodulin in cilia | |
| Altland et al. | Paraffin oil protected high resolution hybrid isoelectric focusing for the demonstration of substitutions of neutral amino acids in denatured proteins: The case of four human transthyretin (prealbumin) variants associated with familial amyloidotic polyneuropathy | |
| Kühnl et al. | An Improved Method for the Identification of Gc1 Subtypes (Group‐Specific Component) by Isoelectric Focusing | |
| Turner et al. | Mitochondrial ATPase Complex of Aspergillus nidulans and the Dicyclohexylcarbodiimide‐Binding Protein | |
| Roy et al. | Free subunits of ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase in pea leaves | |
| Bonnett et al. | Inhibition of moccasin (Agkistrodon piscivoris) venom proteolytic activity by the serum of the Florida king snake (Lampropeltis getulus floridana) | |
| Giri et al. | Detection of electrophoretically separated amylase inhibitors in starch-polyacrylamide gels | |
| Pretsch et al. | The agar contact replica technique after isoelectric focusing as a screening method for the detection of enzyme variants | |
| Goldring et al. | Solubilization of protein–dye complexes on nitrocellulose to quantify proteins spectrophotometrically | |
| Clark et al. | Activity variation between and within two soybean trypsin inhibitor electrophoretic forms | |
| Seidl et al. | Microelectrophoretic method for the detection of proteinase inhibitors | |
| SU1175967A1 (ru) | Способ идентификации ингибиторов @ -амилаз | |
| Suh et al. | Biochemical characterization of six trisomics of grain sorghum, Sorghum bicolor (L.) Moench | |
| Lee et al. | A simple method of identifying peroxidase isoenzymes from crude pea seed extracts | |
| Popescu | A simple method for drying polyacrylamide slab gels using glycerol and gelatin | |
| Terando et al. | Immunoelectrophoresis of proteins in the hemolymph of the large milkweed bug, Oncopeltus fasciatus (Dallas) |