SU1147010A1 - Способ получени октапептида - Google Patents
Способ получени октапептида Download PDFInfo
- Publication number
- SU1147010A1 SU1147010A1 SU833614539A SU3614539A SU1147010A1 SU 1147010 A1 SU1147010 A1 SU 1147010A1 SU 833614539 A SU833614539 A SU 833614539A SU 3614539 A SU3614539 A SU 3614539A SU 1147010 A1 SU1147010 A1 SU 1147010A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- tert
- mmol
- butyl
- octapeptide
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 55
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 19
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229940093499 ethyl acetate Drugs 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 9
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 6
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 5
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 Boc Chemical class 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101800001147 Octapeptide 1 Proteins 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- PFMIJXDAMJTCGA-ZEQRLZLVSA-N (2s)-3-phenyl-2-[[(2s)-3-phenyl-2-[[2-(phenylmethoxycarbonylamino)acetyl]amino]propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 PFMIJXDAMJTCGA-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 2
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- YXGMZBUOYWYJAH-HNNXBMFYSA-N (2s)-6-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl-phenylmethoxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)N(C(=O)OC(C)(C)C)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 YXGMZBUOYWYJAH-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- DDXMARANUDZBSS-UHFFFAOYSA-N 2-[carboxy(phenylmethoxy)amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(C(O)=O)OCC1=CC=CC=C1 DDXMARANUDZBSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N Gly-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FEUPVVCGQLNXNP-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 101500025354 Homo sapiens Insulin B chain Proteins 0.000 description 1
- 101000798165 Homo sapiens Trichohyalin Proteins 0.000 description 1
- BXAQOKHDAYJQPA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyprolyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C1CC(O)CN1 BXAQOKHDAYJQPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 102100032250 Trichohyalin Human genes 0.000 description 1
- CUXSAAMWQXNZQW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol Chemical compound CC(O)=O.CCCCO CUXSAAMWQXNZQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001009 interstitial alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- OZSJLLVVZFTDEY-HJXLNUONSA-N methyl (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O OZSJLLVVZFTDEY-HJXLNUONSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000405 phenylalanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004672 propanoic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Способ получени октапептида формулы Z-Gty-p«,(i-Phe-T,jrCb)-Thf-P|.o-L.,s(-BeeJ-Th(e4)oei путем фрагментной конденсации, о тличающийс тем, что, с целью увеличени выхода и оптической чистоты целевого соединени , при конденсации в качестве исходных фрагментов используют 2.-Gdij-Phe.-Phe.OH и Н -Т f
Description
Jiib Изобретение относитс к усовершенствованному способу нолучени октапептида формулы 1 I-GE Phe-Pht-T rCft -ТЬг -P..(fcoc)-Th(6i) вл ющегос по своей аминокислотной последовательнорти фрагментом 2330 В-цепи инсулина человека и примен емого в качестве :1 ррмежуточного соединени при поЛУчёнии инсулина человека. В пептидной химии широко используют при доххтроении пептидной цепи конденсацию фрагментов с защищенными функциональными групп ми, не принимакндими участи в конденсации . Известен способ получени октапептида формулы 1, заключающийс в синтезе двух пептидных фрагментов г-01у-РЬе. РНе-Туг(Би )-ThrOH и HPro-Lys{Boc)-Thr (Bu)OBu 1 23 4 0 и последующей их конденсации в молекулу октапептида, т.е. по схеме |(1-3)+(4-5)/+(6-8).1-8 (см. схему I). Недостатки известного способа низкий выход целевого продукта (-24 %), его невысока оптическа чистота (,.- 37,7), последнее делает получаемый известным способом октапептид малопригодным дл - превращени в инсулин человека. Целью изобретени вл етс повышение выхода октапептида и увеличение его оптической чистоты. Постав-аенна цель достигаетс описьшаемым способом получени октапептида формулы 1, заключающимс в конденсации двух исходных фрагментов Z-GtijPht-PheOH и H-Y(6«)Thr-PfO-L.j4{ftoc)-Thf Сбитое. 1. Схема 1 (известный способ)
0-П
Boc 0-П Boc - OH H
0-П вц
Boc
0-П 1 - ОН H - OMe
OH H t
оме
92%
,ey l 00%-OMe OH H УЛ
Zt
52% /
У1 Z
t Bu
П Z
Примеч ание. П- полимерный носитель.
УП
2.- OH H -L.
УПа
OBu
OH H
Отличительным признаком описываемого способа вл етс использование в качестве промежуточных соединений фрагментов (1-3) и(4-8), т.е. прове .дение синтеза по схеме (1-3)+/(4-5)+ (6-8)/.
Описьюаемый способ позвол ет увеличить выход на стадии конденсации.
1 2 3 4
Gly Phe Phe Туг ВоеОН Н--О -nz-- ОН И ОМе t
0-П1/Я.
Вое 0-n ./1Уа
-ОН Н1 , Получение Н-бензйлоксикарбоиилглицилфенилаланилфенилаланина (П).
1.1. Присоединение С-концевой ами нокислоты к полимеру-носителю.
Перемешивают в течение 44 ч при м гком кип чении смесь 10,6 г (40,0 ммоль) N-трет-бутилоксикарбог. нилфенилаланина, 20,0 г хлорметилированного сополимера стирола с 1 % дивинилбензола (содержание хлора 40,0 ммоль) и 5,04 мл (36,0 ммоль)
фрагментов с 53 до 84 % с увеличением выхода целевого продукта до 46 % (почти вдвое).
5 При этом повышаетс оптическа чистота целевого соединени : ,0°. Синтез осуществлен по схеме2. Схема 2 (описываемый способ) 5 6 7 в Thr Pro Ьуз . Thr
Вое Bu
t :-oH
72,7%
OMe
У
Bu
OH H
У1а
триэтиламина в 80 мл этилацетата. Далее реакционную смесь охлаждают до 20 С, полимер отфильтровывают, последовательно промывают этнпацетатом , этанолом, водой, этанолом, диоксаном, обрабатывают 4н. раствором хлористого водорода в хлористом метилене, промывают, диоксаном и эфиром и сушат в вакууме. Дл определени количества аминокислоты на полимере-носителе 20 мг полуz -f- 27,J- OBu Boc Bu H / py
5
ченного гидрохлорида фенилаланилполимера подвергают гидролизу при . в течение 5 ч в смеси 12 н. сол ной и пропионЬвой кислот (по 2. мл) и фильтруют . По данным аминокислотного анализа остатка после упаривани фильтрата количество фенйлаланина на полимере составл ет 0,90 ммоль/г.
1.2. Наращивание пептидной цепи на полимерном носителе.
Дп построени пептидной цепи на полимере фенилаланил-полимер (8,8 г содержание аминокислоты 7 ,9 ммоль) дважды подвергают следующему циклу обработок соответствующими растворител ми и реагентами (объем растворителей при каждой обработке 70 мл):
1)Промывка диоксаном, 2x3 мин.
2)Обработка 4,5 н. НС1 в диоксане , 1.хЗО мин.
3)Промьшка диоксаном, 3x3 мин.
4)Промьшка хлористым метиленом, 2x3 мин.
5)Обработка 10 %-ным раствором триэтиламина в хлористом метилене, 1x10 мин.
6)Про№ 1вка хлористым метиленом, 4x3 мин.
7)Добавление 24 шоль N-третбутилоксикарбрнилфенилаланина в хлористом метилене.
8)Внесение в реакционную смесь 12 ммоль дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК)(начало конденсации).
9)Через 1 ч добавление еще
12 ммоль ДЦГК в хлористом метилене.
10)Через последующие 2 ч промывка хлористым метиленом, 3x3 мин (окончание конденсации).
1I)Обработка смесью 4 мл уксусного ангидрида и 2 мл триэтиламина в хлористом метилене дл блокировани возможных свободных аминогрупп, не вступиввшх в реакцию конденсации , 1x30 мин.
При повторении цикла (введение пептидную цепь Ы-бензилоксикарбонилглицина ) на стади х 6-10 в качестве растворител используют диметилформамид (даФА), поскольку N-бензилоксикарбошшглицин в хлористом метилене не раствор етс .
По окончании наращивани пептидной цепи N-бензилоксикарбонилглицилфеннлаланил-фенилаланин-полимер промьшают этанолом, уксусной кислотой и эфиром и сушат в вакууме.
1Q6
1.3. Отделение N-бензилоксикарбонилглицил-фенилаланил-фенилаланина (п) от полимер а-носител ..
Полученный N-бензилоксикарбонилглицил-фенилаланил-фенилаланин-полимер обрабатьшают смесью 10 мл 2 н. NaOH и 90 мл метанола (2 раза по 15 мин), промывают метанолом и объединенные .фильтраты подкисл ют
лимонной кислотой. Образовавшийс . осадок.отфильтровывают, промывают метанолом и объединенные фильтраты упаривают. Остаток переосаждают из метанола водой, промывают водой,
сущат в вакууме над Р.,.05 и перекристалллзовывают из этилацетата.
Выход 3,7 г (92 %) (в расчете на С - концевой фенилаланин, присоединенный к полимеру), белое кристаллическое соединение, т.пл. 178-179 С. /Х / + 17,0° (с 1, ). Rf 0,80 (I-бутанол.-пиридин-уксусна кислота-вода 15:10:3:12), Rf 0,94 (l-бутанол-уксусна кислота-вода 4:1:1 )
(тех на пластинках Силуфол, ЧССР).
Найдено,% : С 66,63; Н 5,97: N 8,45.
.
Вычислено,%: С 66,79; Н 5,81; N 8,34.
Аминокислотный анализ: Gly 1,00; Phe 2,04. ...
П. Получение трет-бутилового эфира 0-трет-бутилтирозил-треонил-пролил-N -трет-бутилоксикарбониллизил0-трет-бутилтреонина (ш).
П.1. Метиловьй эфир N-бензилоксикарбонил-0-трет-бутилтирозил-треонина (1У).
К раствору 1,8 г (10,5 ммоль) гидрохлорида метилового эфира треонина в 15 мл ДМФА при прибавл ют 1,5 мл .(10,5 ммоль) триэтиламина , через 10 мин при -10°С внос т раствор 3,34 г (9,0 ммоль) N-бензилоксикарбонил-0-трет-бутилтирозина в 10 мл тетрагидрофурана (ТГФ) и 1,21 г (9,0 толь) 1-оксибензотриазола , после чего при добавл ют
раствор 1,85 г (9,0 ммоль) ДЦГК в 5 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают 1,ч при ОС н 24 ч при 20 С и осадок отфильтровывают. Фильтрат упаривают, остаток pacтвop юf в
этилацетате, последовательно промывают 5 %-ным.раствором лимонной кислоты, водой, 5 %-ным раствором бикарбоната натри , водой и сушат над NajSO/, . Этиацетатный раствор упаривают, маслообразный остаток хроматографируют на колонке с сили кагелем .Вельм (ФРГ), использу дл элюировани бензол и затем смесь бензола с этилацетатом 1:2. Фракции, содержащие основное вещество (контроль с помощью тех), упа ривают, остаток сушат в вакууме. .Выход 3,20 г (72,7%), белое кри сталлическое соединение, т. пл. 9495С , 8,5 (с 1, МеОН). Rf . 0, (2-бутанол 3 %-ный аммиак 3:1), Rf 0,32 (этилацетат-петро лейный эфир 3:1) (ТСХ), Найдено,%: С 64,05; Н 7,19; N 5,69.. СгбНз NjO;: . Вычислено,%: С 64,17; Н 7,04; N 5,75. П.2. N-Бензилоксикарбонил-О-тре бутилтирозил-треонин (1Уа). К 0,56 г (1,15 ммоль) метиловог эфира N-бензилоксикарбонил-О-третбутилтирозил-треонина (см. п. П.) в 5 мл метанола добавл ют 1,18 мл (1,18 ммоль) 1 Н. NaOH и перемешив ют 3 ч при 20 С. Реакционную смесь охлаждают до , подкисл ют 1 н. л ной кислотой до рН 6-7 и упаривают .. Остаток раствор ют в 50 мл 0,05 н, NaOH, экстрагируют зтилацетатом , водную фазу отдел ют, охлажд ют до и подкисл ют 1 н. сол ной кислотой до рН 3, Масл нистый осадо экстрагируют этилацетататом, промыв ют водой, сушат над NajSO и упарив ют . Образовавшийс твердый остаток сушат в вакууме. Выход 0,51 г (94%), белое аморф ное вещество. -2,7 (с1, МеОН). Rf 0,25 (2-бутанол-3%-ный а 3:1). Rf 0,32 (ацетон-хлороформ 1:1), Rf 0,40 (хлороформ-мета нол 18:2,5) (тех). Найдено,%: С 63,31; Н 6,76; N 5,99. CisHj N Or. Вычислено,%: С 63,32; Н 6,83; N 5,92. П.З. трет-Бутиловый эфир N -бен зилоксикарбонил-N -трет-бутилоксикарбониллизил-0-трет-бутилтреонина К раствору 0,94 г (4,0 ммоль) трет-бутилового эфира 0-трет-бутил треонина в 5 мл ТГФ добавл ют 1,54 ( 4,0 ммоль) Н -бензилоксикарбонилтрет-бутилоксикарбониллизина в 108 5 мл ТГФ и 0.,54 г (4,0 ммоль) 1-оксибензотриазола , охлаждают до Ос и внос т 0,84 г (4,0 ммоль) ДЦГК в 2 мл ТГФ. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при при 20С,осадок удал ют фильтрованием, фильтрат упаривают. Остаток раствор ют в этилацетате, промьшают водой, 2 %-ным раствором лимонной кислоты, 5 %-ным раствором бикарбоната натри и водой и сушат над NajSO . Этилацетат упаривают, остаток (масло) хроматографируют на силикагеле Бельм, использу в качестве элюента смесь этилацетата и петролейного эфира 3:1. Фракции, содержащие основное .вещество (ТСХ), упаривают, остаток сушат в вакууме. Выход 1,97 г (82 %), бесцветное масло. /сС/р +6,6° (с 1, CHClj). Rf О,-65 (ацетон - хлороформ 1:2), Rf 0,45 (этилацетат-петролейный эфир 3:1)(ТСХ). Найдено,%: С 62,39; Н 8,59; N 7,31.CjiHsfN O . Вычислено,%: С 62,70; Н 8,66; N 7,08. П.4. трет-Бутштовый эфир N -третбутилоксикарбониллизнл-0-трет-бутилтреонина (Уа). В раствор 1,42 г (2,40 ммоль) трет-бутш1ового эфира Н -бензилоксикарбонил-N -трет-бутилоксикарбониллйзил-О-третбутилтреонина (см. п. П.З) в 25 мл метанола внос т 50 мг палладиевой черни и смесь перемешивают в атмосфере водорода .в течение 5 ч. Затем катализатор отфильтровывают , фх пьтрат упаривают в вакууме, остаток сушат в вакууме. Выход 1,1 г (100 %), масло. Rf 0,35 (хлороформ-метанол 9:1), Rf 0,80 (2-бутанол-З %-ный аммиак 3: 1) (тех). П.5. трет-Бутиловый эфир N-бензилоксикарбонилпролилЧМ -трет-бутилоксик арб онилли зил-О-тр ет-бутилтреонина (У1). К 1,1 г (2,4 ммоль) трет-бутилового эфира К -трет-бутилоксикарбониллизил-О-трет-бутилтреонина (см. п. П.4) в 5 МП ТГФ добавл ют раствор 0,56 г (2,4 моль) N-бензилоксикарбоннппролина в 5 мл ТГФ и 0,34 г (2,4 ммоль) 1-оксибензотриазола и охлаждают до ОС. Далее прибавл ют 0,52 г (2,4 ммоль) ДЦГК в 2 мл ТГФ и реакционную смесь перемешивают 1 ч при и 5 ч при . Осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают , остаток раствор ют в этилацетате и промывают водой, 2 %-ной лимонной кислотой, 5 %-ным бикарбонатом натри и водой. Этилацетатный раствор сушат над NajSO, упаривают , остаток кристаллизуют из смеси этилацетата и петролейного эфира и сушат.
Выход 1,42 г (85 %), белое кристаллическое соединение, т.пл. Ш9ПО°С . /сС/р - 46, (с }, МеОН). Rf 0,80 (2-бутайол-З %-ный аммиак 3:1), Rf 0,63 (ацетон-хлороформ 1:1) Rf 0,36 (ацетон-хлороформ 1:3) (ТСХ)
. Найдено,%: С 62,69; Н 8,46; N 8,09.
C - eHr8N(,Oj .
& 1числено i С 62,58; Н 8,46; N 8,11.
Аминокислотный анализ: Pro 1,00; Lys 1,04; Thr 0,95.
П.6. трет-Бутиловый эфир пролилN -трет-бутилоксикарбониллизил-Отрет-бутилтреонина ().
В раствор 0,621 г (0,90 ммоль) трет-бутилового эфира N-бензилоксикарббнилпролил-N -трет-бутилоксикарбониллизил-0-трет-бутилтреонина (см. п. П.5) в 10 мл метанола внос т 100 мг палладиевой черни и смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 6 ч. Затем катализатор отфильтровывают , фильтрат упаривают в вакууме,остаток также сушат в вакууме .
Выход 0,53 г (100 %), масло. Rf 0,51 (I-бутанол-уксусна кислотавода 4:1:1), Rf 0,40 .(2-бутанол3 %-ный аммиак 3:1) (ТСХ).
П.7. трет-Бутиловьй эфир N-бензш1оксикарбонил-0-трет-бутш1тирозш1треонил-проли -N -трет-бутнлоксикарбониллизил-О-трет-бутилтреонина (УП)
К раствору 0,53 г (0,90 ммрль) трет-бутилового эфира пролил-И -третбутилоксикарбоншшизил-0-трет-бутилтреонина (см. п. П.6) в 2 мл ДМФА прибавл ют 0,42 г (0,90 ммоль) N-бензилоксикарбонил-0-трет-бутилтирозилтреонина (см. п. П.2) в 2 мл даФА и 0,122 г (0,90 ммоль) 1-оксибензотриазола , после чего при ОС внос т 0,196 г (0,90 ммоль) ДЦГК в 1 мл . Реакционную смесь перемешивают 1 ч при при 20°С, осадок отфипьтровьшают, к фильтрату добавл ют 40 мл охлажденной воды (5 С) и
образовавшеес масло экстрагируют этилацетатом (3 раза по 30 мл).Экстракт промьшают насьш(енным раствором хлорида натри , 5 %-ным раствором лимонной кислоты (3 раза по
30 мл), 5 %-ным раствором бикарбоната натри (З раза по 30 мл) и водой , .сушат над , и упаривают.. Остаток хроматографируют на силикагеле Вельм, последовательно использу дл элюировани бензол и смеси бензола с этилацетатом 1:1 и 1:2. Фракции, содержащие по данным ХСХ основное вещество, упаривают в вакууме , твердый остаток сушат в вакууме .
Выход 0,65 г (60 %), белое кристаллическое соединение, т.пл. 8790°С ) - 48,1° (с 1; МеОН). Rf 0,53 (ацетон-хлороформ 1:1),
Rf 0,62 (хлороформ-метанол 18:2,5), Rf 0,86 (н-бутанол-уксусна кисло- . та-вода 4:1:1 ) (ТСХ).
Найдено,%: С 62,97; Н 8,23; N 8,28.
C jHg NeOij.
Вычислено,%: С 62,94; Н 8,19; N 8,30.
Аминокислотный анализ: tyr 0,91; Thr 2,01; Pro 1,00; Lys 1,10.
П.8. трет-Бутиловый эфир 0-третбутилтирозил-треонилпролил-Н -третбутилоксикарбониллизил-0-третбутил-треонина (Ш).
0,65 г (о,64 ммоль) трет-бутилового эфира N-бензилоксикарбонил-Отрет-бутилтирозил-треонил-прслилN -трет-бутилоксикарбониллизил-0трет-бутилтреонина (см. п. П.7) раствор ют в 10 мл метанола, добавл ют 100 мг палладиевой черни и перемешивают в атмосфере водорода в течение 6 ч. Катализатор отфильтровывают , 4 1льтрат упаривают, остаток сушат в вакууме. Выход 0,53 г (97 %), белое
аморфное соединение, Rf 0,40 (2-бутанол-3 %-ный аммиак.3:1), Rf 0,24 (хлороформ-метанол 18:2,5) (ТСХ),
Найдено,%: С 61,81; Н 8,79; N 9,43.
,.
Вычислено, % С 61,62; Н 8,73; N 9,58.
Аминокислотный анализ: Туг 0,96; Thr 1,92; Pro 1,00; Lys 1,05.
Ш.Получение трет-бутилового эфира N-бензилоксикарбонилглицилфенилаланил-фенилаланил-0-трет-бутилn тирозилтреонил-пррлил-К -трет бутил оксикарбониллизил-0-трет-бутилтреонина (1). 0,53 г (0,60 ммоль) трет-бутилового эфира 0-трет-бутилтирозил-трео нил-прсшил-N -трет-бутилоксикарбониллиэил-0-трет-бутилтреонина (см. п. П.8) раствор ют в 3 мл ДМФ добавл ют раствор 0,31 г (0,60 ммол К-бензштоксикарбонилглицил-фенилала нил-фенилаланина (см. п. 1.3) в 2 м ДМФА, 0,081 г (0,60 ммоль) 1-оксибензотриазола , после чего охлаждают до О С и прибавл ют 0,125 г (0,60 ммоль) ДЦГК. Реакционную смес перемешивают 2 ч при 0С и 6 ч при , осадок отфильтровывают, фильт рат смешивают с 30 мл охлажденной воды (5°с) и образовавшеес масло экстрагируют этилацетатом (3 раза по 25 мл). Экстракт промывают насыщенным раствором хлорида натри , 5 %-ным раствором лимонной кислоты (З раза по .20 мл), 5 %-ным раствором бикарбоната натри (3 раза по 20 мл) и водой, сушат над NazSO/, и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с окисью алюмини ( Tl степень активности по Брокману испЬльзу дл элюировани этилацетат и затем смес.ь хлороформа и метанола 18:2. Фракции с основным веществом (тех) упаривают в вакууме, pc-faTOK кристаллизуют из этилацетата и петролейного зфира, осадок отфильтровывают и сушат, в вакууме. 0 Выход О,/О г (84 %), белое кристаллическое соединение, т.пл. 118120С /«:/( - 52,0 (с 1, МеОН). Rf 0,26 (ацетон-хлороформ 1:1), Rf 0,80 (2-бутанол-З %-ный аммиак 3:1), Rf 0,86 (1-бутанол-уксусна кислота-вода .4:1:1) (ТСХ). Найдено,%: С 64,25; Н 7,88; N 9,38. С73 HwjNg Qf«. Вычислено,%: С 64,34; Н 7,62; N 9,25. Аминокислотный анализ: Gly 1,00; Phe 2,00; Туг 0,95; Thr 1,93;. Pro 0,90; Lys 1,04. Описываемый способ позвол ет получать промежуточные и конечное соединение - октапептид 1 с достаточно высоким выходом (выход на заключительной стадии 84 %; суммарный выход 46 %) без применени какихлибо специальных методов выделени и очистки. В известном способе суммарный выход октапептида-1 составил 24 %. Одновременно октапептид-1, полученный описываемым способом, обладает значительно большей стереохимической чистотой (удельное вращение - 52 ), чем тот же октапептвд, синтезированный известным способом (удельное вращение - 37,7°). Использование описываемой схемы синтеза позволит существенно снизить себестоимость конечного продукта за счет снижени расхода промежуточньЕХ соединений на конечной стадии.
Claims (2)
- Способ получения октапептида формулы{у * РЯ ¢-РЬ г · Т<, г(Ьч )-ТНс “ Гео у £(*В0 с )-Тн> (βι^)®0Μпутем фрагментной конденсации, о тличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и оптической чистоты целевого соединения, при конденсации в качестве исходных фрагментов используют-РНе -ΡΗςΟΗ ис©ωί I147010
- 2
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833614539A SU1147010A1 (ru) | 1983-07-04 | 1983-07-04 | Способ получени октапептида |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU833614539A SU1147010A1 (ru) | 1983-07-04 | 1983-07-04 | Способ получени октапептида |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1147010A1 true SU1147010A1 (ru) | 1985-12-15 |
Family
ID=21071805
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833614539A SU1147010A1 (ru) | 1983-07-04 | 1983-07-04 | Способ получени октапептида |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1147010A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8436136B2 (en) * | 2003-05-21 | 2013-05-07 | Biotech Tools S.A. | Peptide complex |
-
1983
- 1983-07-04 SU SU833614539A patent/SU1147010A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Э.Шредер, К.Любке. Пептиды, ч.1, М., Мир, 1967, с.116. Патент US № 4029642, кл. С 07 С 103/52, опублик. 1977 (прототип). * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8436136B2 (en) * | 2003-05-21 | 2013-05-07 | Biotech Tools S.A. | Peptide complex |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5554725A (en) | Synthesis of dolastatin 15 | |
| Rich et al. | Synthesis of tentoxin and related dehydro cyclic tetrapeptides | |
| US4420424A (en) | New peptides and a process for their preparation | |
| RU2107691C1 (ru) | Пептид и способ его получения | |
| CA1243306A (en) | Biologically active tripeptide and tetrapeptide alkylamides, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same | |
| CA1137467A (en) | Process for the preparation of somatostatin | |
| US3917578A (en) | Process for producing somatostatin and intermediates | |
| Nutt et al. | Synthesis of dihydromauritine A, a reduced cyclopeptide alkaloid | |
| YAJIMA et al. | Studies on Peptides. XXXII. The Use of N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1, 2-dihydro-quinoline as a Coupling Reagent of Peptide-Fragments on Polymer Support | |
| SU1147010A1 (ru) | Способ получени октапептида | |
| Beyerman et al. | On the repetitive excess mixed anhydride method for the synthesis of peptides. Synthesis of the sequence 1‐10 of human growth hormone | |
| CN114213503A (zh) | 一种类蛇毒三肽的合成方法 | |
| US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
| DE1643345B2 (de) | Glucagonderivat und Verfahren zur Herstellung von Glucagon | |
| LU85710A1 (fr) | Nouveaux derives de la gonadoliberine et procede pour leur preparation | |
| SU651691A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей или амидов или сложных бензиловых эфиров | |
| CN112876541B (zh) | 一种地加瑞克的固相合成方法 | |
| Schattenkerk et al. | Studies on polypeptides xiv synthesis of possible rennin substrates | |
| HU185238B (en) | Process for preparing peptides containing guanidino-group | |
| US3790555A (en) | Octapeptide derivative of gonadotropinreleasing hormone | |
| EP0311392B1 (en) | Solution synthesis of an octapeptide | |
| Meldal et al. | Synthesis of a proposed antigenic hexapeptide from Escherichia coli K88 protein fimbriae | |
| UEDA et al. | Cyclic peptides: XXVI. Synthesis of AM‐toxin II analogs by cyclization through ester bond formation | |
| US4093609A (en) | Somatostatin synthesis | |
| RU2063979C1 (ru) | Пептиды последовательности окситоцина |