SK7062003A3

SK7062003A3 - Peptides and/or proteins and use thereof for the production of a therapeutic and/or prophylactic medicament

Info

Publication number: SK7062003A3
Application number: SK706-2003A
Authority: SK
Inventors: Peter Petzelbauer
Original assignee: Fibrex Medical Res & Dev Gmbh
Priority date: 2000-12-12
Filing date: 2001-12-07
Publication date: 2003-11-04
Also published as: KR100864069B1; US7271144B2; EA005576B1; US7494973B2; SI1586586T1; NO20032656D0; KR20030060988A; DK1586586T3; CN1518558B; EE200300283A; DE50110182D1; PT1586586E; EP1341819B1; NO330767B1; EP1586586A2; ES2266093T3; BR0116122A; US20090088384A1; BG107891A; EP1586586B1

Description

Oblasť techniky

Vynález rieši peptidy a/alebo proteíny, ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku a farmaceutický prípravok.

Doterajší stav techniky

Látky na inhibíciu alebo prevenciu zápalových reakcií, takzvané imunosupresíva, ktoré sa doteraz používajú na profylaxiu a terapiu, všeobecne zahrnujú dve typické skupiny látok. Po prvé deriváty hormónu, to jest kortizónu, ktorý sa prirodzene vyskytuje v tele a po druhé exogénnych imunosupresív ako je cyklosporín a jeho deriváty, azatioprín, cyklofosfamid atď. Všetky tieto látky majú protizápalové účinky, ale pri dlhodobej terapii majú významné vedľajšie reakcie. Tieto vedľajšie reakcie majú pre dlhodobú terapiu obmedzujúci účinok, čo je dôvodom prečo sa tieto látky používajú striedavo alebo v kombinácii, aby sa vedľajšie reakcie udržali na prijateľnej úrovni alebo aby sa mohlo v terapii ďalej pokračovať. Ako príklady vedľajších reakcií sa uvádzajú patologické zlomeniny spojené s kortizónom, keď tieto zlomeniny sú spôsobené osteoporóznym účinkom kortizónu alebo ľadvinové zlyhanie, ktoré môže byť spôsobené cyklosporínom. Tieto vedľajšie reakcie sú u oboch skupín zlúčenín nevyhnutné, a tak je len otázkou doby trvania terapie a celkovej dávky, kedy sa terapia musí ukončiť.

Podstata vynálezu

Predmet predloženého vynálezu rieši nové farmaceutické výrobky, ktoré sú vhodné na prevenciu alebo inhibíciu zápalových javov, a ktoré majú len malé vedľajšie účinky. Ďalší predmet vynálezu rieši dlhodobú terapiu.

V nasledujúcom texte sú aminokyseliny peptidov tohto vynálezu označované obvyklými skratkami, ktoré označujú a-aminokyseliny.

Analógmi sa rozumie peptid, ktorý sa odvodí derivatizáciou, substitúciou, s výhodou homologickou substitúciou, odobratím a/alebo pripojením sekvencie fibrínu a obzvlášť zvýhodnených sekvencii fibrínu.

Peptidy alebo proteíny tohto vynálezu majú všeobecný vzorec I (identifikačné číslo sekvencie 1, 2)

T C Z* H) ^R2 ú kde Rj a R₂ sú rovnaké alebo rôzne, sú vodíkový atóm, nasýtený alebo nenasýtený uhľovodíkový zvyšok obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov,

Zi je histidínový alebo prolínový zvyšok,

Z₂ je arginínový zvyšok, peptidový zvyšok alebo proteínový zvyšok obsahujúci počiatočný arginínový zvyšok, konkrétne obsahujúci 2 až 30 aminokyselín, tiež sú to ich soli a napríklad také amidy alebo ich vzájomné zmesi a/alebo zmesi s aspoň jednou ďalšou látkou na terapeutické a/alebo preventívne použitie v medicíne človeka a/alebo vo veterinárnej medicíne, kde sú konkrétne prítomné len L-aminokyseliny.

Celkom prekvapujúce bolo, že určitá aminokyselinová sekvencia zabraňuje priľnutiu buniek z krvného riečišťa na endoteliálne bunky cievnej steny a/alebo ich následnému prechodu z krvi do tkaniva.

Peptidy alebo proteíny podľa tohto vynálezu majú všeobecný vzorec II (identifikačné číslo sekvencie 3 až 10), » HO ^Ri\ J II _ZN C C Zj-Arg Zj— Zq—Z5 mj

R/ i kde R] a R₂ sú rovnaké alebo rôzne, sú vodíkový atóm, nasýtený alebo nenasýtený uhľovodíkový zvyšok obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov,

Zi je histidínový alebo prolínový zvyšok,

Arg je arginínový zvyšok,

Z₃ je prolínový alebo valínový zvyšok,

Z₄ je leucínový alebo valínový zvyšok,

Z₅ je proteínový zvyšok alebo peptidový zvyšok, konkrétne obsahujúci 2 až 30 aminokyselín alebo zvyšok alkoholu obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov alebo zvyšok organickej alebo anorganickej zásady, tiež sú to ich soli a napríklad tiež amidy alebo ich vzájomné zmesi a/alebo zmesi s aspoň jednou ďalšou látkou na terapeutické a/alebo preventívne použitie v medicíne človeka a/alebo vo veterinárnej medicíne, kde sú konkrétne prítomné len L-aminokyseliny.

Celkom prekvapujúce bolo, že časti sakvencie, a to peptidy alebo fragmenty fíbrinogénu, majú protizápalové účinky. Bez viazania sa na teoretické úvahy tak tieto účinky môžu byť založené na skutočnosti, že sa fibrín viaže na endotelíálne bunky prostredníctvom svojho nového N-konca reťazca

Ββ a na bunky krvného riečišťa prostredníctvom sekvencie reťazca Aa, čo vedie k priľnutiu a prechodu buniek do tohoto tkaniva. Toto naväzovanie má vedľajší účinok v tom, že sa inhibuje tvorba fibrínu.

Avšak uvedená inhibícia nepredstavuje pre pacienta potenciálnu nevýhodu, pretože ak dôjde k malým poraneniam, je koagulácia krvi dostatočná aj v neprítomnosti fibrínu. Iba v prípade operačného liečenia môže byť prípadne vhodné ukončiť tento druh terapie. Iné vedľajšie reakcie možno v podstate vylúčiť, pretože tieto látku interagujú iba prirodzenými ligandami. Navyše prirodzená ochrana nie je nepriaznivo ovplyvnená leukocytmi v krvi. Zloženie prostredia ostáva rovnaké, a to napríklad čo sa týka granulocytov, lymfocytov a monocytov, takže prirodzený ochranný proces ostáva zachovaný a ochrana proti infekciám v krvi ostáva nezmenená.

Fibrinogén sa produkuje v pečeni a v tejto forme je biologicky inaktívny a normálne je v krvi v koncentráciách 3 g/1. Proteolytickým štiepením proenzýmom protrombínom sa tvorí trombín, ktorý z fibrinogénu odštepuje fibrinopeptidy A a B. Týmto sa fibrinogén transformuje do svojej biologicky aktívnej formy. Vzniká tak fibrín a štiepne produkty fibrínu.

Počas každej aktivácie zrážania krvi sa tvorí trombín, t. j. pri každom poškodení tkaniva, či už je zápalového pôvodu, traumatického alebo degeneratívneho pôvodu. Tvorba fibrínu sprostredkovaná trombínom je v základe ochranným procesom, ktorého účelom je rýchle uzatvorenie akýchkoľvek narušení vaskulámeho systému. Tvorba fibrínu je však tiež patogénnym procesom. Objavenie sa fibrínových krvných zrazenín ako spúšťacej príčiny srdcového infarktu je totiž jedným z najhorúcejších problémov medicíny človeka.

Úlohu, ktorú fibrín hrá počas prenikania zápalových buniek z krvného riečišťa do tkaniva, čo je na jednej strane síce žiaducim procesom obrany proti patogénnym mikroorganizmom alebo nádorovým bunkám objavujúcim sa v tkanive, ale na druhej strane je aj procesom, ktorý sám o sebe indukuje alebo prehlbuje poškodenie tkaniva, doteraz nebola vôbec skúmaná alebo nie v dostatočnom rozsahu. Fibrín sa viaže na endotelíálne bunky prostredníctvom svojho nového N-konca reťazca Ββ pomocou sekvencie reťazca Ββ a na bunky v krvnom riečišti pomocou sekvencie reťazca Aa, čo vedie k priľnutiu a prechodu buniek do tkaniva.

Peptidy alebo proteíny podľa tohto vynálezu môžu zabrániť pripojeniu buniek z krvného riečišťa na endotelíálne bunky cievnej steny a/alebo ich následnému prechodu z krvi do tkaniva.

Peptid alebo proteín tohto vynálezu všeobecného vzorca II, kde Z₅ je peptidový zostatok obsahujúci aminokyselinovú sekvenciu s identifikačným číslom 11

Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg Pro Ala

Pro Pro Pro íle Ser Gly Gly Gly Tyr Arg a Z] je histidínový zostatok,

Arg je arginínový zostatok,

Z₃ je prolínový zostatok,

Z₄ je leucínový zostatok, zabraňuje fíbrínovým fragmentom usadzovaniu sa alebo pripojeniu na cievnu stenu. To znemožňuje, aby sa zápalové bunky zadržiavali na endoteliálnych bunkách cievnych stien tepien a žíl, a tak sa týmto bunkám zabraňuje, aby ostávali na cievnych stenách, čím sa zabraňuje akejkoľvek ďalšej infiltrácii tkaniva.

Peptid alebo proteín všeobecného vzorca II, kde Z₅ je peptidový zostatok obsahujúci nasledujúcu sekvenciu aminokyslín (identifikačné číslo sekvencie 12)

Glu Arg His Gin Ser Ala Cys Lys Asp Ser Asp Trp Pro

Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn Tyr Lys a Zi je prolínový zostatok,

Arg je arginínový zostatok,

Z₃ je valínový zostatok,

Z₄ je valínový zostatok, zabraňuje bunkám periférnej krvi priľnúť na fibrín alebo fibrínové fragmenty, a tak zabraňuje ich migrácii do tkaniva.

Popísané štiepne produkty sú v literatúre tiež známe ako peptid Ββ a peptid Aa. Vyššie uvedená cesta ovplyvnenia pripojenia a migrácie je v systéme kontroly migrácie buniek z krvi do tkaniva celkom nová. Táto funkcia fibrínu môže byť blokovaná peptidom Ββ a tiež peptidom Aa.

Uvedené peptidy podľa tohto vynálezu sú preto vhodné ako terapeutické činidlá pre človeka a zvieratá, aby blokovali migráciu buniek z krvi do tkaniva. Pretože fibrín alebo iné produkty fibrinogénu, ktoré vznikajú proteolytickým štiepením, ako napríklad štiepením fíbrinogénu po aktivácii plazminogénu urokinázou, vznikajú iba v špecifickom a miestne obmedzenom množstve, t. j. v miestach zápalu, porušenej koagulácie, arteriálnej sklerózy, trombózy a/alebo rastu nádoru, je účinok uvedeného terapeutického činidla miestne obmedzený, čo znamená, že patologické vedľajšie účinky objavujúce sa na iných miestach tam nie sú očakávané alebo sú očakávané iba v obmedzenom rozsahu.

Zvýhodnené a celkom neočakávané oblasti použitia peptidov a/alebo proteinov tohto vynálezu tvorí príprava farmaceutických prípravkov pre terapiu alebo prevenciu miestnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré sú infekčného pôvodu, ktoré majú pôvod v autoimunitnej reakcii, reumatickom ochorení, poruche imunitného systému, genetickom ochorení, v prevencii a/alebo terapii odmietnutia štepu objavujúcej sa po transplantáciách orgánov alebo arteriálnej sklerózy alebo reperfúzneho poškodenia, prípadov založených na arteriosklerotickom a/alebo trombotickom ochorení a zvýšenom usadzovaní fibrínu. Tento peptid, obzvlášť potom peptid Ββ, sa tiež výborne hodí na výrobu farmaceutického prípravku, ktorý sprostredkuje transport inej liečivej látky k ľudským alebo živočíšnym endoteliálnym bunkám. Liečivá látka, ktorá sa má transportovať, sa jedným koncom pripojí na peptid a potom sa prostredníctvom VE-caderínu usadí na voľnom mieste cievnej steny, t.j. na endoteliálnej bunke.

Ďalej je tento vynález v ďalších podrobnostiach vysvetlený prostredníctvom uvedených príkladov.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Príprava štiepnych produktov fibrinogénu

Podľa práce Blombäck et al. (Náture 218, 130 až 134 (1968)) sa prostredníctvom rozkladu zahrnujúceho brómkyán získali nepolymerizujúce degradačné produkty fibrinogénu. Takto degradovaný fibrinogén väčšinou zahrnuje fragment o 63 kDa, t. j. N-koncový disulfidový uzol, NDSK a obsahuje reťazec Αα 1 až 51, reťazec Ββ 1 až 118 a reťazec γ 1 až 78. Na získanie NDSK-II (NDSK bez fibrinopeptidov A a B) sa počas 3 hodín pri laboratórnej teplote odštiepili pomocou trombínu (20 jednotiek/lpg NDSK) N-koncovej aminokyseliny reťazcov Αα a reťazcov Ββ a následne sa pôsobilo diizopropylfluórfosfátom, aby sa zablokoval účinok trombínu. Takto získaný NDSK-II pozostával z reťazca Αα 17 až 51, reťazca Ββ 15 až 118 a reťazca γ 1 až 78.

Na získanie NDSK-uPa sa na 500 pg NDSK pôsobilo 200 jednotkami urokínázového plazminogénového aktivátora (uPa) od firmy Technoclone, Viedeň, Rakúsko, a to počas jednej hodiny pri 37 °C. Reakcia sa zastavila 5 mM fenylmetylsulfonylchloridom. Takto získaný NDSK-uPA je NDSK a nemá fibrinopeptid B.

Ako slepá vzorka sa podľa práce Nieuwenhuizen et al. (Biochem Biophys Acta 755,531 až 533 (1983)) získala druhá frakcia fibrinogénových stepných produktov odkazovaná ako FCB-2, kde sa štiepne produkty získali pôsobením brómkyánu. FCB-2 je protein s veľkosťou 43 kDa a zahrnuje reťazec Aa 148 až 208, reťazec Ββ 191 až 305 a reťazec γ 95 až 265. K uvedenému proteínu sa pre kontrolné účely pridal trombín a diisopropylfluórfosfát. Výsledkom toho však nebola žiadna zmena proteínu (v ďalšom texte odkazovanom ako FCB-2-thr).

Za účelom uskutočnenia ďalších slepých kontrolných pokusov sa na kultivačné médium (RPMI od firmy Life techn. Inc., Paisky, Veľká Británia) pôsobilo trombínom, ako je uvedené vyššie a následne sa inaktivovalo (RPMI-thr) alebo sa naň pôsobilo s uPA, ako je uvedené vyššie a opäť sa inaktivovalo (RPMI-uPA).

Príklad 2

Peptid Aa (identifikačné číslo sekvencie 12) zodpovedá aminokyselinám 1 až 28 reťazca a fibrínu a je identický s aminokyselinami 17 až 45 reťazca Aa fibrinogénu:

Gly Pro Arg Val Val Glu Arg His Gin Ser Ala Cys Lys

Asp Ser Asp Trp Pro Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn

Tyr Lys

Peptid Ββ (identifikačné číslo sekvencie 11) zodpovedá aminokyselinám 1 až 28 reťazca β fibrínu, ktorý je identický s aminokyselinami 15 až 43 reťazca Ββ fibrinogénu, ktorý má nasledujúcu sekvenciu:

Gly

His

Arg

Pro

Leu

Asp

Lys

Arg

Glu

Ala

Pro

Ser

Leu

Arg

Pro

Ala

Pro

íle

Ser

Gly

Tyr

Arg

Použitím stratégie chrániacej fluórenylmetyloxykarbonylové (FMOC) skupiny podľa práce Carpino L.A a Han G.Y., J. Amer. Chem. Soc. 37, 3404 až 3409 (1981) sa syntetizovali obidva peptidy, a to prostredníctvom peptidovej syntézy na pevnej fáze podľa práce Merrinfield R.B., J. Amer. Chem. Soc 85,2149 až 2154 (1963) použitím násobného peptidového syntetizátoru. Surové peptidy sa prečistili preparatívnou HPLC na reverznú fázu pomocou C-18 kolóny Nucleosil 100-10 podľa práce Engelhart H. a Miiller H., Chromatography 19, 77 (1984) a publikácie Henschen A., Hupe K.P. a Lottspeich F., High Performance Liquid Chromatography, VCH 1985. Ako kontrolné peptidy sa použili peptidy rovnakej dĺžky, ale ktoré obsahovali náhodnú sekvenciu aminokyselín.

Príklad 3

Model s myšou HU-SCID

Na chrbát SCID myší sa transplantovala ľudská koža a o dva týždne neskôr sa do peritonea injektovali ľudské lymfocyty. Postup bol uskutočnený podľa práce Petzelbauer et al. (J. Invest. Dermatol. 107, 576 až 581 (1996). Potom sa takto pripraveným pätnástim myšiam injektovali do ich chvostových ciev nasledujúce látky:

a) 100 pg ľudského NDSK-II,

b) 100 pg ľudského FCB-2,

c) 100 pg peptidu Aa,

d) 100 pg peptidu Ββ,

e) 100 pg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín,

f) 100 pg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou aminokyselín.

O dvadsaťštyri hodín neskôr sa odstránila ľudská koža a vyhodnotil sa počet zápalových miest, ktorý sa vyjadril v počte týchto buniek na 0,3 mm² a určila sa priemerná hodnota so smerodajnou odchýlkou.

Pre a) 22 ± 2,8

Pre b) 9 ±2,1

Pre c) 4 ± 1,1

Pre d) 6 + 1,1

Pre e) 5 ± 1,2

Pre f) 7 ± 1,3

Tieto výsledky umožňujú uskutočniť záver, že NDSK-Π spôsobuje zapálenie, a že uvedený proteín bol použitý ako patogénna látka. Ďalšie zlúčeniny sami o sebe nevykazujú žiadny významný nárast v množstve zápalových buniek.

Porovnávací príklad 4

Pätnástim myšiam podľa príkladu 3 sa do ich chvostových ciev injektovalo

100 pg ľudského NDSK-II a

100 pg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín.

Ďalší postup bol totožný s postupom príkladu 3. Na 0,3 mm² mohlo byť určené 23 ± 3,5 zápalového ložiska.

Porovnávací príklad 5

Pätnástim myšiam podľa príkladu 3 sa do ich chvostových ciev injektovalo

100 pg ľudského NDSK-II podľa príkladu 1 a

100 pg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou aminokyselín.

Ďalší postup bol totožný s postupom príkladu 3. Na 0,3 mm² mohlo byť určené 24 + 2 zápalového ložiska.

Príklad 6

Pätnástim myšiam podľa príkladu 3 sa injektovalo

100 pg ľudského NDSK-II a

100 pg syntetizovaného peptidu Aa.

Ďalší postup bol totožný s postupom v príklade 3. Na 0,3 mm² mohlo byť určené 21 ±2,2 zápalového ložiska.

Príklad 7

Pätnástim myšiam podľa príkladu 3 sa do ich chvostových ciev injektovalo

100 pg NDSK-II a

100 pg syntetizovaného peptidu Ββ.

Ďalší postup bol totožný s postupom príkladu 3. Na 0,3 mm² mohlo byť určené 14 ± 2 zápalového ložiska.

Príklady 4 až 7 ukazujú, že peptid Ββ blokuje lymfocytické zapálenie.

Porovnávací príklad 8

Endoteliálne bunky z ľudských pupočných ciev (HUVEC) sa označili červeným fluorescenčným farbivom (Celí Tracker Orange, 1 pg/ml, Molecular Probes, Eugene, OR) a dispergovali sa na kolagénovej matrici (Collaborative Biomedical Products, Bedford, MA). Cez zhluk endoteliálnych buniek sa prevrstvili periférne krvné mononukleáme bunky (PBMC) (10⁵ buniek na 25 mm²) označené zeleným fluorescenčným farbivom (Celí Tracker Green, 1 pg/ml, Molecular Probes, Eugene, Oregon).

Potom sa bunky dvanásť hodín inkubovali pri 37 °C.

Priľnuté bunky, ktoré prešli do gélu sa vyfotografovali laserovým skenovacím mikroskopom, previedli sa do pixelov a vyhodnotili sa prostredníctvom NIH zobrazovacieho programu pre verejnú oblasť podľa práce Grôger et al. (J. Immunol Method 222, 101 až 109 (1999).

Možné bolo aj určiť počet priľnutých buniek na 0,1 mm², a to ako je uvedené pod pojmom „priľnuté“. Z trikrát troch pokusov bola vyhodnotená stredná hodnota a spoločne aj ich smerodajná odchýlka.

Bunky		priľnuté	prejdené do tkaniva
a) RPMI-uPA	0,1 pg/ml	40 ± 4	4 ± 3
	1,0 pg/ml	38± 2	5 ±’ 2
	10,0 pg/ml	32 ± 4	5 ± 1
b) NDSK	0,1 pg/ml	31 ± 18	6 ± 3
	1,0 pg/ml	35 ± 18	5 ± 2
	10,0 pg/ml	36 ±24	6 ± 3
c) NDSK-II	0,1 pg/ml	55 ±21	12± 5
	1,0 pg/ml	67 ±31	19 ± 12
	10,0 pg/ml	65 ±31	19± 10
d) NDSK-uPA	0,1 pg/ml	58 ± 3	10± 2
	1,0 pg/ml	60 ± 3,5	14± 3
	10,0 pg/ml	65 ± 3	18± 1,5
e) FCB-2	0,1 pg/ml	30 ±26	6± 4
	1,0 pg/ml	10± 10	3± 2
	10,0 pg/ml	21 ± 7	5± 4
f) FCB-2-thr	0,1 pg/ml	20 ± 12	6± 5
	1,0 pg/ml	23 ± 13	7± 5
	10,0 pg/ml	26 ± 11	4± 2
g) RPMI-thr	0,1 pg/ml	29 ± 15	4± 5
	1,0 pg/ml	26 ± 14	5± 5
	10,0 pg/ml	41 ±20	5± 4

Tieto výsledky umožňujú učiniť záver, že použitie NDSK-II má za výsledok významnú migráciu periférnych krvných mononukleámych buniek (PBMC), a to vo väčšom rozsahu než pri použití NDSK-uPA, a tak vykazuje patogénny účinok.

Výsledkom žiadneho z kontrolných pokusov a), b), e), f) a g) nebola akákoľvek významná migrácia.

Príklad 9

100 pg NDSK-II a peptidy Ββ alebo Ββ s náhodnou sekvenciou aminokyselín sa pridali ku kolagénovej matrici podľa príkladu 8 obsahujúcej suspenziu PBMC a ďalší postup bol rovnaký s postupom príkladu 8.

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku NDSK-II	38 ± 15	6± 4
b) iba 100 pg NDSK-II	73 ±29	16± 7
c) 10 pg peptidu Ββ + NDSK-II	63 ±33	7± 4
d) 100 pg peptidu Ββ + NDSK-II	47 ±34	5± 4
e) 1000 pg peptidu Ββ+ NDSK-II	52 ±27	10± 6
f) 10 pg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou
aminokyselín + NDSK-II	77 ±33	16± 6
g) 100 pg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou
aminokyselín + NDSK-II	86 ±35	15± 6
h) 1000 pg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou
aminokyselín + NDSK-II	78 ± 31	13± 8

Ako možno odvodiť z týchto testových výsledkov, tak peptid Ββ blokuje zápaly.

Príklad 10

100 pg NDSK-II a peptid Aa alebo Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín sa pridali ku kolagénovej matrici podľa príkladu 8 obsahujúcej suspenziu PBMC a ďalej sa postupovalo podľa príkladu 8.

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku NDSK-II	42 ± 6	10± 1
b) ibaNDSK-Π	96± 11	24 ± 3
c) 10 pg peptidu Aa + NDSK-II	69 ± 12	21 ± 4
d) 100 pg peptidu Aa + NDSK-II	73 ± 13	15± 6
e) 1000 pg peptidu Aa ± NDSK-II	70 ± 6	13 ± 5
f) 10 pg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou
aminokyselín + NDSK-II	70 ± 6	25 ± 2

g) 100 pg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín + NDSK-II 65 ±16 24 ± 3

h) 1000 pg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín + NDSK-II 70 ± 12 26 ± 3

Ako možno odvodiť z týchto testových výsledkov, tak peptid Aa blokuje migráciu PBMC len čiastočne.

Príklad 11

Pretože PBMC v podstate pozostáva zo zmesi lymfocytov a monocytov, boli v príklade 11 namiesto PBMC (ako v príkladoch 8 až 10) použité len čisté monocyty.

100 pg NDSK-uPa alebo 100 pg NDSK-II v uvedenom poradí a peptid Aa alebo peptid Ββ sa v uvedenom poradí pridali ku kolagénovej matrici podľa príkladu 8 obsahujúcej endoteliálne bunky a lymfocyty.

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku	68 ± 8	16± 3
b) NDSK-uPA	143 ± 11	53 ± 5
c) NDSK-II	119± 11	43 ± 4
d) iba 100 pg peptidu Ββ	58± 18	14± 1
e) NDSK-uPA + 100 pg peptidu Ββ	74 ± 8	19± 2
f) NDSK-II + 100 pg peptidu Ββ	74 ± 8	17± 3
g) iba 100 pg peptidu Aa	77 ± 4	18± 1
h) NDSK-uPA + 100 pg peptidu Aa	131 ± 4	40 ± 3
i) NDSK-II + 100 pg peptidu Aa	131 ± 4	44 ± 4
j) iba 100 pg peptidu Ββ s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	75 ± 5	19± 1
k) NDSK-uPA + 100 pg peptidu Ββ s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	134 ± 13	46 ± 4
1) NDSK-II + 100 pg peptidu Ββ s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	120 ± 12	42 ± 4

Tieto testové výsledky ukazujú,

1) že ako NDSK-II, tak NDSK-uPA podporujú lymfocytický zápal,

2) že peptid Ββ celkom blokuje lymfocytickú adhéziu a migráciu indukovanou NDSK-II a NDSK-uPA, zatiaľ čo peptid Aa nemá blokačný účinok, čo napovedá, že voľný α reťazec nie je nutný pre indukciu pripojenia a migráciu lymfocytov.

Príklad 12

Použité postupy boli rovnaké ako v príklade 11, avšak okrem toho, že namiesto lymfocytov sa použili čisté monocyty. 100 gg NDSK-uPA alebo 100 gg NDSK-Π sa v uvedenom poradí pridalo k peptidu Aa, peptidu Aa s náhodnou sekvenciou aminokyselín, peptidu Ββ alebo peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou aminokyselín.

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku	43 ± 8	7± 1
b) NDSK-uPA	48 ± 10	10± 2
c) NDSK-II	90 ± 11	19± 6
d) iba 100 gg peptidu Ββ	59 ± 7	5± 1
e) NDSK-uPA + 100 gg peptidu Ββ	61 ± 11	8± 3
f) NDSK-II + 100 gg peptidu Ββ	70 ± 7	7± 5
g) 100 gg peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou
aminokyselín	40 ± 7	6± 1
h) NDSK-uPA + 100 gg peptidu Ββ s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	45 ± 5	8± 3
i) NDSK-II + 100 gg peptidu Ββ s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	92 ± 10	20 ± 7
j) 100 gg peptidu Aa	59 ± 6	5± 1
k) NDSK-uPA + 100 gg peptidu Aa	62 ± 4	8± 5
1) NDSK-II + 100 gg peptidu Aa	68 ±10	9± 6
m) 100 gg peptidu Aa s náhodnou sekvenciou
aminokyselín	58 ± 7	6± 1
n) NDSK-uPA + 100 gg peptidu Aa s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	50± 10	10± 4
o) NDSK-II + 100 gg peptidu Aa s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	108 ± 8	21 ± 5

Tieto testové výsledky ukazujú, že iba NDSK-II podporuje migráciu monocytov, zatiaľ čo NDSK-uPA nie, čo znamená, že ako a reťazec, tak β reťazec musia mať voľný koniec na N-konci a blokovať migráciu monocytov.

Príklad 13

Postupy tohto príkladu boli podľa príkladu 11, pričom sa použili čisté lymfocyty. 100 pg NDSK-uPA alebo 100 pg NDSK-II sa v uvedenom poradí pridalo ku krátkym peptidovým soliam odvodeným od acetátu peptidu Aa Gly Pro Arg (Pro)-NH₂ (derivát peptidu Aa) alebo odvodenému od acetátu peptidu Ββ Gly His Arg Pro-OH (derivát peptidu Ββ).

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku	60 ± 8	14 ± 1
b) NDSK-uPA	149 ± 12	57 ± 5
c) NDSK-II	121 ± 11	48 ± 7
d) iba 100 pg derivátu peptidu Ββ	58± 10	12± 9
e) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Ββ	70 ± 8	16± 3
f) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Ββ	69 ± 7	14± 5
g) iba 100 pg derivátu peptidu Aa	77 ± 4	18± 1
h) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Aa	134 ± 4	48 ± 5
i) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Aa	131 ± 7	49 ± 6
j) iba 100 pg derivátu peptidu Ββ s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	70 ± 5	14± 7
k) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Ββ s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	130± 12	49 ± 6
1) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Ββ
s náhodnou sekvenciou aminokyselín	120 ± 10	55 ± 8

Uvedené experimenty dovoľujú učiniť záver, že ak sa inhibuje lymfocytycká migrácia, potom rovnaký účinok ako peptidy dlhé majú kontinuálne pridávané peptidy krátke.

Príklad 14

Postup tohto príkladu bol totožný s príkladom 12, pričom sa použili čisté monocyty. 100 pg NDSKuPA alebo 100 pg NDSK-II sa v uvedenom poradí pridalo ku krátkym peptidovým soliam acetátu peptidu Αα Gly Pro Arg (Pro)-NH₂ (derivát peptidu Aa) alebo acetátu peptidu Ββ Gly His Arg ProOH (derivát peptidu Ββ).

Bunky	priľnuté	prejdené do tkaniva
a) bez prídavku	40 ± 8	5+ 1
b) NDSK-uPA	54+9	7+ 2
c) NDSK-II	85+11	22+6
d) 100 pg derivátu peptidu Ββ	52 ± 7	6+ 1
e) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Ββ	61 ± 11	8+ 3
f) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Ββ	68 ± 7	8+ 4
g) 100 pg derivátu peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou
aminokyselín	40+7	6+ 1
h) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Ββ s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	44+6	8+ 2
i) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Ββ s
náhodnou sekvenciou aminokyselín	92+10	23+7
j) 100 pg derivátu peptidu Aa	50+5	4+ 4
k) NDSK-uPA +100 detivátu peptidu Aa	60+5	7+ 6
1) NDSK-II + 100 pg derivátu peptidu Aa	64+11	8+ 2
m) 100 pg derivátu peptidu Aa s náhodnou
sekvenciou aminokyselín	54+10	6+ 3
n) NDSK-uPA + 100 pg derivátu peptidu Aa
s náhodnou sekvenciou aminokyselín	50+ 10	10 + 4
o) NDSK-II + 100 pg peptidu Aa
s náhodnou sekvenciou aminokyselín	99+8	21 + 7

Uvedené experimenty dovoľujú urobiť záver, že keď je inhibovaná migrácia monocytov, potom rovnaký účinok ako dlhé peptidy majú vhodným spôsobom kontinuálne pridávané peptidy krátke.

Príklad 15

Testy boli uskutočnené so samcami krýs Wistar s hmotnosťou 220 až 280 g. Krysám sa podávala štandardná potrava a voda. Po uskutočnení testov sa krysy zanestetizovali a ich dýchanie bolo umelo udržiavané na frekvencii 70 pulzov za minútu, keď sa použilo 8 až 10 ml/kg plynu obsahujúceho 30 % objemových kyslíka pri pretlaku 133,3 až 266,6 Pa (1 až 2 mm ortuťového stĺpca). Do srdcovej tepny na pravej strane sa zaviedla meracia kanyla a zmeral sa krvný tlak v tepne a spočítali sa srdcové údery.

Miera krvného tlaku sa určila ako súčin krvného tlaku v aorte a rýchlosti srdcových úderov, pričom jej rozmer bol v jednotkách mm ortuťového stípca/minúta/10³. Do žily na pravej strane sa zaviedla meracia kanyla na zavádzanie testových látok. Po uskutočnení chirurgického zásahu sa do srdca podali 2 ml krysej krvi. O tridsať minút neskôr bola uzatvorená srdcová tepna na ľavej strane. O ďalších dvadsaťpäť minút neskôr sa uzatvorenie uvoľnilo, aby sa do ischemickej oblasti mohla znovu dodať krv. V tomto časovom okamihu sa v uvedenom podradí pridalo 800 pg/kg peptidu Ββ alebo peptidu Ββ s náhodnou sekvenciou aminokyselín, a to vnútrožilne celkom polovici zvierat a potom sa nechali uplynúť dve hodiny.

Aby sa rozlíšilo poškodené a nepoškodené srdcové tkanivo, do srdcovej tepny na ľavej strane sa pridalo Evansovo modré farbivo a to v koncentrácii 2 % hmotn. Potom sa vybraté srdce rozrezalo piatimi vodorovnými rezmi, pravá strana žily sa odstránila a na rezy sa dvadsať minút pôsobilo trifenyltetrazoliumchloridom (1 % hmotn.) pri 37 °C tak, aby sa mohlo rozlíšiť medzi normálnym tkanivom a ischemickým nekróznym tkanivom. Rezy sa vyhodnotili pomocou počítačovej planimetrie.

Z dôvodu cievneho uzatvorenia bolo ohrozené 62,5 % srdcového svalu v srdciach porovnávacích krýs, oproti 60 % v srdciach testových krýs. V srdciach porovnávacích krýs bolo 46 % ohrozeného tkaniva mŕtve, oproti 29 % v srdciach testových krýs. To zodpovedá 37 % zníženiu mŕtveho tkaniva (P< 0,05).

Látky podľa tohto vynálezu a použitie týchto látok podľa vynálezu na prípravu farmaceutického prípravku majú špeciálny význam, a to pre farmaceutický prípravok použitý v terapii ochorení spôsobených účinkom autoreaktívnych lymfocytov poškodzujúcich tkanivo.

K týmto ochoreniam patria ochorenia z oblasti autoimunitných ochorení, ako sú kolagenózy, reumatické ochorenia, psoriázy a poinfekčné/parainfekčné choroby a choroby spôsobené reakciou hostiteľa na štep. Pretože uvedený farmaceutický prípravok blokuje migráciu lymfocytov do tkaniva, nastáva hojivý účinok. Ľymfocyty tak ostanú v krvnom riečišti a nie sú schopné vyvolávať autoreaktívny, tkanivo poškodzujúci účinok.

Hojivý účinok nastáva pri podávaní liečiva na terapiu a/alebo prevenciu rejekcie, ktorá sa objavuje po transplantáciách orgánov, pretože uvedené liečivo zabraňuje migrácii lymfocytov z krvného riečišťa do cudzieho orgánu, a preto tento cudzí orgán nemôže byť zničený autoreaktívnymy lymfocytmi.

Hojivý účinok nastáva pri podávaní liečiva na terapiu a/alebo prevenciu arteriálnej sklerózy po transplantáciách orgánu, pretože uvedené liečivo zabraňuje migrácii lymfocytov a monocytov do cievnej steny, a tak predchádza aktivácii buniek cievnej steny. Tým sa minimalizuje alebo predchádza objaveniu sa arteriálnej sklerózy po transplantáciách orgánov.

Hojivý účinok nastáva pri podávaní liečiva na terapiu a/alebo prevenciu reperfúzneho poškodenia po chirurgicky alebo farmaceutický indukovanom obnovení prúdenia krvi, ako napríklad po srdcovom infarkte, apoplektickom šoku, po cievnej chirurgii, chirurgickom výkone k premosteniu (bypass) a transplantáciách orgánu, pretože uvedené liečivo inhibuje migráciu lymfocytov a monocytov do cievnej steny. Reperfúzne poškodenie je spôsobené kyslíkovou nedostatočnosťou/acidózou, ktorá sa objavuje v bunkách cievy počas obnovenia prúdenia krvi a vedie k ich aktivácii. Lymfocyty a monocyty sa tak pripoja na cievnu stenu a migrujú do nej. Skutočnosť, že lymfocytom a monocytom sa zabráni v priľnutí a migrácii do cievnej steny, prináša pokles poškodenia indukovaného hypoxiou/acidózou, a to bez akéhokoľvek permanentného cievneho poškodenia spôsobeného následnou zápalovou reakciou.

Hojivý účinok nastáva pri podávaní liečiva na terapiu a/alebo prevenciu arteriálnej sklerózy spojenej s metabolickými ochoreniami alebo procesmi starnutia, pretože uvedené liečivo inhibuje migráciu lymfocytov a monocytov do cievnej steny, a tak inhibuje šírenie arteriosklerotického plaku, ktorý je výsledkom tejto migrácie.

Farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu možno použiť na transport ďalšej liečivej látky. Farmaceutický prípravok podľa tohto vynálezu špecificky naviaže povrchovú molekulu na endoteliálne bunky. Liečivé látky spojené s týmto prípravkom tak môžu pôsobiť na endoteliálne bunky vo vyšších koncentráciách bez toho, aby mohli spustiť vedľajšie reakcie na iných miestach. Ako príklad môže byť uvedené použitie látok inhibujúcich bunkové delenie, keď tieto látky môžu mať antiangiogénny účinok, a to potom, čo sú špecificky pripojené na endoteliálne bunky. V tomto prípade sa hojivý účinok objaví u pacientov s nádorom, pretože rast nádoru je blokovaný bránením proliferáciou endoteliálnych buniek, a tak vyhnutím sa neoangiogenéze.

Výpis sekvencie <110> FIBREX Medical Research und Development GesmbH/Petzelbauer Peter <120> Peptidy a/alebo proteíny a ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku <130>

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 1 <211> 32 <212> peptid <400> Gly His Arg X_aa2 X_aa29

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 < 170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <210> 2 <211> 32 <212> peptid <400> Gly Pro Arg X_aa2 X_aa29

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <210> 3 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly His Arg Pro Val X_aa2 X_aa3o

Výpis sekvencie <110> FIBREX Medical Research und Development GesmbH/Petzelbauer Peter < 120> Peptidy a/alebo proteíny a ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku <130>

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <2I0> 4 <211> 7 až 32 <212> peptid <400> Gly His Arg Val Val X_aa2 X_aa3o

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <210> 5 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly Pro Arg Pro Val X_aa2 X_aa3o

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 6 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly Pro Arg Val Val X_aa2 X_aa3o

Výpis sekvencie <110> FIBREX Medical Research und Development GesmbH/Petzelbauer Peter <120> Peptidy a/alebo proteíny a ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku <130> , <140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 7 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly Pro Arg Pro Leu X_aa2 X_aa3o

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 8 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly His Arg Pro Leu

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 9 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly Pro Arg Val Leu X_aa2 X_aa3o

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <210> 10 <211> 7 až 35 <212> peptid <400> Gly His Arg Val Leu X_aa2 X_aa3o

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Offíce 97 <210> 11 <211> 28 <212> peptid <400> Gly His Arg Pro Leu Asp Lys Lys Arg Glu Glu

Ala Pro Ser Leu Arg Pro Ala Pro Pro Pro íle

Ser Gly Gly Gly Tyr Arg

<140>

<141>

<150> AT 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 12 <170> Microsoft Windows NT, Workstation 4.0, Office 97 <210> 12 <211> 28 <212> peptid

<400> Gly	Pro	Arg	Val	Val	Glu	Arg	His	Gin	Ser	Ala
Cys	Lys	Asp	Ser	Asp	Trp	Pro	Phe	Cys	Ser	Asp
Glu	Asp	Trp	Asn	Tyr	Lys

Výpis sekvencie <110> FIBREX Medical Research und Development GesmbH/Petzelbauer Peter <120> Peptidy a/alebo proteíny a ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku <130> 2760 PCT <140> PCT/AT 01/00387 <141> 2001-12-07 <150> AT A 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 2 <170> Patentln verzia 3.1 <210> 1 <211> 28 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>

<221> zdroj <223> /poznámka=“zodpovedá aminokyselinám 1 až 28 sekvencie reťazca Ββ fibrínu“ <400> 1

Gly His Arg Pro Leu Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg

10 15

Pro Ala Pro Pro Pro íle Ser Gly Gly Gly Tyr Arg

25

Výpis sekvencie <110> FIBREX Medical Research und Development GesmbH/Petzelbauer Peter < 120> Peptidy a/alebo proteíny a ich použitie na prípravu terapeutického a/alebo preventívneho farmaceutického prípravku <130> 2760 PCT <140> PCT/AT 01/00387 <141> 2001-12-07 <150> AT A 2063/2000 <151> 2000 12 12 <160> 2 < 170> Patentln verzia 3.1 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Umelá sekvencia <220>

<221> zdroj <223> /poznámka=“zodpovedá aminokyselinám 1 až 28 sekvencie reťazca Aa fibrínu“ <400> 2

Gly Pro Arg Val Val Glu Arg His Gin Ser Ala Cys Lys Asp Ser Asp

5 10 15

Trp Pro Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn Tyr Lys

25

TT Jve-zoos

Claims

1. Peptidy alebo proteíny všeobecného vzorca I s identifikačným číslom sekvencie 1, 2,

R n í\ I II N-C-Č-Z^ n/ 1 ² n (D kde Ri a R₂ sú rovnaké alebo rôzne, sú vodíkový atóm, nasýtený alebo nenasýtený uhľovodíkový zvyšok obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov,

Zi je histidínový alebo prolínový zvyšok,

Z₂ je arginínový zvyšok, peptidový zvyšok alebo proteínový zvyšok obsahujúci počiatočný arginínový zvyšok, konkrétne obsahujúci 2 až 30 aminokyselín, na terapeutické a/alebo preventívne použitie v medicíne človeka a/alebo veterinárnej medicíne a tiež ich soli a napríklad tiež amidy alebo ich vzájomné zmesi a/alebo zmesi s aspoň jednou ďalšou látkou.

2. Peptidy alebo proteíny podľa nároku 1 všeobecného vzorca II s identifikačným číslom sekvencie 3 až 10, _w HO

L II /N“ γ Č Zj-Arg Zj-Zq-Zg (H) ή

kde Ri a R₂ sú rovnaké alebo rôzne, sú vodíkový atóm, nasýtený alebo nenasýtený uhľovodíkový zvyšok obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov,

Zi je histidínový alebo prolínový zvyšok,

Arg je arginínový zvyšok,

Z₃ je prolínový alebo valínový zvyšok,

Z₄ je leucínový alebo valínový zvyšok,

Z₅ je proteínový zvyšok alebo peptidový zvyšok, konkrétne obsahujúci 2 až 30 aminokyselín alebo zvyšok alkoholu obsahujúci 1 až 3 uhlíkové atómy, konkrétne do 10 uhlíkových atómov alebo zvyšok organickej alebo anorganickej zásady, na terapeutické a/alebo preventívne použitie v medicíne človeka a/alebo veterinárnej medicíne a tiež ich solí a napríklad tiež amidy alebo ich vzájomné zmesi a/alebo zmesi s aspoň jednou ďalšou látkou.

3. Peptidy alebo proteíny podľa nároku 2, kde Z₅ je peptidový zvyšok odvodený od reťazca Aa fibrínu.

4. Peptidy alebo proteíny podľa nároku 2, kde Z₅ je peptidový zvyšok odvodený od reťazca Ββ fibrínu.

5. Peptidy alebo proteíny všeobecného vzorca II podľa nároku 2, kde Z₅ je peptidový zvyšok obsahujúci nasledujúcu aminokyselinovú sekvenciu s identifikačným číslom sekvencie 11

Asp Lys Lys Arg Glu Glu Ala Pro Ser Leu Arg Pro

Ala Pro Pro Pro íle Ser Gly Gly Gly Tyr Arg aZi je histidínový zvyšok,

Arg je arginínový zvyšok,

Z₃ je prolínový zvyšok,

Z₄ je leucínový zvyšok.

6. Peptidy alebo proteíny podľa nároku 2 všeobecného vzorca II, kde Z₅ je peptidový zvyšok obsahujúci nasledujúcu aminokyselinovú sekvenciu s identifikačným číslom sekvencie 12

Glu Arg His Gin Ser Ala Cys Lys Asp Ser Asp Trp

Pro Phe Cys Ser Asp Glu Asp Trp Asn Tyr Lys a Z] je prolínový zvyšok,

Arg je arginínový zvyšok,

Z₃ je valínový zvyšok,

Z₄ je valínový zvyšok.

7. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 na prípravu farmaceutického prípravku na terapiu lokálnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré sú infekčného pôvodu.

8. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 7 na prípravu farmaceutického prípravku na terapiu lokálnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré majú pôvod v autoimunitnej reakcii.

9. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 8 na prípravu farmaceutického prípravku na terapiu lokálnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré majú pôvod v reumatickom ochorení.

10. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9 na prípravu farmaceutického prípravku na terapiu lokálnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré majú pôvod v poruche imunitného systému.

11. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10 na prípravu farmaceutického prípravku na terapiu lokálnych a/alebo celkových zápalov v tele, ktoré majú pôvod v genetickom ochorení.

12. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 na prípravu farmaceutického prípravku pre prevenciu a/alebo terapiu rejekcie, ktorá sa objavuje po transplantáciách orgánu, na prevenciu a/alebo terapiu arteriálnej sklerózy, reperfúzneho poškodenia, arteriosklerotických ochorení a/alebo zvýšeného usadzovania fibrínu počas procesu starnutia.

13. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 12 na prípravu farmaceutického prípravku pre prevenciu a/alebo terapiu arteriálnej sklerózy po transplantáciách orgánu.

14. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13 na prípravu farmaceutického prípravku pre prevenciu a/alebo terapiu reperfúzneho poškodenia.

15. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 14 na prípravu farmaceutického prípravku pre prevenciu a/alebo terapiu artériosklerotických a/alebo trombotických ochorení.

16. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 15 na prípravu farmaceutického prípravku pre prevenciu a/alebo terapiu zvýšeného usadzovania fibrínu počas procesu stámutia.

17. Použitie peptidov a/alebo proteínov podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16 na prípravu farmaceutického prípravku použitého na transport ďalšej liečivej látky k ľudským alebo živočíšnym endoteliálnym bunkám.

18. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje aspoň jeden peptid a/alebo proteín podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 17.

19. Farmaceutický prípravok podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 18, vyznačujúci sa tým, že má formu vhodnú pre injekciu.